Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион"

На правах рукописи

м

ГОЛУНОВА Ольга Вячеславовна

Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион

03.00.23 - биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ООЗаьз

Москва - 2009

003469150

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор биологических наук

Волков Михаил Юрьевич.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Мирзаев Микаель Нурбагандович; кандидат биологических наук Богатырев Александр Александрович.

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности».

г; /

Защита состоится « У» сЛ 2009 года в » час. на

заседании диссертационного совета Д.220.042.01 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « ^» сс-ссС- 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лечение желудочно-кишечных болезней (ЖКБ) молодняка сельскохозяйственных животных остается в настоящее время одной из актуальных проблем ветеринарной медицины. Несмотря на наличие большого количества природных и синтетических лечебно-профилактических препаратов, многие вопросы, касающиеся лечения диспепсии, остаются до настоящего времени нерешенными.

В этой связи разработка и внедрение в практику ветеринарии новых комплексных высокоэффективных биологических препаратов для лечения и профилактики ЖКБ животных представляет собой актуальную задачу.

Перспективным направлением в данной области, по мнению многих отечественных и зарубежных специалистов, является конструирование пробио-тиков и кормовых добавок на их основе, а также разработка и совершенствование технологий производства комплексных препаратов на основе консорциумов метаболитов бактерий с широким спектром физиологической активное™.

В связи с этим конструирование комплексных кормовых добавок на основе метаболитов бацилл, иммобилизованных на природных минеральных ионообменных матрицах, с питательными компонентами целебных растений представляет собой новое направление биотехнологии препаратов для профилактики ЖКБ сельскохозяйственных животных.

Цель работы - разработка новой кормовой добавки с пробиотическими и гепатопротекторными свойствами на основе безотходной технологии приготовления пробиотиков и оценка ее эффективности при желудочно-кишечных болезнях поросят-отьемышей.

Задачи исследования

1. Обосновать компонентный состав кормовой добавки с пробиотиче-ским и гепатопротекторным действиями и оценить биологические свойства ее компонентов.

2. Разработать технологию производства кормовой добавки Бион на оборудовании АТЛ пробиотиков Биоспорин и Бактистатин.

3. Приготовить лабораторные образцы кормовой добавки и изучить ее

биологические свойства.

4. Приготовить производственную серию и оценить лечебно-профилакти-ческую эффективность кормовой добавки Бион при ЖКБ на поросятах-отьемышах.

5. Рассчитать экономическую эффективность кормовой добавки Бион при откорме поросят.

6. Разработать проекты нормативно-технической документацию на кормовую добавку Бион.

Научная новизна. Впервые на основе комбинации метаболитов споро-образующего штамма В. зиЫШэ 3, иммобилизованных на природном энтеро-сорбенте - глауконите в смеси со шротом плодов расторопши пятнистой, получена новая отечественная кормовая добавка, обладающая комплексным сорбционным, гепатопротекторным и пробиотическим действием при лечении ЖКБ, за счет эффективно подобранного композиционного состава Российских природных компонентов, получаемая по безотходной технологии производства пробиотиков на отечественном технологическом оборудовании.

Обоснована возможность использования природного алюмосиликата -глауконита, шрота плодов расторопши пятнистой и их смеси с метаболитами В.виЫШБ 3 в комплексных кормовых добавках для сельскохозяйственных животных.

Исследованы биологические свойства кормовой добавки Бион, способность подавлять размножение сальмонелл, кандид и стафилококков, стимулировать рост лактобацилл и бифидобактерий в ЖКТ животных, способность улучшать перевариваемость кормов и проявлять адсорбционное и гепатопро-текторное действия, обеспечивающие возможность ее применения при лечении и профилактике ЖКБ поросят, в том числе в комплексе с антибиотиками при инфекционных болезнях животных и их осложнениях.

Установлена высокая (95-97%) лечебно-профилактическая эффективность готовой формы кормовой добавки Бион при ЖКБ поросят-отъемышей.

Практическая значимость работы. Создана безотходная технология, позволяющая одновременно получать пробиотики Биоспорин, Бактистатин и

кормовую добавку Бион в виде порошка на единой аппаратурно-технологической линии в филиале ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ - Цешр военно-технических проблем биологической защиты».

В практику ветеринарии Российской Федерации будет введена первая отечественная комбинированная пробиотическая кормовая добавка Бион, обладающая широким спектром лечебно-профилактической эффективности.

Разработаны и утверждены проект ТУ 9365-001-46392258-2008 на кормовую добавку Бион; промышленный регламент производства кормовой добавки Бион в сухой форме (15.02.2008 г. № 3458); разработан проект инструкции по применению кормовой добавки Бион для лечения и профилактики дисбак-териозов ЖКТ поросят-отьемышей.

Независимая экспертиза производственных серий подтвердила соответствие показателей качества кормовой добавки Бион требованиям ТУ (акт ст 20.03.2008 г. ООО «Лаборатория технологии оздоровительных препаратов»).

На поросятах-отьемышах установлена эффективность действия кормовой добавки Бион. Исследовано влияние ее на микробиоценоз кишечника, установлена высокая лечебно-профилактическая эффективность при диспепсиях ЖКТ, что подтверждено актами, утвержденными руководителями животноводческих хозяйств.

В соответствии с порядком регистрации в Российской Федерации нормативная документация и отчеты об испытании кормовой добавки Бион подготовлены для представления на экспертизу в профильной лаборатории ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ) и государственную регистрацию.

Результаты исследований по созданию кормовой добавки с пробиотиче-скими и гепатопротективными свойствами и безотходной технологии используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Апробация работы: основные положения диссертации были доложены и обсуждены: на X Юбилейном Международном Славяно-Балтийском

научном форуме "Санкт-Петербург - Гастро-2008" (Санкт-Петербург -2008 г.); конференции «Международное сотрудничество и развитие биотехнологии в Кировской области» (г. Киров).

Публикации.

По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, в том числе: 2 статьи в сборниках международных конференций, в журнале, включенном в перечень ВАК РФ, 3 статьи.

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на 106 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (126 источников, из которых 114 отечественных и 12 иностранных), 29 таблиц, 2 рисунка.

На защиту выносятся следующие положения и результаты.

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование компонентного состава кормовой добавки Бион на основе культуральной жидкости, содержащей продукты метаболизма B.subtilis 3, иммобилизованные на природном минеральном адсорбенте-глауконите в смеси с сухим шротом плодов расто-ропши.

2.Промышленная безотходная технология с использованием современных средств концентрирования, позволяющая получать кормовую добавку Бион на ATJI производства Бактистатин и Биоспорин.

3.Результаты лечебно-профилактической эффективности пробиотической и гепатопротекторной кормовой добавки Бион при ЖКБ поросят-отъемышей.

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2006 по 2008 годы на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ (г. Москва); ЗАО СП «Медвежьи озера» (Московская область), ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ - Центр военно-технических проблем биологической защиты» (г. Екатеринбург), ООО «Лаборатория технологии оздоровительных препаратов» (г. Санкт-Петербург).

В работе были использованы метаболиты культуры B.subtilis 3, выращенной в биореакторах способом глубинного культивирования в жидкой питательной среде (ПС). Эксперименты проведены на 150 белых беспородных мышах массой 18-22 г, 22-26 г, 26-32 г; 18 крысах-самцах и 16 крысах-самках линии ВИСТАР; 200 поросятах-отьемышах. В процессе работы было отобрано и исследовано 125 проб фекалий животных (95 - поросят, 30 - белых мышей) и 64 пробы крови поросят-отъемышей.

Культивирование B.subtilis 3 проводили в аппаратах ферментерах марки «БИОР-0,25», при глубинном методе культивирования в течение 48 часов.

Отделение B.subtilis 3 от среды культивирования осуществляли с использованием ультрафильтрационной установки «Сартокон-мини».

Иммобилизацию фильтрата на глауконите в смеси со шротом расторопши осуществляли в сушилке грануляторе 524Р-АК.

Бактериологические исследования проводили по методу Блохиной И.Н., Воронина Е.С. и др. (1990); антагонистическую активность определяли по Егорову Н.С. (1999); общее состояние экспериментальных животных изучали по методу Трахтенберга И.М. (1978); биохимические показатели сыворотки крови, а также гематологические показатели определяли методами, описанными Западнюк И.В. с соавт. (1962); адсорбционную активность исследовали по ГОСТ 4453-74; острую, хроническую токсичность кормовой добавки определяли по Сорокуловой И.Б. (1998); бактерицидную активность сыворотки крови животных определяли по методу Кашкиной В.Н. (1999); лечебно-профилактическую эффективность препарата определяли в опытах на поросятах-отьемышах по общепринятым методам.

Экспериментальные данные обрабатывали методом корреляционного, вариационного и факторного статистического анализа с использованием пакета компьютерных npoi-рамм «Statgraphics Plus for Windous», «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву A.A. (1962).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Обоснование использования компонентного состава кормовой добавки

Для производства кормовой добавки, получившей рабочее название Бион,

7

использовали: фильтрат культуральной жидкости В.БиЫШз 3; природный алюмосиликат - глауконит Каринского месторождения и шрот плодов расторопши пятнистой с выраженными гепатопротективными свойствами.

Биологические свойства фильтрата штамма В. виЫШз 3 в полной степени соответствуют свойствам микроорганизмов-продуцентов. Синтезируемые клетками биологически активные вещества концентрируются в процессе ферментации и переходят в фильтрата при отделении клеток.

Используя глауконит в качестве носителя биологически активных веществ, получили биопрепарат с полифункциональными свойствами для профилактики и лечения ЖКБ.

Широко известным активным гепатопротекторным комплексом расторопши (ТУ 9291-008-5652 9037-04) являются флаволигнаны и, в частности, силимарин, обладающий уникальной способностью способствовать регенерации клеток печени и препятствовать проникновению ядовитых токсичных веществ в клетки печени.

Таким образом, использование в совокупности трех компонентов: фильтрата + глауконита + шрота расторопши позволило получить высокоэффективную комплексную лечебно-профилактическую кормовую добавку, экономически выгодную и доступную в применении.

Применение выбранных природных биостимуляторов является наиболее эффективным, физиологически и экономически обоснованным способом оптимизации рациона питания молодняка сельскохозяйственных животных, восстановления работоспособности систем организма животных, ответственных за адаптацию к неблагоприятным условиям окружающей среды, возникающих после отъема.

Оценка питательной ценности шрота расторопши пятнистой

Для оценки кормовых свойств шрота расторопши провели количественную оценку азотсодержащих веществ, общего фосфора, определение содержания белка и его аминокислотный состав.

Содержание общего азота в шроте расторопши составило - 3,29%, фосфора-0,71%.

Шрот расторопши содержит белки, в состав которых входит полный набор аминокислот. Аминокислотный анализ шрота расторопши проводили после полного кислотного гидролиза. На долю таких аминокислот, как аспа-рагиновая, серии, глютаминовая, глицин, валин, аргинин приходится 65% от суммы всех аминокислот. В 100 г шрота расторопши содержится 24 г белков, 70% которых относительно легко растворимы и могут расщепляться протеа-зами.

Для оценки питательной ценности белков шрота расторопши расчитали содержание незаменимых аминокислот относительно «идеального» гипотетического белка и установили, что количество незаменимых аминокислот, определяющих его питательную ценность, достаточно высоко, что определяет возможность его использования для конструирования кормовой добавки для животноводства.

Оценка безопасности фазового, минералогического состава, безвредности и сорбционных свойств глауконита

Глауконитом следует называть железистую диоктаэдрическую слюду, неразбухающую, с (А1, Ре*)1^, (Ре3", А[)%, Ре3*> А1.

Химический состав глауконита Каринского месторождения имеет следующий состав оксидов: кремния - 70,6%, алюминия - 4,6, железа - 12,8, магния - 2,2, марганца - 0,02, калия - 3,9, фосфора - 0,04%. Запасы глауко-нитового песка Каринского месторождения примерно исчисляются 500 млн т.

На первом этапе исследования оценили безопасность глауконита по содержанию токсичных элементов и радионуклидов. В результате исследований установили, что глауконит Каринского месторождения Челябинской области не содержит токсичные элементы в превышающих допустимые концентрациях, и по содержанию радионуклидов глауконит абсолютно безопасен.

Таблица 1. Фазовый состав глауконита

_Минеральная фаза__Содержание, % масс._

Глауконит__82±3_

I Кварц__17±1_¡'

I Плагиоклаз 1±0,2 |

Химический состав глауконита Каринского месторождения изучался в сравнении с цеолитом Холинского месторождения и лигнином Красноярского промышленного предприятия по биоконверсии отходов деревообработки и рациональном использовании лесного сырья. Анализ химического состава глауконита показал, что по содержанию важных в питании микроэлементов глауконит значительно превосходит цеолит и лигнин.

Безвредность глауконита проверяли на крысах-самцах линии ВИСТАР с исходной массой 145-150 г, которым глауконит вводили перорально в дозах 35 мг/кг и 350 мг/кг и установили, что при введении в суточный рацион крыс глауконита в дозе 35 мг на кг веса масса крыс достоверно не отличалась от контроля на протяжении всего эксперимента. При введении в суточный рацион крыс глауконита в дозе 350 мг на кг веса наблюдалось статистически достоверное снижение массы тела крыс через 2, 3 и 4 недели с начала постановки опыта на 10%, .14% и 9,3% (табл.2).

Таблица 2. Масса тела крыс при включении в их рацион глауконита

Продолжительность опыта, недель Контрольная группа I опытная группа II опытная группа

0 151,3±4,7 145,3±2,0 149,0±6,1

1 174,0±6,7 174,3±2,1 168,4±6,3

2 195,6±6,6 200,2±2,6 178,2±4,5**

3 226,6+7,6 232,4±5,6 196,7±5,6**

4 228,2±8,5 229,1±5,6 207,5±5,5**

Примечание: ** - отличия от контроля статистически достоверны при Р< 0,05, в остальных случаях Р > 0,05.

Исследования адсорбционной активности глауконита по отношению к различным физиологическим веществам проводили в би- и поликомпонентных средах (в плазме крови, в панкреатическом соке) при соотношении раствора и сорбента 10:0,3.

Глауконит сорбирует из биологических растворов в значительной степени холестерин, мочевину, креатин и в меньшей степени - общие липиды, белки и глюкозу.

В результате проведенных исследований установлено, что глауконит со-

держит эффективный состав микроэлементов для конструирования кормовых добавок, обеспечивает на 10% более высокую избирательную, адсорбционную и ионообменную способность по сравнению с цеолитом и лигнином, является безопасным и безвредным для организма лабораторных животных, что в значительной мере определяет его использование, как иммобилизаци-онную ионообменную матрицу для конструирования кормовых добавок.

Оценка безвредности и определение оптимальной дозы кормовой добавки Бион

Острую токсичность кормовой добавки Бион с пробиотическим и гепато-протективным действиями изучали на двух сериях препарата, которые вводили белым мышам внутрибрюшинно и перорально.

Установлено, что все мыши, получавшие разные серии кормовой добавки Бион в различных дозах за весь период наблюдений оставались клинически здоровыми, хорошо поедали корм, их поведенческие реакции были в пределах нормы.

Хроническую токсичность определяли путем перорального введения белым мышам суспензии двух серий кормовой добавки Бион в течение 15 дней ежедневно по 40 мг (табл. 3).

Таблица 3. Результаты проверки хронической токсичности кормовой

добавки Бион

Название До- Курс вве- Количество Пало, Выжило,

за, мг дения, сут. животных гол. гол.

Бион (серия № 1) 40 15 6 0 6

Бион (серия № 2) 40 15 6 0 6

Установлено, что все мыши опытных групп были клинически здоровы на протяжении периода наблюдений. За время наблюдения не отмечались клинические симптомы интоксикации организма экспериментальных животных.

Оптимальную и летальную дозу кормовой добавки Бион устанавливали в опытах на белых беспородных мышах, которым Бион вводили перорально в в дозе 0,1; 0,2 и 0,3 мл 2 раза в день, в течение 10 дней (табл. 4).

Таблица 4. Результаты исследования оптимальной и летальной дозы кормовой добавки Бион

№ груп пы Кол-во жив-х Доза вводимого препарата, мл Физиологическое состояние мышей за 10 сут наблюдения Погибло, шт

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 6 0,1 + + + + + + + + + ± 0

2 6 0,2 + + + + + + + + + + 0

3 6 0,3 + + ± ± ± ± — - - — 1

4 6 Препарат не вводили + + ± ± ± 2

Примечания: «+» - физиологическая норма (температура, аппетит и общее состояние в пределах нормы, кал густой консистенции, поведение резвое); «±» - температура и общее состояние в пределах нормы, кал с изменением цвета, жидкой консистенции; «-» - температура выше нормы, диарея, кал желтого цвета, общее состояние угнетенное, отказ от корма.

Таким образом, установлено, что компоненты кормовой добавки Бион не проявляют острую и хроническую токсичность на организм экспериментальных животных. Оптимальная доза введения добавки составила 0,1 мл на голову в сутки при приеме 2 раза в день.

Оценка гепатозащитной активности на модели острого токсического гепатита у мышей

Гепатозащитный эффект оценивали по индексу выживаемости мышей после отравления ССЦ.

Установлено, что кормовая добавка Бион оказывала положительный эффект. Однако этот эффект невысок. Так, в контроле гибель животных составила 70%, а на фоне введения Биона - 60%.

Приготовление лабораторного образца кормовой добавки Бион и оценка его физико-химических свойств

При конструировании препарата из трех синергичных компонентов необходимо было подобрать их оптимальное соотношение.

В качестве оценки выбора комбинаций ингредиентов в препарате использовали адсорбционную способность глауконита по фильтрату культуральной жидкости.

Для приготовления кормовой добавки Бион фильтрат культуральной жидкости В. БиЫШБ 3, отделенный на ультрафильтрационной установке, напылялся на смесь глауконита и порошка шрота расторопши в сушилке

грануляторе 524Р-АК производительностью 10 кг/цикл, для обезвоживания.

Приготовление кормовой добавки осуществлялось по этапам. На первом этапе готовили смесь подготовленного глауконита со шротом расторопши с культуральной жидкостью с шагом 10%, полученную массу раскладывали на полки и сушили в сушильном шкафу при температуре 55°С до остаточного влагосодержания 4-8%.

Оптимальное соотношение сухой смеси подготовленного глауконита со шротом расторопши и культурального фильтрата составило 65:35, увеличение количества культурального фильтрата, как позже было выяснено, не оказывает существенного влияния на качество препарата, зато значительно повышает его себестоимость и удлиняет процесс высушивания.

К глаукониту добавляли порошок шрота расторопши из расчета содержания не менее 10% терапевтической дозы флаволигнанов в кормовой добавке. Рабочее название разработанной кормовой добавки - «Бион».

Для полной стерилизации Биона выбран радиационный способ стерилизации с дозой 25 кГр, обеспечивающей надежную стерилизацию остаточного количества жизнеспособных микроорганизмов.

Технология приготовления кормовой добавки Бион в условиях промышленного производства

Культивирование В.зиЫШэ 3 проводили глубинным способом в биореакторах марки «БИОР», объемом 0,25 м"\

Концентрирование нативных культур бацилл и отделение фильтратов осуществляли с использованием ультрафильтрационной установки «Сарто-кон-мини», снаряженной мембранным модулем «Микросарт» с размером пор 0,2 мкм, позволяющей получить фильтрат, свободный от живых клеток В.зиЫШэ 3 при максимальном накоплении биологически активных метаболитов в фильтрате.

При производстве пробиотической кормовой добавки Бион было признано целесообразным использовать способ концентрирования нативных культур бацилл и отделение фильтрата с применением ультрафильтрационной установки «Сартокон-мини».

Приготовления обезвоженного компонента фильтрата культуральной жидкости Bacillus subtiiis 3

Получаемый активный компонент кормовой добавки Бион - фильтрат культуральной жидкости B.subtilis 3 является высоко влажной субстанцией, что затрудняет выбор способа обезвоживания, т.к. его компоненты являются термолабильными материалами.

В результате обоснования режимов обезвоживания был предложен метод высушивания в псевдокипящем слое иммобилизирующей матрицы, как наиболее технически совершенным и перспективным, так и позволяющим совместить операции смешивания, гранулирования, сушки в одном аппарате и организовать непрерывное производство с высокой производительностью, а в нашем случае и иммобилизацию жидкой фазы на глауконите.

Процессы смешения, гранулирования и сушки организован в резервуаре установки для гранулирования и смешения 524Р-АК в соответствии с СОП № 8 ОТ/051/01.

Технология приготовления конечной формы добавки

Гранулят кормовой добавки Бион после иммобилизации должен отвечать следующим требованиям:

- иметь однородный гранулометрический состав, что получается при просеивании на виброситах (определяется визуально);

- массовая доля влаги не более 8%, обеспечивается временем пребывания в бункере сушилки гранулятора при определенной температуре.

Дозирование кормовой добавки Бион осуществляется по массе, как наиболее точному методу с помощью автомата типа АР-ИЗ, имеющего калибровку от 0,1 до 1000 г.

Разработка методов контроля кормовой добавки

Кормовая добавка Бион представляет собой фильтрат культуральной жидкости В. subtiiis штамма 3, иммобилизованный на природном ионообмен-нике и адсорбенте - глауконите в смеси с порошком шрота расторопши в соотношении:

Глауконит - 65%;

Фильтрат (метаболиты) культуральной жидкости В. БиЫШэ 3-1%; Шрот плодов расторопши пятнистой - 34%. Готовая форма кормовой добавки Бион - порошок.

Таблица 5. Физико-химические и биологические показатели Бпона

Наименование показателя Требование качества

Внешний вид Аморфный порошок в виде гранул

Цвет Светло-коричневый

Запах Специфический

Безвредность В тест - дозе на мышах безвреден

Массовая доля влаги, % не более 8,0

Адсорбционная активность по индикатору этиленовому синему в мг/г продукта 2,0

Массовая доля флаволигнанов (силибина), % 0,3-0,35

Амилолитическая активность, ед./г 4,0

Протеолитическая активность, ед./г 0,6

Массовая доля аминного азота, % 0,5

Растворимость, мин не более 20

Антагонистическая активность (зоны угнете-1я тест-штаммов), не менее (мм) S. aureus—10, С. albicans-8, S. sonnei-8, S. typhimurium-8

Микробиологическая чистота (наличие в 1 г препарата): Pseudomonas aeruginosa Enterobacteriaceae Staphylococcus aureus Дрожжевых и плесневых грибов КМАФАМ, КОЕ/г, не более не допускается не допускается не допускается не допускается 1 000

Оценка биологических свойств кормовой добавки Бион

Контроль подлинности, безвредности, стандартности и биологической активности кормовой добавки Бион должен осуществляться общепринятыми методами и обеспечивать исчерпывающую информацию о ее свойствах.

Исследование стабильности кормовой добавки Бион в процессе хранения

Срок годности кормовой добавки Бион и условия хранения установлены в результате исследований на стабильность свойств в процессе хранения.

15

В процессе хранения кормовой добавки Бион контролировали физико-химические показатели, проверку биологической активности осуществляли на группе поросят, которую осуществляли после года и двух лет хранения кормовой добавки. Учитывали содержание силибина, а также распад азота и отсутствие процесса гниения и распада белка.

Уровень силибина в процессе хранения существенно не изменился и колебался в пределах 0,01% от нормы 2,8-3,8%, что говорит о сохранении гепа-топротекторных свойств. Распад белка и гниение в процессе хранения отсутствовали.

Биологические свойства кормовой добавки Бион после хранения в течении 12 и 24 месяцев при кормлении поросят не изменились.

Что позволило установить срок годности Биона - 2 года со дня изготовления.

Определение лечебно-профилактической эффективности Бион при болезнях ЖКТ поросят-отьемышей

Опыты на животных установили профилактическую эффективность кормовой добавки Бион для поросят-отьемышей - 96,7% при даче добавки в дозе 1,0 г на голову 1 раз в день, 3 дня подряд.

При исследовании микрофлоры фекалий поросят опытных групп в динамике отмечали постепенное очищение содержимого кишечника от условно-патогенных и патогенных микроорганизмов и существенное увеличение концентрации полезной микрофлоры (бифидо- и лактобактерий).

Гематологические исследования крови и анализ лейкограмм поросят-отьемышей опытных и контрольных групп до начала постановки опыта, а также через 3 и 10 дней с начала постановки опыта подтвердили эффективность выбранной дозы и кратности введения.

При оценке терапевтического действия кормовой добавки Бион была установлена 90%-ная эффективность добавки в терапевтической дозе для поросят-отьемышей - 1,25 г/гол. 2 раза в день, 6 дней подряд.

Изучено влияние Биона на интенсивность роста поросят-отьемышей опытных групп, поставленных на откорм, при внесении в комбикорм порося-

Рис.1. Диаграмма прироста живой массы

Установлено, что Бион способствует усвоению корма и приросту живой массы на 9,9% по сравнению с контролем.

Таблица 6. Изменение живой массы и среднесуточных привесов у поросят-отьемышей на откорме

Показатель Вводимый препа рат

Бион Бактиста-тин Биоплюс

Живая масса, кг 43,2±2,1 43,3±1,8 43,3±2,3

Среднесуточный прирост, г 630±28 620±31 605±46

Общий прирост, кг 67,5 64,8 58,9

Среднесуточное потребление комбикорма,кг 2,18 2,18 2,18

Затрачено комбикорма на 1 кг прироста, кг 3,26 3,45 3,70

Экономическая эффективность

Использование кормовой добавки Бион в составе полнорационных комбикормов обеспечило экономический эффект в расчете на 1 голову в среднем 827,65 руб. за счет дополнительно полученного прироста.

ВЫВОДЫ

1. Разработана новая комплексная кормовая добавка с пробиотическими и гепатопротекторными свойствами на основе метаболитов В.зиЫШв штамм 3, иммобилизованных на природном ионообменнике и адсорбенте глауконите, в смеси со шротом плодов расторопши пятнистой, имеющая срок годности 24 месяца при температуре хранения до 25 °С.

2. Разработана безотходная технология приготовления Бион на АТЛ про-

17

биотиков Биоспорин и Бактистатии на основе ультрафильтрации с производительностью до 80 дм3/ч. Полученные по безотходной технологии серии кормовой добавки Бион отвечают требованиям нормативной документации.

3. Кормовая добавка Бион нетоксична и безвредна для сельскохозяйственных животных, проявляет антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенной и условно-патогенной микрофлоры животных, способствует восстановлению уровня лакто- и бифидобактерий и отвечает современным требованиям к пробиотикам использование на фоне применения антибиотиков.

4. Природный алюмосиликат глауконит обеспечивает пролонгированное действие кормовой добавки Бион, адсорбирует низкомолекулярные соединения, токсины, вирусы и проявляет ионообменные свойства, обладает по сравнению с цеолитом более широким спектром микроэлементов и на 10 % более высокими сорбционными свойствами.

5. Схема применения кормовой добавки Бион для лечения и профилактики болезней ЖКТ у поросят-отъемышей, апробированная в условиях хозяйств, показала высокую 90-97%-ную лечебно-профилактическую эффективность в рекомендуемых дозах при длительности применения препарата от 3 до б суток.

6. Кормовая добавка Бион способствует повышению аппетита, перевариваемое™ корма и увеличивает прирост живой массы новорожденных поросят в среднем на 150 г в сутки по сравнению с контролем.

7. Экономический эффект от применения Биона составляет 827,65 руб. на каждого поросенка, находящегося на откорме.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Новая комплексная кормовая добавка Бион обладает гепатопротектив-ными и пробиотическими свойствами и рекомендуется к использованию в качестве лечебно-профилактической кормовой добавки при болезнях ЖКТ у молодняка сельскохозяйственных животных.

2. Разработана безотходная технология производства кормовой добавки

«Бион» в порошках на аппаратурно-технологической линии пробиотиков Биоспорин и Бактистатин в филиале ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ - ЦВТП БЗ».

3. Разработаны и утверждены технические условия на сухую форму препарата «Бион (ТУ 9365-001-46392258-2008) на опытную партию».

4. Разработан проект «Инструкции по применению препарата «Бион» (порошок) для лечения и профилактики дисбактериозов ЖКТ и повышения естественной резистентности сельскохозяйственных животных».

5. Разработан и утвержден регламент производства кормовой добавки «Бион» № РП 10-001-46392258-08.

6. В соответствии с порядком регистрации в Российской Федерации нормативная документация и отчеты об испытании кормовой добавки Бион подготовлены для представления на экспертизу в профильной лаборатории ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ) и государственную регистрацию.

7. Результаты исследований по усовершенствованию безотходной технологии пробиотиков Биоспорин, Бактистатин и кормовой добавки Бион с комбинированным пробиотическим и гепатопротекторным действием используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Элементы безотходной технологии, технологические параметры и режимы производства кормовой добавки «Бион» в сухой форме с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления современных кормовых добавок на основе других микроорганизмов и растительных компонентов.

2. Результаты исследований по безотходной технологии препаратов на основе В.биЫШз 3 и оценке их эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в высших учебных заведениях.

3. Кормовая добавка «Бион» рекомендуется зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при ЖКБ поросят, вызванных энтеропатогенными микроорганизмами и их ассоциациями, а также для совместного приема с антибиотиками при острых инфекционных заболеваниях ЖКТ бактериальной природы и для профилактики вирусных инфекций.

4. С целью профилактики желудочно-кишечных болезней поросят-отъемышей рекомендуется применять Бион в дозе 1,0 г на 1-го поросенка 1 раз в сутки, в течение 3 дней.

5. С лечебной целью при желудочно-кишечных болезнях поросят-отьемышей необходимо применять при первых появлениях клинических признаков заболевания в дозе 1,0 г на 1-го поросенка 2 раз в сутки в течение 6 дней.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Анохина О.В. Оценка эффективности препарата Бион при профилактике и лечении диспепсии у поросят отьемышей / О.В.Анохина // Ветеринарная медицина. - 2007. - № 2-3. - С. 27-28.

2. Анохина О.В. Расторопша и перспективы ее использования в ветеринарии / 0-В.Анохина, П.П. Бабенко, И.В.Тихонов II Ветеринарная медицина. -2007.-№2-3.-С. 3-4.

3. Анохина О.В. Технология приготовления кормовой добавки Бион / О.В.Анохина, М.Ю. Волков, А.З. Рогожин // Ветеринарная медицина. - 2008. -№ 1.-С. 7-8.

4. Анохина О.В. Новые пробиотические препараты с гепатопротективной активностью / О.В.Анохина, И.В.Тихонов, М.Ю.Волков и др. // Сб. науч. тр. 10-го Юбилейного Междун. Славяно-Балтийского научного форума «Гастро-2008». - Спб: ООО «Гастро». - 2008. -№ 2-3. - С. 5.

5. Тихонов И.В. Пробиотики нового поколения / И.В. Тихонов, О.В. Анохина Н Международное сотрудничество и развитие биотехнологии в Кировской области: Сб.науч.тр. - Киров: «Экспресс». - 2008. - С. 6.

Отпечатано в ООО «Компания Спутники-» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 04.02.09. Тираж 110 экз. Усл. п.л. 1 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Голунова, Ольга Вячеславовна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.И

1.1. Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта поросят-отъемышей.

1.2. Кормовые добавки, применяемые для профилактики диареи у поросят-отъемышей.

1.3. Принципы конструирования кормовых добавок с пробиотическим действием.

1.4. Биологически активные вещества, продуцируемые бактериями Bacillus subtilis.

1.5. Опыт применения глауконитов.

1.6. Профилактика и лечение желудочно-кишечных болезней у поросят-отъемышей.

1.7. Растительные производные, используемые в кормовых добавках при желудочно-кишечных болезнях.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Обоснование использования компонентного состава кормовой добавки.

2.2.2. Оценка питательной ценности шрота расторопши пятнистой.

2.2.3. Оценка безопасности, фазового, минералогического состава, безвредности и сорбционных свойств глауконита.

2.2.4. Оценка безвредности и определение оптимальной дозы кормовой добавки.

2.2.5. Оценка гепатозащитной активности на модели острого токсического гепатита у мышей.

2.2.6. Приготовление лабораторного образца кормовой добавки Бион и оценка его физико-химических свойств.

2.2.7. Технология приготовления кормовой добавки Бион в условиях промышленного производства.

2.2.8. Приготовление обезвоженных компонентов фильтрата культуральной жидкости Bacillus subtilis 3.

2.2.9. Технология приготовления конечной формы добавки

2.2.10. Разработка методов контроля кормовой добавки.

2.2.11. Оценка биологических свойств кормовой добавки Бион.

2.2.12. Исследование стабильности кормовой добавки Бион в процессе хранения.

2.2.13. Определение профилактической эффективности Биона при болезнях желудочно-кишечного тракта поросят-отъемышей.

2.2.14. Оценка терапевтической эффективности Биона при болезнях желудочно-кишечного тракта поросят-отъемышей.

3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ БИОН.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5. ВЫВОДЫ.

6. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион"

Лечение ЖКБ молодняка сельскохозяйственных животных остается в настоящее время одной из актуальных проблем ветеринарной медицины. Несмотря на большое количество природных и синтетических лечебно-профилактических препаратов, многие вопросы, касающиеся лечения диспепсии, остаются до настоящего времени нерешенными.

Широко применяемые с этой целью антибактериальные препараты наряду с положительным воздействием на течение и форму заболевания вызывают побочные эффекты: возникновение антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, развитие дисбиотических состояний кишечника, аллергические реакции и др.

В этой связи разработка и внедрение в практику ветеринарии новых комплексных высокоэффективных биологических препаратов для лечения и профилактики ЖКБ животных представляет собой задачу, актуальность которой не вызывает сомнений [1-4].

Перспективным направлением в данной области, по мнению многих отечественных и зарубежных специалистов [1,4,5-10], является конструирование пробиотиков.

Опыт многих российских и зарубежных ученых [11-15] показал, что применение в ветеринарии препаратов растительного происхождения для лечения и профилактики диарейных заболеваний в целом ряде случаев имеет положительный результат.

Многие растения одновременно оказывают положительное влияние на различные системы: пищеварительную, сердечно-сосудистую, мочеполовую и т.д. Однако наиболее ценными считаются препараты растительного происхождения, которые обладают наряду с основным механизмом действия еще и дезинтоксикационными свойствами за счет воздействия на ретикуло-гистиоцитарную систему и печень, в частности. Основным представителем таких растений является расторопша пятнистая Silybum marianum (L.) Gaerth., сем. Астровые - Asteraceae, опыт применения которой насчитывает более 2000 лет [11-14].

Биологически активные компоненты расторопши входят в состав таких гепатопротекторных средств, как карсил, силибор, легалон, натурсил [16-20].

Главными составляющими ее являются биологически активные вещества - флаволигнаны (силибин, силидианин, силикристин и их стереоизомеры), обладающие гепатопротекторным действием, флавоноиды (таксифолин, кверцетин, кемпферол, дигидрокемпферол), органические кислоты, горечи, смолы, жирное масло, белки, в состав которых входит полный набор незаменимых аминокислот, фосфолипиды и другие вещества [21-23].

Поэтому препараты расторопши по механизму действия следует отнести не только к гепатозащитным средствам, но и к универсальным мембрано- и органопротекторам [24].

Матрицей для иммобилизации бактерий-антагонистов и продуктов их метаболизма могут быть природные глаукониты, обладающие уникальными ионообменными и адсорбционными свойствами [25-29].

Эффективность использования природных энтеросорбентов в рационах сельскохозяйственных животных неоспоримо доказана работами отечественных и зарубежных специалистов [30-35].

Глаукониты благоприятно влияют на морфологическое состояние слизистой оболочки кишечника, усиливают функционирование микроворсинок, что улучшает пищеварение и всасывание, регулируют содержание свободной жидкости в кишечнике, тем самым, способствуя нормализации пищеварения.

Конструирование и производство биологических препаратов на основе комбинаций ионообменных матриц с компонентами растительного происхождения и метаболитами бацилл для комплексной профилактики желудочно-кишечных болезней сельскохозяйственных животных являются актуальной задачей для обеспечения здоровья и производительности сельскохозяйственных животных.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы являлась разработка новой кормовой добавки с пробиотическими и гепатопротекторными свойствами на основе безотходной технологии приготовления пробиотиков и оценка ее эффективности при желудочно-кишечных болезнях поросят-отъемышей.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Обосновать компонентный состав кормовой добавки с пробиотическим и гепатопротекторным действиями и оценить биологические свойства ее компонентов.

2. Разработать технологию производства кормовой добавки Бион на оборудовании ATJI пробиотиков Биоспорин и Бактистатин.

3. Приготовить лабораторные образцы кормовой добавки и изучить ее биологические свойства.

4. Приготовить производственную серию и оценить лечебно-профилакти-ческую эффективность кормовой добавки Бион при ЖКБ на поросятах-отъемышах.

5. Рассчитать экономическую эффективность кормовой добавки Бион при откорме поросят.

6. Разработать проекты нормативно-технической документацию на кормовую добавку Бион.

Научная новизна

Впервые на основе комбинации метаболитов спорообразующего штамма В. subtilis 3, иммобилизованных на природном энтеросорбенте - глауконите в смеси со шротом плодов расторопши пятнистой, получена новая отечественная кормовая добавка, обладающая комплексным сорбционным, гепатопротекторным и пробиотическим действием при лечении ЖКБ, за счет эффективно подобранного композиционного состава Российских природных компонентов, получаемая по безотходной технологии производства пробиотиков на отечественном технологическом оборудовании.

Обоснована возможность использования природного алюмосиликата -глауконита, шрота плодов расторопши пятнистой и их смеси с метаболитами B.subtilis 3 в комплексных кормовых добавках для сельскохозяйственных животных.

Исследованы биологические свойства кормовой добавки Бион, способность подавлять размножение сальмонелл, кандид и стафилококков, стимулировать рост лактобацилл и бифидобактерий в ЖКТ животных, способность улучшать перевариваемость кормов и проявлять адсорбционное и гепатопротекторное действия, обеспечивающие возможность ее применения при лечении и профилактике ЖКБ поросят, в том числе в комплексе с антибиотиками при инфекционных болезнях животных и их осложнениях.

Установлена высокая (95-97%) лечебно-профилактическая эффективность готовой формы кормовой добавки Бион при ЖКБ поросят-отъемышей.

Практическая и теоретическая значимость работы

Создана безотходная технология, позволяющая одновременно получать пробиотики Биоспорин, Бактистатин и кормовую добавку Бион в виде порошка на единой аппаратурно-технологической линии в филиале ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ-Центр военно-технических проблем биологической защиты».

В практику ветеринарии Российской Федерации будет введена первая отечественная комбинированная пробиотическая кормовая добавка Бион, обладающая широким спектром лечебно-профилактической эффективности.

Разработаны и утверждены проект ТУ 9365-001-46392258-2008 на кормовую добавку Бион; промышленный регламент производства кормовой добавки Бион в сухой форме (15.02.2008 г. № 3458); разработан проект инструкции по применению кормовой добавки Бион для лечения и профилактики дисбактериозов ЖКТ поросят-отъемышей.

Независимая экспертиза производственных серий подтвердила соответствие показателей качества кормовой добавки Бион требованиям ТУ акт от 20.03.2008 г. ООО «Лаборатория технологии оздоровительных препаратов»).

На поросятах-отъемышах установлена эффективность действия кормовой добавки Бион. Исследовано влияние ее на микробиоценоз кишечника, установлена высокая лечебно-профилактическая эффективность при диспепсиях ЖЕСТ, что подтверждено актами, утвержденными руководителями животноводческих хозяйств.

В соответствии с порядком регистрации в Российской Федерации нормативная документация и отчеты об испытании кормовой добавки Бион подготовлены для представления на экспертизу в профильной лаборатории ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ) и государственную регистрацию.

Результаты исследований по созданию кормовой добавки с пробиотическими и гепатопротективными свойствами и безотходной технологии используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование компонентного состава кормовой добавки Бион на основе фильтрата культуральной жидкости, содержащей продукты метаболизма В. subtilis 3, иммобилизованные на природном минеральном адсорбенте - глауконите в смеси с сухим шротом плодов расторопши.

2. Промышленная безотходная технология с использованием современных средств концентрирования, позволяющая получать кормовую добавку Бион на АТЛ производства пробиотиков Бактистатин и Биоспорин. 3. Результаты лечебно-профилактической эффективности пробиотической и гепатопротекторной кормовой добавки Бион при желудочно-кишечных болезнях поросят-отъемышей.

Апробация работы: основные положения диссертации были доложены и обсуждены: на X Юбилейном Международном Славяно-Балтийском научном форуме "Санкт-Петербург — Гастро-2008" (Санкт-Петербург -2008 г.); конференции «Международное сотрудничество и развитие биотехнологии в Кировской области» (г. Киров).

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, в том числе: 2 статьи в сборниках международных конференций, в журнале, включенном в перечень ВАК РФ, 3 статьи.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 106 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (126 источников, из которых 114 отечественных и 12 иностранных), 29 таблиц, 2 рисунка.

Автор работы выражает глубокую признательность и благодарность сотрудникам МГАВМиБ, филиалу ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ - ЦВТП БЗ», ООО «Лаборатория технологии оздоровительных препаратов», ЗАО СП «Медвежьи озера», а также руководству этих организаций и хозяйств за возможность выполнения научных и практических исследований по производству кормовой добавки и изучению свойств кормовой добавки Бион. Одновременно выражает благодарность научному руководителю за оказанную помощь при проведении исследований по теме диссертации и оформлению работы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Голунова, Ольга Вячеславовна

ВЫВОДОВ

1. Элементы усовершенствованной безотходной технологии, технологические параметры и режимы производства кормовой добавки «Бион» в сухой форме с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов.

2. Результаты исследований по усовершенствованию безотходной технологии препаратов на основе В. subtilis 3 и оценки их эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в высших учебных заведениях.

3. Кормовая добавка «Бион» рекомендуется зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при ЖКБ поросят, вызванных энтеропатогенными микроорганизмами и их ассоциациями, а также для совместного приема с антибиотиками при острых инфекционных заболеваниях ЖКТ бактериальной природы и для профилактики вирусных инфекций.

4. С целью профилактики желудочно-кишечных болезней поросят-отъемышей рекомендуется применять Бион в дозе 1,0 г на 1-го поросенка 1 раз в сутки, в течение 3 дней.

5. С лечебной целью при желудочно-кишечных болезнях поросят-отъемышей необходимо применять при первых появлениях клинических признаков заболевания в дозе 1,0 г на 1-го поросенка 2 раза в сутки, в течение 6 дней.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Голунова, Ольга Вячеславовна, Москва

1. Антипов, В.А. Использование пробиотиков в животноводстве /В.А. Антипов // Ветеринария, 1991, № 4. С. 55-58.

2. Бродов, Л.Е. Диагностика и лечение острых кишечных инфекций /Л.Е. Бродов, Н.Д. Ющук, В.В. Малеев // Эпидемиол. и инфек. Болезни, 1997, № 4. С. 4 - 6.

3. Воронин, Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят / Е.С. Воронин, Д.А. Девришов, Л.Я. Ставцева // Вестник с.-х. науки, 1989, № 9. С. 105-116.

4. Малик, Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис . докт. биол. наук: 16.00.03 / Н.И Малик; ВГНКИ. М., 2002. - 53 с.

5. Белявская, В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацилл новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственных белков в организм /В.А. Белявская: Сб. науч. тр. сотр. НИКТИ БАВ. -Новосибирск, 1996. - С. 90-197.

6. Каширская, Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры /Н.Ю. Каширская // Русский медицинский журнал, 2000, № 13-14. С. 38-42.

7. Королюк, A.M. Конструирование новых препаратов и лечебных продуктов для направленной коррекции микроэкологического статуса организма / A.M. Королюк // Инфектология, достижения и перспективы: Сб. науч. тр. СПб, 1996. - С. 125.

8. Несчисляев, В.А. Пробиотики: ретроспектива, проблемы и достижения научно-производственной практики НПО «Биомед» / В.А. Несчисляев, А.Н. Иванкин, А.В. Бердутина // Журн.микробиол.,1998, № 2. С. 100102.

9. Петров, В.Ф. Получение природных биологических активных препаратов новое направление исследований в НПО «Биомед» / В.Ф. Петров, Г.М. Сафонова // Журн.микробиол., 1998, № 2. - С. 95-98.

10. Шимкус, А.Ю. Применение пробиотиков при выращивании телят / А.Ю. Шимкус //Актуал. вопросы зоотехн. науки и практики как основа улучшен, продуктив. качеств и здоровья с.-х. животных: Сб.науч.тр. М.: Колос, 2001.-С. 81-83.

11. Авакаянц, Б.М. Опыт лечения и профилактики диспепсии лекарственными растениями / Б.М. Авакаянц // Ветеринария, 1998, № 12. -С. 25.

12. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук: -Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1990. С. 333.

13. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями / Н.Г. Ковалева. М.: Медицина, 1971.-С. 350.

14. Heinze, W. Heilkrauterkunde Phytotherapie - Wirkstofftherapie, Aspekte und Perspektiven aus human- und veterinarmedizinischer Sicht / Heinze W. // Tierarztl.Umsch, 1999, № 1.- P. 46-54.

15. Амосова, E.H. Растения Сибири и Дальнего Востока источники поиска лекарственных препаратов для онкологической практики / Е.Н. Амосова, Е.П. Зубова, Е.Д. Гольдберг // Фармакология и токсикология, 1991. - Т. 54, №6.-С. 6.

16. Гильмиярова, Ф.Н. Экопатология и экопротекторы: сущьность, концепции, принятые решения / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская // Материалы 2-й Международной практической конференции. Самара, 1995.-С. 10.

17. Филимонов, А.А. Натурсил новый фитопрепарат для лечения ожогов / А.А. Филимонов, Ф.Н. Гильмиярова // Мемориальная научно-практич.конференция: Тезисы. Челябинск, 1996. - С. 169-170.

18. Сонненбихлер, И. Влияние флавоноидного силибина на синтез РНК в печени крысы / И. Сонненбихлер // Клиническое значение препарата легалон: Мат. симп. (Москва, 7 апр., 1981 г.). М., 1981. - С. 58-62.

19. Дроговоз, С.М. Сравнительная характеристика силибора, Лив.52 и легалона при дистрофии печени / С.М. Дроговоз, Л.А. Порохняк, Б.А. Рогожин, Т.С. Сахарова и др. // Фармация, 1988, №5. С. 57-59.

20. Венгеровский, А.И. Гепатозащитное действие силибинина при экспериментальных интоксикациях / А.И. Венгеровский, B.C. Чучалин, Е.А. Морокова // Фармакология и токсикология, 1987, №5 С. 67-69.

21. Hikino Hirochi. Sulibin marianum. Antihepatoxis actcions of flavonoids from Sulibin marianum fruits / Hikino Hirochi, Kiso Yoshinobu, H. Wagner et al. // Planta med, 1984. V. 50, №3. - P. 248- 250.

22. Valemzuella, A. Silybin dichemusuccinate protect rat eruthrocytek agains phenylhydrazine induced lipid peroxydation and hemolyses / A. Valemzuella, R. Guella, A. Garrido // Planta med, 1987, №5. P. 402-405.

23. Гильмиярова, Ф.Н. Постижение сути: экология, экопатология, натурсил / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская. Самара, 1997. - С. 233.

24. Березин, И.В. Иммобилизованные ферменты / И.В. Березин, Н.Л. Клячко, А.В. Левашов и др. // Биотехнология / Под ред. Н.С. Егорова и В.Д. Самуилова. М.: Высш.шк., 1987. - Кн. 7. - С. 12-67.

25. Вудворд, Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты / Под ред. Дж. Вудворда. М., Мир, 1988. - С. 6-14.

26. Овчинников, А.А. Применение природных алюмосиликатов в рационах сельскохозяйственных животных / А.А. Овчинников, Ш.Г. Усманов / Аграрная наука Урала: вопросы теории и практики / Челяб. науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. Челябинск, 2005. - С. 190-192.

27. Тагиров, X. Использование глауконита в качестве кормовой добавки / X. Тагиров, И. Миронова // Молочное и мясное скотоводство, 2008, № 1. -С. 26-27.

28. Бгатов, В.И. Природные сорбенты и животный мир / В.И. Бгатов, А.В. Бгатов, А.В. Bait, A.M. Паничев: Материалы межд. симп. Новосибирск, 1995.-С. 25-28.

29. Кирсанов, Т.С. Влияние глауконитового концентрата на рост телят / Т.С. Кирсанов / Технол. пробл. пр-ва продукции животноводства. Троицк, 2001.-С. 50-51.

30. Горбунова, Г.П. Глаукониты юрских и нижнемеловых отложений центральной части Русской платформы / Г.П. Горбунова: Тр. ИГН.АН. СССР. -Вып. 114, 1950, 148 с.

31. Энтеробактерии: Руководство для врачей / И.В. Голубева, В.А. Киселева и др. / Под ред. В.И. Покровского. М.: Медицина, 1985.

32. Запруднов, A.M. Микробная флора кишечника и пробиотики / A.M. Запруднов, JI.H. Мазанкова. М.: Колос, 1999, 204 с.

33. Изачик, Ю.А. Дисбактериоз кишечника/ Ю.А. Изачик, А.А. Корсунский // Медицинская помощь, 1993, №2. С. 58-60.

34. Интизаров, М.М. Микрофлора тела животных / М.М. Интизаров М.: MB А, 1989,20 с.

35. Тараканов, М.А. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных / М.А. Тараканов // Ветеринария, 2000, № 5. С. 25-26.

36. Конопаткин, А.А., Бакулов, И.А. и др. / Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / Под ред. А.А. Конопаткина. -М.: Колос, 1984, 324 с.

37. Коршунов, В.М. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов и др. М.: Мир, 1999, 287 с.

38. Полушин Г.В. Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии / Г.В. Полушин, С.В. Старченков, Г.Г. Щербаков СПб: ГИОРД, 1999, 185 с.

39. Бондаренко, В.М. и др. Дисбиоз. Современные особенности профилактики и лечения / В.М. Бондаренко М.: Мир, 1995. - С. 20.

40. Куриленко, А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, В.Л. Крупальник -М.: Колос, 2000, 275 с.

41. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т. 1: Микрофлора человека и животных и ее функции / Б.А. Шендеров - М.: ГРАНТЬ, 1998, 288 с.

42. Коршунов, В.М. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, В.В. Смеянов, Б.А. Ефимов -Вестн. РАМН, 1996, №2. С. 60-65.

43. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника и его коррекция при помощи бактерийных препаратов "Ором" и "Бифидумбактерин" / Ф.Ю. Гариб, И.Э. Нарбаева, A.M. Бектемиров и др.: Методич. реком. Ташкент: Прамос, 1994. - С. 13.

44. Перетц, М.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека и животных / М.Г. Перетц М.: Колос, 1995, 387 с.

45. Гафаров, Х.З. Моно и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов А.З. Казань: ФЭН, 2002. - С. 101-446, 475-530.

46. Скородумов, Д.И. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / Д.И. Скородумов, М.А. Сидоров, В.Б. Федоров М.: Колос, 1995, 294 с.

47. Трещанина, Н.А. Выделение чистой культуры бактерий. Изучение свойств выделенных штаммов. Техника микробиологического исследования / Н.А. Трещанина, М.М. Серых, Ю.П. Фролов Самара: Восход, 1997, 76 с.

48. Чахаева, О.В. Гнотобиология и микрофлора организма "хозяина" и антибиотикотерапия. Антибиотики и медбиотехнология / О.В. Чахаева, 1987. Т.32, №3. - С. 170.

49. Rivas, A.L. and al. Relations between oraly-administered colostrum derived nutrients and bovine leukocyte populations. (1999) 38th Ann National Council, Arlington, VA. P. 215-217.

50. Southorn, P.A., Powis G. Free radicals in medicine. Chemical nature and biologic reactions//Mayo. Clin. Proc.-1988.-№63.-P.381-389.

51. Jarvis, W.R. The epidemiology of colonization, Infection Control and Nosocomial Colonization 1996, 17:47-52.

52. McDonough, P.L. and al. Salmonella enterica infections: an emerging infectious disease // J.Clin.Microbiol, 1999; 37: 2418-2427.

53. Блохина, И.Н. Метод, указания по выделению и идентиф. усл.-патоген. энтеробак. и сальмонелл при острых киш. забол. мол. с.-х. животных /

54. И.Н. Блохина, Е.С. Воронин, Н.В. Залесских и др. М.: МСХ, 1990. - С. 37.

55. Шадрин, A.M. Цеогумит для профилактики микотоксикозов у цыплят /

56. A.M. Шадрин, В.А. Синицин, М.Д. Рыбаченко // Ветеринария, 2006, №1. С. 37-40.

57. Раицкая, В.И. Сорбционные свойства, лечебная и профилактическая эффективность энтеросорбента ЭСТ-1: Автореф. дис.канд. вет. наук /

58. B.И. Раицкая; Ин-т эксперим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока. -Новосибирск, 2002, 25 с.

59. Девришов, Д.А. Рекицен профилактический препарат против желудочно-кишечных заболеваний поросят / Д.А. Девришов, Г.Н. Печникова, З.М. Бедоева, А.А. Бурдов М., 1995. - С. 81-84.

60. Воронцова, Л.А. Биологически активные вещества для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят / Л.А. Воронцова, М.В. Чернышов, Е.Ю. Григорьянц // Дальневост. гос. агр. унт, 2003. Вып.2. - С. 44-47.

61. Аминопептид 2С и янтарная кислота эффективная подкормка для поросят // Ветеринария с.-х. жив, 2007, №10. - С. 59-61.

62. Филенко, В. Использование БАД биобактон в сочетании с бифидумбактерином СХЖ для поросят-гипотрофиков / В. Филенко, Е. Растоваров // Главный зоотехник, 2006, №12. С. 30-31.

63. Мягких, Ф. Бифидум СЖК избавит телят от диареи / Ф. Мягких, В. Сенников //Агрорынок, 2004, №9. С. 25-26.

64. Санин, В. Вирусные инфекции кошек современные рекомендации по лечению и профилактике / В. Санин // Ветеринарная клиника, 2002, №3, 4. - С. 10-11.

65. Малик, Е.В. Значение пробиотика Биокорм Пионер в профилактике послеродовых осложнений у свиноматок и повышении сохранности поросят / Е.В. Малик: Межд. конгресс: Пробиотики, пребиотики, симбиотики и функц-е прод. пит. СПб, 2007. - С. 26.

66. Волков М.Ю. Применение пребиотика Бактистатин в животноводстве / М.Ю. Волков, А.И. Акимочкин: Сб. науч. тр. «Перспективы развития биотехнологии в России». Пущино: МаксПресс, 2005. - С. 64-65.

67. Волков М.Ю. Новый пробиотик Бактистатин продукт современных биотехнологий / М.Ю. Волков: Сб. науч. тр. «Перспективы развития биотехнологии в России». - Пущино: МаксПресс, 2005. - С. 21-22.

68. Волков М.Ю. Коррекция нарушения микробиоценоза человека с помощью пробиотиков / М.Ю. Волков, А.В. Синица, Е.И. Ткаченко, Ю.П. Успенский, И.В. Тихонов // Вопросы питания, 2006, № 4. Т. 75. - С. 32-34.

69. Слабоспицкая, А.Т. Гиалуронидазная активность споровых аэробных бактерий, выделенных из различных экологических источников / А.Т. Слабоспицкая // Микробиол. журн., 1985 Т. 47, № 4. - С. 71-74.

70. Смирнов, В.В. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова // Микробиол. Журн, 1992, №6.-С. 82-94.

71. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии-продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская Киев: Нукова Думка, 1982, 278 с.

72. Fuller, R. Bacteria associated with the gastric epithelium of neonatal pigs / R/ Fuller, P.A. Barrow, B.E. Brooker // Appl. Environ. Microbiol., 1978. Vol. 35, №3.-P.-582-591.

73. Хуратов, А.Х. Агрохимическая и экологическая характеристика майкопских глауконитовых песчаников / А.Х. Хуратов, И.П. Гайдарев, Р.З. Уджуху: Сб. науч. тр. / Адыг. науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. -Майкоп, 2001. Вып. 4. - С. 151-160.

74. Овчинников, А.А. Природные сорбенты Челябинской области и их влияние на живой организм / А.А. Овчинников, И.Р. Мазгаров / Технол. пробл. пр-ва продукции животноводства. Троицк, 2001, - С. 74-76.

75. Мазгаров, И.Р. Сравнительная эффективность использования цеолита Сибайского и глауконита Каринского месторождений в рационах свиней на откорме: Автореф. дис.канд. с.-х. наук / Урал. гос. акад. вет. медицины. Троицк, 2001, 22 с.

76. Романов, Г.А. Почвозащитное земледелие в Монголии / Г.А. Романов, Д. Цэдэв , Г.К. Кудайбергенов М., Агропромиздат, 1988, 223 с.

77. Романов, Г.А. Цеолиты / Г.А. Романов // Степные просторы, 1993, № 11, С. 2-4.

78. Грабовенкский, И.И. Цеолиты и бентониты в животноводстве / И.И. Грабовенкский, Г.И. Калачнюк Ужгород; Карпаты, 1984, 71 с.

79. Калачнюк, Г.И. Физиолого-биохимическое и практическое обоснование скармливания цеолитов / Г.И. Калачнюк / Вестн. с.-х. науки. М., 1990. -Т.З.-С. 56-64.

80. Ромашевская, Е.И. Медико-биологические аспекты применения цеолитов в животноводстве и птицеводстве / Е.И. Ромашевская, Б.Т. Величковский

81. Природ, цеолиты в социал. сфере и охране окружающей среды. -Новосибирск, 1990. С. 20-26

82. Белкин, Б.Л. Применение хотынецких природных цеолитов в животноводстве / Б.Л. Белкин Б.Л. // Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве / Чуваш, гос. с.-х. акад.- Чебоксары, 2004. С. 395-397.

83. Тормасов, Р.И. Ветеринарно-гигиеническое обоснование применения хотынецких природных цеолитов в кормлении свиней: Автореф. дис.канд. вет. наук / Всерос. НИИ вет. санитарии, гигиены и экологии.- М., 2001, 22 с.

84. Dawkins, A natural mineral for the feed industry / Dawkins T.C.K.; Wallace J. // Feed Compounder, 1990. V. 10, № 1. - P. 56-59.

85. Кирюткин, Г.В. Влияние цеолитов на процессы пищеварения у свиней / Г.В. Кирюткин, В.П. Сироткина // Развитие и использ. ресурсов минерал, сырья для сел. хоз-ва. М., 1991. - С. 194-197.

86. Болтян, В. А. Цеолитовые туфы в рационах свиней / В.А. Болтян // Бюл. науч. Работ. ВИЖ, 1989. - Т. 94. - С. 64-66.

87. Сунагатуллин, Ф.А. Влияние глауконита на воспроизводительную функцию свиноматок / Ф.А. Сунагатуллин, Н.Е. Белоусова, Д.Ф. Горшенина, Д.Ю. Горшенин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины / Урал. гос. акад. ветеринар, медицины, 2005. С. 126-127.

88. Иванов, Е.В. Влияние глауконита на воспроизводительные функции свиноматок, рост и сохранность поросят-сосунов: Автореф. дис.канд.биол. наук / Всерос. НИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животных. / Е.В. Иванов Дубровицы, 2001, 28 с.

89. Смирнов, П.Н. Иммунологическая защита поросят при промышленной технологии выращивания / П.Н. Смирнов, Н.Х. Засепский, А.П. Простяков: Методические рекомендации. Новосибирск, 1985. - С. 44.

90. Какоулин, Т.Е. Эффективность стартина при желудочно-кишечных болезнях телят / Т.Е. Какоулин, Ц. Лудыпов // Ветеринария, 1988, №8. -С. 18-20.

91. Милютин, В.Н. Ветглкжосалан отвар корня гермека гмеллина при диареи телят / В.Н. Милютин, Ю.А. Ломов, А.Н. Беспалов // Ветеринария, 1992, №3. С. 48-50.

92. Белянко, Л.В. Специфическая профилактика смешанных инфекций желудочно-кишечного тракта новорожденных телят: Вирусные болезни с.-х. животных / Л.В. Белянко Владимир, 1995. - С. 218.

93. Субботин, В.В. Лактобифадол для бактериопрофилактики ротавируса возбудителя неонатальной диареи телят / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветинфом, 1999, №1. С. 20.

94. Панин, А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих пробиотических препаратов / А.Н. Панин //Научные основы пр-ва вет. биол. препаратов: Сб. науч. тр. / ВНИТИБП. Щелково, 2000. - С. 343345.

95. Шакуров, М.Ш. Новокаиновые блокады в ветеринарии / М.Ш. Шакуров, С.В. Тимофеев, И.Г. Галимзянов М.: Колосс, 2007. - С. 10.

96. Антосяк, В. М., Шретер, А. И. Продуктивность щавеля альпийского на полонине Брескул (охранная зона КГЗ) и возможности его использования: // Тезисы докладов науч.-практ. конф. «Проблемы изучения и охраны заповедных экосистем». Рахов, 1988. - С. 84-86.

97. Герсамия, В. Новые лекарственные средства из растительного сырья ГССР и их терапевтическое значение / В. Герсамия Тбилиси, 1957. - С. 95-98.

98. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейства Magnoliaceae — Limoniacea е- Л., 1984, 460 с.

99. Антосяк, В.М. Про можливють використання щавлю альпшського (Rumex alpinus) в медицин! та ветеринари: Тези доповщей третьо!" укр. конф. з мед. боташки. Киев, 1992. - С. 13-14.

100. Антипов, В.А. Использование пробиотиков в животноводстве / В.А. Антипов // Ветеринария, 1991, № 4. С. 55-58.

101. Овчинников, А.А. Особенности действия растительных хелатирующих комплексов микроэлементов на организм свиней. Влияние скармливания фитопрепарата эраконд: Автореф. дис. д-ра с.-х. наук / Овчинников, А.А.; ВИЖ- пос. Дубровицы, Моск. обл., 1998, 45 с.

102. Жолнин, А.В. Острая токсичность люцэвита-1 // Актуал. пробл. вет. медицины / А.В. Жолнин, О.А. Гуменюк, А.А.Овчинников, Т.Н. Давыдова г. Троицк: УГАВМ, 2002. - С. 33-34.

103. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак CP 2002» и аналогичных. М., 1998, МИ 2468-98.

104. Молохова, Е.И. Лекарственные препараты пробиотики на российском фармацевтическом рынке / Е.И. Молохова, В.Н. Тарасевич // Фармация, 2000. - Т. 49, №3. - С. 55-58.

105. Егоров, Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение / Н.С. Егоров, И.П. Баранова // Антибиотики и химиотерапия, 1999, № 6. С. 33.

106. Bradford, М.М. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / Bradford M.M. // Anal.Biochem. Vol. 72, 1976, 248-254.

107. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1986.

108. Шагам, H.JI. О физико-химических методах стандартизации микробиологических питательных сред / H.JI. Шагам, Б.М. Раскин, В.А. Мельникова// Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол., 1981, № 4. С.24-29.

109. Бергер, М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований / Под ред. М. О. Бергера. М., 1982. - С.23, 56, 67, 84, 97,122, 234.

110. Сорокулова, И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов / И.Б. Сорокулова // Антибиотики и химиотерапия, 1998, № 2. С. 20-23.

111. Трахтенберг, И.М. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте / И.М. Трахтенберг, Р.Е. Сова, В.О. Шефтель М.: Медицина, 1978. - С. 51-53.

112. Раскин, Г.И. Микроскопическая техника / Г.И. Раскин, Л.Б. Левинсон -Москва, 1957.-С. 37-41.

113. Покровский, А.А. Биохимические методы исследования в медицине / Под ред. А.А. Покровского М.: Медицина, 1969. - С. 116-119, 164-169.

114. Антонов, B.C. Динамика классов иммуноглобулинов и других сывороточных белков у крупного рогатого скота в онтогенезе / B.C. Антонов, Н.В. Кленина, С.А. Михайлова // Проблемы ветеринарной иммунологии М.: Агропромиздат, 1985. - С. 49-50.

115. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев Л.: Гос. из-во мед. литературы, 1962. - С. 290.

116. Елынин, А.И. Сгущение суспензий микробиологических производств и способы интенсификации процесса / А.И. Елынин М.: Агропромиздат, 1987.-С. 225.

117. Жужиков, В.А. Фильтрование. Теория и практика разделения суспензий / В.А. Жужиков М.: Химия, 1980. - С.400.

118. Муравьев, И.А. Технология лекарств. Изд. 3-е, перераб. и доп. - Т.1. - М.: Медицина, 1980, 391с.

119. Юсупова, Г.С. Влияние технологических процессов приготовления порошков на биологическую доступность // Г.С. Юсупова, М.М. Миранемов, Х.У. Алиев // Фармация, 1992, № 3. С. 52-53.

Информация о работе
  • Голунова, Ольга Вячеславовна
  • кандидата биологических наук
  • Москва, 2009
  • ВАК 03.00.23
Диссертация
Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки Бион - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации