Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние фосфолипидных препаратов на митохондрии печени при остром гелиотриновом гепатите

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние фосфолипидных препаратов на митохондрии печени при остром гелиотриновом гепатите"

РГВ од

2 1 ШОП 1393

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

На-, правах рукописи

Домбровская Наталья Викторовна

ВЛИЯНИЕ ФОСФОЛИПИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ

НА МИТОХОНДРИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ОСТРОМ ГЕЛИОТРИНОВОМ ГЕПАТИТЕ

03.00.04—Биологическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент — 1993;

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте педиатрии Министерства здравоохранения республики Узбекистан.

Научный руководитель—

доктор медицинских наук, профессор

А. Н. Арипов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук, профессор

А. Н. Николаев, 3. И. Исаев

Ведущая организация—лаборатория белков и пептидов Института биоорганической химии им. акад. Садыкова А. С.

в 7V часов на заседании специализированного совета Д 015.16.21 по присуждению ученой степени доктора наук в Институте биохимии АН Республики Узбекистан (адрес: 700143, Ташкент, пр. X. Абдуллаева, № 56).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН РУз.

Автореферат разослан < 1993 г.

АН РУз.

Защита диссертации состоится « М* аш ¿X' 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

С. А. Бурхано®

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕШ. При заболеваниях печени различной этиологии развитое патологического процесса сопровождается нарушением структуры и функции мембранных систем гепатоцита. Од. ной из первых систем, вклшавдшся в патологический процесс при действии гэпатотрспного агента, является система внергооб-разования (Блюгер А.Ф.,1973; 1984; Майоре А.Я.,1987; и другие).' Повревдение митохондрий вздет к дефициту макроэргических соединений в гепатоцктах и, следовательно, дисбалансу всех энергоемких процессов, обеспечивающих функции органа и кззнэ-деятельность организма.

Регуляторная роль липвдного бислоя шгохсндриальннх мембран, значимость его агрегатного состс- ия для кэмброкосвя-занннх ферментов, осуществляющих респираторный метаболизм и процессы енергообразоваякя, свидетельствуют об актуальности исследований структурно-функциональных характеристик внутриклеточных мембран при повреждениях печени и важность коррегиру-щого воздействия на них.

Среди .„логочислеюшх средств защиты биологических мемб- . ран можно евдолить следующие: фосфолгаиды, внтиоксвданты, тио-ловыэ соединения и др. Наиболее выраженный репарарунвяй эффект при4 наличии структурных изменений в мембранах получен при введении фоофолипвдннх препаратов (Бородин Е.А., Арчаков А.И., Лопухин Ю.М., 1985; Еалданова Н.Б., 1935; Саатов Т.о.,1990), обладающих способностью встраиваться в мембраны клеток, служить донорами незаменимых жирных кислот. При заболеваниях печени фосфэлипидная терапия оправдана тем, что вводимые в кровь фэсфэлишда, почти полностью помещаются клетками печени и стабилизируют повреадэншэ мембраны гепатоцитов ( Грегориадио Г., 1983; Марголис Л.В., Розенберг О.А.,1987). Хороший репаря-рующий эдакт пс учен при применении фосфатидилхолина, выделенного из семян хлопчатника, на т. бранные структуры печени крыс при токсических гепатитах (Каримов М.Ш.,1937; Арипов Д.Н.,1939; Абдугафурова М.А., 1990).

Возмогсность шрокого прхотенения фосфолипидной терапии в практической медицине ограничена существованием единственного препарата на фосфолзпшдной основе - зссенциала фирмы "Каиеггаапп" ( ФРГ ) и отсутствием аналогов отечественного производства, что оправдывает разработку, изучение и внедрение в клиническую практику ковше фосфолипидкых прапара-

тов даш восстановления структуры и функций поврежденных мембран клеток пачеки.

При воздействии патогенного фактора изменениям подвергаются как липидаые, так и белковые компоненты мембраны, его предопределяет необходимость поиска методов, сгособствуацих . регенерации на только —шидноЯ фаза, ко и белкового состава мембран.

Для восстановления белковообразовательной способности печени перспективно применение вкдистена - природного соединения стероидной структуры, обладающего выраженной белсксинтези-рундей активностью (Геворкян Э.С..Тедевосян Ю.В.,1936; Па-евская ЯЛ., 1989), а для повышения анергообоспеченности поврежденных митохондрий логично применить АТФ. Для защиты препаратов екдисген и АТС от воздействий внутренней среда организма и целенаправленной доставки непосредственно к патологическому очагу они были заклвчены в фосфолипвдный бислой.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. В. связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось проведение системэтичэского исследования влияния фосфолшшдвых препаратов на повреадэшше митохондрии печени.

Пос.лвленнЕШ цель предопределила решение следующих конкретных задач:

- исследовать изменения функционального оостояния и лапидаог состава митохондрий шчеш крыс при остром гелиотри-ковом гепатите;

- изучить воэдазшость восстановления функциональной активности, лшшдаого состава шмбран повреаденных ипохондрий тачеш с помощью фосфатидалхолина, выделанного из шрот

хлопчатника о добавлением натриевой соли глицирризиновой

киолотн < ФХхл+ГК ) в сравнении с коммерческим препаратом вооенциале;

- исследование влияния комплексных препаратов ФХхл+ГН+АТ® в ОХЕЛ+ГК+ вкдиотэн на поврежденные китохондрии печени.

НАУЧНАЯ ЮВШН&. В результата проведенных исследований получены даннда, сведете льотвувдиэ о том, что токсический еффэкт гелиотршз на штохоэдрни печени обусловлен действием

- г - .

его реакционно-активных метаболитов, образующихся при активации процэссов ПОЛ, которые вызнвапт изменения лшшдного биолоя митохондрий и нарушение их функциональной активности.

Установлена способность фосфэлипидншс препаратов восстанавливать структуру и функцию митохондриалышх мзмбран печени. Показано, что введение фосфатидилхолкна хлопчатника о гли-царризгаовой кислотой способствует восстаковленив липидаого состава мембран и стабилизирует их функциональную активность.

Проведено систематическоо исслэдованяэ вффактивноотп фосфолипвдных препаратов в зависимости от включения в ах состав лекарственных веществ. Показано, что введение акдастена а АГФ а состава фосфолипидвого препарата с.-особстауот восстановлению липидаого состава мембран, процэссов дыхания и окислительного фосфорилирования, продукции АТФ. Подтверждено преимущество ОХхл+ГК парад зарубежным аналогом - аосеюдаале. Ещэ более выраженным рапарирукпда действиоы на поврежденные мембраны ': мчтахондркй1 обладали комплексные препараты ФХхл+ГК+АТФ и ФХхл+ГК+акдистен.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Результаты проведвшщх исследований подтверждают способность фосфэлшидннх препаратов восстанавливать структуру и функцию поврежденных митохондриалышх мембран печени и могут быть использованы, как обоснование для их клинической апробации. Показана возможность целенаправленной доставки лекарственных препаратов непосредственно к патологическому очагу.

ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. По материалам проведенных исследований получено:

- авторское сшдетельатво N 1747072 ( от 16.03.93 ) на "Орадство для реконструкции комбран 1п т^го".

- приоритетная справка N 4316957 ( от 16.07.87 ) на "Спосоо лечения хронического гепати.а препаратом экдиотэн"

Материала работа экспонировались на ВДНХ ССОР, ВДНХ Уа-ОСР, на выставка в Лаоса "Наука, техника и экономика советского Узбекистана" в вида проспектов:

- фосфолипэдшй препарат для лечения гепатитов ( Москва,

1989);

- фосфэляпвдный препарат для репарации поврежденных

- 3 -

кзкбран клеток печени ( Москва, 1989 );

- применение фосфолипидного препарата из хлопчатника для восстановления поврежденных мембран клеток печени при гепатитах ( Ташкент, 1939 );

- <J ;сфолипвдный препарат для реконструкции поврежденных HswöpaH клеток печени ( Вьентьян, 1989 ).

ПШИЩДО. Основные положения диссертационной работы о траке ш в О опублтсовашшх научных работах.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы исследования", вксшримеьтальшй части, в которой приводятся результаты собственных исследований, заключения и выводов. Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 20 рисунками. Библиография включает 108 отечественных и 50 иностранных источников.

СОДЕРЗСАШЕ РАБОТЫ.

Материалы г метода исследований.

В работе в качестве вксперимектальных животных использованы белые беспородные крыси-самцы с начальной массой 80-100 г. Острый токсический гепатит вызывали по методу Абдуллаева Н.Х. ( 1978 ) одноразовым подкожным введением гелиогринп в до-С9 30 иг на 100 г. массы шватиого.

Печень животных перфузировали , измельчали и гомогенизировали в среде выделения, содержащей 6Ш трис-HOL (рИ-7,4), 0,25 II раствор сахарозы и 0,01 М ЭДТА. Митохондрии печена ш-двлялись методой дифференциального центрифугирования ( W.O. Schneider, . .Hageboot,1950) на центрифуге Joan CK 1000 (Франция ¡. Дшсашш митохондрий И гомогената печены крыс регистрировали кислородным олектродом типа "Кларка" на полярографэ М-Т. Цитохроиоксвдазнуо активность оценивали по скорости окисления аскорбета в присутствии ТМФД.

Oö активности АТФазы судили по нарастанию фосфора неорганического по методу, прэдлоаэшгому Я.Х. Туракуловш и др. (196Т). Активность СДГ определяли по методу King Т.Е. (196Т ). Активность ЦО определяли по методу Straus ( 1956 ).

Скорость перэкисного окисления липндов в ИАДФН- и аокор-Свт-ваппсшш системах определяла ТБК-шкрометодом, разрабо-

тенным В.А. Владимировым, А.И. Лрчакошш ( 1972 ).

Определение содержания АТФ в митохондриях печени проводили виолхмтшсцоятным когодом на Лшиномэтрэ 1250 фирмы ЬКВ, ( Швеция ) с примененном коммерческих тест наборов.

Экстракцию и очистку липадов из митохондрий проводила да ГоХОг ег а1, ( 1957 ). Аналитическое разделение издивядувлыш фосфоятадав проводили методом тонкослойной хроматографии а модификации Уазкоуяку ег в1. (1975), Содеряание фосфожпадоа определяли по методу Ваг1е« ( 1959 ) в модификации Ломая-товской А.Ф. и ооавт. ( 1976 ). Для проявления Зосфолктадоз использовали реактив Васьковокого. Олрздэлейте жнрнокислотногта состава фосфолилидов проводили по метиловым ефирам кирншс кислот методом Лалккна В.3., Сядовяшоюа И.Л. ( 1971 ).

Содержание Салка в кембрвнах митохондрий определяла по методу Ьоигу сг (1951). Содержаний холестерина определяла методом КеЬзгог, (1962). Для определения содержания фосфолшш-дов в окстроктах применяла мэгодику ВагиеП, (1959) в модоййг-кации .Явмриговсхой Л .О. и соввт., (15-76), РЕЗУЛЬТАТЫ ШЭДОВАНШ.

К наотопеэму Бремени факт наличия функциональна изменений" в митохондриях почеки крыс при острой гелиотриновой интоксикации ни у кого из исследователей не вызшвает сомнения, однако в механизма дойствия гелиотрлиа на гепатоцнты до иы вар некоторое вопросы остаются ношяснэшымя.

Ксследоввгшя, проведенные рядом авторов, покасели.что при остром гелиэтршговом гепатите значительно изменяются соства в функциональная активность мембран макросом печени крыс. Микросомы из всех оргаявлл клетки являются наиболее способдаш! к свободно-радакалъкш реакциям. В работах Аршгава Л.Н. (1989) и соавторов доказано, что токсический эффэкт гедиотряна на микросоиа печени крис опосредован образованием реакционно-способных метаболитов, которые, стимулируя процессы пере-шсного окисления липпдов, ачзнваот повреждение мембран ендоп-лазматического рвттсулумп печени и его фэрментных систем.

Как известно, ряд авторов рассматривает процессы лигоне-роксидации в норме, как способ обновления мембран, как один из путей метаболизма митохондрий, по интенсивности процессов ПОЛ

- е -

в ряду клеточных органелл они следуют за михросомами.

Нами обнаружено значительное повышение интенсивности процессов ПОЛ в митохондриях (рио.З), как в ферментной, так и в неферментной системах (в 2,3 и 2,4 раза соответственно) при острой интоксикации гелиотрином. Однако остается открытым воп-•роо: сам ли гелиотрш напрямую вызывает активацию горекисного окисления в митохондриях печени или это опосредованное действие его метаболитов, образованных другими клеточными органе лламя гештоцита.

Поскольку субстратами ПОЛ являются НИ мембранных липа-дов, то в условиях интенсификации процессов тарекислого окисления лнпидов изменяются лшшдвш компоненты мембран митохондрий: снижается доля ненасыщенных фосфолшшдов, повшается содержание лиоофосфатидилхолина. Анализ жирнокислотного состава митохондрий печени при остром гелиотриновом гепатите показал, что в первув очередь горекисному окислению подвергается полиненаснцвнные «¡ирные кислоты: такие, как арахидоновая и ли-шлевая.

Ферменты митохондриалышх шмбран, выполнязощие процессы енергообразоваяия, являются лишд-завигашыми белками и, Севу словно, изменяют свою активность при изменении их липидного окружения.

Были проведены исследования по изучению действия гелиот-рнна на роцессы дыхания и окислительного фосфорилировшшя изолированных митохондрий и гомогената печени крыо, которые показали, что окорость окисления ескорбата через ТЩД в гомо-генатв печени крыс с оотрад гелиотриновым гепатитом .снижается в 2 раза по сравнению с контролем, что является следствием инактивации терминального комплекса дахательн I цепи - цитох-ромоковдазы. Эксперимента на суспензии изолированных митохондрий, выделенных из печени крыс, отравленных гелиотропом, пока-вали, что в митохондриях отимулироваш скорости ■ потребления кислорода в состояниях 3 и А по Чансу, при окиолении оукцнната снижены ковфЗ&даанты дыхательного контроля и фосфорилировшшя на ЗОЯ и 503 соответственно по сравнению о интактиыми митохондриями. Соотношение полученных результатов в экспериментах на изолированных митохондриях и гомогенате печени крыс с ост- 6 -

*

рым токсическим поражением имеет неоднозначную аавишпюоть. о одной стороны, усматривается прямая корреляция «виду данными изменениями цитохромоксидазной активности гомогената печени к степенью разобщенности окислительного фо сформирования митохондрий печени крыс с острым гепагитом-аншкениэ коаф|ицивнтов фосфорилирования и дыхательного контроля. О другой сторона, несколько озадачивает несоответствие скоростей дыхания митохондрий и гомогената печени крыс о острым гепатитом. По-видимому,это является следствием того,что в препарате гомогената печени присутствует метаболита гелнотрина,' образовавшиеся в микросомальной системе ПОЛ, которые вызывают усиление интенсивности ПОЛ в митохондриях и нвгосредс« чно угнетают цитох-ромоксидазу, в то время как эксперименты по окислительному фосфоршшрованию проводились на отмытых митохондриях, я стимуляция дыхания является компенсаторной реакцией деградированных органэлл.

. . ■. Нарушение энергообрззувдих процессов в печени крыо о острым гелиотр^овым гепатитом подтверждалось изменением активности митохондриалышх ферментов (Рио. 1). Наиболее чувствительной к изменении» липидаого окружения является цитохро-! моксидаза^ которая чутко реагирует также на дефицит протеинов («Т. О. 01отооквге, 1986), а гелиотриновый гепатит, как известно (АОдуллаев Н.Х., Азимов Р.К., Ыухамэдов Т.М.,1987; Паевская • Л. Д., 1989), характеризуется гшопротеинемией, которая также позволяет в какой-то мере обьяснять столь резкое повышение активности цитохромоксидазы. Снижается продукция АТФ, что связа-зано, ш-видимому, на только со снижением его синтеза в митохондриях, но и с пошшешшм расходованием в организме.

ВЛИЯНИЕ ФООаЯУШГЩЗЩЫХ ПРЕПАРАТОВ НА МИТОХОНДРИИ ШЧЕКк ЯРИ ОСТРОМ ГЮШОТРИНОВОМ ГЕПАТИТЕ, необходимым условием для стабилизации функционального состояния органелл является восстановление фоофэлипидаого бислоя мембран, именно поэтому и были использованы фоофолипид-ше препараты. Предыдущими работами вашей лаборатории было показано, что наиболее аффективным по репарационной способности из ряда различных фосфолишдов является фосфвтидалхолин, вадэ-енный из семян хлопчатника, он уступает только фосфшшидам мембран гепатоцитов крыс .Поэтому препарат был создан на основа

- 7 -

ПЫ/МГ бел. мин.

60)

50

15-

10

и

и

СДГ ЦО АТФ

Рис. 1. Изменение активности ферментов (нМ/мг белка мин.) и содержания AT® (нМ/мг белка) в митохондриях печени крыс о острым гелиотриновым гепатитом.

О - контроль; Щ - OIT,

-¿-Х1000 О

Рис. 2. Цдтохромоксидазная активность гомогената печени крыс с острым гелиотриновым . гепатитом (ОГГ). С - концентрация ТМ5Д У-скорость окисления аокорбата при бесконечно большой концент-трации ТМФД. (иМ Оа/мин.вес печени).

о - контроль; х - ОГГ.

фосфатидилхолина хлопчатника. В качестве детергента была использована три натриевая соль глицярризияовой кислоты, облада-даицая кроме дэтергентных свойств еще и еитиоксидантной активностью, что выгодно отличает ее от других детергентов в условиях интенсификации процессов ПОЛ при гелиотриг~вом гепатите.

Влияние фосфолипидных препаратов на процессы ПОЛ и лишдный спектр повревденшх гелиотрином штохондриалъшх мембран.

При введении крысам о острым гелиотриновым гепатитом фосфолипидных препаратов ФХхл+ГК, ФХхл+ГК+АТФ, ФХхл+ГК+эк-диотен отмечается снижение активности процессов ПОЛ как в фермент-зависимой, так и в аскорбат-зависшой системах перео-киоления лшидов (рис. 3). Наибольшую эффективность проявлял препарат ФХхл+ГК+экд.-в этой группе содержание ВДА в митохонд-рш снотаотся в 1,6 раза в фермент-зависимой и в 2,3 раза в

нефармент-звЕисшэй системах переокислешш, в группе, получавшей ФХхл+ГК+АТФ, оно снизилось в 1,5 раза в 2,2 раза соответственно. Насколько меньшим эффектом обладал препарат ФХхл+ГК, при введении которого содержание вторичного продукта ПОЛ ~ МДА снижалось в 1,3 раза в фермент-зависимой ив 1,7 раза в вскорбат-зависимой системах переокисления по сравнению с митохондриями печени крыс одной серии затравки, не получавших лечения.

Поскольку данные препарата стабилизируют процессы ПОЛ в поврежденных митохондриях, логично ожидать и нормализацию га-пидаых компонентов мембраны, ее агрегатного состояния. Действительно, при введении фосфолипидных рапаратоз показателя состояния лшшдшх компонентов мембраны значительно изменяются в сторону нормализации. Содержание обода фосфоляпидов гадает тенденцию к нормализации во всех исследуемых группах, по в несколько разной степени. Наибольший еффэкт проявлял препарат ФХхл+ГК,- .• чуть менее , аффективными были ФХхл+ГК+взд. и ФХхл+ПС+ ДТФ.

Под влиянием фосфолишдашх препаратов изменялся и фосфо-липидный состав митохондрий печени (Риа.4): нормализуется содержание вакнейшего фосфолшдада внутренних митохондриальных мембран кардиолипта, повдаается содержание ФХ, причем в группе, получавшей ФХхл+екднстев,содержание втих двух фосфола-пздов полностью нормализуется, очень Слизок по эффективности к нему в етой серии экспериментов ОХхл+ГК+.АТФ и чуть уступает ФХхл+ГК. Если за критерий аКективиосги фосфолшгадвых препаратов принять содержание лизофосфзтидилхолина в митохондриях печени крыо о острой гелиотриновой интоксикацией, то при введо-шт лм еххл+ГК+АГО оточалась наибольшая гфЕекгавнооть - со-деряаине лазофос^^лцдахолина снизалооь в 3 раза по сравнению о аналогичным показателем животных .дноЗ серии затравка.

Стабшизнрущае дэйствиэ фосфолишдных препаратов проявилось а в дз«эыэгсп! авриокиологного состава фосфолиггадоз kz-гоховдрай печени крао с острым гелнотриновым гепатитом. Наивысший нормалязупдай вффэкт на показателя хирнокислотяого состава фосфолипидов митохондрий оказывал препарат ФХхл+ПС+евд. При его ввэдеша красам о острым гепатитом доля

Влияние фосфолипидных препаратов на интенсивность ПОП в митохондриях печени крыс при остром гепатите

8ССЮ «Х-1И* №» 4Х49КЯ вкд

РЖ. Э.

кд и .ШДФЦ ¡Ш лско и?

Фосфогашиднмй состав иитоховдрий печени крыв острым гепатитом в при введении фосфолипвдиьсс препаратов

ненасыщенных »арных кислот карднолишшв выросла до 88 55 по отношению к норме, что почти в 9 раз выше, чем при патологии, причем, ото повышение обусловлено главным образом повышением доли линолевой кислоты (18:2). Анализ жирнокиолотного спектра фосфатидилхолина обнаруживает нормализацию соотношения суш ненасыщенных и насыщенных жирных кислот, доля НЖК возрастает в основном за счет арахидоновой (20:4) кислоты .

Влияние фосфолипидных препаратов на функциональную активность митохондрий печени крыс с острой голкотриновой интоксикацией.

Стабилизация а репарация лшщдного биолоя мембран сопровождалась изменением активности встроенных в бислой ферментов. Через 3 дня введения исследуемых фосфолипидных препаратов наблюдается отойкая тенденция к нормализации показателей енерге-тичаского обмена. Дальнейшее введение фосфолипидных препаратов дает еще более выраженный полокительнмй еффект, а при введении препаратов ®Ххл+ ГК+АТФ и ФХхл+ГК+екэистен активность ферментов полностью нормализуется. Энергообеспеченнооть митохондрий цечени, судя по содераанив в них АТФ, при 7-ми дневном введении втих двух препаратов нормализуется полностью (Рио. б.б).

Нормализуются параметры дыхания и окислительного фосфэ-рялирования. Прекрасный репариругаций ефЕект на повреяденные гелиотрином митохондриалыше мембранные структуры гочени отмечен при введении препаратов ФХхл+ГК и ФХхл+ГК+АТФ , а при введения ФХхл+ГК+вкд его эффективность превзошла все наш оадда-пия: скорость окисления аскорбата в присутствии ТМЭД в гомоге-нате печени не только восстанавливалась,но и возрастала относительно контроля в среднем на 30 %. Повышение веса печени и тивдеа нрыо в згой группе животных свидетельствует о положительном влиянии препарата на организм кивотшго. ( табл. 1).

Введение фосфолипидных препаратов в значительной степени стабилизирует н процессы респираторного метаболизма в мембранах мх печени крыс с острым гэлиотриновкм поражением: нормализуются параметры дыхания я окислительного фосфоридирсваная изолированных митохондрий печени крыс (табл.2).

Из приведенных донных видно, что исследуемые фосфолипид-пна препараты: ФХхл+ГК. ФХхл+ГК+АТФ и ФХо+ГК+екдаотен облада-

Активность ферментов и содержание АТФ и митохондрия* печени крис с острым гепатитом и при введении фосфолипидних препаратов

-т—1—I—■—I—■—I—■—I ' I ОТ «X ЭСС2Н »Х+ЛТФ АТФ ФИ+ОКД ЭКД '

Рке, 5,

I 1 АТ«ма;

I ,сдг. ЕШО *тф .

Активность цитохромоксидазм митохондрий печени крыо с острым гепатитом и^П^идв^ении (}/осфолипидных

к ог

Рис, в.

•X ЭССЕН 4№»ДО . АТФ «Х+ЭД ЭКД

в -ЦО . - 12 -

ют прекрасным стабилизирущим и репарируюцнм действием ив мембраны митохондрий печени крыс с острым голиотриновым гепатитом. Они реконструирует липидшЯ матрикс мембран, восстанавливает функциональную активность белковых компонентов мембраны - ферментов дыхательного комплекса.

Наиболее эффективным оказался препарат ФХхл+ГК+екдастен, который полностью нормализовал структуру и функции митохондри-елышх мембран. Прекрасный терапевтический эЩ&ект,оказываемый этим препаратом на функциональную активность мх, обеспечивается, на наш взгляд.репарируювдм действием фосфатидалхолина на лзшпдноэ окружение ферментов "рнхательных цепочек", о одной стороны, и стимулирующим бяосянтетичэские процессы действием екдастэна, о другой.

Положительное действие препарата ФХхл+ГК+АТФ на повреа-дэшшэ митохондряальные мембрана, на наш взгляд, обьясняется той стабилизирующим влиянием фзсфапу'-яхолина, о котором было сказано ранее, и кромэ того, АТФ, почти полностью попадающий в клетки печени, участвует в дыхательном цикле и процессах вкер-Гвтического метаболизма, улучиая их.

Несколько менеэ ефЕективнам оказался препарат ОХхл+ГК, который, в свою очередь значительно превосходил единственный используемый на сегодняшний день в практической иэдацинэ фоофолипидиый препарат- вссенциалэ.

Препарат вссенциале в серии наших вкспериментов стабилизирующего и рэпарирукщаго действия ю обнаруживал, а в некоторых случаях усугублял патологический процесс. склонны объяснять данный факт тем, что в составе препарата вссенциалэ (Па^зпвапп) в качеотве детергента присутствуют в значительном количестве (около 3055) сола дезокскхолиевой кислоты, обладавшие токсическим действием на мембраны .

Препараты АТФ и экдястен, применяемые без фосфатидилхо-лшш влияли на поврежденные китохондриалькыэ структуры полоки-талыю , изменяя их лшпвдшй состав, функциональную шставнооть п параметры респираторного метаболизма, но изменения эти были менее выражены, что, обьясняется на только отсутствием фоо~ фолипидов, но и тем, что часть препарата при введении в кровь матаболизируется ч других системах и органах, не достигая печени.

Таблица 1.

Цитохромоксидазная активность печени и вес тимуса крыс с острой гелиотрияовой интоксикацией, получавших фосфэлипидаые препараты в течение 7 дней.

Группы 1 7 1 Вес печени 1 180 ! Вес тимуса

животных 1 I (КГ) 1 ' печени 1 (МГ)

Здоровые животные 62,5+3.31 3500+100 21875+385 125.0+2,0

0 Г 30,5+2.70 2800+150 8540+400 55,0+1.0

РА<0,001 Р4<0,001 р4<0,001 р4<0,001

ОГ+ЕСхл+ГК+ 41,6+3,00 3050+50 12688+450 75,1+1,2

Р4<0,001 Р4<0,СЮ5 Р1<0,001 ^<0,001

р„<0,05 - р,<0,001 Р,<0,05

ОГ+ФХхл+ГК+ 90,9+4,87 3560+100 32360+487 90,1+0,9

- ¿""Ъ Г,<0,001 - р»<0,001 Р4<0,05

Р,<0,001 р3<0,001 ря<0,001 Р,<0,001

0Г+ФХхл+ГК+ 97,2+4.07 3730+70 36255+285 131,1+3,0

екд. ^ <0,001 - р^О.ОО!

>»,<0,001 Ра<0,001 ра<0,001 Р,<0,001

ОГ+АТФ • 41,6+2,73 4000+150 16640+410 82,0+0,9

Р*<0,001 Р,<0,05 р4<0,001 ' р4<0,05

Ра<0.05 р,<0,001 ря<0,001 р,<0,001

0Г+8КД. 58,3+2,31 3600+100 20988+231 119,0+2,5

р1<0,001 - р4<0,001 ' . -

р,<0 л5 ра<0,001 Ря<0,001 . р„<0,001

ОГ+ессея- 25,0+1,6 2600+50 6500+240 70,0+2,5

цивле р4<0,001 Рх<0,001 Р!<0,001 р4<0,001

- — • * <0,05

Примечав.а: ЦХО печени - скорость окисления вскорбата через ЯЩ из расчета на вес печени <нМ 0,/ыин.вес печени). V - скорость окисления аскорбэга при бесконечно большой концентрации ТМФД.

Таблица 2.

Окислительное фосфорилированяэ митохондрий печени крыс с острым гелиотрнновым гепатитом,получавши фэсфолшшдные препараты в течении 7 дней.:

Группы i Va HHBOT-Xl I v. 1 ' 1 ДК 1 1 ЛДФ/0 1 VJЩФ 1'

Здор-s 54,1+2,7 13,0+0,7 4,1+0,1 1,8+0,02 67,5+3,8

0 г 119,7+10,5 57,8+4,7 2,1+0,2 1,3+J,01 157,5+6,6

PiiO.OOl P^O.OOI P»<0,001 Рд<0,001 <0,001

0Г+ 86,3+3,1 39,6+3,6 2,^+0,3 1,5+0,04 115,0+4,7

0Ххл+ И<0,001 pt<0,001 p,. <0,001 - P^O.OOI

га р3<0,001 ра<0,05 - - Pa<0,05

0Г+ 74„0+1,7 21,3+2,2 3,6+0,3 1,8+0,01 83,0+2,8

ФХхл+ ; - - Pi<0,05 - - -

гк+т Ра<0,001 pa<0,001 pa<0,00i Pa<0,001 ps<0,001

ог+, • • 57.4+2,5 14,1+0,7 4,1+0,2 1,8+0,05 .69,2+3,3

©Ххл+ - - ' - -

ГК+экд .'2<0,001 Ря<0,001 P,<0,001 ря<0,001 p3<0,001

ОГ+ДТФ 99,444,8 • 36,6+2,7 2,7+0,1 1,7+0,05 113,5+9,0

Ра<0,05 5>,.<0,001 Pa<0,05 - Pj^O.OOl

Ря<0,05 ps<0,05 p3<0,001 - ■ -

ОГ+впд. 68,0+1,9 24,2+1,4 2,8+0,2 1,7+0,02 85,4+2,8

Р&<0,05 p4<0,001 pt<0,05 - р^О.Об

Ра<0,05 pa<0,001 P3<0,001 ps<0,001 pa<0,001

ОГ+вс- 89,4+4,1 30,8+4,7 2,9+0,2 1,4+0,05 120,5+6,0

С0ШШ- Pj. <0,001 р&<0,001 ра<0,001 Pj.iO.OOl p,. <0,001

алэ —

Примечание: среда инкубации: 120 Ш KCl, 10 ггМ сукщша-та, 10 мМ трис-буфвр, 1,0 мкг/мл ротенон, 1 Ш КНэР0„, рН-7,4. Vs, V», Удда скорости потребления кислорода (tfj 03/ют.мг белка). Добавки: АДЗ>- 250 мкМ; . 4„Щй>- 200 мкМ; мх- 4 мг белка/мл.

- 1Б -

выводы

1. Введение гелиотрииа крысам вызывает повреждение даго-хондриолышх мембран печени,обусловленное повышением интенсивности процессов ПОЛ, ы результата которых:

- изменяется фосфолипидшя состав митохондрий; кирнокии-лотный состав Оосфолшидоа изменяется в сторону снижения дола полипенасыщенных гшрных кислот, таких как орахидоновая и лико-ловая;

- снижается интенсивность процэссоа дыхания, окислительного фосфорилировакия, продукщ!я АТФ.

2. Установлено, что фосфолигащшй препарат на основе ©эсфатидашолшт хлопчатника - ФХхл+ГК в значительной степеш: юсотанаатшвот липидные компоненты павреадэнкых митохондра-елышх мембран, что выраяается в снижении доли токсического продукта шреоклсления липвдов-лизофосфатидилхолина, выраженной тенденции к нормализации содержания фосфатидилхолина, фэсфзтидалетанолашна, повышении доли полинвнасыщешшх жирных кислот.

3. фоифолидидные препараты, восстанавливая липидное окружение ферментов митохонлриалышх мембран, оказывают половите льнов действие па их функциональную активность нормализуются параметры дыхательного метаболизма, повышается содерЕа-нае АТФ.

4. Применение комплексных препаратов ФХхл+ГК«кдистен и ФХхл+ГК+АТФ значительно поветаэт репарирующий еффект на пов-реадвнные митохондриальные мембраны, восстанавливая их функциональную активность почти до нормальных значений.

5. По эффективности репарирущэго действия исследуемые фэсфолипидные препараты можно расположить в следующей последовательности:

ФХхл*ГК+вкдастен > ФХхл+ГК+АТФ > ФХхл+ГК > ассенциело

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

I .Л.М. Фесенко, Б.А. Кадыров, Н.0. ДаЖЗровская Ыэханяэми повреждения митохондриальных структур печени при остром токсическом поражении и способы их восстановлении. //Реконструкция, стабилизация и репараций иовретеэнных биологических мембран:

Матер.всесоюз. сикп.-Благовещенск.-1989.-G.i25

2.Х.Я. Каримов, Л.А. ПавЕская, Н.В. Домброяская Способа коррекции процессов синтеза белка в печена при вкслоршап-

толыгам хроническом гепатите. //Нарушшшо механизмов регуляция и их коррекцшкТез.докл. IV Есесоюз. съезда патофизиологов.- М.- 1989.- С. 1178.

3.А.Н. Арилов, Л.U. Фесенко, Н.В. Домбровская Квмбрано-токсичесяий эффект галиотрина. //Цитохром Р-450 и модификация какромолекул: V Всесовз. конф.- Ялга.-1989.- С.371.

4.Н.В. Домбровская Влияние гэлиотриновой интоксикация па липидиый состав кэкбран ьштохсндрий печэш. //Конференция биохимиков республик Средней Азии и Казахстана,V. . : Тез. докл.-Ташкент.-1991.-С.281.

5.Disturbances In oxidative phosphorylation in toa Итог of rata with hellotrlne-induced hepatitis and restoration by phosphatidylcholine end ATP. /Z.Z, Glzatulllna, L.M. Pesroko, П.У. DombroTsltaya, at al. //Biomedical Slonce. - 1991. - 7.-2. -P.460-464.

Кзобрэтения

6. Способ лечения хронического гепатита препаратом вкдеотен. Приоритетная справка Но 4316957 (от 16.07.87 г.)

7. Суспензия для реконструкции мембран "In vitro-'. Авторсзсоэ свидетельство Ко 174072 (от 02.04.90 г.)

УТКИР ГЕЛИОТПМ ГН1АТИТВДА ЯИГАР Ш0Х0НДР1ШАРИГА ФООЭОЛМГЩ ПРЕПАРАТ ДА РШОТЕГ ТАСИРЮШ УРГАШШ.

Утказплгпн иэланишлар натижасида Heliotroplum Laalocarpu-'n таъсиридан чикпб келган уткир токсиклпншп лшгадлоршнг пэрэкнсь оксидлвшпш вктивлвштириб китар момбранасининг лилпд бислойини тузшпшики бузклишигв олиб келада, ва натшада мембрана силан йоглшгган фэрментларнинг акгивлигиии пасшим. бу вса асосвн митохондряяларнииг энергетик боглашшиши бузили-шига, кислород исгтвмол фыиюшшинг ошгааига олиб келиш маълум булдя.

Пахтадок олинган фосфатвдалхолян глациррнзиа кислота би-лан бпрга ^увгалиб аргашзмга киритилса комбрашизрзпшг яллиг-

лантан лшшд магрикскникг гикланшига, уларнннг функционал вк-гшшгштшг ошшш кузатилада.

Фосфолдаид препарагларюшыг вффективлиги уларнинг тарки-бига киригилган дорилар булда Оогликликдир вни^ланган (АТФ ва о^аилларшгнг синтезшинг активладтирадаган препарат -фитоекда-зон - вкдаотан ишлаталган).

Угкир гэлиогрин гепатит билан огриган $айвонларга айтиб утилган прэларатларнинг киритилиши митохоццриал мембраналаршшг липид бислойшшнг тиклашшшга, нафас олиш процессларига.оксид-лашб фосфорланиш ва АКйшшг сингезига игобий таъсир курсатада.

Олинган напжалер есоседа пахтадан олинган фосфатмдалхо-лгшга глвдирризин колота 1$ушилиб тайерланган препарат (ФХхл+ГК) Natternimm фармасвда шлаб чикариладиган вссешдаалэ препаратига Караганда анча яхша таъсир допиши курсатклган.

, *'1икастланган митахондриал мембраналаршшг тнклаышшга ФХхл+ГК+АТФ ва ФХхл+ГК+вкдисгбн комшшсли препаратлар шада кучлиро^ таъсир ipmsw кузатилди.

THE EFFECT OF PHOSPHOLIPID PKEPARATIONS Ш LIVER MITOCHONDRIA IK ACUTE НШ0ТНШ HEPATITIS.

Our study revealed destabilization of cell membrane 11- ; pid bllayar due to acute Intoxication, induced by Hellotropl-um Lasiocarpum and characterized by the activation of lipid peroxidation, which was associated with the decrease in membrane-bound enzyme aotivity, in particularly, system ol mitochondrial energy conjugation. Increase in oxygen consumption.

It waa found that administration or cotton phosphatidil-choline with glycyrrhizlne acid ( PCc+GA ) promoted the reparation of membr ie lipide matrix, their functional activity. Systematic investigation of the effect of phospholipids drugs was carried out in relation to inclusion to their content of ATP ( PCc+GA+ATP )and phltoekdiaone - ekdistene, having narked proteln-ayntheslEing activity ( PCc+GA+ekd ). It вав demonstrated that infusion ol ekdistene and ATP in content of phospholipide drugs to the animals with acute heliotrins hepatitis restored lipide concentration in membrane of mito- 18 -

chondrla, processes of respiration and oxidative phosphorylation, production of ATP. The advantage of over Essentials (Matteraenn). The oomposlt drugs POo+GA+AT? and PCc+GA+ekd had mode sake reparative effect on the danaged aitochondrial membranes.

Список оспращэнзЭ ПС - три иагриевая соль глзцарризнвовой гаолоты ЦДА - малшовый даальдзгзд ПЭД -тетрвиетпл-п-фвнялеяднашш

Шхл - фосфатидилхолЕЭ, вщзлзеенЗ ез сешш хлопчатника ФХхл+ГК - фоефолипидшЗ ярепара? на основе <$оофагадялхолгша хлопчаташа о грянатраэвоЭ оолья глицпррнвшювой ко ело та в качества дагэргантп.

®ХшнГК->АТФ - кошяэкенна препарат аа оаново ®Хо+ГК о добавлезяем ДТФ.

®С2л+ГН*ЭНД -коаиэкспнй препарат ча основа ФйинГК о дсбавлЕШШд вкдзетеяа.

v&fj