Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка средств лечения при отравлении животных фосфорорганическими пестицидами

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка средств лечения при отравлении животных фосфорорганическими пестицидами"

На правах рукописи

ДАВЛЕТХАНОВА ЭЛЬМИРА МИРЗАБЕКОВНА

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ЛЕЧЕНИЯ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ЖИВОТНЫХ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИМИ ПЕСТИЦИДАМИ

03.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань -2010

003490912

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») г. Казань.

Научный руководитель: Доктор биологических наук

Асланов Рашид Михайлович

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор

Хисматуллина Наиля Анваровна Доктор биологических наук Папуниди Эллада Константиновна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Чувашская государственная

сельскохозяйственная академия»

Защита состоится чг^- 2010 года Стасов на заседании

диссертационного совета Д - 220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Казань, Научный городок - 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» (г. Казань).

Элеюронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru.

Автореферат разослан » ¿р* г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук ^^ Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Широкое использование лекарственных средств является одним из основных способов профилактики и терапии болезней животных. Создание новых лекарственных веществ предполагает поиск биологически активных соединений и их клиническое испытание. В последнее время все чаще для оценки токсичности лекарственных средств применяют методы биотестирования на различных биологических моделях (Г.Ф. Леванова, 2002; Т.В. Бойко, 1999; В.А. Антипов, А.Н. Трошин, 2009).

Вопрос внедрения альтернативных методов, в том числе культуральных, для изучения токсичности и безопасности лекарственных средств в систему доклинических исследований в России остается незавершенным. Между тем, в Европе оценка токсичности препаратов in vitro активно используется во многих сферах биотехнологии наравне с клиническими испытаниями. Основными мотивами для внедрения альтернативных методов являются этические соображения, исключающие эксперименты на животных и экономические, предусматривающие снижение материальных затрат на оценку безопасности потенциальных лекарственных средств (А.И. Марченко и др., 2000; Л.П. Михайлов, 2002; Г.Т. Айтдинов и др., 2008; Л.В. Коломбет и др., 2008). Интеграция России в европейские экономические структуры, в частности, предполагаемое вступление в ВТО, потребует принятия аналогичных европейским законодательных актов, ограничивающих использование животных для токсикологических испытаний (М.В. Тертичная, 2005; А.П. Еськов и др., 2003; Т.П. Денисова, Е.В. Симонова, 2008).

Одной из причин высокой заболеваемости и падежа животных является экологическая обстановка и несоблюдение санитарно-гигиенических требований. По данным Всемирной организации здравоохранения, значительную долю токсических экологических факторов составляют пестициды. Среди них одно из лидирующих мест занимают фосфорорганические пестициды (ФОП). В этой связи разработка средств для лечения животных при отравлениях данными

соединениями остается актуальной задачей ветеринарной фармакологии и токсикологии (Д.П. Елизаров и др., 2001; А.В.Иванов, 2007, 2009; C.B. Шабунин, 2009;).

Несмотря на большое количество препаратов, предназначенных для лечения острых интоксикаций ФОП, остается необходимым дальнейшее изыскание новых антидотных средств в связи с дороговизной и недостаточной эффективностью существующих препаратов (К.Х. Папуниди, М.Я. Тремасов, P.M. Асланов, 2009).

В ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» синтезирован ряд новых холинолитиков, эффективность которых предстояло установить. Кроме того было важно проследить особенности фармакологических и токсикологических эффектов химических препаратов на биообъектах разного уровня организации, начиная от клеточного (культура клеток) и органно-тканевого (изолированный отрезок тощей кишки кролика) до организменного (животные).

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ отдела токсикологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» по заданию «Токсикологическая безопасность» (№ гос. регистрации 01200202603).

1.2 Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение фармако-токсикологических свойств новых холинолитиков и возможности использования клеточных культур, органно-тканевого комплекса для первоначального скрининга холинолитиков и разработать антидотную рецептуру для защиты животных от отравлений ФОП.

Исходя из поставленной цели, решались следующие задачи:

1. Определить токсические дозы хлорофоса и карбофоса на перевиваемых культурах клеток почек крупного рогатого скота (MDBK), сирийского хомячка (ВНК - 21/13-02) и провести сравнительную оценку вновь синтезированных холинолитиков при совместном культивировании с ФОП на перевиваемых культурах клеток.

2. Определить влияние ФОП совместно с холинолитиками на изолированный отрезок тощей кишки кролика.

3. Определить параметры острой токсичности синтезированных холинолитиков и разработать антидотную рецептуру для лечения животных при отравлении ФОП.

4. Изучить гематологические, биохимические и электрокардиографические показатели при экспериментальной затравке лабораторных животных ФОП и лечении антидотной рецептурой.

1.3 Научная новизна работы. Впервые в сравнительном плане изучены токсические эффекты ФОП с использованием биообъектов разного уровня организации (культура клеток - изолированный нервно-мышечный препарат -организм).

На основе нового холинолитика разработана антидотная рецептура AJI-7, показана ее терапевтическая эффективность. Исследованы гематологические, биохимические и электрокардиографические показатели лабораторных животных при экспериментальной затравке и лечении разработанным антидотом.

1.4 Практическая значимость. На основании полученных данных рекомендовано использование перевиваемых культур клеток и изолированного нервно-мышечного препарата для определения токсичности пестицидов и для первоначального скрининга веществ с потенциально антидотными свойствами. Разработаны антидотная рецептура АЛ-7, предназначенная для лечения острых отравлений фосфорорганическими пестицидами, а также инструкция по применению антидота АЛ-7 для лечения животных при отравлении фосфорорганическими пестицидами, утвержденная начальником Главного Управления ветеринарии Кабинета Министров РТ от 12.11.2009г.

1.5 Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2009 гг.; научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Достижение молодых ученых - в производство» -(Казань, 2008), пятом съезде общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2008), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученных «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и

практики в современных условиях и пути их решения» (Казань, 2009), Втором съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России (Казань, 2009).

1.6 Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе одна статья - в издании, рекомендованном ВАК РФ.

1.7 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Обоснование возможности использования клеточных культур и изолированного нервно-мышечного препарата для оценки токсического действия фосфорорганических пестицидов и скрининга препаратов с потенциально антидотными свойствами.

- Разработка антидотной рецептуры (AJI-7) с изучением влияния на организм животных и оценка её терапевтической эффективности.

1.8 Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 155 страницах компьютерного текста и включает: общую характеристику, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложение. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 15 рисунками. Список литературы включает 235 источников, в том числе 44 зарубежных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории фармакологии и токсикологии сильнодействующих ядовитых веществ и секторе культур клеток и гибридомной технологии ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» (г. Казань) в период 2006 - 2009 гг.

В опытах использовали фосфорорганические пестициды: карбофос (АДВ 50%) и хлорофос (АДВ 94,7%), а также холинолитики, которые синтезированы в лаборатории химического синтеза отдела токсикологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» под руководством профессора Р.Д. Гареева.

В опытах in vitro использовали перевиваемые культуры клеток из коллекции ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»: MDBK - линия клеток почки бычка, ВНК - 21/13-02 -

линия клеток почки сирийского хомячка, которые хранили в жидком азоте при температуре - 196°С. Перед использованием клетки размораживали и культивировали при температуре 37°С до нормализации ростовых свойств (Р. Адаме, 1983; Б.И. Антонов, 1986). В последующем культивирование проводили монослойно при температуре 37°С на основе питательных сред Игла - MEM и 199, 0,5% - ного раствора гидролизата лактоальбумина и сыворотки крови бычьей. В готовую культуральную среду вносили антибиотики: стрептомицин, пенициллин и канамицин в дозе 100 ЕД/мл, 3%-ый раствор глутамина по 2,5 мл на 1,5 л готовой среды. Клеточные линии поддерживали путем периодического пассирования в культуральных матрасах объемом 200-250 мл.

Влияние пестицидов на культурально-морфологические свойства клеток определяли с учетом индекса пролиферации - отношения числа выросших клеток к числу засеянных. В культуру клеток вносили водные растворы карбофоса и хлорофоса. В качестве контроля использовали клеточную суспензию без внесения каких-либо веществ. Затем флаконы с культурой выдерживали в термостате при температуре 37°С в течение 72 часов. Подсчет посеянных и выросших клеток осуществляли в камере Горяева.

Опыты на изолированном препарате мышцы кишечника проводились на кроликах породы «Серый великан».

Острую токсичность определяли по методу Кербера (1931).

Эффективность антидотных рецептур проверяли на белых крысах и кроликах. Антидоты вводили внутримышечно при развитии характерных клинических признаков интоксикации (саливация, бронхоспазм, атаксия).

В ходе экспериментов изучали клиническое состояние животных, потребление корма и воды, изменение массы и температуры тела, частоту пульса и дыхания, регистрировалась продолжительность жизни, патологоанатомическая картина. После проведения необходимых процедур, определяемых целью и задачами эксперимента до опыта и на 3, 7, 10, 15, 20, 25, 30 сут брали кровь для исследований.

В крови животных определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов (А.А. Кудрявцев, 1969; И.П. Кондрахин, 1988).

Активность ацетилхолинэстеразы в крови определяли по методу Хестрина (1949), аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы - при помощи биохимического анализатора «EXPRESS PLUS», количество глюкозы - при помощи набора реактивов «Глюкостар».

Содержание общего белка в сыворотке крови определяли при помощи рефрактометра ИРФ - 454 БМ, белковые фракции - методом Олла и Маккарда в модификации С.А. Карпюка (1966), электрокардиографические исследования проводили на приборе ЭК 1 Т - ОЗМ и анализ кардиограммы - по второму отведению (В.В. Мурашко, 1987).

Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере, с использованием программ Microsoft Excel с применением критерия достоверности по Стьюденту. Различия между показателями считали достоверными при р< 0,05.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Изучение воздействия ФОП на перевиваемые культуры клеток MDBK и ВНК - 21/13-02

При проведении опытов по определению цитотоксичности использовали водные растворы хлорофоса, в концентрациях: 0,02, 0,004, 0,002, 0,0004, 0,0002, 0,00004 мг/мл и карбофоса - 0,022; 0,016; 0,008; 0,004; 0,002 мг/мл. В эксперименте использовали перевиваемые линии MDBK и ВНК - 21/13-02. Время инкубации с токсином составляло 72 ч, по истечении которого производили определение пролиферативной активности клеток.

Доза хлорофоса 2x10"2 мг/мл вызывала 100%-ную гибель исследуемых клеток, при воздействии карбофоса эта доза составила 22х10"2 мг/мл. Среднесмертельная доза хлорофоса составила 4х10'3 мг/мл, а карбофоса 16х10"2 мг/мл. Минимальная токсическая доза хлорофоса для обоих видов культур

составляла 4x10'", для карбофоса - 4x10'4 мг/мл. Разница в величине пролиферативной активности была незначительной.

3.2 Цитотоксичность хлорофоса на фоне воздействия различных холииолитиков

Внесение в клеточную суспензию хлорофоса осуществлялось в дозе 1С50, соответствующей для МБВК 0,002 мг/мл, для ВНК - 21/13-02 - 0,004 мг/мл. Одновременно с токсином в культуральную среду вносились водные растворы холинолитических средств в дозах 0,03; 0,003; 0,0003; 0,00003 мг/мл клеточной суспензии. Наиболее эффективной явилась доза 0,0003 мг/мл.

При внесении хлорофоса и антидотных средств в культуру клеток №ГОВК происходили достоверные изменения индекса пролиферации. Результаты представлены на рис. 1.

1. Контроль

2. Атропина сульфат +Хлорофое

3. А-З+Хлорофос

4. А-4+Хлорофос

5. А-7+Хлорофос

6. ГС-2+Хлорофос

7. ГС-З+Хлорофос

Рисунок 1. Цитотоксичность хлорофоса на фоне воздействия различных холинолитиков

При внесении хлорофоса с атропина сульфатом индекс пролиферации составил 72,4%. Защитная эффективность холинолитика А-3 выражалась в увеличении индекса пролиферации до 70,4%, при внесении холинолитика А-4 -73,3%. А-7 восстанавливал пролиферативную активность культур клеток до 85,1%. Препараты серии ГС-2 и ГС-3 показали низкую активность,

выражавшуюся в уменьшении индекса пролиферации до 41,5 и 50%, что ниже, значений, полученных при использовании атропина сульфата.

При совместном культивировании хлорофоса и ГС-2 пролиферативная активность для культуры клеток ВНК - 21/13-02 составила 51,9-, ГС-3 - 54,5%. При внесении в культуральную среду холинолитика А-3 пролиферативная активность клеток составила 65,2%, у препарата А-4 индекс пролиферации равнялся 72%. При совместном внесении хлорофоса и холинолитика А-7 пролиферативная активность составила &2,%%.

3.2 Цитотоксичность карбофоса на фоне воздействия различных холинолитиков

При совместном внесении в культуральную среду карбофоса и веществ, обладающих потенциальньно антидотными свойствами, происходило увеличение пролиферативной активности клеток. Результаты представлены на рис.2.

1. Контроль

2. Атропина сульфат +Карбофос

3. А-З+Карбофос

4. А-4+Карбофос

5. А-7+Карбофос 1

6. ГС-2+Карбофос

7. ГС-З+Карбофос

Рисунок 2. Цитотоксичность карбофоса на фоне воздействия различных холинолитиков

При внесении холинолитика А-3 в культуру клеток МБВК индекс пролиферации составил 68,7%, при внесении А-4 - 79%; при совместном культивировании карбофоса и препарата А-7 индекс пролиферации составил 87%. Препараты серии ГС в сочетании с карбофосом показали низкий результат и не

способствовали восстановлению роста культур клеток. Индекс пролиферации для ГС-2 составил 45,5%, для ГС-3 - 57,5%. Эффективность использования атропина сульфата на данной культуральной модели была равна 80,4%.

Для перевиваемой культуры клеток ВНК - 21/13-02 внесение холинолитика А-3 приводило к повышению индекса пролиферации до 71%. При использовании холинолитика А-4 в качестве терапевтического средства индекс пролиферации составил 76,5%, а препарата А-7 - 87,5%. При использовании холинолитика ГС-2 индекс пролиферации составил 47,5%, ГС-3 - 49,6%, а атропина сульфата - 68%.

3.3 Воздействие хлорофоса на моторику изолированного отрезка тощей кишки кролика

Изучение влияния хлорофоса на моторную функцию отрезка тощей кишки кролика показало, что токсин в концентрации 4x10"" г/мл вызывает значительные изменения в функциональном состоянии биообъекта. Так, через 1 мин опыта амплитуда спонтанных мышечных сокращений снижалась на 47,5 - через 5 мин -на 82,5-, а через 10 мин - на 85,0%. Частота спонтанной активности кишечника, напротив, в первые минуты опыта увеличилась и через 1 мин составила 111,1-, через 5 мин - 112,3-, а на 10 мин - снижалась до 88,3% относительно исходных величин. Увеличение концентрации пестицида до 5x10"4 г/мл вызывало еще более значительные изменения моторной функции кишечника, через 10 мин наблюдалось почти полное угнетение спонтанной активности биообъекта. Концентрация хлорофоса 6х10"4 г/мл уже через 1 мин вызывала снижение амплитуды спонтанных мышечных сокращений на 57,4%, а через 5 мин отмечалось полное угнетение моторной функции кишечника.

Таким образом, хлорофос вызывает зависимые от концентрации значительные частично обратимые изменения моторики изолированного отрезка тощей кишки кролика, которые выражаются в снижении амплитуды, увеличении частоты спонтанных сокращений в первые минуты с последующим значительным расслаблением гладких мышц.

3.4 Воздействие холинолитиков на моторику изолированного отрезка тощей кишки кролика

В следующей серии опытов в сравнительном плане изучали влияние холинолитиков на изолированный нервно-мышечный препарат.

Учитывая результаты опытов, полученные на перевиваемых культурах клеток, использовали холинолитики наиболее токсичный ГС-3 и наименее токсичный А-7 и для сравнения - атропина сульфат.

Реакция кишечника на введение в раствор ГС-3 в концентрации 3x10"4 г/мл, характеризовалась: мощным тоническим сокращением тощей кишки кролика, через 30 сек отмечалось некоторое снижение амплитуды тонического сокращения, а через 1 мин величина сокращений была ниже фоновых значений на 22,7%, а спустя 2, 3 и 4 мин амплитуда сокращений была выше на 33,4-, 32,0- и 26,7%, соответственно.

Внесение в инкубационный раствор холинолитика А-7 в концентрации 3x10"4 г/мл приводило через 1-2 мин к снижению амплитуды и частоты спонтанных мышечных фибрилляций биологического объекта на 44,5 — 50,0%.

Атропина сульфата в концентрации 3x10"4 г/мл вызывал угнетение моторной функции кишечника. Через 1 мин амплитуда спонтанных мышечных фибрилляций снижалась на 36,0% и оставалось на этом уровне, на 5 мин снижение амплитуды мышечных фибриляций составило 33,5%.

3.5 Действие холинолитика А-7 на гладкомышечный препарат, подвергнутый воздействию хлорофоса

Влияние хлорофоса испытывали на изолированном отрезке кишечника, который подвергали воздействию пестицида до и после введения холинолитика.

Опыты показали, что действие хлорофоса на биологический объект, предварительно обработанный А-7, не приводит к значительному нарушению моторной функции кишечника. При воздействии хлорофоса в концентрации 5х10"4 г/мл амплитуда спонтанных мышечных фибрилляций при 10-и минутном

воздействии возрастала всего на 0,7%- При внесении препарата А-7 на фоне 10-и минутного действия хлорофоса через 20-25 мин восстанавливала амплитуду спонтанных мышечных сокращений до 86,0 и 90,9%, соответственно относительно исходных величин.

Таким образом, проведенные эксперименты Показали, что холинолитик А-7 способствовал нормализации функционального состояния и работы моторики кишечника.

3.6 Определение острой токсичности новых холинолитиков

Исследования по : изучению острой токсичности новых холинолитиков проводились на 145 белых мышах массой 18-20 г. Животные были разделены по принципу аналогов на шесть групп. Первая группа получала холинолитик А-3, вторая - А-4, третья - А-7, четвертая - ГС-2, пятая - ГС-3. Холинолитики вводили в виде водных растворов подкожно. Животные шестой группы служили контролем и получали дистиллированную воду. Наблюдение за животными вели в течение 30 дней с момента введения препаратов. При проведении эксперимента учитывались признаки отравления, время гибели, количество выживших, а также быстрота восстановления функций организма. В ходе исследований были установлены средне - и абсолютно смертельные дозы холинолитиков для белых мышей, которые составили: для А-7 - 430 - и 550 мг/кг; А-3 - 275 - и 400 мг/кг; А-4 - 275- и 500 мг/кг; ГС-2 - 205- и 400 мг/кг и ГС-3 - 215- и 400 мг/кг, соответственно.

Из проведенных исследований следует, что наименее токсичным для белых мышей является холинолитик А-7. .

3.7 Разработка антндотной рецептуры АЛ-7

На основании результатов, полученных при использовании перевиваемых культур клеток и нервно-мышечного препарата, а также учитывая острую токсичность, для дальнейших исследований был отобран холинолитик А-7.

Для проведения эксперимента 72 белых крыс разделили на 12 групп. Животных отравляли перорально хлорофосом в абсолютно-смертельной дозе 1900 мг/кг.

Первые признаки отравления в виде беспокойства проявлялись уже через 2 мин после введения хлорофоса. В дальнейшем через 5-7 мин наблюдалось нарушение координации движения, атаксия. Через 13-15 мин отмечали сильный тремор, а также обильное слюнотечение, появлялись хрипы. На 18-20 мин у животных развивались сильные судороги (клонические и клонико-тонические), затем они впадали в коматозное состояние. Гибель наступала на 20-35 мин.

Антидотные рецептуры вводили внутримышечно при развитии таких симптомов отравления, как угнетение, беспокойство, саливация, бронхоспазм, судороги. В ходе проведенных экспериментов была разработана наиболее эффективная рецептура, условно названная АЛ-7, включающая в себя холинолитик А-7 в дозе 25 мг/кг, дипироксим -10 мг/кг, бромистый натрий -10 мг/кг и глюкозу - 10 мг/кг. При введении антидота АЛ-7 клинические признаки отравления исчезали через 5-10 мин, восстанавливалось дыхание. Судороги прекращались на 8-10 мин, через 15-20 мин животные вставали. Через 5-6 ч животные начинали передвигаться по клетке. Гибель животных в ходе опыта не зафиксирована.

3.8 Терапевтическая эффективность антидотной рецептуры АЛ-7 при отравлении кроликов ФОП

Защитная эффективность антидотной рецептуры АЛ-7 изучалась на 18 кроликах обоего пола массой 2,5 - 3 кг, разделенных по принципу аналогов на 3 группы.

Животным первой группы (контрольной) вводили хлорофос перрорально в дозе 525 мг/кг (ЫЭ50). Клинические признаки интоксикации проявлялись у контрольных животных в виде угнетения через 5-10 мин с момента введения яда, через 15-27 мин отмечались легкие хрипы, тремор, бронхоспазм, а спустя 43-45 мин у кроликов наблюдали усиление хрипов, обильное истечение из носовой и

ротовой полости, развивались клонические и клонико-тонические судороги. Через 70-140 мин пали 3 контрольных кролика.

*У животных, отравленных среднесмертельными дозами хлорофоса на 7-е сут исследования отмечалось увеличение активности щелочной фосфатазы на 8,7-, на 10-е сут - на 14,3%. К концу исследования данный показатель был выше фона на 11%. Активность аланинаминотрансферазы на 7-е и 30-е сут исследования увеличилась на 10- и 10,5%. В активности аспартатамино-трансферазы в сыворотке крови подопытных животных на 10-е, 15-е - и 30-е сут повышалась на 12,8-, 28,6-, и 5,7%, соответственно.

Кроликам второй группы хлорофос вводили в тех же дозах и при развитии характерных клинических признаков (саливация, атаксия, бронхоспазм) лечили антидотом АЛ-7. Через 8-12 мин с момента введения антидота происходило улучшение дыхания, прекращались судороги, спустя 20-25 мин животные начинали передвигаться по клетке, реагировать на внешние раздражители. В крови кроликов опытной группы активность щелочной фосфатазы увеличилась на 3-й сут на 17,9%, на 7-е и 10-е сут - на 28,2 и 33,6%, соответственно. К 30- м сут исследования активность фермента была выше фоновых значений на 12,5%. Активность аланинаминотрансферазы на 7-е сут исследования повысилась на 8% и продолжала повышаться, на 20-е сут данный показатель был выше фоновых значений на 23,7%, к 25-м сут происходило снижение активности до уровня фона. При исследовании аспартатаминотрансферазы было отмечено увеличение активности на 3-й сут - на 25%, на 20-е сут разница с фоновыми значениями составила 4,9%. Изменения активности ацетилхолинэстеразы представлена на рис. 3.

фон 3 7 10 15 20 25 30

О Затравка хлорофосом

■ Затравка хлорофосом и лечение антидотной рецептурой АЛ-7

Рисунок 3. Активность ацетилхолинэстеразы в крови кроликов при затравке хлорофосом и лечении антидотной рецептурой АЛ-7

Как видно из данных рисунка 3, активность ацетилхолинэстеразы в крови кроликов, отравленных хлорофосом в среднесмертельной дозе, значительно снизилась и на 3-й сут исследования составляла 21,6-, на 7-и сут - 34,5%, на 10-е сут этот показатель был равен 42%, на 15-е и 20-е сут активность составляла 52,3-и 59,3%, соответственно. На 30-е сут исследования было отмечено восстановление данного показателя на 70,2%.

У кроликов второй группы, леченных антидотной рецептурой АЛ-7 активность фермента на 3-й сут составила 51,6-, на 7-е - 63,5%, на 20-е сут исследования уровень данного показателя отличался от контроля на 10% и к концу эксперимента был близок к фоновым значениям.

Во второй серии опытов изучали эффективность антидота АЛ-7 при отравлении кроликов абсолютно-смертельными дозами хлорофоса. Контрольным кроликам (3 гол) хлорофос вводили в абсолютно-смертельной дозе (750 мг/кг). Подопытных животных (4 гол) подвергали затравке в тех же дозах, но при развитии клинических признаков отравления (саливация, бронхоспазм, судороги) вводили антидотную рецептуру АЛ-7. Через 15-17 мин с момента введения антидота нормализовалось дыхание, прекращались судороги. Через 2-3 ч

животные начинали передвигаться по клетке, реагировать на внешние раздражители.

Проведенные исследования показали, что у отравленных и леченных антидотом АЛ-7 животных активность ацетилхолинэстеразы на 3-й сут исследования снизилась до 34,2-, на 7-е сут составила 37,5-, на 10 сут - 53,1-, на 15-е сут - 63,6%, на 30-е сут исследования активность фермента составила 83,8%. Содержание в сыворотке крови щелочной фосфатазы увеличивалось, так на 3-й сут исследования увеличение составило 26,9, на 15-е - на 38,5%. К концу эксперимента увеличение активности составило 22%. При исследовании на 3-й сут аланинаминотрансферазы можно отметить повышение активности на 11,7%, на 7-е сут - на 35,1%, к 20-м сут данный показатель превышал фоновые на 12%, к концу исследования ферментная активность превышала фоновые значения на 5,7%. При изучении активности аспартатаминотрансферазы также происходило увеличение, на 3-й сут на 20,6%, на 7-и и 10-е сут - на 43,7 и 47,5%, соответственно, а к концу эксперимента активность фермента превышала фоновые значения на 9,1%.

3.9 Исследование сердечной деятельности кроликов, отравленных хлорофосом и леченных антидотом АЛ-7

Эксперименты проводились на 11 кроликах породы «Серый великан» массой 2,5-3 кг. Для этого были сформированы 2 группы. Животным первой группы (контрольной) вводили хлорофос в среднесмертельной дозе, второй группы (опытной), при развитии характерных признаков отравления вводили антидотную рецептуру АЛ-7.

Следует отметить, что на 10 мин эксперимента у кроликов обеих групп отмечалось увеличение зубца Р, что характеризует ухудшение предсердно-желудочковой проводимости, увеличение электрической систолы сердца. Наблюдалось также удлинение зубца Я. Эти изменения обнаруживались сравнительно рано, еще до появления видимых признаков отравления ФОП и свидетельствуют о повышении тонуса блуждающего нерва.

На 20-й мин эксперимента наблюдалось уменьшение вольтажа зубцов О и Т, на фоне продолжающего увеличения вольтажа зубцов Р и К, а также удлинение интервала РС>, (^ЮТ, Ш1.

Удлинение величины амплитуды рИБ наблюдалось у животных обеих групп на 30 мин исследования, происходит это, вероятно, вследствие нарушения проводимости во внутрежелудковой проводниковой системе и возможного поражения сердечной мышцы.

На 60-й мин эксперимента отмечались удлинение интервала Р(2, а также ОЯБТ, замедление ритма сердечной деятельности, продолжающееся увеличение высоты зубцов Р и Я, связанного с нарушением функций проводящей системы сердца по типу неполной атрио-вентикулярной блокады. Следует отметить, что в опытной группе отмечено отсутствие зубца О и Б.

На 90-й мин у контрольных животных отмечено отсутствие зубца О и 8, вольтаж зубцов Р и Я увеличен. Через 24 ч после начала эксперимента у затравленных животных показано незначительное увеличение зубцов Р, и Я. Интервалы <3118 и С^БТ были меньше фоновых значений.

У подопытных животных на 90 мин отмечается снижение амплитуды зубцов Р и Я, появление зубцов С? и Б, уменьшение интервалов РС>, ОЯБТ, ИЛ. На 150-й мин эксперимента у леченных животных отмечено восстановление данных показателей до уровня фона.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально показана возможность использования перевиваемых культур клеток МОВК, ВНК - 21/13-02 и изолированного нервно-мышечного препарата для скрининга холинолитиков. По максимальной активности индекса пролиферации клеток (83-88%) отобран холинолитик А-7.

2. Холинолитик А-7 (3x10"4 г/мл) способствует восстановлению функционального состояния работы моторики кишечника при воздействии на него хлорофоса в дозе 5хЮ'4г/мл.

3. Среднесмертельная и абсолютно-смертельная дозы холинолитиков для мышей составляют: А7 - 430- и 550 мг/кг, А-3 - 275- и 400 мг/кг, А-4 - 275- и 500 мг/кг; ГС-2 - 205- и 400 мг/кг, ГС-3 - 215- и 400 мг/кг, соответственно.

4. На основе холинолитика А-7 в дозе 25 мг/кг, реактиватора холинэстеразы -дипироксима - 10 мг/кг, седативного средства - бромистого натрия - 10 мг/кг и общеукрепляющего средства - глюкозы - 10 мг/кг, разработана антидотная рецептура АЛ-7, которая защищает от гибели 90-100% животных, отравленных абсолютно-смертельными дозами хлорофоса.

5. Введение антидотной рецептуры АЛ-7 в терапевтической дозе не вызывает изменения гематологических (эритроциты, лейкоциты, гемоглобин, СОЭ) и биохимических (активность АХЭ, количество общего белка и его фракций) показателей у животных.

6. Лечение антидотом АЛ-7 лабораторных животных при отравлениях хлорофосом ускоряет восстановление активности ацетилхолинэстеразы крови, нормализует сердечную деятельность и положительно влияет на гематологические и биохимические показатели.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Показана возможность использования культур клеток и изолированного нервно-мышечного препарата для определения токсичности фосфорорганических пестицидов, а также для скрининга веществ, обладающих потенциально антидотными свойствами. ■

2. Для лечения отравлений фосфорорганическими пестицидами разработана антидотная рецептура АЛ-7, состоящая из холинолитика А-7 в количестве 25 мг/кг, дипироксима - 10 мг/кг, бромистого натрия - 10 мг/кг и глюкозы - 10 мг/кг.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зухрабова, Э.М. Исследование воздействия хлорофоса и холинолитика А-2 на перевиваемые культуры клеток / Э.М. Зухрабова // Матер. Всерос. науч.-практич. конф. молодых ученых и специалистов «Достижения молодых ученых -в производство». - Казань, 2008. - С. 43-45;

2. Зухрабова, Э.М. Влияние различных доз карбофоса на перевиваемые культуры клеток MDBK и ВНК - 21/13-02 / Э.М. Зухрабова // Матер. Всерос. науч.-практич. конф. молодых ученых «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и практики в современных условиях и пути их решения», посвященная памяти Р.Г. Гареева. 25-27 февраля 2009 г. - Казань, 2009.-С. 375-378;

3. Зухрабова, Э.М. Определение токсических доз карбофоса и хлорофоса на перевиваемых культурах клеток MDBK и ВНК - 21/13-02 / Э.М. Зухрабова, Е.Ю. Хамзина, Р.Я. Гильмутдинов, P.M. Асланов /Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им, Н.Э. Баумана. - Казань: 2009.-С. 103-107.

4. Зухрабова, Э.М. Изучение лечебной эффективности антидотных рецептур, созданных на основе вновь синтезированных холинолитиков / P.M. Асланов, Р.Д. Гареев, И.Г. Хайрутдинов, Э.М. Зухрабова // Матер. Второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России - Казань, 2009. - С. 535-539;

5. Зухрабова, Э.М. Влияние ФОП и антидота AJ1-5 на активность холинэстеразы в органах кроликов / A.M. Аймалетдинов, P.M. Асланов, Э.М. Зухрабова, Г.Р. Юсупова // Матер. Второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России - Казань, 2009. - С. 34-36;

6. Зухрабова, Э.М. Эффективность антидота AJI-5 при отравлении кроликов хлорофосом /A.M. Аймалетдинов, P.M. Асланов, Р.Д. Гареев, Э.М. Зухрабова // Матер. Второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России -Казань, 2009. - С. 36-38;

7. Зухрабова, Э.М. Изучение терапевтической эффективности AJI-7 при отравлении белых крыс абсолютно-смертельными дозами хлорофоса/ Э.М. Зухрабова, P.M. Асланов, И.Г. Хайрутдинов/ Ветеринарная медицина домашних животных: Сб. статей. Вып. 6. - Казань: Печатный двор, 2009. -73 с.

8. Зухрабова, Э.М. Разработка антидотных рецептур для лечения отравлений фосфорорганическими соединениями /Э.М. Зухрабова, P.M. Асланов, Р.Д. Гареев, И.Г. Хайрутдинов/ Ветеринарная медицина домашних животных: Сб. статей. Вып. 6. - Казань: Печатный двор, 2009. -75с.

Отпечатано в ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф.207

Тел: 272-74-59,541-76-41, 541-76-51. Лицензия ПД№7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 18.12.2009 г. Печ.л.1,0 Заказ М К-6811. Тиршк 100 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Давлетханова, Эльмира Мирзабековна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общая характеристика фосфорорганических соединений.

2.2. Механизм действия фосфорорганических пестицидов на организм.

2.3. Диагностика и средства лечения при отравлении фосфорорганическими пестицидами.

2.4. Альтернативные модели в токсикологических исследованиях.

2.4.1. Применение культур клеток в токсикологических исследованиях.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.2. Результаты собственных исследований.

3.2.1. Исследование цитотоксичности карбофоса и хлорофоса на перевиваемых культурах клеток.

3.2.1.1. Изучение воздействия хлорофоса на перевиваемые культуры клеток МОВК и ВНК - 21/13-02.

3.2.1.2. Изучение воздействия карбофоса на перевиваемые культуры клеток МОВК и ВНК-21/13-02.

3.2.2. Использование культур клеток МОВК и ВНК - 21/13-02 для скрининга холинолитиков.

3.2.2.1. Цитотоксичность хлорофоса на фоне воздействия различных холинолитиков.

3.2.2.2. Цитотоксичность карбофоса на фоне воздействия различных фармакологических средств.

3.3. Изучение влияния ФОП и холинолитиков на гладкомышечные органы кролика.

3.3.1. Воздействие хлорофоса на моторику изолированного отрезка тощей кишки кролика.

3.3.2. Воздействие холинолитиков на моторику изолированного отрезка тощей кишки кролика.

3.3.3. Действие холинолитика А-7 на гладкомышечный препарат подвергнутый воздействию хлорофоса.

3.4. Определение острой токсичности новых холинолитиков.

3.5. Разработка антидотной рецептуры AJI-7.

3.6. Влияние антидотной рецептуры AJI-7 на динамику показателей крови животных.

3.6.1. Биохимические и гематологические показатели крови животных при введении антидотной рецептуры AJI-7.

3.6.2. Терапевтическая эффективность антидота AJI-7 при отравлении белых крыс хлорофосом.

3.6.3. Терапевтическая эффективность применения антидотной рецептуры AJI-7 при экспериментальной затравке кроликов фосфорорганическими пестицидами.

3.7. Исследование сердечной деятельности кроликов, отравленных хлорофосом и леченных антидотной рецептурой AJI-7.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка средств лечения при отравлении животных фосфорорганическими пестицидами"

Вопрос внедрения альтернативных методов, в том числе культуральных, для изучения токсичности и безопасности лекарств в систему доклинических исследований в России остается незавершенным. Между тем, в Европе оценка токсичности препаратов in vitro активно используется во многих сферах биотехнологии наравне с клиническими испытаниями. Основными мотивами для внедрения альтернативных методов являются этические соображения, исключающие эксперименты на животных и экономические, предусматривающие снижение материальных затрат на оценку безопасности потенциальных лекарственных препаратов (А.И. Марченко и др., 2000; Л.П. Михайлов, 2002; Г.Т. Айтдинов и др., 2008; Л.В. Коломбет и др., 2008). Интеграция России в европейские экономические структуры, в частности, предполагаемое вступление в ВТО, потребует принятия аналогичных европейским законодательных актов, ограничивающих использование животных для токсикологических испытаний (М.В. Тертичная, 2005; А.П. Еськов и др., 2003; Т.П. Денисова, Е.В. Симонова, 2008).

Одной из причин высокой заболеваемости и падежа животных является экологическая обстановка и несоблюдение санитарно-гигиенических требований. По данным Всемирной организации здравоохранения, значительную долю токсических экологических факторов составляют пестициды. Среди них одно из лидирующих мест занимают фосфорорганические пестициды (ФОП). В этой связи разработка средств для лечения животных при отравлениях данными соединениями остается актуальной задачей ветеринарной фармакологии и токсикологии (Д.П. Елизаров и др., 2001; А.В.Иванов, 2007, 2009; C.B. Шабунин, 2009;).

Несмотря на большое количество препаратов, предназначенных для лечения острых интоксикаций ФОП, остается необходимым дальнейшее изыскание новых антидотных средств в связи с дороговизной и недостаточной эффективностью существующих препаратов (К.Х. Папуниди, М.Я. Тремасов, P.M. Асланов, 2009).

В ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» синтезирован ряд новых холинолитиков, эффективность которых предстояло установить. Кроме того было важно проследить особенности фармакологических и токсикологических эффектов химических препаратов на биообъектах разного уровня организации, начиная от клеточного (культура клеток) и органно-тканевого (изолированный отрезок тощей кишки кролика) до организменного (животные).

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ отдела токсикологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» по заданию «Токсикологическая безопасность» (№ гос. регистрации 01200202603).

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение фармако-токсикологических свойств новых холинолитиков и возможности использования клеточных культур, органно-тканевого комплекса для первоначального скрининга холинолитиков и разработать антидотную рецептуру для защиты животных от отравлений ФОП.

Исходя из поставленной цели, решались следующие задачи:

1. Определить токсические дозы хлорофоса и карбофоса на перевиваемых культурах клеток почек крупного рогатого скота (MDBK), сирийского хомячка (ВЕК - 21/13-02) и провести сравнительную оценку вновь синтезированных холинолитиков при совместном культивировании с ФОП на перевиваемых культурах клеток.

2. Определить влияние ФОП совместно с холинолитиками на изолированный отрезок тощей кишки кролика.

3. Определить параметры острой токсичности синтезированных холинолитиков и разработать антидотную рецептуру для лечения животных при отравлении ФОП.

4. Изучить гематологические, биохимические и электрокардиографические показатели при экспериментальной затравке лабораторных животных ФОП и лечении антидотной рецептурой.

Научная новизна работы. Впервые в сравнительном плане изучены токсические эффекты ФОП с использованием биообъектов разного уровня организации (культура клеток — изолированный нервно-мышечный препарат — организм).

На основе нового холинолитика разработана антидотная рецептура АЛ-7, показана ее терапевтическая эффективность. Исследованы гематологические, биохимические и электрокардиографические показатели лабораторных животных при экспериментальной затравке и лечении разработанным антидотом.

Практическая значимость. На основании полученных данных ^ рекомендовано использование перевиваемых культур клеток и изолированного нервно-мышечного препарата для определения токсичности пестицидов и для первоначального скрининга веществ с потенциально антидотными свойствами. Разработаны антидотная рецептура АЛ-7, предназначенная для лечения острых отравлений фосфорорганическими пестицидами, а также инструкция по применению антидота АЛ-7 для лечения животных при отравлении фосфорорганическими пестицидами, утвержденная начальником Главного Управления ветеринарии Кабинета Министров РТ от 12.11. 2009г.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2009 гг.; научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Достижение молодых ученых - в производство» -(Казань, 2008), пятом съезде общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2008), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученных «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и практики в современных условиях и пути их решения» (Казань, 2009), Втором съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России (Казань, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе одна статья - в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Обоснование возможности использования клеточных культур и изолированного нервно-мышечного препарата для оценки токсического действия фосфорорганических пестицидов и скрининга препаратов с потенциально антидотными свойствами.

- Разработка антидотной рецептуры (АЛ-7) с изучением влияния на организм животных и оценка её терапевтической эффективности.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 155 страницах компьютерного текста и включает: общую характеристику, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложение. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 16 рисунками. Список литературы включает 235 источников, в том числе 44 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Давлетханова, Эльмира Мирзабековна

1. Экспериментально показана возможность использования перевиваемых культур клеток MDBK, ВНК - 21/13-02 и изолированного нервно-мышечного препарата для скрининга холинолитиков. По активности индекса пролиферации клеток (83-88%) и нервно-мышечного препарата (91%) отобран холинолитик А-7.2. Холинолитик А-7 (3x10"4 г/мл) способствует восстановлению функционального состояния работы моторики кишечника при воздействии на него хлорофоса в дозе 5x10"4 г/мл.3. Среднесмертельная и абсолютно-смертельная дозы холинолитиков для мышей составляют: А7 - 430 и 550 мг/кг, А-3 - 275 и 400, А-4 - 275 и 500; ГС-2 - 205 и 400, ГС-3 - 215 и 400 мг/кг, соответственно.4. На основе холинолитика А-7 в дозе 25 мг/кг, реактиватора холинэстеразы -дипироксима - 10 мг/кг, седативного средства -бромистого натрия — 10 мг/кг и общеукрепляющего средства -глюкозы — 10 мг/кг, разработана антидотная рецептура АЛ-7, которая защищает от гибели 90-

100% животных, отравленных абсолютно-смертельными дозами хлорофоса.5. Введение антидотной рецептуры АЛ-7 в терапевтической дозе не вызывает изменения гематологических (эритроциты, лейкоциты, гемоглобин, СОЭ) и биохимических (активность АХЭ, количество общего белка и его

фракций) показателей у животных.6. Лечение антидотом АЛ-7 лабораторных животных при отравлениях хлорофосом ускоряет восстановление активности ацетилхолинэстеразы крови, нормализует сердечную деятельность и положительно влияет на гематологические и биохимические показатели.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Показана возможность использования культур клеток и изолированного нервно-мышечного препарата для определения токсичности фосфороганических пестицидов, а также для скрининга веществ обладающих потенциально антидотными свойствами.2. Для лечения острых отравлений фосфорорганическими пестицидами разработана антидотная рецептура АЛ-7, состоящая из холинолитика А-7 в количестве 25 мг/кг, дипироксима - 10 мг/кг, бромистого натрия - 10 мг/кг, глюкозы — 10 мг/кг

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Давлетханова, Эльмира Мирзабековна, Казань

1. Абженов, В.К. Защита растений в Казахстане / В.К. Абженов // Защита и карантин растений. - 2006. - № 10. - С. 10-12.

2. Адаме, Р. Методы культуры клеток для биохимиков / Р. Адаме. М.: Мир, 1983.-264 с.

3. Айдинов, Г.Т. Альтернативные методы исследования при экспертизе товаров детского ассортимента / Г.Т. Айтдинов, Э.М. Гайсинская, И.П. Кульцев и др.// Тезисы докладов 3-его съезда токсикологов России, -М.: 2008.-С. 131-133.

4. Аймалетдинов, A.M. Изучение терапевтической эффективности антидота АЛ-5 при отравлении животных хлорофосом / A.M. Аймалетдинов// Материалы научно-практ. конф. молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии». Казань, 2007. -С. 7-9.

5. Аймалетдинов, A.M. Эффективность антидота АЛ-5 при отравлениях / A.M. Аймалетдинов, P.P. Гайзатуллин // Ветеринарный врач. — 2008. -№4.-С. 8-10.

6. Акимов, Г.А. Изменения нервной системы при острой интоксикации карбофосом / Г.А. Акимов, И.П. Колесниченко, Н.В. Владеева // Сов. медицина. 1997. - №9. - С. 21-24.

7. Алтаева, A.A. Микроядерный тест на клетках щитовидной железы как скрининговый метод в токсикологических исследованиях / A.A.Алтаева, JI.П. Сычева, H.H. Беляева // Тезисы докладов 3-его съезда токсикологов России-М.: 2008. 137 с.

8. Аничков, C.B. Избирательное действие медиаторных средств. /Л.Н. Аничков. Л.: Медицина, 1974. - 295 с.

9. Антонов Б.И., Яковлев Т.Ф., Дерябина В.И. и др. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические: Справочник. / Антонова Б.И., Т.Ф. Яковлев М.: Агропромиздат, 1991 - 287с.

10. Асланов, P.M. Новые антидоты при отравлении животных фосфорорганическими и карбаматными пестицидами / P.M. Асланов, И.Г. Хайрутдинов, H.H. Жестков и др. // Ветеринарный врач. 2005. -№2. С. 7-9.

11. Багданов, Н.Р. Механизм действия нейротоксичных инсектицидов / Н.Р. Багданов, М.Г. Мигранов // Агрохимия. 1996. - №12. - С. 110121.

12. Бадюгин И.С. Экстремальная токсикология: руководство для врачей / И.С. Бадюгин, Ш.С. Каратай, Т.К. Константинова // Под ред. Е.А. Лужникова. ГЭОТАР - Медицина. 2006. - 416 с.

13. Байматов, В.Н. Морфологические и биохимические изменения в организме животных и человека при патологии печени / В.Н. Байматов, Э.Г. Давлетов. M., 1999. - 187 с.

14. Баженов C.B. Ветеринарная токсикология. Ленинград.: Колос, 1970 — 320с.

15. Балан Г.М. Проблема острых отравлений пестицидами в сельском хозяйстве. /Г.М. Балан, Г.С. Иванов, В.А. Бабич //Сельское хозяйство во втором тысячелетии. — Украина, Киев, 1998. — 39 с.

16. Батищев, И.С. К оценке биологического действия нового антидота производственного назначения /И.С. Батищев// Тезисы докладов 3-го съезда токсикологов России. М.: 2008. — 55 с.

17. Березовская И.В. Альтернативные методы в лекарственной токсикологии в настоящем и будущем /И.В.Березовская, В.М. Иванова, Ю.А. Спасский // Тезисы докладов 1-го съезда токсикологов России. М., 1998. 269 с.

18. Бойко, O.B. Влияние токсических веществ на условно-патогенные микроорганизмы / О.В. Бойко, В.Н. Салько, A.B. Бойко и др. // Гигиена и санитария. 2002. - №1. - С. 54-56.

19. Бойко, Т.В. Использование культуры тканей в токсикологической оценке гербицида Хармони / Т.В. Бойко // Ветеринария. 1999. - №7. -С. 48-49.

20. Болдырева, В.В. Альтернативные методы в практике работы токсикологической лаборатории тульской области / В.В.Болдырева, С.Н. Петрова, В.А. Щеглова, Г.Е. Савушкина //Тезисы докладов 3-й съезд токсикологов России. М., 2008. С. 64-65.

21. Василос, А.Ф. Действие пестицидов на эксплантированные клетки / А.Ф. Василос, И.Г. Шройт, В.Д. Дмитриенко, Е.А. Тодорова // Гигиена труда и профессиональные заболевания. 1982. - №6. - С. 21-24. .

22. Василос, А.Ф. Цитотоксическое и цитогенетическое свойства пестицидов / А.Ф. Василос. — Кишинев: Наука, 1980. 120 с.

23. Васильева, Е.А. Краткий справочник ветеринарного лаборанта-химика / Е.А. Васильева. -М.: Россельхозиздат, 1980. 148 с.

24. Аргунова, М.Н. Ветеринарная токсикология с основами экологии: учебное пособие / Под. ред. М.Н. Аргунова. СПб.: Лань, 2007. С. 177193.

25. Куценко С.А. Военная токсикология, радиобиология и медицинская защита: учеб. пособие для студентов мед. вузов / Воен. мед. акад. им . С.М. Кирова: под ред. С.А.Куценко. СПб.: Фолиант, 2004. 527 с.

26. Войтович, A.M. Цитотоксическое действие полисахаридного комплекса Горца Вейриха / A.M. Войтович, Е.С. Дружинина, A.M. Бондарчук, Л.Н. Журихина // Материалы третьего съезда токсикологов России, 2008. С 73-74.

27. Ганиев, М.М. Химические средства защиты растений: учеб. пособие для вузов / М.М. Ганиев, В.Д. Недорезков. М.: Колос. - 2006. - 248 с.

28. Гембицкий, E.B. Антидотная терапия отравлений хлорофосом / Е.В. Гембицкий, Е.А. Мошкин, Г.В. Максимов // Военно- мед. журнал. — 1970.-№Ю.-С. 49-53.

29. Гембицкий, Е.В. Патогенез, диагностика и лечение острой дыхательной недостаточности при интоксикации фосфорорганическими инсектицидами / Е.В. Гембицкий, В.А. Гайдук, В.В. Закурдаев // Сов. Медицина. 1978. - №10. - С. 93-99.

30. Гильмутдинов, Р.Я. Физиология крови / Р.Я. Гильмутдинов, Р.З. Курбанов // Казань: Изд-во ТГТИ. 1999. - 184 с.

31. Годиков, H.H. Антихолинэстеразные свойства некоторых фосфорорганических соединений / H.H. Годиков. М.: Наука, 1972. -С. 423-431.

32. Голиков, С.Н. Профилактика и терапия отравления отравлений фосфорорганическими инсектицидами / С.Н. Голиков. М.: Медицина, 1968.- 168 с.

33. Голиков, С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, Н.В. Саноцкий, JI.A. Тиунов. М.: Медицина, 1986. - 280 с.

34. Голиков, С.Н. Современные представления о природе холинорецептера / С.Н. Голиков, С.Г. Кузнецов // Вестник АМН СССР. 1970. - №2. - С. 67-85.

35. ГОСТ Р ИСО 10993.5-99. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 5. Исследование на цитотоксичность: методы in vitro. М., ИПК Издательство стандартов, 2000.

36. Гусейнова, Н.М. Изучение активности некоторых ферментов печени при воздействии пестицидов /Н.М. Гусейнова// Актуальные вопросыклинической и теоретической медицины: Сб. научн. ст. Кишинев, -1991.-С. 33-35.

37. Гущин, JI.A. Отравления животных средствами защиты растений // 1-й съезд вет. врачей Респулики Татарстан. Казань, 18-20 мая, 1996. С. 253-256.

38. Дагаев, В.Н. Клинико-морфологическая токсикодинамика отравлений фосфорорганическими инсектицидами / В.Н. Дагаев, А.И. Искандеров, K.M. Самибаев // Суд. мед. экспертиза. 1991. - №2. - С. 34-37.

39. Данилова, JT.A. Анализы крови и мочи / JI.A. Данилова СПб.: Деан, 1999.- 128 с.

40. Денисова, Т.П. Дафнии как тест-объект в токсикогенетических исследованиях / Т.П. Денисова, Е.В. Симонова // Тезисы докладов 3-го съезд токсикологов России, СПб.,2008. С. 93-95.

41. Дуева, JI.A. Реакция специфической дегрануляции культур клеток брыжейки крыс и морских свинок как новый тест для оценки аллергенной активности химических веществ / JI.A. Дуева, A.B. Карамышева // Токсикологический вестник. 2001. - №4. - С. 19-23.

42. Дьяконов, Л.П. Животная клетка в культуре / Л.П. Дьяконов, В.И. Ситьков М.: 2000. - С. 148-159.

43. Дядищев Н.Р., Рыбалкин С.П., Марченко А.И. Биологические модели in vitro в токсикологии /Н.Р. Дядищев, С.П. Рыбалкин, А.И. Марченко// Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. 276 с.

44. Елизаров, Д.П. Оценка эффективности распространенных энтеросорбентов при интоксикации хлорированными углеводородами // Д.П. Елизаров, А.И. Елькин, Г.А. Терехин и др. / Токсикологический вестник. 2001. — №5. - 21 с.

45. Ермолаева, Е.Е. Ингибирование эстераз и функциональная активность диизопропилфторфосфата и фосфокола / Е.Е. Ермолаева, Н.В. Гончаров, A.C. Радилов и др./ Токсикологический вестник. 2008. -№2. - С. 2-7.

46. Ермолаева, Е.Е. Оценка влияния фосфорорганических соединений (ФОС) на систему гемостаза / Е.Е. Ермолаева, Н.В. Гончаров, И.В. Миндукшев и др. // Тезисы докладов 3-го съезда токсикологов России, 2008. С. 105-106.

47. Еропкин, М.Ю. Модели, альтернативные использованию лабораторных животных в токсикологии. Достижения и проблемы / М.Ю. Еропкин // Токсикологический вестник. 1999. -№5. - С. 7-13.

48. Еропкин, М.Ю. Ферментативные методы оценки цитотоксичности на модели клеток человека в культуре: динамика лактатдегидрогеназы поддействием различных концентраций ДДС / М.Ю. Еропкин, Е.М. Еропкина // Токсикологический вестник. 1997. - №5. — С. 26-31.

49. Еропкин, М.Ю. Культура клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов / М.Ю. Еропкин, Е.М. Еропкина // СПб.: Морсар АВ. - 2003. - 240 с.

50. Есартия, Г.В. Вопросы токсического действия пестицидов / Г.В. Есартия // Изд. АН Грузии. Т., 2005. -31. - №5. - С. 647-650.

51. Еськов, А.П. Токсикологические испытания. Альтернативные методы / А.П. Еськов, Р.И. Каюмов, А.Е. Соколов // Токсикологический вестник. -2003.-№5.-С. 25-29.

52. Еськов, А.П. Альтернативные методы на основе оценки цитотоксичности на кратковременной суспензионной культуре клеток-сперматозоидах быка / А.П. Еськов, Р.И. Каюмов, А.Е. Соколов // Материалы восьмого съезда токсикологов России. 2008. - С. 107-108.

53. Еськов, А.П. Метод оценки цитотоксичности на кратковременной суспензионной культуре клеток / А.П. Еськов, Р.И. Каюмов, А.Е. Соколов // Материалы восьмого съезда токсикологов России. — 2008. -С. 109-111.

54. Жуленко, В.Н. Ветеринарная токсикология / В.Н.Жуленко, М.И. Рабинович, Г.А. Таланов. М.: КолосС, 2004. - 384 с.

55. Завьялов Н.В., Червонская Г.П., Панкратова Г.П и др. Ускоренное изучение цитотоксического действия в экспресс-тестах in vitro/H.B. Завьялов, Г.П. Червонская, Г.П. Панкратова и др.// Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М.: 1998. 279 с.

56. Завьялова, Е.А. Культура клеток гуппи и ее применение в вирусологических исследованиях / Е.А. Завьялова, Т.Д. Пичугина, Л.П. Дьяконов, М.Н. Борисова // Ветеринарная патология. — 2003. №5. — С. 50-52.

57. Захаренко, В.А. Пестициды в современном мире / В.А. Захаренко, H.H. Мельников // Агрохимия. 1996. - №1. - С. 100-108.

58. Зимаков, Ю.А. Видовые различия чувствительных животных к пестицидами /Ю.А.Зимаков // Тез. докл. конференции «Экологические проблемы фармакологии и токсикологии». Казань. 1990. - С. 38-39.

59. Зорнин, М.Г. Антитоксическая активность природных сорбентов при отравлении фосфорорганическими соединениями / М.Г. Зорин, Г.А.Терехин // Материалы научной сессии Пермской и Ижевской медицинских академий. Пермь; Ижевск. - 2005. - С. 21-23.

60. Иванов, A.B. Разработка специфических средств лечения отравлений животных ФОП / A.B. Иванов, P.M. Асланов, М.Я. Тремасов и др. // Материалы 1-го съезда ветеринарных фармакологов России. — Воронеж. 2007. - С. 35-39.

61. Иванов, A.B. Актуальные проблемы ветеринарной токсикологии / A.B. Иванов // Ветеринарный врач. — 2005. №1. - С. 19-22.

62. Иванов, A.B. Биологическая и химическая безопасность животноводства в современных условиях / Ветеринарный врач. 2007. - №1. — С. 2-4.

63. Иванов, A.B. Влияние антидота AJI-5 на биохимические и гематологические показатели животных отравленных ФОП / А.В.Иванов, A.M. Аймалетдинов, P.M. Асланов // Тезисы докладов 3-го съезда токсикологов России. М.:2008. — 133 с.

64. Иванов, A.B. Случаи отравления крупного рогатого скота пестицидами на пастбище / A.B. Иванов, Г.Г. Галяутдинова, В.И. Егоров и др.// Ветеринария, М., 2006. №8. - С. 13-14.

65. Иванов, A.B. Токсикологическая безопасность проблемы и пути их решения. /A.B. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди// Материалы 2-го съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. Казань, 2009. - 620 с.

66. Ильницкая, A.B. Влияние холинолитических препаратов на нервную систему // A.B. Ильницкая, Л.И. Липкина, И.В. Березняк, С.Г. ФедороваМатериалы 19-го Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей. М., 2001. - Т. 2. - С. 91 -94.

67. Информационный бюллетень ассоциации клеточных культур, СПб., 1997. -№12.

68. Исидоров, В.А. Введение в химическую экотоксикологию: Учеб. пособие / В.А. Исидоров. СПб.: Химиздат. 1999. - 144 с.

69. Кабачник, М.И. Влияние фосфорорганических веществ на передачу невно-мышечного возбуждения/М.И. Кабачник// Вестник АН СССР. -1968.-№5.-С. 86-94.

70. Каган, Ю.С. Токсикологический вестник фосфорорганических пестицидов. М.: Медицина. 1977. - 298 с.

71. Каган, Ю.С. Общая токсикология пестицидов / Ю.С. Каган // Киев: Здоровье, 1981.- 174 с.

72. Каган, Ю.С. Токсикологические аспекты исследования новых пестицидов / Ю.С. Каган // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. 1988. - Т.ЗЗ. - №6. - С. 624-631.

73. Калайда, M.JI. Основы токсикологии: Учебное пособие / M.JI. Калайда. Казань: Мин. образования РФ; КГЭУ, 2004. - 160 с.

74. Карпенко, В.Н. Роль пестицидов в развитии заболеваний системы крови/В.Н.Карпенко// Пробл. гематологии и перелив, крови. - 1972. -№8. - С. 44-47.

75. Кошкшарев, Н.В. Действие нового реактиватора холинэстеразы диэтиксима на центральную нервную систему/ Н.В. Кокшарев, С.Д. Ковтун, Ю.С. Каган // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1977. — T.LXXXIII, №1. С.29-32.

76. Колбасов, В.В. Поиск новых средств ускоряющих восстановление физической выносливости после тяжелых отравлений антихолинэстеразными ядами /В.В. Колбасов, А.И. Ельнин // Тез докл. Росс. науч. конгресса «Человек и лекарство». М. - 1997. - 267 с.

77. Колесникова, Г.Г. Клеточные культуры как тест-система оценки качества новых фитопрепаратов / Г.Г. Колесникова, A.B. Слободенюк, Н.П. Глинских // Цитология. 1994. - т. 36. - №6. - С. 555.

78. Колонбет Л.В. и др. Новые возможности in vitro в токсикологии. / Коломбет Л.В., Сивогривов Д.Е., Тирас Х.П и др.// Тезисы докладов 3 съезда токсикологов России. М. 2008. - С. 556.

79. Комплексная экологически безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных. М.: ФГНУ «Росинформагротех». 2002.

80. Кондрахин, И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии /И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов // М.: Агропромиздат. -1988.-287 с.

81. Кондрахин И.П. Справочник ветеринарного терапевта и токсиколога: справочник /Под ред. проф. И.П. Кондрахина. М.: КолосС, - 2005. -544с.

82. Королев, Б.А. Антидотная терапия при отравлении кроликов циклофосом и циодрином / Б.А. Королев // Сборник научных трудов ВНИИ вет. энтомол. и арахнол. 1996. - №37. - С. 49-57.

83. Красовский, Г.Н. Обоснования использования альтернативных биологических моделей в гигиенической токсикологии // Г.Н. Красовский, Н.А. Егорова, М.Г. Антонова / Тезисы докладов 1-го съезда токсикологов России. М., 1998. С.8.

84. Кудрявцев А.А. Гематология животных и рыб /А.А. Кудрявцев/ М.: Колос, 1969.- 320с.

85. Кулешков, К.В. Разработка новых подходов к определению видовой принадлежности клеточных культур / К.В. Кулешков // Материалы 5-го общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. М. 2-4 декабря. 2008.

86. Куценко, С.А. Основы токсикологии / С.А. Куценко // СПб.: Фолиант,-2004.-716 с.

87. Кушнева, B.C. Справочник по токсикологии и гигиеническим нормативам (ПДК) потенциально опасных химических веществ / B.C. Кушнева, Р.Б. Гошкова // М.: ИздАТ. 1999. - 72с.

88. Кэрис Дж.-мл. Мифы, затрудняющие использование инфузорий при экотоксикологическом тестировании // Инфузории в биотестировании. Международная заочная научно-практическая конференция. СПб, 1998. -С. 10-19.

89. Леванова, Г.Ф. Оценка качества воды с помощью биотестирования индикаторными штаммами бактерий / Г.Ф. Леванова, Е.Ю. Кашников // Гигиена и санитария. 2002. - №4. - С. 68-70.

90. Лимаренко A.A. Кормовые отравления сельскохозяйственных животных/ A.A. Лиморенко// СПб.: Лань, 2007. - 384 с.

91. Линева, А.К. Справочник: Физиологические показатели нормы животных / А.К. Линева // К.: ФГУИППВ. 2003. - 256 с.

92. Литвинов, H.H. Анализ зарубежных и отечественных статистических данных по острым химическим отравлениям / H.H. Литвинов, Ю.Н. Остапенко, В.И. Казачков и др. // Токсикологический вестник. 1997. - №5. - С. 5-12.

93. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология /Е.А. Лужников // М.: Медицина. 1999. - 339 с.

94. Лукьянов A.C. Биоэтика. Альтернативы экспериментам на животных /A.C. Лукьянов, Л.Л. Лукьянова, Н.М. Чернавская, С.Ф. Гилязов// М.: Изд-во МГУ, 1996. 253 с.

95. Любимов Ю.А. Автоматизированный цитотоксический тест для изучения материалов медицинского назначения / Ю.А. Любимов, A.B. Саватеев, К.И. Комяк // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М. 1998. -С. 294.

96. Малышева M.B. Клеточные культуры — модельная тест-система в токсикологических исследованиях / М.В. Малышева, P.A. Рязанова// Тезисы докладов 1-го съезда токсикологов России. М., 1998. — 297 с.

97. Маркова, И.В. Клиническая токсикология детей и подростков. Часть 2 /И.В. Маркова, В.В. Афанасьев, Э.К. Цыбулькина. СПб.: Интермедика,- 1999. - 400 с.

98. Марченко А.И. Количественная оценка острой токсичности хлоридов металлов на тест-моделях in vitro / А.И. Марченко, С.П. Рыбалкин, A.B. Воробьев и др. // 7-й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Тезисы докладов. М., 2000. — 545 с.

99. Медведь, J1. И. Пестициды и проблема здравоохранения / Л.И.Медведь, Ю.С.Каган, Е.И. Спыну // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. 1968. - Т 13. - №3. - С. 263-271.

100. Мельников, H.H. Современная ситуация с применением пестицидов / H.H. Мельников / Хим. пром. 1994. - № 2. - С. 14-18.

101. Мельников, H.H. Пестициды: Химия, технология и применение. М.: Химия, 1997.-712 с.

102. Меньшикова, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник/В .В. Меньшикова. М.: Медицина, 1997. - 368 с.

103. Михайлов Л.П. Возможность биоиндикации на клеточных культурах человека и животных /Л.П. Михайлов, Н.В. Игнатович, Е.С. Ахраменко// Научный Центр Клинической и Экспериментальной Медицины СО РАМН. 2002.

104. Михельсон, М.Я. Ацетилхолин / М.Я. Михельсон, Э.В. Земаль. -Ленинград.: Наука, 1970. — 280 с.

105. Мозгов, И.Е. /И.Е. Мозгов. Фармакология. М.: Колос, 1979. - 416 с.

106. Монастырский O.A. Полной и достоверной инвентаризации имеющихся в стране пестицидов никогда не проводилось. Всероссийиский НИИ биологической защиты растений. Краснодар.: 2004.

107. Мурашко, B.B. Электрокардиография / B.B. Мурашко, A.B. Струтынский. М.: Медицина. - 1987. - 256 с.

108. Нагиев, Э.Р. Структурно-функциональное сотояние мембран эритроцитов при остром отравлении метафосом и введение перфторана // Э.Р.Нагиев, М.М. Газимагомедова // Биомед.- химия. 2003. Т. 49.-№2.-С. 138-144.

109. Новиков, В.А. Профилактика и лечение отравлений животных фосфорорганическими пестицидами. — Учен, записки КГВИ. — 1975. т.120. С. 21-26.

110. Нуритдинова, Ф.Н. О токсическом действии фосфорорганических пестицидов на орган зрения /Ф.Н. Нуритдинова// Вестн. офтальмол. -1975. -№1.- С. 75-76.

111. Панченкова, Г.А. Исследование хронической токсичности гербицида «Раундап» в ряду поколений Daphnia magna / Г.А. Панченкова // Токсикологический вестник. 2008. - №4. - С. 27-30.

112. Папуниди, К.Х., Тремасов, М.Я., Асланов, P.M. Обеспечение химической безопасности. Материалы второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. Казань.9-12 июня 2009 года. Материалы съезда. Казань, 2009. - 620с.

113. Пестициды в экосистемах: Проблемы и перспективы: Аналитический обзор. Новосибирск: СО РАН, ГПНТБ, 1994. 142 с.

114. Полоз, Д.Д. Токсикологическая характеристика фосфорорганических соединений /Д. Д. Полоз// Тр. MB А. Т.32. М.: 1961. 181 с.

115. Прозоровский, В.Б. Пути химического воздействия на холинэргические нервные окончания /В.Б. Прозоровский // Успехи физиол. науки. -1980. Т.П.-№2.-С. 26-48.

116. Прозоровский, В.Б. Структурные изменения эритроцитов как возможная причина низкой эффективности специфической терапии отравлений карбофосом / В.Б. Прозоровский, В.Г. Скопичев, Т.В. Ардабьева // Морфология. 1997. - №6. - С. 60-64.

117. Прозоровский, В.Б. Лечебно-профилактический антидот ФОВ / В.Б. Прозоровский // Актуальные вопросы профилактики и терапии интоксикаций: Сборник научных трудов. СПб.: 2005. - С. 9-16.

118. Раздольская, Н.В. Совершенствование метода культивирования / Н.В. Раздольская, A.B., Иванов, A.M., Криворучко, А.Б. Литвинчук // Материалы пятого общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. Москва. 2-4 декабря. 2008.

119. Ракитский, В.Н. Итоги и задачи развития отечественной токсикологии пестицидов / В.Н. Ракитский //Тезисы докладов 3-го съезда токсикологов России, М.: 2008. С. 24-25.

120. Родионов, Г.А. Влияние хлорофоса на развитие и течение патологии печени в эксперименте / Г.А. Родионов, Л.Я. Воронина // Врачеб. дело. 1991.-№ 11.-С. 54-58.

121. Рожнов, Г.И. Разработка альтернативных методов оценки токсичности химических веществ на основе биотестирования / Г.И. Рожнов, В.А. Пройнова, A.B. Лиманцев и др. // Токсикол. вестн. 1995. - №6. -С.27-29.

122. Розенград, В.И. Избирательная токсичность фосфороганических инсектоакарицидов (сравнительно биохимические аспекты) / В.И. Розенград, O.E. Шерстобитов. - Л.: Наука - 1978. - 103 с.

123. Романов, Е.А. Средства дезинсекции и дератизации в здравоохранении и ветеринарии: Справочник / Е.А. Романов, Э.Д. Хафизов, O.A. Есенина. Казань: Рутен, 2006. - 510 с.

124. Салихов, И.Г. Клинические особенности течения острых отравлений фосфорорганическими инсектицидами / И.Г. Салихов, Е.С. Марголин, Ф.Я. Халитов // Казан, мед. журн. 1985. - Т.66. - №4. - С. 274-276.

125. Саноцкий, В.И. Патогенетические механизмы острых отравлений нейротропными веществами / В.И. Саноцкий, А.И. Петров, Е.В. Давыдов // Тез.докл 2 съезда токсикологов России. — М.: 2003. — С. 410411.

126. Саноцкая, Н.В. Влияние фосфорорганического пестицида антио на кровоснабжение мозга / Н.В. Саноцкая, Я. К. Рурамбаев, Д. Д. Мециевский // Бюлл. эксп. биол. и мед., 1995. - Т.119. - №3. - С. 270275.

127. Сидорин Г.И. Об «альтернативных» методах исследования в токсикологии. /Г.И. Сидорин, А.Д. Фролова, Л.В. Луковникова // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. — 317 с.

128. Скок, В.И. Нейрональные холинорецепторы / В.И. Скок, A.A. Селянка, В.А. Деркач. М.: Наука, 1987. - 344 с.

129. Соколов В.Д. Фармакология /В.Д. Соколов, М.И. Рабинович, И.Г. Горшков и др.- М.: Колос, 1997.

130. Субботин, В.М. Современные лекарственные средства в ветеринарии/ В.М. Субботин, С.Т. Субботина, И.Д. Александров, Ростов-на-Дону: Феникс, 2001. -600с.

131. Сухо Дулова, Г.Н. Токсическое поражение сердечно-сосудистой системы у детей / Г.Н. Сухо Дулова, Е.А. Лужников. М.: Медпрактика, 2002. - 132 с.

132. Тараканов И.А. Нарушение дыхания и кровообращения при экспериментальном отравлении пестицидами из группы ФОС (антио) /И.А. Тараканов, Я.К. Курамбае, A.A. Хусинов и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1994. - Т. 117. - №5. - С. 470-475.

133. Таращук, В.В. О морфологических изменениях в нервной системе при остром отравлении хлорофосом. В кн.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Вып.7. Киев, Изд. ВНИИГИНТОКС, 1967.-С. 316-321.

134. Тертичная, M.B. Возможность использования культур клеток в качестве биопробы при Т-2 токсикозе / М.В. Тертичная// Вет. Врач. — 2005.-№2.-С. 29-31.

135. Тертичная, М.В. Влияние стрегиматоцитстина на передачу возбуждения в нервно-мышечных соединениях поперечно-полосатой мускулатуры теплокровных / М.В. Тертичная, Р.Я. Гильмутдинов, М.Я. Тремасов // Ученые записки КГАВМ, Казань, 2003- т. 175 - с.159.

136. Тертичная, М.В. Воздействие Т-2 токсина на культуру клеток различных видов животных / М.В. Тертичная // Материалы Всероссийской научно-практ. конф. по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. Казань. 2004. - С. 56-57.

137. Тихонов, И.В. Биотехнология / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнева и др. СПб.: ГИОРД, 2008. - 704 с.

138. Тремасов, М.Я. Состояние сердечно-сосудистой системы у овец при отравлении фосфаколом / В кн: Болезни овец и меры борьбы с ними. -Чита, 1980.

139. Успенская С.И., Серегина О.Б., Нестерова Г.А. Экспресс-метод оценки биологической активности полиморфных модификаций лекарственных веществ на простейших // 6-й Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тезисы докладов. М., 1999. - С. 482

140. Фаерман, И.С. О функциональном состоянии печени и желудка у лиц, занятых производством фосфорорганических инсектицидов/И. С. Фаерман// Тер. арх. 1965. - т.37. - №5. - С. 51-54.

141. Федоров JI.A., Яблоков A.B. Пестициды токсикологический удар по биосфере и человеку. - М.: Наука, 1999. - 461 с.

142. Федоров, В.А. Клеточные технологии в современной медицине / В.А. Федоров // Материалы пятого общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. Москва. 2-4 декабря. 2008.

143. Федоров, В.А. Современные технологии в культивировании клеток / В.А. Федоров // Материалы пятого общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. 2-4 декабря. 2008. — Сб. статей. Москва. 2008. - С. 253-255.

144. Федорова А.И. Практикум по экологии и охране окружающей среды: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. Заведений/ А.И. Федорова, А.И. Никольская// М.: ВЛАДОС, 2003 - 235с.

145. Фрадкин, В.А. Аллергодиагностика in vitro /В.А. Фрадкин.- М.-.1995. -216 с.

146. Фролова А.Д. Изучение биологического окисления in vitro для ускоренного прогнозирования метаболической активности промышленных ядов / А. Д. Фролова, Л.В. Луковникова // Токсикологический вестник, 1995. - №4. — С. 9-12.

147. Хайрутдинов, И.Г. О результатах применения атропина при отравлении ТМТД / И.Г. Хайрутдинов, H.H. Жестков // Материалы научной конференции, поев. 125-летию академии. 4.2. 1998. - 128 с.

148. Червонская, Г.П. Этика медико-биологического эксперимента в доклинических испытаниях // Г.П. Червонская, Г.П. Панкратова, Л.Л. Мироноваи др./ Токсикологический вестник, 1998. №3. - С. 2-8.

149. Черных, A.M. Гигиеническая оценка применения пестицидов в районах курской области // A.M. Черных / Гигиена и санитария. 2006. - №2. -С. 15-16.

150. Чиркин, A.A. Клинический анализ лабораторных данных / A.A. Чиркин. М.: Медлит., 2007. - 384 с.

151. Шабунин C.B. Современные принципы и походы к созданию лечебно-профилактических средств в ветеринарии/ C.B. Шабунин//Второй съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России. 9-12 июня 2009 года. Материалы съезда. Казань. 2009. — 19-24 с.

152. Шамсиев, Б.Н. Химико-гематологичекие и биохимические изменения в организме кроликов при хроническом отравлении их хлорофосом. — Научн. труды. Самарск. СХИ. 1998. т.41. - С. 53-55.

153. Шахназаров, М.А. Морфологические и гистохимические изменения печени при ацетатной язве желудка и хроническом воздействии пестицида хлорофоса / М.А. Шахназаров, М.Г. Расулов // Токсикологический вестник. - 2008. - №2. - С. 29-32.

154. Ашихмина Т.Я. Экологический мониторинг: Учебн. методическое пособие /Т.Я. Ашихминой - М.: Академический проект, 2005- с.315.

155. Экология: Учебник для технических вузов / Под ред. Л.И. Цветковой — М.: АСВ, СПб.: Химиздат, 2001- с.286.

156. Этический кодекс СММНО по проведению экспериментов с использованием животных. Хроника ВОЗ. Т.39. - №3.

157. Эфендиев, Т.М. К клинике отравлений меркаптофосом /Т.М. Эфендеев//Клин. Мед.- 1961. т.З9. - №1. - С. 126-130.

158. Юданова, Л.А. Пестициды в окружающей среде. Аналитический обзор./Л.А.Юданова//- Новосибирск.: Изд.ГПНТБ CO.- 1999.-47 с.

159. Annet, В. The und for the replacement of animals in medical experiments (FRAME): the first 25 years/B. Annet// ATLA. 1995. - V.23. - P. 19-32.

160. Balls, M., Clothier R. Comments on the scientific validation and reglatori acceptance о in vitro toxicity test // Toxicol, in vitro. 1991.-V.5.- №. 5-6. — P. 535-538

161. Blasiak, J et. al. In vitro studies on the genotoxiciti of the organophosphorus insecticide malation and its two analogues/ J. Blasiak et. al// Mutat Res -2002.-V.445 №2- P. 275-283.

162. Blogard В., Clausen J. An in vitro system for evalution of oxidative stress and the effects /В. Blogaard, J. Clausen// ATLA. 2000. - V. 24. - №3. - P. 279-287.

163. Blauboer, B. Recent development in vitro toxicology /В. Blauboer// Hum. And Exp. Toxicol. 1996. - V. 15. - № 11. - P. 928.

164. Bruck H.E. A histo-chemical stay of changes observed in the mouse diaphragm, after organophosphate poisoning /Н.Е. Bruck, R.H. Inns, N.S. Tackwell// Hum. and Exp. Toxicol. 2001. - V. 10. N1. - P. 9-14.

165. Chlopkicz, B. Influence of metabolic activation of the induction of micronuclei by antihypertensive drugs in L 929 cells / B. Chlopkicz // Arch. Toxicol. 2001. - V. 74. - №4. - P. 794-798.

166. Cigliano S. Analysis of metal-regulated metallothionein and hat shock gene expression in Hella derived cadmium-resistant cells/ S. Cigliano, P. Remondelli, L. Minichiello et al// Exp. Cell. Res. - 1996. - V. 228. - №2. -P. 173-178.

167. Clemendson C. MEIC evaluation of acute systemic toxicity/ C. Clemendson, E E. Mc Farlane-Abdulla, M. Anderson et al// ATLA. 2002. - V.24. -Suppl.-P. 251-311.

168. Clothier R. A comparison of three cytotoxicity endpoints in the corneal HCE-T model /R. Clothier, A. Orme, T. Walker et al.// ATLA. 2000. - V. 28, №2.-P. 293-302.

169. Clothier R. Effects of surfactant retreatment in vitro: A method to evaluate changes in cell functions and in cell viability / R. Clothier, R. Sansom// ATLA. 1997.-V. 25. №1.-P. 61-66.

170. Coeke, S. Metabolism: a bottleneck In vitro toxicological test development / S. Coeke, H. Ahr., J. Blaauboer et al. // ATLA. 2006. - V. 34. - №1. - P. 49-84.

171. Cytotoxicity of linden and paraguat to human hepatoma cell lines /B. Descampiaux, N. Cottelle, J. Caeteau et al. //Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1999. V. 62. - №1. - P. 16-24.

172. Doehmer, J. Prediction drug metabolism dependent toxicity for humans with a genetically engineered cell battery / J. Doehmer // ATLA. - 2006. -V.34. - №4. - P. 561-575.

173. Fentem T. In vitro atternatives testing in animals /T. Fentem, M. Balls// Chem. And Ind. 1993. - №6. - P. 207-211.

174. Ferro M. Studies on a-hexachlrocyclohexane cytotoxocoty, genotoxicity and cytochrome P450 induction in primary hepatocytes and hepatoma cell linesfrom rodents and humans /M. Ferro, A. Bassi, D. Adamo et al. // ATLA. -1997.-V.25. №2. - P. 139-152.

175. Gercken G. Influence of heavy metals and mineral dusts on superoxide anion release by alveolar macrophages / G. Gercken, M. Labedzka, R. Geertz, H. Gulyas,// J. Aerosoe Sci. 2008. - V.19. - №7. - P. 1133-1136.

176. H. Bruck, et al. // J. Hypertens. 2001. - V. 19 - №5 - P. 97-110.

177. Horn, T. Acute hepatotoxicant exposure induces TNFR mediated hepatic inuri and cytokine/ apoptic gene expretion / T. Horn, T. Brien, L. Schook, M. Rutherford/ Toxicol. Sci. - 2000. V. 54. - №1. - P. 262-273.

178. Hughes J. Morphology of ricin and abrin exposed endothelial cells in consistent with apoptotic cell death/ J. Hughes, C. Lindsay, G. Griffits // Hum. and Exp. Toxicol. 1996. - V.15. - №5. - P. 443-451.

179. Kannan K. Organochlorine hesticides and oceanic countries/ K.-Kannan, S. Tanabe, J. Guesy et al. // Rev. environ, contam. toxicol. 1997. — V.152. -P. 1-55.

180. Kialy J. et al. Chromosome studies in workers producing organophosphate insecticides // Arch, environ. Comtam. Toxicol. 2008. - V.8. - P. 309-319.

181. Kuchowwicz E., Rydsinski K. Can cytotoxic effects induced by industrial chemicals be time-dependent? // ATLA. 1999. - V.27. - №3. - P. 367-377.

182. Malich G. Humman cell line toxixity of binary and ternary chemical mixtures in comparison to individual toxic effects of their components/ G.Malich M. Markovich, С. Winder // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. -1998. V.35. - №9. - P. 588-596.

183. Mead C. Compason of rat primary astrocytes, coglioma and human 1321N1 astrocytoma cell for in vitro indicators of gliotoxicity/ C. Mead, V. Pentreath // Hum. and Exp. Toxicol. 1996. - V.15. - №8. - P.663.

184. Madin S., Dardy N., //Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1985. V.98. - P. 574.

185. Mutch E. Diazinon. Chlorpyrifos and parathion are metabolized by multiple cytochromes P450 in human liver / E. Mutch, W. Faith// M. Toxicology. -2006.-№ 1-2.-P. 22-23.

186. Norman-Horward J. Этический кодекс CMMHO по проведению экспериментов с использованием животных. Хроника ВОЗ. — 2000. -Т.39. №3.

187. Orlans, F. The Three R in research and education: A long road ahead in thee Unated State / F. Orlans// ATLA. 1996. - V.24. - №2. - P. 151-158.

188. Toxicity and cell density monitoring in monolayer and tree-dimensional cultures with the XTT assay /X. Ponsoda, M. Gomes Lechon, J. Castell// ATLA. - 1998. - V.26. - №3. - P. 331-342.

189. Rodiella, V. Bismuth — induced metallothionein in cultured human proximal tubular cells failed to protect against metal-induced toxicity/ V. Rodiella, A. Milles, W Jenner, G. Hawks Worth// Hum. and Exp. Toxicol. 1997. -V.16.-№7.-P.413.

190. Russel W., Birch R. The principles of humane experimental technique. Methuen, London, 1959. 253 P.

191. Suzuki, T. Cytotoxocoty of paraquat and phospholipid peroxidation in rat hepatocytes/ T. Suzuki, M. Komatsu, H. Isono// Jap. J. Toxicol, and Environ Health. 1996. - V.42. - №1. - P. 10.

192. Toxicologi in vitro // An international jornal published in association with TNO BIBRA International LTD. Pergamon. - 2001. - V. 15. № 3. - 95p.

193. J. Warnock. Cell culture processes for the production of viral vectors for gene therapy purposes / J. Warnock, O. Merten, M. Al-Rubeai// Cytotechnology. 2006. - №1-3. - P. 141.-162.

194. Ethionine toxicity in vitro: The correlation of data from rat hepatocyte suspensions and monolayers with in vitro observation /C. Waterfield, C. Westmoreland, D. Asker et. al. // Arch. Toxicol. 1998. - V.72. - №9. - P. 588-596.

195. Yang J. Lead acetate mytegeniciti and mutation spectrum in the hypoxanthine guanine phosporibosyltransferase gene of Chinese hamster ovary K1 cells / J. Yang, S. Yeh, C. Chang // Mol. Carcinogeneses. 1996. -V.17.-№4.-P.181-191.

196. Yu Z. Effects of hupoxia. Soman and their combination on PC12 cells / Z. Yu, T. Cheg, H. Igisu// J. Med. Coll. PLA. 1997. - V.12. - №3. - P. 173176.236. www.cbio.ru