Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Современные ортопоксвирусные заболевания человека, диагностика и экология возбудителей

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Современные ортопоксвирусные заболевания человека, диагностика и экология возбудителей"

РГ6 од

pcraäkah людаия №щшсшх наук

институт гатжшга и вирусных энцефалитов

На правах рукописи ЖУКОВА Ольга Алексеевна

СОВРЕМЕННЫЕ üPTOI!ÜKC!UfPVCIíLE ЗАШЕВА1Ш ЧЕЛОВЕКА, ДИАГНОСТИКА Я ЭКШШГШ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

(03.00.06 - БИрУСО/ОГИЯ)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наж

Москва

та

Работа выполнена в Нзуч:п- ксслвджсхе ;ъског.: институте вирусных препаратов (НИИВП) РАМИ.

НАУЧНЫЙ РЖОВОДШЕЛЬ:

¡сктр медицинских нзук, член- корреспондент РАЕН, заслуженный деятель туки России, профессор Марэшвшода С. С.

официалыье оппоненты:

доктор медицинских каж, действительный член • РАЕН, профессор Зуев В. А.

доктор медицинских наук Хозинский В. Б.

БЕДУ1ЦЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: -ГЪсударстЕенный научно- исследовательский

институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарешвича ИЗ России -

Защита состоится " " 1993 г. в /О '

эседанш Специализированного совета при Институте пол

г. в ¡У чэсав на заседании Специализированного Осеета при Инспггуте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАШ (142784. Ькхковскан область. Почгсг зое отделение - Институт полиомиелит?).

С диссертацией момнэ ознакомиться з библиотеке Института полиомиелита и сируагыч энцефалитов РАМН.

Автореферат разослан

«5~ « ^(ииёГьЛ 1993 г.

Ученый секретарь Специалиэирсванного Совета каддвдзг биологических наук

Медведюша 0. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. После ликвидации натуральной оспы и отмены оспопрививания возник вопрос о потенциальной угрозе для людей вирусов оспы швсгтын, в частости, возбудителя оспы обезьян, вызывающего у лодей клинически неотличимое от натуральной оспы заболевание (Мареннииова С.С. и др., 1971: MarenniKova et al., 1972: Lacfnyi et al., 1972} . Несмотря на то, что с момента его открытия прашк более 20 лет, многие вопросы, связанные с этим заболеванием, остались неизучеными: до последнего времени был неизвестен природный резервуар вируса, не вполне ясна контагиоз-носгь этой инфекции, пути заражения человека и другие особенности оспы обезьян. Поэтому в число задач, определенных ХХХШ Всемирной Ассамблеей Здравоохранения на период после ликвидации натуральной оспы, быю вклочено изучение оспы обезьян у человека (Resolution of ХХХШ VVHA, 1980). В соответствии с згой резолюцией Отделом ликвидации оспы ВОЗ начал осуществляться специальный научный проект по изучению оспы обезьян. В выполнении этого проекта приняли участие СЬтрудничэкнцие центры ВОЗ по оспе в Атланте и в Москве (в таи числе и автор настоетцей работы) а также полевые эпидемиологические бригады в странах Экваториальной Африки, эндемичных по оспе обезьян.

Помимо выполнения решения ХХХШ ВАЗ об определении потенциальной опасности оспы обезьян для людей, эта исследования были актуальными и для нашей страны, поскольку полностью исключить возможность завоза оспы обезьян в другие страны с инфицированными животными или больными людьми нельзя. Следует отметить, что в упомянутой резолюции ХХХШ ВАЗ (пункт 4) былэ настоятельно реко-

мендовзно стимулировать научные исследования и в отношении других оргопоксвируоов, в частности, патогенного для человека вируса оспы коров.

Относительно оспы мэров в течение последних двух десяпшзтий накопилось бсшыюе количество наблюдений, которые заставили изменить традиционную концепцию о том, что это заболевание является профессиональным заболеванием доярок, которые инфицируются от больных коров (ВахЬу, 1975).

Случаи заболевания оспой коров животных, принадлежащих к 8 из 18 отрядов класса млекопитающих, а также лодей без какой-либо связи с крупным рогами скотом (ЕИасЫа, 1976; ВахЬу, 1977) позволили в вдвинуть гипотезу о грызунах как резервуаре вируса оспы моров (ВахЬу, 1977.: Мэгепгпкоиа et &1., 1984). Учитывая это, оставалась актуальным выяснение этиологии всех случаев оспоподобных заболеваний в нашей стране и поиск природного резервуара вируса.

Цель и задачи работы. Целью настоящих исследований было пополнение наших знаний об оспе обезьян у людей и природном резервуаре возбудителя (в рашах проекта ВОЗ по этой инфекции).: выяснение природа и характера оргопоксвирусных заболеваний, имеющих место в нашей стране; усовершенствование методов лабораторной диагностики ороохксвирусных инфекций.

В связи с этим ставились следующие задачи:

1. Проведение вирусологического и сероюгического исследования материалов от людей с подозрением на оспу обезьян, собранных бригадами эпиднадзорз ВОЗ в эндемичных по оспе обезьян очагах и анализ архивного материала по диагностическому обследованию аналогичного контингента за более ранний период (с 1984 г.).

2. Обследование ш наличие вируса ссгты обезьян и соответствующих антител в пробах от животных и насекомых, собрениых бригадами эпиднадзорз ВОЗ в очагах оспы обезьян, а также привезенных организованной ВОЗ экспедицией в Республику Заир.

3. Изучение и внедрение в прэгаику метода быстрой Еидоспеци-фичесхой диагностики оспы обезьян с использованием шноклональных антител (МАТ)к этому вирусу.

4. Изучение динамики образования групповых и видоспешфичес-ких антител у больных оспой обезьян.

5. Выяснение этиологии ослоттодобных заболевании, шкг.шх место в нашей стране в период после ликвидации натуральной оспы в мире.

6. Определение возможности видоспе^1фической серагогическюй диагностики сспы моров, используя и-муноформентньй анализ (ИМ) с предварительной адсорбцией сыворотки вирусом вакцины (ИФА-А).

Научная новизна и теоретическая значимость работы.

__ 1. На основе проведенных исследований существенно расширены

наши знания об оспе обезьян у людей: установлено наличие бессимптомных форм этой инфекции и их частота.: уточнены попгосы тренп-дассибильности инфекции; годгвервдены данные о том, что одним из основных природных резервуаров этого вируса являются тропические бел<и; впервые в нашей стране в экспериментальных исследованиях установлена чрезвычайно высокая чувствительность белок к вирусу оспы обезьян при разных путях заражения.

2. Впервые установлено, что в нашей стране в период после ликвидации натуральной оспы в мире у лодей имеют место заболевания генуинной оспой коров, а также подтверждена циркуляция вируса пэравакцины; впервые в наши стране получены эксппрв.«теиьныо

данные, подгверадзкщие высокую восприимчивость домашних кошек к вирусу оспы коров и их возможную роль как "промежуточного хозяина" этого вируса и источника инфицирования человека.

Практическая ценность работы. 1. Изучен и внедрен в практику Московского Сотрудничающего центра ВОЗ по оспе и родственны.! инфекциям метод быстрой видоспецифической диагностики оспы обезьян на основе ИФА о использованием МАТ к этому вирусу.

2. Разработан метод видоспецифической серологической диагностики оспы коров с использованием ИФА-А.

3. Пополнена коллекция музея Сотрудничающего центра ВОЗ (НИИВЛ) 5 новыми штаммами вируса оспы коров, получениями от людей и 2 иггаммами, выделенными от белых крыс, послуживши источником заражения людей оспой коров,

В государственную коллекцию вирусов ИЗ РФ депонирован штамм "Ель-87", выделенный впервые на территории бывшего СССР от больного человека, инфицированного от больной белой крысы.

4. Разработаны следующие методические рекомендации:

а) "Ввдовая идентификация антител к патогенным для человека оршпоксвирусам (оспе обезьян и оспе коров) с псмоцыо ИФА-адсорбции". Утвераздены Ученым советом НИИВЛ 28 ноября 1930 г.;

б) "Дополнения к методическим рекомендациям по комплексному исследованию материала при эпизаэтотогическом обследовании территории: выявление очагов оргопоксвирусов". Утверкдены Главны,! эпидемиологическим управлением МЗ СССР 28 сктября 1989 г.;

в) "(Методические рекомендации по экспресс-диагностике орто-поксвирусных инфекг[ий с па.сирзЮ иммунной электронной микросюо-пии". Утвервдены Ученым советом НИИВП 10 июня 1990 г.

Публикация результатов исследования и апробация роботы. По теме диссертации опубликовано 12 печатный работ. Материалы работы доложены на 62 сессии общего собрания АМН СССР (21 марта 1991 года) . Диссертация апробирована та конференции НИИВП РАМН 12 июля 1991 г.

Объем и струупура работы. Диссертация изложена на 115 страницах изшиготтисного текста, включая иллюстрации (8 рисункга и 18 таблиц). Работа состоит из следующих разделав: введение, обзор данных литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы. Список литературы включает 126 источни-kdb, из которых 95 - зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

—- В работе испальзоваш 2 штамма вируса оспы обезьян, 13 tin'af.t-мзв вируса оспы коров , 1 штамм вируса вакцины и 1 штамм вируса эктрсмелии. В экспериментах применяли клеточную культуру Vero, 12 -дневные куриные эмбрионы породы "Леггорн", лабораторных грызунов, кроликов, домэтних кшек и сибирских бе;юк. В процессе рэбо-ты испальзоваш различные вирусологические методы (выделение и идентификацию вирусов, включая внутривидовую, а также моделирование инфекция на животных), серологические методы (реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию иммунодиффузии (РИ), реакцию ишунофлюоресценции (ИФ), ИФА, ИФА-А, иммунобдагттог), а также электронную микроскопию (34) и иммунную элекяронную микроскопию (ИЭМ). Показатель пэгогенности для лабораторных грызунов определяли по формуле Кербера (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962).

РЕЗУЛЬТАТЫ ЮТЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные в рамках соответствующе го проекта ВОЗ лэЁортюр-но-диагностические исследования, а также анализ относящегося к этому архивного материала Московского Оотрудничзкицего центра ВОЗ по оспе и родственный инфекциям, показали, что после ликвидации ос-пы большая часть оспоподобных заболеваний в странах Экваториальной Африки не быта связана с псксвирусами (табл. 1) Среди заболеваний, вызванных последними периодически встречаюсь оспа обезьян.: кроме нее регистрировались Тана пскс и контагиозный моллюск (диагноз двух последних заболеваний ставили на основании Ю№шк1> эпидемиологических данных, результатов Э.1 и отрицательных результатов выделения вируса на куриных эмбрионах). Данные о небольшом удельна.) весе оспы обезьян среди обследуемого контингента согласуйся с исследованиями других авторе® о низкой частоте этого заболевания в упомянутых странах (Arita et al., 1985; Fenner et al,, Fine et al., Jesek et al., 19S8). Сопоставление данных лэбераторю-диагностических исследований и результатов эпидемиологического и клинического обследования, проведенного бригадами эпиднадзора ВОЗ, позволило выявить рад новых фактов относительно оспы обезьян у людей. Так было установлено (табл. 2), что большая часть заболевших (667.) инфицируется вирусом оспы обезьян из природного резервуара; в 32,171 имела место передача инфекции от первичных случаев и 1,9% - от вторичных. В 167, случаев выявлена бессимптомная форма инфекции.

Таблиц 1

Обирте результаты исследований диагностических материалов из стран, эндемичных по оспе обезьян

1 Вид ! исследованного 1 материала | 1 1 1 ....... .....- 1 Обнаружены при 3-1 вирионы | Получено изолягов вируса оспы обезьян

покс группы 1 1 1 герпес группы 1 1 \ I | 1 !

Содержимое кожных 1 96/301 35/301 73/316

""поражений больных |

с подозрением на | 31,92 11,67. 23,17.

оспу обезьян | 1

СыЕоротни больных с подозрение-! на оспу обезьян и контактировавших с больными оспой обезьян*

Обнаружены антитела к вирусам в ИФА-А

оспы обезьян

вакцины ) неидентифицируе-| мые по отношению | к вируса»-) вакци-| ны и оспы обезьян __I_

81/316 25,67.

18/316 5,77.

19/316 67.

Обозначения: числитель - числэ положительных находок:

знаменатель - обшее количество исследованных образцов;

* - группу контактировавших составили 183 человека, илев-ших непосредственный контакт с больными оспой обезьян

Таблица 2

Распределение выявленных случаев оспы обезьян по генерациям и форме инфекции

! Форма | инфекции ( 1 1 Количество выявленных случаев Из них инфицировались от

1 | неизвестного ! природного носителя вируса ¡больных оспой обезьян 1-,- (1 гене- |П генерации ¡рации | 1 1

Клиническая 87 64 (73,57.) 21 (24,17.) 2 (2,47.)

выраженная Инаппараигная Итого: 16 103 4 (25*) 68 ( 66,07.) 12 (757.) 0 33 (32,1%) 2 (1,97.)

Было выяснено также, чгго, как и при натуральной осле (Марен-никпва С. С., 1963; Мальцева Н. Н., 1980), при оспе обезьян у людей вирус может бьггь изолирован из кшных поражений всех типов (сос-коб папул, везикулярная и пустулезная жидкость, корки), начиная со 2-го до 21-го дня болезни (срок наблюдения). С помощью ИФА-А было получено 25,67. лабораторных подтверждений диагноза оспы обезьян (табл. 1). Бесспорная ценность этого метода была подтверждена при обследовании в фазе поздней реконвалесценции (без кожных поражений) или когда по каким-либо причинам отсутствовал материал из кожных поражений. Использование именно этой реакции датю возможность, в частности, установить новый, ранее неизвестный факт - существование бегатмптомных форы оспы обезьян.

Нами были расширены диагностические критерии ИФА-А (при использовании этого теста параллельно проводили прямое выделение вируса из проб от обследуемых). Так была псказана возможность постановки диагноза оспы обезьян при 337. остаточных антител (вместо первоначально требуемых 50%) и 3-х кратном и более !1арастании титра антител к этому вирусу.

Как было установлено, при использовании ИФА без предварительной адсорбции групповых антител в качестве "суррогатного" теста диагностическое значение может иметь разница в "игграх антител к гомологичному (вирусу оспы обезьян) и гетеротогачному вирусу (вирусу вакцины).

Изучение динамики антителообразования у больных оспой обезьян показало, что антитела выявляются ухе ¡и 5-й день болезни. Максимум их накопления отмечается к концу Еторой недели, затем титр антител снижается, но остается euje достаточно еысоким даже спустя 3,5 месяца (максимальный срок наблюдения).

Результаты проведенного нами обследования диких и домашних животных, а также членистоногих в основном эндемичном очаге по оспе обезьян (Республика Заир) подтвердили сделанное ранее сообщение других исследователей (Маренникова С. С. и др.,Khodakevich et, al., 1986) о роли белек, кг-эк природного резервуара вируса оспы обезьян. При обследовании 5 видов животных, (белок, мышевидных грызунов, коз, овец, кошек), .антитела были найдены только у дико-живучих африканских белок. Or ¡nix же нами былэ получена и 2 изо-ляга вируса. Исследование проб от клешей и муравьев на наличие вируса дало отрицательный результат.

Дополнительным педтверадекием роли белж как носителей вируса оспы обезьян яеились наши экотепшентолыгые исследования, проведен

ные ш сибирских бежах (Sciurus vulgaris). В ходе этих опытов впервые была установлена их чрезвычайно высокая чувствительность к этому вирусу. Как асазалэсь, в ответ на заражение вируса.) оспы обезьян (интрзнэзально, пероралыю и на скарифицированную кшу) у этих животных развивалась острая генерализованная инфекция с высоким накоплением вируса в органах, заканчивающаяся их гибелью на 7-8 суши после заражения, Эти данные согласуются с результатами опытов по моделированию естественной инфекции у 5 виде® тропических белок (Ходасевич JI.H., 1990).

Самостоятельным разделай работы явилось изучение и внедрение е практику экспресс-метода индикации и одновременной идентификации вируса оспы обезьян с помощью ИФА на основе МАТ. Для конструирования тест-системы нами были атофаны гибрида-iu (из числа ранее полученных в НИИВП) активно и стабильно секретирукяцие ТО (разных изоютов) к этому Еирусу.

Предварительно бьито проведено определение специфичггости ЫАТ метода-! иммуноблэта. Оказалось, что видоспецифичные МАТ взаимодействуют с. одним белкш вируса оспы обезьян, имекхцим молекулярную t-raccy 70-72 КД.

Как было нами установлено, специфичность подобной системы для выявления вируса оспы обезьян определялась "детекторными", а не "закЕатыващими" актителзш (сравнивался иммуносорбенг , приготовленный из полтеюнальных антител к вирусу вакцины и из МАТ к вирусу оспы обезьш разных изотипов). При проверке чувствительности тест-системы на лабораторных игхаммах вируса оспы обезьян, а также на палевом и экспериментальном материале (зараженные тропические белки) было установлено (табл.3), что 100% чувствитель-

fгость теста достигаюсь при концентрации вирусного белк» в исследуемых пробах равной 2,5 нг. Однако, даже при содержании вирусного белка в 10 раз меньше (252 пг) чувствительносгь теста быта достаточно высокой и составляла 81?.. Изотип HAT, использованных для приготовления пергкси/реных коггьютгов.. п гаиих опыта); не сказывал решающего влияния ил чувствительносгь тест системы. При изучении стабильности основных компонентов тест-системы (кшыогата в жидком и су нем вида, HMMyiraropfeirra) пило показано, что тлунооорбенг сохраняет спою лкгисиссть из менее 6 месяцев в

о

условиях хранения при 1-4 . Все кетгьюгаты, пригагоалеюше из иммунных эсцитических жидкостей (ИАЖ), сохраняли свою активность также не менее 6 месяцев. При Солее длительном хранении (9-14 мес.) активность их несколько снижалась, но кпроекгшруя рабочее разведение, они были пригодна для использования. Препарат, приготовленный из куль туртгь ной жидкости (КЖ), псазалоя но только ма-лззктивным, но и не стабильным. Стабильность лиофилизированного мэныогата на основе МАТ мала отличалэсь от таковой поликлональ-ного на протяжении всего срока наблюдения.

Охарактеризовав различные параметры тест-системы, включая чувствительность и специфичность, мы внедрили ее в практику работы Сотрудничающего центра ВОЗ (НИИВП) для эгсатресс-диагноспоси оспы обезьш. Ток, в частности, с помощью этого теста в 1933 г. была проведена срочная идентификация выделен! ¡ого в Германии изо-ляга ортопоксшруса от ребенка из Габона, погибшего от острого геморрагического заболевания с сыпью. Андгогичный случаи повторился в 1991 г., когда из ВОЗ поступил материал от Од/а.пых из Па-бона.

Та&ткща Л'

Оценка чувствительности ИФА для выявления Бидсхтгешфического антигена вируса оспы обезьян

! Выделение в культуре клеток Усго***1 Выделение на ХАО ¡Выявляэ-

Титр в ИФА I--■------1-----1------¡мая кон-

I Результат ¡Концентрация вируса I Результат | Концентрация вируса (центрация ! Им* титров в 1я ООЕ/г \ |(м титров в ООЁ/г ¡бежа

! I ' " ! | i

21000-63000 13/13** (1007.) 7,0 б/В (1007.) 6,1 125 нг

и вьые

2430- 7290 15/15 (1007.) 5,7 13/13 (1007.) 5,8 63,1 нг

270-810 17/17 (1007.) 5,0 14/14 (1007.) 4,4 2,5 нг

90 15/20 (757.) 3,3 13/16 (81%) 3,4 252 пг

30 6/10 (607.) 2,3 3/7 (437.) 1,4 2,5 пг

<30 3/19 (177.) 0,4 3/16 (197.) 0,5 0,3 пг

* м - средняя геометрическая;

** - числитель - кготтчэство положительных находок, знаменатель - количество кзблодений;

е скобках - 7. усланных выделений;

*** - данные американского Центра по борьбе с болезнями

Установить природу заболеваниш оказалась вса-.ц'кным в течение 3-к чэсов. Таким образом, бшо не только установлен ценность предложенного теста, как метода быстрой диагностики сспы обезьян, но и показано, что ареал распространения оспы обезьян в Экваториальной Африке шире, чем это быт известно. ___ 0/зхн га разделов работы бил посвящен исслсдов^лиш по выяснению природы случаев оспоподобкын заболеваний, всснккгетрих у ло-дей в нашей стране посте ликвидации натуральной оспы в мире. Эти исследования да™ возможность установить, что в ншей стране имеют место споредшеские случаи оспы моров у людей, .п таски ьеп:с.т-{Хфуюгся встаики парпвакхршы. В частности, среди исследованных в 19С6-1991 гг. проб от больных с подозрением на заболевания пекг-вирусной природы из различных районов бывшего ОХР (России, Украины, Казахстана и Чувашии) диагноз парпвакниш был установлен в 21, 6Х случаев. Соответственно оспа котов быта вьвпвлена у £>,87. обследованных. В отношении ппровогарвга наши данные подтвердили имевшиеся наблюдения о тем, что это заболевание поражает только лиц, имевшик контакт с крупным рогатьм схотим (коровами), как результат инфицирования от последнего (Дсшгов П.А., Морозов 1-1.А. 1931, Рггейпап е1 а]., 19КЗ; Мсбоуюх еЬ а1., 191.3: Шелухита и др., 1986). Что касается ослы коров в нашей стране. то как было установлено лабораторными исследованиями за последние 40 лет все ^случаи так называемой "оспы коров" у людей к действительности были вызваны вирусом парасакцины, либо привиточным вирусом вакцины (Ахмедов А. М. и др., 1960; Мальцева Н. Н. и др., 1966; Ворононко И.Е. и др., 1971; Шелухита Э.М. и др., 1905). В то же время в странах Западной Европы оспа коров, периодически регистрируется до настоящего времени (Шпз, 1927: Осилив, 1У51; НЛекЫа, 1976;

ВзхЬу, 1981; КНпкеЫе1 еЬ а1., 1988). Попутно следует отметить, что на протяжении наших исследований (1986-1992 гг.) мы ни разу не встретились с заболеваниями, вызванными вирусом осповакцины, что легко объясняется прекращением с конца 1979 - начала 80-х гг. регулярно проводницегося повсеместного оспопрививания. Возможно, что связанное с отаеной прививок падение иммунитета к оспе у населения и появление полностью неиммунных лиц даю кэ1-1 возможность выявить ранее не тлевших места (или не попавших в поле зрения медицинских работников) случаи генуинной оспы коров у людей.

Первый такой случай - заболевание мальчика 10 лет оспой коров был зарегистрирован нами в 1988 г. Несмотря на то, что ребенок был в прошлом привит против оспы, заболевание протекало достаточно тяжело и потребовало госпитализации в течение 8 недель.

о

Кроме обИ}их симптомов (повышения температуры до 39 , недомогания, слабости и др.) отмечались лимфаденит и выраженные длительно не-заживавшие местные поражения (в облэсти ушной раковины и мочки уха). Источник инфекции выявить не удаюсь, хотя по данным анамнеза заболевания можно предполагать, что им явились полевые грызуны или их экскременты. О таи, что грызуны могут выделять с экскрементами жизнеспособный вирус имеются экспериментальные данные Майборода (1980, 1982). Нами также впервые были описаны 4 случая заражения людей оспой коров от больных белых крыс.: подобных сообщили мы не встретили в доступной нам литературе. В двух случаях болели взрослые люда (ранее вакцинированные прошв оспы), имевшие тесный контакт с этими животными (сотрудники вивария). В двух других случаях - это были дети, которые стали жертвами модного увлечения родителей покупать в качестве "живой" игрушки белых

крыс, Заболевшие были не вакцинировзны протип оспы. В обоих случаях течение заболевания пагр*?боЕа.ш их гос.питалю-щш, а у одного из них наблюдалась генерализация процесса.

При изучении изолятов аг людей и белых крыс, послуживших источника-! их инфицирования, была определена (по совокупности фенотипи-ческих маркеров) их принадлежность к вирусу оспы коров. Выявленные отличия изотопов сгг референс-штомш вируса оспы коров "Брайтон" касались предельной температуры накопления в куриных эмбрионах и патогенности для лаборэггорнык грызунов. Наши данные о су1иествовании внутривидовой ваглтабельносги у вируса оспы коров полностью совпадают с находками других авторов (ВахЬу, 1975: Ше-лухина Э. М., 1980) изучавшими различные штаммы этого вируса. Дополнительное подтверждение принадлежности и.чолятсв к вирусу оспы коров былэ получено при изучении их ДНК с по.кнуью сострим[ионного анализа (в рамок совместной работы с НПО "Вектор", г, Новосибирск) .

С помацью специально предпринятого иссл>;првпния в ИФА сывороток больных оспой коров на разных сроках заболевания нам удалось проследить за динамикой онтителэобразовашш. Юэк было установлено, антитела появляются с. 5-го дня, максимум их накопления определяется к 18 дню, затем наблюдается тенденция к понижению уровня .антител, на даже не» 54 день (срок наблюдения) они выявляются в достаточно высоком титре. При этом, если у невамрширо-Еанных против оспы пациентов титры антител к вирусу оспы коров были несколько выше, чем к вирусу вакцины, то у вакцинированных бальных титры антител к обоим вирусам были ровньми на протяжении Есего срока наблюдения (табл. 4).

Таблица 4

Видовая идентификация антител у людей, больных оспой коров, с па-одью теота ИФА-А

Пациент, !Вэк- I Сывооотка I

Титр в ИФА

Е. Н. ,34

1ци-|на-

¡11ИЯ

I + I

I

-н—

ИССЛЕДОЕа- У--------------—-

лзсь на ¡сыворотки, адсорбированной ¡"нссмальнш" антигеном

I С БИруСОМ

I вакиины

18 ДЕНЬ от 14000 начала за-I болеЕания

I сыворотки, адсорбированной | антигеном вируса вакцины

с вирусом | с вирусам оспы' капов | вакиины

с вирусал оспы коров

14000

* в скобках указан процент остаточных антител

540 (3,97.)* 14000 (1007.)

А. Г., 10 + 15 день 27 день 54 день 1_ ____ . 1620 4860 4860 1620 4860 4860 60 (3,77.1 180 (3.731) < 60 540 (337.) 1620 (337.) 4860 (1007.)

Л. Г., 4,5 12 день 30 день 1620 540 4860 4860 180 (117. ) < 60 4860 (3007.) 1620 (3007.)

_________ Б. Р.. 12 ___________1 5 день 18 день 540 1620 4860 14000 60 (117.) 180 (117.) 1620 (3007.) 4860 (3007.)

Д.К., 10 | - 10 день 540 4860 180 (3321) 1620 (3007.)

-Нами впервье была показана возможность применения ИФА-А для постановки серологического диагноза оспы коров (при этом использовали уточненные нами при оспе обезьян диагностические критерии)• с помощью этого теста наличие видоспецифичесхт антител быто установлено у всех пациентов, в том числе тех, где диагноз оспы коров был подтвержден прямым выделением вируса. Практика показала, что как и при оспе обезьян особенно цеигым этот прием сказался в следующих случаях: 1) там, где выделение вируса по тем или иным причине« оказалось безуспешным; 2) у людей, птнее вакцгашрованных против оспы, у которых выявлению видоотецифических антител мешаю наличие антител к вирусу вакцины.

Учитькая полученные бесспорные доказательства роли грызунов, как природного резервуара вируса оспы коров, (Ладный И. Д. и др., 1975; НаренникоЕа С. С. и др., 1978; Цанэва Ш. А. и др., 1939 г.) нами также была предпринята подобная попытка. В первом случае обследовали мышевидных грызунов, отловленных в районе одного из очагов заражения людей; во-втором - 12 видок грызунов из различных районов бывшего СССР (в рамках совместной работы с институтом Полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН). В обоих случаях были получены отрицательные результаты.

Мы полагаем, 1гго количество выявленных случаев оспы коров у людей в нашей стране представляют лишь часть того, что имеет место в действительности. Это предположение основывается на следующем: во-первых, все случаи относятся к Москве и Подаосновыо, где медицинские работники знают о возюшостях л&борзторгого исследования на орггатсксвирусы (НИИВП); во-вторых, одной из причин может быть легкость течения болезни у взрослых, привитых в пссшюм про-

тив остты, вследствие чего они не обретаются за медицинской помощью. И, наконец, в наше попе зрения не попали случаи оспы коров, связанные с заражением от домашних кошек, о которых в последние годы неоднократно сообщалось в зарубежной пе^ити, в таи числе о случае с летальным исходом (Thcnsett et al., 1978; Martland et al., 1985.: Willemse, Qnberink, 1985; Klingebiel et al., 1938, Czerny et al., 1991). Надо думать, что случаи заражения от конек имеют место и в нашей стране. Учитывая последнее, мы впервые в нашей стране изучили восприимчивость этих животных к вирусу оспы коров, использовав для этого штамм, выделенный от белых крыс. Полученные данные полностью подтвердили результаты английских исследователей (Gaskell et al., 1983; Bennett et al., 1989) о выоской восприимчивости кшек к вирусу оспы коров. Помимо того, что наш данные являются косвенным подтверждением "заинтересованности" кшек в циркуляции вируса оспы моров как промежуточного хозяина, воспроизведенная нами модель оспы коров на кошках открывает новые возможности экспериментального изучения этой инфекхгии.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что среда зарегистрированных случаев оспы обезьян у людей в странах Экваториальной Африки (Заир, ЦАР) большинство (66Х) инфицируется из природного резервуара инфекции, 32,17. - от первичных случаев и 1,9% - от вторичных случаев.

2. Выявлено наличие бессимптшных форм этого заболевания. Впервые показано существование оспы обезьян в новом регионе (Па-Сон) .

3. Вирусологически-! и серологически.» обследованием дикпживу-

црт животных, а также проводе» пы-ш эксперименты ¡ьми исследованиями на бел-оах подгоериедена роль белек как гтригодного резервуара вируса оспы обезьян,

4. Изучена и внедрена в практику работы Сотрудничающего центра ВОЗ (НИШП) тест-система ИФА на ослопе МАТ к вирусу оспы обезьян, позволяющая проводить быстрое выявление и видоспецифи-ческую идентификацию этого вируса. При этом показано, что специфичность тест-системы определяется "детекшэрны.и", а не "захваты-вагацими" антителами.

5. Впервые в нашей стране выявлена и описана генуинная оспа коров у людей. Устатазлзно, что источником заражения в части случаев были грызуны (белые крысы), в остальных - неизвестный природный носитель вируса.

6. Все подученные нами изоляты от больных людей и белых крыс, несмотря ш некоторые различия, агаэсяциеся к их патоген-ности для лабораторных грызунов и предельной температуре размножения, по совокупности т свойств идштфгсптт.ованы как вирус оспы коров.

7. Впервые определена возможность использования ИФА-А для серолэгичесной диагностики оспы коров и уточнены диагностические критерии применения этой рхзакхрти,

8. Экспериментальными исследованиями подтверждена высокая восприимчивость домашних кшек к вирусу оспы 1«оров и определен характер вызываедай им инфекции у этих животных.

Спиоок работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Львов С. Д., Грсмашевский В. Л., Ыаренникова С. С., Богоявленский Г. В., Байлук ф. Н., Бутенко А. М., Гущина Е. Н., Шелухина Э. М., Жукова O.A., Морозова Т. Н. Изоляция поксвируса (poxviridae, orthopoxvirus, комплекс оспы коров) сгг погавас-экономок microtus(m) oecononus Pal. 1776 в лесотундре Кольского полуострова // Вопр, вируоол. - 1988. - N 1. - с. 92-94.

2. ЬЬренникова С. С., Жукова 0. А., Маленкова Г. М., й-юва Н. Н. Лаборагорю подтвериоденный случзй заражения человека оспой крыс (оспой короЕ) // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. - 1988. - N е. - с. 30-32.

3. Якова Н. Н., (-Хренникова С. С., Жукова 0. А., Слугин М. И. Повышение эффективности алектронна-шкроскопической диагностики ортопоксвируснысх инфекций // Вопр. вирус. - 1989. - N 6. - с. 752 -755.

4. Harem ikova S.S., Shelukhim Е.М., Zhukova O.A. Experimental infection of squirreis sciurus vulgaris by monkey pox virus // Acta virol. - 1989. - v. 33. - p. 399.

5. MarremiKova S.S., SheluKhina Т.M., Matsevich G. R., Ezek Z., Khodakevich L. N., Zhukova O.A., Yanova N.N., Chekunova E. V. Monkey pox in humans: current results // Acta virol. - 1989. - V. 33. - p. 246-253.

6. Ivbremikova S.S., SheluKhina E.M.,, Zhukova O.A., Yanova N. N., Lopareb V.N. Shiallpox diagnosed 400 yeans later: results of skin lesions examination of 16-th ceatury italian mummy // J. of gigiene, epidemiol., raicrobiol and immunol. -1990. - v.34. - N2. - p. 227-231.

7. Хренникова С.С., Якова Н.Н., Жукова 0.А. Электронная микроскопия как метод диагностики при эпидемиологическом надзоре за псксвируслыми инфекциями // Ж. шкробиол., зпидемиол. и иммунологии. - 1990. - N 8. - с. 57-62.

_ 8. Marennikova S.S., Shelukhina Е.М.,, Zhukova О.А.,

Shchelkunov S. N., Gashnikov P. V., Sandakchiev L. S. The comparative study of strain DNA of ortopoxviruses classified as cowpox virus species // The fifth meeting' of the ccxnmitee on orthopoxvirus infection. - Geneva. - 11 to 13 dec. 1990. - w.p.

9. Marennikova S.S., Shelukhina E.M., Khodakevich L.N., Zhukova O.A. New data on ecology of orthopoxviruses pathogenic for human beings // YUi International congress of viroloc-y. Berlin. - 1990. - p. 263.

10. Марета-кова С. С., Жукова 0. A., Нагиева Ф. Г... Шелухина Э. Н.. Мацввич Г.Р. Разработка и применение тест-системы ИФА для выявления и бидоесй идентификации вируса оспы обезьян // Ж. микро-биол., эпидемией. и иммунологии. - 1991. - N 2. - с. 60-Св.

И. Marennikova S. S,, Shchel Kirov S. N., Lvov S.D.. Shelukhiva E. M., Zhukova 0. A.. Gashnikov P. V., Gromcshevsky V. L. A new orthopoxvirus carried by small rodents // 9-th International poxvirus and irictovirus meeting'. - Switzerland. -J992. - p. 71.

12. Zhukova 0. A., Tsanava S. A., Marennikova S.S. Experimental infection of domestic cats by cowpox virus // Acta Virol. 1992. - v. 36. - p. 43-44.