Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РОЛЬ АУКСОГЕТЕРОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ В ЭТИОПАТОГЕНЕЗЕ БОЛЕЗНЕЙ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ В ШЕЛКОВОДСТВЕ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "РОЛЬ АУКСОГЕТЕРОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ В ЭТИОПАТОГЕНЕЗЕ БОЛЕЗНЕЙ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ В ШЕЛКОВОДСТВЕ"

АКАДЕМИЯ НАУК АРМЯНСКОЙ ССР ОТДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

На оравах рукоажсщ

роза амаяховна боякян роль алесогвткротрофньа бактерий в зтиооатогкнкзк

болезней тутового к&шяряда и применение ангаю-тяков б 1блководстве

Jiceef 11ци на аршшскоа венке

(03 jOO.07 « кякробвохогва)

à i i t р в i б р a i

дассвртацм ш сояокавае утшЛ степе як кавдиата Лнхжогачвскм наук

£ромя-19?3

АКАДЕМИЯ НАУК АРМЯНСКОЙ ССР ОТДЕЛЕНИЕ ШО ЛОГИЧЕСКИХ НАУК

На правах рукописи

РОЗА АМАЯКОВНА БОШКЯН

РОЛЬ АУЯСОГЕТЕРОТРОФШСС БАКТЕРИЙ В ЭТИОПАТОГЕНЕЗЕ БОЛЕЗНЕЙ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ В ШЕЛКОВОДСТВЕ

Диссертация на армянском языке (03.00.07 - микробиологиа)

Автореферат диссертации ва соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ераван-1973

Работа выполнена г лаборатории спорообразувщих бактерий Института микробиологии Академии наук Армянской ССР,

Научный руководитель -

доятор биологических наук Э.К.АФЕШСЯН

Офиаиалвные опцовенты:

Заслуженный деятель науки Арм.ССР.доктор с/х наук

Р.К.ГАЛМЬЯН

Кандидат сельскохозяйственных наук В .А .ЧИШНГАРЯН

Ведущее предприятие: яафедра Физиологии» анатомии растений и микробиологии Ереванского Государственного университета.

Работа изложена на 142 страницах* включает 8 -глав, 32 таблицы, 6 иллюстраций. Список литературы содержит £82 названия работ, в том числе 174 отечественных.

Автореферат разослан "¡Ь " 1973 г.

Запита состоится " " . /-¿¿¿^ 1973 г.

на заседании Ученого Совета № 2 Отделении Биологических Наук АН Арм.ССР. ^ ,

*

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Отделения Биологических Наук ¿В Арм.ССР (Ереван, ул.Пушкина,12).

Отзывы направлять по адресу: г.Ереваи-1, ул.АСо»ява,15,

комн.66 Ученоиу секретарю Совета 16 2 Отделения Биол.Наук АН Ари.ССР

Ученый секретарь Совета наяд.сД наук •

Т.Г.ЧУБАРЯН

-з-

Вюдеш

■ Энтомолатогсннве княроорганызкы привлекают в дослодва« время внимание ирокого круга саецкадястов. Практическим прз-лохенкем этого вопроса является получение к прякввеахе зффек-авввнг микробных инсектицидных препаратов для борьбы с вредж-йгеламя сельского ховяМства.

В настоящее время 7 вас ■ в ряхе стран соэдана промнялен-¡ность микробных инсектидждов в применением зктокопатогенных спорообразувдих бактерий. Для получения жнсежпцкдяых препаратов наиболее перспективным! являйся отдельные виды атнх багте-|я> (Суитмен,1964; Талалаев,19?0; Федоринчля,1970; Гуяасях 1970; Афрккян,19?0; &и1аЬш ,1963).

Зткопатогенез инфекционных заболеваний в ас о коша обусловим многообразным* взаимодействиями кявечной мяхрофлоря с организмом хозяина, которые определяет мвогве стороны ххзведеятель-Soctk насекомых (Африкян,1970; Азакяв,19?2; Hmmia .1962,1967).

Биологические особенности автотшатогеннмх бантервв слабо |мучвны. Имеющийся Фактический материал недостаточен два »мяс-иеяяя особенностей «тих бажтерв* - возбудителе! евлевжек ж «х вванмвдействмя с шасекеммкя; У отделах «теме нвте генных мкж-рооргакхзявв ве ншеп токенчим* для касекекмх венеств* в щв выяснен втяоватоговез вызываемых кма болване!.

В нормальной кжиечяой микрофлоре иасекоюсх вироко распространены также вады, которые прх кассовом размнохвяжн,* ояред** Ценных условиях, нередко являются возбудителями заболевание в •фвчввов впваоотии (Итбйахау8,1952; Талалаев,1956; St*iah*u«, 2963). В »том аспект» хороио изучены бактериальные болеет тутового шелкопряда. Установлено,*« обитающие > кжмечно! микрофлоре тутового молкопряда некоторые виды бактерий а определенных условиих вызывает бактериозы, которые приносят больной урон шелководству (Ятвбен,Х934; Михайлов,1950). Вирулентность »тжх бактерий во многом обусловлена как состоянием организма ' насекомого, так я действием факторов в веяной среды. v

Нормальная микрофлора тутового иелжоприда и других васеко- ■ Кых играет важную роль х кх шцевагятельяом процессе. Микроор-тавяамн, обитающие в химвчиом тракте насекомых, в процессе раз-

внтин образуй: различные витамины, аминокислоты и другие физиологически активные соединения. Однако многие вопросы физволого-бюиишческих особенностей взаимодействий микрофлоры с насекомыми изучены недостаточно.

Основной целью наших исследований бах о изучена» аминокислотного питания аэробных спороносных бактерий, .особеано их эн-томопатогенных форм, а также выявление характера взаимодействия с насекомыми спорообразущих ОантериЗ, нуждающихся в различных аминокислотах.

Расширение производства инсектицидных препаратов диктует необходимость изучения их действия против шарового круга вредителей сельскохозяйственных растение, в том числе некатод, С этой целью вами изучалось действие на нематоду - RhtMitla ш&огов«ге» некоторых бактериальных инсектицидных препаратов, полученных в нашей лаборатории, и ряда энтомопатогеняых микроорганизмов.

В разделе pacos, посвященных использованию антибиотиков в аелководстве* представлены данные по изучение проникновения и сохранения в грене, а также действию на тутовый аеяхопряд различных антибиотических веществ я продуктов метаболизма бактерий-антагонистов. Результаты этих исследований имеют прямое отношение к перспективной области применения антибиотиков в гренажном производстве дня борьбы против различных бактериальных инфекций, повышения продуктивности велкопряда и улучшении технологических качеств кокона.

В соответствии с поставленными задачами, настоящая работа включает следующие основные разделы:

1. Распространение спороносных бактерий в нормальной и патогенной микрофлоре тутового велкопряда я характеристика их аминокислотного питания.

2. Влияние аминохислотозавнсимых спороносных бактерий на развитие тутового иелкопряда и их роль в метаболятических нарушениях 8того насекомого.

3. Действие энтомопатогеняыг бактерий на яйца аскарид Anearla lnabrieoid*« и на развитие нематоды Hb*Mitie т*огог «•fea.

4. Возможности использования вктмбиотиков в качестве де-

эинфипирующих и стимуджруицих веществ в шелководстве.

5. Изучение некоторых перспективных мтаммов Вм.*Ьиг1»-£1«п«1а для использования хх > производстве мвсектицидных препаратов.

В главе I представлен обзор литературы по знтомопатоген-ным спорообраэующим бактериим ■ шх взаимодействия с насекокы-ш. Глава & обобщает натерли я »пользованные методы исследований, которые представлены в автореферате по отдельный главам

Глава О. Распространение ауяоогетеротрофннг-амиво-кнслотозависимых спорообразуювдх бактерий в микрофлоре здоровых ■ погибмнх гусениц тутового велкопряда

Кякечвая микрофлора играет значительную роль в процессах питания ■ других физиологических функциях организма насекомых. В навей лаборатория мучена рол» ауксогетеротрофных - витамкн-вавясимых бактерий в организме насекомых н, в частаости,» ые-таболнтических расстройствах тутового мелкопряда (Африкян, 1970; Авакян,1?72).

Распространение амняокгслот^озависямых бактерий в кввечной микрофлоре гусениц тутового шелкопряда научалось наш в динамике его развитая. г г» исследования проводились как на катернале производственных выкормок, тах ■ в лабораторных~ус-ловиях. Обследовалась такие микрофлора листа иелковжцы,экскрементов и подстилки. Идентификации культур проводили по определителям микроорганизмов (Красильников,1Э%9; вге*4 «г «1. , 1957).

Давима микробиологических анализов обраацов аа Артаиат-ского района Армянской ССР« приведенные в таблице I, свидетельствует о том, что наиболее богатой является микрофлора подстилки, аатем экскрементов. Ори атом в составе микрофлоры преобладающими няляптс* аминохиелохоэаяислиые банте ран. В экскрементах количество ятих бактерий в 4-ом ж 5-ом возрастах , составляет от 30 до 50% воей бактериальной флоры.

Эпифитяаи микрофлора листа иелховяцы,схармдиваа*ог? гусеницам ранних возрастов« сравнительно бедна микроорганизмами и представлена« главней образом, яеепороносяыми бактериям*. В

Тасймца I

Распространение акгаомсяоювашсяыиз: о Коровиных бактерий в микрофлоре л»с»о шелковицы,зкскреквнтов 17свнжп з нодстивка (лес9наля выжоркка с.Артаиат АрМгССР, число бактерий ъ тис,/г)

Яоэ- Исследуемый Обёг'б ДОЛ-ВС Кол-во аиияокаслото-

раст кзкро- СПОРО- зависииых спороносныг

гусе. субстрат орга- НОСНЫХ бактерий

ЖЩ аязмов бакте- Бас.ое

рий го г«ив-1Ьц. .1шеавп1в

Пецз

Пасх велковицы II б 5 4 I

I Экскременты 4 I I X 0

Подстилка 120 100 100 ШО 0

2ист валковицы 50 12 ю 8 г

а Экскременты 50 2 2 2 0

Подстилка 100 4 4 4 0

Лист велковицы 50 33 33 30 3

г Экскременты 6 2 I I 0

Подстилка Ю • 8 6 6 г

Лист пелковяцы 70 25 25 25 а

1У Экскрэханты 12 7 7 7 0

Подстилка 20 6 5 5 0

ЛИСТ ВвЛКОЕИЦЫ чг 5 5 4 I

У Экскременты 500 100 100 100 0

Подстилка 1500 100 ю 10 0

Ярхмечанхе: нулевым показателей откачано обнаружение микроорганизмов в количестве менее I тыс. клеток з 1г обследованного субстрата.

дальнейшем отмечалось ростепевное аагрнзвенже бащилврвой флорой, чаще всего бактериям» груяпы в«о, свг«иа-*;Ьих1п£1епа1ь я гво.ваЬЯИе-авяел^гЛоав . Обварухеяже в впшфитаоЖ ыявро-фхоре иста шелковицы бахтержй -продуцентов аятоиоцжднш: кристаллов свидетельствует о «он, что субстраты веэвтоиогев-

ного происхождения могут служить резервуаров возбудителей опасных инфекций. .

Результаты исследования образцов погибшего тутового шелкопряда кз различных районов Армении показали,что чаще всего из аминокислотозависимых спсрообраэующих бактерий встречаются Bw.ttmei Bao.thuribglwüsi« (табл.2). Отмечены некоторые различия в зависимости от эколого-геогрзфических зон. Бактерии этой группы больше всего отмечены в образцах из пелководческих районов Араратской долины, меньше всего - из предгорных и горных районов Армении. Так, B»o.c»re«s встречался в 20-50Jó образцах из Шаушгаского, Артапатского, Ехегнадзорского районов, меньше всего - - в образцах Аштаракского и Иджевансного районов, 6 исследованных образцах Ок те мбе ря не к ого, Автаракско-го районов и г.Еревана Вас., thuringleneia не обнаружен вовсе. Более всего Bao.thurlagienaia встречается в Ехегнадзорском и Мегринскон районах.

По данный анализов образцов чхар из районов Северного Кавказа, Грузии, Азербайджана и Узбекистана, выявлены в основном аналогичные закономерности распространения аминокислотозависимых видов спороносаых бактерий, то есть наиболее часто обнаруживаемыми оказались бактерии из группы Вас.сетей», Вас. tharin-el«D«ta > отчасти Bao. eubtllie-meaeiitericue (табл.2).

Глава ГУ. Анкноккслотиое"питание разных видов аэробных снорообразуоцих бактерий

Изучение аминокислотозависимых свойств аэробных спорообразующих бактерий представляет большой интерес для идентификации культур и для выявления природы патогенеза различных бактериозов насекомых. Литературные данные свидетельству»! о.том, что в некоторых случаях особенности аминокислотного питания могут служить важным признаком дифференциации отдельных групп микроорганизмов (Одинцова,1959; Логинова, Верховцева,1963; Sebiilta, Poapvr ,1948; Sohulta lie Manue ,1949). Установлено, также, что имеется корреляция между патогеаностьв культур микроорганизмов и числом требуемых аминокислот (Сохина.Биргер, X96I; Палфи и др.,1969).

Табтаца 2

Ра с прос тра не на е анхнокислотозавнсииых бактерий в микрофлоре образцов чхар из различных шелководческих районов

Происхождение 1, £ол-во * образцов . образцов Обнаружено образцов.пораженных спороносными бактериями

Всего В юн числе

% Вм.овгвав Бао * %Ьат±п

К-в6™[ Т-воТ 1

Ереван ИНШ Дрм.ССР Эчмиадэинскнй р-в»ПШС Шауиянский " ОятемберянскнЙ " Арташатский " Аштараяский **' ШаматдинскаЙ * Идкеванский " Когайнский " Ехегнадзорсвий " Ыегринский Район 66 214 137 74 115 106 166 394 197 ' 9 ■ 42 н АОМС! 10 13 54 6 46 I 33 52 64 4 ' IX' Ы -к- и м * ' СД" "\й 8 ооооооооо о 0 6 41 0 29 . I 12 16 31 , 2 6 0 2,8 30,0 0 25,2 м,о 7,0 4,0 16,0 22,0 и.о 0 5 13 0 10 0 9 7 9 2 5 0 2,3 9,0 0 8,7 0 5,0 2.0 5,0 22.0 12,0. 1

Всего ., \ 1540 292 19,0 144 9.3 60 3,9

Ра?лич Груз.ССР,г»Тбилиси Аа.ССР,г.Кировабад Уаб.ССР.г.Коявнд Краснодарский край Ставропольский край вне реек ЮЗ 42 60 511 121 ублйни 18 4 II 90 I и 17,4 9,5 18,3 17,6 0,8 Юны 6 2 8 64 0 \ 7,7 4,7 13.3 12,5 0 4 2 2 22 0 3,8 4.7 3.5 0

Всего 837 ' 124 14,8 82 9,7 30 3,5

Нами изучались особенности аминокислотного питания различаю; групп и видов аэробных спорообразуюцих бактерий,выделенных из нпсексмых, почв и других субстратов. В работе использовано около №0 культур, выделенных сотрудниках» навей лаборатории, а такие кзогне коллекционные штаммы,полученные вэ различных отечественных и иностранных музеев.

Исследования ш определенно потребности бактервв в аминокислотах проводились в несколько этапов. Вначале определялась зависимость испытанных культур от смеси аминокислот (использовался гидролиза? казеина), затем вывалялась зависимость от групп аминокислот и, наконец, с последовательными исключениями одной из них определялась зависимость от отдельных аминокислот.

Этими опытами выявлялись также аминокислоты, оказывание угнетеннее действие, и аминокислоты, снимающие подобное действие. Данные, полученные ауксанографечесхим методом,окончательно уточнялись с установлением оптимальных концентраций ростового Фактора на жидкой синтетической среде s условиях стационарного и глубинного выращивания.

В результате проведенных исследований выяснено,что, за исключением гтакмов вас- «J-bido* ж в»о. nega teriua , все остальные испытанные грушш и виды спорообразуюмжх бактерий нуждались в аминокислотах и ииташвах. Так, среди изученных 96 итамиов группы B&e.enbtlli«-ae«eaterleaa один игами Вм>»*ееп-terlott» fusoM нуждался одновременно в витаминах и аминокислотах, а 56 культур требовали для своего роста лниь аминокислоты. Для 27 ятамиоввде.розтитха м 4 штаммов Вм.ирЬаеПоиа, в основном, характерна зависимость от витаминов, а для итакмог B*c.xtctenif«rmi*.BM>.eljreulMu*S».l*BtM характерна потребность как в витаминах, так м в аминокислотах.

- При изучении культур Вив.выявлено, что они нуждаются, в основном, в асоарагиновой и глутамжновой кислотах, оркятмае, а некоторые штаммы-в лейцине. Бри изучении лево- и сравозавитих форм культур данного вала корреляция с зависимостью от- Ь-'и' В форм'аминокислот не. установлена.

Аминокислотная зависимость бактерий белее подробно была ' изучена У культур грушш Bao.oereae-thttrinsieuaiB . 2 селе до-

-Ю-

ваао 92 штамма Вас. thuriogieiiele и 28 аташов Bac.cereua, в ток числе 30,штаммов лоллекцйояаых,лалучевяых лэ.разных уч--рехдеяий нашей а других стран. В число исследованных культур ~входили все тисовые штаммы Вас.thuringieasie, принятые в настоящее время для отдельных разновидностей данного вида С s« Barbae, Bona«fol ,1962,196?; Bunoefoi, P« Berjuc ,1963).

Результаты исследований показывает, что изученные 16 штаммов серотипа berliner зависят от больного числа аминокислот. Они, в основном, нуждаются в аргививе, аспарагйновой и гяутама-новой кислотах, метиоаине, гистидине, а некоторые штаммы - в глицине. Культуры серотипа niesti - амивокислотоэависммыв,причем,в основной, это аргинин, глицин, мешанин зависимые формы. Для культур серотипа sotto-deadrollaua характерна зависимость от аспарагйновой, глгсамивовой кислот, гистидина, а для некоторых от аргинина, гляцина.

Культуры серотипа g&llerl*« характеризуется зависимостью от аспарагйновой, глутамииовой касяог, глицина, иногда - аргинина, лейцина, никотиновой кислоты. Данные изучения витаминного питания, проведенного сотрудниками напев лаборатории (Афри-кян,19?0; Авакян,19?2; Авакян и др.,1972) показывают, что культуры этого серотипа требуют для своего развития присутствия в среде никотиновой кислоты. Для серотипа oauceeloue (16 ятаа-мов) характерна сугубо аминокислотная зависимость. Они для своего роста нуждаются, в основном, в аргинине, аспарагйновой ,

пгутамнвовой кислотах, гистидине, метионине и глицине. Следует отметить, что для штаммов данного серотипа треонин является стимулирующей аминокислотой, между тем яа штаммы остальных описанных серотипов эта аминокислота оказывает угнетающее действие. Штаммы редко обнаруживаемых серотипов - entomocldue--«ubtoxlcus, alzawai, morriooni, toiwortb также зависимы только от аминокислот - аргинина, аспарагйновой, реже глутаминовой кислот , гистидина, глицина, а «гаммы серотипов darmstadienaia, tbompeonl и fowieri нуждаются только в гистидине.

Исследования показали,что как серотипируемыа*так и весе-ротишруемые штаммы Bac.cereua по акнвохислотному штавию,кан правило, не отличались от Вас, thuringtanaia . Все наученные ■таимы Bae.cereue (28 втакмов), не серотипаруемые сыворотками

иввестных евротнпов Вво.хЬит1пг1«пвЛ« , также нуждались только в аминокислотах. Отмечено, что рост всех изученных нами нтам-

нов разных сероткоов угнетался,в основном, в присутствии в среде яволеЙцива, сернна, треонина в лейцина.

Глава У. Роль аминокжелотозавиежжмх бактерий в зтиопатогевеае заболеваний тутового ■елнопрнда

Для выяснения вхкянкя акиноккслотозаввсимых бактерии яа раввитхо к продуктивность тутового желяопряда культуры жх скармливались гусеницам в течение разного времени. Использовались: «там* 720 в*л.о»г»ив, выдадеввый из погибшей гусеницы тутового шелкопряда я нуждающийся в ъ -глутамхновой кислоте и -меткоякне, атипичный ятакн 1506 в*е.в***««,нуждшощкйсн в .ь -изолейцине, нтамм 1511 В»о. с »х»»»-«* gateri.ua 1л*«г»в(11*»иъг ;нужда»нийся в ъ -иволейцине и ш-лейцина. к коллекционная !кульхура £«*.11о1мв1*вгч1» Р-241, порученная нэ ЧССР» рост которой зависят от ь - ыакжжа.

Гусеница скармливались листом шелковицы» на поверхность которого наносилась суспензия однодневных культур с лосиха КОЛ. 'Исслёдоважая проводили» в двух вариантах,с ежедневным корм-левхем и подкормкой в начала каждого возраста. Опыты с ежедневным скармливанием проводились в комнатных условиях* Во втором вариант« гусеницы содержались в увлажненном термостате с поливенной температурой, о целы* провокации метаболнтичеехкх расстройств и более интенсивного развития бактерий в квяечной микрофлоре. В процессе опытов научались микрофлора гусениц, их привесы, а также содержание а гемолимфе амяиоххслот,по которым была дефицитна скармливаемая культура бактерий. Свободные аминокислоты в гемолимфе налкопрцда определялись по методу Филип-роввча (1960).

В таблице 3 приведены сводные данные ваиих нсследовавий с рднокраггой подкормкой испытанными культурами микробов а нача-' де каждого возраста. Как видно вз таблицы, средний вес гусанюц Куколок, коконов ■ оболочки гусениц, подкормленных амняоккс* |010аавхснинмИ бактериями, систематически нале таковых в контроле и, наоборот, процент смертности гусениц выше по сравнении !

Влкяюм подкорики ашшонислотовамсиюши бактериями на раэмпе ж про дукив кость тузоюто неяяопряла

(однократное скармливание в начале каждого возраста)

Скармливаемая культура бактерий х двфкцмюю амя-ноюслоты

Средний вес гусе- ¡Скерт п„ над в г (до воар^'иость.

1 ) У I *

Средкий.вес

КО- 'ку— КО- I хол<

ва ки

п

000-лоч-кя

% Кож-во аванокислот э обо- 1геиояинФе в иг/ил

на

¡КИВОВ.

к-та

ала-

В2В

шш ГДЙД

Вы», оегеае и.720 1г-гдуташновая «-та, эд-нвхиошга

0,025 ;0,114

0,565 ¡26,6

0,69 0,6 0,54 0,5

0,09 0,04

13,0 15,7 7,4 ;

2,7

I

1,1 ! 1,0

В«е.о«г*иа вт.1506 ь -каояейцян

0,022'0,094

I и

0,585 26,6 ! „ ( *

0,77 О»?

0,65 0,62

0,12 0,08

15,0 ;

11,4 I

12,4

4,0

0,6

0,0*

I

в

г!ш» lnter.BT.X5II

М-лейШЮ, ъ -иаолейаяв

0,022

0,096

0,520 27,6

/

0,63 0,57

0,55 0,5

0,08 0,07

12,6 12,2

2,3?

м

0,6

0,004 1

Вю.ЦоЬмЦГогш!«

ит,

Р-241

I -аланка

0*020

0,097

0,494 13,3

0,74 0,61

0,64 0,54

0,1 0,07

13,5 |

П.*

>9,4

1.8

1,02

1.0

Контроль (без подкормки мня-рооргввиэиамн)

0,025

0,147

0,650 6,6

0,93 0.77

0,81 0.66

0,12 О.Н

15,5 14.2

16,7

4,8

3,5

1,6

с контролем. Это особенно четко выявляется в вариантах,слары-ливаемых штаммами 1506 Вас.свгейян I5II Вас. cereuc-aegatwiuia ínter«. .нухдакцихся в изолейонне к лейцине в у штамма 720 вас. c«reus, нуждаются в глутаниновой кислоте к иетжоннне.Смертность гусениц в этих вариантах весьма значительна м находится в пределах 26,6-27,6$. Устанавливается закономерное уменьшенхе в гемолимфе гусениц содержания изолейцина, лейцина, метионнна и.глутамнновой кислоты, то есть тех аминокислот, в которых нуждалтея для своего роста испытуемые шташш.

В серии опытов с ежедневной подкормкой амннокнелотозави-симыми штаммами также обнаруживается отмеченная выше закономерность (табл.4). В этих вариантах смертность гусениц достигает 50-53,3%, Полученные коконы были не полноценные, мелкие, с мягкими полисами н тонкой оболочкой.

Для проверки указанных результатов проводился дополнительный опыт. Из упомянутых серий опытов отбирались гусеницы 5-го возраста м подкармливались одновременно культурами аминокислотозависимых штаммов и растворами соответствующих аминокислот (50мхг/мл). Как показывает данные таблиц 5 к 6, использование дополнительной подкормки с дефицитными аминокислотами в определенной степени снимает все отрицательные явления от скармливания гусениц аминокнслотозависимыми штаммами. Это сказывается как ва состоянии гусениц ж их привесах, так я на сявления процента смертности гусениц и ва качестве коконов.

. Этот материал исследований подтверждает, что при развитии в килечной микрофлоре тутового шелкопряда отдельных видов бактерий, нуждавшихся в аминокислотах, обнаруживается характерные метаболитическиа расстройства, вызванные значительным снижением содержания в гемолимфе насекомых тех аминокислот,которые служат ростовым фактором для культур бактерий. Подобные нарушения очень часто сопровождаются гкбельв гусениц. Эти метабо-лжтические расстройства, имевшие аеспецифвчесхий ивфекционный характер, играют, по-видимому, важную роль в зтяопатогевезе различных бактериозов насекомых (Африяяи,1969,Е970).

Поскольку испытуемые спороносные бактерии при подкормке тутового шелкопряда вызывали метаболитаческхе расстройства, изучение характера взаимоотношения эти бактерий в микроорга-

Влияние подкормки ашнокисдотоэавасашш баягераяии на развитие и продуктивность тумвого шелкопряда (ежедневное скаршивание,начиная с Ш возраста)

Скармливаемая культура бактерий я дефицитные, аминокислот Средний вес гусениц в г (по ма пастам! Смер? вость Пол Средний вес в г й обо-

Ш и 1 У % коно-ва куколки 000-лочки лочки

Две. сегеиэ ШТ.720 ь -глутами новая кислота, С1-нетиош1н 0,025 0,10? 0,530 50,0 $ 1* 0,68 0,6 0,08 11,7

Вне. с«г»иа шт.1506 ь-взолейцин 0,022 0,102 0,545 53,3 ? 0,65 0,6 0,05 8,31

Бво.свгвив-швбагег1ад 1п*«ги. аг.1511 т-лейцив, ь-изовейвдш 0,020 0,096 0,520 40,0 € 0,83 0,71 0,12 10,8

Вво.ИсЬеп1Гогш1в ШГ.Р-241 . ь -алавян 0,021 0,106 0,525 Ю,0 ? / 0,43 0,42 0,37 0,36 0,06 0,06 14,0 14,2

Контроль (без подкормки микроорганизмами) 0,025 0,147 0,635 * 3,3 % / 0,99 0,84 0,84 0,7 0,15 .15.1 17,0

х/ здесь и в последующих таблицах особей _противоположного пола в опыте не оказалось

-1Ь-

Таблица 5

Влияние подкорики аминокислотозавяскмыми бактериями со скармливанием дефицитными аминокислотами на развитие и продуктивность .тутового аелкопряда

/скармливание один раз в начале 7 возраста/

Скармлива- - Дефицит- ' Средний вес 'Средний вес в г %

_ "«АЛ П>Л* ЬМ : ИПААЛнМ « V > _ ... .. ____ _ _._. :

емая куль- вал амвно «гусениц в У 'гнгк-тура бак- |кислота и : возрасте по Лол; » тагай ¡ее кои- ■ дням в г ° центрация ! т " Г ч '> в мкг/ил ! ■ * '' ^ 7 • кукол-, ки ни

вас.свгвив ат.720 без амино-; л сер \ -г 7 кислоты ; 2,2 1* 0,69 , ^ 10.54 0,6 0,5 0,09 13,0 0,0417.4

ь-глута- ? ! миновая „ к-та : Мгметио- ' 1 НИН 50 { ? 2,3; ( $ ;о,ээ } 0,85 0,14114,1 1

Вас. семи» ВТ.1506 без амнно-' 1 кислоты ! 0,58511?2 1,8 * 10,74 <? 'о.70 0,65 0.62 0,12!13,0 0.08!11.4

1 -изожей- \ гян 50 к 2,2 2,6 $ Г 0,86 0,72 0,72 0.62 0,14 0,1 15,6 14,0

ВТ.1511 I без аминокислоты 0,520 1?5 2,1 % Г 0,63 0,57 0,55 0,5 0,08 0,07 12,6 12,2

ь-изолей- цин 1-лейцин я 2,45 ? 1,04 0,9 0,14 13,4

ят.Р-241 без аминокислоты 0,494 Др 7 2,1 ? г 0,74 0,61 0,64 0.54 0,1 0.07 И,5 И ,4

1,-аланин 50 ■ £15 2,25 $ г 0,80 0,97 0,67 0,17 0,13 15 ,С к,;

Контроль (без подкормки микроорганизмами') 0,623 556 2,8 * «г 0,93 0,77 0,8Х 0,66 0,12 0,11 15 ,£

-lö-

Блиякие подкормки аминокйслотозавискмыми бактериями со скаржлизанвеи дефицитными аминокислотами на развитие я продуктиьность тутового шелкопряда

/ежедневное скармливание начиная с У возраста/

¡кардой- ^ Дефицит-< Сре дни й вес гу-ваемая ная ани- сениц У воарас-культура нокис-та та.пр ^ням з г. 5актерий и ее кон j

центрац, 'I 7 9 _в нкг/мл......

Пол'

Средний вес ' ^ Ä

кона

код- лоч-ки ки

т

:беэ ами- л 550 т 05;? пл ; ь-гдута-;

I ¥

0,68

0,6 ;0,06 11,7

us

2-9Si2-87 irf* i 1,12 0,95 0,1? 15,1

Вйс.««- (без ами- л 545 т к т ?5 ' нонис-ты !* 0,65 0,6 '0,05 3,3

**ЛМ5|здйдаа" ! ■ 2,15 2,9 1 50 ; i s 1,07 0,91 0,9 .0,17 0,7?i0,X4 15,8 15,3

9м,в«гв-is-eega-teriuai Leterm. 0,83 0,7t;0,I2 1 m,8

iL -вэолей t циа, : üt-лей- : " '2,32, 2,6 ! цян 50 ; , „ ; !

BT.ISII k 0,92 0,7610,16 i : 17,4 1

Вас.lieh enlfor - пт.Р-241 бе з ами-*^ кислоту | 0,525¡2,0 2,05 ; | j $ / 0,43 0,42 0,37 0,36 0,06 i 14,0 0,06 i14,2

ь-ала- ! i ! нин ! " 2,35 2,5 50 | { ! ? f 1,24 0,80 1,07 0,65 0,17 0,15 : 13,7 13,7

Контроль (бег подкормки микроорганизмами! 1 1 0,635 <2,62(2,95 1 i 1 г 0,99 0,84 0,84 0»? 0,15 0,14 15,1 17,0

низмамв кишечного тракта тутового шелкопряда представлял определенный интерес.

При исследовании антагонистических свойств этих бактерий на культуры различных видов микроорганизмов - зг.ццгвив.в.еои. Вае.е*геие, Вас.туоо1<1ев, Вас.виЬ*111в, Вао.

ЗДоеив, Вас .«ГЫЛив, Вае.ЫоПп!, Вас.роХутухяИ Сшм11<1Д »1Ысапв

установлено, что испытанные втаммы в&о.согеивне обладают выраженным антагонистический действием. Антагонизм выявляется у них в редких случаях и, в основной, к грамположительным бактериях. Сильный антагонистическим свойством обладает штамм ?-241 В««. 11сЬ»и1ГегяА» , а У втанмов 1506 (В*о.е#г*ав)И 1511 {Вм,с•гедонме* этого не выявлено. Испытанные

итамиы аиикокксдотозавкскмых бактерий не подавляли рост кишечной микрофлоры тутового шелкопряда.

С цельв выявления наиболее аффективных антибиотиков против аминскислотозависиша штаммов изучено действие 22 препаратов. В результате выявлены препараты,которые подавляют рост амино-кислотозависимых втамиов. Пак,рост втамма 720 Вао.сегеив подавлялся стрептомицином, биомицином, террамицнном» тетрациклином, жеомяцином, виодариком, фитобактериоиицином иаифомипиномЛ'ост атаииов 1506 и 1511 подавлялся также под действием ноликиксива а, субгидяна, а рост Вае*11сЬ«а1Хог«1кР-241, кроме перечисленных антибиотиков, подавлялся н амицетином.

Глава УХ. Антибиотики как обеззараживающие средства в гренажном производстве

Наряду с успехами в области применения антиоиотиков в вел-говодстве методом подкормки гусениц, существенным пробелом является отсутствие работ по использовании этих препаратов для обеззараживания грены тутового шелкопряда,которая является источником передачи многих опасных для аелноводства инфекционных болезней. Имеется значительное число работ, основанных на прижизненном обеззараживании грены от протозойного заболевания велкопряда-пебринц. Так, предложено' обеззараживать пебрввозную грену термическими воздействиями (Астауров в др.,1952,1962; Ованесян, Лобжанвдзе,1958; Бабурашвили,1965).звуковым« и ультра

уковыми кола баш яш (Дидебулидзе и др.,1960; Бабурашвяли, 64,1965) и фитонцидами (Бабураввиди,1960). Против других бо-звей шелкопряда использовался ряд дезинфицирующих веществ: леиа (Назарова,1933), едкий натр с формалином (Пеклеябурце-,1960), 5% гадевая известь (Яиадзаки и др.,1966).

Нашими ранними работами показано,что антибиотики хорошо оникают и долго сохраняются в тканях семян растений не ока-вая отрицательного действия на их всхожесть (Африкяв и др. 58,1961а). Эти исследования показали возможное та исшльзовн-я антибиотиков для обеззараживания гревы (Члл-Акопян и др., 62).

Материалом для исследований служила здоровая грена тутово-лелкопряда породы Бк-2 из Ереванской племенной шелководч&с-й станции (ШЮ) и Ереванского грензавода ЫСХ Ар и.ССР. Для сб-ботки гревы использовался 21 антибиотик отечественного и за-бежного происхождении с самыми различными спектрами действия: аеаищшша» сгрептомацин, биомицин, террамицин, тетрациклин, иземив, эритромицин, нанамидаи, аыфомицин, амидетин, хлсрсми-тии, аиодариа, субгалнв, бациградан, фнтобаатерноыицдн, ооли-кенн и и В, грамицидин, неомицнн, дигидрововобиоцив, автисио-аи ВША £1811-19 и № 2686. Для получения максимального про-нвовеяия препарата в зародш концентрации антибиотиков бра-сь, по возможности, высокие*Грена обрабатывалась погружением растворы антибиотиков на время от 5мин. до 2-х часов. Обра-тка грены этими растворами проводилась весной и сразу же дос-обработки грена для оживления инкубировалась в приаятых ловиях, а при осенней обработке грену после просушки закладываем на зимовку для даяьяейяей инкубации весной.

Обнаружение антибиотиков в оболочке грены и в мурашах проводилось о исподьзованием^внсокочувствительных культур бакте-й. Для большинства антибиотиков применялась культура сшро-сиой бактерии в«е.14о«и* атамм ИННИ Ары. 1014. Наличие пе-Гришина, бацатраадна а других антибиотиков в грене проверя-

СЬ С ПОМОЩЬЮ эталонаЫХ КУЛЬТУР Э*.»игвив, В.со11.

Ожйвляемость обработанной и необработанной антибиотиками 8 вы учитывалась подсчетом числа вылупившихся муравей и неожив-Й грены. Данные опытов по оживлению грены обработаны статис-

тически (Урбах,Т964).

Результаты этих опытов показали, что ври обработке высокими концентрациями антибиотиков, большинство its вих обнаруживалось в оболочке грены, а в мурзщах не выявлялось.

Следующие испытания ло обработке грены антибиотиками проводились осенью. В этом случае было испытано1антибиотиков, которые в предыдущем опыте обнаруживались в ободочке гревы. Зрелая грена обрабатывалась осень» (до зимовки), после чего хранилась в обычных условиях. Следующей весной перезимовавшая грена инкубировалась. Опыты показали, что из испытанных антибиотиков в зародыш грены проникали и обнаруживались 'пенициллин, стрептомиаив, биомицин, т а рра мивд н ,гри э е ми н /аифоми цй и и вана-мицнн. Некоторые антибиотики как баоитрацин,'субтилин, подимик-сив К и В, неомицин и грамицидин обнаруживались только в оболочке гревы. Оживляемостъ муравей, вылупившихся из гревы,при обработке всеми антибиотиками, былапочти одинаковой. Угнетающего действия антибиотиков при этом;яе отмечалось.

Таким образок, в результате проведенных исследований установлено,что осенняя обработка гревы водными растворами большинства испытанных антибиотиков сопровождается-проникновеннемих4 в зародыш с последующим обнаружением в мураяах.Пря весенней, ярединкубационной обработке, проникновение * антибиотиков в трену не установлено (Чия-Акопян и Др1'|;19б2), '

В дальнейшем нами исследовалось-действие антибиотиков на' оживление гревы и развитие гусениц' в производствевных условиях' при осенней её обработке. В опыте были исиользовакыЧ'отече'ст-веввых антибиотика в следующих концентрациях: пегацаллин,стрептомицин - IOOO ед/ма,террамиадк и тетрациклин900'ед/мл. Грена тутового неднопряда (порода Ек-I) ,полученная из Ереванской племенной шелководческой станции в декабре 1962 года, обраба-тывзлась погружением в растворы вышеперечисленных антибиотиков" на два часа ври +7-+8°. Контролем .служила погруженная в воду грена. После обработки грена оставлялась на зимовку в холодильнике при +5-+40. Весной 1963г. обработанная ;Греваянхубирова-жглась, учитывался процент оживления,; в: также ^проникновение !вн-Э(-тибиотивов в грену. . „■.■«ад^а^а -»•-•>,?ся

С целью изучения развития гусениц^нв: ррены^обработавноЯ

растворами антибиотиков, в колхозе села А.ртааатаван Арташат-зкого района Арм.ССР был поставлен omit по производственной выкормке тутового шелкопряда не вылупившихся курааей. Полученные коконы подвергнуты технологическому анализу на шелковом комбинате вы.'В.ИЛенина г.Бреввва (табд.7).

Данные таблицы показывают, что процент оживления грены, обработанной антибиотикаих, находится в пределах контроля. Это свидетельствует о том, что испытанные антибиотики, проникая в зародшЕ греки, не оказывают отрицательное действие на оживление грены. Продолжительность периода оживления была одинаковой во всех опытных вариантах. Более того установлено, что антибиотики не только ве оказывали отрицательного действия на развитие гусениц, а, наоборот, в вариантах с терраик-циноы и тетрациклином, особенно в 5-ом возрасте, отмечалось некоторое их стицударующее действие.

Результаты технологических испытаний коконов свидетельствую* об отсутствии неблагоприятного действия sa продуктивность шелкопряда, полученного из обработанной антибиотиками грены. В отдельных случаях отмечается даже улучшение технологе веских показателей и обшей сортности шелка-сырца. Так,уста-новлено,что во сравнению с контролем ( I5Ï), выход яелка-сыр-ца значительно увеличивается в вариантах с ленжциллннсщ(21£) я террамицином (17%) с соответствующим снижением удельного расхода шелка-сырца. В вариантах с тетрациклином сортность шелка-сырца несколько ниже по сравнения с контролем, однако это не ухудшает друга« технологические показатели. Перемоточная способность нити в этом варианте выше (52м), а дефектность нити ниже (бит,). Другие технологические показателя в испытанных вариантах варьировали в пределах нормы. Коконы, полученные ша обработанной стрептомицином трену, ввиду малого количества не подверглись технологическому анализу.

По итогам выполненных работ, мохно заключить о возможности широкого применения испытанных к показавших хорошо результаты антибиотиков (пенициллина, террающшаа ж тетрациклине)» шелководстве для делеа обеззараживавши грены от вяешвих в внутренних инфекций.

Работы по обработке грев» антхбиотоками о использованием

Таблица 7

Действие ойрабомя грены антибиотиками на хианеспособность и продуктивность тутового щелкопрада

. Про- Средний вес одной Антибиотики ; цент ! гусеницы в г оме- ; (по возрастай) ления; ' грены | ш . ТГ . Г : ! ; ! Технологическае показатели

тав-го коконов в кг подо- иолу-йы 1,1 одшшй П, Ш | иелк-сорта сырец в % I в % ¿дель- иере- | дефект ныв иоточ.1 ность расход способ) _ __ велка- аость сыруа об/и в го | Сорт шелка- сырца

Панели* ! 0»034 0,172 98,8 V ! 10.034! 0.183 0,843 0,826 3,370 68,9 | 21,0 ) ■ ( ) 4,700 ! 35 ¡8 I

С*рвптошщиа 98,86 0,03^0,183 0.032! О.Ш 0,855. 0.836 м 1 ве проверялись

1вррашцин 98,9 0,033 0,033 0,175 0,169 0,859 0,880 м. 4,2«) 1 ■ 73,1 | 17,4 1 ! 5,700 ; 29 ( 7 2

Тетрацшвя■ 99,0 0,034 0,035 0,Х?5 0,169 0,880 0.883 6,950 87,0 К ,8 6,300 | 52 6 3

Контрой» 0,035 0,036 0,176 0,167 0,850 0,849 5,450 32,6 15,0 ■ 6,700 | 19 8 г

больвого числа антибиотиков и греаы разных возрастав проводились сотрудниками налей лаборатории (Чмл-Акопяв,Пучявяв,196б, 1966). Установлено такие противопебрявоэное действие отдельных препаратов (грнземин, амфомнцин, новобиодин, стрептомицин)при обработка грены, зараженной пебрнной (Чил-Акопян и др.,1973).

Для выявления гренодидного и стимулирующего действия на оживление грены тутового велкопряда кроне чистых препаратов антибиотиков нави использовались в иатввные фильтраты некоторых бактерий, грибов и ахгяномицетов, являющихся продуцентами физиологически активны* веществ. Из испытанных 5-ти втаммов гриба в * »иуе г 1 , одного втамма актиномицета и Вр1е*г1* твг+1-оШ.»** Би -0 наиболее выраженным греноцидныв действием обладали только культуры эатонопатогенных видов зр1саг1л о111а1» В« -9 И В*«игег1« ер. ИТ.89. ' *

Гренодидвая активность некоторых энтомопатогенных грибов, а также бактерий, обладающих инсектицидными свойствами, послужила основанием для испытаний их в борьбе с яйцами аскарид и развитием нематод.

Нами изучалось действие натявных фильтратов из 32 культур

бактерий и 9 культур грибов на инвазвовность яиц ляа«г1в 1пжЬ-т1воШ> х).

Результатами этих работ установлено, что большинство испытанных игаммов Вде.г1гаг11151*пя1»1 В*о.о»г#иш,образующие ж не образующие антомоцидвые кристалловидные токсины, втаммы 8ве* виЪМ11»-я*вей**г1сая,В«в.|н«е*(#г1ив н некоторых выдов актжвоик-цетов в грибов >а родов Рив*г1ищ яе оказывает влияния на строение я развитие яиц аскарид - АвсаПа 1шЪг1оои*» и нх инвазионное действие. Сильное действие на развитие яиц с дегенеративными изменениями бластулы я гаструла отмечается при использовании наивных фильтратов грибов Рц«ах1иа *рогогЬг1сЬ*Х-Ха, В*«п*ег1в ь*а»1«л» в антомогенных бактерий вида в»е.вовеки*» ив*о.о*твав (11аркарян,1967; Бобикян н др.,1972),

Изучение влияния культур сдороаосаых бактерий на раавятив нематоды М»»М1«1я мегоееге». показало, что культуры В «а.

х) Работы были выполнены совместно со старвнм научном сотруд-

*г«и* и Вае.1ЮТ1ед1«п*1*„ ве обладают губительным действием ва нематоды. При внесении я копрокультуру пороонобидных форм инсектицидных препаратов, в бохьвинстве случаев, также не проявлялось отрицательное действие, за исключением препарата БШ-6И, приготовленного ва основе штамма 011 ив серо типа в»и-»••1ва» , который был использован в больвях концентрациях (400 млрд/г).

Глава УЛ. Влияние подкормки антибиотиками и бактериями ва развитие и продуктивность тутового велкопряда

Антибиотики о большим успехом применяются для предупреждения и лечения некоторых болезвей велкопряда (Можелевская, 1956; Судзуки,1958; Кучеренко, Овсяник,1966; Африкян м др., 1961а,б; 1962;Чил-Акопян и др.,1962).

Успешное и рациональное использование этих веществ в яел-яоводстве связано с разработкой различных вопросов для выявления характера действия их ва организм гуоевяцы.

Опытами,проведенными в навей лаборатории,показано,что определенные антибиотики активно подавляют рост некоторых анто-моватогевных бактерий, в том числе возбудителей бактериальных

болезней тутового валвопряда (Африкян я др.,1960; Африкян и др.,1361а,б,1962; Л£г1к1*й,1960). Подобные данные получены и зарубежными исследователями как в отноиевии знто-иопатогенных бактерий ( ЮшмпоГГ «1. ,1954,1955:1епо1То , 1963), так и Грибов ( ОяОмии,1954,1956).

При выраженном лрогявоияфекционяои действии некоторых аа-тибиотияов отмечается и их определенный стимулирующий аффект на рост, развитие и продуктивность шелкопряда (Ыожелевская, 1956, Сафаров, Алиев,1960; Камояк,1961;Колибин,1962; Туманян и др.,1964; Чавтурия, Ованесян.1964; ,1956; БЬу*-

ел 1а »1. ,1960; Зама*, Зг1т»в*ау* ,1960) *

Настоящий раздел работы посвящав итогам проведенных нами исследований по изучению влияния подкормки антибиотиками на развитие в продуктивность тутового шелкопряда с целью выяснения дозировки, оптимальной кратности скармливания гусеницам антибиотиков, оргааотроштости их действия я т.д. Работа право-

дялась, ь основном, на базе Племенной шелководческой станций ШХ Ар м .ССР,

Антибиотики скармливались гусеницам вместе с листок шелковицы. Листья опрыскивались аз пульвилизатора раствором антибиотика, оставлялись некоторое время в прохладном месте для высушивания к один раз в сутки скармливались тутовому ыедкопряду в ранних и 2-3 раза в сутки в последних возрастах. 8 остальное время гусеницы подкармливались листом шелковицы, не обработанным антибиотиками. В большинстве случаев использовались водные растворы антибиотиков в 2-х концентрациях: пенициллин, стрептомицин 10 и ЮОед/ил, тетрациклиновые антибиотики в~ концентрациях ЮО я IOOO ед/мл, а бацвтрацвв - 0,3 и 3 ед/ил. При обработке.листа шелковицы растворами антибиотиков в указанных концентрациях они регулярно обнаруживались в тканях листа шелковицы.

Подкормка гусениц антибиотиками продолжалась в течение равного времени,а именно в продолжение 2-5, 3-5, 4-5 возрастов ш в течение только 5-го возраста. Таким образом, ставилась цель проследить влияние подкармливания антибиотиками ва рост, развитие к продуктивность тутового шелкопряда в различных возрастах* Учитывались яоедаемость корма, состояние и развитие гусениц. Следует отметить, что ни в одном варианте опытов нами яе было отмечено какого-либо видимого отрицательного действия подкормки испытанными антибиотиками на развитие гусениц по сравнению с контролем. В конце опытов проводилась сортировка коковов, взвешивание куколок в оболочки для определения выхода шелка-сырца в ряда технологических анализов.

Определение веса куколки в Кокова, а также процента оболочки проводилось раздельно для самок и-самцов с целы» дифференцированного анализа полученных данных. Средний вес гусениц определялся в начале каждого возраста .до подкормки.

На рис.1 приведены данные ко среднему весу гусениц, подкормленных со второго возраста и в S-ом возрасте я проценту оболочки. Установлено,что ко стимуляции роста гусениц тутового шелкопряда лучшие результаты отмечены в вариантах с растворам! террвмицива, тетрациклина, биомицина« стрептомицина с концентрацией 100 ед/м, пенициллина -10 я бацитрацшва -0,3

Вдияние подкормки аитябиотвкаки ва развитее и продуктивность тутового еелкспрядя

Рис Л

о»

о* *

¡д/мя прк подкормке напивая со 2-го возраста, В этих вариантах средний вас гусениц тутового шелкопряда по сравнение с гонтролем увеличивался на 10-15%. При аодкориае, начиная с i-ro возраста, отмечено некоторое увеличение веса яуводок ючти во всех вариантах меньшее, чем при подкормке с ранних возрастов.

Следует отметить, что если средний вес гусениц к куколок гвелнчввался оря подкормке гусениц отмеченными антибиотиками в более ранних возрастах,то некоторое увеличение процента обо-

лочкж отмечалось при подкормке гусениц ■ в более поаднмх возрастах. Это отмечено, например, а вариантах с террамицином н тетрациклином в концентрации ЮО ед/мл. Данные опытов свидетельствуют о ток, что имеется прямая зависимость между увеличением веса куколок к продолжите*» ость о подкормки гусениц тутового шелкопряда я в какой-то мере - обратная »ависимость между продолжительностью подкормки я процентом оболочки. Эти эакономеряостя отмечаются, однако, нерегулярно я яе при скармливании всеми антибиотиками.

* Даяние технологических анализов,проведенных а Ереванском шелковом комбинате им.В .И Ленина, показывают, что по сравво-ияа о контролем в вариантах о подкормкой антибиотиками резко снизился процент чхара (неразмотанных отход)* улучшилось качество коконов. Так,коконов первого и второго глетов похумн» больше яз вариантов* обработанных тетрациклином (65,3^),биомицином (65Д^) я стрептомицином (60,меньше в контроле (54*3£). Наоборот* коконов третьего сорта больше всего было подучено в контрольном варианте, меньше всего в вариантах с подкормкой биомицином и тетрациклином. Подобная яе картина отмачека я сортиостя шелка-сырца. Все остальные изученные показатели были близки к контроле.

Полученные нами данные свидетельствуют о благоприятном действия испытуемых антибиотиков на рост* развитие я продуктивность гусениц тутового шелкопряда. Подкормка гусениц пенициллином, террамицкном х тетрациклином приводит к увеличении ' выхода шелка-сырца м длины коковаоХ нити в среднем до Ре^ вультаты этих работ указывают, что некоторые антибиотики могут о успехом применяться для подкормки тутового шелкопряда о целью полпенни его продуктивности. Данные указанных исследований ващкиеям авторским свидетельством (Дфряяям я др.*1962).

Действие микробов-антагонистов ва развитие в продуктивность тутового шелкопряда

В доступно! нам литературе нет работ по использованию микробов в шелководстве методом скармливания яхс листая шелко^ вицы. Ввмк~яоставлея рях опытов по применению культур споро-

образующих бактерий» продуцирующих антибиотики, ростовые к др. физиологически активные соединения,в подкормке тутового шелкопряда с цель» изучения влияния на его развитие и продуктивность.

В работе использовано по одной культуре Bec.*»gateriujn , Вес. a¡es»nterictts, albldua и Бас. polyayxa . НетоДИКЗ

подкормки гусениц кулмуральными жидкостями бактерий была аналогична той, которая применялась при подкормке антибиотика ш. Культуральные жидкости бактерий скармливались гусеницам тутового шелкопряда в стерилизованном н нестеридизовав-нои виде. В процессе опытов производились систематические анализы кишечной микрофлоры тутового шелкопряда. Данные микробиологических анализов, проведенных в первый день 5-го возраста, показали, что,хотя в опытных вариантах общее количество микроорганизмов, в том числе спороносных и яеспороносных бактерий, превышает таковое в контроле, однако это отрицательно не влияет на рост, развитие и продуктивность скармливаемых бактериями гусениц тутового шелкопряда. Полученные данные показывает, что все испытанные ятаммы бактерий, в основной, не оказали отрицательного действия не рост н развитие тутового шелкопряда, а также на длину коконной нити. Отдельные ггаииы при скармливании давали полокительеый эффект в опытах с подкормкой не стерили з о в а н н ой культуральной жидкостью. Это отмечалось при использовании штаммов »«c.altoidue, Bao, mee«n-tericus . Выход шелка-сырца коррелировал с общим сти-цудирукшим действием бактериального скармливания на рост и развитие гусениц. За исключением штамма Вас,«ивentéricaа oitreue положительное влияние на выход шелка-сырца отмечалось в вариантах опытов с применением бактериального скармливания в течение более продолжительного времени в период 2-5 возрастов. Увеличение выхода шелка было в пределах до 10% по сравнения с контролем. Данные по характеристике действия вскармливания бактериями на продуктивность шелкопряда представлены на рис.2/ -

-289 Рже .2 Деютвше игробо»-аггагонжетов' на разытке а продуктивности тутового недадпряда

Глава Л. Взучеа«а некоторых перспективных штампов зитомолагогевЕЫх' бактерий

Б последах« годы значительные усюп достигнуты в области получении микробных инсектицидных препаратов х применения ■х в борьбе с ирвдхтелями сельского хозяйства. Эти праварати получены в основном кг спороносных бактерий, обрзиугох специфические энтомоциднме токсины (Галалаев,1956,1970; Тонко-нохенко,19£7; Полтев ш др.,1%9; Гу*асян,19?0; Афряхяи,1971;

, 1963; Ад^ия ,1968;®»«»«, Во*я*у ,1971). Нх цен-

ность заключается в тон, что они действует ааопрв деленные виды вредоиомшх насекомых ir оеэвредкы для человека, тсллокровных животных к р&стевий.

Сотрудниками навей лаборатория были выделены культуры Bfto.tburln|ü.*a*l* > которые ва основания подробного изучения морфологических, биохимических и серологических свойств я ли-тического действия Фагов были идентифицированы как новая разновидность Bae.tfaurlngi«iei> тш*.oauoasieui (Афрмкян, Чил-Акопяв,1968; ¿фрикян и др.,1968; Чил-Акопян,19?0). С использованием некоторых из этих культур получены бактериальные инсектицидные препарата - НШ-805, ЭДП-8П и ШП-837, которые вирохо испытаны против вредоносных для сельского хозяйства насекомых (Чилингарян,1965,1967; Африкян я др.,1969; Чилиага-' ряв и др.,1969,1970). В данном разделе обобщены результаты налах исследований ряда перспективных штампов Bto-thnriaglanala

При изучении аминокислотного питания лтаммов бактерий 805 , 811 и 837 серотипа oauoaaleu« установлено,что они нуждаются в асларагивовой, глутаминовой кислотах в гвствдкна, а штамма 811 и 837 нуждаются также н в аргинине. Рост этих атаманов угнетается при наличия в среде лейцине, иэолейцнна, сери-на в треонина (тебя.8),

При изучении условий выращивания втаммов 805 в 837 на различных средах нами бил использован рад субстратов для замены кукурузного экстракта. В качестве источников белкового азота ввяты пшеничная, кукурузная в овсяная мука, которые добавлялись в концентрации, равной содержанию белкового азота в регламентной среде с кукурузным экстрактом.

Bas показали данные опытов, для роста втаммов 805 к 837 серотвиа oette*eicu« , благоприятными оказались среды с пшеничной, кувэдузной и 2,6% овсяной мукой, В этих средах титр спор составлял от 3,6 до 4*9 млрд/мл, а кристалловидные токсины - 80-90%.при титре 2,0млрд/мл м токсинов - 60% в контроле.

На материале 2-х штаммов в »o. tburingj.«nal« серотипов eaucaeicrus в gallería» нами были изучены вопросы, сохранения жизнеспособности спор и клеток в репродукции ях аатомо-

Таблица 8

Характеристика аминокислотной потребности некоторых штампов Вас.итг1г1£1епв1в тг,свиеав1сцз.

Штаи- ' мы бактерий Ростовое Угнетающее сникают угнетение аминокислот Оказывают си-

действие действие иэолейциаа серина ! треонина ; нергетическое действие

805 асп,глу,гис илей,сер,трео вал, асп арг,ала,глу арг,ала,асп, гис гис+арг+трео, гис+трео, гис+трео+глу

811 арг,асп,глу, илей,сер, вал,асп,глу арг,асл,глу арг,ала,асп, гис+трео,

гис трео.лей глу,вал гис+трео+глу, арг+гис,арг+асп

637 арг,асп,глу, гис илеЙ,сер,трео, лей вал,ася,глу 1 1 арг,ала,асп асп,гис гис+трео, гис+трео+глу, гис+трео+асп

Условные сокращения: ава-аланкн, арг-аргинин, асп-аспарагивовая к-та,

глу-глутаниновая н-та, гис-гистидин, илей-изолейцин, лей-лейцин, сер-серии, трео-треовин, в^л-валин.

цидной активности (по кристаллообразованию) в условиях хранения культур после лиофильной суики.

На первой этапе работы для выявления наиболее оптимальной среды, обеспечивающей максимальное споро- и токсияообразовавие были испытаны следующие среды: CP-I, СР-г (Красильдиков,2950), СР-3 (PFldbm, Gottlieb ,1348), СР-4 (H«wle, Crulckebaai ,

1940) И СР-5 (Ямамото) с pH 7,2-7,4.

Указанные среды применялись в различных модификациях с заменой отдельных компонентов на 0;5 и 1,0% гидролизата казеина с учетом потребности испытуемых ятаммов в аминокислотах.

При репродукции хранившихся лиофилиаярованных культур в течение 3-х месяцев при комнатной температуре установлено,что для птаыма 811 серотипа canoaeleu* благоприятной*явилась среда СР-5 с 0,5-1,0% гидролизата казеина, а для штамма 1000 серотипа -gallería* - СР-3, СР-4 и СР-5 с гидролизата казеина. Репродукция штаммов после 5^-ти лет хранения показала,что из испытанных питательных сред наиболее благоприятной для спорообразования (100%) и токсинообразования (70-S0%) штамма 811 серотипа esocáeictt» является модифицированная среда Ямамото(СР-5) о добавлением 0,5-1% гидролизата 'назеина; Для;ятамма ЮОО серотипа е»и«г1м почти все испытанные среды; кроме среды СР-5 ^ оказались неблагоприятными, так как в них отмечалось изменение форм кристаллов. ..-.s.'i-vc ¿аъгл'йлйг, -"v;

Изучено влияние различных защитных сред на сохравб&ве7жизнеспособности и активности культур бактерий при лиофилизации:'' 8 качестве испытуемых культур применялись штамм 647:сер0теш1;к berliner , штамм 1001 серотипа *9tto-daadMUa^4nTaMM[':I000>:j серотипа galleriae а штамм 811 сером пае «ме aaicu е > чглгг*<

В качестве защитных, или суспензионных сред применялись: . СР-5, творожная сыворотка, полученная послеосажденивмолока* 40% хлористым кальцием, творожная сыворотка с >.Ю% сахарозы;с:; Киот.десиванс, физиологический раствор с 10% глицерина и^безк него. ■ - " Л V : .И"» о. - Ч! : Г' C.Taj

Культуры выращивались на среде Ямамото, в течааив З-х суток, центрифугировались и полученная биомасса :разводилась £в¡паре числе наых защитных средах. Разведение.биомассыпроизводилось с расчетом внесения в амцулм суспензиях, титром 1мдрд опорг.и

клеток s Ins.

Результаты репродукции лнофялизировашшх культур, спустя 3 двя. Зяб месяцев показали,что не все испытуемые итаммы одинаково сохранили споро- я токсинообразуючу» активность в испытанных защитных средах. Во всех суспензионных средах хороиие результаты (по. данным процента спорообразования и репродукции нристаллообразуюце» активности) получены.только у штамма 811 серотипа oaueaalettc . Для наймов ЮОО серотипа {berliner и Ю01 - 4«пйхоЫшш веблагопринтными явились'среды Мист.деси-канс и физиологически* раствор с 10¡t глицерина.

По результатам опытов можно заключить,что консервация— культур методом лиофилизацнх в целом не оказывает отрицательного влияния на жизнеспособность спор и клеток и репродукцию их «атомоцждноК активности. Диофилнзацня культур бактерий непосредственно на соответствующих средах без отделения биомассы с ее последующим суспендированном также дает хороиие результаты. Этот вывод подтверждается на материалах исследований по репродукции хранивиихен в лиофилизированном состоянии культур в течение 5 лет при комнатной температуре.

. Проведены также гисто-патологическяе а токсикологические исследования по испытании действия культур кристаллофоров серо* типа cancaaiea* на теплокровных животных (белые мыви, крысы) цри различных методах мх введения. После перорального однолрат-ного введения белым мышам и крысам водных суспензий препаратов ! БИЛ-605, БИП-811 в дозе 200 млрд спор и клеток на кг веса животного > течение 30-дневного наблюдения- не выявлено никаких признаков отравления жлж заболевания (Геворкян, Бобикяи,19б6; Афрякяи» 1970 Диализ микрофлоры исправкеии! животных показал, что* хотя бактерии - кристаллофори обнаруживаются в зке-креиежтах в течение 7-9 дне к, оки не юшшт нормальную микрофлору жжвотжмх, в частности развитие в.«оИ. Ажалогжчиме дажжа* балж получены ж при миогократиеи введекки препаратов в дозе 100 млрд свор а клеток на кг веса животного. Т водопят-инх животных же жаявлено какжх-либв отклонении от норма по сражения с контрольной группой животных. Результаты исследо-вахж! • безвредности жтамков 605, 811 ж 837 для теплокров-нвх обсуждена я утверждена на заседании Евро Комитета по

изучению и регламентации ядохимикатов ара Главной санитарно-эпидемиологическом управлении илнистерства здравоохранения СССР 7 февраля 1966 года.

Выводи

X. Аминоквсдотоэависимые бактерия кироко распространены в кишечной микрофлоре тутового шелкопряда, в подстилке и в эпи-фитной микрофлоре листа шелковицы. Количество этих бактерий значительно возрастает в У возрасте я обусловлено увеличением количества микроорганизмов в впифитной микрофлоре листа шелковицы и в подстилке. > т

2. В исследованных образцах здоровых я погибших гусениц тутового шелкопряда, полученных из'различных ведководчвских районов Армении, Северного Кавказа, Грузия, Азербайджана я Узбекистана, систематически обнаруживались с по ровосшиг бакте рии, в том числе Вас.оогеив я Вао.. В различных4'-'1* образцах погибшего тутового шелкопряда бактерии вида Вм. Чьа-гше1*пм1« обнаружены в Армении в Чегриаском районе 'в коли-' честве 12% из числа обследованных образцов, в Арарате кой доли-не 1% и в предгорных районах Арме шит 6%. Частота* ветре едедгостя Вав^ьиг1ав±вае1е в погибших образцах ту ховогоиелко1фяда,гполу-ченных. из Азербайджана, Грузии, Узбекистана, Краснода^кого иг Ставропольского краев находилась в пределах- з^'ч*»»'-^ „V

3. За исключением культур Bae.Bvgrterl.tiK,' Вао.е1ъМив г И ^ Вшс.роЮТуха все остальные исследованные виды спороносных; бак-!

терий характеризуются аминокислотной завис имостъю71Для"';1г1 культуры различных серотиповвас.^иг1пвДвпв1вч и' 78'"ята~ш*ов,Ч?зо в*в.с»г*ав характерна определенная зависимость4 от'рада амино^* кислот. 4 ,3* зи «нааа.

4. Культуры различных серо типов ваш. 1Ьш-1лйА»пл1а ^характеризуются определенной спецификой аминокислотного питания ,Х1пра-чем более выраженными аминокислотоаависяш^ми; свойствами!'выдел^я ются штаммы разновидности вше.гьшг1а<1«п»1« •▼¿г;^ (серотип ЪшгНпе* ), рост которых,' в основном,*стимулируют ас-парагиновая и глутаминован кислоты, аргинин, гмстждав,*а' неко--торнх штаммов также метиоиин, глицин и валив. У «темпов равлич-ных серотипов одного я того же вида отмечается/потребность;';в

раэлвчных аминокислотах.

Рост исследованных культур подавляется в присутствии кэо-лейцина, лейцина, серина, а в некоторых случаях - треонина.

5 .Культуры видов Вес.0 »r»ue, Bae.thurlngl«&ei*,Bae.QyeQld»a очень сходны по аминокислотному питанию, однако у штаммов вю. чаге«* вв»с.щуе»1й»» редко отмечается потребность в витаминах группы В и нуждаются они в значительно меньшем количестве аминокислот.

6. Искусственное скармливание гусениц тутового велкопряда амйнокислотозавмснмыми втаммамн видовВм.с*гмш, вао.оегеив-те-csterlnm lBt«m*dl*tua, Sae.llohattlforáis при условии их массового развития в кввечном тракте тутового велкопряда, вызывает метаболитические варувеник, а в ряде случаев - гибель ry-i се ниц.

Исследования аминокислотного состава гемолимфы тутового велкопряда показали, что развитие указанных культур в кивечном тракте тутового велкопряда приводит к значительному уменьшению концентрации тех аминокислот, в которых нуждаются ати бактерии (глутаминовая кислота, метионин, аланиа, лейцин, ваолейцин). В результате метаболвтическнх нарувенкй отмечается снижение привесов гусениц, куколок в выхода велка-сырца. В отдельных случаях отмечался высокий процент смертности гусениц (40-50$).

7. Обработка грены растворами большинства испытанных авти-> биотиков показала, что они проникают в оболочку грены в зароди-' ве в обнаруживаются в них в течение года.

Результаты производственных опытов показали,что осенняя обработка грены растворами пенициллина, стрептомицина, терра-мицкна и тетрациклина (общее количество 75г) при весеннем ожив* леями не сказывалась отрицательно на ожввжввнш грены я дальнейшее развитии гусениц. Технологическими анализами жоковов, полученных на этой гренв, установлено,что антибиотики способствовали повышению выхода велха-сырца (сеницалхин-£1?, террамшцкн-I7JÍ, жовтрожь-XSjt), перемоточной способности китв (1,5-2,5 раза) в сортности велжа-енрца (пеиициххии-1-ый сорт, террамицин-2-ой, при контроле 3 сорт}.

8. Некоторве «гаммы автожоватогевннх грибов оказывает отрицательное действие жа ожжвжяемость грены. Выявленное грено-

цидное действие не свяаано с образованней токсичных антибиотиков. На инвазионное развитие яиц аскариды угнетающее влияние оказала обработка их культурами грибов Fuaarium sporothriohella, Beauveria toeeeiana я некоторыми штаммами Вас.coagulana. Все испытанные штаммыВао. thurtoglenaia и их инсектицидные препараты не П0Д8ВЛ яли развития неиатоды Rh.maerocerca н яиц аскариды.

9. Опытами в производственных условиях выявлено ростовое действие пенициллина, стрептомицина, террамицина, тетрациклина, бациграцина и полимиксина, скаршгаваемых гусеницам с лис-тон шелковицы. Лучшие результаты получены с применением пенициллина, террамицина, тетрациклина в концентрации ЮО ед/мл и биомицина 10 и 100 ед/мл при скармливании с раннего (2-го) возраста. Б этих случаях увеличивается вес гусениц на 10-15%, выход шелка-сырца и длина нити - на 10%. Высокие концентрации стрептомицина, бациграцина и полиыаксина в некоторой степени подавляют развитие гусениц при подкормке с ранних возрастов, однако это не сказывается отрицательно на продуктивности тутового шелкопряда.

Установлено, что подкормка тутового шелкопряда растворами пенициллина, стрептомицина, террамицина, тетрациклина в концентрация 1000 ед/мл способствует снижении заболеваемости шелкопряда и уменьшения процента отхода коконов.

10. Скармливание гусениц культурами спорообразуюцих бактерий благоприятно действует на их развитие, качество коконов и выход оболочки. Увеличение длины шелковой нити отмечается при подкормке штаммом 63 Bac.meaan-Urioue «it»*» в ранних возрастах, а штаммом 99 Sae.eteeenterloua nig»r - в течение последнего возраста.

11. Установлено, что при лиофндизецнн и поддержании культур разных сероткпов вида Вас, -t'teurlnglanela наиболее аффективными суспензионными средами является молочная сыворотка. Пнет, десиканс и физиологический раствор. Репродукция из лиофивнзиро-ванного состояния при 5-Летнем хранении не показала*снижения споро- я токсянообраэования.

12. При исследовании 3-х перспективных штаммов Bao.thurla-jelansls vas.oauoaaleut установлено, что для роста этих штаммов

и получения инсектицидных препаратов вместо кукурузного экстракта с успехом «одно использовать кукурузную и овсяную пуку.

Опытами установлена безвредность этих препаратов для теплокровных животных' При систематическом микроанализе кала теплокровных животных данные бактерии, как правило, обнаруживаются в кишечном тракте до В-Ю дней и не подавляют нормальную микрофлору животных. £

Список работ по теме диссертации

1. Проникновение и сохранение антибиотиков в семенах и рассаде некоторых растений. Вопросы с/х и промышл.микробиологии, (Ереван),1958 (соавт.Африкян Э.К., Туманян В.Г.).

2. Действие антибиотиков на возбудителей бактериозов тутового шелкопряда. ДАН Арм.ССР,32 (2) ,ПЗ,1961а(соавт.Африкян Э.К., Туманян В.Г., Саруханяв Л.Б., Авакян З.Р.).

3. Эффективность антибиотиков при бактериозах тутового шелкопряда и повышении его продуктивности. ДАН Ары.ССР,32 (3), 115,19616 (соавт.Африкян Э.К., Туманян В.Г., Чил-Акопян 'i.A., Саруханян Л.Б., Авакян З.Г.).

Способ борьбы с бактериальными болезнями тутового шелкопряда. Автор .свид.(£145445,1962 (соавт.Африкян Э.К., Туманян В,Г., Чил-Акопян Л.А., Паносяв Л.Б., Муоегян P.A.).

5. Применение антибиотиков как средство для обеззараживания грены тутового шелкопряда. Наумно-тех.сб. ГНТК, Ж (8), серия легкая промышл.,(Ереван),1962 (соавт.Чил-Акопян Л.Д., Африкян Э.К.).

6. Влияние подвормяи антибиотиками на развитие и продуктивноеtf тутового шелкопряда. Вопросы шкробиол.,12, 313 (Ереван), 1964 (соавт.Туманян В.Г., Саруханяк Л.Б., Африкян Э.К.).

7. К вопросу о цатогенности бактериального инсектицида из miaii-j нов Вас. оегеия'для человека и некоторых лабораторных живот- 1

-5V-

Г

■ % вых. Материалы I реепубл.научно-практической конференция : so внедрению результатов научных исследований в медшшж-;<г;л скую практику. (Ереван),1966. 220 (соавт^Геворкян С.Г.).

8. Бавтериальный инсектицидный препарат ЕИЛ-805. «Биологический журнал Армения*, 32, (в), 1969 (соавт.Афрвнян Э.К., Чилиигарян 8.А., Чил-Акопяи Л .А., Туманян В.Г., Геворкян

С Л*.).

9. Витаминное ж аминокислотное питание зктомооатогеаных споро-обраауащжх бактерий. Сб.Вопросы микробиологии У(ХУ).Ереван,

' 1972 (соавт.Афрюяв Э.К., Аважян З.Г., Чялкигаряя S.O., -5агдесар*н C.B.).

Ю. Действие эвтомоаатогенных микроорганизмов на яйца «скареды Я неиатодв -Rbabd.maeroowe* . С б. Вопросы микробиологии, У(И), Еревав,Х972 (соавх.Караяряя А.И., Афршнйв 3.R.).

II. Условии сохранения и репродукции активности культу р в «о. thurlnflen«!* . Сб/ Вопросы микробиологии У(ХУ). Ереван, 1972 .(«оавт.Чил-Акомв Л.А., Чилингарнн К.О., Киракосвн И.А., Адимян А.Б.» Исмаилова А.Ю., Африкян Э.К.),

,Z. V** *£ atlU#tle* 3» »ÜJnwre bwtwrlal dl««w** eentrol. II iBtimtlMilw latmlogltelMn Xoagraea, Wi«n

(17-25 ^o^uat, BmctU» I3c), i960 (соавт.Африкяа 3.H., "

Туманян В.Г.).

•'h-- -

Тираж 250

Закаа 210

Печатно-иножительжия лаборатория Ереванского государственного медицииокего икстггута, Ереван*- Кирова 2,