Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Стробилоцеркоз: межорганизмальные паразитохозяинные взаимоотношения при гепатоазоканцерогенезе и дотации пищи аминослотами

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Стробилоцеркоз: межорганизмальные паразитохозяинные взаимоотношения при гепатоазоканцерогенезе и дотации пищи аминослотами"

од

На правах рукописи

БОГДАНОВ Вячеслав Романович

СТР0БИЛ0ЦЕРК03: МЕЮРГАНИЗМАЛЬНЫЕ ПАРАЗИТОХОЗЯИННЫЕ ВЗАИМООТНОШЕНИЯ ПРИ ГЕПАТО-АЗОКАНЦЕРОГЕНЕЗЕ И ДОТАЦИИ ПИЩ АМИНОКИСЛОТАМИ (экспериментально-теоретическое исследование)

(03.00.19 - паразитология, гельминтология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Тюмень - 1998

Работа выполнена в Кемеровской государственной медицинской академии

Научные консультанты: действительный член Академии Технологических наук РФ, доктор медицинских наук, профессор В.Г.БЫЧКОВ действительный член Академии Естественных наук РФ, доктор медицинских наук, профессор К.Г.ГРОМОВ Официальные доктор медицинских наук,

оппоненты: профессор В. В.МЕФОДЬЕВ

доктор биологических наук, профессор К.П.ФЕДОРОВ доктор биологических наук. Профессор Э.Х.ДАУГАЛИЕВА

Ведущее учреждение: Томский государственный меди цинский университет.

Защита диссертации состоится /У-/С- 1993 г_

в часов на заседании диссертационного совета Д 020.86.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной энтомологии к арахнологии по адресу: 625041 г. Тюмень, ул. Институтская, 2. , ВНИИВЗА

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке В1ШИВЭА

Автореферат разослан ¿^¿¿¿^/О&Л^ 1998 г.

Ученый секретарь диссерта- СОЛОПОВ Н.В.

ционного совета, доктор биологических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Взаимоотношения в системе пара-зиг-хозяин на организмальном уровне, где паразит выступает в качестве "организма", а хозяин - "среды", не могут быть поняты без четкого представления о сущности "организма" и "среды" (Лаптев И.П., 1972: Брудастов А.Н,. 1977, 1985; йо-ганзен Б.Г., Логачев Е.Д.. 1985. 1986, 1991. 1992: Астафьев Б.А., Петров O.E., 1992; и др.). До настоящего времени определение этих краеугольных общебиологических понятий выражено формально, где организм рассматривается как "вещь в себе", и часто в противопоставлении "среде". Выделение в организмаль-ной структуре нескольких подуровней (Иоганзен Б.Г., Логачев Е.Д., 1985) ставит вопрос о границах между ними, и позволяет по-новому подойти к анализу связей в системе паразит-хозяин. Эти представления совершенно не разработаны. В связи с этим и новой оценки требуют также понятия "паразит" и "паразитизм" (Логачев Е. Д., 1990). Специфический характер отношений складывается в системе паразит-хозяин-опухоль, которая почти не изучена экспериментально. Проблема рака является одной из важнейших медико-биологических проблем, подвергающейся на протяжении длительного периода мощной, всесторонней атаке со стороны медицинских, биологических и других наук. Несмотря на гигантский поток информации по разным аспектам этой проблемы, одно из ее направлений - онкопаразитология (Бычков В.Г., 1988) - предстает в редуцированном виде. Имеется немногим более 40 видов паразитов, представители которых способствуют опухолевому росту. В подавляющем большинстве случаев конкретное их участие в процессе опухолевой трансформации либо не исследовалось, либо слабо изучено. Значительная их часть посвящена туморогенной активности. Из них наибольшей опухолеобразовательной способностью наделены нематоды, вызывающие опухоли растений и животных (Догель В.А., 1947; Шабад А. А., 1961; Парамонов А. А., 1968; Keller R. et ath. 1971; Астафьев Б. А., 1975). Наиболее изучены в морфологическом плане неопластические трансформации при трематодозах (Schwarz D.A., 1981; Flawell D.I., 1981 Бычков В.Г., Яроцкий Л.С., 1990; и др.). Наименьшее число сведений имеется в от-

ношении бластомогенной роли цестод. Экспериментальные исследования по опухолеродной способности цестод ограничиваются, преимущественно, изучением "цистицерковых" сарком, возникающих в печени некоторых линий крыс под влиянием Strobilocer-cus fasciolarls, личинки цестоды Hydatigera taeniaeformis. Конкретные механизмы озлокачествлепия в этом случае остались неразгаданными {F.D.Bullock, M.R.Curtis, 1924, 1926; W, F. Dunning, M.R.Curtis, 1953; Л.М.Шабад, 1961, 1968; Г.В.Плисс. 1959, 1960. 1962, 1964).

Антиопухолевое, антиканцерогенное влияние гельминтов в эксперименте почти не изучено. В природных популяциях, насыщенных разнообразными паразитами, опухоли встречаются крайне редко. Одной из причин этого может быть возможный антагонизм или иные взаимодействия между опухолью и паразитом. Неизученность этого процесса продиктовала необходимость выполнения предлагаемой работы. В литературе отсутствует описание модели, позволяющей изучать влияние развития цестрд (имаго-генеза и лярвогенеза) на канцерогенез. Главной причиной выбора экспериментального печеночного канцерогенеза в качестве "партнера" стробилоцеркоза по взаимодействию на "канцерогенез-гельминтоз", явилась попытка увеличить выход "цистицерковых" сарком у крыс с помощью химического канцерогена, избирательно действующего на их печень. Таким веществом является ДАБ. К числу позитивных факторов этой модели являются: 1. Печень-орган, где постоянно крайне редко возникают "спонтанные" опухоли, что позволяет пренебречь "фоновым" опухоле-образовашем (Чаклин А.В., ШайнА.А.. 1976; Гранов A.M., Петровичев H.H., 1977; ВихертА.М., Чаклин A.B., 1990; Чаклин А. В., 1990; Попова И.В., Джаналиев Б.Р., 1990; Португа-ловаВ.В., Круглова 0.Н., 1991; Забежинский М.А., Суховоль-ский O.K. и др., 1993; Андреева P.M., Самсонов В.А. и др., 1996). 2. Стробилоцеркоз и ДАБ-канцерогенез самостоятельно хорошо изучены на разных уровнях, а последний датирован в отношении важнейших морфологических событий, продолжительность каждого из которых соизмерима с периодом формирования стробклоцерка (Бакулева Н.А., 1940; Greenfield S.Н., 1942; Hutchison W. М., 1958; Smyth J.D., 1969; ШульцР.С.. Андреева Н.К., 1955; Абуладзе К.И., 1964; Зеленцов А.Г., 1972; Бере-занцев Ю. А., 1973, 1982, 1985; Верезанцев ¡0. А., Борщуков

Д. В.. 1978; Березанцев Ю. Л.. Борисов A.B. и др., 1983; Березанцев Ю. А., Обидика М.Ю., 1985; Березанцев в. А., Перевозчи-кова Н. Г.. 1935; Мовсесян С.О. и соавт., 1978, 1981; Чесно-коваМ.В., 1983; Величко И. В., Скворцова Ф. К., 1985; Иванова В. Ф. и соавт., 1985; АдоеваЕ. Я., 1985; Перевозчикова Н.Г., 1985, 1998; 1986; Гулинска Д. и Шрамлова Я., 1986; Курбет A.B., 1987; Бккорез А. И., Пинчук В. Г., 1976; Банников Г. А., 1981; Медведева Н. Д., 1987; и др.). 3. Результаты, полученные при раздельном использовании этих моделей, хорошо воспроизводятся. Неопределенным оставался вопрос о возможном блокирующем действии рисовой диеты, ДАБ и его метаболитов, процессов, запускаемых ими в организме крыс, на инвазию и развитие паразита в печени. Существовавшая неопределенность при совмещений двух моделей, могла быть решена экспериментально с использованием разных режимов.

Цель исследования. Установить общий и специальный характер взаимоотношений в системах паразит-хозяин, паразит-хозяин-опухоль на организмалшом уровне, а также выявить возможное участие аминокислот и регулируемых ими процессов в этих связях.

Задачи исследования. 1. Создать модель сочетанного стробилоцеркоза и гепатоазокандерогенеза. 2. Выявить влияние стробилоцеркового лярвогенеза на разные морфологические процессы при гепатоазоканцерогенезе: овальноклегочную пролиферацию, гиперпластические узлы, циррозогенез, , фиброгенез, некроз; и жировую дистрофию, начальные бластомы. 3. Исследовать гистохнмически активность оксидоредуктаз, ©осфатаз, SH-групп в печени крыс при совместном действии канцерогена и лярвогенеза. 4. Изучить влияние избытка каждой из десяти аминокислот на морфологические показатели органов и тканей хозяина и стробилоцерка для' выявления возможного сходства в их действии на разные в таксономическом к экологическом отношении организмы. 5. Определить возможность влияния стробилоцеркового лярвогенеза на эндогенное образование в печени крыс китрозаминов из аргинина и амина, поступающих из экзогенного источника. 6. Представить возможные механизмы влияния стробилоцеркового лярвогенеза на каниеро-, бластомоге-нез, индуцированный п-диметиламиноазобензолом. 7. Провести сравнение эндосоматических паразитов с бластомами по ряду

общебиологических свойств. 8. Создать концепцию уровней организмальности, а на ее основе - классификацию паразитов. 9. Обосновать выделение из паразитизма клептобиоза. 10. Проанализировать возможность участия аминокислот в генной, межклеточной и можткаяевой регуляции.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Организм -многоуровневое образование, в структуру которого входят элементы внешней среды. Каждый уровень организмальности имеет свои приоритетные системы регуляции, барьеры. В соответствии с этим, паразиты могут быть классифицированы по уровню используемой организмальности и способу преодоления ее барьеров. 2. Стробилоцерковый лярвогенез угнетает ДАБ-канцеро™, и бластомогенез в печени белых крыс. Это угнетение может быть связано с ослаблением эндогенного синтеза канцерогенных нитрогаминов, избыточной продукцией Нг0г, N0 и КН3 в печени, пикнотизацией ядер с последующей гибелью измененных клеток, угнетением фиброгенеза. 3. Разные аминокислоты вызывают разные морфологические преобразования в тканях хозяина и паразита. Действие одинаковых аминокислот на сходные параметры хозяина и паразита похожи. 4. Аминокислота в виде спектра свободных аминокислот (ССА) могут быть регуляторами генной активности, межклеточных и межтканевых отношений. 5. Между бластомами и эндосоматическими паразитами существует конвергентное сходство.

Научная новизна исследования. 1. Впервые предложена и отработана в разных экспериментальных режимах модель сочетания стробилоцеркового ларвогенеза, вызываемого личинкой цес-тоды Hydatigera taeniaeformis и канцеро-бластомогенезом, индуцируемого п-дкметиламиноазобензолом. 2. Впервые обнаружено подавление стробилоцерковым лярвогенезом ДАБ-зависимого кан-церо-Оластомогенеза у белых крыс-самцов и изучены морфологические, гистохимические, микроморфологические изменения в печени хозяина. 3. Впервые изучено влияние избытка десяти аминокислот на морфологические, морфометрические показатели органов и тканей стробилоцерков и мышей в системе паразит-хозяин. 4. Предложена концепция организма, основанная на включении элементов внешней среды (экстракорпоральных органов) в состав индивидуума, а на ее основе предложена классификация паразитов. 5. Выделен особый тип симбиоза - кдапто-

биоз, базирующийся на использовании "организации" хозяина. 6. Предложена концепция генорегудяторной роли спектра свободных аминокислот и участия их в короткодастантных регуляциях. 7. Проведено сравнение эндосоматических паразитов -клептобионтов и бластом по ряду общебиологических особенностей и обнаружено значительное конвергентное сходство по большинству из них. 8. Предложены механизмы, объясняющие антиканцерогенное, антибласгомное действие лярвогенеза, индуцируемого стробилоцерками гидатигер.

Теоретическая и практическая значимость работы. Наличие конвергентного сходства между зндосоматическими паразита-ми-клептобионтами и бластомами, открывает перспективы угнетения бластомогенеза-бластом паразитарными аналогами, использования эндосоматических паразитов в качестве модели для скрининга антибластошых препаратов. Ангиогенез в паразито-форной капсуле (ПФК) может быть использован для скрининга веществ с ангио- и антиангиогенной активностью, а также быть мишенью для угнетения лярвальных цеотодозов с помощью противораковых антиангиогенных препаратов. Экзогенно вводимая аргиназа или ее индукторы могут быть использованы для уменьшения притока аргинина в личинки цестод, развивающиеся в печени. Учитывая влияние аминокислот в генетической и других регуляциях, можно использовать лекарственные препараты на фоне предварительно создаваемого или известного аминокислотного статуса. Разные аминокислоты могут быть использованы для приведения состояния печени к норме в зависимости от уровня ее повреждения. Избыточное поступление аргинина с пищей может способствовать ангиогенезу в ПФК при лярвальных цестодо-зах, е. также стимулировать рост и размножение паразитов. При трематодозах (описторхозе) это может приводить к синтезу нитрозаминов и канцерогенезу. В связи с чем продукта питания, содержание избыток аргинина (рыба, мясо и др.), должны быть использованы с ограничениями больными этими паразитоза-ми. При патологоанатомических исследованиях необходимо учитывать возможность угнетения паразитами имеющихся опухолей, что может выявить новые случаи антиканцерогенеза при парази-тозах. Модель стробилоцеркоз - промежуточный хозяин может быть использована для дальнейшего изучения влияния аминокислот на явление импринтинга.

Апробация материалов работы диссертации. Основные положения и материалы, вошедшие в диссертацию, доложены и обсуждены на: областной конференции молодых специалистов (Кемерово, 1981); "Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека (Кемерово, 1982): 7-ой научной конференции, посвященной теоретическим и практическим вопросам общей и экологической паразитологии (Кемерово, 1984), 8-ой научной конференции, посвященной теоретическим и практическим вопросам общей биологии и паразитологии (Кемерово, 1985). Конференциях: "Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека" (Кемерово, 1987), "Острые инфекционные заболевания" (Кемерово, 1987), "Острые инфекции и инвазии у человека" (Кемерово, 1989, 1990), "Актуальные проблемы острых инфекций и инвазий человека" (Киров, 1990). 9-ой научной конференции, посвященной теоретическим и практическим вопросам общей и экологической паразитологии (Кемерово, 1991), Межгосударственной конференции "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере" (Санкт-Петербург, 1992), 4-ой научно-практической конференции, посвященной 30-летию медико-профилактического факультета Кемеровского медицинского института (Кемерово, 1993), учебно-методической конференции "Содержание, формы и методы обучения" (Кемерово, 1993). Конференциях: "Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицинской морфологии" (Смоленск, 1994); "Экология и общественное здоровье населения" (Новокузнецк, 1994). 2-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточной Азии (Владивосток, 1994), 3-ей Всероссийской научной конференции "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных" (Волгоград, 1995); Научно-практической конференции, посвященной 40-летию КГМА "Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе" (Кемерово, 1996). Всероссийской научно-практической конференции "Медико-экологические проблемы паразитологии" (Кемерово, 1996); Научно-практических конференциях "Экология-безопасность-жизнь" (Кемерово, 1997), и "Санслужба г. Кемерово "Прошлое, настоящее, будущее" (Кемерово, 1997).

Публикации. Опубликовано 77 работ, из них по теме диссертации - 34.

Внедрение результатов исследования. Модель сочетанного канцерогенеза и стробилодеркоза была использована в разделе "Аминокислотная коррекция состояния больных опухолями" в рамках научно-исследовательской программы по заказу администрации Кемеровской области "Здоровье населения Кузбасса". Концепция экстракорпоральной природы организма отражена в методической рекомендации изучающим экологию и паразитологию "Уровни организмальности. Паразитизм. Клептобиоз" (1996). Результаты исследования используются в курсе лекций по проблеме "Паразит-хозяин". "Биология опухолей", читаемых в Кемеровской медицинской академии.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, семи глав, выводов и списка литературы. Объем работы без иллюстраций, таблиц и схем составляет 263 страницы. Общий объем работы 436 страниц. Список литературы включает 367 отечественных и 193 иностранных работ. Работа снабжена: 139 фотографиями, скомпонованных в 108 рисунков, 4-мя схемами и 39 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Было проведено 12 основных серий экспериментов в период 1982-1991Г.г, которые в предлагаемой работе расположены не в хронологической, а в смысловой последовательности. Серии А -Ж выполнены с целью установления характера влияния стробило-церков цестсды Hydatigera taemaeformis (Batsch, 1786), Lamarck, 1816, развивающихся в печени белых крыс на разные этапы канцерогенеза и бластомогенеза, вызываемые п-дмметила-миноазобензолом (ДАБ) в этом органе. Была использована базовая рисовая диета, дефицитная по рибофлавину с добавлением канцерогена - ДАБ (Быкорез А.И., Пинчук В.Г., 1976). Основные параметры серий А - Ж указаны в таблице 1. В каждой серии заражение крыс проведено с использованием яиц одного экземпляра цестоды Hydatigera taeniaeformis. Была проведена помесячная регистрация погибших животных с учетом в их печени личинок и опухолей. По завершении эксперимента животные были эвтаназированы, взвешены, определена масса личинок.

Таблица 1. Основные параметры семи серий эксперимента по выявлению взаимовлияния инвазии - лярвогенеза-стробилоцерко-за и канцеро-бластокогенеза, вызванного ДАБ.

Серия Группа N No Mo L Тк Ук й Год проведения эксперимента

А К П К,П 60 60 60 200 151162 3 0-10 (-) 1 нед. 0 80 80 1983

Б К п К,П 50 50 50 170 212231 4 0-8 0 0 80 80 1984

В* к п к,п 40 40 40 140 8390 2 0-9 (+) конец 1-го мес. 0 70 70 1986

Г' I к п к,п 50 40 50 160 171180 3,2 0-9 (+) конец 2-го мес. 0 80 80 1988

д* к п к.п 40 30 40 130 117125 2, 5 0-8 (+) конец 4-го мес. 0 60 60 1982

Е к п К, 11 50 50 50 170 106116 2,2 0-10 (+) конец 6-го мес. 0 80 80 1989

Ж* к п к.п 40 30 40 130 9197 2,0 0-8 (+> конец 8-го мес. 0 70 70 1985

Примечания: * крысы Вистар; "К", "П", "К,П" - группы "Канцероген", "Паразит", "Канцероген - Паразит"; N и И0 - численность крыс в группах и в серии (с учетом группы "Контроль"); М0 - начальный вес животного; I - возраст крыс; Тк- продолжительность получения крысами ДАБ в месяцах; 1к - момент инвазии онкосферами по отношению к периоду Тк; (-) и (+) -соответственно до и после начала первого приема ДАБ; А - доза онкосфер на крысу.

- и -

фрагменты печени в последующем подвергались микроморфологическому исследованию. В каждой серии было четыре группы: "Канцероген" (1.0), "Канцероген-Паразит" (1.2), "Паразит" или "Стробилоцерк" (0.2) и "Контроль" (0.0) (в этой группе было £0 крыс в каждой серии). В конце эксперимента были определены: вероятность смерти крыс йх: 1х, где - вероятность умереть в данном возрасте, с!х - число умерших в этом возрасте. 1Х - численность доживших до начала данного возрастного интервала (Мерков А. И., Поляков Л.Е., 1974); экстенсивность инвазии (Е - отношение числа крыс с личинками в печени к их числу в финальной группе): интенсивность инвазии (I - отношение количества живых личинок у заразившихся крыс к числу носителей).

Е: сериях 3 и И (1987) исследовано влияние развивающихся стробилоцерков на ранние морфогенетические процессы, вызванные НАБ. Серия 3 представлена тремя экспериментальными группами: 1.0, 1.2 и 0.2 по тридцати крыс в каждой, и одной группой "Контроль", содержащей 15 животных. Использованы крысы-самцы Вистар массой 93 - 112 г. Животные 1.2 и 0.2 групп заражены онкосферами в дозе 85 яиц на крысу одновременно с началом скармливания им ДАБ. На 33-и сутки крысы были эвтаназированы, а их органы использованы для морфометри-ческих и гистохимических исследований. Аналогично была организована и изучена серия И, но заражение крыс в ней произведено на 34-е сутки от начала приема ДАБ, а через 28 суток животные подверглись эвтаназии.

В сериях К и Л (1990) проведено изучение влияния аминокислотного дисбаланса, вызываемого избыточным дополнением пищевого рациона одной из аминокислот на развитие стробилоцерков и состояние органов и тканей хозяина. Серии К и Л были составлены из 12 групп каждая: десять "аминокислотных" групп, одна "Контроль-П" (по 15 животных) и одна "Конт-роль-0" (Ю животных). Использованы самки мышей СБА массой 22.3-27.2г. Животные всех 24 групп получали стандартную рисовую диету с витаминами. В корм животных "аминокислотных" групп добавляли одну из 10 1-аминокислот: 60мг аминокислоты на 6г сухого риса (это соответствует количеству съедаемого корма одной мышью за сутки). Использованы аминокислоты: гис-тидин, аргинин, лизин, метионин, цистеин. лейцин, изолейцин.

тирозин, пролин и аспарагин. Животные 20 групп обеих серий получали "аминокислотную" диету в течение 9 суток, после чего были переведены на базисный корм. В "аминокислотных" и "Контроль-П" группах одновременно проведено заражение яйцами, - 60 яиц на мышь, - одного экземпляра Hydatigera taenl-aeformis: мыши серии К инвазированы яйцами из последней, а серии Л - из предпоследней проглоттид. В серии К заражение проведено через 6 суток от начала приема "аминокислотной" диеты, а в серии Л - за 9 суток до него. На пятидесятые сутки от момента инвазии все животные были эвтаназированы. определена масса их тела, тимуса, личинок, показатели инвазии (Е, I). Фрагменты органов, личинок, ПФК были подготовлены для мккроморфологического и морфометрического изучения. Определены органные и тканевые параметры: lt, 12, N6 j, N62,

Кд2. M, L, NCK. NKT. d, D, NM, SMrtK (см. далее). В соответствии с величиной показателя, "аминокислотные" и "Контроль-П" группы были расположены в ранжированные ряды по каждому из них. В последующем проведена вариационно-статистическая и рейтинговая оценка влияния каждой аминокислоты на морфофункциональные процессы. Также изучены органы животных, погибших в течение эксперимента.

В серии П (1991) изучено влияние инвазии и лярвогенеза на эндогенное образование нитрозаминов из поступающих с пищей амина-амидопирина (Рубенчик Б.Л., 1987) и L-аргинина (по 1мг и 10мг в сутки на животное соответственно). 90 крыс-самцов Вкстар массой 114-131Г были разбиты на 6 равных групп. Животные 3, 4. 5 и 6 групп были заражены яйцами гидатигер (80 онкосфер на крысу), а через 20 суток рисовая диета в группах 1 и 4 была модифицирована аргинином, группе 3 - аргинином-амином, 5-ой группе - амином. Крысы 2-ой группы не были заражены и находились на рисовом рационе без модификации аргинином или амином. Через 28 суток все животные были переведены на немодифицированную рисовую диету, и на 54 сутки от начала инвазии эвтаназированы. Определены показатели инвазии, уровень О-пролиферации, содержание двуядерных гепа-тоцитов и клеток с пикнотизированными ядрами, число клеток в отпечатках печени, содержание эритроцитов с F-гемоглобином в мазках крови, М личинок и 1 тимуса.

Гистохимические методы исследования. Для проведения

гистохимических исследований был использован фиксированный материал, замороженные срезы, отпечатки печени. Фиксаторы и режим фиксации подбирали в зависимости от характера выявляемого вещества (Кисели Д.. 1962; Берстон М., 1969; Виноградов В.В., 1971; Лойда 3. и соавт. 1982). Большая часть материала Фиксирована з 4% нейтральном формалине. 70% и 96% этиловом спирте, жидкости Карнуа, Телесницкого. ацетоне. Использованы парафиновые срезы толщиной 7-15мкм, изготовленные по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969). Для сравнения активности разных оксидоредуктаз. а также фосфатаз в морфологическом очаге одного типа, ориентировались на максимальную активность фермента.

Полуколичественную оценку проводили также при сопоставлении срезов разной толщины, но с одинаковой общей интенсивностью окрашивания (Богданов В. Р., 1982). Были изучены оксн-доредуктазы: моноакинооксидаза (МАО), оксидаза О-аминокислот (ОА). сукцинатдегидрогеназа (СДГ), НАДФН- и НАДН-диафоразы, пероксидаза (ПО), глутаматдегидрогеназа (ГДГ), тажо-зо-6-фосфат дегидрогеназа (Г-6-ФДГ), малатдегидрогеназа де-карбоксилярующая (МДГд), малатдегидрогеназа (МДГ). лактатде-гидрогеназа (ЛДГ) (Пирс Э., 1964; Берстон й., 1965; Лойда 3. и соавт., 1982). фосфатазы: кислая (КФ) и щелочная (ЩФ) Фос-фомоноэстеразы определены по .Гомори и Берстону (Пирс 3., 1964; Берстон М., 1965). Для выявления ЩФ по Гомори в ряде случаев использовали несколько субстратов в конечной концентрации в инкубационной среде: фенилфосфат (0.001%). р-глицерофосфат (3%), глюкозо-6-фосфат (0.05%), тиаминпиро-фосфат (0.095%), фенолфталеинфосфат (0.1%), НАДФ (0.«), а-глицерофосфат (3%). С целью дифференцировки ЩФ на кишечный и печеночный типы, использовали 1-цистеин (0.01М, 0.12%) и Ь-фенилаланин (0.05М, 0.83%) (Луппа X., 1980; Лойда 3. и соавт.. 1982). Было изучено и влияние других аминокислот на активность ЩФ и КФ: триптофана, тирозина, гистидина, лизина, пролика, серина, лейцина, метионина, (использованы 0.1% р-ры). КФ была выявлена по Гомори с использованием р-глкце-рофосфата. а по Берстону - АБ-ВЭ-фосфата. При проведении гистохимических реакций был проведен комплекс необходимых контролей (Богданов В. Р., 1981).

Были также использованы методы неферментной гистохимии:

на белок по Бонхегу, SH-группы выявлены по а) Шевремону. Фредерику, б) Барнетту, Зелигману; S-S-группы - комбинированным методом с предварительным восстановлением S-S-групп в SH-группы Богданов В.Р., 1981). Гликоген и нейтральные гли-козамкногликаны (ГАГ) выявляли с помощью ШИК-реакции, а кислые ГАГ - алъциановьм синим (АС) при разных pH (1.5-7.0). Проведены ферментные (амилазный, гиалуронидазный) и другие контроли (Виноградов В.В., 1971; Богданов В. Р.. 1973, 1981).

по Перлсу (модификация Лизона. Бантинга и Гомори), Си** - по Окамото, Узману (Пирс 3., 1962). Нуклеиновые кислоты определяли по Эйнарсону (ДНК и РНК) и Фельгену (ДНК) с использованием срезов, обработанных рибонуклеазой и дезокси-рибонуклеазой. Так как при проведении гистохимических реакций на ферменты и некоторые другие вещества структура ядер часто не определяется, - что необходимо для идентификации клеточных типов, - во многих случаях после проведения соответствующей гистохимической реакции срезы ила отпечатки органов обрабатывали рибонуклеазой с последующей докраской ядер по Эйнарсону или гематоксилином.

Гистологические методы. Использовано окрашивание гематоксилин-эозином. а также докрашивание срезов, окрашенных по Эйнарсону эозином. Фетальный (F) гемоглобин в эритроцитах был определен методом Betke К., Kloichauer Е., (1958).

Морфометрические метода. Сбор материала и его дальнейшая обработка осуществлены с использованием рекомендаций по стандартизации методов морфометрического исследования (Ав-тандилов Г.Г., 1980; Кирьякулов Г.С. и соавт., 1981; Логинов A.C., АруинД.К., 1985; Проблемы нормы.. 1991). Относительную площадь морфообразований в печени определяли методом точечного счета (Гуцол A.A., Кондратьев Б. Ю., 1988) в срезах или проекциях фотонегативов, изучая 12 полей зрения на животное. В печени также определяли средние (й±ш) ряда показателей. Ns - число гепатоцитов в печеночной балке (Цитологическая. , 1976) подсчитывали в пяти балках (радиусах) тридцати долек у каждого животного. Na - процент двуядерных гепатоцитов от числа гепатоцитов и н|1ИК - процент пикнотизиро-ванных ядер от их общего числа в срезе определяли в сорока полях зрения в каждой печени. М0 - количество клеток в отпечатке, полученном в стандартных условиях. С каждой печени

получали 20 стекол с отпечатками, в которых обнаруживали зоны максимального сосредоточения клеток, определяли их число, используя окулярный ограничитель площади. В каждой печени изучено 60 полей зрения. Для определения плоидности ядер по их размерам, использовали окулярную шкалу (Павлов А. В., 1985), а также окуляр-микрометр АМ9-2. Змик - относительную площадь микроциркуляторного русла ПФК определяли методом линейного интегрирования по Ноз^а! (ГуцолА.А.. Кондратьев Б.Ю., 1988) используя срезы, окрашенные по Эйнарсону. В серии К от одной мыши брали 2-3 ПФК, а в серии Л - 3-4. В каждой и;; них изучали предварительно отобранное на многих срезах одно поле зрения (об.40х). репрезентативно отражающее сосудистое русло ПФК. В этих же ПФК определяли содержание плазматических клеток (Нпл) и толщину ПФК (д). Число плазмо-цитов подсчитывали в 3-5 (серия К) и 10-15 (серия Л) полях зрения (об. 40х), О-в трех-четырех полях зрения (об.40х). Толщину кутикулы стробилоцерка (<1), количество субкутикуляр-ных клеток на единицу длины кутикулы (Мск), количество кальциевых телец (НЕТ) определяли в одинаковых зонах разных срезов личинок, взятых от различных мышей, по 30 измерений на личинку. I - длину больших крючьев рассчитывали на основании измерения 15-ти из них у каждого изученного стробилоцерка. Предварительно фиксированные сколексы личинок лизировали трипсином на стеклянных пластинках, что приводило к переводу объемной ориентации крючьев в плоскостную и упрощало измерения, которые производили окуляр-микрометром. Массу личинок замеряли на аналитических весах. Индекс тимуса (1т) вычисляли по формуле Мт/Мх х 100, где Мт и Мж - масса тимуса и животного соответственно. Препараты исследовали на микроскопе МББ-1, их микрофотографирование проводили на пленку Мик-рат-200 или Микрат-300 с помощью фотонасадки МФН-1.

Количественные показатели экспериментов обработаны статистически с использованием специальных компьютерных программ. В некоторых случаях вычисляли коэффициенты корреляции и вариации (Яакин Г.Ф., 1980). Достоверность различий между сравниваемыми группами определяли, используя критерий Ъ с вероятностью ошибки менее 5%.

В главе 3 (Взаимовлияние лярвогенеза и гепатоазоканце-рогенеза у крыс) представлены результаты семи серий эксперн-

ментов по изучению влияния инвазированности стробилоцеркозом на развитие ДАБ-канцерогенеза в печени крыс-самцов. Основные результаты экспериментов представлены в таблице 2. В конце эксперимента в группе "Канцероген" обозначились подгруппы О* (животные с опухолями) и 0" (без опухолей), в группе "Паразит"- П+ и П" (соответственно) крысы со стробилоцерками и без них. в группе "Канцероген-Паразит" - 0+ П+, О* [Г, 0~П+,' О"ГГ. В группе Б канцерогенез, вызываемый ДАБ. подвергся действию всего комплекса влияний, вызываемых инвазией онкос-ферами гидатигер: инвазирование, допеченочная и внутрипече-ночная. миграция, инкапсуляция (фиброгенез, ангиогенез и др.), лярвогенез. В серии А, животные которой (группы 0. 2 и 1.2) были заражены онкосферами за неделю до начала кормления, исключено влияние дошкапсулярных процессов на начальные этапы канцерогенеза. Во всех сериях, за исключением Ж, развивающийся паразит подвергался влиянию ДАБ, его производных. В серии Ж этого не было, так как кормление ДАВ было прекращено до начала заражения.

Процесс канцерогенеза можно условно разбить на несколько периодов: 1. Собственно канцерогенез, приводящий к появлению первых зачаточных опухолей; 2. Бластомогенез - преобразование зачаточных опухолей в дефинитивную форму со специфической структурой; 3. Бластомный - характеризующийся особыми отношениями дефинитивной опухоли с организмом - опухо-леносктелем. Заражение онкосферами гидатигер в эти периоды канцерогенеза, проведенное в разных сериях, позволяет выявить действие морфогенезов, запускаемых развивающимся паразитом в печени, на морфогенезы, вызванные ДАБ и его дериватам. Анализ взаимоотношения стробилоцеркоза и канцерогенеза был основан на рабочей гипотезе о полном невлиянии двух этих процессов друг на друга (0-0 - взаимодействие, нейтрализм). Вероятность одновременного присутствия в печени паразита и опухоли в группе "Канцероген-Паразит" равна произведению вероятностей двух независимых, неальтернативных событий -Р(0*"П<" )=Р(0+) х Р(П+). Вероятность событий 0+ и 0", а также П+ и ГГ была определена по частоте опухолей в финальной популяции группы "Канцероген" и экстенсивности инвазии группа "Паразит". Теоретические вероятности совмещения двух пар альтернативных событий указаны в таблице 2, и на их основа-

- 1? -

Таблица 2. Показатели подгрупп группы "Канцероген-Паразит" всех серий

Р Подгруппы "Канцероген-Паразит"

и

I о*пч 0+П" 0'П+ 0"1Г Итого

РФ 0.071 0. 405 0 191 0. 333

N4 3(1) 17(3) 8 14 42

А I 2.33+0 34 0 2 12+0. 25 0

Рт 0.257 0.573 0. 053 0.117

}!т И 24 2 5 42

0. ООО 0. 282 0 256 0.462

мФ 0(2) 11(1) 10 18 39

Б I 0 0 1. 70+0.31

Рт 0.361 0.520 0. 049 0.070

Кх 14 20 2 3 39

РФ 0.000 0. 260 0. 333 0.407

«ф 0(2) 7(3) 9 11 27

В I 0 0 2. 00+34 0

рт 0.224 0.606 0. 046 0.124

7 16 1 3 27

РФ 0. 004 0.270 0. 216 0.460

Щ 2(1) 10(2) 8 17 37

Г I 2.50+0. 63 0 1. 37+0. 12 0

Рт 0.320 0.50 0. 07 0. 11

12 18 3 4 37

- 18 -Продолжение таблицы 2

Н*

Л I рт

0.000

0(2)

о

0.189

6

0.437 14(1) О

0.711 23

0.219 7

2. 00+0. 29 0.021 1

0.344 11 О

0.079 2

0.167 6(3)

4. 00+0.64 0.589 21

0.194

7(2)

О

0.331 12

0.250 9

3.22+0.45

0.051

2

0.389 14

0

0.029

1

I

Рт Иг

0. 193 6(2)

4.33+0.20 0.310 10

0.419 13(4) О

0.660 20

0. 193 6

3. 00+0.64 0. 010 О

0.193

6

0

0. 020

1

®

N

®

Примечания: Р - вероятность появления опухоли, паразита или их сочетания у одного животного; ф - фактические данные; т - теоретические, ожидаемые величины; I - интенсивность инвазии; N - количество животных в подгруппе; ( )- в скобках дано количество животных, погибших до окончания эксперимента

нии рассчитано количество крыс, которое должно быть в каждой из четырех подгрупп по формуле Р(0± П±) х п. (п - число крыс в финальной популяции группы 1.2). Во всех сериях отмечено резкое уменьшение количества животных подгруппы 0+ ГГ; а в сериях Б, В. Д эта подгруппа отсутствовала (без учета погибших во время эксперимента). Теоретически во всех подгруппах 0"ГГ должно быть 81 животное (11, 14, 7, 12. 6. 21, 10; I п^ О* [Г =81). Фактически же их всего 30, с учетом животных, погибших в течение эксперимента, а без них всего 17. В О* П-подгруппе, во всех сериях, ожидаемое количество крыс было также больше полученного в эксперименте, а ф2 п^ 0+ 1Г=79, т2 П1-7 О*П"-133, что почти в два раза больше. Даже если к первому результату добавить 17 - общее число крыс из этой подгруппы, погибших до окончания эксперимента, то и в этом случае полученная величина - 96, значительно меньше ожидаемого количества. Уменьшение объема "канцерогенных" групп сопровождается соответствующим увеличением других групп каждой серии - О'П'и 0"П", В наибольшей мере, в сравнении с ожидаемым (расчетным) уровнем, увеличилась подгруппа 0"ГГ({,Х = 57, а Т1 = 11) - в 5.18 раза. Это указывает на некоторое благоприятное влияние "канцерогенеза без опухолей" на лярво-генез. В 4.8 раза увеличивается объем подгруппы ОГГ во всех сериях (Ф1 - 91, а г£ = 19).Средняя числа животных по всем сериям в подгруппах (в скобках указан ожидаемый объем): О* Г - 2,43 ± 0.60 (11.57 ± 2.27, Р<0. 001), О* Г - 11.28 ± 1.70 (19.00 ± 4.44, Р<0.05), О" ГГ - 13.00 ± 1.05 (2.70 ± 0.60, Р<0.001). (Г1Г - 8.14 ± 0.45 (1.57 ± 0.45, Р<0.001). Полученные результаты однозначно указывают на ингибирующее влияние стробилоцеркоза на канцерогенез в печени крыс под влиянием ДАБ. Наибольший эффект подавления отмечен в том случае, когда паразит действует всем комплексом процессов. Выпадение влияния на канцерогенез стадий инвазирования, нахождения личинок в кишечнике крыс, миграции к печени, миграции в печени, инкапсуляции, начального формирования личинки в паре.зитофорной капсуле, - а эти стадии отсутствовали в серии А, приводит к снижению угнетающего влияния личинок на канцерогенез. В сериях Б и В, сходных по продолжительности совместного действия канцерогенеза и стробилоцеркоза с группой А, подгруппа О* 1Г отсутствовала. По-видимому, для инги-

бирующего влияния стробилоцеркоза, важно совпадение "эффектной" стадии развития паразита, и, следовательно, процессов, ею генерируемых в организме хозяина, с чувствительной стадией канцерогенеза. Заражение крыс онкосферами в период развитых опухолей (серии Е и Ж), хотя и приводит к понижению числа опухолей в группе "Канцероген-Паразит", но это уменьшение не так значительно, как в аналогичных подгруппах других серий. Это может быть связано либо с тем, что личинки, не оказывая непосредственного угнетающего действия на сформированные бластемы, препятствуют переходу "незрелых" бластом в дефинитивные, либо тем, что бластомы под влиянием паразита гибнут, или их клетки и структура нормализуются, т.е. теряют опухолевый фенотип.

Уменьшенное количество животных, в сравнении с ожидаемым в подгруппах 0+П*. не связано с повышенной гибелью крыс, несущих в печени личинок и опухоль. Количество животных, погибших за время эксперимента, в печени которых были обнаружены паразиты и опухоли, составило всего 13 крыс или 1.86 ± 0.15 б подгруппе серии. Можно было ожидать, что в числе погибших окажутся все недостающие в подгруппе С+П+ крысы, т.е. 81 - 17 = 64 (г^-Пф), что составляет 11.57 ± 1.0 крыс на подгруппу - величину, достоверно (Р<0.001) отличающуюся от наблюдаемой в эксперименте. Проанализирована смертность в группах 1.0, 0.2 и 1.2 во всех сериях. Если допустить аддитивность причин смерти, вызванных канцеро- и лярвогенезом, то вероятность смерти в группе "Канцероген-Паразит" будет равна сумме вероятностей смерти "Канцероген" и "Паразит" -q(1.2) = я(1.2) + 4(0.2); ожидаемая qг(1.2) и сравнена с фактической яф(1.2). Во всех сериях ожидаемая величина превышала полученное в эксперименте значение. Если принять qт в каждой серии за 100%, то составит: серия А - 87,5%, Б -42,8%, В -73,2%, Г - 37,5%, Д - 33,3%,Е - 67,4%, Ж - 67.6%. Средняя по сериям: ^ (1. 0) = 0.033 ± 0.004, (0. 2) = 0.027 ± 0.003, ЯФ(1.2) = 0.033 1 0.03, Яг (1.2) = 0.061 ± 0.006. Различия между первыми тремя величинами не существенны (Р>0.05), а яф(1.2) резко отличается (Р<0.001) от ожидаемой величины чт(1.2). Самостоятельный вклад канцерогенеза и стробилоцеркоза в общую вероятность смерти - близки. То, что в группе "Канцероген-Паразит" д равна каждому из этих двух

- El -

показателей, а не их сумме, указывает либо на дейсвие только одного из них в качестве причины смерти, либо на ослабление каждого из них в присутствии другого. Наибольший эффект взаимоослабления наблюдается в сериях Г и Д, где q$(1.2) меньше q(1.0) и q(0.2). В сериях А, Б, Е я Ж q$(1.2) выше q(1.0) и q(0.2), а в серии В q$(1.2) больше q(1.0) и меньше q(0.2).

Влияние опухолей и канцерогенеза на лярвогенез. Наиболее длительное "сосуществование" этих процессов было в серии А - Юмес., наименьшее - в серии Ж - 2 мес. Совместное присутствие опухолей и личинок в одной печени крыс финальной группы, было обнаружено в сериях А, Г, Е и Ж. Всего 17 животных. Во всех четырех сериях интенсивность инвазии в подгруппе О*[Г больше, чем в 0~ГГ, что, возможно, связано с какими-то благоприятными для личинок условиями, возникающими в печени крыс с опухолями. Если в сериях А и Г интенсивность инвазии в подгруппах 0+ И* была ниже, чем в группах "Паразит" (Р>0.05), то в сериях Е и Ж подгруппы 0+П+ имеют наибольшей показатель интенсивности. Это связано с малой продолжительностью воздействия ДАБ и его дериватов на паразитов в серки Б и его отсутствием в серии Ж, и. возможно, отсутствием угнетающего личинок действия каких-то морфо-физиологи-ческих процессов, запускаемых в организме хозяина ДАБ, в первые периоды канцеробластомогенеза. Не исключено прямое или косвенное благоприятное влияние бластом на инвазирова-ние, миграцию онкосфер и последующие их преобразования в стробилоцерков. О влиянии опухолевого процесса на личинок можно судить по их массе. В подгруппах 0+ П* средняя масса одной личинки выше, чем в соответствующих им 0~П+ подгруппах и группах 0.2, а. так как в подгруппе О* П+ этих серий и интенсивность инвазии более высока, то общая масса личинок в группе 0*П* достоверно превышает этот показатель в сравниваемых подразделениях (Р<0.05).

В главе 4 (Микроморфологические и гистохимические изменения в печени крыс под влиянием ДАБ, лярвогенеза и их сочетания) рассмотрены результаты двух дополнительных серий эксперимента 3 и И.

В процессе ДАБ-канцерогенеза были выделены морфофункци-ональные состояния дольки печет и определена площадь, ими занимаемая (таблицы 3, 4). В основу выделения этих "типов"

долек, получивиих рабочие названия, была положена способность гепатоцитов связывать ДАБ или его дериваты, наличие овалькоклеточной пролиферации (О-пролиферации), количество гепатоцитов в печеночной балке, наличие микроядер и полиплоидных ядер. Было обнаружено, что реакция Шевремона, Фредерика способна выявлять ДАБ и его производные, связанные с биополимерами. Интактная долька 1 - это долька печени животных из группы, не получавших ДАБ. Она окружена аналогичными по строению дольками и не инфильтрирована О-клетками, связывает ДАБ. Интактная долька II напоминает по структуре интактную дольку I, но находится в нетипичном для последней окружении (цирротические, склеротические изменения, инфильтрация око-лодолькового пространства лейкоцитами, разрастания сосудов и др.), и не связывает ДАБ. "Нормальная" долька характеризуется признаками интактной дольки 1, но имеет признаки инфильтрации овальными клетками (О-клетками). "Полиморфоядерная" долька отличается отсутствием связывания ДАБ, наличием в центре нескольких 8-16-плоидных ядер, уменьшенным количеством гепатоцитов в печеночной балке и присутствием микроядер. "Гиперхромная" долька отличается способностью к связыванию красителей, наличием большого числа пикнотизированных ядер и изменений клеток, свидетельствующих о их нефункциональном преднекротическом состоянии.

Заражение крыс, одновременно с началом их кормления ДАБ, продолжавшееся в течение 33 суток, позволило выяснить влияние заражения на начальные этапы ДАБ-канцерогенеза. Отмечено резкое снижение в присутствии паразита площади, занимаемой О-клетками (Р<0.001). зоны некроза, "юных" опухолей (гиперпластических локусов), "остального пространства" и увеличение площади "полиморфной", "интактной" II долек (Р<0.001), (Табл. 3). Гиперпластические узелки (локусы), прежде^ всего, расположены в междольковом пространстве, которое в наибольшей мере инфильтрировано О-клетками, выделяющими кислые гликозаминогликаны. В этом же пространстве идет интенсивный ангио- и фиброгенез. Уменьшение междолькового пространства неблагоприятно сказывается на образование зачаточных опухолей. Кислые гликозаминогликаны междолькового пространства создают диффузный барьер, препятствующий проникновению в него антител, и благоприятствует росту здесь

Таблица 3. относительная площадь, занимаемая морфофункцио-нальными образованиями в печени крыс серий 3 и И. (М ± т, п = 10).

Группы серий .

МО

Серия 3 (п=11) Серия И (п=10)

1.0 1.2 1.0 1.2

1. 0 7 ± 0. 1 0.8 ± 0. 1 0. 8 ± 0.1 0.5 + 0 1

2. 7 3 ± 0.6 6.5 ± 0.6 3.9 ± 0.4 4.7 ± 0 5

3. 7 4 + 0.6 9.9 + 0.3 3.8 ± 0.2 4.4 ± 0 4

4. 9 4 ±0.9 9.7 ± 0.7 5.5 ± 0.7 7.3 ± 0 5

5. 9. 5 + 0.6 3.1 + 0. 1 4.2 + 0.3 10.5 ± 0. 6

6. 22. 6 ± 1.6 39.4 ± 2.1 12.7 + 0.1 8.7 ± 0. 3

7. 6. 2 ±0.7 20.4 ±0.7 24.1 ± 1.8 37.9 ± 2. 4

8. 4. 9 ±0.5 0.6 ± 0.2 7.3 ± 0.6 3.4 ± 0. 5

9. 32. 0 ± 1. 1 9.6 ± 0.6 37.7 + 2.7 22.6 ± 1. 6

Условные обозначения: МО - морфофункциональные образования: 1. "Иктактная" долька I, 2. Зона выраженной жировой дистрофии, 3. "Нормальная" долька, 4. "Гиперхромная" долька, 5. Зона некроза, 6. "Полиморфоядерная" долька, 7. "Интакт-ная" долька II, 8. "Юные опухоли", 9. "Остальное пространство" среза печени; 1.0 - группа "Канцероген", 1.2 - группа "Канцероген-Паразит".

- 24 -

Таблица 4. Содержание некоторых видов клеток в дольках печени разного типа серии 3 (М ± ш)

Морфометричес-кий показатель Группы

1.0 1.2 0.2 О.О3

Площадь занимаемая о-клетками (в % от общей площади среза) 62,3 ±9,3 п-11 28,6 ±4,2 11=11 3.9 ± 0,2 П=10 ДО 0,3 П=10

Количество а гепатоцитов в б печеночной в балке разных г типов долек 16.3 ±1,3 15,1 ± 2,2 7.1 ± 0.7 14.4 ±2,8 15,9 ±3,2 16,4 ±2,6 8,8 ± 1,5 13,3 ± 1.2 17, 1 ± 2,9 9,9 ± 2,1 14,7 ± 1,5

Количество а двуядерных в б гепатоцитов в в % от обще- г го числа гепатоцитов 25,6 ±4,6 21,1 ± 4,1 13,3 ± 2,7 30,9 ±7,2 22, 2 ± 3,5 29,8 ±3,5 7.1 ± 0,9 30,0 ± 4, 9 31,5 ± 4,9 9,7 ± 1.5

Примечание: а - "интактная", 16 - "нормальная", в - "поли-морфоядерная", г - "интактная" II дольки. Группы: 1.0 -"Канцероген". 1.2 - "Канцероген - Стробилоцерк", 0.2 - "Паразит" с личинкой, 0.03 - "Паразит" без личинок.

бластом. В зоне максимального расположения О-пролифератов, почти нет макрофагов и плазматических клеток, что также свидетельствует о низком уровне иммунологического контроля в этой зоне. Этому же способствуют и фибротические процессы, создающие иммунозащитные компартией™, заселяемые предшественниками бластсм. Между выраженностью междолькового пространства и площадью "юных" опухолей в срезах печени группы "Канцероген", прослеживается положительная корреляционная связь умеренного типа (среднего) (г=0.61). Количество микроядер невелико в "нормальных" дольках и они отсутствуют в ин-тактных I и II дольках. В полиморфоядерной дольке их число резко возрастает. Образование микроядер, которые содержат одну или несколько хромосом, может иметь следующие последствия. 1. Гепатоциты удаляют дефектные хромосомы, очищаясь от вредных мутаций. 2. Идет сегрегационная гемизиготизация. вследствие чего одна из гомологичных хромосом остается в ядре, а другая переходит в микроядро. Это создает возможности для проявления как рецессивного, так и доминантного аллелей в пространстве одного гепатоцита, что увеличивает разнообразие фенотипических ответов гепатоцитов. Кроме того, сегрегация хромосом с помощью микронуклеации, изменяет соотношение генов внутри основного ядерного генотипа, что также разнообразит проявление генотипа. В присутствии личинок общее число микроядер увеличивается в связи с увеличением площади, занимаемой полиморфоядерной долькой, частота же их появления не изменяется. Важным способом элиминации дефектных генотипов может быть пикнотизация ядер, которая резко возрастает под влиянием личинок. Личинки усиливают регенерационные процессы на фоне ДАБ-канцерогенеза.

Гистохимические изменения. В канцерогенных группах отмечена повышенная реакция на белок в гепзтоцитах долек, не потерявших способность связывать ЛАБ. Увеличены кислотные свойства белков или их окружения, что проявляется в задержке перехода при окрашивании зеленой окраски тканей в синю при окрашивании бромфеноловым синим. Гликоген распределен крайне неравномерно в пределах дольки. В присутствии стробилоцерков происходит усиление насыщенности гликогеном. Скопление кислых и нейтральных ГАГ в несвойственных для нормальной печени местах и их избыток в междольковых пространствах, способе-

твует разобщению долек, снижению иммунного надзора и улучшает условия для роста опухолей. Железо чаще обнаруживается в зоне кислых ГАГ, а медь - в некротизированных участках.

Изученные оксидоредуктазы, в зависимости от вида кофактора (кофермента), делятся на: 1. Флавинзависимые - МАО, АО, СЛГ, НАДФН- и НАДН-диафоразы, 2. Гемсодержащие -ПО, 3. НАДФ-зависимые: ГДГ, Г-6-ФДГ, ВДГД, 4. НАД-зависимые дегид-рогеназы: МДГ и ЛДГ. В группе "Канцероген" относительная активность этих ферментов зависела от типа долек, каждая из которых имела свой ряд активности: 1. "Интактная" долька 1: ЛДГ)СДГ)НАДФН-диафораза, НАДН-Диафораза, МДГ, МДГд, Г-6-ФДГ>ГДГ, ОА)МАО> ПО. 2. "Нормальная" долька: НАДФ-Диафо-раза>СДГ)0А>МА0. ПО, Г-6-ФДГ, МДГЛ, ЛДГ, НАДН-диафораза»МДГ, СДГ. 3. "Полиморфоядерная" долька: Г-6-ФДГ, НАДН-диафораза, МДГд>ДДГ>МДГ, ГДГ, НАДФН-диафораза>ПО, СДГ>0А, МАО. 4. "Ги-перхромная" долька: НАДФН- и НАДН-диафоразы, ЛДГ, СДГ, ГДГ>П0. МАО. ОА, Г-6-ФДГ, МДГд, МДГ. 5. Интактная долька II: Г-6-ФДГ. МДГ. ЛДОНАДН- и НАДФН-диафоразы, ГДГ>СДГ, МДГд>МАО, ОА, ПО. 6. "Юные опухоли": Г-6-ФДГ, МДГ , ЛДГ, НАДФН-диафораза НАДН-диафораза, ГДГ>МДГ, СДГ»ОА»МАО, ПО. В процессе преобразования печеночной дольки под влиянием ДАБ, происходит относительное увеличение активности НАДФ-зависи-мых ферментов. Резко возрастает активность ферментов, образующих аммиак (МАО, ОА) или его детоксицирущих (ГДГ).

В "полиморфоядерной" дольке происходит уменьшение роли флавиновых оксидоредуктаз и ферментов, разрушающих амины, что создает предпосылки использования их для нитрозирования. В присутствии паразита (группа "Канцероген-паразит") отмечена большая устойчивость (сохранение нормальной активности) флавиновых дегидрогеназ.

В группе "Паразит" в паренхиме печени отмечен следующий ряд активностей ферментов: НАДН-диафораза>СДГ>Г-6-ФДПНАДФН-диафораза, ЛДГХГДГ, МДГ, ИДГд>П0, МАО, ОА. Снижение относительной роли НАДФН-диафоразы, в сравнении с группой "Канцероген-Паразит", вероятно, связано с пониженным уровнем ксенобиотиков, обезвреживаемых через систему НАДФН-диафораза, Р-450-цитохром. Фосфатазы. 0-клетки содержат "кишечный" тип ЩФ, кнгибируемый Ь-фенилаланином, а эндотелий, гепатоциты и другие клеточные элементы - печеночный тип - угнетаемый

только Ь-вдстеином. Присутствие паразита мало сказывается на активности ЩФ. В очагах "юных опухолей" активность ЩФ значительно повышена и фермент относится к печеночному типу. Активность КФ обратна активности ЩФ в этих же структурах.

Серия И. Заражение проведено на высоте 0-клеточной пролиферации на 33 сутки от начала кормления ДАБ. Присутствие паразитов приводит к резким изменениям соотношения площадей, занимаемых разными типами долек и изменений структуры печени (Таблица 3). Уменьшается площадь "юных опухолей" и "остального пространства". Увеличивается зона некроза, что монет быть благоприятным показателем, свидетельствующим об элиминации генетически измененных гепатоцитов и других клеток. Повышается площадь активной паренхимы за счет интактной дольки II типа. Увеличивается количество клеток в балке интактной дольки II типа с 12.3 ± 1.7 до 14.9 ±1.4 гепатоцита (Р>0.05), количество двуядерных гепатоцитов - с 14.4 ± 1.1% до 25.8 ± 1.7% (Р<0.001). Регенераторный импульс, создаваемый паразитом, по-видимому, способствует более быстрому восстановлению печени на фоне продолжающегося действия ДАБ. Уменьшена интенсивность реакции Шевремона, Фредерика. Активность НАДН-дмафоразы преобладает над НАДФН-диафоразной активностью. Активность флавиновых ферментов сохранена в большей мере, чем в группе "Канцероген". Активность ЩФ повышена в зоне фиброгенеза.

В печени животных групп "Канцероген" и "Канцероген-Паразит" серий А-Ж, наибольшую площадь занимают холангиоцеллю-лярные опухоли, меньше - гепагоцеллюлярные. Отмечено 17 случаев одновременного нахождения опухолей и паразитов в печени крыс, доживших до конца эксперимента. При сравнении одинаковых холангиоцеллюлярных опухолей в группах "Канцероген" (подгруппа 0+) и "Канцероген-Паразит" (подгруппа 0+П") отмечено, что в присутствии стробилоцерка идет уменьшение разнообразия клеток, выстилающих полость опухоли и появление множества служенных клеток в ее просвете. ШИК-положительное, аморфное содержимое полости интенсивно резорбируется лейкоцитами. Идет разрастание соединительной ткани (инкапсуляция). Гибель опухолей идет за счет инфильтрации сегментоя-дерными лейкоцитами (чаще в присутствии 1-3 месячных строби-лоцерков) и ликнотизации клеток опухоли. В присутствии личи-

- 28 -

нок уменьшается гетерогенность опухолей.

В главе пятой (Влияние аминокислот на ранние этапы развития стробилоцерков в печени мышей) представлены экспериментальные данные по влиянию десяти аминокислот на ряд морфологических показателей личинок и печени. В сутки каждая мышь, находившаяся в эксперименте, потребляла около 144мг незаменимых и 382 мг всех аминокислот, и дополнительно 60мг одной из десяти изучаемых аминокислот, добавляемых к рациону. Отношение количества добавляемой аминокислоты к ее количеству в исходной рисовой диете составляет: изолейцин -3.03, лейцин - 1.61, лизин - 3.85, метионин - 4.17, аргинин - 2.32. гистидин - 6.25, пролин - 3.03, тирозин - 3.45, цис-теин - 10.0. Обнаружено большое сходство результатов оценки действия каждой аминокислоты на множество параметров при использовании вариационно-статистического и рейтингового подхода. В серии К действие аминокислот происходило в период инвазирования животных онкосферами гидатигер, их вне- и внутркпеченочной миграции, а также локализации личинок и начале их инкапсуляции. Во второй серии (И) проверено влияние тех же аминокислот на начальные этапы интракапсулярного развития в течение 9 суток. Животные обеих групп эвтаназированы на 50-е сутки с момента заражения. Наибольшее морфологическое действие в первой серии отмечено у аргинина, тирозина, гистидина, пролина (табл. 5). Аргинин способствует элиминации мигрирующих онкосфер. усиливает воспалительный процесс вокруг них, уменьшает массу тимуса, что приводит к достоверному снижению интенсивности и экстенсивности инвазии. Тирозин, чаще негативно, влиял на процессы, связанные с биосинтезом белка (рост крючьев и стробилоцерков); аспарагин, напротив, увеличивал рост паразитов и массу тимуса. Одна и та же аминокислота могла действовать противоположно на разные параметры и, соответственно, процессы, ими характеризуемые. По степени влияния (рейтинговая характеристика каждой аминокислоты) все аминокислоты подразделены на три группы: резко отклоняющие морфофизиологические параметры хозяина и паразита (аргинин, тирозин, гистидин. пролин); умеренно влияющие (цистеин, аспарагин, изолейцин); и более слабо действующие (метионин, лизин, лейцин). Во второй серии аргинин проявил стимулирующий эффект на рост стробилоцерков и не влиял на

Таблица 5. Рейтинговая оценка влияния аминокислот на показатели мышей в серии К

Аминокислоты Ранги показателей аминокислот

Е 1 12 н6, Ид* М

Гкстидин -4 -4 2 3 -3 -3 -6

Аргинин -7 -8 -6 9 -6 4 1

Лизин -2 -1 -2 4 -2 1 -(2-3)

Метионии 3-2 -2 -3 5 2 3 -(2-3)

Цистеин -3 -3 -4 2 -5 - 5 -5

Лейцин 1 Л X 1 7 1 -1 2

Изолейцин 2-3 г -1 8 з -2 -1

Тирозин -5 -(6-7) -5 1 -4 5 -7

Пролин -6 -(6-7) 3-4 -1 4 -4 -4

Аспарагин -1 -5 3-4 ......... _ 6 -1 2 3

Условные обозначения: 2СТ0(, - сумма модулей рангов (общий рейтинг аминокислоты); Атоа - средний ранг аминокислоты (сила отклоняющей способности аминокислоты от контроля - П); Н] - порядковый номер рейтинга; п(.} - количество отрицательных отклонений от контроля - П; - сумма модулей отрицательных отклонений ("отрицательный" рейтинг); К2 - порядковый номер "отрицательного" рейтинга; п(<1 - количество положительных отклонений от контроля - П.

- 30 -Продолжение таблицы 5.

Ранги показателей аминокислот

1 «с к И а ипл ^МИ К

Гистидйн 3-5 2 -2 5 -5 4 6

Аргинин -4 3 -4 6 -3 -6 7

Лизин -1 -1 -5 2 -4 -1 -1

Метионин 1 -3 1 -3 -1 -3 -2

Цистекн 3-5 -4 -5 -(1-2) -2 -2 2

Лейцин г -2 3 1 2 1 3

Изслейцин 3-5 1 4 3 1 2 ' 1

Тирозин -5 -6 л -4 -6 -5 5

Пролин -3 -5 -3 -(1-2) 4 -4 -3

Аспаре.гин -2 4 -1 4 3 и 4

- 31 -Продолжение таблицы 5.

Аминокислоты Рейтинг аминокислот

у •'•га о а Лп о а ±ш ^тоа <-) Ащ о а (-> ±ш пе>

Гистидин 53 3.79 0.32 3 7 27 3.87 0.28 3 7

Аргинин 74 5. 29 0.57 1 8 44 5.50 0.66 1 6

Лизин 29.5 2.11 0.32 9 И 22.5 2.04 0.40 7 3

Метионин 34 2.43 0. 32 8 8 19. 5 2.44 0.26 6 6

Цистекн 47.5 3.39 0.32 5 И 39.5 3.59 0.30 5 3

Лейцин 28 2. 00 0. 17 10 2 3 1.50 0.29 9 12

Изолейцин 35. 5 2.50 0.57 7 3 4 1.33 0.42 10 11

Тирозин 66.5 4.75 0.49 2 10 53.5 5.35 0.32 2 4

Пролин 52. 5 3.75 0.49 4 11 41 3.73 0.50 4 3

Аспарг.гин 42.5 3.03 0.49 6 5 10 2.00 0.86 8 9

результаты инвазии. Тирозин, пролин, гистидин в этой серии оказали наиболее мощное влияние на морфофизиологические преобразования. Значительную эффективность проявили аргинин, цистеин и лизин; слабую - аспарагин, лейцин, метионин, изо-лейцик.

Так как эвтаназия мышей была проведена через значительный период времени после прекращения введения избытка аминокислот (в первой серии через 41 сутки, а во второй - через 32 суток), то отмеченные изменения свидетельствуют о длительном сохранении влияния изученных аминокислот на морфологические процессы в тканях хозяина на фоне стробилоцеркоза и запускаемых им процессов: воспаления, регенерации и др.. Это указывает на наличие своеобразного аминокислотного запечат-ления (импринтинга) состояния органа или ткани, бывшего в период совместного действия морфогенетического процесса и аминокислотного имбаланса, вызываемого избытком аминокислоты.

Б главе шестой (Морфофункциональные изменения в печени крыс под влиянием избытка аргинина и стробилоцеркоза на фоне введения ксенобиотика - амина) изучено возможное образование нитрозаминов из поступающих с пищей амина и аргинина, и влияние на этот процесс развивающихся стробилоцерков. об образовании нитрозамина судили по появлению О-пролиферации, ее интенсивности, содержанию двуядерных гепатоцитов.

В группе крыс, получавших аргинин и амин, отмечена наиболее выраженная О-пролиферация. В присутствии гельминта токсическое действие пары аргинин-амин, - возможно, обусловленное образующимся нитрозамином, - значительно снижается. Гельминт также увеличивает содержание двуядерных гепатоцитов, усиливая регенерацию органа. Обнаружено резкое увеличение пккнотизации ядер клеток печени у животных с предполагаемым синтезом нитрозамина в присутствии стробилоцерков. Пик-нотизация как морфологическое проявление апоптоза способствует элиминации клеток с поврежденным геномом. Нитрозашны не оказывают влияния на рост личинок. Обнаружено появление в крови животных эритроцитов с фетальным гемоглобином, число которых выше в группе, находившейся под действием аргинина, амина и личинок. Личинки увеличивают силу сцепления между клетками печени, которая уменьшается возможным образованием

нитрозаминов. Угнетающее действие стробилоцерков на образование нитрозаминов в печени крыс, возможно, объясняет их антиканцерогенное действие. Обнаружена также положительная средняя корреляция между числом погибших личинок в печени крыс к относительной массой тимуса. Продукты лизиса личинок могут стимулировать иммунную систему крыс.

В главе седьмой (Уровни организмальности, паразиты и клептобионты) рассмотрена концепция многоуровневости организма. В организмальном уровне можно выделить три подуровня: 1. Индивидуума; 2. Особи; 3. Организма. Индивидуум - монер-ная, гнотобионтная система, ограниченная мембранным или мембран-мембранным эктосоматическим барьером (ЭСБ). Анатомическое тело индивидуума - сома. Индивидуум - высший уровень организации мембранных образований. Стохастичность процессов в нем минимизирована. Приоритетная регуляторная система -генетическая. Особь - это индивидуум со всеми пространствами, ассоциированными с ЗСБ. Анатомическое тело - корпус. Есть эндокорпоральные пространства: 1. Инфузионные. служащие для восприятия объектов внешней среды; 2. Эвакуаторные, предназначенные для выведения; 3. Инверсионные, в которых направление перемещения объектов меняется на противоположное. Есть также эктокорпоральное пространство - открытое во внешнюю среду. Приоритетная регуляторная система - гуморальная и нервная. Граница носит функциональный характер и совпадает с границами гомеостатического влияния. Стохастичность процессов в экстрасоматических пространствах высока. Организм - особь со всеми экстракорпоральными органами (ЗКО). ЭКО - объекты внешней среды, имеющие органическую, неорганическую или смешанную природу, произведенные с участием рассматриваемой особи или без нее, и включенные в ее функциональные системы. ЭКО - это " организованность" внешней среды, используемая особью. Анатомическое тело - экстракорпус. Его границы совпадают с границами всех ЭКО. Приоритетная регулирующая система - мозг.

В связи с трехподуровневой системой организма - паразиты по месту их локализации могут быть подразделены на эндо-соматкческих, эндокорпоральных, супракорпоральных и экстракорпоральных. Первые находятся в соме, вторые - в эктосома-тических пространствах, третьи живут за пределами корпуса

хозяина и вступают с ним только в трофический контакт; четвертые питаются органикой ЭКО. Особую группу составляют па-расоматические паразиты, живущие в ЭСБ (например, чесоточный зудень). По способу проникновения в хозяина и продолжительности контакта с ним, паразиты подразделяются на инкорпоран-тов, перфорантов, пенетрантов, перфоропенетрантов. Способы проникновения паразита в хозяина: 1. Инкорпорация - это вхождение ксенобионта в эктосоматическое пространство особи и поселение в нем. Инкорпоранты подразделяются на эндокорпо-ральных и эктокорпоральных. 2. Перфорация - альтерация ксе-нобиоктом ЭСБ с целью установления "соустья" между эндосома-тической средой и пищевоспринимающей системой паразита. Пример - кровососы. Перфорация - кратковременный процесс относительно длительности онтогенеза паразита. 3. Пенетрация -проникновение паразита через ЭСБ и ряд эндосоматических барьеров с целью поселения в соме хозяина. При пенетрации идет совмещение биологических пространств двух различных особей. Пенетрация совершается дважды: "на входе" и "на выходе". Пенетранты используют хозяина также и в качестве донора ЭКО. Для них характерен клептоэффект - заимствование структур другой особи в своих целях. Пенетранты являются не только паразитами, но и клептобионтами, так как "воруют" организованность хозяина и приобретают при этом его адаптационные свойства. Такая форма симбиоза, когда одна особь односторонне использует другую в качестве источника организованности (биологического пространства - времени) - была названа клептобиозом (В.Р.Богданов, 1993). Финальные клептоби-онты - вирусы и прионы. 4. Перфоропенетрация - наряду с установлением трофического "соустья", как при типичной перфорации, паразит использует нетрофические свойства хозяина (например, ферменты, гормоны, кинетические способности и др.). Имеет место клептоэффект и более длительное взаимодействие, чем при перфорации. Пример - самки иксодоьшх клс щей. Понятие "паразит" следует использовать только для обозначения трофического взаимодействия, при котором одна особь использует потоки органических веществ, организуемых другой особью - хозяином, не разрушает его целостность, а нарушает барьерность. Предполагается рассматривать "паразитизм" с позиции волновой природы живого, как особую форму интерферен-

ции (в физическом понимании этого явления), выражающуюся в "сложении" волновых свойств двух осцилляторов - "паразита" и "хозяина". "Вред" и "польза", сопровождающие паразитизм -это проявление разного результата этого сложения (биорезонанса, его отсутствия и промежуточного состояния).

В восьмой главе (Возможные механизмы, обеспечивающие взаимодействие лярво- и канцерогенеза с организмом хозяина: обсуждение полученных результатов) рассмотрены клептобиоти-ческяе отношения личинок и хозяина, влияния на них аминокислот, добавляемых с пищей. Проанализировано сходство и различие опухолей и эндосоматических паразитов по 29 биологическим свойствам. Сходство паразита и опухоли, по некоторым из приведенных параметров-признаков, свидетельствует об одинаковых тенденциях реагирования "чужого" в сходных условиях обитания - организме хозяина. Одинаковая реакция хозяина на паразита и опухоль указывает на отсутствие специфической реакции. В связи с этим нельзя исключить возможность'моделирования взаимоотношений системы опухоль-хозяин, используя некоторые известные модели лярзальных цестодозов и других гельмкктозов (Smyth J.D., 1969; Лукашенко Н.П., 1975; Бессонов A.C., 1988; Астафьев Б. А. и соавт.. 1989; и др.). Эти же модели, а также отдельно лярвальные стадии можно использовать для изучения эффекта антибластомных веществ и их скрининга (Алпатов В.В.. 1950; Лукашенко Н.П., 1975). При этом, по-видимому, следует исходить из предпосылки, что каждому типу опухолей наиболее соответствует определенная модель -паразитез.

Рассмотрено взаимовлияние опухоли и паразита с использованием собственных и литературных данных. Высказана гипотеза о генорегуляторной активности спектра свободных аминокислот. ССА - это догенный регулятор включения аминокислот в полипептидную цепочку. Изменение ССА приводит к изменению генной экспрессии, что либо стимулирует развитие опухоли, либо угнетает. Зндосоматлческие паразиты могут выступать как регуляторы ССА.

- 36 -

выводы

1. Стробилоцерки цестоды Нуйа^ега 1аеп1аеГогш1з, развивающиеся в печени крыс-самцов, угнетают канцерогенез в этом органе, вызванный Ы-диметиламиноазобензолом. Степень угнетения зависит от длительности совместного протекания лярво- и канцерогенеза.

2. ДАВ-канцерогенез уменьшает вероятность развития стробилоцерков. снижая показатели инвазии, но благоприятно влияет на рост и развитие выживших личинок. Заражение крыс на фоке уже сформированных бластом печени приводит к резкому увеличению показателей инвазии и массы стробилоцерков.

3. В присутствии стробилоцерков морфофункциональные преобразования, вызванные ДАБ, достоверно изменяются. Уменьшается площадь: 0-клеточной пролиферации, некроза, гиперпластических очагов, внедолькового пространства, фиброза и цирроза. Увеличивается зона функционально способной печени, сохраняющей дольковое строение.

4. В печени, измененной действием ДАБ, вокруг стробило-церка и ПФК отмечается нормализация дифференцировки гепато-цитов и структуры печени; идет элиминация поврежденных клеток с использованием пикнотизации их ядер, усиливаются регенераторные процессы.

5. В опухолях печени, вызвзанных ДАБ, в присутствии стробилоцерков резко усиливается инфильтрация сегментоядер-ньш лейкоцитами, инкапсуляция и пикнотизация ядер и клеток, что завершается разрушением бластом.

6. Распределение активности оксидоредуктаз, щелочной и кислой фосфатаз зависит от характера морфофункционального состояния дольки при ДАБ-канцерогенезе. Увеличивается активность ферментов, разрушающих токсины: Н202 (оксидаза О-ами-нокислот), аммиак (моноаминооксидаза), N0 (НАДФН-диафораза). В присутствии стрсбилоцерка более длительно сохранена активность флавиновых дегидрогеназ (МАО. СДГ, НАДФН-диафоразы), которая значительно снижается в течение ДАБ-канцерогенеза.

7. Рост и развитие стробилоцерков связаны с высокой потребностью в аргинине. Личинки, используя аргинин, уменьшают его превращение в N0, снижают нитрозирование эндогенных аминоь и уровень канцерогенных аминов. Аргинин усиливает ан-

гиогекез в ПФК, снижает относительную массу тимуса, увеличивает элиминацию мигрирующих онкосфер.

8. Избыточное поступление отдельных аминокислот с пищей изменяет морфобиологические показатели у мышей. В присутствии личинки эти показатели либо нормализуются, либо отклоняются еще больше. По способности отклонять величину параметра от "контроля", аминокислоты составили три группы: резко отклоняющие (аргинин, тирозин, гистидин, пролин), умеренно (цистеин, аспарагин. изолейцин), и слабо действующие (ме-тионин, лизин, лейцин). Одинаковые аминокислоты оказывают одинаковый эффект на сходные процессы хозяина и паразита.

9. Совместное влияние избытка аминокислоты и лярвогене-за в течение продолжительного (по отношению к онтогенезу хозяина и паразита) периода времени приводит к стойким изменениям морфологических показателей, сохраняющимся у хозяина и личинки после отмены избытка аминокислоты в течение длительного периода. Аминокислоты оказывают генорегуляторное влияние.

10. Организмальность имеет три уровня - индивидуум, особь и собственно организм, которые отражают эволюционную и онтогенетическую преемственность и динамику. Каждому из этих уровней соответствуют свои специфические барьеры, приоритетные регулируювгле и информационные системы, разный характер и степень организованности. Каждый уровень организмальности имеет своих ксенобионтов, заимствующих трофический материал (паразиты) или организованность. Преодоление барьеров ксено-бионтом идет одним из способов: инкорпорация, перфорация, перфоропенетрация и пенетрация.

11. В антагонистическом симбиозе, наряду с паразитизмом существует особая форма - клептобиоз. Этот тип симбиоза основан на использовании организованности хозяина (среды обитания) ксенобионтом, который использует ее в качестве своих экстракорпоральных органов.

12. Эндосоматические паразиты - клептобионты, обнаруживают конвергентное сходство с б.ластомаки по многим жизненно важным свойствам. Это может быть основанием для их конкуренции при совместном существовании в органе хозяина.

- 38 -

СПИСОК ОСНОВНЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Богданов В. Р. Адсорбция щелочной фосфатазы кишечника кошки на кутикуле цесгод Hydatigera taeniaeformis (Batsch, 1786; Lamarck, 1816) и Dipylidlum caninum (Linneus, 1758) и роль функциональных групп белка в этом процессе //Тезисы докл. научной конф.. посвященной теоретическим и практическим вопросам паразитологии. - Кемерово. - 1974. - С. В - 10.

2. Богданов В.Р.. Кошкина Н.Г., Логачев Е.Д. Гистохимическое исследование покровных тканей цестод при действии некоторых антгельминтаков in vitro. - В сб. : Профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных (СИБНИ-ВИ). Омск. - 1977. - Вып. 29. - С. 92 - 93.

3. Богданов В. Р. К вопросу об использовании цестодами экзогенных энтеральных ферментов //Человек, среда, здоровье: Тезисы докл. к I сьезду врачей Кузбасса. - Кемерово. - 1978. - С. 291 - 293.

4. Богданов В.Р., Богданова A.A. Особенности взаимоотношений в системе паразит-хозяин. 1. Поглощение цестодами Hydatigera taeniaeformis (Batsch, 1786; Lamarck, 1816) экзогенной щелочной фосфатазы. - В сб.: Проблемы экологии позвоконных Сибири. Изд-во Кемеровского гос. уни-Е;ерситета. Кемерово, 1978. - С. 148 - 153.

5. Богданов В. Р. Гистохимическое исследование кутикуляр-но-мускульного мешка и кортикальной паренхимы цестод в связи с условиями их обитания. Автореф. диссерт. канд. бнол. наук. Алма-Ата. - 1981. - 16 с.

6. Богданов В.Р. Некоторые аспекты взаимоотношений в системе стробилоцерк-печень мышей и крыс в норме и на фоне бластомогенеза /Актуальные проблемы острых инфекций и инвазий человека: Тезисы докл. научк.-практ. конфе-ренц. - Кемерово-Киров, 1990 в. - С. 102 - 103.

7. Богданов В. Р. Некоторые дискуссионные вопросы паразитизма /IX научн. конф., посвящен, теоретич. и практи-ческ. вопросам общей и экологической паразитологии: Тезисы к докл., май, 1991 г. - Кемерово: Кемеровский мед. институт. - 1991. - С. 23 - 26.

8. Богданов В. Р. Образование и природа вазопролиферинов в системе стробилоцерк - печень хозяина //Острые инфекции к инвазии человека: Тезисы докл. к научн.-практ. конф. - Кемерово. - 1991. - С. 105 - 107.

9. Богданов В.Р. Участие паразитофорной капсулы стробило-церков в неопластической трансформации в печени /'/Острые инфекции и инвазии человека: Тезисы докл. к научн.-практ. конф. - Кемерово. - 1991. - С. 107 - 109.

10. Богданов В.Р. Клептобиоз как особая форма симбиоза //Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере: Мат. межгосударственной конф. - Тюмень - Санкт-Петербург. - 1992. - С. 16 - 17.

11. Богданов В. Р., Богданов Я.В. Стимуляция аргинином и а.ргинин-цистежювой смесью гепатоазоканцерогенеза у крыс //IV научно-практ. конф.. посвящ. 30- летию меци-ко-профилакт. факультета Кемеровского мед. института: Тезисы (сборник). - Кемерово: Центр, сан. зпид. надзора Кемерова. - 1993. - С. 50 - 61.

12. Богданов В.Р., Богданов Я.В. Влияние стробилоцерков НусЗа^ега 1аегиае1оптз /СеэЮба/ на азоканцерогенез в печени крыс //Актуален, вопр. фунд. и прикл. мед. мор-фол. -Смоленск, 1994.- 22 с.

13. Богданов В.Р., Богданов Я.В. Механизмы антиканцерогенного эффекта личинок цестоды Нуйаидега 1аеп1аеГогш1з на химический канцерогенез в печени крыс, индуцированный п-диметиламиноазобензолсм //Экология и общественное здоровье населения: Сб. докл. конф. Новокузнецк. Сибирское отделение РАИН. Новокузнецк. - 1994. - 29 с.

14. Богданов В.Р. Механизмы антиканцерогенного эффекта личинок цестоды НуйаИвега 1аетае1"огппз на химический канцерогенез в печени крыс, индуцированный п-диметила-миноазобензолом //2-й международный симпозиум фонда медицинского обмена Японии, России и стран Северо-Восточ-кой Азии. - Владивосток. - 1994. - 304 с.

15. Богданов В.Р. Сравнительная характеристика действия рисовой диеты и ее аминокислотного эквивалента на азоканцерогенез в печени крыс //Сб.: научн. трудов Кемеровского мед. ин-та. - Кемерово. - 1994. - С. 33-37.

16. Богданов В.Р., Богданов Я.В. Образование эндогенного

- 40 -

нитрозамина из экзогенных предшественников диэтиламина и аргинина в печени крыс-самцов Вистар /Влияние антро-поген. факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных: Материалы III Всероссийск. научн. конф. - Волгоград. - 1995. - 16 с.

17. Богданов В.Р. Клептобиоз - новая форма симбиоза. Медико-экологические проблемы паразитологии. Сборник научн. трудов по материалам доклад. Всероссийск. научн.-практ. конф., посвящ. 70-летию со дня рождения проф., д.б.н. Е.Д. Логачева (г. Кемерово, 20-31 мая 1996г.). Кемерово. - 1996. - С. 25 - 28.

18. Богданов В.Р. Уровни организмальности. Паразитизм. Клептобиоз. К 70-летию со дня рождения основателя каф. биол. КГМИ (КГМА) д.б.н., проф. Е.Д. Логачева и 40-летию образования кафедры. Методические рекомендации изучающим экологию и паразитологию. Кемерово, 1996. -65 с.

19. Богданов В.Р. Вазопролиферины цестод к трематод //Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе (Тезисы докладов к научно-практической конференции, посвященной 40 летаю КГМА). - Кемерово. - 1996. - Ч. 1. - С. 145 - 146.

20. Богданов В. Р. Классификация форм паразитов в связи с трехподуровневой схемой организмальности животных//Сре-да обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе (Тезисы докладов к научно-практической конференции, посвященной 40- летию КГМА). - Кемерово. - 1996. - Ч. 1. - С. 146 - 148.

21. Богданов В.Р. Возможная трофическая роль плазмоцитоз паразитофорной капсулы в отношении стробилоцерков цес-тоды Hydatigera taeniaeforrais //Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе (Тезисы докладов к научно-практической конференции, посвященной 40 летав КГМА). - Кемерово. - 1996. - Ч. 3. - С. 149 - 151.

22. Богданов В.Р., Богданов Я.В. НАДФН-диафоразная активность в печени крыс в условиях образования эндогенного нитрозамина /Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе: Тезисы докл. к научн. -пракг. конф. посвящ. 40-лети» КГМА Ч. 2. - Кемерс-

- 41 -

Во. - 1996. - С. 235 - 236.

23. Богданов В.Р.. Богданов Я. В., Богданова 0. В. о возможности депуринизации ДНК гепатоцятов крысы, подвергшихся действию диэтилнитрозамина In vivo /Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в Кузбассе: Тезисы докл. к научн.-практ. конф. посвящ. 40-летию КГМА Ч. 2. - Кемерово. - 1996. - С. 236 - 238.

24. Богданов В.Р., Бычков В.Г., Богданова А. А. Морфофункци-ональные параллели во взаимоотношениях личинок цестод с хозяином //Санслужба г. Кемерово. Прошлое, настоящее, будущее: Тезисы докл. к научн. -практ. конф., посвящ. 75-летию санслужбы России. - Кемерово, сентябрь 1997. - Кемерово. - 1997. - С. 126 - 129.

25. Богданов В.Р., Бычков В.Г., Громов К.Г.. Зайцев В.И., Богданов Я.В., Богданова А.А. Угнетение стробилоцерками Hydatigera taeniaeformis образования нитрозаминов у крыс //Санслужба г. Кемерово. Прошлое, настоящее, будущее: Тезисы докл. к науч.-практ. конф., посвящ. 75- летаю санслужбы России. - Кемерово, сентябрь 1997.- Кемерово. - 1997. - С. 133 - 135.

26. Богданов В.Р., Зайцев В.И., Богданов Я.В., Богданова A.A. Формирование клептобиотических отношений а паразитарных системах //Санслужба г. Кемерова. Прошлое, настоящее, будущее: Тезисы докл. к научн.-практ. конф., посвящ. 75-легию санэгоислужбы России. - Кемерово, сентябрь, 1997. Кемерово. - 1997. - С. 123 - 125.