Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Видовой состав и структура популяций грибов рода Fusarium нa посевнх озимой ржи в Башкирии

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Видовой состав и структура популяций грибов рода Fusarium нa посевнх озимой ржи в Башкирии"

московский государственный университет ИМ.м.в.ломоносова

Биологический факультет

рГ8 од

На правах рукописи УДК 632.4:582.288.42

ГАРИФУЛЛИНА ГУЛЬНАРА ФАРИТОВНА4

ВИДОВОЙ СОСТАВ И СТРУКТУРА ПОПУЛЯЦИЙ ГРИБОВ РОДА FUSARIUM НА ПОСЕВАХ ОЗИМОЙ РЯИ В БАШКИРИИ.

03.00.24 - Микология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1994

Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии биологического факультета МГУ.

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор

Ю.Т.ДЬЯКОВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

М.М.ЛЕВИТИН

кандидат биологических наук Е.П.ДУРЫНИНА

Ведущее учреждение: Сельскохозяйственная академия им.К.А.Тимирязева.

-Защита диссертации состоится " 1994 г. в 15-30

часов на заседании специализированного совета Д.053.05.65 при Московском государственном университете им. М.В.Ломоносова по адресу: Москва, Ленинские горы, МГУ, Биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан "№ " г.

Ученый секретарь СоЕета, кандидат биологических наук

Лекомцева С.Н.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕШ. Производство зерна является основной [роблемой сельского хозяйства в Башкирии. В республике, по дан-шм станции защиты растений, ежегодный недобор урожая сельско-:озяйственных культур от болезней и вредителей составляет 18-¡0%. Научно обоснованный, подход к созданию устойчивых к болез-1ям сортов и планированию защитных мероприятий требует знания структуры и границ популяций фитопатогенных грибов и потен-дшльных возможностей изменчивости паразитов.

В последние года возрастает поражение колосовых культур Е»узариозом. Озимая рожь, которая в Башкирии занимает 20% от тлощадей, отведенных под зерновые культуры, также подвержена данному заболеанию. Грибы рода Fusarium вызывают болезни колола, корневые гнили, отмирание продуктивных стеблей. Их паразитизм не облигатен. Многие виды грибов рода Fusarium выделяются из почвы, где длительное время вегетируют на растительных остатках. Также относительна филогенетическая и органотропная специализация фузариев. При исследованиях фузариозов хлопчатника, томатов и других растений показано, что штаммы, выделенные из почвы и пораженных растений на одном поле имеют генетические и фенотипические различия, т.е. представляют собой изолированные и, возможно, независимые, эволюционно, популяции. В отношение фузариозов злаков подобных исследований не проводилось.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью диссертационной работы явилось изучение видового состава и распространения грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи в различных эколого-географических зонах Башкирии, анализ структуры популяций фуза-риевых грибов, выделенных из почвы и растений озимой ржи.

Задачи исследования:

- изучить распространение грибов рода Fusarium в почве ризосферы озимой рки и на самих растениях, определить их видовую принадлежность;

- изучить клоновый состав популяций по морфолого-культурашшм и.биохимическим признакам;

- определить вегетативно совместимые группы грибов рода Fusarium, встречающихся во всех исследуемых субстратах (почва, стебель, колос).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые проведен анализ видового состава грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи в различных эколого-географических зонах Башкирии. Описан белковый полиморфизм ПОПУЛЯЦИЙ Fusarium oxysporum (Schlecht) Snyd et Hans И f. soiani (Mart.) App.et Wr. при сравнении электрофоретических спектров неспецифических эстераз. Впервые проведены исследования по определению вегетативно совместимых груш грибов рода Fusarium, выделенных с посевов озимой ржи. В результате популя-ционно-фенотипического исследования установлено, что лопуляции

F.oxysporum И F. soiani ИМвЮТ КЛОНЭЛЬНУЮ структуру И ПреДСТЭВЛе-

ны мозаикой локально распространенных клонов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Для успешной борьбы с фуза-риозом на посевах зерновых культур необходимо знание развития фитопатогенного гриба, его экологических, биохимических и генетических особенностей.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы были доложены на заседании кафедры микологии и альгологии биологического факультета МГУ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, пяти глзе, заключения, выводов, списка цитируемой лите-

//о

ратуры и приложения. Работа включает — страниц машинописного

у_г J г

текста, --- таблиц, рисунков и приложение объемом —

-МЪ

страниц. Библиография содержит —- названий, из которых иностранной .

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

В главе дана характеристика грибов рода Fusarium, сведения о распространении этих грибов, специализации и патогенности. Приводятся данные по изучению вегетативной несовместимости у грибов рода Fusarium и использованию этого признака в качестве теста для выявления генетического разнообразия в популяциях при дифференциации штаммов по специализированным формам и расам.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Наш исследованы образцы почвы под посевами озимой ржи сорта Чулпан, а также растения е фазе трубкования, в фазе восковой спелости зерна и в период уборки урожая (стерню). Образцы почвы были взяты с двух полей в Дувансном районе (северо- восточная лесостепь) и Уфимском районе (юкная лесостепь) в августе 1989 г. и в мае 1990 г. Там не были взяты образцы стерни в августе 1989 г. и образцы стеблей в фазе трубкования в мае 1990 г.

Для изучения поражекности колосьев грибами рода Fusarium было исследовано семь полей в различных эколого-географических зонах Башкирии. При анализе распространенности фузариоза, поля обследовали маршрутным методом, с последующим выделением изоля-тов на стандартные среды (Великанов и др., 1989; Бенкен, Хацке-вич, 1972). Видовую принадлежность устанавливали по определителям (Билай, 1977; Booth. 1977).

Для оценки ВЛИЯНИЯ изучаемых штаммов грибов рода Fusarium

на рост растения в лабораторных условиях использовали метод, разработанный А.А.Бенкеном (1977).

Для дальнейшей работы у И30ЛЯТ0В двух ВИДОВ F.oxysporum и F.soiani, встречающихся на всех исследованных субстратах (почва, стебель, колос), были получены моноспоровые культуры. Идентифицировано 10 морфотипов колоний. Описание всех колоний проведено в стандартных условиях (5-е сутки, температура выращивания - 24-26 С, среда Чапека).

Биохимические признаки изучали методом электрофореза в вертикальном блоке полиакриламидного геля (Devis, 1964). Порядок проведения электрофореза и гистохимическое окрашивание ге-левых блоков были стандартными (Алтухов, 1974; Корочкин и др., 1977).

Для изучения вегетативной несовместимости использовали мутанты, не способные восстанавливать нитрат (nit-мутанты). Для получения nit-мутантов применяли модификацию методики, разработанной ДЛЯ Aspergillus nidulans fCove, 1976; Puhalla. 1985). Идентификацию nit-мутантов осуществляли на наборе сред с различными источниками азота (Correll et al.. 1987). Выявлено три класса nit-мутантов: nit-i, nit-з. nit-м. Реакции совместимости (комплементации) фиксировали по появлению на границе соприкосновения двух субстратных паутинистых колоний nit-мутантов плотного воздушного мицелия, характерного для штаммов.дикого типа. В случае несовместимости реакция комплементации не наблюдалась.

Для статистической обработки результатов опытов по изучению структуры популяций по морфолого-культуральным признакам использовали формулы, рекомендованные Животовским (1980; 1983). Для анализа фенотипического разнообразия использовали индекс

Шеннона (Животовский, 1983). При оценке фенотипического сходства популяций использовали меру попарного сходства г (Животовский, 1979, 1983). Для оценки сопряженности между варьирующими признаками рассчитывали коэффициент корреляции (Лакин, 1980). При сравнении средних величин достоверность различий определяли с помощью критерия Стьюдента (Лакин, 1980).

Результаты электрофореза анализировали следующим образом: I) определяли коэффициенты попарного сходства (Кс) между штаммами по спектрам неспецифических эстераз по формуле: Кс = Ф0(зщ /Ф, где Фоб - количество полос общее для спектров двух штаммов, а Ф - общее количество полос для спектров двух штаммов; 2) матрицу коэффициентов сходства закладывали в память компьютера ibm-xt, который проводит кластерный анализ и построение дерева нормированных дистанций между штаммами по программе "Systat". ГЛАВА 3. ВИДОВОЙ СОСТАВ И РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ГРИБОВ РОДА FUSARIUM НА ТЕРРИТОРИИ БАШКИРИИ.

В результате исследований установлено, что грибы рода Fusarium широко распространены на посевах озимой ржи в различных районах Башкирии. При анализе распространения грибов рода Fusarium в почве обнаружено, что в период весенней вегетации растений распространенность составляет 10-50% и возрастает к концу вегетации по сравнению с весенним периодом. Это может быть связано с накоплением пропагул во время активной жизнедеятельности грибов (табл.1). В весенний период (май,1990) исследуемые поля заметно отличаются мевду собой по распространенности грибов, что может быть связано с климатическими и метеороло-гическши условиями, характерными для этих районов (табл.1).

В результате анализа распространения грибов рода Fusarium

на надземных частях растений в тех же районах установлено, что распространенность фузариоза в Дуванском районе (северо- восточная лесостепь) довольно высокая, т.е. почти из всех образцов, собранных в послеуборочный период, выделены колонии грибов. .

Таблица I. Распространенность грибов рода Fusarium в почве ризосферы озимой ржи (на территории Башкирии).

Время сбора Место сбора Кол-во Распростра-

образцов ненность в %

5-10 Дуванский р-н

авг. (северо-вост.

1989 г. лесостепь)

1-е поле 8 62,5

Дуванский р-н

2-е поле 8 50,0

I—10 мая Дуванский р-н

1990 Г. 1-е поле 10 50,0

Дуванский р-н

2-е поло- 10 0,0

Уфимский р-н

(юкная лесостепь)

1-е поле 10 10,0

Уфимский район

2-е поле 9 33,0

Исследования растений, собранных в стадии трубкования (май,1990), показали, что распространенность фузариоза и поражение грибом озимой ржи в 1,5-2,0 раза ниже, чем в конце веге-

тации растений (табл.2).

Для изучения распространения фузариоза на колосьях озимой ржи, пораженные растения на первых этапах работы отделяли от здоровых визуально, по наличию тонкого налета розового цвета в местах смыкания чешуек.

Таблица 2. Распространенность грибов рода Fusarium на стебле озимой ржи (на территории Башкирии).

Время сбсра Место сбора Кол-во Распростра-

образцов ненность в %

5-10 авг. 1989 г. Дуванский р-н (северо-вост. лесостепь)

1-е поле 8 87,5

2-е поле 8 87,5

I—10 мая Дуванский р-н

1990 г. 1-е поле 10 30,0

2-е поле 10 10,0

I—10 мая 1990 Г. Уфимский Р-Н (южная лесостепь) 1-е поле 10 20,0

2-е поле 9 11,0

Как видно из таблицы 3, в среднем по исследованным районам, по внешним признакам, поракенность колоса фузариозом составляет 25%. Анализ выделения грибов рода Риааг1ит при помещении образцов на питательную среду показал резкое увеличение

количества пораженных фузариозом колосьев практически по всем районам (таСл.З, графа 4).

Таблица 3. Оценка распространенности фузариоза колоса озимой ржи в раличных районах Башкирии.

J6J6 Место сбора (район)

Общее число колосьев

% колосьев с внешними признаками фузариоза

% фузариозных колосьев при исследовании на питательной среде

1.Бураевский

северная лесостепь

2.Аургазин-ский

кжная лес.

3.Туймазин-ский

юго-запад, лес.

4.Мишкинский северная

лес.

5.Уфимский кжная лес.

6.Дуванский сев.-вост.

лес.

1-е поле

7.Дуванский

сев.-вост. лес.

2-е поле

138

108

77

93 136

31

30

25

41

29

27

12,5

13

20

80

100

77,8

100 100

100

100

Видовой состав. Из почвы, стеблей и колосьев озимой наш было выделено 125 изолятов, принадлежащих к 12 видам рода

Fusarium'. F. sporotrichiella W.R. emend Bilai - 12,2%; F. sambucinum Fuck - 16,0%; F.pxysporum (Schlecht) Snyd et Hans

- 15.2%; F.culmorum fW.G.Sm.ISacc. - 11.2%; F. graminiarum Schwabe - 6,4%; F.solani (Mart.) App et Wr. - 5,6%; F.avenaceum (Fr.) Sacc. - 5,6%; F.gibbosum App et Wr. emend Bilai - 5,6%; F. latei'i tium Ness - 4.8%; F.redcslens Wr. - 4.0%; F. nivale (fr.) Ges - 3,2%; F.heterosporiir: Hess - 2,4%.

Для оценки зависимости частоты встречаемости видов от субстрата были взяты изоляты, выделенные из образцов почвы, стеблей и колоса, собранных в Дуванском районе (табл.4).

Таблица 4. Сравнение частоты встречаемости (%) видов гриба рода Fusarium В ЗЗВИСИМОСТИ ОТ СубСТрЭТЭ В ДуБЭНСКОМ

районе.

виды почва стерня стебель КОЛОС

F.culmorum 24,5 10,7 - 7,7

F. oxysporum 31,5 21,4 7,7 23,0

F. graminiarum 3,5 14,3 - -

F. sambucinum 13,0 - 15,4 30,7

F. sporotrichiella 3,5 - 46,1 15,4

F. avenaceum - 3,6 15,4 -

F. lateritium - 21,6 - -

F.gibbosum - 21,4 7,7 -

F. nivale - - - 7,7

F.heterosporum 10,0 - - -

F.solani 10,0 7,1 7,7 7,7

F.redolens 3,5 - - 7,7

Доминирующими видами в почве бит F. oxysporum И F.culmorum, НЭ СТерне - F.gibbosum. F. lateritium. На Стебле -

F.sporotrichieila, ha kojioce - F. sambucinum. F.oxysporum.

Таким образом, мы предположили, что имеется зависимость встречаемости некоторых видов от субстрата.

Глава 4. Патогенность грибов рода Fusarium.

Для заражения в лабораторных условиях использовали штаммы F.oxysporum (ВЫДелеННЫе ИЗ ПОЧВЫ И стебля ржи), F.graminiarum (по два штамма, выделенные из стеблей и колоса ржи). Для проверки чистоты опыта проведено вторичное выделение грибов.

В результате опыта установлено, что в основном все штаммы подавляют рост и развитие растений. Наиболее сильно подавляли рост растений штаммы. F.^raminiarum, выделенные из стеблей (% подавления - 61,5-63,0).

Глава 5. Сравнительное изучение популяций F.oxysporum и F. solani на посевах озимой ржи в Башкирии.

5.1. Морфолого-культуральные признаки.

Нами проведен анализ морфолого-культуральных признаков штаммов двух ВИДОВ F.oxysporum И F. solani, ВСТречаЮЩИХСЯ В Образцах всех исследованных субстратов (почва, стебель, колос).

В результате клонирования исследуемых штаммов выявлена высокая природная гетерогенность по типу роста их' мицелия. Идентифицировано 10 морфотипов: А - мицелий пушистый, по краю волокнистый; Б - мицелий войлочный, плотный, по краю пленчатый; В - мицелий клочковато-войлочный, по краю пушисто-бархатистый, иногда чешуйчатый; Г - мицелий рваный, местами - пушистый, местами - пленчатый; Д - мицелий чешуйчато-пленчатый, по краю пленчатый; Е - мицелий зональный: центр - чешуйчатый, край -пленчатый, средняя зона - пушистый; И - мицелий зональный:

центр - пленчатый рыхлый, низкий, край колонии - пушистый плотный, высокий; К - мицелий зональный: центр и край колонии -войлочный, плотный, средняя зона - пушистый,, невысокий; Л -мицелий ворсиситый, невысокий; М - мицелий войлочный, плотный,

край колонии волнистый.

Частота встречаемости морфологических типов в популяциях

к. во1ап2 1телс.тавлена_й9 рис Л.

Частоты встречаемости

(Частоты встречаемости а)

б)

выборки с полей морфологических типов в

I

[-Г; §-Д; [

I- М; а) почва; 0) стебель

В;

! V

популяциях - И;

Рис.1. Частоты

Г. эо2ат'.

ГЛ: 0-в; I I"* I-«

В популяциях гриба р.зо1ат, выделенных из почвы и стеблей доминирующими были морфотип к и морфотип И, соответственно.

В популяциях грибов р.охузрогит (рис.2), выделенных из почвы, преобладает морфотип А, выделеных из стеблей - Д, а г-, популяциях, выделенных из колосьев - В.

Частоты "встречаемости, а)'

0.5-

ол

0.3

0.2

ол

1

Частоты встречаемости

4 о)

0.5

ол-

ж

02

0.1

! II Ш выборки с полей

Частоты встречаемости

0.8-

07

0$-

й!>-

0.5-

о.г-

ОЛ

В)

¡VII' Рис.2.

Л

Л

I

IV

выборки с поле]

I VIII: Частоты

IX

выборки с полей морфологических типов в популяциях р.охуарогит. (Услов. обознач. см.рис.1, а) почва; б) стебель

в) колос

<

I

Оценка степени морфологического разнообразия показала (табл.5), что популяции е.охугротт, выделенные из почвы наиболее вариабельны. Среднее число морфотипов (|х) и доля редких морфотипов (ъ) в почвенных популяциях были более высокими по сравнению с этими показателями в популяциях, выделенных из стеблей и колосьев.

Таблица 5. Индексы разнообразия морфолого-культуральных признаков у штаммов р.схузрогит и р.го1ап1 на посевах озимой ржи.

число штаммов

Р. охувротт П 160

с; 121 к 48 Р.зо!ап1 П 47 с 50 К 20

н

I,64-0,05 1,52±0,02 1,41-0,04

I,31*0,01 I,86-0,01

о

1

П-С 2,55х

П-С 2,41хх

6,28-0,26 4.76-0,10 4,49-0,22

3,85-0,23 6,61±0,21 О

Ь

0,215-0,03 0,048-0,02 0,10 -0,04

0,04 -0,02 0,06 ±0,03 О

Примечание: п - почва: с - стебель; к - колос; Н - инд. Шеннона; р. - среднее число морф; ь - доля редких морф; ъ -г-критерий Стьюдента; х - достоверные различия; хх - высокодостоверные различия.

Среди штаммов г.яоХап! наиболее вариабельными оказались штаммы, выделение из стеблей (табл.5).

Проводили попарное сравнение сходства частот встречаемости морфотшов между популяциями Г.охуврогит, ВЫДеЛёННЫМИ С рЭЗНЫХ полей. Обнаружено, что меньше различий наблюдается между экологически отдаленными популяциями: почва-стебель, стебель-колос, почва-колос. В то же время, штаммы, взятые из одного субстрата, с разных полей имеют существенные различия . Для того, чтобы исключить эффект зависимости показателя сходства от числа штаммов, вычислен коэффициент корреляции между числом сравниваемых штаммов и степенью сходства. Для всей выборки (14 вариантов) корреляция оказалась недостоверной.

Эти данные могут быть связаны с двумя обстоятельствами: I) отсутствием селекции на морфологические признаки в разных. географических и экологических условиях; 2) клональной структурой популяций, приводящей к отсутствию обменов между штаммами внутри и между популяциями.

Об этом свидетельствует анализ внутрипопуляционного фено-типическтого сходства штаммов. Показатель сходства при сравнении образцов, взятых с одного шля в большинстве случаев равен нулю.

Аналогичная закономерность наблюдается и при анализе сходства ПОПУЛЯЦИЙ ?.ао1гти

5.2.Биохимический полиморфизм.

В популяционных исследованиях используют биохимические маркеры. С целью выявления биохимического полиморфизма в популяциях провели электрофоретическое изучение неспецифических эстераз штаммов охуврогыт и р.зо1ап1. Профиль не специфических штаммов, выделенных из почвы, стеблей и колосьев озимой ржи

насчитывает 25 фракций, причем, только одна из них является общей для всех штаммов р.охузрогит и кsoiaпi (ь?£ = 0,0э). Сочетание различающихся полос дало большое число элекрофоретичес-ких типов, как для г.схуярогит, так и для р.зо1ап2. Попарное сравнение частот встречаемости отдельных фракций выявило значительные различия не только между клонами, взятыми с разных полей, но и между клонами, взятыми из разных образцов одного поля.

При сравнении клонов, выделенных из разных субстратов (почва, стебель, колос) по фракциям эстераз оказалось, что все исследуемые клоны, полученные из колосьев имели одну общую фракцию неспецифических эстераз, по-видимому она может служить маркером штаммов, выделенных из данного субстрата. Анализ частоты встречаемости фракций эстераз у клонов р. $о1ап1, выделенных из почвы и стеблей, показал большое разнообразие полос и отсутствие маркерных (общих) фракций.

На основании матрицы коэффициентов сходства построена ден-дрограмма, позволившая оценить степень сходства между разными грушами штаммов г-охуврогит. Результаты кластерного анализа свидетельствуют о некоторой приуроченности штаммов к экологическим нишам (рис.3).

Выше изложенное указывает на высокую степень гетерогенности популяций и отсутствие обменов между и внутри них.

5.3.Генетический полиморфизм.

Вегетативная несовместимость используется в качестве теста для выявления генетического разнообразия в популяциях фитопато-генных грибов и позволяет идентифицировать непатогенные штаммы.

1,00

0,0 с

к ъг

К

к

к 26 к ьт.

к

К 19

к

и

п

Рис.3. Дендрограмма сходства клоков р.охуррегия. 1-34 - клоны, выделенные из почвы (п), стеблей ¡с) колосьев (к).

1В

В последние года широко применяется метод определения вегетативно совместимых групп у грибов рода Fusarium С ПОМОЩЬЮ мутантов, не способных восстанавливать нитрат - nit-мутанты (Puhalla. 1985).

В настоящем исследовании применили этот метод для изучения вегетативной несовместимости штаммов F.oxysporum и F.solani, встречающихся во всех исследованных субстратах.

Изоляция п1£_-мутантов. На среду с добавкой хлората калия в концентрации, ингибирующей нормальный рост гриба, помещали штаммы F.oxysporum и F.solani. Проанализировано 34 и 14 штаммов, соответственно. Развившиеся хлоратустойчивые сектора отсевали на питательную среду без хлората, содержащую в качестве единственного источника азота нитрат.

Хлоратустойчивые сектора были получены из 31 штамма р.сху-sporum И 13 штаммов F.solani С ЧЭСТОТОЙ 0,33-0,66 И 0,16- 0,5 на одну КОЛОНИЮ, соответственно. Из трех штаммов F.oxysporum и одного штамма F.solani не получены хлоратустойчивые сектора, так как эти штаммы на среде с добавлением хлората калия давали колонии с нормальным мицелием, т.е. были устойчивы к действию хлората калия.

Большинство хлоратустойчизых секторов не могли утилизировать нитрат (60%). В качестве nit-мутантов они были использованы в последующих опытах. Было выделено 251 мутант из штаммов F.oxysporum И 116 МУТЭНТОВ ИЗ F.solani (ТабЛ.6). Все муТЭНТЫ

были стабильны и при повторном рассеве на минимальной среде давали колонии, характерные для nit-мутантов.

Таблица 6. Nit-феНОТИПЫ мутантов F. oxysporum И F.solani.

Число Число Всего Частота образов, пп-мутантов (%) штаммов секторов мутантов пП-з п!-ь-м

F. oxyspoma

31 424 251 67,7 16,7 15,7

F.solani

13 172 116 82,8 12,1 5,1 .

Идентификация nit-мутантов. Nit-фенотип может возникать в результате мутаций ряда генов, участвующих в процессе восстановления нитрата. Тип nit-мутантов исследованных штаммов был определен с помощью набора соответствующих сред.

Было получено три класса nit-мутантов. Эти классы представляют мутации: в структурном локусе нитратредуктазы (nit-I), в .специфическом регуляторном локусе (nit-З) и в локусах молиб-ден-содержащего кофактора (nit-M). Из штаммов f.oxysporum и F.solani с наибольшей частотой были выделены мутанты nit-i. Частота образования мутантов nit-з и nit-M значительно ниже (тасл.6). При идентификации nit-мутантов штаммов F.solani только у 3 штаммов получены мутанты класса nit-M (табл.6).

Трудность получения nit-мутантов класса nit-м является основным недостатаком этого метода (Corren. 1987).

Тесты на комплементацию. Nit-мутанты вегетативно- совместимых штаммов с различными генетическими повреждениями могут комплементироваться на селективной среде с нитратом , образуя зоны нормально растущего мицелия. Мутанты класса nit-м легко комплементировались с мутантами nit-i и nit-з. Между мутантами

nit—1 и nit-з комплементация происходила значительно реже. В некоторых случаях даже при попарном выращивании мутантов nit-i и nit-з, полученных из одного штамма, они не комплементирова-лись. При выращивании пар мутантов nit-i и nit-i. nit- з и nit-з. nit-м и nit-м комплементация ни в одном из случаев не наблюдалась.

При попарном выращивании nit-мутантов, полученных из клонов F.oxysporum одного штамма и отличающихся по морфологии колоний (морфотипы), практически во всех случаях происходила комплементация между nit-i и nit-м ( nit-з и nit-м) и реже между мутантами nit-i и nit-з.

Комплементация не происходила между nit-мутантами, полученными из разных штаммов (почвенных, стеблевых, колосовых), когда все nit-мутанты были спарены во всех возможных комбинациях. Более того, несовместимыми оказались штаммы, выделенные из стеблей одного и того же образца. Это означает, что в наших исследованиях каждый штамм F.oxysporum представляет отдельную вегетативно совместимую группу.

Из 13 изолятов F.soiani только у трех были получены мутанты nit-м. При попарном выращивании nit-мутантов во всех комбинациях реакция совместимости наблюдалась между одним растительным штаммом и почвенным, а так же между двумя почвенными штаммами. В остальных случаях в комбинациях nit-i и nit-м (nit-з и nit-м) реакция совместимости не наблюдалась.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ распространения фузариоза озимой ржи показал, что грибы рода Fusarium широко распространены в различных эколого-

географических зонах Башкирии.

Обнаружена зависимость встречаемости некоторых видов рода Fusarium от субстрата (почва, стебель, колос). Однако отдельные вида ( f. oxysporum и f. soiani) встречались во всех исследованных субстратах:"

По многим литературным данным было отмечено, что имеется специализация некоторых ВИДОВ рода Fusarium по паразитированию на отдельных культурных растениях, а также существуют различия между популяциями, выделенными из растений и почвы. Например, ПО результатам МНОГИХ исследований (Bowden et al., 1991: Tantaoni et ai.. i99i) обнаружено, что эти популяции различаются по патогенности и vc-груштам. Штаммы, выделенные из растений составляют одну vc-группу, а штаммы, выделенные из почвы ризосферы этих же растений - отдельные vc-группы, состоящие из одного штамма, или образуют vc-группы несовместимые с патогенной vc-группой. По зерновым культурам таких данных недостаточно.

Мы попытались проверить эти предположения на примере грибов рода Fusarium, выделенных из растений озимой ржи и почвы.

В наием исследовании проведен анализ морфолого- культу-ральных и биохимических признаков, а также вегетативной несовместимости двух видов f.oxysporum И f. soiani, ВСТречаЮЩИХСЯ ВО всех исследуемых субстратах. Обнаружена значительная степень морфологического разнообразия В популяциях f.oxysporum и f.soiani. Анализ вегетативно несовместимых групп показал, что все штаммы f.oxysporum я f.soiani вегетативно не совместимы.

Таким образом, не было отмечено наличия вегетативно совместимых супергрупп, приуроченных к паразитированию или разви-

тию в почве. Однако, некоторая приуроченность к субстратам (почва, колос) обнаружена при сравнении спектров изоферментов эстеразы. Возможно, у исследуемых нами видов только начинается дивергенция популяций в направлении к специализации.

ВЫВОДЫ

1. Грибы рода Fusarium широко распространены во всех экол-ого-географических зонах Башкирии.

2. Визуальная оценка поракенности колоса ржи фузариозом в фазе восковой спелости зерна не может объективно отражать распространенность инфекций. Точную картину распространенности грибов рода Fusarium дает выделение грибов на питательную среду.

3. Впервые проведен анализ видового состава грибов рода Fusarium На ПОСеВЗХ рЖИ. Обнаружено 12 ВИДОВ рода Fusarium, из которых доминирующими В почве были F. oxysporum. F.culmorum. На стебле - F. lateritium. F. oxysporum. НЭ КОЛОСв - F. sambucinum. F.sporotrichiella.

4. В результате моноспорового рассева выделено 10 морфоти-ПОВ двух ВИДОВ F. oxysporum И F.solani. АНЭЛИЗ ЧЭСТОТЫ ВСТречаемости морфотипов в популяциях, выделенных из почвы, стеблей и колосьев озимой ржи показал высокую степень фенотипического разнообразия.

5. Выявлена широкая вариабельность биохимических признаков при сравнении электрофоретических спектров неспецифических эс-тераз. В результате кластерного анализа обнаружена связь между спектрам! эстераз и субстратом.

6. Впервые проведены исследования по определению vc-груяп грибов рода Fusarium, выделенных с посевов ржи. Показано, что все исследованные итаммы f.oxysporum и f. so2ani вегетативно несовместимы, т.е. каждый штамм представляет отдельную vc-группу.

7. Популяционно-фенотипическое изучение исследуемых видов показало, ЧТО популяции F.oxysporum Я f.solani ИМеЮТ КЛОНаЛЬНую структуру и представлены мозаикой локально распространенных клонов.

Публикации по теме диссертации:

Гарифуллина Г.Ф., Долгова A.B. Видовой состав и распространенность грибов рода Fusarium на территории Башкортостана// Микология и фитопатология. - 1994. - Т.28. - Je _ . (в печати)

Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гарифуллина, Г. Ф.

Введение

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика грибов рода Fusarium.

1.1.1. Специализация грибов рода Fusarium.

1.1.2. Распространенность и патогенность грибов рода Fusarium.

1.1.3. Влияние факторов среды на поражаемость растений.

1.2. Анализ фенотипов как подход к изучению популяционной изменчивости фитопатогенов.

1.2.1. Анализ морфолого-культуральных признаков.

1.2.2. Анализ уровня природного белкового полиморфизма.

1.3. Вегетативная несовместимость.

1.3.1. Гетерокариоз,

1.3.2. Гетерокариоз и вегетативная несовместимость у грибов рода Fusarium.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика места сбора материала.

2.2. Материалы.

2.3. Методы.

2.3.1. Выделение изолятов в чистую культуру и определение видовой принадлежности.

2.3.2. Оценка патогенности некоторых видов рода Fusarium.

2.3.3. Анализ морофлого-культуральных признаков.

2.3.4. Метод электрофоретического разделения изоферментов эегеразы.

2.3.5. Получение и определение фенотипов nit-мутантов.

2.3.6. Математическая обработка результатов.

Глава 3. Видовой состав и распространение грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи в Башкирии.

3.1. Распространение грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи.

3.2. Видовой состав грибов рода Fusarium.

Глава 4. Патогенность грибов рода Fusarium.

Глава 5. Сравнительное изучение популяций Fusarium oxysporum и Fusarium solani на посевах озимой ржи в Башкирии.

5.1. Морфолого-культуральные признаки.

5.2. Биохимический полиморфизм.

5.3. Генетический полиморфизм. 81 Заключение 90 Выводы 92 Литература 93 Приложение

Введение Диссертация по биологии, на тему "Видовой состав и структура популяций грибов рода Fusarium нa посевнх озимой ржи в Башкирии"

Производство' является основной проблемой сельского хозяйства в Башкирии. В республике, по данным станции защиты растений, ежегодный недобор урожая от болезней и вредителей составляет 18 - 20%. Научно обоснованный подход к созданию устойчивых к болезням сортов и планированию защитных мероприятий требует знания структуры и границ популяций фитопатогенных грибов и потенциальных возможностей изменчивости паразитов.

В последние годы возрастает поражение колосовых культур фузариозом, что отмечено во многих работах отечественных и зарубежных исследователей (Болтнянская, 1981; Левитин, Иващенко, Шипилова, 1990; Cook, 1981; Sutton, 1982).

Озимая рожь, которая в Башкирии занимает 20% от площадей, отведенных под зерновые культуры, также подвержена данному заболеванию.

Грибы рода Fusarium вызывают болезни колоса, корневые шили, отмирание продуктивных стеблей. Их паразитизм не облигатен. Многтие виды грибов рода Fusarium выделяются из почвы, где длительное время вегетируют на растительных остатках. Также относительны филогенетическая и органотропная специализации фузариев. При исследованиях фузариозов хлопчатника, томатов и других растений показано, что штаммы, выделенные из почвы и пораженных растений на одном поле, имеют генетические и фенотипические различия, т.е. представляют собой изолированные и, возможно, независимые эволюционно, популяции.

В отношении фузариозов злаков подобных исследований не проводилось.

Целью нашей работы было изучение видового состава и распространения грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи в различных эколого-географических зонах Башкирии, анализ структуры популяций фузариевых грибов, выделенных из почвы и растений озимой ржи.

Перед нами были поставлены следующие задачи: изучить распространение грибов рода Fusarium в почве ризосферы ржи и на самих растениях, определить их видовую принадлежность; изучить клоновый состав популяций по морфолого-культуральным и биохимическим признакам; определить вегетативно совместимые группы грибов рода Fusarium, встречающихся во всех исследуемых субстратах (почва, стебель, колос).

Заключение Диссертация по теме "Микология", Гарифуллина, Г. Ф.

выводы

1. Грибы рода Fusarium широко распространены во всех эколого-географических зонах Башкирии.

2. Визуальная оценка пораженности колоса ржи фузариозом в фазе восковой спелости зерна не может объективно отражать распространенность инфекции. Точную картину распространенности грибов рода Fusarium дает выделение грибов на питательную среду.

3. Впервые проведен анализ видового состава грибов рода Fusarium на посевах озимой ржи. Обнаружено 12 видов рода Fusarium, из которых доминирующими в почве были F.oxysporum, F.culmorum, на стебле F.lateritium, F.oxysporum, на колосе -F.sambucinum, F.sporotrichiella.

4. В результате моноспорового рассева выделено 10 морфотипов двух видов: F.oxysporum и F.solani. Анализ частоты встречаемости морфотипов в популяциях, выделенных из почвы, стеблей и колоса озимой ряш, показал высокую степень морфологического разнообразия.

5. Выявлена широкая вариабельность биохимических признаков при сравнении электрофоретических спектров неспецифических эстераз. В результате кластерного анализа обнаружена связь между спектрами эстераз и субстратами.

6. Впервые проведены исследования по определению VC-групп грибов рода Fusarium, выделенных с посевов ржи. Показано, что все исследованные штаммы F.oxysporum и F.solani вегетативно несовместимы, то-есть каждый штамм представляет отдельную VC-группу.

7. Популяционно-фенотипическое изучение исследуемых видов показало, что популяции F.oxysporum и F.solani имеют клональную структуру и представлены мозаикой локально распространенных клонов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ распространения фузариоза озимой ржи показал, что грибы рода Fusarium широко распространены в различных эколого-географических зонах Башкирии.

Обнаружена зависимость встречаемости некоторых видов грибов рода Fusarium от субстрата (почва, стебель, колос). Однако, отдельные виды (F.oxysporum и F.solani) встречались во всех субстратах.

По многим литературным данным было отмечено, что имеется специализация некоторых видов рода Fusarium по паразитированию на отдельных культурных растениях, а также существуют различия между популяциями, выделенными из растений и почвы. Например, по результатам многих исследований (Bowden et al., 1991; Tantaoni et al., 1991), обнаружено, что эти популяции различаются по патогенности и VC-группам. Штаммы, выделенные из растений, составляют одну VC-группу, а штаммы, выделенные из почвы ризосферы этих же растений, - отдельные VC-группы, состоящие из одного штамма, или образуют VC-группы несовместимые с патогенной VC-группой. По зерновым культурам таких данных недостаточно.

Мы попытались проверить эти предположения на примере грибов рода Fusarium, выделенных из растений озимой ржи и почвы.

В нашем исследовании проведен анализ морфолого-культуральных и биохимических признаков, а также вегетативной несовместимости двух видов: F.oxysporum и F.solani, встречающихся во всех исследуемых субстратах. Обнаружена значительная степень морфологического разнообразия в популяциях F.oxysporum и F.solani. Анализ вегетативно совместимых групп показал, что все штаммы F.oxysporum и F.solani вегетативно несовместимы.

Таким образом, не было отмечено наличия вегетативно совместимых супергрупп, приуроченных к паразитированию или развитию в почве. Однако, некоторая приуроченность к субстратам (почва, колос), обнаружена при сравнении спектров изоферментов эстеразы. Возможно, у исследуемых нами видов только начинается дивергенция популяций в направлении специализации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гарифуллина, Г. Ф., Москва

1. Айала Ф. Введение в популяционную и эволюционную генетику. М.: Мир, 1984. 232 с.

2. Акмурадов Б.П., Сидорова С.Ф. Морфолого-культуральная изменчивость возбудителей фузариозного увядания хлопчатника и овощных культур // Микол. и фитопатол. 1983. Т. 17, N5. С. 392-395

3. Баландина И.Д., Шевцова Л.П. Особенности штаммов грибов Verticillium dahliae Kleb и Fusarium oxysporum f.vasinfectum, различающиеся по степени вирулентности // Тр. Среднеазиатского НИИЗР. Ташкент. 1977. N11. С. 16-20

4. Балыдин В.К.О некоторых агротехнических факторах повышения устойчивости пшеницы к корневой гнили // Тез. докл. совещ.: Корневые гнили сельскохозяйственных культур. Тбилиси. 1975. С. 3-4

5. Беляева Н.Я. Роль фузариоза в возникновении пустоколосости и щуплости зерна озимой пшеницы в МССР и меры борьбы с ними. Автореф.дисс.канд. селскохоз. наук. JI. 1981. 22 с.

6. Бенкен А.А., Жукова Р.В. Возбудители корневых гаилей яровой пшеницы в эколого-географических зонах Башкирской АССР // Микол. и фитопатол. 1974. Т. 8, N1. С. 31-37

7. Бенкен А.А.Дацкевич Л.К. Проблемы борьбы с многолетними эпифитотиями корневой гнили яровой пшеницы в Сибири // Тез.докл. 8 Всесозн. совещ. по иммунитету сельскохоз.растений к болезням и вредителям. Новосибирск. 1981. С. 83-84

8. Бенкен А.А., Хрустовская В.Н. // Труды ВИЗР. Л.: Наука. 1977. С. 9-13.

9. Билай В.И. Фузарии. К.: Наукова думка. 1977. 441 с.

10. Билай В.И. Принципы систематики и структуры фитопатогенных видов рода Fusarium // Микробиол. журн. 1978. Т. 40, N2. С. 148 156

11. Болтнянская Э.В. Микофлора зерна ржи в период его созревания в поле в связи с формированием у зерна розовой окраски // Изв. АН СССР. Сер. биология.1986. С. 793-797

12. Волчкова Е.В. Корневая гниль пшеницы в Северной Осетии // Тез. докл. совещ.:Корневые гнили зерновых злаков и борьба с ними. Киев. 1967. С. 34-35

13. Гешеле Э.Э. Методическое руководство по фитопатологической оценке зерновых культур. Одесса. 1971. 179 с.

14. Гришечкина С.Д., Бенкен А.А. Корневые гнили зерновых культур в Волго-вятском регионе // Микол. и фитопатол. 1981а. Т. 15, N5. С. 450-451

15. Гришечкина С.Д., Бенкен А.А. Внутривидовая специализация возбудителя фузариозной корневой гнили злаков // Микол. и фитопатол. 19816. Т. 15, N1. С. 82-83

16. Горленко М.В. Некоторые вопросы географии и биологии грибов // Бюлл. Моск.об-ва исп. природы. Отд. биол. 1975. Т. 80, N2. С. 30 -35

17. Гусева К.А.,Нестеров А.Н. Поражаемость зерновых культур корневой гнилью в условиях Ленинградской области // В сб.: Селекция, семеноводство и сортовая агротехника сельскозозяйственных культур. Л. 1977. С. 39-42

18. Дарага А.В. Популяционное изучение возбудителя пирикуляриоза ржи гриба Pyricularia oryzae Cav. Автореф. дисс. .канд. биол. наук. М. 1986. 24 с.

19. Дарага А.В., Терехова В.А., Дьяков Ю.Т., Джавахия В.Г. Изменчивость фитопатогенного гриба Pyricularia oryzae Cav. IV. Сравнительное изучение нестабильности моноконидиальных изолятов // Биол. науки. 1985. N5. С. 84-89

20. Дьяков Ю.Т. Использование метода электрофореза белков для исследований по таксономии и изменчивости грибов. Итоги науки и техники. Ботаника: т. 4. М.: ВИНИТИ. 1980. С. 109-116

21. Животовский Л.А. Показатели популяционной изменчивости по полиморфным признакам. Фенетика популяций, под ред. Яблокова А.В. М.: Наука. 1982. С. 38-44

22. Животовский Л.А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях. Итоги науки и техники. Общая генетика: т.8. М.: ВИНИТИ. 1983. С. 76-104

23. Жукова Р.В. Корневые гнили пшеницы в Башкирской АССР // Микол. и фитопатол. 1974. Т. 8, N2. С. 163

24. Захаров И.А., Мироненко Н.В. Гетерокариоз и проблемы структуры популяций грибов // Микол. и фитопатол. 1983. Т. 17, N5. С. 414-424

25. Караджова JI.B. Фузариозы зерновых культур // Защита растений. 1976. N5. С. 24-25

26. Карташова Е.Р., Первозванцева Т.Н. Изозимный состав дегидрогеназ Fusarium oxysporum f. vasinfectum // Сельскохоз. биология. 1969. Т. 4, N5. С. 716-718

27. Корочкин Л.И., Серов О.Л., Пудовкин А.И. и др. Генетика изоферментов. М.: Наука. 1977. 278 с.

28. Корочкин Л.И. Изоферменты в молекулярной биологии и генетике. // Мол. биология. 1979. Т. 13, No 3. С. 369-374

29. Коршунова А.Ф., Чумаков А.Е., Инночихина Р.И. Защита пшеницы от корневых гнилей. Л.: Колос. 1976. 184 с.

30. Лакин Г.Ф. Биометрия. Учебное пособие для биологич.спец. вузов. М.: Высшая школа. 1980. 293 с.

31. Левитин М.М. Генетические основы изменчивости фитопатогенных грибов. Л.: Наука. 1986. 208 с.

32. Левитин М.М.,Иващенко В.Г.,Шипилова Н.Г. Фузариоз колоса пшеницы // Микол. и фитопатол. 1990. Т.24, N5. С. 446-453

33. Левонтин Р. Генетические основы эволюции. М.: Мир.1978. 351 с.

34. Лукьянова Л.Г. Корневые гнили озимой ржи // Защита растений. 1985. N7. С. 20-21

35. Макаренко Е.А. Корневая гниль яровой пшеницы // Матер, науч.конф. Киров. 1973. С. 134-138

36. Меттлер Л., Грегг Т. Гентика популяций и эволюция. М.: Мир. 1972. 323 с.

37. Можина И.А., Горленко М.В., Дьяков Ю.Т. Сравнительное изучение популяций Thielaviopsis basicola (Berk, et Br.) Ferraris. И. Патогенность // Микол. и фитопатол. 1984. Т. 18, N1. С. 22-26

38. Назарова Л.Н.,Фогенкова Т.В.,Корнева Л.Г. Болезни озимой ржи // Защита растений. 1992. N5. С. 52-53

39. Ордин А.П. Способы определения природы розовой окраски зерна: на примере зерна пшеницы и ржи (возбудитель Fusarium sp., Mycelia sterilia) // Изв. АН СССР. Сер. биология. 1985. N2. С. 313316

40. Пантелеймонова Т.И.,Дьяков Ю.Т. Сравнительное изучение возбудителей серой гнили земляники Botrytis cinerea Fr. в Подмосковье // Бюлл. моек, о-ва испыт. природы. Отд. биол. 1985. Т. 90, N3. С. 93-103

41. Пантелеймонова Т. И. Фенетическое изучение внутривидовой дифференциации возбудителя серой гнили Botrytis cirierea Pers.:Fr. Автореф. дисс.канд. биол. наук. М. 1986. 14 с.

42. Петренко В.М. Рекомендации по защите зерновых культур от фузариоза в Краснодарском крае на 1990. Краснодар. 1990. 11 с.

43. Попов В.И.,Кумачева Е.М.,Козловская П.И. Патогенность возбудителей корневой гнили яровой пшеницы // Микол. и фитопатол. 1978. Т. 12, N3. С. 248-254

44. Портянкин Д.Е., Терехова В.А., Левитин М.М. Популяционное изучение возбудителя фузариозного увядания льна в Белоруссии // Микол. и фитопатол. 1988. Т. 22, N4. С. 362-368

45. Простакова Ж.Г., Балашова Н.И., Лупашку Г. А. Взаимосвязь фузариозоустойчивости сои с адаптивностью к экстремальным факторам среды. Экологическая генетика растений и животных. Кишинев: Штиница. 1984. С. 86-94

46. Райло А.И. Грибы из рода Фузариум. М.: Гос. из-во с/х лит. 1950. 415 с.

47. Степанов К.М. Грибные эпифитотии: введение в общую эпифитотию грибных болезней растений. М.: Сельхозгиз. 1962. 471 с.

48. Супрун Л.М. Популяционное изучение Phythophthora infestans (Mont.) de Вагу возбудителя фитофтороза картофеля. Автореф. дисс.канд. биол. наук. М. 1984. 23 с.

49. Трувеллер К.А.,Нефедов Т.Н. Многоцелевой прибор для вертикального электрофореза в параллельных пластинах полиакриламидного геля // Науч. докл. высш. школы. Биол. науки. 1974. N9. С. 137 -140

50. Успенская Г.Д. Экологическая адаптация и эволюция грибов // Микол. и фитопатол. 1980. Т. 14. N3. С. 259-263

51. Финчем Дж. Генетическая комплементация. М.: Мир. 1968. 184с.

52. Хохрякова Т.М. О геграфическом видообразовании фитопатогенных грибов // Микол. и фитопатол. 1980. Т. 14, N3. С. 269-272

53. Цымбал М.М.,Моршацкий А.А. Влияние агротехнических факторов на поражаемость озимой пшеницы корневой гнилью в Центральной степи УССР. Корневые гнили хлебных злаков и меры борьбы с ними. М.: Колос. 1975. С. 76-80

54. Чулкина В.А. Корневые гнили хлебных злаков в Сибири. Новосибирск: Наука. 1985. 189 с.

55. Шаповалова Р.А. Электрофоретический анализ белков различных по специализации форм Fusarium oxysporum Schlecht // Узбекский биол. журн. 1979. N1.1. С. 7-9

56. Шипилова И.П.,Семенов А.Я. и др. Распространенность и вредоносность грибов рода Fusarium на зерновых культурах // Бюлл. ВНИИ защ. раст. 1985. N59. С.30.35

57. Яблоков А.В. Состояние исследований и некоторые проблемы фенетики популяций. М.: Наука. 1982. С. 3-14

58. Armstrong G.M., Armstrong J.К. Formae speciales and races of Fusarium oxysporum causing wilt disease. Fusarium: Disease,Biology and Taxonomy. Ed.Nelson P.E.,Toussoun T.A. Pennsylvania State Univ. Press. Univ. Park. P. 391-399

59. Booth C. The genus Fusarium. Commonwealth Mycological institute. Kew.Surrey. England. 237 p.

60. Bosland Paul W., Williams P.H. An evaluation of Fusarium oxysporum from crucifers based on pathogenicity, isozyme polymorphism, vegetative compatibility and geographic origin //Can. J. Bot. 1987. Y.65, N10. P. 2067-2073

61. Bowden R.L., Leslie J.F. Vegetative compatibility groups in Fusarium graminiarum from wheat head scab. // Phytopath. 1991. V. 81, N10. P. 1168

62. Buezacki S.T., Maxham S.E. A texhnigue to aid the study of soil moisture influences on root pathogens // Transactions of the British Mycological Society. 1982. V. 79, N1. P. 180-182

63. Buxton E.W. Heterokaryosis and variability in Fusarium oxysporum f. sp. gladioli // J. Gen. Microbiol. 1954. V.10, N1. P. 71-84

64. Buxton E.W. Parasexual recombination in the Banana Wilt fusarium // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1962. V.45, N2. P.274-279

65. Cook R.J. Fusarium disease of wheat and other small grains in North America. Fusarium: Disease, Biology and Taxonomy. Ed. Nelson P.E., Toussoun T.A. Pennsylvania State Univ. Press. Univ. Park. P. 33-52

66. Correll J.C. Differetial gruth response of Fusarium oxysporum and Fusarium solani on a medium containg potassium chlorate // Phytopath. 1986. V. 76, N10. P. 1145

67. Correll J.C. The relationship between formae speciales, races and vegetative compatibility groups in Fusarium oxysporum // Phytopath. 1991. V. 81, N9. H. 1061-1064

68. Correll J.C., Leslie J.F., Klittich C.J.R. Observations of the heritability of heterokaryon "self incompatibility" in Gibberella fujikuroi ( Fusarium moniliforme) // Phytopath. 1987. V. 76. P. 386-400

69. Correll J.C.,Klittich C.J.R.,Leslie J.F. Nitrate nontilizing mutants of Fusarium oxysporum and their use in vegetative compatibility tests// Phytopath. 1987. V. 77, N12. P. 1640-1646

70. Correll J.C.,Klittich C.J.R.,Leslie J.F. Heterokaryon self-incompatibility in Gibberella fujikuroi (Fusarium moniliforme) // Mycol. Research. 1989. V. 93, N1. P. 21-27

71. Correll J.C., Puhalla J.E.,Schneider R.W.,Kraft J.M. Differentiating rases of Fusarium oxysporum f. sp. pisi based on vegetative compatibility // Phytopath. 1985. N75. P.1347

72. Correll J.C.,Puhalla J.E.,Schneider R.W. Identification of Fusarium oxysporum f.sp.apii on the basis of colony size, virulence and vegetative compatibility // Phytopath. 1986. N76. P. 396- 400

73. Cove D.J. Chlorate toxicity in Aspergillus nidulans: The selection and characterization of chlorate resistant mutants // Heredity. 1976a. N36. P. 191-203

74. Cove D.J. Chlorate toxicity in Aspergillus nidulans: Studies of mutants altered in nitrate assimilation // Mol. Gen. Genet. 1976b. N146. P. 147-159

75. Chand Т.,Logan С. Cultural and pathogenie variation in potato isolates of Rhizoctonia solani in northern Ireland // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1983. V. 81, N3. P. 585589

76. Clare B.G., Flentje N.T., Atkinson M.R. Electrophoritic patterns of oxidoreductiases and other proteins as criteria in fungal taxonomy // Australian J. Sci. 1968. N21. P. 275-295

77. Colhoum Y. Control of Fusarium diseases of cereals // Ann. fenn. 1972. V. 11, N5. P. 292-297

78. Cook R.J. Fusarium root and foot rot of cereals in the Pacific Northwest // Phytopath. 1968. V. 58, N2. P. 127-131

79. Day P.R. Genetics of host-parasite interaction. San Francisco ect.: W.H.Freeman and Co. 1974. 238 p.

80. Devis B.J. Disc electrophoresis. II. Method and application to humon serum proteins // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1964. V. 121, P. 404-427

81. Draganic M. Proulavanje fusariozne trulenzi korena i stabla к kukurusa na teritoriji SR Srbije // Arh. poljopr. nauke. 1978. V. 31, N16. P. 53-56

82. Drysdale R.B.,Brott P.M. Electrophoretic patterns of enzymes from isolates of Fusarium graminiarum // Trans, of the Brit. Mycol. Soc. 1971. N57. P. 172-175

83. Dunn-Coleman N.S.,Smarrelli J.Jr. and Garrett R.H. Nitrate assimilation in eukaryotic cells // Int. Rev. Cytol. 1984. V. 92. P. 1-50

84. Elmer W.H. Vegetative compatibility Groups of Fusarium proliferatum from Asparagus and comparisons of Virulence Growth Rates and Colonization of Asparagus Residues Among Groups // Phytopath. 1991. V. 81, N8. P. 852-857

85. Elmer W.H. and Stephens C.T. Classification of Fusarium oxysporum f.sp.asparagi into Vegetatively Compatible Groups // Phytopath. 1989. V. 79, N1. P. 88-93

86. Elias K.S.,Schneider R.W. Vegetative compatibility groups ( heterokaryons) in Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici // Phytopath. 1991. V. 79. P. 88-93

87. Fatemi J., Nelson R. Intra-isolate heterokaryosis in Pyricularia oryzae // Phytopath. 1977. V. 67, N12. P. 1523-1525

88. Fincham J.R.S., Day P.R. Fungal genetics. 3rd ed. Oxford etc.: Blackwell. 1971.300 p.

89. Garraway M.O., Evans K.C. Fungal nutrition and physiology. New York: John Wiley & Sons. 401 p.

90. Gerdemann J.W., Finley A.M. The pathogenicity of races 1 and races 2 of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici // Phytopath. 1951. V. 41. P. 238-244

91. Gordon T.R. Relationships among pathogenic and nonpathogenic strains in a local population of Fusarium oxysporum // Phytopath. 1991. V. 81, N11. P. 1168

92. Gordon T.R.,Correll J.C.,McCain A.H. Host specificity and vegetative compatibility in Verticillium albo-atrum // Phytopath. 1986. V. 76. P. 1111

93. Gordon T.R., Okamoto D. Vegetative compatibility groupings in a local population of Fusarium oxysporum // Can. J. Bot. 1991. V. 69. P. 168-172

94. Groth J.V., Roelfs A.P. Effect of sexual and asexual reproduction on race abundance in cereal rust fungus populations // Phytopath. 1982. V. 72, N11. P. 1503-1507

95. Hall R. Proteins and catalase isoenzymes from Fusarium solani and theiz taxonomic significance // Australian J. Biol. Sci. 1967. N206. P. 419-428

96. Hart L.P. and Endo R.M. The effect of time of exposure to inoculum plant age, root development and root wounding on Fusarium yellows of celery // Phytopath. 1981. V. 71. P. 77-79

97. Jannelli D., Capparelli R., Cristinzio G., Marziano F., Scala F. and Noviello C. Serological differentiation among formae speciales and physiological races of Fusarium oxysporum // Mycologia. V. 74. P. 313-319

98. Joffe A.Z. A modern system of Fusarium taxonomy // Mycopathol. Mycol. Appl. V. 53. P. 201-228

99. Jacobson P.J., Gordon T.R. Vegetative compatibility and self-incompatibility within Fusarium oxysporum f. sp. melonis // Phytopath. 1988. V. 78, N6. P. 668-672

100. Jacobson D.J. and Gordon T.R. Fusarium oxysporum f. sp.melonis: A case study of diversity within a forma specialis //Phytopath. 1991. V. 81, N9. P. 1064-1067

101. Jacobson D.J., Gordon Т.К. The variability of mitochondrial DNA as anindicator of relationships between populations of Fusarium oxysporum f. sp. melonis // Mycol. Res. 1990. V. 94. P. 734-744

102. Katan Т., Katan J. Vegetative compatibility grouping of Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum from tissue and the Rhixophere of cotton plant // Phytopath. 1988. V. 78, N6. P. 852-855

103. Katan T. Symtomless carriers of the tomato Fusarium wilt pathogen // Phytopath. 1971. V. 61. S. 1213-1217

104. Katan Т., Zamir D., Sarfatti M., Katan J. Vegetative compatibility groups andsubgroups in Fusarium oxysporum f.sp.redicis-lycopersici // Phytopath. 1991. V. 81, N3. P. 255-261

105. Killebrew F., Roy K., Lawrenc G., McLean K. Occurrence and pathogenicity of Fusarium solani on soybean seedlings // Phytopath. 1987. V. 77, N12. P. 1702

106. Klitich C.J.R., Leslie J.F., Wilson J.D. Spontaneous chlorate-resistant mutantsof Gibberella fujikuroi (Fusarium moniliforme) // Phytopath. 1986. V. 76. P. 1142

107. Kraft J.M., Haglund W.A. A reappraisal of race classification of Fusarium oxysporum f. sp. pisi // Phytopath. 1978. V. 68. P. 149-152

108. LaMondia J.A., Elmer W.H. Pathogenicity and vegetative compatibility among isolates of Fusarium oxysporum and Fusarium moniliforme colonizing Asparagus tissues // Can. J. Botany. 1989. V. 67. P. 2420-2424

109. Larkin R.P., Hopkins D.L., Martin F.N. Vegetative compatibility within Fusarium oxysporum f. sp. niveum and its relationship to virulence, aggressiveness, and race // Can. J. Microbiol. 1990. V. 36. P. 352-358

110. Latunde-Dada A.O., Lucas J.A. Influence of temperature on host resistance and fungal sessitivity to medicarpin in lucerne callus lines infected with Verticillium albo-atrum // Physiol. Molec. Plant. Pathol. 1986. V. 28, N1. P. 89-97

111. Leong S.A., Holden D.W. Molecular genetics of pathogenesis // Annu. Rev. Phytopath. 1989. V. 27. P. 462-481

112. Leslie J.F. Mating populations in Gibberella fujikuroi (Fusarium section Liseola) // Phytopath. 1991. V. 81. P. 1058-1060

113. Lewis C.M., Funcham J.K.S. Regulation of nitrate reductase in the Basidiomycete Ustilago maydis // J. Bacteriol. 1970. V. 103. P. 55-61

114. Manicom B.Q., Bar-Joseph M., Kotze J.M. and Becker M.M. A restriction fragment length polymorphism probe relating vegetative compatibility groups and pathogenicity in Fusarium oxysporum f .sp. dianthi // Phytopath. 1990. V. 80. P. 336-339

115. Marzluf G.A. Regulation of nitrogen metabolism and gene expression in fungi // Microbiol. Rev. 1981. V. 45. P. 437-461

116. Menzies J.G., Koch C., Seywerd F. Additions to the host range of Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici // Plant Dis. 1990. V.7 4. P, 569-572

117. Meyer J.A., Renard J.L. Protein and esterase patterns of two formal species of Fusarium oxysporum // Phytopath. 1969. V. 59. P. 1409-1411

118. Nei M. Genetic distance between populations // Amer.Naturalist. 1972. V. 106. P. 283-291

119. Nelson P.E. Life cycle and epidemiology of Fusarium oxysporum // Fungal wilt disease of plants / Мосе M.E., Bell A. A., Beekman C.H. New York: Academic Press. 1981a. P. 51-80

120. Nelson P.E., Toussoun T.A., Cook R.J. Fusarium: diseases, biology and taxonomy / University Park: Pennsylvania State University Press. 1981b. 457 p.

121. Nelson P.E. History of Fusarium systematics // Phytopath. 1991. V.81, N9. P. 1045-1048

122. Oard J.H., Simons M.D. A growth chamber comparison of traits of aggressiveness in sexual and asexual populations of Puccinia coronata // Phytopath. 1983. V. 73. P. 1226-1229

123. Papa K.E. Heterokarion incompatibility in Aspergillus flavus // Mycologia. 1978. N1. P. 98-100

124. Patridge J.E., Nelson P.E. Toussoun T.A. Ribosomal proteins of the genus Fusarium // Mycologia. 1984. N.76. P. 533-544

125. Ploetz R.C. Variability of Fusarium oxysporum f.sp.cubense // Can. J. Botany. 1990. V. 68. P. 1357-1363

126. Ploetz R.C., Correll J.C. Vegetative compatibility among races of Fusarium oxysporum f.sp.cubense // Plant Dis. 1988. V. 63. P. 179-183

127. Pope D.D. Genetic diversity in Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici using restriction fragment length polymorphism // Phytopath. 1990. V. 80. P. 966

128. Puhalla J.E. Classification of strains of Fusarium oxysporum on basis of vegetative compatibility // Can. J. Botany. 1985a V. 63. P. 179-183

129. Puhalla J.E., Spieth Ph.T. A comparision of heterocaryosis and vegetative compatibility among varietes of Gibberella fujikuroi (Fusarium moniliforme) // Exp. Mycol. 1985b. V. 9. N1. P. 32-47

130. Purss J.S. Pathogenic specialization in Fusarium graminiarum // Australian J. Agric. Res. 1971. V. 22, N4. P. 553561

131. Sidhu G.S., Webster S.M. A study of heterokaryosis and its iffluence on virulence in Fusarium oxysporum lycopersici // Can. J. Bot. 1979. V.57, N5. P. 548-555

132. Snyder W.C. and Hansen H.W. The species concept in Fusarium // Am. J. Bot. 1940. V. 27. P. 39-47

133. Snyder W.C.,Hansen H.W. The species concept in Fusarium with reference to Discolor and other sections // Am. J. Bot. 1945. N32. P. 657-666

134. Summerell L.W., Burgess, Klein T.A., Pattison A.B. Stubble Manogement and the Site of Penetration of Wheat by Fusarium graminiarum Group 1 // Phytopath. 1990. V. 80, N9. P. 877-879

135. Sutton J.C. Epidemiology of wheat head bligh and maize ear rot eaused by Fusarium graminiarum // Can. J. Plant Pathol. 1982. V. 4, N2. P. 195-205

136. Tantaoni A., Boisson C. Compatibilite vegetative d'olates du Fusarium oxysporum f.sp.albedinis et de Fusarium oxysporum de la rhisosphere du Palmier dattisr et des sols de palmeraies // Phytopath. 1991. V. 30, N3. P. 155-163

137. Toth K.F., Lacy M.L. Comparing vegetative compatibility and protein banding patterns for identification of Fusarium oxysporum f. sp. apii race 2 // Can. J. Microbiol. 1991. V. 37, N9. P. 669-674

138. Waggoner P.E., Norvell W.A., Royle D.J. The law of the minimum and therelation between pathogen, weather and disease // Phytopath. 1980. V. 70. P. 59-64

139. Whittaker A. Ammo acid transport in fungi: An essay // Trans. Br. Mycol. Soc. 1976. Y.67. P. 365-376

140. Williams P.H. Fusarium yellows. Screening Crucifers for multiple disease resistance: Univ.of Wisconsin, Madison. 1981. P. 124-129

141. Windels C.E. Current status of Fusarium taxonomy // Phytopath. 1991. V. 81, N9. P. 1048-1051

142. Wollenveber H.W., Reinking O.A. Die Fusarium ( Ihre Beschreibung, Schadwikung und Bekampfung). Berlin: Paul Parey. 1935. 355 S.

143. Woloshuk C.P., Wolkow P.M., Sisler H.D. The effect of three fungicides specific for the control of rice blast disease on the growth and melanin biosynthesis by Pyrieularia oryzae Cav. // Pestic. Sci. 1961. N12. P. 86-90

144. J j. СХ 'J С.' -t «■ ^ 1 -'Х-'-л.-- — - • - -А •