Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Углеводная специфичность галектинов тандемного типа

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Углеводная специфичность галектинов тандемного типа"

005055408

На правах рукописи

Вохмянина Ольга Александровна

Углеводная специфичность галектинов тандемного типа

03.01.04 - Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

2 2 НОЯ 2012

Москва-2012

005055408

Работа выполнена в лаборатории углеводов Федерального государственного бюджетного учреяедения науки Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Научный руководитель кандидат химических наук

Рапопорт Евгения Марковна

Официальные оппоненты: Румш Лев Давыдович

доктор химических наук, профессор, заведующий лабораторией Федерального государственного бюджетного учреждения науки Российской академии наук Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова

Местечкина Наталия Михайловна

кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории Федерального

государственного бюджетного учреждения науки Российской академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха

Ведущая организация Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего

профессионального образования Московский государственный университет тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова

Защита состоится 6 декабря 2012 года в 13.00 на заседании диссертационного совета Д 002.247.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора и кандидата наук при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Российской академии наук Институте биохимии им. А.Н. Баха по адресу: 119071, Москва, Ленинский проспект, д. 33, строение 2.

С диссертацией можно ознакомиться в Библиотеке биологической литературы РАН по адресу: 119071, Москва, Ленинский проспект, д. 33, строение 1.

Автореферат разослан / ноября 2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

А.Ф. Орловский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Введение

Лектины - углеводсвязывающие белки неиммунного происхождения. Связываясь с гликоконъюгатами клетки, они принимают непосредственное участие в разнообразных процессах меж- и внутриклеточного узнавания. Галектины - Р-гапактозидсвязывающие белки, объединенные в одну группу по гомологии в аминокислотной последовательности углеводсвязывающего сайта. В зависимости от структурной организации, галектины млекопитающих разделяют на три группы: прототип, химерный и тандемный типы (рис. 1). Галектины «прототипа» содержат один углеводсвязывающий домен (УСД), единственный белок "химерного" типа галектин-3, состоит из одного УСД и одного регуляторного домена, содержащего повторяющиеся коллагеноподобные участки. Для галектинов тандемного типа характерно наличие в молекуле двух (]Ч- и С-) УСД, гомологичных, но не идентичных по аминокислотной последовательности.

NO

Прототип Химерный тип Тандемный тип

Рисунок 1. Структурная организация галектинов. УСД выделены черным цветом, линкер галектинов тандемного типа - белым цветом, регуляторный домен галектина-3 - серым цветом. К и N — коллагеновый и N-концевой участки регуляторного домена галектина-3.

Актуальность проблемы

Интерес к исследованию галектинов вызван тем, что они экспрессируются на различных видах клеток, в том числе опухолевых, и вовлечены в апоптоз, регуляцию клеточного цикла, адгезию клеток друг к другу и межклеточному матриксу, передачу межклеточных сигналов, некоторые галектины являются маркерами трансформации клетки и медиаторами воспаления.

Несмотря на многообразие функций, информация об углеводной специфичности галектинов в составе клеток ограничена. С помощью различных бесклеточных тест-систем, которые отличаются друг от друга презентацией гликанов или лектина, было показано, что экспонированные на поверхности клетки галектины способны связываться с любыми комплементарными P-Gal-терминированными гликанами, содержащие остатки Fuca или Gala/GalNAca. Однако, исследования, проведенные in vitro и in vivo, показали, что клеточные галектины избирательно связываются только с некоторыми гликанам, то есть применяемые для исследования специфичности белка искусственные модели не воспроизводят в полной ч

Я

мере особенности взаимодействия галектина с клеточным окружением. В связи с этим представляет большой интерес изучение углеводной специфичности галектинов в составе клеток.

Цель и задачи

Цель данной работы — установить механизм, который обеспечивает избирательность галектинов в составе клеток.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать углеводную специфичность галектинов тандемного типа человека, как полноразмерных, так и однодоменных.

2. Провести сравнительный анализ углеводной специфичности куриного (СС8) и человеческого галектинов-8.

3. Исследовать, какой из углеводсвязывающих доменов, М- или С-, участвует в заякоривании на клетке, и с какими гликанами он связывается; объяснить, какой из доменов (или оба) вовлечены в связывание с внешними гликанами.

4. Исследовать локализацию галектинов тандемного типа в гликокаликсе.

Научная новизна и практическая значимость работы

Предложен метод исследования углеводной специфичности лектинов (не имеющих вР1 якоря) в составе клетки. Исследована углеводная специфичность галектинов тандемного типа в составе клетки; выявлен паттерн их лигандов. Проведен сравнительный анализ углеводной специфичности одного и того же галектина, но выделенного из разных источников: на примере куриного и человеческого галектина-8 показано, что их углеводсвязывающие профили совпадают. Выявлены клеточные гликаны, с помощью которых К- и С-УСД галектинов тандемного типа заякориваются на клетке, показано, что несмотря на наличие двух функционально активных УСД, ключевая роль в связывании экзогенных гликанов принадлежит С-УСД. Выявлено, что одним из механизмов избирательности связывания может быть маскирование галектинов г/мс-лигандами1, то есть взаимодействие белка с г/мс-лигандами управляет связыванием «внешних» (транс)-лигандов.

Несмотря на то, что работа имеет фундаментальную направленность, свойство галектинов тандемного типа высоко специфично связывать группоспецифические антигены крови АВН может быть использовано при создании новых лекарств, направленных на активацию иммунной системы при инфекционных и воспалительных процессах, а также онкотрансформации.

Публикации и апробация работы

По теме диссертации опубликовано 2 статьи в рецензируемых журналах. Основные материалы диссертации были представлены на следующих конференциях: Международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2009» (Москва, 2009),

1 ¿[«с-гликаны — гликаны, экспрессирующиеся на тех же клетках, что и галектин; транс-гликаны - гликаны других клеток

IV Российский симпозиум «Белки и пептиды», (Казань, 2009), Международная научная конференция по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященная 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова, (Москва, 2009), 13-я международная путинская школа-конференция молодых ученых, (Пущино, 2009), XXII зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии, (Москва, 2010), 11th European Training course on Carbohydrate (Вагенинген, Нидерланды, 2010), Annual Conference of the Society for Glycobiology (Сейнт Пит Бич, Флорида, США, 2010), Russian-Indian Symposium on Glycosciences (Москва, 2011), XXI International Symposium on Glycoconjugates (Вена, Австрия, 2011), Первая Всероссийская конференция «Фундаментальная гликобиология» (Казань, 2012).

CTpyiciypa и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 137 страницах, содержит 48 рисунков, 7 таблиц, 4 приложения, имеет традиционную структуру и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов, обсуждения, выводов, заключения и списка цитируемой литературы, включающего 193 ссылки.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Гликан-связывающую специфичность галектинов исследовали в составе клеток (В-лимфоциты человека). Эта клеточная линия была выбрана, так как она не экспрессирует эндогенные галектины. Галектины нагружали на клетки, факт сорбции доказывали с помощью соответствующих антител.

1. Сравнительный анализ углеводной специфичности галектинов -4, -8 и -9 человека

Связывание галектинов, нагруженных на клетки, с флуоресцеин-мечеными гликоконъюгатами Иус-РАА-Яио (гликопробами) изучали методом проточной цитометриии. Гликопробы - олигосахариды системы крови АВН, а также сульфатированные и сиалилированные гликаны, терминированные ЬЫ или Ьес (табл. 1).

Таблица 1. Олигосахариды в составе С1ус-РАА-Пио, их аббревиатура.

№ Структура гликана(СТус) Аббревиатура

Дисахариды

1 Са1Р1-4С1сЫАсР ЬИ

2 Оаф1-ЗОаМАса ТР

3 Оа1Р1-ЗОШАсР Ьес

4 Оа1р1-ЗОаШАф т»

5 З-О-Би-Оаф 1 -4(6-0-5и)С1сР 3',608и2Ьас

6 3-О-8и-Оа10 1 -4С1с1МАсР 3'08и1ЛЧ[

7 6-0-8и-Са1Р 1 -4СШАсР б'ОЭиЬЫ

8 4-0-8и-Са1Р 1 -4С1сНАсР 4'05и1Л<Г

9 ва1Р 1 -4(6-0-Зи)асЫЛсР бОЭиЬЫ

10 З-О-Би-СаЩ 1 -ЗОаВДАса З'ОБиТР

11 З-О-Зи-ОЫРЬЗасИАсР 3'08иЬес

12 Оа1ЫАса1-ЗСаМАсР Рв-2

13 0а1ЫАсР1-401сКАсР ЬассШАс

14 ваШАсР 1 -4(6-0-8и)01сКАсР 608иЬассШАс

Трисахариды

15 Оа1а1-ЗОа1р1-4С1сНАср аа1аЗ'1Л

16 Биса 1 -2Са1 Р1 -3 ОкИАсР Н (тип 1)

17 Риса 1 -2Са1Р 1 -ДСкИЛсР Н (тип 2)

18 Риса 1 -20а1Р 1 -ЗваМАса Н (тип 3)

19 Риса 1 -2Са1Р 1 -ЗОа1ЫАсР Н (тип 4)

№ Структура гликана (Glyc) Аббревиатура

20 Galal-3(Fucal-2)Galß Btri

21 GalNAca 1 -3(Fuca 1 -2)Galß Art

22 Neu5Aca2-3Galß 1 -4GlcNAcß 3'SiaLN

23 Neu5Aca2-6Galß 1 -4GlcNAcß 6'SiaLN

24 Neu5Aca2-3 Galß 1 -3GalNAca 3'SiaTF

25 Neu5Aca2-3Galßl-3GlcNAcß 3'SiaLec

26 GlcNAcßl-6^ GalNAca Galß 1-3 Core 2

Тетра-, пента- и гексасахириды

27 Galß 1 -3GlcNAcß 1 -3Galß 1 -4Glcß LNT

28 Galß 1 -4GlcNAcß 1 -3Galß 1 -4Glcß LNnT

29 Galßl-4GlcNAcßl-3Galßl-4GlcNAcß LN3'LN

30 Galß 1 -4GlcNAcß 1 -6Galß 1 -4GlcNAcß LN6'LN

31 GaIßI-4GIcNAcßl-3GaIßl-4GIcNAcßl-3GaIßI-4GlcNAcß (LN)3

32 GlcNAcßl-^ Galßl-4GlcNAcß GlcNAcßl-/ (G1cNAc)23',6'LN

33 GlcNAcßl-^ Galßl-4GlcNAcß Galßl-4GlcNAcßl-/ LN3'(GlcNAc6')LN

34 Galß l-4GlcNAcß 1-6^ Galß 1 -4GlcNAcß GlcNAcßl-3 LN6'(GlcNAc3')LN

35 Galß l-4GlcNAcß 1-3 Galßl-4GlcNAcß Galß l-4GlcNAcß 1-6 (LN)23',6'LN

36 Galß 1 -3GlcNAcß 1 -3Galß 1 -4GlcNAcß Lec3'LN

37 Galßl-3GlcNAcßl-3Galßl-3GlcNAcß Lec3'Lec

38 Galß 1 -3GlcNAcß 1 -6Galß 1 -4GlcNAcß Lec6'LN

№ Структура гликана (в1ус) Аббревиатура

39 СаГЫАса1-3 \ Са1Р1-301сЫАсР Риса1-2 А (тип 1)

40 ОаШАса1-3 \ ОафМИсКАсР Риса 1-2 А (тип 2)

41 Оа1сс1-3^ ОафЬЗОкКАсР Риса1-2 В (тип 1)

42 Са1а1-3^ Са1р1-40ШАсР Риса 1-2 В (тип 2)

43 Са1а1-3^ ОаШ-ЗСаПчГАса / Риса 1-2 В (тип 3)

44 Са1а1-3 ^ СафЬЗОаШАсР Риса 1-2 В (тип 4)

45 Риса 1-3^ вШАсР Риса 1-20а1Р 1-4 Ьеу

46 ваШ -3 Са1В1-4 / \ Риса 1-2 ^ЛсИАсрьзр Риса1-3 ВЬеу

Следует отметить, что из-за разной аффинности антител к галектинам не представляется возможным строго количественно оценить их нагрузку, а значит и последующее связывание с гликанами. Однако, можно сравнить профили связывания. Общим для исследованных галектинов человека является следующее:

1. Галектины -4, -8, -9 не связывались вовсе, или связывались слабо с 1ЛЧ, но проявили сродство к Трр (рис. 2, а, б, в). В целом, галектины тандемного типа предпочтительнее связывались с гликанами, в терминальном фрагменте которых имеется заместитель при С-3 (0а1(31-30аВДАс, Са1|31-30ШАс), а не С-4 (ОаЛр 1 -40ШАс) остатка вШАс (или ОаШАс).

2. Галектины связывались с линейными и разветвленными олиголактозаминами.

3. Все три галектина связывались с отрицательно заряженными гликанами, содержащими заместители при 0-3 остатка галактозы и 0-6 остатка глюкозы или 01сЫАс, а именно с З'ОЭиЬМ, З'ОЭиЬе0, З'ОЗиТР и 608иЬЫ.

4. Самыми аффинными лигандами галектинов -4, -8, -9 в клеточной системе оказались АВН-гликаны, то есть группоспецифические антигены крови системы АВН.

В (тип 2) В {тип 1} А (тип 2) Л (тип 1) Н (тип 2) Н (тип 1)

31 60SUjI.bc ЗОЭиГР КЖ|А«

ЗОЯиШ зпшл

т.

1М1М шз'т

ШпТ

шт ирзи?

ЦГ31Н

}

13'

□ □

а □

]

100 150 200 О 200 400 600 800 1000

Флуоресценция

флуоресценция

100 800 1000 1400 Флуоресценция

Рисунок 2. Изучение специфичности галектинов -4 (а), -8 (б) и -9 (в) в составе клеток.

Галектины нагружали на клетки Яа^ и исследовали его связывание с гликопробами. Относительную флуоресценцию подсчитывали по формуле [(Р/Бо)х 100]-100, где Р, -интенсивность флуоресценции клеток, нагруженных галектином, после инкубации с Иус-РАА-Яио, Ро - интенсивность флуоресценции клеток после инкубации с С1ус-РАА-Аио в отсутствие галектина. За отсутствие связывания принимали величину флуоресценции < 20.

Несмотря на то, что галектины -4, -8 и -9 относятся к группе тандемных галектинов, гомология между ними составляет всего 40 - 60%, поэтому неудивительно, что паттерн их специфичности совпадает лишь частично:

1. Галектины -8 и -9 (рис. 2, б, в), но не галектин-4 (рис. 2, а), связывались с дисахаридом Ьес. В тоже время, все галектины связывались с Ьес-содержащими

дисахаридами. Следует отметить, что за исключением связывания с LNT, в целом, сродство к гликанам, содержащим Lec, было ниже, чем к олиголактозаминам (рис. 2, а, б, в).

2. В отличие от галектинов -4 и -8, галектин-9 связывался не только с 3'-, но и с 6'- замещенными олиголактозаминами (рис. 2, в).

3. Хотя все три галектина связывались с отрицательно заряженными гликанами, драматическое усиление по сравнению с нейтральными дисахаридами LN, Lec и TF наблюдалось только в отношении галектина-4 (рис. 2, а).

4. Из группоспецифических антигенов в клеточной системе галектины -4 и -8 предпочтительнее связывались с А-, (рис. 2, а, б), а галектин-9 - с В-гликанами (рис. 2, в).

2. Галектин-8 курицы

Проведенный сравнительный анализ птичьего и человеческого галектинов позволил выявить некоторые особенности в специфичности CG8. Во-первых, углеводсвязывающие профили человеческого и куриного галектинов в составе клеток в целом совпадают (рис. 3), за исключением взаимодействия с дисахаридом Lec; это свидетельствует в пользу того, что птичий галектин-8 является ортологом человеческого. Во-вторых, несмотря на отсутствие экспрессии АВН-гликанов у птиц, CG8 проявлял наибольшее сродство именно к ним, что также характерно и для другого птичьего галектина, CGI А. Самыми аффинными лигандами были тетрасахариды А (тип 2) и В (тип 2), однако, уровень связывания с ними CG8 в составе клеток Raji был ниже, чем человеческого галектина (рис. 3).

□ Гзпектин-8

Отнсситепьные вд.

Рисунок 3. Сравнительная углеводная специфичность СС8 и НЧ38, определенная цитофлуориметрией. Галектины инкубировали с клетками Яа^!, далее исследовали связывание модифицированных клеток с гликопробами (см. «Материалы и методы»). Данные нормализованы относительно интенсивности флуоресценции клеток после инкубации с ТР-пробой и приведены в относительных единицах.

К настоящему времени отсутствуют данные о наличии видовой специфичности у галектинов. Хотя было показано, что связывание галектинов -4 и -9 мыши с гликанами, проявившими сродство к их человеческим гомологам, на порядок ниже, но различие в аффиности объяснялось заменами в активном центре углеводсвязывающего сайта [Тч1а§ае е1 а1., 2008]. Гомология между М-УСД гапектина-8 и Св8 составляет 74% [Ка1шег е1 а!., 2009], поэтому можно предположить, что другие аминокислоты, входящие в УСД, вносят свой вклад в связывание.

3. Роль междоменного линкера во взаимодействии галектинов с гликанами

Чтобы выявить влияние линкера (участка белка, соединяющего два УСД) на углеводсвязывающие свойства, было изучено связывание с гликопробами галектина-4\у12 и галектина-8Ь. Следует отметить, что оба галектина сорбировались на клетки в той же степени, что и нативные галектины.

Связывание галектина-4л¥1 с гликопробами было на уровне галектина-4 (рис. 4). В частности, с нейтральными олиголактозаминами и с З'ОБиТР в одинаковой степени связывались обе формы, в то время как сродство к АВН-гликанам было в полтора-два раза ниже.

В (тип 2 В (тип 1) А Iтип 2) А (тип 1) И (тип 2) И (тип 1)

№з шзьм и и»

I I запектин-4м1 □ гзпектин-4

50

100 150

Флуоресценция

200

Рисунок 4. Изучение специфичности галектина-4лу1 в составе клеток. Галектин-4ш1 нагружали на клетки Яа^ и исследовали его связывание с гликопробами. Относительную флуоресценцию подсчитывали по формуле [(Р;/Ро)х100]-100, где Б) - интенсивность флуоресценции клеток, нагруженных галектином, после инкубации с 01ус-РАА-Яио, Ро -интенсивность флуоресценции клеток после инкубации с 01ус-РАА-Аио в отсутствие галектина.За отсутствие связывания принимали величину флуоресценции <20.

2 Линкер галектина-4\у1 состоит из 26, а не 41 а.о; линкер галектина-8Ь длиннее на 41 а.о, чем у нативного белка

Галектин-8Ь, наоборот, связывался слабо, или не связывался вовсе с гликопробами, в том числе, с теми, к которым проявил высокую аффинность галектин-8.

Т.к. домены безлинкерного галектина-4\у1 расположены близко друг к другу, то после заякоривания на гликане первого домена, второму из пространственных соображений сложно вступить в г/ыс-взаимодействие, в то время как его доступность для экзогенных гликанов сохраняется. Напротив, у галектина с длинным линкером возможность второго домена связаться с г/нс-гликаном сохраняется, что затрудняет взаимодействие с транс-гликанами. Принимая во внимание, что галектины являются медиаторами межклеточной адгезии, экспрессия удлиненных форм, неспособных связывать гликаны, может быть необходима для ингибирования («выключения») межклеточной адгезии.

Суммируя, следует подчеркнуть, что, данные, полученные с помощью клеточной и бесклеточных (гликочипный анализ, поляризация флуоресценции, фронтальная аффинная хроматография - литературные данные) систем совпадают, однако, выявляется и ряд отличий:

1. Галектины -4, -8 и -9 не связываются с 1.ес и с гликанами, содержащими этот дисахарид. В клеточной системе, как уже упоминалось выше, галектины -8 и -9 связывались с ними. Более того, связывание с Ьес было даже выше, чем с З'-О-сульфатированным аналогом.

2. Также, как и в искусственных системах минимальным фрагментом для связывания галектинами А- и В-гликанов являются тетрасахариды, трисахарид Н также узнается. Галектины преимущественно связываются с АВН гликанами 1 и 2 типов, трисахариды А и В во всех случаях без исключений были неактивны.

3. Сродство к АВН-олигосахаридам галектинов, нагруженных на клетки, значительно выше, чем к другим гликанам. В бесклеточных системах эта разница была не столь драматической. Чтобы объяснить это, необходимо знать специфичность каждого из УСД, и уже основываясь на этом знании, предполагать, какой домен заякоривается на клетке, а какой - участвует во взаимодействии с транс-тпккшэми.

Для ответа на эти вопросы были проведены следующие эксперименты: 1) исследован углеводсвязывающий профиль однодоменных галектинов в твердофазной системе; 2) исследовано связывание галектинов (полноразмерных и однодоменных) с клетками, обработанными гликозидазами; 3) измерено количество высвободившегося белка в супернатанте после инкубации с аффинной для С-УСД гликопробой.

4. Изучение углеводной специфичности № и С-однодоменных галектинов в твердофазной системе

Т.к. однодоменные галектины одновалентны, то исследовать их связывание с гликопробами в составе клеток не представлялось возможным. В твердофазной системе было показано, что КГ-однодоменные галектины проявили сродство к олиголактозаминам, в то время как с АВН-гликанами связывался С-УСД. Как так и С-УСД проявляли сродство к отрицательно заряженным гликанам, хотя аффинность М-УСД к ним была выше (рис. 5).

а б в

в (та 2) А (та 2) И Н(МЯ2) * * □ гапеУШп-40 . Т и □ галетин-4М , * 134 э ? к X У

З'ОЙТР З'ОМД ЮВММ З'.иоОД.ЭС

=н =3 И

..........и,

-II -м

ШаТ ш 7 изддеич =31 ....................к ---р, =н ..............И --ц

л N

ШЗ'СКЯ/СО'Ш, р})р\0'Ш Р и л Ш э 1 Н □ V =>

77= Т& Ш, ¿.е"

а м

О 20 Л? Я? ВО 100 120 О 50 100 160 200 250 0 50 100 150 200 250

Ингибирование

Рисунок 5. Специфичность однодоменных галектинов -4N и -4С (а), -8N (б) и -9N (в) в твердофазной системе. Значение ингибирования рассчитывали по формуле 1/1100, где I -максимальная (а) концентрация Иус-РАА (мкМ), при которой еще наблюдается ингибирование или концентрация (б-в) гликопробы, при которой наблюдается 40%-ное ингибирование.

5. Выявление гликанов, с которыми предположительно связываются галектины тандемного типа на клетках

Для идентификации гликанов, с которыми связываются галектины, исследовали их связывание с клетками после дегликозилирования.

Клетки сначала инкубировали с ферментами, а уже затем на них нагружали галектины. Факт сорбции галектинов подтверждали с помощью соответствующих антител. Десиалилирование клеток приводило к уменьшению связывания как полноразмерного галектина-8, так и его однодоменной формы-8Ы (рис. 6, б). Напротив, связывание с клетками полноразмерных галектинов -4 и -9, а также их однодоменных форм увеличивалось (рис. 6, а, в). После обработки клеток (3-галактозидазой связывание всех галектинов уменьшалось (рис. 6, б, в), если сравнивать с только десиалилированными.

галектин-4С

галектин-4М

ш десиап ил иров ание+де гал акт озипир ован ие Ш десиапипирование □ контроль

О 20 40 60 80 100 120 140 160 Флуоресценция

б

О 10 20 30 40 50 60 70 Флуоресценция

Р"

Т

>

О 200 400 600 800 1000

Флуоресценция

Рисунок 6. Взаимодействие галектинов -4 (а), -8 (б) и -9 (в) с клетками после ферментативной обработки. Клетки обработанные ферментами, инкубировали с

галектинами, как описано в «Материалах и методах». Флуоресценцию рассчитывали по формуле РУРо)х100]-100, где Р; - интенсивность флуоресценции после инкубации клеток, нагруженных галектином, с антителами, р0 - интенсивность флуоресценции клеток после инкубации с ФИТЦ-мечеными анти-кроличьими антителами.

С помощью пектинов и анти-углеводных антител было показано, что большая часть гликанов клеток терминирована олиголактозаминами, частично сиалилироваными; в то же время на этих клетках вообще не экспрессируются АВН-гликаны. Как уже было сказано выше, аффинность С-УСД к олиголактозаминам, в том числе к З'-сиалилированным ниже, чем 1Ч-УСД (см. п. 3), поэтому наиболее вероятно, что при заякоривании на клетке ключевая роль принадлежит ТЯ-УСД, а не С-УСД. Тогда можно предположить, что в связывание с экзогенными гликанами вовлечен С-УСД.

Чтобы проверить это, был проведен модельный эксперимент с однодоменными формами галектина-4, когда заякоренный на клетке белок инкубировали с высокоаффинной для С-домена гликопробой, после чего измеряли количество высвободившегося белка в еупернатанте.

гаг-вУ'гин-4С

О 2 i 6 е 10 12 и 16 Концентрация белка е еупернатанте иг/мл

Рисунок 7. Идентификация галектина-4 в еупернатанте клеток, дот-анализ.

Такое высвобождение наблюдалось только в случае С-домена, но не в случаях N-домена и целого двухдоменного галектина-4 (рис. 7), то есть в связывание с экзогенными гликанами вовлечен С-УСД. Его высокой аффинностью к АВН-гликанам обуславливается предпочтительность связывания клеточных галектинов тандемного типа с группоспецифическими антигенами АВН, несмотря на то, что паттерн связывания (как видно из приведенного исследования) значительно шире.

Гликокаликс клетки имеет сложную организацию, его состав постоянно обновляется. У животных клеток его толщина варьирует от 30 - 500 нм, а у эндотелиальных клеток может достигать 4,5 мкм [Curry and Adamson, 2011; Martins and Bairos, 2002], что значительно больше размера белка. Это означает, что почти все гликолиганды в той или иной степени скрыты и недоступны для связывания с белками. Чтобы понять механизм межклеточных взаимодействий с участием галектинов была исследована: 1) их локализация; 2) вовлеченность г/г/с-гликанов в маскировку белка.

6. Локализация галектинов -4, -8 и -9 в гликокаликсе клетки

Флуоресцентной микроскопией была исследована локализация галектинов в клеточной мембране. Как видно на гистограммах распределения флуоресценции, все три галектина аккумулируются в пэтчах разных размеров (рис. 8).

Расстояние (мкм) Расстояние (мкм) Расстояние (мкм)

Рисунок 8. Локализация галектинов -4 (а), -8 (б) и -9 (в) в гликокаликсе клеток Raji.

Галектины нагружали на клетки, после чего инкубировали с соответствующими антителами, мечеными фикоэритрином (красный цвет). Изображения получали с помощью конфокального микроскопа Nikon Eclipse ТЕ 2000-Е (Япония), объектив хЮО. Масштаб = 10 мкм. На гистограммах (внизу) приведено распределение флуоресценции областей, выделенных белыми прямоугольниками (вверху), по оси ординат - относительная интенсивность флуоресценции в условных единицах, по оси абсцисс - длина выделенного участка в мкм.

Методом конфокальной микроскопии с двойным окрашиванием исследовали расположение галектиновых пэтчей в гликокаликсе. Для этого галектины детектировали соответствующими антителами, а гликокаликс окрашивали растительным лектином DSA (Datura stramonium), узнающим (З-гапактозиды. Толщину гликокаликса и расположение в нем галектинов измеряли с помощью «внутренней линейки», встроенной в программное обеспечение EZC1 к конфокальному микроскопу Nikon (Япония) (рис. 9) и стандартных флуоресцентных частиц диаметром 500 мкм, для каждой клетки проводили более двенадцати измерений; в каждом опыте было проанализировано не менее десяти клеток. Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Excel 2003.

Как видно из рис. 9, в целом, галектины -4, -8 и -9 распределяются по всей толщине гликокаликса, однако, для каждого из них характерен собственный паттерн распределения. Так, галектины -8 и -9 обнаруживается в четко очерченных патчах, в то время как галектин-4 - в диффузных.

« гал-4 на ЛОЖЕ Н№ вЯш

Е59 в— шш Ш

ОБА гал-9 вез О

& 20 С 10

О г 4 6 8 10 12 и Расстояние (мт>)

JVv^Av

& 30

го « 10

I 6 3 10 12 14 Расстояние (мюл)

0 2 4 6 8 10 12 Расстояние (ит)

Рисунок 9. Расположение галектинов -4, -8 и -9 в гликокаликсе. Галектины нагружали на клетки Ла^, после чего инкубировали с соответствующими антителами (красный цвет, б), для окрашивания гликокаликса клетки инкубировали с биотинилированным лектином ОБА и затем с ЗЦ-ФИТЦ (зеленый цвет, о); конфокальная микроскопия, увеличениехЮОО. Типичная локализация галектинов показана стрелками (в). Справа приведены схемы расположения галектинов в гликокаликсе (г). Толщина гликокаликса в соответствующем месте показана белым цветом и цифрой. На гистограммах (д) приведено распределение флуоресценции областей, выделенных прямоугольниками; по оси ординат - относительная интенсивность флуоресценции в условных единицах, по оси абсцисс - длина выделенного участка в мкм.

Далее была исследована клеточная локализация однодоменных галектинов. Галектины -4Ы, и -9Ы распределялись по всей толщине гликокаликса (рис. 10), в то же время С-однодоменный галектин-4 располагался как в глубине гликокаликса, так и на его переферии (рис. 11).

Рисунок 10. Расположение галектинов -414, -8N и в гликокаликсе. Галектины нагружали на клетки Яа^, после чего инкубировали с соответствующими антителами (красный цвет), для окрашивания гликокаликса клетки инкубировали с биотинилированным лектином ОБА и затем с 8ц--ФИТЦ (зеленый цвет); конфокальная микроскопия, увеличение х 1000. Справа приведены схемы расположения М-однодоменных галектинов в гликокаликсе. Локализация галектинов показана стрелками. Толщина гликокаликса, выделенная в соответствующем месте белым цветом, обозначена цифрой.

Рисунок 11. Расположение галектина-4С в гликокаликсе. Галектин нагружали на клетки 11а_Ц, после чего инкубировали с антителами (красный цвет), его локализация показана стрелкой Для окрашивания гликокаликса клетки инкубировали с биотинилированным лектином ОЭА и затем с 8(т-ФИТЦ (зеленый цвет); конфокальная микроскопия, увеличение х 1000. Справа приведена схема расположения галектина-4С в гликокаликсе. Локализация гапектинов показана стрелками. Толщина гликокаликса, выделенная в соответствующем месте белым цветом, обозначена цифрой.

Из приведенных экспериментов следует, что всегда галектины -4, -8 и -9 не распределены равномерно на поверхности мембраны, а аккумулируются в пэтчах. Пэтчинг не является результатом индукции гликокластеров самих галектинов. В пользу этого свидетельствует тот факт, что однодоменные (и поэтому одновалентные) галектины также аккумулировались в пэтчах.

В гликокаликсе галектины, по всей вероятности маскированы гликанами тех же клеток, что может быть одной из причин избирательности галектинов. Чтобы проверить эту гипотезу, клетки, нагруженные галектинами, инкубировали с ферментами, последовательно отщепляющими остатки №и5Аса и ваЩ. После чего сравнивали связывание с гликопробами галектинов в составе нативных клеток и обработанных гликозидазами.

7. Гликан-связывающая активность клеток, нагруженных галектинами -4, -8 и -9, после обработки ферментами

После дегликозилирования галектины -4, -8 связывались с гликопробой ЫЧ, чего не наблюдалось в случае клеток, не обработанных ферментами. Галектин-9 связывался с ЬК слабо, после ферментативной обработки его связывание с гликопробой также усиливалось. Эти данные указывают на то, что УСД галектинов в составе клеток может быть маскирован г/ис-гликанами.

■ десиапипирование + дегалактозилирование

□ десиапипирование

□ контроль

галектин- 9

¥

галектин-8

¥

галектин-4

О 5 10 15 20 25 30 35

Флуоресценция

Рисунок 12. Влияние гликозидаз на гликан-связывающую активность галектинов, нагруженных на клетки Галектины нагружали на клетки, после чего их обрабатывали

последовательно нейраминидазой и Р-галактозидазой, как указано в «Материалах и методах». Далее исследовали связывание клеток с 1ЛЧ-РАА-Аио, значение флуоресценции расчитывали по формуле [(Р/Ро)х100]-100%, где - интенсивность флуоресценции клеток после инкубации с Иус-РАА-йио; Ио - интенсивность флуоресценции клеток после инкубации с Иус-РАА-Яио без обработки клеток ферментами.

Суммируя результаты этих экспериментов (п. 4 - 7), можно предположить, как осуществляется связывание галектинов тандемного типа с экзогенными гликанами: 1) галектины удерживаются на клетке К- и С-УСД, но аффинность последнего к гликанам ниже; 2) если аффинность внешнего гликана выше, чем г/ие-гликана, то он вытесняет его и происходит связывание С-УСД с транс-гликанами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использованная в данной работе клеточная система позволила выявить углеводсвязывающий профиль галектинов -4, -8 и -9.

Несмотря на наличие двух углеводсвязывающих доменов, ключевая роль во взаимодействии с экзогенными {транс-гликанами) принадлежит С-УСД. Самыми аффинными лигандами для него являются АВН-гликаны, чем обусловлена предпочтительность связывания клеточных галектинов тандемного типа с группоспецифическим антигенам крови. Естественно возникает вопрос, каков биологический смысл высокого сродства галектинов тандемного типа к ним. В норме АВН-гликаны экспрессируются на мембранных гликопротеинах или гликолипидах эритроцитов, эпителиальных и эндотелиальных клеток, а также на секретируемых муцинах. Галектины экспрессируются на поверхности клетки при воспалительных процессах и онкотрансформации, поэтому связываться с АВН-гликанами в организме здоровых индивидуумов не могут. С другой стороны, некоторые патогенные бактерии и вирусы связывают А-и В-гликаны слизистой ротовой полости и желудочно-кишечного тракта человека. Можно предположить, что галектины ингибируют заражение, маскируя собственные А-и В-гликаны, или они узнают эти гликаны, когда они входят в состав клеточной стенки микроорганизмов. Кроме того, связывание галектинов -8 и -9 с АВН-гликанами эндотелиальных клеток может способствовать их миграции в прилежащую ткань. Таким образом, при регенерации поврежденных тканей галектины могут быть позитивными регуляторами ангиогенеза. Однако, при онкотрансформации стимуляция галектинами -4, -8 и -9 ангиогенеза способствует метастазированию опухолевых клеток. В этом случае создание синтетических ингибиторов связывания галектинов с АВН-гликанами может быть одним из эффективных средств в противоопухолевой терапии.

выводы

1. Предложен метод исследования утлеводсвязывающей специфичности галектинов, который заключается в изучении взаимодействия клеток, нагруженных галектинами, с экзогенными гликоконъюгатами. С помощью этого метода установлено, что галектины -4, -8 и -9 проявляют наибольшее сродство к группоспецифическим антигенам крови системы АВН.

2. Показано сходство куриного и человеческого галектинов-8 по их углеводной специфичности.

3. Установлено, что И-домсн тандемных галектинов связывается с олиголактозаминами и отрицательно заряженными гликанами, а С-домен - с АВН-гликанами.

4. Показано, что галектины тандемного типа заякориваются на клетке предпочтительно с помощью М-домена, в то время как С-домен отвечает за взаимодействие с внешними лигандами.

5. Найдено, что общим свойством галектинов является неравномерное (в виде кластеров) аккумулирование в гликокаликсе клетки; в то же время характер распределения каждого галектина индивидуален.

6. Показано, что г/мс-взаимодействие регулирует функциональную активность галектинов: с одной стороны, гуыс-лиганды маскируют галектины, предотвращая их взаимодействие с лигандами соседних клеток, с другой стороны, они же предотвращают взаимодействие с низкоаффинными лигандами, разрешая взаимодействие с высокоаффинными.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи

1. Вохмянина О.А.. Рапопорт Е.М., Рыжов И.М., Корчагина Е.Ю., Пазынина Г.В., Северов В.В., Кальтнер Г., Андре С., Габиус Г.-И., Бовин Н.В. Углеводная специфичность куриного и человеческого галектинов в составе клеток. Биохимия. 2011, 76 (10), 1185-92.

2. Vokhmvanina О.А., Rapoport Е.М., Andre S., Severov V.V., Ryzhov I.M., Pazynina G.V., Korchagina EJu., Gabius H.J., Bovin N.V. Comparative study of the glycan specificities of cell-bound human tandem repeat-type galectins -4, -8 and -9. Glycobiology. 2012, 22 (9), 12071217.

Тезисы докладов

1. Вохмянина O.A. Специфичность галектина-8 человека. Международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2009», Москва, 13-18 апреля 2009, стр. 42.

2. Вохмянина О.А.. Рапопорт Е.М., Пазынина Г.В., Северов В.В., Бовин Н.В. Специфичность галектина-8 человека. IV Российский симпозиум «Белки и пептиды», Казань, 23-27 июня 2009, стр. 68.

3. Вохмянина О.А., Рапопорт Е.М., Пазынина Г.В., Северов В.В., Бовин Н.В. Углеводсвязывающий паттерн клеточных галектинов человека тандемного типа. Международная научная конференция по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященная 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова, Москва, 28 сентября - 1 октября 2009, Том 2, стр. 41.

4. Вохмянина О.А., Рапопорт Е.М., Пазынина Г.В., Северов В.В., Бовин Н.В. Сравнительный анализ углеводных специфичностей галектина-8 человека и курицы. 13-я международная пущинская школа-конференция молодых ученых, Пущино, 28 сентября - 2 октября 2009, стр. 65.

5. Вохмянина О.А.. Рапопорт Е.М., Пазынина Г.В., Северов В.В., Бовин Н.В. Углеводсвязывающий паттерн птичьего галектина-8: сравнительный анализ с галектином-8 человека, XXII зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии, Москва, 8-11 февраля 2010, стр. 18.

6. Vokhmvanina О.А.. Rapoport Е.М., Pazynina G.V., Severov V.V., Bovin N.V. Carbohydrate-binding pattern of human tandem-repeat-type cellulat galectins, 11th European Training course on Carbohydrate, Wageningen, The Netherlands, 17-20 May, 2010, p. 96.

7. Vokhmvanina Olga. Rapoport Eugenia, Ryzhov Ivan, Korchagina Elena, Severov Vyacheslav, Pazynina Galina, Gabius Hans-J., Bovin Nikolai. Specificity of cell bound human galectins-4, -8 and -9, Annual Conference of the Society for Glycobiology, St Pete Beach, FL, USA, 17-21 November 2010, p. 1474.

8. Eugenia Rapoport, Olga Vokhmvanina. Ivan Ryzhov, Elena Korchagina, Galina Pazynina, Nicolai Bovin. Galectins: study of their cellular cis- and trans-ligands, Russian-Indian Symposium on Glycosciences, Moscow, 13-16 June, 2011, p. 23.

9. E. Rapoport, O. Vokhmvanina. E. Korchagina, I. Ryzhov, I. Mikhalev, N. Bovin. Neoglycolipids as a tool for study of cellular ligands of galectins, XXI International Symposium on Glycoconjugates, Vienna, Austria, August 21-26,2011, p. 272.

10. Рапопорт E.M., Вохмянина O.A.. Матвеева B.K., Пазынина Г.В., Корчагина Е.Ю., Рыжов И.М., Бовин Н.В. Галектины: углеводная специфичность и механизм регуляции функциональной активности, Первая Всероссийская конференция «Фундаментальная гликобиология», Казань, 20-24 июня 2012, с. 53.

Заказ № 105-П/10/2012 Подписано в печать 29.10.2012 Тираж 100 экз. Усл. п.л.1

"Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru; е-таИ:info@cfr.ru

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Вохмянина, Ольга Александровна

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика галектинов

1.2. Галектины тандемного типа

1.2.1. Общая характеристика галектинов тандемного ^ ^ типа

1.2.2. Структура и доменная организация

1.2.3. Строение углеводсвязывающего сайта И- ^ домена

1.2.4. Строение С-УСД

1.3. Углеводная специфичность галектинов человека

1.3.1. Связывание с незамещенными дисахаридами

1.3.2. Связывание с олиголактозаминами

1.3.3. Взаимодействие галектинов с отрицательно заряженными гликанами

1.3.4. Взаимодействие галектинов с ваШАса- ^ терминированными гликанами

1.3.5. Взаимодействие галектинов с группоспецифическими антигенами крови системы

1.3.6. Влияние линкера на углеводсвязывающую активность галектинов

1.4. Биологические функции галектинов тандемного типа

1.4.1. Функции внутриклеточных галектинов

1.4.2. Функции галектинов на поверхности клеток

1.4.2.1. Галектины как молекулы межклеточной адгезии

2.4.1. Сорбция галектина на клетки, обработанные ферментами

2.4.2. Сорбция галектинов на клетки, обработанные ингибиторами биосинтеза К- и О-гликанов

2.6. Исследование локализации галектинов на поверхности клеток

2.10.Связывание галектинов с клетками, модифицированными неогликолипидами

2.12.2. Связывание галектинов, сорбированных на пластик, с С1ус-РАА-Ыо

1.4.2.2. Галектины и иммунная система

Введение Диссертация по биологии, на тему "Углеводная специфичность галектинов тандемного типа"

Лектины, взаимодействуя с гликоконъюгатами, принимают непосредственное участие в разнообразных процессах меж- и внутриклеточного узнавания. Интерес к эндогенным лектинам связан с их способностью индуцировать межклеточную адгезию при воспалительных процессах и метастазировании.

Галектины - (3-галактозидсвязывающие белки, один из классов эндогенных лектинов. Несмотря на многообразие функций, информация об истинной специфичности галектинов в составе клеток ограничена. Имеющиеся данные по углеводной специфичности, главным образом, получены с помощью различных бесклеточных тест-систем, которые не воспроизводят в полной мере особенности взаимодействия галектина с клеточными гликанами. В связи с этим представляет большой интерес изучение углеводной специфичности галектинов в составе клеток.

Цель данной работы - установить механизм, который обеспечивает избирательность связывания с лигандами клеточных галектинов тандемного типа.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать углеводную специфичность галектинов тандемного типа человека, как полноразмерных, так и однодоменных.

2. Провести сравнительный анализ углеводной специфичности куриного и человеческого галектинов-8.

3. Исследовать, какой из углеводсвязывающих доменов, ]М- или С-, участвует в заякоривании на клетке, и с какими гликанами он связывается; объяснить, какой из доменов (или оба) вовлечены в связывание с внешними гликанами.

4. Исследовать локализацию галектинов тандемного типа в гликокаликсе.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Вохмянина, Ольга Александровна

выводы

1. Предложен метод исследования углеводсвязывающей специфичности галектинов, который заключается в изучении взаимодействия клеток, нагруженных галектинами с экзогенными гликоконъюгатами. С помощью этого метода установлено, что галектины -4, -8 и -9 проявляют наибольшее сродство к группоспецифическим антигенам крови системы АВН.

2. Показано сходство куриного и человеческого галектинов-8 по их углеводной специфичности.

3. Установлено, что И-домен тандемных галектинов связывается с олиголактозаминами и отрицательно заряженными гликанами, а С-домен -с АВН-гликанами.

4. Показано, что галектины тандемного типа заякориваются на клетке предпочтительно с помощью Ы-домена, в то время как С-домен отвечает за взаимодействие с внешними лигандами.

5. Найдено, что общим свойством галектинов является неравномерное (в виде кластеров) аккумулирование в гликокаликсе клетки; в то же время характер распределения каждого галектина индивидуален.

6. //иовзаимодействие регулирует функциональную активность галектинов: с одной стороны, г/иол иганды маскируют галектины, предотвращая их взаимодействие с лигандами соседних клеток, с другой стороны, они же предотвращают взаимодействие с низкоаффинными лигандами, разрешая взаимодействие с высокоаффинными.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает признательность:

- Коллективу лаборатории углеводов ИБХ РАН и лично к.х.н. Пазыниной Г.В., к.х.н. Корчагиной Е.Ю., Рыжову И.М. за предоставленные образцы неогликоконъюгатов и неогликолипидов; д.х.н., проф. Бовину Н.В. за конструктивные замечания в обсуждении результатов диссертации, а также руководителю диссертационной работы к.х.н. Рапопорт Е.М. за терпение и неоценимую помощь в работе на всех её этапах: от планирования эксперимента до интерпретации полученных результатов.

- Коллективу лаборатории межклеточных взаимодействий ИБХ РАН и лично д.б.н., проф. Сапожникову A.M. и к.б.н. Свирщевской Е.В. за помощь в проведении цитофлуориметрии и конфокальной микроскопии;

- Dr. H.-J. Habius, Dr. S. Andre и H. Kaltner (Ludwig-Maximilians-University Munich, Munich, Germany) за предоставленные образцы галектинов и антител.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использованная в данной работе клеточная система позволила выявить углеводсвязывающий профиль галектинов -4, -8 и -9.

Несмотря на наличие двух углеводсвязывающих доменов, ключевая роль во взаимодействии с экзогенными (гаранс-гликанами) принадлежит С-УСД. Самыми аффинными лигандами для него являются АВН-гликаны, чем обусловлена предпочтительность связывания клеточных галектинов тандемного типа с группоспецифическим антигенам крови. Естественно возникает вопрос, каков биологический смысл высокого сродства галектинов тандемного типа к ним. В норме АВН-гликаны экспрессируются на мембранных гликопротеинах или гликолипидах эритроцитов, эпителиальных и эндотелиальных клеток, а также на секретируемых муцинах. Галектины экспрессируются на поверхности клетки при воспалительных процессах и онкотрансформации, поэтому связываться с АВН-гликанами в организме здоровых индивидуумов не могут. С другой стороны, некоторые патогенные бактерии и вирусы связывают А- и В-гликаны слизистой ротовой полости и желудочно-кишечного тракта человека. Можно предположить, что галектины ингибируют заражение, маскируя собственные А- и В-гликаны, или они узнают эти гликаны, когда они входят в состав клеточной стенки микроорганизмов. Кроме того, связывание галектинов -8 и -9 с АВН-гликанами эндотелиальных клеток может способствовать их миграции в прилежащую ткань. Таким образом, при регенерации поврежденных тканей галектины могут быть позитивными регуляторами ангиогенеза. Однако, при онкотрансформации стимуляция галектинами -4, -8 и -9 ангиогенеза способствует метастазированию опухолевых клеток. В этом случае создание синтетических ингибиторов связывания галектинов с АВН-гликанами может быть одним из эффективных средств в противоопухолевой терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Вохмянина, Ольга Александровна, Москва

1. Barondes SH, Leffler H. Soluble lactose-binding lectins from chicken and rat // Methods Enzymol. 1987. V. 138, P. 510-5.

2. Barondes SH, Castronovo V, Cooper DN, Cummings RD, Drickamer K, Feizi T, Gitt MA, Hirabayashi J, Hughes C, Kasai K. Galectins: a family of animal beta-galactoside-binding lectins // Cell. 1994. V. 76. P. 597-8.

3. Cooper, D.N.W., Barondes, S.H. God must love galectins. he made so many of them // Glycobiology. 1999. V. 9. P. 979-984.

4. Hernandez, J.D., Baum, L.G. Ah, sweet mystery of death! Galectins and control of cell fate // Glycobiology. 2002. V. 12. P. 127R-136R.

5. Leffler, H., Carlsson, S., Hedlund, M., Qian, Yu., Poirier, F. Introduction to galectins // Glycoconjugate J. 2004. V. 19. P. 433-440.

6. Norling LV, Perretti M, Cooper D. Endogenous galectins and the control of the host inflammatory response // J Endocrinol. 2009. V. 201. P. 16984.

7. Liu FT, Rabinovich G A. Galectins: regulators of acute and chronic inflammation//Ann N Y Acad Sci. 2010. V. 1183. P. 158-82.

8. Liu, F.-T. Regulatory roles of galectins in the immune response // Int. Arch. Allergy Immunol. 2005. V. 136. P. 385-400.

9. Hughes, R.C. Secretion of the galectin family of mammalian carbohydrate-binding proteins // Bichim. Biophys. Acta. 1999. V. 1473. P. 172185.

10. Nickel, W. The mystery of nonclassical protein secretion. A current view on cargo proteins and potential export routes // Eur. J. Biochem. 2003. V. 270. P. 2109-2119.

11. Seelenmeyer C, Wegehingel S, Tews I, Kiinzler M, Aebi M, Nickel W. Cell surface counter receptors are essential components of the unconventional export machinery of galectin-1 // J Cell Biol. 2005. V. 171. P. 373-81.

12. Barondes, S.H., Cooper, D.N., Gitt, M.A., Leffler, H. Galectins. Structure and function of a large family of animal lectins // J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 20807-20810.

13. Kasai K, Hirabayashi J. Galectins: a family of animal lectins that decipher glycocodes // J Biochem. 1996. V. 119. P. 1-8.

14. Houzelstein D, Gon9alves IR, Fadden AJ, Sidhu SS, Cooper DN, Drickamer K, Leffler H, Poirier F. Phylogenetic analysis of the vertebrate galectin family // Mol Biol Evol. 2004. V. 21. P. 1177-87.

15. Visegrady B, Than NG, Kilar F, Siimegi B, Than GN, Bohn H. Homology modelling and molecular dynamics studies of human placental tissue protein 13 (galectin-13) // Protein Eng. 2001. V. 11. P. 875-80.

16. Tasumi S, Vasta GR. A galectin of unique domain organization from hemocytes of the Eastern oyster (Crassostrea virginica) is a receptor for the protistan parasite Perkinsus marinus // J Immunol. 2007. V. 179. P. 3086-98.

17. Zick Y, Eisenstein M, Goren RA, Hadari YR, Levy Y, Ronen D. Role of galectin-8 as a modulator of cell adhesion and cell growth // Glycoconj J. 2004. V. 19. P. 517-26.

18. Yang RY, Hsu DK, Yu L, Chen HY, Liu FT. Galectin-12 is required for adipogenic signaling and adipocyte differentiation // J Biol Chem. 2004. V. 279. P. 29761-6.

19. Wei Q, Eviatar-Ribak T, Miskimins WK, Miskimins R. Galectin-4 is involved in p27-mediated activation of the myelin basic protein promoter // J Neurochem. 2007. V. 101(5). P. 1214-23.

20. Tardy F, Deviller P, Louisot P, Martin A. Purification and characterization of the N-terminal domain of galectin-4 from rat small intestine // FEBS Lett. 1995. V. 59. P. 169-72.

21. Rechreche H, Mallo GV, Montalto G, Dagorn JC, Iovanna JL. Cloning and expression of the mRNA of human galectin-4, an S-type lectin down-regulated in colorectal cancer // Eur J Biochem. 1997. V. 248. P. 225-30.

22. Chiu ML, Parry DA, Feldman SR, Klapper DG, O'Keefe EJ. An adherens junction protein is a member of the family of lactose-binding lectins // J Biol Chem. 1994. V. 269. P. 31770-6.

23. Jiang W, Puch S, Guo X, Bhavanandan VP. Signature sequences for the galectin-4 subfamily // IUBMB Life. 1999. V. 48. P. 601-5.1.l

24. Cooper DN, Barondes SH. Evidence for export of a muscle lectin from cytosol to extracellular matrix and for a novel secretory mechanism // J Cell Biol. 1990. V. 110. P. 1681-91.

25. Sato, S., and Hughes, R. C. Regulation of secretion and surface expression ofMac-2, a galactoside-binding protein of macrophages // J Biol Chem. 1994. V. 69, P. 4424-4430.

26. Wooters MA, Ropp SL, Erickson AK. Identification of galectin-4 isoforms in porcine small intestine // Biochimie. 2005. V. 87. P. 143-9.

27. Gitt MA, Colnot C, Poirier F, Nani KJ, Barondes SH, Leffler H. Galectin-4 and galectin-6 are two closely related lectins expressed in mouse gastrointestinal tract // J Biol Chem. 1998. V. 273. P. 2954-60.

28. Hadari YR, Paz K, Dekel R, Mestrovic T, Accili D, Zick Y. Galectin-8. A new rat lectin, related to galectin-4 // J Biol Chem. 1995. V. 27. P. 3447-53.

29. Gopalkrishnan RV, Roberts T, Tuli S, Kang D, Christiansen KA, Fisher PB. Molecular characterization of prostate carcinoma tumor antigen-1, PCTA-1, a human galectin-8 related gene // Oncogene. 2000. V. 19(38). P. 4405-16.

30. Bidon N, Brichory F, Hanash S, Bourguet P, Dazord L, Le Pennec JP. Two messenger RNAs and five isoforms for P066-CBP, a galectin-8 homolog in a human lung carcinoma cell line // Gene. 2001c. V. 274(1-2). P. 253-62.

31. Nishi N, Itoh A, Shoji H, Miyanaka H, Nakamura T. Galectin-8 and galectin-9 are novel substrates for thrombin // Glycobiology. 2006. V. 16. P. 15C-20C.

32. Bidon-Wagner, N., Le Pennec, J.-P. Human galectin-8 isoforms and112cancer// Glycoconjugate J. 2004. V. 19. P. 557-563.

33. Tureci O, Schmitt H, Fadle N, Pfreundschuh M, Sahin U. Molecular definition of a novel human galectin which is immunogenic in patients with Hodgkin's disease // J Biol Chem. 1997. V. 272. P. 6416-22.

34. Wada J, Kanwar YS: Identification and characterization of galectin-9, a novel ß-galactoside-binding mammalian lectin // J Biol Chem. 1997a. V. 272. P. 6416-6422.

35. Cooper, D.N.W. Galectinomics: finding themes in complexity // Bichim. Biophys. Acta. 2002. V. 1572. P. 209-231.

36. Matsumoto R, Matsumoto H, Seki M, Hata M, Asano Y, Kanegasaki S, Stevens RL, Hirashima M. Human ecalectin, a variant of human galectin-9, is a novel eosinophil chemoattractant produced by T lymphocytes // J Biol Chem. 1998. V. 273. P. 16976-84.

37. Hirashima M. Ecalectin/Galectin-9, a novel eosinophil chemoattractant: its function and production // INT Arch Allergy Immunol. 2000. V. 122(suppl 1). P. 6-9.

38. Hirashima M: Ecalectin as a T cell-derived eosinophil chemoattractant // INT Arch Allergy Immunol. 1999. V. 120(suppl 1). P. 7-10.

39. Matsushita N, Nishi N, Seki M, Matsumoto R, Kuwabara I, Liu FT, Hata Y, Nakamura T, Hirashima M. Requirement of divalent galactoside113binding activity of ecalectin/galectin-9 for eosinophil chemoattraction // J Biol Chem. 2000. V. 275. P. 8355-60.

40. Hirashima M, Kashio Y, Nishi N, Yamauchi A, Imaizumi TA, Kageshita T, Saita N, Nakamura T. Galectin-9 in physiological and pathological conditions // Glycoconj J. 2004. V. 19. P. 593-600.

41. Spitzenberger F, Graessler J, Schroeder HE. Molecular and functional characterization of galectin 9 mRNA isoforms in porcine and human cells and tissues // Biochimie. 2001. V. 83. P. 851-62.

42. Lipkowitz MS, Leal-Pinto E, Cohen BE, Abramson RG. Galectin 9 is the sugar-regulated urate transporter/channel UAT // Glycoconj J. 2004. V. 19. P. 491-8.

43. Lensch M, Lohr M, Russwurm R, Vidal M, Kaltner H, Andre S, Gabius HJ. Unique sequence and expression profiles of rat galectins-5 and -9 as a result of species-specific gene divergence // Int J Biochem Cell Biol. 2006. V. 38. P. 1741-58.

44. Gitt MA, Wiser MF, Leffler H, Herrmann J, Xia YR, Massa SM, Cooper DN, Lusis AJ, Barondes SH. Sequence and mapping of galectin-5, a beta-galactoside-binding lectin, found in rat erythrocytes // J Biol Chem. 1995. V. 270(10). P. 5032-8.

45. Cerra RF, Gitt MA, Barondes SH. Three soluble rat beta-galactoside-binding lectins // J Biol Chem. 1985. V. 260. P. 10474-7.

46. Leffler H, Masiarz FR, Barondes SH. Soluble lactose-binding vertebrate lectins: a growing family // Biochemistry. 1989. V. 28. P. 9222-9.

47. Yang, R.Y., Hsu, D.K., Yu, L., Ni, J., Liu, F.-T. Cell cycle regulation by galectin-12, a new member of the galectin superfamily // J Biol Chem. 2001. V. 276. P. 20252-20260.

48. Oda Y, Herrmann J, Gitt MA, Turck CW, Burlingame AL, Barondes SH, Leffler H. Soluble lactose-binding lectin from rat intestine with two different carbohydrate-binding domains in the same peptide chain // J Biol Chem. 1993. V. 268, P. 5929-39.

49. Rini, J.M., Lobsanov, Y.D. New animal lectin structures // Curr. Opin. Struct. Biol. 1999. V. 9. P. 578-584.

50. Brinda, K.V., Surolia, A., Vishveshwara, S. Insights into the quaternary association of proteins through structure graphs: a case study of lectins // Biochem. J. 2005. V. 391. P. 1-15.

51. Carlsson S, Carlsson MC, Leffler H. Intracellular sorting of galectin-8 based on carbohydrate fine specificity // Glycobiology. 2007b. V. 17. P. 906-12.

52. Nagae M, Nishi N, Murata T, Usui T, Nakamura T, Wakatsuki S, Kato R. Structural analysis of the recognition mechanism of poly-Nacetyllactosamine by the human galectin-9 N-terminal carbohydrate recognition domain // Glycobiology. 2009. V. 19. P. 112-7.

53. Yoshida H, Teraoka M, Nishi N, Nakakita S, Nakamura T, Hirashima M, Kamitori S. X-ray structures of human galectin-9 C-terminal domain in complexes with a biantennary oligosaccharide and sialyllactose // J Biol Chem. 2010. V. 285. P. 36969-76.

54. Ideo, H., Seko, A., Ishizuka, I., Yamashita, K. The N-terminal carbohydrate recognition domain of galectin-8 recognizes specific glycosphingolipids with high affinity // Glycobiology. 2003. V. 13. P. 713-723.

55. Ford MG, Weimar T, Kôhli T, Woods RJ. Molecular dynamics simulations of galectin-1-oligosaccharide complexes reveal the molecular basis for ligand diversity // Proteins. 2003. V. 53. P. 229-40.

56. Krejcirikova V, Pachl P, Fabry M, Maly P, Rezacova P, Brynda J: Structure of the mouse galectin-4 N-terminal carbohydrate-recognition domain reveals the mechanisms of oligosaccharide recognition // Acta Cryst. 2011. V. D67. P. 204-211.

57. Бовин H.B. Гликоконъюгаты на основе полиакрил амида -инструменты для изучения лектинов, антител, гликозилтрансфераз в гликобиологии, цитохимии и гистохимии // Биоорг. Химия. 1996. Т. 22 (9). С. 643-663.

58. Lee RT, Lee YC. Affinity enhancement by multivalent lectin-carbohydrate interaction // Glycoconj J. 2000. V. 17(7-9). P. 43-51.116

59. Dam TK, Gabius HJ, André S, Kaltner H, Lensch M, Brewer CF. Galectins bind to the multivalent glycoprotein asialofetuin with enhanced affinities and a gradient of decreasing binding constants // Biochemistry. 2005. V. 44(37). P. 12564-71.

60. Consortium for Functional Glycomics. URL: http://www.functionalglycomics.org.

61. Ideo H, Seko A, Ohkura T, Matta KL, Yamashita K. High-affinity binding of recombinant human galectin-4 to SO(3)(-)>3Galbetal>3GalNAc pyranoside // Glycobiology. 2002. V. 12. P. 199-208.

62. Wu AM, Wu JH, Tsai MS, Liu JH, André S, Wasano K, Kaltner H, Gabius HJ. Fine specificity of domain-I of recombinant tandem-repeat-type galectin-4 from rat gastrointestinal tract (G4-N) // Biochem J. 2002. V. 367. P. 653-64.

63. Stowell SR, Arthur CM, Slanina KA, Horton JR, Smith DF, Cummings RD. Dimeric Galectin-8 induces phosphatidylserine exposure in leukocytes through polylactosamine recognition by the C-terminal domain // J Biol Chem. 2008. V. 283. P. 20547-59.

64. Ideo H, Matsuzaka T, Nonaka T, Seko A, Yamashita K: Galectin-8-N-domain recognition mechanisms for sialylated and sulfated glycans // J Biol Chem. 2011. V. 286. P. 11346-55.

65. Levy Y, Auslender S, Eisenstein M, Vidavski RR, Ronen D, Bershadsky AD, Zick Y. It depends on the hinge: a structure-functional analysis of galectin-8, a tandem-repeat type lectin // Glycobiology. 2006. V. 16. P. 463-76.

66. Earl LA, Bi S, Baum LG. Galectin multimerization and lattice formation are regulated by linker region structure // Glycobiology. 2011. V. 21. P. 6-12.

67. Hadari YR, Arbel-Goren R, Levy Y, Amsterdam A, Alón R, Zakut R, Zick Y. Galectin-8 binding to integrins inhibits cell adhesion and induces apoptosis // J Cell Sci. 2000. V. 113. P. 2385-97.118

68. Levy Y, Arbel-Goren R, Hadari YR, Eshhar S, Ronen D, Elhanany E, Geiger B, Zick Y. Galectin-8 functions as a matricellular modulator of cell adhesion//J Biol Chem. 2001. V. 276. P. 31285-95.

69. Dumic J, Dabelic S, Flôgel M. Galectin-3: an open-ended story // Biochim Biophys Acta. 2006. V. 1760(4). P. 616-35.

70. Niepceron E, Simian F, Louisot P, Biol-N'garagba MC. Expression of galectin 4 in the rat small intestine during postnatal development // Biochimie. 2004a. V. 86(2). P. 115-8.

71. Niepceron E, Simian-Lermé F, Louisot P, Biol-N'garagba MC. Expression and localization of galectin 4 in rat stomach during postnatal development // Int J Biochem. Cell Biol. 2004b. V. 36(5). P. 909-19.

72. Nio-Kobayashi J, Takahashi-Iwanaga H, Iwanaga T. Immunohistochemical localization of six galectin subtypes in the mouse digestive tract // J Histochem Cytochem. 2009. V. 57(1). P. 41-50.

73. Harrison WJ, Bull JJ, Seltmann H, Zouboulis CC, Philpott MP. Expression of lipogenic factors galectin-12, resistin, SREBP-1, and SCD in human sebaceous glands and cultured sebocytes // J Invest Dermatol. 2007. V. 127(6). P. 1309-17.

74. Stancic M, van Horssen J, Thijssen VL, Gabius HJ, van der Valk P, Hoekstra D, Baron W. Increased expression of distinct galectins in multiple sclerosis lesions // Neuropathol Appl Neurobiol. 2011. V. 37(6). P. 654-71.

75. Matsuura A, Tsukada J, Mizobe T, Higashi T, Mouri F, Tanikawa R, Yamauchi A, Hirashima M, Tanaka Y. Intracellular galectin-9 activates inflammatory cytokines in monocytes // Genes Cells. 2009. V. 14(4). P. 511-21.

76. Cattaneo V, Tribulatti M, Campetella O: Galectin-8 tandem-repeat is essential for T-cell proliferation but not for co-stimulation // Biochem. J. 2011. V. 434. P. 153-160.

77. Bassen R, Brichory F, Caulet-Maugendre S, Bidon N, Délavai P, Desrues B, Dazord L. Expression of P066-CBP, a type-8 galectin, in different healthy, tumoral and peritumoral tissues // Anticancer Res. 1999. V. 19(6B). P. 5429-33.

78. Bidon N, Brichory F, Thomas D, Cavalier A, Caulet-Maugendre S, Bourguet P, Dazord L. Sodium butyrate induces growth inhibition and modulates galectin-8 expression in human lung carcinoma cells // Anticancer Res. 2001a. V. 21(2A). P. 1049-55.

79. Yamauchi A, Kontani K, Kihara M, Nishi N, Yokomise H, Hirashima M. Galectin-9, a novel prognostic factor with antimetastatic potential in breast cancer // Breast J. 2006. V. 12. P. 196-200.

80. Huflejt ME, Leffler H. Galectin-4 in normal tissues and cancer // Glycoconj J. 2004. V. 20. P. 247-55.

81. Rumilla KM, Erickson LA, Erickson AK, Lloyd RV. Galectin-4 expression in carcinoid tumors // Endocr Pathol. 2006. V. 17(3). P. 243-9.

82. Ideo H, Seko A, Yamashita K. Galectin-4 binds to sulfated glycosphingolipids and carcinoembryonic antigen in patches on the cell surface of human colon adenocarcinoma cells // J Biol Chem. 2005. V. 280. P. 4730-7.

83. Satelli A, Rao PS, Thirumala S, Rao US. Galectin-4 functions as a tumor suppressor of human colorectal cancer // Int J Cancer. 2011. V. 129(4). P. 799-809.

84. Lee S, Bang S, Song K, Lee I. Differential expression in normal-adenoma-carcinoma sequence suggests complex molecular carcinogenesis in colon // Oncol Rep. 2006. V. 16(4). P. 747-54.

85. Tripodi D, Quemener S, Renaudin K, Ferron C, Malard O, Guisle-Marsollier I, Sebille-Rivain V, Verger C, Geraut C, Gratas-Rabbia-Re C. Gene expression profiling in sinonasal adenocarcinoma // BMC Med Genomics. 2009. V. 2. P. 65.

86. Henno S, Brichory F, Langanay T, Desrues B, Bidon N, Délavai P, Ramee MP, Dazord L, Caulet-Maugendre S. Expression of P066-CBP, a galectin-8, in different types of primary and secondary broncho-pulmonary tumors // Oncol Rep. 2002. V. 9(1). P. 177-80.

87. Dong GW, Kim J, Park JH, Choi JY, Cho SI, Lim SC. Galectin-8 expression in laryngeal squamous cell carcinoma // Clin Exp Otorhinolaryngol. 2009. V. 2. P. 13-9.

88. Kramer MW, Waalkes S, Serth J, Hennenlotter J, Tezval H, Stenzl A, Kuczyk MA, Merseburger AS. Decreased galectin-8 is a strong marker for recurrence in urothelial carcinoma of the bladder // Urol Int. 2011. V. 87(2). P. 143-50.

89. Irie A, Yamauchi A, Kontani K, Kihara M, Liu D, Shirato Y, Seki M, Nishi N, Nakamura T, Yokomise H, Hirashima M. Galectin-9 as a prognostic factor with antimetastatic potential in breast cancer // Clin Cancer Res. 2005. V. 11. P. 2962-8.

90. Liang M, Ueno M, Oomizu S, Arikawa T, Shinonaga R, Zhang S, Yamauchi A, Hirashima M. Galectin-9 expression links to malignant potential of cervical squamous cell carcinoma // J Cancer Res Clin Oncol. 2008. V. 134(8). P. 899-907.

91. Lee A, Chick JM, Kolarich D, Haynes PA, Robertson GR, Tsoli M, Jankova L, Clarke SJ, Packer NH, Baker MS. Liver membrane proteome glycosylation changes in mice bearing an extra-hepatic tumor // Mol Cell Proteomics. 2011. V. 10 (9).

92. Watanabe M, Takemasa I, Kaneko N, Yokoyama Y, Matsuo E, Iwasa S, Mori M, Matsuura N, Monden M, Nishimura O. Clinical significance of circulating galectins as colorectal cancer markers // Oncol Rep. 2011. V. 25(5). P. 1217-26.

93. Kashio Y, Nakamura K, Abedin MJ, Seki M, Nishi N, Yoshida N, Nakamura T, Hirashima M. Galectin-9 induces apoptosis through the calcium-calpain-caspase-1 pathway // J Immunol. 2003. V. 170. P. 3631-3636.

94. Makishi S, Okudaira T, Ishikawa C, Sawada S, Watanabe T, Hirashima M, Sunakawa H, Mori N. A modified version of galectin-9 induces cell cycle arrest and apoptosis of Burkitt and Hodgkin lymphoma cells // Br J Haematol. 2008. V. 142. P. 583-94.

95. Arbel-Goren R, Levy Y, Ronen D, Zick Y. Cyclin-dependent kinase inhibitors and JNK act as molecular switches, regulating the choice between growth arrest and apoptosis induced by galectin-8 // J Biol Chem. 2005. V. 280(19). P. 19105-14.

96. Kaltner H, Stierstorfer B. Animal lectins as cell adhesion molecules // Acta Anat (Basel). 1998. V. 161(1-4). P. 162-79.

97. Hughes RC. Galectins as modulators of cell adhesion // Biochimie. 2001. V. 83(7). P. 667-76.

98. Rabinovich GA, Rubinstein N, Toscano MA. Role of galectins in inflammatory and immunomodulatory processes // Biochim Biophys Acta. 2002. V. 1572(2-3). P. 274-84.

99. Yamamoto H, Nishi N, Shoji H, Itoh A, Lu LH, Hirashima M, Nakamura T. Induction of cell adhesion by galectin-8 and its target molecules in Jurkat T-cells // J Biochem. 2008. V. 143. P. 311-24.

100. Diskin S, Cao Z, Leffler H, Panjwani N. The role of integrin glycosylation in galectin-8-mediated trabecular meshwork cell adhesion and spreading // Glycobiology. 2009. V. 19(1). P. 29-37.

101. Nishi N, Shoji H, Seki M, Itoh A, Miyanaka H, Yuube K, Hirashima M, Nakamura T. Galectin-8 modulates neutrophil function via interaction with integrin alphaM // Glycobiology. 2003. V. 13(11). P. 755-63.

102. Cueni LN, Detmar M. Galectin-8 interacts with podoplanin and modulates lymphatic endothelial cell functions // Exp Cell Res. 2009. V. 315. P. 1715-23.

103. Raica M, Cimpean AM, Ribatti D. The role of podoplanin in tumor progression and metastasis // Anticancer Res. 2008. V. 28(5B). P. 2997-3006.

104. Ideo H, Seko A, Yamashita K. Recognition mechanism of galectin-4 for cholesterol 3-sulfate // J Biol Chem. 2007. V. 282. P. 21081-9.

105. Brennan MJ, Hannah JH, Leininger E. Adhesion of Bordetella pertussis to sulfatides and to the GalNAc beta 4Gal sequence found in glycosphingolipids // J Biol Chem. 1991. V. 266(28). P. 18827-31.

106. Teneberg S, Miller-Podraza H, Lampert HC, Evans DJ Jr, Evans DG, Danielsson D, Karlsson KA. Carbohydrate binding specificity of the neutrophil-activating protein of Helicobacter pylori // J Biol Chem. 1997. V. 272(30). P. 19067-71.

107. Ishizuka I. Chemistry and functional distribution of sulfoglycolipids // Prog Lipid Res. 1997. V. 36(4). P. 245-319.

108. Sato S, Hughes RC. Binding specificity of a baby hamster kidney lectin for H type I and II chains, polylactosamine glycans, and appropriately glycosylated forms of laminin and fibronectin // J Biol Chem. 1992. V. 267(10). P. 6983-90.

109. Krzeslak A, Lipinska A. Galectin-3 as a multifunctional protein // Cell Mol Biol Lett. 2004. V. 9(2). P. 305-28.

110. Camby I, Le Mercier M, Lefranc F, Kiss R. Galectin-1: a small protein with major functions // Glycobiology. 2006. V. 16(11). P. 137R-157R.

111. Tribulatti M.V., Mucci J., Cattaneo V., Aguero F., Gilmartin T., Head S.R., Campetella O. Galectin-8 induces apoptosis in the CD4highCD8high thymocyte subpopulation // Glycobiology. 2007. V. 17. P. 1404-1412.

112. Paclik D, Danese S, Berndt U, Wiedenmann B, Dignass A, Sturm A. Galectin-4 controls intestinal inflammation by selective regulation of peripheral and mucosal T cell apoptosis and cell cycle // PLoS One. 2008. V. 3(7). P. e2629.

113. Lu L.-H., Nakagawa R., Kashio Y., Ito A., Shoji H., Nishi N., Hirashima M., Yamauchi A., Nakamura T. Characterization of galectin-9-induced death of Jurkat T cells // Journal of Biochemistry. 2007. V. 141. P. 157-172.

114. Zhu C, Anderson AC, Schubart A, Xiong H, Imitola J, Khoury SJ, Zheng XX, Strom TB, Kuchroo VK. The Tim-3 ligand galectin-9 negatively regulates T helper type 1 immunity // Nat Immunol. 2005. V. 6. P. 1245-52.

115. Naka EL, Ponciano VC, Cenedeze MA, Pacheco-Silva A, Cámara NO. Detection of the Tim-3 ligand, galectin-9, inside the allograft during a rejection episode // Int Immunopharmacol. 2009. V. 9. P. 658-62.

116. Nakae S, Iikura M, Suto H, Akiba H, Umetsu DT, Dekruyff RH, Saito H, Galli SJ. TIM-1 and TIM-3 enhancement of Th2 cytokine production by mast cells // Blood. 2007. V. 110(7). P. 2565-8.

117. Hastings WD, Anderson DE, Kassam N, Koguchi K, Greenfield EA, Kent SC, Zheng XX, Strom TB, Hafler DA, Kuchroo VK. TIM-3 is expressed on activated human CD4+ T cells and regulates Thl and Thl7 cytokines // Eur J Immunol. 2009. V. 39(9). P. 2492-501.

118. Stowell SR, Karmakar S, Stowell CJ, Dias-Baruffi M, McEver RP, Cummings RD. Human galectin-1, -2, and -4 induce surface exposure of phosphatidylserine in activated human neutrophils but not in activated T cells // Blood. 2007. V. 109. P. 219-27.

119. Wang F, Xu J, Liao Y, Wang Y, Liu C, Zhu X, Chen ZK, Sun Z. Tim-3 ligand galectin-9 reduces IL-17 level and accelerates Klebsiella pneumoniae infection // Cell Immunol. 2011. V. 269(1). P. 22-8.

120. Бережная H.M., Чехун В.Ф. Иммунология злокачественного роста / Бережная Н.М. Киев. : Наукова думка, 1995. - 790 с.

121. Tanikawa R, Tanikawa T, Hirashima M, Yamauchi A, Tanaka Y. Galectin-9 induces osteoblast differentiation through the CD44/Smad signaling pathway // Biochem Biophys Res Commun. 2010. V. 394(2). P. 317-22.

122. Takahashi Y, Fukusato T, Kobayashi Y, Akiyama S, Tamatani T, Shiga J, Mori S. High expression of eosinophil chemoattractant ecalectin/galectin-9 in drug-induced liver injury // Liver Int. 2006. V. 26. P. 106-15.

123. Danielsen EM, van Deurs B. Galectin-4 and small intestinal brush border enzymes form clusters // Mol Biol Cell. 1997. V. 8(11). P. 2241-51.

124. Rapoport EM, Pochechueva TV, Kurmyshkina OV, Pazynina GV, Severov VV, Gordeeva EA, Belyanchikov IM, André S, Gabius HJ, Bovin NV. Solid-phase assays for study of carbohydrate specificity of galectins // Biochemistry (Mosc). 2010. V. 75. P. 310-9.

125. Heathcote D, Carroll T, Wang JJ, Flower R, Rodionov I, Tuzikov A, Bovin N, Henry S. Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto red blood cells // Transfusion. 2010. V. 50. P. 635-41.

126. Blake DA, Bovin NV, Bess D, Henry SM. FSL constructs: a simple method for modifying cell/virion surfaces with a range of biological markers without affecting their viability // J Vis Exp. 2011. V. 5. P. doi: 10.3791/3289.

127. Crocker PR. Siglecs: sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectins in cell-cell interactions and signaling // Curr Opin Struct Biol. 2002. V. 12(5). P. 609-15.

128. Wu AM, Wu JH, Tsai MS, Kaltner H, Gabius HJ. Carbohydrate specificity of a galectin from chicken liver (CG-16) // Biochem J. 2001. V. 358. P. 529-38.

129. Curry FE, Adamson RH. Endothelial glycocalyx: permeability barrier and mechanosensor // Ann Biomed Eng. 2012. V. 40(4). P. 828-39.

130. Martins Mde F, Bairos VA. Glycocalyx of lung epithelial cells // Int Rev Cytol. 2002. V. 216. P. 131-73.