Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль оксидоредуктаз и их множественных форм в метаболических процессах при алкоголизации и развитии алкогольной мотивации

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль оксидоредуктаз и их множественных форм в метаболических процессах при алкоголизации и развитии алкогольной мотивации"

/МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ СИБИРСКИИ МЕДИЦИНСКИМ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ВЫСОКОГОРСКИИ Валерий Евгеньевич

РОЛЬ ОКСИДОРЕДУКТАЗ II ИХ МНОЖЕСТВЕННЫХ ФОРМ В МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ ПРИ АЛКОГОЛИЗАЦИИ II РАЗВИТИИ АЛКОГОЛЬНОЙ МОТИВАЦИИ

03.00.04 — «Биохимия»

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора меднцннскнх наук

ТОМСК 1992

Работа выполнена а Омском медицинском институте Научные консультанты - член корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук,профессор И.П.АНОХИНА, доктор медицинских наук,профессор К.Н.ГГУЗДЕВА.

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАМН,доктор медицинских наук, профессор В.Н.ШШВ,

доктор медицинских наук,профессор Л.С.ШШСШМЕНКО, доктор медицинских наук Н.Б.КАНСКАЯ.

Ведущее учреждение - Российский медицинский университет (г. Москва)

" с ■ Защита состоится п30 щ0£4Уе(!ЩР/1992 г. в_чао.

на заседании специализированного Совета Д 084.28.01 при

Сибирском медицинской университете (634050, г. Томск,

Московский тракт, 2)

. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Сибирского медицинского университета (634050, г. Томск, пр. Ленина, 107)

Автореферат разослан

Учёный секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук,

профессор

Э.И.Белобородова

РОС^МЙОКдя

ГО С уд Л р С г У.(; и л ...»

I ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

! ' ! Актуальность проблемы. Отсутствие научно обоснованного >

| комплексного подхода, низкая эффективность только адмглш- | ! стративннх мер и недостаточность знаний патогенеза алкоголь-, | ной зависимости являются причинами распространения пьянства I I и алкоголизма. Отмена государственной монополии на продажу ! I алкогольных напитков, развитие рыночных экономических отио- | | тений выявляет новые вопросы и проблемы, связанные с алкого-! I лизацией населения. • |

| Долгие годы алкоголизм рассматривался как психическое } , заболевание, и игнорировались физиологические и биохкмичес- | ; кие механизмы этой патологии. В последнее время появилась ' ¡точка зрения ( .т.веазПеу , 1988), согласно которой алкого-; | лизм является метаболическим заболеванием* аналогичным Диа-! | бету. I

| Нарушение обменных процессов при алкогольной янтоксика-[ ции давно уже не вызывало сомнений (А.А.Понроиский, 1976; I : И.А.Сытинский, 1980; А.Е.Успенский, 1964; Ю...;. Островский и • ; соавт., 1988; с.б.ЫеЬег , 1988, 1990 и др.). Практически _ единодушно мнение исследователей о том, что осноеой много; численных метаболических нарушений при алкоголизации явля- | • ются изменение редонс-состояния клетки, вследствие някопле } ния восстановленных форм коферментов и субстратов, воэдей- | ствие токсического ацеталвдегида. повреждение мембранных | ! структур. Зги первичные эффекты этанола вызывал нарушение ; различных окислительных процессов, изменяя, вероятно, актив-* ность оксидоредуктаз. Однако литературных сведений, харак- | ■ теризушгас состояние оксидоредуктаз яри алкоголизации, не- I достаточно, и они отличаются противоречивостью. [

Внимание исследователей обращено, правде всего, к изу- | чению ферментов метаболизма этанола. Однако имеется доста- 1 точно экспериментального материма, подтверждающего предположение. что печень характеризуется значительной актив- ; костью алкогольдегидрогеназы (АДГ) и лимитирухдим звеном в окислении этанола является интенсивность реокисления НАГ Н (И.А.Смтинсний, 1960; В. II. Островский, 1°-83; '

Однако V. литературе практи'^.скк отсутствуют дшяыо, сокос-

чавллтцие активность эт^ло-гметаболизирумдих ферментов и ок-i окдоредуктаз, способствующих реохислению НАД'Н. ;

! ЕэвнеГлим аспектом изучения алкоголизации является вы- ; . лскекие механизме)к развития алкогольной зависимости, ново- ; i ротным моментом в исследовании которого стало установление ■ j факта генетической предрасположенности к потреблению алко- • j голя и выведение генетических линий животных с высоким - ■ ■ } предпочтением к этанолу (ПЭ) и животных, отвергающих его j раствори, а предпочитающих воду (ПВ) ( .1С.Eriksson ■', 1968).' i возможность моделирования алкогольной зависимости привлекла! I внимание исследователей к изучении биологических предпосы- ; • жок развктяя алкоголизма (И-.П.Анохкна, 1980; Ю.М.Островский, 1980, 1986; 1388). Установлены также различия в изофермент— | -них спектрах алкогольдегидрогеназк и альдегвддёгидрогеназы ■ : V представителей различных этнических групл, отличающихся • •; 1 потреблением алкоголя ( т.к.Li et al , '1977; H.W.Goedde.et i

■ al , 1779, IS80; S. Herada.et al , 1282; A.Joshida et, ej. ; IS89).. Однако .исследование изоформ этих энзимов у американ-

1 пев привело,к закли¿еняв, что различия в частоте алкоголизма не связаны с отличиями типах изоферментов АДГ и АльЕГ •. I ( W.£.Boston et al „, IS88) . Роль других-дЭГИДРОГеНаЗ '.В •!. формировании алкогольной мотивации • не установлена. В-связи-

■ с этиги, одновременной,изучение активности, ферментов метабо-. лизма.этанола, других олсидоредуктази их .изоформ при формировании алкогольной мотивации представляется- весьма важ- • ным в понимании патогенеза алкоголизма. ; . ..;

Актуальность исследования обусловлена, таккэ -необходимостью выяснения влияния стрессорных факторов, на активность ферментов, принимающих -участие в окислении, этанола, его

■ непосредственного метаболита - ацетавдегпда и, других .вое- ; стазовленних. субстратов, изучения степени, нарушения актив- : ности окекдоредуктаз пру. совместном воздействии стресса и ..!

, алкоголизашш.• .... ....,.'..•

■ Перспективным является исследование биохимических и физиологических покагателей у жителей Крайнего Севера - ко-,-.,, репного и .миграционного, населения с различной-степенью ал--, коголизация с последующей разработкой теотоь для выявления ч: алкогольной мотивации, а также определение активности окси-

I дородултаз в секционном материале, полученном после смерти ■ от острого алкогольного отран"ения и друиох причин с цель« | разработки дифференциально-диагностических критериев. | Настоящая работа является фрагменте!.! научных исслечозза- , i ней, проводимых по научно-технической программе 0.69,13 Б!Щ. I наркологии АШ СССР и еходкт б раздел 6.1.5.9.6 программы ; ! "Здоровье человека в Сибири и на Дальнем Востоке" Сибирско-; | го Отделения РАШ. |

| Цель и задачи исследования. Исходя из изложенного., : I целью работы явилось изучение акпиности охсцдоредукта:. на | различных этапах метаболизма при острой и хронической алко-I | гольной интоксикации, при развитии алкогольной мотивации и . | при воздействии стресса на организм в условиях алкоголизации. Учитывая изложенное, при выполнении работы решались ; следующие конкретные задачи: !

- изучить активность оксидоредуктаз цикла трмкарбоновых I кислот пэчони крыс при действии эталола и ацетальдегида I

| в условиях острой и хронической интоксикации; ;

I - разработать зкепераменталь-ую модель ранних стадий форми-) I СОЕания алкогольной мотивации; I

- изучить активность оксидородуктаз печени яивотикх с раз- | I личной алкогольной мотивацией; ;

- исследовать влияние стресса на активность ферментов мета-! болизма этанола; |

- избить совместное действие стресса и алкоголизации на ! активность оксидоредуктаз и показатели тиолдасулт-фидного ; обмена; 1

- исследовать некоторые биохимические тесты, обосковашшо \ экспериментальными исследованиями, в условиях воздействия; на организм человека экстремальных факторов. '

Научная новизна. Б результате проведенного исследования; вперЕне в ломплексе изучены с использованием спектро$отс-- ; метрических методов, диск-элоктрофореза и изоэлектрячеекого фокусирования активность оасидоредунтаз - алкоголъдехчдао- | геназы, ксантиноксидязн, глшоуо-б-фоейасдагвдрогешли печени экспериментальны,. клвотных в различные нерио/:ш алко- . гольноЗ ииюксикашш и при формирования алкогаг^юй мотивации.

I Впервые выявлены общие звенья и взаимовлияние на мета- \ ! болические процессы алкоголизации и стросса, что важно для ; , ответа на вопрос, является ли алкоголь антистрессорным фак-, > тором и мокег ли стресс способствовать формированию алко- < I голькой мотивации.

; При обследовании представителей различных этнических ; ; групп народностей Крайнего Севера впорвые выявлены особен- I : ности алкогольной мотивации у подростков среди коренного и { 1 пришлого населения. Новизну представляют и результаты ис- | : следований дегидрогеназ и их изо^рм органов лиц, погибших | ! от острого алкогольного отравления, при сравнении активное-' 1 ти тех же ферментов в секционном материале, полученном при !

скоропостижной смерти от ишемической болезни сордца. |

1" Практгческая значимость. Полученные в эксперименте • ! I результаты свидетельствуют о том, что стресс наиболее су- ; | щественное влияние оказывает не на ферменты,- окисляющие I | этанол, а на активность оксцдоредуктаз последующих этапов ¡. ; его метаболизма. Выявленное существенное снижение-активное-; I ти альдегиддегидрогеназы при стрессе способствует повышению^ 1 концентрации ацетальдегвда, характеризуицегося большей ток-; , сичностыо, чем этанол, что указывает на неблагоприятное | ! действие стресса на организм в условиях алкоголизации. \ , Вместе с тем показано, что алкоголь усиливает стресс- ! реакцию, не только усугубляя мотаболические сдвиги, но и ] ; способствуя более выраженному падению массы тела животных, ' ' наблюдаемому при совместном действии стросса и этанола, не-; смотря на то, что последний обладает калориГегашм эффектом.! Отсгда вытекает практический вывод - этанол не может рас- | усматриваться как антистрессорннй фактор. |

Полученные нами данные при обследовании народностей ' Крайнего Севера были использованы для написания икформаци- ; онного письма: "Методы выявления особенностей алкогольной ! ■ мотивации у'народностей Крайнего Севера как основы для фаз-; работки мероприятий по профилактике алкоголизма" (1990), .; | рекомендованного Министерством здравоохранения РСФСР для ; Ерачей наркологических диспансоров районов,Сибири и Край-. него Севера. . , , „ ■,

Найдешше при исследошнил секционного материала пока-

затели активности ферментов и сооиюишия вх изофэгм в на- ■ личных органах в случаях смерти разнога reiresa ira íc-ne потребления алкоголя, легли и основу мзго/апоских рв:;оиовда- ¡ ций "Биохимические методы исследования дегидрогеназ ц их i изоформ для диагностики острых отражений гтилознм алпсго- ; лек" (1991), предстаЕлешжх н 1ШЦ Ш Российской Федерации. ¡ Изложенные в рекомендациях даннье с подробным списанием ! методов исследования могут подуть прагтичаског* применен!4/': в судебно-медицинской практике. i

Разработанные и опубликованные в процессе написания ра~J йоты .методические рекомещтяии для самостоятельно?! работы студентов на тему "Обмен этанола и патогенетические геха- j низш развития алкоголизма и алкогольной интоксикации" i (IS90) используются з обучении студентов на кафедрах йиохя-j мл и, патофизиологии, психиатрии.

Основные полокегтая. вкаосимые на защиту: I. Острая алкогольная интоксикация приводит к вирау.ешгом j нарушениям окислительных процессор и энергетического ба~' ланса клеток печени, о чём свидетельствует сютеьнв активности лимитирунцего фермента цикла трикарбонсвнх ние~, лот НАД-зэеисиюй изоцатратдетидрогеназв, а также калат- i дегвдрогенази и цктохромокмдазк. Нарушение ьштохондри- ! альных процессов окисления усиливает протонную интскси- j кацию, характерную для алкоголизация, в условиях ызы;-вавдейся гипоксии, о чём свидетельствует увеличение со- ' держания лактата и изофс-гмы ЛДГд на фоне роста оив;ей лактатдегидрогеназной активности. . Эффекты этанола при хронической интоксикации отличаются от его действия при острой интоксикации. Нормализапия ¡ активности дегидрогэназ на определенных этапах-кнтокои- ; кации монет быть результатом.напряжения здадтационно-ца«. щитных механизмов. Более дгжгедьное поступлении этанола в организм приводит к изменении активности мятохс'згш-альных дегидрогеназ, коррелирующему с ваоулонзями íce'fo-липидного состава мембран ruiToxoiyip;:,"'. , ]'зофер.М9Н!кке спектру ааьдегиддегиЕГ"Uywüзы (ЛльД?) mi-тохондрпи уиготннх о.раг**игчшЕ алкогольной котякзтхей

пмзют суиосте&ннко отличия, сто пг.:як»яс~. т. в

но более высоком уровне активности АльДГ-Ш и сниженной | активности АльИГ-Т у крыс, предночитамоих этанол в сравнении с аналогичными показателями, найденными у животных., предпочитающие воду. Это может влиять на скорость метаболизма ацетальдегпда и, кроме того, способствует | изменению отношения НАД/НЛДН, что приводит к интенсифи-| кации реокисления НАДН при наличии у животных алкоголь-| ной мотивации.

I 4. Высокая активность цитозольной нзоцитратдегидоогеназы,. I найденная у предпочитающих этанол животных, ведущая к ; интенсивному образованию альфа-кетоглутарата, долина

способствовать его реакции переаминирования с аспартг- | том, что в свою очередь будет стимулировать малат-аспар-I | • татннй иунт, играющий ведущую роль в экспорте НАДФ из ■ ¡' I цитозоля в митохондрии. Более интенсивное функционировав ; ние малат-аспартатного шунта в цитозольном компартменте ;

у предпочитающих этанол крыс, способствуя транспорту { | восстановленных эквивалентов из I йозоля в митохондрии, | будет тем самым снижать "протонную интоксикацию" в уело-; 1 вяях действия этанола, что, возмонно, и приводит к боль-:

шему употреблению этанола животными этой группы. | Б. Алкоголизация животных и эмоциональный стресс не оказы- ;

• Бают существенного влияния на активность алкогольдегид- ! рогеназы, но приводят к снижению активности альдегидде- ' гидрогеназы, наиболее выраженному при сочетанном дейст- ! вии алкоголя и стресса. В этих условиях наблюдается так-| же снижение активности НАД-зависимой изоцитратдегидроге-; назы, НАД- и НАДФ-зависимоЙ малагдегидрогеназы, что ело-' собствует накоплению восстановленных эквивалентов, усиливая развитие алкогольной интоксикации.- ( 6. Стресс не только снижает активность АльЦГ, но и изменяет соотношение и свойства её изоферментов, что указывает на важную роль этого фермента в адаптивных реакциях организма на воздействие факторов внешней среда, поскольку АльДГ окисляет не только ацетальдогид, но и другие биогенные альдегиды. . • 7. Ферментативная активность НАД-ВДГ, НАДФ-ЩГ и пзофер-монтныо спектры .ГДГ печени, миокарда и различных отделов

головного мозга имеют особенности, характерные дня смор-1 ти от острого алкогольного отравления, в отличие от ише-мической болезни сердца и механической травмы, что рекомендуется как вспомогателы-ый метод дифференциальной диагностики причин смерти в судебно-медицинской практике. >

Результаты диссертационной работы доложены и обсуждались! на Международном симпозиуме "Биологические и медицинские I аспекты алкоголизма" (Москва, 1564), на международном симпозиуме "Хроматография в биологии и медицине" (Москва, 1986),] на соЕетско-финляндском симпозиуме по нейропсихофармаяоло- | гии и биомедицинским аспектам алкоголизма (Москва, 1583) и I на советско-американской конференции по алкоголизму и нар- | команиям (Москва, 1950), на Всесоюзном сшшозиумз "Сгрукту--ра и функции лизосом" (Новосибирск, 1980), на Всесоюзной | конференции по адаптации (Ашхабад, 1983), на Всесоюзных ! симпозиумах по медицинской энзимологии (Алма-Ата, 1533; | Москва, 1986), на Всесоюзной конференции "Хроматография J ! биологии и медицине" (Москва, 1283), на Всесоюзной конфа- I ренции "Народности Севера: проблемы и перспективы экономи- ; ческого и социального развития" (Новосибирск, 19БЗ), на | Всесоюзной конференции молодых ученых и специалистов "Ак- I туальные проблемы наркологии" (Киев, 1986), на Всесоюзной | конференции "Актуальные вопросы наркомании" (Омск, 1982), I на Всесоюзном биохимическом съезде (Москва, 1986) на Все- | союзном съезде невропатологов, психиатров и наркологов ; (Москва, 1988), на съезде невропатологов и психиатров Мол- • давии (Кишинев, 1981), на Республиканском семинаре "Соци- I ально-экономическое развитие и здоровье малочисленных на- | родов Севера" (Красноярск, 1950), на Республиканской кон- | ференции "Клинические и организационные воаросы наркологи- | ческой помощи в регионе Сибири и Дальнего Востока" (Благо- ; вещенск, 1984), на объединенной конференции психиатров ; Таджикистана, Всесоюзного научно-исследоватбльс.,ого инсти- | тута общей и судебной психиатрии им. В.П.Сербского и Том- ; сиого научно-исследовательского центра психического зх-ровья АМН СССР "Проблемы наркологи^" (Душанбе, 1589), на : симпозиуме "Биохимия, фармакологии и медицинское приыеп<?-

i чип щю'.шошшх ь!>та>жяо1 к. других ярадшоотвенииков кофер- ! j контор.'' (Иркутск, 1963), ira сямпозпуке "Особенности липид--I лого обмена зз услоьтях Снбиог»и Дальнего Востока с учётом | ! бнсокзх л яш'сшис факторов" (Чита, 1987), на конференциях j ' биохимиков регпублш: Срздной Азии и Казахстана (Душанбе, j . ; Ашхабад, Ï966), на научно-практической конференции |

1 молодкх ученых я сиоциалистов "Здоровье человека в Сибири" i ; 'Красноярск, ISCP), на научной конферешцш "Биохимия - ме~ ! ! дшкче" (Ленинград. IS8S), на зональных конференциях био- J химиков Урала .ч Западной Сибири (Томск, 1980; Тюмень,IS82), ; ! на областвых иаучяо-яракткчасиис конференциях "Рациоиализа-j цин и гпоСритательстьо в медицине" (Омск, 1982, 1985), на ! : екегсднкх зао.одящ'лх Омска о отдел енич Всесоюзного биохими-' . чыского общества. ' .{

По тэ>зе диссертации ощ'блакорано 52 научные работа. Струхтура н обшп диссортатщц. Диссертация состоит из. j • шю.-.енш, обнора литературы (Г глава), главы, посвященной ;

кагеркалам и методам исследования. 5 глал описания собствен! них результатов с их интерпретацией, заключения, выводов и , ■ списка использованной литературы (483 наименоьания, из них j 153 отечественных и 320 зарубежных авторов). Работа изложена на 315 страницах машшолисного текста, иллюстрирована i 50 таблипадя'и I7 рисунками.

МА.ГШ'Ш И МЕТОДЫ ИСаЩЮВАНИЙ

Экспериментальные исследования проведены на 1585 кри- ' сах. Ъ таблице I предстагаеки сводонкя о распределении э?саерамснтаг»ьного ' шп-еряала в различных сериях исследова- ' пей. В экспедиционных исследованиях обследовано 4ОС жителей Крайнего Севера - практически здоровых и больных алкоголизм ном. Свюшоивый ыртеотак получен от 65 трупов, погибших от ; ' гравк, Iî£C и острого алкогольного отравления. :

TIpv кс.слсдошгап д^с-ж-ч острой и подострой алкоголь- • ' ной EVriOKCKKaiHiv IV. aitiKiEoctb оксвдюродуитаэ тавотным вводили пснопыо зсняа внутрь яплудна 48^ раствор этанола h до?.е 4 г на кг що.сы угвотиого.

Сраиоцке матаболгчоскгх эффектов этанола и ацетальде- •

Таблица I

Распределение экспериментального материала

Раздел исследования

Количество групп

Количество нивотннх (крысы)

1. Изучение активности оксвдоре-дуктаз и фосфолипидного состава в различные сроки острой 26 алкогольной и ацетальдегидной интоксикации

2. Исследование активности дегвд-рогеназ и фосфолипидного соста- 24 ва при хронической интоксикации

3. Выявление воздействия внешних

| факторов на формирование ално- 18 | гольной мотивации

\4. Изучение активности оксодоре-| дуктаз печени у животных с раз- 12 | личной алкогольной мотивацией

5. Исследование активности оксидо-; редуктаз, их множественных форм

п регулируемости в различных ^

I отделах головного мозга

¡6. Оценка влияния стресса на ак-1 тивность ферментов метаболизма

этанола, на кинетические свой- 10 ! ства АльДГ и её изоферментный спектр

¡7. Изучение совместного воздействия

стресса и алкоголизации на актив- 24 ность оксидоредуктаз печени

149

205

744

117

40

93

237

ВСЕГО

118

1585

года возможно только при использовании эквивалентных по токсичности доз. Учитывая это, мы предварительно установили методом наименьших квадратов DL gg исследуемых веществ. Для алкоголя DL gQ составила 289 ммоль на кг массы, для ацеталь-дегида 37 ммоль на кг массы. При острой интоксикации вводили 1/2 га, 5q сравниваемых веществ.

Хроническую интоксикацию вызывали путем принудительной алкоголизации, используя в качестве единственного источника жидкости раствор алкоголя.

Разработан метод выявления алкогольной мотивации у животных (Рационализаторское предложение отраслевого значения Jp 0-2140).

! Степень развития алкогольной мотивации животных выявля-! ли путем учета количества выпитого раствора алкоголя и воды j в условиях свободного выбора при содержании крыс в ищшви-I дуальных клетках с двумя поилками, одна из которых содержа-j j ла 10$ раствор алкоголя, другая - воду. Эмоциональный стресс j вызывали путем иммобилизации крыс на спине (Л.С.Колесничен-1 ! ко, I98G). Митохондриальную и цитозольную фракции получали [ , методом дифференциального центрифугирования в соответствии j ! с методическими рекомендациями И.М.МосолоеоЙ с соавт.(1971),! ! Н.Д.Йценко (1282).

j Для выявлеши максимальной активности мембраносвязанных!

ферментов к осадку митохондрий или надосадочной жидкости : добавляли неионный детергент тритон Х-100 в конечном кон! центрации 0,1%.

Активность алкогольдегидрогеназы (КФ, I.I.I, алкоголь: ' НАД-оксидоредуктаза) печени определяли по методу Bonnicheen| ..Brink (1955) В модификации Goedde et al (IS80). ; Активность алвдегвддегидрогеназы АльДГ (КФ 1.2.1.3., ; альдегвд:НАД-оксвдоредуктаза) определяли по Marchner , ToUlmar (1976).

Большое различие констант ы'ихаэлиса для Ал1ДГ^ (мито-' хондриальной) и АльДГ^ (цитозольной) позволяет определять изофермеитный состав АльДГ кинетическим методом. Активность АльШ^ определяли при малых концентрациях (30 мкМ), а активность АлЩд находили по разности между общей активностью АльДГ (при высоких концентрациях ацетальдегида -

Ï8 мМ) и активностью АльДГ^.

Активность НАД- и НАДФ-заЕисимнх форм ЦЦГ, 1ЩГ, глюко-j зо-6-фосфатдегидрогеназы, глутатионредуктазы определяли I спектрофотометрически, регистрируя оптическую плотность j при изменении концентрации НАДН.

) НАДФ-зависимую дисульфидредуктазную активность опредв- : ляли спектрофотомеюически по методу Tietae (1970).

Изменение регулируемости этого фермента выделяли при добавлении в инкубационную среду цШ$ в конечной кмщентра-ции 10~% или серотонина - 10 M (Кулгаский Б.И. и др. ,1981),

Активность j -глутамилтрансферазы (ГГТ; КФ 2,3.2,1) определяли ПО Meister et al(1981),

Разделение изоферментов ЛДГ и Г.ДГ проводили в 1% полиак-1 риламидном геле. После электрофореза цилиндрические гели окрашивали в соответствующих реакционных смесях (Маурер, 1971; Остерман, 1981).

Для фракционирования изоферментов АльДГ использовали аналитический вариант ИЕФ в трубках или в ультратонком слое (А.Мурель, i960).

Для исследования кинетических свойств изоферментов Ал1ДГ, количественной оценки их соотношений использовали метод ионнообменной хроматографии (С.Пирожков, Blair , Bodley , 1969; Koivula , Koivusalo , 1975).

Константу Михаэлиса (Ки) и максимальную скорость реакции (f макс.) определяли графически в координатах Лайнуиве- • ра-Берка. Кт и V макс, определяли для ацетальдегида в качестве субстрата;

: Для определения чувствительности различных типов адре-|норецептороЕ использовали методические приёмг, описанные В.И.Кулинским с соаЕт. (1980).

Фосфолипидные фракции разделяли методом тонкослойной ; хроматографии.

| Весь материал исследований обработан статистически на сШ "Wang " с использованием программ для исчисления средней арифметической. (X), квадратичсского отклонения (б"), ошибки средней арифметической (га ). критерия Стыодента (• ).

ПроЕедён корреляционный анализ количественных показателей методом парной корреля-ци. Функциональная связь оцо-

писалась как слабая при коэффициенте корреляции (г)- меньше 0,0; средняя - от 0,5 до 0,7; сильная - от 0,7 до 0,9 и ; тесная от 0,9 до 1,0 (П.А.Рнжов, 1973).

I

| РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Активность оксидоредукгаз при алкоголизации

Результ .ты наших исследований показали, что острая алкогольная интоксикация вызывает снижение активности Независимой изоцитратдегидрогеназы (ИДГ-НАД) на 45,3$ (р<0,01) уже через I час после введения этанола (Рис. I).

Рис.1. активность изоцитратдегидрогеназы при острой интоксикации

(иноль ' нмол» НЙДНУмим МО 1 мг. валко )

НГЙМ/мии-' Ыг 8«то)

30

г. о

m

о

1 2. 4 в 12 24 Срок

_____Гчась|

р<0,05; **-р<0,01.

У/А кпитроль gg| ,таяоя Ру-^ ацетальлсгид

! Подавление активности этого фермента наблкщалось и в дальнейшие сроки, интоксикации, но было менее выраженным и ста-j тистически недостоверным. Только через 24 чйса после вве-:денпя алкоголя активность ИДГ-НАД вновь резко снижалась ; на 57,2/2 (р <0,001). Активность другого фермента митохонд-;рий-НАД-зависимой малатдегвдрогеназн (ВДТ-НАД), прюшмаю-

щей участие в поддержании энергетического баланса, пост^к-лящей НАДИ в дыхательную цеш митохондрии, такко снигалась ]при острой алкогольной интоксикации. Через I час поело в^е-;дения алкоголя активность ЩГ-НАД митохондрий умэвьшалясь на 34,4^, через 2 часа - на 26,через 6 часов - на 30,7^,. через 12 часов - на 36,2$, к наиболее выраженным было снижение активности этого фермента через 24 часа - на 59,4$.

Наряду с изучением динамики активности ферментов цикла трикарбоновых кислот при острой алкогольной интоксикации, представляло интерес исследовать аь^ивнос'.'ь цитохромокс.да-[зы (ЦО), осуществляющей конечный этап переноса электронов л дыхательной цепи, обеспечивающий энергетический эффект всех предшествующих метаболических превращений.

Согласно полученным результатам, активность цитохромок- > сидазы в первые часы после введет«! этанола достоверно не изменялась, только через 6 часов наблюдалось снижение её I активности на 26,4%, а в последующие сроки активность ЦО (восстанавливалась до уровня величин, найденных у контроль-;ных животных.

| В качестве показателя, связанного с интенсклшм образо» ! ;ванием восстановленных форм при острой алкогольной интокси-; кадии, на начальном её э^апе через 60 минут после введения |этанола было выявлено повышение общей актлвности лактатдн-¡гидрогвназы (ЛДГ), сопроиождащееоя увеличением активности ' (катодной фракции ЛДГ-5. В этот период наблвдалось также уае-¡личение содержания лактата. В более поздние сроки после ¡введения этанола до 12 часов отмечались аналогичные изш-'нения.

I (

| Существенных изменений в этот срок алкогольной интоксикации в активности ферментов, непосредственно окисляющих 'этанол, ЛДГ, а также ксантиноксидазы, каталазы ж фермента метаболизирукщего ацетальдегид-АлнДГ не установлено.

Так как изменения активности ферментов наблвдались пре-' имущественно среди мембраносвяэашгюс ферментов, го мойсно предположить, что изменение их активности связано с нарушением под действием этанола структуры мембран и, преязда всего, их фоофолипидного слоя. В пользу такого предположения

говорит то, что через 30 минут после внутрижелудочного введения этанола снижалось содержание фосфора фосфолилидов на 15%. Наиболее выраженные сдвиги наблвдались в содержании сфингомиелинов, которое снижалось на 32$. Через 2 часа пос-. : ло введения этанола резко повышалось содержание фосфатидил-| холина (ФХ), за счет этого увеличивалось общее содержание I фосфолилидов. В дальнейшие сроки после некоторого увеличе-! ш содержания ФХ наблюдалось их уменьшение через 24 часа | после введения алкоголя.

; Можно предположить, что изменения фосфолипидного соста-1 ва митохондрий при острой алкогольной интоксикации являются ! причиной снижения активности митохондриальных оксидоредук-| таз. Нарушения фосфолипидного состава митохондрий могут |. быть обусловлены как непосредственным солюбилизирумцим эф-( фактом этанола, так и активацией перекисного окисления ли-| пздов в этих условиях.

| Другим фактором, способствующим нарушению митоховдри-| альных мембран, может являться активация лизосомальных фер-! ментов, о ч;м свидетельствуют данные"об увеличении общей и | свободной активности кислой фосфатазы. I При хронической алкогольной интоксикации наблюдалось в | начальные сроки (15-30-й день) повышение активности мито-. хондриальных оксидоредуитаз - ВДГ-НАД, 1ДГ, ЩГ-НАД и ЦО I и возвращение активности этих ферментов к контрольным по-| казателям в последующие сроки интоксикации (60-120-й дни). | Однако активность ТОГ вновь повышалась на 120-й день 1 (Рис. 2), а ВДГ-НАД значительно снижалась на 60-Е день ин-; токсикации. Определенное повышение, после первоначального I снижения в первые сутки, активности митохондриальных окси-} доредуктаз может быть результатом мобилизации адаптивных меха"измсв организма на интоксикацию. В то же время это увеличение активности отдельных оксидоредуктаз сопрогау-; дается снижением активности цитозольных ферментов - НАДФ-! зависимых КДГ и ВДГ, а также ксантиноксидазы и митохонд-риальной АлъЦГ. Эта разнонаправленность изменений активности оксидоредуктаз приводит, вероятно, к дискоординации метаболических процессов и может вызвать развитие гипокси-ческой ситуации.

.

в»

?в ев 50 ад

38 28 10

Р::с.2. активность глутаматдегидрогеназы

при кроничеокои интоксик/' нии

с5г8ил,нмоль НАДН/мин.на 1мг белка/'

15

* - р<0,05 *# - р< 0,01

У/А коитроя» ка

эВ"

>таиал

12.0

Срок С® оутнаи

ацвталкД»гяд

Статистический анализ также выявил значительное нару- ; шение корреляционных связей при алкоголизации животных. Особенно чётко это наблюдалось при острой интоксикации, когда исчезали корреляционные сеязи исследуемых оксвдоре-дуктаз с каталазой, а другие сеязи были значительно слабее, Дальнейшая алкоголизация приводила к появлению новых взаимодействий меяду активностью ферментов.

Изменения активности оксидоредуктаз сопровождаются, как и при острой интоксикации, нарушением фосфолнпидного состава митохондрий,увеличением содержания ф_¿фатвдилсе-рина (ФС), фосфатвдилхолина (ФХ) и полиглицерофосфатвдов (ПГФ) на 15-й и 60-й дни интоксикации V- уменьшением соде,.; жания ФС, ФХ, фосфатидилзтаноламина (ФЕА-), при увеличении ; ПГФ на 80-е сутки, снижением ФС, сфянгомкелина (СМ) и | увеличением ФХ и ПГФ нч 120-э сутки э-т.-лчиизадга. Нарушения фоофолипидногс состава стбклоточнух фракций могут быть выззапы актьлигиоЛ перокисного окисления л.-шдоз. На проокч. элитное действи" хроническое алкоголизации указывают данные сб увеличении диепоилх конггогат, снк~он"я

иерекпсной резистентности эритроцитов (А.А.Линчевская, 1976\ увеличения содержания малонового диальдегкда (А.К.Врублев-ский о соавт., 1£80; НаппасЪ еЬ в1, 1979).

Обнаруженная нами дисгсоордшгация активности оксидоредук-, таз печени при хронической алкогольной интоксикации может | ириЕестк к развит:-» гипоксической ситуации, к накоплен!® ! нодоекисленных продуктов и, возможно, образованию токсичных I соединений. Так, выявленное нами снижение активности АльИГ I при боле э высоких цифрах активности АДГ, приводит, вероятно, к накоплению ацетальдегида. Аналогичную картину изменений I активности АДГ и АЛ1ДГ при длительной алкоголизации наблюдали и другие исследователи (Б.М.Кершенгольц и др., 1980). ■ 5 результате противоположной направленности изменения ак-( тивности АДГ и АльДГ образуются "ножницы" мевду скоростью I окисления этанола и ацетальдегида, дисбаланс между скоро-I стт га образования и распада ацетальдегида. Набадпемое при

I .

' алкоголизме ^'личение концентрации ацетальдегида в крови | более чем на 80^ обусловлено увеличением соотношения активностей АДГ/АльДГ п-чени (Б.М.Кершенгольц и др., 1980), в результате чего гепатоциты становятся продуцентом ацетальдегида при детоксикапли этанола.

. Учитывая, что непосредственный метаболит этанола -• ацетальдегид в 8-10 раз токсичнее своего предшественника, представляло определешыЁ интерес сравнение эффектов этанола и ацетальдегида на активность митохоцдриальных дегид-рогеназ.

| При сведении эквивалентных по летальной- токсичности ; (1/2ЕЬ зд) растворов этанола и ацетальдегида наблюдалось I более выраженное снижение активности изоцитратдегпдрогеназы 1 под вл.шнпем ацетальдегида, в отличие от действия этанола ! (рис. I). Острая интоксикация ацетзльдегидом вызывала и ' более значительное снетение активности малатдегидрогеназы.

При хронической интоксикации ацеталвдегядом характерным I является некоторое глглбироЕание активности ЛДГ в началь-; ние сроки (15 дноГ) и, вероятно, как результат этого, сне-уонио уровня лактата при повышении концентрации пирувата. , В дальнейшие сроки гзмоненкя актпЕности ЛДГ и её изофер-• ментсв не наблюдалось. Только четырехмесячная интоксикация

• ацетальдегидом вызывала значительное снижение ооуой активности ЛДГ (на 24,9#; р <0,05).

■ Различия и противоположная направленность в действии

! ацетальдегида и этанола позволяют предположив, что опреда-| ленный токсический эффект при алкогольной интоксикации вы-| зываатся непосредственно этанолом до его превращения в ацетальдегид. Следует признать также определенную условность этого заключения, так как при алкогольной интоксикации сдвиги являлись следствием эффектов этанола и некоторого количества образовавшегося из него ацетальдегида, а во' втором случае они вызывались только ацетальдегидом.

Большая выраженность изменений при действии ацетальдегида может быть обусловлена тем, что ацетальдегид нашего реакционноактивнео этанола и является важным перекрестным ЗЕеном как обмена алкоголя, так и многих других метаболических процессов.

Подводя итог исследованиям оксидоредуктаз при алко£олл~ зации, следует отметить, что нарушения активности митохонд-риальннх дегидрогенаэ (ВДГ, да, ВДГ) могут снижать эффективность реокислетш НДД'Н, что приводит к большему накоплению восстановленных субстратов и усиливает токсическая эффект этанола.

Активность оксидоредуктаз печени хибогедс с различной алкогольной мотивацией_

Многочисленные исследования указыЕакт на сложность и многофакторность этиологии алкоголизма. Поворотным мс-мен-том в исследовании патогенеза алкоголизма стало выявление факта генетической предрасположенности животных к употреб-| лению алкоголя. В настоящее время выведены генетические

■ линии мышей, крыс, хомяков с высоким :редпочтением к эта: нслу (ПЭ) и животных, отвергапдих его растьорн, я предпо-

I читанцих воду (ПБ).'Установление этого факта обратило ссо~ > бое внимание исследователей на важность биологических, ми: таболических предпосылок к развитиг алкогольной заЕсси^-с-!та (Ю.М.Остроес£лй, 198С, 1586, 1988).

Для выявления среди беспородных белых крыс животных с различной алкогольной мотивацией использовали метод свобод—: ного выбора между растворами алкоголя и водой. '

Без предварительной алкоголизации выявлено 12, живот! них, предпочитающих этанол (113), Алкоголизация крыс в тече-; | ние I месяца приводила к значительному увеличению (в 3 ра- ; I за) животных ПЭ - до 36,0$, причем как среди самцов ( с 0,2$ до 27,4$)., так и среди самок (о 16,3? до 48,5$).

У особей разного пола установлены определенные различия и в изначальной алкогольной мотивации: если среди самцов крысы ПЭ составили 9,2%, то среди самок - 15,3?-, Противоположная картина наблюдалась в группе ПБ - у самцов особи этой группы доставили 73,1$, а среди самок - 57,7$.

Установлена также определенная зависимость формирования алкогольной мотивации от периода года. Так, при прове, дении эксперимента зимой (декабрь-январь) - 35,2$ самок предпочитали раствори этанола, тогда как в весенний период времени (март-апрель) процент предпочитающих этанол увели--чивался до 57,8$.

Полученные результаты подтверждают представление о том, что при значительной генетической детерминированности алкогольной мотивации, ей формирование зависит от многих внешних факторов - алкоголизации, сезона, условий содержания, питания, стрессовых ситуаций и т.д.

Активность ферментов, непосредственно окисляющих эта- . нол и ацетальдегид, - АДГ и'АльЕГ исследовали при различных условиях эксперимента. Прежде всего было обращено внимание на тот факт, что в период свободного Еыбора между раствором алкоголя и водой у животных, предпочитающих этанол (ПЭ), могут проявиться эффекты этанола, поэтому исследования проводились через длительный срок после введения 1 алкоголя (14 дней) и во-вторых, для выравнивания условий | эксперимента сразу же после свободного выбора ееодили I раствор алкоголя в дозе 4 г/кг как животным ПЭ, так и ! предпочитающим Еоду (ПВ).

! Результаты исследований свидетельствуют, что акткв-! кость АДГ печени до нагрузки раствором алкоголя имоет тен-

; денцию к увеличению у животных ПЭ, в сравнении с крысами

ПБ. Однако после нагрузки раствором алкоголя активность АДГ | становится одинаковой у ПВ и у ПЭ животных как через 24 ча-1 са, так и через 14 дней. Не выявлено существенных различий активности АДГ печени у крыс ПЭ и ПВ обоего пола как без предварительной алкоголизации животных, так и после алкоголизации животных в течение I месяца перед периодом свободного Еыбора. Эти данные приводят к выводу об отсутствии существенной роли АДГ в развитии алкогольной мотивации, а имеющиеся в литературе сведения о повышенной активности АДГ у крыс ПЭ могут быть обусловлены воздействием алкоголя в период свободного выбора животными между раствором алко- . голя и водой.

При изучении общей активности Ал1ДГ печени нами также но выявлено существенных различий при разных условиях эксперимента ни до нагрузки раствором-алкоголя, ни через 24 часа после нагрузки, ни через 14 дней после введения алкоголя. Статистически достоверные различия в активности АльЦГ отсутствуют в печени крыо ПЭ и ПВ разного пола, а также при использовании предварительной алкоголизации и при применении пропионового альдегида в качестве субстрата. Практически одинаковая активность выявлена в митохондриаль-ной и цитозольной фракциях НАД-зависимой и НАДФ-зависимой формах АльДГ. Так как общая активность. АДГ и АльДГ существенно не изменялась, то и соотношение АДГ/АльДГ было одинаковым в группах ПВ и ПЭ. Не отличалась существенно и активность фермента,восстанавливающего ацетальдегид-алздегид-редуктазы. Однако изоферментный состав митохондрий, где происходит окисление основной части ацетальдвгвда.у крыс ПЭ существенно отличается от изоферментного спектра ПВ | животных. Это проявляется в значительно более высоком уров~ | не активности АльДГ-Ш у крыс ПЭ и сниженной активности ; АльДГ-1 в сравнении с аналогичными показателями животных I ПБ. Эти различия в изоферментном спектре АльДГ митохондрий

печени могут существенным образом повлиять на спорость I метаболизма ацетальдегида и различных биогешгх альдеги-5 дов у крыс ПЭ. Первый, достаточно мобильь-й путь реокис-5 ления НАДН, накапливающегося .три окислении этанола, -

реакция восстановления пирувата при участии лактатдегидро-геназы. Исследование прямой лактатдегидрогеназной реакции (субстрат-пируват), обратной реакции (субстрат-лактат) и ; кзоферментного спектра ЛДГ не установило существенных раз- : I личий среди крыс ПБ и ПЭ.

I Основной путь удаления избытка НАДН в цитоплазме - это ' 1 транспорт восстановленных эквивалентов через митохондриаль-| ную мембрану и окисление НАДН в митохондриях. Активность лимитирующего фермента цикла Кребса - изоцитратдегидроге-( казн митохондрий печени как НАД-заЕисимой, так и НАДФ-за-| висимэй форм не отличалась у крыс ПВ и ПЭ. Однако у этих | животных наблюдались существенные различия (р <0,05) в активности НАДФ-зависимой ИДГ цитозоля-фермента, участвую-.щего в гек рироЕании восстановленных эквивалентов для липо-генеза, для реакций микрогомального окисления.

При электрофоретическом изучении множественных форм . [ МИГ установлено достоверное изменение соотношения НАД-за-| висгмых изоферментов МЕГ - снижение активности ВДГ-1 и 1 увеличение активности ВДГ-2, Через 14 дней после этаноль-| ной нагрузки выявились различия в изоферментном спектре, ; НАД-зависимой Г.ЩГ, аналогичные тем, которые наблюдались у ; крыс ПВ и ПЭ до нагрузки этанолом, т.е. более низкая актив! ность ВДГ-1 при повышенной активности ВДГ-2 у крыс ПЭ в сравнении с животными ПБ.

Из Есех исследованных 35 показателей, характеризующих окислительные процессы в печени, выявлены отличия у крыс ИЭ в сравнении с животными ПБ только в изоферментном спект-| ре АльДГ, активности цитозольной НАДФ-зависимой ВДГ, соот-1 ношении изоформ ЩГ и активности глутатионредуктазы. I Возникает вопрос, какая из метаболических осо-

бенностей является первичной, определяющей отличия других ' биохимических показателей.

Представления о взяток, даже опрэделяшюй роли сульф-: гидрильных групп в активности окислительных ферментов привели нас к заключению о необходимости исследования актив-, ности ферментов тиол-дисульфидного обмена.

При изучении базальной активности дпеульфидредуктазы

(ДСР) печени установлена более высокая её активность (на Г 53,5%, в<0,01) у крыс ПЭ, в сравнении с животными ПЬ. I Добавление в пробу цАМФ стимулировало активность ДСР | у животных ПВ, но не влияло на активность ДСР у ПЭ крыс, | хотя она оставалась выше, чем у'ШЗ животных. При более га- ( сокой активности ДСР у животных ПЭ у них обнаружена болео ! низкая активность глутатионредуктазы печени на 9,0% в сравнении с животными ПВ. Активность других ферментов метаболизма глутатиона - глутатионнероксидазы, глутатион-* -трансферазы и гамма-глуташлтранспелтидазы существенно но отличалась у животных ПЭ от соответствующих показателей у крыс ПВ. В наших исследованиях не обнаружено различий в ! содержании глутатиона в печени и интенсивности включения 14-С-этанола в глутатион, |

В ткани головного мозга в целом не выявлено существен- ' ных отличий в базальной активности ДСР и серотонин-стиму- I | лированной активности, но у крыс ИЗ обнаружена более высо- ; | кая стимуляция активности ДСР под действием пАМФ в сравкз- I | нил с тканью головного мозга крыс ПВ.

; В коре головного мозга существенных различий в базаль- | ; ной и ц!Ш-стимулированной активности ДСР у крыо ПВ и ПЭ I ; не обнаружено, но так ко как и в печена активность глута- | ; тионредуктазн ниже у крыс ПЭ (на 40,2$; р<0,01), в срав- | нении с животными ПВ. " |

Аналогичная картина наблкщалась и в ткали промежуточно-) ' го мозга: отсутствие различий в базальной и цДМ5-стимулиро-( ванной активности ДСР и более низкая активность глутатион- > редуктазы (ГР) у животных ПЭ (на 53,7$; р <0,05) в сравне- } нии с крысами ПВ. В мозжечке активность ДСР как базальная, 1 так к цАМФ-стимулированная, не отличалась у крыс ПЭ и ПВ. ! .

В ткани головного мозга у животных ПЭ установлено бо- | . лее низкое содержание фракции ГР-П. Это уменьшение более I | значительное на фоне сниженной общей активности ГР. В тка- | ни промежуточного мозга существенных отличий в изофэрмент- | ном спектре глутатионредуктазы не обнаружено.

Таким образом, наиболее характерным признаком, отличающим, крыс с алкогольной мотивацией, является более низкая активность глутатионредуктазы как в печени, так и в

различных отделах головного мозга. Более низкая активность I

I

глутатионредуктазы у крыс ПЭ может приводить к накоплению перекисей липццов при воздействии алкоголя, а под их влиянием возможна трансформация различных ферментов, как обмена алкоголя, гак и нейромедиаторов (Б.З.Горкин, 1984).

Влияние стресса на активность ферментов _метаболизма этанола_

Экспериментальные данные указывают на увеличение потребления алкоголя под воздействием стресса ( н.Е.Регг et а! 1980; Н.А.Христолюбова с соавт,, 1986; О.Е.йоокшап , 1987; Е.А.Громова и др., 1988), что может быть обусловлено изменением его метаболизма, повышением активности ферментов окисления этанола.

В наших исследованиях при воздействии иммобилизацион- I ного стресса активность алкогольдегадрогеназы печени не подвергалась существенным изменениям. Только на 14 день воздействия ежедневной 2,5-часовой иммобилизации наблвда-лось некоторое увеличение активности АДГ. | При исследовании активности других ферментов окисления | этанола - каталазы, ксантиноксидазы, МЭОС существенных из! менений под влиянием эмоционального стресса также не выяк-' лено. ■ •

Воздействие, стресса проявилось на активности альдегид-дегидрогенази (АльДГ) и ей множественных форм. Если одно- ; ! кратная иммобилизация не вызывала достоверных изменений I АльДГ митохондрий, то более длительное стрессовое воздей-| ствие (7 и 14 да 2) приводило к снижению активности фермен-| I та на 28,3% и на 61,7$ соответственно. Активность АльДГ ! ; цитозольной фракции, наоборот, существенно снижалась через | :24 часа после однократного воздействия, а в последухщие I I сроки оставалась на низком уровне, но статистически не от- ■ | личалась от данных контрольной группы животных.

Снижение активности АльДГ митохондрий обусловлено, прежде-всого{ снижением фракции \лцЦГ>4, как установлено на-: ми при исследовании изоферментного спектра АлЩ1 методом изо'электрического фокусирована..

Эти результаты подтверждаются и данными ионнообменной I хроматографии. Изоферментний спектр АльДГ печени крыс, под-, вергнутнх иммобилизацконному стрессу, существенно отлича- I ется от спектра АльДГ контрольных животных. После воздействия 2,Б-часовой иммобилизации в течение 14 дней уыеньша- ; ется удельная активность всех изоформ АльДГ, а хроматогра- | фические фракции 3 и 46 практически не обнаруживаются.

Из полученных результатов следует, что стресс наиболее | существенное влияние оказывает не на ферменты, окисляидие этанол, а на альдегиддегидрогеназу, участвующую в метаболизме продукта его окисления - ацетальдегида.

Учитывал выраженные изменения активности АльДГ под влиянием стресса, .представляло интерес исследовать некоторые кинетические свойства этого фермента.

Под влиянием стресса происходит снижение активности изоформн АльПГ^ при рН среды инкубации от 7,0 до 11,0 в сравнении с контролем, значение К„ для ацетальдегида была | выше у стрессированных животных, чем у интактных крыс; на-| блвдаются различия и в значении Ушазс ■ альдегидцегидроге-I назной реакции в печени этих животных. Полученные резуль-| таты указывают на то, что в печени крыс, находившихся в ! стрессовой ситуации, снижается сродство АльДГ к субстрауу-! ацетальдегиду, в результате чего уменьшается максимальная 1 скорость альдегиддегидрогеназной реакции. | Таким образом, различными методами установлено, что ' при стрессе не только снижается общая активность АльДГ, но , и изменяется соотношение и свойства её изофермэ'нтов. Поскольку АльДГ окисляет не только уксусный, йо и другие аль; дегиды, снижение активности АльДГ я изменение её изофер-' ментного спектра может играть существенную роль в развитии ' стресса и адаптивных реакций организма.

Стрессовые ситуации оказали воздействие не только на I ферменты первых этапов окисления этанола, но и на другие ! энзимы,- действующие на продукты последующих этапов метабо- ) лизма, способствующие реокисленшо КАДН.

Однако наиболее выражешще изменения под влиянием .; стресса наблюдались в активности АльДГ. Обнаруженное нами •

существенное снижение активности этого фермента при незна- I читальной тенденции к увеличению активности АДГ ведет к уве-1 личонию отношения активностей АДГ/АльДГ. Следствием этого может явиться накопление ацетальдегвда, характеризующегося высокой токсичностью, который может повлиять на различные

метаболические процессы.

'

Совместное воздействие стресса и алкоголизации _на активность оксилоредуктаз печени

Противоречивость мнений о взаимодействии стресса и алкоголя, недостаток сведений о нарушении при этой метаболических процессов явилось обоснованием следующей серив вкспв-г ■ рименталышх исследований.

Полученные результаты показывают, что активность АДГ | печени существенно не изменяется в течение двухнедельного : воздействия алкоголизации, стресса и их сочетания. Хотя че-. [ роз 14 суток воздействия на&здалась тенденция н повышению , ; активности АДГ при алкоголизации, в меньшой степени это 1 рааалось при отрессе и при совместном действии стресса и | 1 й-ккохоля. i

; Следует обратить внимание, что совместное действие ал; коголя и стресса проявляется в изменении активности других ! ферментов метаболизма этанола, что на набявдалось при раз; дельном действии. Так, активность ксантиноксвдазы увеличи- | , вается на 31,65? (р< 0,05) через 24 часа после внутрижелу- ; ' дочного введения раствора этанола и иммобилизации крыс на • спине. В дальнейшие сроки активность этого фермента не из: менялась. В противоположность этому, существенных изменений 1 активности катагазы не наблвдалось в начальные сроки (I и

суток), но она значительно снижалась (на 56,1$, р<0,01) : через 14 суток совместного действия алкоголизации и стресса; ; Установлена снижение в атих условиях активности АльДГ .) ! митохондрий сачени на К суткл воздействий, такой «е пони- | , генный уровень АллДР митохондрий, иаблвдадея уже ца 7 сутки,; 1 однако-это снижение бнло статистически на существенно. Уменьшение активности АльДГ пск-сошестши воздействии стресса и алкоголя было мь..ее '"выражено, чем только при

*

действии иммобилизации. ;

Пониженная активность АльЦ" при совместном действия : стресса и алкоголизации будет способствовать накоплению | ацетальдегида, увеличивая токсичность алкоголя в этих уело-^ виях. Кроме того, пониженная активность АльЦГ может по&пп- ; ять и на метаболизм биогенных альдегидов, образующихся из ; аминов, которые играют важную роль как в развитии -алкоголь-;, ной зависимости (И.П.Анохина и др., 1980), ^ак и в форми- I роЕании алкогольной мотивации. |

Изменение активности ксантвноксццазн и каталазн может повлиять не только на метаболизм этанола, но и способство- | вать нарушен™ процессов перекисного окисления липидов, | увеличивая тем самым токсичность алкоголя, |

Существенным изменениям при совместном воздействии ; стресса и алкоголя подвергается активность и оксшгоредуктаз| последувдих этапов окисления. !

I Как и при действии только стресса, при его сочетании с ! ! алкоголизацией также наблвдается снижение активности НАД-. ! : зависимой 11ДГ на 7 сутки, но отличает совместное действие • I исследуемых факторов более низкая активность в этот срок ! ; НАДФ-зависимой ИДГ в митохондриях°( на 20,6$).Активность !

этой формы ИДГ в цитозольной фракции остаётся без изменений,^ ' также как и активность ЕАД-зависимой формы Г.ЩГ. Как и при ( воздействии алкоголизации, яри ее сочетании со стрессовым воздействием, наблюдалось снижение активности НАДФ-зависи- ' : мой ВДГ в цитозольной фракции на I и 7 сутки исследования. ] НАДФ-завйсимая ВДГ является одним из поставщиков НАДФ'Н; ' во внемитохоцдриальное пространство гепатоцита, и снижение ' активности ВДГ может привести к понижению уровня НАДФ'Н в ■ I : цитозоле, необходимого для системы микросомального окисле- ! • ния. Б результате этого может снижаться интенсивность окис-! • . леяия этанола е гепатоцнте и усиливаться интоксикация.

Снижение активности НАДФ-ВДГ митохондрий, наблюдаемое нами при совместном действии алкоголизации и стресса, будет] способствовать уменьшению НАДФ в митохондриях. Как и макси •' малыше изменения активности митохондриальных дегидрогеназ, снижение активности глутатиощ;едуктазы ари совместном действии алкоголизации и стресса наблюдалось через-7 суток,_

I причём это снижение било более выражено, чем при действии только стресса. Вероятно, как мобилизацию адаптивных механизмов мо*сно рассматривать увеличение содержания глутатиош через 14 суток совместного воздействия алкоголизации и стресса, но это повышение было в меньшей степени, чем при действии только эмоционального стресса. Включение 14-С-гли-цина в глутатион при совместном действии алкоголизации и стресса сохранялось на уровне контрольных животных, в отличие от воэдейотвкя.иммобилизации, когда оно значительно снижалось.

Корреляционный анализ показывает, что алкоголизация, стресс и их совместное воздействие вызывают значительное ) нарушение связей, снижение их числа. Совместное воздействие алкоголизации и стресса в течение 14 суток приводит к по- | явлению новых связей средней степени, что мы рассматрива- | ем как проявление дискоординации метаболических процессов,| так как остаются в полной изоляции такие ферменты как ; ксантиноксидаза (при стрессе) и глутатионредуктаза (сов- ( \ меотное воздействие) (рис. 3). !

! Полученные результаты свидетельствуют о том, что при : совместном воздействии алкоголизации и стресса наблюдается 1 более расширенный спектр метаболических нарушений, чем при | их раздельном действии. Причём метаболические нарушения, : характерные для одного фактора (алкоголизации или стресса), ' в основном, проявляются и при совместном их действии. Так, , I снижение активности АльДГ митохондрий и цитозоля, НАД-за- • \ висимой ИДГ, глутатионредуктазы, характерное для эмоцио- ■ | нального стресса наблюдалось в те же сроки и при его сов- ; ! местном действии с алкоголизацией. ;

! Таким образом, расширение диапазона метаболических \ ! нарушений, в результате сушации эффектов, их более значи-! |. тел^нак выраженность, появление новых эффектов совместного |; действия алкоголя: и стресса позволяют наги Еыдвинугь пред- I ' положение, что ачкоголизацин организма в условиях стресса : усиливает аго кеолагояс.ш .гае вфректы и, наоборот, стресс п вышает токсичность этанола. Бти результаты приводят к заключению, что е ;коголь не способствует более сшстрой . адаптации в услов*лх стресса, а, значит, алкоголь не об а-

чени через 14 суток воздействия алкоголизации а стресса.А-кон- ■ троль,тЗ-а1Коголь,В-стресс,Г-стресс^а.'1коголь.1-ЛДГ,2-АльДГ(цито-золь),3-АльДГ(митохондрии) ,4-ИДГ-НАДФ-завгсимая(цитозоль) ,5-ИДГ-НАДФ-зависимая( митохондрии), 6-ИДГ-НАд-зависи?лал,8-каталаза,9-ГР, Ю-ксантиноксидаза,П-ЬЩГ-ПАД-зои- миаяСмитохондрии) ,12-;Щ'-Н.'ЛФ-зависимая( митохондрии) ,13-МДГ-НАЦ-зависимая(цитозоль) ,14-МДГ-НАДФ--зависимаяСшггозоль). . • .

дает адаптогеншм, антистрессорным действием. Об зтом же свидетельствуют результаты исследования массы животных и надпочечников в течение эксперимента. Так, при совместном действии алкоголя и стресса масса надпочечников повышается на 41,7/3.через 7 суток и еще в большей степени через 14 су-гон - на 67,9$, Такое значительное увеличение массы надпочечников было статистически достоверно не только по отношению к контрольным животным, но и в сравнении с животными, подвергнутыми только эмоциональному стрессу (рис. 4).

Ряс.4. масса надпочечников крыо при

алкоголизации и иммобилизационном • стрессе <^мг/10Ог массы животного)

40

(мг/100г моссы

lkMieTH.ro)

_1_

* - р<0,05; **-р<0,001

1////Ц' - контроль ^^ - алкоголь

14 Срок суткам^ — отр,со

Таким образом, все эти результаты свидетельствуют, что алкоголь обладает в большей степени стрессорогенннм действием, а не адалтогенным эффектом.

Использование определения активности оксидоредуктаз и других биохимических тестов для выявления алкогольной мотивации и интоксикации при воздействии ___экстремальных Факторов_

% Развитием экспериментальных исследований явилось изучение б. охимических показателей у представителей коренного

и миграционного населения Крайнего Севера и в органах лиц. | погибших от острого алкогольного отравления. ;

При этом установлено снижение чувствительности альфа-1-| адренорецепторов и некоторое увеличение реакции бета-адрено-| рецепторов у мужчин коренного населения Крайнего Севера, что может лежать в основе предрасположенности к алкоголю. Одно- | временно с изучением чувствительности адренорецепторов для / выяснения особенностей формирования алкогольной мотивации у населения Крайнего Севера было проведено анонимное анкетное обследование подростков коренного и миграционного населения Таймыра Красноярского края. Анализ анкетирования показал, что 82,6$ подростков - коренных жителей употребляют спиртные напитки, не употребляют вообще - 17,4$, тогда как среди подростков миграционного населения не употребля- | ют алкоголь в 2,раза больше - 38,9$. Анализ результатов ! указывает на более раннее приобщение к алкоголю жителей Крайнего Севера. Это определяет необходимость разработки основ профилактики алкоголизма среди практически здорового населения с помощью чувствительных методов, позволяющих су-I дить б предрасположенности индивидуума к употреблению алко-! голя. Анализ результатов проведенных исследований позволил ' представить эти методы в инструктивном письме для врачей- • ; наркологов регионов Крайнего Севера, утвержденном на Респу-; бликанском уровне. "

Для разработки биохимических тестов дифференциальной I диагностики смерти от острого алкогольного отравления и ' причин другого генеза, в частности, ишемичоской болезни сердца, проведены исследования на секционном материале. ; Как и при экспериментальной острой интоксикации, при смерти ; от алкогольного отравления выявлены характерные нарушения |. : активности не столько ферментов метаболизма этанола, сколь^|. ко ферментов, окисляющих восстановленные эквиваленты и осу-) ществлянлих их транспорт. Установлено, что наиболее харак- | терным для острого алкогольного отравления является измене-! ние соотношения активностей НАД- и НАДФ-зависимых форм МЙГ.| Так, изменение соотношения активностей этих изоформ в гипо--таламусе при остром алкогольном отравлении и ИБС имеет про-' тивоположнуго направленность, что обосновывает целесообраз- ;

'оэ • м

Лшогенэз

Торможение НТК

АцетадКоАч

т

г

НАД'Н

АльДГ

НАД

Ацетальдетаг

л

ляг

М50С

НАД'Н

НАД

НК

Транспорт восстановленных. эквивалентов

Ксантин-оксвдаза

ЭТАНОЛ

Индукция

микросомальных

оксидаз

Глутатион окисленный

Глутатион восстановленный

Активация

перехшсных

процессов

Ингибирование ферментов _НТК

Накопление адетшгьдагида

Ингибирование синтеза _ацетальдегида

Низкий уровень эндогенного ацетальдегида

Алкогольная мотивация

Нарушение структуры и функций мембран

Рис.5. Схема нарушений окислительно-восстановительных процессов при алкогольной интоксикации

>

ность определения активности этих дегидрогеназ для дифферен-циг тьной диагностики в практике судебно-медицинской экспертизы. На основании этих данных подготовлены практические рекомендации.

Таким образом, результаты исследования указывают на важнейшую роль активности оксидоредуктаз печени и ферментов тиол-дисульфдцного обмана, как в развитии алкогольной интоксикации, так и в формировании алкогольной мотивации, особенно в условиях стресса. На основании результатов проведенной работы предлагается схема (рис. 5), демонстрирующая биохимические механизмы формирования алкогольной мотивации. Б соответствии с нашими данными метаболической ос-ноеой предрасположенности к алкоголю является низкий уровень ГР, что предполагает и более низкую скорость образования восстановленного глутатиона. При алкоголизации дефицит глутатиона лимитирует скорость окисления ¿ацетальдегида. Накопление высоких концентрация ацетальдегида в этих условиях тормозит егс синтез. Развивающаяся в результате этого в дальнейшем недостаточность эндогенного ацетальдегида яв-j ляется основой формирования алкогольной мотивации. | ■ Б формировании предпочтения,к алкоголю может играть . ' роль стрессовое воздействие, снижавдее как общую активность ; АльДГ, так и нарушающее её изофермвнтный спектр и кинети-, ческие свойства, что приводит к диспропорции АДГ/АльЦГ и i накоплению ацетальдегида с последувдим ингибированием синтеза и понижением его эндогенного уровня. ' ; Из изложенного следует, что метаболические эффекты i этанола не уменьшаются, а, наоборот, увеличиваются, и.сле-' довательно, совместное воздействие стресса и алкоголя ока; зывает более выраженное токсическое действие на организм. .

ВЫВОДЫ j

I. Острая алкогольная интоксикация вызывает снижение в пе- | чени активности митохондриальных дегидрогеназ - НАД-за- ! вислых ИДГ и МИГ, перераспределение изоферментного ! спектра ЛДГ, проявляющееся в увеличении анаэробной ¡ фракции ЛДГ—5. Активность цитозольных ферментов, непо- '

средствекно окисляхщих этанол-АДГ, ксантиноксидаэы, ка-талазы, а такие альдегиддегидрогеназы существенно не изменяется.

2. Снижение активности митойовдриальных дегидрогеназ при острой интоксикации обусловлено мембранотропным действием этанола, о чём свидетельствует изменение фосфолипид-ного состава митохондрий, увеличение свободной активности лизосоыальных ферментов.

3. Хроническая алкогольная интоксикация сопрововдается увеличением активности ИДГ, ГДГ, НАД-зависимой ЩГ, ЦО на 15-30-й дни алкоголизации и нормализацией их активности в последующие сроки. Более длительная алкоголизация (90, 120 дней) вызывает увеличение активности ЛДГ-5 и изменение фосфолипидного состава митохондрий.

4. При алкогольной мотивации наблюдается более высогш активность изофермента АлъДГ-Ш при отсутствии существенных

| различий в общей активности АДГ печени, а также коры го-| ловногб мозга, гипоталамуса и промежуточного мозга. Выявлены отличия у животных с различной алкогольной мо~ | тивацией в активности НАДФ-зависимой ИДГ цитозоля, изо-I ферментном спектре НАД-зависимой МДГ. Наиболее характер! ным признаком алкогольной мотивации является более низкая активность глутатионредуктазы как в печени, так и в различных отделах, голоеного мозга. !

;5. При значительной генетической детерминированности алко- | I гольная мотивация быстрее развивается у самок,, в весен- !

ний период, чем в зимний, а также в условиях алкоголиза-| ! щш и стрессовых ситуаций; следовательно,зависит от пола,| сезонности, воздействия факторов внешней среды. |

6. Эмоциональный стресс вызывает снижение активности АлцДГ | ; митохондрий печени, изменение её изоферментного спектра ' ! и кинетических свойств, а также снижение активности НАД- |

зависимой ИДГ и ГР цитозоля, что может влиять на форми- I роЕаниа алкогольной мотивации. - •

7. .Совместное воздействие алкоголизации и стресса приводит ;

к значительным изменениям активчеотл иорментоэ окислы:*>• этанола - ксаятиноксидозн, каталазв, а такяо ЧАЛ- к НАДФ-завксимой ЛДГ митохондрий, НАДФ-завясииоГ. ЩГ <• 1 глутатионредуктазу пнюзоля печени. Это свидйтг>льстг.у,.:>т ; об увеличении токсичности этанола в стресссгоп ситуации, что подтверждается более значительным увеличением массы \ надпочзчников и снивепием массы зиготннг в этих у^ювэт?.«

8. Обследование коренного к миграционного населения регио- \

нов Крайнего .Севера о использованном биохимических и 1

физиологических ТОСТОВ ВКЛЕИЛО у НИХ ОТЛЕЧЙЯ л Т)'ВО Tri?- \

! тельности и 3 -йдреноретдепторон и изменения и к гг> !

I акции при длительном потреблении алкоголя. I

i ..

; 9. Снижение активности ЕАД-зашскмой ЩГ в косе головього j

| мозга и увеличение отношения е? НАД- и НАДФ-зависимкх I

j изоформ в гипоталамусе при остром отравлении этиловым j

j алкоголем,.установленное при исследовании секционного

! материала, позволило рекомендовать использование их orr- j

1 редаленил для дифференциальной диагностики в судебно-

1 медицинской практике. ;

! Внедрение результатов исследования в практику

1. ИоЕые данные с нарушении активности окемдередуктаз и ; соотношения их изоформ пру алкогольной интоксикации и ! формировании алкогольной мотивации послужили основой

для подготовки методических .рекомендаций, которые используются в учебном процессе на кафедрах Челябинского ме- ! д!Щ;'.нского института (патологической физиологии, биохи--ш), Читинского медицинского института (биохимии, пси- : хиатрии, патологической физиологии), Тюменского медицин-' ского института (биохимии), Башкирского медицинского кн-; статута (биохимии, патологической физиологии, Тяо.'/ако- ; логии).

2. Результ-.тк исследования особенностей формироьаикч алко- ; гольчой мотивации е условиях Крайнего Севега использованы для написания инструктивного письма, утвержденного ПКЦ 'по наркологии КинистерстЕа здравоохранения Росскй-

ской Федерации и рекомендовано для врачей наркологичес- : ких диспансеров.

5. Экспериментальная модель, разработанная на основании данного исследования, утверждённая в качества рационализаторского предложения отраслевого значения на Республиканской проблемной комиссии, пригоняется в научно-исследовательской раоотв кафедр • биохимии'и биологии Омского меди- : цинокого института.

4. Данные о нарушении активности оксидоредуктаз и соотношении их изоформ при остром алкогольном отравлении использованы для подготовки методических рэкоглэндаций, представленных в ЩЦ ШЗ Российской Федерации.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ

1. Изменение общей активности ЛДГ и её изоферментов как показатель адаптации организма в условия* интоксикации ацэтадьдегидом // Механизмы адаптации и компенсации физиологических функций в экспериментальных условиях.-Томок, 1977. - С.249 (Соавт. К.Я.Груздева, С.Н.Афонина).

2. Фосфолипвдный состав субклеточных фракций печени и миокарда при острой интоксикации // Механизмы адаптации и компенсации физиологических функций в экспериментальных условиях.-Томск, 1977. - С.248.

3. Воздействие этанола и ацетальдегида на активность тканевых- лактатдагидрогеназ и их изоферментов // "Биохимия экстремальных состояний". Материалы II зональной конф.

. биохимиков Западной Сибири и Урала.-Томск, 1980.-С.42-43. ' (Соавт. К.Н.Груздева, С.Н.Афонина, В.Г.Купор).

•Iк.Активность кислых и щелочных фосфатаз в условиях этаноль-. ной и ацетальдегидной интоксикации // "Биохимия экстремальных состояний". Материалы II зональной конф. биохимиков Западной Сибири и Урала.-Томск, 19Й0.-С.49-50.(Соавт. Н.Р.Светенок).

Активность лизосомаиьных ферментов печени и миокарда при *воздейагвин на организм этанола и ацетальдегида //Струк-. аура и функции лизосом. Тезисы дом. 11-го Всесоюзного Ъгыозиума.-Новосибирск, 1У80.-С.57 (Соавт. К.Н.Груздева,

аб

А.М.Дмитриева, И.Р.Спетенок).

6. (Сравнительная характеристика влияния этанола и ацеталь-дегида на некоторые биохимические показатели // Патогенетические, юшнико-терапевтичоские и эпидег.пюлогг.чес- ■ кие аспекты изучения алкоголизма. Научные труда .'з 140.-Омск, 1980. -С. 25-27 (Соавт. Б. А. Антиф ьева, Л. ¡Л. Дмитри о -ва).

7. Активность лактатдегидрогеназы и её молекулярных форм з тканях при воздействии этилового спирта и ацетальдегяда// Алкоголизм и неалкогольныэ токсикомании.-;;1Л980.-С.31-36. (Соазт. К.Н.Груздева, С.П.Афонина, В.Г.Купер).

8. Влияние острой и хронической интоксикации на активность кислоЛ и щелочной фосфатаз //Там же.-С.21-27.

9. Состояние энергетических процессов в печени в динамике острой алкогольной интоксикации // Тезисы докл. 3 конф.

■ биохимиков республик Средней Азии и Казахстана, т.2 "Биохимия человека и животных".-Душанбе,1981.-С.93.(Соавт. К.Н.Груздсва, С.В.Мусихина, Б.Л.Антифьера). .

10. Проявление метаболической адаптации в различные период** алкогольной интоксикации //Тезисы докладов ¿11 Всесоюзной конф. по адаптация.-Ашхабад,19Ы,-С.129-130.(Соавт. К.Н.Груздева, В.Г.Купор). /

■И.Метаболические эффекты апомор^ина при алкогольной интоксикации //Обмен и регулярные эффекты моноаминов»-Красноярск, 1981.-С.135-139.(Соавт.К.Н.Груздева, В;Г.Купор, Б.А.Антифьева).

12. О роли комплексных клиншсо-экснерименталышх доследований в изучении алкоголизма //"Алкоголизм и алкогольные неарозы". Тезисы докл. £ съезда невропатологов и психиатров -Молдавии, т.£1,-Кишинёв,1981.-С.160. (Соавт.Н.П. Стацэнко, К.Н.Груздева, М.Г.Усов).

13. Модель алкоголизма как основа для разработки обоснованного лечения в различные периоды заболевания //Сборник работ Омского гарнизонного госпиталя, посвященный ХХУ1 съезду .ЛСС. - Омск, 198[.-С.136-138.

14. ГепатотоксическЬе действие этанола по данным изучения метаболизма углеводов и лилидов, - глава в кн. //"Эта* нол и обмен веществ". - ,Линек, 1982.-С.88-103 (Соавт.

К Л, Груздева). ;

i'"'. Соотношение свободных нуклеотидов и активности дегидро- | геназ при острой алкогольной интоксикации //Патохимия • обмена веществ к механизмы его регуляции. -Тюмень,1982.-: С.8Л-84 (Соавт. К.П.Груздева, Л.М. Дмитриева). I

'6. Некоторые .показатели лишщного обмена в различные нерио-; дк форьгарс isHi'Ji пристрастия к алкоголю у крыс //Патохи- ! мая обмена веществ и механизмы его регуляции.-Тюмень, { К8?.-С. 82-63 (Соавт. Е.А.АнтифЬбва).' I

Г-'. Состояние обменных процессов в динамике иодострой алко- i гольной интоксикации // "Алкоголизм и неалкогольные ; -юксвкомании". - 1.1., 198.?.-С. 105-1(77. j

1Б. Характеристика легальной токсичности и морфологической ; картины некоторых органов животных при введении препа- f рата апоморфина в спирте // Экст.емалыгее и терминаль- i ные состояния. - Омск, 1982.-С. '

19. Метод выявления животных, предпочитаыцнх этанол или во- i ду // Изобретательство и рационализаторство в медицине.-; Снек, 1982.-С.62-63. •

?ч. Исследование активности сукцинатдегщрсгеназы и' малат- s дегидрогеназы печени крыс, предпочитающих этанол и.во- ■ ДУ // Тезисы ЗУ Всесоюзного сиш. по медицинской энзи-мологии. - Алма-Ата, 1983.-С.£2 (Соавт. К.Н.Груздева, ! Ь.Г.Кулор." С,£.Муснхияа). .j

21. Состояние энзиматического профиля и развитие алкоголь- j пой мотивации //"Проблемы и перспективы экономического

и социального развития". - Новосибирск, 1983.-С.28-30.

22.-Активность алкогольдегвдрогеназы и носпецифических к этанолу дегидрогеназ печени крыс со сформированной алкогольной мотивацией // {Материалы Советско-финляндского

' симпозиума "Нейропсихофарыаколопм и биологические аспекты алкоголизма". - М,,1983.-0.20 (Соа.ет. К.Н.Груздева) .

23. Применение изоэлектрического фокусирования для изучения изофэрментного спектра алкогольдегидрогеназы .и ачьде-гиддегвдрогеназы // "Хроматография в биологии и медицине" . - M.,.1983. - °,4Ь (Соавт. К.И.Груздс.л).

| 24. Состояние метаболических процессов при алкогольной мо-| тивации //"Клинические и организационные вопросы нарко-| логической помощи в регионе С 1бири и Дальнего Востока"г [ Благовещенск, 1984.-С.103-106.

| 25. Роль этанола как дестабилизатора субклеточных мембран и | метаболических реакций в процессе развития алкогольной ; зависимости // Биологические основы алкоголизма (Сб. : научн. тр.). - М., 1984.-С.59-64 (Соавт. К.Н.Груздем). : 26. Сравнительная характеристика множественных форм малат-! дегидрогеназы и фосфолипидного состава мембран мито-I хо1щрий печени животных, предпочитавдих этанол или воду // Биологические мембраны и энергетика организма в норме и при патологии. - Саратов, 1984.-С.46-50 (Соавт. К.Н.Груздева, В.Г.Купор).

■ 27. Экспериментальные подходы к изучению механизма формиро-

вания алкогольной мотивации // Биологические и медицинские аспекты алкоголизма. - М., 1984,-С.54-59 (Соавт. К.Н.Груздева). , !

! 28. О влиянии аломорфина на некоторые биохимические локаза-I тели у экспериментальных животных при алкогольной ин- ; , токсикации и значение этих исследований в практической наркологии // Алкоголизм и йеалкогольные токсикомании.-М., 1984.-С.127-129 (Соавт. К.Н.Груздева, Б.Г.Купор, Б.А.АнтифьеЕа).

29. Полиморфизм оксидоредуктаз при формировании алкогольной

■ мотивации // Биохимическая экология. Экспериментальная клиническая биохимия. -Свердловск, 1985.-С.24-28 (Со! авт. Б.Г.Купор).

30. Метод выявления алкогольной мотивации животных // Изобретательство и рационализация в медицине, - Омск, 1985.-С.46-47. '

31. Энзимные констелляши печени при формировании алкоголь-ной мотивации в эксперименте // Тез. докл. Всесоюз. симп. по медицинской энзимологии. - М., 1986.-С.57 (Совет. К.Н.Груздева, Б.Г.Купор).

32. Сравнение хроматографического и электрофоретического методов разделения изоферментов малатдегидрогеназы // "Хроматография в биологии и медицине". ?Латериалы мелоту-

народного симпозиума. - M., 1985,-С.25.

33. Активность дисульфидр едуктазы и глутатионредуктазн у крыс с алкогольной мотивацией // Тез, докл. 1У конф. биохимиков республик Средней Азии и Казахстана. - Ашхабад, IS86. - С.86 (Соавт. К.Н.Груздева).

34. Ацетальдегид-модификатор окислительно-восстановительных х:роцессов // "Здоровье человека в Сибири". Материала ; краевой научно-практической конф. молодых ученых и спе- ; циадистов. - Красноярск, 1966.-С.41-42 (Соавт, Т.Б.Ели- ' нова).

• 35. Активность аньдегвдцегидрогеназы и альдегвдредуктазы | при йммобшшзацнонном стрессе // "Актуальные проблемы

' алкоголизма". Тезисы докл. Всосоюз. конф, молодых уче- ' пых и специалистов. -Киев, 1986.-0,23 (Соавт, А.В.Се- ; мочкин).

36. Моделирование алкогольной мотивации в эксперименте и ; характеристика спектра дегвдрогеназ печени // "Клиника : и механизмы метаболических структурных нарушений при алкоголизме". - Омск, I986.-C.6I-66 (Соавт. В.Г.Куаор).

37. Активность дегвдрогеназ печени крыс при острой алкоголь-лой и ацетальдегидной интоксикации // "Клиника и меха- :

• низмы метаболических и структурных нарушений при алко- j голпзме" -Омск, I986.-C.49-5I (Соавт. Б.Н.Ельцош, I Г. В, Блинова ),

.36, Состояние антмоккслительной системы у киеотных с различной алкогольной мотивацией // "Особенности липвдного обмена в условиях Сибири и Дальнего Востока о учетом быто-' вых и лицевых факторов".-Чита, I987.-C.I6I-I62 (Соавт, •Г,А.Лопухов, С.Е.Драгина).

;39. Способ Ешьления киеотных на предпочтение этанола воде // Изобретательство и рационализация в медицине. Респ.

I . сб. науч. тр. - М,, 1987. - С.18-19.

40, Этанол как дестабилизатор субклеточных мембран и метаболически процессов в гепат^цитах // Процессы биоэнергетики и сгруктурногфунквдональные свойства биологичес-1UDC мз^бран в норме й в условиях патолог«!, - каратов, X IS87.-C.II3-II7 (Совет. К.Н.Груздьва).

141. Соотношение НАД и НАДФ-савкоимых дегмдрогеназ в уолсгк-| ях стресса и острой алкогольной интоксикации / Алкоголизм. Респ. сб. научн.трудов. - ГЛ., 1980.-С.69-72. : (Соавт. К.Н.Груздева', В.Г.Купер). 42. Фермбнты окисления этанола в печони животных с р.?.элич-1 . ной алкогольной мотивацией и при воздействии иммобили-:' защитного стресса // Б Бсесоыз". съезд невропатологов,

психиатров и наркологов. - М., 1008.-С."13-345. ■43. К характеристике систем транспорта восстановленных экви-'

Еалентов при алкоголизации и 'формировании алкогольной ! мотивация // "Биохимия - медицине".Материалы Всесоюз. ; конф. - Ленинград, 1988,-0.60-61 (Соазт. К.Н.Груздева,

B.Г.Купор).

■44. Активность оксидоредуктаз печени крыс с различной алко- -гбльной мотивацией // Ред. ж. "Волр. мед. химии".-1989.-■ С.10. Доп. в ШШТИ 11.09.69. И 5749-В-9.

45. К характеристике чувствительности адренорецептороз при алкоголизме у населения Крайнего Севера // Проблемы наркологии. Тез. докл. - Душанбе, 1989.-С.61-63 (Соавт, К.Н.Груздева, Г.А.Лопухов, А.В.Семслкин).

46. Активность ферментов метаболизма этанола и ацетальдоги-да при стрессе и алкогольной интоксикации. .Ред.ас. фав-макол. и Т0КСИК0Л.-1989,- 4.-0.127. Деп. в ВИНИТИ. 22.06.88, № 4998-В (Соавт. К.Н.Груздева, А.В.Сёмочкин,

C.Е.Драглна).

47. Особенности потребления алкогольных напитков подростка- . ми в условиях Крайнего Севера // Тозисы докл*. Респ. семинара. .- Красноярск, 1990.-С.154-155 (Соавт. Г.А.Лопу- • хов, С.С.Титова).

48. Влияние этанола на активность некоторых оксидоредуктаз в печени крыс,' подвергшихся стрессу. Деп. в ВИНИТИ •• 19.03.91, № П92-В91 (Соавт. К.Н.Груздева, Б.Д.Конвай). ;

. 49. Ферменты окисления этанола й его метаболитов при острой алкогольной интоксикации и' ишобйлизацконном стрессе // Бопр. наркол. - 1991. - .':» 4.-С.2-4 (Соавт. К.Н.Груздева, 4 В.Г.Купор).

50. Метаболические аспекты взаимодействия стресса а алкоголя //Метаболяческие, морфологические и психо-согиальнке

аспекты метаболизма. Сб. науч. тр. - Омск, 1991. -С.4-8. (Соавт. К.Н.Груздева).

51. Активность ферментов эритроцитов в диагностике алкоголизма // Метаболические, ыорфогистохишческие и психосоциальные аспекты алкоголизма. Сб. научн. тр. - Омск, 1991. - С.50-54. (Соавт. В.Г.Купор, К.Н.Груздева, И.П.Алгазин, Г.А.Лопухов).

62. Множественные формы адьдегиддегцдрогеназы печени при воздействии эмоционального стресса // Обмен веществ в норме и патологии. - Тюмень, 1992. - С.21 (Соавт. К.Н.Груздева).

Сдано ь печать 30.09.92. «оршт 60хЬ4 1/16. Ьум.тип. & 3. •Печать Офсетная. Уч.-изд.л. 2.Ц0. Тирак 100. Заказ 6Й2.

Картодитогра^я Омского СХЦ, им. С.М.Кирова, Ошск-й, Цибаковокая, 4