Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Респираторно-синцитиальная (РС) вирусная инфекция и особенности анти-РС-вирусного гуморального иммунитета у больных с различными формами бронхита

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Респираторно-синцитиальная (РС) вирусная инфекция и особенности анти-РС-вирусного гуморального иммунитета у больных с различными формами бронхита"

Р Г Б ОД

2 1 АВГ 1995 На правах рукописи

КРИВИЦКАЯ Вера Зорьевна

РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНАЯ (РС) ВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ И ОСОБЕННОСТИ АНТИ-РС-ВИРУСНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ БРОНХИТА

03.00.06 - вирусологи«

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологически* наук

Санкт-Петербург 1995

Работа выполнена в Государственной научном центре пульмонологии МЗ и МП Российской Федерации.

Научный руководитель: доктор медицинских наук Яковлева Н.В.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук Бичурина М.А. доктор медицинских наук Аксёнов O.A.

Ведущее учреждение - Военно-медицинская Академия им.С.М.Кирова , Санкт-Петербург

Защита состоится "......................:.......................1995 г,

в "........" часов на заседании диссертационного совета Д.074.48.D1

НИИ гриппа РАМН ( 197022, Санкт-Петербург,ул.проФ.Попова, 15/17).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ гриппа РАМН.

Автореферат разослан "..........................................1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Покровская Е.Е.

Актшьность проблемы. Респираторио-синцитиальный { PC} -вирус - является наиболее частой причиной респираторных заболеваний у детей .вызывая у них бронхиты,бронхиолиты и острые пневмонии ( Nicolai Т., Pohl A., i990;Prince LF.,1990 ; Saijo М. et al., 1994 ) , По современным представлениям , РС-инФекция у взрослых людей тоже может протекать тяжело и даже со смертельным.исходом, особенно у пожилых и иммунодеФицитяых пациентов ( Лещикская Н.П., КамФорин Л.Е., 1986; Agit» G.et al., 1990 ; Falsey A.R.et al.,1993).

Установлена важная роль этого вируса в патогенезе различных Форм бронхита (Кетиладзе Е.С. и др., 1986; Яковлева Н.В. и др.,1987; Leschinskaya N.P. et al. ,198ft ; Борисенко Л.В. и др., 1995). Обсуждается возможность связи РС-инФекции с обострением я прогрессированиеи хронического бронхита у взрослых людей, (Марчук Г.И. и др., 1990; Корнеенков В.К.,Семенов В. А.,1991).

Несмотря на многочисленные исследования ,проводимые во многих лабораториях мира, механизмы патогенеза PC-вирусной инфекции и зашиты от нее со стороны инфицированного организма до сих пор во' многом неясны . Работы, посвященные гуморальной реакции на этот вирус, касаются ,в основном, маленьких детей , лишь единичные исследования анализируют анти-РС-вирусный ответ у взрослых пациентов .

Изучение гуморальной реакции на этот вирус необходимо еще и потому , что специфические AT непосредственно участвуют в патогенезе PC- инфекции , способствуют Формированию бронхо-спазиа и обструкции бронхов ( Prince G.A.et al, , 1986 ¡ Nadal D., Ogra P.L.,1990; Toms G.L.,1990 ; Masot A.J.et al.,1993 ). Изучение механизмов гуморальной нейтрализации PC-вируса крайне необходимо , поскольку выяснено ,что высокий уровень специфических AT не обеспечивает реальную анти-РС-вирусную защиту ( Stewart R.S., Gershwin L.J.,1990; ; Toras G.L.,1990 ;Murphy B.R.et al.,1993 ). Особенно важно это для пациентов , у которых РС-инФекция выявляется на Фоне затяжного , рецидивирующего или хронического течения бронхита , когда эффективность иммунной защиты , в том числе и ее гуморального звена, резко снижена .

Целью настоящего исследования являлось изучение особенности анти-РС-вирусного гуморального иммунитета у детей с острым бронхитом и у взрослых пациентов с различными вариантами пстрпю и хронического бронхита ; повышение ч}вг.тяительности ичиунп-♦ерментного метода для серобиагностики PC инФекции .

Задачи исследования: 1/ Разработать оптимальные условия применения иммуноФерментного анализа для выявлен)« специфического к РС-вирусу с

использованием лероксидазного коныогата стафилококкового белка А с целью Более точной диагностики РС-ннФекцин. 2/ Произвести подбор наиболее адекватного для работы штамма РС-вируса.

3 /Оценить частоту выявления РС-вирусной ннФекции ,реинФекции, особенности локализации РС-вирусных антигенов и длительность сохранения их в клетках эпителия слизистой респираторного тракта у пациентов с различными Формами бронхита.

4 /Проанализировать реакцию специфических иммуноглобулинов различных классов при РС- инфекции у детей с острым бронхитом и взрослых пациентов с острыми и хроническими вариантами бронхита.

5/ Выявить связь между активностью анти-РС-вирусного иммунитета и тяжестью клинического состояния пациентов.

6 / Охарактеризовать особенности гуморальной реакции при РС-инФекции у детей и взрослых с острым бронхитом, осложненным проявлениями бронхообструктивного синдрома.

7 / Дать сравнительную характеристику анти-РС-вирусного иммунитета у пациентов с однократно- и многократновыявляемой РС-кнФекцией.

8 / Выявить РС-внрусную персистенцию и провести сравнительный анализ гуморальной реакции при длительном и краткосрочном вирусном инфицировании .

Научная новизна исследования: 1/ Впервые применен иммукоФерментный метод с использованием лероксидазного коныогата стафилококкового белка А и штамма РС-вируса РС/ Новошахтинск /3080/86 для выявления специфического к РС-вирусу . Показана высокая чувствительность и специФич--* ность этого метода для серодиагностики РС- инФекции.

2 / Впервые проведен сравнительный анализ реакции специфических иммуноглобулинов различных классов при РС-инФекции , наблюдаемой у взрослых больных с различными Формами острого и хронического бронхита.

3 / Впервые проведен сравнительный анализ состояния системного и местного гуморального иммунитета при однократновыявляемой и многократной РС-инФекции у взрослых пациентов с различными Формами бронхита.

4/ Впервые показано, что высокие уровни специфического к РС-вирусу сывороточного 1?А являются показателем осложненного течения РС-инФекции.

5/ Впервые охарактеризована реакция иммуноглобулинов различных классов на РС-вирусные антигены, длительно находящиеся в клетках эпителия слизистой респираторного тракта .

Практическое значение работы:

Разработаны условия применения высокочувствительного ммму -ноФерментного метола для выявления анти-РС-вирусных антител класса с использованием пероксивазното хонъюгата

стафилококкового белка А и штамма вируса РС/ Новошахтинск/ 3080/86 , что способствует улучшению серодиагностики РС- инфекции , к, в связи с этим , повышает эффективность своевременного противовирусного лечения.

Получены данные о большой частоте выявления РС- инфекции и сниженном уровне гуморальной анти-РС-внрусной защиты при затяжном и рецидивирующем течении острого бронхита , при наличии бронхообструктивного синдрома у взрослых больных , что должно учитываться при назначении лечения таким пациентам н способствовать повышению его эффективности.

Показана возможность РС-вирусной персистенции .выявления РС-инФекции в период относительной клинической ремиссии, выдвинуто предположение о хронической природе этой инфекции у больных хроническим обструктивным бронхитом. Все указанное является показанием к постоянному контролю над РС- инфекцией у данной группы пациентов .

Основные положения, выносимые на защиту : и У взрослых пациентов с различными вариантами течения бронхита, особенно в случае острого рецидивирующего бронхита, осложнен -кого бронхоспазмом , и хронического обструктивного бронхит?. < большой частотой выявляется РС- инфекция . Различные Формы острого и хронического бронхита различаются по глубине проникновения РС-вирусд в респираторный тракт, продолжительности инфицирования,частоте выявления РС-вирусной реинФекции.

2/Ири РС-инФекции у детей двух возрастных групп ( старше и младше 3 лет) с острым бронхитом показаны различия л активности специфических иммуноглобулинов псех 4 классов .У детей старшего возраста наблшается более ранняя и выраженная анти-РС-вирусная исйтралиаушшая активность сывороточных и секретарим* антител.

3/ Во всех обследованных группах больных , как детей,так и взрослых, наблюдается пряма! корреляция степени остроты РС-вирусного процесса с активностью воспаления в бронхах. Установлена взаимосвязь выраженности гуморальной реакции на РС-вирус с тяжестью клинического состояния пациентов, наличием бронхообструктивного синдрома , частотой РС-вирусных реинФекций 4 / У взрослых больных хроническим обструктивным бронхитом выявлена РС-вкрусная персистенция . Наиболее длительно вирусные антигены сохраняется в глубоких отделах бронхиального дерева. По сравнению с однократным и многократным краткосрочным инфицированием длительное нахождение РС-вирусных структур в клетках эпителия слизистой респираторного тракта связано со сниженной вируснейтрализующей Функцией сывороточных имму -ноглобулинов.

Апробация работы. По материалам диссертации опубликовано II научных работ . Основные результаты исследования доложены на городской конференции молодых ученых по проблемам пульмоно -лотии(г. Санкт-Петербург , май 1991) , на 3 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания ( г. Санкт-Петербург , декабрь 1992) , на 4 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (г.Москва, март 1994).

Реализация работы. Разработанный в процессе исследования кммуноФерментный метод для выявления специфического к РС-вкрусу !вС внедрен в практику вирусологической группы ГНЦ пульмонологии г.С.-Петербурга,

Основные результаты по оценке состояния специфической анти-РС-вирусной гуморальной зашиты учитывались при разработке антивирусной терапии для пациентов ГНЦ пульмонологии и четвертой детской городской больницы г.С.-Петербурга. В связи с результатами по улучшению диагностики РС-инФекции получено 2 удостоверения на рац. предложение по ГУЗЛ 11 21/90 и" » 25/91 .

ШЬёМ И структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения,4 глав , выводов,практических рекомендаций и указателя литчратуры. Текст иллюстрирован 42 таблицами,2 рисунками. Библиографический указатель содержит 374 источника - 86 отечественных и 288 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Ж&ййЯШШ И методы:

Всего проанализировано 253 случая выявленной РС-инФекции: 33 у детей с острым бронхитом (ОБ ) -15 у детей в возрасте до 3 лет (средний возраст-1,410,9 года) , 18 у детей старше 3 лет (средний возраст-8,613,8 лет); 220 у взрослых пациентов - 44 с острим затяжным бронхитом (ОБЗ), 53 с острым рецидивирующим бронхитом( РБ), 38 с хроническим необструктивным бронхитом(ХНБ), 85 с хроническим обструхтивным бронхитом(ХОБ) . В качестве контроля рассматривали 124 случая отсутствия РС-ииФекции у больных с теми же заболеваниями и материал 70 доноров. Разделение пациентов с острым бронхитом на группы в зависимости от особенностей течения заболевания проводили по классификации Кокосова А.Н.( Кокосов А.Н., 1991 ):остротекущий бронхит(ОБ), длящийся не более 2 недель ; затяжной бронхит (ОБЗ) , длящийся до 1 месяца и дольше; рецидивирующий бронхит (РЬ)- остротехущий, повторяющийся в течение года ло тр

вирусных антител(АТ) проводилось в динамике 2-6 раз за время от 3 недель до 3-4 месяцев.44"% всех взрослых больных, у которых была выявлена РС-инФекция, обследовалось повторно 2-5 раз в течение 2 -5 лет. Для выявления РС-вирусных АГ непрямым иммуноФлу-орёсцентным методом использовались материалы браш- биопсий эпителия слизистой оболочки носоглотки и бронхов; бронхиальные смывы , жидкость броихоальвеолярных лаважей ( ЖБАЛ).

О наличии РС-инФекции судили по совокупности нескольких критериев : достоверному приросту в парных сыворотках уровня специфических АТ хотя бы одного из основных классов (1{С,1кМ) и/или нейтрализующих АТ, подтвержденному клиническими симптомами РС-инФекции , сероконверсией,наблюдаемой в реакции связывания комплемента (РСК) ; и , по возможности, наличием РС-вирусных АГ в эпителиальных клетках слизистой респираторное тракта . Частота выявления РС-пирусных антигенов у больных с диагностированной РС-инФекцией показана в таблице 1 ( вторая граФа).

Для выявления специфических к РС-вирусу А1 класса в крови нами были разработаны условия применения непрямого иммуно -Ферментного метода (ИФА) с использованием иррокг.идаачого конъю -гат* стафилококкового белка А. При серодиашигтике РС-ииФекции »тот метод был в 1,4 рала чувствительнее РСК. Содержание анти-РС-иирусчых lgM.UA, ч сыворотках кропи и секретирпою Iи

Выявление вирусных антигенов

- ь -

бронхиальных смывах и ЖБАЛ определяли по общепринятой меголнке с помощью пероксклазных конъюгатов к соответствующему типу AT. Выявление общего IgA в крови проводили методом радиальной иммунониФФузки по Маичини { Mancini G.et al.,1965).

Функциональную способность AT крови , бронхиальных смывов и ЖБАЛ нейтрализовать PC-вирус in vitro оценивали в реакции нейтрализации (РН) на клетках HcLa.

Был произведен подбор наиболее оптимального для работы штамма PC-вируса. Из 3 штампов : 2 эталонных -Long и В 18537 и изолята РС/ Новошахтинск /3080/86 , предоставленных из коллекции Федерального центра НИИ гриппа ( С,- Петербург), наибольшей чувствительностью яри серодиагностике РС-инФекции обладал РС/ Новошахтинск /3080/86 , -что послужило основанием для его использования в ИФА и РН.

PC-вирус культивировали на клетках HeLa и очищали ультрацент -рмФугированием в ступенчатом градиенте сахарозы (Trepanier Р.et at.,1983).

При обработке результатов использовали компьютерную программу Microsta .

Результаты иссленовакиз jj обсуждение.

Результатынашейработы показали, что РС-якФекция наблюдается с большой частотой не только у детей с острым бронхитом(ОБ) , но н у взрослых больных с различными Формами этого заболевания

Таблица 1

__ч_а_с _т_2._т_а____¿julu-ulü J_Iä)___

Annua n/ч ^ PC-вир.антигенов PC-вирусной

РС-инФекции * больных с реинФекции

бР°нхита________________УС-инФекцней

детисОБ_ _67 __66__ _____н/о

"ОБЗ IT* ?7 0

ОБЗ f б/с_____52 _________40______________6____

РБ 5 Г™ 30 2? РБ ♦ б/с _ 75хх _ 35^ _ 54_+ ХНТ ~52т 37 ~22ГГ~ ХОБ__________________IL-____________32^__

+ , х - показатели, достоверно отличающиеся друг от друга (р 0,01) РС- вирус трааиционно считается причиной Формирования

бронхообстругтивиого синдрома (БОС) , проявлениями которого являются бронхоспазм и бронхообструкцкя ,у детей(ЛещинскаяН.П., КамФорин Л.Е.,198&;5ЮИ Е ,е1 а! ,,1985;Ьоре2 Р.е! а1.,1993). На связь этого вируса с БОС у взрослых людей указывают наши данные о более частом относительном наблюдении РС-вирусной инфекции и реинФекции у больных при наличии бронхоспазма ( при затяжном и рецидивирующем течении острого бронхита -ОБЗ+б/с иРБ+б/с) и обструкции ( хронический обструктивный бронхит-ХОБ), чем в слу -чаях отсутствия этих осложнений ( соответственно ОБЗ и РБ ; хронический необсгруктивный бронхит—ХНБ)—табл.1, Лля РС-инФекции , проходящей у детей с ОБ и взрослых больных с хроническими Формами бронхита[ особенно при ХОБ) характерно проникновение РС -вируса в глубокие отделы бронхиального дерева При острых вариантах бронхита у взрослых людей вирусные антигены наблюдаются преимущественно в эпителиальных клетках слизистой верхних дыхательных путей( табл. 2).

Таблица 2 частота выявления РС -вирусных АГ

Форма число ~в~носоглоткГ в круйны* в~мелких _ _ _ _Р_М!! и к!*___________________б[10нх_а_х____бронхах

ОБ лети 23 78 65 н/о

взрослые ОБЗ пациенты: 16 75 13 0

РБ 24 70 17 0

ХНБ 23 43 50 39

ХОБ 64 46 83 • 59

РС-вирусные АГ в браш-биоптатах детей с ОБ сохранялись в подавляющем большинстве случаев только в течение первой недели инфекции ; у взрослых больных с ОБЗ, РБ и ХНБ они не выявлялись уже через 1-2 недели после появления первых симптомов заболевания . Наиболее длительно РС-вирусные структуры присутствовали в клетках респираторного эпителия у пациентов с РБ+б/с и-, особенно с ХОБ . У 8 человек с ХОБ выявлена . РС-вирусная персистенция - от 4,5 до 8 недель ( в среднем 5,5+1,8 недель).

У больных ¡'Б. ХНБ , ХОБ с многократными РС-инФекциями и при вирусной персистенции у пациентов с ХОБ »о всех 100% случаев РС-вирусные АГ выявляли в глубоких отделах бронхиального дерева.

Активность специфических иммуноглобулинов(ИГ ) при РС-инФекции в среднем по группе оценивали по совокупности следушцих

параметрив : динамике изменения средних уровней ли ходу инфекции; частоте выявления больных с ранней реакцией на РС-вирус данного класса АТ ( в первые 2 недели инфекции) ; длительности сохранения в крови после перенесенной инфекции ; доле пациентов , у которых были выявлены высокие уровни этого ИГ и тех, у кого уровни не превышали контрольных значений .

У дегей с ОБ при РС-инФекции были покзаны возрастные особенности в состоянии гуморального иммунитета. Почти у всех детей обеих возрастных групп(старше и младше 3 лет) специфические сывороточные 1&М и реагировали активно и в течение первых 7-10 дней инфекции . Но пик ответа ¡¿С у старших детей наблюдался на 3-4 дня раньше, чем у младших . Активность анти-РС-вирусных ЦЕ и 1кА в крови у младших детей была выше , чем у старших . Высокие уровни специфического секреторного ЦА ^^А) и вирус-нейтрализующей активности секреторных АТ(5АТ) из бронхиальных смывов , наоборот, у старших детей выявлялись по ходу ииФекции раньше и значительно превышали значения, полученные для соответствующих временных точек у младших детей . Способность АТ крови нейтрализовать ¡п VI [ г о инфекционный РС-вирус у детей в возрасте до 3 лет проявлялась позднее, чем у пациентов старше 3 лет При явновыявленной РС- инфекции у части пациентов уровни специфических ^М или ^С в крови не превышали значений, полученных для контрольных групп(доноры и пациенты с теми же Формами бронхита, но без РС-ииФекции) на всем протяжении заболевания. Доля таких пациентов составила: среди детей с ОБ- Ы для ^М и у взрослых больных с острым рецидивирующим - 4% для и ИХ для ,и острым затяжным бронхитом - 343! для 18% для ^С; с хроническим необструктивным - 103! для ^М и 26% зля ЦС;с хроническим обструктивным бронхитом -38! для ГвМ и 22% для [8С. Т.о ., видимое отсутствие увеличения содержания в крови одного из двух этих ИГ -довольно частое явление при РС- инфекции , наблюдаемой у взрослых людей с затяжной- и хроническими Формами бронхита .

У взрослых пациентов показана взаимосвязь активности гуморального анти-РС-вирусного иммунитета и Формы бронхита, при котором наблю'алась инфекция. Выраженность реакции специфического крови убывала следующим образом :

РБ ХНБ 063,ХОБ. Активность специфического ЦС, выявленная в крови по ходу РС-инФекции, не отличалась значимо у пациентов с ОБЗ.ХНБ и ХОБ .

_ У -

Однако, при этик Формах бронхита она была пмше , чем при РБ.

Активность специфического крови при РС-инФекции у пациентов с острыми Формами бронхита ,была значительно выше, чем при хронических вариантах течения заболевания.Наиболее выраженной была реакция этого ИГ при РБ, наименее активной - при ХОБ.

Реакция специфического ^А крови, наоборот, была активнее при РС-инФекции, выявленной у пациентов с ХНБ и особенное ХОБ, чем в группах с острыми Формами бронхита( РБ и особенно ОБЗ).

Пик реакции специфического БГяА из бронхиального содержимого проявлялся у больных РБ на более ранних сроках РС- инфекции ( в течение первой недели), чем у пациентов с другими Формами бронхита( на 2-3 неделе при ОБЗ и ХНБ ; через 4 недели при однократной РС-инФекции у больных ХОБ). Уровни Я^А у больных ХОБ с повторяющимися РС-инФекциями и вирусной персистенции не отличались от нормы на всем протяжении наблюдения за ходом заболевания .

Уровень анти-РС-вирусной нейтрализации сывороточных и секреторных АТ при РС-инФекции , выявленной у пациентов с острыми Формами бронхита , значительно выше, чем у пациентов с хроническими вариантами этого заболевания, особенно при ХОБ.

У взрослых пациентов выявлена связь динамики и активности отпета специфических А'Г с клиническими проявлениями заболевания. У.больных 053,РБ и ХНБ ранняя и активная реакция специфических сывороточных 1&М, ^С и нейтрализующих АТ крови наблюдалась в МОХ случаев у людей без хронической лор-патологии и ярковыра -женной бытовой аллергии . РС-инФекция начиналась, у них остро, на Фоке относительного клинического благополучия. У пациентов с замедленной динамикой ответа со стороны этих АТ ( пик реакции через 3-4 недели инфекции) РС-инФекция выявлялась с большой частотой на Фоне уже длительнотекущего бронхита( от 2-3 до 10—12 недель) , после острой пневмонии,при наличии хронической лор-патологии , сильной аллергии, проявлений бронхообструктивного синдрома . У пациентов с ХОБ, в дополнение к этому , наблюдалась чаще , чем при раннем ответе, высокая степень, активности воспалительного процесса в бронхах, эмфизема легких и сильная дыхательная недостаточность.

Динамика появления и активность, специфических ИГ в крови зависит и от того , является ли РС'-инФекция однократной (единственный случай , выявленный в течение 1 года наблюдения за больным ) или многократной ( 2-3 случая инфекции в год),

У больных РБ.ХНЬ и ХОЬ с повторяющимися РС'-икФекциами пи сравнению со случаями однократного наблюдения показана более ранняя и активная реакция сывороточных специфических ЦСДкА и , особенно ЦМ. Вероятно, усиление и ускорение ответа специФичес -ких ИГ при многократных РС-инФекциях связано с реализацией информации .Формирующейся в клетках памяти при повторных воздействиях на организм вирусных антигенов .Этим можно объяснить и более быстрый ответ специфического ^С при РС-инФекцик у старших детей по сравнению с младшими, поскольку с возрастом увеличивается число перенесенных случаев этого вирусного заболевания .

Нейтрализующая способность АТ крови по отношению к РС-виру-су и активность специфического сывороточного ^Е у больных РБ и ХНБ выше и проявляется раньше при однократной РС-инФекцни , чем при многократной ;у больных ХОБ , наоборот, - более выражена в у пациентов с частыми реинФекциями. Вне зависимости от Формы бронхита, секреторная анти-РС-вирусная гуморальная реакция более активна у пациентов с однократным инфицированием.

Выявлена связь состояния специфического анти-РС-вирусного гуморального иммунитета с наличием проявлений бронхообст-руктивного синдрома( БОС ) при бронхите у детей и взрослых людей.

У детей с ОБ старше 3 лет при выявленной РС-инФекции наличие преходящей обструкции бронхов (при остром обструктнвном бронхите - ООБ ) по сравнению со случаями отсутствия таковой ( острый необ-структивный бронхит - ОНБ ) связано со снижением активности специфических сывороточных 1гМ и Г?С , сильным запаздыванием реакции специфического ^М ; угнетением вируснейтрализующей способности АТ крови и бронхиального содержимого.

При РС-инФекции у взрослых пациентов с острым рецидивирующим бронхитом , осложненным бронхоспазмом( РБ+б/с), тоже снижена активность специфических ^С и , особенно ^М. При затяж- * ном варианте острого бронхита (ОБЗ + б/с) наличие бронхоспазма коррелирует с более поздним достижением пика реакции на РС-вирус со стороны специфического 1еС . Однако, при этой Форме бронхита наличие БОС , по сравнению со случаями его отсутствия , связано, в отличие от тог" что наблюдается в группе РБ, с более выраженным , хотя и замедленным , ответом специфического . Как при ОБЗ ,так и при РБ наличие бронхоспазма коррелирует с замедленной и сниженной анти-РС-вирусной нейтрализацией АТ крови.

При РС-инФекции у взрослых больных с хроническими

- и

иариаитаки бронхита характер реакции специфических 111' даух основных классов хровм менее зависит от наличия БОС, представленного в данном случае стойкой бронхиальной обструкцией, чем при острых Формах : между пациентами с ХНБ и ХОБ выявлены лишь нехитрые отличия в активности специфического IgM.

Кислородное голодание, являющееся следствием БОС, может быть одной из причин снижения и замедления по ходу РС-инФькцим реакции IgM , IgG и уменьшения Функциональной нейтрализующей способности специфических AT. Более выраженный по некоторым параметрам специфический гуморальный анти-РС-иирусный utbüt cü стороны IgM у больных ОЬЗ+ б/с, а не сниженный, как при яру(их Формах бронхита, возможно, объясняется тем, что у *тих больных иммунная система пытается обеспечить защиту от вируса ценой дополнительной напряженности, чего не наблюдается при других вариантах бронхита с БОС - либо из-за сильных сдвигов и угнетенности ( РБ+б/с ; ХОБ ), либо из-за возрастной нестабильности иммунитета ( дети с ООБ). Наличие напряженности в реакции при ОБЗ+б/с подтверждается замедленным во времени ответом специфических IgM и IsG.

IgE принимает непосредственное участие в Формировании бронхообструктивного синдрома ( Мизерницкий Ю.Л.,1992; Schleimer R.Р.,1990; Dandurand R.J.et el.,1993). Нами показано ,что у взрослых пациентов с острыми Формами бронхита активность специфического IgE крови выше при наличии БОС, чем при его отсутствии. Однако, в группе обследованных нами детей , активность специфического IgE, наоборот, была выше при РС-инФекции, наблюдаемой у пациентов с острим необстуктивным бронхитом , по сравнению со случаями острого обструктивного бронхита.

Показано, что (gE является не только показателем сенсибилизации к вирусным АГ, но и играет важную роль в нормальном антивирусном ответе , я том числе и на РС-вирус ( Welliver R.C.et al.,1984:1989 ; Mudde G.C.et at.,1990; Daniele R.P.1990). С этим согласуются наши данные о большой относительной частоте выявления этого специфического ИГпри РС-инФекции - уровни его в крови значительно превышают норму у 62Х детей старше 3 лет и 865! детей младше 3 лет при Об ; у взрослых~в 92* при РБ.75Х при ОБЗ; в 66% и 57X при ХНБ н ХОБ.

Можно предположить, что выявленная у детей младше 3 лет большая активность специфического ЦЕ связана , в основном, с аллергией на пирус , поскольку в этом возрасте особенно часто наб-

лкшется связанная с РС- инфекцией и носящая аллергический характер временная бронхиальная обструкция . На то , что у взрослых людей высокая активность специфического не всегда связана только с аллергией, показывают наши данные о неотличакг щихся средних уровнях специфического ^Е у больных РБ как с бронхоспазмом, так и без него , несмотря на то, что число яркоаы -раженных аллергиков среди этих групп различно : Ш при РБ+б/с и 13% при РБ без б/с, р 0,01. Кроме того, из 35 взрослых больных с различными Формами бронхита , у которых были зарегистрированы внешние аллергические проявления , при РС-инФекции высокие уровни специфического 1вЕ в крови наблюдались лишь в 57% случаев.

Сниженная активность этого иммуноглобулина у детей с обструкцией по сравнению со случаями ее отсутствия при остром бронхите тоже свидетельствует о неоднозначной роли этого ИГ.

То , что активная и ранняя реакция ^Е с большой частотой наблюдается не только у клинически тяжевых пациентов, при бронхите с выраженным астматическим компонентом, но и у относительно здоровых людей при благополучном протекании заболевания ,когда выявляется высокий уровень противовирусной гуморальной нейтрализации , может быть показателем возможной противовирусной Функции специфического ^Е . Вероятно , в первом случае высокие уровни этого ИГ - следствие, главным образом, аллергической реакции, во втором-еще и участия в нейтрализации вируса.

Одним из показателей Функциональной значимости противовирусных антител является способность к нейтрализации . Главная роль в системной гуморальной нейтрализации вирусов отводится (кС и им, в связи с чем определенный интерес представляло сопостанление степени активности этих специФичес -ких иммуноглобулинов с уровнем нейтрализации АТ крови. В некоторых случаях видно явное несоответствие между двумя этими характеристиками. Т.е . , защитные свойства специфических ИГ не являются прямой Функцией их количества.

Так , в группе младших детей с ОБ не было ни одного пациента , у, которого при РС- инФекции не наблюдалось бы значительного подъема в крови уровня специфического и/или ^С . Но у 33! этих больных нейтрализация АТ крови в течение всего времени наблюдения за ходом РС-инФекции не превышала контрольных значений. Г детей старшей возрастной группы с ОБ и взрослых пациентов с ОБЗ и РБ при однократной РС-инФекции не было отмечено значимого несоответствия между уровнями , сроками, и степенью активности

специфических IgM , IgC и гуморальной нейтрализации . Но оно показано у пациентов с РЬ.ХНБ и ХОБ при повторяющихся РС-инФек -циях .когда происходило явное отставание проявлений нейтрализующей активности AT крови от выявления больших количеств' специфических иммуноглобулинов нейтрализующих классов.

При РС-инФекции, наблюдаемой у больных с хроническими Формами бронхита , средние уровни специфических IgM и IgGв крови не уступали по величине таковым, полученным при острых вариантах зтого заболевания . Однако, активность антивирусной сывороточной нейтрализации при этом была значительно ниже.

Поскольку специфическому SIgA отводится главенствующая роль в местной противовирусной нейтрализации , логично было сопоставить его уровни с нейтрализующей способностью AT секреторных жидкостей по отношению к PC-вирусу. Чрезвычайно высокие уровни специфического SIgA из бронхиальных смывов , показанные в острый период РС-инФекции .сочетаются с крайне низкой активностью анти-РС-вирусной нейтрализации местных AT на этих сроках у детей с острым обструктивным бронхитом .

Подобное же несоответствие ярко выражено у больных ХОБ при однократной РС-инФекции .

Т.о., высокие уровни специфических ИГ не обязательно обеспечивают реальную защиту от инфекций.

Сниженная способность специфических ИГ нейтрализовать PC-вирус, несмотря на высокое содержание их в крови , наблюдаемая у маленьких детей с ОБ по сравнению с более старшими ; у взрослых пациентов с хроническими Формами бронхита пи сравнению с острыми ; при повторных РС-инФекциях в сравнении с однократными, является, вероятно, результатом взаимодействия многих Факторов. С одной стороны, с возрастом происходит накопление иммунологической памяти ,в связи с чем наблюдается более быстрый и at тцпный синтез специфических ,И1 в отпет на вирусное инфицирование С другой - незрелость гуморального звена имму нитета у детей ( Schuf Р.Н., 1987; Popow -Kraupp Th. el al. ,1989 ) ; вторичный иммунодефицит , нарушение Т- клеточной регуляции и Функционирования В-лимФоцитов, отмеченные при бронхолегочных заболеваниях с проявлениями бронхообструктивного синдрома (Замотаев И.П., 1985-, Беэкоровайная О.И.,1994; Maiuska 1. et al. ,l99ü), при хроническом бронхите , рецидивирующих вирусных инфекциях (Походзей И. В.и др.,1989; Яковлева Н. В., 1994 ; Reynolds Н.У., 1988 ; Anders S.et а!.,1990).

Вероятно , я усл»пиях такой «»стабильности , при известной низкой иммуногенности главных гликопротеидов РС-вируса , присоединение к которым специфических антител и обеспечивает нейтрализацию вируса, синтезируется большое количество иммуноглобулинов к ненейтрализующим эпитопам РС-вирусных АГ, что отражается на функциональной значимости противовирусных антигсл.

В то время как огромная защитная противовирусная роль Б^А доказана, Физиологическая функция ^А крови еще мало изучена.

Результаты нашего исследования показывают , что высокая активность специфического сывороточного 1йА при РС-инФекции у пациентов с бронхитами прямо коррелирует с осложненным протеканием вирусного процесса и/или бронхита - у детей младшего возраста с острым бронхитом ; у взрослых людей с хроническими Формами бронхита и неоднократными РС-вирусными реинФекциями; при наличии бронхообструктквного синдрома у детей и взрослых.

Реакция этого класса ИГ , наблюдаемая у старших детей с ОБ является, по-видимому , наиболее адекватной при нормальном, «(¡осложненном течении вирусной инфекции: чрезвычайно активный синтез специфического 5 Т в А с первых дней инфекции , выявление его в больших количествах в течение длительного времени ( 2-4 недели | при видимом отсутствии реакции со стороны специфического I8А в кропи . Эта же тенденция прослеживается при РС-инФекции у взрослых людей с острыми вариантами бронхита, когда показаны меньшие сдвиги в иммунной системе , чем при более сложных Формах этого заболевания . Т ,о ., при нормальном течении РС- инфекции у здоровых молодых людей реакция противовирусного ЦА наблюдается, главным образом, на местном , а не на системном уровне.

Полученные данные об отсутствии корреляции между уровнями сывороточного и секреторного специфического 1вА в обследуемых группах больных служат подтверждением положения о том , что системный и секреторный !?А синтезируется в значительной степени независимо друг от друга.

Наивысшая активность специфического ^А крови наблюдается при РС-инФекции у больных наиболее тяжелой Формой бронхита -ХОБ. У этих пациентов , особенно в случае повторных РС-инФекций, выявлен дисбаланс в соотношении гуморального и местного 1хА: высокая гуморальная активность при сниженной или отсутствующей местной реакции . Это. может быть следствием деструктивных изменений слизистых оболочек респираторного тракта , сильно выраженных при ХОБ, что приводит к увеличению поступления ^Л в

*

циркуляцию из-за нарушения эпителиального барьера,« Функциональных нарушений печени (следствие постоянной кислородной недостаточности, связанной с обструкцией ) , поскольку печень-важнейшее место катаболизма ЦА и [вА-содержащнх иммунных комплексов. Обнаруженная нами достоверная прямая корреляция между содержанием в крови анти-РС-вирусного и общего 1?А у больных ХОБ ( при других Формах бронхита подобных связей не установлено ) дает основание предполагать , что большое количество специфического сывороточного 1аА является отражением имеющегося у этих больных какого-то общего , независимого от антигенной специфичности,дефекта в метаболизме данного класса антител.

Вероятно, у больных с РБ.ОБЗ и ХНБ ( особенно при наличии БОС и многократных РС-инФекций) повышение уровней ЦА в крови является следствием временных иммунологических расстройств, которые при ХОБ носят необратимый характер. Подобный наблюдаемому при ХОБ, дисбаланс между количеством специфического сывороточного и секреторного при РС -инФекции у маленьких детей можно объяснить временными нарушениями метаболизма этого ИГ, вызванные глубокими изменениями, которые производит РС-вирус в слизистых оболочках маленьких детей на Фоне еще не сформировавшейся системы иммунной зашиты .

Полученные величины коэффициента взаимной сопряженности Пирсона ( К ) указывают на достоверную связь между острой Фазой РС-инФекции и наличием активного воспалительного процесса в бронхах во всех обследованных группах больных , что свидетельствует о реальном вкладе этой инфекции в патогенез различных Форм бронхита:

К овз = 0,47 ( достоверность корреляции р 0,001) К рв = 0,40 ( р 0,01) К хов = 0,43 ( р 0,02)

К хнв = 0,71 (р 0,01) К об дети = 1 ( р 0,01)

Пги ХОБ данная связь менее значима , чем в других группах : только при этом варианте бронхита у клинически здоровых людей выявлена острая РС-ииФекция (у 2 человек- 13% ), на наличие которой указывало присутствие РС-вирусных АГ в клетках слизистой респираторного тракта и положительная динамика серологической реакции на них . Т.е.,у больных ХОБ показана принципиальная возможность бессимптомного прохождения РС-инФекции. Только при ХОБ (у 3 человек) антигены РС-вируса выявлялись в клетках дыхательного эпителия при отсутствии всех серологияес -ких реакций. Эти случаи можно отнести к Фану нирусоносительства.

К проблеме вирусоносительства примыкает вопрос о персистенции вирусов в организме . Исследований, анализирующих механизм действия персистирующего РС-вируса на человека ш тпо в мировой литературе - единицы . Нами было обследовано 8 пациентов с выявленной псрсистенцией РС-вирусных антигенов в эпителиальных клетках респираторного тракта от 4,5 до 8 недель , в среднем 5,5+1,8 недель .

Длительная вирусная персистенция у этих больных связана со следующими особенностями состояния гуморального иммунитета: 1/ Реакция специфических сывороточных ЦС и, особенно ^М , более выражена и проявляется раньше , а специфического 1&Е крови замедленна и менее длительна, по сравнению со случаями неперсистентиото инфицирования у больных ХОБ. 2/Наблюваютса высокие уровни специфическою с первых дией после выявления РС-вирусных АГ и до 4-5 недели включительно.

3 / Показана чрезвычайно высокая активность специфического сывороточного ЦА одновременно с крайне низким содержанием специфического БЦА в бронхиальных секреторных жидкостях .

4 / Характерно намного более длительное сохранение в крови высоких уровней специфических и 1§А( до 17,28 и 30 недель соответственно) по сравнению со всеми другими группами больных. 6/ Анти-РС-вирусная нейтрализующая активность сывороточных антител выражена незначительно , несмотря на высокие уровни специфических иммуноглобулинов в крови . У секреторных антител из бронхиального содержимого она практически отсутствует.

При ХОБ наблюдаются условия , известные как благоприятствующие персистенции вируса и образованию дефектных вирусных частиц: ярковыраженный иммунодефицит , присутствие в ростовой среде специфических к вирусу АТ( в крови большинства пациентов с ХОБ еще до наблюдаемой РС-чнФекции отмечено повышенное по сравнению с нормой содержание специфических акти- Р С-вирусных АТ). Можно предположить, что под воздействием этих Факторов инфекционный РС- вирус претерпевает морфологические изменения . становясь дефектным,что, в свою очередь, связано с особенностями гуморального ответа на него .

Проходящая без ярковыраженных клинических проявлений в период клинической ремиссии РС инфекция у некоторых больных ХОБ может быть следствием дефектной клеточной РС-вируснпй поп) -ляции , где образуется слишкоу мало полноценных пирионон. чтобы вызвать типичную клиническую картину инфекции .

Значительное увеличение активности специфических сывороточных ЦМ и при вирусной персистенции по сравнению с неперсистентным инфицированием можно объяснить' удлинением экспозиции вирусных антигенов, которые при недлительном воздействии на организм больных со сниженным иммунным статусом, учитывая предполагаемую дефектность вируса, не обладают достаточной иммуногенносты». Иммуногенность может повышаться при персистенции, но, видимо, за счет ненейтрализующих эпитопов РС-вируса, поскольку увеличения нейтрализующей способности специфических иммуноглобулинов крови .несмотря на их высокие уровни , не наблюдается.

Характерный для больных ХОБ дисбаланс в соотношении специфического сывороточного и секреторного 1яА , еще более усиливается при персистенции вируса. Возможно, это обусловлено дефектом связывания молекул ^А с секреторным компонентом и нарушением механизма трансцитоза молекул 1?А через эпителиальные клетки в просвет слизистой. При РС-вирусной персистенции показано одновременное увеличение в крови уровней и 1иА , общим элементом у которых является ] - цепь. Вероятно , длительное нахождение вирусных структур в эпителиальных клетках, где идет сборка , приводит к нарушениям во взаимодействии З-цепи с молекулами и . Следствием этого может быть синтез иммуноглобулинов с низкой способностью к противовирусной нейтрализации, что и наблюдалось у таких больных .

Пролонгированное нахождение вирусных антигенов в эпителии бронхов , а такхе длительное сохранение в крови высоких уровней специфических иммуноглобулинов , наблюдаемое при РС-вирусной персистенции у больных ХОБ , учитывая важную роль анти-РС-вирусных антител в патогенезе РС-инФекции , может способствовать хронизации воспалительного процесса в бронхах , что связано со сгижением иммунного статуса. Создается замкнутый круг: вторичный иммунодефицит и изменения иммунной регуляции у больных ХОБ способствуют персистенции РС-вируса , которая , в свою очередь, ведет к утяжелению клинического течения бронхита.

ВЫВОДЫ

1/ Разработанный иммуноФерментный анализ с применением пероксидазного конъюгата белка А и штамма вируса РС/ Ново-шахтинск /3080/86 является специфичным и чувствительным методом для выявления анти-РС-вмрусного ; способствует улучшению серодиагностики РС-инФекции.

2/ При РС-инФекции у детей с острым бронхитом и взрослых людей с хроническими вариантами этого заболевания наблюдается проникновение вируса в глубокие отделы бронхиального дерева . При острых Формах бронхита у взрослых больных РС-вирусные антигены выявляются преимущественно в эпителиальных клетках слизистой верхних дыхательных путей. Среди взрослых людей наибольший процент выявления РС~ инфекций и реинФекций , наиболее длительное сохранение РС- вирусных антигенов в клетках респираторного эпителия зарегистрированы у пациентов с острым рецидивирующим бронхитом , осложненным бронхоспазмом , и с хроническим об-структивным бронхитом .

З/Выявлены возрастные отличия в состоянии гуморального иммунитета при РС-цнФекции у детей с острым бронхитом :

- У детей старше 3 лет по сравнению с младшими, более выражена реакция специфического сывороточного секреторного бронхиального ЦА ; выше анти-РС-вирусназ нейтрализующая активность антител крови и бронхиального содержимого.

- У пациентов в возрасте до 3 лет по сравнению со старшими детьми выше активность специфических сывороточных ^Е и ^А.

4 / Наличие бронхоспазма и бронхообструкции у больных с различными Формами бронхита связано с более частым по сравнению со случаями отсутствия этих явлений наблюдением РС-инФекции и реииФекцин . РС-инФекция у детей и взрослых с острым бронхитом, осложненным бронхоспазчазмом , характеризуется более низкими покататрлчми анти-РС- пиругной активности сывороточных ^С, 7еМ и иейгралилукши* антител крови , чем это показано для пациентоп , у которых проявления бронхообструктивного синдрома отсутствуют .

5/ У больных с острым рецидивирующим (РБ) , необструктивным - и обструктивнмм хроническим бронхитом (ХНБ.ХОБ) со значительной частотой показаны повторные РС-инФекции, выявляемые на протяжении 1 года наблюдения. При многократных РС-инФекциях по сравнению со случаями однократного выявления , у больных с РБ, ХНБ и ХОБ зарегистрирована более ранняя и выраженная реакция специфических , ЦМ и 1?А крови ; но снижен уровень местного гуморального иммуиитетета . При однократной РС-инФекции но сравнению с повторяющейся у пациентов с РБ и ХНБ наблюдался более ,а у больных ХОБ, наоборот , -менее активный анти-РС вирусный отш:1 сывороточного 1&Е и нейтрализующих антител кропи 6/ Л оказано наличие прямой корреляции мчжпу степе острот

^С-вирусного процесса и активностью воспаления в бронхах при острых и хронических Формах бронхита. Выраженность противовирусной реакции ЦМ и нейтрализующих антител , выявленной в крови по ходу РС-инФекции у взрослых больных с различными вариантами бронхита , обратнопропорциональна тяжести клинического состояния пациентов. Самый низкий уровень системной и местной гуморальной анти-РС-вирусной защиты наблюдается у больных с клинически наиболее тяжелым течением заболевания- при хроническом обструктивном бронхите .

7 / Выраженная реакция на РС-вирус специфического ^А кровн является показателем осложненного течения РС-инФекции и/или бронхита, при котором она наблюдается. Активность этого иммуноглобулина выше при многократновытляемых РС-инФекциях ,чем при однократном ее диагносциропании ; при наличии бронхооб-структивного синдрома по сравнению со случаями его отсутствия ; при хронических Формах бронхита по сравнению с острыми. У больных хроническим обструктивным бронхитом при РС- инфекции наблюдается дисбаланс реакции системного и секреторного специфического ^А - показана высокая активность иммуноглобулина этого класса в крови и низкий урояень ее п бронхиальном содержимом.

8 / Высокая активность специфического ^Е в крови наблюдается при РС-инФекции не только у клинически тяжелых пациентов с ярковыраженным аллергическим компонентом и при наличии проявлений бронхообструктивного синдрома , но и у относительно здоровых людей при благополучном течении заболевания. У взрослых пациентов анги-РС-внрусная активность этого иммуноглобулина выше при острых Формах бронхита,чем при хронических.

9 / У больных хроническим обструктивным бронхитом , преимущественно в глубоких отделах бронхиального дерева, выявлена РС-вирусная персистенция , которая , по сравнению со случаями однократного и многократного недлительного наблюдения РС-вирусных антигенов , характеризуется увеличением активности специфических сывороточных [вС, ^М и I в А ; длительным сохранением в крови высоких уровней этих иммуноглобулинов .особенно ЦМ и ¡гА ; сниженной анти-РС-аирусной нейтрализующей активностью антител крови , крайне низкими показателями секреторного иммунитета .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Кривицкая В.3..Яковлева Н.В. Особенности гуморального ответа на респиоаторно-синцнтиальную инФекнию у детей с острыми обет-

руктивными бронхитами// II Всесоюзный хонтресс по бол. орг.дых,-Челябинск.,1991.-С.126.

2.ЯковлеваН.В.,Кривицкая В.З.,РумельН.Б.,АлександроваН.И. О пер-скстенции реснираторно-сиицитиальното вируса у больных различными Формами острого и хронического бронхита// Там же.- С.127.

3. Кривицкая В.З.,Яховлева Н.В. .МурыгинаГ.Л. Применение иммуно-Ферментного анализа для выявления антител к респираторно-синдитиальному вирусу с помощью конъюгата стафилококкового белка А с пероксиаазой// Вопросы вирусологии.-1991.-М1.-С,76-78.

4. Кривицкая В.З.,Яковлева Н.В. Особенности некоторых показателей гуморального ответа на респираторно-синцитиальную вирусную инфекцию у детей с острыми бронхитами// Лаб.дедо.-1991.-С.45-48.

5. Кривицкая В.3..Яковлева Н.В. ,Александрова.Н.М. Специфический гуморальныйответ на респираторно-синцитиальную инфекцию у больных хроническим обструхтивиыы бронхитом//Иммунология и патоло-логия гриппа и триппопояобных заболеваний.Сб.тр.ВНИИ гриппа., СПб.- 1991 .—С. 34—37.

6. Кривицкая В.З.,Яковлева Н.В. Особенности гуморального ответа на респираторно-синцитиальную вирусную инфекцию у взрослых пациентов с различными Формами бронхита//Вопр.вирусологии,- 1992 -ЙЗ.-С.146-149.

7. Матрахшина Е.И., Яковлева Н.В.,Суховсхаа О.А., Волкова В .В., Кривицкая В.З. Особенности кликико-лабораторного обслевования рабочих пыльных профессий с патологией верхних дыхательных путей//Клинихо-эпидемиологичесхие аспекты проблемы НЗЛ и актуальные вопросы вторичной профилактики.Сб.научилр.ВНИИП., CII6.-lfi8l.-C 22-27. .

8. Кривицкая В.З..Яковлева Н.В. ,Александрова Н.И. Уровни специфического к РС-вирусу 1вА х взрослых больных различными Формами 6ронх»та//1ННациональннЯконгр.побол.орг.дых.-СПб.-1992.-реФ.672 V.Яковлева Н.В..Александрова Н.И..Кривицкая В.З. Респираторные вирусные инФекции при хроническом обструктивком бронхите// Там же.реф.291.

10. Кривицкая В.З..Яковлева Н.В.,Александрова Н.И. Особенности антм-РС-вирусното отвела при хрокичесхих Формах бронхита//

4 Национальный конгресс по бол. орг.дых.-Москва.-1994 .-реФ.180. И. Кривицкая Б.3..Яковлева Н.В. Специфический к респираторно-синцитиадьному (РС)-вирусу при рецидивирующей РС-инФехции у взрослых больных с различными Формами бронхита//

5 Национальны» конгресс по бол орг.дых.-Мое» пз.-1995 .-реФ.1592 .