Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Усовершенствование метода диагностики нозематоза медоносных пчел

ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Усовершенствование метода диагностики нозематоза медоносных пчел"

На правах рукописи

ЧЕРНЫШЕВ АЛЕКСЕЙ АНАТОЛЬЕВИЧ

Усовершенствование метода диагностики нозематоза медоносных пчел

06.02.05 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

з О Д5Г Ш1

Москва — 2012

005046747

Работа выполнена в лаборатории ветеринарной санитарии в пчеловодстве ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Российской академии сельскохозяйственных наук Научный кандидат биологических наук, доцент

руководитель: Сохликов Алексей Борисович,

(ГНУ ВНИИВСГЭ) Официальные доктор биологических наук, профессор

оппоненты: Павлова Инна Борисовна,

ГНУ ВНИИВСГЭ, ведущий научный сотрудник лаборатории санитарной микробиологии доктор биологических наук Бондаренко Владимир Олегович, ФГБУ «ВГНКИ», ведущий научный сотрудник отдела качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская Государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина (ФГОУ ВПО МГАВМиБ)

Защита состоится « 03 » октября 2012 г. в 11:00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.008.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» по адресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, дом 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «_» _2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, ____

кандидат биологических наук С Крутько Н.С.

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы

В настоящее время во многих странах мира отмечено нарастание массовой гибели пчелиных семей неустановленной этиологии. Так называемый молниеносный коллапс (синдром массовой гибели пчел) многие авторы связывают с инфекцией медоносных пчел, вызываемой микроспоридией Nosema ceranae (Fries I., Martin R., Higes M. 2006; Garcia P., Martinndez R., 2007; Meana A., 2007; Hornitzky M., 2008; Chen Y„ Pettis J. 2008). Этот вид ноземы был впервые выделен в 1996 г (I. Fries et al.,) из горных китайских пчел Apis cerana. Заболевание нозематозом медоносных пчел, вызываемое микроспоридией Nosema apis (Zander, 1909) хорошо изучено и описано в литературе (Fries 1., Fen F., 1996; Meloun L., Geythaus H., 2001; Hatjina F., Haristis L., 2005).

Видовая идентификация возбудителей нозематоза затруднена, так как морфологические различия Nozema apis и Nosema ceranae незначительны и не могут быть установлены традиционными методами исследования. С этой целью применяют специальные методы: электронную микроскопию и молекулярно-генетические методы, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР) (Blanchard P., Ribieri M., Celle О., 2007; Hornitzky M., 2008; Giersch T., Galey F., 2009). В последние годы нозематоз широко распространяется по всей территории России и наносит значительный экономический ущерб пчеловодству. Это вызывает необходимость разработки мер по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

Цель и задачи исследований

Цель работы разработать метод видовой идентификации возбудителей нозематозной инфекции, а также определить меры по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по нозематозу пчел на пасеках Московской области в период 2009 - 2011 гг.

2. Разработать метод видовой идентификации возбудителей нозематоза пчел с использованием полимеразной цепной реакции.

3. Изучить влияние микроспоридии Nosema сегапае на жизнедеятельность и продуктивность семей пчел.

4. Разработать меры по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

Научная новизна исследований

Определена эпизоотическая ситуация по нозематозу пчел на пасеках Московской области в период 2009 - 2011 гг.

Методом ПЦР «в реальном времени» идентифицирован возбудитель Nosema сегапае в семьях пчел, пораженных нозематозом.

Установлено влияние Nosema сегапае на жизнедеятельность и продуктивность пчелиных семей.

Разработан метод лазерной интерференционной микроскопии для контроля качества дезинфекции при нозематозе пчел, который позволяет выявить морфометрические различия (фазовая толщина и диаметр) живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema.

Разработаны меры по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований разработаны:

1. «Методические рекомендации по определению жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционной микроскопии» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 15.06.2009 г), п.п. 3, 4;

2. «Методическое пособие по идентификации возбудителей нозематоза медоносных пчел методом ПЦР «в реальном времени» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 09.11.2011 г), п.п. 2,4;

3. «Методическое пособие о мерах по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках» (рассмотрено и одобрено на секции «Патология пчел, рыб и охрана полезных гидробионтов» отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол №2 от 26.04.2012 г), п.п. 3, 4.

Апробация работы

Материалы исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены: на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ в 2009 - 2011 гг.; на 2-ой Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов «Инновационные процессы в АПК», посвященной 50-летию образования РУДН (Москва, 2010 г.); на секции «Патология пчел, рыб и охрана полезных гидробионтов» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Москва, 2011, 2012 гг.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, 4 из них в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Положения выносимые на защиту:

1. Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу пчел на пасеках Московской области в период 2009 - 2011 гг.

2. Разработка метода полимеразной цепной реакции для видовой идентификации возбудителей нозематоза пчел.

3. Изучение влияния микроспоридии Nosema сегапае на жизнедеятельность и продуктивность семей пчел.

4. Меры по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

Объем и структура работы

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложения. Материал изложен на 106 страницах машинописного текста, включая 7 таблиц, 11 рисунков. Список литературы содержит 351 источник отечественных и зарубежных авторов.

2. Материалы и методы исследований

Экспериментальную часть исследований проводили в период 2009 - 2011 гг. в лаборатории ветеринарной санитарии в пчеловодстве, на экспериментальной пасеке ГНУ ВНИИВСГЭ, а также на пасеках Московской области.

Исследования проводили согласно принятым документам:

- Основные методические требования к постановке экспериментов в пчеловодстве (М., ВАСХНИЛ, 1971 г.);

- Методические указания по диагностике нозематоза медоносных пчел. (Утв. ГУВ МСХ СССР от 25.04.1985 г.);

- Инструкция по дезинфекции, дезакаризации, дезинсекции и дератизации на пасеках. (Утв. ГУВ МСХ СССР от 25.06.1982 г.);

- Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации болезней, отравлений и основных вредителей пчел. (Утв. Департаментом ветеринарии РФ 17.08.1998 г.).

Препараты их живых пчел готовили по методике В.И. Полтева (1936).

Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на территории Московской области в период 2009 - 2011 гг. проводили на пасеках членов Московского общества пчеловодов-любителей, где была зарегистрирована гибель пчелиных семей.

Мертвых пчел (подмор) по 50 - 100 шт. от каждой пчелиной семьи в лаборатории помещали на фильтровальную бумагу, просматривали каждую пчелу с помощью лупы, отмечали наличие клещей Varroa destructor или других паразитов. Затем проводили диагностику на наличие микроспоридий рода Nosema. Всего исследовано 200 проб.

Для видовой идентификации спор микроспоридий рода Nosema разработан метод ПЦР «в реальном времени».

В качестве стимулятора повышения репродуктивной активности пчелиных маток использовали препарат апистим (изготовитель: ООО «Аписфера 2000», Москва), в качестве контроля - цветочную пыльцу.

Степень поражения пчелиных семей спорами микроспоридий рода Nosema определяли после выставки семей пчел из зимовника, затем формировали опытные и контрольные группы семей пчел. При этом учитывали: породу пчел, возраст пчелиных маток, силу пчелиных семей в улочках, кормообеспеченность, количество открытого и печатного расплода, степень поражения семей нозематозом. Идентификацию двух видов возбудителей нозематоза не проводили.

При определении влияния стимулирующих подкормок на развитие нозематоза в семьях учитывали:

- среднее число спор микроспоридий рода Nosema в пробах пчел (интенсивность инфекции), млн.;

- количество пчел, пораженных микроспоридией рода Nosema (экстенсивность инфекции), %.

После проведения стимулирующих подкормок отмечали репродуктивную активность пчелиных маток, общее состояние семей пчел и их работоспособность.

Изучение выживаемости возбудителя нозематоза пчел и разработку режимов дезинфекции объектов пчеловодства проводили в соответствии с методиками по дезинфекции и санитарии в пчеловодстве.

В качестве дезинфицирующих средств использовали: уксусную кислоту (80%-ной концентрации) и 6%-ный раствор пероксида водорода с добавлением 0,5% уксусной кислоты.

В связи с тем что микроспоридий рода Nosema не культивируются на питательных средах, качество дезинфекции контролировали методом проведения биопробы и согласно Методическим рекомендациям по определению жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционной микроскопии. (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 15 июня 2009 г.).

3. Результаты собственных исследований

3.1. Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области в период 2009 - 2011 гг.

Результаты изучения эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты исследования проб пчел от погибших семей за период 2009-2011 гг.

Место отбора проб Обследованно семей пчел, шт Выявлены возбудители

Всего Выявлено погибших Взято проб nosema nosema + varroa varroa Невыясненная этиология

Можайский район 210 27 27 6 10 7 4

Одинцовский район 300 30 30 6 12 8 4

Бапашихинский ^айон 160 12 12 3 4 3 2

Раменский район 150 15 15 4 5 3 3

Ногинский район 240 29 29 6 10 9 4

Орехово-Зуевский 110 10 10 2 4 2 2

Коломенский 170 30 30 8 11 8 3

Московская область 1340 153 153 35 56 40 22

Как видно из представленных данных, при обследовании 1340 пчелиных семей из 7 районов Московской области в период 2009-2011 гг. погибло 153 семьи пчел. Из проб пчел от погибших семей выделили микроспоридии рода Nosema в 22,9% и микроспоридии рода Nosema совместно с клещом Varroa destructor в 36,6% случаев.

3.2. Разработка метода полимеразной цепной реакции для видовой идентификации возбудителей нозематоза пчел

Для видовой идентификации спор микроспоридий рода Nosema разработан метод ПЦР «в реальном времени» (ПЦР-РВ), который по сравнению с традиционным методом ПЦР имеет ряд преимуществ: меньше стадий исследований (нет электрофореза); быстрый анализ (результат виден до окончания анализа); более чувствительный и специфический анализ; возможность количественного и качественного определения ДНК возбудителя в биологическом материале.

Наиболее ответственный этап при постановке реакции ПЦР «в реальном времени» - синтез праймера. Необходимая информация о последовательности нуклеотидов у микроспоридий Nosema apis и Nosema сегапае получена из международных банков данных (GenBank, EMBL) через сеть Интернет. Специфические участки нуклеотидной цепочки (праймер) для Nosema сегапае и Nosema apis представлен в таблице 2.

Таблица 2

Последовательность нуклеотидов в праймерах для микроспоридий рода Nosema

Вид Последовательность праймера (5' - 3') Величина продукта ПЦР-РВ (bp) Расположение на геноме

Nosema apis GenBank: U97150 Forward: 5'-GCCCTCCATAATAAGAGTGTCCAC- У Reverse: 5'ATCTCTCATCCCAAGAGCATTGC- 3' Probe: 5 'ACTT ACC ATGCC AG CAG CC AG AAG A- 3' 142 4364 - 4387

Nosema сегапае GenBank: DQ486027 Forward: 5'AAGAGTGAGACCTATCAGCTAGTTG- 3' Reverse: 5'CCGTCTCTCAGGCTCCTTCTC- 3' Probe: 5'ACCGTTACCCGTCACAGCCTTGTT- 3' 104 218-242

На экспериментальной пасеке ВНИИВСГЭ, используя обычную световую микроскопию, было выявлено 4 семьи пчел, пораженных нозематозом, и сформирована опытная группа. В качестве контроля использовали пчел от здоровых семей. От опытных и контрольных семей были отобрано по 50 живых пчел, из средней кишки которых выделяли ДНК.

Результаты учитывали по анализу кривых накопления ДНК в ходе проведения ПЦР-РВ. На рисунках 1, 2, 3 представлены графики накопления ДНК и электрофореграммы продуктов ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema apis и Nosema сегапае.

Nosemaapis

1 2 3 4 5

а

График накопления ДНК Nosema apis для различных концентраций методом ПЦР-РВ.

Nosema cerana

б

Электрофореграмма продуктов ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema apis.

в

График накопления ДНК Nosema ceranae для различных концентраций методом ПЦР-РВ.

Г

Электрофореграмма продуктов ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema ceranae.

Nosema apis 1 2 3 4 5

График накопления ДНК Nosema Электрофореграмма продуктов apis для различных концентраций ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema методом ПЦР-РВ. apis.

1 2 3 4 5

Nosema ceranae

в

График накопления ДНК Nosema ceranae для различных концентраций методом ПЦР-РВ

г

Электрофореграмма продуктов ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema ceranae.

Nosema apis

a

График накопления ДНК Nosema apis для различных концентраций методом ПЦР-РВ

б

Электрофореграмма продуктов ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema apis.

Nosema ceranae 1 2 3 4 5

График накопления ДНК Электрофореграмма продуктов

Nosema ceranae для различных ПЦР-РВ геномной ДНК Nosema концентраций методом ПЦР-РВ ceranae.

При анализе содержания геномной ДНК двух возбудителей нозематоза пчел методом ПЦР «в реальном времени» установили, что содержание ДНК Nosema ceranae в средней кишке пораженных нозематозом пчел существенно выше, чем содержание ДНК Nosema apis. Визуально это видно по выходу ПЦР-продукта (ампликона) (рис. 1, б, г; 2, б, г; 3, б, г), а так же по кривым ПЦР «в

реальном времени» (рис. 1, а, в; 2, а, в; 3, а, в). О высоком содержании генома Nosema сегапае свидетельствуют и незначительные изменения концентрации ампликона в экспериментах с разведением ДНК-матрицы. При разведении в 104 раз выход ампликона практически не меняется при визуальном анализе в геле при проведении электрофореза.

3.3. Влияние микроспоридии Nosema сегапае на жизнедеятельность и продуктивность семей пчел

В результате исследований по выделению ДНК у пораженных нозематозом пчел с применением ПЦР «в реальном времени» было установлено, что основным возбудителем нозематозной инфекции на экспериментальной пасеке ВНИИВСГЭ является микроспоридия вида Nosema сегапае.

В течение пчеловодческого сезона в опытных и контрольных семьях пчел выполняли все необходимые пасечные работы, при этом лекарственные средства, стимуляторы развития не применяли. Результаты наблюдения представлены в таблице 3.

Таблица 3

Состояние семей пчел пораженных Nosema сегапае

Группы семей Весенний период (апрель - май) Летнее-осенний период (август -сентябрь)

пчел Число Сила Количество Число Сила Количество

рамок, шт семьи, число улочек меда, кг рамок, шт семьи, число улочек меда, кг

Опытная 5+1 3+0,5 4,3+0,5 8+1* 5,7+0,5* 12,1+1,2*

Контрольная 6+1 4+0,5 5+0,8 11+1* 9+0,5* 18+1,5**

Примечание: * Р > 0,95; ** Р > 0,99

Как видно из данных, приведенных в таблице, сила семей опытной группы пчел была на 36,6%, а количество собранного ими меда на 32,8% меньше, чем в контроле. При этом массовой гибели и слета пчел не отмечено.

3.4. Разработка мер по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках

Нами было изучено влияние препарата апистим на развитие нозематозной инфекции в семьях пчел и определена жизнеспособность спор микроспоридий рода Nosema после проведения дезинфекции.

3.4.1. Изучение влияния препарата апистим на развитие нозематозной инфекции в семьях пчел.

Важным профилактическим мероприятием при нозематозе является интенсивное наращивание числа молодых пчел в весенний период, так как для них характерна естественная устойчивость к заражению нозематозом.

Проведен поиск стимуляторов репродуктивной активности пчелиных маток, не содержащих веществ белковой природы, так как белок является стимулятором развития микроспоридий рода Nosema.

С этой целью применяли препарат апистим, содержащий сбалансированный комплекс солей микроэлементов: калия, магния и кобальта, в качестве контроля использовали цветочную пыльцу. Результаты, полученные в ходе исследований, представлены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4

Развитие нозематозной инфекции в семьях пчел

Группы семей пчел Среднее число спор ноземы в пробах пчел, млн Количество пчел, зараженных спорами ноземы, %

До опыта После опыта До опыта После опыта

1 (пыльца) 4,8 ± 0,5 15,6 + 1,1* 27 + 5 83 ±5*

2 (апистим) 5 ±0,8 8,2 ±0,8* 30 ±6 42 ±6*

3(контроль) 5,2 ± 0,6 12, 7 ±1,2** 25 ±4 67 + 4*

Примечание: * Р > 0,95; ** Р > 0,99

Полученные результаты свидетельствуют, что подкормка, пораженных нозематозом семей пчел, сахарным сиропом с препаратом апистим приводила к снижению степени поражения пчел нозематозом на 37% и к уменьшению количества спор в пробах пчел на 35,4%, тогда как подкормки с пыльцой увеличивали степень поражения пчел нозематозом на 24% и количество спор ноземы в пробах возрастало на 22,8% по сравнению с контролем.

Группы семей пчел Пе риод после обработки, сут.

12 14 16 18 21

1 (пыльца) 5,8 + 0,8 9,8 ± 1,3 15,7 + 1,5 20,6+1,2 25,4+1,2**

2 (апистим) 6,7+ 1,2* 11,2+1,1 16,8+1,3 23,4+1,5 28,5+1,1*

3 (контроль) 4,2 + 0,5 8,7 ± 0,7 14,3 + 0,9 18,2+1,1 21,7+1*

Примечание: * Р > 0,95; ** Р > 0,99

Данные, представленные в таблице, свидетельствуют, что количество печатного расплода возросло после применения подкормок с препаратом апистим на 31,3% и с пыльцой на 17% по сравнению с контролем.

В результате проведенных исследований было установлено, что препарат апистим увеличивает репродуктивную активность пчелиных маток, уменьшает степень поражения пчел нозематозом и может быть рекомендован для профилактики нозематоза пчел.

3.4.2. Проведение дезинфекции при нозематозе пчел В качестве дезинфицирующих средств при дезинфекции соторамок, инфицированных спорами микроспоридий рода Nosema, использовали уксусную кислоту (80%-ной концентрации) и 6%-ный раствор пероксида водорода с добавлением 0,5% уксусной кислоты, а в качестве контроля - воду.

Результаты опытов по проведению дезинфекции при нозематозе пчел представлены в таблице 6 .

Таблица 6

Результаты опытов по дезинфекции сотов при нозематозе пчел

Средство дезинфекции Концентрация, % Экспозиция, ч Расход л/мЗ, г Число тестов Обеззаражено Необезза-ражено

Уксусная кислота 80 96 2,0 10 10 -

Пероксид водорода, + 6 6 0,5 10 10 _

уксусная кислота 0,5

Вода (контроль) - 6 0,5 10 - 10

Из данных, представленных в таблице, видно, что пары 80%-ной уксусной кислоты и 6%-ный раствор пероксида водорода с добавлением 0,5%

уксусной кислоты в указанных режимах оказывают обеззараживающее действие при дезинфекции соторамок, инфицированных спорами микроспоридий рода Nosema.

3.4.3. Определение жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema после проведения дезинфекции методом лазерной интерференционной микроскопии.

Впервые методы интерференционной микроскопии для диагностики функционального состояния биологических объектов были применены В.П. Тычинским (1983 г).

Определение жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционнй микроскопии проводили совместно с ООО «Лаборатории Амфора» (г. Москва). Суть данного метода заключается в установлении фазовых портретов живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema.

Для этой цели живые споры микроспоридий рода Nosema выделяли из средней кишки зараженных нозематозом пчел. Суспензию с живыми спорами наносили на поверхности тест-объектов, которые подвергали дезинфекции: парами уксусной кислоты 80%-ной концентрации (экспозиция 4 сут); 10%-ным раствором пероксида водорода (экспозиция 3 ч); текучим паром при температуре около 100°С (экспозиция 30 мин). Гибель спор микроспоридий рода Nosema устанавливали методом биопробы. Исследование живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema проводили на Модуляционном интерференционном микроскопе МИМ 2.1 производства ООО «Лаборатории Амфора». Для достоверной статистической оценки выборка составила 35-40 спор.

Было установлено, что наиболее значимыми параметрами при изучении морфометрических признаков живых и погибших спор являются их фазовая толщина и диаметр. На рисунке 4 приведены гистограммы распределения фазовой толщины спор микроспоридий рода Nosema.

Фазова» толщина, им

На гистограмме видно, что фазовая толщина живых спор составила 100 -200 нм с максимумом в районе 128 нм, т.е. большинство (около 50%) спор в данной популяции имело фазовую толщину 122 - 132 нм. Под воздействием дезинфектантов и высокой температуры фазовая толщина спор резко снижалась до 40-150 нм с максимумом в районе 100 нм.

Изменения, вызванные внешними факторами, выразились и в изменении поперечного диаметра споры (продольный диаметр споры искажается в зависимости от ее ориентации в пространстве). На рисунке 5 приведены гистограммы распределения диаметров живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema.

Диаметр, мкм

Из гистограммы видно, что диаметр живых спор составлял 2,5 - 3,5 мкм с максимумом в районе 2,5 мкм. Под воздействием дезинфектантов и высокой температуры диаметр спор увеличивался, и максимум гистограммы смещался в область 3 — 4 мкм.

Еще одним важным параметром, отражающим состояние спор, является рефрактерность - средняя по объему разница показателя преломления споры и окружающей ее среды, которую вычисляли как отношение фазовой толщины споры к ее диаметру. На рисунке 6 приведены гистограммы распределения рефрактерности живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema.

0,00 0,02 0,04 0,06 0,08

Рефрактерность

Из гистограммы видно, что средний показатель рефрактерности погибших спор микроспоридий рода Nosema уменьшился на 0,02.

Проведенные исследования показали, что методы лазерной интерференционной микроскопии позволяют объективно оценивать функциональное состояние спор микроспоридий рода Nosema по ряду морфометрических признаков (фазовая толщина и диаметр) и служат объективным критерием оценки качества дезинфекции объектов пчеловодства при нозематозе пчел.

ВЫВОДЫ:

1. Анализ проб пчел от погибших семей на пасеках Московской области за период 2009 - 2011 гг. выявил наличие спор микроспоридий рода Nosema в 59,5% общего числа погибших семей пчел.

2. Для видовой идентификации спор микроспоридий рода Nosema разработан метод ПЦР «в реальном времени», который в сравнении с традиционным методом имеет ряд преимуществ: меньше стадий исследований;

более чувствительный и специфический анализ; возможность количественного и качественного определения ДНК возбудителя в биологическом материале.

3. Методом ПЦР «в реальном времени» идентифицированы возбудители нозематоза пчел на пасеках Московской области и установлено, что микроспоридия вида Nosema сегапае доминирует в генномной ДНК по сравнению с микроспоридией вида Nosema apis.

4. Установлено, что сила семей пчел, пораженных микроспоридией Nosema сегапае, была на 36,6%, а количество собранного ими меда на 32,8% меньше чем в контроле. При этом массовой гибели и слета пчел не отмечено.

5. Установлено, что в семьях пчел, пораженных нозематозом, применение препарата апистим в весенний-летний период повышает репродуктивную активность пчелиной матки на 31,3%, в результате чего снижается степень поражения пчел нозематозом на 37% по сравнению с контролем.

6. Состав, содержащий 6% пероксида водорода с добавлением 0,5 % уксусной кислоты, оказывает обеззараживающее действие при дезинфекции соторамок, инфицированных спорами микроспоридий рода Nosema, и является экологически безопасным.

7. Метод лазерной интерференционной микроскопии для контроля качества дезинфекции при нозематозе пчел позволяет выявить морфометрические различия (фазовая толщина и диаметр) живых и погибших спор микроспоридий рода Nosema.

Предложения для практики

Разработаны и утверждены для использования в научно-исследовательских учреждениях и ветеринарных лабораториях:

1. «Методические рекомендации по определению жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционной микроскопии» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 15.06.2009 г), п.п. 3,4;

2. «Методическое пособие по идентификации возбудителей нозематоза медоносных пчел методом ПЦР «в реальном времени» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 09.11.2011 г), п.п. 2, 4;

3. «Методическое пособие о мерах по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках» (рассмотрено и одобрено на секции «Патология пчел, рыб и охрана полезных гидробионтов» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, протокол №2 от 26.04.2012 г, г. Москва), п.п. 3,4.

Список опубликованных работ

1) Чернышев A.A. Определение жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционной микроскопии. \\ «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». - 2010. - №2(4). -С. 78-82.

2) Сохликов А.Б., Игнатьева Г.И., Чернышев A.A. Метод ПЦР-РВ для идентификации возбудителей нозематоза.\\ Пчеловодство. - 2012. - №1. - С. 24 -25.

3) Сохликов А.Б., Чернышев A.A. Препарат Апистим для профилактики нозематоза пчел. \\ Пчеловодство. - 2011. - №2. - С. 26-28.

4) Сохликов А.Б., Чернышев A.A. Методы профилактики нозематоза пчел. \\ «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». - 2011. -№1(5).-С. 49-53.

5) Чернышев A.A., Сохликов А.Б., Игнатьев П.С. Определение жизнеспособности спор микроспоридий рода Nosema методом лазерной интерференционной микроскопии. \\Инновационные процессы в АПК. Сборник статей 2-й Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 50-летию образования РУДН. - М„ РУДН, 2010, С. 343-346.

Подписано в печать: 09.08.2012

Заказ № 7503 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 wwvv.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чернышев, Алексей Анатольевич

2. Обзор литературы.

2.1. Возбудители заболевания.

2.2. Патогенез.

2.3. Клиническая картина заболевания.

2.4. Методы диагностики.

2.5. Меры борьбы и профилактика заболевания.

3. Материалы и методы исследований.

4. Результаты собственных исследований.

4.1. Изучение эпизоотической ситуации по нозематозу на пасеках Московской области в период 2009-2011 гг.

4.2. Разработка метода полимеразной цепной реакции для видовой идентификации возбудителей нозематоза пчел.

4.3. Влияние микроспоридии Nosema ceranae на жизнедеятельность и продуктивность семей пчел.

4.4. Разработка мер по предупреждению распространения нозематоза пчел на пасеках.

5. Обсуждение результатов исследований.

6. Выводы.

7. Предложения для практики.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Чернышев, Алексей Анатольевич, Москва

1. Аветисян Г.А. Разведение и содержание пчел. Москва : Колос, 1983.

2. Алексеенко Ф.М., Вовк A.M. Изучение эпизоотологии и разработка методов профилактики и терапии нозематоза пчел. Научные труды УНИИЭВ, Киев : Госсельсхозиздат, 1962, т.28.

3. Апостолов X. Кога започват проблемите с нозематозата. Пчеларство, 1992, №1.

4. Баракаускас А. Организация мероприятий по ликвидации нозематоза пчел в Литовской ССР. Тезисы всесоюзного семинара "Современные методы изучения болезней пчел и меры их профилактики." Москва : 1972.

5. Батуев Ю.М., Марченко Е.В., Аветисян Г.А. Болезни пчел весной. Москва : Пчеловодство, 1986, №2.

6. Бейли Л. Патогенез и экология Nosema apis. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

7. Бойко А.К. К методике массовых микроскопических исследований пчел на нозематоз. Пчеловодство, Москва : 1938, №1.

8. Борхет А. Болести по пчелите. Земиздат, 1979.

9. Бэрманн Р. Заболевание пчел и маток нозематозом. Пчеловодство, Москва : 1963, №11.

10. Васькова H.H., Зинатуллина З.Я., Модин O.A. Эффективность эвкалиптового масла при болезнях пчел (Аскофероз,нозематоз,варроатоз). Труды Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной энтомологии и арахнологии 2007.

11. Ван-Ларе. Лечение нозематоза пчел дийодогидрооксихинолиином. XXIII Межд. Конгресс по пчеловодству. Апимондия, Бухарест, 1971.

12. Ван-Ларе. Изучение факторов, влияющих на прорастание спор Nosema apis Zander. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству. Апимондия, Бухарест, 1977.

13. Василиади Г.К. Пчелы: естественная устойчивость к нозематозу. Пчеловодство, Москва : 1991, №11.

14. Вепхвадзе Н.П. Динамика распределения метронидозола в организме животных и саркоме-45. Медицинская радиология, 27(3).

15. Виноградова Т.В., Сахаров М.К. Борьба с нозематозом пчел. Пчеловодство, Москва : 1935, №6.

16. Виноградова Т.В. Химиотерапия и дезинфекция при нозематозе. Труды 27 Пленума ветсекции ВАСХНИЛ. Москва : 1949.

17. Вовк A.M. Оценка противонозематозного действия лекарственных препаратов. Тезисы всесоюзного семинара "Современные методы изучения болезней пчел и меры их профилактики." Москва : 1972.

18. Воякина А.Е., Стройков С.А. Подкормка для пчел. А/с СССР № 733584 от 15.05.1980.

19. Гаврилов Б.Н. Применение уксусной кислоты в борьбе с нозематозом пчел. Пчеловодство, Москва : 1957, №4.

20. Гаврилов Б.Н. Применение фумагиллина и фумидила-Б для лечения нозематозных пчел. Сб.работ Ленингр. вет.ин-та., 1958, №21.

21. Гаврилов Б.Н., Антонов B.C., Грачев Б.Н. Окись этилена убивает споры ноземы. Пчеловодство, Москва : 1968, №7.

22. Гаврилов Б.Н. Газовая дезинфекция сотов при нозематозе. Пчеловодство, Москва : 1972, №1.

23. Гаврилов Б.Н. О влиянии сульфапиридазина на развитие возбудителя нозематоза. Сб. работ Ленингр. вет. ин-та, 1978, №43.

24. Гаврилов Б.Н. Тепловой способ обеззараживания сотов и кормовых запасов в них при нозематозе пчел. Сб. науч. работ Ленингр. вет. ин-та, 1980, №63.

25. Гапонова B.C., Мельник В.Н. Профилактика нозематоза пчел. Ветеринария, Москва : 1975, №9.

26. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Москва : Мир, 2002.

27. Годяцкий С.Я. Лечебно-профилактическое тесто для пчел. Пчеловодство, Москва : 1973, №12.

28. Годяцкий С.Я. Профилактические работы на пасеке. Пчеловодство, Москва : 1974, №1.

29. Голоскоков В.Г., Пименов П.К. Содержание микроэлементов в органах здоровых и больных нозематозом пчел. Труды Ульяненского, с-х ин-та, 1972, т.17, №8.

30. Горелик О.В., Веневцев Д.Ю. Применение фитосбора в борьбе с нозематозом пчел. Технологические проблемы производства продукции животноводчества и растениеводства. Уральская государственная академия ветеринарной медицины 2005.

31. Гробов О.Ф. Споры ноземы в организме насекомых. Пчеловодство, Москва : 1967, №6.

32. Гробов О.Ф. К перспективе использования возрастного коэффициента гемолимфы пчел при изучении их патологии. XXI Межд. Конгресс по пчеловодству. Москва : 1967.

33. Гробов О.Ф. К методике изучения гемолимфоформулы медоносной пчелы. Системы ведения пчеловодства в различных природно-климатических зонах. Москва : 1968.

34. Гробов О.Ф., Соколов В.П., Бондаренко О.И., и др. Опыты по применению фумагиллина-ДЦГ при нозематозе пчел. Труды ВИЭВ, 1970, т.38.

35. Гробов О.Ф., Смирнов A.M., Волковский Г.Д. Эффективность окиси этилена и бромистого метила на споры Nosema apis. Ветеринария, Москва : 1970, №6.

36. Гробов О.Ф. Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел. Ветеринария, Москва : 1971, №8.

37. Гробов О.Ф., Сотников А.Н. Возбудители нозематоза. Пчеловодство, Москва : 2007 № 1

38. Гробов О.Ф. Изучение действия некоторых ноземастатических препаратов Труды ВИЭВ, 1971, т.39.

39. Гробов О.Ф. Исследования в области патологии пчел. Труды ВИЭВ, 1972, т.40.

40. Гробов О.Ф. Роль нозема апис Цандер при вирусном параличе пчел. 24 Межд. конгресс по пчеловодству. Апимондия, Бухарест : 1973.

41. Гробов О.Ф. Особенности борьбы с нозематозом. Пчеловодство, Москва : 1974, №4.

42. Гробов О.Ф. Паразитоценотические взаимоотношения между Nosema apis Zander и некоторыми организмами гнезда apis mellifera L. Апимондия, Бухарест : 1974.

43. Гробов О.Ф., Бондаренко О.И. Изучение влияния Малп. меллифице и нозема апис в организме медоносных пчел. Труды ВИЭВ, 1975, т.43.

44. Гробов О.Ф., Дроздова З.И. Энцефалотозооноз (нозематоз) животных. Москва :1979.

45. Гробов О.Ф., Смирнов A.M., Попов Е.Т. Болезни и вредители медоносных пчел. Москва : Агропромиздат, 1987.

46. Гробов О.Ф. Предупреждение потерь от болезней пчел. Москва : Ветеринария, 1988, №4.

47. Гробов О.Ф., Гузева Л.Н., Родионова З.Э. и др. Опасные болезни и вредители пчел. Москва : Нива России, 1992.

48. Гросс К. Становится ли нозема апис Цандер резистентной к фумидилу-Б? Бухарест : Апимондия, 1969.

49. Гулюкин М.И., Гробов О.Ф., Сотников А.Н. Некоторые малоизученные болезни и вредители пчел. Москва ВИЭВ 2008.

50. Даутов А.Г. Летние и осенние мероприятия по борьбе с нозематозом. Москва : Пчеловодство, 1938, №9.

51. Даутов А.Г. Борьба с нозематозом пчел путем применения комплекса мероприятий. Москва : Пчеловодство, 1939, №2.

52. Даутов А.Г. Опыт борьбы с нозематозом путем осеннего перегона и весенней изоляции пчел. Труды Казанского НИВИ, 1940, т.5.

53. Дебеляк 3. и др. Заразные болезни пчел на территории региона Кралево. Москва : Ветеринарный вестник, 1991, №11.

54. Дреер К. Прибавянето на киселина в зимната храна на пчелите.Пчеларство, 1973, №8.

55. Жданов C.B. Морфологические изменения кишечника пчелы при нозематозе. Труды 27 Пленума ветсекции ВАСХНИЛ, Москва : 1949.

56. Жданов C.B. Профилактика нозематоза пчел. Москва : Ветеринария, 1971, №8.

57. Жеребкин М.В. Пищеварение нозематозных пчел. Москва : Пчеловодство, 1968, №5.

58. Жеребкин М.В., Мартынов А.Г. Влияние сахарной подкормки на состояние пчел. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

59. Жеребкин М.В. Физиологическое состояние пчел при нозематозе. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

60. Жеребкин М.В. О способности экстракта из средней кишки насекомых створаживать казеин молока. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия , Бухарест : 1977.

61. Зинатуллина З.Я., Столбов Н.М. Применение химических препаратов при нозематозе пчел в тепличных хозяйствах. Москва : Пчеловодство, 2006г.

62. Исси И.В., Воронин В.Н. Тип Микроспоридий. Руководство- по зоологии. РАН. Протисты. Часть 2, 994-1045, 2007г.

63. Клочко Р.Т. Лекарственные растения для лечения пчел. Москва : Пчеловодство, 1993, №3.

64. Кожевников Г. Наблюдения над ходом нозематоза на Измайловской опытной пасеке в 1913 году. Москва : Пчеловодство, 1968, №2.

65. Колесникова О.П., Козлов В.А. Изучение действия метронидозола при развитии иммунного ответа мышей на эритроциты барана. Оценка и коррекция сост. иммунной системы в клинике и эксперименте. Новосибирск : 1987.

66. Коломиец А.Ю., Симецкий М.А. Эффективность препаратов в аэрозольных упаковках при нозематозе пчел. Дезинфекция, дезинсекция,дезакаризация и дератизация животноводческих помещений в промышленных комплексах. Москва : 1979.

67. Конарев М.К. Профилактика нозематоза в действии. Москва : Пчеловодство, 1982, №9.

68. Корнехо Л.Г., Росси К., Давила М. Статистическое исследование процесса спорогенеза нозема апис в зависимости от некоторых метеорологических факторов. XXIV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1973.

69. Костецкий Р. Влияние некоторых микроэлементов, витаминов, ноземина и апимиелина на нозематоз и весенние развитие пчел. XXIV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1973.

70. Костецкий Р. Биологические аспекты борьбы с нозематозом. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест: 1977

71. Котова Г.Н. Применение фумидила "В" для лечения нозематоза пчелиных семей. Системы ведения пчеловодства в различных природно-климатических зонах. Москва: 1968.

72. Кирьякова В. А. Материалы по патофизиологии и биологии нозематозных пчел. Труды 27 Пленума ветсекции ВАСХНИЛ, Москва : 1949.

73. Кузнецова Н.Ф. Состояние гипофаренгиальных желез и их инвертирующая способность при нозематозе. Москва : Научные труды НИИ пчеловодства, 1973.

74. Куликов Н.С. Нозематоз и токсикозы пчел. Материалы докладов Всесоюзной научной конференции, посвященной 90-летию Казанского ветеринарного института, Казань : 1963.

75. Кузьмина Э.В., Столбов Н.М. Нозематоз пчел в Южном Зауралье и способы его лечения. Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки в России. Москва : 1999.

76. Левин Г.Г., Ковалев A.A., Минаев В.Л., Сухоруков К.А. Оценка точности измерения сухой массы клетки на автоматизированном интерференционном микроскопе. Измерительная техника. Москва : 2004.

77. Либерман С.С. Отчет по изучению токсичности метронидозола. Москва: 1989.

78. Лихотин А.К. Препарат овогид для пчел. Москва : Пчеловодство, 1993, №3.

79. Луппова В.Б. Изменения в показателях азотистого обмена у здоровых и больных нозематозом пчел разного возраста. Тезисы Всесоюзного семинара "Современные методы изучения болезней пчел и меры их профилактики" Москва: 1972.

80. Макаров С.Г. Пораженность пчел варроатозом и нозематозом в р. Марий эл. Москва : Пчеловодство 2010, №8.

81. Мадатов Р.И. Распространенность нозематоза пчел и изучение санитарно-профилактических мероприятий против него в условиях Казахской ССР. Автореф. диссерт. на соиск. уч. ст. канд.вет.наук, Алма-Ата : 1955.

82. Мадатов Р.И. Нозематоз пчел и борьба с ним. Тезисы Всесоюзного семинара "Современные методы изучения болезней пчел и меры ихпрофилактики" Москва : 1972.

83. Мадатов Р.И., Мерщиев В.М. Действие антибиотиков и химиопрепаратов на парамецию и нозему пчел. Москва : Ветеринария, 1972, №10.

84. Марков В.И. Нозематоз при варроатозной инвазии. Москва : Пчеловодство, 1986, №9.

85. Мастицкий Д.С. Чеснок лечит нозематоз. Сел. хоз-во Белоруссии, Минск : 1986.

86. Мельник В.Н. Экспресс-метод диагностики нозематоза пчел. Москва : Ветеринария, 1971, №8.

87. Мельник В.Н. Особенности устойчивости медоносных пчел к заражению нозематозом. Москва : Ветеринария, 1974, №6.

88. Мельник В.Н. Корма и нозематоз. Москва : Пчеловодство, 1975,4.

89. Мельник В.Н. Лечебно-профилактическая подкормка при нозематозе. Москва : Пчеловодство, 1976, №4.

90. Мельник В.Н. Восприимчивость к нозематозу рабочих пчел, маток и трутней. 24 Международный конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1977.

91. Мельник В.Н. Фумагиллин при нозематозе пчел. Москва : Пчеловодство, 1979, №3.

92. Мельник В.Н. Противонозематозный комплекс. Москва : Пчеловодство, 1984, №8

93. Мерщиев В.М. Инновация в пчеловодстве. Научный Исследовательский институт пчеловодства 2009г.

94. Метелин В.Б., Минаев В.Л., Валов А.Л., Конрадов A.A., Василенко И.А., Бабакова С.В. Компьютерная фазово-интерференционная микроскопия в биологии и медицинеюСборник научных трудов. г.Красноярск : 2003.

95. Михайленко Г.П. Визначения стшкости бджолиних с1мей проти нозематозу. Бджшьництво, 1971, №7.

96. Михайленко Г.П. Устойчивость к нозематозу пчел различных пород. Тезисы всесоюзного семинара "Современные методы изучения болезней пчел и меры их профилактики". Москва : 1972.

97. Михайленко Г.П. Зимостойкость пчелиных семей и устойчивость к нозематозу. Москва : Пчеловодство, 1974, 9.

98. Михайленко Г.П. Визначения стшкости бджолиних семей против нозематозу. Твариннцтво Украши, 1991, №5.

99. Михек И. Марганцевокислый калий в борьбе с ноземой. Москва: Пчеловодство, 1956, №5.

100. Неверов В.Ю., Столбов Н.М., Кузьмина Э.В. Смешанное течение варроатоза и нозематоза медоносных пчел в Западной сибири. Материалы международной научной конференции «Пчеловодство XXI в.». Москва : 2000г.

101. Негреев В.Н. Нозематоз и зимовка пчел. Москва : Пчеловодство 2002, №5.

102. Ормоцадзе К.Е. Экономический ущерб от нозематоза пчел в некоторых районах Грузии. Сб. трудов Груз, опыт, станции пчеловодства, 1971, №2.

103. Островский Н.И. Нозематоз пчел, его предупреждение и лечение. Рыбное : 1955.

104. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы. Москва : Наука, 2005.

105. Пероутка М. Использование трутней для изучения нозематоза. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1975.

106. Пероутка М., Веселы В. Нозематоз в Чехословакии. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1977.

107. Пероутка М., Чихаж Р. Эффект стеринов на цикл развития Nosema apis Z. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1977.

108. Полтев В.И. Продолжительность жизни нозематозных пчел и маток. Москва : Пчеловодство, 1934, №8.

109. Полтев В.И. Как распространяется нозематоз пчел. Пчеловодство, 1935, №4.

110. Полтев В.И. Болезни и вредители пчел. СХГ, 1936.

111. Полтев В.И. Пароформалиновая дезинфекция при нозематозе. Москва : Пчеловодство, 1948, №2.

112. Полтев В.И. О мероприятиях по борьбе с болезнями пчел. Москва : Пчеловодство, 1956, №2.

113. Полтев В.И. Поиски лечебных средств против нозематоза. Москва : Пчеловодство, 1957, №4.

114. Полтев В.И. Зимовка на сахаре и нозематоз. Москва : Пчеловодство, 1964, №11.

115. Полтев В.И., Гробов О.Ф. Болезни пчел на Дальнем Востоке. Москва : Пчеловодство, 1969, №1.

116. Полтев В.И., Цивилев И.В. Профилактика и терапия нозематоза. Москва : Пчеловодство, 1975, №4.

117. Полтев В.И. Совершенствование методов борьбы с болезнями пчел. Москва : Пчеловодство, 1977, №5.

118. Попов Е.Т., Мельник В.Н. Профилактика нозематоза осенью. Москва : Пчеловодство, 1982, №8.

119. Поросятников Н.В. Нозематоз без поноса. Москва : Хозяин 20095.

120. Таранов Г.Ф. Корма и кормление пчел. Москва : Россельхозиздат,1983.

121. Ревенок Д.С. лечение нозематоза пчел перцовым сиропом. Москва : Пчеловодство, 1956, №5.

122. Руссо М. Профилактика болезней пчел. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1975.

123. Самышкина B.C., Мельник В.Н. Фумагиллин ДЦГ и Фумидил-Б при нозематозе пчел. Москва : Пчеловодство, 1973, №7.

124. Сергеева Р.В. Особенности развития нозематоза у пчел в условияхтеплиц. Труды ВСХИЗО, 1971.

125. Сергеева Р.В. Особенности развития нозематоза у пчел в теплицах и его профилактика с помощью белкового корма и фумагиллина. Автореферат на соиск. уч. ст. канд. биол. наук, Москва : 1972.

126. Соловьева Л.Ф. Новое в науке и практике пчеловодства. Научно Исследовательский институт пчеловодства НИИП 2009г.

127. Сидоров Н.Г., Михайленко Г.П. Устойчивость разных пород пчел к экспериментальному заражению ноземой. Москва : Пчеловодство, 1969, №11.

128. Сидоров Н.Г. Влияние зональности и пород пчел на развитие нозематоза. Семинар "Современные методы изучения болезней пчел и меры их профилактики". Москва: 1972.

129. Сидоров Н.Г. Зимний корм и нозематоз. Москва : Пчеловодство, 1973, №11.

130. Сидоров Н.Г., Коптев B.C., Мугалимов Я.М. Устойчивость пчел к нозематозу и генетический метод борьбы. Москва : Ветеринария, 1975, №7.

131. Сидоров Н.Г., Столбов И.М. Экспериментальная смешанная инвазия нозематоза и варроатоза пчел. Науч.-техн. бюл. ВНИИ вет. энтомологии и арахнологии, 1975, вып.6.

132. Силаев А.Б., Беккер З.Э., Максимова и др. Фумагиллин из продукта выделенного в СССР. Антибиотики, 1957, №6.

133. Смирнов A.M. Как выдворить нозематоз с пасек. Минск : Сел. хоз-во Белоруссии, 1971, №8.

134. Смирнов A.M., Сохликов А.Б. Лечение нозематоза. Москва : Пчеловодство, 2002, №4.

135. Смирнов A.M., Чернов К.С. Пчеловодство Японии. Борьба с болезнями пчел. Москва : Пчеловодство, 1976, №3.

136. Смирнов A.M. Ветеринарная санитария на пасеках как мера профилактики и ликвидации заразных болезней. XXVI Межд. Конгресс по пчеловодству. Бухарест : Апимондия, 1977.

137. Смирнов A.M. Ветеринарный контроль за состоянием пасек. Москва : Пчеловодство, 1983, №5.

138. Смирнов A.M., Коломиец А.Ю., Симецкий М.А. Препараты в аэрозольных баллонах для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря. Москва : Труды ВНИИВС, 1979, том 65.

139. Смирнова Н.И., Перегуд О.Н. Энтеросептол при лечении нозематоза. Москва : Пчеловодство, 1971, №9.

140. Соколов В.П., Гробов О.Ф. Споры ноземы в гемолимфе пчел. Москва : Пчеловодство, 1963, №7.

141. Соловьева Л.Ф., Годяцкий С.Я. Мероприятия против нозематоза. Москва : Пчеловодство, 1989, №2.

142. Стеценко Н.Г. Как готовить настойку полыни. Москва: Пчеловодство, 1969, №7.

143. Стройков С. А. Кормление тестообразными смесями. Москва: Пчеловодство, 1991, №11.

144. Таков В. Санитарно-дезинфекционни мероприятия в пчелина. Киев: Пчеларство, 1992, №11.

145. Тимофеев O.E., Дунец E.H. Нозематоз пчел. Минск : Белорусское с/х. 2007.

146. Токарев Ю.С., Игнатьева А.Н., Зинатуллина З.Я. Молекулярная диагностика нозематоза ПЦР. Москва : Пчеловодство, 2010, №5.

147. Успенский Н.К. К диагностике нозематоза. Москва : Пчеловодство, 1935, №2.

148. Фоти Н, Щербонеску С., Кришан Ю. Влияние нозематоза на содержание протеина в гемолимфе пчел. XXIII Межд. Конгресс, Бухарест : Апимондия, 1971.

149. Ханко Я., Лемаков С. Нозематоз трутней XXIII Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1971.

150. Черепов В.Т. Нозематоз пчел в Кировской области и опыт его лечения уротропином. Мат.доклада Всес. научн. конференции посвященной90.летию Казанского вет.инст., Казань : 1963.

151. Черепов В.Т., Кузнецова Н.Ф. Расовая изменчивость устойчивости пчел к нозематозу. XXII Межд. Конгресс по пчеловодству, Бухарест : Апимондия, 1969.

152. Шабанов М.М. Есенна профилактика против нозематозата. Пчеларство, 1976, №11.

153. Шабанов М.М. Ненормальни состояния в пчелните семейства. Пчеларство, 1976, №11.

154. Шабанов М.М. Пролетна профилактика срешу нозематозата. Пчеларство, 1976, №3.

155. Шабанов М.М. Изучение нозематоза в Болгарии. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

156. Шимануки X., Ленерт Т. Когда матки заболевают нозематозом. XXIV. Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1973.

157. Штехе В. Связь между развитием паразита Нозема Апис и вараши-ванием расплода в пчелиной семье. XXII Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1969.

158. Штехе В. Биологические аспекты нозематоза пчел. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

159. Штондина Д.А. Биологические активные вещества при нозематозе. Пчеловодство, 2006, №4.

160. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004

161. Якобе Ф. Исследование влияния кормления и окружающей температуры на развитие Nosema apis Z. у медоносной пчелы. XXIII Межд. Конгресс по пчеловодству. Москва : 1971.

162. Якобе Ф., Майе Л. Липиды в организме пчел и Nosema apis. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

163. Якобе Ф. Морфологические аспекты развития Nosema apis Z. XXV Межд. Конгресс по пчеловодству, Апимондия, Бухарест : 1977.

164. Agache P., Marin M. Studiul componentei florei bacteriere si micotice a interestinului mijlociu al albinelor adulte in con-ditii de sanatate si nosemaza. Apicultura Romania, 1983, 12, p.13-14.

165. Anderson D.L., Giacon H. Reduced pollen collection by honeybee (Hymenoptera, Apidae) colonies infected with Nosema apis and sacbrood virus. J. Econ. Entomol., 1992.

166. Anderson D.L., Trueman J.W.H. Varroa jacobsoni (Acari: Varroidae) is more than one species. Experience. Appl. Acarol., 2000.

167. Anderson E., Atkins E. Pesticide usage in relation to beekeeping. A. Rev. Ent., 1968.

168. Anderson D., Giacon H. Reduced pollen collection by honey bee colonies infected with Nosema apis and sacbrood virus. Journal- of- economic-entomology, 1992.

169. Bailey L. The epidemiology and control of Nosema disease of the honey bee. Annals of Applied Biology, 1955.

170. Bailey L. The natural mechanism of suppression of Nosema apis in enzootically infected colonies of the honey bee. J. of Invertebrate Pathology, 1959.

171. Bailey L. Nosema apis and dysentery of the honeybee. J. of Apicultural research, 1967.

172. Bailey L. Nosema apis in drone honeybees. J. of Apicultural Research,1972.

173. Bailey L., Ball B.V. Honey Bee Pathology. The Science, London, 1991.

174. Barnavon M. Toxicite du fluvalinate sur les abeilles. La defense des vegetaux, 1985.

175. Bretschko J. Ursachen wechselhafter erfolgschancen medikamenteneinsatzes bei den parasitosen am beispiel der nosematose and varroatose. Bienenwelt,1986.

176. Bornek R., Maile B. Ensayos con Apistan. Vida Apic., 1989.

177. Bosacoma J., Canas S. Diagnostico de acariasis y nosemiasis. Vida Apic,1989.

178. Bowen-Walker P.-L., Martin S.-J., Gunn A. The transmission of deformed wing virus between honeybees ( Apis mellifera L. ) by the ectoparasitic mite Varroa jacobsoni Oud. Dzh. Invertebr. Pathol., 1999.

179. Buhlmann G. Nosema. Bienen-ZTG, 1988.

180. Chen Y., Evans Dzh., Feldlaufer M. Horizontal and vertical issues virus in honeybee, Apis Mellifera. Dzh. Invertebr. Pathol., 2006.

181. Chen Y., Pettis J.S., Kollinz A. M. Rasprostranennosti and way of the issue of the honey of the bee virus. App Environ Microbiol., 2006.

182. Chen Y., Smith I.B., and Pettis J.S. Nosema ceranae this long-persisting and broad spreading to infections of the European bee honey (Apis Mellifera) in United Staff:. J Invertebr Pathol., 2008.

183. Colla S.R., Otterstatter M.C., Gegear R.J., Thomson J.D., Plightof the bumble bee: pathogen spillover from commercial to wild. Biol. Air-tight., 2006.

184. Daszak P., Cunningham A.A., Hyatt A.D. Emerging infectious diseases of wildlife-threats to biodiversity and human health. Science, 2000.

185. Coke-Foster D.L., Konlan S., Holms E.S., and all. Examinations microbe in honey of the bee to colonies ruin by frustration. Sciences, 2007.

186. Cue J., Besana A., Genersh E., Gisder S., Nanetti A., and all. Off the Broad runaway Nosema ceranae, appearing incitant of the west bee honey, Apis Mellifera. J Invertebr Pathol. 2007.

187. De-Graaf D., Jacobs F. Tissue specificity of Nosema apis. Journal-of-Invertebrate- Pathology, 1991.

188. Delgado L. Estudo suplementar a proposito da interaccao dos farmacos fiimagllinae oxitetraciclina sobre as abelhas com no-semose. Rep. Trab. Lab. Nac. Investig. Veter., Lisboa, 1989.

189. Doull K. Control of nosema disease of honeybees. Austral, beekeeper,1974.

190. Efenberger P. Djelovanje heksametilentetramina na pokusnu in-vazija pcela spokama Nosema apis. Veferinarska medicina i bio-tehnika. Zagreb, 1985.

191. Eulhardt W., Beaulien B., Joldman P. Biochem Pharmacol, 1988.

192. Eva Forsgren, Ingemar Fries. Acidic-bericolic feed and nosema desiase. J.apic Sc., 2005.

193. Eijnde J.V., Vette N. Nosema infection in honeybees ( Apis mellifera L.) and bumblebees ( Bombus terrestris L.). Proc. The Experience. Appl. Entomol. Netherlands Entomol., 1993.

194. Farina V., Nunies J. Trophallaxis in honey- bees, Apis Mellifera (L.) in connection with ITY sources of the food, Anim. The Behaviour., 1991.

195. Faucon, J.P., Mathieu L., Ribie're A.C., Drajnudel P., Zeggane, S., AurieYes C., Aubert M.F.A. Honey bee winter mortality in France in 1999 and 2000. Bee World, 2002.

196. Fischer R. Die Nosematose eine gefarliche Bienenkrankheit. Germany, 1984.

197. Fries I. Infectivity and multiplication of Nosema apis Z. in the ventriculus of the honeybee. Apidologie, 1988.

198. Fries I., Fen F., daSilva A. Nosema ceranae n.sp. (Microspora, Nosematidae), morphological and molecular feature of the parasite from asiatic bees Apis cerana (Hymenoptera, Apidae). Eur. Dzh. Protistol., 1996.

199. Fries I. Nosema API a parasite in colonies of the bees honey. Bee journal, 1995.

200. Fries I., Fen F., Slemenda Pieniazek N. Nosema ceranae p. Sp. (Microspora, Nosematidae), morphological and molecular features parasite of the asiatic honeybee Apis cerana (Hymenoptera, Apidae). Eu J Protistol., 1996.

201. Fries I., Martin R., Meana A., Garsia-Palensiya P., Higes M. Natural infection ceranae Nosema in european bees honey. J Apic Res, 2006.

202. Fries I., Higes M., Martin R., Meana A., Nosema ceranae, new microsporidii of the parasite beside bees in Europe. J Invertebr Pathol., 2006.

203. Fries I. Observations on the development and transmission of Nosema apis Z. in the ventriculus of the honeybee. J. apic., 1989.

204. Fries I., Granados R., Morse R. Germination intracellulaire des spores de Nosema apis Z. Apidologie, 1992.

205. Fries I., Ekbohm G., Villumstad E., 1984. Nosema apis , sampling techniques and honey yield. J. Apicult. Res., 1984.

206. Fries I., Protozoa. In: Morse, RA, Flottum, K. (Eds.), Honey Bee Pests, Predators and Diseases. AI Root Company, Medina, Ohio, USA., 1997.

207. Fries I., Martin R., Meana A., Garciaa P., Higes M. Natural infections of Nosema ceranae in European honey bees. J. Apicult. Res., 2006.

208. Fries I., Slemenda S.B., daSilva A., Pieniazek N.J. AfricanHoney bees ( Apis mellifera scutellata ) and nosema ( Nosema apis ) infection. J. Apicult. Res., 2003.

209. Fries I., Nosema API a parasite in honey of the bee to colonies. Bi Worldwide, 1995.

210. Fries I., deSilva A. Nosema ceranae Sp. (Microspora, Nosemati-DAE), morphological and molecular features from microsporidii parasite asiatic bee honey Apis ceranae (Hymenoptera, Apidae). European Jour- NAL from, 1996.

211. Fries I., Martin R., Higes M. Natural infections Nosema ceranae in ES-honeybees. Journal beekeeping studies., 2006.

212. Fritzsch W. Erprobung eines heilmittels gegen nosematose. Archiv fur experimentelle Veterinärmedizin, 1970.

213. Furgala B., Boch R. The effect of fumidil B, Nosemak and humatin on Nosema apis. J. Apicultural Research, 1970.

214. Furgala B., Gochnauer T. Chemotherapi of Nosema disease. American bee J., 1989.

215. Furgala B., Sugden M. Residual activity of biocyclohexylammonum fumagillin in sucrose syrose syrop and two temperatures. American bee J., 1985.

216. Gatehouse H.S., Malone L.A. Genetic variability among Nosema apis isolates. J.apic. Res., 1999.

217. Gatehouse H.S., Malone L.A. The ribosomal RNA gene region of Nosema apis (microspora): DNA sequence for small and large subunit rRNA genes and evidence of a large tandem repeat unit Dzh. Invertebr. Pathol., 1998.

218. Gave K.M., Selie K.M. Review fall dependency Nosema diseases (Nosema API for Zander) from honey of the bee in South Australia. J insect Pathol., 1961.

219. Gilliam M., Taber S., Lorenc L.Y., Presto D. B. The Factors influence upon development disease breed in colonies of the honeybees, Apis Mellifera, helm polluted API, Ascosphaera. J. Invertebr. Pathol., 1988.

220. Ghazoul, J. Buzziness as usual? Questioning the global pollination crises. Trends Ecol. Evol., 2005.

221. Grimstad P., Ross V. Kreyg Aedes triseriatus (Diptera: Culicidae) and La-Cross of the virus. The Modification midge behaviour of the nursing to viral infection, J. Med. Entomol., 1980.

222. Grbic D., Tomas I. Novi preparati u susbijanin nosemoze. Pcela, 1985.

223. Grbic D., Basic I. Upotreba lijeka nozecid-a u lijecenju nozemaze pcela. Agron Glasnik, 1989.

224. Gilliam M. Microorganism and disease ancountorod in continuons bee Production. American Bee J., 1978.

225. Gilliam M., Taber S., Rose J. Chalkbrood disease of honoybees Apis mellifera L. Apidologie, 1978.

226. Glinski Z. Grzybica otorbielakowa ozerwia pszezotymiodnejmeto-dy loczenia. Now. Voter., 1983.

227. Gudvin M., Hauten A., Blekman R. The Expenseses and advantages Analysis use fumagillin for treatment Nosema. New Zealand Beekeeper, 1990.

228. Hartwig A. Nosemaza najgrozniejsza choroba przewodu pokarmo-wego pszczol. Pszczelarstwo, 1991.

229. Hassaneyn M.H. Studies on influence upon infections with Nosema API, on physiologies of the queen honey bees. The Journal of the celluar science., 1951.

230. Haupt B. J., Pelling A. E.,Horto, M. A.Integrated Confocal and Scanning Probe Microscopy for Biomedical Research. The Scientific World J.2006.

231. Herbert E., Witherell P., Shimanuki H. Control of varroa jacobsoni on honey bees in queen cages and small laboratory cages using amitraz, fluvalinate and apitol. American Bee J., 1988.

232. Higes M., Garsia P., Meana A. Experimental contamination Mellifera Apis with ceranae Nosema. Dzh. Invertebr. Pathol., 2007.

233. Higes M., Garcia P., Martinz R., Meana A. Experimental poisoning the bees Apis Mellifera with Nosema ceranae. Dzh. Inverteb. Pathol., 2007.

234. Higes M., Martin R., Meana A. Nosema ceranae, new parasite microsporodii in honeybees in ES- ropes. The Journal invertebrate to pathology., 2006.

235. Higes M., Garsiya-Palensiya P., Martinz R., Meana A. Experimental contamination Mellifera Apis bees with Nosema ceranae (Microsporidia). The Journal invertebrate to pathology., 2007.

236. Higes M., Botias C., Bailon E.G.As natural infections ceranae Nosema reasons of the bee of the honey to colonies ruin. Ecological microbiology, 2008.

237. Higes M., Martin R., Meana A. Nosema ceranae, new microsporidia of the parasite of the honeybees in Europe. J. "Inversion". Pathol., 2006.

238. Higes M., Martin-Ernandes R., Garrido-bailon E. Garsiya-Palensiya P. Finding infectious ceranae Nosema (Microsporidia) disputes in corbicular Pollen bees. J.Invertebr., 2008.

239. Higes M., Martin R., Sanz A., Alvarez N., Sanz A., Garciaia P., Meana A. El sii de despoblamiento de las colmenas en Espan~a. Consideraciones sobre su origin. Vida Apic., 2005.

240. Higes M., Martin R., Meana A. Nosema ceranae, a new microsporidian parasite in honeybees in Europe. Dzh. Invertebr. Pathol., 2006.

241. Higes, M., Garcia P., Martmndez, R., Aranzazu, M. Experimental infection of Apis mellifera honeybees with Nosema ceranae (Microsporidia). J. Invert. Ways., 2007.

242. Juan W.F., Czyan J.H., CHeni Y.W., Van C.H. Nosema ceranae to insulate from bees Apis Chalklifera. 38 Apidologie, 2007.

243. Huang W.F., Jiang, J.H., Chen, Y.-W., Wang, C.-H. A Nosema ceranae isolate from the honeybee Apis mellifera . Apidologie, 2007.

244. Juan W.F., Czyan J.H., CHeni Y.W., Van C.H., Nosema ceranae to insulate from bees Apis Mellifera. Apidologie, 2007.

245. Juan V., Czyan J. Full pPHK sequences Nosema ceranae in honeybees in Europe. J Invertebr Pathol., 2005.

246. Kalideron A. Sanches L.A. Presence Nosema ceranae in Afrikanizirovannye bees honey in Bone-Rika. Journal beekeeping studies. 2008.

247. Kelly H. Nosema the N1 disease of bees. Brit. Bee J., 1971.

248. Kemper B., Bally G. Digital holographic microscopy for live cell applications and technical inspection. Applied Optics. 2006.

249. Kasprzak S., Topolska G. Virus infections of the honey bee Apis mellifera associated with varroosis and noseemosis. Med.veter., 2008.

250. Kan Y.U. Experimental studies on pathogenicity and stages of the development API, Nosema korean J Vet Res., 1976.

251. Kezic N., Colony of the losses in Horvatii during winter 2008/09. In: Works 4 y Coloss conference, Zagreb, 2009.

252. Klee J., Tay W.T., Paxton R.J. Specific and sensitive detection of Nosema bombi (Microsporidia: Nosematidae) in bumble bees (Bombus spp.;Hymenoptera: Apidae) by PCR of partial rRNA gene sequences. Dzh. Invertebr. Pathol., 2006.

253. Klee J., Besana M., Genersch E., Gisder S., Nanetti A., The Widespreadrunaway microsporidi Nosema ceranae, appearing incitant of the west bee honey, Apis Mellifera. Dzh. Inverteb. Pathol., 2007.

254. Kolar C.S., Lodge D.M. Progress in invasion biology: predicting invaders. Trends Ecol. Evol., 2001.

255. Landim C. Electron microscopy studo of nosema apis: life cycle and relationship with the intestinal cells in Apis mellifera. Naturalia, 1990.

256. Larsson, R. Ultrastructure, function, and classification of Micro-sporidia. Prog. Protistol., 1986.

257. Langridzh D.F. Nosema disease of the bees and some investigations checking in staff Victoria, Australia Bi Worldwide, 1961.

258. Larrivee J. Sources of Nosema infection. American Bee J., 1965

259. Laurent M. Nosemose de abeilles melliferes. L Apicoltore de Italia,1970.

260. Imdorf, A., Charrie're, JD, Gallmann, P. Mögliche Ursachenfur die Völkerverluste der letzten Jahre. Schweizerische Bienenzeitung, 2006.

261. Lehnert T., Shimanuki H., Knox D. Transmission of nosema disease from infected workers of the honey bee, to queens in queen mailing cages. American Bee J., 1973.

262. Lehnert T. Comparing methods of feeding fumidil B for nosema control in honey bees. American Bee J., 1977.

263. Lehnert T., Shimanuki H. Population chang and nosema spore levels in colonies started with package bees. Apidologie, 1979.

264. Liu T. Effects of fumidil B on the spore of nosema apis on lipids of the hors celle as revealed by freeze etching. J. In-vetebrate Pathology, 1973.

265. Li Jilian, Wu Jie. Nosema bombi, a microsporidian of the bumble bee Bombus lucorum. J.apic., 2005.

266. Liu T. Oocytes degeneration in the queen honey bee after infection byNosema apis. Tissue-and-Cell, 1992.

267. Loskotova J., Peroutka M., Vesely V. Nosema disease of honey bee queens Apis mellifera L. Apidologie, 1980.

268. Marin M., et al. Nicozele albineler. Apicult, 1975.

269. Matasin Z. Nozemosa. Huvatslca Pcela., 1999.

270. Matheson A. World bee health report. Bee World, 1993.

271. Mayack S., Naug D. Energy voltages in bees Apis Mellifera from Nosema ceranae in- perfection, Dzh. Invertebr. Pathol., 2009.

272. Meloun L.A., Newton M. The Comparison answers to some New Zealand and Australia of the bee (Apis Mellifera L) for Nosema API, Z. 26 Apidologie, 1995.

273. Meloun L.A., Geythaus H.S., Tregidga E.L Influence time, temperature, and honey on Nosema API (Microsporidia: Nosematidae), parasite of the Bee, Apis Mellifera (Hymenoptera: Apidae) J Invertebr 77 Pathol., 2001.

274. Metson A. The Worldwide bee Report about condition of the public health. Bi Worldwide, 1993.

275. Meana A. Experimental contamination Mellifera Apis bees with Nosema ceranae microsporidia. J. Invertebr Pathol., 2007.

276. Moffett J., Wilson W. The viability and infectiavity of frozen nosema spores. American Bee J., 1971.

277. Mehr Z., Menapace D.M., Uilson W.T., Sakett R.R. The Studies on and spreading breed in apiaries. Amer. Bi J., 1976.

278. Moffet J.O., Uilson W.T., Stouner A., Wardecker A. The Nursing commercilally has gained the pollen containing mummy has caused the chalk- breed. Amer. Bi J., 1978.

279. Oldroyta V.R. That kills the american bees a honey? PLoS Biology,2007.

280. Naug D. Structure to social network and her(its) influence upon speaker of the issue in bee of the colonies, behaviour. Ecol. Sociobiol., 2008.

281. Naug D., Camazine S. Role to colonies or- ganization on incitant of theissue in social-in sects, ZH. Teor. J. Biol., 2002.

282. Naug D., Smith B. Experimental changes to infectious period influences upon issue speakers in social group, Tr. R. Soc., 2007.

283. Neuman K. Jak lecit nosematozu. Vcelarstvi, 1987.

284. Nijima K., Osawa K., Yashida T. Toxicity of several insecticides to honeybees: Influence of posttreatment temperature. Bull. Fac. Agr. Tamagama Univ. Tokyo, 1985.

285. Jay S., Dixon D. Intertiale and nosema infected honeybees shipped to western Canada. J. of Apicultural Research, 1984.

286. Jedruszuk A. Ckoroba sponoucowa-wiosna w pasiece. Pszccelarstwo,1999.

287. Jones W. The nosema story and yon. The Australian Beekeeper, 1975.

288. Jeanne F. Phytopharmacie et apiculture. Bull. Tech. Apic., 1986.

289. Jenoland D. Les mycoses abeilles recherche d un traitemort medicament eux off icace. Nef. franc.Apic., 1980.

290. Jouffroy C. Apistan: un nouveau concept. Quest. Apic, 1989.

291. Malone L., Giacon H. Effects of some chemicals on nosema disease of bees. New- Zealand-Beekeeper, 1991.

292. Dertel E. Nosema disease in the Baton rouge area. Gleaning in bee culture, 1964.

293. Oertel E. Colony dysturbance and nosema disease. J. of Apicultural Research, 1967.

294. Park Y., Popescu G., Badizadegan K., Dasari R., Feld M. Diffraction phase and fluorescence microscopy .Opt. Expr., 2006.

295. Pakston R.J., Klee J., Pored S. Nosema ceranae has infected Apis Mellifera in Europe at least once since 1998 and can be more dangerous, than API, Nosema Apidologie, 2007.

296. ParaK V. Nosematoza a medny vynos. Vcelarstvi, 1993.

297. Pakston RJ, Klee J, S Pored, Fries I. Nosema ceranae has infected Apis Mellifera in Europe, at least once 1998 and can be more dangerous, than API,Nosema. 38 Apidologie, 2007.

298. Pelling A. E., Sehati, S., Gralla, E. B., Valentine, J. S., and Gimzewski, J.K. Local Nanomechanical Motion of the Cell Wall of Saccharomyces cerevisiae. Science, 2004.

299. Pelling A. E., Sehati, S., Gralla, E. B. and Gimzewski, J. K. Time Dependence of the Frequency and Amplitude of the Local Nanomechanical Motion of Yeast.Nanomedicine, 2005.

300. Pelling, A. E., Veraitch, F. S., Chu, C., Nicholls, B. M., Hemsley, A., Mason, C. and Horton, M. A. Mapping correlated membrane pulsations and fluctuations in human cells. J. Molecular Recognit., 2007.

301. Peroutka M. Pouziti nitekabinu k leceni nosematozy vcel. Vcelarstvi,1981.

302. Peroutka M. Co bylo pricinou jarnich uhynu. Vcelarstvi, 1985.

303. Peroutka M. Nosematoza pzicina zhrouceni vcelstev. Vcelarstvi, 1992.

304. Piatt K., Linthicum K.Influence virus denge inperfection on food behaviour Aedes aegypt, Am. Dzh. The Trope. Medicine Gig. 1997.

305. Pokorna S. Vliv terapeutik a podminek vnejsiho prostredi na vyvoj prvoka nosema apis Z. Ustavu Vcelarsk, 1987.

306. Popescu G., Badizadegan K., Dasari R.R., Feld M.S. Observation of dynamic subdomains in red blood cells. J. Biomed. Opt., 2006.

307. Pohorecka K. Laboratory studies on the effect of standardized Artemisia absinthium L. extraction Nosema apis infection in the worker Apis mellifera. J. apic., 2004.

308. Pohorecka K. Skutecznosc leczenia nosemozy pszczol fumagillina podamanaw nozrych postaciach pokamur weglowodanowege Pszczeln. Zeszyty nayk, 1999.

309. Rahman M. Influence parasitism on products of the feeding Con-suggestion about Pieris rapae maggot, Dzh. Ekon. Entomol., 1970.

310. Rinderer T.E., Silivestr H.A. Change to answer to Nosema APIinterfaces, longevity, and accumulation of the behaviour in free mating the population honey bees. N-th. Entomol. Soc. Am., 1978.

311. Rinderer T., Colling A., Brown M. Heritabilities and correlations of the honeybee: response to nosema apis, longevity, and alarm response to isopentyl acetate. Apidologie, 1983.

312. Ruzicka F. Secondaru infections with Varroa infestations of honey bees, especially viruses. Bienenvater, 1991.

313. Rice R.N. Nosema disease in honeybees-genetic variation and control. Rural Industries Research and Development Corporation. No. 01/46, Australia, 2001.

314. Ruttner F. Biogeography and Taxonomy of Honeybees. SpringerVerlag, Berlin, Germany, 1988.

315. Pulen R. "Adaptive" changes to behaviour struck animal: critical review, Int. J. Parasitol., 1995.

316. Steche W. La nosemose des abeilles. Bull. Apicole, 1962.

317. Steche W., Held T. Rasterelektronenmicroskopische untersuchun-gen uber die ontogenie von Nosema apis Zander. Apidologie, 1981.

318. Soule J., Dutreuil C. et al. Jastroenterol, 1985.

319. Shen, M., Cui, L., Ostiguy, N., Cox-Foster, D. Tangled transmission routes and interaction between picorna-like viruses (Kashmir bee virus and sacbrood virus) with the honey bee host and the parasitic varroa mite. J. Gen. The Virologies., 2005.

320. Shen M., Yang X., Cox-Foster D., Cui L. The role of varroa mites in infections of Kashmir bee virus (KBV) and deformed wing virus (DWV) in honey bees. Virology, 2005.

321. Steffan-Dewenter, I., Potts, SG, Packer, L., 2005. Pollinator diversity and crop pollination services are at risk. Trends Ecol. Evol., 2005.

322. Szabo T., Heikel D. Effect of fumagillin treatment on nosema infection, survival and populations of overwintering honeybee colonies. J. Apic. Res., 1987.

323. Spreafico M., Colombo M. Attuazione di un piano di controllo integrato delle arversita dell alveare: metodologic e primi risultati. Selez. Veter., 1996.

324. Sulimanovic D., Zeba Lj, Markovich J. Confession and liquidation of the Bee of the diseases (on Croatian language)., 1995.

325. Taber S. What do You Know About Nosema? American Bee J., 1992.

326. Tay W.T., O'Mahony E.M., Paxton R.J. Complete rRNA gene sequences reveal that the microsporidium Nosema bombi infects diverse bumblebee ( Bombus spp.) hosts and contains multiple polymorphic sites. J. Eukaryot. Microbiol., 2005.

327. Thomas S.R., Elkington J.S. Pathogenicity and virulence. J. Invertebr. Pathol., 2004.

328. Tomaszewska B., Lone E., Dyda D. Laboratory treatment of Nosema apis with lasaloci and monensin. Angew. Parasitol, 1988.

329. Topolska G., Gajda A., Hartwiga A. Polish honey bee cobry-bss during the winter of 2007/2008. J.apic.Sc., 2008.

330. Topolska G., Kasprzak S. First cases of Nosema ceranae infection in bees in Poland.Med.veter., 2007.

331. Tlak Gajger I., Petrinec Z., Pinter L., Kozaric Z. Experimental treatment Nosema diseases with "Nozevit" phyto-pharmacological preparation. AmericanBee Journal, 2009.

332. Tlak Gajger I., Vugrek O., L Pinter., Petrinec Z. "Nozevit patty of' treatment of the bees (Apis chalk- lifera) for checking Nosema ceranae disease. The American journal Bi, 2009.

333. Uitington R., Uinston L. Influence Nosema bombi and his(its) treatment fumagillin on bumblebee (Bombus west) colony. The Journal invertebrate pathology, 2003.

334. Uiliyams G.R., Sampson M.A., Shutler D. Fumagillin management is recently discovered of the parasite inwesternhoneybees Nosemaceranae (Apis chalk-lifera)? The Journal invertebrate to pathology, 2008.

335. Van D.I., Moeller F.E. The Division of labor and queen attendance behaviour Nosema bees of the workman. Dzh. Ekon., 1970.

336. Varis A., Ball B., Allen M. Frequence des organismes pathoge-nes dansles colonies d'abeilles en Finlande et en Grande Bre-tagne. Apidologie, 1992.

337. Vishnyakov G.N., Levin G.G, Minaev V.L., Pickalov V.V., Likhachev A.V. Tomographic interference microscopy of living cells. Microscopy and Analysis, 2004.

338. Vishnyakov G.N., Levin G.G., Zakerian C.S., Likhachov A.V., Pickalov V.V., Kozinets G.I., Novoderzhkina I.K., Streletskaya G.A. Three dimensional limited - angle microtomography of blood cells: experimental results // Proc. SPIE., 1998.

339. Webster T. Nosema API for issue spore (dispute) amongst honeybees, Am. Bi J., 1993.

340. Woolhouse M.E.J. Population biology of emerging and reemerging pathogens. Trends Microbiol., 2002.

341. Woolhouse M.E.J, Haydon D.T., Antia, R. Emerging pathogens: the epidemiology and evolution of species jumps. Trends Ecol. Evol., 2005.

342. Wyborn M., Mccutcheon D. A comparison of dry and wet fumagillin treatments for spring nosema disease suppression of overwintered colonies. American Bee J., 1987.

343. Woyke J. Increase in Life-span, unit honey productivity an honey surplus with fumagillin treatment of honsybees. J. Apicul-tural Research, 1984.

344. Zander E., 1909. Parasiten ALS Tierische Krankenheitserreger BEI-twitched-Biene. Munchener Bienenzeitung, 1909.15.18 ноября 2011 года Россия, Москва, МВЦ «Крокус Экспо.награждаетсяМЕДАЛЬ Ю