Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка жидкой питательной среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка жидкой питательной среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им МВ ЛОМОНОСОВА БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи

ПАНАСОВЕЦ ОЛЬГА ПЕТРОВНА

РАЗРАБОТКА ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ НАКОПЛЕНИЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ

03 00 07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ООЗ 1БЗ шс

Москва - 2007

003163107

Работа выполнена в лаборатории санитарно-микробиологических, вирусологических методов исследования и экологической экспертизы ФГУН «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитоло1 ии» Роспотребнадзора и на кафедре микробиологии МГУ им М В Ломоносова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация: ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им А Н Сысина РАМН, г Москва

Защита состоится «13 » ноября 2007 года в 15 ч 30 мин на заседании Диссертационного совета Д 501 001 21 при Московском государственном университете им М В Ломоносова по адресу 119992, г Москва Ленинские горы, д 1, корп 12, биологический факультет Московского государственного университета им М В Ломоносова, аудитория 3 А

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ им В М Ломоносова

Автореферат разослан « 12 » октября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

Нетрусов Александр Иванович (03 00 07 - микробиология) Консультант: кандидат медицинских наук

Алешня Валентина Валентиновна (14 00 07 - гигиена)

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук доктор биологических наук

Ножевникова Алла Николаевна

Ушакова Нина Александровна

кандидат биологических наук

НФ Пискункова

ОБЩЕЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Актуальность проблемы Вопрос обеспечения рационального использования и охраны природных ресурсов страны постоянно находится в центре внимания правительства РФ Важным шагом в этом направлении явилось принятие в 1999 г закона «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (№ 52 - ФЗ от 30 03 1999) Федеральный закон направлен на обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия населения как одного из основных условий реализации конституционных прав граждан на охрану здоровья В законе также предусмотрены санитарно-эпидемиологические требования к охране окружающей среды, несоблюдение которых может создать угрозу возникновения и распространение заболеваний, в том числе инфекционных Несмотря на все меры, направленные на борьбу с инфекционными болезнями, ежегодно регистрируются все новые вспышки инфекций, имеющие несомненный водный характер, вызываемые бактериями рода Salmonella (Онищенко, 2000, Parker et al, 2001, Гуменюк и др , 2002, Ковалев и др, 2002)

Данные микроорганизмы обладают выраженной биологической пластичностью, позволяющей им адаптироваться и существовать в различных экологических ситуациях Ряд исследователей показали, что сальмонеллы могут длительное время переживать в водной среде При этом они способны не только выживать, но и сохранять свои биохимические характеристики и патогенные свойства (Chipperfield, 1974, Карцев и др , 1975, Добрянская и др , 1979, Гума и др , 1988) Кроме того они обладают способностью размножаться в водных объектах Особенно это качество проявляется в воде загрязненной органическими соединениями (Гречаная, Ситков, 1975, Багдасарьян и др, 1980, Соловых и др, 1998, Di Pietro et al, 2000) В стрессовых условиях (понижение или повышение температуры относительно оптимума, воздействие химических веществ, нехватка питательных веществ и др) сальмонеллы могут переходить в состояние некультивируемости, сохраняя при эюм свои биологические свойства, в том числе и патогенный потенциал (Четина и др , 1992, Гинсбург, Романова, 1997, Литвин и др, 2004, Бухарин и др, 2005), что снижает достоверность оценки уровня загрязнения сальмонеллами водных объектов Снижение заболеваемости

населения, сальмонеллезами, связанными с водным фактором, является проблемой, решение которой во многом зависит от своевременных профилактических мер на основе оценки качества воды с помощью качественных сред и современных методов исследования В течение нескольких десятилетий в практике здравоохранения РФ применяются магниевая и селенитовая среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов, которые недостаточно эффективны По данным исследователей, с помощью этих сред выделяется лишь 40 - 60 % сальмонелл, находящихся в исследуемом объекте (Калина, 1978, Головина и др, 1997), так как вещества-ингибиторы, входящие в состав вышеуказанных сред, подавляют рост не только сопутствующей микробиоты, но и некоторых сероваров сальмонелл В действующих нормативных документах (МУК 4 2 1884 - 04), при оценке загрязнения сальмонеллами водных объектов, рекомендуют применять сразу две среды накопления магниевую и селенитовую Поскольку эти среды имеют разную чувствительность, это приводит к несопоставимости результатов исследования, снижению эффективности метода, невозможности проведения достоверной оценки эпидемической опасности воды

Цель и задачи исследования Целью нашего исследования явилась разработка и обоснование возможности использования новой среды накопления для повышения эффективности выделения сальмонелл, в том числе и некультивируемых форм, из водных объектов различной степени бактериального загрязнения Для достижения цели были поставлены следующие задачи

1 В экспериментальных условиях подобрать минеральный состав новой среды, факторы роста, ингибирующие вещества для конкурирующих видов микроорг анизмов, рН

2 В экспериментальных условиях проверить способность новой питательной среды к возможности размножения в ней сальмонелл и торможению роста возможной сопутствующей микробиоты Сравнить новую среду с наиболее используемыми в настоящее время средами накопления

3 Показать возможность применения новой среды накопления для выделения некультивируемых форм сальмонелл из водных объектов

4 Разработать методические приемы, позволяющие проводить исследования на наличие сальмонелл с высокой степенью достоверности результата

5 В полевых условиях с использованием новой питательной среды и разработанными методическими приемами провести исследования проб воды, взятых в биотопах с различной степенью биологического загрязнения, в сравнении со средами общепринятыми в практике здравоохранения

Научная новизна работы

- Разработана новая жидкая среда накопления для выделения сальмонелл из водных объектов, превосходящая по чувствительности и эффективности накопления аналоги, используемые в настоящее время в практике здравоохранения РФ Защищена патентом (решение о выдаче № 2006115322/13 от 11 04 2007 г)

- Показана эффективность применения новой среды для реверсии некультивируемых форм сальмонелл, что позволяет повысить достоверность оценки загрязнения сальмонеллами водных объектов

Научно-практическая значимость Материалы диссертации использованы при подготовке аналитических справок

- «Об экологическом мониторинге за санитарно-показательными, потенциально патогенными и патогенными микроорганизмами в водных объектах Юга Российской Федерации» (письмо Федеральной службы Роспотребнадзора

№ 0100/2723 05-26 от 14 04 2005 г о возможности использования документа Федеральной службой в практической работе)

- «О степени загрязнения водных объектов Юга России патогенными, потенциально-патогенными и санитарно-показательными микроорганизмами» (письмо Управления Федеральной службы Роспотребнадзора по Ростовской области № 07-64/12357 от 10 11 2006 г об использовании документа для формирования Федерального информационного фонда социально-гигиенического мониторинга)

Разработан проект нормативно-технической документации (Технические условия, Пусковой регламент производства, инструкция по применению и др) для промышленного производства «Питательной среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов» В настоящее время разработанная нормативно-

техническая документация находится на согласовании в ФГУН «ГИСК им Л А Тарасевича» Роспотребнадзора

Внедрение новой среды накопления для сальмонелл в практику здравоохранения позволит осуществлять бочее эффективный мониторинг за санитарным состоянием водных объектов с целью своевременного проведения оперативных мероприятий против распространения сальмонеллезов водным путем Апробация работы

Результаты и основные положения работы представлены на научно-практической конференции «Региональные проблемы окружающей среды, здоровья населения и санитарно-эпидемиологического благополучия» (Ростов-на-Дону, 2004), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Суздаль, 2005), на заседании Ученого совета ФГУН «Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора (Ростов-на-Дону, 2007), на межлабораториой конференции со грудников лаборатории санитарно-микробиологических методов исследования и экочогическои экспертизы и лаборатории микробиологии и разработки иммунобиологических препаратов ФГУН «Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора (Ростов-на-Дону, 2007) Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них 2 в журналах из списка ВАК Минобразования РФ Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, изложения собственных экспериментальных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы и приложения Объем рукописи составляет 125 страниц Работа иллюстрирована 24 таблицами и 17 рисунками Список литературы содержит 203 источника, в том числе 164 отечественных авторов

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В соответствии с поставленной целью, объектами в экспериментальных условиях служили следующие культуры бактерий

1 Salmonella typhi № 1196 - представитель возбудителей тифо-паратифозных заболеваний, для которого характерен водный путь передачи инфекционного начала

2 Salmonella paratyphi В № 506, Salmonellaparatyphi В № 8006 - как более устойчивые во внешней среде из группы возбудителей паратифозных заболеваний

3 Salmonella typhimurium № 301, Salmonella typhimurmm № 9640, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Salmonella anatum, Salmonella derby -широко циркулирующие среди людей и животных, и наиболее часто выделяемые из воды открытых водоемов

4 Staphylococcus aureus № 653 8 - рАТСС, Escherichia coli № 3912/41

(055 К59), Shigellaflexneri 2a № 170, Escherichia coli, Enterococcus faecahs, Klebsiella pneumoniae - в качестве возможных микробных ассоциантов

Штаммы получены из коллекции музея живых культур ФГУН ГИСК им Л А Тарасевича Роспотребнадзора, все нереферентные штаммы выделены из воды р Дон

Штаммы обладали типичными морфологическими, культуральными, биохимическими и серологическими свойствами

Оценку качества сравниваемых накопительных сред проводили согласно «Методическим рекомендациям к контролю питательных сред по биологическим показателям» (1981) по следующим критериям показатель эффективности, показатель ингибирования, скорость роста, показатель стабильности основных свойств микроорганизмов

Исследования проводили с использованием разработанной нами среды, в качестве сред сравнения были взяты магниевая среда (МР «Применение магниевой среды для выделения сальмонелл из испражнений больных и носителей, пищевых продуктов, сточных жидкостей и воды открытых водоемов», 1973) и селенитовый бульон Лейфсона (ФС 42-3589-98)

С целью выяснения возможности перехода сальмонелл в некультивируемое состояние, а так же их реверсии были использованы следующие штаммы 5 paratyphi В № 8006, S typhimurium № 9640, 5 typhimurium, S enteritidis, S anatum

Для получения некультивируемых форм сальмонелл (НФ) использованы следующие методы

1 Сальмонеллы в количестве 102 и 107 КОЕ/мл выдерживали в дистиллированной воде в темноте при температуре

а) + 6 "С,

б) + 37 °С (Романова, 1997)

С определенным интервалом отбирали пробы жидкости и определяли количество клеток с помощью

- титрования на плотной питательной среде (МПА - мясопептонный агар),

- титрования на плотной питательной среде с добавлением каталазы,

- полимеразной цепной реакции,

2 Взвеси культур (в концентрации 102 и 107 КОЕ/мл) прогревали на водяной бане при температуре 56 °С в течение 1-14 мин Для регистрации выживаемости популяций с периодичностью 1 мин отбирали пробы полученной взвеси и определяли количество живых клеток при помощи

-титрования на плотной питательной среде (МПА),

-титрования на плотной питательной среде с добавлением каталазы (Шеюхович и др, 2005),

Некультивируемыми считали сальмонеллы в пробе, из которой на твердой питательной среде не вырастало ни одной клетки

Полимеразную цепную реакцию проводили на многоканальном амплификаторе МС-2 «Терцик» (Россия) на базе отдела диспансеризации клинико-лабораторного мониторинга больных ВИЧ-инфекцией Южного Регионального Центра по борьбе со СПИДом

При проведении проверки реверсирующей способности различных сред накопления для сальмонелл были использованы следующие тест-штаммы S paratyphi В № 8006, S typhimurium № 9640, S typhimurium, S enteritidis, S anatum В эксперимент взяты разработанная, магниевая и селенитовая среды Суспензию, содержащую сальмонеллы в некультивируемом состоянии (НС), полученные указанными выше способами, засевали по 1 мл в 9 мл среды накопления Инкубировали при температуре 37 "С в течение 24 ч, затем по 0,1 мл

высевали на МПА для подсчета выросших колоний Контролем служил прямой высев 0,1 мл взвеси на МПА

При определении возможности реверсии НФ в организме теплокровных животных использовали следующие тест-штаммы S paratyphi В № 8006, S typhimurium № 9640, S typhirnurium При определении вирулентности сальмонелл, указанные выше культуры, перешедшие в НС под воздействием повышенной температуры (56 °С), вводили внутрибрюшинно белым мышам самцам весом 16-18 г в объеме 1 мл Доза заражения составила 107 КОЕ/мл Для заражения каждым штаммом брали по 10 мышей Контролем служила группа животных (10 мышей), которым не вводили суспензию сальмонелл Для бактериологического исследования использовали паренхиматозные органы (печень и селезенку) Посев производили параллельно на чашки с висмут-сульфит-агаром и среды накопления (предлагаемую, магниевую и селенитовую) с последующим пересевом на чашки с висмут-сульфит-агаром Посевы инкубировали при 37 °С в течение 24 ч Дальнейшее определение биохимических и серологических признаков проводили по действующим нормативным документам

Содержание аминного азота определяли формольным титрованием согласно ФС 42 - 3874 - 99 «Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских и иммунобиологических препаратов» Величину рН измеряли с помощью иономера универсального ЭВ-74 со стеклянным электродом

При изучении эффективности разработанной среды в полевых условиях исследована вода р Дон, вода горканализации г Ростова-на-Дону и г Азова

В соответствии со степенью биологического загрязнения для исследования выбраны следующие биотопы

№ 1 - в районе водозабора № 2 г Ростова-на-Дону, № 2 - в районе городского пляжа г Ростова-на-Дону, № 3 - в районе речного вокзала г Ростова-на-Дону, № 4 - 500 м ниже впадения р Темерник,

№ 5 - 500 м ниже выпуска сточных вод горканализации г Ростова-на-Дону, № 6 - в районе водозабора г. Азова, № 7 - в районе городского пляжа i Азова,

№ 8 - 500 м ниже выпуска горканализации г Азова Отбор проб сточных вод горканализации городов Ростова-на-Дону и Азова осуществляли

№ 1 - в приемной камере, № 2 - после первичных отстойников, № 3 - после вторичных отстойников, № 4 - после очистки

Отбор проб производили батометром в стерильные бутылки из поверхностного горизонта на глубине 0,5 м При этом регистрировалась метеорологическая обстановка температура воздуха и воды, атмосферные осадки Пробы отбирали во все сезоны года Объем работ в полевых условиях составил 165 проб воды

При исследовании воды поверхностных водоемов производили посев 100,0 мл воды во флаконы, содержащие 100,0 мл среды, 10,0 мл - во флаконы с 10,0 мл среды, 1,0 мл и последующие разведения (от 10'1 до 10"3) в пробирки, содержащие 9 мл среды в 2-х параллельных рядах При исследовании сточных вод до очистки засевали 2 объема по 1,0 мл и по 2 объема из разведений от 10"' до 10"7, после очистки - 2 объема по 100 мл, 2 объема по 10,0 мл, 2 объема по 1,0 мл и по 2 объема из разведений 10"1 до 10"3

Посевы инкубировали 24 ч при температуре 37 °С Из каждой емкости, где отмечено равномерное помутнение среды, делали петлей высев на 2 чашки с висмут-сульфит-агаром Через 24 ч инкубации при температуре 37 °С отбирали подозрительные на сальмонеллы колонии Окончательное определение биохимических и серологических свойств проводили по действующим нормативным документам

Определение количества сальмонелл проводили по таблицам Хоскинса-Мура (МУК 4 2 1884-04)

Статистическую обработку полученных данных осуществляли по стандартной методике вычисления (М ± т) и критерия Стыодента Число вариантов > 3 Достоверность различий оценивали при уровне вероятности р < 0,05

Всего в экспериментальных условиях было выполнено 1210 анализов, в полевых - 165 исследований, проведено 2500 определит!

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Поскольку цель работы - создание среды накопления, важно было подобрать питательную основу, позволяющую накапливать биомассу сальмонелл, и вещества - ингибиторы роста возможной сопутствующей микробиоты

При определении влияния экстракта кормовых дрожжей, едкого натра и калия фосфорнокислого однозамещенного на накопление сальмонелл установлено, что оптимальным соотношением этих ингредиентов является содержание 4,5 - 5,0 г/л, 1,3 - 1,4 г/л, 8,6 - 8,8 г/л, соответственно рН составил 6,6 - 6,8 Увеличение или уменьшение концентрации ингредиентов приводило к повышению или понижению рН, что снижало эффективность накопления тест-штаммов

В качестве ингибиторов роста сопутствующей микробиоты нами выбраны бриллиантовый зеленый и кристаллический фиолетовый Анализ полученных данных свидетельствует, что 0,01 % раствор кристаллического фиолетового не задерживает рост сальмонелл в концентрациях 8,0 мл/л, 9,5 мл/л, 10,0 мл/л, 20,0 мл/л Данные концентрации также не оказывают влияния на рост Е сок и К pneumoniae В тоже время рост Е faecahs полностью подавлялся при добавлении в среду 10,0 и 20,0 мл/л 0,01 % раствора кристаллического фиолетового Добавление к питательной основе 0,1 % раствора бриллиантового зеленого в концентрации 4,0 мл/л не повлияло ни на рост сальмонелл, ни на рост сопутствующей микробиоты Увеличение вносимой концентрации до 5,0 - 10,0 мл/л не оказывало подавляющего воздействия на рост сальмонелл, но ингибировало рост Е сок, К pneumoniae и Е faecalis Сочетание 5,0 мл/л 0,1 % раствора бриллиантового зеленого и 10,0 мл/л 0,01 % раствора кристаллического фиолетового привело к подавлению роста Е сок, К pneumoniae и Е faecalis при посеве 1000, 100 и 10 КОЕ/мл, не оказывая влияния на рост тест-штаммов сальмонелл

В результате проведенной работы сконструирована среда накопления для выделения сальмонелл из водных объектов, в которою в качестве источника

питания мы ввели сухой экстракт кормовых дрожжей (5,0 г/л), соли калия (8,8 г/л) и натрия (1,4 г/л) для создания оптимальной рН, 0,1 % раствор бриллиантового зеленого (5,0 мл/л) и 0,01 % раствор кристаллического фиолетового (10 мл/л), в качестве ингибиторов роста сопутствующей микробиоты

Сконструированная среда накопления прошла всестороннюю проверку -изучены ее физико-химические и биологические свойства Среда накопления представляет собой прозрачную жидкость, травянисто-зеленого цвета, рН - 6,6 -6,8, содержание аминного азота - от 0,8 до 1,0 %

Предлаг аемая среда накопления чувствительна обеспечивает рост тест-штаммов сальмонелл при посеве единичных клеток, чем выгодно отличается от аналогичных сред, применяемых в практике здравоохранения в настоящее время (табл 1)

Таблица 1

Сравнение чувствительности сред накопления для сальмонелл

Тест-штамм Опытная среда Магниевая среда Селенитовая среда

КГ4 10"' 1(Г Ю-6 ю-7 10"* 10"* ю-' 108

S typhi № 1196 + - - - - - - - -

5 paratyphi В № 506 + + + + + + + + +

S paratyphi В № 8006 + + + + + - + + -

S typhimurium № 301 + + + + + + + + +

S typhimurium №9640 + + + + + + + - -

S typhimurium + + + + + + + + -

S derby + + + + + + + + -

S enteritidis + + - - - - + + -

S anatum + + + + + + + + -

Примечание- + сплошной рост, - рост отсутствует

Наименьшее время, которое требуется для накопления биомассы сальмонелл, составляет 6 ч, оптимальным же является 24 ч инкубации посевов при температуре 37 °С

Культуры сальмонелл, при инкубации на разработанной среде, сохраняли биологические свойства

При изучении эффективности накопления сальмонелл, получены следующие данные накопление биомассы S paratyphi В № 506, S typhimurium № 301, S typhimurium № 9640, S typhimurium ЗхЮ7 раз, S paratyphi В № 8006 - в 7х108 раза, S anatum- в 2х 10s раз Магниевая среда уступает по эффективности накопления некоторых сероваров сальмонелл Так, накопление S paratyphi В № 506 в 1,5 раза меньше, чем на предлагаемой, S typhimurium № 9640 - в 3,3 раза, S typhimurium - 4,4 раза, S anatum - в 5,0 раз (табл 2)

Таблица 2

Сравнение эффективности накопления сальмонелл при использовании предлагаемой и магниевой сред накопления (посевная доза 10 КОЕ/мл)

Тест-штамм Предлагаемая среда Магниевая среда n t P

Количество сальмонелл (КОЕ/л)

Mi±mi M2±m2

S paratyphi В № 506 Зх108±5х107 2xl05±3xl0' 9 2,5 <0,02

S paratyphi В № 8006 бхЮ^ЗхЮ8 I*105±lxl04 9 17,9 <0,001

S typhimurium № 301 ЗХЮ8±2Х10' 1х108±1хЮ' 9 4,1 <0,001

S typhimurium № 9640 ЗхЮ8±4Х10' 9x10^4x10' 9 4,3 <0,001

S typhimurium 1X10^3X10' 3xl0s±5xl0' 9 2,5 <0,02

S anatum 2x10^4x10* 4xl0s±3xl0' 9 3,6 <0,001

S derby 7xl0'±8xl06 Ixl0"±2xl05 9 8,0 <0,001

Увеличение биомассы на селенитовой среде было незначительным (табл 3)

Таблица 3

Сравнение эффективности накопления сальмонелл при использовании предлагаемой и селенитовой сред накопления (посевная доза 10 КОЕ/мл)

Тест-штамм Предлагаемая среда Селенитовая среда п t Р

Количество сальмонелл (КОЕ/л)

М[ ± mi М2±Ш2

S paratyphi В № 506 3xl0*±5xl0' ЗхЮ2±2хЮ 9 5,1 <0,001

S typhimurium № 301 ЗхЮ5±2х106 1х102±5,7 9 10,2 <0,001

5 typhimurium № 9640 ЗхЮ8±4=<10' рост отсутствует - - -

S typhimurium 1хЮ8±5хЮ' рост отсутствует - - -

S anatum 2x10^4x10" рост отсутствует - - -

S derby 7x10^8x10" рост отсутствует - - -

S paratyphi В № 8006 6х10"±ЗхЮ8 рост отсутствует - - -

Разработанная нами среда накопления позволяет ингибировать рост всех тест-штаммов (£ coli № 3912/41, S aureus № 6538- рАТСС, Е coli, К pneumoniae, Е faecahs, Sh flexnery 2 а № 170) при посеве 100, 100 и 10 КОЕ/мл В тех же условиях селенитовая среда не подавляла роста S aureus № 6538- рАТСС, Е faecahs, а магниевая среда не обеспечивала подавления роста Е coli № 3912/41, Е coli и К pneumoniae При изучении ингибирующих свойств сравниваемых сред с применением смеси тест-штаммов Е coli № 3912/41 в количестве 103 КОЕ/мл и S paratyphi В № 506 - 102 КОЕ/мл было зарегистрировано увеличение биомассы сальмонелл и подавление роста кишечных палочек на предлагаемой среде при

культивировании суспензии при температуре 37 °С в течение 24 ч, тогда как селенитовая и магниевая не задерживали роста данного микроорганизма

Установлено, что хранение разработанной среды при температуре от 2 до 25 °С в течение года не оказывало влияния на чувствительность, эффективность и ингибирующие свойства предлагаемой среды

Нами установлена возможность перехода бактерий рода Salmonella в НС под действием повышенной температуры (56 °С) и сочетания действия пониженной температуры (6 "С) и отсутствия питательных веществ Показано влияние на переход клеток в НС дозы заражения В условиях повышенной температуры и дозы заражения 102 КОЕ/мл клетки сальмонелл переходили в НФ через 3-4 мин прогревания (рис 1), при увеличении вносимой дозы до 107 КОЕ/мл время перехода составило 14 мин (рис 2)

Рис 1 Динамика образования НФ 5 (ур/итипит № 9640 под действием повышенной температуры (доза заражения 102 КОЕ/мл) и реверсии при добавлении катал азы

Рис 2 Динамика образования НФ 5 ¡урЬтипит № 9640 под действием повышенной температуры (доза заражения 107 КОЕ/мл) и реверсии при добавлении катал азы.

При культивировании сальмонелл при пониженной температуре и в состоянии «голода» тест-штаммы переходили в НФ в течение 33 - 35 суток (доза заражения 102 КОЕ/мл) (рис 3), при увеличении дозы до 107 КОЕ/мл происходило и увеличение срока пребывания сальмонелл в вегетативном состоянии до 95, 105 и 108 суток у S paratyphi В № 8006, S anatum, S typhimurium № 9640, соответственно Добавление каталазы к суспензии клеток, содержащей НФ, приводило к реверсии клеток в вегетативное состояние, после того как указанные выше клетки переставали высеваться на твердых питательных средах

Рис 3 Динамика образования НФ S typhimurium № 9640 под действием пониженной температуры (доза заражения 102 КОЕ/мл) и реверсии при добавлении катал азы

При изучении возможности реверсии клеток, находящихся в состоянии некультивируемости, с помощью сред накопления были получены следующие результаты разработанная нами среда позволяла не только восстанавливать данные клетки, но и накапливать биомассу Магниевая и селенитовая среды таким действием не обчадают

Нами проведена серия экспериментов по изучению возможности сохранения НФ сальмонелл своих вирулентных свойств Тест-штаммы (S paratyphi В № 8006, S typhimurium № 9640, S typhimurium), прогретые при температуре 56 °С в течение 14 мин в количестве 107 КОЕ/мл, вводили белым мышам-самцам внутрибрюшинно по 1 мл Через 24 ч данные тест-штаммы выделены га печени и селезенки животных, что свидетельствует о сохранении НФ сальмонелл своих биологических свойств В контрольной группе не отмечено выделение вышеуказанных штаммов

Эффективность предлагаемой среды накопления для сальмонелл была доказана при проведении полевых испытаний С помощью различных сред накопления было исследовано 56 проб сточной воды городов Ростова-на-Дону и Азова При изучении воды горканализации г Ростова-на-Дону сальмонеллы выделены в 100,0 % исследованных проб с помощью разработанной нами среды, в 84,4 % - с магниевой и лишь в 18,8 % - с селенитовой Средний индекс сальмонелл

составил 6015,6±3310,0 КОЕ/л при использовании предлагаемой среды, 202,2±63,9 КОЕ/л - магниевой и 3,4±1,2 КОЕ/л - селенитовой При исследовании воды горканализации г Азова в 83,3 % проб были обнаружены сальмонеллы при использовании разработанной среды, 66,6% и 33,3 % - магниевой и селенитовой сред, соответственно. Средний индекс составил 1380,6 ± 459,5 КОЕ/л при использовании разработанной нами среды, 65,3 ± 22,0 КОЕ/л - магниевой и лишь 6.0 ± 2,1 КОЕ/л - селенитовой Всего на разных этапах очистки сточной воды выделено 437 культур бактерий рода Salmonella 47 сероваров Из них 280 культур при помощи разработанной среды, 127 - магниевои и лишь 30 - селенитовой При использовании разработанной среды из воды горканализации чаще других выделены следующие серовары S derby, S essen, S typhimurium, S brandenburg, S enteritidis, магниевой - S brandenburg, S derby, S essen, S heidelberg и S derby, S brandenburg S reading - селенитовой При этом с использованием опытной среды было выделено 196 культуры сальмонелл группы В, 99 - с применением магниевой и 25 - селенитовой среды, тогда как группы С - 44, 15 и 4, группы D - 22, 9 и 1, группы Е - 18,4 и 0, соответственно

Было исследовано 109 проб р Дон, взятых в биотопах с различной степенью бактериального загрязнения В целом по водоему бактерии рода Salmonella выделены в 93,6 % проб с применением разработанной среды, с магниевой - в 70,6 % проб и всего лишь в 25,7 % - с селенитовой (рис 4) Среднее количество искомых микроорганизмов составило 501,8±78,8 КОЕ/'л при применении сконструированной среды, тогда как с применением магниевой и селенитовой -21,1±6,2 и 9,4±2,0 КОЕ/л, соответственно (рис 5) С использованием разработанной нами среды было выделено 57 сероваров сальмонелл, 34 - с магниевой и 15 - с селенитовой При этом всего выделено 520 культур, из них 342 при использовании разработанной среды, 141 - магниевой, 37 - селенитовой Из воды р Дон чаще других выделены следующие серовары S derby, S typhimurium, S essen, S kimuenza, S brandenburg с применением разработанной нами среды, S derby, S heidelberg, S brandenburg - с магниевой и селенитовой сред

■ селенитовая среда 0 магниевая среда □ предлагаемая среда)

Рис. 4. Частота выделения сальмонелл из воды р. Дон с использованием разных сред накопления.

□ предлагаемая среда Ш магниевая среда В селенитовая среда

Рис. 5. Количество сальмонелл в 1 л исследуемой воды при использовании различных сред накопления.

Все сказанное выше позволяет рекомендовать разработанную нами среду накопления для сальмонелл к использованию при проведении санитарно-микробиологического мониторинга воды различной степени бактериального загрязнения Среда обладает всеми характеристиками, предусмотренными в нормативных документах она чувствительна, эффективна, позволяет задерживать рост сопутствующей микробиоты, проста в применении и изготовлении

ВЫВОДЫ

1 Подобран оптимальный состав среды, обеспечивающий высокий темп накопления сальмонелл, с одновременным подавлением роста сопутствующей микробиоты Среда состоит из непищевого сырья и отечественных реактивов, по чувствительности, эффективности накопления и показателю ингибирования превосходит среды аналогичного назначения

2 Показана возможность реверсии сальмонелл, находящихся в некультивируемом состоянии, но сохраняющих вирулентные свойства, в вегетативное состояние при помощи разработанной среды накопления

3 Разработана технология производства среды накопления для сальмонелл (Технические условия, Пусковой регламент производства, инструкция по применению и др ) Разработанная среда накопления защищена патентом (решение о выдаче № 2006115322/13 от 11 04 07 г)

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Головина С В , Журавлев П В , Алешня В В , Панасовец О.П. Бактериологический мониторинг за качеством воды поверхностных водоемов // материалы пленума Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и МЗ Российской Федерации «Социально-гигиенический мониторинг методология, региональные особенности, управленческие решения» 17-19 декабря 2003 М, 2003, 77 -79

2 Алешин В В , Головина С В , Журавлев П В , Панасовец О.П., Глухов А А, Ковалевская О Л, Щеглова Е И, Гордеев В А, Ьелоглазова М Д, Черногорова Т Н Методические подходы к выделению условно-патогенных микроорганизмов из водных объектов // материалы Всероссийской научно-практическои конференции «Медицинская микробиологии - XXI век», 28 -30 сентября 2004 Саратов, 2004, 19-20

3 Алешня В В , Головина С В , Журавлев П В , Панасовец О.П. Распространение и количественная характеристика сальмонелл в нижнем течении реки Дон // материалы пленума Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и Минздрава и соцразвития Российской Федерации «Современные проблемы медицины окружающей среды», 16-17 декабря 2004 М, 2004, 10 - 11

4 Панасовец О.П. Разработка жидкой среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов // сборник научных трудов «Региональные проблемы окружающей среды, здоровья населения и санитарно-эпидемиологического благопотучия» Ростов-на-Дону, 2004, 138- 139

5 Панасовец О.П. Экспериментальные и натурные испытания новой среды обогащения для сальмонелл из водных объектов // материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье», 19 - 22 мая 2005 Суздаль, 2005,382 - 383

6 Алешня В В , Головина С В , Журавлев П В , Панасовец О.П., Недачин А Е, Артемова Т 3 , Иванова Л В , Талаева Ю Г , Загайнова А В , Буторина Н Н , Ибрагимова Л М, Колбасникова И А Значение индикаторных микрооорганизмов в оценке микробного риска при питьевом водопользовании // материалы пленума научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и Минздрава и соцразвития Российском Федерации «Экологически обусловленные ущербы здоровью методология, значение и перспективы оценки», 22 - 23 декабря 2005 М, 2005,178- 180

7 Недачин А Е, Артемова Т 3, Дмитриева Р А, Доскина Р А, Талаева Ю Г, Иванова Л В , Буторина Н Н, Лаврова Д В , Санамян А Г, Загайнова А В , Алешня В В , Журавлев П В , Головина С В , Панасовец О.П., Савилов Е Д,

Мамонтова Л М, Анганова Е В Проблемы эпидемической безопасности питьевого водопользования населения России // Гигиена и санитария, 2005, 6, 14-18

8 Журавлев П В , Головина С В , Алешня В В , Панасовец О.П., Сибилева А А, Ковалевская О Л. Усовершенствованая питательная среда для выделения сальмонелл из водных объектов // материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиоло1 ов и паразитологов, 26 - 27 апреля 2007 М, 2007, т 3, 28 - 29

9 Панасовец О.П., Нетрусов А И, Головина С В , Алешня В В , Журавлев П В Обоснование возможности применения новой жидкой среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов // ЖМЭИ, 2007, 4, 54 - 56

Подписано в печать 11 10 2007 Формат 60x88 1/16 Объем 1,25 п л Тираж 100 экз Заказ № 673 Отпечатано в ООО «Соцветие красок» 119992 г Москва, Ленинские горы, д 1 Главное здание МГУ, к А-102

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Панасовец, Ольга Петровна

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1.

1.1. Распространение и выживаемость сальмонелл в водных объектах.

1.1.1. Загрязнение сальмонеллами сточных вод.

1.1.2. Загрязнение сальмонеллами открытых водоемов.

1.2. Некультивируемые формы бактерий (НФ).

1.2.1. Факторы, способствующие переходу микроорганизмов в некультивируемое состояние (НС).

1.2.2. Методы определения НФ.

1.2.3. Факторы реверсии НФ.

1.3. Характеристика сред накопления для выделения сальмонелл из объектов окружающей среды.

ЧАСТЬ И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Штаммы.

2.2. Реактивы и питательные среды.

2.3. Биологические методы.

2.3.1. Чувствительность среды.

2.3.2. Определение показателя эффективности и скорости роста сальмонелл.

2.3.3. Показатель ингибирования роста возможной сопутствующей микробиоты.

2.3.4. Определение стабильности основных свойств тест-штаммов сальмонелл, выращенных на предлагаемой среде и средах сравнения.

2.4. Некультивируемые формы сальмонелл.

2.4.1. Получение некультивируемых форм сальмонелл.

2.4.2. Проведение ПЦР.

2.5. Методика реверсии некультивируемых форм сальмонелл.

2.5.1. Определение вирулентности культур сальмонелл, находящихся в НФ, на белых мышах.

2.5.2. Методика определения влияния различных сред накопления на восстановление биологических свойств сальмонелл, находящихся в НС.

2.6. Физико-химические методы.

2.6.1. Определение рН.

2.6.2. Аминный азот.

2.7. Исследования, проведенные в полевых условиях.

2.7.1. Объекты изучения в полевых условиях.

2.7. Методика исследования воды поверхностных водоемов.

2.8. Исследование хозяйственно-бытовых сточных вод.

2.9. Статистические методы.

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА СРЕДЫ НАКОПЛЕНИЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ

3.1. Подбор оптимального соотношения ингредиентов в составе предлагаемой среды.

3.2. Физико-химические показатели среды.

3.3. Технология приготовления среды накопления для сальмонелл.

3.4. Биологические свойства среды.

3.4.1. Чувствительность среды.

3.4.2. Определение показателя эффективности и скорости роста сальмонелл.

3.4.3. Показатель ингибирования роста сопутствующей микробиоты.

ГЛАВА 4. НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫЕ ФОРМЫ САЛЬМОНЕЛЛ

4.1. Переход сальмонелл в некультивируемое состояние под действием повышенной температуры.

4.2. Переход сальмонелл в некультивируемое состояние под действием пониженной температуры в условиях отсутствия питательных веществ.

4.3. Реверсия НФ сальмонелл в организме теплокровных животных.

ГЛАВА 5. ИСПЫТАНИЕ ПРЕДЛАГАЕМОЙ СРЕДЫ НАКОПЛЕНИЯ

И СРЕД СРАВНЕНИЯ В ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ

5.1. Распространение, количественная и видовая характеристика сальмонелл, выделенных из воды горканализации городов Ростова-на-Дону и Азова с применением различных сред накопления.

5.2. Распространение, количественная и видовая характеристика сальмонелл, выделенных из воды Нижнего Дона с применением различных сред накопления.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка жидкой питательной среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов"

Вопрос обеспечения рационального использования и охраны природных ресурсов страны постоянно находится в центре внимания правительства РФ. Важным шагом в этом направлении явилось принятие в 1999 г. закона «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (№ 52 - ФЗ от 30.03.1999). Настоящий Федеральный закон направлен на обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия населения как одного из основных условий реализации конституционных прав граждан на охрану здоровья (Онищенко, 2004). В данном законе также предусмотрены санитарно-эпидемиологические требования к охране окружающей среды, несоблюдение которых может создать угрозу возникновения и распространение заболеваний, в том числе инфекционных.

Несмотря на все меры, направленные на борьбу с инфекционными болезнями, уровни заболеваемости ими в мире остаются высокими (Ерман и др., 1992; Parker et al., 2001; Гуменюк и др., 2002; Ковалев и др., 2002; Charkowski et al., 2002; Anis Shobirin et al., 2003). По расчетным данным ВОЗ ежегодно в мире острые кишечные инфекции (ОКИ) переносят 2 млрд. человек. В последние годы намечается неблагоприятная тенденция к росту заболеваемости ОКИ, передаваемых водным путем: в 1998 г. по России зарегистрировано 122 вспышки кишечных инфекций водного происхождения, к 2006 г. показатель увеличился в 1,5 раз (Онищенко, 2002; Онищенко, 2006). Среди многочисленных возбудителей острых кишечных заболеваний (ОКЗ), связанных с водным путем передачи, следует выделить сальмонеллы, поскольку они являются безусловными патогенами для человека и животных, и наиболее часто среди патогенных микроорганизмов встречаются в воде (Бекназов, 1975; Зарицкий, 1988; Graver, Thakur, 2001; Махнев, 2002; Махнев, 2006; Лобзин и др., 2006). Известны многочисленные примеры заболеваний сальмонеллезами, связанные с водным фактором: вспышка в Мексике в 1972 г. (Гипп, 1975), в г. Риверсайд (США) в 1989 г. (Покровский и др., 1989), в Кине (Англия) в 1986 г. (Колпаков, Козырева, 1989), в 1997 г. в

Казахстане (Табаева и др., 2001), в 2000 г. в Чеченской Республике, а в 2003 г. в Республике Дагестан зарегистрированы вспышки брюшного тифа (Онищенко, 2000; Грижебовский и др., 2001; Оншценко, 2006).

Поскольку поверхностные водоемы являются конечным пунктом поступления недостаточно очищенных промышленных и хозяйственно-бытовых сточных вод, создаются условия для накопления и развития болезнетворных микробов, и водоемы, в этом случае, могут служить резервуаром и путем передачи инфекционного агента (Юрко, 1971; Круглова и др., 1983; Martin-Bauyer, 1983; Кулов и др., 1987; Макарова и др., 1990; Далечин и др., 1998; Khanh, Pruss et al., 2002).

В условиях интенсивной антропогенной нагрузки на водоемы изменяются микробиологические процессы, протекающие в водных объектах и соотношение циркулирующих в воде микроорганизмов. Это приводит к нарушению локальных экологических микросистем. Происходит естественный отбор бактерий, биологически устойчивых и обладающих большой жизнеспособностью. Данные изменения способствуют длительному сохранению патогенных бактерий в объектах внешней среды и переходу в некультивируемое состояние, повышая риск обострения эпидемиологической ситуации. В этом случае характер изменения биоценоза бактерий приобретает важное значение при оценке санитарного режима водоема (Абрамсон и др., 1983; Чернышева и др., 1990; Бойцов, 1991; Bakhrouf-Ben et al., 1992; Mahasneh, 1992; Kolsky, 1993; Усманов, 2004).

Очевидно, что установление степени эпидемического риска заражения сальмонеллами через воду, как и проведение в целом надзора за их циркуляцией в окружающей среде, теснейшим образом связано с эффективностью соответствующих методов выделения этих возбудителей и их идентификации (Султанов, Раджиева, 1989; Лысов, 1991). Результаты лабораторных исследований являются важным и объективным мерилом степени распространения инфекции и создают основу не только для планирования анализа и оценки результатов профилактических и противоэпидемических мероприятий, но и помогают выявлению изменений в характере развития эпидемического процесса различных заболеваний. Чем выше уровень лабораторных исследований, используемых при определении параметров эпидемиологического надзора, тем обоснованней заключение о причинах возникновения эпидемиологической ситуации и, следовательно, более целенаправленными и обоснованными будут планируемые противоэпидемические мероприятия (Седова, 1975; Покровский и др., 1995).

Используемые среды первичного накопления для выделения сальмонелл из водной среды не достаточно эффективны в отношении бактерий находящихся в состоянии «сублетального стресса», что препятствует объективной санитарно-эпидемической оценке водоисточника. При этом среды имеют сложный состав, в который входят дорогостоящие компоненты, что влечет за собой повышение стоимости анализов, требует увеличения количества лабораторной посуды, затрат времени и труда персонала. С учетом выше сказанного, одной из наиболее актуальных задач современной санитарной микробиологии является создание и разработка эффективных, экономичных и легко воспроизводимых в условиях практических бактериологических лабораторий питательных сред, позволяющих получать объективную информацию о степени бактериологического загрязнения водных объектов (Головина и др., 1997; Трухина, 2002; Онищенко, 2002; Онищенко, 2006).

Учитывая вышеизложенное, целью нашего исследования явилась разработка и обоснование возможности использования новой среды накопления для повышения эффективности выделения сальмонелл, в том числе и некультивируемых форм, из водных объектов различной степени бактериального загрязнения.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. В экспериментальных условиях подобрать минеральный состав новой среды, факторы роста, ингибирующие вещества для конкурирующих видов микроорганизмов, рН.

2. В экспериментальных условиях проверить способность новой питательной среды к возможности размножения в ней сальмонелл и торможению роста сопутствующей микробиоты. Сравнить новую среду с наиболее используемыми в настоящее время средами.

3. Показать возможность применения новой среды накопления для выделения некультивируемых форм сальмонелл из водных объектов.

4. Разработать методические приемы, позволяющие проводить исследования на наличие сальмонелл с высокой степенью достоверности результата.

5. В полевых условиях с использованием новой питательной среды и разработанными методическими приемами провести исследования проб воды взятых, в биотопах с различной степенью биологического загрязнения, в сравнении со средами общепринятыми в практике здравоохранения.

4 Научная новизна

- Разработана новая жидкая среда накопления для выделения сальмонелл из водных объектов, превосходящая по чувствительности и эффективности накопления аналоги, используемые в настоящее время в практике здравоохранения РФ. Защищена патентом № 2006115322/13 от 11. 04.2007 г.

- Показана эффективность применения новой среды для реверсии некультивируемых форм сальмонелл, что позволяет повысить достоверность оценки загрязнения сальмонеллами водных объектов.

Научно-практическая значимость

Материалы диссертации использованы при подготовке аналитической справки «Об экологическом мониторинге за санитарно-показательными, потенциально патогенными и патогенными микроорганизмами в водных объектах Юга Российской Федерации» (письмо

Федеральной службы Роспотребнадзора № 0100/2723.05-26 от 14.04.2005 г о возможности использования документа Федеральной службой в практической работе).

Материалы диссертации использованы при подготовке аналитической справки «О степени загрязнения водных объектов Юга России патогенными, потенциально-патогенными и санитарно-показательными микроорганизмами» (письмо Управления Федеральной службы Роспотребнадзора по Ростовской области № 07-64/12357 от 10.11.2006 г об использовании документа для формирования Федерального информационного фонда социально-гигиенического мониторинга).

Разработан проект нормативно-технической документации (Технические условия, Пусковой регламент производства, инструкция по применению, этикетка на флакон и др.) для промышленного производства «Питательной среды накопления для выделения сальмонелл из водных объектов». В настоящее время разработанная нормативно-техническая документация находится на согласовании в ФГУН «ГИСК им. JI.A. Тарасевича» Роспотребнадзора.

Внедрение новой среды накопления для сальмонелл в практику здравоохранения позволит осуществлять более объективный мониторинг за санитарным состоянием водных объектов с целью своевременного проведения оперативных мероприятий против распространения сальмонеллезов водным путем.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- преимущество предложенной среды накопления перед используемыми в настоящее время средами накопления для определения сальмонелл в водных объектах;

- возможность применения предлагаемой среды для реверсии некультивируемых форм сальмонелл;

- обоснование использования разработанной среды при проведении мониторинга за качеством воды различной степени бактериологического загрязнения на наличие сальмонелл, в том числе некультивируемых форм.

Апробация работы

Результаты и основные положения работы представлены на научно-практической конференции «Региональные проблемы окружающей среды, здоровья населения и санитарно-эпидемиологического благополучия» (Ростов-на-Дону, 2004), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Суздаль, 2005), на заседании Ученого совета ФГУН «Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора (Ростов-на-Дону, 2007), на межлабораторной конференции сотрудников лаборатории санитарно-микробиологических методов исследования и экологической экспертизы и лаборатории микробиологии и разработки иммуно-биологических препаратов ФГУН «Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора (Ростов-на-Дону, 2007).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них 2 в реферируемых журналах из списка ВАК Минобразования РФ.

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, изложения собственных экспериментальных результатов и их

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Панасовец, Ольга Петровна

100 выводы

1. Подобран оптимальный состав среды, обеспечивающий высокий темп накопления сальмонелл, с одновременным подавлением роста сопутствующей микробиоты. Среда состоит из непищевого сырья и отечественных реактивов, по чувствительности, эффективности накопления и показателю ингибирования превосходит среды аналогичного назначения.

2. Показана возможность реверсии сальмонелл, находящихся в некультивируемом состоянии, но сохраняющих вирулентные свойства, в вегетативное состояние при помощи разработанной среды накопления.

3. Разработана технология производства среды накопления для сальмонелл (Технические условия, Пусковой регламент производства, инструкция по применению и др.) Разработанная среда накопления защищена патентом решение о выдаче № 2006115322/13 от 11.04.07 г.)

101

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Панасовец, Ольга Петровна, Москва

1. Абрамсон Л.Я., Ананичева А.В., Барабанова Р.П. О роли водного фактора в распространении кишечных инфекций.// Саратов, 1983, 12. Деп. во ВНИИМИ МЗ СССР №6931-83.

2. Авазов Э.Н., Рахимов А.Р. К вопросу о факторах распространения желудочно-кишечных заболеваний.// Актуальные вопросы кишечных инфекций. Ташкент, 1984, 77-78.

3. Айзен М.С., Царев И.В., Пушкина А.А., Влодавец В.В., Курпамедис О.В. Комплексная санитарно-микробиологическая характеристика бытовых отходов.// Гигиена и санитария, 1985,9,24 26.

4. Аксенов М.Ю., Гинсбург А.Л. Диагностика инфекционных заболеваний с помощью метода полимеразной цепной реакции.// Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1993,4, 3 7.

5. Алешня В.В. Влияние ряда факторов окружающей среды на самоочищение водоема от сальмонелл./ Диссертация к. м. н., Ростов-на-Дону: РГМИ, 1979.

6. Алешня В.В., Цацка А.А., Влодавец В.В., Алешня Е.П. О методике изучения жизнеспособности микроорганизмов в водоеме.// Гигиена и санитария, 1982, 8, 7-8.

7. Алешня В.В., Цацка А.А., Влодавец В.В., Алешня Е.П. Динамика отмирания сальмонелл в речной воде.// Микробиологический журнал, 1984,46 (2), 14-18.

8. Алешня В.В., Головина С.В., Журавлев П.В., Цацка А.А., Бывалов Н.Ф.,

9. Тмехов А.А. Влияние санитарно-гигиенических условий населенных мест науровень заболеваний кишечными инфекциями.// Гигиена и санитария, 1995,2,6.8.

10. Алтынбеков М.А. Динамика заболеваемости тифо-паратифозными инфекциями в Чимкентской области.//ЖМЭИ, 1982,6,35 38.

11. Бабаходжаев С.Н., Мухтарова С.М., Хакимов М.М. Заболеваемость бактериальной дизентерией и другими острыми кишечными инфекциями детей дошкольного возраста в Сырдарьинской области.// Эпидемиология и инфекционные болезни, 2001,3,13-14.

12. Багдасарьян Г.А., Талаева Ю.Т., Артемова Т.З., Немыря В.И., Недачин А.Е. Особенности санитарно-микробиологической оценки качества прибрежных морских вод в условиях их промышленно-бытового загрязнения.// Гигиена и санитария, 1980, 8,5 8.

13. Бекназов P.O. Заболеваемость населения кишечными инфекциями в Нижнечирчикском районе.// Актуальные вопросы кишечных инфекций. Ташкент, 1975,34-36.

14. Бирк К.Ф. Обоснование дополнительных санитарно-микробиологических показателей качества воды, обеспечивающих ее эпидемическую безопасность.// Автореферат д.м.н., М.: НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН, 1982.

15. Бойцов А.Г., Козлова Н.С. Сальмонеллы в воде реки Нева, Невской Губы и совершенствование методов их выделения.// Материалы X Всесоюзной конференции: Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды. М., 1988,52 54.

16. Бойцов А.Г., Ластовка О.Н. Выделение сублетально поврежденных штаммов сальмонелл из воды поверхностных водоемов.// Гигиена и санитария, 2003,3, 76-77.

17. Болдырева Н.Н. Особенности эпидемиологии кишечных инфекций в Ковровском районе Владимирской области.//ЖМЭИ, 2002,1,105 106.

18. Бойцов А.Г. Значение сублетальных повреждений микроорганизмов (обзор).// Гигиена и санитария, 1991, 8,67 69.

19. Бранд М.Г. Изучение некоторых азотистых фракций селенитовых сред в процессе роста бактерий кишечного семейства.// Материалы по эпидемиологии и микробиологической диагностике кишечных и кокковых инфекций. Кишинев, 1976,28-31.

20. Брызгало В.А., Коршун А.И., Никаноров A.M., Соколова Л.П. Гидробиологические характеристики нижних участков Дона, в условиях длительного антропогенного воздействия.// Водные ресурсы, 2000,27 (3), 357-363.

21. Бухарин О.В., Гинсбург А.Л., Романова Ю.М. Механизмы выживания бактерий./ М.: Медицина, 2005,143-219.

22. Гинсбург A.JL, Романова Ю.М. Некультивируемые формы бактерий и их роль в сохранении возбудителей сапронозов во внешней среде.// ЖМЭИ, 1997,3, 116-121.

23. Гинсбург A.JI., Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Ковалев Ю.Н., Аляпкина Ю.С., Чегаева Е.В. Механизм действия и природа факторов, индуцирующих образование некультивируемых форм у S. typhimurium.!I ЖМЭИ, 1999,6,3 8.

24. Гипп Е.К. Экспериментальные и натурные исследования по разработке методов обнаружения сальмонелл в воде водоемов./ Автореферат к. м. н., М., 1975.

25. Гирин В.Н., Григорьева Л.В. Санитарно-бактериологическое и вирусологическое исследование воды./Киев: Здоровья, 1981,5 15.

26. Головина С.В., Журавлев П.В., Алешня В.В. Сравнительная оценка методов обнаружения индикаторов и условно-патогенной флоры в воде.// Гигиена и санитария, 1997,4,58-59.

27. Головина С.В., Журавлев П.В., Мирович М.О., Прядко Л.И., Романова Л.В. Санитарная охрана малых рек от биологического загрязнения.// Сб. н. тр.: Гигиенические аспекты охраны окружающей среды. Ростов-на-Дону, 1985, 30-31.

28. Головина С.В., Цатурова Г.А., Кукушин B.C. Опыт использования хозяйственно-бытовых сточных вод на земледельческих полях орошения.// Гигиена и санитария, 1980,1,77-78.

29. Григорьева JT.B., Касьяненко A.M., Корчак Г.И. Санитарная микробиология эвтрофных водоемов./ Киев: Здоровье, 1985,224.

30. Григорьева JI.B., Корчак Г.И., Малахова JI.A. Использование красок для выявления факторов патогенности эшерихий и сальмонелл.// Лабораторное дело, 1991,2,57-59.

31. Гума В.И., Любчак Д.А., Каражей Г.И., Вакараш Н.А., Заславский Б.А., Пономарева Г.И., Потапов Л.И. Сравнительное изучение магниевых сред.// Гигиена и санитария, 1988, 8, 68 69.

32. Гуменюк В.Т., Пономарева Е.А., Максимова Е.А. Динамика заболеваемости острыми кишечными инфекциями в районе.// Сб. н. тр.: Региональные проблемы гигиены окружающей среды и здоровья населения. Ростов-на-Дону, 2002,7, 167- 168.

33. Дзюбан А.Н., Косолапов Д.Б., Кузнецова И.А. Микробиологические процессы в горьковском водохранилище.// Водные ресурсы, 2001,28 (1), 47 57.

34. Добрянская Э.Я., Гапелина В.В., Стадников С.М. Фаготиповый пейзаж и биологические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов, выделенных на территории УзССР.// Сб. н. тр.: Актуальные вопросы бактериальных инфекций. Ташкент, 1979,43-48.

35. Ерман Б.А., Тулакина Л.Г., Устьянцев В.П., Кундрюкова Л.И., Исачкова Л.М., Бочаров А.Ф., Втюрин Б.В. Ультраструктурная патология инфекционных болезней./ Новосибирск: Наука, 1992,47 51.

36. Журавлев П.В., Алешня В.В., Головина С.В., Глухов А.А., Ковалевская О.А. Изучение барьерной роли водоочистных сооружений Ростовского и Азовского водопроводов в отношении условно-патогенных микроорганизмов.// Сб. н. тр., Рязань, 2000,104-106.

37. Журавлев П.В. Значение потенциально патогенных микроорганизмов при санитарной оценке зарегулированных водоемов./ Диссер. к. м. н., Ростов-на-Дону: РГМИ, 1991.

38. Зарицкий A.M. Сальмонеллезы./ Киев: Здоровья, 1988,19-34.

39. Иванов JI.H. Изучение влияния животноводческих комплексов на окружающую среду инфекционную заболеваемость населения.// Гигиена и санитария, 1985,9, 13-16.

40. Иванов Л.И. Острые кишечные инфекции./ Л.: Медицина, 1982,184.

41. Калина Г.П. Сальмонеллы в окружающей среде./ М.: Медицина, 1978,160.

42. Кальюлайд Л.И. Бактериальная загрязненность сточных вод крупной птицефабрики на разных этапах биологической очистки.// Гигиена и санитария, 1983,8,70-71.

43. Карагулова С.Т. Ускоренный метод выявления сальмонелл по их специфическим термостабильным О-антигенам у людей и из объектов внешней среды./ Автореферат к.м.н., М.: МНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского, 1985.

44. Карчава Г.В. Санитарно-микробиологическая оценка процессов биологического загрязнения прибрежной морской воды в курортной зоне.// Материалы IX Всесоюзной конференции: Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды. М., 1983, 66 67.

45. Ковалев Г.К. Микробиологические аспекты потенциальной опасности воды.// Гигиена и санитария, 1982, 9,67-71.

46. Ковалев Н.Г., Балабан О.А., Жукова Л.Ф., Подсвирова И.А., Тугачева О.Н. Эпидемиологические аспекты острых кишечных инфекций в крае.// Сб. н. тр.: Региональные проблемы гигиены окружающей среды и здоровья населения. Ростов-на-Дону, 2002, 7,197- 199.

47. Ковальчук Н.И., Шубин Ф.Н., Хорошко В.А., Шевердина Ф.Н., Табасенко Т.Т., Кошелева Н.Г. Сравнительная характеристика серотипов сальмонелл, редко выявляемых в Приморском крае.// ЖМЭИ, 1997,5, 88-91.

48. Колпаков С.Л., Козырева Т.С. Проявление эпидемического процесса брюшнотифозной инфекции в Москве.// ЖМЭИ, 1989,12,40 45.

49. Комзолова Н.Б. Влияние стоков целлюлозно-бумажных предприятий на выживаемость бактерий в условиях моделирования.// Сб. н. тр.: Санитарно-микробиологические исследования в условиях антропогенных загрязнений окружающей среды. М., 1990,24 29.

50. Комзолова Н.Б. Значение P. aeruginosa при комплексной санитарно-микробиологической оценке качества воды поверхностных водоисточников, используемых населением./ Автореферат к. б. н. М., 1988.

51. Корчак Г.И. Санитарно-микробиологические аспекты антропогенных загрязнений зон рекреации морей.// Материалы IX Всесоюзной конференции: Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды. М., 1983, 80-81.

52. Корчак Г.И., Григорьева Л.В., Попович Г.Г., Бондаренко В.И., Антонов М.Ю. Микробное обсеменение зон рекреации морей и выявление фактора риска инфекционной заболеваемости.// Гигиена и санитария, 1985, 5,16 20.

53. Круглова Е.И. Научное обоснование гигиенических критериев оценки эпидемической безопасности водных объектов в зоне рекреации./ Автореферат к. м.н. М., 1991.

54. Круглова Е.И, Бирк К.Ф., Локк Э.Ф. К вопросу о влиянии уровня бактериального загрязнения на здоровье в зоне рекреации.// Материалы IX Всесоюзной конференции: Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды. М., 1983, 85-86.

55. Круглова Е.И., Локк Э.Ф., Кишок Т.В. Зависимость между уровнем микробного загрязнения рекреационной воды и заболеванием острыми кишечными инфекциями.// Таллин, 1984,29 30.

56. Круглова Е.И. Научное обоснование гигиенических критериев оценки эпидемической безопасности водных объектов в зоне рекреации./ Автореферат к. м. н., М., 1991.

57. Круглов Б.А. О сравнительной устойчивости возбудителей брюшного тифа, паратифа А и паратифа В в некоторых объектах внешней среды.// Сальмонеллезы, труды, том 102. Саратов, 1973.

58. Ластовка О.Н., Капралова Л.Е. Санитарно-микробиологические исследования акватории реки Невы и Невской Губы.// Материалы X Всесоюзной конференции: Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды. М., 1988, 87 88.

59. Литвин В.Ю., Гинсбург А.Л., Пушкарева В.И., Романова Ю.М., Баев Б.В. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий./ М.: Фармарус-Принт, 1997, 49-110.

60. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н. Биоценотические основы природной очаговости сапронозов (итоги 15-летних наблюдений).// ЖМЭИ, 2004, 4,102-108.

61. Лобанов В.В., Колпикова Л.Д., Шариков A.M., Гаврилов Б.В. Изучение смешанной инфекции, вызываемой V. cholera и S. typhi в эксперименте.// ЖМЭИ, 1998, 5, 17-19.

62. Лобзин Ю.В., Волжанин В.М., Захарченко С.М. Клиника, диагностика и лечение актуальных кишечных инфекций./ С.Петербург: ИКФ Фолиант, 1999,54-91.

63. Лобзин Ю.В., Цинзерлинг В.А., Коваленко А.Н. Узловые вопросы патогенеза брюшного тифа.// Эпидемиология и инфекционные болезни, 2006,1,55 59.

64. Лысов П.С. Микробиологические и молекулярно-биологические особенности госпитальных штаммов сальмонелл тифимуриум и их использование в эпидемиологическом анализе./ Автореферат к.м.н., Ростов-на-Дону: РГМИ, 1991.

65. Магдей М.В., Слюсарь В.Н., Рожнова С.Ш. Анализ групповой заболеваемости сальмонеллезами в республике Молдова.// ЖМЭИ, 1993,4,47 52.

66. Макарова Р.Г., Вечелковский Ю.Л., Карпов Н.А., Бычкова Р.С., Панычева Л.А. Клиническая характеристика водной вспышки брюшного тифа.// Тезисы докладов к научно-практической конференции: Острые инфекции и инвазии человека. Кемерово, 1990,23-25.

67. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование.//М., 1984.

68. Маслов А.К. Подходы к диагностике хронических водных эпидемий острых кишечных инфекций.// Тезисы докладов к научно-практической конференции: Острые инфекции и инвазии человека. Кемерово, 1990,18-20.

69. Махнев М.В. Особенности эпидемиологического проявления брюшного тифа в организованных коллективах.// ЖМЭИ, 2002,1,27 32.

70. Махнев М.В. Особенности клинического течения брюшного тифа в период его эпидемии в Таджикистане.// Эпидемиология и инфекционные болезни, 2006,1, 44-49.

71. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям./М., 1981.

72. Миртазаев А.А., Исмаилов Д.Г., Барамыкова Л.А. К эпидемиологии сальмонеллезов.// Сб н. тр.: Патогенез, диагностика, клиника и профилактика бактериальных инфекций. Ташкент, 1982, 38-41.

73. Митчел Р. Микробиология загрязненных вод./ М.: Медицина, 1976,323.

74. МУ № 2285-81 Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов./ М., 1981,25 37.

75. МУК 4.2.1884-04. Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов./ М., 2005, 34-37.

76. Мунблит В.Я., Тальрозе В.Л., Трофимов В.И. Термоинактивация микроорганизмов.//М.: Наука, 1985,159-209.

77. Мусабаева И.К. Руководство по кишечным инфекциям./ Ташкент: Медицина, 1980, 725.

78. Невский М.В., Хуриев Б.Б. Итоги изучения носительства возбудителей брюшного тифа и паратифов.// Актуальные вопросы эпидемиологии. Ташкент, 1984,10, 14-19.

79. Немыря В.И., Богатырева М.Д. Определение сальмонелл в прибрежной морской воде.// Гигиена и санитария, 1980,3, 77 78.

80. Онищенко Г.Г. Влияние состояния окружающей среды на здоровье населения. Нерешенные проблемы и задачи.// Гигиена и санитария, 2002,1,3-10.

81. Онищенко Г.Г. Актуальные проблемы совершенствования государственного санитарно-эпидемиологического надзора в области гигиены окружающей среды.// Гигиена и санитария, 2002,3,3-9.

82. Онищенко Г.Г. Санитарно-эпидемиологическая обстановка и неотложные мероприятия по восстановлению системы здравоохранения Чеченскойреспублики.// Здоровье населения и среда обитания, 2000,4,6 9.

83. Онищенко Г.Г. О состоянии питьевого водоснабжения в Российской Федерации.// Гигиена и санитария, 2006,4,3 7.

84. Онищенко Г.Г. О реализации Федерального закона от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологичеком благополучии населения» и мерах по совершенствованию его применения.// Гигиена и санитария, 2004,1,3-5.

85. Платонова А.Г., Маркелова С.В. Характеристика санитарно-эпидемиологического благополучия и заболеваемости в летних оздоровительных учреждениях Российской Федерации в 1997-1999 гг.// Здоровье населения и среда обитания, 2000,4,14-17.

86. Плахотя Л.П. Выживаемость сальмонелл в аэрозольном состоянии в условиях эксперимента.// Гигиена и санитария, 1984,6,75 77.

87. Покровский В.И. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней./ М.: Медицина, 1993,464.

88. Покровский В.И., Малеев В.В., Сёмина Н.А. Роль лабораторных исследований в диагностике и мониторинге инфекционных болезней.// Клиническая лабораторная диагностика, 1995,6,28 33.

89. Покровский В.И., Килессо В.А., Ющук Н.Д. Сальмонеллезы: (этиология, эпидемиология, клиника, профилактика)./ Т.: Медицина, 1989,344.

90. Пономарева Л.В., Килеженко В.А. Комплексная санитарно-бактериологическая характеристика прибрежных морских вод Севера.// Сб. н. тр.: Проблемысанитарной микробиологии окружающей среды. М., 1977,26 29.

91. Попова П.П. Особенности эпидемиологии и эпизоотологии сальмонеллезов центрального Казахстана.// Материалы конференции: Современные проблемы сальмонеллезов и вакцинопрофилактики кори. Москва Ереван, 1976,39-40.

92. Попова П.П., Ременцова М.М., Ким А.А. Экология сальмонелл и эпидемиология сальмонеллезов./Алма-Ата: Наука, 1987,128.

93. Попович Г.Г., Бондаренко В.И. Инфицированность человека энтеробактериями и энтеровирусами при купании в зависимости от уровня микробиологического загрязнения воды.// ЖМЭИ, 1989,3,45 47.

94. Пушкарева В.И. Патогенные бактерии в почвенных и водных сообществах.// Диссертация д.б.н. М., 1994.

95. Пушкарева В.И. Экспериментальная оценка взаимодействий Yersinia pestis EV с почвенными инфузориями и возможности длительного сохранения бактерий в цистах простейших.//Журнал микробиологии, 2003,4,40 44.

96. Рожнова С.Ш. Сальмонеллезы: проблемы.// Эпидемиология и инфекционные болезни, 1999,2,39-41.

97. Романова Ю.М., Гинсбург A.JI. Есть ли сходство в механизмах образования «некультивируемых форм» у грамотрицательных бактерий и спор у бацилл?// молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1993,6,34 37.

98. Романова Ю.М., Гинсбург A.JI. Генетический контроль индукции некультивируемого состояния у патогенных бактерий.// ЖМЭИ, 1996,3, 16 -18.

99. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинсбург A.JI. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели Salmonella typhimurium: феномен и генетический контроль.// ЖМЭИ, 1997,4,35-41.

100. Романова Ю.Т. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели S. typhimurium: феномен и генетический контроль./Дис. д.б.н. М., 1997.

101. СанПиН 2.1.5.980 00. Гигиенические требования к охране поверхностных вод./М., 2000,16-17.

102. Севостьянова Е.В., Ряпис Л.А. Экология S. typhi и её связь с проявлениями брюшнотифозной инфекции.//ЖМЭИ, 1999,3, 93 98.

103. Седова Н.Н. // Лабораторное дело, 1975, 9,556 558.

104. Сергевкин В.И., Михалева Р.А. Этиологическая структура сальмонеллезов людей и серотиповый пейзаж сальмонелл, выделенных от сельскохозяйственных животных и из объектов окружающей среды.// ЖМЭИ, 1990,2,117-118.

105. Сидоренко Г.И., Талаева Ю.Г., Богдасарьян Г.А. Эффективность гигиенических мероприятий по ограничению циркуляции возбудителей кишечных инфекций в водоемах.// Материалы сессии АМН СССР: Актуальные вопросы кишечных инфекций. Ташкент, 1975,18-21.

106. Соколенко А.В., Миронова А.В., Меньшикова Е.А., Титова С.В.,

107. Соловых Г.Н, Фабарисова Л.Г., Нефедова Е.М. Влияние тепловых электростанций на санитарно-биологический режим водоемов.// Гигиена и санитария, 1998,6,24 27.

108. Стадникова С.М. Особенности биологии сальмонелл брюшного тифа и паратифа в условиях внешней среды.// Сб. н. тр.: Актуальные вопросы кишечных инфекций. Ташкент, 1984,31 -33.

109. Султанов Г.В., Раджиева Г.Р. Желчетиосульфатный бульон среда обогащения шигелл.// ЖМЭИ, 1989,4,112-113.

110. Табаева А.А., Котова A.JL, Кыраубаев К.К. Сальмонеллезы, вызванные возбудителями редких групп.// Эпидемиология и инфекционные болезни, 2001, 6, 35-39.

111. Ткачёва М.Н., Тихомиров Е.Д., Лобанова Е.А., Атакян Р.В., Хроменкова В.П. Распространение в мире и эпидемиологические особенности тифо-паратифозных инфекций.//ЖМЭИ, 1983,1,9- 15.

112. Талаева Ю.Г., Круглова Е.И., Бирк К.Ф. Моделирование передачи бактериальных кишечных инфекций при купании.// Гигиена и санитария, 1985, 12, 51-52.

113. Талаева Ю.Г., Немыря В.И., Богатырева М.Д. О количественном учете сальмонелл в речной воде.// Гигиена и санитария, 1979,4,46 48.

114. Трухина Г.М. Санитарно-показательные микроорганизмы в оценке эпидемиологической обстановки.// Сб. н. тр.: Региональные проблемы гигиены окружающей среды и здоровья населения. Ростов-на-Дону, 2002,7,146- 148.

115. Усманов У.М. Некоторые итоги деятельности санитарно эпидемиологической службы по контролю состояния окружающей среды в Ташкентской области Республики Узбекистан.// Гигиена и санитария, 2004,3,24 - 26.

116. ФС 42 3874 - 99. Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских и иммунобиологических препаратов./М., 1981.

117. Хамидов Г.К., Розина В.Ф., Оринова М.М., Санникова С.П. Некоторые эпидемиологические особенности сальмонеллеза в Андижане.// Сб. н. тр.: Актуальные вопросы кишечных инфекций. Ташкент, 1984,36 37.

118. Хмель Л.Ф. естественные резервуары сальмонелл в условиях г. Алма-Аты./ Автореферат к.б.н., Алма-Ата: Институт краевой патологии, 1972.

119. Цацка А.А., Головина С.В., Журавлев П.В., Мирович М.О. Влияние ряда природных факторов на выживаемость условно-патогенных микроорганизмов в водной среде.// Сб. н. тр.: Гигиенические аспекты охраны окружающей среды. Ростов-на-Дону, 1986,33.

120. Черкасский Б.Л, Рожнова С.Ш., Христюхина О.А., Соловьева В.К. Современные особенности эпидемиологического процесса сальмонеллезов в СССР.// ЖМЭИ, 1991,1,32-36.

121. Чижова Н.П. Основы селективного действия селенитовой среды./ Афтореферат к. м. н., М., 1972.

122. Четина Е.В., Гинсбург А.Л., Грижебовский Г.М., Македонова Л.Д. Исследование эпидемической значимости некультивируемых форм холерных вибрионов методом полимеразной цепной реакции.// Молекулярно-биологическая диагностика, 1992,3,21 -25.

123. Шахбазов Ш.Г. Эпидемиология брюшного тифа в Азербайджанской ССР.// Материалы конференции: Современные проблемы сальмонеллезов и вакцинопрофилактики кори. Москва Ереван, 1976,13 - 15.

124. Шахназарова Л.М. Усовершенствование санитарно-бактериологического контроля качества питьевой воды в целях профилактики кишечных инфекций./ Автореферат к. м. н., М., 1981.

125. Шелохович А.И., Кудрякова Т.А., Соколенко А.В., Качкина Г.В.

126. Шиманская С.А., Гипп Е.К., Ерошина С.С., Стулова Л.В., Шаров Л.И.

127. К вопросу о роли водного фактора в распространении острых сальмонеллезных гастроэнтеритов.// Сб. н. тр.: Проблемы санитарной микробиологии окружающей среды. М„ 1977,44-45.

128. Шур И.В. Заболевание сальмонеллезной этиологии./ М.: Медицина, 1970,304.

129. Экология микроорганизмов./ Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Издательский центр «Академия», 2004, 221 -222.

130. Эргашева Л.Э., Усманов И.А. К вопросу сохранения вирулентности бактерий брюшного тифа и паратифа в сточной воде и почве в условиях жаркого климата.// Гигиена и санитария, 1982,5, 85 87.

131. Эпидемиологическая обстановка в РФ в 2000 г.// II Ежемесячный информационный бюллетень «Здоровье населения и среда обитания», 2000,5, 22-23.

132. Эстрин Б.М., Пономарева-Герасимюк А.И., Опалатенко Я.В. К этиологии заболеваемости сальмонеллезом.// Лабораторное дело, 1990,11,69 70.

133. Юрко Л.П. Некоторые особенности инфекции вызываемой S. typhimurium в г. Ашхабаде./ Автореферат к.м.н., М.: Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии МЗ, 1971.

134. Яровой П.И. Влияние рек на уровень заболеваемости населения брюшным тифом.// Материалы IX Всесоюзной конференции: Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды. М., 1983,231 232.

135. Anis Shobirin М.Н., Shuhaimi М., Abu-Bakar F. Characterization of Salmonella spp. isolated from patients below 3 years old.// World J. of Microbiol. Biotech., 2003,19,751 -755.

136. Bakhrout-Ben F.A., Jeddi M., Tufenkji A. Ecological relationship between heterotrophic bacteria, fecal indicators and P. aeruginosa in Tunisian coastal seawater.// Rev. Int. Oceanogr. Med., 1992,105 106,79 -100.

137. Barcina J., Gonzales J.M., Iriberri J. Survival strategy of Escherichia coli and Enterococcus faecalis in illuminated fresh and marine systems.// J. Appl. Bacterid., 1990,68,189- 198.

138. Charkowski A.O., Barak J.D., Sarreal C.Z., Mandrell R.E. Differences in growth of Salmonella enterica and Escherichia coli 0157:H7 on alfalfa sprouts.// Appl. and Env. Microbiol., 2002,68 (6), 3114 3120.

139. Chipperfield P.J.N. The sea in a large scale extended aeration system.// Pollut. Monitor, 1974,16 (19), 21 -22.

140. Costa K., Bacher G., Allmaier G. The morphological transistion of Helicobacter pylori cells from spiral to coccoid is preceded by a substantial modification of the cell wall.//J. Bacteriology, 1999,181,3710-3715.

141. Colwell R.R., Brayton P.R., Grimes D.J. Viable but nonculturable Vibrio cholerae and related pathogens in the environment: implication for the release of genetically engineered microorganisms.// BioTechnology, 1985,3, 817 820.

142. Colwell R.R., Brayton P.R., Herrington D. Viable but nonculturable state in the human intestine.// World J. Microbiol. Biotechnol., 1996,12,28 31.

143. Di Pietro A., Scoglio M.E., Anzalone C. Effect of metal mixtures on Salmonella enteritidis viability in synthetic sewage.// Ann. Ig.: Med. Prev.comunita., 2000, 12 (6), 469-478.

144. Duncan S., Glover L.A., Killham H. Luminescence-based detection of activity of starved and viable but nonculturable bacteria.// Appl. Environm. Microbiol., 1994, 60 (4), 1308-1316.

145. Edel W., Guinee P.A.M., Van Schothorst M., Kampelmancher E.H. The role of effluents in the spread of Salmonella.// Infektionskr., Hyg. Abt. Orig., 1972,221 (4), 547-549.

146. FransiscoD.E., Mah R.A., Rabit A.C. Acridin orange epifluorescent technique for counting bacteria in natural waters.// J. Trans. Am. Microsc. Soc., 1973,92,416 421.

147. Grover P.S., Thakur K. Shimla drinking water a bacteriological analysis.// J. Commun. Diseases, 2001,33 (1), 44 - 52.

148. Hedrey G.E. Technical note. Some effect of pulp and water on microbiological water quality of river.// Water Res., 1982,7,1291 -1295.

149. Hoff K.A. Survival of Vibrio anguillarum and Vibrio salmonicida at different salinities.//Appl. Environ. Microbiol., 1989,55,1775 -1786.

150. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. Long-term persistence of toxigenic Vibrio cholerae 01 in mucilaginous sheath of a blue-green alga Anabaena variabilis Л J. Trop. Med. and Hyg., 1990,93 (2), 133 139.

151. Islam M.S., Hasan M.K., Miah M.A. Use of polymerase chain reaction and fluorescent-antibody methods for detecting viable but nonculturable Shigella dysenteriae type 1 in laboratory microcosms.// Appl. Environm. Microbiol., 1993,2,536 540.

152. Jones J.G., Simon B.M. An investigation of errors in direct counts of aquatic bacteria by epifluorescence microscopy, with reference to a new method for dyeing membrane filters.//J. Appl. Bacteriol., Baltimore, 1984,1,131 136.

153. Joux F., Le Baron P. Ecological implications of an improved direct viable count method for aquatic bacteria.// Appl. Environ. Microbiol., 1997,63 (9), 3643 3647.

154. Kampelmacher E. H., Jansen L. M. N. Salmonella und E. coli in Rhein und Maas beim Einstromen in der Niederlanden.//Zbl. Bakt. Hyg, I Abt. Orig. B, 1973, 158 (2), 177-182.

155. Kogure K., Simidu U., Taga N. A tentative direct microscopic methods for counting living marine bacteria.// Can. J. Microbiol., 1979,25,415 420.

156. Kolsky P. Water, sanitation and diarrhea the limited of understanding.// J. Med. Microbiol, 1993,38(1), 3.

157. Khanh N.B., Martin-Bauyer G. Epidemiologie des meladiss a transmission hydrigue.// Tech. Sci. Municip. 1983,7,330 336.

158. Kumar A., Kumar S. Survival kinetics of Salmonella enterica serotype senftenberg after heat and acid stress.// World J. of Microbiol. Biotech., 2003,19,985 987.

159. Mahasneh I. Isolation and characterization of faecal indicator bacteria from urban and rural natural drinking water sources.// Biomed. Lett., 1992,47,347 354.

160. McKay A.M. Viable but non-culturable forms of potentially pathogenic bacteria in water.// Lett. Appl. Microbiol., 1992,14,129-135.

161. Nebe-von-Caron G., Stephens P.G., Hewitt C.J. Analysis of bacterial function by multi-color fluorescence flow cytometry and single cell sorting.// J. Microbiol. Methods., 2000,42,97- 114.

162. Nilsson L., Oliver J., Kjelleberg S. Resuscitation of Vibrio vulnificus from the viable but nonculturable state.// J. Bacteriology, 1991,173 (16), 5054 5059.

163. Oliver J.D., Dagher M., Linden K. Induction of Escherichia coli and Salmonella typhimurium into the viable but nonculturable state following chlorination of wastewater.// J. of water and health., 2005,3 (3), 249 257.

164. Parker C.T., Guard-Petter J. Coutribution of flagella and invasion proteins to pathogenesis of S. enterica serovar enteritidis in chinks.// FEMS Microbiol. Lett., 2001, 201 (2), 287-191.

165. Parvery F., Chambrevil G., Becaund J.I., Cayeux P. Etude ecologique des Salmonella dans une riviere on zone urbanila Neine a Angers.// Rev. Epid. Med. Soc., 1974,22 (2), 125-136.

166. Pruss A., Kay D., Fewtrell L., Bartram J. Estimating the burden of disease from water, sanitation and hygiene at a global level.// Environ. Health Perspect., 2002, 110 (5), 537-542.

167. Rodriguez G.G., Phipps D., Ishiguro K. Use of a fluorescent redox probe for direct visualization of actively respiring bacteria.// Appl. Environ. Microbiol., 1994, 58 (6), 1801 1808.

168. Roszak D.B., Grimes D.G., Colwell R.R. Viable but nonculturable stage of Salmonella enteritidis in aquatic systems.// Can. J. Microbiol., 1984,30,334 338.

169. Resoner D.J. Water pollution Microbiology. Detection of bacterial pathogens and their occurrence.//J. Water. Pol. Contr. Fed., 1975,47 (6), 1581 1587.

170. Xilinas M.E., Paparassilion J.T. Sumie d'Escherichia coli dans des ecantillons d'eau de mer.// Arch. Hist. Pasteur Hellen., 1975,21,97 -103.

171. Wai S.N., Moriya Т., Kondo K. Resuscitation of Vibrio cholerae 01 strain TSI 4 from a viable but nonculturable state by heat shock.// FEMS Microbiol. Lett., 1996, 2, 187-191.

172. Zimmerman R., Itturiaga R., Becker-Birck J. Simultaneous determination of the total number of aquatic bacteria and the number there of involved in respiration.// Appl. Environ. Microbiol., 1978,36 (12), 926 935.1. ПРИЛОЖЕ

173. РОСПАТЕНТ Федеральное государственное учреждение «Федеральный институт промышленной собственности Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам» (ФГУ ФИПС)

174. Есрежкоаская наб., 30, корп. 1, Москва, Г-59, ГСП-5, 123995 Газетный 119 Телефон 240- 60-15. Телеке 1 N818 ПДЧ. Ф«*с 234-30-58 ' '-РНИИМП1. На№ 1113 от27.11.2006

175. Маш № 2006115322/13(016652)

176. При переписке просим ссылаться на номер заявки и сообщить Оиту получения данной корреспонденции

177. РЕШЕНИЕ О ВЫДАЧЕ ПАТЕНТА НА ИЗОБРЕТЕНИЕ

178. Заявка №200.6115322/13(016652) (22) Дата подачи заявки 03.05.2006

179. Дата начала отсчета срока действия патента 03.05.2006 (85) Дата начала рассмотрения международной заявки на национальной фазе

180. ПРИОРИТЕТ УСТАНОВЛЕН ПО ДАТЕ

181. Номер (32) Дата подачи) (33) Код Пункт(ы)первой (ых) заявки(ок) первой(ых) заявки(ок) страны формулы1.