Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Рекомбинация точковых мутаций и делеций в гене Lys2 у дрожжей-сахаромицетов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чернов, Юрий Олегович

ВВВДЕБИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Генетический анализ механизмов рекомбинации у дрожжей.

1. Типы рекомбинации и методы ее изучения

2. Тетрадный анализ мейотической рекомбинации.II

3. Методы анализа митотической рекомбинации.-.

4. Генетический контроль рекомбинации.

5. Зависимость параметров рекомбинации от расположения и природы рекомбинирующих мутаций.

6. Постановка задачи.

Глава П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

1. Обозначения и сокращения

2. Штаммы дрожжей.

3. Среды и условия культивирования.

4. Генетические методики.

Глава Ш. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММОВ ДРОЖЖЕЙ ДМ ИЗУЧЕНИЯ ВНУТРШЖ-НОЙ РЕКОМШНАЩИ И КАРТИРОВАНИЕ МУТАЦИЙ lye

1. Получение и характеристика мутаций Iys2.

2. Генетическая локализация мутаций 1ув в двухсайтовых и трехсайтовых скрещиваниях.

3. Гомозиготизация мутации his7 при рекомбинации в локусе LYS2.

4. Получение и характеристика мутанта нгс+.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Рекомбинация точковых мутаций и делеций в гене Lys2 у дрожжей-сахаромицетов"

Рекомбинация молекул ДНК - один из источников комбинативной изменчивости. Процессы рекомбинации вовлечены также в контроль стабильности генома. В результате рекомбинации цроисходят перестройки хромосом (см.Томилин, 1983). Специализированные системы рекомбинации обеспечивают дифференцировку типов спаривания у дрожжей (см. Herakowitz, Oshima, 1981), вариации антигенных типов у трипаносом (см. Pays et ai., 1981), развитие иммунной системы в онтогенезе млекопитающих (см. Gough, 1981; Tonegawa et ai., 1981). В последние годы изучение механизмов рекомбинации цриобре-ло не только теоретическое, но и большое прикладное значение. Тест на рекомбиногенность широко используется при выявлении генетической активности факторов окружающей среды (см. iiagao et ai., 1978; Павлов, 1980). С другой стороны, проблема рекомбинационной стабильности химерных ДНК - одна из наиболее актуальных цроблем генетической инженерии (см. Вельков, 1983).

Настоящая работа посвящается изучению механизмов общей (гомологичной) рекомбинации у дрожжей-сахаромицетов. Для общей рекомбинации необходима гомология нуклеотидных последовательностей. Один из подходов к анализу механизмов рекомбинации - исследование рекомбинационных свойств мутаций, нарушающих гомологию ДНК, например, делеций. Рекомбинацию делеций изучали у различных объектов; полученные результаты были противоречивы (см.Щербаков и др., 1982; Szostak et ai., 1983). У дрожжей-сахаромицетов изучали рекомбинацию делеций в мейозе (см. Fogei et ai., 1979, 1981). Детального анализа механизмов митотической рекомбинации мутаций различной природы ранее не проводили.

Мы исследовали рекомбинацию в гене L3t-S2 у Saccharomyces cerevisiae. В ходе работы была получена коллекция точковых мутаций и делеций 1уа2, определено расположение мутаций на карте рекомбинации. Выделена мутация, приводящая к повышению частоты митотиче-ской рекомбинации в гене LYS2. Мы провели систематический анализ продуктов митотической рекомбинации мутаций iys2. Благодаря использованию селективных методов на всех этапах анализа мы смогли цроверить большие выборки митотических рекомбинантов для разных сочетаний мутаций, что не удавалось другим исследователям. Наш обнаружен новый маркер-эффект митотической внутригенной рекомбинации, выражающийся в том, что в некоторых комбинациях мутаций с пониженной частотой цроисходит конверсия и с повышенной частотой - реципрокная рекомбинация. Впервые цроведено сравнение способности к митотической конверсии точковых мутаций и делеций. Проведен сравнительный анализ продуктов спонтанной и индуцированной митотической внутригенной рекомбинации для одних и тех же сочетаний мутаций 1ув2. Обнаружено, что ультрафиолетовое и рентгеновское излучение индуцируют как конверсию, так и рецицрокнуто вну-тригенную рекомбинацию. Показано, что структура цродуктов митотической рекомбинации оцределяется цриродой рекомбинирующих мутаций, а не тем, как получены рекомбинанты (спонтанно или цри индукции).

Наши данные свидетельствуют, что митотическая конверсия больших делеций происходит реже, чем конверсия точковых мутаций. Мы цредполагаем, что взаимодействие гомологичных хромосом в районе делеции затруднено. Возможно, делеции редко включаются в участки гибридной ДНК, образующиеся в зоне контактов гомологов, и препятствуют распространению гибридной ДНК по хромосоме. Результаты работы должны быть учтены при построении молекулярных моделей гомологичной рекомбинации. Полученные данные следует учитывать также цри разработке тест-систем для определения генетической активности физических и химических агентов.

Диссертационная работа выполнена в лаборатории физиологической генетики Биологического научно-исследовательского института ЛГУ в рамках плановой темы "Исследование генетического конт-■ роля наследственной изменчивости" (№ гос.регистрации 81045837 :).

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Чернов, Юрий Олегович

ВЫВОДЫ

1. Получено более 4000 мутантов, усваивающих с(-аминоадипино-вую кислоту (Adp+), у различных штаммов дрожжей-сахаромицетов. Показано, что большинство мутантов Adp+ несут мутации в гене lys2» Получена коллекция точковых мутаций lys 2. Идентифицировано десять делеций lys2.

2. Определено расположение мутаций iys2 на карте рекомбинации; установлена ориентация карты относительно центромеры хромосомы 2.

3. Получена и охарактеризована мутация MICX, приводящая к повышенной частоте внутригенной рекомбинации и чувствительности к ультрафиолетовому излучению.

4. Обнаружен новый маркер-эффект митотической внутригенной рекомбинации у дрожжей-сахаромицетов. Показано, что некоторые мутации lys2 реже остальных конвертируют к дикому типу, и рекомбинация между этими мутациями чаще цроисходит в результате рецип-рокных событий. Две из трех мутаций, проявляющих маркер-эффект, представляют собой большие делеции.

5. Показано, что ультрафиолетовое и рентгеновское излучение индуцируют как митотическую конверсию, так и реципрокную внутри-генную митотическую рекомбинацию. Маркер-эффект больших делеций lys2 сохраняется и при индуцированной рекомбинации.

6. Показано, что мутация MICX не приводит к увеличению доли продуктов рецицрокной внутригенной митотической рекомбинации среди рекомбинантов дикого типа. Мутация MICX сильнее повышает частоту конверсии точковой мутации, чем частоту конверсии делеции.

7. Показано, что в трехсайтовом скрещивании точковой мутации и двойной делеции рекомбинанты Lys+I образуются главным образом в результате конверсии точковой мутации.

8. Обнаружено, что при мейотической рекомбинации между точко-выми мутациями и при мейотической рекомбинации между большими де-лециями lys 2 доля событий рецицрокной рекомбинации не различается.

§ 6. Заключение

Мы провели анализ продуктов митотической рекомбинации в 30 двухбайтовых и 2 трехсайтовых скрещиваниях с участием девяти стабильных точковых мутаций Iys2, двух малых делеций, двух больших делеций (iys2-22 и iys2-25) и двойной делеции 1уз2-22,25 (см.§ I и 2). На среде с ААК селективно отбирали ми-тотических сегрегантов, гомозиготных по скрытой (мутантной) аллели 1уз2, сохраняющейся в гетерозиготе у рекомбинантов дикого типа (см.рис Л 6). Мы идентифицировали природу скрытых аллелей lys2 более чем у 5000 спонтанных и индуцированных УФ и Х-лучами митотических рекомбинантов. В большинстве двухбайтовых скрещиваний митотическая рекомбинация происходит, преимущественно в результате конверсии: в гетерозиготе, как правило, сохраняются исходные одиночные мутации (см. § 3). Однако при рекомбинации между делениями 22 и 25, а также между делецией 22 и точковой мутацией 32 с аномально высокой частотой происходят реципрокные события; до 38% аллелей iys2, сохраняющихся в гетерозиготе у митотических рекомбинантов Lys+, представляли собой двойные мутации. Этот маркер-эффект делеций 22 и 25 наблюдается как при спонтанной рекомбинации, так и при индукции (см. § 3). Для некоторых двухсайто-вых скрещиваний обнаружено, что одна из исходных одиночных мутаций iys2 сохраняется в гетерозиготе значительно чаще другой (см. § 3). Очевидно, это указывает на резкие различия в частотах конверсии мутаций. Эти различия сохраняются и при индукции, а также при повышении частоты рекомбинации вследствие мутации MICX. В трехсайтовых скрещиваниях между двойной делецией iys2-22,25 и точковыми мутациями рекомбинанты дикого типа возникают преимущественно в результате конверсии точковой мутации (см. § 4). Мы проанализировали также мейотических рекомбинантов Lys+, полученных в условиях, когда мейотическая рекомбинация уже происходит, но интенсивного спорообразования не наблюдается (см. § 5). Большинство этих рекомбинантов представляют собой диплоиды и несут две аллели генаЬУБ2, образовавшиеся в ходе одного мейоза. Между комбинациями 2 точковых мутаций (76/33, 18/32) и комбинацией 2 делеций (22/25) не было обнаружено различий по природе скрытых аллелей lys2, сохраняющихся в гетерозиготе у мейотических рекомбинантов Lys+: большинство скрытых аллелей были представлены исходными одиночными мутациями.

Глава У. ОБСУЖДЕНИЕ

§ I. Ген LYS2 как модель для изучения мутационного процесса и рекомбинации

Мутации lys2 имеют плейотропное проявление: они приводят к ауксотрофности по лизину и в то же время к способности усваивать d-аминоадипиновую кислоту в качестве единственного источника азота (Chattoo et al., 1979; см. также гл.HI, § I). Это позволяет вести селекцию в "обе стороны": отбирать как мутантов по гену lys 2 у штаммов дикого типа (на среде с о^ -аминоадипино-вой кислотой), так и ревертантов дикого типа у штаммов, мутант-ных по lys2 (на среде без лизина).

Возможность селекции "в обе стороны" делает ген LYS2 исключительно удобной моделью для изучения механизмов мутационного цро-цесса и рекомбинации у дрожжей. Индукция мутантов по гену LYS2 и анализ природы индуцированных мутаций могут быть использованы для характеристики мутагенов (см. Павлов, 1980). Метод селекции мутантов по гену LYS2 можно рекомендовать для маркирования различных штаммов дрожжей-сахаромицетов (в том числе и штаммов, используемых в производстве).

Благодаря применению селективных методов молено выявлять и анализировать редкие классы мутаций. Мы получили и охарактеризовали большое количество мутантов по гену lys2 (спонтанных и индуцированных УФ и Х-лучами) и идентифицировали мультисайтовые мутации (делеции) (см.гл.Ш, § I). Делеции lys2 обнаруживаются одинаково редко (в среднем I делеция приблизительно из 300 мутаций) как среди спонтанных мутаций, так и среди мутаций, индуцированных УФ и Х-лучами.

По данным, имеющимся в литературе, у бактерий и бактериофагов делеции возникают как спонтанно, так и при индукции различными мутагенами (УФ, Х-лучами, гамма-лучами, быстрыми нейтронами, азотистой кислотой) и составляют в различных локусах от 9 ДО 40$ всех мутаций (Demerec, I960; Hartman et al., 1971; Conk-ling et ai., 1976). У дрожжей-сахаромицетов ранее делеции получали, главным образом, спонтанно. Сравнительный анализ частоты возникновения делеций среди спонтанных и индуцированных мутаций в одном и том же гене у дрожжей проведен нами впервые. Б генах ADE3 (Jones, 1972), САЫ1 (Whelan et al., 1979), CYC1 (Liebman et ai., 1979) делеции составляют, как правило, несколько процентов спонтанных мутаций - меньше, чем у бактерий, но в несколько раз больше, чем в гене LYS2. Механизмы возникновения делеций у^рожжёйизучены мало. Ф.Шерман с соавторами (Sherman et ai*, 1975) получали мутации сус1 в мейозе у диплои-дов, несущих в компаунде две аллели гена CYC1 с небольшими делециями или дупликациями, не нарушающими фазу считывания. Оказалось, что около 25$ вновь возникших мутаций представляли собой делеции. Причины этого явления неясны. Авторы предположили, что делеции могут возникать вследствие "ошибок" рекомбинации в условиях нарушения спаривания гомологичных хромосом. Крупные делеции, захватывающие целый ген или несколько генов, возникают у дрожжей в результате неравного кроссинговера; частота таких делеций сильно повышена в участках, расположенных между повторяющимися последовательностями (Rothstein, 1979; Liebman et al., 1979, 1981). Возможно также возникновение делеций при транспозиции мобильных элементов, как это показано для бактерий (см. Kleckner,1981).

Высокие частоты спонтанной митотической рекомбинации в двухГ сайтовых скрещиваниях (до 3*10 - см.табл.13) свидетельствуют о больших размерах гена lys2, что подтверждается и молекулярно-биологическими данными: Х.Эйбель и П.Филиппеен (Eibel, Phillip-psen, 1983) установили, что кодирующая область гена lys2 составляет около 4 тысяч пар нуклеотидов - значительно больше, чем в других генах дрожжей. Из-за низкой частоты возникновения делеций было затруднительно получить набор перекрывающихся делеций для всей маркированной области гена lys2» Поэтому для картирования мутаций мы изучали рекомбинацию в трехсайтовых скрещиваниях и гомозиготизацию дистального маркера his7 при рекомбинации мутаций lys2 (см.гл.Ш, §§ 2 и 3). На основании этих данных была построена карта гена lys2 (см.рис.13). Метод трехсайтовых скрещиваний не позволяет однозначно определить порядок мутаций в области гена lys2, перекрываемой делецией lys2-25 (см.гл.Ш, ч

§ 2). Достоверные различия между реципрокными гибридами по частоте гомозиготизации his7 у рекомбинантов по гену LYS2 также были зарегистрированы не для всех комбинаций мутаций iys2 (см. гл.Ш, § 3). Данные, имеющиеся в литературе, также свидетельствуют, что в некоторых случаях метод трехсайтовых скрещиваний и анализ гомозиготизации дистального маркера не позволяют однозначно картировать мутации у дрожжей (см. Инге-Вечтомов и др., 1975; Кваша и др., 1976; Lawrence et al., 1975; Sherman et al., 1975). При интерцретации результатов анализа продуктов рекомбинации мы будем использовать главным образом данные о перекрывании и неперекрывании точковых мутаций делециями, а также данные о расположении мутаций iys2-8 и Iys2~76, которое установлено непротиворечиво.

§ 2. Маркер-эффекты мутаций lys 2

Рекомбинанты дикого типа в двухсайтовых скрещиваниях могут возникать в результате конверсии одной из мутаций к последовательности дикого типа либо в результате реципрокной рекомбинации (см.гл.1, § 2 и 3, рис.3 и 4). Доля двойных мутаций среди скрытых аллелей, сохраняющихся в гетерозиготе у митотических рекомбинантов дикого типа, отражает долю событий реципрокной рекомбинации (см.гл.1 , § 3, рис.3 и 4). Встречаемость исходных одиночных мутаций в гетерозиготе отражает относительные частоты конверсии этих мутаций. Если одна из мутаций конвертирует к дикому типу значительно реже другой, она сохраняется в гетерозиготе значительно чаще. В этом случае отношение числа скрытых аллелей, представленных мутацией, которая сохраняется чаще, к числу скрытых аллелей, представленных мутацией, которая сохраняется реже (коэффициент полярности) будет значительно больше I. Если обе мутации конвертируют с близкими частотами, они сохраняются в гетерозиготе также с близкими частотами (Кр близок к Г). Эти закономерности справедливы и цри рекомбинации на стадии двух нитей, и при рекомбинации на стадии четырех нитей (см.подробнее гл.1, § 3).

Ранее у дрожжей-сахаромицетов изучали митотическую рекомбинацию В генах ADE2, ADE3, ADE6, ILV1, HIS1, TRP5 И LEU1 (см. гл.1, табл.2). Для каждого гена анализировали одну-две комбинации мутаций либо суммировали небольшие выборки рекомбинантов для нескольких комбинаций мутаций. Во всех случаях двойные мутации составляли небольшую долю скрытых аллелей (от 0 до 9%). В тех гетероаллельных комбинациях, для которых были проанализированы достаточно большие выборки рекомбинантов, исходные одиночные мутации встречались в гетерозиготе с близкими частотами, т.е. полярности не наблюдалось (Кр был близок к 1)(см. Hurst, Fogel, 1964; Wildenberg, 1970; Kakar, 1963; Golin, Esposito, 1981). Эти данные позволили заключить, что внуаригенная митоти-ческая рекомбинация у дрожжей происходит в основном в результате конверсии, причем разные мутации одного гена конвертируют к дикому типу с близкими частотами (см. Kunz, Haynes, 1981; Golin, Esposito, 1981).

Использование селективного метода отбора гомозигот по скрытой аллели у рекомбинантов дикого типа позволило нам значительно упростить процедуру идентификации продуктов митотической внутригенной рекомбинации (см.гл.1У, рис.17). Мы проанализировали 30 двухбайтовых скрещиваний мутаций 1ув2 и в общей сложности проверили примерно в 4 раза больше рекомбинантов, чем все остальные авторы, вместе взятые. Полученные результаты (см. табл.22) отличаются от данных, имеющихся в литературе. Для некоторых комбинаций мутаций обнаружена высокая (до 38%) частота гетерозигот по двойным мутациям среди митотических рекомбинантов Lys+, а значит, и высокая доля событии рецицрокной рекомбинации, Коэффициент полярности также варьировал в очень широких пределах - от I до 26; следовательно, в некоторых гетероал-лельных комбинациях мутации сильно различались по частотам конверсии.

Рассмотрим экспериментальные данные подробнее с учетом природы рекомбинирующих мутаций (см.табл.27). Для удобства расцре-делим мутации по нескольким группам. I. Большие делеции 22 и 25 (D) - сюда же будем относить также двойную делецию 1уз2-22,25.

В табл.27 учтены результаты трехсайтового скрещивания t

22 25 где точковая мутация 76 находится за пределами участка, переQ крываемого двойной делецией. Трехсайтовое скрещивание ----22 2э здесь рассматриваться не будет. 2. Малые делеции 38 и 74 (а). 3. Мутация 32, которая по своим свойствам отличается от других точковых мутаций. 4. Остальные восемь точковых мутаций (р).

При рекомбинации между точковыми мутациями (кроме 32) двойные мутации составляют небольшую долю скрытых аллелей (от 0 до

Маркер-эффекты мутаций lys 2

Комбина- Гетерозиготы Кр Преобладаю- Проверено ция по двойной щая мутация^ -мутаций мутации, % комби- рекомбинаций нантов

РхР 0-5,6 1,0-2,7 — 8 1168

DxD 24,1-37,6 1,1-1,5 — I 721 рхД 0-7,3 2,2—26,3 D(9) 9 1249 pxd 0,7-5,7 1Д-4Д dO)** 3 225 dxd 5,0 3,4 — I 101 dxD 9,4-11,0 2,0-5,7 D(2) 2 327 рх32 2,6-10,4 1,1-11,3 32(3)xxx 4 774 dx32 3,2-7,6 1,5-3,3 32(l) ^^^ 2 123

Dx32 19,7 1,2 — I 71

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чернов, Юрий Олегович, Ленинград

1. Бельков В.В. Нестабильность рекомбинантных молекул. Генетика, 1983, т.19, № 10, с.I573-1581.

2. Глотов Н.В., Животовский Л.А., Хованов Н.В., Хромов-Борисов Н.Н. Биометрия. Л., Изд-во ЛГУ, 1982, 264 с.

3. Горденин Д.А., Инге-Вечтомов С.Г. Механизм возникновения мутантов ПО гену ade2 у ДИПЛОИДОВ дрожжей Saccharomyces cerevi-siae при действии ультрафиолетового света. Генетика, 1981, т.17, « 5, с.822-831.

4. Горденин Д.А., Кваша В.В. Внутригенвая рекомбинация и методы построения генных карт у грибов. Исследования по генетике, 1976, вып.7, с.73-88.

5. Захаров И.А., Кожин С.А., Кожина Т.Н., Федорова И.В. Сборник методик по генетике дрожжей-сахарамицетов. Л., Наука, 1976, 112 с.

6. Захаров И. А., Ковальцова С.В., Кожина Т.Н., Федорова И.В., Яровой Б.Ф. Мутационный процесс у грибов. Л., Наука, 1980, 288 с.

7. Инге-Вечтомов С.Г., Дрожжи. ВИНИТИ, Итоги науки и техники. Сер."Общие проблемы биологии", М., 1982, т.1, с.148-т192.

8. Инге-Вечтомов С.Г., Горденин Д.А., Кваша В.В. Двойные мутации ПО локусу ade2 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae И ИХ использование для внутригенного картирования. Генетика, 1975, т. II, № 4, с.121-133.

9. Кваша В.В., Горденин Д.А., Инге-Вечтомов С.Г. Распределение некомплементирующих и полярно комплементирующих мутаций в локусе ade2 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae,- Генетика, 1976, т.12, № 5, с.126-138.

10. Королев В.Г., Грачева Л.М. Индуцирование рекомбинации распадом фосфора-32, инкорпорированного в один или оба генома зиготы дрожжей Saccharomyces cerevisiae.- Генетика, 1972,т.8, № 8, C.III-I20.

11. Кушев В.В. Механизмы генетической рекомбинации. Л., Наука, 1971, 248 с.

12. Павлов Ю.И. Использование дрожжей Saccharomyces cerevisiae для изучения активности и специфичности мутагенов и промута-генов. Автореферат дисс.канд., Л., 1980.

13. Райпулис Е.П,, Ле Динь Лыонг. Митотическая конверсия в локусе ad2 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Генетика, 1969, т.5, Jfc 5, с.129-136.

14. Самсонова М.Г. Генетика митохондрий дрожжей. Успехи современной генетики, 1978, вып.7, с.64-84.

15. Смирнов М.Н., Краснопевцева Н.Г., Инге-Вечтомов С.Г., Янулай-тис А.А. Изучение мутантов по экзогенной фосфатазе у дрожжей Saccharomyces cerevisiae*- Исследования по генетике, 1974, вып.5, с.59-62.

16. Томилин Н.В. Генетическая стабильность клетки. Л., Наука, 1983, 156 с.

17. Франклин Н. Неправильная рекомбинация. В кн.: Фаг лямбда, М., Мир, 1975, с.232-256.

18. Хромов-Борисов Н.Н. Метод упорядоченного посева для изучения роста и мутирования микроорганизмов. Тезисы докладов конференции по генетике промышленных микроорганизмов. Цах^адзор, 1973, с.43.

19. Щербаков В.П., Плугина Л.А., Кудряшова Е.А. Рекомбинация у бактериофага Т4: о природе возмущений, вносимых в генетическую рекомбинацию областью негсмшогии. Генетика, 1982,т.18, № 9, с.1442-1452.

20. Baker B.S., Carpenter A.T.C., Esposito M.S., Esposito R.E., Sandler L. The genetic control of meiosis . Annual Review of Genetics, 1976, v.10, p.53-134.

21. Benz Y/.C., Berger H. Selective allele loss in mixed infections with T4 bacteriophage. Genetics, 1973» v.73, N 1, p.1-11.

22. Berger H., Warren A.J. Effects of deletion mutations on high negative interference in T4D bacteriophage. Genetics, 1969, v.63, N 1, p.1-5.

23. Birky C.W. Transmission genetics of mitochondria and chloro-plasts. Annual Review of Genetics, 1978, v.12, p.471-512.

24. Boram W.R., Roman H. Recombination in Saccharomyces cerevi-siae: aDIJA repair mutation associated with elevated mitotic gene conversion. Proceedings of the National Academy of Sciences of USA, 1976, v.73, p.2828-2832.

25. Budd M., Mortimer R.K. Repair of double-strand breaks in a temperature conditional radiation-sensitive mutant of Saccharomyces cerevisiae. -Mutation Research,1982, v.103, p.19-24.

26. Calderon I.L., Contopoulou C.R. and Mortimer R.K. Isolation of plasmids that complement the mutations rad 50-1, rad 51-1,rad 54-3 and rad 55-3. Current Genetics, 1983, v.7, II 2,p.93-100.

27. Calos M.P., Miller J.H. Transposable elements. Cell, 1980, v.20, p.579-595.

28. Case M.E., Giles N.H. Allelic recombination in ITeurospora: Tetrad analysis of a three-point cross within the pan-2 locus. Genetics, 1964, v.49, N 3, p.529-540.

29. Chattoo B.B., Sherman P., Azubalis D., Fjellstedt T.,Mehnert IIand Ogur M. Selection of lys2 mutants of the yeast Saccharomy-ces cerevisiae by the use of o(-aminoadipate. Genetics, 1979, v.93, N 1, p.51-65.

30. Choi Т., Lusnak K., Williamson M. and Fogel S. Gene conversion of a centromeric ade8-18. In: The Molecular Biology of

31. Yeast. Abstracts of papers presented at the meeting. Cold Spring Harbor, Hew York, 1983, p.101.

32. Conkling M.A., Grunau J.A. and Drake J.W. Gamma-ray mutagenesis in bacteriophage T4. Genetics, 1976, v.82, p.565-575.

33. Das Gupta C., Radding C.M. Polar branch migration promotedby RecA protein: Effect of mismatched base pairs. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1982, v.79, N 3, p.762-766.

34. Demerec M., Frequency of deletions among spontaneous and induced mutations in Salmonella. Proceedings of The national

35. Academy of Sciences of USA, 1960, v.46, p.1075-1079.

36. Doermann A.H., Parma D.H. Recombination in bacteriophage T4.~ Journal of Cellular Physiology, 1967, v.70, Suppl.1, p.147-164.

37. Drake J.W. Heteroduplex heterozygotes in bacteriophage T4involving mutations of various dimensions» Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1966, v.55, p.506-512.

38. Eibel H., Philippsen P. Identification of the cloned S.cere-visiae LYS2 gene by an integrative transformation approach.-Molecular and General Genetics, 1983, v.191, N 1, p.66-73.

39. Eibel H., Gafner J., Stotz A., Philippsen P. Characterization of yeast mobile element Ty1. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, 1981, v.45, part II, p.609-617.

40. Esposito M.S. Postmeiotic segregation in Saccharomyces. -Molecular and General Genetics, 1971, v.111, IT 3, p.297-299.

41. Esposito M.S. Evidence that spontaneous mitotic recombination occurs at the two-strand stage. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1978, v.75, N 9,p.4436-4440.

42. Pabre P. Induced intragenic recombination in yeast can occur during the G1 mitotic phase. Nature, 1978, v.272, p.795-798.

43. Pabre P., Roman H. Genetic evidence for inducibility of recombination competence in yeast. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1977, v.74, N 4, p.1667-1671.

44. Palco S.C», Rose M., Botstein D. Homologous recombination between episomal plasmids and chromosomes in yeast.

45. Genetics, 1983, v.105, N 4, p.843-856.

46. Pink G.R. A cluster of genes controlling three enzymes in histidine biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae. -Genetics, 1966, v.53, p,445-459.

47. Pink G.R., Styles C.A. Gene conversion of deletions in the

48. HIS4 region of yeast. Genetics, 1974, v.77, p.231-244.

49. Pink G.R., Parabaugh P., Roeder G. and Chaleff D. Transposable elements(Ty) in yeast, Gold Spring Harbor Symposia on

50. Quantitative Biology, 1981, v.45, part II, p.575-580.

51. Fogel S., Hurst D.D. Meiotic gene conversion in yeast tetrads and the theory of recombination. Genetics, 1967, v.57,p.455-481.

52. Fogel S., Mortimer R.K. Informational transfer in meiotic gene conversion. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1969, v.62, II 1, p.96-103.

53. Fogel S., Mortimer R.K. Fidelity of meiotic gene conversionin yeast. Molecular and General Genetics, 1970, v.109, p.177-185.

54. Friis J., Roman H. The effect of the mating type alleles on intragenic recombination in yeast. Genetics, 1968, v.59, N 1, P.33-36.

55. Game J.C., Johnston L.H., Borstel R.C. von. Enhanced mitotic recombination in a ligase defective mutants of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1979, v.76, p.4589-4592.

56. Game J.C., Zamb T.J., Braun R.J., Resnick M. and Roth R.M. The role of radiation (rad) genes in meiotic recombination in yeast. Genetics, 1980, v.94, N 1, p.51-68.

57. Gottesman S. Lambda site-specific recombination; The att site. Cell, 1981, v.25, p.585-586.

58. Gough II. The rearrangement of immunoglobulin genes.- Trends in Biochemical Sciences, 1981, v.6, N 8, p.203-205.

59. Gutz H. Site specific induction of gene conversion in Schizosaccharomyces pombe. Genetics, 1971, v.69, p«317-337.

60. Haber J., Liu P.S., Resnick M. Gene conversions induced by-irradiation are directed toward the irradiated chromosome, th- XI International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology. (Abstracts). Montpellier, Prance, 1982.,p. 165.

61. Hamza H., Haedens V., Mekki-Berrada A. and J.-L.Rossignol. Hybrid DNA formation during meiotic recombination. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1981,v.78, N 12, p.7648-7651•

62. Hartman P.E., Hartman Z., Stahl R.C. Classification and mapping of spontaneous and induced .mutations in the histidine operon of Salmonella. Advances in Genetics, 1971, v.16,p.1-34.

63. Hastings P.J., Savage E.A. Further evidence of a dispairity between conversion and restoration in the his1 locus of Saccharomyces cerevisiae. Current Genetics, 1984, v.8, N1,p.23-28.

64. Reseach, 1975, v.33, p.157-164.

65. Hoekstra M.F., Malone R.E. Error-prone repair is not required for reml-produced hypermutability. In; The Molecular Biology of Yeast. Abstracts of papers presented at the meeting. Cold Spring Harbor, New York, 1983, p.93.

66. Holliday R. A mechanism for gene conversion in fungi.-Genetical Research., 1964, v.5, p.282-304.

67. Hotchkiss R.D. Models of genetic recombination. Annual Review of Microbiology, 1974, v.28, p.445-468.

68. Hurst D.D., Fogel S. Mitotic recombination and heteroallelic repair in Saccharomyces cerevisiae.- Genetics, 1965, v.50, p.435-458.

69. Hurst D.D., Fogel S., Mortimer R.K. Conversion associated recombination in yeast. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1972, v.69, p.101-105.

70. Ikeda H., Moriya K., Matsumoto T. In vitro study of illegitimate recombination: Involvement of DNA gyrase. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, 1981, v.45, part I, p.399-408.

71. Ikeda H., Aoki K. and Naito A. Illegitimate recombinationmediated in vitro by DNA gyrase;' of Escherichia coli: structure of recombinant ША molecules, Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1982, v.79, N 12, p.37243728.

72. Jackson J.A., Pink G.R. Gene conversion between duplicated genetic elements in yeast.- Nature, 1981, v.292, p.306-311.

73. Kalcar S.N. Allelic recombination and its relation to recombination of outside markers in yeast.- Genetics, 1963, v.48,p.957-966.

74. Keil R.L. and Roeder G.S. A mitotic recombination hotspot in the ribosomal DNA of Saccharomyces cerevisiae. In: The Molecular Biology of Yeast. Abstracts of papers presented at the meeting, Cold Spring Harbor, New York, 1983, p.87.

75. Klar A.J.S., Pogei S. and Lusnak K. Gene conversion of the mating-type locus in Saccharomyces cerevisiae. Genetics,1979, v,92, p.777-782.83» Kleckner N, Transposable elements in prokaryotes. Annual Review of Genetics, 1981, v.15, p.341-404.

76. Kunz B.A. and Haynes R.H. Phenomenology and genetic control of mitotic recombination in yeast. Annual Review of Genetics, 1981, v.15, p.57-89.

77. Kupiec M., Simchen G. Cloning and mapping of the RAD50 gene of Saccharomyces cerevisiae. Molecular and General Genetics,1984, v.193, N 3, p.525-531.

78. Lawrence C.W. Mutagenesis in Saccharomyces cerevisiae.-Advances in Genetics, 1982, v.21, p.173-254.

79. Lawrence C.W., Sherman P., Jackson M., Gilmore R.A. Mapping and gene conversion studies with the structural gene for iso--1-cytochrome с in yeast.- Genetics, 1975» v.81, N 4,p.615-629.

80. Lichten M., Borts R., Hearn M. amd Haber J. Analysis of two cloned regions with high frequencies of recombination inyeast.- In: The Molecular Biology of Yeast. Abstract of papers presented at the meeting. Cold Spring Harbor, New York, 1983, p.127.

81. Liebman S.W., Singh A., Sherman P. A mutator affecting the region of the iso-1-cytochrome с gene in yeast.- Genetics,1979, v.92, p.783-802.

82. Liebman S.W. and Downs K.M. The RAD52 gene is not required for the function of the DEL1 mutator gene in Saccharomyces cerevisiae.- Molecular and General Genetics, 1980, v.179, p.703-705.

83. Liebman S., Shalit P., Picologlou S. Ту elements are involved in the formation of deletions in DEL1 strains of Saccharomyces cerevisiae.- Cell, 1981, v.26, p.401-409.

84. Lighten M. and Pox M.S. Effects of nonhomology on bacteriophage lambda recombination. Genetics, 1983, v.103, N 1,p.5-22.

85. Lindegren C.C. Uon-mendelian segregation in a single tetrad of Saccharomyces ascribed to gene conversion.- Science, 1955, v.121, p.605-607.

86. Lissouba P., Mousseau J., Rizet G., Rossignol J.-L» Pinestructure of genes in the ascomycete Ascobolus immersus.-Advances in Genetics, 1962, v.11, p.343-380.

87. Luchnik A.II., Glaser V.M., Shestakov S.V. Repair of ША double-strand breaks requires two homologous DTTA duplexes.

88. Molecular Biology Reports, 1977, v.3, p.437-442,

89. Makin G.V., Szybalski W. and Blattner F.R. Asymmetric effects of deletions and substituions on high negative interference in coliphage lambda.- Genetics, 1982, v.102, N 3, p.299-317.

90. Maloney D., Pogel S. Mitotic recombination in yeast: Isolation and characterization of mutants with enhanced spontaneous mitotic gene conversion rates.- Genetics, 1980, v.94, p.825-839.

91. Markham P., Whitehouse H.L.K. A hypothesis for the initiation of genetic recombination in eukaryotes.- Nature, 1982, v.295, p.421-423.

92. Meselson M.S., Radding C.M. A general model for genetic recombination. Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1975, v.72, p.358-361.

93. Mikus M.D., Petes T.D. Recombination between genes located on nonhomologous chromosomes in Saccharomyces cerevisiae.-Genetics, 1982, v.101, N 3M, p.369-404.

94. Minet M., Grossenbacher-Grunder A.M., Thuriaux P. The origin of a centromere effect on mitotic recombination. A study inthe fission yeast Schizosaccharomyces pombe.- Current Genetics, 1980, v.2, p.53-60.

95. Mitchell M.B. Aberrant recombination of pyridoxine mutants of Neurospora.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1955, v.41, p.215-220.

96. Montelone B.A., Prakash S. and Prakash L. Recombination and mutagenesis in rad6 mutants of Saccharomyces cerevisiae: Evidence for multiple functions of the RAD6 gene.- Molecular and General Genetics, 1981c, v.184, p.410-415.

97. Moore C.W., Sherman P. Role of DNA sequences in genetic recombination in the iso-1-cytochrome с gene of yeast. I. Discrepancies between physical distances and genetic distances determined by five mapping procedures. Genetics,1975, v.79, p.397-418.

98. Mortimer R.K., Fogel S. Genetical interference and geneconversion.- In: Mechanisms in recombination, ed. by R.F.Grell, 1974, p.263-275.

99. Mortimer R.K., Schild D. Genetic map of Saccharomyces cerevisiae.- Microbiological Revievs, 1980, v.44, N 4, p.519-571.

100. Mortimer R.K., Contopoulou R., Schild D. Mitotic chromosome loss in a radiation-sensitive strain of the yeast Saccharomyces cerevisiae.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1981, v.78, p.5778-5782.

101. Munz P., Amstutz H., Kohli J., Leupold U. Recombination between dispersed serine tRUA genes in Schizosaccharomyces pombе.- Nature, 1982, v.300, p.225-231.

102. Nagao M., Sugimura Т., Matsushima T. Environmental mutagens and carcinogens.- Annual Reviev of Genetics, 1978, v.12,p.117-160.

103. Nicolas A., Rossignol J.-L. Gene conversion: point-mutationheterozygoses laver hetегоduplex formation.- The EMBO Journal, 1983, v. 2, N 12, p.2265-2270.

104. Orosz L., Rostas K. and Hotchkiss D. A comparison of twopoint, three point and deletion mapping in the С cistron of rhizobiophage 16-3 with an explanation for the recombination pattern.- Genetics, 1980a, v.94, p.249-263.

105. Orosz L., Pay A. and Dallmann G. Heterozygosis of phage 16-3 of Rhizobium meliloti: moderate level of mismatch repair or gene conversion.- Molecular and General Genetics, 1980b, v.179, p.163-167.

106. Orr-Weaver T.L., Szostak J.W., Rothstein R.J. Yeast transformations A model system for the study of recombination.-Proceedings of The National Academy of Sciences of USA,1981, v.78, N 10, p.6354-6358.

107. Orr-Weaver T.L., Szostak J.W. Yeast recombination: The association between dOuble-strand gap and crossing-over.-Proceedings of the National Academy of Sciences of USA, 1983, v.80, N 14, p.4417-4421.

108. Pays E., Lheureux M., Steinert M., Analysis of the DNA and RNA changes associated with the expression of isotypic variant-specific antigens of trypanosomesNucleic Acid Research, 1981, v.9, N 11, p.4225-4238.

109. Petes T.D. Unequal meiotic recombination within tandem arrays of yeast ribosomal DNA genes.- Cell, 1980, v.19,p.765-774.

110. Prakash S., Prakash L. Increase spontaneous mitotic segregation in IMS-sensitive mutants of Saccharomyces cerevisiae.-Genetics, 1977, v.87, p.229-236.

111. Prakash L., Sherman P. Mutagenic specificitys reversion of iso-1-cytochrome с mutants of yeast.- Journal of Molecular

112. Biology, 1973, v.79, p.65-82.

113. Prakash S., Prakash L., Burke W. and Montelone B.A. Effectsof the RAD52 gene on recombination in Saccharomyces cerevisiae.- Genetics,1980, v.94, p.31-50.

114. Radding C.M. Homologous pairing and strand exchange in genetic recombination.- Annual Reviev of Genetics, 1982, v.16,p.405-437.of

115. Resnick M.A. The repair double-strand breaks in D1TA: a moofdel involving recombination.- Journal theoretical Biology, 1976, v.59, p.97-106.

116. Resnick M.A. The induction of molecular and genetic recombination in eukaryotic cells.- Advances in Radiation Biology, 1979 , v.8, p.175-217.

117. Resnick M.A., Martin P. The repair of double-strand breaks in the nuclear ША of Saccharomyces cerevisiae and its genetic control.- Molecular and General Genetics, 1976, v.143,p.119-129.

118. Rodarte-Ramon U.S., Mortimer R.K. Radiation-induced recombination in Saccharomyces: Isolation and genetic study of recombination-deficient mutants.- Radiation Research, 1972, v.49, N 1, p.133-147.

119. Roeder G.S., Pink G.R. Movement of yeast transposable elements by gene conversion.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1982, v.79, р.5б21-5б25.

120. Roeder G.S., Parabaugh P.J., Chaleff D.T., Pink G.R. The origins of gene instability in yeast.- Science, 1980, v.209,p.1375-1380.

121. Roman H. Studies on gene mutation in Saccharomyces.- Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, 1957, v.21, p.175-183.

122. Roman H., Pabre P. Gene conversion and associated reciprocal recombination are separable events in vegetative cells of Saccharomyces cerevisiae.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1983, v.80, N 22, p.6912-6916.

123. Rose A.H. Growth and handling of yeast.- Ins Methods in Cell

124. Biology, ed. by D.M.Prescott, 1975, v.12, p.1-16.

125. Rose M., Winston P. Identification of а Ту insertion within the coding sequence of the S.cerevisiae URA3 gene.- Molecular and General Genetics, 1984, v.193, N 3, p.557-569.

126. Rossignol J.L. and Paquette N. Dispairity of gene conversion in frameshift mutants located in locus b2 of Ascobolus immersus.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1979, v.76, p.2871-2875.

127. Roth R. Chromosome replication during meiosis: Identification of gene functions required for premeiotic DNA synthesis.- Proceedings of The National Academy of Sciences of USA, 1973, v.70, p.3087-3091.

128. Roth R. Temperature-sensitive yeast mutants defective in meiotic recombination and replication.- Genetics, 1976, v.83, p.675-686.

129. Roth R., Pogel S. A system selective for yeast mutants deficient in meiotic recombination.- Molecular and General Genetics, 1971, v.112, p.295-305.

130. Rothstein R. Deletions of a tyrosine tRNA gene in S.cerevisiae.- Cell, 197?, v.17, p.185-190.

131. Saeki Т., Machida I. and llakai S. Genetic control of diploid recovery after ^-irradiation in the yeast Saccharomyces cerevisiae.- Mutation Research, 1980, v.73» p.251-265.

132. Savage E.A., Hastings P.J. Marker effects and the nature of recombination event at the his1 locus of Saccharomyces cerevisiae.- Current Genetics, 1981, v.3, p.37-47.

133. Scherer S., Davis R.W. Recombination of dispersed repeated DNA sequences in yeast.- Science, 1980, v.209, p.1380-1400.143» Scherer S., Mann C. and Davis R.W. Reversion of a promotor deletion in yeast.- Nature, 1982, v.298, p.815-819.

134. Schild D., Konforti В., Perez C., Gish W.arid; Mortimer R.K. Cloning of the RAD52 gene.- Current Genetics, 1983, v.7,1. N 2, p.85-92.

135. Sherman P., Roman H. Evidence for two types of allelic recombination in yeast.- Genetics, 1963, v.48, p.255-261.

136. Sherman P., Stewart J.W., Jackson M., Gilmore R.A., Parker J.H. Mutants of yeast defective in iso-1-cytochrome c.-Genetics, 1974, v.77, p.255-284.

137. Stadler D.R. The mechanism of intragenic recombination.-Annual Review of Genetics, 1973, v.7, p.113-127.

138. Stahl P.W. One way to think about gene conversion.-Genetics, 1969, v.61 (Suppl.), p.1-13.

139. Sugawara IT., Szostak J.W. Recombination between sequences in nonhomologous positions.- Proceedings of The National

140. Academy of Sciences of USA, 1983, v.80, IT 18, p.5675-5679.

141. Szostak J.W., Wu R. Unequal crossing-ovor in the ribosomal ША of Saccharomyces cerevisiae.- Nature, 1980, v.284,p.426-430.

142. Szostak J.W., Orr-Weaver T.L., Rothstein R.J., Stahl P.W. The double-strand-break repair model for recombination.-Cell, 1983, v.33, N1, p.25-35.

143. Tonegawa S., Sakano H., Maki R., Traunecker A., Heinrich G., Roeder W., Kurosawa Y. Somatic reorganization of immunoglobulin genes during lymphocyte differentiation.- Cold Spring

144. Harbor Symposia on Quantitative Biology, 1981, v.45, part II, p.839-858.

145. Whelan W.L., Gocke E. and Manney T.R. The CA1T1 locus of Saccharomyces cerevisiae; fine-structure analysis and forward mutation rates.- Genetics, 1979, v.91, p.35-51.

146. Whitehouse H.L.K., Hastings P.J. The analysis of the genetic recombination on the polaron hybrid ШТА model.- Genetical Research, 1965, v.6, p.27-92.

147. Wildenberg J. The relation of mitotic recombination to D1TA replication in yeast pedigrees. Genetics, 1970, v.66,p.291-304.

148. York, 1983, p.102. 160» Winston M.K., Bhattacharjee J.K. Growth inhibition by o( -aminoadipate and reversal of the effect by specific amino acid supplements in Saccharomyces cerevisiae.- Journal of Bacteriology, 1982, v.152, N 2, p.874-879.

149. Woodworth-Gutai M. Recombination in SV40-infected cells: Nucleotide sequences at viral-viral recombinant joints in naturally arising variants. Virology, 1981a, v.109,p.344-352.

150. Woodworth-Gutai M. Recombination in SV40-infected cells: Viral DNA sequences at sites of circularization of transfec-ting linear DNA.- Virology, 1981b, v.109, p.353-365.

151. Zamb T.J., Petes T.D. Unequal sister-strand recombination within yeast ribosomal DNA does not require RAD52 gene product.- Current Genetics, 1981, v.3, p.125-132.