Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Цитологический скрининг рака шейки матки
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Цитологический скрининг рака шейки матки"

На правах рукописи

003057Т80

Родионова Ольга Михайловна ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

003057780

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию и Тихоокеанском институте биоорганической химии

ДВО РАН

Научный руководитель

Научный консультант

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Апанасевич Владимир Иосифович

кандидат химических наук, Булгаков Александр Александрович

доктор биологических наук, Вараксин Анатолий Алексеевич; кандидат медицинских наук, Фисенко Александр Иванович

Ведущая организация

Российская медицинская академия последипломного образования

Защита состоится " ¿5" 2007г. в -/¿^часов на заседании

диссертационного совета Д 208. 007. 01 при ГОУ ВПО Владивостокском государственном медицинском университете Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 690990, г. Владивосток, пр-т Острякова, 2.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета (г. Владивосток, пр-т Острякова, 2).

Автореферат разослан "

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Рева Г. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Рак шейки матки (РШМ) относится к наиболее распространенным и социально значимым онкологическим заболеваниям. Ежегодно в мире диагностируется от 450 до 500 тысяч новых случаев РШМ, и ежегодно умирают от него около 231 ООО женщин (Parkin D.M. et al., 2001, 2005). В России в структуре заболеваемости среди злокачественных новообразований у женщин РШМ занимает четвертое место, а в структуре смертности находится на 6-м месте (Петрова Г.В., 2003; Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2004; Хасанов Р.Ш., 2006).

К большому сожалению, доля больных РШМ, выявленных на ранних стадиях, остается относительно небольшой. Внедрение скрининговых программ в США позволяет выявить в преинвазивной стадии более 2/3 новообразований шейки матки и 70% - 80% больных в I - II стадиях заболевания (Петрова Г.В., 2003; Чиссов В.И. и др., 2005). В России в среднем только у 10% больных, взятых на учет по поводу рака шейки матки, выявляются ранние (0 - I а) стадии, у 58,7% пациенток - в I - II стадиях заболевания. Инвазивные и распространенные стадии РШМ выявляются у больных в широком диапазоне значений от 24,7% до 90,2% (Кравец Б.Б. и др., 2001; Черенков В.Г. и др., 2001; Невожай В.И., Юдин C.B., 2002; Петрова Г.В., 2003; Чиссов В.И. и др., 2005; Хасанов Р.Ш., 2006).

Лабораторные методы исследования позволяют выявить только морфологические изменения эпителия шейки матки и цервикального канала (Шиллер-Волкова H.H. и др., 1964; Абрамов М.Г., 1974; Петрова A.C., Птохов М.П., 1976; Cardozo P.L., 1976; Базарнова М.Л., 1988; Andereon MJ8., 1997; Хмельницкий O.K., 2000; Шабанова И.П., 2001; Шабанова И.П., Касоян К.Т., 2006). Стандартом раннего (доклинического) выявления РШМ является цитологический метод. Цитологический скрининг привел к снижению уровня заболеваемости и смертности от РШМ в каждой стране, где была внедрена соответствующая программа. Однако чувствительность цитологического метода остается недостаточно высокой и составляет от 5% до 83,3% (Koss

L.G., 1989; Davidson J., Marty J., 1994; Подистов Ю.И., 2005; Doh A.S. et al., 2005;Vuysta H. De. et al., 2005). В последние годы в некоторых странах отмечается повышение уровня заболеваемости и смертности (Аксель Е.М., Давыдов М.И., 2002; Чиссов В.Й. и др., 2005). С внедрением новых цитологических и биохимических методов исследования (определение плойдности ядер, вирусные и тканевые биомаркеры; белки: bel, Е - 6, Е — 7 и др.) появились новые диагностические возможности выявления РШМ на доклиническом этапе (Wisman G. Bea A. et al., 2001; Wolf J. К. et al., 2003; Автандилов Г.Г. и др., 2004; Goel М.М. et al., 2005; Карселадзе А.И., 2006; Манухин И.Б., Минкина Г.Н., 2006; Подистов Ю.И. и др., 2006).

Развитие доклинической диагностики РШМ во второй половине 20 века пошло по пути определения в сыворотке крови опухолевых маркеров (ОМ). Для диагностики РШМ наиболее значимыми были признаны антиген плоскоклеточной карциномы (SCC), специфический тканевой полипептид (TPS) и раково-эмбриональный антиген (РЭА). Однако большинство из предложенных маркеров обладают недостаточно высокой чувствительностью и специфичностью. При этом только SCC применяется для мониторинга течения плоскоклеточного РШМ, прогноза и эффективности проводимого лечения (Pras Е. et al., 2002; Сергеева Н.С. и др., 2004).

На этом фоне весьма перспективным является разработка новых подходов, позволяющих определять ранние биохимические нарушения, коррелирующие с неопластической трансформацией. Перспективным в этом направлении является исследование уровня РЭА/РЭА подобных антигенов в вагинальном секрете (Булгаков А.А. и др., 2005). Поиск новых систем диагностики с использованием компонентов, специфически связывающихся с РЭА/РЭА-подобными структурами, является актуальным и необходимым.

Ранее из целомическэй жидкости голотурии Apostichopus japanicm (дальневосточного трепанга) учеными Тихоокеанского института биоорганической химии был выделен и охарактеризован лектин, получивший название маннан-связывающего лекпша трепанга (МСЛ-Т). В современном

представлении лектины - это обширная группа белков, обладающих общим свойством обратимо и избирательно связывать углеводные детерминанты гликоконьюгатов. Эта принципиальная особенность лектинов нашла практическое применение при диагностике ряда злокачественных новообразований, сопровождающимися изменениями углеводного состава гликоконьюгатов (йаЫш Н., 2002; Капра-Маккег Р. е1 а1., 2002). Было показано, что МСЛ-Т специфически взаимодействует с углеводными цепями РЭА. Это свойство МСЛ-Т, а также содержание РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах (ВС), послужило предпосылкой для проведения сравнительного изучения вагинальных секретов у здоровых женщин, у женщин с доброкачественными процессами и РШМ.

Цель исследования: Усовершенствовать методы диагностики рака шейки матки.

Задачи исследования:

1. Оценить информативность цитологического материала, полученного при скрининге рака шейки матки с применением традиционного набора инструментов и комбинации цервикальной щетки СуШЬгшЪ и деревянного шпателя Эйра.

2. Оптимизировать метод получения качественного материала для цитологического исследования при атрофической слизистой шейки матки.

3. Оценить риск развития РШМ в группе женщин при наличии положительного цитологического заключения о злокачественном поражении шейки матки при отрицательном результате гистологического исследования.

4. Разработать новый лектин-иммуноферментный метод определения РЭА, РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах у здоровых женщин, с доброкачественными процессами и у женщин с раком шейки матки. Оценить перспективы применения метода в диагностике РШМ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Использование комбинации цервикальной щетки СуЬ>ЬтзЬ и деревянного шпателя Эйра улучшает качество цитологических исследований при скрининге рака шейки матки.

2. При наличии ложной цитологической гипердиагностики РШМ и гистологической гиподиагностики пациенты нуждаются в динамическом наблюдении для своевременного выявления раннего рака шейки матки.

3. Возможна дополнительная диагностика рака шейки матки при использовании лектин-иммуноферментного метода определения РЗА/РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах.

Научная новизна исследования. Показана возможность повышения эффективности доклинической диагностики рака шейки матки при цитологическом скрининге.

Снижение уровня концентрации лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов (ЛСД), выявляемое разработанным нами лектин-иммуноферментным методом в вагинальном секрете, показало значительную корреляцию со злокачественными заболеваниями шейки матки.

Практическая значимость работы. Выявлена достоверная закономерная зависимость ложноотрицательных цитологических результатов от качества цитологических препаратов.

Разработан лектин-иммуноферментный метод диагностики РШМ по вагинальному секрету. Установлена диагностическая ценность метода с определением чувствительности и специфичности.

Внедрение результатов в практику. Полученные данные используются в работе цитологических лабораторий, женских консультаций и смотровых кабинетов г. Владивостока, Приморского края. Они внедрены в учебный процесс института повышения квалификации врачей ВГМУ (для врачей клинической лабораторной диагностики, клинических интернов), студентов 4-6 курсов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены и обсуждены на краевой научно-практической конференции врачей гинекологов-эндокринологов (Владивосток, 2004; 2005); 6-ой Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2005); краевом научно-практическом семинаре «Междисциплинарный подход к диагностике и лечению пролиферативных процессов репродуктивной системы» (Владивосток, 2006) и на краевой научно-практической конференции врачей онкологов (Владивосток, 2006).

Публикации. Основные положения диссертационной работы нашли свое отражение в 17 печатных работах.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, глав: «Характеристика материалов и методов исследования», «Эффективность цитологического скрининга рака шейки матки», «Организационные аспекта скрининга рака шейки матки», «Перспективы использования маннан-связывающего лектина дальневосточной голотурии {АровНсИорш ]аропгсш) в диагностике рака шейки матки», обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы, который состоит из 84 отечественных и 149 зарубежных источников. Диссертация изложена на 139 страницах, содержит 11 таблиц и 21 рисунок.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. В настоящей работе были проанализированы 698866 цитологических заключений материала, полученного при скрининге рака шейки матки у женщин г. Владивостока с 1 января 1992 г. по 31 декабря 2003 г.

Был разработан и применен метод лектин-иммуноферментной диагностики РШМ у 90 пациенток.

Цитологические методы

Материал для цитологического исследования получали в соответствии с Приказом №270 МЗ РФ от 12 .09.97 «О мерах по улучшению организации онкологической помощи населению Российской Федерации». Мазки брали как по общепринятой методике, так и но предложенному нами методу. Материал получали со всей поверхности влагалищной части шейки матки с захватом зоны трансформации путем соскоба обратной стороной деревянного шпателя Эйра. Такое применение шпателя продиктовано тем, что не существует шпателя, который по форме идеально подходил для любой шейки матки. После этого получали материал из цервикального канала при помощи щетки Cytobrush (Medscand Plus, Швеция) (производили четыре вращения вокруг оси на 360 0 — два раза по часовой стрелке, два раза против часовой стрелки и два поступательных движения по оси цервикального канала). Обработку цитологических микропрепаратов проводили по общепринятым методикам (Петрова A.C.,1985; Шабалова И.П., 2001). Цитологический диагноз устанавливался в соответствии с классификацией, принятой в России (сходная с ней классификация TBS, 2001) (Шабалова И.П., 2001; Solomon D. et al., 2004).

Лектин-иммуноферментный метод

Принцип: Маннан-связывающий лекган трепанга специфически связывается с углеводными структурами раково-эмбрионального антигена, адсорбированного на лунках полистирольного микропланшета Maxisorb (Costar, USA). Это гетерогенный, твердофазный метод анализа, основанный на выявлении двух типов антигенных детерминант белковой и углеводной природы.

Приборы и реактивы: Сканирующий спектрофотометр Multiscan II (Финляндия), гоейкер Heidolph duomax 1030, миксер, микроцентрифуга. Посадочный буфер 0,1M NaHC03 pH9.5; буферТВБ-Т; 0,25% BSA в TBS-T; раствор лектина трепанга; буфер TBS-T - Са2+; маннан-связывающий лекган

трепанга, меченный пероксидазой хрена; субстрат ОФДА; стоп реагент (5% H2S04).

Материал для исследования: объектом исследования был вагинальный секрет здоровых женщин, а также пациенток с доброкачественными и злокачественными поражениями в возрасте от 40 до 60 лет1. Диагноз рака шейки матки был установлен клинически и верифицирован гистологическим методом. Образцы были собраны в различные стадии ежемесячного цикла, кроме менструации. Вагинальный секрет получали с помощью пастеровской полиэтиленовой стерильной градуированной пипетки <1-1.4мм и V=1.5 мл. Брали свободно лежащий секрет ближе к поверхности шейки матки. Полученный секрет помещали в пробирки Eppendorf V=l.5 мл. Пробирки заранее взвешивались на аналитических весах. Исследуемые образцы ВС были стандартизованы по весовой концентрации и хранились при температуре - 42°С.

Ход определения: Лектин-иммуноферментный метод включает следующие основные стадии:

1. Адсорбцию поликлональных антител против РЭА в лунках полистирольного микропланшета (Ат-РЭА).

2. Стадию блокировки свободных центров связывания BSA.

3. Инкубацию адсорбированных антител Ат-РЭА с антигенами (Аг):

3.1. С раствором РЭА, используемого в качестве положительного контроля и для построения калибровочной кривой.

3.2. С экстрактами вагинальных секретов.

4. Инкубацию МСЛ-Т с ранее полученными комплексами Ат-РЭА-Аг.

5. Иммунодетекцию комплексов АтРЭА-Аг-МС Л-Т антителами против МСЛ-Т меченных пероксидазой хрена.

6. Цветную визуализацию конечного комплекса субстратом.

Уровень лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов в экстрактах ВС выражался в условных единицах (U/ml) по калибровочной кривой, рассчитанной для растворов РЭА с известными концентрациями. Количество

определяемого маннан-связывающего лектина вторичными антителами пропорционально количеству углеводных изоформ раково-эмбрионального антигена.

Взаимодействие лектина трепанга с комплексом РЭА/РЭА-подобных антигенов с первичными антителами было специфично, так как было показано, что лектин не взаимодействует с нормальными иммуноглобулинами, с бычьим сывороточным альбумином и пероксидазой хрена.

Статистическая обработка полученных цифровых данных проводилась методом вариационной статистики. Различия между исследуемыми группами, рассчитанные по t-критерию Стьюдента-Фишера, признавались достоверными при р<0,01, р<0,05 или р<0,001. Полученные результаты обрабатывались с помощью программ STATJSTICA 6.0 и Mathcad 2001.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

В ЦДЛ г. Владивостока проводились сравнительные исследования по оценке информативности материала, полученного различными инструментами в двух группах женщин. Было обследовано 1000 женщин в возрасте от 18 до 70 лет. В первой группе средний возраст составил 39,7±2,8 года, во второй группе 39,5±3,2 года. Все женщины ежегодно подвергались цитологическому скринингу с использованием традиционных инструментов. В первой группе (п=500) материал на цитологическое исследование получали с помощью комбинированного применения щетки Cytobrush (Medscand Plus, Швеция) и деревянного шпателя Эйра по нашей методике. Во второй группе (п=500) применялись традиционные инструменты (ложка Фолькмана, желобоватый зонд, металлический или пластмассовый шпатель Эйра и др.).

Полученные препараты оценивались с позиции информативности материала (табл. 1), а также учитывались изменения эпителия (табл. 2). Контролем качества цитологических исследований являлись гистологические заключения.

Характеристика информативности материала, полученного различными

инструментами

Метод получения материала

Су№ЬгшЬ и деревянный шпатель Эйра Традиционные инструменты

Количество пациентов 500 500

Материал адекватный 499 (99,8±0,2%) 162 (33,5±2Л%)

недостаточно адекватный 1 (0,2%) 321 (63%)

неадектный 0 17(3,5%)

Из таблицы 1 следует, что материал, полученный в результате комбинированного применения щетки СуйэЬпюЬ и деревянного шпателя Эйра, был расценен как информативный в 99,8±0,2% случаев. Напротив, материал, полученный с помощью традиционных инструментов, не отвечал установленным требованиям, и его информативность составила 33,5±2,1%. Между группами определены статистически достоверные различия (р<0,001).

В соответствии с таблицей 2, при анализе цитологических заключений в I группе женщин была установлена более высокая частота выявления атипических изменений эпителия шейки матки (40,8%), в том числе плоскоклеточного рака (0,2%). Совпадение с гистологическим заключением в этой группе составило 100%. Соответственно, во И группе отмечалась низкая частота обнаружения клеточных изменений (7,4%). Комбинированное применение щетки Суи>ЬгшЬ и деревянного шпателя Эйра обеспечивает комплексное получение материала из исследуемых зон и может способствовать более частому выявлению атипических изменений эпителия шейки матки.

Характеристика цитограмм в зависимости от характера применения различных инструментов

Группы женщин

Методы получения материала Су1оЬгазЬ и деревянный шпатель Эйра Традиционные инструменты

Количество пациентов 500 500

Цитограмма без особенностей 295 125

Воспаление 84 18

Фоновые процессы (эрозия,

псевдоэрозия, лейкоплакия с 78 12

атипией)

£ о Легкая 24 3

Умеренная 13 . 3 .

а Тяжелая 4 1

Рак 1 0

Одной из причин ложноотрицательного цитологического результата у женщин периода менопаузы и постменопаузы при атрофической слизистой является скудный клеточный состав или отсутствие клеток в препарате. С целью определения диагностической ценности цитологических микропрепаратов у женщин этого периода при атрофической слизистой, провели исследование по оценке информативности материала, полученного различными инструментами. Было обследовано 954 женщины в возрасте от 45 до 70 лет, которые были распределены по двум группам. В первой группе (п=474) материал получали из шейки матки и цервикального канала с помощью деревянного шпателя Эйра. Средний возраст женщин в этой группе

составил 64,0±5,7лет. Во второй группе (п=480) материал получали со всей поверхности влагалищной части шейки и из церв икал ьного канала по оригинальной методике. Перед получением материала деревянный шпатель Эйра предварительно увлажняли в физиологическом растворе, чтобы препятствовать клеткам фиксироваться на сухом шпателе. Средний возраст женщин в этой группе составил 65±4,2 лет (рисЛ).

80,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% ■ 10.00% 0,00%

Шпатель Эйра

Шпатель Эйра, увлажненный физ. раствором

Рис. 1. Сравнительная характеристика информативности материала в зависимости от характера используемых инструментов при атрофической слизистой шейки матки.

Согласно данным рисунка 1 в первой группе информативность материала составила в 36,5±2,2%, во второй группе — 74,5±1,9%. Предварительное увлажнение шпателя Эйра в физиологическом растворе способствовало лучшему получению и переносу клеток на предметное стекло, что значительно повышает информативность цитологических микропрепаратов, достоверность (р0,001).

Таким образом, применение комбинации цервикальной щетки СугоЬпкЬ и деревянного шпателя Эйра по нашей методике оказалось действительно эффективным, что подтверждено выявлением рака шейки матки. Современные коммерческие одноразовые наборы для проведения

профилактических осмотров не предусматривают включение щетки «Cytobrush». Поэтому, учитывая вполне приемлемую стоимость щетки «Cytobrush», были даны рекомендации ДЗАПК аптечной сети включить щетки «Cytobrush» в состав одноразовых наборов. На основании рекомендаций был издан приказ ДЗАПК № 43 - 876 от 28.07.03.Согласно этому приказу необходимо: обеспечить 100% скрининг рака шейки матки в смотровых кабинетах, обеспечить доступ приобретения по желанию женщин одноразовых инструментов «Cytobrush», активизировать санитарно -просветительную работу среди женщин. Предварительное увлажнение деревянного шпателя Эйра в физиологическом растворе перед получением материала при атрофической слизистой шейки матки повышает информативность цитологических препаратов до 74,5±1,9%.

За 12 летний период деятельности лаборатории выделена группа из 20 женщин (0,003% от числа обследованных цитологическим методом) с ложноположительным цитологическим диагнозом рака шейки матки. В разные периоды (от 1,5 до 7,5 лет) у этих женщин установлен диагноз РШМ, преимущественно запущенных форм. Большинство из этих женщин клинически были здоровы. Средний возраст женщин составил 63,5±4,1 года. Проведенный анализ работы ЦЦЛ выявил 7,9% ошибочно-отрицательных цитологических результатов и 15,8% ошибочно положительных результатов, которые перешли в ошибочно-отрицательные гистологические результаты.

Существующие до сих пор цитологические критерии не позволяют с оптимальной точностью диагностировать на цитологическом уровне CIS. с одной стороны от CIN Ш, с другой - от инвазивного рака. Для уточнения диагноза по существующим протоколам рекомендуется проведение кольпоскопии, прицельной биопсии и выскабливания цервикального канала. Если результаты этих исследований остаются отрицательными, но имеется цитологическое заключение о наличии РШМ, следует изменить тактику ведения пациенток в индивидуальном порядке. Необходима контрольная визуализация как цитологических, так и гистологических препаратов 2-3

исследователями одновременно. По результатам совместного исследования выдавать экспертное заключение, которое будет иметь решающее значение в постановке окончательного диагноза. Пациентки должны находиться под особым наблюдением. Цитологические исследования проводить через 4-8 недель, 3, 6 и 12 месяцев. Преимущества и ограничения каждого из методов диагностики позволяет обеспечить индивидуальный подход к выбору оптимального решения в зависимости от патологического процесса и анатомо-функционального состояния пациентки. Наиболее удачным решением классификации TBS является объединение CIN II ,СШ III и CIS в одну группу « Поражение клеток плоского многослойного эпителия тяжелой степени». Такая трактовка цитологического заключения должна стать руководством для клинициста, которому будет необходимо получить полноценный материал для гистологического исследования.

В последнее время успешно развиваются методы, основанные на использовании лектинов, которые получили название ELLA (enzyme-linked lectin assay). Лекшн-иммуноферментный метод анализа позволяет проводить исследования углеводного профиля гликопротеинов, как плазмы крови, так и других биологических жидкостей человека В связи с этим, весьма перспективным является разработка новых подходов, позволяющих определять ранние биохимические изменения состава вагинальных секретов, коррелирующих с неопластической трансформацией. К их числу относится разработка методов диагностики патологии шейки матки на основе изучения углеводного состава вагинального секрета.

Известно, что вагинальный секрет является продуктом биосинтеза эпителиальных клеток, имеющего строго определенные параметры pH, микроэлементного, белкового, углеводного, липидного и других составов. Немногочисленные работы и наши собственные данные свидетельствуют о том, что влагалищное содержимое состоит из жидкостного и клеточного компонентов, слизи, продуцируемой цервикальными железами, транссудата, десквамированного эпителия влагалища и матки, лейкоцитов и

микроорганизмов. Процесс образования влагалищного содержимого относительно постоянен и количественно составляет в сутки от 0,76±0,004 до 4,50±0,12 мл. В его составе нами были обнаружены раково-эмбриональный антиген и РЭА/РЭА-подобные антигены. В связи с этим определенный интерес представляло проведение исследования по изучению качественных и количественных изменений, происходящих при секреции этих антигенов нормальными и трансформированными клетками.

Ранее из целомической жидкости голотурии Apostichopus japonicits (дальневосточного трепанга) учеными Тихоокеанского института биоорганической химии был выделен и охарактеризован лектин, получивший название маннан-связывающего лектина трепанга. Было показано, что MCJI-Т специфически взаимодействует с углеводными цепями РЭА. Это свойство MCJI-T, а также содержание РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах, послужило предпосылкой для проведения сравнительного изучения ВС у трех групп пациентов: здоровых, с доброкачественными изменениями и раком шейки матки.

Нами были исследованы вагинальные секреты, полученные у 90 женщин, средний возраст которых составил 46,4±0,6 года. Главной целью исследования был поиск существенной разницы между уровнем JTCA при раке шейки матки, доброкачественных процессах шейки матки и у здоровых женщин.

В экспериментах, проведенных нами с вагинальными секретами 3 групп женщин — здоровых (30), с доброкачественными поражениями шейки матки (30) и с раком шейки матки (30), были показаны существенные различия в связывании МСЛ-Т с углеводными компонентами секретов в этих группах. При этом концентрации ЛСА в вагинальных секретах здоровых женщин и с доброкачественными изменениями были близки по своим значениям, и в среднем составляли 20,3=Ы,3 U/ml и 19,7±1,6 U/ml, соответственно. Среднее значение концентраций ЛСА в секретах женщин с диагностированным раком шейки матки составили 5,2±0,8 U/ml (табл.3).

Уровень лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов (JICA) в вагинальных секретах в исследуемых группах

Количество женщин (п=30) Группы пациенток Уровень ЛСА (U/ml) M±m

30 Здоровые 20,3*1,3

30 С доброкачественными изменениями 19,7±1,6

30 Рак шейки матки 5,2±0,8

Согласно результатам таблицы 3 уровень ЛСА при наличии рака шейки матки был значительно ниже, чем при доброкачественных процессах шейки матки и у здоровых женщин. Нами установлены статистически достоверные различия значений ЛСА между здоровыми женщинами и пациентками с диагнозом рака шейки матки (р<0,001), а также между пациентками с доброкачественными и злокачественными заболеваниями (р<0,001).

Мы считаем, что снижение уровня лектин-связанных антигенов у женщин со злокачественными поражениями шейки матки вызвано появлением сиаловой кислоты на терминальных остатках углеводных цепей РЭА/РЭА подобных антигенов, что приводит к блокировке связывания лектина с углеводными цепями.

Важной характеристикой диагностической значимости метода является его чувствительность, специфичность. Дифференциация между двумя группами определяется при выбранном контрольном уровне cut-off level. По существующим требованиям к диагностическим наборам для выявления опухолевых маркеров специфичность метода должна составлять не менее 95%. При диагностической специфичности (установленной нами) 95% по отношению к соответствующим исследуемым группам значение

контрольного уровня (cut-off level z^,) составило 12,74 U/ml Чувствительность метода при специфичности 95% составила 86,2% (рис.2).

Значения лектансвязанных атнгенов в вагинальных секретах z,U/ml —рак шейки матки

-—— доброкачественные поражения шейки матки

----здоровые женщины

Рис.2. Зависимость ЛС А от установленного уровня cut-off level гш.

Таким образом, снижение концентрации JICA, выявляемой разработанным нами лектин-иммуноферментным методом в вагинальном секрете ниже определенного уровня, показало значительную корреляцию со злокачественными заболеваниями шейки матки (р<0,001). По нашему мнению, определение концентрации лектин-связанных форм в вагинальном секрете является перспективным и требует дальнейших исследований. Возможно, это позволит использовать данный метод для верификации диагноза и прогноза характера патологического процесса.

1. При соблюдении методики получения материала с поверхности шейки матки и цервикального канала с помощью комбинированного применения цервикальной щетки СуТоЬгшЬ и деревянного шпателя Эйра количество информативных мазков составляет 99,8±0,2 % против 33,5±2,1% случаев. При использовании комбинации СугоЬпвЬ и деревянного шпателя Эйра по нашей методике в 99% случаев из 100 не требуется проведения повторного исследования.

2. Предварительное увлажнение деревянного шпателя Эйра физиологическим раствором перед получением материала при наличии атрофической слизистой шейки матки значительно увеличивает диагностические возможности цитологического скрининга. Количество информативных микропрепаратов возрастает с 36,5±2,2% до 74,5±1,9%.

3. При положительном цитологическом диагнозе РШМ и отрицательных гистологических результатах высока вероятность выявления в будущем РШМ (17,б±3,5%). Необходим регулярный мониторинг за этой категорией женщин с комплексным обследованием.

4. Эксперементально показано, что разработанный лектин-иммуноферментный метод диагностики РШМ, основанный на определении РЭА, РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах является % перспективным и представляет интерес для практической онкологии. Использование лектин-иммуноферментного метода дает дополнительную возможность выявления РШМ и дифференцировки с доброкачественными заболеваниями, а также проведения мониторинга и выявления рецидивов заболевания. Чувствительность метода при специфичности 95% составляет , 86,2%. По чувствительности и специфичности метод не уступает известным на данный момент методам диагностики РШМ.

ПРАКТИЧЕОСИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для снижения ошибочно-отрицательных результатов цитологического исследования при получении материала с поверхности

шейки матки и цервикального канала рекомендуем использовать комбинацию цервикальной щетки Cytobrush и деревянного шпателя Эйра по предлагаемой методике. ДЗАПК рекомендовано аптечной сети включить щетки «Cytobrush» в состав одноразовых наборов.

2. Для предупреждения развития инвазивного рака шейки матки у женщин с положительным цитологическим диагнозом злокачественного поражения и при отрицательном результате гистологического исследования, необходим регулярный мониторинг за этой категорией женщин с комплексным обследованием.

3. При наличии атрофической слизистой шейки матки перед получением материала для цитологического исследования рекомендовано предварительное увлажнение деревянного шпателя Эйра физиологическим раствором.

4. Разработаны и опубликованы 2 методические рекомендации: «Стандартизация цитологических методов исследования в диагностике заболеваний шейки матки»(2002), «Скрининг рака шейки матки, организация и методолошя»(2006).

5. Данные диссертационной работы могут быть использованы при чтении лекций и проведении семинарских занятий в медицинских вузах и на циклах повышения квалификации врачей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ermolina, Larisa N. The transmitters of inflammation in gravidas with recurrent genital herpis / Larisa N. Ermolina, Olga M. Rodionova, Elena V. Prosekova. Course of clinical laboratory diagnostics, Vladivostok State Medical University, Vladivostok, Russia // The eleventh International Symposium of the Japan - Russia Medical Exchange: program - Abstract (H) Supplement- Niigata, 2004.-P.422.

2. Ермолина, Л.Н. Динамика интерлейкина 4 (ИЛ-4) в вагинальном секрете и сыворотке крови беременных с рецидивирующим генитальным герпесом / Л.Н. Ермолина, Е.В. Просекова, О.М. Родионова // Аллергология и

иммунология: тез. П Всемирного конгресса по иммунопатологии и аллергии. - Москва, 2004. - Т. 5, № 2. - С. 136 - 137.

3. Ермолина, JX.H. Локальный и системный уровень фактора некроза опухоли a (TNFa) и его динамика у беременных с рецидивирующим генитальным герпесом / Л.Н. Ермолина, Е.В. Просекова, О.М. Родионова // Цигокины и воспаление. - 2006. - Т. 5, № 4 - С.17 - 21.

4. Особенности герпес вирусной инфекции в цервикальной патологии / Л.Н. Чиркова, Е.В. Просекова, О.М. Родионова, Г.Ф. Погорелова, Л.В. Седая // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей:

_ тез. докл.У - Дальневост. онколог.конф. - Владивосток, 2003. - С. 147 - 150.

5. Перспективы использования маннан-связывающего лектина дальневосточной голотурии Apostichopus japonicus при диагностике рака шейки матки / A.A. Булгаков, О.М. Родионова, И.Ю. Петрова, М.Г. Елисейкиыа, В.И. Апанасевич // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей: материалы VII Дальневост. онколог, конф. -Владивосток, 2005. - С. 156 - 158.

6. Применение лектин-иммуноферментного метода в диагностике рака шейки матки / A.A. Булгаков, О.М. Родионова, И.Ю. Петрова, М.Г. Елисейкина, Л.Н. Ермолина, В.И. Апанасевич // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 792 - 796.

7. Родионова, О.М. Роль централизованной цитологической лаборатории при раннем выявлении злокачественных новообразований / О.М. Родионова // Оказание терапевтической помощи в условиях поликлиники (к 10-летию - кафедры поликлинической терапии ВГМУ) -Владивосток, 1997. - С. 51.

8. Родионова, О.М. Опыт работы централизованной цитологической лаборатории г. Владивостока за период с 1986 по 2000 годы / О.М. Родионова // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей: тез. Ш -Дальневост. онколог, конф. - Владивосток, 2001. - С. 42 ~ 46.

9. Родионова, О.М. Стандартизация цитологических методов исследования в диагностике заболеваний шейки матки: методические рекомендации / О.М. Родионова, Т.И. Слепнева, А.Г. Мухотина, C.B. Юдин.

- Владивосток: Изд-во ОАО Дальприбор. - 2002. - 37 с.

10. Родионова, О.М. Состояние цитологической службы в Приморском крае и перспективы развития / О.М. Родионова, И.В. Назарова, C.B. Юдин // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей: тез. V - Дальневост. онколог, конф. - Владивосток, 2003. - С. 22 - 26.

11. Родионова, О.М. Роль папилломавирусной инфекции в возникновении рака шейки матки / О.М. Родионова // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей: тез. докл.VI Дальневост. онколог, конф.

- Владивосток, 2004. - С.31 - 34.

12. Родионова, О.М. Выявление папилломавирусной инфекции при скрининге рака шейки матки / О.М. Родионова, ИВ. Остапчук, В.И. Апанасевич // Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей: тез. докл. VI Дальневост. онколог, конф. - Владивосток, 2004. - С. 87 - 88.

13. Родионова, О.М. Гинекологический скрининг и характеристика информативности материала, полученного разными методами в цервикальной цитологии / О.М. Родионова, В.И. Апанасевич, А,С. Юдина, И.Ю. Невмержицкая // Новости клинической цитологии России. - 2004. - Т. 8,№1-2.-С. 38-41.

14. Родионова, О.М. Применение аналитической модели для оценки качества цитологического скрининга рака шейки матки / О.М. Родионова, В.И. Апанасевич // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2005. - № 4. - С. 60-61.

15. Родионова, О.М. Перспективы и место цитологического скрининга рака шейки матки / О.М. Родионова // Журнал теоретической и практической медицины. - 2005. - Т. 3, № 3. - С. 365 - 369.

16. Родионова, О.М. Проблема целого и части, структуры и функции в медицине. Содержание и соотношение понятия молекулярная патология,

органопатология Г О. М. Родионова // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины: тез.докл. VI - Тихоокеанской научн.-практич. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, Владивосток, 27 апреля 2005. - Владивосток, 2005 - С. 175.

17. Юдин, C.B. Скрининг рака шейки матки (организация и методология): метод, рекомендации / C.B. Юдин, Л.А. Несвяченная, О.М. Родионова, A.A. Мелякова, В.Г. Морева — Владивосток: йзд-во ОАО Дальприбор - 2006. - 31 с. СПИСОК СОКРАЩЕНИИ Аг-антигены

Ат-РЭА — антитела против раково-эмбрионального антигена ВГМУ - Владивостокский государственный медицинский университет ВС - вагинальный секрет

ДЗАПК - Департамент здравоохранения администрации Приморского края

ЛСА - лектин-связанные антигены

МСЛ-Т - маннан-связывающий лектин трепанга

ОМ - опухолевые маркеры

ОФДА - ортофенилендиамин

РШМ - рак шейки матки

РЭА - раково-эмбриональный антиген

ЦДЛ - централизованная цитологическая лаборатория

BSA - бычьий сывороточный альбумин

CIN П — дисплазия умеренной степени

CIN Ш - дисплазии тяжелой степени

CIS - внутриэпителиальная карцинома

SCC - антиген плоскоклеточной карциномы

TBS - Т - буфер с тритоном

TBS - классификация The Bethesda System (2001 г.) TPS - специфический тканевой полипептид

РОДИОНОВА Ольга Михайловна

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 26.02.07. Формат 60x84/16 Усл. печ. л. 1,4. Уч.-изд. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ 027

Типография издательства ДВГТУ. 690950, Владивосток, Пушкинская, 10

Содержание диссертации, кандидат биологических наук , Родионова, Ольга Михайловна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитологический скрининг рака шейки матки"

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Родионова, Ольга Михайловна

Библиография Диссертация по биологии, кандидат биологических наук , Родионова, Ольга Михайловна, Владивосток