Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Сравнительная эффективность диагностических методов и ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при гельминтозах жвачных животных

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная эффективность диагностических методов и ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при гельминтозах жвачных животных"

На правах рукописи

ИБРАХИМ МОХАМЕД ИЗЗАТ САИД

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ И ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКТОВ УБОЯ ПРИ ГЕЛЬМИНТОЗАХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ.

Специальность: 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных. 03.02.11 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 2 ДЕК 2013

МОСКВА-2013

00554390»

005543908

Работа выполнена на кафедре «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Гламаздин Игорь Геннадьевич

«Московский государственный университет пищевых производств»

Официальные оппоненты: Кунаков Альберт Александрович

доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»

Написанова Людмила Александровна

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ГНУ «Всероссийский научно- исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина»

Защита диссертации состоится «25» декабря 2013 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д.212.149.03 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина 33, тел.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»

Автореферат размещен на официальном сайте Министерства образования и науки РФ

http://vak.ed.ru/_«? 7 » Ц^Я^) И^2013г-

Автореферат разослан » г-, н г |2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, ( //У^/"

доктор ветеринарных наук, профессор Т.Г. Андрианова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы.

В системе общественного производства, на всех ступенях его развития значительное место принадлежит производству мясных продуктов. Мясо, наряду с молоком, рыбой и яйцами, является основным источником животного белка - важнейшего элемента питания, который не может быть заменен другим продуктом. Не вызывает сомнения, что безопасность и качество пищи, приготовленной из сырья животного происхождения полностью зависят от качества содержания продуктивных животных, от сопровождающих их болезней, особенно инфекционной и паразитарной этиологии.

Изучение гельминтозных болезней жвачных животных, роли возбудителей в биогеоценозах, их влияния на организм продуктивных животных является важным аспектом в повышении социально-экономического уровня для населения большинства стран мира. Своевременная диагностика позволяет предотвратить недостаточно эффективное содержание больных животных и разрабатывать необходимые профилактические мероприятия, что является одним из важных резервов повышения рентабельности животноводства.

Давно установлено, что жвачные животные в большой степени инвазированы гельминтам и на территории Российской Федерации и на территориях сопредельных стран (К.И. Скрябин, P.C. Шульц, 1937; A.B. Огородников, 2001; К.Л. Мальцев, 2006; Д.М. Давудов, 2008; K.M. Садов, 2008; И.А. Архипов, 2011; A.B. Радионов, 2012).

Результаты наиболее трудоемких и информативных работ по видовой классификации, распространению и диагностике гельминтозов жвачных животных представлены в научных трудах К.И. Скрябина, P.C. Шульца (1937); Е.Е. Шумаковича (1968); В.Н. Трач (1974); А. М. Сазанова, (1959); Н. В. Демидова, (1965); М.И. Кузнецова, (1987); И А. Архипова, (1998); Г.М. Лазарева (1998); С.Д. Дурдусова (1999); P.C. Кармалиева (2011).

Установлено, что на территории сельскохозяйственных угодий и ферм западного Казахстана имеются условия для существования большого количества гельминтов. При уточнении гельминтофауны жвачных животных (крупный рогатый скот) после тщательных исследований выявлено 39 видов гельминтов. Причем, из них определено биогельминтов - 16 видов, а геогельминтов - 23 вида. Как считает Р.С Кармалиев - фасциолез, мопиезиоз, эхинококкоз и другие гельминтозные болезни причиняют большой экономический ущерб.

В результате эпизоотологических исследований в популяции овец Нижегородской и Волгоградской областей был зарегистрирован 21 вид гельминтов: 3 вида трематод (15.0%), 4 - цестод (20,0%) и 14 - нематод (65,0%) (К.Л. Мальцев, 2006).

Существующие на сегодняшний день копрологические методы диагностики гельминтозов выявляют далеко не все болезни. Например: фасциолез можно диагностировать только через 3,5 - 4 месяца после начала инвазии, эхинококкоз или финноз вообще не представляется возможным. Между тем возбудители фасциолеза, эхинококкоза или тонкошейного финноза являются опасными болезнетворными агентами. Воспалительный процесс, вызванный гельминтами, обычно протекает тяжело, имеет пролиферативный характер, затрагивает всю гепатобиллиарную систему хозяина и часто заканчивается хроническим гепатитом по пролиферативному типу. Обозначенная патология ведет к нарушению деятельности желудочно-кишечного тракта и к явлению мальабсорбции, что приводит к значительному снижению эффективности откорма и снижению пищевой ценности получаемой животноводческой продукции, а также к сокращению сроков хранения продуктов убоя (А.И. Коробов, 2010).

Возбудители гельминтозных болезней многогранно патологически воздействуют па хозяина и нарушают нормальное физиологическое состояние организма. В научной литературе имеются данные, что паразитарная инвазия оказывает влияние на качество мясной продукции. В химическом составе продуктов убоя больных животных изменяется соотношение компонентов состава мышечной ткани (С.Н. Глебочев, A.A. Кунаков, 2008; Е.В. Давыдов, 2010; А.И. Коробов, 2011; И.Г. Гламаздин, 2011).

В концепции развития животноводства предусмотрено обеспечение населения России продуктами питания высокого качества, при этом планируется развивать именно отечественное производство с целью достижения максимальной независимости страны от поставок импортных продуктов.

Организации и проведению диагностической и профилактической работы в отношении паразитарных болезней мешает имеющаяся разобщенность лабораторий и оперативных подразделений, их малочисленность, отсутствие эффективной, информативной и стройной системы диагностических мероприятий для контроля над паразитами в ветеринарии.

Цель и задачи исследования. В соответствии с актуальностью проблемы цель работы заключалась в изучении гельминтозной инвазии жвачных животных и разработки научно-обоснованной системы диагностических мероприятий. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Исследовать распространение гельминтозов среди жвачных животных, поступающих на убой Раменского мясокомбината.

2) Изучить влияние гельминтов на химический состав продуктов убоя жвачных животных.

3) Уточнить эффективность гельминтоовоскопических методов исследования.

4) Дать сравнительную характеристику диагностической эффективности гельминтолярвоскопическим методам.

5) Провести анализ сравнительной диагностической эффективности методов ветеринарно-санитарной экспертизы и неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных.

6) Разработать диагностическую тест-систему на основе взаимодействия антиген-антитело.

7) Сформулировать научно-обоснованные принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах.

Научная новизна. Проведен тщательный анализ диагностической эффективности в сравнительном аспекте специализированных гельминтологических методов, серологических тестов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы. Разработан лабораторный вариант диагностической тест-системы на основе мультиантигенной системы ELISA. Проведен анализ влияния разных видов гельминтов при различных локализациях на химический состав продуктов убоя. Сформулированы научно-обоснованные принципы организации диагностических мероприятий при гельминтозах жвачных животных.

Практическая значимость работы. По материалам проведенных исследований разработаны методические рекомендации «Комплекс мероприятий по диагностике гельминтозов крупного рогатого скота», которые утверждены на ученом совете «Института ветеринарной экспертизы, санитарии и экологии». Материалы исследовательской работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий по курсам: «Лабораторная диагностика» и «Паразитология и инвазионные болезни».

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на международной конференции студентов и молодых ученых "Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания" МГУПБ, 2009. На X международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», МГУПП, 2012. Автор принимал участие в интернет-конференции СтавГАУ 2012.

Личный вклад соискателя. Работа выполнялась в рамках международного договора по подготовке кадров высшей квалификации между Россией и Арабской Республикой Египет. В 2010 году Мохамед Иззат Сайд Ибрахим после двухгодичного обучения в магистратуре защитил магистерскую диссертацию на тему:' «Биоэкология возбудителей инвазионных болезней в условиях мегаполиса», в ходе выполнения, которой освоил основные методы паразитологических исследований. Представленная

диссертационная работа является результатом трехлетних научных исследований автора в области гельминтологии жвачных животных. Исследования по изучению распространения, сезонной динамики, усовершенствованию методов диагностики гельминтозов, разработки параметров диагностической тест-системы на основе ELISA, изучение химического состава продуктов убоя при гельминтозных инвазиях выполнены лично автором.

Методические рекомендации «Комплекс мероприятий по диагностике гельминтозов крупного рогатого скота», в которых изложены принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах, разработаны совместно с академиком РАСХН, проф. Б.В. Уша и проф. И.Г. Гламаздиным. Авторы не возражают использовать полученные результаты в данной работе. Работа выполнялась под руководством доктора ветеринарных наук, профессора И.Г. Гламаздина, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов.

Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее 80% материалов в исследовании аспиранта. Соавторы не возражают в использовании результатов совместных исследований.

Положения, выносимые на защиту:

Гельминтозная инвазия среди жвачных животных, поступающих на убой на Раменский мясокомбинат.

Исследования и химический состав продуктов убоя жвачных животных при гельминтозах.

Сравнительная диагностическая эффективность специальных гельминтологических методов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы.

• Эффективность мультиантигенного варианта ИФА (ELISA) для диагностики гельминтозов.

Принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах.

Публикации. В результате проведенных исследований автором опубликовано 6 научных работ, в тексте которых изложены основные положения и выводы, вытекающие из полученных результатов, в том числе в изданиях рекомендованных ВАК РФ опубликовано три научные работы.

Объем и структура диссертации. При использовании машинописного текста материалы диссертации изложены на 117 страницах. Рукопись включает в себя введение, обзор литературы, собственные исследования, которые подразделены на материалы и методы и результаты исследования, а также их обсуждение и заключение. К тому же представлены выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Список литературы содержит 187 источника, из них 140

отечественных и 47 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 10 рисунками.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлен анализ по распространению гельминтозов жвачных животных на территории России. Автором описаны существующие методы диагностики гельминтозов. Приводятся данные по сравнительной эффективности послеубойной и прижизненной диагностики, описаны приемы по ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена с 2009 по 2013 годы на кафедре «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», а также на мясокомбинате «Раменский». Часть диагностических исследований проводили в ветеринарном диагностическом центре «Аргумент» (МГУПП).

Гельминтологические вскрытия внутренних органов и желудочно-кишечного тракта, также ово - и ларпоскопические исследования проб фекалий провели на материале от 350 голов крупного рогатого скота и 270 голов овец.

Гельминтофауну крупного рогатого скота и овец изучали в различные сезоны 2009-2013 гг.

Метод неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных. Видовой состав гельминтов определяли с помощью гельминтологических исследований различных органов: легких, сычуга и кишечника. Вначале проводили трехкратное промывание содержимого сычуга, затем, использовали мешочки из мельничного газа (величина ячеек 0,2—0,4 мм). В дальнейшем завязывали мешочки и вместе с содержимым полоскали в воде, контролируя появление мути. После прекращения отделения мути начинали просматривать частями содержимое мешочка в чашке Петри, гельминтов визуализировали при помощи лупы. Выборку гельминтов проводили кисточкой и иглой для препарирования тканей. При необходимости проведения дифференциальной диагностики и идентификации гельминтов крупного рогатого скота использовали определители: К.И.Скрябин, Н.П. Шихобалова, Р.С.Шульц и др. «Определитель паразитических нематод» Т.З «Стронгилята», 1952; К.И.Скрябин, П.П. Шихобалова, Р.С.Шульц «Трихостронгилиды животных и человека. Основы нематодологии Т.З», 1954, В.И. Ивашкин, С. А. Мухамадиев «Определитель гельминтов крупного рогатого скота» (1981).

Кроме того, исследовали стенку пищевода, желудка и кишечника компрессионным методом с микроскопией в трихинеллоскопе.

Печень помещали в большую эмалированную кювету, отпрепарировали желчный пузырь, который перекладывали в отдельный сосуд. Желчный пузырь вскрывали, заливали дегазированной водой, чтобы раствор оставался прозрачным, затем через 30 минут осадок исследовали на белом фоне. Печень препарировали в сосуде, наполненном водой, пульпу разрывали на мелкие локусы, затем заливали еще раз водой, через 30 минут сливали надосадочную жидкость, еще раз заливали и так до тех пор, пока супернатант не приобретал прозрачность. Затем исследовали осадок с помощью лупы в чашке Петри поочередно на белом и черном фоне.

Легкие, крупные бронхи, трахею и гортань разрезали ножницами, осматривали, и затем применяли метод соскоба. Исследовали под лупой содержимое бронхов и самого соскоба. Всю паренхиму легких дробили осторожно руками на мелкие фрагменты, заливали водой и исследовали методом последовательного промывания.

Почки разрезали и исследовали почечную лоханку, паренхиму почек частями подвергали размозженшо и маленькими частями проводили анализ содержимого, используя лупу.

Сердце и крупные кровеносные сосуды вскрывали в физиологическом растворе, применяли метод последовательного промывания, контролируя осадок на черном и белом фоне с просмотром через лупу.

Ветеринарно-санитарная экспертиза. Диагностику паразитарных болезней проводили по правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов, утвержденым Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 27 декабря 1983 года.

Методы гельминтоларвоскопии. При ларвоскопии (от лат. larva -личинка, греч. skopeo - смотрю) — использовали совокупность приемов обработки и исследования проб материала с целью выявления личинок гельминтов в различных биологических субстратах.

Упрощенный метод Ветцеля-Орлова. Монтировали аппарат Бермана, но вместо зажима на свободный конец резиновой трубки надевали пробирку. Пробы фекалий (10 г) помещали в воронки аппарата Бермана на металлической сетке или завернув их в отрезки марли. Предварительно воронки заливали водой комнатной температуры. Аппарат с пробами от овец оставляли при комнатной температуре на 3 ч, крупного рогатого скота — на 5 ч. Исследовали осадок под малым увеличением микроскопа (Г.А. Котельников, 1984). К тому же для диагностики личинок в фекалиях крупного рогатого скота использовали метод Щербовича. Для обнаружения личинок в фекалиях овец применяли метод Вайда (И.В. Орлов, 1962).

Метод культивирования личинок. 30 г фекалий помещали в обычный стакан, закрывали марлей, помещали в теплое место 27°С) на 7-8 дней, 1 раз в сутки увлажняли пробу водой. Затем, содержимое стакана заливали

теплой водой с экспозицией 7 минут, воду сливали в чистую посуду, отстаивали 10 минут. Сливали надосадочную жидкость и осадок исследовали по каплям на предметном стекле. Подвижных личинок умерщвляли настойкой йода.

Методы гельминтоовоскопии. Для обнаружения яиц гельминтов в фекалиях использовали метод последовательного промывания и метод флотации с нашими модификациями. В частности, в методе Фюллеборна вместо поваренной соли NaCl, в некоторых случаях использовали тиосульфат натрия Na2S03S - который представлял собой бесцветные моноклинные кристаллы. Данная соль имеет молярную массу 248,17 моль и хорошо растворима в воде (41,2% при 20°С). Капли поверхностной пленки снимали через 50 минут, помещали на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и микроскопнровали. Для того чтобы повысить эффективность диагностики, пробу дополнительно оставляли на 5 часов в том же растворе и затем исследовали осадок, микроскопируя содержимое на предметном или часовом стекле.

Мультиантигенный вариант тест-системы на основе ИФА (ELISA). Для серологических тестов объектами исследования служила коллекция сывороток крови от 600 голов крупного рогатого скота и 340 голов овец (наличие паразитов подтверждено, проведенной ветеринарно-санитарной экспертизой), включающая:

• 95 сывороток крови от крупного рогатого скота и 53 сыворотки от овец спонтанно зараженного нематодами желудочно-кишечного тракта;

• 32 сыворотки крови от крупного рогатого скота и 17 сывороток крови от овец, у которых были обнаружены легочные нематоды;

• 44 сыворотки крови от крупного рогатого скота, 31 сыворотка от овец спонтанно зараженного Fasciola hepatica;

• 17 сывороток крови от крупного рогатого скота, 14 сывороток крови от овец, зараженных тонкошейным цистщеркозом;

11 сывороток крови от крупного рогатого скота, 8 сывороток от овец спонтанно инвазированных Echinococcus granulosus.

Отбор сывороток крови проводили на мясокомбинате «Раменский» во время убоя крупного рогатого скота и овец с последующей обязательной ветеринарно-санитарной экспертизой внутренних органов. В качестве антигена использовали полные водно-солевые экстракты гельминтов - сырой соматический антиген.

Антивидовым конъюгатом являлись антитела к антителам быка или к антителам барана к IgG (H+L), меченные пероксидазой хрена, производства НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи. Твердофазным адсорбентом (носителем), на котором осуществлялась реакции взаимодействия антиген-антитело (ELISA) - полистироловые 96-луночные планшеты для ИФА, плоскодонные фирм Dynatech (Германия) и Nunck (Дания).

Мультиантигенный тест осуществляли исследованием каждой сыворотки сразу на пять антигенов, которые были адсорбированы каждый в своей лунке: нематод легочной ткани, нематод желудочно-кишечного тракта, F. hepatica, C.tenuicollis, Е. granulosus.

Сбор инвазионного материала и получение соматического антигена.

Гельминтов собирали на точках контроля и ветеринарно-санитарной экспертизы внутренних органов из органов и тканей с характерной локализацией паразитов в организме зараженных животных. Исследования проводили в убойном цехе мясокомбината «Раменский» Московской области. Живых гельминтов помещали в термос со льдом и в течение 2 часов с нарочным доставляли в лабораторию, после чего избавлялись от различных загрязнений и пятикратно промывали трематод и нематод в фосфатно-солевом буфере рН 7,2. Для того, чтобы избавиться от содержимого кишечника, проводили инкубацию паразитов, используя раствор Stephenson (150 шМ NaCI, 10 mM KCI, 1 тМ СаС12, 6 тМ боратный буфер и 30 тМ глюкоза) рН 8.6 При 37°С, экспозиция - 6 часов (Stephenson W., 1947а). В дальнейшем, гельминтов помещали в специальную фарфоровую ступку и добавляли 0,01 М фосфатно-солевой буфер рН 7,2 в соотношении 1:2. Гомогенизировали ткани, растирая их пестиком до получения кашицеобразной и однородной консистенции с последующим трехкратным замораживанием и оттаиванием в течение 10 минут. Следующим этапом являлось центрифугирование в течение 20 минут при 15000 об/мин и температуре 4°С. Надосадочную жидкость отбирали пипеткой. Для определения концентрации белка в супернатанте использовали метод определения общего белка по Лоури (Lowry О.Н. et al., 1951).

Химический состав мяса и субпродуктов. С целью изучения влияния паразитов на химический состав субпродуктов и мяса исследовали мышечную ткань, печень, сердце и почки. В тканях определяли содержание влаги, белка, жира и золы. Для точного анализа изучение проводили согласно ГОСТ 23392-78 «Мясо. Методы химического и микробиологического анализа свежести» учитывая «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1988). Проведение опытов осуществляли трехкратно и выводили среднее арифметическое значение цифровых показателей. Результаты исследований обрабатывали методом статистического анализа с использованием программного обеспечения Microsoft Office 2010, программ «SPSS» и «Statistika».

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Распространение гельминтозов среди жвачных животных, поступающих на убойные площадки мясокомбинатов Московской

области.

Гельминтологическими методами и методами ветеринарно-санитарной экспертизы для оценки распространения гельминтозов было

исследовано 350 голов крупного рогатого скота и 270 голов овец. К тому же серологическими методами с обязательной ветеринарно-санитарной экспертизой было исследовано еще 620 голов крупного рогатого скота и 340 голов овец. Таким образом, мы проанализировали данные результатов обследования на гельминтозы 970 голов крупного рогатого скота и 610 голов овец.

Как видно из таблицы 1 наибольшее число гельминтов было зарегистрировано при исследовании желудочно-кишечного тракта крупного

Таблица 1

Распространение гельминтозов жвачных жнвотных_

Гельминтозы Выявлено случаев Экстенсивность инвазии,%

крупный овцы, крупный овцы,

рогатый скот, п=970 п=610 рогатый скот, п=970 п=610

легочные 80 77 8,25 12.6

желудочно- 93 84 9,58 13,77

кишечные

фасциолез 60 41 6,18 6.72

цистицеркоз 67 64 6,91 10,49

тенуикольныи

Эхинококкоз 17 14 1,75 2,29

ларвальныи

рогатого скота и овец, ЭИ =9,58 и 13,77, соответственно. Интересно отметить, что нематодозы крупного рогатого скота были представлены: Ostertagia ostertagi 3,23%, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis - 2,42%, Nematodirus filicollis - 3,05%, Hemonchus contortus - 1,2%, причем в 32,07% случаях наблюдали смешанную инвазию. Возбудителей нематодозов желудочно-кишечного тракта овец дифференцировали как следующие виды: Ostertagia circumcincta - 3,04%, Trichostrongylus colubriformis, Trichostrongylus axei - 4,78%, Nematodirus filicollis - 4,63%, Haemonchus contortus - 1,32%, причем смешанная инвазия наблюдалась у овец в 41,7% случаях.

Таким образом, у крупного рогатого скота, нами выявлены следующие паразиты: Dictyocaulus viviparus, Ostertagia ostertagi, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Nematodirus filicollis, Haemonchus contortus, Fasciola hepatica, Cycticercus tenuicollis, Echinococcus granulosus (larva). В органах и тканях овец нами были выявлены гельминты: Dictyocaulus filaria, Protostrongylus kochi, Mullerius capillaris, Cystocaulus nigrescens, Ostertagia circumcincta, Trichostrongylus colubriformis, Nematodirus filicollis, Haemonchus contortus, Fasciola hepatica, Cysticercus tenuicollis, Echinococcus granulosus (larva).

Остертагиоз. У крупного рогатого скота эта болезнь вызывалась Ostertagia ostertagi, ЭИ = 3,23%, а овцы по результатам наших исследований

были поражены Оз1е1^1а агситстйа ЭИ = 3,04%. Возбудители локализовались в сычуге и кишечнике животных. Дифференциальную диагностику двух видов проводили по размерам гельминтов и спикул. СЫег1а§1а оз1ег1а£1 самцы 7,2 ± 0,6 мм длины, спикулы 0,22 ± 0,01 мм длины, дистальный конец спикул как бы обрублен и образует зубчатые тонкие отростки. Самки достигали 8,7 ± 0,4 мм длины. С^а^а агентства самцы имели 10,2 ± 0,7 мм длины, .спикулы 0,42 ± 0,04 мм длины, задний конец спикул расщеплен на две ветви равной длины. Самки достигали 13,2 ± 0,8 мм длины.

Зараженные животные в некоторых случаях были истощены, имели жидкие испражнения часто с остатками непереваренной пищи. Наблюдали усиленную жажду. При убое остертагиозных животных отмечали мало жира на сальнике, содержимое желудка и кишечника водянистое зеленоватого цвета со слизью. Слизистая оболочка сычуга набухшая и поражена мелкими узелками сероватого цвета. Иногда отмечали анемию.

Трихостронгилез. У крупного рогатого скота трихостронгилез вызывался Тпс1ю8Ш)П£у1и5 ахе1 и ТпсИоз^ог^у^ со1иЬп(опшх - 17 случаев, ЭИ = 1,75%. У овец эта болезнь была вызвана инвазией Тпс1юз1!ч^у1и$ соШЬпЛгтЬ, ТпсЬоэйо^уШз ахе1 - 15 случаев, ЭИ - 2,45%. Самец ТпсЬозИтнщук« ахе1 до 4,1±0,3 мм длины. Спикулы желто-коричневого цвета неравной длины, их дистальные концы образуют треугольные наросты. Самка этого вида 5,2 ± 0,3 длины, отверстие вульвы открывается на расстоянии 1,0 ± 0,2 мм от хвостового конца. Самцы вида ТпсИозЦ-ог^уШв со1иЬп1отш 5,3 ± 0,5 мм длины, спикулы практически равной длины, изогнуты, на проксимальном конце имеют корневой отросток и на дистальном хорошо заметен треугольный нарост. Самка 5,5 ± 0,6 мм длины, отверстие вульвы открывается на расстоянии 1,2 ± 0,2 мм от заднего конца. Экскреторное отверстие открывается вблизи от переднего конца.

У зараженных животных слизистая желудка была покрыта толстым слоем тягучей, прозрачной слизью без ярко выраженных признаков хронического воспаления, исхудания и потери живой массы практически не отмечали.

Нематодироз. Эта болезнь крупного рогатого скота, вызванная паразитированием в желудочно-кишечном тракте КеггШосНш.ч ППсоШб, было зарегистрировано 20 случаев, ЭИ = 2,06%. У овец обнаруживали тот же вид нематоды (ТСепШосИгаз ЯНсоШз) - 29 случаев, ЭИ - 4,75%.

Кутикула этого вида нематод в головной части поперечно исчерчена, ротовое отверстие окружено шестью маленькими сосочками. Самец в длину 12,5 ± 2,2 мм, бурса простая, спикулы длинные, толстые на их дистальном конце хитиновая мембрана приобретает форму ланцета. Самка 18,7 ± 0,2 мм в длину. Вульва без кутикулярных утолщений открывается в задней трети тела.

Больные животные не имели видимой клинической картины, в некоторые случаях отмечали диарею, при ветеринарно-санитарной

экспертизе органов обнаруживали волосовидных паразитов в тонком отделе кишечника.

Гемонхоз. У жвачных животных по данным наших исследований вызывается одним возбудителем Hemonchus contortus. У крупного рогатого скота было зарегистрировано 29 случаев, ЭИ = 2,98%. Овцы были поражены в 21 случае, ЭИ = 3,44%.

Тело паразита снабжено продольной и поперечной исчерченностью. Самец 19,7 ± 0,3 мм в длину, имеет трехлопастную бурсу, спикулы коричневого цвета, каждая из них ближе к дистальному концу несет острый шипик. Самка длиной 28,4 ± 0,3 мм, вульва открывается на медиальной стороне клапана ближе к заднему концу. Гемонхоз диагностировали как сычужно-глистную инвазию жвачных, в местах локализации паразитов отмечали гиперемию слизистых, воспалительные явления и увеличение мезентериальных лимфоузлов.

Дикгиокаулез. По нашим данным легочные нематодозы у крупного рогатого скота вызывались только одним видом - Dictyocaulus viviparus. Как видно из таблицы 1 было установлено 80 случаев, что составило 8,25% ЭИ. Гельминты имели нитевидное, беловато-желтое тело, утонченное к обоим концам. Отмечали хорошо выраженную рудиментарную ротовую полость и расширенный в своей задней части пищевод. Самцы достигали 30,0 ± 5,4 мм в длину, имели спикулы желтоватого цвета, ноздреватой структуры, хорошо заметен был ячеистого строения рулек. Самки имели 40,0 ± 15,3 мм длины, женское половое отверстие открывалось близ середины тела. Вокруг отверстия вульвы имелись кутикулярные выросты. Паразитов обнаруживали в просветах трахеи и бронхах различного диаметра. У отдельных животных наблюдали кашель и частичную потерю веса. В легких обнаруживали слизь, междольчатая соединительная ткань была инфильтрирована, в паренхиме ткани локально отмечались темно-красные и серые очаги. Были также отмечены участки эмфиземы и ателектаза.

Нематодозы легких у овец были представлены Dictyocaulus filaría -5,31% ЭИ. Морфологически данный'вид от ранее описанного отличался большими размерами и наличием на задней части ротовой полости хитинизированного кольца. Protostrongylus kochi - 2,07% ЭИ. Самцы имели 25 ± 3,4 мм длину, небольшую половую бурсу и равные спикулы. Самки достигали в длину 35 ± 3,7 мм, отверстие вульвы прикрыто небольшой складкой и открывалось недалеко от ануса. Локализовался данный вид паразитов чаще в бронхах и бронхиолах. Mullerius capillaris - 4, 23% ЭИ. Самцы 17 ± 2,4 мм длиной, половая бурса короткая, спикулы в конце имеют расщепление на две нити. Самки 27 ± 3,3 мм в длину, вульва открывается в задней части вблизи ануса. Паразиты локализовались в альвеолах и мелких бронхах. Cystocaulus nigrescens - 1,0% ЭИ. Самцы достигали в длину 40 ± 2.3 мм, небольшие, равные спикулы, на дорзалыюй стороне есть выступ, конец тела прямой. Самка 56 ± 10,4 мм длиной, отверстие вульвы открывалась

вблизи ануса. Локализовались паразиты в бронхиолах и альвеолах задних долей легких.

При локализации нематод в легких овец всегда обнаруживали очаги разного цвета (желтого, серого, красного) и плотности. На разрезе наблюдалась инфильтрация паренхимы, утолщенность стенок капилляров, слизь в просветах бронхов и бронхиол.

Необходимо отметить, также достаточно высокую экстенсивность инвазии фасциолезом у крупного рогатого скота и овец 6,18 и 10,49, соответственно.

Тканевые паразитозы в виде представителей двух видов, Cysticercus tenuicollis, Echinococcus granulosus (larva) были обнаружены у обследованных жвачных животных. По локализации они несколько отличались, так например: все случаи эхинококкоза связаны с поражениями печени, возбудитель цистицеркоза тенуиколыюго зарегистрирован на серозных покровах внутренних органах брюшной полости.

2.2.2 Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при гельминтозах жвачных животных.

Для оценки ветеринарно-санитарной характеристики мы изучили соотношения химических компонентов мяса и химический состав субпродуктов гельминтозных животных. Пробы для исследований получали после убоя животных, при этом учитывали данные прижизненной диагностики и неполных гельминтологических вскрытий отдельных органов. Нами были определены процентные соотношения содержание в пробах воды, белка, жира и золы. Нами были выявлены изменения в химическом составе продуктов убоя крупного рогатого скота. Достоверная разница получена при определении процентного содержания жира у больных и контрольных животных. Так, содержание жира в мышечной ткани контрольной группы составляло 5,24±0,4%, а животных зараженных кишечными нематодами, фасциолами и эхинококками 3,0±0,2%; 4,1±0,2%; 3,8±0,5%, соответственно.

Сердечная ткань контрольных животных содержала жира 3,12±0,2% в то время как животных больных кишечными нематодозами, фасциолезом и эхинококкозом 1,8±0,2; 2,6±0,2; 2,25±0,2 соответственно.

Содержание белка, воды и золы в тканях больных и здоровых (контрольных) животных в большинстве случаев отличались, хотя и оказалось статистически недостоверным. По результатам наших экспериментов хорошо прослеживается общая тенденция изменения в меньшую сторону процентного содержание белка и повышения процентного содержания воды у животных пораженных гельминтами.

При изучении процентного соотношения химического состава мяса и субпродуктов овец, полученные данные соответствуют закономерностям,

которые были выявлены при изучении мясной продукции крупного рогатого скота.

При нематодозах желудочно-кишечного тракта овец химический состав мышечной ткани представлял собой следующее соотношения компонентов: вода - 79,4±3,4%; белок - 18,3±1,2%; жир - 1,3±0,1%; зола -1,03±0,2%. Наибольшие изменения нами были отмечены в случаях заражения легочными нематодозами овец: вода - 80,0+2,7%; белок 17,5±1,4%; жир -1, 1±0,1 %; зола - 1,02± 0,1 %. При этом следует отмстить, что у незараженных паразитами овец химический состав мяса оказался: 74,6± 2.4%; 20,0±0,2%; 3,6± 0,2%; 1,05± 0,1%, соответственно.

Таким образом, результаты наших научных экспериментов свидетельствуют, что мясо и субпродукты жвачных животных, зараженных гельминтами, по химическому составу существенно отличаются от мяса и субпродуктов здоровых животных. Во многих случаях получены достоверные изменения в содержании влаги, белка, жира. В содержании золы в продуктах убоя жвачных животных, страдающих гельмшггозами и животных контрольной группы - выраженной, достоверной разницы не установлено.

2.2.3 Сравнительная диагностическая эффективность специальных гельминтологических методов и методов ветеринарно-сапитарной экспертизы

Для обнаружения паразитов в своих экспериментах мы использовали специальные методы гельминтологических исследований и рутинные методы ветеринарно-санитарного осмотра, применяемые в обязательном порядке при каждодневной экспертизе продуктов убоя на мясокомбинатах. В специальных гельминтологических методах можно выделить два направления: 1) прижизненные, которые следует применять в хозяйствах по разведению и выращиванию жвачных животных; 2) послеубойные, которые необходимо использовать на мясокомбинатах при выполнении ветеринарно-санитарной экспертизы или при выполнении научно-исследовательских работ.

Прижизненные методы диагностики.

Большинство гельминтов паразитирует в желудочно-кишечном тракте, это позволяет использовать исследования фекалий, как один из основных диагностических методов. Обнаружение яиц и личинок или самих гельминтов и их фрагментов в доставленном материале в большинстве случаев направлено на выявление не болезни, а возбудителя гельминтоза.

Фекалии легко получить в необходимом количестве и методы, которые использовали для их исследования, не требуют дорогостоящего оборудования. Исследованием фекалий мы могли диагностировать не только гельминтов, локализующихся в желудочно-кишечном тракте, но и в сообщающихся с ним железах (печень, поджелудочная железа), а в случаях заглатывания яиц или личинок с мокротой, то и паразитов легких.

Методы гельмшггоовоскопии. Как видно из таблицы 2 далеко не все методы диагностики одинаково эффективны. При легочных и кишечных нематодозах наиболее ценным в диагностическом отношении являлся метод лярвоскопии.

Таблица 2

Сравнительная эффективность диагностических методов при основных

гельминтозах жвачных животных

Гельминтозы Число выявленных случаев (% эффективности)

методом последовательного промывания Флотацией Ларвоскопией

к.р.с. овцы к.р.с. овцы к.р.с. овцы

нематодозы N=80 N=77 N=80 N=77 N=80 N=77

легких 5 (6,2%) 2 (2,6%) 3 (3,7%) 3 (3,8%) 76 (95,0%) 74(96,1%)

нематодозы N=93 N=84 N=93 N=84 N=93 N=84

желудочно-кишечного 32 (34,4%) 26 (30,9%) 71 (76,3%) 61 (79,4%) 88 (94,6%) 81 (96,4%)

тракта

Фасциолез N=60 N=41 N=60 N=41 N=60 N=41

42(70,0%) 32 (78,0%) 45(75,0%) 33 (80,5%) нет нет

тонкошейный финноз Невозможно выявление паразита

Эхинококкоз ларвальный Невозможно выявление паразита

Эффективность этого метода при нематодозах легких у крупного рогатого скота была 95,0% и у овец 96,1%. Желудочно-кишечные нематодозы могли определить методом лярвоскопии у крупного рогатого скота и овец с эффективностью 94,6% и 96,4%, соответственно.

Гельминтозы жвачных определяли также методами последовательного промывания и флотацией в этих случаях обнаруживали яйца/личинки. Сравнивая эти два метода можно сказать, что наиболее целесообразно применять метод флотации, его эффективность у крупного рогатого скота и овец была установлена 76,3% и 79,4%, соответственно. В методе флотации (Фюллеборна) - мы использовали для приготовления насыщенного раствора тиосульфат натрия К'а28038. На его основе получали раствор с удельной плотностью 1.4. Для замедления кристаллизации раствора на предметном стекле в исследуемый препарат добавляли каплю глицерина, разведенного водой 1:1. В редких случаях замечали деформацию яиц фасциол, которые приобретали вогнутую форму овала коричневой окраски. Во - время проведения гельминтолярвоскопии необходимо обращать внимание, чтобы срок от взятия пробы до ее исследования был не больше 12 часов (20°С). В наших экспериментах личинки из яиц выходили в некоторых случаях через 12-20 часов, что приводило к трудностям в диагностике из-за их

16

подвижности. Личинок обездвиживали, добавляя к раствору 1 - 2 капли жидкости Барбагало с одной частью 5%-ного раствора йода.

Методы послеубойной диагностики. Методы ветеринарно-санитарпой экспертизы и неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных. Крупный рогатый скот и овцы относятся к категории убойных домашних животных. По правилам ветеринарно-санитарной экспертизы к убою на мясо допускаются только здоровые животные. Гельминтозные инвазии часто не имеют ярко выраженной клинической картины, поэтому для обеспечения высокого качества мясной продукции особое значение приобретают методы послеубойной диагностики. Нами проведена оценка эффективности существующей рутиной экспертизы на мясокомбинате. Как видно из таблицы 3 нематодозы легких у коров и овец выявлялись экспертизой в 91.25% и 93,5%, соответственно. Метод неполных гельминтологических вскрытий оказался более эффективным и с его помощью в 100% случаях выявляли всех паразитических червей в продуктах убоя овец и крупного рогатого скота. При ветеринарно-санитарной экспертизе печени, в желчных ходах, нами выявлялись возбудители фасциолеза. Эффективность диагностики и у крупного рогатого скота и овец оказалась очень высокой, например: 96,6% и 97,56%, соответственно. Возбудителей тонкошейного финноза и ларвального эхинококкоза диагностировали методами экспертизы и неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных с одинаковой эффективностью -100%.

Таблица 3

Сравнительная эффективность послеубойных диагностических методов

Гельминтозы Ветеринарно-санитарная экспертиза Метод неполных гельминтологических исследований отдельных органов

к.р.с. Овцы к.р.с. Овцы

нематодозы легких N=80 73(91,25%) N=77 72 (93,5%) N=80 80 (100%) N=77 77 (100%)

нематодозы желудочно-кишечного тракта N=93 87 (93,55%) N=84 79 (94,04%) N=93 93 (100%) N=84 84(100%)

Фасциолез N=60 58 (96,66%) N=41 40 (97,56%) N=60 60(100%) N=41 41 (100%)

тонкошейный финноз N=67 67(100%) N=64 64(100%) N=67 67(100) N=64 64(100%)

Эхинококкоз N=17 17(100%) N=14 14(100%) N=17 17(100%) N=14 14(100%)

2.2.4 Серологическая диагностика гельминтозов жвачных с помощью мультиаптигенного теста на основе ИФА (ELISA).

Для оценки диагностической эффективности ИФА при гельминтоза* жвачных животных использовали коллекцию сывороток крови, описанную выше. При этом в ИФА сыворотка считалась положительной, если при учете результатов реакции иммуноферментный фотометр показывал коэффициент оптической плотности (Е) 0,25 и выше, соответственно, если ниже - то отрицательной. Определение специфичности ИФА проводили на основании сопоставления результатов реакции с разными антигенами и данных неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных (табл. 4). Эффективность мультиантигенного теста оказалась достаточно высокой и при учете результатов реакции достигала 100%. Максимальное значение экстинкции получено при диагностике тонкошейного финноза, Е = 1,42±0,20. При принятой нами системе учета положительных ответов в ИФА были получены ложноположительные реакции при диагностике эхинококкоза с животными, зараженными тонкошейным финнозом. При диагностике нематодозов желудочно-кишечного тракта регистрировались ложноположительные реакции с сыворотками крови от животных, зараженных нематодозами. Однако, сравнивая коэффициенты экстинкции гомологичных и гетерологичных реакций, установили большую разницу в цифрах, например: 0,24±0,04 и 1,42±0,02 (более чем в 6,5 раз).

Таблица 4

Эффективность мультиантигенного теста на основе ИФА (ELISA) при

гельминтозах крупного рогатого скота

Гельминтозы Коэффициент экстинкции (Е) в ИФА с разными антигенами

АГ легочных нематод АГ кишечных нематод АГ фасциол АГ цистицерк АГ эхинококк

нематодозы легких, N=32 1,14-0,37 0,24±0,12 0,11±0,04 0,14±0,03 0,10±0,02

нематодозы желудочно-кишечного тракта, N=95 0,22±0,02 1,25*0,17 0,12±0,02 0,12±0,04 0,12±0,03

фасциолез, N=44 0,15±0,02 0,16±0,01 1,3510,24 0,22*0,05 0,18±0,07

тонкошейный финноз, N=17 0,16±0,01 0,14±0,02 0,20±0,04 :1,42±0,20 0,22±0,06

эхинококкоз, N=11 0,16±0,02 0,1б±0,02 0,18±0,04 0,24±0,04 1,34; o.l s

Р £ 0,05 - разница достоверна между значениями экстинкции в реакциях сыворотки крови от зараженных животных с гомологичными и гетсрологичными антигенами.

В наших экспериментах при оценке гелъминтозной инвазии у овец мультиантигенный тест показал удовлетворительные результаты. Как видно из таблицы 5 интенсивность экстинкции при учете реакции у овец во всех случаях оказалась выше, у крупного рогатого скота. При учете результатов теста, сыворотку считали положительной, если иммуноферментный фотометр показывал коэффициент оптической плотности (Е) 0,35 и выше, соответственно, если ниже - то отрицательной. Максимально высокой экстинкция оказалась при фасциолезе. Перекрестные реакции были отмечены между сыворотками крови от животных, больных цистицеркозом и эхинококкозом, а также между легочными и кишечными нематодами. В то же время при сравнительном учете результатов реакции в мультиантигенном варианте всегда выявлялись гомологичные реакции, ставился точный диагноз на преобладающий гельминтозный акцент. Полученные ложноположительные результаты в сыворотках крови от животных, в органах и тканях которых при послеубойной экспертизе были обнаружены не ожидаемые гельминты, можно объяснить проведенной дегельминтизацией, длительной сенсибилизацией тканей организма метаболитами паразитов, а также наличие общих антигенных детерминант у гельминтов разных видов.

В то же время мы получили 100% чувствительность, что говорит о возможности использовать тест для прижизненной диагностики гельминтозов жвачных животных.

Таблица 5

Эффективность мультиантигенного теста на основе ИФА (ELISA) при гельминтозах овец

Гельминтозы Коэффициент экстинкции (Е) в ИФА с разными антигенами

АГ легочных нематод АГ кишечных нематод АГ фасциол АГ цистицерк АГ эхинококк

нематодозы легких, N=17 1,56±0,38 0,34±0,12 0,22±0,08 0,34±0,05 0,22±0,04

нематодозы желудочно-кишечного тракта, N=53 0,32±0,04 1,54±0,18 0,26±0,03 0,22±0,04 0,28±0,06

фасциолез, N=31 0,25±0,03 0,26±0,04 1,65±0;34 0,32±0,06 0,28±0,12

тонкошейный финноз, N=14 0,26±0,04 0,24±0,08 0,23±0,06 1,62 >0,20 0,32±0,06

эхинококкоз, N=8 0,26±0,08 0,26±0,06 0,28±0,04 0,24±0,04 1,54±0,28

Р < 0,05 - разница достоверна между значениями экстинкции в реакциях сыворотки крови от зараженных животных с гомологичными и гетерологичными антигенами.

3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ

В третьей главе обсуждаются данные собственных экспериментов с результатами, полученными другими исследователями.

Обосновывается предположение о необходимости усиления контроля над гельминтозами жвачных животных. Анализируются результаты диагностики гельминтозов с помощью вариантов диагностических методов в собственной модификации, которые позволяют улучшить диагностику яиц и фрагментов гельминтов.

ВЫВОДЫ

1. Гельминтозная инвазия жвачных животных широко распространенное явление среди особей, поступающих для убоя на мясокомбинаты московской области. Гельминтозные болезни оказывают негативное влияние на химический состав продуктов убоя, что приводит к необходимости особого контроля над паразитами с помощью диагностических методов основанных на разных принципах выявления инвазии.

2. Установлено, что наибольшее число гельминтов поражает желудочно-кишечный тракт крупного рогатого скота и овец, ЭИ=9,59 и 13,79 соответственно. Также выявлены легочные нематоды, фасциолы, цистицерки тонкошейные и эхинококки ларвальные у крупного рогатого скота и овец ЭИ=8,25 и 12,67; 6,18 и 6,72; 6,91 и 10,49; 1,75 и 2,29 соответственно.

3. Определены тенденции изменения химического состава продуктов убоя при гельминтозах жвачных животных. Достоверная разница получена при определении процентного содержания жира и составляла 5,24±0,4% в мышечной ткани контрольной группы, а мясо крупного рогатого скота, зараженного кишечными нематодами, фасциолами и эхинококками 3.0±0,2%; 4,1±0,2%; 3,8±0,5%, соответственно. Содержание белка, воды и золы в тканях больных и здоровых (контрольных) животных в большинстве случаев отличались, хотя и оказалось статистически недостоверным.

4. Доказано, что изменения процентного соотношения химического состава мяса и субпродуктов при гельминтозах овец, соответствуют закономерностям, выявленным при изучении мясной продукции крупного рогатого скота. Наибольшие изменения нами были отмечены в случаях заражения овец легочными нематодозами: вода - 80,0±2,7%; белок 17,5±1,4%; жир - 1,1±0,1%; зола - 1,02± 0,1%.

5. Установлено, что при диагностике нематодозов легких и нематодозов желудочно - кишечного тракта крупного рогатого скота и овец наиболее эффективным являются методы ларвоскопии 95% и 96,1%; 94,62% и 96,49%, соответственно. Диагностическая эффективность методов

последовательного промывания и флотации при фасциолезе крупного рогатого скота и овец оказалась 70% и 78%; 75% и 80,5% соответственно.

6. Доказано, что метод неполных гельминтологических исследований отдельных органов является наиболее эффективным в послеубойной диагностике паразитов и превосходит методы рутинной ветеринарно-санитарной экспертизы на 9% - 6%.

7. Определена достоверная разница в показаниях экстинкции в мультиантигенной системе ИФА (ELISA) между сыворотками зараженных и незараженных гельминтами животных. С помощью разработанного мультиантигеиного варианта теста при сравнении результатов гомологичных с гетерологичными сыворотками крови при всех гельминтозах была получена 100% эффективность.

8. Установлены принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах. Весенние диагностические мероприятия необходимо проводить на основе методов флотации, исследование надосадочной жидкости и осадка, исследования крови мультиантигенной системой ИФА. Осенние диагностические мероприятия проводить с помощью уже предложенных методов исследования и ларвоскопией. Для повышения эффективности послеубойной ветеринарной экспертизе предлагается использовать методы неполных гельминтологических исследований отдельных органов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В условиях сельскохозяйственных ферм следует проводить поголовное гельминтологическое обследование вновь прибывших животных и 20% животных содержащихся в хозяйствах два раза в год. Диагностику необходимо осуществлять во 2-ю и 3-ю декады мая и 2-ю и 3-ю декады октября. Для этого следует использовать методы гельминтоовоскопии и мультиантигенную систему ИФА. В случаях положительных ответов в ИФА для уточнения диагноза рекомендуется использовать методы лярвоскопии -Бермана-Орлова и Вайда.

2. Для успешного выявления гельминтов на убойных пунктах в случаях изменения цвета, конфигурации поверхности и размеров внутренних органов: печени, легких и сердца рекомендуется проводить паразитарную диагностику методом неполных гельминтологических исследований отдельных органов.

3. Разработанные методические рекомендации можно использовать в практике врачей откормочных хозяйств и молочно-товарных ферм, при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы на мясокомбинатах.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ибрахим М.И.С. Распространение возбудителей гельминтозов на объектах окружающей среды/ М.И.С. Ибрахим, И.Г. Гламаздин// Материалы докл. научн. международной конференции студентов и молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания». М., МГУПБ, 2009. - С.201-202.

2. Ибрахим М.И.С. Биоэкология возбудителей инвазионных болезней/ М.И.С. Ибрахим// Материалы X международной научн. конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» - М.: Издательский комплекс МГУПП, 2012. -С.156-157.

3. Ибрахим М.И.С. Случай трихинеллеза волка/ И.Г. Гламаздин, Н.Ю. Сысоева, М.И.С. Ибрахим и др.// Вестник ветеринарии. - 2012. -№4. - С.35- 37.

4. Ибрахим М.И.С. Сравнительная эффективность методов диагностики гельминтозной инвазии крупного рогатого скота и химическая характеристика мясной продукции/ М.И.С. Ибрахим, И.Г. Гламаздин// ВЕТКОРМ.-2013.-№3.-С. 30-31.

5. Ибрахим М.И.С. Влияние гельминтозной инвазии на качество мясной продукции овец/ М. И.С. Ибрахим, И.Г. Гламаздин, Н.Ю. Сысоева // Российский паразитологический журнал. - 2013. - №2. - С. 120-122.

6. Ибрахим М.И.С. Прижизненная и послеубойная диагностика гельминтозов жвачных животных/ И.Г.Гламаздин, М.И.С. Ибрахим, Н.Ю. Сысоева, O.A. Панова// Международный научно-исследовательский журнал. - 2013. - №10 (7). - Ч. 1. - С. 62-64.

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" Подписано к печати 18.11.2013г. Формат 60x84/16. Бумага "Офсетная №1" 80г/м2. Печать трафаретная. Усл.печ.л. 1.30. Тираж 100. Заказ 652

WWW.FRANTERA.COM

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Ибрахим Мохамед Иззат Саид, Москва

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПИЩЕВЫХ ПРОИЗВОДСТВ»

На правах рукописи

04201452964

ИБРАХИМ МОХАМЕД ИЗЗАТ САИД

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ И ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКТОВ УБОЯ ПРИ ГЕЛЬМИНТОЗАХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных 03.02.11 - паразитология

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Гламаздин И.Г.

Москва, 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ 3

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9

1.1 Распространенность гельминтозной инвазии среди жвачных 9 животных

1.2 Влияние гельминтов на химический состав продуктов убоя жвач- 18 ных животных

1. 3 Эффективность гельминтоовоскопических методов исследования 24

1.4 Эффективность гельминтолярвоскопических методов 33

1.5 Методы иммунодиагностики 35

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 48

2.1 Материалы и методы 48

2.2 Результаты исследований 58

2.2.1 Распространение гельминтозов среди жвачных животных, посту- 58 пающих на убойные площадки мясокомбинатов Московской области.

2.2.2 Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при гельминто- 70 зах жвачных животных.

2.2.3 Сравнительная диагностическая эффективность специальных 73 гельминтологических методов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы

2.2.4 Серологическая диагностика гельминтозов жвачных с помощью 76 мультиантигенного теста на основе ИФА (ELISA).

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВА- 86 НИЙ

ВЫВОДЫ 92

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 94

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 96

ПРИЛОЖЕНИЕ 116

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы.

В системе общественного производства, на всех ступенях его развития значительное место принадлежит производству мясных продуктов. Мясо, наряду с молоком, рыбой и яйцами, является основным источником животного белка - важнейшего элемента питания, который не может быть заменен другим продуктом. Не вызывает сомнения, что безопасность и качество пищи, приготовленной из сырья животного происхождения полностью зависят от качества содержания продуктивных животных, от сопровождающих их болезней, особенно инфекционной и паразитарной этиологии.

Изучение гельминтозных болезней жвачных животных, роли возбудителей в биогеоценозах, их влияние на организм продуктивных животных является важным аспектом в повышении социально-экономического уровня для населения большинства стран мира. Своевременная диагностика позволяет предотвратить недостаточно эффективное содержание больных животных и разрабатывать необходимые профилактические мероприятия, что является одним из важных резервов повышения рентабельности животноводства.

Давно установлено, что жвачные животные в большой степени инвази-рованы гельминтами на территории Российской Федерации и на территориях сопредельных стран (К.И. Скрябин, P.C. Шульц, 1937; A.B. Огородников, 1999; K.M. Садов, 2000; К.Л. Мальцев, 2006; Д.М. Давудов, 2008; И.А. Архипов, 2008, 2011; T.W.Cameron, 1923, 1934, 1934).

Результаты наиболее трудоемких и информативных работ по видовой классификации, распространению и диагностике гельминтозов жвачных животных представлены в научных трудах К.И. Скрябина, P.C. Шульца (1937); Е.Е. Шумаковича (1968); В.Н. Трач (1974); А. М. Сазанова, (1958); Н. В. Демидова, (1965); М.И. Кузнецова, (1984); И А. Архипова, (1998); Г.М. Лазарева (1998); С.Д. Дурдусова (1999); P.C. Кармалиева (2011).

3

Установлено, что на территории сельскохозяйственных угодий и ферм западного Казахстана имеются условия для существования большого количества гельминтов. При уточнении гельминтофауны жвачных животных (крупный рогатый скот) после тщательных исследований выявлено 39 видов гельминтов. Причем, из них определено биогельминтов - 16 видов, а геогельминтов - 23 вида. Как считает Р.С Кармалиев - фасциолез, мониезиоз, эхино-коккоз и другие гельминтозные болезни причиняют большой экономический ущерб.

В результате эпизоотологических исследований в популяции овец Нижегородской и Волгоградской областей был зарегистрирован 21 вид гельминтов: 3 вида трематод (15.0%), 4 - цестод (20,0%) и 14 - нематод (65,0%) (К.Л. Мальцев, 2006).

Существующие на сегодняшний день копрологические методы диагностики гельминтозов выявляют далеко не все болезни. Например: фасциолез можно диагностировать только через 3,5-4 месяца после начала инвазии, эхинококкоз или финноз вообще не представляется возможным. Между тем возбудители фасциолеза, эхинококкоза или тонкошейного финноза являются опасными болезнетворными агентами. Воспалительный процесс, вызванный гельминтами, обычно протекает тяжело, имеет пролиферативный характер, затрагивает всю гепатобиллиарную систему хозяина и часто заканчивается хроническим гепатитом по пролиферативному типу. Обозначенная патология ведет к нарушению деятельности желудочно-кишечного тракта и к явлению мальабсорбции, что приводит к значительному снижению эффективности откорма и снижению пищевой ценности получаемой животноводческой продукции, а также к сокращению сроков хранения продуктов убоя (А.И. Коробов, 2010).

Возбудители гельминтозных болезней многогранно патологически воздействуют на хозяина и нарушают нормальное физиологическое состояние организма. В научной литературе имеются данные, что паразитарная инвазия

оказывает влияние на качество мясной продукции (Б.О.Оипапёег, J.Hбglund,

4

E.Spörndly, P J.Waller, 2000). В химическом составе продуктов убоя больных животных изменяется соотношение компонентов состава мышечной ткани (С.Н. Глебочев, A.A. Кунаков, 2008; Е.В. Давыдов, 2009; А.И. Коробов, 2010; И.Г. Гламаздин, 2011).

В концепции развития животноводства предусмотрено обеспечение населения России продуктами питания высокого качества, при этом планируется развивать именно отечественное производство с целью достижения максимальной независимости страны от поставок импортных продуктов.

Организации и проведению диагностической и профилактической работы в отношении паразитарных болезней мешает имеющаяся разобщенность лабораторий и оперативных подразделений, их малочисленность, отсутствие эффективной, информативной и стройной системы диагностических мероприятий для контроля над паразитами в ветеринарии.

Цель и задачи исследования. В соответствии с актуальностью проблемы цель работы заключалась в изучении гельминтозной инвазии жвачных животных и разработки научно-обоснованной системы диагностических мероприятий. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Исследовать распространение гельминтозов среди жвачных животных, поступающих на убой Раменского мясокомбината.

2) Изучить влияние гельминтов на химический состав продуктов убоя жвачных животных.

3) Уточнить эффективность гельминтоовоскопических методов исследования.

4) Дать сравнительную характеристику диагностической эффективности гельминтолярвоскопическим методам.

5) Провести анализ сравнительной диагностической эффективности методов ветеринарно-санитарной экспертизы и неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных.

6) Разработать диагностическую тест-систему на основе взаимодействия антиген-антитело.

7) Сформулировать научно-обоснованные принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах.

Научная новизна. Проведен тщательный анализ диагностической эффективности в сравнительном аспекте специализированных гельминтологических методов, серологических тестов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы. Разработан лабораторный вариант диагностической тест-системы на основе мультиантигенной системы ELISA. Проведен анализ влияния разных видов гельминтов при различных локализациях на химический состав продуктов убоя. Сформулированы научно-обоснованные принципы организации диагностических мероприятий при гельминтозах жвачных животных.

Практическая значимость работы. По материалам проведенных исследований разработаны методические положения «Комплекс мероприятий по диагностике гельминтозов крупного рогатого скота», которые одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Россельхозакадемии от 26.09.2013 протокол №3. Материалы исследовательской работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий по курсам: «Лабораторная диагностика» и «Паразитология и инвазионные болезни».

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на международной конференции студентов и молодых ученых "Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания" МГУПБ, 2009. На X международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», МГУПП, 2012. Автор принимал участие в интернет-конференцие СтавГАУ 2012.

Личный вклад соискателя. Работа выполнялась в рамках международного договора по подготовке кадров высшей квалификации между Россией и Арабской Республикой Египет. В 2010 году Мохамед Иззат Сайд Ибра-

6

хим после двухгодичного обучения в магистратуре защитил магистерскую диссертацию на тему: «Биоэкология возбудителей инвазионных болезней в условиях мегаполиса», в ходе выполнения, которой освоил основные методы паразитологических исследований. Представленная диссертационная работа является результатом трехлетних научных исследований автора в области гельминтологии жвачных животных. Исследования по изучению распространения, сезонной динамики, усовершенствованию методов диагностики гель-минтозов, разработки параметров диагностической тест-системы на основе ELISA, изучение химического состава продуктов убоя при гельминтозных инвазиях выполнены лично автором.

Методические положения «Комплекс мероприятий по диагностике гельминтозов крупного рогатого скота», в которых изложены принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах, разработаны совместно с академиком РАСХН, проф. Б.В. Уша и проф. И.Г. Гла-маздиным. Авторы не возражают использовать полученные результаты в данной работе. Работа выполнялась под руководством доктора ветеринарных наук, профессора И.Г. Гламаздина, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов.

Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее 80% материалов в исследовании аспиранта. Соавторы не возражают в использовании результатов совместных исследований.

Положения, выносимые на защиту:

• Гельминтозная инвазия среди жвачных животных, поступающих на убой на Раменский мясокомбинат.

• Исследования и химический состав продуктов убоя жвачных животных при гельминтозах.

• Сравнительная диагностическая эффективность специальных гельминтологических методов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы.

• Эффективность мультиантигенного варианта ИФА (ELISA) для диагностики гельминтозов.

• Принципы организации системы диагностических мероприятий при гельминтозах.

Публикации. В результате проведенных исследований автором опубликовано 6 научных работ, в тексте которых изложены основные положения и выводы, вытекающие из полученных результатов, в том числе в изданиях рекомендованных ВАК РФ опубликовано три научные работы.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Распространенность гельминтозной инвазии среди жвачных животных

Гельминтозы во многих странах мира являются сдерживающим фактором успешного развития откормочного направления деятельности сельскохозяйственного животноводства. В Российской Федерации увеличению поголовья высокопродуктивного скота, повышению рентабельности молочной и мясной отрасли препятствуют гельминтозные болезни жвачных животных. Наиболее широко распространенными болезнями из гельминтозов являются стронгилятозы желудочно-кишечного тракта, диктуокаулез, мониезиоз, фас-циолез, парамфистоматозы. Получены достоверные сведения о том, что данные инвазии вызывают ощутимые патологии различных систем живого организма, что приводит к значительным экономическим потерям в животноводческой отрасли (К.И.Скрябин, P.C. Шульц, 1937; Н.С. Gibba, 1985; А.Б. Муромцев, 2009; N. Maingi, G.K. Njoroge, 2010).

В литературе исследователями часто отмечаются случаи наличия смешанных инвазий, вызванных фасциолами и стронгилятами пищеварительного тракта, которые оказывая сочетанную форму патологии, наносят экономический ущерб хозяйствам. По мнению Р.Т. Сафиулина у коров снижаются надои на 10,6% , а у молодняка крупного рогатого скота прирост массы на 45,36%, что отрицательно влияет на экономические показатели хозяйственной деятенльности (S.O. Dimander, J. Höglund, Е. Spörndly, P.J. Waller, 2000; Р.Т. Сафиуллин, K.A. Хромов, 2009).

По мнениию H.B. Демидова (1987) и ряда других исследователей базовой основой всех терапевтических схем и различных профилактических мероприятий является диагностическая дегельминтизация поголовья и копро-логические исследования, проведенные до нее и после, определяют целесообразность и эффективность данного мероприятия (В.В. Горохов, 1983; Г.А.

Котельников, 1974, 1984; М.В. Хренов, 1997; Р.Т. Сафиуллин, 2001; Д.Г. Ла-тыпов, 2010 и др.)

Диагностика гельминтозов на ранней и личиночной стадии развития паразита на сегодняшний день является самой актуальной проблемой большинства стран мира. В последние годы в мировой ветеринарной практике получили стремительное развитие иммунологические и генетические тесты на паразитозы животных и человека (S.M. Phillips, E.G. Fox, 1984; J. Hansen, В. Perry, 1994; T.C. Золоткова, M.Д. Новак, 2000, 2001 и др.). Однако с целью понимания вопросов развития паразито-хозяинных отношений, вопросов абсолютной эффективности диагностики, основ и тонкостей эпизоотологиче-ского процесса при гельминтозах животных иммунологические методы плохо изучены, и требуется дальнейшее их усовершенствование (Т.Н. Сивкова, 2002; Л.А. Написанова, 2004; Д.Г.Латыпов, 2010; Р.Н. Silverman, 1965; Т.М. Ellis, A. Gregory, M. Turnor, M. Kalknoven, R.H. Wroth, 1993; E. Castro, A. Freyre, Z. Hernandez, 2000).

Таким образом, разработка модификаций копролоческих мотодов, внедрение в деятельность практикующих ветеринарных врачей иммунохимических методов диагностики гельминтозов, использование подходов фундаментальной гельминтологии к выявлению гельминтов в органах и тканях животных после убоя или их гибели остается актуальным.

В результате проведенных исследований А.Б. Муромцевым (2009), в которых были использованы метод полных гельминтологических вскрытий животных, метод неполных гельминтологических вскрытий отдельных органов и камеральная обработка гельминтов в течение 10 лет (1998 - 2008 гг.), в Калининградской области установлено большое количество разных по своим биологическим харатеристикам видов гельминтов. Крупный рогатый скот, разводимый на территории Калининградской области, в общей сумме был поражен 38 видами гельминтов. Необходимо указать, что диагностируемые паразиты крупного рогатого скота относились к разным классам гельминтов

и имели специфическую локализацию в органах и тканях животных. Четыре

10

вида трематод локализовались в печени и в желудочно-кишечном тракте, семь видов цестод из которых половозрелые формы локализовались в кишечнике, а личиночные стадии развития в печени, в мышцах и легких, двадцать семь видов нематод, которые локализовались в легких, в желудочно-кишечном тракте. Нематоды поражали также протоки слезных желез, слезно-носовой канал, полость тела, связки и сухожилия животных. Автором отмечено расширение ареала некоторых видов гельминтов, оказалось, что восемь видов паразитов ранее не встречались в Калининградской области, а именно: Moniezia alba, Thysaniezia giardi, Oesophagostomum columbianum, Trichostrongylus colubriformis, Ostertagia circumcincta, O.trifurcata, Cooperia punctata, Cooperia sp. (А.Б.Муромцев, 2009).

He менее сложная эпизоотическая обстановка была установлена этим же автором по паразитозам овец. В организме овец, разводимых в Калининградской области, установлено 43 вида гельминтов. При дифференциальной диагностике по морфологическим характеристикам зарегистрировали три вида трематод, шесть видов цестод, и тридцать три вида нематод. Интересно, что двадцать восемь видов были определены как геогельминты, а пятнадцать видов как биогельминты. К тому же среди популяции овец отмечено также увеличение видов гельминтов, в частности: D. lanceatum, S. papillosus, Skr. ovis, О. columbianum, Tr. capricola, Ost. ostertagi, Ost. orloffi, Ost. occidentalis, C. oncophora, C. punctata, N. filicollis, N. spathiger, N. abnormalis, P. kochi, S. labiatopapillosa, T. skrjabini т.е. шестнадцать видов паразитов ранее не регистрировались в Калиниградской области. При изучении органной локализации гельминтов в овцах установлено поражение легких пятью видами, печени тремя, желудочно-кишечного тракта тридцатью тремя, полостей тела двумя, головного мозга одним видом (А.Б. Муромцев, 2009).

С другой стороны, автор от