Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза

Маймистова, Алла Альбертовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза"

На правах рукописи

003488133

Маймистова Алла Альбертовна

РОЛЬ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЭФФЕКТОРИЫХ ПУТЕЙ ЭРИТРОЦИТОВ В ИЗМЕНЕНИИ ИХ МИКРОРЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ В НОРМЕ И НА ФОНЕ АТЕРОСКЛЕРОЗА

03.00.13. - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических, наук

1 о ДЕК 2009

Ярославль - 2009

003488133

Работа выполнена на кафедре медико-биологических основ спорта ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Алексей Васильевич Муравьев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Ирина Анатольевна Соколова

кандидат биологических наук, доцент Наталья Петровна Здюмаева

Ведущая организация: ГОУ ВПО Белгородский государственный университет

Защита состоится «__» декабря 2009 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 212.307.02 при ГОУ ВПО ««Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского» по адресу: 150000, г. Ярославль, Которосльная наб., 46 в.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке «ГОУ ВПО Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского»

Автореферат разослан «__» ноября 2009 г.

Ученый секретарь / /

диссертационного совета, ^ ^

кандидат биологических наук, доцент ^ / И.А. Осетров

( >-" /

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Эффективность доставки кровью веществ и кислорода к клеткам зависит от двух групп факторов: сосудистых и реологических (H. Schmid-Schônbein, 1975; J.F. Stoltz, 1995; A. Pries, T. Secomb, 2003). В микрососудах, особенно в капиллярах, стенки которых лишены сократительных элементов и вазомоторной иннервации (Г.И. Мчедлишвили, 1995), ведущую роль в тканевой перфузии играют реологические свойства крови и особенно микрореология эритроцитов (Н.Н. Фирсов, 2004; J.F. Stoltz, 1999). По данным ряда авторов снижение деформируемости эритроцитов и их высокая агрегация могут являться ведущим звеном расстройств микроциркуяяции (И.А. Соколова и др., 2005; O.K. Baskurt, H.J. Meisel-man, 2007). Следовательно, проблема срочного и долговременного изменения микрореологических свойств эритроцитов при адаптации кровотока или компенсации сосудистых нарушений требует своего изучения. Для ее решения имеется ряд предпосылок. Несмотря на простоту конструкции, зрелые эритроциты сохранили многие элементы молекулярных сигнальных путей (D. Miles, 2000; G. Minetti et al., 2004), при активации которых могут изменяться их реологические свойства (S. Manno et al., 2005). Имеется ряд работ, в которых сообщается о том, что под влиянием внеклеточных сигнальных факторов изменяется микрореология эритроцитов (А.В. Муравьев и др., 2002; И.А. Тихомирова, 2006; J.F. Horga et al., 2000; F.A. Carvalho et al., 2006). Вместе с тем лишь отдельные работы посвящены исследованию внутриклеточных сигнальных систем, связанных с микрореологическим поведением эритроцитов (Y. Zipser et al., 2002; С. Saldanha et al., 2007). Кроме того, отсутствуют комплексные исследования всего вне- и внутриклеточного сигнального каскада и анализ вовлечения в регуляторный процесс разных внутриклеточных сигнальных путей.

Таким образом, отсутствие в литературе исчерпывающих данных о регуляторных внутриклеточных механизмах изменения агрегации и деформации эритроцитов, а также важная роль этих микрореологических свойств в обеспечении транспорта вещества и энергии в системе микроциркуляции мотивировало проведение настоящего исследования. Кроме того, необходимо заметить, что элементы внутриклеточных сигнальных каскадов могут быть молекулярными мишенями, воздействие на которые может привести к коррекции негативно измененных реологических свойств эритроцитов и крови в целом. Для того чтобы лучше определить величину вклада микрореологических свойств эритроцитов в текучесть цельной крови и ее транспортный потенциал, был изучен комплекс реологических характеристик крови в условиях физиологической нормы и у лиц с нарушениями артериального сосудистого русла при церебральном

склерозе и атеросклерозе сосудов нижних конечностей. Дефицит дилата-ции в этих условиях может быть либо компенсирован реологическими свойствами крови, или негативные изменения гемореологического профиля приведут к дальнейшей декомпенсации периферического кровообращения.

С учетом вышесказанного была сформулирована цель и основные задачи исследования.

Цель диссертационной работы: исследование роли внутриклеточных эффекторных механизмов эритроцитов, связанных с изменениями их микрореологических свойств, в норме и на фоне атеросклероза.

Задачи исследования:

1. Изучить гемореологический профиль лиц в норме и при атеро-склеротических изменениях сосудистого русла.

2. Исследовать роль аденилатциклазной системы в изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

3. Изучить участие протеинкиназ в перестройках микрореологии эритроцитов.

4. Исследовать элементы кальциевого сигнального пути при изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

Научная новизна исследования

Для решения поставленных в работе задач был разработан новый метод регистрации деформируемости эритроцитов на основе проточной микрокамеры и компьютерного анализа изображения клеток. Доказана высокая эффективность применения этого метода для экспериментальных и клинических исследований микрореологии эритроцитов. При анализе реологических характеристик крови норме и у лиц с атеросклеротически-ми изменениями были получены новые данные об особенностях реологии крови в условиях дефицита сосудистого русла и о вкладе отдельных макро- и микрореологических характеристик в текучесть цельной крови и ее транспортный потенциал. Показана возможность срочного изменения микрореологии эритроцитов под влиянием однократного приема лекарственных препаратов - ингибиторов активности фосфодиэстсраз. Впервые получен комплекс доказательств участия аденилатциклазной системы в регуляции микрореологических свойств эритроцитов. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что стимулирование протеинкиназы А дает больший позитивный микрореологический эффект, чем активация протеинкиназы С. Впервые установлено, что стимулирование тирозино-вых протеинкиназ приводит к заметному повышению деформируемости эритроцитов. Новыми являются данные о том, что изменение уровня Са2т в эритроцитах существенным образом влияет на микрореологическос поведение эритроцитов, особенно на их агрегацию.

Теоретическая и практическая значимость работы

При исследовании микрореологического поведения эритроцитов получены новые данные о внутриклеточных механизмах регуляции этих, присущих эритроцитам, клеточных свойств. Методы и подходы, разработанные для изучения регуляторных механизмов изменения микрореологии эритроцитов, могут быть применены и для исследования других типов клеток. В частности разработанный в данном исследовании метод проточной микрокамеры с точно дозированным напряжением сдвига может быть применен для исследования механического нагружения лейкоцитов, клеток сосудистого эндотелия и опухолевых клеток. Определение внутриклеточных молекулярных мишеней, действие на которые сигнальными молекулами меняет реологическое поведение эритроцитов, может быть использовано при разработке новых лекарственных препаратов с целью коррекции негативно измененных реологических свойств эритроцитов. Материалы диссертации расширяют представления о факторах регуляции вязкости крови, а также механизмах изменения микрореологических свойств эритроцитов. Они могут быть использованы в лекционных курсах по физиологии крови и кровообращения для студентов биологических и медицинских факультетов вузов, для написания монографий и практических руководств, а также для организации и проведения дальнейших исследований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У лиц с атеросклеротшеским поражением сосудистого русла имеется комплекс негативных гемореологических изменений по сравнению с данными лиц контроля. Эти изменения включают повышение вязкости крови и плазмы, прирост агрегации и ригидности эритроцитов.

2. Повышение активности аденилатциклазный системы эритроцитов: 1) при прямом стимулировании аденилатциклазы форсколином, 2) введением в среду инкубации клеток стабильного аналога ц-АМФ, 3) ингиби-рованием (в том числе селективным) фосфодиэстераз эритроцитов - приводит к достоверному приросту их деформируемости и снижению агрегации клеток.

3. При стимулировании цАМФ-зависимой протеинкиназы А в эритроцитах наблюдается статистически достоверное и существенное повышение деформируемости эритроцитов и снижение их агрегации. Тогда как стимулирование протеинкиназы С с помощью форболового эфира и кальциевого ионофора дает меньший микрореологический эффект. Активация тирозиновых протеинкиназ при помощи ванадата натрия, эритро-поэтина и цисплатина сопровождается достоверным приростом деформируемости эритроцитов и меньшим изменением их агрегации.

4. Блокирование входа Са2+ в эритроциты при помощи верапамила и его связывание в среде инкубации при помощи хелатора ЭГТА сопрово-

ждается достоверным увеличением деформируемости клеток и снижением их агрегации, тогда как повышение внутриклеточного Са2+ путем инкубации клеток с кальциевым ионофором (А23187) сочетается с выраженным приростом агрегации эритроцитов и некоторым снижением их деформируемости.

Апробация результатов работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на международной конференции «Гемореология в микро- и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); XX съезде физиологического общества им. Павлова (Москва, 2007); VI международной конференции «Гемореология и микроциркуляция» (Ярославль, 2007); V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2007); Conference on Clinical Hemorheology and Microcirculation (Дрезден, Германия,

2007); Всероссийской школе-семинаре «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2008, 2009); Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург,

2008); IV Всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2008); XII Международном конгрессе по Биореологии (Пенсильвания, США, 2008); IV Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» с международным участием (Москва, 2009); I Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи» (Москва, 2009); Европейской конференции по Гемореологии (Сан-Мориц, Швейцария, 2009); Европейской школе-конференции по Биореологии, (Варна, Болгария, 2006, 2009).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 22 печатных работы, в том числе 5 - в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 149 страницах печатного текста, включает 25 таблиц и 34 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием методов исследования, 2-х глав с изложением полученных результатов, обсуждения, выводов, списка литературы. Библио-фафический указатель включает 369 источников: 87 отечественных и 262 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для достижения поставленной цели и решения основных задач было сформировано несколько групп наблюдения. Первую группу составили лица с атеросклерозом сосудов головного мозга (группа 1; мужчины, возраст от 50 до 68 лет, п-50). Во вторую группу были включены лица с ате-росклеротическими поражениями сосудов артерий нижних конечностей (группа 2; мужчины, возраст от 42 до 57 лет, п=33). Для каждой из указанных групп были сформированы соответствующие группы контроля, сопоставимые по полу и возрасту (для группы 1 - контроль 1; п=50, для группы 2 - контроль 2; п=33). Диагноз атеросклероза был поставлен на основании комплексного обследования пациентов в условиях специализированного отделения клиники.

Кровь для анализа (в объеме 10 мл. с гепарином в качестве антикоагулянта, 5000 ЕД) брали из локтевой вены в асептических условиях клинической лаборатории опытным медперсоналом. Все измерения и манипуляции с кровью проводились в течение 4 часов после ее взятия при комнатной температуре (21±2°С).

Для изучения молекулярных механизмов изменения микрореологических свойств, проводили несколько серий опытов, в которых эритроциты инкубировали с препаратами, влияющими на элементы внутриклеточных молекулярных сигнальных каскадов и в том числе:

а) на систему аденилатциклаза - цАМФ:

1) стимулятор аденилатциклазы (АЦ) - форсколпп (10 цМ);

2) проникающий аналог циклического АМФ (цАМФ) - дБ-цАМФ (50 цМ);

3) неселективный ингибитор активности фосфодиэстераз (ФДЭ) - изобу-тишетилксантип (ИБМК, 100 цМ);

4) ингибитор ФДЭ1 - винпоцетин (10 цМ);

5) ингибитор ФДЭ4 -ролипрам (10 цМ);

б) на кальциевый сигнальный путь:

1) блокатор Са2+ каналов - верапамил (100 цМ);

2) хелатор кальция в среде - отиленгликольтетрауксусная кислота (ЭГТА,

1 цМ);

3) ингибитор Са2+-зависимых калиевых каналов - клотримазол (100 цМ);

4) кальциевый ионофор - А 23187 (кальцимицин, 10 цМ);

в) на систему протсишшназ и фосфатаз:

1) стимулятор протеинкиназы С (ПКС) - форболовый эфир (3,0 цМ);

2) неселективный ингибитор ПКС - стауроспорин (3,0цМ);

3) селективный ингибитор ПКС - бис-индолилмалеймид-Х-гидрохлорид (БИМХГ, 3 иМ);

4) активатор МК-киназ - эритропоэтин (Эпо, 10,0 М.Е./мл);

5) стимулятор тирозиновых протеинкиназ (ТПК) - цисплатин (3 нМ);

6) ингибитор тирозиновых протеинфосфатаз (ТПФ) - ортованадат натрия (100 цМ).

Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием, затем их трижды отмывали в изотоническом растворе NaCl, с глюкозой (5,0 мМ). Суспензии эритроцитов (Hct=40%) инкубировали с разными препаратами при 37°С от 5 до 15 мин. В данных сериях в качестве контроля исследовали суспензии эритроцитов без добавления препаратов.

Колтпекс вискозиметрических измерений В эту группу методов включали измерения вязкости цельной крови, плазмы (т|п) и суспензии эритроцитов (г|с или ВС) в изотоническом растворе NaCl с гематокритом 40%. Их регистрацию проводили на полуавтоматическом капиллярном вискозиметре при напряжениях сдвига от 0,196 Н-м"2 до 1,96 Н-м'2.

Определение показателя гематокрита и гемоглобина Определение гематокрита (Hct) крови и приготовленных суспензий эритроцитов проводили на специальной микрогематокритной центрифуге СМ-70 (Латвия). Концентрацию гемоглобина крови (НЬ) измеряли на биохимическом фотометре Микролаб-540. Рассчитывали среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС).

Регистрация деформируемости эритроцитов Для оценки деформируемости эритроцитов:

1) Измеряли т]с с Hct=40% при напряжении сдвига 1,96 Н-м"2.

2) Определяли индекс удлинения эритроцитов (ИУЭ, рис. 1) в проточной микрокамере. Изображение растянутых потоком жидкости, прикрепленных одной точкой к поверхности микроканала эритроцитов (рис. 1.2) передавалось через USB порт в компьютер, используя цифровой окуляр (модель DCM500). После «захвата» и записи изображения определяли длину (L) и ширину (W) деформированных клеток (около 100) и рассчитывали индекс удлинения как показатель деформации: ИУЭ = (L-W)/(L+W)

1. |г з, w

Рис. 1. Принцип измерения индекса удлинения эритроцитов (ИУЭ), как показателя их деформируемости. Обозначения: 1. Эритроцит в микрокамере до подачи сдвигового напряжения потоком жидкости; 2. Эритроцит, деформированный в сдвиговом потоке (г = 0,78 Н-м"2). 3. Расчет индекса удлинения.

3) Вычисляли индекс ригидности эритроцитов по формуле L. Dinten-fass (1981):

Тк = (T]0OJ-1)/ Vj0OJ -Hot, где i]0 - относительная вязкость крови, Hct -гематокрит (в долях от единицы).

Регистрация агрегации эритроцитов Агрегацию эритроцитов определяли:

1) Методом оптической микроскопии с последующим компьютерным анализом изображения. Это позволяло рассчитать отношение числа агрегатов к количеству неагрегнрованных клеток, которое рассматривали как показатель агрегации эритроцитов (ПА), а также число клеток, приходящихся на один агрегат (Ч/А). Интегральный индекс агрегации (ИИА) рассчитывали как произведение ПА на ЧА.

2) На основе данных регистрации вязкости крови при напряжении сдвига 1,96 H-M""(qKl) и 0,196 1Ьч"2 (г^) рассчитывали индекс неньюгоно-вости крови, как г^/г^ (O.K. Baskurt, H.J. Meiselman, 1997).

Определение эффективности транспортного потенциала крови

Определение эффективности доставки кислорода к тканям производили по формуле: TOv Hct/r)Kl (J. Stoltz et al., 1991; P. Kenyeres et al., 2008).

Математическая обработка данных Статистическую обработку полученных цифровых материалов и все виды анализа результатов, включая корреляционный, проводили на PC IBM, используя табличный редактор Microsoft Excel и программу «Statistica» (версия 6.0). Проверку выборочного распределения на нормальность проводили с помощью теста Шапиро-Уилка. Если выборка подчинялась закону нормального распределения, достоверность различий в исследуемых группах определяли с помощью t-критерия Стыодента. Поскольку параметры не всегда соответствовали критерию нормального распределения, то в ряде случаев оценку статистической значимости различий в группах наблюдения проводили с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни, Вилкоксона, Колмогорова-Смирнова. За уровень статистически значимых принимали изменения при р<0,05 и р<0,01. В таблицах приведены средние (М) и стандартные отклонения (о).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристики гемореологического профиля в норме и при церебральном атеросклерозе

Гемореологический профиль у лиц группы 1 характеризовался повышенной вязкостью крови по сравнению с контролем как при высоких (г|к1), так и при относительно низких скоростях сдвига (пк2) на 22 и 30% соответственно (табл. 1). Высокая в группе 1 в значительной степени связана с приростом вязкости плазмы на 16% по сравненшо контролем (табл. 1). Что касается г\К2,то ее разница с контролем была в меньшей степени обусловлена т|п, о чем свидетельствует отсутствие достоверной корреляции между этими показателями.

Таблица 1

Макрореологические характеристики крови лиц группы 1 _по сравнению с контролем (М+а)_

Показатели Контроль 1 (п=50) Группа 1 (п=50)

т|к1, мПа-с 3,2±0,41 3,91±0,68**

Т|к2, мПа-с 50.7&Ы1 65,77±21,76**

г)п, мПа-с 1,88±0,13 2,18±0,27**

Нс1, % 45,81±3,49 45,34±5,04

НЬ, г/л 147,1±17,83 148,51±21

Обозначения: г|К1 - вязкость крови при напряжении сдвига 1,96 Н-м~2; Г|к2 - вязкость крови при напряжении сдвига 0,196 Н-м-2; г)п - вязкость плазмы при напряжении сдвига 0,784 Н-м"2; Нс1 - гематокрит крови; НЬ - концентрация гемоглобина в крови;** - различия достоверны при р<0,01

Расчет коэффициента детерминации (В.М. Зациорский, 1981) показал, что вклад в текучесть крови и ее транспортный потенциал Нй и т]п составил от 35 до 68%.

Таблица 2

Показатели Контроль 1 (п=50) Группа 1 (п=50)

ПА, отн.ед. 0,06±0,04 0,1±0,08**

Ч/А, отн.ед. 4,84±0,62 5,07±0,67

ИИА, отн.ед. 0,27±0,21 0,48±0,38**

Л*2>Цки отн.ед. 15,93±2,97 16,95±4,88

Обозначения: ПА - показатель агрегации; Ч/А - число клеток, приходящихся на агрегат; ИИА - интегральный индекс агрегации: Г|к2/г|к1 - индекс неиьютоновости крови; ** - различия достоверны при р<0,01

Агрегация эритроцитов (АЭ) у лиц группы 1 была заметно повышена по сравнению с контролем (табл. 2). Свидетельством этому была разница ПА между группами в 67% (р<0,01; табл. 2). На 15% меньший ИУЭ, а также более высокая вязкость суспензии эритроцитов свидетельствовали о низкой деформируемости эритроцитов (ДЭ) лиц группы 1 (рис. 2). Кроме того, корреляция (г=0,716; р<0,05) между индексом ригидности и т|к2 свидетельствовала о значительном влиянии ДЭ на текучесть крови в целом.

I-

[

140 ,

1 80 1

1 60 -

' I 401

20 Н

о 4—

В Контроль Ш Группа!

Рис. 2. Изменение показателей деформируемости эритроцитов в группе 1 относительно контрольных лиц, где ВС - вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м"2; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов; Тк - индекс ригидности эритроцитов; р<0,01

В группе 1 отношение Нс1/г|к1 было равно 11,9, что на 17% ниже, чем в контроле (р<0,01). Наличие корреляции между Нй/г|к1 и т|п (г=0,484, р<0,05), свидетельствует о вкладе высокой г|пв эффективность транспорта кислорода. Другим существенным фактором является ДЭ. На это указывала корреляция ИУЭ и Нс1/г|к1 (г=0,549; р<0,05).

Таким образом, изучение гемореологических характеристик лиц с атеросклерозом сосудов головного мозга выявило изменения основных реологических параметров. Наиболее значимые изменения потоковых свойств крови касались микрореологических свойств эритроцитов - их деформируемости и агрегации.

Анализ характеристик гемореологнческого профиля в норме п при атеросклерозе сосудов нижних конечностей

Гемореологический профиль лиц группы 2 имел ряд негативных изменений. Так г)к1 была достоверно выше, чем в контроле на 35 % (табл. 3; р<0,01). Эта разница была обусловлена также как и в группе 1 главным образом повышением г|п, которое составило 16% (табл. 3). Корреляция между Г1„1 и г|п (г=0,503; р<0,05) служила подтверждением роли вязкости плазмы в снижении текучести крови. Хотя и была отмечена значимая

корреляция между На и г|к1 (г=0,610 р<0,05), достоверных различий между группой 2 и контролем по На практически не было (табл. 3). Следовательно, можно полагать, что изменение текучести крови зависело не столько от концентрации эритроцитов, сколько от г|п и других факторов, в том числе от микрореологии эритроцитов.

Таблица 3

Макрореологические характеристики крови лиц группы 2

по сравнению с контролем (М±а)

Показатели Контроль 2 (п=33) Группа 2 (п=33)

т|к1, мПа-с 3,35±0,34 4,52±1,17**

Т1к2, мПа-с 53,74±11,12 68,16±28,7**

т]п, мПа-с 1,87±0,12 2,17±0,29**

Hct, % 47,08±3,1 46,31±5,88

Hb, г/л 154,16± 17,05 154,7±24,32

Обозначения те же, что в табл. I

Разница вязкости крови при низкой скорости сдвига по сравнению с группой контроля составила 27% (табл. 3; р<0,01). Для лиц группы 2 была характерна высокая ЛЭ. При этом наблюдалось как повышение общего числа агрегатов, гак и увеличение их размеров (табл. 4). Разница по ПА с контролем составила 50% (р<0,05).

Таблица 4

Показатели микрореологии эритроцитов лиц группы 2 _по сравнению с контролем (М±а)_

Показатели Контроль 2 (п=33) Группа 2 (п=33)

ПА, отн. ед. 0,04±0,02 0,06±0,04*

Ч/А, отн.ед. 4,71±0,67 5,04±0,52*

ИИА, отн. ед. 0,19±0,12 0,35±0,25*

Лк2 отн.ед. 16,06±2,99 15,78±6,26

Тк, отн. ед. 0,92±0,22 1,05±0,26*

Tic, мПа-с 2,06±0,18 2,25±0,35**

ИУЭ, отн.ед. 0,240±0,030 0,224±0,030*

МСНС, г/дл 32,43±2,42 32,67±1,71

Обозначения: ПА - показатель агрегации; Ч/А - число клеток, приходящихся на агрегат; ИИА - интегральный индекс агрегации; г|к2/г|к1 - индекс неньюто-новости крови; Тк - индекс ригидности эритроцитов; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов; г;с - вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м"2; * - р<0,05; ** - р<0,01

Что касается ДЭ, то в группе 2 она была ниже, чем в контроле. Разница по разным индексам составила от 10 до 14% (р<0,05; табл. 4). Более

низкая ДЭ может внести вклад в повышение т)к2. Об этом свидетельствует корреляция между индексом Тк и вязкостью крови (г=0,632; р<0,05).

Важно заметить, что между Hct и сниженным транспортным потенциалом крови (отношение Hct/riKl) отмечалась лишь слабая отрицательная корреляция (г- - 0,010). Вместе с тем эта величина очень сильно зависела от вязкости крови. Коэффициент корреляции между ними составил 0,818. На эффективность транспорта влияла и ДЭ. На это указывала отрицательная корреляция (г- - 0,632; р<0,05) между Hcí/t^i и Тк, а также положительная корреляция этого индекса с ИУЭ (г=0,586; р<0,05).

Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что у лиц с атеросклеротическими поражениями сосудистого русла параметры гемореологического профиля заметно отличались от соответствующих характеристик лиц с интактной сосудистой системой. Существенный вклад в прирост вязкости крови, наряду с повышенной Г|п вносит микрореология эритроцитов. При этом было установлено, что у лиц группы 2 на долю микрореологии эритроцитов в общей текучести крови может приходится до 38%, тогда как у лиц группы 1 эта цифра превышает 50%.

Анализ клеточных и молекулярных механизмов изменений микрореологии эритроцитов

Доказательством возможного срочного изменения микрореологических свойств эритроцитов при активации внутриклеточных молекулярных мишеней могут служить наши наблюдения, выполненные при однократном приеме лекарственных препаратов, обладающих активностью в отношении фосфодиэстераз (пентоксифиллин и винпоцетин). При сравнении комплекса реологических характеристик до и после приема препарата был установлен прирост деформируемости и снижение агрегации эритроцитов. Эти факты, полученные в наблюдениях ш vivo свидетельствуют о том, что эритроциты способны на быстрый микрореологический ответ, в основе которого вероятно лежат регуляторные механизмы, связанные с внутриклеточными сигнальными системами, например, такими как система адетыатциклаза - 1{АМФ или Са~— калъмодулин.

Анализ роли адгнтатцикпазной системы в изменениях микрореологических характеристик эритроцитов

Наиболее вероятными системами регуляции, которые могут включаться в клеточный ответ, являются аденилатциклазный и Ca2t - сигнальные пути (Н. Oonishi et al., 1997), а также хорошо представленная в мембранах зрелых эритроцитов человека система протеинкиназ и протеин-фосфатаз (G. Minetti et al., 2004). Анализ результатов исследования показал, что стимулирование АЦ форсколином увеличило деформируемость эритроцитов и вызвало снижение их агрегации (табл. 5).

Таблица 5

Агрегация эритроцитов здоровых лиц при их инкубации с форсколином,

дБ-цАМФ и комплексом Форсколин t-Пентоксифиллин (М±ст)

Показатели Контроль дБ-цАМФ (50 цМ) Форсколин (10цМ) Ф+П

ПА, отн.ед. 0,06±0,04 0,04±0,02* 0,06±0,04 0,04±0,02

Ч/А, отн. ед. 4,79±0,64 4,82±0,47 5,17±0,64 4,88±0,48

ИИА,отн. ед. 0,32±0,25 0,17±0,07* 0,3±0,23 0,19±0,12*

Обозначения: ПА - показатель агрегации: Ч/А - число клеток, приходящихся на агрегат; ИИА - интегральный индекс агрегации; * - различия достоверны й^и р<0,05

и з -.

Контроль дБ- цАМФ Форсколин Ф+П

Рис. 3. Изменение вязкости суспензии эритроцитов под влиянием инкубации с препаратами, обладающими аденилатциклазной активностью, где Ф+Т - «Фор-сколин+Пентоксифиллин»; * - различия достоверны при р<0,05; ** - различия достоверны при р<0,01

Повышение уровня цАМФ в эритроцитах при введении дБ-цАМФ и как следствие - активация ПКА существенно снизило АЭ и их ригидность (табл. 6).

Винпоцетин способствовал приросту ДЭ и существенному снижению АЭ. Ингибитор ФДЭ-4 - ролипрам не оказал заметного влияния на агрегацию, однако повышал ДЭ. На это указывало снижение пс на 11% (р<0,05) и прирост ИУЭ до 0,226±0,022, что составило 20% (р<0,05). Ингибитор активности ФДЭ - ИБМК умеренно снижал АЭ и достоверно повысил ДЭ (табл. 6).

Проведенное одновременное стимулирование АЦ и ингибирование ФДЭ путем инкубации эритроцитов с комплексом «Форско-лин+Пентоксифиллин» сопровождалось самым большим приростом их деформируемости, а также выраженным снижением агрегации. Применение другого комплекса - «Форсколин+ИБМК», оказало сходное, но менее выраженное влияние на микрореологию эритроцитов.

Таблица 6

Изменение микрореологических характеристики крови _под влиянием ИБМК (М±а; п= 11)_

Показатели Контроль ИБМК (100 цМ)

Г|с, мПа-с 2,42±0,34 2,14±0,25*

ПА, отн.ед. 0,068±0,05 0,05±0,04

Ч/А, отн. ед. 4,77±0,72 4,85±0,67

ИИА, отн. ед. 0,31±0,25 0,24±0,18

ИУЭ, отн. ед. 0,194±0,018 0,230±0,015*

Обозначения: г)с - вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м'2; ПА - показатель агрегации; Ч/Л - число клеток, приходящихся на агрегат; ИИА - интегральный индекс агрегации; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов;* -различия достоверны при р<0,05

Следовательно, можно заключить, что повышение уровня цАМФ путем ингибирования активности ФДЭ, а также при введении стабильного аналога цАМФ - дБ-цАМФ изменяет микрореологическое поведение эритроцитов.

Роль протеинкиниз и фосфатаз в изменениях микрореологии эритроцитов

Особый интерес представляют протеинкиназы (ПК) и протеинфос-фатазы эритроцитов, поскольку они могут модифицировать морфологию, деформируемость и метаболические функции этих клеток (P. Boivin, 1988; Y. Zipser, 2002; G. Minetti et al., 2004). При анализе участия ПК в механизмах изменения микрореологических свойств эритроцитов необходимо подчеркнуть то, что согласно данным литературы зрелые эритроциты содержат функционально активные: цАМФ-зависимую протеинки-назу А (P. Boivin et al., 1981; Е. Ling et al., 1988), кальцийзависи.иую про-теинкиназу С (D.A. Andrews et al., 2002; S. Manno et al., 2005) и тирози-новые протеинкиназы (Y. Zipser, 2002; G. Minetti et al., 2004). Эти киназы могут быть активированы внеклеточными сигнальными молекулами. Белки цитоскелета, а также интегральные белки мембраны (например, белок полосы 4,1 и/или белок полосы 3) миут быть эффекторами, фос-форилирование которых сопровождается микрореологическими перестройками (S. Manno et al., 2005; S. Oliveira et al., 2008; рис. 4).

Рис. 4. Схема, иллюстрирующая участие ПК разного типа в механизмах изменения микрореологических свойств эритроцитов Обозначения: ПК-А - протеинкиназа А; ПК-С - протеинкиназа С; ТИК - тирози-

новая протеинкиназа

При стимулировании ПКС форболовым эфиром (ФЭ) наблюдалось умеренное повышение ДЭ, тогда как агрегация достоверно не изменялась (рис. 5А).Обработка клеток селективным ингибитором ПКС -• БИХГМ (R.A. Bit, 1993) не повлияла на АЭ, но вместе с тем умеренно повысила ДЭ (рис. 5Б).

ИИА

■ Контроль шФорболоеыйэфир ■ Контроль о БИХГМ

А. Б.

Рис. 5. Изменение микрореолог ических характеристики крови здоровых лиц под влиянием ФЭ (А; п=17) и под действием селективного ингибитора протеинкиназы С - БИХГМ (Б; п=18), где ВС - вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м~2; ИИА - интегральный индекс агрегации; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов; * - различия достоверны при р<0,05

120 -

yss 110 \

IШ1

ВС

МУЗ

ИУЭ

Неселективный ингибитор ПКС - стауроспорин устранял позитивный эффект ФЭ на пластичность клеток, однако, не оказал заметного влияния на АЭ. Сочетанное воздействие стимулятора ПКС ФЭ и БИХГМ сопровождалось существенным приростом деформируемости и снижением АЭ (рис. 6). Тогда как последовательная инкубация эритроцитов с стауроспорином и ФЭ влияния на АЭ не оказала, но вместе с тем привела к повышению ДЭ.

120 | 90 ^ ф 60

I 30 -

* *

III

вс иуэ

■ Контроль

ИБИХГМ+Форболовый эфир

ИИА

Рис. 6. Изменение микрореологических характеристик крови здоровых допоров (п=18) под влиянием «БИХГМ+ФЭ» Обозначения те же, что на рис. 5; * - различия достоверны при р<0,05

Полученный в результате стимулирования ПКС некоторый прирост эластичности эритроцитов может быть связан с фосфорилированием белка 3, о чем свидетельствуют данные и других исследователей (Б. Маппо е! аЦ 2005; 5. ОПуена й а1., 2008).

Анализ результатов изменения ДЭ под влиянием препаратов, имеющих тирозинкиназную активность, показал, что положительные сдвиги эритроцитов были более существенными, чем при стимулировании ПКС. Так при инкубации эритроцитов с эритропоэтином (Эпоэтин), влияние которого может включать активацию тирозиновых 1АК-киназ (У/. То^ е1 а1., 2005), было получено заметное улучшение ДЭ. Препарат цистатин, обладает способностью активировать ТПК семейства Эгс и главным образом Ьш-киназы (Я. Кишат е! а!., ¡995: 8. ЗЫэЬосМа е1 а!., 1998). При инкубации эритроцитов с этим препаратом происходило повышение ДЭ на 12% (р<0,05) и существенное снижение АЭ по сравнению с контролем (р<0,05; табл. 7).

Таблица 7

Изменение микрореологических свойств эритроцитов под влиянием соединений, имеющих тирозинкиназную и фосфатазную активность _(М±с; п~18) __

Показатели Контроль Эпоэтин (Ю,0М.Е./мл) Цисплатин (3 нМ) Ванадат (100 дМ)

т]с, мПа-с 2,05+0,25 1,87+0,21** 1,91±0,22 |_1,87±0,21 **

ИУЭ, отн.ед. 0,248±0,02 0,271+0,03* 0,278+0,03* 0,294+0,06*

ПА, отн.ед. 0, ¡2+0,08 0,12±0,08 0,07 ±0.04* 0,13+0,12

Обозначения: т)с - вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м"2; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов; ПА - показатель агрегации; * - различия достоверны при р<0.05:** - различия достоверны при р<0,01

Увеличение ДЭ было зарегистрировано при инкубации клеток с ингибитором тирозиновых протеинфосфатаз - ортованадатом натрия (р<0,05). При этом АЭ достоверно не изменялась (табл. 7).

Анализ роли кальциевого сигнального пути в изменениях микрореологии эритроцитов

Важным звеном в регуляции микрореологических свойств эритроцитов наряду с аденилатциклазной, протеинкиназной системами может быть Са2+ сигнальный путь. Стимулирование входа в эритроциты Са2+ путем их инкубации с кальциевым ионофором (А23187) несколько снижало ДЭ, но в большей степени повлияло на АЭ. Наблюдали ее выраженный прирост (табл. 8). Сходный проагрегационный эффект кальцимиципа был отмечен и другими авторами (И.А. Тихомирова, 2005; У/. СЬипу! й а!., 2001). Однако если клетки предварительно обработать селективным ингибитором ПКС (БИМХГ), а затем - А231287, то происходит не снижение, а наоборот - прирост ДЭ (р<0,05). Следовательно, можно полагать, что повышение ДЭ сочетается с ограничением входа Са2+ в клетку.

Таблица 8

Изменение микрореологических характеристики крови _под влиянием А23187 (М±о; п=27)_

Показатели г|с, мПа-с ПА, отн.ед. ИУЭ, отн.ед

Контроль 1,99+0,2 0,08±0,07 0,26±0,04

А 23187 1,96+0,23 0,12±0,11 0,27±0,04

Обозначения: те же, что в табл. 7.

Таким образом, можно предположить, что повышение Са2+ в клетке имеет два противоположных последствия: 1) активация спектрин-актинового взаимодействия и снижение пластичности эритроцитов; 2) активация Са2+-зависимых протеинкиназ и повышение пластичности клеток в результате фосфорилирования белка полосы 3 (S.L. Marchesi et al. 1989).

Таблица 9

Изменение микрореологических характеристики эритроцитов

под влиянием инкубации клеток с верапамилом и ЭГТА (М±о; п=24)

Показатели Контроль Верапамил (ЮОцМ) ЭГТА (1 мМ)

г|с, мПа-с 2,08±0,18 1,88±0,16* 1,91+0,16*

ИУЭ, отн.ед. 0,223+0,02 0,247±0,04* 0,274+0,04**

ПА, отн.ед. 0,08±0,0б 0,06±0,05 0,03+0,02**

Обозначения: те же, что в табл. 7.

При снижении уровня Са2+ в клетках путем инкубации эритроцитов с блокатором кальциевых каналов - верапамилом (С.Н. Орлов, 1986) наблюдалось достоверное повышение деформируемости клеток и небольшое снижение АЭ (табл. 10). Другим способом снижения уровня внутриклеточного Са2<~ является связывание кальция в среде инкубации с помощью ЭГТА (Дж. Эккерт и др., 1991). Под влиянием хелатора Са2+ произошло выраженное увеличение ДЭ и значительное снижение их агрегации (табл. 9).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, результаты проведённого исследования показали, что у лиц с нарушениями сосудистого русла по типу атеросклероза гемо-реологический профиль заметно отличается от соответствующих характеристик здоровых людей. Существенный вклад в прирост вязкости цельной крови, наряду с повышенной вязкостью плазмы, вносят изменения микрореологических свойств эритроцитов. При этом было установлено, что у лиц с атеросклерозом сосудов нижних конечностей вклад микрореологических параметров эритроцитов (агрегации и деформации) в вязкость цельной крови составлял в среднем 38%, тогда как у лиц с церебральными сосудистыми расстройствами он превышал 50%.

Однократный прием лекарственных препаратов, обладающих активностью в отношении фосфодиэстераз (винпоцетин и пентоксифиллин), сопровождался позитивными изменениями микрореологических характеристик эритроцитов лиц с нарушениями сосудистого русла. Следовательно, можно заключить, что эритроциты могут срочно реагировать изменением своих свойств при действии на их внутриклеточные молекулярные мишени.

Анализ механизмов изменения микрореологических характеристик эритроцитов показал, что проявление разной степени деформируемости клеток связано с активацией и ингибированием элементов вне- и внутриклеточных сигнальных путей. При этом регуляторные каскады могут включать не только кальциевый и аденилатциклазный сигнальные пути, но и хорошо представленную в зрелых эритроцитах человека систему тирозиновых протеипкиназ и фосфатаз. Экспериментальные данные позволяют предполагать, что аденилатциклазная система и кальциевый механизм регуляции могут быть в антагонистических отношениях при изменениях микрореологических свойств эритроцитов. Полученные данные подтверждают мнение о том, что фосфорилирование и дефосфоршшрова-ние белков мембраны и цитоскелета эритроцитов способствует срочному изменению свойств мембраны: ее пластичности и стабильности, и это отражается на микрореологическом поведении клеток в целом.

ВЫВОДЫ:

1. Значительный вклад, превышающий в среднем 40%, в повышение вязкости крови при высоких и низких скоростях сдвига у лиц с атеро-склеротическими изменениями сосудистого русла вносят микрореологические свойства эритроцитов - деформируемость и агрегация.

2. Комплекс макрореологических изменений у лиц с атеросклероти-ческими нарушениями сосудистого русла характеризовался более высокой вязкостью крови, обусловленной, главным образом, повышенной вязкостью плазмы.

3. Микрореологические свойства эритроцитов вместе с вязкостью плазмы оказывают основное влияние на снижение транспортного потенциала крови у лиц с атеросклеротическими изменениями сосудистого русла.

4. Повышение деформируемости эритроцитов и снижение их агрегации при стимулировании аденилатциклазы и прямом повышении уровня цАМФ в клетках свидетельствовало о вовлечении этой внутриклеточной сигнальной системы в регуляцию микрореологических свойств эритроцитов.

5. Заметный позитивный эффект, полученный при снижении активности фосфодиэстераз в эритроцитах как селективными (винпоцетин и ро-липрам), так и неселективными (пентоксифиллин и изобутилметиксан-тин) ингибиторами, позволяет считать эти ферментные системы важным элементов регуляции микрореологических свойств эритроцитов.

6. Сравнение микрореологических эффектов, при активации протеин-киназ эритроцитов, позволило установить, что при стимулировании про-теинкиназы А происходит статистически достоверный и существенный прирост эластичности клеток, тогда как при активации протеинкиназы С эффект был заметно меньшим. Активация тирозиновых протеинкиназ тоже сочеталась с достоверным позитивным изменением деформируемости эритроцитов.

7. Регуляторная роль кальциевого сигнального пути заключается в том, что снижение поступления Са2+ в эритроциты, блокированием кальциевых каналов верапамилом или связыванием его в среде инкубации при помощи ЭГТА, сопровождалось достоверным увеличением деформируемости эритроцитов и снижением их агрегатообразования, тогда как повышение внутриклеточного Са2+ при помощи йонофора А23187 приводит к выраженному приросту агрегации эритроцитов и уменьшению их деформируемости.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Маймистова А.А., Муравьев А.В., Тихомирова И.А., Муравьёв А.А., Чучканов Ф.А. Сравнительная гемореологическая эффективность Трентала и его генеричсских копий // Журнал Клиническая фармакология итерация,- 2005,- Т. 14,-№5.- С. 1-4.

2. Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Булаева С.В., Викторова Е.А. Эндо - и паракринные сигнальные пути при изменении микрореологических свойств эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)».-Ярославль, 2007.-С. 144.

3. Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Муравьёв А.А., Баканова И.А., Зайцев Л.Г., Волков Ю.Н. Особенности микрореологических свойств эритроцитов, разделённых в градиенте плотности на молодые и старые клетки // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)».-Ярославль, 2007.-С. 145.

4. Маймистова А.А., Зубова Н.В., Замышляев А.В., Булаева С.В. Микрореологический эффект ингибирования фосфодиэстераз и блокирования Са 2+ каналов эритроцитов у больных сахарным диабетом 2 типа и атеросклерозом // Мат. международ», конф. «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)». - Ярославль, 2007. - С. 147.

5. Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Булаева С.В., Замышляев А.В. Анализ действия гормонов и их синтетических аналогов на микрореологические свойства эритроцитов // Регионарное кровообращение и микро-циркуляция.-2007.-Т.6.-.№2(22).- С.18-23 (Журнал включен в перечень рекомендованных ВАК РФ изданий).

6. Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Булаева С.В., Тихомирова И.А., Ройтман Е.В. Роль гормонов и простагландинов в изменениях микрореологических свойств эритроцитов человека /У Тромбоз, гемостаз а реология. - 2007. - №4.-С.47-52.

7. Maimistova А.А., Muravyov A.V. Bulaeva S.V., Chuchkanov F.A. Hemorheological efficiency of drugs, targeting on intracellular phosphodiesterase activity, in vitro study // J. Clinical Hemorheol. and. Microcirculation.-2007.- V. 36.-N4.- P.327-334 (Журнал включен в перечень рекомендованных ВАК РФ изданий).

8. Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Булаева С.В., Тихомирова И.А., Петроченко Е.П. Изменение микрореологических свойств эритроцитов с возрастом: роль Са 2+ // Регионарн. Кровообращение и микроциркуляция.-2007. - №4. - С. 34-41 (Журнал включен в перечень рекомендованных ВАК РФ изданий).

9. Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Булаева C.B., Викторова Е.А.Анализ механизмов изменения микрореологических свойств эритроцитов: in vitro исследование // Тез. Докл. V Всеросс. Конф. «Механизмы функционирования висцеральных систем». - Санкт-Петербург.-2007.-С. 213-214.

10. Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Булаева C.B., Чучканов Ф.А., Шинкаренко B.C. Роль фосфодиэстераз в изменении деформируемости эритроцитов // Мат.XX Съезда физиол. Общества им. И.П. Павлова. - М., 2007,-с. 163

11. Маймистова A.A., Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Булаева C.B. Сравнительный анализ роли Са2+ и циклического АМФ в изменениях деформируемости эритроцитов // Механизмы функционирования висцеральных систем,- СПБ, 2008.- С. 122-123.

12. Булаева C.B., Маймистова A.A. Роль микрореологических свойств эритроцитов в обеспечении транспорта фармакологических препаратов кровью // Тез. Докл. Всероссийской школы-семинара «Нанобио-технологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 9-11 декабря 2008 года).- Белгород: ИПЦ «ПОЛИТЕРРА», 2008. - С15-16.

13. Маймистова A.A. Сравнительный анализ гемореологической эффективности ингибирования в эритроцитах фосфодиэстераз (ФДЭ) и стимулирования аденилатциклазы (АЦ) в норме и патологии // Тез. докл. 4-й Всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии кровообращения.- М., 2008.- С. 55-56.

14. Maimistova A.A., Bulaeva S.V., Muravyov A.V. and Viktorova E.A. Endo- and paracrine signaling pathways under red cell microrheological changes П Biorheology.- 2008,- V.45.-Nl,2.- P.118 (Журнал включен в перечень рекомендованных ВАК РФ изданий).

15. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Тихомирова И.А. Анализ изменений деформируемости эритроцитов в норме и при патологии // Регионарное кровообращение и микроциркуляция.- 2008,- №4. - С.1-7 (Журнал включен в перечень рекомендованных ВАК РФ изданий).

16. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Тихомирова И.А. Исследование деформируемости эритроцитов в экспериментальной практике // Тромбоз. Гемостаз. Реология.- 2008.-№4.-С. 1-13

17. Маймистова A.A., Замышляев A.B., Муравьев. Гемореологиче-ский профиль в условиях нарушения сосудистого русла // Мат. междуна-родн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)».-Ярославль, 2009.-С.15.

18. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Булаева C.B. Роль тирозино-вых киназ, фосфатаз и аденилатциклазной системы в изменениях деформируемости эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)».-Ярославль, 2009.-С.54.

19. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Булаева C.B. Анализ участия протеинкиназы С и Ca24 в изменениях микрореологических свойств эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)».-Ярославль, 2009.-С.55.

20. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Булаева C.B., Тихомирова И.А., Викторова Е.А. Участие пуринергических рецепторов (тина P2Y13) в регуляции микрореологических свойств эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)».-Ярославль, 2009.-С.57.

21. Маймистова A.A., Булаева C.B., Замышляев A.B., Муравьев A.B., Стельмах А.10. Гемореологический профиль и перекисное окисление ли-пидов у лиц с церебральным атеросклерозом // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)». - Ярославль, 2009.-С.113.

22. Маймистова A.A., Муравьев A.B., Булаева C.B., Кошелев В.Б., Науменко Л.В. Микрореология эритроцитов: роль протеинкиназ в ее изменениях // Тромбоз. Гемостаз. Реология,- 2009.-№ 3._С. 28-33.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

Г|к1 - вязкость цельной крови при напряжении сдвига 1, 96 IT м~3

Пк2~~ вязкость цельной крови при напряжении сдвига 1, 96 Н-м"2

Пп - вязкость плазмы при напряжении сдвига 0,784 Н-м"2

г|с- вязкость суспензии эритроцитов при напряжении сдвига 1,96 Н-м"2

ДЭ - деформируемость эритроцитов

ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов

АЭ - агрегация эритроцитов

Г1А - показатель агрегации

Ч/А - число клеток в агрегате

ИИА - интегральный индекс агрегации

Hct -гематокрит

НЬ - гемоглобин

МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроците

Hct/)-]K¡ -показатель эффективности доставки кислорода кровью

Пкг/г|к1 - показатель неньютоновости крови

АЦ - аденилатциклаза

цАМФ- циклический алемозинмопофосфат

дБ-цАМФ - стабильный проникающий аналог цАМФ

ФДЭ - фосфодиэстераза

Г1КА - протеинкиназа А

ПКС - протеинкиназа С

Формат 60x91/16. Усл. печ. л. 1.2. Тираж 100 экз. Заказ № 5Q5" ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет имени К.Д. Ушинского» 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, д. 108

Типография ЯГПУ 1500006 Ярославль, Которосльная наб., 46 Тел.: (4852) 32-98-69,72-64-03

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Маймистова, Алла Альбертовна

ВВЕДНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Анализ роли реологических свойств крови в обеспечении ее транспортной функции.

1.1.1. Роль гематокрита.

1.1.2. Вязкость плазмы.

1.1.3. Агрегация эритроцитов.

1.1.4. Деформируемость эритроцитов.

1.2. Макро- и микрореологические свойства крови при центральных и периферических изменениях сосудистого русла.

Глава 2. ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика объекта исследования и организация наблюдений.

2.2. Методы исследования клеточных и молекулярных механизмов изменения микрореологических характеристик эритроцитов.

2.3. Методы регистрации реологических и биохимических показателей крови и плазмы.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Гемореологическая модель при нарушениях церебрального кровообращения

3.2. Гемореологическая модель при нарушениях периферического кровообращения

3.3. Изменения реологических свойств крови лиц с церебральными сосудистыми расстройствами при действии ингибиторов фосфодиэстераз - пен-токсифиллина и винпоцетина (эффект in vivo и in vitro).

3.4. Изменения реологических свойств крови лиц с периферическими сосудистыми расстройствами при действии ингибитора фосфодиэстераз — пентоксифиллина {in vitro исследование).

Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. ИЗУЧЕНИЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ИЗМЕНЕНИЯМИ МИКРОРЕОЛОГИИ ЭРИТРОЦИТОВ.

4.1. Роль аденилатциклазного сигнального пути в изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

4.2. Роль активации и ингибирования элементов кальциевого сигнального пути в изменениях микрореологии эритроцитов.

4.3. Роль активации и ингибирования киназных и фосфатазных каскадов в изменениях микрореологии эритроцитов.

Глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5.1. Модельные характеристики гемореологического профиля при нарушениях церебрального кровообращения.

5.2. Анализ модельных характеристик гемореологического профиля при изменениях периферического сосудистого русла.93 i

5.3. Анализ клеточных и молекулярных механизмов изменений микрорео- ! логии эритроцитов.98 •

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза"

Эффективность доставки кровью веществ и кислорода к клеткам зависит от двух групп факторов: сосудистых и реологических (Н. Schmid-Schonbein, 1982; J.F. Stoltz, 1995; A.R. Priers, T. Secomb, 2003). В микрососудах, особенно в капиллярах, стенки которых лишены сократительных элементов и вазомоторной иннервации (В.В. Куприянов и др., 1975; Г.И. Мчедлишвили, 1989; 1995), ведущую роль в тканевой перфузии играют реологические свойства крови и особенно микрореология эритроцитов (Н.Н. Фирсов, П.Х. Джанашия, 2004; J.F. Stoltz, 1995). По данным ряда авторов снижение деформируемости эритроцитов и их высокая агрегация могут являться ведущим звеном расстройств микроциркуляции (И.А. Соколова и др., 2005; O.K. Baskurt et al., 2007). Следовательно, проблема срочного и долговременного изменения микрореологических свойств эритроцитов при адаптации кровотока или компенсации сосудистых нарушений требует своего изучения. Для ее решения имеется ряд предпосылок. Несмотря на простоту конструкции, зрелые эритроциты сохранили многие элементы молекулярных сигнальных путей (D. Miles, W. Kolch 2000; G. Minetti et al., 2004), при активации которых могут изменяться их реологические свойства (S. Manno et al., 2005). Имеется ряд работ, в которых сообщается о том, что под влиянием внеклеточных сигнальных факторов изменяется микрореология эритроцитов (А.В. Муравьев и др., 2002; И.А. Тихомирова, 2005; J.F. Horga et al., 2000; F.A. Carvalho et al., 2006). Вместе с тем лишь отдельные-работы посвящены исследованию внутриклеточных сигнальных систем, связанных с микрореологическим поведением эритроцитов (Y. Zipser et al., 2002"; С. Saldanha et al., 2007). Кроме того, отсутствуют комплексные исследования всего вне—и внутриклеточного сигнального каскада и анализ вовлечения в регуляторный процесс разных внутриклеточных сигнальных путей.

Таким образом, отсутствие в литературе исчерпывающих данных о ре-гуляторных внутриклеточных механизмах изменения агрегации и деформации эритроцитов, а также важная роль этих микрореологических свойств в обеспечении транспорта вещества и энергии в системе микроциркуляции мотивировало проведение настоящего исследования. Кроме того, необходимо заметить, что элементы внутриклеточных сигнальных каскадов могут быть молекулярными мишенями, воздействие на которые может привести к коррекции негативно измененных реологических свойств эритроцитов и крови в целом. Для того чтобы лучше определить величину вклада микрореологических свойств эритроцитов в текучесть цельной крови и ее транспортный потенциал, был изучен комплекс реологических характеристик крови в условиях физиологической нормы и у лиц с нарушениями артериального сосудистого русла при церебральном склерозе и атеросклерозе сосудов нижних конечностей. Дефицит дилатации в этих условиях может быть либо компенсирован реологическими свойствами крови, или негативные изменения гемореологического профиля приведут к дальнейшей декомпенсации периферического кровообращения.

С учетом вышесказанного была сформулирована цель и основные задачи исследования.

Задачи исследования:

1. Изучить гемореологический профиль лиц в норме и при атероскле-ротических изменениях сосудистого русла:

2. Исследовать роль аденилатциклазной системы в изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

3. Изучить участие протеинкиназ в перестройках микрореологии эритроцитов.

Научная новизна исследования

Для решения поставленных в работе задач был разработан новый метод регистрации деформируемости эритроцитов на основе проточной микрокамеры и компьютерного анализа изображения клеток. Доказана высокая эффективность применения этого метода для экспериментальных и клинических исследований микрореологии эритроцитов. При анализе реологических характеристик крови в норме и у лиц с атеросклеротическими изменениями были получены новые данные об особенностях реологии крови в условиях дефицита сосудистого русла и о вкладе отдельных макро- и микрореологических характеристик в текучесть цельной крови и ее транспортный потенциал. Показана возможность срочного изменения микрореологии эритроцитов под влиянием однократного приема лекарственного препарата - ингибитора активности фосфодиэстераз. Впервые получен комплекс доказательств участия аденилатциклазной системы в регуляции микрореологических свойств эритроцитов. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что стимулирование протеинкиназы А дает больший позитивный микрореологический эффект, чем активация протеинкиназы С. Впервые установлено, что стимулирование тирозиновых протеин-киназ приводит к заметному повышению деформируемости эритроцитов. Новыми являются данные о том, что изменение уровня Са в эритроцитах существенным образом влияет на микрореологическое поведение эритроцитов, особенно на их агрегацию;

Теоретическая и практическая значимость" работы

При исследовании микрореологического поведения эритроцитов получены новые данные о внутриклеточных механизмах регуляции этих, присущих эритроцитам, клёточных свойств. Методы и подходы, разработанные для изучения регуляторных механизмов изменения микрореологии эритроцитов, могут быть применены и для исследования других типов клеток. В-частности разработанный в данном исследовании метод проточной микрокамеры с точно дозированным напряжением сдвига может быть применен для исследования механического нагружения лейкоцитов, клеток сосудистого эндотелия и опухолевых клеток. Определение внутриклеточных молекулярных мишеней, действие на которые сигнальными молекулами меняет реологическое поведение эритроцитов, может быть использовано при разработке новых лекарственных препаратов с целью коррекции негативно измененных реологических свойств эритроцитов. Материалы диссертации расширяют представления о факторах регуляции вязкости крови, а также механизмах изменения микрореологических свойств эритроцитов. Они могут быть использованы в лекционных курсах по физиологии крови и кровообращения для студентов биологических и медицинских факультетов вузов, для написания монографий и практических руководств, а также для организации и проведения дальнейших исследований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У лиц с атеросклеротическим поражением сосудистого русла имеется комплекс негативных гемореологических изменений по сравнению с данными лиц контроля. Эти изменения включают повышение вязкости крови и плазмы, прирост агрегации и ригидности эритроцитов.

2. Повышение активности аденилатцикггазный системы эритроцитов: 1) при прямом стимулировании аденилатциклазы форсколином, 2) введением в среду инкубации клеток стабильного аналога цАМФ, 3) ингибированием (в том.числе селективным) фосфодиэстераз эритроцитов — приводит к достоверному приросту их деформируемости и снижению агрегации клеток.

3. При стимулировании цАМФ-зависимой протеинкиназы А в эритроцитах наблюдается статистически'достоверное, и существенное повышение деформируемости эритроцитов и снижение их агрегации. Тогда как. стимулирование протеинкиназы С с помощью форболового эфира и кальциевого ионофора дает меньший микрореологический эффект. Активация тирози-новых протеинкиназ при помощи ванадата натрия, эритропоэтина и цисплатина сопровождается достоверным приростом деформируемости эритроцитов и меньшим изменением их агрегации.

4. Блокирование входа Са в эритроциты при помощи верапамила и его связывание в среде инкубации при помощи хелатора ЭГТА сопровождается достоверным увеличением деформируемости клеток и снижением их агрегации, тогда как повышение внутриклеточного Са2+ путем инкубации клеток с кальциевым ионофором (А23187) сочетается с выраженным приростом агрегации эритроцитов и некоторым снижением их деформируемости.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Маймистова, Алла Альбертовна

ВЫВОДЫ:

1. Значительный вклад, превышающий в среднем 40%, в повышение вязкости крови при высоких и низких скоростях сдвига у лиц с атеросклеро-тическими изменениями сосудистого русла вносят микрореологические свойства эритроцитов - деформируемость и агрегация.

2. Комплекс макрореологических изменений у лиц с атеросклеротиче-скими нарушениями сосудистого русла характеризовался более высокой вязкостью крови, обусловленной, главным образом, повышенной вязкостью плазмы.

5. Заметный позитивный эффект, полученный при снижении активности фосфодиэстераз в эритроцитах как селективными (винпоцетин и ролип-рам), так и неселективными (пентоксифиллин и изобутилметиксантин) ингибиторами, позволяет считать эти ферментные системы важным элементом регуляции микрореологических свойств эритроцитов.

6. Сравнение микрореологических эффектов при активации протеинки-наз эритроцитов позволило установить, что при стимулировании протеин-киназы А происходит статистически достоверный и существенный прирост эластичности клеток, тогда как при активации протеинкиназы С эффект был заметно меньшим. Активация тирозиновых протеинкиназ тоже сочеталась с достоверным позитивным изменением деформируемости эритроцитов.

7. Регуляторная роль кальциевого сигнального пути заключается в том, что снижение поступления Са2+ в эритроциты блокированием кальциевых каналов верапамилом или связыванием его в среде инкубации при помощи ЭГТА сопровождалось достоверным увеличением деформируемости эритроцитов и снижением их агрегатообразования, тогда как повышение внутриклеточного Са при помощи ионофора А23187 приводит к выраженному приросту агрегации эритроцитов и уменьшению их деформируемости.

Заключение

Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что у лиц с нарушениями сосудистого русла по типу атеросклероза гемореоло-гический профиль заметно отличается от соответствующих характеристик здоровых людей. Существенный вклад в прирост вязкости крови наряду с повышенной вязкостью плазмы вносят изменения микрореологии эритроцитов. При этом было установлено, что у лиц с атеросклерозом сосудов нижних конечностей вклад микрореологических параметров эритроцитов (агрегации и деформации) в вязкость цельной крови составлял в среднем 38%, тогда как у лиц с церебральными сосудистыми расстройствами он превышал 50%. Однократный прием лекарственного препарата, обладающего активностью в отношении фосфодиэстераз (винпоцетин), сопровождался позитивными изменениями микрореологических характеристик эритроцитов лиц с нарушениями сосудистого русла. Следовательно, можно заключить, что эритроциты могут срочно реагировать изменением своих свойств при. действии на их внутриклеточные молекулярные мишени.

Анализ механизмов изменения микрореологических характеристик эритроцитов показал, что проявление разной степени деформируемости клеток связано с активацией и ингибированием элементов вне- и внутриклеточных сигнальных путей. При этом регуляторные каскады могут включать не только кальциевый и аденилатциклазный сигнальные пути, но и хорошо представленную в зрелых эритроцитах человека систему тирози-новых протеинкиназ и фосфатаз. Экспериментальные данные позволяют предполагать, что аденилатциклазная система и кальциевый механизм регуляции могут быть в антагонистических отношениях при изменениях микрореологии эритроцитов. Полученные данные подтверждают мнение о том, что фосфорилирование и дефосфорилирование белков мембраны и цитоскелета эритроцитов способствует срочному изменению свойств мембраны: ее пластичности и стабильности, и это отражается на микрореологическом поведении клеток в целом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Маймистова, Алла Альбертовна, Ярославль

1. Блохина Т.А., Назаров С.Б., Чемоданов В.В. Роль плазменных факторов в регуляции реологических свойств эритроцитов человека // Мат. международн. конф. по гемореологии. Ярославль, 2001. - С. 60-61.

2. Блохина Т.А. Значение физико-химических и биологических свойств плазмы крови в регуляции реологических характеристик эритроцитов: Ав-тореф. дис. канд. биол. наук. — Ярославль, 2002. 16 с.

3. Викулов А.Д. Основы изменений реологических свойств крови у человека и животных при долговременной адаптации к мышечным нагрузкам: Автореф. дисс. докт. биол. наук. М., 1997. - 34 с.

4. Галенок В.А., Гостинская Е.В., Диккер В.Е. Гемореология при нарушениях углеводного обмена. Новосибирск: Наука, 1987. -258 с.

5. Герасимов Л.В., Мороз В.В., Исакова A.A. Влияние коллоидных плазмозаменителей на микрореологические свойства крови // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)». Ярославль, 2009. — С. 7.

6. Гринштейн В.Б., Назаров С.Б., Ромаренко И.А., Бурцев Е.М. Реоло-гичесие свойства эритроцитов у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения // Мат. международн. конф. по микроциркуляции. — Ярославль, 1999. С. 202-203.

7. Гущин А.Г., Чумаков A.A., Голубев В.В., Майнугин C.B., Виноградов И.Е. Синдром гипервязкости крови при заболеваниях сосудов нижних конечностей // Мат. международн. конф. по микроциркуляции. Ярославль, 1997.-С. 174-175.

8. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. -М.:Мир, 1991.-544 с.

9. Еремин H.H. Реологические свойства крови у лиц с разным уровнем артериального давления: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Ярославль, 2002. — 22 с.

10. Зайцев Л.Г. Комплексный анализ гемореологических профилей у мужчин и женщин при разных функциональных состояниях организма: Автореф. дисс. докт. биол. наук. Ярославль, 2000. — 30 с.

11. Замышляев A.B. Реологические свойства крови у больных системной крвсной волчанкой и системной склеродермией: Автореф. дисс. канд. биол. наук. — Ярославль, 2002. 22 с.

12. Захарова Н.Б., Буров Ю.А., Сырцов Д.А. Роль дисбаланса цитокинов в развитии гемореологических расстройств у больных с облитерирующим атеросклерозом сосудов нижних конечностей // Мат. международн. конф. по микроциркуляции. — Ярославль, 2005. — С. 48.

13. Зинчук В.В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты // Усп. физиол. наук. 2001. - Т. 32. - № 3. - С. 63-68.

14. Ивенс И., Скейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран. М.: Мир, 1982. - 304 с.

15. Кабанов A.B. Модификация гемореологического профиля у пациентов с артериальной гипертонией при терапии диуретиками: Автореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 2002.

16. Катюхин JI.H. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования // Физиол. журнал. 1995. - Т. 81. - № 6. — С. 122129.

17. Киричук В.Ф., Болотова Н.В., Николаева Н.В. Изменения микроцир-куляторного гомеостаза и реологии крови при сахарном диабете // Тромбоз, гемостаз и реология. 2004. - № 4. - С. 12-19.

18. Киричук В.Ф., Пономарева А.И. Гемореологические изменения у больных с патологией печени // Мат. международн. конф. «Гемореология вмикро- и макроциркуляции». Ярославль, 2005. - С. 25.

19. Козииец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. Клетки крови современные технологии их анализа. - М.: Триада-фарм, 2002. — 200 с.

20. Коробков A.B. Нормальная физиология. М.: Высшая школа, 1980. — 458 с.

21. Куницкая H.A., Шилкина Н.П. Системная красная волчанка: важные аспекты патогенеза нарушений реологических свойств крови И Мат. меж-дународн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». Ярославль, 2005.-С. 122.

22. Куприянов В.В., Караганов Я.Л., Козлов В.И. Микроциркуляторное русло. М.: Медицина, 1975. - 216 с.

23. Левин Г.Я. Нарушения гемостаза и ДВС-синдром в острый период ожоговой болезни // Тромбоз, гемостаз и реология. 2004, № 4. - С. 55-62

24. Левин C.B. Структурные изменения клеточных мембран. Ленинград: Наука, 1976.- 198 с.

25. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х.,Реология крови. М.: Медицина, 1982.-272 с.

26. Люсов В.А., Белоусов Ю.Б., Савенков М.П. Состояние гемостаза и реологии крови при застойной недостаточности кровообращения // Кардиология. 1979, № 4. - С. 86-89.

27. Манухин Б.Н. Физиология адренорецепторов. Л.: Наука, 1968. -234 с.

28. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Часть I. — М.: Медицина. -1993.-736 с.

29. Мельников- A.A., Викулов А.Д., Хатаназейская И:А. Взаимосвязь реологических свойств крови с общей фзической работоспособностью // Мат. международн. конф. по микроциркуляции. Ярославль, 1999. — С. 226-227.

30. Мельников A.A. Комплексный анализ факторов, взаимосвязанных с реологическими свойствами крови у спортсменов // Автореф. дисс.докт.биол. наук. Ярославль, 2004. - 46 с.

31. Механика кровообращения / К. Каро, Т. Педли, Р. Шротер, У. Сид. -М.: Мир, 1981.-623 с.

32. Муравьев A.B. Морфофункциональные основы изменений микрососудистого русла, реологических свойств крови и транспорта кислорода при адаптации к мышечным нагрузкам: Автореф. дисс. докт. биол. наук. -М., 1993.-37 с.

33. Муравьев A.B., Якусевич. В.В., Зайцев Л.Г., Сироткина A.M., Муравьев A.A. Гемореологические профили пациентов с артериальной гипер-тензией в сочетании с синдромом гипервязкости // Физиология человека. — 1998, №4.-С. 113-117.

34. Муравьев A.A. Гемореологические профили при физической активности и повышенном артериальном давлении: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Ярославль, 1999. — 21 с.

35. Муравьев A.B., Шинкаренко B.C., Баканова И.А. Реологические механизмы, обеспечивающие эффективность транспорта кислорода кровью // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. - № 4. - С. 34-37.

36. Муравьев A.B., Тихомирова И.А., Борисов Д.В. Анализ влияния плазменных и клеточных факторов на агрегацию эритроцитов разных возрастных популяций // Физиология человека. 2002, № 4. - С. 144-148.

37. Муравьев A.B., Зайцев Л.Г., Муравьев A.A., Бурухин С.Ф., Чопоров C.B., Баканова И.А. Оптимальный гематокрит в норме и патологии // Мат. Междунар. Конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». — Ярославль, 2005. —С. 17.

38. Муравьев A.B., Якусевич В.В., Муравьев A.B., Борисов Д.А., Волков Ю.Н. Реологические свойства крови у лиц с артериальной гипо- и гипертонией // Мат. международн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». -Ярославль, 2005. С. 233.

39. Муравьев, A.B., Чепоров C.B. Гемореололгия (экспериментальные и клинические аспекты реологии крови). Ярославль, 2009. - 178 с.

40. Мчедлишвили Г.И. Функция сосудистых механизмов головного мозга, их роль в регулировании и в патологии мозгового кровообращения. — Д.: Наука, 1968.- 100 с.

41. Мчедлишвили Г.И. Микроциркуляция крови. Л., 1989. - 290 с.

42. Мчедлишвили Г.И. Концепция структурирования кровотока в микрососудах // Физиологический журнал СССР. 1995, № 6 - С. 48-53.

43. Орлов С.Н., Покудин Н.И., Постнов Ю.В. Транспорт кальция в эритроцитах, нагруженных высокоселективным хелатором Са2+. Характеристики, связанные с первичной гипертензией // Кардиология. 1986. - Т. 26, № 11.-С. 90-96.

44. Орлов С.Н., Новиков, К.Н. Регуляция объема клеток: механизмы, сопряженные клеточные реакции и патофизиологическое значение // Росс, физиол. журнал им. И.М. Сеченова. 1996. - Т. 82, № 8-9. - С. 1-15.

45. Постнов Ю.В. О мембранной концепции первичной артериальной гипертонии (к развитию представлений о природе гипертонической болезни) // Кардиология. 1985. - № 10. - С. 63-71.

46. Постнов Ю.В., Орлов С.Н. Первичная гипертензия как патология клеточных мембран. М.: Медицина, 1987. - 192 с.

47. Санников А.Г., Бродер И.А. Сторожок С.А. // Научн. Вестн. Тюм. ГУ. 1997. - № 2. - С. 36-41.

48. Санников А.Г., Сторожок С.А. // Материалы 3 съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск. 1997.

49. Селезнев С.А., Назаренко Г.И., Зайцев B.C. Клинические аспекты микрогемоциркуляции. -М.: Медицина, 1985. 179 с.

50. Симонов В.А., Якусевич В.В., Кабанов A.B., Петроченко A.C. Гемо-реологические изменения у пациентов с тяжелой сердечной недостаточностью // Мат. международн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». -Ярославль, 2005. С. 49.

51. Смирнов И.Ю. Влияние агрегационно-электростатического взаимодействий между эритроцитами на структуру потока крови в микрососудах // Мат. международн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». — Ярославль, 2005. — С. 37.

52. Сторожок С.А., Санников А.Г., Белкин A.B. Зависимость стабильности деформабельности мембран эритроцитов от межмолекулярных взаимодействий белков цитоскелета. Тюмень: «Изд-во ТюмГУ», 1997. - Т. 3 -С. 140.

53. Сторожок С.А., Санников А.Г., Захаров Ю.М. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства. — Тюмень: «Изд-во ТюмГУ», 1997.-С. 152.

54. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринная система. М.: Мир, 1989. - 656 с.

55. Тихомирова И.А. Роль экстрацеллюлярных мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов // Автореф. дисс. .докт. биол. наук. Ярославль, 2005. — 40 с.

56. Ткачук В.А. Введение в молекулярную эндокринологию. — М.: Изд-во МГУ, 1983.-256 с.

57. Ткачук В.А. Гормональная регуляция транспорта Са2+ в клетках крови и сосудов // Рос. физиол. журнал им. И.М Сеченова. 1998. - Т. 84. -№ 10.-С. 1006-1018.

58. Уилкинсон У.Л. Неныотоновские жидкости. М.: Мир, 1964. - 216 с.

59. Фаллер Д., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М.: БИНОМ-Пресс, 2003.-272 с.

60. Фирсов H.H. Реологические свойства крови и патология сердечнососудистой системы // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002, № 2. - С. 2632.

61. Фирсов H.H., Джанашия П.Х. Введение в экспериментальную и клиническую гемореологию. М.: ГОУ ВПО, 2004. - 258 с.

62. Фолков Б., Нил Э. Кровообращение. М.: Медицина, 1976. - 462 с.

63. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитар-ных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. — 214 с.

64. Чернух А.М., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. -М.: Медицина, 1975. 455 с.

65. Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Влияние внутриклеточного АТФ на Ьа3+-индуцированную агрегацию и слияние эритроцитов // Биофизика. 2002. - Т. 47. - № 2. - С. 300-303.

66. Широкова Л.Ю., Широкова Т.Ю., Долгова Л.Н. Динамика вязкостных свойств эритроцитов при комплексной антиоксидантной терапии ревматоидного артрита // Мат. международн. конф. по микроциркуляции. — Ярославль, 1997.-С. 210-211.

67. Эккерт Р., Рэнделл Д., Огастин Дж. Физиология животных. Т. 1. — М.: Мир, 1992.-267 с.

68. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М.: изд. РАМН, 2000. - 372 с.

69. Якусевич В.В. Макро- и микрогемореологические нарушения при эс-сенциальной артериальной гипертонии и их модификация под действием основных классов антигипертензивных средств // Автореф. дисс.докт. биол. наук. М., 2000. - 36 с.

70. Ajmani R. Hypertension and hemorheology // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1997. - Vol. 17. - P. 397-420.

71. Allen I., Rasmussen H. Human red blood cells: Prostaglandin E2, epinephrine and isoproterenol alter deformability // Science. 1971. - Vol. 144. -P. 512-516.

72. Allen I., Rasmussen H. Some effects of vasoactive hormones on the mammalian red blood cell / In: Prostagladins in Cellular Biology. New York, 1972.-P. 27-40,

73. Alonso C., Pries A.R., Gaehtgens P. Red blood cell aggregation and its effect on blood flow in the microcirculation // Hemorheologie et agregation erythrocytaire. 1994. - Vol. 4. - P. 119-124.

74. An X., Liu S., Debnath G., Guo X. Identification and functional characterization of protein 4.1R and actin-binding sites in erythrocyte beta spectrin: regulation of the interactions by phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate

75. Biochemistry. 2005. - Vol. 44. - P. 10681-10688.

76. Anderson J.P., Morrow J.S. The interaction of calmodulin with human erythrocyte spectrin. Inhibition of protein 4.1-stimulated actin binding // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 6365-6372.

77. Andrews D.A., Lu Yang, Low P.S. Phorbol ester stimulates a protein kinase C-mediated agatoxin-TK-sensitive calcium permeability pathway in human red blood cells // Blood. 2002. - Vol. 100, N 9. - P. 3392-3399.

78. Anong W.A., Weis T.L., Low P.S. Rate of rupture and reattachment of the band 3-ankyrin bridge on the human erythrocyte membrane // Biol. Chem. -2006. Vol. 281.-P. 22360-22366.

79. Anong W.A., Franco T., Chu H., Weis T.L., Devlin E.E., Bodine D.M., An X., Mohandas N., Low P.S. Adducin forms a bridge between the erythrocyte membrane and its cytoskeleton and regulates membrane cohesion // Blood. -2009.-Vol. 114.-P. 1904-1912.

80. Arduini A., Rossi M., Mancinelli G. Effect of L-carnitine and acetyl-L-carnitine on the human erythrocyte membrane stability and deformability // Life Sci.- 1990.-Vol. 47.-P. 2395-2400. .

81. Artmann G.M. Microscopic photometric quantification of stiffness and relaxation time of red blood cells in a flow chamber // Biorheology. 1995. — Vol. 32.-P. 553-570.

82. Aydogan S., Yapislar H., Artis S., Aydogan B. Impaired erythrocytes deformability in H202-induced oxidative stress: Protective effect of L-carnosine // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 39, N 1-4. - P. 93-98.

83. Babu N., Singh M. Influence of hyperglycemia on aggregation, deformability and shape parameters of erythrocytes // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2004. - Vol. 31, N 4. - P. 273-280.

84. Baciu I., Ivanof L., Pavel T. Erythropoietin binding to the red cell membranes // Physiologie. 1985. - Vol. 22. - P. 227-231.

85. Baines A.J. Evolution of spectrin function in cytoskeletal and membrane networks // Biochem. Soc. Trans. 2009. - Vol. 37. - P. 796-803.

86. Baskurt O.K., Meiselman H.J. Cellular determinants of low shear blood viscosity // Biorheology. 1997. - Vol. 34, N 4-5. - P. 375-376.

87. Baskurt O.K., Temiz A., Meiselman H.J. Effect of superoxide anions on red blood cell rheologic properties // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 24, N 1,-P. 102-110.

88. Baskurt O.K., Meiselman H.J. Blood rheology and hemodynamics // Semin. Thromb. Hemost. 2003. - Vol. 29, N 5. - P. 435-450.

89. Baskurt O.K., Yalcin O., Meiselman H.J. Hemorheology and vascular control Hemorheology and vascular control mechanisms // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2004. - Vol. 30.-P. 169-178.

90. Baskurt O.K., Yalcin O., Ozdem S. Modulation of endothelial nitric oxide synthase expression by red-blood cell aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 286. - H222-H228.

91. Baskurt O.K., Yalcin O., Gungor F., Meiselman H.J. Hemorheological parameters as determinants of myocardial tissue hematocrit values // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 35, N 1-2! - P. 45-50i

92. Baskurt O.K., Hardeman M.R., Rampling M.W., Meiselman H:J. Handbook of hemorheology and hemodynamics, IOS Press. 2007. - 455 p.

93. Baskurt O.K. In vivo correlates of altered blood rheology // Biorheology. -2008.-Vol. 45.-P. 629-638.

94. Baumler I., Donath E., Neu B., Kiesewetter H. Basic mechanisms of RBC aggregation models and experimental results // Biorheology. - 1999, N 36. -P. 63-64.

95. Baumler H., Neu B., Mitlohner R. Electrophoretic and aggregation behavior of bovine, horse and human red blood cells in plasma and polymer solutions // Biorheology. 2001. - Vol. 38, N 1. - P. 39-51.

96. Ben-Ami R., Barshtein G., Mardi T. A synergistic effect of albumin and fibrinogen on immunoglobulin-induced red blood cell aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Vol. 285. - H2663-H2669.

97. Berga L., Dolz J., Vieves-Corrons L. Viscometric methods for assessing red cell deformability and fragmentation // Biorheology. 1984. - Vol. 21. - P. 297-301.

98. Betz T., Lenz M., Joanny J.F., Sykes C. ATP-dependent mechanics of red blood cells // Proc. Natl. Acad Sci. 2009. - Vol. 106, N 36. - P. 15320-1535.

99. Bishop J.J., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Effect of aggregation and shear rate on the dispersion of red blood cells flowing in venules // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. - Vol. 283. - H1985-H1996.

100. Bit R.A. Potent and highly selective bisindolylmaleimides by conformational restriction // J. Med Chem. 1993. - Vol. 36. - P. 21-29.

101. Bobrowska-Hagerstrand M., Hagerstrand H., Iglic A. Membrane skeleton and red blood cell vesiculation at low pH // Biochim. Biophys. Acta. 1998. -Vol. 1371.-P. 123-128.

102. Bogle R.G., Coade S.B., Moncada S. Bradykinin and ATP stimulate arginine uptake and nitric oxide release in vascular endothelial cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - Vol. 180: - P. 926-932.

103. Bohler T., Wagner S., Seiberth V. Blood rheology and retinopathy in premature infants with veiy low birth weight // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995.-Vol. 15, N3.-P. 305-309.

104. Boisseau M.R., Roudaut M.F., Taccoen A. Red1 cell aggregation and microcirculation // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995. - Vol. 15. - P. 428.

105. Boivin P., Garbarz M., Dhermy D., Galand C. In vitro phosphorylation of the red blood cell cytoskeleton complex by cyclic AMP-dependent protein kinase from erythrocyte membrane // Biochim. Biophys. Acta. 1981. — Vol. 21.-P. 1-6.

106. Boivin P. Role of the phosphorylation of red blood cell membrane proteins // Biochem. J. 1988. - Vol. 256. - P. 689-695.

107. Bolokadze N., Lobjanidze I., Momtselidze. Blood rheological properties and lipid peroxidation in cerebral and systemic circulation of neurocritical patients // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2004. - Vol. 30, N 2. - P. 99-105.

108. Boogaerts M.A., Roelant C., Temmerman J. Effect of beta-blocking drugs on red cell adhesive and rheological properties // J. Lab. Clin. Med. — 1983. — Vol. 102, N6.-P. 899-908.

109. Bordin L., Fiore C., Bragadin M., Brunati A.M., Clari G. Regulation of membrane band 3 Tyr-phosphorylation by proteolysis of p72(Syk) and possible involvement in senescence process // Acta Biochim. Biophys. 2009. — Vol. 41, N 10.-P. 846-851.

110. Bosman J., Tangelder G.J., Egbrink M.G., Reneman R.S., Slaaf D.W. The influence of adenosine on red blood cell flow cessation in skeletal muscle // Int. J. Microcirc. Clin. Exp. 1996. - Vol. 16, N 2. - P. 74-81.

111. Bowers A.S., Pepple D.J., Reid H.L. Oxygen delivery index in subjects with normal haemoglobin (HbAA), sickle cell trait (HbAS) and homozygous sickle cell disease // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 40, N 4. -P. 303-309.

112. Bradley A.J., Murad K.L., Regan K.L., Scott M.D. Biophysical consequences of linker chemistry and .polymer size on stealth erythrocytes: size does matter // Biochim. Biophys. Acta Biomembranes. - 2002. - Vol. 1561. -N2.-P. 147-158.

113. Bransky A., Korin N., Nemirovski Y., Dinnar U. Correlation between erythrocytes deformability and size: a study using a microchannel based cell analyzer // Microvasc. Res. 2007. - Vol. 73, N 1. - P. 7-13.

114. Brooks D.E. Mechanism of red cell aggregation / Red blood cell, rheology and aging. D. Piatt editor. Springer Verlag. Berlin, 1988. - P. 158-162.

115. Brooks D.E., Goodwin J.W., Seaman G.V. Interactions among erythrocytes under shear // Appl. Phys. 1970. - Vol. 28. - P. 172-177.

116. Brun J.F., Khaled S., Raynaud E., Bouix D., Micallef J.P. and Orsetti A.The triphasic effects of exercise on blood rheology: which relevans to physiology and pathophysiology // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1998. -Vol. 18.-P. 104-109.

117. Brun J.F., Micallef J.F., Supparo I. Maximal oxygen uptake and lactate thresholds during exercise are related to blood viscosity and erythrocyte aggregation in professional football players // Clin. Hemorheol. and Microcirc. -1995,N2.-P. 201-212.

118. Buchwald H., O'Dea T.J., Menchaca H.J., Michalek V.N., Rohde T.D. Effect of plasma cholesterol on red blood cell oxygen transport // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2000. - Vol. 27, N 12. - P. 951-955.

119. Busch C.J., Liu H., Graveline A.R., Bloch K.D. Nitric oxide induces phosphodiesterase 4B expression in rat pulmonary artery smooth muscle cells // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2006. - Vol. 290. - L747-L753.

120. Cabel M., Meiselman H.J., Popel A.S., Johnson P.C. Contribution of red blood cell aggregation to venous vascular resistance in skeletal muscle // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 272. - HI 020-1032.

121. Cabrales M., Tsai A.G. Plasma viscosity regulates systemic and microvascular perfusion during extreme anemic conditions // Am. J. Physiol. -2006. Vol. 291. - H2445-H2452.

122. Carvalho F.A., Almeida J.P., Freitas-Santos T., Saldanha C. Modulation of erythrocyte acetylcholinesterase activity and its association with G proteinband 3 interactions 11 J. Membr. Biol. 2009. - Vol. 228, N 2. - P. 89-97.

123. Carvalho F.A., Maria A.V., Bras Nougueira J.M., Guerra J., Martins-Silva J., Saldanha C. The relation between the erythrocyte nitric oxide and hemorheological parameters // Clin. Hemorheol. and Microcirc. — 2006. Vol. 35.-P. 341-347.

124. Chabanel A., Samama M. Evaluation of a method to assess red blood cell aggregation // Biorheology. 1989. - Vol. 26. - P. 785-797.

125. Charansonney O., Mouren S., Dufaux S. Red blood cell aggregation and blood viscosity in an isolated heart preparation // Biorheology. 1993. - Vol. 30.-P. 75-84

126. Charm S.E., Kurland G.S. Blood flow and microcirculation // John Wiley and Sons LTD. New York- Toronto, 1974. - 243 p.

127. Chien S., Jan K.M. Red cell aggregation by macromolecules: roles of surface absorption and electrostatic repulsion // J. Supramol. Stuct. 1973. -Vol.-P. 385-409.

128. Chien S., Jan K.M. Ultrastructural basis of the mechanism of rouleax formation // Microvasc. Res. 1973. - Vol. 5. - P. 155-166.

129. Chien S. Rheology of sickle cells and erythrocyte content // Blood Cells. -1977, N2.-P. 283-303.

130. Chien S. Rheology in the microcirculation in normal and low flow states // Adv. Shock Res. 1982. - Vol: 8. - P. 71-80.

131. Chunyi W., Yanjun Z., Weibo K. The influence of calcium ions and ionophore A23187 on microrheological characteristics of erythrocytes by new model ektacytometry // Clin. Hemorheol. and Microcirc. — 2001. — Vol. 24. — N l.-P. 19-23.

132. Cicco G., Carbonara M.C., Stingi G.D., Pirrelli A. Cytosolic calcium and hemorheological patterns during arterial hypertension // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2001. - Vol. 24, N 1. - P. 25-31.

133. Cicha I., Suzuki Y., Tateishi N., Maeda N. Changes of RBC aggregation in oxygenation-deoxygenation: pH dependency and cell morphology // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Vol. 284, N 6. - H2335-H2342.

134. Ciuffetti G., Sokola E., Lombardini R., Pasqualini L, Pirro M, Mannarino E. The influence of iloprost on blood rheology and tissue perfusion in patients with intermittent claudication // Kardiol. Pol. 2003. - Vol. 59. - P. 197-204.

135. Cohen C.M., Foley S.F. The role of band 4.1 in the association of actin with eiythrocyte membranes // Biochim Biophys Acta. 1982. Vol. 688. — P. 691-701.

136. Cohen C. M., Gascard P. Regulation and post-translational modification of erythrocyte membrane and membrane-skeletal proteins // Semin. Hematol. -1992. Vol. 29. - P. 244-292.

137. Cokelet G.B., Meiselman H.J. Rheological comparison of hemoglobin solutions and erythrocyte suspensions // Science. 1968. - Vol. 162. - P. 275277.

138. Cokelet G.B. Macroscopic rheology and tube of human blood // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1976. - Vol. l.-P. 9-14.

139. Connes P., Caillaud C., Py G., Mercier J., Hue O., Brun J. Maximal exercise and lactate do not change red blood cell aggregation in well trained athletes // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2007 - Vol. 36, N 4. - P. 319-326.

140. Copley A.L. Apparent viscosity and wall adherence of blood systems. Flow properties of blood and other biological systems. London: Pergamin Press, 1960.-P. 97-117.

141. Corry W.D., Jackson L.J., Seaman G.V. Action of hydroxyethyl starch on the flow properties of human erythrocyte suspensions // Biorheology. 1983. — Vol. 20, N5.-P. 705-717.

142. Creighton J.R., Asada N., Cooper D.M. F., Steven T. Coordinate regulation of membrane cAMP by Ca~ -inhibited adenylyl cyclase and phosphodiesterase activities // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2003. -Vol. 284. -L100-L107.

143. Cummings D.M., Ballas S.K., Ellison M.J. Lack of effect of pentoxifylline on red- blood cell defonnability // J. Clin. Pharmacol. 1992. -Vol. 32.-P. 1050-1053.

144. Datta-Roy A., Ray T.R., Sinha A.K. Control of erythrocyte membrane microviscosity by insulin // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - Vol. 44, N 1. - P. 187-190.

145. Dawson D.L., Zheng Q., Worthy S.A., Charles B., Bradley D.V.Jr. Failure of pentoxifylline or cilostazol to improve blood and plasma viscosity, fibrinogen, and erythrocyte deformability in claudication // Angiology. — 2002. — Vol. 53.-P. 509-520.

146. Delamaire M., Durand F., Pinel J.F., GofFM.C., Chauvel P., Beauplet A. Importance of erythrocyte aggregation phenomena in cerebrovascular accidents. // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995. - Vol. 15, N 3. - P. 430.

147. Derganc J., Bozic B., Svetina S., Zeks. Equilibrium shapes of erythrocytes in rouleaux formation // Biophys. J. 2003. - Vol. 84. - P. 1486-1492.

148. Dikmenoglu N., Ileri E., Seringec N., Ercil D. Melatonin prevents lipid peroxidation in human erythrocytes but augments deterioration of deformabilityafter in vitro oxidative stress // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 40, N3.-P. 235-242.

149. Dintenfass L. Consideration on the internal viscosity of red cells and its effect on the viscosity of whole blood // Angiology. 1962. - Vol. 13, N 5. - P. 333-344.

150. Dintenfass L. Some rheological factors in the pathogenesis of thrombosis // Lancet. 1965, N 2. - P. 370-372.

151. Dintenfass L. The role of ABO blood groups in blood rheology of cardiovascular disorders // Angiology. 1973. - Vol. 24, N 7. - P. 442-453.

152. Dintenfass L., Milton G.W. Blood viscosity factors and prognosis in malignant melanoma. Effect of ABO blood groups // Med. J. Aust. 1973. -Vol. 2, N22.-P. 1091-1095.

153. Dintenfass L. Blood rheology as diagnostic and predictive tool in cardiovascular diseases. Effect of ABO blood groups // Angiology. 1974. -Vol. 25, N6.-P. 365-372.

154. Dintenfass L. Red cell aggregation in cardiovascular diseases and crucial role of inversion phenomenon // Angiology. 1985. - Vol. 36. - P. 315-326.

155. Dormandy J.A. Medical and engineering problems of blood viscosity // Biomed. Eng. 1974, N 7. - P. 284-291.

156. Dormandy J.A., Loh A., Ray S., Taylor R.S. The clinical problem and overall concept of microcirculatory changes in critical leg ischaemia // Int. J. Microcirc: Clin. Exp. Suppl. 1992. - P. 9.

157. Doyle M.P., Galey W.R., Walker B.R. Reduced erythrocyte deformability alters pulmonary hemodynamics // J. Appl. Physiol. 1989. - Vol. 67, N 6. - P. 2593-2599.

158. Drissen G., Heidtman H., Schmid-Schonbein H. Reaction of erythrocyte velocity in capillaries upon reduction of hematocrit value // Bioreology. 1979. -Vol. 16.-P. 125-126.

159. Drochon A., Barthes-Biesel D., Lacombe C., Lelievre J.C. Determination of the red blood cell apparent membrane elastic modulus from viscometric measurements // J. Biomech. Eng. 1990. - Vol. 112, N 3. - P. 241-249.

160. Dupuy-Fons C., Brun J.F., Quere I., Bardet L., Janbon C. Rheology and occlusive arterial disease of legs // J. Mai. Vase. 1996. - Vol. 21, N 3. - P. 165— 170.

161. Durussel J.J., Berthault M.F., Guiffant G., Dufaux J. Effects of red blood cell hyperaggregation on the rat microcirculation blood flow // Acta Physiol. Scand. 1998. - Vol. 163. - P. 25-32.

162. Eder P.S., Soong C.J., Tao M. Phosphorylation reduces the affinity of protein 4.1 for spectrin // Biochemistry. 1986. - Vol. 25. - P. 1764-1770.

163. Ehrly A.M. Red blood cell aggregation and oxygen supply in peripheral vascular disease // Hemorheologie et aggregation erythrocytaire. — 1994. Vol. 4.-P. 143-144.

164. Ehrly A.M., Bauersachs R. Role of erythrocyte aggregation in the pathophysiology of vascular diseases // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995. -Vol. 15, N3.-P. 429.

165. Elishkevitz K., Fusman R., Koffler M. Rheological determinants of red blood cell aggregation in diabetic patients in relation to their metabolic control // Diabet. Med. 2002. - Vol. 19. - N 2. - P. 152-156.

166. Erdely A., Kepka-Lenhart D., Clark M. Inhibition of phosphodiesterase 4 amplifies cytokine-dependent induction of arginase in macrophages // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2006. - Vol. 290. - L534-L539.

167. Erdem T.Y., Ercan M., Ugurlu S., Balci H., Acbay O., Gundogdu* S. Plasma viscosity, an early cardiovascular risk factor in women with, subclinical' hypothyroidism // Clin. Hemorheol: and Microcirc. 2008. - Vol. 38, N 4: - P. 219-225.

168. Ernst E. Changes in blood rheology produced by exercise // J. Am. Med. Ass. 1985. - Vol. 253. - P. 2962-2972.

169. Ernst E., Matrai A. Blood rheology in athlets // J. Sports Med. and Phus. Fitness. 1985, N 4 - P. 207-212.

170. Erusalimsky J.D., Balas N., Milner Y. Possible identity of a membrane-bound with a soluble cyclic AMP-independent erythrocyte protein kinase that phosphorylates spectrin // Acta Biochim. Biophys. 1983. - Vol. 756. - P. 171— 181.

171. Evans E., Hochmuth R. A solid-liquid composite model of the red cell membrane // Membr. Biol. 1977. - Vol. 30. - P. 351-358.

172. Evans J., Gratzer W., Mohandas N., Parker K., Sleep J. Fluctuations of the red blood cell membrane: relation to mechanical properties and lack of ATP dependence // Biophys. J. 2008. - Vol. 94, N 10. - P. 4134-4144.

173. Fahraeus R. The viscosity of the blood in narrow capillary tubes // Am. J. Physiol. 1931. - Vol. 96. - P. 562.

174. Fisher M. Injuries to the vascular endothelium: vascular wall and endothelial dysfunction // Rev. Neurol. Dis. 2008. - Vol. 5. - P. 4-11.

175. Fonay K., Zambo K., Radnai B. Effect of high blood viscosity of pulmonary circulation: data of optimal hematocrit in' patients with hypoxic secondary polycythamia // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995, N 3. - P. 152-158.

176. Frenette P.S., Atweh G.F. Sickle cell disease: old discoveries, new concepts and future promise // J. Clin. Invest. 2007. - Vol. 117. - P. 850-858.

177. Fricke K., Wirthensohn K., Laxhuber R., Sackmann E. Flicker spectroscopy of erythrocytes. A sensitive method to study subtle changes of membrane bending stiffness // Eur. Biophys. J 1986. - Vol. 14 N 2. - P. 67-81.

178. Gaehtgens P. Blood rheology and blood flow in the circulation current knowledge and concepts // Rev. Port. Hemorreol. - 1987. - Suppl.l. - P. 5-16.

179. Gaehtgens P. Psysiological relevance of RBC aggregation the "con" view // Biorheology. 1995. - Vol. 32. - P. 105-106.

180. Gedde M.M., Yang E. Resolution of the paradox of red cell shape changes in low and high pH // Biochim. Biophys. Acta. 1999.- Vol. 1417.- P.245-253.

181. Goldstone J., Schmid-Schonbein H., Wells R. The rheology of red cell Aggregates // Microvasc.Res.-1970.-Vol.2 P.273-286.

182. Hakim T.S., Macek A.S. Effect of hypoxia on erythrocyte deformability in different species // Biorheology. 1988. - Vol. 25, - P. 857-868.

183. Hakim T.S. Effect of erythrocyte heat treatment on pulmonary vascular resistance // Microvasc. Res. 1994. - Vol. 48. - P. 13-25.

184. Heilmann L., Siekmann U. Effect of metoprolol on the flow properties of blood // Arzneimittelforschung. 1984. - Vol. 34, N 3. - P. 298-302.

185. Hilario S., Saldanha C., Martin-a-Silva J. The effect of adrenaline upon human erythrocyte properties. Sex-related differences? // Biorheology. 1999. -Vol. 36,N1-2.-P. 124.

186. Hines P., Zen Q., Burney S. Novel epinephrine and cyclic AMP-mediated activation of BCAM/Lu-dependent sickle (SS) RBC adhesion // Blood. 2003. -Vol. 101.- P. 3281-3286.«

187. Janzen J., Elliott T.G., Carter C.J., Brooks D.E. Detection of red cell aggregation by low shear rate viscometry in whole blood with elevated plasma viscosity // Biorheology. 2000. - Vol. 37. - P. 225-237.

188. Jasso I., Landi A., Dinya E. Orv. Hetil. Risk status of patients with peripheral arterial disease (PAD). 2007. - Vol. 148, N 52. - P. 2469-2476.

189. Jentoft N. Why are proteins O-glycosylated? // Trends Biochem. Sci. -1990, N 15.-P. 291-294.

190. Johnson P., Cabel M., Popel A. Venous resistance and red cell aggregation // Abst. Microcirculatory Soc. 41st Annu. Conf. Anaheim, California. - 1994. - P. 82-83.

191. Johnson P.C. The importance of red blood cell aggregation in vivo the "pro" view // Biorheology. - 1995. - Vol. 32. -N 2-3. - P. 105-106.

192. Kang E.S., Ford K., Grokulsky G., Wang Y.B., Chiang T.M., Acchiardo S.R. Normal circulating adult human red blood cells contain inactive NOS proteins // J. Lab. Clin. Med. 2000. - Vol. 135, N 6. - P. 444-451.

193. Kaul D.K., Fabry M.E. In vivo studies of sickle red blood cells // Microcirculation. 2004. - Vol. 11. - P. 153-165.

194. Kesmarky G., Feher G., Koltai K., Horvath B., Toth K. Viscosity, hemostasis and inflammation in atherosclerotic heart diseases // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 35, N 1-2. - P. 67-73.

195. Kesmarky G., Kenyeres P., Rabai M., Toth K. Plasma viscosity: A forgotten variable // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 39, N 1-4.- P. 243-246.

196. Kikuchi Y., Koyama T. Effects of Na+ and K+ on protein adsorption on red blood cell surface // Am. J. Physiol. 1984. - Vol. 247, N 5. - H748-753.

197. Kim S.J., Kang H.S., Kang M.S. a 1-Agonists-induced Mg2+ efflux is related to MAP kinase activation in the heart // Biochem. Biophys. Res. Comm.- 2005. Vol. 333, N 4. - P. 1132-1138.

198. Kim S., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Aggregate formation of erythrocytes in postcapillary venules // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2005. Vol. 288. - H584-H590.

199. Kim S., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Effect of erythrocyte aggregation at normal human levels on functional capillary density in rat spinotrapezius muscle // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. - Vol. 290, N3. -H941-947.

200. Kirkuchi Y., Horimoto M., Koyama T. Reduced deformability of erythrocytes exposed to hypercaphia//Experientia— 1979—Vol. 35.-P.343-344.

201. Klarl B.A., Lang P.A., Kempe D.S. Protein kinase C mediates erythrocyte "programmed cell death" following glucose depletion // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2006. - Vol. 290. - C244-C253.

202. Klitzman B., Johnson P.C. Hematocrit, diameter, red cell flux, velocity and flow: correlations and heterogeneties in straited muscle capillaries // Recent. Adv. Microvasc. 1980. - P. 36-37.

203. Knisely M.H. Intravascular erythrocyte aggregation* (blood sludge) / Handbook of physiology. London, 1965. - Vol. 3. - P. 2249-2292.

204. Koenig W., Ernst E. The possible role of hemorheology in atherothrombogenesis // Atherosclerosis. 1992. - Vol. 94, N 2-3 P. 93-107.

205. Koksal C., Ercan M., Bozkurt A.K. Hemorheological variables in critical limb ischemia // Int. Angiol. 2002. - Vol. 21, N 4. - P. 355-359.

206. Koller A., Dornyei G., Kaley G. Flow-induced responses in skeletal muscle venules: modulation by nitric oxide and prostaglandins // Am. J. Physio.1 Heart Circ. Physiol. 1998. - Vol. 275. -H831-H836.

207. Kon K., Maeda N., Shiga T. The relationship between deoxygenation rate erythrocytes and deformation by shear stress // Biorheology. 1983. - Vol. 20. -P. 92-100.

208. Kon K., Maeda N., Shiga T. Erythrocyte deformation in shear flow: influences of internal viscosity, membrane stiffness, and hematocrit // Blood. -1987. Vol. 69. - P. 727-734.

209. Koscielny J., Jung E.M., Mrowietz C., Kiesewetter H., Latza R. Blood fluidity, fibrinogen, and cardiovascular risk factors of occlusive arterial disease: results of the Aachen study // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2004. - Vol. 31,N3.-P. 185-195.

210. Kucukatay M.B., Wenby R.B., Meiselman H.J., Baskurt O.K. Effects of nitric oxide on red blood cell deformability // Am. J. Physiol. 2003. - Vol. 284.-H 1577-H1584.

211. Kumar V., Bustin S.A., McKay I.A. Transforming growth factor alpha // Cell Biol. 1995. - Vol. 19.'- N 5. - P. 373-388.

212. Lacombe C., Bucherer C., Ladjouzi J., Lelievre J.C. Competitive role between fibrinogen and; albumin on thixotropy of red cell suspensions // Biorheology. 1988, N 25. - P. 349-354.

213. Larcan A., Stoltz J.F. Blood hyperviscosity syndromes. Classification and physiopathological understanding. Therapeutic deductions // Ann. Med., Interne. 1983.-Vol. 134, N 5. -P. 395-410.

214. Lijnen P:, Echevaria-Vazquez D., Fagard R:, Petrov V. Protein kinase G induced changes in erythrocyte Na-t-/H+ exchange and cytosolic free calcium in humans // Am. J. Hypert. 1998. - Vol. 11. - N 1. - P. 81-87.s

215. Linderkamp O., Meiselman H.J. Geometric, osmotic, and membrane mechanical properties of density-separated human red cells // Blood. 1982. -Vol. 59.-P. 1121-1127.

216. Ling E., Danilov Y.N., Cohen C.M. Modulation of red cell band 4.1 function by cAMP-dependent kinase and protein kinase C phosphorylation // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 15. - P. 2209-2216.

217. Lipowsky H.H., Kovalcheck S., Zweifach B. The distribution of blood rheological parameters in microvasculature of cat mesentery // Circ. Res. -1978. Vol. 43. - P. 738-749.

218. Lofstrom B. Intravascular aggregatijn and oxygen concumption // Scand. J. Akta anesth. 1959. - Vol. 3. - P. 41-51.

219. London M. The role of blood rheology in regulating blood pressure // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1997. - Vol. 17. - P. 93-106.

220. Lowe G.D. Blood rheology in vitro and in vivo // Baillieres Clin. Haematol. 1987. - Vol. 1, N 3. - P. 597-636.

221. Luquita A., Gennaro M., Rasia M. Effect of subnormal hemoglobin concentration on the deformability of normocytic erythrocytes // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1996. - Vol. 16, N 2. - P. 117-127.

222. Maeda N., Sekiya M., Kameda K., Shiga T. Effect of immunoglobulin preparations on the aggregation of human erythrocytes // Eur. J. Clin. Invest. -1986.-Vol. 16.-P. 184—191.

223. Maeda N., Shiga T. Opposite effect of albumin on erythrocyte aggregation induced by immunoglobulin G and fibrinogen // Acta Biochim. Biophys. 1986. -Vol. 855. - P. 127-135.

224. Maeda N., Izumida Y., Suzuki. Influence of IgG and its related macromolecules on RBC aggregation // Hemorheologie et agregation erythrocytaire. 1994. - Vol. 4. - P. 44-49.

225. Maeda N., Tanaka H., Yamamoto J. Whole blood neutrophil aggregation in diabetes mellitus // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995. - Vol. 15, N 3. -P. 494.

226. Maeda N., Cicha I., Tateishi N., Suzuki Y. Triglyceride in plasma: Prospective effects on microcirculatory functions // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 34, N 1-2. - P. 341-346.

227. Malek A.M., Alper S.L., Izumo S. Hemodynamic shear stress and its role in atherosclerosis // JAMA. 1999. - Vol. 282. - P. 2035-2042.

228. Mallozzi C., Di Stasi A.M., Minetti M. Peroxynitrite modulates tyrosine-dependent signal transduction pathway of human erythrocyte band 3 // FAS EB.- 1997.-Vol. 11.-P. 1281-1290.

229. Manno S., Takakuwa Y., Nagao K., Mohandas N. Modulation of erythrocyte membrane mechanical function by beta-spectrin phosphorylation and dephosphorylation // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 10. - P. 5659-5665.

230. Manno S., Takakuwa Y., Mohandas N. Modulation of erythrocyte membrane mechanical function by protein 4.1 phosphorylation // J. Biol. Chem.- 2005. Vol. 280. - P. 7581-7587.

231. Martini J., Carpentier B., Chavez Negrete A., Cabrales P., Tsai A.G., Intaglietta M. Beneficial effects due to increasing blood and plasma viscosity // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 35, N 1-2. - P. 51-57.

232. Mchedlishvili G., Gobyishvili L., Beritashvili N. Effect of intensified red blood cell aggregability on arterial pressure and mescenteric microcirculation // Microvasc. Res. 1993. - Vol. 45. - P. 233-242.

233. Mchedlishvili G. Dynamic structure of blood flow in microvessels // Microcirc. Endothelium Lymphatics. 1991. - Vol. 7, N 1-3. - P. 3-49.

234. Meiselman H.J. Red blood cell role in RBC aggregation: 1963-1993 and beyond // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1993. - Vol. 13. - P. 575-592.

235. Merrill E.W., Pelletier G.A., Cheng C.S. Yield stress of normal human blood as a function of the endogenous fibrinogen // J. Appl. Physiol. 1968. -Vol. 26.-P. 1-3.

236. Messmer K. Hemodilution // Surg. Clin. North. Am. 1982. - Vol. 5. - P. 659-664.

237. Miles D., Kolch W. Cell-Type specific Integration of Cross-Talk between extracellular signal-regulated kinase and cAMP signaling // Mol. Pharm. 2000. -Vol. 58.-P. 659-668.

238. Miller C. An overview of the potassium channel family // Genome Biology. 2000. - Vol. 1. - N 4. - P. 41-45.

239. Minetti G., Low P.S. Erythrocyte signal transduction pathways and their possible functions // Curr. Opin. Hematol. 1997. - Vol. 4.-N2.-P. 116-121.

240. Minetti G., Ciana A., Balduini C. Differential sorting of tyrosine kinases and phosphotyrosine phosphatases acting on band 3 during vesiculation of human erythrocytes // Biochem. J. 2004. - Vol. 377. - P. 489^197.

241. Mirhashemi S., Ertefal S., Messmer K., Intaglietta M. Model analysis of the enhancement of tissue oxygenation by hemodilution due to increased microvascular flow velocity // Microvasc. Res. 1987, N 3. - P. 230-301.

242. Mohandas N., Clark M., Jacobs M. Automation in hematology // New York, «Liss». 1981, N 8. - P. 167-171.

243. Mohandas N., Chasis J.A., Shohet S.B. The influence of membrane skeleton on red cell deformability, membrane material properties, and shape // Semin. Hematol. 1983. - Vol. 20. - P. 225-242.

244. Moncada S. The role of nitric oxide in cardiovascular system // Int. J. Microcirc: Clin. Exp. Suppl. 1992. - P. 5.

245. Morris S.A., Bilezikian J.P. Evidence that forskolin activates turkey erythrocyte adenylate cyclase through a noncatalytic site // Arch. Biochem. Biophys. 1983. - Vol. 220, N 2. - P. 628-636.

246. Muller R. Haemorheology and peripheral vascular diseases: a new therapeutic approach // J. Med. 1981. - Vol. 12. - P. 209-236.

247. Muller R., Lehrach F. Flemorheology of the cerebrovascular multifunctional disorders // Currant medical research and opinions. 1981. -Vol. 7.-P. 253-263.

248. Muravyov A.V., Yakusevich V.V., Kabanov A.V., Petrochenko A.S. The effect of diuretics on red blood cell microrheological parameters in female hypertensive patients // Clin Hemorheol. and Microcirc. 2005. - Vol. 33, N 2. -P. 121.

249. Nabors K.L., Baumgartner W.A., Steven J.J. Red blood cell orientation in pulmonary capillaries and its effect on gas diffusion // J. Appl. Physiol. 2003. -Vol. 94,N4.-P. 1634-1640.

250. Nash G.B., Meiselman H. Red cell and ghost viscoelasticity. Effect of hemoglobin concentration and in vivo aging // Biophys. J. 1983. - Vol. 43. -P. 63-67.

251. Nash G.B., Wenby R.B., Sowemimo-Coker S.O., Meiselman H.J. Influence of cellular properties on red cell aggregation // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1987, N 7. - P. 93-108.

252. Nash G.B., Meiselman H.J. Effect of dehydration on the viscoelastic behavior of red cells // Blood Cells. 1991. - Vol. 17, N 3. - P. 517-522.

253. Nash G.B. Red cell mechanics: what changes are needed to adversely affect in vivo circulation // Biorheology. 1991. - Vol. 28. - P. 231-239.

254. Nash G., Watts T., Thornton C., Barigou M. Red cell aggregation as a factor influencing margination and adhesion of leukocytes and platelets // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 39, N 1-4. - P. 303-310.

255. Nedrelow J.H., Cianci C.D., Morrow J.S. c-Src binds alpha II spectrin's Src homology 3 (SH3) domain and blocks calpain susceptibility by phosphorylating Tyrl 176 // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 7735-7741.

256. Nunomura W, Takakuwa Y. Regulation of protein 4.1R interactions with membrane proteins by Ca and calmodulin // Front Biosci. 2006. - Vol. 1. -P. 1522-1539.

257. Nunomura W., Takakuwa Y., Parra M., Conboy J., Mohandas N. Regulation of protein 4.1R, p55, and glycophorin C ternary complex in human erythrocyte membrane // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 24540-24546.

258. Olearczyk J.J., Stephenson A.H., Lonigro A.J., Sprague R.S. NO inhibits signal transduction pathway for ATP release from erythrocytes via its action on heterotrimeric G protein Gi // Am. J. Physiol. Heart Circ: Physiol. 2004. - N 287. - H748-H754.

259. Oliveira S., Silva-Herdade A.S., Saldanha C. Modulation of erythrocyte deformability by PKC activity // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 39.-P. 363-373.

260. Oonishi T., Sakashita K., Uyesaka N. Regulation of red blood cell filterability by Ca2+ influx and cAMP-mediated signaling pathways // Am. J. Physiol. Cell Physiol.- 1997.-Vol. 273, N42. C1828-C1834.

261. Parthasarathi K., Lipowsky H.H. Cappilary recruitment in response to tissue hypoxia and its dependence on red blood cell deformability // Am. J. Physiol. 1999. - Vol. 277. -H2145-H2157.

262. Pearson M.J., Lipowsky H.H. Influence of erythrocyte aggregation* on-' leukocyte margination in postcapillary venules of rat mesentery // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000. - Vol. 279, N 4. - P. H1460-H1471.

263. Pfafferott C., Meiselman H., Hochstein P. The effect of malonyldialdehyde on erythrocyte deformability // Blood. 1982. - Vol. 59. -P. 12-15.

264. Pfafferott C., Nash G.B., Meiselman H.J. Red blood cell deformation in shear flow. Effects of internal and external phase viscosity and of in vivo aging // Biophys J. 1985. - Vol. 47. - P. 695-704.

265. Piagnerelli M.P., Boudieltia K.Z., Vanhaeverbeek M., Vincent J.L. Red blood cell rheology in sepsis // Intensive Care Med. 2003. - Vol. 29. - P. 1052-1061.

266. Pindur G., A. Sander, U.T. Seyfert, F. Jung, The effect of pentoxifylline on the deformability of erythrocytes in erythrocyte concentrates in additive solution // Anasthesiol. Intensivmed Notfallmed Schmerzth. 2001. - Vol. 36. -S59-S61.

267. Pribush A., Hatskelzon L., Mazor D., Katorza E., Zilberman-Kravits D., Meyerstein N. The role of erythrocyte aggregation in the abnormal hemorheology of multiple myeloma patients // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 34, N 4. - P. 529-536.

268. Priers A.R., Secomb T. Rheology of the microcirculation // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2003. - Vol. 29. - P. 143-148.

269. Puig de Morales-Marinkovic M., Turner K.T., Butler J.P., Fredberg J.J., Suresh S. Viscoelastisity of the human red blood cell // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2007. - Vol. 293. - P. 597-605.

270. Quemada D. Rheology of concentrated disperse systems. A model for non -Newtonian shear viscosity in steady flows // Rheol. Acte. 1978, N 6. - P. 632-642.

271. Rampling M.W. Red cell aggregation as a risk factor for thrombosis // Rev. Port. Hemorreol. 1991, N 5. - P. 39-47.

272. Rampling M.W., Martin G. Albumin and rouleaux formation // Clin1. Hemorheol. and Microcirc. 1992. - Vol. 12. - P. 761-765.

273. Rasia M., Bollini A. Red blood cell shape as a function of medium's ionic strength and pH // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1372. - P. 198-204.

274. Reinhart W.H., Sang L., Chien S. Quantitative relationship between heinz body formation and red blood cell deformability // Blood. 1986. - Vol. 68. - P. 1376-1387.

275. Ross P.D., Minton A.P. Hard quasispherical model for the viscosity of hemoglobin solutions // Biochem. and Biophys. Res. 1977. - Vol. 76. - P. 971-976.

276. Saldanha C., Silva A.S., Gon9alves S., Martins-Silva J. Modulation of erythrocyte hemorheological properties by band 3 phosphorylation and dephosphorylation // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2007. - Vol. 36, N 3. -P. 183-194.

277. Schmid-Schonbein H., Gallash G., Volger E. Microrheology and protein chemistry of pathological red cell aggregation (blood sludge) studied in vitro // Biorheology. 1973, N 10. - P. 213-223.

278. Schmid-Schonbein H.W. Blood rheology in hemoconcentration // High Altitude Physiol, and Med. -N.Y.: Springer, 1982. P. 109-116.

279. Schmid-Schonbein H., Grebe R., Heidtvann H. et al. Passive axial drift of fluid-drop like mammalian RBC: Results of spontaneous self-organization in a system far from fluid dynamics equilibrium // Microcirc. Clin. And Exper. — 1992.-Vol. 11.-P. 61-63.

280. Secomb T.W. Flow-dependent rheological properties of blood in capillaries // Microvasc.Res. 1987, N 1. - P. 46-58.

281. Seigner M., Closse C., Constans J., Lestage B., Dufourcq P., Pruvost A., Amiral J., Conri C., Boisseau M.R. Vascular endotelial cells during hypoxia // Clinical Hemorheology. Samplement 1. 1994. - Vol. 14. - P. 1.

282. Sens P., Gov N. Force balance and membrane shedding at the red-blood cell surface // Phys. Rev. Lett. 2007. - Vol. 98, N 1. - P. 018102.

283. Shiga T., Imaizumi K., Harada N., Sekiya M. Kinetics of rouleaux formation using TV image analyzer // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -1983. Vol. 245, N 2. - H252-H258.

284. Shin S., Ku Y., Babu N., Singh M. Erythrocytes deformability and its variations in diabetes mellitus // Indian J. Exp. Biol. 2007. - Vol. 45, N 1. - P. 121-128.

285. Shin S., Ku Y., Babu N., Singh M., Ho J.X., Kim Y.K., Suh. J.S. Progressive impairment of erythrocyte deformability as indicator of microangiopathy in type 2 diabetes mellitus // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2007. - Vol. 36, N 3. - P. 253-261.

286. Shishodia S., Sodhi A., Shrivastava A. Involvement of Ras and MAP kinase ERK-1) in cisplatin-induced activation of murine bone marrow-derived macrophages // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - Vol. 45, N 3. - P. 527-534.

287. Singh M., Muralidharan E. Mechanism of erythrocyte aggregate formation in presence of magnetic field and dextrans as analysed by laser light scattering // Biorheology. 1988. - Vol. 25. - P. 237-245.

288. Skalak R., Chien S. Theoretical models of rouleau formation and disaggregation // Ann. N.Y. Acad Sci. 1983. - Vol. 416. - P. 138-148.

289. Skalak R. Aggregation and disaggregation of red blood cells // Biorheology. 1984. - Vol. 21. - P. 463^176.

290. Somer T. Monoclonal and polyclonal hyperviscosity syndromes // Biorheology. 1999, N 2. - P. 66.

291. Sowemimo-Coker S.O., Whittingstall P., Pietsch L. Effects of cellular factors on the aggregation behavior of human, rat and bovine erythrocytes // Clin. Hemorheol: and Microcirc. 1989, N 9. - P. 723-737.

292. Sprague R.S., Ellsworth M.L., Stephenson A.H., Lonigro A.J. Participation of cAMP in a signal-transduction pathway relating erythrocyte deformation to ATP release // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2001. - Vol. 281, N4.-CI 158-CI 164.

293. Starzyk D., Korbut R., Gryglewski R.J. Effects of nitric oxide and prostacyclin on deformability and aggregability of red blood cells of rats ex vivo and in vitro // J. Physiol. Pharmacol. 1999. - Vol. 50, N 4. - P. 629-637.

294. Stoltz J.F. Clinical hemorheology: past, present and future // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 1995. - Vol. 15. - N 3. - P. 399-600.

295. Stoltz J.F., Donner M., Muller S., Larcan A. Hemorheology in clinical practice. Introduction to the notion of hemorheologic profile // J. Mai Vase. -1991.-Vol. 6.-P. 261-270.

296. Stuart J. Red cell filterability and cell size // Br. J. Haematol. 1987. -Vol. 66.-N3.-P. 431-432.

297. Stuart J., Nash G.B. Red cell deformability and haematological disorders // Blood Rev. 1990. - Vol. 4, N 3. - P. 141-147.

298. Sundquist J., Susan D., Bias J. The oti-adrenergic receptor in human erythrocyte membranes mediates interaction in vitro of epinephrine and thyroid hormone at the membrane Ca~ -ATPase // Cellular Signalling. 1992. - Vol. 4. - P. 795-799.

299. Takakuwa Y., Mohandas N., Ishibashi T. Regulation of red cell membrane deformability and stability by skeletal protein network // Biorheology. 1990. - Vol. 27. - P. 357-365.

300. Takakuwa Y. Protein 4.1, a multifunctional protein of the erythrocyte membrane skeleton: structure and functions in, erythrocytes and nonerythroid cells // Int. J. Hematol. 2000. - Vol. 72: - P. 298-309.

301. Takakuwa Y. Regulation of red cell membrane protein interactions: implications for red cell function // Curr. Opin. Hematol. 2001. - Vol. 8. - P. 80-84.

302. Tao M., Hosey M.M. Phosphorylation of rabbit and human erythrocyte membranes by soluble adenosine 3':5'-monophosphate-dependent and -independent protein kinases // J. Biol. Chem. 1977. - Vol. 252. - P. 102-109.

303. Tepperman J., Tepperman H. Metabolic and endocrine physiology and introductory. Chicago - London. - Year Book Publishers, Inc. - 1987. - 656p.

304. Tikliomiroiva I.A., Muravyov A.V., Kruglova E.V. Hormonal control mechanisms of the rheological properties of erythrocytes under physical exercises and stress // Biorheology. 2008. - Vol. 45, N 1-2. - P. 49.

305. Tong W., Zhang J., Lodish H.F. Lnk inhibits erythropoiesis and Epo-dependent JAK2 activation and downstream signaling pathways // Blood. -2005.-Vol. 15.-P. 4604-4612.

306. Tsai A.G., Nance P.R., Cabrales P. Frangos J.A., Buerk D.G., Intaglietta M. // Am. J. Physiol. -2005. Vol. 288. -H1730-H1739.

307. Tuvia S., Moses A., Gulayev N. et al. Beta-adrenergic agonists regulate cell membrane fluctuations of human erythrocytes // J. Physiol. 1999. - Vol. 516. -N 3. -P. 781-792.

308. Vaughn M.W., Huang K.T., Kuo L., Liao J.C. Erythrocytes possess an intrinsic barrier to nitric oxide consumption // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. -N4.-P. 2342-2348.

309. Vaya A., Falco C., Reganon E., Vila V., Martinez-Sales V., Corella D.', Contreras M.T., Aznar J. Influence of plasma factors-on red cell aggregation in survivor of acute myocardial infarction // Thromb. Haemost. 2004. — Vol. 91, N 2.-P. 354-359.

310. Velcheva I., Antonova N., Dimitrova V., Dimitrov N., Ivanov I. Plasma lipids and blood viscosity in patients with cerebrovascular disease // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2006. - Vol. 35, N 1-2. - P. 155-157.

311. Velcheva I., Antonova N., Titianova E., Damianov P., Dimitrov N., Dimitrova V. Hemorheological disturbances in cerebrovascular diseases // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. - Vol. 39, N 1-4. - P. 391-396.

312. Vestergaard-Bogind B., Bennekou P. Calcium-induced oscillations in K+ conductance and membrane potential of human erythrocytes mediated by the ionophore A23187 // Biochim. Biophys. Acta. 1982. - Vol.688. - N1. - P.37-44.

313. Vestergaard-Bogind B. Spontaneous inactivation of the Ca2+-sensitive K+ channels of human red cells at high intracellular Ca2+ activity // Biochim. Biophys. Acta. 1983.-Vol. 730. -N 2. -P. 285-294.

314. Vicaut E. Opposite effects of red blood cell aggregation on resistance to blood flow // J. Cardiovasc. Surg. 1995, N 36. - P. 361-368.

315. Vigilance J.E., Reid H.L. Segmental blood flow and rheological determinants in diabetic patients with peripheral occlusive arterial disease // J. Diabetes Complications. 2008. - Vol. 22. - P. 210-216.

316. Vitvitsky V.M., Frolova E.V., Martinov S.V. Effect of membrane permeability to anions on swelling rate of erythrocytes treated of amphotericin B or gramicidin D // Biochem. 2005, N 2. - P. 255-260.

317. Wan J., Ristenpart W.D., Stone H.A. Dynamics of shear-induced ATP release from red blood cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2008. - Vol. 105, N43.-P. 16432-16437.

318. Wang X., Yang L., Liu Y., Gao W., Peng W., Sung K.L., Sung L.A. Oxidized low-density lipoprotein (Ox-LDL)- impacts on erythrocyte viscoelasticity and its molecular mechanism // J. Biomech. 2009. — Vol: 42, N 14.-P. 2394-2399.

319. Warnke K.C., Skalak T.C. Leukocyte plugging in vivo in skeletal muscle arterioles trees // Am. J. Physiol. 1992. - Vol. 262. - HI 149-H1155.

320. Waugh R.E. Reticulocyte rigidity and passage through endothelial-like pores // Blood. 1991. - Vol. 78, N 11. - P. 3037-3042.

321. Waugh R.E., Narla M., Jackson C.W. Rheologic properties of senescent erythrocytes: loss of surface area and volume with red blood cell age // Blood. -1992, N79.-P. 1351-1358.

322. Weng X., Roederer G.O., Beaulieu R., Cloutier G. Contribution of cutephase proteins and cardiovascular risk factors to erythrocyte aggregation in normolipidemic and hyperlipidemic individuals // Thromb. Haemost. — 1998, N 80.-P. 903-908.

323. Whicher J.T. Cytokines and acute phase proteins // Rev. Port. Hemorheol. 1990.-Vol. 5.-P. 49-56.

324. Whittingstall P., Toth K., Wenby R.B., Meiselman H.J. Cellular factors in RBC aggregation: effects of autologous plasma and various polymers // Hemorheologie et aggregation erythrocytaire. 1992. - Vol. 4. - P. 21-30.

325. Wiley J.S., McCulloch K.E. Calcium ions, drug action and the red cell membrane // Pharmacol. Ther. 1982. - Vol. 18. -N 2. - P. 271-292.

326. Yalcin O., Meiselman H.J., Armstrong J.K., Baskurt O.K. Effect ofenhanced red blood cell aggregation influence in vivo blood flow resistance // Am. J. Physiol. 2004. - Vol. 287. - H2644- H2650.

327. Yalcin O., Uyuklu M., Armstrong J.K. Graded alterations of RBC aggregation influence in vivo blood flow resistance // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 287. - H2644-H2650.

328. Yalcin O., Ay din F., Ulker P. Effects of red blood cell aggregation on myocardial hematocrit gradient using two approaches to increase aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. - Vol. 290. -N 2. - H765-H771.

329. Yamamoto M. Effects of fibrinogen, globulin, albumin and hematocrit on the kinetics of erythrocyte aggregation in man // Angiology. — 1986. N 37. - P: 663- 671.

330. Yoshimura A., Arai K. Physician Education: The erythropoietin receptor and signal transduction // Oncologist. 1996. - Vol. 1. - P. 337-339.

331. Zimmermann J., Schramm L., Wanner C. Hemorheology, plasma protein composition and von Willebrand factor in type I diabetic nephropathy // Clin. Nephrol. 1996, N 46. - P. 230-236.

332. Zipser Y., Piade A., Barbul A., Korenstein R., Kosower N.S. Ca2+ promotes erythrocyte band 3 tyrosine phosphorylation via dissociation of phosphotyrosine phosphatase from band 3 // Biochem. J. 2002. - Vol. 15, N368.-P. 137-144.

333. Zorio E., Murado J., Arizo D., Rueda J., Corella D., Simô M., Vayâ A. Haemorheological parameters in young patients with acute myocardial infarction // Clin. Hemorheol. and Microcirc. 2008. -Vol. 39, N1-4. - P. 3341.

Информация о работе

Маймистова, Алла Альбертовна
кандидата биологических наук
Ярославль, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Роль внутриклеточных эффекторных путей эритроцитов в изменении их микрореологических свойств в норме и на фоне атеросклероза - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы