Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации

Алгулян, Армен Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации"

на правахрукописи

ии^4Ь5Э9Э

АЛГУЛЯН АРМЕН СЕРГЕЕВИЧ

РАЗВИТИЕ РЕКОНСТРУИРОВАННЫХ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ИХ

АКТИВАЦИИ

03.00.23. - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Г<

п. Дубровицы, Московская область 2008 г.

003455999

Работа выполнена в лаборатории меточной инженерии и трансплантации эмбрионов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных Россельхозакадемии.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Рябых Владимир Павлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,

заслуженный деятель науки России Тараканов Борис Васильевич;

кандидат биологических наук Сытина Галина Николаевна

Ведущее учреждение: Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина

Защита диссертации состоится 23 декабря 2008 года, в 10 часов, на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.013.01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства Россельхозакадемии.

Адрес института:

142132, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы, ГНУ ВНИИЖ. т/факс (4967) 65-11-01

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института. Автореферат разослан « 2008 года.

Учёный секретарь совета, кандидат биологических нау:

В.Г1. Губанона

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Большое значение, которое во всём мире придаётся разработке технологии клонирования животных, обусловлено тем, что она может быть многогранно использована в таких областях как биология, сельское хозяйство и медицина.

В животноводстве технология клонирования может быть направлена на интенсивное использование уникальных выдающихся животных для ускорения селекционного процесса, для усиления эффекта селекции за счёт более быстрого получения оптимизированных генотипов, для сохранения исчезающих пород домашних и диких животных. Кроме того, технология клонирования может быть использована для повышения эффективности технологии получения трансгенных животных.

С 1997 года - после получения овечки Долли (Wilmut I. et al., 1997), когда было показано, что в организме взрослых животных имеются недифференцированные клетки, обладающие тотипотентными свойствами, которые могут быть использованы в качестве источников кариопластов для реконструирования клеток с целью клонирования животных, исследования по разработке технологии клонирования животных вступили в новый этап. При использовании в качестве источника ядер соматических клеток взрослого животного можно получать клоны потомков с желаемыми признаками, которые в значительной степени соответствуют признакам, уже проявившимся у их прародителя.

Несмотря на то, что за последние годы в области клонирования животных достигнуты определенные успехи, они пока в большей степени носят эмпирический характер, поэтому-положительные результаты сильно варьируют от эксперимента к эксперименту. Основной причиной такой нестабильности результатов является недостаточность фундаментальных знаний о глубинных механизмах, обусловливающих процесс репрограммирования кариопластов цитопластами, и факторов, влияющих на этот процесс.

Одним из критических факторов технологии клонирования животных является активация цитопластов, от которой зависит репрограммирование кариопластов и дальнейшее развитие реконструированных клеток.

Интерфазное ядро соматической клетки, трансплантированное в цитоплазму энуклеи-рованиой яйцеклетки, под действием факторов цитоплазмы переходит в состояние аналогичное состоянию метафазы II ядра нативной яйцеклетки, и оказывается заблокированным в этом состоянии. Чтобы вывести ядро реконструированной клетки из состояния метафазы II и запустить процесс деления дробления ее необходимо активировать.

Исходя из вышеизложенного существует острая необходимость в поиске наиболее эффективных способов активации реконструированных клеток, позволяющих репрограм-мировать кариопласты, и обеспечивающих полноценное развитие реконструированных клеток.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение влияния различных факторов искусственной активации на развитие реконструированных клеток, полученных при использовании в качестве цитопластов - ооцигов, дозревавших in vivo и in vitro, а в качестве кариопластов - ядра соматических клеток взрослых животных.

Для достижения поставленной цели считали необходимым решить следующие задачи:

- изучить влияние различных факторов на процесс активации и развитие реконструированных клеток при разных способах активации цитопластов;

- изучить влияния ионов экзогенного Са ++ на активацию цитопластов при разных способах и вариантах активации цитопластов;

- изучить влияния осмотического давления среды активации на активацию цитопластов и развитие реконструированных клеток;

- выяпить оптимальные системы активации реконструированных клеток крупного рогатого скота.

Научная Новизна исследований. Впервые в сравнительных исследованиях на основе изучения участия экзогенного Са,+ в процессе искусственной активации яйцеклеток млекопитающих установлено, что участие экзогенного Са++ в процессе искусственной активации реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей происходит с помощью тех же механизмов, что и активация неоплодотворённых яйцеклеток к партено-генетическому развитию.

Впервые установлено, что высокочастотное переменное электрическое поле вызывает активацию к партеногенетическому развитию мышиных яйцеклеток, созревавших in vivo, при этом активация происходит только при участии эндогенного Са++.

Впервые установлено, что яйцеклетки крупного рогатого скота, дозревавшие in vitro, практически не активируются хлористым стронцием, в отличие от мышиных яйцеклеток, созревавших in vivo, которые активируются хлористым стронцием с высокой эффективностью.

Установлено, что воздействие повышенного осмотического давления раствора 6-DMAP (300 mOsm) в течение 3 ч оказывает существенное отрицательное влияние на процесс активации и на развитие до стадии бластоцисты партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов, по сравнению с пониженным осмотическим давлением (250 mOsm).

Практическая значимость. Результаты исследований, полученные при изучении влияния различных искусственных факторов на активацию и развитие партеногенетических и реконструированных эмбрионов, могут быть использованы для повышения результативности процесса активации реконструированных эмбрионов млекопитающих с целью клонирования животных.

Результаты исследований, направленные на установление оптимальных режимов активации реконструированных клеток, могут быть использованы в работах по получению клонированных эмбрионов крупного рогатого скота.

Результаты исследований, полученные при изучении влияния хлористого стронция на активацию партеногенетических и реконструированных эмбрионов млекопитающих, могут быть использованы для получения клонированных мышиных эмбрионов.

Результаты исследований, полученные при изучении влияния переменного электрического поля на активацию эмбрионов крупного рогатого скота и мышей к партеногенетическому развитию, необходимо учитывать при реконструировании эмбрионов млекопитающих с использованием для слияния кариопластов с цитопластами прямоугольного импульса постоянного тока в камере с параллельными электродами. Положения выносимые на защиту.

1. Участие экзогенного Са'+ в процессе искусственной активации реконструированных эмбрионов млекопитающих, вызванной различными активаторами происходит с помощью тех же механизмов, что и при активации неоплодотворённых яйцеклеток к партеногенетическому развитию.

2. Реконструированные эмбрионы млекопитающих (крупный рогатый скот, мыши) достоверно хуже развиваются до стадии бластоцисты, по сравнению с яйцеклетками, активированными к партеногенетическому развитию. Искусственная активация как реконструированных, так и партеногенетических эмбрионов млекопитающих этанолом или прямоугольным импульсом постоянного тока происходит за счёт совместного участия эндогенного и экзогенного тогда как активация кальциевым ионофором или переменным электрическим полем

осуществляется только под действием эндогенного Са+*, высвобождающегося из внутриклеточных депо.

3. Хлористый стронций с высокой эффективностью активирует мышиные яйцеклегки к партеногенетическому развитию и практически не эффективен для активации яйцеклеток крупного рогатого скота, дозревавших in vitro.

4. Повышение осмотического давления с 250 до 300 mOsm раствора 6-DMAP в период активации реконструированных и партеногенетических мышиных эмбрионов отрицательно влияет на их дальнейшее развитие до стадии бластоцисты.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных отчётных сессиях ВНИИФБиП в период с 2004 по 2008г., а также на:

- Международной научно-практической интернет-конференции «Управление функциональными системами организма» (г. Ставрополь, 2006 г.)

- IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (г. Боровск, 2006 г.)

- VI Международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» (п. Дубровины, 2006 г.)

- IV съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Пущино, 2006 г.)

- конкурсе молодых ученых в рамках IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Пущино, 2006 г.)

- VII международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных: роль нанотехнологий в реализации приоритетных задач биотехнологии» (п. Дубровицы, 2008 г.)

Публикации результатов исследовании. По материалам диссертационной работы опубликовано 12 печатных работ, в том числе 1 работа в рецензируемом научном издании, рекомендованном ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа содержит 16 таблиц, 2 рисунка и 25 фотографий. Список литературы включает 444 ссылки, в том числе 424 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования проводились в лаборатории клеточной инженерии и трансплантации эмбрионов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

2.1. Получение клеток источников цитопластов

При реконструировании мышиных эмбрионов в качестве цитопластов были использованы энуклеированные ооциты на стадии метафазы II (МП), полученные через 12-14 ч после введения самкам-донорам гибридных мышей F1 (CBAxC57BL) хорионического гонадотропина человека (ХГч).

Ооциты крупного рогатого скота получали из антральных фолликулов (2-6 мм в диаметре) яичников, которые доставляли в лабораторию в течение 3 ч после убоя коров на мясокомбинате. Дозревание ооцитов in vitro проводилось по методике отработанной в лаборатории. В опытные группы отбирали только ооциты с первым полярным тельцем (на стадии МП), через 20-23 ч после постановки их на дозревание.

жлвотное докор кицсклсто';

клонированное животное ,

Jk.

х "Энуклеация

л-

'Зрелый ооцит Mil

ЯНСЯВСГКОе-рецкпнепт

Клст ка-источник ядра (кариопласт)

Трансплм>тйцня •

K¡eim .'■(■'■■'. -''■■

----—p- : :''••"•

лед оболочку ч■ :

шггоплас! а % К.;/..

Активация ---->

комплекс Реконструированная

цитоплает-кариоплаот клегеа

Рис. 1. Принципиальная схема клонирования млекопитающих путём трансплантации ядер соматических клеток в энуклеированные ооциты, созревавшие in vivo.

2.2. Получение клеток источников кариопластов

В экспериментах по реконструированию мышиных оонитов в качестве источника кариопластов использовали свежеполученные клетки кумулюса округлой формы, размером 10-12 мкм. При реконструировании эмбрионов крупного рогатого скота в качестве кариопластов также использовали свежеполученные клетки кумулюса округлой формы, размером 10-12 мкм, большая часть которых, в это время находилась в фазе Go- Gi клеточного цикла (Schuetz A.W., 1996). После обработки ооцитов в 0,1% растворе гиалуронидазы клетки кумулюса помещались в каплю с манипуляционной средой под минеральным маслом до процесса реконструирования.

2,З.Реконструирование клеток

Энуклеацию ооцитов и реконструирование клеток осуществляли микрохирургическим методом (McGrath J., Solter D., 1983), на установке, включающей в себя комплект микроманипуляторов фирмы "Narishiga" и инвертированный микроскоп типа «Diaphot-TMD» фирмы "Nikon", оснащённый оптикой дифференциально-интерференционного контраста (DIC по Номарскому).

При реконструировании единичные кариопласты (кумулюсные клетки) вводили в пе-ривителлиновое пространство знуклеированных ооцитов через прокол в прозрачной оболочке.

2.4. Электрослияние кариопластов с цитопластами

Слияние цитопласта с ¡кариопластом осуществляли с помощью контроллера электрослияния (ИБП РАН, г. Пущино) в камере с параллельными электродами в среде

Циммермана (0,3 М маннитол; 0,1 мМ MgS04; 0,05 мМ СаС12) (Zimmerman V. et al., 1982). Слияние производили с помощью 1 импульса постоянного тока напряжением 1,5 kB/см для клеток мышей и 2,0 кВ/см для клеток крупного рогатого скота продолжительностью 30 мксек с интервалом 30 мин.

2.5. Активация цитопластов

Активацию проводили как на интактных (без энуклеации), так и на реконструированных мышиных ооцитах (через 1-1,5 ч после установления факта электрослияния).

Реконструированные клетки и интшаные ооциты мышей и крупного рогатого скота были разбиты на группы и подвергнуты различным вариантам физической и химической активации, о которых будет указано в разделе 3. Результаты исследований.

2.6. Культивирование реконструированных и партеногенетическн активированных

клеток

Реконструированные и партеногенетическн активированные мышиные эмбрионы культивировали в микрокаплях в среде KSOM под слоем минерального масла в увлажненной атмосфере воздуха с 5% СО; в течение 96 ч при 37 °С. Через каждые 24 ч регистрировали процесс развития эмбрионов.

Реконструированные и партеногенетическн активированные эмбрионы крупного рогатого скота культивировали в среде KSOMh KSOM** в увлажненной атмосфере под газовой фазой 5% С02; 5% 02; 90% N2 в течение 10 суток при 38,5 "С. Все среды приготавливались в условиях лаборатории из реактивов фирмы «Sigma» (США).

Результаты экспериментов обработаны методом регрессионного и корреляционного анализа и вариационной статистики (Плохинский H.A., 1980). Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента-Фишера по H.A. Плохинскому (1980).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Изучение действия этанола на процесс искусственной акт ивации яйцеклеток н последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных

эмбрионов in vitro.

Одним из первых факторов используемых для вызывания искусственной активации яйцеклеток млекопитающих к партеногенетическому развитию являлся этанол.

В связи с этим в первой серии экспериментов нами было исследовано влияние этанола на процесс активации и дальнейшее партеногенетическое развитие интактных мышиных ооцитов. Для этого ооциты были обработаны 7% этанолом в манипуляционной среде N12, содержащей 1,71 mM Са++ (I гр.) и в среде М2 без Са++ (II гр.) в течение 5 мин с последующим культивированием в среде KSOM содержащей 2 mM 6-DMAP в течение 3 ч.

Таблица 1

Партеногенетическое развитие мышиных ооцитов активированных

этанолом в зависимости от наличия Оа++ в среде активации _ _

№№ гр. I Характеристика групп Кол-во ооцитов (п) Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. морулы бластоцисты

п % 91,0 ±3,2* п % п %

с Са++ 166 151 136 81,9 ±2.9* 127 76,5 ± 2,4*

II 1 без Са++ 226 147 65,0 ± 3,6* 98 43,4 ± 3,9* 80 35,4 ±3,5*

* р<0,005

Анализ данных (табл. 1) указывает, что, судя по количеству яйцеклеток, вступивших в деление дробления влияние экзогенного Са++ проявляется сразу после активации клеток этанолом - 91,0% с участием (I гр.) и 65% без участия экзогенного Са++ (II гр.).

Также это влияние сказывается на дальнейшем развитии эмбрионов in vitro. Так до стадии бластоцисты. развилось 76,5% яйцеклеток активированных в присутствии экзогенного Са++ (I гр.) и только 35,4% - в отсутствии экзогенного Cart (II гр.).

Во второй серии опытов, проведённых на мышиных эмбрионах, реконструированных путём трансплантации ядер клеток кумулюса в энуклеированные яйцеклетки, активацию осуществляли также этанолом по схеме, используемой для активации ооцитов к партено-генетическому развитию (I серия опытов, табл. I).

Таблица 2

Развитие реконструированных мышиных эмбрионов, активированных этанолом,

в зависимости от наличия Са++ в среде активации

ГР- Характеристика групп Кол-во компл. цитопл.-кариопя. (шт.) Кол-во реконст. эмбрионов <п> Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. морулы бластоцисты

п % п % п "ТГ % 3TJ±3,I**

сСа" 129 37 33 89,2 ± 4,8** 19 51,4 ±4,5*

1" без Са " 133 33 22 66,7 ±5,7** 11 33,3 ± 6,7* 6 18,2 ± 5,1**

* р<0,05; ** р<0,005

Из представленных результатов (табл. 2) следует, что в деление дробления вступило 89,2% (1 гр.) и 66,7% (II гр.) реконструированных эмбрионов, а до стадии бластоцисты развилось 37,8% и 18,2%, соответственно.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что при активации этанолом, экзогенный Са++, находящийся в среде активации активно участвует в процессе активашш реконструированных клеток и оказывает существенное влияние на его эффективность и последующее развитие эмбрионов до стадии бластоцисты.

Таким образом, результаты экспериментов показали, что как при активации яйцеклеток к партеногенетическому развитию, так и при активации реконструированных клеток 7% этанолом, экзогенный Са++ находящийся в среде активации, оказывает значительное положительное влияние на активацию и развитие активированных эмбрионов до стадии бластоцисты in vitro. При этом большее количество партеногенетических эмбрионов развиваются до стадии бластоцисты, по сравнению с реконструированными эмбрионами при активации этанолом, как в присутствии, так и отсутствии экзогенного Са++ (76,5% против 37,8% и 35,4% против 18,2%, соответственно).

3.2. Изучение действия прямоугольного импульса постоянного тока на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических н реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

В третьей серии экспериментов было исследовано действие прямоугольного импульса постоянного тока на процесс активации и дальнейшего партеногенегического развития интактных мышиных ооцитов. Для этого на ооциты воздействовали однократным прямоугольным импульсом постоянного тока продолжительностью 30 мкс в камере с параллельными электродами, при напряжении 0,8 кВ/см. Активация электрическим импульсом постоянного тока проводилась в среде Циммермана (Zimmerman V. et al., 1982.) - (I группа) и в растворе маннитола 0,3 М без ионов Са++ и Mg++ (II группа). После электроактивации яйцеклетки обоих групп культивировались в среде KSOM содержащей 2 тМ 6-DMAP в течение 3 ч.

ТаблицаЗ

Влияние прямоугольного импульса постоянного тока на партеногенетическую активацию и развитие мышиных эмбрионов п зависимости от наличия Са++ в среде активации

№№ Характе- Кол-во Развитие эмбрионов до стадии:

гр. ристика ооцитов 2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты

групп (П) п % п % п % п %

I с Са++ 178 150 84,3 ± 5.4* 126 70,8 ±4,1 116 65,2 ± 4,8* 98 55,0 ±2,7**

II эез Са** 153 94 61,4 ±6,4* 82 53,6 ± 5,6 70 45,7 ±5,1* 51 33,3 ±2,5**|

*р<0,05; **р<0,005

Анализ результатов этой серии экспериментов (табл. 3) свидетельствует, что при активации яйцеклеток прямоугольным электрическим импульсом постоянного тока, экзогенный Са4-1", находящийся в среде активации, активно участвует в процессе активации и оказывает существенное влияние на его эффективность и последующее развитие эмбрионов. Наиболее выражено это влияние сказалось на дальнейшем развитии эмбрионов in vitro. Так до стадии бластоцисты в присутствии экзогенного Са++ (1 гр.) развилось 55,0% активированных яйцеклеток и только 33,3% - в отсутствии экзогенного Са++ (II гр.).

В четвертой серии опытов, проведённых на реконструированных мышиных эмбрионах, активацию осуществляли с помощью импульса постоянного тока по той же схеме, как и для активации ооцитов к партеногенетическому развитию (табл. 3)

Таблица 4

Влияние прямоугольного импульса постоянного тока на активацию и развитие реконст-

руированных мышиных эмбрионов в зависимости от наличия Са++ в среде активации

гр. Характеристика групп Кол-во компл. цигопл,-кариопл. (П) Кол-во реконст. эмбрионов (шт.) Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. морулы бластоцисты

п % п % п %

I с Са++ 124 27 21 П,1 ± 6,0* 11 40,7 ± 5,7* 5 22,2 ± 6,6

II без Са++ 127 22 13 59,0 ±7,9* 5 22,7 ± 7,6* 2 9,1 ±6,7

* р<0,05

Анализ результатов этой серии экспериментов свидетельствует, что в деление дробления вступило 77,7% (I гр.) и 59,0% (II гр.) реконструированных эмбрионов. Данные этой серии опытов свидетельствуют о том, что при активации реконструированных клеток электрическим импульсом, экзогенный Са++, находящийся в среде активации, также активно участвует в процессе активации, как и при активации интактных яйцеклеток к партеногенетическому развитию (табл. 3) и оказывает существенное влияние на его эффективность и последующее развитие эмбрионов, по крайней мере, до стадии бластоцисты. В отсутствии экзогенного Са^до стадии бластоцисты in vitro развилось 9,1% реконструированных эмбрионов, тогда как в присутствии экзогенного Са^+ - 22,2% эмбрионов.

Таким образом, результаты экспериментов показали, что при активации электрическим импульсом постоянного тока к партеногенетическому развитию, как интактных яйцеклеток, так и реконструированных клеток, экзогенный Са++ находящийся в среде активации, играет важнейшую роль в процессе активации и последующего развития эмбрионов до стадии бластоцисты in vitro.

3.3. Изучение действия переменного электрического поля на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее партеногенетическое развитие мышиных

эмбрионов in vitro.

В большинстве работ по клонированию эмбрионов млекопитающих используется способ слияния кариопласта с цитопластом с помощью прямоугольных импульсов постоянного тока с предварительной ориентацией комплекса цитопласт-кариоиласт с помощью переменного электрического поля с частотой 400-1000 КГц и напряжением 0,3-0,8 кВ/см, что также, по-видимому, может влиять на процесс активации реконструированных клеток. Однако вопрос о том, как влияет переменное электрическое поле на активацию и дальнейшее развитие яйцеклеток млекопитающих, практически не изучен.

Исходя из этого, следующая серия опытов была направлена на изучение влияния высокочастотного переменного поля на активацию и дальнейшее партеногенетическое раз-питие мышиных эмбрионов. Ооциты были подвергнуты воздействию тока переменного электрического поля в камере с параллельными электродами, при напряжении 0,5 кВ/см и частоте 600 кГц в течение 3 сек (1 гр.) и 13 сек (II гр.) в среде Циммермана (Zimmerman V. et ah, 1982).

Таблица 5

Влияние переменного электрического поля на партеногенетическую активацию и разви-

тие эмбрионов мышей в зависимости от продолжительности его воздействия

№№ гр. Продолжи тельность перемен, поля (сек.) Кол-во «леток (П) Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. 4-кл. морулы бластоцист

п % п % п % . п %

I 3 109 68 62,4 ± 10,5 64 58,7 ± 9,9 57 52,3 ± 8,4 50 45,9 ±6,6

13 104 78 75,0 ±6,1 68 65,4 ± 6,4 68 65,4 ± 6,4 62 59,6 ±9,8

Из анализа результатов представленных в таблице 5 следует, что при воздействии на ооциты током переменного электрического поля их активация может происходить без пробоя мембраны, так как прямоугольный импульс в этом случае не был применён, так в деление дробления вступило 62,4% (I гр.) и 75,0% (II гр.), а развитие до стации бластоци-сгы составило 45,9% и 59,6% соответственно. Также видно, что увеличение продолжительности воздействия переменного электрического поля с 3 сек до 13 сек влияет на партеногенетическое развитие незначительно.

Таблица 6

Влияние тока переменного электрического поля на активацию и партеногенетическое развитие мышиных эмбрионов в зависимости от наличия Са4+ в среде активации

Мв№ Характе- Кол-во Развитие эмбрионов до стадии: |

гр. ристика клеток 2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты |

групп (П) п % п % п % п % |

I с Са++ 104 78 75,0 ±6,1 68 65,4 ± 6,4 68 65,4 ± 6,4 62 59,6 ±9,8

11 без Са++ 104 62 59,6 ± 5,3 59 56,7 ± 4,5 57 54,8 ± 4,6 54 51,9 ± 3,6 J

Анализ результатов этого эксперимента (табл. 6) свидетельствует, что влияние экзогенного Са++ на дальнейшее развитие эмбрионов in vitro незначительно. Так до стадии бластоцисты развилось 59,6% яйцеклеток активированных в присутствии экзогенного Са++ (I гр.) и 51,9% - в отсутствии экзогенного Са++ (II гр.). Этот результат указывает на то, что экзогенный CaTf, находящийся в среде активации, практически не участвует в процессе активации мышиных яйцеклеток переменным электрическим полем и не оказывает влияния на эффективность активации и последующее развитие паргеногенетических

ммшиных эмбрионов in vitro, а попалапис Са++ в цитозоль происходит за счёт выхода его из внутриклеточных депо яйцеклеток.

Таким образом, воздействие переменного электрического поля на мышиные яйцеклетки вызывает их активацию, и эффективность развития партеногенетических мышиных эмбрионов in vitro до стадии бластоцисты практически не зависит от продолжительности воздействия переменного поля. Присутствие экзогенного Са" в среде активации при воздействии переменным электрическим полем также незначительно влияет на показатели активации и развития эмбрионов in vitro.

3.4. Изучение действия кальциевого иопифора на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие ппртсногенетичесзсмх н реконструированных мышиных эмбрионов id vitro.

Принимая во внимание тот факт, что во многих физиологических процессах, в том числе и в процессе активации клеток ведущую роль играют ионы Са++, то представляется целесообразным специфически направленное воздействие на систему высвобождения Ca+t с помощью кальциевого ионофора.

Исходя из этого в следующей серии экспериментов, было исследовано действие кальциевого ионофора на процесс активации и дальнейшего партекогенетического развития интактных мышиных ооцитов. В связи с этим была проведена активация кальциевым ионофором А23187 (10 мкМ) в среде М2 содержащей 1,71 шМ Са++ (I гр.) и в среде М2 не содержащей ионы Са++ и Mg" (И гр.) в течение 1 мин, с последующим культивированием в среде KSOM содержащей 2 шМ 6-DMAP в течение 3 ч.

Таблица 7

Партеногенетическое развитие мышиных ооцитов активированных кальциевым

ионофором в зависимости от наличия Са'1 в среде активации

гр. Характеристика групп Кол- во ооцитов (п) Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. 4-кл. мо рулы бластоцисты

п 156 % п % п % п % |

I с Са++ 163 95,7 ±2,0 147 90,2 ±2,1 138 84,7 ±2.3 131 80,4 ±2,7 I

и без Са++ 161 154 95,6 ± 1,4 146 90,7 ± 1,1 133 82,6 ± 2,0 129 80,1 ±2,2 1

Результаты представленные в таблице 7 свидетельствуют, что, судя по количеству яйцеклеток, вступивших в деление дробления сразу после активации клеток кальциевым ионофором, присутствие экзогенного Са^" в среде активации влияния не оказало, и эффективность активации была на одном уровне - 95,7% с участием (! гр.) и 95,6% без участия экзогенного Са4+ (II гр.). На дальнейшем развитии эмбрионов in vitro влияние экзогенного Са++ также не сказалось и достоверных различий между I и II гр. не наблюдалось.

Эти результаты свидетельствуют о том, что при активации яйцеклеток кальциевым ионофором экзогенный Са++ , находящийся н среде активации, не участвует в процессе активации и ке оказывает влияние на его эффективность и последующее развитие партеногенетических мышиных эмбрионов, а повышение концентрации Са"" в цитозоле происходит исключительно за счёт выхода его из внутриклеточных депо ооцитов.

В следующей серии опытов, проведенной на реконструированных мышиных эмбрионах, активацию осуществляли также кальциевым ионофором по схеме, используемой для активации ооцитов к партеногенетическому развитию (табл. 7).

Таблица 8

Развитие реконструированных мышиных эмбрионов активированных кальциевым ионофором в зависимости от наличия Са++ в среде активации

Г Характеристика групп Кол-во компл. цитопл,-кариопл. (П) Кол-во реконст. эмбрион. (П) Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты

п % п % п % п %

i сСа^ 116 36 33 91,7 ±4,5 25 69,4 ± 5,5 19 52,8 ± 5,2 13 36,1 ± 5,0

н без Са" 121 32 29 90,6 ± 3,9 20 62,5 ± 6,3 17 53,1 ±4,1 11 34,4 ±5,1';

Анализ результатов этого эксперимента (табл. 8) показал, что эффективность активации реконструированных клеток кальциевым ионофором и дальнейшее развитие эмбрионов по всем стадиям между группами достоверно не различалось. Эффективность развития реконструированных эмбрионов до стадии бластоцисты находилась на одном уровне и составляла 36,1% и 34,4%, соответственно, не зависимо от присутствия Са++ в среде активации.

В данном случае активация клеток происходит за счёт повышения концентрации эндогенного Са++, что, по-видимому, предпочтительнее при искусственной активации реконструированных клеток, так как не зависит от концентрации Са+* в среде окружающей клетку и в большей степени соответствует естественной активации яйцеклетки, осуществляемой в процессе оплодотворения.

Сопоставление результатов активации к партеногенетическому развитию двух способов, в которых активация происходила без участия экзогенного Са++ - с помощью переменного электрического поля и кальциевого ионофора (табл. 6 и 7) показало, что активация с помощью ионофора эффективнее, чем с помощью переменного электрического поля (80,4% против 59,6% бластоцист, соответственно). Это явление, по-видимому, обусловлено тем, что кальциевый ионофор более целенаправленно воздействует на механизм высвобождения эндогенного Са++.

Таким образом, при активации реконструированных мышиных клеток Са++, отсутствие Са++ в среде активации, не оказывает влияние на эффективность активации и последующее развитие эмбрионов. В данном случае активация клеток происходит за счёт увеличения концентрации эндогенного Са++, что предпочтительнее при искусственной активации реконструированных клеток, так как высвобождение эндогенного Са++ более стабильный и физиологичный процесс, чем неконтролируемое поступление экзогенного Сан внутрь клетки из культуральной среды.

3.5. Изучение действия хлористого стронция на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

В последние годы внимание исследователей обращено к такому фактору вызывания искусственной активации яйцеклеток к партеногенетическому развитию как хлористый стронций (SrCl2). Это связанно с тем, что в отличие от большинства активаторов, дающих однократное повышение концентрации Са++ в цитозоле клеток, SrCl2 вызывает повторные колебания Са+\ которые по своей динамике сходны с колебаниями вызываемыми сперматозоидом при оплодотворении. Хотя эти колебания имеют более низкую частоту и амплитуду, чем вызванные сперматозоидом. Несмотря на это результаты, получаемые разными авторами при активации яйцеклеток к партеногенетическому развитию с помощью SrCl2 неоднозначны, как в отношении используемой концентрации, так и в отношении времени воздействия на яйцеклетки различных видов животных.

В сиязи с этим в следующей серии экспериментов нами было изучено влияние продолжительности обработки мышиных ооцитоз БгОгна активацию и дальнейшее паргено-генетическое развитие мышиных эмбрионов. Для этого ооциты культивировали в среде К80М без ионов Са++ и содержащей 10 гаМ 5гС12, с добавлением цитохалазина Б в концентрации 5 мкг/мл., в течение 3 ч (I ф.) и 6 ч (II гр.).

Таблица 9

гр.

Время Кол-во Развитие эмбрионов до стадии: |

инкуба- ооци- 2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты j

ции в SrCI2 тов (я) п % п % 11 % п % I

3 часа 116 110 94.8 ± 2.3 103 88,8 ± 4,2 101 87,0 ±4,3 95 81,9 ±1,2 I

6 часов 192 177 92.2 ± 2,3 170 88.5 ±2,1 159 82,8 ± 1,4 146 76,0 ±1,8 1

Анализ результатов этого эксперимент;.! (табл. 9) показал, что, существенных различий в способности к активации партеногенетичсского развития между 1 и II группами не наблюдается, в деление дробления вступило 94,8% и 92,2%, соответственно. Эффективность развития до стадии бластоцисты между этими двумя также различается не достоверно и составляет 81,9% против 76,0%, соответственно.

Таким образом, активация мышиных ооцитов 8гС12 в течение 3 ч является достаточной и может быть испытана для активации реконструированных мышиных эмбрионов.

Таблица 10

реконструированных мышиных эмбрионов ^гивированиых ЭгС!;

Характеристика .. группы

I Хлористый стронций

Кол-во ком пл. цитопл,-кариопл

М 102

Кол-во реконст. эмбрионов (п)

Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл.

88.5±4,8

4-кл.

76,9±5,3

морулы

Зластоцсты

57,7±5.2

34,6±6,0

Изучение эффективности различных способов иску сственной активации как ннтакт-ных мышиных яйцеклеток к партеногеистическому развитию (табл. ! ,3,7,9), так к реконструированных мышиных эмбрионов (табл. 2,4,8,10) показало, что более высокая эффективность активации и развитие до стадии бластоцисты были получены при активации: этанол + 6-DMAP, кальциевый ионофор + 6-DMAP и SrCl2. При этом достоверного различия между данными группами не наблюдалось.

3.6. Изучение иллиния осмотического давления среды в период искусственной активации на развитие партеногенетическнх и реконструированных мышиных

эмбрионов in vitro.

Поскольку мембрана эукариотических клеток относительно водопроницаема, увеличение внеклеточного осмотического давлении приводит к уменьшению объема клетки. Вероятно, что восстановление объема клетки, которое происходит посредством притока и утечки различных растворов, изменения концентрации ионов Са+, может приводить к активации различных внутриклеточных механизмов сигнализации. Эти каскады могут быть вовлечены не только в процесс регулирования объема, но также влиять на другие клеточные механизмы.

Таким образом, в следующей серии экспериментов нами была предпринята попытка изучить влияние осмотического давления среды активации на активацию и развитие партеногенетическнх и клеток. Эксперименты были проведены по следующей схеме:

I гр. - Активация кальциевым ионофором А23187 (10 мкМ) в среде KSOM с осмотическим давлением 250 mOsM в течение 1 мин с последующим культивированием в среде KSOM с осмотическим давлением 250 mOsM содержащей 2 mM 6-DMAP (3 ч)

II гр. - кальциевый иоиофор 250 mOsM + 6-DMAP 300 mOsM.

III гр. - кальциевый ионофор 300 mOsM + 6-DMAP 250 mOsM.

IV гр. - кальциевый ионофор 300 mOsM + 6-DMAP 300 mOsM.

Таблица 11

Влияние осмотического давления среды активации на активацию и партеногенетическое

развитие мышиных эмбрионов

№№ гр. I Кол-во ооцитов (п) 125 Развитие эмбрионов до стадии:

2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты

п 107 % п % п % п %

85,6 ±5,4 105 84,0 ±5,4 99 79,2 ± 5,9 91 72,8 ±6,3

- 11 121 81 66,9 ±6,6 60 49,6 ± 10,2 55 45,5±10,6 45 37,2 ± 8,4

111 121 105 86,8 ± 7,0 104 86,0 ±7,3 93 76,9 ±7,1 81 66,9 ±6,7

1 IV 120 79 65,8 ± 8,3 64 53,3 ±8,1 53 44,2 ± 8,2 44 36,7 ±8,1

Анализ результатов этого эксперимента (табл. 11) показал, что в случаях, когда активация кальциевым ионофором сопровождалась инкубацией ооцитов в среде с повышенным осмотическим давлением (300 mOsM), содержащей 6-DMAP (II и IV гр.), количество ооцитов вступивших в деление дробления было значительно ниже, чем в группах с пониженным давлением (I и III гр.) (65,8%-66,9% против 85,6%-86,8%, соответственно). Также в группах II и IV наблюдалось существенное снижение развития эмбрионов до стадии бластоцисты (37,2% и 36,7%, соответственно), в отличие от I и III групп, где развитие до стадии бластоцисты составило 72,8% и 66,9%, соответственно. Как видно из результатов таблицы 11, воздействие кальциевого ионофора в среде с пониженным и повышенным осмотическим давлением в течение 1 мин не оказал существенного влияния на партеноге-нетическую активацию мышиных эмбрионов.

В следующей серии экспериментов нами было исследовано влияние повышенного осмотического давления среды активации на развитие реконструированных мышиных эмбрионов по схеме, ранее использованной для активации интактных ооцитов.

Таблица 12

Влияние осмотического давления среды активации на активацию и развитие

мышиных эмбрионов

Кол-во <ол-во Развитие эмбрионов до стадии: f

гр. компл. эеконс. 2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты 1

цитопл.- эмбр. 1

кариопл. (П) (П) п % п % п % п %

I 52 15 12 80,0 ±9,7 8 53,3 ± 16,7 7 46,7 ± 12,8 5 33,3 ± 10,7

Н 49 16 8 50,0 ±5,3 5 31,3 ±8,2 4 25,0 ±6,1 3 18,8 ±7,0

III 45 13 11 84,6 ± 10,5 6 46,2 ± 12,5 5 38,5 ± 15,3 4 30,8 ±13,3

IV 50 15 7 46,6 ±6,2 4 26,7 ± 10,0 2 13,3 ±7,6 2 13,3 ±7,6

Анализ результатов этой серии экспериментов (табл. 12) показал, что во II и IV группе, где после активации кальциевым ионофором следовала обработка 6-DMAP (3 ч) в среде с повышенным осмотическим давлением, доля реконструированных эмбрионов вступивших в деление дробления и их дальнейшее развитие до стадии бластоцисты, находилось на низком уровне (46,6%-50,0% и 13,3%-18,8% соответственно). Напротив, в группе 1 и III, где инкубация в 6-DMAP проходила в среде с пониженным осмотическим давлением,

показатели активации и развития эмбрионов оказались более высокими и составили 80,0%-84,6% и 33,3-30,8%, соответственно.

Таким образом, при активации мышиных нартеногенетических и реконструированных эмбрионов кальциевым ионофором с последующим культивированием в растворе 6-DMAP воздействие повышенного осмотического давления раствора 6-DMAP (300 mOsm) в течение 3 ч. оказывает существенное отрицательное влияние на процесс активации и развития до стати бластоцисты, по сравнению с пониженным (250 mOsm) осмотическим давлением (36,7% и ]3,3% против 72,8% и 33,3%, соответственно).

3.7. Изучение эффективности различных способов искусственной активации к партеногенетическому развитию яйцеклеток крупного рогатого скота дозревавших in vitro.

SrCl2 эффективно активирует ооциты мыши, однако информация относительно его использования в активации яйцеклеток крупного рогатого скота ограничена. Таким образом, цель следующих экспериментов состояла в том, чтобы установить возможность активации ооцитов крупного рогатого скота при обработке их SrCI2, а также наши его оптимальную концентрацию. Для этого ооциты крупного рогатого скота (через 23-24 ч после качала постановки на дозревание) культивировали в среде K.SOM без ионов Са"1 и Mgf содержащей 10 шМ (I гр.), 20 гпМ (И гр.) и 30 mM (Ш гр.) SrCl2 в течение 6 ч.

Таблица 13

Партеногенетическос- развитие ооцитов i

Концен- Кол-во Развитие эмбрионов до стадии:

гр. трация SrCb ооцитов (П) 2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты

(mM) п % n % п % п %

I 10 113 9 7,9 ±4,8 7 6,2 ±6.1 5 4,4 ± 3,0 2 1,8 ± 2,7

II 20 106 21 19,8 ±7,5 17 16,0 ±5,6 12 11,3 ±4,3 8 7,5 ±1,1

Ш 30 110 25 22,7 ± 4,9 20 18,2 ±4,5 12 10,9 ±3,0 3 2,7 ± 1,8

В результате активации в развитие вступило 7,9%, 19,8% и 22,7% ооцитов, а стадии бластоцисты достигло 1,8%, 7,7% и 2,7%, соответственно, что в несколько раз ниже результатов, полученных на мышиных эмбрионах (81,9%). Таким образом, 8гС!2 в концентрации 10 шМ в течение 3 ч эффективно активирует мышиные яйцеклетки к партеногенетическому развитию до стадии бластоцисты, но не является эффективным для активации яйцеклеток крупного рогатого скота в концентрации от 10 до 30 шМ.

Яйцеклетки крупного рогатого скота, активированные к партеногенетическому развитию, довольно часто используют для определения оптимальных режимов активации в дальнейшем предназначенных для использования на реконструированных эмбрионах, т.к. эта методика менее трудоемка и при этом в большинстве случаев даёт достаточно объективные результаты.

Исходя из этого в следующей серии опытов, были проведены исследования, с целью определения эффективности партеногенетического развития при активации ранних ооцитов крупного рогатого скота различными агентами.

I гр. - Однократный прямоугольный импульс постоянного тока продолжительностью 30 мкс, при напряжении 1,2 кВ/см.

И гр. - 7% этанол в течение 5 мин.

Ш гр. - кальциевый ионофор А23187 (10 мкМ) в течение 5 мин. IV гр. - 20 rnM SrCl2 в течение 6 ч.

Таблица 14

Партеногенетическое развитие эмбрионов крупного рогатого скота, активированных

№№ гр. Характеристика групп Кол-во ооцитов (п) Развитие эмб рионов до стадии:

2-кл. 4-кл. морулы бластоцисты

п % п % п % п %

I Имп. пост, тока 152 76 50,0 ±3,9 61 40,1 ±3,2 44 28,9 ±1,3 21 13,8 ± 1,2

11 Этанол 141 78 55,3 ± 1,2 58 41,1 ±3,5 42 29,8 ± 3,2 23 16,3 ±0,8

III Са++ ионофор 134 81 60,5 ±1,6 61 45,5 ± 3,6 42 31,3 ±2,7 31 23,1 ±2,9

IV SrCi2 106 21 19,8 ±7,5 17 16,0 ±5,6 12 11,3 ±4,3 8 7,5 ±1,1

Анализ результатов этого эксперимента (табл. 14) свидетельствует, что эффективность активации этанолом (И гр.) и кальциевым ионофором (III гр.) с последующей обработкой 6-DMAP находится примерно на одном уровне, в деление дробления в этих группах вступило 55,3% и 60,5%, а до стадии бластоцисты развилось 16,3% и 23,1% соответственно. Во время культивирования было отмечено более медленное развитие до стадии бластоцисты эмбрионов крупного рогатого скота обработанных этанолом + 6-DMAP (И гр.), по сравнению с кальциевым ионофором + 6-DMAP (III гр.). При этом в III группе отмечено более высокое качество полученных бластоцист. Кроме того, в данных экспериментах выход бластоцист из блестящей оболочки наблюдали только в III группе. Активация яйцеклеток крупного рогатого скота прямоугольным импульсом постоянного электрического тока (I гр.) является менее эффективной (13,8% бластоцист). Обработка SrCl2 (IV гр.) привела к низкому уровню развития эмбрионов до стадии бластоцисты (7,5%).

Таким образом, наиболее приемлемым способом активации яйцеклеток крупного рогатого скота с физиологической и технологической точек зрения является обработка их кальциевым ионофором (А23187) с последующим культивированием в растворе 6-DMAP.

3.8. Изучение эффективности активации кальциевым ионофором реконструированных эмбрионов рогатого скота дозревавших in vitro.

Исходя из результатов вышеприведённых исследований, в последующих экспериментах для активации реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота нами был выбран способ активации - кальциевый ионофор + 6-DMAP.

Таблица 15

Развитие реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота активированных

№№ опытов Кол-во компл. цитопл.-кариопл. (П) Эффективность слияния Развитие эмб рионов до стадии: ||

2-4-кл. 8-16-кл. морулы бластоцисты 1

п % п % 55,8±5,2 п 52 % 40,3±5,2 п % п % 1

18 293 129 44,0±3,6 72 35 27,1±4,0 20 15,6±2,7 1

Анализ результатов этой серии экспериментов (табл. 15) показал, что в экспериментах по реконструированию эмбрионов крупного рогатого скота эффективность электрослияния находилась на уровне 44%. Результаты исследования также показали, что в деление дробления вступило 55,8% реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота. До стадии бластоцисты развилось 15,6%.

Таким образом, в результате проведённых исследований установлено, что способ активации с помощью кальци евого ионофора и 6-DMAP эмбрионов крупного рогатого скота реконструированных путём трансплантации ядер кумулюсных клеток в энуклеированные ооциты, дозревавшие in vitro, позволяет получать приемлемое количество эмбрионов на

стадии бластоцисты и может быть использован в работах по клонированию крупного рогатого скота.

4. ВЫВОДЫ

1. Искусственная активация реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей этанолом, прямоугольным импульсом постоянною тока, кальциевым ионо-фором или переменным электрическим полем в основном происходит по тем же механизмам, что и активация неоплодотзорённых яйцеклеток этих видов животных к партеногенетическому развитию. Однако дальнейшее развитие in vitro реконструированных эмбрионов до стадии бластоцисты достоверно снижается, но сравнению с партеногенетическими эмбрионами (22,0% - 37,8% против 55,0% - 81,9%, соответственно).

2. Переменное электрическое поле частотой 600-1000 КГц способно активировать мышиные яйцеклетки к партеногенетическому развитию, из которых 59,6% достигают стадии бластоцисгы.

3. Этанол и прямоугольный импульс постоянного тока активируют как реконструированные, так и партеиогенетические мышиные эмбрионы за счёт совместного действия эндогенного и экзогенного Са+\ При этом, экзогенный С а" оказывает существенное влияние на процесс активации и гюследуещее развитие эмбрионов до стадии бластоцисты. (партеногены: 55,0% с CV и 33,3% без Са++; реконструированные: 22,2% против 9,1%, соответственно).

4. Кальциевый ионофор и переменное электрическое поле активируют как иартеногене-тические, так и реконструированные эмбрионы мышей и крупного рогатого скота, только за счёт действия эндогенною Са++ (партеногены: 80,4% с Са++ и 80,1% без Са^; реконструированные: 36,1% против 34,1%, соответственно).

5. Хлористый стронций в концентрации 10 шМ в течение 3 ч эффективно активирует мышиные яйцеклетки к партеногенетическому развитию до стадии бластоцисты (81,9%), но активация яйцеклеток крупного рогатого скота при его воздействии в концентрации от 10 до 30 тМ ие является эффективной (19,8% активации и 7,5% -выход бластоцист).

6. Наиболее приемлемым способом активации реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей с физиологической и технологической точек зрения является обработка их кальциевым ионсфором (А23187) в течение I мин для мышей и 5 мин для крупного рогатого скота с последующим культивированием в 2 шМ растворе 6-DMAP в течение 3-4 ч. Этот способ позволяет получать до 15,6% клонированных эмбрионов крупного рогатого скота на стадии бластоцист из клеток реконструированных с использованием в качестве кариопластов ядер кумулюсных клеток и в качестве цитошастов яйцеклеток, дозревавших in vitro.

7. При активации мышиных партеногенетических и реконструированных эмбрионов кальциевым ионофором с последующим культивированием в растворе 6-DMAP воздействие повышенного осмотического давления раствора 6-DMAP (300 mOsm) и течение 3 ч оказывает существенное отрицательное влияние на процесс активации и развития до стадии бластоцисты, по сравнению с пониженным (250 mOsm) осмотическим давлением - (36,7% и 13,3% против 72,8% и 33,3%, соответственно). Кратковременное воздействие повышенного осмотического давления раствора кальциевого ионофора в течение I мин не оказало отрицательного влияния па развитие до стадии бластоцисты, как партеногенетических, так и реконструированных мышиных эмбрионов.

8. Получены клонированные эмбрионы крупного рогатого скота на стадии бластоцисты путем трансплантации ядер кумулюсных клеток в энуклеированные яйцеклетки,

-IB-

дозревавшие in vitro, и клонированные бластоцисты мышей при использовании в качестве цитопластов яйцеклеток, созревавших in vivo.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для активации реконструированных клеток к митотическому делению и дальнейшему развитию эмбрионов целесообразно обрабатывать их кальциевым ионофором (10 мкМ) в течение 5 мин для клеток крупного рогатого скота и в течение 1 мин - для мышиных, с последующим культивированием в течение 3 ч в среде содержащей 6-DMAP (2 мМ).

2. Для активации реконструированных мышиных эмбрионов и их дальнейшего развития до стадии бластоцисты, целесообразно обрабатывать их хлористым стронцием (10 шМ) в течение 3 ч.

3. Раствор 6-DMAP, используемый для активации реконструированных эмбрионов млекопитающих, должен иметь пониженное осмотическое давление (250 mOsM).

СПИСОК

работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Кириенко, К.В. Получение клонированных эмбрионов крупного рогатого скота путем трансплантации ядер соматических клеток в энуклеированные ооциты, дозревавшие in vitro / K.B. Кириенко, А.Г. Логинов, A.C. Алгулян, И.Г. Сметанина, J1.B. Татаринова, В.П. Рябых // Сельскохозяйственная биология. - 2007. - № 4. - С. 53-61.

2. Алгулян, A.C. Влияние осмотического давления среды активации на развитие парте-ногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro / A.C. Алгулян,

A.Г. Логинов, К.В. Кириенко, В.П. Рябых // Материалы VII Международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии с.-х. животных: роль нанотехнологий в решении приоритетных задач биотехнологии», Дубро-вицы, 2008, С. 91-96.

3. Алгулян, A.C. Влияние прямоугольного импульса постоянного тока и переменного электрического поля на активацию и развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro / A.C. Алгулян, А.Г. Логинов, К.В. Кириенко,

B.П. Рябых // Материалы VII Международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии с.-х. животных: роль нанотехнологий в решении приоритетных задач биотехнологии», Дубровицы, 2008, С. 96-101.

4. Алгулян, A.C. Влияние различных вариантов химической активации на развитие in vitro партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов / A.C. Алгулян, А.Г. Логинов, К.В. Кириенко, В.П. Рябых // Материалы VII Международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии с.-х. животных: роль нанотехнологий в решении приоритетных задач биотехнологии», Дубровицы, 2008, С. 101-106.

5. Алгулян, A.C. Использование хлористого стронция для искусственной активации ин-тактных и реконструированных эмбрионов млекопитающих / A.C. Алгулян, А.Г. Логинов, К.В. Кириенко, И.Г. Сметанина, В.П. Рябых // Материалы VII Международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии с.-х. животных: роль нанотехнологий в решении приоритетных задач биотехнологии», Дубровицы, 2008, С. 106-110.

ICJ

6. Сметаиина, И.Г. Использование в качестве цитопластов яйцеклеток крупного рогатого скота, созревших in vitro в полностью «определенной» культуральной системе/ И.Г. Сметаиина, J1.B. Татаринова, К.В. Кириенко, А.Г. Логинов, A.C. Ал гуляй, В.П. Рябых // Материалы VII Международной научной конференции-школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии с.-х. животных: роль нанотехнологий в решении приоритетных задач биотехнологии», Дубровицы, 2008, С. 220-223.

7. Кириенко, К.В. Развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов при разных вариантах активации / К.В. Кириенко, А.Г. Логинов, A.C. Алгу-лян, В.П. Рябых // Материалы Международной научно-практической интернет-конференции «Управление функциональными системами организма», Аргус, 2006, С. 28-31.

8. Кириенко, К.В. Получение клонированных эмбрионов крупного рогатого скота при использовании в качестве цитопластов ооцитов, дозревавших in vitro / К.В. Кириенко, А.Г. Логинов, И.Г. Сметаиина, Л.В. Татаринова, A.C. Алгулян, В.П. Рябых // Материалы IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, 2006, С. 240-242.

9. Кириенко, К.В. Развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов в зависимости от способа их активации / К.В. Кириенко, А.Г. Логинов, A.C. Алгулян, В.Г1. Рябых // Материалы IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, 2006, С. 242-243.

10. Кириенко, К.В. Развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов в зависимости от режима активации / К.В. Кириенко, А.Г. Логинов, A.C. Алгулян, В.П. Рябых // Материалы VI Международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2006, С. 70-73.

11. Логинов, А.Г. Получение клонированных эмбрионов крупного рогатого скота при использовании в качестве кариопластов соматических клеток / А.Г. Логинов, К.В. Кириенко, И.Г. Сметанина, Л.В. Татаринова, A.C. Алгулян, В.П. Рябых // Материалы VI международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2006, С. 133-135.

12. Логинов, А.Г. Получение клонированных эмбрионов крупного рогатого скота при использовании в качестве цитопластов ооцитов, дозревавших in vitro / А.Г. Логинов, К.В. Кириенко, И.Г. Сметаиина, Л.В. Татаринова, A.C. Алгулян, В.П. Рябых // Материалы IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова, Москва, 2006, С. 138-139.

Отпечатано в МУП «Полиграфист» г. Боровск, пл. Ленина, 20 Подп. к печати 19.11.2008 г. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. Усл. леч. л. 1 Заказ 1233, тар. 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Алгулян, Армен Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. История развития технологии клонирования животных путём трансплантации ядер.

1.2. Роль ионов Са4"* в активации яйцеклеток при оплодотворении.

1.3. Внутриклеточная сигнализация.

1.4. Микроскопические и субмикроскопические изменения в яйцеклетках в процессе активации.

1.5. Молекулярные механизмы выхода яйцеклеток из мейотического блока.

1.6. Влияние возраста ооцитов на их активацию.

1.7. Искусственные активаторы.

1.8. Влияние ингибиторов протеинкиназы на активацию яйцеклеток. 50 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

II. Объекты и методы исследований.

2.1. Получение клеток источников цитопластов.

2.2. Получение клеток источников кариопластов.

2.3. Реконструирование клеток.

2.4. Слияние кариопластов с цитопластами.

2.5. Активация цитопластов.

2.6. Культивирование реконструированных и партеногенетически активированных клеток.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Изучение действия факторов на процесс искусственной активации яйцеклеток и развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.1.1. Изучение действия этанола на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.1.2. Изучение действия прямоугольного импульса постоянного тока на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.1.3. Изучение действия переменного электрического поля на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее партеногене-тическое развитие мышиных эмбрионов in vitro.

3.1.4. Изучение действия кальциевого ионофора на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.1.5 Изучение действия хлористого стронция на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.2. Сравнительное изучение эффективности различных способов активации мышиных яйцеклеток и реконструированных эмбрионов.

3.2.1. Изучение эффективности различных способов искусственной активации мышиных яйцеклеток к партеногенетическому развитию.

3.2.2. Изучение эффективности различных способов искусственной активации реконструированных мышиных эмбрионов на их развитие in vitro.

3.2.3. Изучение влияния осмотического давления среды в период искусственной активации на развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов in vitro.

3.3. Определение оптимальной системы искусственной активации яйцеклеток и реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота.

3.3.1. Изучение эффективности различных способов искусственной активации к партеногенетическому развитию яйцеклеток крупного рогатого скота, дозревавших in vitro.

3.3.2. Изучение эффективности активации кальциевым ионофором реконструированных эмбрионов рогатого скота, дозревавших in vitro.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации"

Актуальность исследований.

Большое значение, которое во всём мире придаётся разработке технологии клонирования животных, обусловлено тем, что она может быть многогранно использована в таких областях как биология, сельское хозяйство и медицина.

В медицине основные этапы технологии клонирования животных являются ключевыми звеньями при получении истинных эмбриональных стволовых клеток для терапевтического клонирования. В настоящее время, особенно большое внимание, уделяется исследованиям, направленным на получение эмбриональных стволовых клеток человека на основе использования в качестве цитопластов - яйцеклеток животных.

Первый этап исследований по разработке технологии клонирования млекопитающих базировался на использовании в качестве источников кариопла-стов бластомеров эмбрионов ранних стадий развития, которые считались относительно малодифференцированными клетками. В результате этих работ к середине 90-х годов были получены клонированные сельскохозяйственные животные почти всех видов. Но получаемые клоны животных не являлись идентичными хромосомальному генотипу животного донора эмбрионов, а являлись генетическими копиями эмбриона, хозяйственная ценность которого была неизвестна.

С 1997 года - после получения овечки Долли (Wilmut I. et al., 1997), когда было показано, что в организме взрослых животных имеются недифференцированные клетки, обладающие тотипотентными свойствами, которые могут быть использованы в качестве источников кариопластов для реконструирования клеток с целью клонирования животных, исследования по разработке технологии клонирования животных вступили в новый этап. При использовании в качестве источника ядер соматических клеток взрослого животного можно уже получать клоны потомков с желаемыми признаками, которые в значительной степени соответствуют признакам, уже проявившимся у их прародителя.

Несмотря на то, что за последние годы в области клонирования животных достигнуты определенные успехи, они пока в большей степени носят эмпирический характер, поэтому положительные результаты сильно варьируют от эксперимента к эксперименту. Основной причиной такой нестабильности результатов является недостаточность фундаментальных знаний о глубинных механизмах, обусловливающих процесс репрограммирования кариопластов цитопластами, и факторов, влияющих на этот процесс.

У всех млекопитающих созревание ооцитов блокируется на стадии ме-тафазы второго мейотического деления (МII). Это блокирование осуществляется за счет действия фактора, способствующего созреванию ооцита (maturation promoting factor, MPF). Во время оплодотворения сперматозоид, проходя через цитоплазматическую мембрану, запускает серию внутриклеточных колебаний концентрации кальция (Са^'). Эти внутриклеточные изменения концентрации С а44" в цитозоле, вызванные сперматозоидом, запускают целую серию механизмов, которые приводят к инактивации MPF и тем самым выводят ооцит из метафазной блокады, обеспечивая возобновление ми-тотического цикла, т.е. наступает активация ооцита.

Оказалось, что не только воздействие сперматозоида на цитоплазмати-ческую мембрану может вызывать серию колебаний концентрации внутриклеточного Са44", но и целый ряд искусственных активаторов, таких как электроимпульс, этанол, кальциевый ионофор и ряд других веществ. При воздействии на цитоплазматическую мембрану эти факторы могут вызывать колебания концентрации Са44" в цитозоле и индуцировать процессы активации ооцита и его партеногенетическое развитие. Установлено, что искусственные активаторы цитопластов действуют на колебания концентрации Са++ в цитозоле ооцита по-разному, неконтролируемо повышая как концентрацию Са++, так и время его действия. И эти неконтролируемые подъёмы концентрации Са44" могут вызывать цитотоксический эффект. Поэтому ведётся поиск режимов искусственной активации цитопластов, которые бы были близки к механизмам активации, создаваемым сперматозоидом при оплодотворении.

С развитием работ по клонированию животных путём трансплантации ядер соматических клеток в энуклеированные яйцеклетки, остро встала проблема активации реконструированных эмбрионов.

Интерфазное ядро соматической клетки, трансплантированное в цитоплазму энуклеированной яйцеклетки, под действием факторов цитоплазмы переходит в состояние метафазы II, аналогичное состоянию ядра нативной яйцеклетки, и оказывается заблокированным в этом состоянии. Чтобы вывести ядро реконструированной клетки из состояния метафазы II и запустить процесс деления дробления ее необходимо активировать.

К настоящему времени относительно неплохо разработаны способы активации неоплодотворённых яйцеклеток млекопитающих к партеногенетиче-скому развитию, но для того чтобы использовать эти способы для активации реконструированных клеток необходимо дополнительные более глубокие исследования, т.к. существуют очень большие различия между нативной яйцеклеткой и реконструированным эмбрионом. При активации нативной яйцеклетки партеногенетическое развитие происходит в результате деления собственного ядра, а в реконструированных клетках - в результате репрограм-мирования чужеродного ядра, трансплантированного в энуклеированную яйцеклетку. Репрограммирование генома соматических клеток, это сложнейший процесс, включающий целый ряд последовательных механизмов. Поэтому можно предположить, что активация нативной яйцеклетки и реконструированной клетки будут существенно отличаться. Исходя из этого, с целью поиска приемлемых способов активации реконструированных эмбрионов млекопитающих, возникает необходимость в изучении возможности использования способов, применяемых для активации нативных яйцеклеток к пар-теногенетическому развитию, для активации реконструированных эмбрионов.

Исходя из вышеизложенного существует острая необходимость в поиске наиболее эффективных способов активации реконструированных клеток, позволяющих репрограммировать кариопласты, и обеспечивающих полноценное развитие реконструированных клеток.

Цель и задачи исследований.

Целью исследований являлось изучение влияния различных факторов искусственной активации на развитие реконструированных клеток, полученных при использовании в качестве цитопластов - ооцитов, дозревавших in vivo и in vitro, а в качестве кариопластов - ядра соматических клеток взрослых животных.

Для достижения поставленной цели считали необходимым решить следующие задачи:

- изучить влияния ионов экзогенного Са ** на активацию цитопластов при разных способах и вариантах активации цитопластов;

- выявить оптимальные системы активации реконструированных клеток крупного рогатого скота.

Научная новизна исследований.

Впервые в сравнительных исследованиях на основе изучения участия экзогенного Са4"1" в процессе искусственной активации яйцеклеток млекопитающих установлено, что участие экзогенного Са++ в процессе искусственной активации реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей происходит с помощью тех же механизмов, что и активация неоплодотво-рённых яйцеклеток к партеногенетическому развитию.

Установлено, что яйцеклетки крупного рогатого скота, дозревавшие in vitro, практически не активируются хлористым стронцием, в отличие от мышиных яйцеклеток, созревавших in vivo, которые активируются SrCb с высокой эффективностью.

Впервые установлено, что воздействие повышенного осмотического давления раствора 6-DMAP (300 mOsm) в течение 3 часов оказывает существенное отрицательное влияние на процесс активации и на развитие до стадии бластоцисты партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов, по сравнению с пониженным осмотическим давлением (250 mOsm).

Практическая значимость.

Результаты исследований, полученные при изучении влияния различных искусственных факторов на активацию и развитие партеногенетических и реконструированных эмбрионов, могут быть использованы для повышения результативности процесса активации реконструированных эмбрионов млекопитающих с целью клонирования животных.

Положения выносимые на защиту.

1. Участие экзогенного Са1+ в процессе искусственной активации реконструированных эмбрионов млекопитающих, вызванной различными активаторами происходит с помощью тех же механизмов, что и при активации неоплодотворённых яйцеклеток к партеногенетическому развитию.

3. Искусственная активация как реконструированных, так и партеногенетических эмбрионов млекопитающих этанолом или прямоугольным импульсом постоянного тока происходит за счёт совместного участия эндогенного и экзогенного Са"4", тогда как активация кальциевым ио-нофором или переменным электрическим полем осуществляется и только под действием эндогенного Са**, высвобождающегося из внутриклеточных депо.

4. Хлористый стронций с высокой эффективностью активирует мышиные яйцеклетки к партеногенетическому развитию и практически не эффективен для активации яйцеклеток крупного рогатого скота, дозревавших in vitro.

5. Повышение осмотического давления с 250 до 300 mOsm раствора 6-DMAP в период активации реконструированных и партеногенетических мышиных эмбрионов отрицательно влияет на их дальнейшее развитие до стадии бластоцисты.

Апробация работы.

Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных отчётных сессиях ВНИИФБиП в период с 2004 по 2008г., а также на:

- IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (г. Боровск, 5-7 сентября 2006 г.)

- VI Международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» (п. Дубровицы, 19-20 декабря 2006 г.)

- IV съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Пущино, 6-7 декабря 2006 г.)

- конкурсе молодых ученых в рамках IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Пущино, 6-7 декабря 2006 г.)

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Термин "клон" происходит от греческого слова "klon", что означает - веточка, побег, черенок, и имеет отношение, прежде всего к вегетативному размножению. Клонирование подразумевает способность ядер клеток взрослого организма обеспечивать развитие другого взрослого организма. Эта способность впервые была продемонстрирована на клетках моркови и табака. Любая дифференцированная клетка, имеющая неповрежденное ядро, обладает полным набором генов, необходимых для формирования целого организма. Однако в процессе дифференцировки часть генов выключается и функционально активны только некоторые из них, которые определяют свойства и функции данной ткани. У растений гаметы образуются из соматических клеток, поэтому нет ничего удивительного в том, что единичная клетка может давать начало другому типу клеток и сформировывать генетически однородный клон. У животных же половые клетки обособляются довольно рано в ходе эмбриогенеза и только в процессе полового размножения, при котором происходит слияние мужской и женской гамет, образуется зигота, обладающая свойствами плюри- и тотипотентности и, то есть, способна дать начало целому организму и дифференцироваться в клетки любой ткани взрослого организма. Этим существенным отличием и объясняется главное препятствие в клонировании позвоночных животных.

Клонирование млекопитающих - это одна из актуальных проблем современной биологии, однако, эффективность технологии клонирования до сих пор остаётся невысока. Большая часть реконструированных эмбрионов не развивается далее ранних эмбриональных стадий, из родившихся животных около половины не достигают взрослого состояния. Изучение фундаментальных основ экспрессии генов и ее контроля поможет объяснить причины и, возможно, избежать данных трудностей.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Алгулян, Армен Сергеевич

114 ВЫВОДЫ

1. Искусственная активация реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей этанолом, прямоугольным импульсом постоянного тока, кальциевым ионофором или переменным электрическим полем в основном происходит по тем же механизмам, что и активация неоплодотворённых яйцеклеток этих видов животных к партеногене-тическому развитию. Однако дальнейшее развитие in vitro реконструированных эмбрионов до стадии бластоцисты достоверно снижается, по сравнению с партеногенетическими эмбрионами (22,0% - 37,8% против 55,0% - 81,9%, соответственно).

3. Этанол и прямоугольный импульс постоянного тока активируют как реконструированные, так и партеногенетические мышиные эмбрионы (клетки) за счёт совместного действия эндогенного и экзогенного Са44". При этом, экзогенный Са44 оказывает существенное влияние на процесс активации и последуещее развитие эмбрионов до стадии бластоцисты (партеногены: 55,0% с Са44" и 33,3% без Са44"; реконструированные: 22,2% против 9,1%, соответственно).

4. Кальциевый ионофор и переменное электрическое поле активируют как партеногенетические, так и реконструированные эмбрионы мышей и крупного рогатого скота, только за счёт действия эндогенного Са44" (партеногены: 80,4% с Са44 и 80,1% без Са44; реконструированные: 36,1% против 34,1%, соответственно).

5. Хлористый стронций в концентрации 10 шМ в течение 3 часов эффективно активирует мышиные яйцеклетки к партеногенетическому развитию до стадии бластоцисты (81,9%), но активация яйцеклеток крупного рогатого скота при его воздействии в концентрации от 10 до 30 mM не является эффективной (19,8% активации и 7,5% - выход бласто-цист).

6. Наиболее приемлемым способом активации реконструированных эмбрионов крупного рогатого скота и мышей с физиологической и технологической точек зрения является обработка их кальциевым ионофором (А23187) в течение 1 минуты для мышей и 5 минут для крупного рогатого скота с последующим культивированием в 2 mM растворе 6-DMAP в течение 3-4 часов. Этот способ позволяет получать до 15,6% клонированных эмбрионов крупного рогатого скота на стадии бласто-цист из клеток реконструированных с использованием в качестве ка-риопластов ядер кумулюсных клеток и в качестве цитопластов яйцеклеток, дозревавших in vitro.

7. При активации мышиных партеногенетических и реконструированных эмбрионов кальциевым ионофором с последующим культивированием в растворе 6-DMAP воздействие повышенного осмотического давления раствора 6-DMAP (300 mOsm) в течение 3 часов оказывает существенное отрицательное влияние на процесс активации и развития до стадии бластоцисты, по сравнению с пониженным (250 mOsm) осмотическим давлением - (36,7% и 13,3% против 72,8% и 33,3%, соответственно). Кратковременное воздействие повышенного осмотического давления раствора кальциевого ионофора в течение 1 минут не оказало отрицательного влияния на развитие до стадии бластоцисты, как партеногенетических, так и реконструированных мышиных эмбрионов.

8. Получены клонированные эмбрионы крупного рогатого скота на стадии бластоцисты путём трансплантации ядер кумулюсных клеток в энуклеированные яйцеклетки, дозревавшие in vitro, и клонированные бластоцисты мышей при использовании в качестве цитопластов яйцеклеток, созревавших in vivo.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для активации реконструированных клеток к митотическому делению и дальнейшему развитию эмбрионов целесообразно обрабатывать их кальциевым ионофором (10 мкМ) в течение 5 минут для клеток крупного рогатого скота и в течение 1 минуты - для мышиных, с последующим культивированием в течение 3 часов в среде содержащей 6-DMAP (2 мМ).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Алгулян, Армен Сергеевич, Боровск

1. Васецкий, С.Г. Пересадка ядер в яйцеклетки млекопитающих. // Онтогенез. 1986.-Т.17. - № 3. - с. 229-233.

2. Беликов, В.Ю. Влияние условий созревания ооцитов мышей in vitro на их способность к партеногенетической активации под действием цикло-гексимида и этанола. // Онтогенез.-1986.-Т.17.-№ 1.-е. 93-97.

3. Дыбан, А.П. Изучение факторов, определяющих частоту и пути партено-генетического развития яйцеклеток мыши, активированных этанолом. /

4. A.П. Дыбан, Е.М. Нониашвили // Онтогенез. 1986.-Т.17.-№ 2.-е. 165175.

5. Захарченко, В.И. Исследование влияния некоторых факторов на развитие клонированных эмбрионов кролика. / В.И. Захарченко, И.С. Лагутина, А.В. Захаров, М.И. Прокофьев // Доклады РАСХН.-1993.-№ 5.-е. 2629.

6. Захарченко, В.И. Эмбрионы кролика с трансплантированными ядрами. /

7. B.И. Захарченко, И.С. Лагутина, М.И. Прокофьев // Аграрная наука.-1994.-№ 1.-е. 35.

8. Захарченко, В.И. Трансплантация ядер в созревшие ооциты крупного рогатого скота. / В.И. Захарченко, И.С. Лагутина, М.И. Прокофьев, Л.К. Эрнст // Вестник РАСХН.-1993.-№ 4.-е. 51-52.

9. Захарченко, В.И. О методах клеточной инженерии ранних зародышей с.-х. животных. / В.И.Захарченко, М.И. Прокофьев // Сельскохозяйственная Биология.- 1990.-№ 2.-е. 51-53.

10. Конюхов Б.В. Клонирование позвоночных: успех и проблемы. // Генетика.- 1997.-Т.ЗЗ.-№1.-с. 1605-1620.

11. Ю.Корочкин, Л.И. Клонирование животных. // Соросовский образовательный журнал.-1999.-№4.-с. 10-16.11 .Лагутина, И.С. Клонирование млекопитающих. / И.С. Лагутина, В.В. Га-лат // Онтогенез.-2001.-Т.32.-№ 3-е. 180-195.

12. Никитин, В.А. Техника изготовления микроинструментов для исследования клеток под микроскопом. // Пущино, ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1986. 123 с.

13. Ротт, Н.Н. Новые данные о пересадке ядер у млекопитающих. // Онтогенез.- 1987.-Т.18.-№ 4.-е. 341-344.

14. Струнников, В.А. Клонирование животных: теория и практика. // Природа.» 1998.-№7.-с. 3-9.

15. Тараканов, Б.В. Перспективы создания новых пробиотиков на основе ре-комбинантных штаммов бактерий, экспрессирующих эукариотические гены. / Б.В. Тараканов, Л.К. Эрнст // М.: РАСХН, 2002.

16. Фонбрюн, П. Методы микроманипуляций. // М. Издательство иностранной литературы.- 1951.-с. 175.

17. Хамидов, Д.Х. Партеногенетическая активация созревших in vivo ооцитов мыши под действием циклогексимида. / Д.Х. Хамидов, Т.Ю. Коваль, Д. Шаюнусова, Е. Гончарова// Онтогенез.-1990.-Т.21.-№4.-с. 432-434.

18. Чайлахян, JI.M. Электростимулируемое слияние клеток в клеточной инженерии. / JI.M. Чайлахян, Б.Н. Вепринцев, Т.А. Свиридова, В.А. Никитин // Биофизика.-1987.-Т.ХХХП.-№5.

19. Albritton, N.L. Localized calcium spikes and propagating calcium waves. / N.L. Albritton, T. Meyer// Cell Calcium.-1993.-v. 14.-p.691-697.

20. Andreeva, N. Inhibition of NaVCa4* exchange enhances delayed neuronal death elicited by glutamate in cerebellar granule cell cultures. / N. Andreeva, B. Khodorov, E. Stelmashook, E. Jr. Cragoe, I. Victorov // Brain Res.-1991.-v.548.-p.322-325.

21. Asada, S. Hydrogen peroxide induces apoptosis of chondrocytes; involvement of calcium ion and extracellular signal-regulated protein kinase. / S. Asada, K. Fukuda, F. Nishisaka, M. Matsukawa, C. Hamanisi // Inflamm. Res.-2001.-v.50.-p.l9-23.

22. Ayabe Т., Kopf G.S., Schultz R.M. Regulation of mouse egg activation: presence of ryanodine receptors and effects of microinjected ryanodine and cyclic ADP ribose on uninseminated and inseminated eggs. // Development.- 1995.-v,121.-p.2233-2244.

23. Bagnasco, S.M. Role of calcium in organic osmolyte efflux when MDCK cells are shifted from hypertonic to isotonic medium. / S.M. Bagnasco, M.H. Montrose, J.S. Handler // Am. J. Physiol.-1993.-v.264.- p.Cl 165-C1170.

24. Banuett, F. Signaling in the yeasts: an informational cascade with links to the filamentous fungi. // Microbiol. Mol. Biol. Rev.-1998.-v.62.-p.249-274.

25. Barbacid, M. Inhibitors of polypeptide elongation on yeast polysomes. / M. Barbacid, M. Fresno, D. Vazquez // J. Antibiot.-1975.- v.28.-p.453-462.

26. Batiza, A.F. Yeast respond to hypotonic shock with a calcium pulse / A.F. Batiza, T. Schulz, P.H. Masson//J. Biol. Chem.-1996.-v.271.-p.23357-23362.

27. Bavister, B.D. Development of preimplantation embryos of the golden hamster in a defined culture medium. / B.D. Bavister, M.L. Leibfried, G. Zieber-man // Biol. Reprod.-l983.-v.28.-p.235-247.

28. Bement, W.M. Activators of protein kinase С trigger cortical granule exocyto-sis, cortical contraction, and cleavage furrow formation in Xenopus laevis oocytes and eggs. / W.M. Bement, D.G. Capco // J. Cell Biol.-1989.-v.108.-p.885-892.

29. Bement, W.M. Protein kinase С acts downstream of calcium at entry into the first mitotic interphase of Xenopus laevis. / W.M. Bement, D.G. Capco // Cell Regul.-1990.- v.3.-p.315-326.

30. Berridge, M.J. Calcium oscillations. // J. Biol. Chem.-1990.-v.265.-p.9583-9586.

31. Berridge, M.J. Capacitative calcium entry. // J. Biochem.-1995.-v.312.-p.l-l 1.

32. Berridge, M.J. Cytoplasmic calcium oscillations: a two pool model. // Cell Calcium.-1991 .-v. 12.-p.63-72.

33. Berridge, M.J. Inositol trisphosphate and calcium signalling. // Nature.-1993.-v.361.-p.315-325.

34. Berridge, M.J. Cytosolic calcium oscillators. / M.J. Berridge, A. Galione // FASEB J.-1977.- v.2.-p.3074-3082.

35. Berridge, M.J. Inositol phosphates in cell signalling. / M.J. Berridge, R.F. Irvine // Nature. 1989.-v.341 .-p.97-205.

36. Blaustein, M.P. Action of anionic and cationic nerveblocking agents: experiment and interpretation. / M.P. Blaustein, D.E. Goldman // Science.-1966.-v.l53.-p.429-432.

37. Bleil, J.D. Structure and function of the zona pellucida: Identification and characterization of the proteins of the mouse oocyte's zona pellucida. / J.D. Bleil, P.M. Wassarman // Dev. Biol.-1980.-v.76.-p.l85-202.

38. Bondioli, K.R. Production of identifical bovine offspring by nuclear transfer. / K.R. Bondioli, M.E. Weshusin, R. Looney // Theriogenology.-1990.-v.33.-p.165-174.

39. Bootman, M.D. The elementary principles of calcium signalling. / M.D. Bootman, M.J. Berridge//Cell. 1995.-v.83.-p.675-678.

40. Bos-Mikich, A. Calcium oscillations and protein synthesis inhibition synergis-tically activate mouse oocytes. / A. Bos-Mikich, K. Swann, D. Whittingham // Molecular Reproduction and Development.-1995.-v.41.-p.84-90.

41. Bos-Mikich, A. Meiotic and mitotic Ca4-1" oscillations affect cell composition in resulting blastocysts. / Bos-Mikich, A. Whittingham D., Jones K. // Developmental Biology.-1997.-V. 182.-p. 172-179.

42. Bos-Mikich, A.B. Sr^-induced parthenogenetic activation of mouse oocytes is enhanced by cycloheximide. / A.B. Bos-Mikich, K. Swann, D.G. Whittingham // Journal of Reproduction and Fertility Abstract Series.-1993.-p.l2-18.

43. Briggs, R. King F. Transplantation of living nuclei from blastula cells into enucleated frogs eggs. / R. Briggs, F. King // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1952.-v.38.-p.455-463.

44. Buck, W.R. Synergistic calcium release in the sea urchin egg by ryanodine and cyclic ADP ribose. / W.R. Buck, E.E. Hoffman, T.L. Rakow, S.S. Shen // Dev. Biol.-1994.- v. 163.-p. 1-10.

45. Busa, W.B. Activation of frog (Xenopus laevis) egg by inositol triphosphate. Characterization of Са4"* release from intracellular stores. / W.B. Busa, J.E. Ferguson, S.K. Joseph, J.R. Williamson, R Nuccitelli // J. Cell Biol.-1985.-v.l01.-p.677-683.

46. Busa, W.B. An elevated free cytozolic Ca4-1" wave follows fertilization in eggs of the frog, Xenopus laevts. / W.B. Busa, R. Nuccitelli // J. Cell Biol.-1985.-v.lOO.-p. 1325-1329.

47. Campbell, K.H.S. Improved development of ovine nuclear transfer embryos reconstructed during the presumptive S-phase of enucleated pre-activated oocytes. / K.H.S. Campbell, P. Loi, P. Cappai, I. Wilmut // Biol. Reprod.-1994.-v.49.-p.933-942.

48. Campbell, K.H.S. Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line. / K.H.S. Campbell, J. McWhir, W.A. Ritchie, I. Wilmut // Nature.-1996.-v.380.-p.64-66.

49. Carafoli, E. Biogenesis: plasma membrane calcium ATPase: 15 years of work on the purified enzyme. // J. FASEB.-1994.-v.8.-p.993-1002.

50. Carroll, J. The initiation and regulation of Ca4^ signaling at fertilization in the mammals. // Seminars in Cell and Developmental Biology.-2001.-v.12.-p.37-43.

51. Carroll, J. Spontaneous cytosolic calcium oscillations driven by inositol trisphosphate occur during in vitro maturation of mouse oocytes. / J. Carroll, K. Swann//J. Biol. Chem.-1992.-v.267.-p.l 1196-11201.

52. Carroll, J. Spatiotemporal dynamics of intracellular Ca^i oscillations during the growth and meiotic maturation of mouse oocytes. / J. Carroll, K. Swann, D. Whittingham, M. Whitaker // Development.-1994.-v.l20-p.3507-3517.

53. Cascio, S.M. Program of early development in the mammal: Post-transcriptional control of a class of proteins synthesized by mouse oocytes and early embryos. / S.M. Cascio, P.M. Wassarman // Dev. Biol.-1982.-v.89.-p.397-408.

54. Chambers, E.L. Fertilization and cleavage of the eggs of the sea urchin Ly-techinus variegatus in Ca^-free sea water. // Eur. J. Cell Biol.-1980.-v.22.-p.476.

55. Chambers, E.L. Is external calcium required for fertilization of sea urchin eggs by acrosome-reacted sperm? / E.L. Chambers, S.V. Angeloni // J. Cell Biol.-1981 .-v.91 .-p. 181.

56. Chang, D.C. Changes in membrane structure induced by electroporation as revealed by rapid-freezing electron microscopy. / D.C. Chang, T.S. Reese // Biophys. J.-1990.-v.58.-p.l-12.

57. Chang, M.C. Development of parthenogenetic rabbit blastocysts induced by low temperature storage of unfertilized ova. // J. Exp. Zool.-1954.-v.125.-p.127-149.

58. Che, L. Chemical activation of parthenogenetic and nuclear transfer porcine oocytes using ionomycin and strontium chloride. / L. Che, A. Lalonde, V. Bordignon // Theriogenology.-2007.-v.l5.-67(7).-p.l297-304.

59. Cheng, H. Calcium sparks: elementary events underlying excitation-contraction coupling in heart muscle. / H. Cheng, W.J. Lederer, M.B. Cannell // Science.-1993.- v.262.-p.740-744.

60. Cheung, J.Y. Calcium and ischemic injury. / J.Y. Cheung, J.V. Bonventre, C.D. Malis, A. Leaf//N. Engl. J. Med.-1986.-v.314.-p. 1670-1676.

61. Choi, T. Activation of p34cdc2 protein kinase activity in meiotic and mitotic cell cycles in mouse oocytes and embryos. / T. Choi, F. Aoki, M. Yamashita, Y. Nagahama, K. Kohmoto // Development.-1991.-v. 113.-p.789-795.

62. Clapham, D.E. Calcium signaling. II Cell.-1995.-80.-p.259-268.

63. Clapham, D.E. Replenishing the stores. //Nature.-1995.-v.375.-p.634-635.

64. Clapper, D.L. Inositol trisphoshate induces calcium release from nonmito-chondrial stores in sea urchin egg homogenates. / D.L. Clapper, H.C. Lee // J. Biol. Chem., 1985.-v.260.-p.l3947-13954.

65. Clarke, HJ. The induction of reversible and irreversible chromosome decondensation by protein synthesis inhibition during meiotic maturation of mouse oocytes. / HJ. Clarke, Y. Masui //Dev. Biol.-1983.-v.97.-p.291-301.

66. Clarke, HJ. Suppression of chromosome condensation during meiotic maturation induces parthenogenetic development of mouse oocytes. / HJ. Clarke, J. Rossant, Y. Masui // Development.-1988.-v.l04.-p.97-103.

67. Clarke P.G.H. Developmental cell death: morphological diversity and multiple mechanisms. //Anat. Embryol.-1990.-v.l81.-p.l95-213.

68. Collas, P. Electrical activation of mouse oocytes. / P. Collas, JJ. Balise, G.A. Hofmann, J.M. Robl //Theriogenology.-1989.-v.32.-p.835-843.

69. Collas, P. Inactivation of histone HI kinase by С a*4" in rabbit oocytes. / P. Collas, T. Chang, C. Long, J.M. Robl // Mol. Reprod. Dev.-1995.-v.40.-p.253-258.

70. Collas, P. Electrically induced calcium elevation, activation, and parthenogenetic development of bovine oocytes. / P. Collas, R. Fissore, J.M. Robl, E.J. Sullivan, F.L. Barnes // Mol. Reprod. Dev.-1993.-v.34.-p.212-223.

71. Collas, P. Effects of donor cell cycle stage on chromatin and spindle morphology in nuclear transplant rabbit embryos./ P. Collas, C. Pinto-Correia, F.A. Ponce de Leon, J.M. Robl // Biol. Reprod.-1992.-v.46.-p.501-511.

72. Collas, P. Factors affecting efficiency of nuclear transplantation in the rabbit embryo. / P. Collas, J.M. Robl // Biol. Reprod.-1990.-v.43.-p.877-884.

73. Collas, P. Relationship between nuclear remodeling and development in nuclear transplant rabbit embryos. / P. Collas, J.M. Robl // Biol. Reprod.-1991.-v.45.-p.455-465.

74. Collas, P. Histone HI kinase activity in bovine oocytes following calcium stimulation. /Р. Collas, E.J. Sullivan, F.L. Barnes // Mol. Reprod. Dev.-1993.-v.34.-p.224-231.

75. Colonna, R. Effects of protein kinase С stimulation and free Са4-1" rise in mammalian egg activation. / R. Colonna, C. Tatone, A. Malgaroli, F. Eusebi, F. Mangia // Gamete Res.-1989.-v.24.-p.l71-183.

76. Cran, D.G. Cortical granules during oocyte maturation and fertilization. // In Cell Biology of Mammalian Egg Manipulation (ed. Greve Т., Hyttel P. and Weir B.J.). The Journals of Reproduction and Fertility Ltd., Cambridge.-1988.-p.49-62.

77. Crossley, I. Activation of sea urchin eggs by inositol phosphates is independent of external calcium. /1. Crossley, K. Swann, E. Chambers, M. Whitaker // Biochem. J.-1988.-v.252.-p.257-262.

78. Currie, K.P.M. Activation of С a44- dependent currents in cultured rat dorsal root ganglion neurones by a sperm factor and cyclic ADP-ribose. / K.P.M. Currie, K. Swann, A. Galione, R.H. Scott // Mol. Biol. Cell.-1992.-v.3.-p.1415-1425.

79. Cuthbertson, K.S.R. Free Ca^ increases in exponential phase during mouse oocyte activation. / K.S.R. Cuthbertson, D.G. Whittingtham, P.H. Cobbold // Nature.-1981 .-v.294.-p.754-757.

80. Cuthbertson, K.S.R. Parthenogenetic activation of mouse oocytes in vitro with ethanol and benzyl alcohol. // J. Exp. Zool.-1983.-v.226.-p.311-314.

81. Cuthbertson, K.S.R. Cobbold P.H. Phorbol ester and sperm activate mouse oocytes by inducing sustained oscillations in cell Ca44 / K.S.R. Cuthbertson, P.H. Cobbold // Nature.-1985.-v.316.-p.541-542.

82. Dargie, P.J. Comparison of Ca44" mobilizing activities of cyclic ADP-ribose and inositol trisphosphate. / P.J. Dargie, M.C. Agre, H.C. Lee // Cell Regul.-1990,-v. 1 .-p.279-290.

83. Dascalu, A. A hyperosmotic stimulus regulates intracellular pH, calcium, and S-100 protein levels in avian chondrocytes. / A. Dascalu, R. Korenstein, Y. Oron, Z. Nevo // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1996.-v.227.-p.368-373.

84. Dascalu, A. A hyperosmotic stimulus elevates intracellular calcium and inhibits proliferation of a human keratinocyte cell line. J. Invest. / A. Dascalu, A. Matithyou, Y. Oron, R. Korenstein // Dermatol.-2000.-v.l 15.-p.714-718.

85. De Azevedo, W.F. Inhibition of cyclin-dependent kinase by purine analogues. / W.F. De Azevedo, S. Leclerc, L. Meijer, L. Havlicek, M. Strnad, S. Kim // Eur. J. Biochem.-1997.-v.243.-p.518—526.

86. De La Fuente, R. Developmental consequences of karyokinesis without cytokinesis during the first mitotic cell cycle of bovine parthenotes. / R. De La Fuente, W.A. King //Biol. Reprod.-1998.-v.58.-p.952-962.

87. Debey, P. Dynamics of chromatin changes in live one cell embryos: a continuous followup by fluorescence microscopy. / P. Debey, J.P. Renard, M. Coppey-Moisan, I.Monnot, M. Geze // Exp. Cell Res.-1989.-v.183.-p.413-433.

88. Deng, M.Q. Intracellular free calcium changes of mouse oocytes during activation induced by ethanol or electrical stimulations and parthenogenetic development. / M.Q. Deng, B.Q. Fan // Shi Yan Sheng Wu Xue Bao.-1994.-v.27(3).-p.289-297.

89. DiBerardino, M.A. Gene reactivation in erythrocytes: nuclear transplantation in oocytes and eggs of Rana. / M.A. DiBerardino, N.J. Hofner // Science.-1983.-v.219.-p.862-864.

90. Dinneys, A. High developmental rates of vitrified bovine oocytes following parthenogenetic activation, in vitro fertilization, and somatic cell nuclear transfer. / A. Dinneys, D. Yunping, S. Jianga, X. Yang // Biol, of Reprod.-2000.-v.63.-p.513-518.

91. Dode, M.A. Developmental capacity of Bos indicus oocytes after inhibition of meiotic resuption by 6-dimethylaminopurine. / M.A. Dode, P.R. Adona // Anim. Reprod. Sci.-2001.-v.65.-p.l71-80.

92. Dominko, T. Bovine Oocyte Cytoplasm Supports Development of Embryos Produced by Nuclear Transfer of Somatic Cell Nuclei from Various Mammalian Species. / T. Dominko, M. Mitalipova, B. Haleya, Z. Beyhana, E.

93. Memilia, В. McKusicka, NX. Firsta // Biol, of Reprod.-1999.-v.60.-p.1496-1502.

94. Doree, M. The cyclin-dependent protein kinases and the control of cell division. / M. Doree, S. Galas // FASEB J.-1994.-v.8.-p.l 114-1121.

95. Draetta, G. Cdc2 protein kinase is complexed with both cyclin A and B: evidence for proteolytic inactivation of MPF. / G. Draetta, F. Luca, J. Westen-dorf, L. Brizuela, J. Ruderman, D. Beach // Cell.-1989.-v.56.-p.829-838.

96. Du, F. Beneficial effect of oocyte activation prior to and during nuclear transfer in cattle using in vitro matured oocytes 24 hr of age. / F. Du, S. Jinng, X. Yang // Reprod. Nutr. Dev.-1995-v.35.-p.708-712.

97. Ducibella, T. Quantitative studies of changes in cortical granule number and distribution in the mouse oocyte during meiotic maturation. / T. Ducibella, E. Anderson, D.F. Albertini, J. Aalberg, S. Rangarajan // Dev. Biol.-1988-v.130.-p. 184-197.

98. Ducibella, T. Egg-to-embryo transition is driven by differential responses to Ca** oscillation number. / T. Ducibella, D. Huneau, E. Angelichio, Z. Xu, R. Schultz, G. Kopf //Developmental Biology.-2002.-v.250.-p.280-291.

99. Dunphy, W.G. The Xenopus cdc2 protein is a component of MPF, a cytoplasmic regulator of mitosis. / W.G. Dunphy, L. Brizuela, D. Beach, J. Newport // Cell.-1988.-v.54.-p,423-431.

100. Dupont, G. Signal-induced Ca** oscillations: properties of a model based on Ca** -induced Ca** release. / G. Dupont, M.J. Berridge, A. Goldbeter // Cell Calcium.-1991-v. 12.-p.73-85.

101. Dupont, G. Phospholipase С in mouse oocytes: characterization of isoforms and their possible involvement in sperm-induced Ca++ spiking. / G. Dupont, O. McGuiness, M.H. Johnson, M.J. Berridge, F. Borgese // Biochemistry Journal.-1996.-v.316.-p.583-591.

102. Endo, M. Calcium induced release of calcium from the sarcoplasmic reticulum of skinned skeletal muscle fibres. / M. Endo, M. Tanaka, Y. Ogawa // Na-ture.-1970.-v.228.-p.34-36.

103. Endo, Y. Stage-specific changes in protein phosphorylation accompanying meiotic maturation of mouse oocytes and fertilization of mouse eggs. / Y. Endo, G.S. Kopf, R.M. Schultz // J. Exp. Zool.-1986.-v.239.-p.401-409.

104. Epel, D. Mechanism of activation of sperm and egg during fertilization of sea urchin gametes. // In: Moscora A.A., Monroy A. (eds). Current Topics in Developmental Biology Academic Press, New York.-1978.-v.12.-p.186-246.

105. Erickson, G.R. Hyperosmotic stress induces volume change and calcium transients in chondrocytes by transmembrane, phospholipid, and G-protein pathways. / G.R. Erickson, L.G. Alexopoulos, F. Guilak // J. Biomech.-2001.-v.34.-p.l527-1535.

106. Faerge, I. Nuclear ultrastructure in bovine oocytes after inhibition of meiosis by chemical and biological inhibitors. / I. Faerge, M. Mayes, P. Hyttel, M.A. Sirard//Mol. Reprod. Dev.-2001.-v.59.-p.459-467.

107. Ferrell, J.E Jr. Cell cycle tyrosine phosphorylation of p34cdc2 and a micro-tubule-associated protein kinase homolog in Xenopus oocytes and eggs. / J.E Jr. Ferrell, M. Wu, J.C. Gerhart, G.S. Martin // Mol. Cell Biol.-1991.-v. 11.-p.1965-1971.

108. Fissore, R.A. Patterns of intracellular Ca*4" concentrations in fertilized bovine eggs. / R.A. Fissore, J.R. Dobrinsky, J.J. Balise, R.T. Duby, J.M. Robl // Biol. Reprod.- 1992.-v.47.-p.960-969.

109. Fissore, R.A. Inositol trisphosphate-induced calcium release in the generation of calcium oscillations in bovine eggs. / R.A. Fissore, C. Pinto-Correia, J.M. Robl // Biol. Reprod.-1995.-v.53.-p.766-774.

110. Fissore, R.A. Intracellular Ca++ response of rabbit oocytes to electrical stimulation. / R.A. Fissore, J.M. Robl // Mol. Reprod. Dev.-1992.-v.32.-p.9-16.

111. Fissore, R.A. Sperm, inositol trisphosphate and thimerosal-induced intracellular calcium elevations in rabbit eggs. / R.A. Fissore, J.M. Robl // Dev. Biol.-1993 .-v.159.-p. 122-130.

112. Fleischer, S. Biochemistry and biophysics of excitation-contraction coupling. / S. Fleischer, M. Inui // Annu. Rev. Biophys. Biophys. Chem.-1989.-v.18.-p.333-364.

113. Fujiwara, T. Development of inositol trisphosphate-induced calcium release mechanism during maturation of hamster oocytes. / T. Fujiwara, K. Nakada, H. Shirakawa, S. Miyazaki //Dev. Biol.-1993.-v.l56.-p.69-79.

114. Fukuda, Y. The time of cortical granule breakdown and sperm penetration in mouse and hamster eggs inseminated in vitro. / Y. Fukuda, M.C. Chang // Biol. Reprod.-1978-v.19.-p.261-266.

115. Fulka, J. Jr. Sister-chromatid separation and the metaphase-anaphase transition in mouse oocytes. / J.Jr. Fulka, R.M. Moor, J. Fulka // Dev. Biol.-1994.-v.l65.-p.410-417.

116. Fulka, J.Jr. Effect of 6-dimethylaminopurine on germinal vesicle breakdown of bovine oocytes. / J.Jr. Fulka, M.L. Leibfried-Rutledge, N.L. First // Mol. Reprod. Dev.-1991.-v.29.-p.379-84.

117. Fulka, J.Jr. Effect of cycloheximide on nuclear maturation of pig and mouse oocytes. / J.Jr. Fulka, J. Motlik, J. Fulka, F. Jilek // J. Reprod. Fertil.-1986.-v.77.-p.281-285.

118. Fulton, B.P. Activation of mammalian oocytes by intracellular injection of calcium. / B.P. Fulton, D.G. Whittingham // Nature.-1978.-v.273.-p.l49-151.

119. Funahashi, H. In vitro development of in vitro-matured porcine oocytes following chemical activation or in vitro fertilization. / H. Funahashi, T.C. Can-tley, T.T. Stumpf, S. Terlouw, B.N. Day // Biol. Reprod.-1994.-v.50.-p.1072-1077.

120. Gabrielli, B.G. Requirement for cdk2 in cytostatic factor-mediated metaphase arrest. / B.G. Gabrielli, L.M. Roy, J.L. Mailer // Science.-1993.-v.259.-p.1766-1769.

121. Galione, А. С a44"- induced Ca** release in sea urchin egg homogenates: modulation by cyclic ADP-ribose. / A. Galione, H.C. Lee, W.B. Busa // Science.-1991.-v.253.-p.l 143-1146.

122. Galione, A. Redundant mechanisms of calcium-induced calcium release underlying calcium waves during fertilization of sea urchin eggs. / A. Galione, A. McDougall, W.B. Busa, N. Willmott, I. Gillot, M. Whitaker // Science.-1993.-v.261.-p.348-352.

123. Gautier, J. Cyclin is a component of maturation-promoting factor from Xenopus. / J. Gautier, J. Minshull, M. Lohka, M. Glotzer, T. Hunt, J.L. Mailer // Cell.-1990.-v.60.-p.487-494.

124. Gautier, J. Purified maturation-promoting factor contains the product of a Xenopus homolog of the fission yeast cell cycle control gene cdc1^. / J. Gautier, C. Norbuiy, M. Lohka, P. Nurse, J. Mailer // Cell.-1988.-v.54.-p.433-439.

125. Gilkey, J.C. A free calcium wave transverses the activating egg of the medaka, Ort'zias latipes. / J.C. Gilkey, L.F. Jaffe, E.B. Ridgway, G.T. Reynolds//J. Cell Biol.-1978.-v.76.-p.448-466.

126. Glotzer, M. Cyclin is degraded by the ubiquitin pathway. / M. Glotzer, A.W. Murray, M.W. Kirschner//Nature.-199l.-v.349.-p. 132-138

127. Gordo, A. Intracellular calcium oscillations signal apoptosis rather than activation in in vitro aged mouse eggs. / A. Gordo, P. Rodrigues, M. Kurokawa, T. Jellerette, G. Exley, C. Warner, R. Fissore // Biol. Reprod.-2002.-v.66.-p. 1828-1837.

128. Graham, C.F. The production of parthenogenetic mammalian embryos and their use biological research. // Biol. Rev.-1974.-v.49.-p.399-422.

129. Guizouarn, H. Cell volume regulation: the role of taurine loss in maintaining membrane potential and cell pH. / H. Guizouarn, R. Motais, F. Garcia Romeu, F. Borgese //J. Physiol.-2000.-523.(Pt 1).-р.147-154.

130. Gulyas, B.J. Cortical reaction and zona hardening in mouse oocytes following exposure to ethanol. / B.J. Gulyas, L.C. Yuan // J. Exp. Zool.-1985.-v.233,-p.269-276.

131. Gurdon, J.B. The developmental capacity of nuclei taken from intestinal epithelium cells of feeding tadpoles. // J. Embryol. Exp. Morphol.-1962.-v.10.-p.622-640.

132. Gurdon, J.B. Transplanted nuclei and cell differentiation. // Sci. Amer.-1968.-v.219.-p.24-35.

133. Haccard, O. Induction of metaphase arrest in cleaving Xenopus embryos by MAP kinase. / O. Haccard, B. Sarcevic, A. Lewellyn, R. Hartley, L. Roy, T. Izumi, E. Erikson, J.L. Mailer // Science.-1993.-v.262.-p.l262-1265.

134. Hagen, D.R. Response of porcine oocytes to electrical and chemical activation during maturation in vitro. / D.R. Hagen, R.S. Prather, N.L. First // Mol. Re-prod. Dev.-1991 .-v.28.-p.70-73.

135. Hardingham, G.E. Bading H. Calcium as a versatile second messenger in the control of gene expression. / G.E. Hardingham, H. Bading // Microsc. Res. Tech.-1999.-v.46.-p.348-355.

136. Herbert, M. The thiol reagent, thimerosal induces intracellular calcium oscillations in mature human oocytes. / M. Herbert, A.P. Murdoch, J.I. Gillespie // Hum. Reprod.-1995.-v.10.-p.2183-2186.

137. Hildebrandt, J.P. Ca4-1" and p38 MAP kinase regulate mAChR-mediated c-Fos expression in avian exocrine cells. / J.P. Hildebrandt, A. Prowald // Am. J. Physiol. Cell Physiol.-2000.-v.278.-p.C879-C884.

138. Hinrichs, K. Activation of horse oocytes. / K. Hinrichs, A.L. Schmidt, J.P. Selgrath // Biology of Reproduction Monograph Series.-1995.-v.l.-p.319-324.

139. Hochachka, P.W. Defence strategies against hypoxia and hypothermia. // Sci-ence-1986.-v.231 .-p.234-241.

140. Hoek, J.B. Alcohol and membrane-associated signal transduction. / J.B. Hoek, E. Rubin // Alcohol Alcohol.-1990-v.25.-p. 143-156.

141. Hoek, J.B. Ethanol-induced mobilization of calcium by activation of phospho-inostitide-specific phospholipase С in intact hepatocytes. / J.B. Hoek, A.P. Thomas, R. Rubin, E. Rubin // J. Biol. Chem.-1987.-v.262.-p.682-691.

142. Hoffmann, E.K. Membrane mechanisms and intracellular signaling in cell volume regulation. / E.K. Hoffmann, P.B. Dunham // Int. Rev. Cytol.-1995.-v. 161.-p. 173-262.

143. Нота, S.T. A cytosolic sperm factor triggers calcium oscillations and membrane hyperpolarizations in human oocytes. / S.T. Нота, К. Swann // Hum. Reprod.-1994.-v.9.-p.2356-2361.

144. Hoppe, P.C. Microsurgically produced homozygous-diploid uniparental mice /Р.С. Hoppe, K. Illmensee //Proc. Nat. Acad. Sci.-1977.-v.74.-p.5657-5661.

145. Hoshi, К. Pretreatment of hamster oocytes with Ca44" ionophore to facilitate fertilization by ooplasmic micro-injection. / K. Hoshi, K. Yanagida, A. Sato // Hum. Reprod.-1992.-v.7.-p.871 -875.

146. Hoth, M. Depletion of intracellular calcium stores activates a calcium current in mast cells. / M. Hoth, R. Penner // Nature.-1992.-v.355.-p.353-355.

147. Howlett, S.K. A set of proteins showing cell cycle dependent modification in the early mouse embryo. // Cell-1986.-v.45.-p.387-396.

148. Hunter, A.G. Stage dependent effects of inhibiting RNA and protein synthesis on meiotic maturation of bovine oocytes in vitro. / A.G. Hunter, R.M. Moor // J. Dairy Sci.- 1987.-v.70.-p. 1646-1651.

149. Igusa, Y. Effects of altered extracellular and intracellular calcium concentration on hyperpolarizing response of hamster egg. / Y. Igusa, S. Miyazaki // J. Physiol.-1983 .-v.340.-p.611 -632.

150. Igusa, Y. Periodic increase of cytoplasmic free calcium in fertilized hamster eggs measured with calcium-sensitive electrodes. / Y. Igusa, S. Miyazaki // J. Physiol.-1986.-v.377.-p. 193-205.

151. Igusa, Y. Periodic hyperpolarizing responses in hamster and mouse eggs fertilized with mouse sperm. / Y. Igusa, S. Miyazaki, N. Yamashita // Physiol.-1983.-v.340.-p.633-647.

152. Illmensee, K. Nuclear transplantation in mus musculus: Developmental potential of nuclei from preimplantation embryos. / K. Illmensee, P.C. Hoppe // Cell.-1981.-v.23.-p.9-18.

153. Ishii, T. Hashimoto Т., Ohmori H. J. // Physiol. (Lond.).-1996.-493.-p.371-384.

154. Iwamatsu, T. Mechanism of Ca44" release in medaka eggs microinjected with inositol 1,4,5-trisphosphate and Са4"4". / T. Iwamatsu, Y. Yoshimoto, Y. Hiramoto //Dev. Biol.-1988.-v.l29.-p.l91-197.

155. Izant, J.G. The role of calcium during mitosis. Calcium participates in the anaphase trigger. // Chromosoma.-l 993 ,-v.88.-p. 1-10.

156. Jaffe, L.A. First messengers at fertilization. // J. Reprod. Fertil. Suppl.-1990.-v.42.-p. 107-116.

157. Jaffe, L.A. G proteins and egg activation. / L.A. Jaffe, P.R. Turner, D. Kline, R.T. Kado, F. Shilling // Cell. Differ. Dev.-1988.-v.25.-p.l5-18.

158. Jilek, F. Activation of pig oocytes using calcium ionophore: effect of protein synthesis inhibitor cycloheximide. / F. Jilek, R. Huttelova, J. Petr, M. Ho-lubova, J. Rozinek // Animal Reproduction Science.-2000.-v.63.-p.l01-111.

159. Johnson, M.H. Acid Tyrode's solution can stimulate parthenogenetic activation of human and mouse oocytes. / M.H. Johnson, S.J. Pickering, P.R.; Braude, C. Vincent, A. Cant, J. Currie // Fertil. Steril.-1990.-v.53.-p.266-270.

160. Jolliff, W.J. Parthenogenic development of in vitro matured porcine oocytes. / W.J. Jolliff, R.S. Prather // J. Anim. Sci.-1994.-72.(suppl 2).-74.(abstract 671).

161. Jolliff, W.J. Parthenogenic development of in vitro-matured, in vivo-cultured porcine oocytes beyond blastocyst. / W.J. Jolliff, R.S. Prather // Biol. Reprod.-1997.-v.55.-p.544-548.

162. Jones, K.T. Ionomycin, thapsigargin, ryanodine, and sperm induced Ca"*"4" release increase during meiotic maturation of mouse oocytes. / K.T. Jones, J. Carroll, D.G. Whittingham // J. Biol. Chem.-l995.-v.270.-p.6671-6677.

163. Jones, K.T. Turning it on and off: M-phase promoting factor during meiotic maturation and fertilization. // Molecular Human Reproduction.-2004.-v.10.-p.1-5.

164. Jones, K.T. Repetitive sperm-induced Ca++ transients in mouse oocytes are cell cycle dependent. / K.T. Jones, J. Carroll, J.A. Merriman, D.G. Whittingham, T. Kono // Development.-1995 .-v. 121 .-p.3259-3266.

165. Jones, K.T. Ionomycin, thapsigargin, ryanodine, and sperm induced Ca44" release increase during meiotic maturation of mouse oocytes. K.T. Jones, J. Carroll, D.G. Whittingham // J. Biol. Chem.-1995.-v.270.-p.6671-6677.

166. Joseph, S.K. Myoinositol 1,4,5- trisphosphate. A second messenger for the hormonal mobilization of intracellular Ca44" in liver. / S.K. Joseph, A.P. Thomas, R.J. Williams, R.F. Irvine, J.R. Williamson // J. Biol. Chem.-1984.-v.259.-p.3077-3081.

167. Kanka, J. Nuclear transplantation in bovine embryo: fine structural and autoradiographic studies. / J. Kanka, J.Jr. Fulka, J. Fulka, J. Petr // Mol. Re-prod. Dev.-1991.-v.29.-p.l 10-116.

168. Kastrop, P.M. Changes in protein synthesis and phosphorylation patterns during bovine oocyte maturation in vitro. / P.M. Kastrop, M.M. Bevers, O.H. De-stree, T.A.M. Kruip //J. Reprod. Fertil.-1990.-v.90.-p.305-310.

169. Kastrop, P.M. Protein synthesis and phosphorylation patterns of bovine oocytes maturing in vivo. / P.M. Kastrop, M.M. Bevers, O.H. Destree, T.A.M. Kruip // Mol. Reprod. Dev.-1991 .-v.29.-p.271-275.

170. Kato, Y. Eight calves cloned from somatic cells of a single adult. / Y. Kato, T. Tani, Y. Sotomaru, K. Kurosawa, J.Y. Kato, H. Doguchi, H. Yasue, Y. Tsunoda // Science.-1998.-v.282.-p.2095-2098.

171. Kaufman, M.H. Early mammalian development. // Parthenogenetic studies. Cambridge.-1983.-p.283.

172. Kaufman, M.H. Parthenogenesis: a system facilitating understanding of factors that influence early mammalian development. // In: Harrison RJ, Holmes RL (eds.), Progress in Anatomy, Cambridge: Cambridge University Press.-1981.-v.l.-p.l-34.

173. Kaufman, M.H. Parthenogenetic activation of mouse eggs following avertin anaesthesia. //J. Embryol. Exp. Morphol.-1975.-v.33.-p.941-946.

174. Kaufman, M.H. The chromosome complement of single-pronuclear haploid mouse embryos following activation by ethanol treatment. // J. Embryol. Exp. Morphol.-1982.-v.71.-p. 139-154.

175. Kaufman, M.H. Genetic control of haploid parthenogenetic development in mammalian embryos. / M.H. Kaufman, E. Huberman, L. Sachs // Nature.-1975.-v.254.-p.694-695.

176. Keating, T.J. Intracellular free calcium oscillations in normal and cleavage-blocked embryos and artificially activated eggs of Xenopus laevis. / T.J. Keating, R.J. Cork, K.R. Robinson//J. Cell Sci.-1994.-v.l07.-p.2229-2237.

177. Keefer, C.L. Spontaneous activation of ovulated rat oocytes during in vitro culture. / C.L. Keefer, A.W. Schuetz // J. Exp. Zool.-1982.-v.224.-p.371-377.

178. Keizer, J. Spark-to-wave transition: saltatory transmission of calcium waves in cardiac myocytes. / J. Keizer, G.D. Smith // Biophys. Chem.-1998.-v.72.-87-100.

179. Kikuchi, K. Maturation M-phase promoting factor: a regulator of aging in porcine oocytes. / K. Kikuchi, K. Naito, J. Noguchi, A. Shimada, H. Kaneko,

180. M. Yamashita, F. Aoki, H. Tojo, Y. Toyoda // Biol. Reprod.-2000.-v.63.-p.715-722.

181. Kishikawa, H. Comparison of oocyte activating agents for mouse cloning. / H. Kishikawa, T. Wakayama, R.Yanagimachi // Cloning- 1999,-v.l.--p. 153-159.

182. Kitawa, M. Butyrolactone I, a selective inhibitor of cdk2 and cdc2 kinase. / M. Kitawa, T. Okabe, H. Ogino, H. Matsumoto, I. Suzuki-Takahashi, T. Ko-kubo et al. // Oncogene.-1993.-v.8.-p.2425-32.

183. Kline, D. Attributes and dynamics of the endoplasmic reticulum in mammalian eggs. // Curr. Top. Dev. Biol.-2000.

184. Kline, D. Repetitive calcium transients and the role of calcium in exocytosis and cell cycle activation in the mouse egg. / D. Kline, J.T. Kline // Dev. Biol.-1992,-v. 149.-p.80-89.

185. Юте, D. Thapsigargin activates a calcium influx pathway in the unfertilized mouse egg and suppresses repetitive calcium transients in the fertilised egg. / D. Kline, J.T. Kline // Journal of Biomedical Chemistiy.-1992.-v.267.-p. 17624-17630.

186. Kline, J.T. Regulation of intracellular calcium in the mouse egg: evidence for inositol trisphosphate-induced calcium release, but not calcium-induced calcium release. / J.T. Kline, D. Kline //Biol. Reprod.-1994.-v.50.-p. 193-203.

187. Knight, D.E. Rendering cells permeable by exposure to electric fields. // In : Techniques in Cellular Physiology." Amsterdam: Elsevier North Holland Scientific Publishers Ltd.-1981.-p.l 13-120.

188. Kono, T. Nuclei from fertilized mouse embryos have calcium releasing activity. / T. Kono, J. Carrol, K. Swann, D.G. Whittingham // Development.-1995.-v.l21.-p.l 123-1128.

189. Koshiyama, H. Novel mechanism of intracellular calcium release in pituitary cell. / H. Koshiyama, H.C. Lee, A. H. Tashijan // J. Biol. Chem.-1991.-v.266.-p.16985-16988.

190. Krivokharchenko, A. Development of parthenogenetic rat embryos. / A. Krivokharchenko, E. Popova, I. Zaitseva, L. Vil'ianovich, D. Ganten, M. Bader // Biology of Reproduction.-2003.-v.68.-p.829-836.

191. Kubelka, M. Time sequence of germinal vesicle breakdown in pig oocytes after cycloheximide and p-aminobenzamidine block. / M. Kubelka, J. Motlik, J.J. Fulka, R. Prochazka, Z. Rimkevikova, J. Fulka // Gam. Res.-1988.-v.19.-p.423-431.

192. Kubelka, M. Butyrolactone I reversibly inhibits meiotic maturation of bovine oocytes, Without influencing chromosome condensation activity. / M. Kubelka, J. Motlik, R.M. Schultz, A. Pavlok // Biol. Reprod.-2000.-v.62.-p.292-302.

193. Kubiak, J.Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest. // Dev. Biol.-1989.-v.l36.-p.537-545.

194. Kubiak, J.Z. The metaphase II arrest in mouse oocytes is controlled through microtubule-dependent destruction of cyclin В in the presence of CSF. / J.Z. Kubiak, M. Weber, H. de Pennart, N. Winston, В. Maro // EMBO J.-1993.-v.l2.-p.3773-3778.

195. Kubish, H.M; Transgene expression in IVM/IVF-derived bovine embryos after delay on maturation with 6 dimethylaminopurine. / H.M. Kubish, M.A. Larson, F. Barnes, J.D. Sikes, R.M. Roberts // Theriogenology.-1995.-v.43.-p.255.

196. Kuhtreiber, W.M. Detection of extracellular calcium gradients with a calcium-specific vibrating electrode. / W.M. Kuhtreiber, L.F. Jaffe // J. Cell Biol.-1990.-v.110.-p. 1565-1573.

197. Kuriyama, R. Role of tubulin-SH groups in polymerization to microtubules. / R. Kuriyama, H. Sakai // J. Biochem.-1974.-v.76-p.651-654.

198. Labbe, J. Purification of MPF from starfish: identification as the histone HI kinase p34cdc2 and a possible mechanism for its periodic activation. / J. Labbe, A. Picard, G. Peaucellier, J.C. Cavadore, P. Nurse, M. Dorre // Cell.-1989.-v.57.-p.253-263.

199. Lang, F. The diversity of volume regulatory mechanisms. / F. Lang, G.L. Busch, H. Volkl // Cell Physiol. Biochem.-1998.-v.8.-p.l-45.

200. Lange, K. Regulation of cell volume via microvillar ion channels. // J. Cell Physiol.-2000.-v. 185.-p.21 -35.

201. Laskey, R.A. Genetic content of adult somatic cells tested by nuclear transplantation from cultured cells. / R.A. Laskey, J.B. Gurdon // Nature.-1970.-v.228.-p. 1332-1334.

202. Lasserre, A. The kinetics of oocyte activation and dynamics of polar body formation in Calomys musculinus and Calomys laucha (Rodentia-Sigmodontinae). / A. Lasserre, E. Cebral, A.D. Vitullo // Zygote.-1999.-V.7.-p.347-356.

203. Lawrence, Y.M. Thapsigargin induces cytoplasmic free Ca4' oscillations in mouse oocytes. / Y.M. Lawrence, K.S. Cuthbertson // Cell Calcium.-1995.-v.l7.-p. 154-164.

204. Leach, R.E. Development of in vitro fertilized mouse embryos exposed to ethanol during the preimplantation period: accelerated embryogenesis at sub-toxic levels. / R.E. Leach, J. Stachecki, D.R. Armant // Teratology.-1993.-v.47.-p.57-64.

205. Lechleiter, J.D. Molecular mechanisms of intracellular calcium excitability in X. laevis oocytes. / J.D. Lechleiter, D.E. Clapham // Cell.-1992.-v.69.-p. 1-20.

206. Ledda, S. The effect of 6-dimethylaminopurine on DNA synthesis in activated mammalian oocytes. / S. Ledda, P. Loi, J. Jr. Fulka, R.M. Moor // Zygote.-1996.-v.4.-p.7-9.

207. Lee, H.C. Functional visualization of the separate but interacting calcium stores sensitive to NAADP and cyclic ADP-ribose. / H.C. Lee, R. Aarhus // J. Cell Sci.-2000.-v. 113.-p.4413^4420.

208. Lee, H.C. Calcium mobilization by dual receptors during fertilization of sea urchin eggs. / H.C. Lee, R. Aarhus, Т.Е. Walseth // Science.-1993.-v.261.-p.352-355.

209. Lee, J. Tyrosine phosphorylation of p34cdc2 in metaphase II-arrested pig oocytes results in pronucleus formation without chromosome segregation. / J. Lee, K. Hata, T. Miyano, M. Yamashita, Y. Dai, R.M. Moor // Mol. Reprod. Dev.-1999.-v.52.-p. 107-116.

210. Levesque, J.T. Effects of different kinases and phosphatases on nuclear and cytoplasmic maturation of bovine oocytes. / J.T. Levesque, M.A. Sirard // Mol. Reprod. Dev.-1995.-v.42.-p.l 14-21.

211. Levesque, J.T. Resumption of meiosis is initiated by the accumulation of cy-clin В in bovine oocytes. / J.T. Levesque, M.A. Sirard // Biol. Reprod.-1996.-v.55.-p.1427-1436.

212. Lipp, P. Nuclear calcium signalling by individual cytoplasmic calcium puffs. / P. Lipp, D. Thomas, M.J. Berridge, M.D. Bootman // EMBO J.-1997.-V.16.-p.7166-7173.

213. Liu, L. Parthenogenetic development and protein patterns of newly matured bovine oocytes after chemical activation. / L. Liu, J.C. Ju, X. Yang // Mol. Reprod. Dev.-1998.-v.49.-p.298-307.

214. Loi, P. Development of parthenogenetic and cloned ovine embryos effect of activation protocols. / P. Loi, S. Ledda, J. Fulka, Jr.P. Cappai, R.M. Moor // Biology of Reproduction.-1998.-v.58.-p.l 177-1187.

215. Lonergan, P. Bovine oocyte and embryo development following meiotic inhibition with butyrolactone I. / P. Lonergan, A. Dinnyes, T. Fair, X. Yang, M. Boland // Mol. Reprod. Dev.-2000.-v.57.-p.204-209.

216. Lonergan, P. Bovine blastocyst production in vitro after inhibition of oocyte meiotic resumption for 24 h. / P. Lonergan, H. Khatir, C. Carolan, P. Mermil-lod // J. Reprod. Fertil.-1997.-v.l09.-p.355-365.

217. Lorca, T. Calmodulin-dependent protein kinase II mediates inactivation of MPF and CSF upon the fertilization of Xenopus eggs. / T. Lorca, F.H. Cru-zalegui, D. Fesquet, J.C. Cavadore, J. Mery, A. Means, M. Doree // Nature.-1993.-v.6452.-p.270-273.

218. Lu, Q. Activation of protein kinase С induces mitogen-activated protein kinase dephosphorylation and pronucleus formation in rat oocytes. / Q. Lu, G.D. Smith, D.Y. Chen, Z.M. Han, Q.Y. Sun // Biol. Reprod.-2002.-v.67.-p.64-69.

219. Luria, A. Differential localization of conventional protein kinase С isoforms during mouse oocyte development. / A. Luria, Т. Tennenbaum, Q.Y. Sun, S. Rubinstein, H. Breitbart // Biol. Reprod.-2000.-v.62.-p.l564-1570.

220. Machaty, Z. Parthenogenetic activation of porcine oocytes with guanosine-5-0-(3'-thiotriphosphate). / Z. Machaty, M.A. Mayes, R.S. Prather // Biol. Re-prod.-1995.-v.52.-p.753-758.

221. Machity, Z. Complete activation of porcine oocytes induced by the sulfhydryl reagent, thimerosal. / Z. Machity, W. Wang, B.N. Day, R.S. Prather // Biol. Reprod.-1997.-v.57-p. 1123-1127.

222. Mann, J.R. Inviability of parthenogenones is determined by pronuclei, not egg cytoplasm. / J.R. Mann, R. Lovell-Badge // Nature.-1984.-V.319.-p.66-67.

223. Marchant, J. Initiation of IP3-mediated Ca4* waves in Xenopus oocytes. / J. Marchant, N. Callamaras, I. Parker / EMBO J.-1999.-v.l8.-p.5285-5299.

224. Marchant, J. Two calcium-binding sites mediated the interconversion of liver inositol 1,4,5-trisphosphate receptors between three conformational states. / J. Marchant, N. Callamaras, I. Parker // Biochemistry Journal.-1994.-v.301.-p.591-598.

225. Masui, Y. The role of Cytostatic Factor (CSF) in the control of oocyte cell cycles a summary of 20 years of study. // Dev. Growth Differ.-1991.-v.33.-p.543-551.

226. Masui, Y. Cytoplasmic control of nuclear behavior during meiotic maturation of frog oocytes. / Y. Masui, C.L. Markert // J. Exp. Zool.-1971.-v.177.-p.129-145.

227. Mayes, M.A. Parthenogenic activation of pig oocytes by protein kinase Inhibition. / M.A. Mayes, P.L. Stogsdill, R.S. Prather // Biol. Reprod.-1995.-v.53.-p.270-275.

228. McCarty, N.A. Calcium signaling in cell volume regulation. / N.A. McCarty, R.G. O'Neil//Physiol. Rev.-1992.-v.72.-p. 1037-1061.

229. McCarty, N.A. / N.A. McCarty, R.G. O'Neil // J. Membr. Biol.-1991.-v. 123.-p. 149-160.

230. McConnel, J.M. Capacity of mouse oocytes to become activated depends on completion of cytoplasmic but not nuclear meiotic maturation. / J.M. McConnel, L. Campbell, C. Vincent//Zygote.-1995.-v.3.-p.45-55.

231. McCullon D.H. Insemination of rabbit eggs is associated with slow depolarization and repetitive diphasic membrane potentials. / D.H. McCullon, C.E. Rexroad, H. Levitan // Dev. Biol.-1983.-v.95.-p.372-377.

232. McGrath, J. Completion of mouse embryogenesis requires both the maternal and paternal genomes. / J. McGrath, D. Solter // Cell.-1984.-v.37.-p. 179-183.

233. McGrath, J. Nuclear transplantation in the mouse by microsurgery and cell fusion. /J. McGrath, D. Solter// Science.-1983(a).-v.220.-p.l300-1302.

234. McGrath, J. Nuclear transplantation in the mouse embryos. / J. McGrath, D. Solter//J. Exp. Zool.-1983(b).-v.228.-p.355-362.

235. McGuinness, O.M. A direct measurement of increased divalent cation influx in fertilised mouse oocytes. / O.M. McGuinness, R.B. Moreton, M.H. Johnson, M.J. Berridge //Development.-1996.-v.l22.-p.2199-2206.

236. McPherson, P.S. The ryanodine receptor/Ca^ release channel. / P.S. McPher-son, K.P. Campbell // J. Biol. Chem.-1993.-v.268.-p.l3765-13768.

237. McPherson, S.M. Cortical localization of a calcium release channel in sea urchin eggs. / S.M. McPherson, P.S. McPherson, L. Mathews, K.P. Campbell, F.J. Longo // J. Cell Biol.-1992,-v. 116.-p. 1111-1121.

238. Mehlmann, L.M. SH2 domain-mediated activation of phospholipase С is not required to initiate Ca^ release at fertilization of mouse eggs. / L.M. Mehlmann, G. Carpenter, S.G. Rhee, L.A. Jaffe // Developmental Biology. -1998.-v.203.-p.221—232.

239. Meldolesi, J. Pathways of Ca"4" influx at the plasma membrane: voltage, receptor, and second messenger-operated channels. / J. Meldolesi, I. Pozzan // Exp. Cell Res.-197l.-v.271.-p.271-283.

240. Meo, S.C. Activation and early parthenogenesis of bovine oocytes treated with ethanol and strontium. / S.C. Meo, C.L. Leal, J.M. Garcia // Anim. Reprod. Sci.-2004.-v.81(l-2).-p.35-46.

241. Meo, S.C. Use of strontium for bovine oocyte activation. / S.C. Meo, W. Ya-mazaki, CL. Leal, J.A. de Oliveira, J.M. Garcia // Theriogenology.-2005.-v.63(8).-p.2089-2102.

242. Messing, R.O. Protein kinase С participates in up-regulation of dihydropyri-dine-sensitive calcium channels by ethanol. / R.O. Messing, A.B. Sneade, B. Savidge // J. Neurochem.-1990.-v.55.-p.l383-1389.

243. Meszdros, L.G. Cyclic ADP-ribose as an endogenous regulator of the non-skeletal type ryanodine receptor Ca*4" channel. / L.G. Meszdros, J. Bak, A. Chu // Nature.-1993.-v.364.-p.76-79.

244. Mitalipov, S.M. Development of nuclear transfer and parthenogenetic rabbit embryos activated with inositol 1,4,5-trisphosphate. / S.M. Mitalipov, K.L. White, V.R. Farrar, J. Morrey, W.A. Reed // Biol. Reprod.-1999.-v.60.-p.821-827.

245. Mitalipov, S.M. Rhesus monkey embryos produced by nuclear transfer from embryonic blastomeres or somatic cells. / S.M. Mitalipov, R.R. Yeoman, K.D. Nusser, D.P. Wolf//Biol. Reprod.-2002.-v.66.-p. 1367-1373.

246. Miyazaki, S. Cell signalling at fertilization of hamster eggs. // J. Reprod. Fert. Suppl.-1990.-v.42.-p. 163-175.

247. Miyazaki, S. Fertilization potential and calcium transients in mammalian eggs. // Dev Growth & Differ.-1988.-v.l06.-p.345-353.

248. Miyazaki, S. Repetitive calcium transients in hamster oocytes. // Cell Cal-cium.-1991 .-v. 12.-p.205-216.

249. Moore, G.D. Differential effect of activators of protein kinase С on cytoskele-tal changes in mouse and hamster eggs. / G.D. Moore, G.S. Kopf, R.M. Schultz// Dev. Biol.-1995.-v.l70.-p.l9-530.

250. Moos, J. Cycloheximide-induced activation of mouse eggs: effects on cdc2/cyclin В and MAP kinase activities. / J. Moos, G.S. Kopf, R.M. Schultz //J. Cell Sci.-1996.-v.l09.-p.739-748.

251. Moos, J. Potential role of mitogen-activated protein kinase in pronuclear envelope assembly and disassembly following fertilization of mouse eggs. / J.

252. Moos, P.E. Visconti, G.D. Moore, R.M. Schultz, G.S. Kopf// Biol. Reprod.-1995.-v.53.-p.692-699.

253. Moos, J. Regulation of nuclear envelope assembly/disassembly by MAP kinase. / J. Moos, Z. Xu, R.M. Schultz, G.S. Kopf// Dev. Biol.-1996,-v. 175.-p.358-361

254. Moses, R.M. Release of mouse eggs from metaphase arrest by protein synthesis inhibition in the absence of a calcium signal or microtubule assembly. / R.M. Moses, D. Kline //Mol. Reprod. Dev.-1995.-v.41.-p.264-273.

255. Moses, R.M. Enhancement of mouse egg activation by the kinase inhibitor, 6-dimethylaminopurine (6-DMAP). / R.M. Moses, Y. Masui // J. Exp. Zool.-1994, l.-v.270(2).-p.211-218.

256. Motlik, J. Two sensitivity levels of cattle oocytes to puromycin. / J. Motlik, B. Lie, Y. Shioya // Biol. Reprod.- 1990.-v.43.-p.994-998.

257. Motlik, J. Interplay between CDC2 kinase and MAP kinase pathway during maturation of mammalian oocytes. / J. Motlik, A. Pavlok, M. Kubelka, J. Ka-lous, P. Kalab // Theriogenology.-1998.-v.49.-p.461-469.

258. Munsie, M. Novel method for demonstrating nuclear contribution in mouse nuclear transfer. / M. Munsie, T. Peura, A. Michalska, A. Trounson, and P. Mountford//Reprod. Fertil. Dev.-1998.-v.l0.-p.633-637.

259. Nagai, T. Development of bovine in vitro matured follicular oocytes activated with ethanol. // Theriogenology.-1992.-v.37.-p.869-875.

260. Nagai, T. Parthenogenetic activation of cattle follicular oocytes in vitro with ethanol. // Gamete Res.-1987.-v.l6.-p.243-249.

261. Naito, K. Association of p34cdc2 and cyclin B1 during meiotic maturation in porcine oocytes. / K. Naito, C. Hawkins, M. Yamashita, Y. Nagahama, F. Aoki., K. Kohmoto, Y. Toyoda, R.M. Moor // Dev. Biol.-1995.-v.168.-p.627-634.

262. Neant, I. Meiosis reinitiation in the mollusk Patella vulgata. Regulation of MPF, CSF and chromosome condensation activity by intracellular pH, protein synthesis and phosphorylation. / I. Neant, P. Guerrier // Development.-1988.-v.l02.-p.505-516.

263. Nicotera, P. Calcium-mediated mechanisms in chemically induced cell death. / P. Nicotera, G. Bellomo, S. Orrenius // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.-1992.-v.32.-p.449-470.

264. Nishizuka, Y. The role of protein kinase С in cell surface transduction and tumor promotion. //Nature.-1984.-v.308.-p.693-698.

265. Nixon, V.L. Ca++ oscillations and the cell cycle at fertilization of mammalian and ascidian eggs. / V.L. Nixon, A. McDougall, K.T. Jones // Biology of the Cell.-2000.-v.92.-p. 187-196.

266. Norbury, C. Animal cell cycles and their control. / C. Norbury, P. Nurse // Annu. Rev. Biochem.-1992.-v.61.-p.441-470.

267. Nurse, P. Universal control mechanism regulating onset of M-phase. // Na-ture.-1990.-v.344.-p.503-508.

268. O'Neill, G. Cytogenetic analysis of ethanol-induced parthenogenesis. / G. O'Neill, M. Kaufman // Journal of Experimental Zoology.-1989.-v.249.-p.l 82-192.

269. O'Neill, G.T. Developmental potential and chromosome constitution of strontium-induced mouse parthenogenones. / G.T. O'Neill, L.R. Rolfe, M.H. Kaufman //Mol. Reprod. Dev.-1991.-v.30.-p.214-219.

270. O'Neill, W.C. Physiological significance of volume-regulatory transporters. // Am. J. Physiol. Cell Physiol.- 1999.-v.276.-p.C995-C 1011.

271. Onishi, A. Pig cloning by microinjection of fetal fibroblast nuclei. / A. Onishi, M. Iwamoto, T. Akita, S. Mikawa, K. Takeda, T. Awata, H. Hanada, A.C.F. Perry // Science.-2002.-v.289.-p. 1188-1190.

272. Onodera, M. Parthenogenetic activation of mouse and rabbit eggs by electric stimulation in vitro. / M. Onodera, Y. Tsunoda // Gamete Research.-1989.-v.22.-p.277-283.

273. Otaegui, P.J. Parthenogenetic activation of mouse oocyte by exposure to SrCL as a source of cytoblasts for nuclear transfer. / P.J. Otaegui, G.T. O'Neill, I. Wilmut // Cloning.-1999,-v. 1 .-p. 111-117.

274. Overstrom, E.W. In vitro assessment of embryo viability. Theriogenology. 1996.-v.45.-p.3-16.308.0zil, J.P. The parthenogenetic development of rabbit oocytes after repetitive pulsatile electrical stimulation. //Development.-1990.-v.109.-p. 117-127.

275. Ozil, J.P. Activation of rabbit oocytes: the impact of the Ca4"4" signal regime on development. / J.P. Ozil, D. Huneau // Development.-2001.-v.l28.-p.917-928.

276. Patel, S. Molecular properties of inositol 1,4,5-trisphosphate receptors. / S. Patel, S.K. Joseph, A.P. Thomas // Cell Calcium.-1999.-v.25.-p.247-264.

277. Pepperell, J.R. The type 1 angiotensin-II receptor mediates intracellular calcium mobilization in rat luteal cells. / J.R. Pepperell, G. Nemeth, Y. Yamada, F. Naftolin // Endocrinology.-1993 .-v. 133 .-p. 1678-1684.

278. Perlman, D.F. Organic osmolyte channels in cell volume regulation in vertebrates. /D.F. Perlman, L. Goldstein//J. Exp. Zool.-1999.-v.283.-p.725-733.

279. Pincus, Further studies on the parthenogenetic activation of rabbit eggs. / G. Pincus, H. Shapiro //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1940.-v.26.-p. 163-165.

280. Pinto-Correia, С. Chromatin and microtubule organization in the first cell cy- . cle in rabbit parthenotes and nuclear transplant embryos. / C. Pinto-Correia, P. Collas, F. Able Ponce De Leon, J.M. Robl // Mol. Reprod. Dev.-1993.-v.34.-p.33-42.

281. Poenie, M. Changes of free calcium levels with stages of the cell division cycle. / M. Poenie, J. Alderton, R.Y. Tsien, R.A. Steinhardt // Nature.-1985.-v.315.-p.l47-149.

282. Prather, R.S. M.M. Sims, N.L. First Nuclear transplantation in early pig embryos. / R.S. Prather, M.M. Sims, N.L. First // Biol. Reprod.-1989.-v.41.-p.414-418.

283. Prather, R.S. Nuclear transplantation in the bovine embiyo: assessment of donor nuclei and recipient oocyte. / R.S. Prather, F.L. Barnes, M.M. Sims, J.M. Robl, W.H. Eyestone, N.L First. // Biol. Reprod.-1987.-v.37.-p.859-866.

284. Pratt, H. Lipids and transitions in embryos. // In Development in Mammals (ed. Johnson, M.H.) Elsevier, Amsterdam.-1978.-p.83-130.

285. Presicce, G.A. Parthenogenetic development of bovine oocytes matured in vitro for 24h and activated by ethanol and cycloheximide. / G.A. Presicce, X. Yang // Mol. Reprod. Dev.-1994(b).-v.38.-p.380-385.

286. Prochazka, R. Development of pronuclei in pig oocytes activated by a single electric pulse. / R. Prochazka, J. Kanka, P. Sutovsky, J. Fulka, J. Motlik // Journal of Reproduction and Fertility.-1992.-v.96.-p.725-734.

287. Putney, J.W.Jr. A model for receptor-regulated calcium entry. // Cell Cal-cium.-1986.-v.7.-p.l-12.

288. Putney, J.W.Jr. Capacitative calcium entry revisited. // Cell Calcium.-1990.-v.ll.-p.611-624.

289. Ragette, R. Barrier effects of hyperosmolar signaling in microvascular endothelium of rat lung. / R. Ragette, C. Fu, J. Bhattacharya // J. Clin. Invest.-1997.-v.l00.-p.685-692.

290. Rakow, T.I. Multiple stores of calcium are released in the sea urchin egg during fertilization. / T.I. Rakow, S.S. Shen // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1990.-v.87.-p.9285-9289.

291. Rana, R.S. Role of phosphoinositides in transmembrane signalling. / R.S. Rana, L.E. Hokin//Physiological Reviews.-1990.-v.70.-p.l 15-164.

292. Rickords, L.F. Effect of the protein kinase С inhibitor staurosporine on oocyte activation of in vitro matured oocytes. / L.F. Rickords, M.S. Peters, T. Stumpf //Biol. Reprod.-1992.-46(suppl l).-p.82 (abstract 124).

293. Rickords, L.F. Electrofusion-induced intracellular Ca** flux and its effect on murine oocyte activation. / L.F. Rickords, K.L. White // Mol. Reprod. Dev.-1992.-V.31 .-p. 152-159.

294. Rime, H. 6-Dimethylaminopurine (6-DMAP), a reversible inhibitor of the transition to metaphase during the first meiotic cell division of the mouse oocyte. / H. Rime, I. Neant, P. Guerrier, R. Ozon // Dev. Biol.-1989.-v.133.-p. 169-179.

295. Robl, J.M. Nuclear transplantation in bovine embryos. / J.M. Robl, R. Prather, F. Barnes, W. Eyestone, D. Northey, B. Gilligan, N.L. First // J. Anim. Sci.-1987.-v.64.-p.642-647.

296. Rossignol, D.P. Induction of calcium-dependent, localized cortical granule breakdown in sea-urchin eggs by voltage pulsation. / D.P. Rossignol, G.L. Decker, W.J. Lennarz, T.Y. Tsong, J. Teissie // Biochim. biophys. Ada.-1983.-v.763.-p.346-355.

297. Rothstein, A. Volume-activated K+ and CI- pathways of dissociated epithelial cells (MDCK): role of Ca44". / A. Rothstein, E. Mack // Am. J. Physiol.-1990.-v.258.-p.C827-C834.

298. Rubin, R. Ethanol-induced stimulation of phosphoinositide turnover and calcium influx in isolated hepatocytes. / R. Rubin, J.B. Hoek // Biochem. Pharmacol." 1988.-v.37.-p.2461-2466.

299. Russel, A.F.J. Subjective assessment of body fat in live sheep. / A.F.J. Russel, J.M. Doney, R.J. Gunn // J. Agric. Sci.-1969.-v.72.-p.451-454.

300. Saeki, K. Developmental capacity of bovine oocytes following inhibition of meiotic resumption by cycloheximide or 6 dimethylaminopurine. / K. Saeki, Y. Nagao, M. Kishi, M. Nagai // Theriogenology.-1997.-v.48.-p.l 161-1172.

301. Sagata, N. The c-mos proto-oncogene product is a cytostatic factor responsible for meiotic arrest in vertebrate eggs. / N. Sagata, N. Watanabe, G.F. Van de Woude, Y. Ikawa // Nature.-1989.-v.342.-p.512-518.

302. Schliess, F. Calcium-dependent activation of Erk-1 and Erk-2 after hypo-osmotic astrocyte swelling. / F. Schliess, R. Sinning, R. Fischer, C. Schmalenbach, D. Haussinger//Biochem. J.- 1996.-320(Pt. 1).-р.167-171.

303. Schmidt, Т. Is there a role for the Ca*4" influx during fertilization of the sea urchin egg? / T. Schmidt, C. Patton, D. Epel // Dev. Biol.-1982.-v.90.-p.284-290.

304. Schuetz, A.W. Alterations in the cell cycle of mouse cumulus granulosa cells during expansion and muciflcation in vivo and in vitro. / A.W. Schu-etz, D.G. Whittingham, R. Snowden // Reprod. Fertil. Dev.-1996.-v.8.-p.935-943.

305. Schultz, R.M. Molecular basis of mammalian egg activation. / R.M. Schultz,

306. G.S. Kopf // «Current Topics in Dev. Biol.».-Vol 30. New York: Academic Press.-1995.-p.21-62.

307. Shaw, J.M. Parthenogenetic activation of unfertilized mouse oocytes by exposure to 1,2-propanediol is influenced by temperature, oocyte age, and cumulus removal. / J.M. Shaw, A.O Trounson. // Gamete Res.-1989.-v.24.-p.269-279.

308. Shi, Z. Synergistic effect of A23187 and cycloheximide allows effective activation of freshly matured bovine oocytes. / Z. Shi, S. Jiang, X. Yang // Theriogenology.-l993.-v.39.-p.303 (Abstract).

309. Shiina, Y. Role of the extracellular Ca4"4" on the intracellular Ca"^ changes in fertilized and activated mouse oocytes. / Y. Shiina, M. Kaneda, K. Ma-tsuyama, К. Tanaka, M. Hiroi, K. Doi // J. Reprod. Fertil.-1993.-v.97.-p.143-150.

310. Shiraishi, K. Developmental changes in the distribution of the endoplasmic reticulum and inositol 1,4,5-trisphosphate receptors and the spatial pattern of Ca44" release during maturation of hamster oocytes. / K. Shiraishi, A. Okada,

311. H. Shirakawa, S. Nakanishi, M. Mikoshiba, S. Miyazaki // Dev. Biol.-1995.-v.l70.-p.594-606.

312. Simili, M. 6-DMAP inhibition of early cell cycle events and induction of mitotic abnormalities. / M. Simili, P. Pellerano, S. Pigullo, G. Tavosanis, L. Ot-taggio, L. Saint-Georges // Mutagenesis.-1997.-v.12.-p.313-319.

313. Simon, M. Effect of cycloheximide upon maturation of bovine oocytes. / M. Simon, F. Jilek, J., Jr. Fulka // Reprod. Nutr. Dev.-1989.-v.29.-p.533-540.

314. Sims, M. Production of calves by transfer of nuclei from cultured inner cell mass cells. / M. Sims, N.L. First // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1994, 91.-p.6143-6147.

315. Sirard, M.A. In vitro inhibition of oocyte nuclear maturation in the bovine. / M.A. Sirard, N.L. First // Biol. Reprod.-1988.-v.39.-p.229-34.

316. Sirard, M.A. Timing of nuclear progression and protein synthesis necessary for meiotic maturation of bovine oocytes. / M.A. Sirard, H.M. Florman, M.L. Leibfried-Rutledge, F.L. Barnes, M.L. Sims, N.L. First // Biol. Reprod.-1989.-v.40.-p. 1257-1263.

317. Smith, L.C. Influence of nuclear and cytoplasmic activity on development in vivo of sheep embryos after nuclear transplantation. / L.C. Smith, I. Wilmut // Biol. Reprod.-1989.-v.40.-p. 1027-1035.

318. Smith, L.C. Membrane and intracellular effects of ultraviolet irradiation with Hoechst 33342 on bovine secondary oocytes matured in vitro. // J. Reprod. Fertil.-1993-v.99.-p.39-44.

319. Soloy, E. Time course of pronuclear deoxyribonucleic acid synthesis in parthenogenetically activated bovine oocytes. / E. Soloy, J. Kanka, D. Viuff, S.D. Smith, H. Callesen, T. Greve // Biol. Reprod.-1997.-v.57.-p.27-35.

320. Speksnijder, J.E. Free calcium pulses following fertilization in the ascidian egg. / J.E. Speksnijder, D.W. Corson, C. Sardet, L.F. Jaffe // Dev. Biol.-1989.-V.135.-p.l82-190.

321. Stachecki, J.J. Transient release of calcium from inositol 1,4,5 trisphosphate-specific stores regulates mouse preimplantation development. / J.J. Stachecki, D.R. Armant // Development.-1996.-v.l22.-p.2485-2496.

322. Steinhardt, R. Intracellular calcium release at fertilization in the sea urchin egg. / R. Steinhardt, R. Zucker, G. Schatten // Dev. Biol.-1977.-v.58.-p.185-196.

323. Steinhardt, R.A. Activation of sea-urchin eggs by a calcium ionophore. / R.A. Steinhardt, D. Epel //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1974.-v.71.-p.l915-1919.

324. Steinhardt, R.A. Is calcium ionophore a universal activator for unfertilized eggs? / R.A. Steinhardt, D. Epel, E.J. Carroll, R. Yanagimachi // Nature.-1974.-252.-p.41 -43.

325. Stice, S.L. Nuclear reprogramming in nuclear transplant rabbit embryos. / S.L. Stice, J.M. Robl // Biol. Reprod.-1988.-v.39.-p.657-664.

326. Stice, S.L. Pluripotent bovine embryonic cell lines direct embryonic development following nuclear transfer. / S.L. Stice, N.S. Strelchenko, C.L. Keefer, L. Matthews // Biol. Reprod.-1996.-v.54.-p. 100-110.

327. Stice, S.L. Multiple generation bovine embryo cloning. / S.L. Stice, C.L. Keefer // Biol. Reprod.-1993 .-v.48.-p.715-719.

328. Stojilkovic, S.S. Endothelin stimulation of cytosolic calcium and gonadotropin secretion in anterior pituitary cells. / S.S. Stojilkovic, F. Merelli, T. Iida, L.Z. Krsmanovic, K.J. Catt // Science.-1990.-v.248.-p. 1663-1666.

329. Stojkovic, M. Parthenogenetic development of bovine oocytes activated by different methods. / M. Stojkovic, V. Zakhartchenko, G. Brem, E. Wolf // Theriogenology.-1997.-v.47.-p.212.

330. Streb, H. Release of Ca4^ from a nonmitochondrial intracellular store in pancreatic acinar cells by inositol-1,4,5 trisphosphate. / H. Streb, R.F. Irvine, M.J. Berridge, I. Schultz //Nature.-1983.-v.306.-p.67-69.

331. Strieker, S.A. Time-lapse confocal imaging of calcium dynamics in starfish embryos. //Dev. Biol.-1995.-v.l70.-p.496-518.

332. Sun, F.Z. Nuclear-cytoplasmic interactions during oocyte maturation and early embryogenesis in sheep. // PhD thesis Cambridge University, UK.-1989.

333. Sun, F.Z. A comparison of intracellular changes in porcine eggs after fertilization and electroactivation. / F.Z. Sun, J. Hoyland, X. Huang, W. Mason, R.M. Moor // Development.-1992,-v. 115.-p.947-956.

334. Sun, Q.Y. MAP kinase activity is downregulated by phorbol ester during mouse oocyte maturation and egg activation in vitro. / Q.Y. Sun, S. Rubinstein, H. Breitbart // Mol. Reprod. Dev.-1999.-v.52.-p.310-318.

335. Surani, M.A.H. Development of reconstituted mouse eggs suggests imprinting of the genome during gametogenesis. / M.A.H. Surani, S.C. Barton, M.L. Norris // Nature.-1984.-v.308.-p.548-550.

336. Suzuki, M. Kawahara K., Ogawa A., Morita Т., Kawagushi Y., Kurihara S., Sakai O. // Am. J. Physiol.-1990.-v.258.-p.F690-F696.

337. Swann, K. A cytosolic sperm factor stimulates repetitive calcium increases and mimics fertilization in hamster eggs. // Development.-1990.-110.-p. 12951302.

338. Swann, K. Different triggers for calcium oscillations in mouse eggs involve a ryanodine-sensitive calcium store. //Biochem. J.-1992.-v.287.-p.79-84.

339. Swann, K. Stimulation of the Na/H exchanger of sea urchin eggs by phorbol ester. /К. Swann, M. Whitaker//Nature.-1985.-v.314.-p.274-277.

340. Swann, K. The part played by inositol trisphosphate and calcium in the propagation of the fertilization wave in sea urchin eggs. / K. Swann, M. Whitaker // J. Cell Biol.-1986.-v.l03.-p.2333-2342.

341. Swann, K. Second messengers at fertilization in sea-urchin eggs. / K. Swann, M. Whitaker//J. Reprod. Fert.-1990.-42 (suppl.).-p.l41-153.

342. Takahashi, S. Parthenogenetic activation and development of bovine oocytes treated with protein synthesis or protein phosphorylation inhibitors. / S. Takahashi, С. Kubota, Y. Ogata, T. Takunaga, H. Imai // Theriogenology.-1996.-v.45.-p.l56.

343. Tang, T.S. Са^ oscillations induced by a cytosolic sperm protein factor are mediated by a maternal machinery that functions only once in mammalian eggs. / T.S. Tang, J.B. Dong, X.Y. Huang, F.Z. Sun // Development.-2000.-v.l27.-p.l 141-1150.

344. Tarkowski, A.K. Experimental parthenogenesis in the mouse. / A.K. Tarkowski, A. Witkowska, J. Nowicka //Nature.-1970.-v.226.-p. 162-165.

345. Tatemoto, H. Effects of cycloheximide on chromatin condensations and germinal vesicle breakdown (GVBD) of cumulus-enclosed and denuded oocytes in cattle. / H. Tatemoto, T. Horiuchi, T. Terada // Theriogenology.-1994.-v.42.-p.l 141-1148.

346. Tatemoto, H. Time-dependent effects of cycloheximide and alpha-amanitin on meiotic resumption and progression in bovine follicular oocytes. / H. Tatemoto, T. Terada // Theriogenology.-1995.-v.43 .-p. 1107-1113.

347. Tateno, H. Parthenogenetic activation of Chinese hamster oocytes by chemical stimuli and its cytogenetic evaluation. / H. Tateno, Y. Kamiguchi // Molecular Reproduction and Development.-1997.-v.47.-p.72—78.

348. Tawia, S.A. The fertilization and development of mouse oocytes following cortical granule discharge in the presence of a protease inhibitor. / S.A. Tawia, A. Lopata// Hum. Reprod.-1992.-v.7.-p.l004-1009.

349. Taylor, C.T. Oscillations in intracellular free calcium induced by spermatozoa in human oocytes at fertilization. / C.T. Taylor, Y.M. Lawrence, C.R. Kings-land, M.M. Biljan, K.S. Cuthbertson // Hum. Reprod.-1993.-v.8.-p.2174-2179.

350. Terasaki, M. Organization of the sea urchin egg endoplasmic reticulum and its reorganization at fertilization. / M. Terasaki, L.A. Jaffe // J. Cell Biol.-1991.-v.ll4.-p.929-940.

351. Tesarik, J. Most living acrosome-reacted spermatozoa do not fuse with the oocyte when inserted into the perivitelline space. / J. Tesarik, C. Mendoza // Fertil. Steril.- 1994.-v.61.-p.529-535.

352. Thibault, C. The mammalian egg, its parthenogenetic development. // Ani. Sci. Nat.-1949.-v.ll.-p.l33-219.

353. Thorn, P. Cyclic ADP-ribose regulation of ruination receptors involved in agonist-evoked cytosolic Ca"14" oscillation in pancreatic acinar cells. / P. Thorn, O. Gerasimenko, O.H. Petersen //EMBO J.-1994.-v.l3.-p.2038-2043.

354. Tinel H., Wehner F., Sauer H. // Am. J. Physiol.-1994.-v.267.-p.F130-F138.

355. Tomashov, M.R. Strontium-induced rat egg activation. / M.R. Tomashov, D. Tchetchik, A. Eldar, R. Kaplan-Kraicer, Y. Oron, R. Shalgi // Reproduction.-2005.-v.l30.-p.467-474.

356. Tsien, R.W. Calcium channels, stores and oscillations. / R.W. Tsien, R.Y. Tsien // Annu. Rev. Cell Biol.-1990.-v.6.-p.715-760.

357. Tsunoda, Y. Differential sensitivity of mouse pronuclei and zygote cytoplasm to Hoescht staining and ultraviolet irradiation. / Y. Tsunoda, Y. Shioda, M. Onodera, K. Nakamura, T. Uchida// J. Reprod. Fertil.-1988.-v.82.-p.l73-177.

358. Van Blerkom, J. Structural relationship and posttranslational modification of stage-specific proteins synthesized during preimplantation development in the mouse. //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1981.-v.78.-p.7629-7633.

359. Vasquez, D. Inhibitors of protein synthesis.// FEBS Lett.-1974.-v.40.-p.63~64.

360. Verkman, A.S. Water transport across mammalian cell membranes. / A.S. Verkman, A.N. van Hoek, T. Ma, A. Frigeri, W.R. Skach, A. Mitra, B.K. Tamarappoo, J. Farinas // Am. J. Physiol. Cell Physiol.-1996.-v.270.-p.C 12-C30.

361. Verlhac, M.H. Microtubule and chromatin behavior follow MAP kinase activity but not MPF activity during meiosis in mouse oocytes. / M.H. Verlhac, J.Z. Kubiak, H.J. Clarke, B. Maro //Development.-1994.-v.120.-p. 1017-1025

362. Vincent, C. Cell cycle progression of parthenogenetically activated mouse oocytes to interphase is dependent on the level of internal calcium. / C. Vincent, T.R. Cheek, M.H. Johnson // J. Cell Sci.-1992.-v.l03.-p.389-396.

363. Vitullo, A.D. Repetitive calcium stimuli drive meiotic resumption and pronu-clear development during mouse oocyte activation. / A.D. Vitullo, J.P. Ozil // Dev. Biol.-1992.-v.l51.-p.l28-136.

364. Wafford, K.A. Calcium-dependent chloride currents elicited by injection of ethanol into Xenopus oocytes. / K.A. Wafford, Т.V. Dunwiddie, R.A. Harris // Brain Research.-1989.-v.505.-p.215-219.

365. Wakayama, T. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. / T. Wakayama, A.C. Perry, M. Zuccotti, K.R. Johnson, R. Yanagimachi //Nature.-1998.-v.394.-p.369-374.

366. Wakayama, T. Yanagimachi R. Mouse cloning with nucleus donor cells of different age and type. / T. Wakayama, R. Yanagimachi // Mol. Reprod. Dev.-2001.-v.58.-p.376-383.

367. Wakayama, T. Nuclear transfer into mouse zygotes. / T. Wakayama, H. Tat-eno, P. Mombaerts, R. Yanagimachi //Nat. Genet.-2000.-v.24-p. 108-109.

368. Waldegger, S. Mechanisms and clinical significance of cell volume regulation. / S. Waldegger, S. Steuer, T. Risler, A. Heidland, G. Capasso, S. Massry, F. Lang//Nephrol. Dial. Transplant.-1998.-V. 13.-p.867-874.

369. Warskulat, U. Compatible organic osmolytes and osmotic modulation of inducible nitric oxide synthetase in RAW 264.7 mouse macrophages. / U. Warskulat, F. Schliess, D. Haussinger // Biol. Chem.-1998.-v.379.-p.867-874.

370. Wassarman, P.M. Zona pellucida glycoproteins. // Ann. Rev. Biochem.-1988.-v.57.-p.414-442.

371. Watanabe, N. Independent inactivation of MPF and cytostatic factor (Mos) upon fertilization of Xenopus eggs. / N. Watanabe, T. Hunt, Y. Ikawa, N. Sagata//Nature.-1991.-v.352.-p.247-248.

372. Webb, D.J. Direct measurement of intracellular pH changes in Xenopus eggs at fertilization and cleavage. / D.J. Webb, R. Nuccitelli // J. Cell Biol.-1981.-v.91.-p.562-567.

373. Weber M., Kubiak J.Z., Arlinghaus R.B., Pines J., Maro B. c-mos proto-oncogene product is partly degraded after release from meiotic arrest and persists during interphase in mouse zygotes. // Dev. Biol.-1991.-v.148.-p.393-397.

374. Whalley Т., McDougall A., Crossley I., Swann K., Whitaker M. Internal calcium release and activation of sea urchin eggs by cGMP are independent of the phosphoinositide signaling pathway. // Mol. Biol. Cell.-1992.-v.3.-p.373-383.

375. Whitaker M. Phosphoinositide second messages in eggs and oocytes. // In Inositol Lipids in Cell Signalling (ed. R.H. Michell, A.H. Druramond and C.P. Downes) London: Academic Press.-1989.-p.459-483.

376. Whitaker, M. Inositol 1,4,5-triphosphate microinjection activates sea urchin eggs. / M. Whitaker, R.E Irvine // Nature.-1984.-v.342.-p.636-639.

377. Whitaker, M. Lighting the fuse at fertilization. / M. Whitaker, K. Swann // Development.-1993117.-p .1 -12.

378. Whitaker, M.J. Calcium and cell cycle control. / M.J. Whitaker, R. Patel // Development.-1990.-v.l08.-p.525-542.

379. Whittingham, D.G. Parthenogenesis in mammals. // Oxford Rev. Repr. Biol./Ed. C. A. Finn. 0xford.-1980.-v.2.-p.205-231.

380. Whittingham, D.G. The involvement of calcium. / D.G. Whittingham, G. Siracusa // Oxford Rev. Repr. Biol.- 1978.-p.321-335.

381. Willadsen, S.M. Cloning of sheep and cow embryos. // Genome.-1989.-v.31.-p.956-962.

382. Willadsen, S.M. Nuclear transplantation in sheep embryos. // Nature.-1986.-v.320.-p.63-65.

383. Willadsen, S.M. A method for culture of micromanipulated sheep embryos and its use to produce monozygotic twins. // Nature.-1979.-v.277.-p.298-300.

384. Wilmut, I. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cell. / I. Wilmut, A.E. Schnieke, J. McWhir, A.J. Kind, K.H.S. Campbell // Nature.-1997.-V.3 85.-p.810-81

385. Winston, N.J. The exit of mouse oocytes from meiotic M-phase requires an intact spindle during intracellular calcium release. / N.J. Winston, O.

386. McGuinness, M.H. Johnson, В. Maro // Journal of Cell Science.-1995.-v.l 08.-p.143-151.

387. Winterberger-Torres, S. Atlas of the early development of the sheep embryo. / S. Winterberger-Torres, C. Sevellec // Paris: Institut National de la Recherche Agronomique.- 1987.-p.l0-15.

388. Witkowska, A. Parthenogenetic development of mouse embryos in vivo. I. Preimplantation development. // J. Embryol. Exp. Morph.-1973.-v.30.-p.519-545.

389. Wolf, D.P. The cortical response in Xenopus laevis ova. // Dev. Biol.-1974.-v.40.-p.l02-115.

390. Wu, B. Nuclear, spindle and molecular events of parthenogenetic activation of bovine oocytes. / B. Wu, L. Liu, S.P. Leibo, X. Yang // Biol. Reprod., 1998 (in pess).

391. Wu X., Yang H., Iserovich P., Fischbach J., Reinach P.S.J. // J. Membr. Biol.-1997,-v. 158.-p. 127-136.

392. Xu, Z. Involvement of 1,4,5- inositol trisphosphate-mediated Ca4"4" release in early and late events of mouse egg activation. / Z. Xu, G.S. Kopf, R.M. Schultz // Development.-1994,-v. 120.-p. 1851-1859.

393. Yanagimachi, R. Mammalian fertilization. // In: Knobil E, Neill JD (eds.). The Physiology of Reproduction, New York: Raven Press, Ltd.-1994.-p.261-268.

394. Yang, X. Synergistic effect of ethanol and cycloheximide on activation of freshly matured bovine oocytes. / X. Yang, G.A. Presicce, L. Moraghan, S. Jiang, RH. Foote // Theriogenology.-1994.-V.41 .-p.395-403.

395. Yue, C. The existence of inositol 1,4,5 trisphosphate and ryanodine receptors in mature bovine oocytes. / C. Yue, K.L. White, W.A. Reed, T.D. Bunch // Development.-1995 .-v. 121 .-p.2645-2654.

396. Zernicka-Goetz, M. Spontaneous and induced activation of rat oocytes. // Mol. Reprod. Dev.-1991.-v.28.-p. 169-176.

397. Zhang, X. Release of tissue-type plasminogen activator by activated rat eggs and its possible role in the zona reaction. / X. Zhang, J. Rutledge, F. Khamsi, D.T. Armstrong//Mol. Reprod. Dev.-1992.-v.32.-p.28-32.

398. Zimmermann, V. Electric field-induced cell-to-cell fusion. / V. Zimmermann, J. Vienken // J. Membrane Biol.-1982.-v.67.-p.l65-182.

Информация о работе

Алгулян, Армен Сергеевич
кандидата биологических наук
Боровск, 2008
ВАК 03.00.23

Диссертация

Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы