Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей

Ломаева, Милена Гелиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей"

На правах рукописи

Ломаева Милена Гелиевна

Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей

03.00.16 - Экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -2007

003163399

Работа выполнена в институте теоретической и экспериментальной биофизики

РАН

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Безлепкин Владимир Георгиевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Рожков Юрий Игоревич доктор биологических наук Какпаков Виталий Туякович

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной радиологии и агроэкологии РАСХН

Защита состоится ^_февраля 2008 г в 12_часов на заседании

диссертационного совета Д 220 056 01 в по адресу 143900, Московская обл , Балашиха 8, ул Ю Фучика, 1, Российский государственный аграрный заочный университет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГАЗУ, Автореферат размещен на сайте www

Автореферат разослан « ' » декабря 2007 г

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 220 056 01 „ /}

доктор с -х наук _- Кузнецова Е И

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Ионизирующая радиация (ИР) в виде естественного радиационного фона Земли является одним из наиболее существенных экологических факторов в процессах адаптации, видообразования и эволюции живого мира в целом [Алтухов и др, 2004, Гераськин и др, 2007] Однако с середины прошлого века характер воздействия ИР на эти процессы резко изменился, что обусловлено глобальным загрязнением среды обитания вследствие радиационных аварий и испытаний ядерного оружия, увеличением количества объектов ядерной энергетики и военно-промышленного комплекса, а также использованием источников ИР в медицине [UNSCEAR, 2001, Алтухов и др 2004, Василенко, 2004, Гераськин и др , 2006] В человеческой популяции постоянно возрастает доля индивидов, подвергавшихся воздействию ИР В связи с этим изучение последствий воздействия ИР в малых и сублетальных дозах на человека очень актуально [UNSCEAR, 2001] Крайне важным является также выявление и количественная оценка уровня индуцированной трансгенерационной нестабильности генома (НСГ), основу которой, как полагают, составляют повреждения, возникающие в геноме клеток полового пути родителей, подвергшихся радиационному воздействию [Niwa, Kominami, 2001, Shimada, Shima, 2004, Barber et al, 2006] Проведение такого рода экологических исследований затруднено недостаточным количеством эпидемиологических данных Поэтому для оценки генетического риска в рамках концепции «человек-мышь» многие работы в этой области проводят на животных

Многообразие вариантов полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяет

перейти от традиционного цитогенетического анализа хромосомных аберраций

и микроядер (МЯ) к выявлению мутаций в кодирующих локусах, а также

количественно оценивать уровень генетической изменчивости (мутации, а

также полиморфизм ДНК) и в неэкспрессируемых областях К таким областям

относятся, например, гипервариабельные минисателлитные (МНС) и

микросателлитные (МКС) повторы, занимающие подавляющую часть генома

животных и растений Повышенная природная вариабельность МКС и МНС, делает их информативными генетическими маркерами Такие маркеры, одновременно характеризующие геном по множеству локусов, называются мультилокусными Их использование позволяет значительно повысить вероятность обнаружения изменений в геноме и уменьшить число объектов в обследуемых выборках, особенно, при исследовании эффектов ИР в сублетальных дозах [Алтухов и др 2004] Работы Dubrova и соавторов показывают передающееся по наследству увеличение вариабельности специфических и гипервариабельных ESTR (expanded s imple tan dem repeat s) мышиных локусов в результате облучения [Dubrova et al, 1996, 1998, 2000, 2002, 2005] Дуброва и коллеги успешно применили этот подход и при исследовании семей, проживавших на загрязненной после Чернобыльской аварии территории Могилевской области Белоруссии Есть и другие работы, где удачно использовался агализ полиморфизма ДНК для оценки генетической нестабильности, возникающей у потомков облученных родителей [UNSCEAR, 2000, Kodaira et al, 2004]

Помимо анализа вариабельности определенных МКС и МНС локусов довольно широкое распространение получил метод оценки генетической нестабильности по полиморфизму длин фрагментов ДНК В литературе метод упоминается как arbitrary primed PCR (AP-PCR) или random amplified polymorphic DNA (RAPD) Ранее нами, с помощью AP-PCR, нами было показано увеличение генетического полиморфизма длин фрагментов ДНК у потомков мышей линии BALB/c, хронически облученных ИР в дозах 0,1 — 0,5 Гр Необходимость исследования последствий острого облучения родителей для потомства обусловлена тем, что эффекты хронического и острого облучения различаются Кроме того, слабо изученными остаются тканеспецифические последствия действия ИР на потомков облученных родителей Также вызывает большой интерес наличие различий в эффектах воздействия ИР на разнополых родителей, а также у их разделенных по полу необлученных потомков

Таким образом, актуальность работы определяется тем, что она отвечает потребности глубокого изучения разнообразных генетических последствий влияния острого облучения ИР родителей на их потомков Цель 0 задачи исследования. Цель данной работы заключалась в сравнении уровня радиационно-индудированой нестабильности генома (НСГ) у потомков мышей линии BALB/c, рожденных после облучения сублетальными дозами ИР самцов- или самок - родителей В связи с этим были поставлены следующие задачи

1 Выявить возможное влияние сублетальных доз ИР на плодовитость облученных мышей - родителей и жизнеспособность их потомства

2 Оценить индуцированную НСГ у потомства, рожденного от самцов - или самок - родителей, облученных в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр) по уровню полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов

3 Сравнить полиморфизм размеров повторов в некоторых постмитотических (кровь, головной мозг, легкие) и пролиферирующих (селезенка, кончик хвоста) тканях потомства самцов и самок, подвергавшихся воздействию ИР в сублетальных дозах

4 Выявить возможные половые отличия в уровне полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов, определяемом по числу неродительских полос (НРП) у потомства, рожденного от облученных самцов - или самок - родителей

5 Сравнить уровень НСГ, выявляемый по молекулярно-генетическим (полиморфизм МКС) и по цитогенетическим (частота встречаемости МЯ) маркерам, у потомства самок, облученных ИР в сублетальных дозах

Основные положения, выносимые на защиту:

1 ИР оказала заметное воздействие на плодовитость самцов- и самок-родителей, а также на количество жизнеспособных потомков только в сублетальной дозе 200 сГр

2 В сравнении с контролем у потомства облученных самок было обнаружено увеличение числа НРП, а у потомства облученных самцов большей частью -уменьшение Кроме того, облучение ИР самок только в сублетальной дозе 200

сГр приводило к заметному изменению уровня полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов, определяемого по изменению числа НРП у их потомства, по сравнению с контрольным потомством При облучении самцов -родителей более низкой дозой ИР (50 сГр) у потомства во всех изученных тканях, кроме селезенки, регистрировались значимые радиационно-индуцированные различия

3 Расстановка постмитотических и пролиферирующих тканей по возрастанию уровня полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов у потомков облученных самцов и самок различалась У потомков облученных в сублетальной дозе 200 сГр самок-родителей ИР число НРП возрастало от ткани кончика хвоста, селезенке, мозге и максимально в периферической крови Воздействие ИР на самцов-родителей в дозах 50 и 200 сГр заметно изменяло число НРП в мозге и в легких

4 Не во всех тканях разнополых потомков облученных самок или самцов наблюдались значительные отличия в уровне НСГ Среди потомков самцов-родителей, облученных в дозе 50 сГр, наибольшее влияние ИР на число НРП обнаруживалось у самцов-потомков в легких и мозге, по сравнению с теми же показателями у потомков-самок У потомства облученных самок наблюдалось большее количество НРП у самок-потомков по сравнению с самцами-потомками в ткани кончика хвоста Пол потомков в меньшей степени влиял на изменение числа НРП в селезенке и головном мозге, а в периферической крови отличия практически отсутствовали

5 Сравнение значений уровня НСГ, определенного традиционным цитогенетическим методом (подсчет частоты встречаемости МЯ в эритроцитах костного мозга) и методом АР-РСЛ (определение уровня длин МКС-ассоциированных повторов по числу НРП) продемонстрировало одинаковый характер дозовой зависимости у потомства самок, облученных ИР в сублетальных дозах (50,100 и 200 сГр)

Научная новизна и практическая значимость. Впервые

продемонстрирована возможность применения АР-РС11 анализа для оценки индуцированной ИР вариабельности длин МКС-ассоциированных повторов

Впервые проведен сравнительный анализ радиационно-индуцированной НСГ потомства, облученных ИР в области сублетальных доз от 50 до 200 сГр самцов и самок мышей линии BALB/c методом оценки полиморфизма длин фрагментов ДНК, амплифицированных с праймером из последовательности, фланкирующей МКС-локус на 11-ой хромосоме мышей Нами обнаружены связанные с типом ткани и полом различия в уровне полиморфизма длин повторов у потомков, родившихся до и после облучения одного из родителей в сублетальной дозе 200 сГр Для обработки результатов впервые было использовано специально разработанное программное обеспечение (ПО), позволяющее значительно уменьшить влияние субъективных факторов и сильно ускорить анализ и статистическую обработку большого массива данных Результаты работы могут быть использованы для экстраполяции данных с целью оценки генетического риска воздействия острого облучения в малых и умеренных дозах на человека Кроме того, полученные результаты позволяют рассматривать метод AP-PCR в качестве одного из важных компонентов эффективных систем радиоэкологического мониторинга и расчета экологических рисков

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались, в том числе, на 3-й Всероссийской научной конференции «Физические проблемы экологии (Экологическая физика)», Москва, 2001, IV съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), Москва, 2001, Международной конференции «Genetic conséquences of emergency radiation situation», Moscow, 2002, конференции «От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям», Пущино, 1114 ноября 2002, III съезде по радиационным исследованиям, Киев, 2003, Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты», Санкт-Петербург, 2004, 4-той всероссийской научной конференции «Физические проблемы экологии (Экологическая физика)», Москва, 2004, Международной конференции «Радиобиологические эффекты риски, минимизация, прогноз», Киев, 2005, The 35-th Annual Meeting of the European Radiation Research Society, Kyiv, August,

22-25, 2006, VIII съезд Украинского общества генетиков и селекционеров им М И Вавилова, Алушта, 24-28 сентября, 2007

Публикации. Основное содержание диссертации изложено в нескольких печатных работах. 5 статьях и 19 тезисах докладов на различных Всероссийских и международных конференциях

Структура и объем работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав 1 - обзора литературы, 2 - материалов и методов исследования, 3 - результатов и обсуждения, заключения (выводов), списка литературы и приложений Объем работы - 124 с , из них основной текст - 97 с , рисунков - 8, таблиц -13, приложение - 10 с , библиографический список из 250 наименований Работа была выполнена при поддержке нескольких грантов РФФИ грант № 00-04-48141, РФФИ грант 0304-48274, Программ Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине -2005»

Материалы и методы исследования.

Схемы экспериментов. Исследования выполнены на мышах линии BALB/c, полученных из питомника Филиала Института Биоорганической Химии РАН (Пущино). В первой серии экспериментов, с облучением самцов, на спаривание отсаживались один самец и две самки Во второй серии экспериментов, с облучением самок, спаривали трех самок (для увеличения числа потомков в группе) с одним самцом. Первое потомство использовалось, как контроль («контрольное» потомство), для получения второго потомства (так называемого «облученного» потомства) спаривали этих же родителей после облучения самца или самки, соответственно Таким образом, между собой сравнивались родные братья и сестры.

Дозы ИР родителей. Самцов мышей Fo-поколения в возрасте 2 месяцев подвергали острому у-облучению на установке ГУБЭ (60 Со) в дозах 50 и 200 сГр при мощности экспозиционной дозы 0,01 Гр/с Самок Fo-поколения облучали однократно рентгеновским излучением в дозах 0,5, 1,0 или 2,0 Гр при мощности экспозиционной дозы 0,1 Гр/мин на установке РУМ-13 (напряжение

мощности экспозиционной дозы 0,1 Гр/мин на установке РУМ-13 (напряжение 200 кВ, сила тока 8 мА, фильтры 1,0 мм Си и 1,0 мм Al, фокусное расстояние 74 см)

Метод гормонального воздействия. Дня синхронизации овуляции перед облучением самок нами был использован метод гормонального воздействия [Gates, 1971]

Выделение ДНК. У всех животных (родителей и потомков) в первой серии

экспериментов извлекали ткани головного мозга, селезенки и легкого, а во

второй серии экспериментов - клетки костного мозга, головной мозг, селезенку,

отсекали кончик хвоста (1-1,5 см) и собирали периферическую кровь

Выделение ДНК проводилось последовательной экстракцией фенолом и

хлороформом [Gupta 1984, Maniatis et al, 1982] с небольшими модификациями

Подсчет микроядер (МЯ). Препараты костного мозга готовили по методу

[Schmid, 1976] МЯ считали в 2000 полихроматофильных (ПХЭ) и

нормохроматофильных (НХЭ) эритроцитах костного мозга

Условия проведения ПЦР. Перед проведением основных экспериментов, для

AP-PCR предварительно были тестированы 17 различных олигонуклеотидов в

качестве праймеров В качестве праймера был использован 20-мерный

олигодезоксинуклеотид [Santos et al, 1995], являющийся фрагментом

последовательности, которая фланкирует МКС локус Atplb2 в окрестностях

гена р53 на 11-й хромосоме мышей Его выбор, среди подобных праймеров,

был обусловлен тем, что при его использовании на разных тканях мышей были

получены ДНК-фингерпринты, содержащие значительное количество

полиморфных и несколько мономорфных продуктов Для проведения ПЦР

нами была разработана оптимизированная система, где использовались на 1

пробу 1х ПЦР буфер (10 шМ трис НС1 рН 8,8; 50 мМ КС1, 6% сахароза, 0,02%

тритон-ХЮО, 3,5 мМ MgCl2, 200 мкМ смеси нуклеотидтрифосфатов, 7,5 pmol

праймера ММАТРВ2(+1), 0,5 единицы Taq-полимеразы, около 12 нг ДНК-

матрицы ПЦР проводилась при следующих условиях, температура

денатурации - 95°С, 1 минута, температура отжига - 53°С, 1 минута,

температура элонгации - 72°С, 5 минут, количество циклов - 45

Гель-электрофорез и визуализация фрагментов ДНК. Продукты ПЦР разделялись в 6%-ном полиакриламидном геле (ПААГ) и окрашивались азотнокислым серебром по методу [Caetano-Anolles, Gresshoff 1994] с небольшими модификациями

Программное обеспечение (ПО) для сравнительного анализа ДНК-фингерпринтов. Изображение высушенных гелей подвергалось обработке с применением специально разработанного в лаборатории для анализа мультилокусных маркеров ПО (Скосырев и др, 2005) В ПО реализуются следующие основные функции

1. "оцифровка" графических изображений гелей (поддержка BMP и JPG форматов), полученных с применением сканера, телекамеры или цифрового фотоаппарата,

2 определение величин электрофоретической подвижности (RJ) продуктов на дорожках геля,

3. сравнение спектров электрофоретических полос на сходство и различие составляющих их компонентов на основе определения нормированных координат (значений Rj) с представлением количественных оценок,

4. получение отчетов с результатами статистической обработки,

5. экспорт результатов анализа в текстовые редакторы

Статистическая обработка результатов Сравнение проводили по двум параметрам общее число полос (ОЧП) и число неродительских полос (НРП) ОЧП подсчитывали у каждого потомка и каждого родителя, а НРП у каждого потомка. Кроме того, определяли НРП, в процентах от ОЧП, у каждого потомка, в среднем в семье и группе в целом Среднее число НРП, в процентах от ОЧП, у потомков-самцов и у потомков-самок в группе в целом Значения ОЧП представляются мало информативными, так как, в основном, колебание количества ОЧП у отдельных животных и в различных тканях носит случайный характер Поэтому основное внимание мы уделили параметру среднего числа НРП в процентах на одного потомка в каждой семье и в группе Для сравнения контрольной и «облученной» групп (потомков, рожденных до и после облучения одного из родителей) применялись критерии достоверности

Стъюдента и Фишера Кроме того, мы установили, что для доверительной вероятности Р > 0,95 численность выборки должна быть не менее 32, а для вероятности Р > 0,99 она должна быть увеличена до 80

Результаты и обсуждение. Результаты, полученные в обеих сериях экспериментов, с облучением самцов и самок - родителей представлены с учетом только самок родивших, имевших два помета, до и после облучения одного из родителей

Влияние облучения на репродуктивные свойства животных-родителей и жизнеспособность их потомства. Результаты наших исследований с облучением самцов Fo поколения показывают, доля родивших самок (в процентах) после второго спаривания уменьшалась примерно на 10%, по сравнению с первым Это опосредованно говорит о снижении фертильности самцов после облучения ИР в обеих дозах У самцов облученных до зачатия потомства так же снизилось количество жизнеспособных потомков по сравнению с числом потомков, рожденным от тех же самцов до облучения. Есть основания полагать, что снижение жизнеспособности потомства связано с облучением самцов - родителей Возникновение доминантных и рецессивных летальных мутаций, крупных генетических перестроек в геноме их половых клеток, может быть причиной гибели потомков первого поколения на разных стадиях эмбриогенеза и в постнатальный период [Ли, 1963, Малашенко и др, 1977, Шевченко, Померанцева, 1985, Dubrova, Plumb, 2002] Во второй серии экспериментов доля самок, родивших после облучения ИР в дозе 50 сГр, возросла по сравнению с контролем, что, несомненно, вызвано гормональными препаратами, стимулирующими не только синхронизацию овуляции, но и гиперовуляцию [Gates, 1971] Было показано уменьшение доли самок, родивших после облучения ИР в дозе 100 и 200 сГр, несомненно, за счет влияния облучения, компенсировавшего увеличение числа жизнеспособных потомков, вызванный гормональными препаратами

При облучении самок - родителей ИР в дозах 50 и 100 сГр, возможно, снижение числа жизнеспособных потомков, вызванное действием ИР, было

незаметно на фоне возросшего их числа под действием гормональных препаратов, что заметно по увеличению среднего числа мышат в помете Однако надо отметить, что перед облучением ИР в дозе 200 сГр введение гормональных препаратов самкам не смогло полностью компенсировать отрицательное действие ИР на количество жизнеспособных потомков, которое упало до контрольного уровня

Полиморфизм длин МКС-ассоциированных повторов в геномной ДНК у потомков облученных родителей. Набор амплифицированных фрагментов ДНК разной длины уникален и поэтому представляет собой анонимный генетический маркер, пригодный для оценки вариабельности МКС-ассоциированных последовательностей в геноме [Vasil'eva et al 2001, Welsh et al 1995, Lopez etal 1999, Barber et al 2006] Изменение спектра продуктов ПЦР может быть следствием замен оснований или более серьезных перестроек в геноме типа дупликаций, инсерций и делеций в потенциально вероятных местах отжига «случайно выбранного» праймера Таким образом, оценка полиморфизма размеров продуктов AP-PCR (компонентов мультилокусного генетического маркера) позволяет делать заключения относительно возникновения упомянутых перестроек и мутаций

При сравнении множества образцов (с несколькими десятками полос в каждом) качество получаемой информации определяется, как техническими возможностями анализа ДНК-фингерпринтов, так и оптимизацией схемы такого анализа, поэтому мы использовали диапазон длин от 872 до 281 по Радиационно-индуцированный полиморфизм длин амплифицированных фрагментов ДНК у потомков при облучении одного из родителей. В первой серии экспериментов у потомства облученных самцов (табл 1) наблюдается более сильное изменение радиационно-индуцированного полиморфизма длин повторов, рассчитанное по числу НРП, в легких, чем в мозге и, тем более, в селезенке Изменение числа НРП у потомков в легких и мозге, вызванное облучением самцов-родителей ИР в сублетальной дозе 50 сГр, больше, чем при облучении самцов - родителей ИР в дозе 200 сГр Для селезенки, по сравнению с другими тканями, обнаружено минимальное радиационно-индуцированное

изменение числа НРП, у потомства самцов, подвергавшихся воздействию радиации в обеих примененных дозах (50 и 200 сГр) Во второй серии экспериментов, у потомства самок-родителей, облученных ИР в сублетальных дозах - 50 и 100 сГр (табл 2), почти во всех тканях обнаружена незначительная естественная вариабельность числа НРП, за исключением, селезенки Значительный радиационно-индуцированный прирост числа НРП наблюдается во всех тканях потомков, когда самки - родители были облучены ИР в самой большой из выбранных нами сублетальных доз - 200 сГр Изменение числа НРП регистрируется в ткани селезенки при облучении самок-родителей всеми выбранными дозами Для других тканей значимые отличия числа НРП от контроля есть только при облучении самок - родителей ИР в дозе 200 сГр, при этом число НРП у потомков в неделящихся тканях (мозг и периферическая кровь) больше, чем в активно пролиферирующих (селезенка и эпителий кончика хвоста) Предполагается, что повышенный уровень полиморфизма повторов и НСГ в соматических клетках потомства, является результатом возникновения нерепарируемых или ошибочно репарируемых повреждений в геноме половых клеток родителей Воздействие этих повреждений, очевидно, может быть усилено при рекомбинации в мейозе или в процессах дробления зиготы, эмбрионального и постэмбрионального развития [Potten, Loeffler 1990, Genetic Instability and Tumorigenesis 1997, Lopez et al 1999, Vogel, Natarajan 1995, Дуброва 2006] Таким образом, биологическая значимость увеличения полиморфизма повторов состоит в том, что, во-первых, появление вариабельных МКС-ных аллелей (изменение количества повторов основного мотива или инверсии) в геноме половых клеток облучавшихся мышей - родителей может отрицательно сказываться на межаллельном кроссинговере в районах возникших изменений, локально нарушая конъюгацию хромосом в мейозе [Kidwell 2002]. Во-вторых, полагая, что транспозиции мобильных генетических элементов (МГЭ) реализуются, в частности, за счет широкого распространения в геноме коротких тандемных повторов [Kidwell 2002], можно ожидать изменения мобильности групп генов, взаимного их расположения или положения

Таблица 1 Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК из разных тканей потомства, рожденного до и после облучения самцов-родителей

Доза облучения родителей, номер группы Средний % НРП (на 1 потомка в группе^ Число потом ков

мозг селезенка легкие

А Д Д

Контроль -1 группа 30 2±1 7 25 0±2.1 30.9±2.1 33

50 сГр - 2 группа 25 7±2 2 -16 1 23 0±2 3 -8.3 25 0±2 0 -21 1 35

Контроль - 5 группа 27 8±1 6 20 9±1 6 25 7±1 8 27

200 сГр - 6 группа 26 4±1 8 -5 2 20 9±1 6 0 26 4±1 9 27 28

Таблица 2 Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК в разных тканях потомства, рожденного до и после облучения самок-родителей

Доза облучения родителей, номер группы Средний % НРП (на 1 потомка в группе1) Число потомков

мозг кровь селезенка хвост

А2 Д Д Д

Контроль-1 группа 11,8±0,4 15,3±0,6 11,9±0,5 13,6±0,6 111

50 сГр-2 группа 12,3±0,6 4,1 15,0±0,7 -2,0 13,4±0,7 11,8 13,9±0,7 2,2 137

Контроль-3 группа 13,6±0,7 16,8±0,8 14,8±0,7 13,8±0,7 76

ЮОсГр-4группа 13,0±0,б -1,5 16,0±0,6 -4,9 16,5±0,8 10,8 15,0±0,7 8,3 99

Контроль-5 группа 10,9±0,5 12,1±0,7 9,9±0,5 11,6±0,5 103

200 сГр-6 группа 16,8±0,6 42,5 20,1±0,8 49,7 14,0±0,б 34,2 14,8±0,6 24,2 104

Примечание (для этой и предыдущей таблиц) 1- Каждая полоса на ДНК-фингерпринтах указывает положение продуктов АР-РСЯ с идентичными величинами электрофоретической подвижности,

2 — Относительная разница в % НРП потомков, рожденных до и после облучения самок-родителей, в процентах

относительно регуляторных сайтов вследствие повышения полиморфизма повторов Например, индукция транспозиций некоторых МГЭ была показана в клетках дрозофилы и крыс, после воздействия ИР [Servomaa, Rytomaa 1990, Забанов и др 1995] В такой ситуации не исключается изменение характера экспрессии определенных МГЭ в процессах пре- и постэмбриональной дифференцировки тканей потомства облученных животных И, в-третьих, за счет увеличения вариабельности повторов может происходить изменение позиционирования нуклеосом и генов, что в свою очередь может быть фактором модификации экспрессии [Bailey, Reeve 1999, Семин, Ильин 2005] Полиморфизм длин амплнфицированных фрагментов ДНК в разных тканях у потомков при облучении одного из родителей. Табл 1 демонстрирует изменения числа НРП (в расчете на одно животное в группе) у потомства, полученного до и после облучения самцов-родителей в дозе 50 и 200 сГр в разных тканях Наибольшее изменение числа НРП у потомства наблюдается в легких, а меньшее - в селезенке при облучении самцов -родителей ИР в дозе 50 сГр, но при дозе 200 сГр изменения числа НРП у потомства максимальны в головном мозге и минимальны в селезенке Во второй серии экспериментов (табл 2), при облучении самок — родителей ИР в дозах 50 и 100 сГр только в селезенке у потомков есть значительные изменения в числе НРП вызванные ИР, в отличие от других тканей число НРП в которых, к тому же, практически не отличается от контроля Заметный радиационно-индуцированный прирост числа НРП наблюдается во всех тканях потомков, при облучении самок - родителей ИР в дозе 200 сГр, причем он достигает максимальной величины в периферической крови, уменьшаясь в мозге, селезенке и становясь минимальным в ткани кончика хвоста Таким образом, доза ИР 200 сГр вызывает у потомства изменение числа НРП в неделящихся тканях неожиданно более заметное, чем в активно пролиферирующих тканях После облучения ИР самок-родителей в дозе 50 сГр наблюдается большее изменение в числе НРП в тканях селезенки и кончика хвоста по сравнению с числом НРП в головном мозге и периферической крови и эта тенденция усиливается при облучении самок-родителей ИР в дозе 100 сГр

Наши наблюдения, некоторым образом, согласуются с литературными данными [Narayanan et al 1997, Lee, DeSimone et al 1994, Kropasova, Slovmska et al 2002, 2004] Различия в изменении числа НРП в разных тканях у потомства облученных самцов и самок, возможно, обусловлены разным размером пулов стволовых клеток ("turnover unit") в этих тканях [Li-Sucholeiki, Thilly 2000], что определяет скорость клеточного обновления [Potten, Loeffler 1990] Особенно это, по-видимому, относится к периферической крови Различия уровня полиморфизма длин МКС-ных повторов и разной скорости накопления мутаций в разных тканях мышей можно объяснить рядом факторов спецификой тканевого метаболизма, эффективностью репарации ДНК и особенностями клеточной структуры постмитотических тканей (периферической крови, мозга и легких) потомства в сравнении с митотически активными (селезенкой и эпителием кончика хвоста) Кроме того, частота и темп спонтанных повреждений генома в клетках организма, в существенной мере, определяются тканевым балансом реактивных форм кислорода и антиоксидантов, а также калорийностью диеты [Melov et al 1997, Бурлакова и др. 2001]. В мозге и в легких предполагается более высокая концентрация, в сравнении с другими тканями, активных форм кислорода, а также продуктов перекисного окисления липидов, которые выступают в роли эндогенных генотоксических факторов [Бурлакова и др 2001, Mamett 2000] Соответственно, для указанных тканей вероятность возникновения повреждений и перестроек в ДНК, как основы полиморфизма и мутационных изменений, возможно, будет выше, чем для других тканей Специфические механизмы репарации ДНК и спонтанного мутагенеза в постмитотических тканях, в частности в клетках мозга, обсуждаются в некоторых публикациях [Evans et al 1995, Bridges 1999] He исключено, что биохимические особенности и уровень пролиферативной активности тканей потомства в случае воздействия на родителей ИР в таких дозах имеет большой вес для повышения уровня трансгенерационной НСГ

Зависимость числа НРП от пола потомков, рожденных до и после облучения одного родителей. В табл 3 и 4 представлены результаты

изменения полиморфизма длин МКС повторов после разделения по полу потомков, рожденных до и после облучения самцов - или самок - родителей

Таблица 3 Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК из разных тканей потомства, рожденного до и после облучения самцов-родителей и разделенного по половому признаку

Доза облучения родителей, номер группы пол потомков Средний % НРП (на 1 потомка в группе1)

мозг селезенка легкие Число потомков

А2 Д А

Контроль -1 группа <? 33 9± 1 8 25 5±3 0 33 8±3 2 17

$ 26 1±2 5 24 4 ±3 0 27 7±2 4 16

50 сГр -2 группа г 24 9 ±3 4 -30 6 21 9±1 7 -15 2 22 6± 2 3 -39 7 16

9 26 1±1 8 0 23 6±2 7 -3 3 26 5±1 9 -4 4 19

Контроль -5 группа S 26 9±2 2 24 1±2 4 25 5±2 3 20

? 28 8±2 5 17 8±1 7 25 9±2 9 17

200 сГр-6 группа с? 28 3±1 9 5 1 22 1±1 89 -8 7 26 3±2 3 3 1 20

$ 21 7±4 0 -28 1 16 8±2 6 -5 8 26 8±3 7 34 8

Примечание (для этой и следующей таблицы) 1- Каждая полоса на ДНК-фингерпринтах указывает положение продуктов АР-РСЯ с идентичными величинами электрофоретической подвижности,

2 — Относительная разница в % НРП потомков, рожденных до и после облучения самок-родителей, в процентах

В тканях мозга и селезенки у потомков-самок при облучении самцов-родителей ИР в дозе 50 сГр наблюдается значительно меньшее изменение числа НРП, чем у самцов - потомков, для ткани легких эта картина меняется на обратную при дозе 200 сГр В тканях легких и селезенки при облучении самцов-родителей ИР в дозе 200 сГр изменение числа НРП практически не связано с полом потомков В мозге у самок-потомков, в отличие от самцов наблюдается значительное изменение числа НРП, вызванное облучением самцов-родителей ИР в дозе 200 сГр В табл 4 представлены результаты изменения числа НРП

после разделения по полу потомков, рожденных до и после облучения самок -родителей Самки - потомки имеют значительно более высокую степень изменения числа НРП, по сравнению с самцами - потомками, в ткани эпителия кончика хвоста при всех использованных при облучении самок-родителей

Таблица 4 Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК из разных тканей потомства, рожденного до и после облучения самок-родителей и разделенного по половому признаку

Доза облучения родителей, номер группы пол потомков Средний % НРП (на 1 потомка в группе1)

мозг кровь селезенка хвост Число потомков

Д2 Д Д Д

Контроль 1 группа (5 13,2±0,9 16,6±0,9 12,7±0,7 14,2±0,9 59

? 11,7±0,7 15,2±0,9 11,4±0,8 13,6±0,9 52

50 сГр 2 группа с? 12,5±0,8 -5,0 14,7±0,9 -4,5 13,9±0,8 9,0 13 3±0,8 -6,6 69

¥ 12,1±0,7 3,4 15,1±0,9 4,0 13,4±0,7 16,1 14,2±0,9 4,3 68

Контроль 3 группа <? 14,0±0,9 16,5±0,9 14,5±1,0 15,2±0,8 35

? 11,8±1,0 14,9±1,3 15,1±1,0 12,2±1,1 41

100 сГр 4 группа в 16,5±0,8 -3,6 15,8±0,8 -4,5 15,7±0,9 7,9 14,9±1,0 -2,2 57

? 12,7±0,8 7,3 15,5±1,1 4,0 16,5±1,3 8,9 14,6±1,0 17,9 42

Контроль 5 группа с? 11,1±0,7 11,4=0,8 10,3±0,7 11,8±0,7 58

2 10,7±0,8 12,2±0,9 9,8±0,7 11,5±0,9 45

200 сГр 6 группа 15,9±0,8 35,6 19,4±0,9 51,9 13,9±0,8 29,8 14,1±0,9 17,7 54

? 18,0±1,1 50,7 20,»±1,4 52,4 14,2±1,0 36,7 15,5±0,9 29,6 50

сублетальных дозах Во всех других тканях и при всех дозах ИР примененных при облучении самок - родителей наблюдаемые колебания изменений числа НРП у разделенных по полу потомков практически не заметны Отличие между самками и самцами — потомками совсем не наблюдается в периферической крови при облучении их родителей ИР в 200 сГр Таким образом, при анализе результатов следует учесть ряд специфических характеристик мужских и

женских зародышевых клеток, которые могут быть причиной различных темпов мутирования при их повреждении [Фогель, Матульский 1990, Rüssel, Rüssel 1992, Vogel, Natarajan 1995, Нефедов, Нефедова, Палыга 2000] В этом плане при оценке уровня индуцированной трансгенерационной НСГ вследствие облучения материнского организма следует учитывать вклад в полиморфизм его митохондриальной (мт) ДНК, которая характеризуется более высокой частотой спонтанных и индуцированных мутаций, по сравнению с ядерным геномом

Частота встречаемости МЯ у родителей и потомства до и после облучения самок-родителей. Одним из традиционных способов определения уровня НСГ является подсчет микроядер в эритроцитах костного мозга

Таблица 5 Частота МЯ в эритроцитах костного мозга у потомства, рожденного до и после облучения самок - родителей [Фоменко и др., 2006]

доза облучения Частота встречаемости МЯ1 число число

родителей костный мозг потомков самок-

потомство самки-родители родителей

Контроль 3,3±2,0 45

50 сГр 5,2±1,33 5,20 ±1,53 39 10

Контроль 3,6±1,6 8

100 сГр 6,0±1,5 3 7,25 ± 1,26 16 4

Контроль 3,3±1,2 28

200 сГр 6,3±1,93 9,00 ±3,00 27 8

Примечание - Частота встречаемости МЯ подсчитывалась на 2000 эритроцитов на 1 животное в группе,

2 - Относительная разница в % НРП потомков, рожденных до и после облучения самок-родителей, в %,

3 —Значения достоверно отличаются от контрольных (р<0,01) по Стьюденту и по Фишеру

Представлялось интересным сравнить результаты полученные этим методом с результатами определения уровня НСГ по уровню полиморфизма длин МКС-ных повторов Сравнение проводилось на потомках облученных самок -родителей В таблице 5 представлены результаты по частоте МЯ, регистрируемой у облученных самок мышей и у их потомков, родившихся до (О сГр, контроль) и после облучения ИР в определенной дозе (50, 100 или 200 сГр) Полученные результаты показывают достоверное увеличение частоты МЯ в эритроцитах костного мозга у облученных самок и их потомства по сравнению с контрольным потомством На основе литературных данных [Косиченко, Алексян 1991, Luke et al 1997] и полученных нами результатов можно предположить, что постоянное формирование МЯ в популяции стволовых клеток является следствием состояния повышенного уровня нестабильности генома соматических клеток потомков облученных родителей Сравнение уровня НСГ у потомства, рожденного после облучения самок ро им (.'. it'll зарегистрированного цитогенетическим и молекулярно-биологическим методами Сравнение уровня НСГ регистрируемое по частоте встречаемости МЯ и полиморфизму длин повторов в разных тканях кроветворной системы потомков облученных в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр) самок и самцов - родителей показывает сходный характер зависимости обоих параметров от всех использованных доз ИР (Рис 1) Механизм образования НСГ в соматических клетках потомков облученных родителей до сих пор неясен Можно предположить, что клоны стволовых клеток с измененной ДНК возникают в процессе эмбриогенеза зародышей из сперматозоидов или ооцитов облученных родителей. Это может быть и не менделевское наследование аномалий в ряду поколений, как следствие состояния повышенного уровня НСГ (внутригеномных перестроек и поломок) соматических клеток организма потомков Не исключено, что причиной формирования НСГ могут быть и рекомбинационные события в процессе образования зигот с участием половых клеток, несущих нелетальные радиационные повреждения в геноме Эти результаты говорят о возможности существования трансгенерационной трансмиссии факторов, ведущих к НСГ в

потомстве облученных родителей. То есть, индуцированные радиацией до оплодотворения нелетальные повреждения в половых клетках родителей приводят к возникновению НСГ в соматических клетках их потомства.

I контроль

S g

о с

CL X

о с; о £ з-

30 25 2015 10

ЙА 1 Й

'777/:, облучение

- 20 - 15

10 5

12 3 4

1 2 3 100

Дозы ИР, сГр

12 3 4 200

о;

fe о

т ф

о.

го ё

го т

Рис. 1. Сравнение характера изменений в уровне НСГ, определяемом по числу неродителъских полос (НРП) и частоте встречаемости МЯ в постмитотических и пролиферирующих тканях кроветворной системы потомков, рожденных до («контроль») и после («облучение») облучения одного из родителей.

1 — частота встречаемости МЯ в эритроцитах костного мозга у потомков, рожденных до и после облучения самок-родителей в сублетальных дозах ИР 50, 100 и 200 сГр, (на 2000 эритроцитов на 1 животное в группе);

2 - число неродительских полос (НРП) в периферической крови у тех же потомков, в процентах;

3 - число НРП в селезенке у тех же потомков, в процентах;

4 - число НРП в селезенке у потомков, рожденных до и после облучения самцов-родителей в сублетальных дозах ИР 50 и 200 сГр, в процентах.

Выводы:

1 Показано, что на плодовитость самцов - и самок — родителей, а также на количество жизнеспособных потомков заметное воздействие оказала ИР только в сублетальной дозе 200 сГр.

2. Установлено, что при облучении ИР в сублетальных дозах (50,100 и 200 сГр) самцов или самок - родителей в соматических клетках их потомства наблюдается изменение уровня полиморфизма длин МКС-ных повторов, определяемого по изменению числа НРП относительно контроля

3 Обнаружена связь между увеличением дозы ИР, полученной одним из родителей, и изменением числа НРП у их потомства Уровень полиморфизма длин МКС-ных повторов более высок у потомков облученнных самок, чем у потомства облученных самцов

4 Продемонстрированы различия в уровне полиморфизма длин МКС-ных повторов в разных тканях потомков Наибольшее изменение числа НРП у потомства наблюдается в легких, а меньшее - в селезенке при облучении самцов - родителей ИР в дозе 50 сГр, но при дозе 200 сГр изменения числа НРП у потомства максимальны в головном мозге и минимальны в селезенке При облучении самок — родителей ИР в дозе 200 сГр у потомства наблюдается заметный прирост числа НРП во всех тканях потомков, причем он достигает максимальной величины в периферической крови, уменьшаясь в мозге, селезенке и становясь минимальным в ткани кончика хвоста При меньших сублетальных дозах (50 и 100 сГр) только в селезенке потомства наблюдается увеличение числа НРП по сравнению с контролем

5. В некоторых тканях выявлена зависимость уровня полиморфизма длин МКС-ных повторов от пола потомка. Для самок - потомков облученных самок - родителей характерно значительно большее число НРП в эпителии кончика хвоста по сравнению с самцами - потомками, во всех других исследованных тканях эти отличия были незначительны и, возможно, случайны При сравнении числа НРП у разделенных по полу потомков самцов — родителей были получены противоречивые данные, возможно, из-за маленькой выборки.

6 Показан сходный характер зависимости уровня НСГ у потомков от дозы ИР, использованной при облучении их самок-родителей, определенный цитогенетическим и молекулярно-биологическим методами У потомства самок, облученных ИР в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр), отмечено заметное увеличение частоты появления МЯ в эритроцитах костного мозга и числа НРП у потомства по сравнению с контрольным потомством

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. Компьютерный анализ вариабельности полос на ДНК-фингерпринтах // Генетика, 2000, Т36, № 4, С. 570-574 (В соавторстве с Сиротой НП, Васильевой Г В , Сиротой А Н, Безлепкиным В.Г )

2 Тканеспецифический характер повышения вариабельности МКС-ассоциированных повторов в геноме потомства у- облученных самцов мышей // Радиационная биология Радиоэкология, 2004, Т 44, № 2, С 133137 (В соавторстве с Безлепкиным В Г , Васильевой Г В , Сиротой Н П, Шайхаевым Г О , Газиевым А И.).

3 Геномная нестабильность у потомства Рг поколения у- облученных мышей, выявляемая микроядерным тестом // Радиационная биология Радиоэкология, 2006, Т46, №4, С 431-435 (В соавторстве с Фоменко Л А, Безлепкиным В Г , Газиевым А И )

4 Молекулярные маркеры нестабильности ядерной и митохондриальной ДНК у потомства самок мышей, подвергавшихся воздействию ионизирующей радиации // В сб научных трудов Достижения и проблемы генетики, селекции и биотехнологии, т 1, с 113-118, Киев, ЛОГОС, 2007 (В соавторстве с Антиповой В Н, Фоменко Л А, Васильевой Г В , Безлепкиным В Г, Газиевым А И )

5 Утилита для анализа полиморфизма продуктов АР-РСЯ как маркера

нестабильности генома // Материалы третьего Съезда общества

биотехнологов России имени Ю А Овчинникова. Москва, 25 - 27

октября 2005 г М., 2005, Изд-во ООО "МАКСПресс", С 77-78 (В

соавторстве с СкосыревымВ С , Васильевой Г В , Безлепкиным В Г )

6 AP-PCR assay of alterations in the progeny of male mice exposed to low-level y-radiation // Mutatation Research, 2001, v.485, P 133-141 (With Vasil'eva G V., Bezlepkin VG, SirotaNP, Gaziev AI).

7 Study of radiation induced genome instability in the Fl progeny of ionizing radiation-exposed mice depending on the sex of parents In Current Problems of Radiation Research (Proceedings of the 35th Annual Meeting of the European Radiation Research, 22-25 August, Kyiv, 2006) / Ed By D Grodzinsky, A. Dmitriev Kyiv, 2007, p 17-25. (With Fomenko L A, Lomaeva M G., Bezlepkin V G, Gaziev A.I.)

8 Study of radiation mduced genome instability in the Fl progeny of ionizing radiation-exposed mice depending on the sex of parents // In Abstracts of The 35th Annual Meeting of the European Radiation Research Society, Kiev (August 22-25, 2006 ) Kiev, Agency "Chernobylinterinform", p 28 (With Fomenko L A, Bezlepkin V G, Gaziev AI)

9 Study of transgenerational effects of ionizing radiation m mice by DNA fingerprinting on AP- PCR basis II In Abstracts of The 35th Annual Meeting of the European Radiation Research Society, Kiev (August 22-25, 2006 ) Kiev, Agency "Chernobylinterinform", p. 40 (With Bezlepkin V.G, Lomaeva M G, Fomenko L A, Gaziev AI)

Подписано в печать 27 11 2007 г

Печать трафаретная

Заказ № 1024 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56, (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ломаева, Милена Гелиевна

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Спонтанная и индуцированная НСГ

1.2. Трансмиссибельная и трансгенерационная НСГ 12 1.2.1. НСГ регистрируемая в структурных генах

1.3. Повторяющиеся последовательности ДНК

1.3.1. Классификация повторов

1.3.2. Семейства повторов

1.3.3. Распределение МНС и МКС по геному

1.4. Вариабельность повторов 18 1.4.1 .Спонтанная вариабельность МНС и МКС

1.4.2. Роль МКС и МНС в функционировании организма

1.4.3. Индуцированная вариабельность МКС и МНС

1.5. Трансгенерационный полиморфизм МНС и МКС

1.5.1. Стадии сперматогенеза и оогенеза

1.5.2. Различие стадий сперматогенеза по чувствительности

1.5.3. Различие чувствительности сперматозоидов и ооци- 27 тов к ИР

1.5.4. Влияние облучения ИР самцов или самок на их 28 необлученное потомство

1.6. Применение различных методов ПЦР к исследованию

2. Материалы и методы исследования 37 2.1. Животные 37 2.1.1 .Характеристика линии BALB/c

2.1.2. Содержание животных во время экспериментов.

2.1.3. Облучение животных

2.1.4. Сбор и хранение образцов тканей животных 38 2.2. Оборудование и материалы

2.2. ¡.Оборудование

2.2.2.Ферменты и биопрепараты

2.2.3.Реагенты

2.3. Фенольный метод выделения ДНК

2.4. Препараты для подсчета МЯ в эритроцитах

2.5. Полимеразная цепная реакция (ПНР)

2.5.1. Выбор праймера и оптимизация условий ПЦР

2.5.2. Условия ПЦР

2.6. Полиакриламидный вертикальный гель-электрофорез 48 (ПААГ)

2.7. Окрашивание гелей с помощью азотнокислого серебра

2.8. Компьютерная обработка изображений

2.9. Статистическая обработка результатов 51 3. Результаты и обсуждение

3.1. Схемы экспериментов

3.1.1. Схема серии экспериментов по изучению трансгене- 53 рационных эффектов острого гамма-облучения самцов мышей

3.1.2. Схема серии экспериментов по изучению трансгене- 54 рационных эффектов острого гамма-облучения самок мышей

3.2. Влияние облучения на репродуктивные свойства жи- 58 вотных-родителей и жизнеспособность их потомства

3.2.1. Плодовитость самок линии В ALB/с

3.2.2. Жизнеспособность потомства, родившегося до и по- 62 еле облучения одного из родителей

3.2.3. Численность потомков в помете и половой индекс

3.3. Полимеразная цепная реакция

3.4. Систематизация первичных данных

3.5. Построение гистограмм распределения

3.6. Полиморфизм длин МКС-ассоциированных повторов в 75 геномной ДНК у потомков при облучении одного из родителей

3.6.1. Полиморфизм длин амплифицированных фрагментов 75 ДНК в разных тканях у потомков при облучении одного из родителей

3.6.2. Радиационно-индуцированный полиморфизм длин 80 амплифицированных фрагментов ДНК у потомков при облучении одного из родителей

3.7. Зависимость степени полиморфизма длин амплифици- 85 рованных фрагментов ДНК от пола потомков

3.8. Частота встречаемости МЯ у родителей и потомства до 91 и после облучения самок-родителей

3.9. Сравнение уровня НСГ у потомства, рожденного после 93 облучения самок - родителей зарегистрированного цитогенетическим и молекулярно-биологическим методами

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей"

Актуальность темы. Ионизирующая радиация (ИР) в виде естественно- -го радиационного фона Земли является одним из наиболее существенных экологических факторов в процессах адаптации, видообразования и эволюции живого мира в целом. Однако с середины прошлого века характер воздействия ИР на эти процессы резко изменился, что обусловлено глобальным загрязнением среды обитания вследствие радиационных аварий и испытаний ядерного оружия, увеличением количества объектов ядерной энергетики и военно-промышленного комплекса, а также использованием источников PIP в медицине [UNSCEAR 2001; Алтухов и др. 2004; Гераськин и др. 2006]. В человеческой популяции постоянно возрастает доля индивидов, подвергавшихся воздействию PIP. В связи с этим изучение действия ИР в сублетальных дозах на человека очень актуальны [UNSCEAR 2001]. Крайне важным является также выявление и количественная оценка уровня индуцированной трансгенерационной нестабильности генома (НСГ), основу которой, как полагают, составляют повреждения, возникающие в геноме клеток полового пути родителей, подвергшихся радиационному воздействию. [Niwa, Kominami 2001; Shimada, Shima 2004; Barber et al. 2006]. Проведение такого рода экологических исследований затруднено недостаточным количеством эпидемиологических данных. Поэтому для оценки генетического риска в рамках концепции «человек-мышь» многие работы в этой области проводят на животных.

Многообразие вариантов полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяет перейти от традиционного цитогенетического анализа хромосомных аберраций и микроядер (МЯ) к выявлению мутаций в кодирующих локусах, а также количественно оценивать уровень генетической изменчивости (мутации, а также полиморфизм ДНК) и в неэкспрессируемых областях. К таким областям относятся, например, гипервариабельные минисателлитные (МНС) и микросател-литные (МКС) повторы, занимающие подавляющую часть генома животных и растений. Повышенная природная вариабельность МКС и МНС, делает их информативными генетическими маркерами. Такие маркеры, одновременно характеризующие геном по множеству локусов, называются мультилокусными. Их использование позволяет значительно повысить вероятность обнаружения изменений в геноме и уменьшить число объектов в обследуемых выборках, особенно, при исследовании эффектов ИР в сублетальных дозах [Алтухов и др. 2004]. Работы Дуброва и соавторов показывают передающееся по наследству увеличение вариабельности специфических и гипервариабельных ESTR (expanded simple tandem repeats) мышиных локусов в результате облучения [Dubrova et al. 1993, 1996, 1998, 2000, 2002, 2005]. Дуброва и коллеги успешно применили этот подход и при исследовании семей, проживавших на загрязненной после Чернобыльской аварии территории Могилевской области Белоруссии [Dubrova et al. 1996, 1997]. Есть и другие работы, где удачно использовалась полиморфная ДНК для оценки генетической нестабильности, возникающей у потомков облученных родителей [UNSCEAR 2000; Niwa et al. 2001; Kodaira et al. 2004].

Помимо анализа вариабельности определенных МКС и МНС локусов довольно широкое распространение получил метод оценки генетической нестабильности по полиморфизму длин фрагментов ДНК. В литературе метод упоминается как arbitrary primed PCR (AP-PCR) или random amplified polymorphic DNA (RAPD). Ранее нами, с помощью AP-PCR, нами было показано увеличение генетического полиморфизма длин фрагментов ДНК у потомков мышей линии ВALB/c, хронически облученных ИР в дозах 0,1 — 0,5 Гр [Безлепкин и др. 2000]. Необходимость исследования последствий острого облучения родителей для потомства обусловлена тем, что эффекты хронического и острого облучения различаются [Безлепкин и др. 2004]. Кроме того, слабо изученными остаются тканеспецифические последствия действия ИР на потомков облученных родителей. Также вызывает большой интерес наличие различий в эффектах от ИР у разнополых облученных родителей, а также их разделенных по полу необлученных потомков.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы заключалась в сравнении уровня радиационно-индуцированой нестабильности генома (НСГ) у потомков мышей линии ВАЬВ/с, рожденных после облучения сублетальными дозами ИР самцов- или самок-родителей.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. 1. Выявить возможное влияние сублетальных доз ИР на плодовитость облученных мышей - родителей и жизнеспособность их потомства.

2. Оценить индуцированную НСГ у потомства, рожденного от самцов - или самок - родителей, облученных в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр) по уровню полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов.

3. Сравнить полиморфизм размеров повторов в некоторых постмитотиче-ских (кровь, головной мозг, легкие) и пролиферирующих (селезенка, кончик хвоста) тканях потомства самцов и самок, подвергавшихся воздействию РТР в сублетальных дозах.

4. Выявить возможные половые отличия в уровне полиморфизма длин МКС-ассоциированных повторов, определяемом по числу неродительских полос (НРП) у потомства, рожденного от облученных самцов - или самок - родителей.

5. Сравнить уровень НСГ, выявляемый по молекулярно-генетическим (полиморфизм МКС) и по цитогенетическим (частота встречаемости МЯ) маркерам, у потомства самок, облученных ИР в сублетальных дозах. Научная новизна и практическая значимость. Впервые продемонстрирована возможность применения АР-РСЯ анализа для оценки индуцированной РТР вариабельности длин МКС-ассоциированных повторов. Впервые проведен сравнительный анализ радиационно-индуцированной НСГ потомства, облученных ИР в области сублетальных доз от 50 до 200 сГр самцов и самок мышей линии ВАЬВ/с методом оценки полиморфизма длин фрагментов ДНК, ампли-фицированных с праймером из последовательности, фланкирующей МКС-локус на 11-ой хромосоме мышей. Нами обнаружены связанные с типом ткани и полом различия в уровне полиморфизма длин повторов у потомков, родившихся до и после облучения одного из родителей в сублетальной дозе 200 сГр. Для обработки результатов впервые было использовано специально разработанное программное обеспечение (ПО), позволяющее значительно уменьшить влияние субъективных факторов и сильно ускорить анализ и статистическую обработку большого массива данных. Результаты работы могут быть использованы для экстраполяции данных с целью оценки генетического риска воздействия острого облучения в малых и умеренных дозах на человека. Кроме того, полученные результаты позволяют рассматривать метод АР-РС11 в качестве одного из важных компонентов эффективных систем радиоэкологического мониторинга и расчета экологических рисков.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Экология", Ломаева, Милена Гелиевна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Показано, что на плодовитость самцов - и самок - родителей, а также на количество жизнеспособных потомков заметное воздействие оказала ИР только в сублетальной дозе 200 сГр.

Установлено, что при облучении ИР в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр) самцов или самок - родителей в соматических клетках их потомства наблюдается изменение уровня полиморфизма длин МКС-ных повторов, определяемого по изменению числа НРП относительно контроля.

Обнаружена связь между увеличением дозы ИР, полученной одним из родителей, и изменением числа НРП у их потомства. Уровень полиморфизма длин МКС-ных повторов более высок у потомков облученных самок, чем у потомства облученных самцов.

Продемонстрированы различия в уровне полиморфизма длин МКС-ных повторов в разных тканях потомков. Наибольшее изменение числа НРП у потомства наблюдается в легких, а меньшее - в селезенке при облучении самцов - родителей ИР в дозе 50 сГр, но при дозе 200 сГр изменения числа НРП у потомства максимальны в головном мозге и минимальны в селезенке. При облучении самок - родителей ИР в дозе 200 сГр у потомства наблюдается заметный прирост числа НРП во всех тканях потомков, причем он достигает максимальной величины в периферической крови, уменьшаясь в мозге, селезенке и становясь минимальным в ткани кончика хвоста. При меньших сублетальных дозах (50 и 100 сГр) только в селезенке потомства наблюдается увеличение числа НРП по сравнению с контролем.

В некоторых тканях выявлена зависимость уровня полиморфизма длин МКС-ных повторов от пола потомка. Для самок - потомков облученных самок - родителей характерно значительно большее число НРП в эпителии кончика хвоста по сравнению с самцами - потомками, во всех других исследованных тканях эти отличия были незначительны и, возможно, случайны. При сравнении числа НРП у разделенных по полу потомков самцов - родителей были получены противоречивые данные, возможно, из-за маленькой выборки.

Показан сходный характер зависимости уровня НСГ у потомков от дозы ИР, использованной при облучении их самок-родителей, определенный цитогенетическим и молекулярно-биологическим методами. У потомства самок, облученных ИР в сублетальных дозах (50, 100 и 200 сГр), отмечено заметное увеличение частоты появления МЯ в эритроцитах костного мозга и числа НРП у потомства по сравнению с контрольным потомством.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ломаева, Милена Гелиевна, Москва

1. Безлепкин В.Г., Газиев А.И. Индуцированная нестабильность генома половых клеток по мини микросателлитным последовательностям // Радиационная биология. Радиоэкология.- 2001.- т.41.- №5.- с.475 - 488.

2. Бекетов C.B., Каштанов С.Н. Влияние наследственных особенностей самцов песца (Alopex lagopus L.) на половой состав потомства // Генетика. 2005,- т.41.- №3. - с.422-426.

3. Бландова З.К., Душкин В.А., Малашенко A.M., Шмидт Е.Ф. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований. М.: Наука, 1983.

4. Булатов В.И. Россия радиоактивная. Новосибирск, 1996.

5. Будагов P.C. Чувствительность облученных животных к возбудителям особо опасных инфекций (обзор литературы) // Радиационная биология. Радиоэкология,- 2004.- т.44. №5.- с.544-546.

6. Булдаков JI.A., Калистратова B.C. Радиационное воздействие на организм. Положительные эффекты. М.: Информ-Атом.- 2005.- 247 с.

7. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Жижина Г.П., Конрадов A.A. Новые аспекты закономерностей действия низкоинтенсивного облучения в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология.- 1999.- т.39.- №1.-с.26-34.

8. Бурлакова Е.Б., Михайлов В.Ф., Мазурик В.К. Система окислительно-восстановительного гомеостаза при радиационно-индуцируемой нестабильности генома // Радиационная биология. Радиоэкология.- 2001.- т.41.-№5.- с.489-499.

9. Воробцова И.Е. Мутабильность клеток печени потомства облученных самцов крыс // Радиобиология. 1987.- т.27.- №3.- с.377-381.

10. Воробцова И.Е., Воробьева М.В., Богомазова А.Н. и др. Зависимость частоты стабильных и нестабильных аббераций хромосом от дозы облучения лимфоцитов человека in vitro // Радиационная биология. Радиоэкология.- 1997.- Т.37.- №2.- с.233-239.

11. Воробцова И.Е. Трансгенерационная передача радиационно-индуцированной нестабильности генома // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. - т.46. - №4. - с.441 - 446.

12. Гераськин С.А., Фесенко C.B., Алексахин P.M. Воздействие аварийного выброса Чернобыльской АЭС на биоту // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006.- т.46. - №2.- с. 178 - 188.

13. Гостимский С.А., Кокаева З.Г., Коновалов Ф.А. Изучение организации и изменчивости генома растений с помощью молекулярных маркеров // Генетика,- 2005.- т.41.- №4.- с.480 492.

14. Гречко В.В. Молекулярные маркеры ДНК в изучении филогении и систематики // Генетика. 2002. - т.38. - №8. - с.1013 - 1033.

15. Гродзинский Д.М., Гудков И.Н. Радиационное поражение растений в зоне влияния аварии на Чернобыльской АЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. - т.46. - №2. - с. 189 - 199.

16. Гундерина JJ.K, Кикнадзе И.И., Истомина А.Г., Голыгина В.В. Изменчивость и дивергенция мультилокусных маркеров генома у видов рода Chironomus (Díptera, Chironomidae) II Генетика.- 2005. т.41. - №12.- с. 1634 -1643.

17. Гундерина JI.K, Салина Е.А. Полиморфизм и дивергенция мультилокусных маркеров ДНК у видов-двойников Chironomus riparius и Chironomus piger Strenzke (Díptera, Chironomidae) II Генетика.- 2003.- т.39. -№8.- С.1059- 1065.

18. Дуброва Ю.Е. Нестабильность генома среди потомков облученных родителей. Факты и их интерпретация // Генетика.- 2006. т.42. - №10. -С.1335 - 1347.

19. Дуброва Ю.Е., Джефрис Ф.Дж., Малашенко A.M. Мутации в ми-нисаттелитной ДНК мышей, индуцированные радиацией // Генетика. 1993.-т.29. - №7. - с.1157 - 1162.

20. Евсеева Т.Н., Майстренко Т.А., Герасъкин С.А., Белых Е. С. Генетическая изменчивость в ценопопуляции горошка мышиного на участке с повышенным уровнем естественной радиоактивности // Радиационная биология. Радиоэкология. 2007. - т.47. - №1. - с.54 - 62.

21. Ермаков A.B., Вейко H.H., Моисеева О.С. и др. Транспозиция ло-кусов хромосом в клетках-свидетелях при воздействии адаптирующих доз ионизирующей радиации // Радиационная биология. Радиоэкология.- 2005. -т.45.- №5. с.535 - 540.

22. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные, их разведение, содержание и использование в эксперименте // Киев.-1962.

23. Иванов М.К., Ревенко A.C., Кабилов М.Р., Дымшиц Г.М. RAPD-анализ митохондриальной ДНК сахарной свеклы: использование для поиска генов системы ЦМС // Доклады Академии Наук.-2002. т.387. - №2. -с.279 -281.

24. Ильинских H.H., Юркин А.Ю., Ильинских E.H., Ильинских И.Н. Радиоактивность и радиоактивные элементы в среде обитания человека // Материалы II Междунар. конф. 18-22 октября 2004 г. / Под ред. Рихванова Л.П. Томск: Тандем-Арт. 2004. - с. 222 - 224.

25. Ковеза О.В., Кокаева З.Г., Коновалов Ф.А., Гостимский С.А. Выявление и картирование полиморфных RAPD-маркеров генома гороха (Pisum sativum L.) II Генетика. 2005. - т.41. - №3. - с.341 - 348.

26. Косиченко U.U., Алексян A.A. Цитогенетическое исследование клеток костного мозга детенышей первого поколения от облученных обезьян //Цитология.-1991.- т.ЗЗ. №7.- с.117-121.

27. Кузнецова О.И., Аш O.A., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Исследование растений-регенерантов гороха (Pisum sativum L.) с помошью молекулярных RAPD- и ISSR-маркеров //Генетика.- 2005. т.41. - №1. - с.71 - 77.

28. Кузьмина Н.С., Васильева И.М., Синелыцикова Т.А., и др. Полиморфизм генов глютатион S - трансфераз и нарушения репарации ДНК // Радиационная биология. Радиоэкология.- 2006. - т.46. - №4. - с. 424 - 428.

29. Лакин Г.Ф. Биометрия.- М.: Высшая школа.- 1980.

30. Любимова И.Е., Воробцова И.Е. Влияние возраста и низкодозово-го облучения на частоту хромосомных аберраций в лимфоцитах человека // Радиационная биология. Радиоэкология.-2007. т.47. - №1.-с. 80 -85.

31. Мазурик В.К., Михайлов В.О. Радиационно-индуцированная нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенное значение // Радиационная биология. Радиоэкология.- 2001. т.41. - №3. - с. 272 -289.

32. Морозова Е.И., Рысков А.П., Семенова С.К. RAPD-изменчивость двух видов трематод (Fasciola hepatica u Dicrocoelium denditicum) из популяции крупного рогатого скота // Генетика.- 2002. т.38. - №8. - с. 1155 - 1162.

33. Муксинова К.Н., Никольская Н.Г. Абберации хромосом в родона-чальных кроветворных клетках-предшественниках в поздние сроки после длительного внешнего облучения // Радиобиология. 1987. -т.27. - №3. -с.411 -413.

34. Мязин А.Е. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма ДНК у потомков мышей, подвергшихся острому и хроническому у-облучению: Дис. канд. биол. наук.- М.: 2006.-100 с.

35. Назаренко С.А., Тимошевский В.А. Сравнительный анализ частоты анеуплоидии в покоящихся и делящихся клетках человека при воздействии вредных внешнесредовых факторов // Генетика.- 2005. т.41. - №3. -с.391 -395.

36. Нефедов И.Ю., Нефедова И.Ю., Палыга Г.Ф. Актуальные аспекты проблемы генетических последствий облучения млекопитающих // Радиа-цонная биология. Радиоэкология.- 2000. т.40. - №4. - с.358 -372.

37. Никаноров Ю.М., Бенъковская Г.В., Николенко А.Г., Поскряков A.B., Вахитов В.А. Использование метода ПЦР для контроля чистопородно-сти пчелосемей Ahis mellifera mellifera L. в условиях Южного Урала // Генетика. -1998. т.34. - №11.- с.1574 - 1577.

38. Николенко А.Г.,. Поскряков A.B. Полиморфизм локуса COI-COII митохондриальной ДНК медоносной пчелы Ahis mellifera L. на Южном Урале // Генетика. 2002. - т.38. - №4. - с.458 - 462.

39. Новое в клонировании ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера.- М.: Мир.- 1989.

40. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие).-М.: Наука.- 1981.-536 с.

41. Рысков А.П. Мультилокусный ДНК-фингерпринтинг в генетико-популяционных исследованиях биоразнообразия // Молекулярная биология. -1999.- т.ЗЗ. №6.- с.997- 1011.

42. Салменкова Е.А., Омельченко В.Т., Радченко O.A., Гордеева Н.В., Рубцова Г.А., Романов Н.С. Генетическая дивергенция гольцов рода Salvelinus Кроноцкого озера (полуостров Камчатка) // Генетика. 2005. -Т.41.- № 8.- с.1096- 1107.

43. Сарапульцев Б.И., Герасъкин С.А. Генетические основы радиорезистентности и эволюция.- М.: Атомэнергоиздат. -1993. 209 с.

44. Сафонова Л.Д., Шустрова И.В., Митрофанов В.Г. Влияние повышенного радиационного фона на мышей, несущих летальные t-гаплотипы // Генетика. 1998. - т.34. - №5. - с.682 - 687.

45. Севанькаев A.B. Некоторые итоги цитогенетических исследований в связи с оценкой последствий Чернобыльской аварии // Радиацонная биология. Радиоэкология. 2000. - т.40. - №5. - с.589 - 595.

46. Семин Б.В., Ильин Ю.В. Многообразие ДКП-ретротраспозонов и механизмы их участия в реорганизации генома // Генетика. 2005. - т.41.-№4. - с.542 - 548.

47. Серебряный A.M., Алещенко A.B., Готлиб В.Я., и др. О реакции клеточной популяции на облучение в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология.-2007. т.47. - №1.- с.93 - 99.

48. Сирота Н.П., Васильева Г.В., Ломаева М.Г., Сирота А.Н., Без-лепкин В.Г. Компьютерный анализ вариабельности полос на ДНК-фингерпринтах // Генетика. 2000. - т.36. - №4.- с.570 - 574.

49. Сусков И.И., Агаджанян A.B., Кузьмина Н.С. и др. Проблема трансгенерационного феномена геномной нестабильности у больных детей разных возрастных групп после аварии на ЧАЭС // Радиационная биология.

50. Радиоэкология. 2006. - т.46. - №4. - с.466 -474.

51. Фогель Ф., МатульскийА. Генетика человека. М.: Мир. - 1990.

52. Фоменко Л.А., Васильева Г.В., Безлепкин В.Г. В эритроцитах костного мозга самцов мышей, подвергавшихся хроническому гамма-облучению в малых дозах, повышена частота микроядер // Известия АН. Сер. Биол.- 2001.- т.4. с.419 - 423.

53. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. М.: Наука. - 1985.

54. Хрисанфова Г.Г., Семенова С.К., Рысков А.П. Клонирование и характеристика РАПИД-маркеров генома паразитических нематод Trichinella spiralis и Т. Pseudospiralis // Молекулярная биология. 2000. - т.34. - №5. -с.828-833.

55. Хрунин A.B., Бебякова H.A., Иванов В.П., Солодилова М.А., Лим-борская С.А. Полиморфизм микросаттелитов Y-хромосомы в русских популяциях севера и юга России на примере Курской и Архангельской областей // Генетика. 2005. - т.41.-№8. - с.1125-1131.

56. Четрв Ю.С. Введение в клеточную биологию. М.: Академкнига.- 2004. - 495с.

57. Чехович A.B., Померанцева М.Д., Рамайя Л.К., Шевченко В.А. Мутационный процесс у мышевидных грызунов, обитающих в районах с повышенным фоном радиации // Радиационная биология. Радиоэкология. 2000. т.40. -№ 5. - с. 605 - 608.

58. Шевченко В.А. Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека / Под ред. Бурлаковой Е.Б. М.: ЦЭПР. - 1996. - с.50 - 67.

59. Шевченко В.А. Современные проблемы оценки генетического риска облучения человека // Радиацонная биология. Радиоэкология. 2000. -т.40. - №5. - с.630 - 639.

60. Шевченко В.А., Померанцева М.Д. Генетические последствия действия ионизирующих излучений // М.: Наука.- 1985. 279 с.

61. Элъконин JI. А., Тырнов В. С. Генетический контроль цитоплазма-тической мужской стерильности растений: состояние проблемы и современные подходы для ее исследования // Генетика.- 2000. т.36. - №4. - с.437 -450.

62. Aaltonen L.A., Peltomaki P., Leach F.S. et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer // Science 1993. - v.260. - p. 812 - 816.

63. Andres A.M. et al. Comparative genetics of functional trinucleotide tandem repeats in humans and apes // J. Mol. Evol. 2004. - v.59.- №3. - p.329 -339.

64. Armour J.A.L., Monckton D.G., Neil D.L. et al Mechanisms of mutation at human minisatellite loci // Genome analysis. v. 7. - Genome arrangement and stability. N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press. - 1993. - p. 43 - 57.

65. Ashwood-Smith M.J., Edwards R.G. DNA repair by oocytes // Molec. Human Reproduc. 1996. - v.2. - p. 46 - 51.

66. Bapat В. V., Madlensky L., Temple L.K.F. et al. Family history characteristics, tumor microsatellite instability and gennline MSH2 and MLH1 mutations in hereditary colorectal cancer // Hum. Genet. 1999. - v. 104. - p. 167 - 176.

67. Barber R.C., Hichebotham P., Hatch T. et al. Radiation-induced transgenerational alterations in genome stability and DNA damage // Oncogene. -2006. v.25. - p. 7336 - 7342.

68. Barber R.C., Plumb M.A., Boulton E. et al Elevated mutation rates in the germline of first second generation offspring of irradiated male mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2002. - v.99. - №10. - p. 6877 - 6882.

69. Bois P., Jeffreys A.J. Minisatellite instability and germline mutation // Cell Mol. Life Sci. 1999. - v.55. - p. 1636 - 1648.

70. Bois P., Stead J.H.D., Bakshi S. et al Isolation and characterization of mouse minisatellites // Genomics. 1998. - v.50. - p. 317 - 330.

71. Bois P., Williamson J., Brown J., et al. A novel unstable mouse VNTR family expanded from SINE B1 element // Genomics. 1998. - v.49. - p. 122- 128.

72. Bouffler S.D., Bridges B.A., Cooper D.N. et al. Assessing radiation-associated mutational risk to the germline: repetitive DNA sequences as mutational targets and biomarkers // Radiat. Res. 2006. - v. 165. - №3. - p. 249 - 268.

73. Bridges B.A. DNA repair: Polymerases for passing lesions // Curr. Biol. 1999. - v.9. - №13. - p. 475 - 477.

74. Brinkmann B., Klintschar M., Neuhunder F. et al. Mutation rate in human microsatellites: influences of the tandem repeat // Am. J. Hum. Genet. -1998.-v.62.-p. 1408- 1415.

75. Brinlanann B., Meyer E., Jungle A. Complex mutational events at the HumD21Sll locus // Hum. Genet. 1996. - v.98. - p. 60 - 64.

76. Burruel V.R., Raabe O. G., Wiley L.M. In vitro fertilization rate of mouse oocytes with spermatozoa from the F1 offspring of males irradiated with 1.0 Gy 137Cs gamma-rays // Mutat. Res. 1997. - v.381. - p. 59 - 66.

77. Butte A. The use and analysis of microarray data // Nat. Rev. Drug Discov. 2002. - v. 1. - p. 951 - 960.

78. Caetano-Anolles G., Gresshoff P.M. Staining nucleic acids silver: an alternative to radioisotopic and fluorescent labeling // Promega Notes Magazine. -1994.-v.45.-p. 13-18.

79. Capriglione N., DeSanto M.G., Odierna G., Olmo E. An alphoid-like satellite DNA sequence is present in the genome of a lacertid lizards // J. Mol. Evol. 1998. - v.46. - p. 240 - 244.

80. Cattanach B.M., Patrick G., Papworth D. et al. Investigation of lung tumour induction in BALB/cJ mice following paternal X-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 1995. - v.67. - p. 607 - 615.

81. Chenal C., Legue F., Nourgalieva K., Brouazin-Jousseaume V, Durel S, Guitton N. Exposition of humans to low doses and low dose rate irradiation: anurgent need for new markers and new models // Radiats Biol Radioecol. 2000. -v.40. - №5. - p. 627-629.

82. Dieringer D., Schlotterer C. Two distinct modes of microsatellite mutation processes: evidence from the complete genomic sequences of nine species / Genome Res. 2003. - v. 13. - №10. - p. 2242 - 2251.

83. Dietmaier W., Wallinger S., Bocker T. Diagnostic microsatellite instability: definition and correlation with mistmatch repair expression // Cancer Res. -1997.-v.57.-p. 4749-4756.

84. Dubrova Y.E. Radiation-induced transgenerational instability // Oncogene. 2003. - v.22. - p. 7087 - 7093.

85. Dubrova Y.E., Jeffreys A.J., Malashenko A.M. Mouse minisattelite mutations induced by ionizing radiation // Nat. Genet. 1993. - v.5. - №1. - p. 92 -94.

86. Dubrova Y.E., Nesterov V.N., Krouchinsky N.G. et al. Ostapenko VA, Neumann R, Neil DL, Jeffreys AJ. Human minisatellite mutation rate after the Chernobyl accident//Nature. 1996. - v.380. - №6576. - p. 683-686.

87. Dubrova Y.E., Plumb M., Brown J., Jeffreys A.J. Radiation-induced germline instability at minisatellite loci // Int. J.Radiat.Biol. 1998. - v.74. - №6. -p. 689 - 696.

88. Dubrova Y.E., Plumb M.A. Ionizing radiation and mutation induction at mouse minisattelite loci. The story of the two generations // Mutat. Res. 2002. -v.499.-p. 143 - 150.

89. Dubrova Y.E., Plumb M.A., Brown J., et al. Stage specificity, dose response, and doudling dose for mouse minisattelite germ-line mutation induced by acute radiation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - v. 95. - p. 6251 - 6255.

90. Dubrova Y.E., Plumb M.A., Brown J. et al. Induction of minisattelite mutations in the mouse germline by low-dose chronic exposure to y-radiation and fission neutrons // Mutat. Res. 2000. - v.453. - №1. - p. 17 -24.

91. Dubrova Y.E., Plumb M.A., Gutierrez B. Transgenerational mutation by radiation // Nature. 2000. - v.405. - № 6782. - p.37.

92. Dubrova Y.E., Jeffreys A.J., Malashenko A.M. Mouse minisatellite mutations induced by ionizing radiation // Nature Genet. 1993. - v.5. - p. 92 - 94.

93. Dubrova Y.E. Radiation-induced mutation at tandem repeat DNA loci in the mouse germline: Spectra and doubling doses // Radiat. Res. 2005. - v. 163. -p. 200-207.

94. Ellegren H. Microsatellites: simple sequences with complex evolution // Nature Genetics 2004. - v.5. - p. 5435 - 5445.

95. Evans D.A., Burbach J.P., van Leeuwen F.W. Somatic mutations in the brain: relationship to aging? // Mutat. Res. 1995. - v.338. - №1-6. - p. 173 -182.

96. Eukaryotic transposable elements as mutagenic agents / Eds. Lambert M.E., McDonald J.F., Weistein J.B.N.Y.: Cold Spring Harbor Press, 1988.

97. Fenech M., Holland N., Chang W.P. et al. The HUman MicroNucleus Project An international collaborative study on the use of the micronucleus technique for measuring DNA damage in humans // Mutat. Res. - 1999. - v.248. - p. 271 -283.

98. Fomenko L.A., Vasil 'eva G. V., Bezleppkin V. G. Elevated micronucleus frequency in bone marrow erythrocytes in the progency of male mice exposed to chroniclow-dose gamma irradiation // Biol. Bull. 2001. - v.28. - p. 350 - 353.

99. Galvao R. et al. Triplet repeats, RNA secondary structure and toxic gain-of-function models for pathogenesis // Brain Res. Bull. 2001. - v.56. - №3-4.-p. 191-201.

100. Gardner M.J., Snee M.P., Hall A.J. et al. Methods and basic data of case-control study of leukaemia and lymphoma among young people near Sella-field nuclear plant in West Cumbria // Br. Med. J. 1990. - v.300. - p. 423 - 429.

101. Gates A.H. II In: Methods in Mammalian Embriology / Ed. J.C. Daniel. Jr., W.H. Freeman & Co. San Francisco: 1971. - p. 64-75.

102. Genetic Instability and Tumorigenesis. /Ed. M.B. Kastan. Berlin: Springer, 1997.-pp. 210.

103. Goldberg Z. Clinical implications of radiation-induced genomic instability // Oncogene. 2003. - v.22. - p. 7011 - 7017.

104. Goodhead D.T. Spatial and temporal distribution of energy // Health Physics. 1988. - v.55. - №2. - p. 231 - 240.

105. Gorbunova V., Seluanov A., Mittelman D., Wilson J.H. Genome-wide demethylation destabilizes CTG*CAG trinucleotide repeats in mammalian cells // Human Molecular Genetics. 2004. - v. 13. - №23. - p. 2979 - 2989.

106. Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J. et al. Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of simple-sequence repeats // Theor. Appl. Genet. 1994. - v.89. - p. 998 - 1006.

107. Hahn E. W., Feingold S.M., Simpson L., Batata M. Recovery from as-permia induced by low-dose radiation in seminoma patients // Cancer. 1982. -v.50. - №2. - p.337 - 340.

108. Harms-Ringdahl M. Some aspects on radiation induced transmissible genomic instability // Mutat. Res. 1998. - v.404. - p. 27 - 33.

109. Hefferon T.W. et al. A variable dinucleotide repeat in the CFTR gene contributes to phenotype diversity by forming RNA secondary structures that alter splicing // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. - v.101. - №10. - p. 3504 - 3509.

110. Hill C.K., William-Hill D. Neutron carcinogenesis: past, present, and future // J. Radiat. Res. 1999. - v. 40. - p. 117 -127.131 .http://www.jgi.doe.gov/programs/comparative/secondlevels/mitochond ria/MtDNAinfo.html

111. Huang L., Snyder A.R., Morgan W.F. Radiation-induced genomic instability and its implications for radiation carcinogenesis // Oncogene. 2003. -v.22. - p. 5848 - 5854.

112. Huang Q.Y., Xu F.H., Shen H, Deng H.Y., Liu Y.J., Liu Y.Z., Li J.L., Recker R.R., Deng H. W. Mutation patterns at dinucleotide microsatellite loci in humans // Am. J. Hum. Genet. 2002. - Mar., v.3. - №70. - p. 625 -634. Epub. 2002 Jan.

113. In K.H. et al. Naturally occurring mutations in the human 5-lipoxygenase gene promoter that modify transcription factor binding and reporter gene transcription // J. Clin. Invest. 1997. - v.99. - №5. - p. 1130 -1137.

114. Iwasaki T., Hashimoto N., Endoh D. et al. Life span and tumours in the first-generation offspring of the gamma-irradiated male mouse // Int. J. Radiat. Biol. 1996. - v.69. - p. 487 - 492.

115. Jeffreys A.J. Highly variable minisatellites and DNA fingerprints // Biochem. Soc. Trans. 1987. - v.l5. - p. 309 - 317.

116. Jeffreys A.J., Bois P., Buard J. et al. Spontaneous and induced minisatellite instability // Electrophoresis. 1997. - v.18. - №9. - p. 1501 -1511.112

117. Jeffreys A.J., Tamaki K., MacLeod A., Monckton D.G., Neill' D.L. and Armour J. A. L. Complex gene conversion events in germline mutation at human minisatellites //Nature Genetics. 1994. - Feb., v.6. - p. 136 - 145.

118. Kaiser M., Roewer L., Hedman M. et al. Characteristic and frequency of germline mutations at microsatellite loci from the human Y-chromosome, as revealed by direct observation in father/son pairs // Am. J. Hum Genet. 2000. -v.66. - p. 1580- 1588.

119. Kaneda H., Hayashi J., Takahama S., Taya C., Lindahl K.F., Yonekawa H. Elimination of paternal mitochondrial DNA in intraspecific crosses during early mouse embryogenesis // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1995. - v.92. - p. 4542 -4546.

120. Karp A., Edwards K. II In: DNA markers: global overview DNA markers: Protoclos, application and overview / Ed. G. Caentano-Anolles, P.M. Gressnoff. N.Y.: Wiley. 1997. - p. 1 -13.

121. Katti M. V., Ranjekar P.K., Gupta V.S. Differential distribution of simple sequence repeats in eukaryotic genome sequences // Molecular Biology and Evolution. 200 l.-v. 18.-№7.-p. 1161 - 1167.

122. Keshava N., Zhou G., Spruill M., Ensell M., Ong T. M. Carcinogenic potential and genomic instability of beryllium sulphate in BALB/c-3T3 cells // Mol. And Cel. Biochem. 2001. v. 222. - p. 69 - 76.

123. Kim N. W., Piatyszek M.A., Prowse K.R., Harley C.B., West M.D., Ho P.L., Coviello G.M., Wright W.E., Weinrich S.L., Shay J. W. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer // Science. 1994. -v.226. - p. 2011 -2015.

124. Knoll A., Jacobson D., Kretz P. et al. Spontaneous mutations in lacl-containing lambda lysogens derived from transgenic mice: the observed patterns differ in liver and spleen // Mutat. Res. 1994. - v.311. - p.57 - 67.

125. Kodaira M., Izumi S., Takahashi N. et al. No evidence of radiation effect on mutation rates at hypervariable minisatellite loci in the germ cells of atomic bomb survivors // Radiat. Res. 2004. - v.162. - p. 350 - 356.113

126. Kodaira M., Satoh C., Hiyama K. Lack of effects of atomic bomb radiation on genetic instability of tandem-repetitive elements in human germ cells // Am. J. Hum. Genet. 1995. - v.57. - №6. - p. 1275 - 1283.

127. Koterov A.N. II Int. J. Low Radiat. 2005. - v. 1. - №4. - p. 376 - 451.

128. Kropasova K., Slovinska L., Misurova E. Cytogenetic changes in the liver of progeny of irradiated of male rats // J. Radiat. Res. 2002. - v.43. - p. 125 -133.

129. Krutovskii K.V., Vollmer S.S., Sorensen F.C. et al. RAPD genome map of Douglasfir // J. Hered. 1998. - v.89. - №3. - p. 197 - 205.

130. Kubota Y., Shimada A., Shima A. DNA alterations detected in the progeny of paternally irradiated Japanese medaka fish (Oryzias latipes) // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995. v.92. - p. 330 - 334.

131. Larin Z, Fricker M.D., Tyler-Smith C. De novo formation of several features of a centromere following induction of a Y alphoid YAC into mammalian cells // Hum. Mol. Genet. 1994. - v.3. - p. 689 - 695.

132. Lee A., DeSimone C., Cerami A., Bucala R. Comparative analysis of DNA mutations in lacl transgenic mice with age // FASEB J. -1994. v.8. - p. 545 - 550.

133. Lehmann M. Anything else but GAGA: a nonhistone protein complex reshapes chromatin structure // Trends Genet. 2004. - v.20. - №1. - p. 15 -22.

134. Levinson G., Gutman G.A. Slipped-strand mispairing: a major mechanism for DNA sequence evolution // Mol. Biol. Evol. 1987. - May; v.3. - №4. - p. 203 -221.

135. Li Y-C, A.B.K., Fahima T., Nevo E. Microsatellites Within Genes: Structure, Function, and Evolution // Molecular Biology and Evolution. 2004. -v.21. - №6. - p. 991-1007.

136. Li Y.-C., A.B.K., Fahima T., Nevo E. Microsatellites: genomic distribution, putative functions and mutational mechanisms: a review // Mol Ecol. -2002. v. 11. - №12. - p. 2453 - 2465.

137. Limoli C.L., Kaplan M.I., Corcoran J., Meyers M., Boothman D.A., Morgan W.F. Chromosomal instability and its relationship to other end points of genomic instability // Cancer Res. 1997. - v.57. - №24. - p. 5557 - 5563.

138. Li-Sucholeiki X.-C., Thilly W.G. A sensitive scanning technology for low frequency nuclear point mutations in human genomic DNA // Nucleic Acids Res. 2000. - v. 28. - №9. - p. e44 (i-viii).

139. Little J.B. Radiation-induced genomic instability // Int. J. Radiat. Biol.- 1998. v.74. - №6. - p. 663 -671.

140. Little J.B. Radiation carcinogenesis // Carcinogenesis. 2000. - v.21.- p. 397 404.

141. Loeb L.A. Microsatellite instability: marker of a mutatorphenotype in cancer // Cancer Res. 1994. - Oct 1; v.54. - №19. - p. 5059 - 5063.

142. Loeb L.A., Loeb K.R., Anderson J.P. Multiple mutations and cancer // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2003. v. 100. - p. 776 - 781.

143. Lopez A., Xamena N., Cabré O. et al. Analysis of genomic damage in the mutagen-sensitive mus-201 mutant of Drosophila melanogaster by arbitrarily // Mutat. Res. 1999. - v. 435. - p. 63 - 75.

144. Luke G.A., Riches A.C., Bryant P.E. Genomic instability in haematopoietic cells of F1 generation mice of irradiated male parents // Mutagenesis. -1997.-V.12.-№3.-p.l47- 152.

145. Maniatis T. et al. Molecular cloning. A laboratory manual. // «CSH»,1982.

146. Marnett L.J. Oxyradicals and DNA damage. // Carcinogenesis. -2000. v.21.-№3.-p. 361 -370.

147. Matinez-Balbas A., Rodriguez-Campos A., Garcia-Ramirez M. et al. Satellite DNA contain sequences that induce curvature // Biochemistry. 1990. -v.29. - p. 2342 - 2348.

148. Matioli S.R, Brito R.A. Obtaining genetic markers by using double-stringency PCR with micro-satellites and arbitrary primers // BioTechniques. -1995.-v.19.-p. 752-758.

149. McLaughlin J.R., King W.D., Anderson T.W. et al. Paternal radiation exposure and leukaemia in offspring: the Ontario case-control study // Br. Med. J. 1993.-v.307.-p. 959-965.

150. McMurray C.T. Mechanisms of DNA expansion // Chromosoma. -1995.-v.104-p.2-13.

151. Mitani K., Takahashi Y., Kominami R. A GGCAGG motif in minisatellites affecting their germline instability // J. Biol. Chem. 1990. - v.265. -p. 15203 - 15210.

152. Mohr U., Dasenbrock C., Tillmann T. et al. Possible carcinogenic effects of X-rays in a transgenerational study with CBA mice // Carcinogenesis. -1999. v.20. - p. 325 - 332.

153. Morgan P., Dightman D.A., ParkL.K. Nonelectrophoretic genotyping using allele-specific PCR and a dsDNA-specific dye // Biotechniques. 1998. -Feb., v.24. - №2. - p.206 - 212.

154. Morgan W.F. Non-targeted and delayed effects of exposure to ionizing radiation: II. Radiation-induced genomic instability and bystander effects in vivo, clastogenic factors and transgenerational effects // Radiat. Res. 2003. -v. 159. - p. 581 -596.

155. Morgan W.F., Day J.P., Kaplan M.I. et al. Genomic instability induced by ionizing radiation // Radiat. Res. 1996. - v.146. - p. 247 - 258.

156. Morgante M., H.M., Powell W. Microsatellites are preferentially associated with nonrepetitive DNA in plant genomes // Nature genetics. 2002. - v.30. -p. 194-200.

157. Narayanan L., Fritzell J.A., Baker S.M. et al. Elevated levels of mutation in multiple tissues of mice deficient in the DNA mismatch repair gene Pms2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - v.94. - №7. - p. 3122 - 3127.

158. Neel J. V. Genetic studies at the Atomic Bomb Casualty Commission-Radiation Effects Research Foundation: 1946-1997 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998.-v.95.-p. 5432-5436.

159. Niwa O., Kominami R. Untargeted mutation of the maternally derived mouse hypervariable minisattelite allete in F1 mice born to from irradiated irradiated spermatozoa // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - v. 98. - p. 1705 - 1710.

160. Nomura T. Parental exposure to x-rays and chemicals induced heritable tumours and anomalies in mice // Nature. 1982. - v.296. - p. 575 -577.

161. Nomura T. Transgenerational carcinogenesis: induction and transmission of genetic alterations and mechanisms of carcinogenesis // Mutat. Res. 2003.- v.544. p. 425 - 432.

162. Oakberg E. F. A new concept of spermatogonial stem-cell renewal in the mouse and its relationship to genetic effects // Mutat. Res. 1971. - v. 11. - №1. -p. 1-7.

163. Oakberg E. F. Spermatogonial stem-cell renewal in the mouse // Anat. Fee. 1971. - v. 169. - №3. - p.515 - 532.

164. Ponnaiya B., Cornforth N.M., Ullrich R L. Radiation-induced chro-mocomal instability in BALB/c and C57BL/6 mice: the difference is as clear as black and white // Radiat. Res. 1997. - v.147. - №3. - p. 121 -125.

165. Potten C.S., Loeffler M. Stem cells: attributes, cycles, spirals, pitfalls and uncertainties. Lessons for and from the crypt. // Development. 1990. - v.l 10. -p. 1001 - 1020.

166. Rabouam C., Comes A.M., Bretagnolle V. et al. Futures of DNA fragments obtained by random amplified polymorphic DNA (RAPD) assays // Mol. Ecol. 1999. - v.8. - p. 493 - 503.

167. Reik W., Walter J. Genomic imprinting: parental influence on the genome // Nat. rev. Genet. 2001. - v.2. - p.21 - 32.

168. Riley D.E., Krieger J.N. Diverse eukaryotic transcripts suggest short tandem repeats have cellular functions // Biochem. Biophys. Res. Commun.2002. v.298. - №4. - p. 581 - 586.

169. Riley D.E., Krieger J.N. Transcribed short tandem repeats occur in couples with strongly preferred registers // Biochem. Biophys. Res. Commun.2003. v.305. - №2. - p. 257 - 265.

170. Rjmanova L.Y., Deriagin G.V. Mashkova T.D. Evidence for selection in evolution of alpha satellite DNA. The central role of CENP-B/pJa binding region // J. Mol. Biol. 1996. - v.261. - p. 334 - 340.

171. Roderick T.H. The response of twenty-seven inbred strains of mice to daily doses of whole body X-irradiation // Radiat. Res. 1963. - v.20. - p. 631 -639.

172. Russell L.B, Russell W.L. Frequency and nature of specific-locus mutations induced in female mice by radiations and chemicals: a review // Mutat. Res. -1992.-v.296.-p. 107- 127.

173. Russell L.B., Russell W.L. Spontaneous mutations recovered as mosaics in the mouse specific-locus test // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - v.93. -p. 13072 - 13077.

174. Ryabokon N.I., Smolich I.I., Goncharova RJ. Genetic processes in chronically irradiated populations of small mammals // Envir. Manag. Health. -2000.-v.il,-№5.-p. 433 -446.

175. Sadamoto S., Suzuki S., Kamiya K., et al. Radiation induction of germline mutation at a hypervariable mouse minisatellite locus // Int. J. Radiat. Biol. -1994.-v.65.-p. 549- 557.

176. Saitoh Y., Miyamoto N., Okada T. et al. The RS447 human mégasatellite tandem repetitive sequence encode a novel deubiquitinating enzyme with functional promoter // Genomics. 2000. - v.67. - p. 291 - 300.

177. Sankaranarayanan K. Estimation of genetic risks of exposure to ionizing radiation: status in the year 2000 // Radiats Biol Radioecol. 2000. - v.40. -№5.-p. 621 -626.

178. Santos J., Perez de Castro I., Herranz M., Fernandez-Piqueras J. Eight new polymorphic microsatellites in mouse gene loci // Cytogenet.Cell Genet. 1995.-v.71.-p. 223 -224.

179. Satoh C., Takahashi N., Asakawa J. et al. Genetic analysis of children of atomic bomb survivors // Environ. Health Perspect. 1996. - v. 104. - Suppl.36. -p. 511 -519.

180. Sawyer D.E., Van Houten B. Repair of DNA damage in mitochondria. // Mutat Res. 1999. - v.434. - p. 161 - 176.

181. Schierwater B. Arbitrarily amplified DNA in systematics and phy-logenetics // Electrophoresis. 1995. - v. 15. - p. 408 - 414.

182. SchleifR.F., Wensink P.C. Practical Methods in molecular biology. // N.Y.: Springer-Verlag. 1981.

183. Schmid W. II In: Chemical Mutagens: Principles and Methods for Their Detection. / Ed. by Hollaender A. N. Y.: Plenum. 1976. - v.4. - p. 31 - 53.

184. Shapiro M.J. Radionuclide scanning and lung lesions // JAMA. -1980.-Jule, v.4. №244. - p. 28.

185. Shimada A., Eguchi H., Yoshinaga S., Shima A. Dose-rate effect on transgenerational mutation frequencies in spermatogonial stem cells of the Medaka fish // Radiat. Res. 2005. - v. 163. - p. 112 -114.

186. Shimada A., Shima A. Combination of genomic DNA fingerprinting into the medaka specific-locus test system for studying environmental germ-line mutagenesis // Mutat. Res. 1998. - v.399. - p. 149 - 165.

187. Shimada A., Shima A. High incidence of mosaic mutations induced by irradiating paternal germ cells of the Medaka fish, Oryzias latipes II Mutat. Res. -2001.-v.495.-p. 33 -42.

188. Shimada A., Shima A. Transgenerational genomic instability as revealed by a somatic mutation assay using the Medaka fish // Mutat. Res. 2004. -v.552. - p. 119-124.

189. Shiraishi K., Shimura T., Taga M. et al. Persistent induction of somatic reversions of the pink-eyed unstable mutation in F1 mice born to fathers irradiated at the spermatozoa stage // Radiat. Res. 2002. - v. 157. - p. 661 - 667.

190. Sinha S., Siggia E.D. Sequence turnover and tandem repeats in cis-regulatory modules in Drosophila // Mol. Biol. Evol. 2005. - v.2. -, №4. - p. 874 -885.

191. Slovinska L., Elbertova A., Misurova E. Transmission of genome damage from irradiated male rats to their progency // Mutat. Res. 2004. - v.559. -p. 29 - 37.

192. Sood A.K., Buller R.E. Genomic instability in ovarian cancer: a reassessment using an arbitrarily primed polymerase chain reaction. // Oncogene. -1996.-v.13.-p. 2499-2504.

193. Stadler J., Gowen J.W. II In: Effects of Ionizing Radiation on the Reproductive System / Eds. Carlson W.D., Gassner F.X. N.Y.: Pergamon Press. -1964.-p. Ill - 122.

194. Streelman J.T., Kocher T.D. Microsatellite variation associated with prolactin expression and growth of salt-challenged tilapia // Physiol. Genomics. -2002. v.9. - №1. - p. 1-4.

195. Suzuki K., Ojima M., Kodama S., Watanabe M. Radiation-induced DNA damage and delayed induced genomic instability // Oncogene. 2003. - v.22. -p. 6988-6993.

196. Takeda K., Takahashi S., Onishi A. et al. Replicative advantage and tissue-specific segregation of RR mitochondrial DNA between C57BL/6 and RR heteroplasmic mice // Genetics. 2000. - v. 155. - p. 777 - 783.

197. Tomatis L. Transgeneration carcinogenesis: a review of the experimental and epidemiological evidence // Jpn. J. Cancer Res. -1994. v.85. - p. 443 -454.

198. Toth G., Gaspari Z, Jurka J. Microsatellites in different eukaryotic genomes: survey and analysis // Genome Res. 2000. - v. 10. - №7. - p. 967 - 981.

199. Trifonov E.N. Tuning function of tandem repeating sequences: a molecular device for fast adaptation // Proc. Intern. Conf. Evol. Genjmics, Thesis. -Costa Rica. 1999, - v. 15. - p. 74.

200. Uitterlinden A.G., Vijg J. II In: Two-dimensional DNA typing a parallel approach to genome analysis / Ed. Ellis Horwood. N. Y.: 1994.

201. Ullrich R.L., Davis C. M. Radiation-induced cytogenetic instability in vivo //Radiat. Res. 1999. - v. 152. - №2. - p. 170 - 173.

202. UNSCEAR 2000. United Nations. Sources and Effects of Ionizing Radiation. Annex J. Exposures and Effects of the Chernobyl Accident. N.Y.: United Nations. - 2000. - p. 453 - 566.

203. UNSCEAR 2001. United Nations. Hereditary effects of radiation. Report to the General Assembly, with Scientific Annex. N.Y.: United Nations. -2001.-p. 5-160.

204. Urquhart A., Kimpton C.P., Dowries T.J., Gill P. Variation in short tandem repeat sequences a survey of twelve microsatellite in loci for use as forensic indefication markers // Int. J. Med. - 1994. - v.107. - p.13 - 20.

205. Vasil'eva G.V., Bezlepkin KG., Lomaeva M.G., Sirota N.P., Gaziev A.I. AP-PCR assay of alterations in the progeny of male mice exposed to low-level y-radiation // Mutat. Res. 2001. - v.485. - p. 133 -141.

206. Vogel E.W., Natarajan A.T. DNA damage and repair in somatic and germ cells in vivo. // Mutat Res. 1995. - v.330. - p. 183 - 208.

207. Vorobtsova I.E. Irradiation of male rats increases the chromosomal sensitivity of progeny to genotoxic agents // Mutagenesis. 2000. - v. 15. - №1. - p. 33 -38.

208. Vorobtsova I.E., Aliyakparova L.M., Anisimov V.N. Promotion of skin tumors by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate in generations of descendants of male mice exposed to X-ray irradiation // Mutat. Res. 1993. - v. 287. - p. 207-216.

209. Waugh R., Powell W. Using RAPD markers for crop improvement // Trends in biotechnology 1992. - v. 10. - №6. - p. 186 -191.

210. Webster M.T., Smith N.G., Ellegren H. Microsatellite evolution inferred from human-chimpanzee genomic sequence alignments // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - v.99. - №13. - p. 8748 - 8753.

211. Weeden N.F., Timmerman G.M., Hemmat M. et al. Inheritance and reliability of RAPD markers // Appl. RAPD Tech. Plant Breed. Minneapolis (USA). -199.-p.12-17.

212. Weinberg H.-Sh., Nevo E., Korol A., Fahima T., Renert G., Shapiro S. Molecular changes in offspring of liquidators who emigrated to Israel from the Chernobyl disaster area // Environmental Health Perspectives. 1997. - v. 105. - p. 1479.

213. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - v. 18. - p. 7213 -7218.122

214. Welsh J., Petersen Ck, McClelland M. Polymorphism generated by arbitrary primed PCR in the mouse: application to strain identification and genetic mapping // Nucleic Acids Research. 1990. - v.19. - №2. - p.303 - 306.

215. Welsh J., Rampino N., Mcclelland M., Perucho M. Nucleic acid fingerprinting by PCR-based methods: applications to problems in aging and mutagenesis // Mutat. Res. 1995. - v.338. - №1-6. - p. 215 - 229.

216. Welsh S.J., Phillips C.N., Farhi D.C. Detection of BCRabI in acute leukemia by molecular and cytogenetic methods // Mol. Diagn. 1996. - Dec., v.l. -№4.-p. 305 -313.

217. Williams J.G.K., Hanafey M.K., Rafalsky J.A., Tingey S.V. Genetic analisys using random amplified polymorphic DNA markers // In: Recombinant DNA. / San Diego: Acad. Press. // Meth. Enzymol. 1993. - v.218. - p. 704 - 740.

218. Williams J.G.K., Kubtlik A.R, Livak K.J. et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - v.l8. - p. 6531 - 6535.

219. Wei Y.H., Chao H.-T., Lee S.-Y.et al. Repeated Ovarian Stimulations Induce Oxidative Damage and Mitochondrial DNA Mutations in Mouse Ovaries // Ann. N.Y. Acad. Sci. -2005.- v. 1042. p. 148-156.

220. Xu, G., Goodrige, A.G. A CT repeat in the promoter of the chicken malic enzyme gene is essential for function at an alternative transcription start site //Arch. Biochem Biophys. 1998. - v.358. - №1. - p. 83-91.

221. Yamada M., Tsuji S., Takahashi H. Involvement of lysosomes in the pathogenesis of CAG repeat diseases // Ann. Neurol. 2002. - v.52. - №4. - p. 498 -503.

222. Yauk C.L., Dubrova Y.E., Grant G.R., Jeffreys A.J. A novel single molecule analysis of spontaneous and radiation-induced mutation at a mouse tandem repeat locus // Mutat. Res. 2002. - v.500. - p. 147 - 156.

223. Yu Y., Okayasu R., Weil M.M. et al. Elevated breast cancer risk in irradiated BALB/c mice associates with unique functional polymorphism of the

224. Prkdc (DNA-dependent protein kinase catalic subunit) gene // Cancer Res. 2001 -v.61. - p. 1820- 1824.

Информация о работе

Ломаева, Милена Гелиевна
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.16

Диссертация

Влияние ионизирующей радиации на уровень полиморфизма ДНК в разных тканях у потомства облученных мышей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы