Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка новой кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка новой кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена"

На правах рукописи

НИМАЦЫРЕНОВА ЛЮБОВЬ ГЕОРГИЕВНА

РАЗРАБОТКА НОВОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, СОДЕРЖАЩЕЙ СВЯЗАННУЮ ФОРМУ СЕЛЕНА

Специальность 03.00.23 - Биотехнология

- 1 ОКТ 2009

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Улан-Удэ - 2009

003478603

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный технологический университет» (ВСГТУ)

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Жамсаранова Сэсэгма Дашиевна

Официальные оппоненты: доктор технических наук, профессор

Данилов Михаил Борисович

кандидат технических наук Лопарева Елена Георгиевна

Ведущая организация: Бурятский научно-исследовательский

институт сельского хозяйства

Защита диссертации состоится 22 октября 2009 г. в 14-00 ч. на заседании диссертационного совета ДМ 212.039.02 при ГОУ ВПО «Восточш Сибирский государственный технологический ушшерситет» по адресу: 670013, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40в.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Восточнс Сибирский государственный технологический университет».

Автореферат размещен на сайте ГОУ ВПО «Восточно-Сибирски государственный технологический университет» www.6sstu.ru.

Автореферат разослан 18 сентября 2009 г.

Ученый секретарь Регионального диссертационного совета, доктор технических

фтационного совета, ^ С.,

наук, профессор у^ъ /У.сЦ^^^^' Хамнаева Н.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время не ослабевает интерес исследователей к селену - микроэлементу, необходимому для нормальной жизнедеятельности организма человека и животных. Селен обеспечивает нормальную функцию печени, обладает антиоксидантными, иммуно-модулирующими и детоксицирующими свойствами. Дефицит селена в организме, как известно, вызывает нарушение обмена веществ, снижение роста, дегенеративные изменения мышечной ткани, печени, кардиомиопатию и репродуктивные дисфункции [Тутельян, Княжев, 2002]. На клеточном уровне недостаток селена ведет к нарушению целостности клеточных мембран, снижению активности ферментов, накоплению кальция внутри клеток, нарушению метаболизма аминокислот и кетокислот, подавлению энергопродуцирующих процессов [Цикуниб, 2008]. В механизме действия селена большое значение имеет формирование им активных центров ферментов, например глутатионпероксидазы, глицинредуктазы и др. [Риш, 2003; Parching et al, 1999; Shchauser, 2003].

Потребление селенсодержащих продуктов питания, в том числе молока и молочных продуктов, имеет важное значение для селендефицитных регионов. С этой целью в сельском хозяйстве в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота (КРС) широко применяются неорганические соединения селена в виде селенита и селената натрия. Они недостаточно эффективны ввиду малой биодоступности (20-30%) и высокой токсичности, быстро действуют, но не кумулируются в организме [Балым, Беляев, 2007]. Органические соединения селена обладают меньшей токсичностью для животных по сравнению с неорганическими [Голубкина, Папазян, 2006]. Малая степень аккултулирования неорганического селена в органах и тканях, невысокий биологический эффект и возможность токсикозов животных при передозировках определяют поиски производных селена с меньшей токсичностью. Создание новой кормовой добавки для прижизненного формирования мпкроэлементного состава сырья животного происхождения является актуальным.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом работ Проблемной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО ((Восточно-Сибирский государственный технологический университет» по научному направлению «Биотехнология пищевых продуктов нового поколения».

Цель работы. Разработать технологию кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие основные

задачи:

1. Оптимизировать режимы получения связанной формы селена на основе пептидов соединительно-тканного белка.

2. Разработать технологию кормовой добавки для крупного рогатого

скота.

3.Изучить динамику накопления селена и витамина Е в коровьем молоке при использовании селенсодержащей кормовой добавки.

4. Оценить влияние тепловых режимов переработки сырого молока, полученного от коров опытной группы, на содержание селена.

5. Исследовать содержание селена в молочных продуктах, полученных из молока, содержащего органическую форму селена.

Научная новизна. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность связывания неорганической формы селена с функциональными группами пептидов эластина. Предложена модель связывания селенита натрия с пептидами эластина. Отработаны режимы сорбции комплекса селен-пептиды эластина на цеолитах Холинского месторождения с диаметром измельчения 0,1-1,0 мм. Установлены режимы получения кормовой добавки на основе цеолитов Холинского месторождения для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена. Исследована безопасность кормовой добавки. На модельных экспериментах установлено, что введение кормовой добавки в рацион лактирующих коров из расчета 200 г в сутки, содержащей 931 мкг связанной формы селена, уже на 14-е сутки кормления приводит к увеличению концентрации селена^ в молоке. Максимальная концентрация органической формы селена в молоке достигала 0,270±0,026 мкг/мл через 42 дня включения кормовой добавки в рацион лактирующих коров, которая под держивалась в течение всего периода кормления.

Экспериментально установлено, что накопление селена в молоке коров, получавших кормовую добавку, способствует увеличению содержания витамина Е в молоке. Тепловая обработка сырого молока, полученного от коров, которые получали кормовую добавку, не вызывала существенного снижения содержания селена в молоке. Потери составили 1,6-2,9%.

Новизна исследований оформлена в заявке на патент РФ (№ 2008146737 (061090) от 26.11.2008 г.).

Практическая значимость. Разработана технология кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена. Разработаны и утверждены проекты нормативной документации (Технические условия и Технологическая инструкция) на кормовую добавку «Цеохол-Бе» для крупного рогатого скота (ТУ 2163-002-26754156-2008). Разработан способ получения молока и молочных продуктов, содержащих органическую форму селена. Проведено промышленное внедрение селенсодержащей кормовой добавки «Цеохол-Бе» на базе ОАО «Оронго» (акт внедрения от 26.03.2009 г.). Выработана опытно-промышленная партия сладкосливочного несоленого масла из селенсодержащих сливок на базе предприятия ОАО «Молоко» (акт выработки от 30.03.2009 г.).

Работа поддержана грантом «Молодые ученые ВСГТУ» (2008 г.).

Апробация работы. Основные положения работы и результаты исследований доложены и обсуждены на II Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2007 г.); VI школе-семинаре молодых ученых России «Проблемы устойчивого развития региона» (Улан-Удэ, 2007 г.); ежегодной научно-практической конференции преподавателей, научных сотрудников и аспирантов ВСГТУ (Улан-Удэ, 2007-2009 гг.); Байкальском молодежном форуме «Здоровая молодежь - будущее России» (Улан-Удэ, 2009г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 2 статьи в журналах из перечня, рецензируемого ВАК.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованных источников (177 наименований) и приложения. Работа изложена на 119 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 23 таблицами и 13 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Проведение экспериментов осуществлялось согласно схеме (рис. 1).

Источником селена в экспериментах служил селенит натрия (Омскпром, «чда»). Для иммобилизации селена в качестве носителя использовали гидролизах белка эластина, полученный методом биотрансформации нативного белка животного происхождения (патент РФ №2245078).

Сорбцию комплекса селен-гидролизат белка проводили на природных цеолитах Холинского месторождения Республики Бурятия с диаметром измельчения 0,1-1,0 мм (ТУ 2163-001-12763074-97).

Исследование комплекса селен-гидролизат белка эластина проводили на ИК спектрофотометре Фурье.

Апробацию разработанной кормовой добавки осуществляли на 40 молочных коровах симментальской породы (помесь) в возрасте 5-6 лет фермерского хозяйства ОАО «Оронго».

Все коровы были разделены на две группы: контрольная, получавшая основной рацион, и опытная, получавшая селенсодержащую кормовую добавку к основному рациону. Внесение в рацион разработанной кормовой добавки проводилось один раз в сутки.

Основные физико-химические показатели определяли стандартными методами: плотность - ареометрическим методом в соответствии с ГОСТ 362584, кислотность - по ГОСТ 3624-92, степень чистоты - по ГОСТ 8218-89, массовая доля жира - кислотным методом по ГОСТ 5867-90, белок -колориметрическим методом по ГОСТ 25179-90, сухие обезжиренные вещества и влага - по ГОСТ 3626-73, витамин Е - по ГОСТ 0410-96. Органолептическая оценка коровьего .масла проводилась по ГОСТ 37-91, перекисное число - по ГОСТ Р 51453-99.

Рисунок 1. Схема проведения экспериментов

Концентрацию селена в исследуемых образцах определяли флюорометри-ческим методом по МУК 04-33-2004 на «Флюорат-02» («Люмэкс», г. Санкт-Петербург). Предварительную минерализацию образцов проводили с

помощью СВЧ минерализатора «Минотавр» («Люмэкс», г. Санкт-Петербург), разделение несвязанных ионов селена - методом диализа.

Токсичность кормовой добавки определяли с использованием тест-культуры инфузории «Стилонихия» по ГОСТ 13496.7-97.

Полученные результаты исследований статистически обработаны с использованием пакета программ Microsoft Excel 2003 и Statistica 6.0. Различия считали достоверными при Р<0,05 ■(* - достоверное различие между 1 и 2 группами).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Разработка способа получения селенсодержащей кормовой добавки для крупного рогатого скота на основе цеолитов Холинского месторождения

Для снижения токсичности селенита натрия в качестве основы комплекса использовали гидролизат белка эластина (ГЭ), полученный методом биотрансформации белка животного происхождения (пат. №2245078).

Эластин выделяли из выйной связки крупного рогатого скота путем зачистки сухожилий, измельчения, многократной солевой и щелочной экстракции, с последующим щелочным гидролизом в кипящем растворе. После щелочного гидролиза данный полуфабрикат варился в воде и промывался, с последующей сушкой и измельчением. Для получения гидролизата белка использовали ферментный препарат пепсин, гидролиз белка проводили в условиях, имитирующих желудочно-кишечный тракт человека.

Гидролизат белка эластина представляет собой светло-желтый прозрачный раствор, без видимого раздела фаз, без запаха и вкуса.

На первом этапе проведен процесс иммобилизации селена на гидролизате белка эластина путем внесения в гидролизат раствора селенита натрия в концентрации 4 мкг/мл при температуре 18-20 °С и рН=9,0. Значение рН гидролизата обусловлено реакционной способностью селенит-иона [Кузьмичева и др., 1973].

Через определенные интервалы времени, используя метод диализа, отделили неорганический селен от связанного. Диализ проводили 24 часа, после чего определяли концентрацию селена во внутреннем стакане флюорометрическим методом.

Максимальная концентрация иммобилизированного селена отмечалась через 2 ч и достигала 1,0 мкг/мл (рис. 2). Через 2 ч начинался процесс ресорбции, остаточная концентрация селена в гидролизате составила 0,6 мкг/мл.

О 2 4 6 8 10 12 14 16

Время, час

Рисунок 2. Динамика связывания селена с пептидами гидролизата эластина

При исследовании ИК-спектров опытного образца гидролизата белка селеном установлено появление новых пиков 827,4 см"1 и 428 см"1, которь свидетельствуют о модификации селеном пептидов гидролизата белка эластина.

Из литературных данных известно, что селен в виде димера -О-БеО-С БеО-О- может связываться с карбоксильными группами пептидов гидролиза' белка [Щелкунов, Дудкин, 2002]. На основе полученных результатов бы; предложена гипотетическая модель взаимодействия селена с гидролизатом бель эластина.

С точки зрения эффективности и технологичности практическог использования другим компонентом кормовой добавки были избраны цеолит Холинского месторождения, которые многие годы используются в практш сельского хозяйства. Цеолиты Холинского месторождения относятся к наиболе безопасным и разрешены к использованию в пищевой и медицинской практик' Цеолиты привлекают внимание исследователей и с экономической точки зрени как сырье местного происхождения, характеризующееся значительным запасами.

Нами было установлено оптимальное соотношение компоненте кормовой добавки. Были взяты следующие соотношения комплекса селе! гидролизат белка эластина (Бе-ГЭ) и цеолита: (2:1), (1,5:1), (1:1), (1:1,5), (1:2 соответственно. При этом диаметр измельчения цеолитов был взят равным 0,1 1,0 мм. Выбор частиц такого размера обусловлен тем, что при скармливани КРС кормов тонкого помола (до 1 мм) улучшается ассимиляция питательны веществ кормов, повышается сохранность и прирост живой массы крупног рогатого скота, а также усвояемость кормов животными [Замана, Соколов, 2001]. При соотношении (2:1), (1,5:1) цеолиты полностью погружались в раствор ГЭ с селеном, наблюдалось вспенивание раствора, а по окончании процесса вспенивания надосадочный слой жидкости был высоким. При соотношении (1:1,5), (1:2) жидкая фаза полностью не покрывала твердую фазу (цеолит). При

юставе (1:1) жидкая фаза полностью покрывала твердую фазу, и после юпучивания высота жидкости над цеолитом составила 1-2 мм. Однако при 1ЫСоком уровне жидкости над цеолитом (2:1, 1,5:1) увеличивается длительность фоцесса сушки, что влияет на продолжительность получения добавки, а при юполном погружении цеолита в комплекс Бе-ГЭ (1:1,5, 1:2) концентрация елена распределялась неравномерно.

Из рисунка 3 видно, что при соотношении компонентов кормовой обавки 1:1 концентрация сорбированного комплекса 5е-ГЭ на цеолите есколько выше и достигается раньше, чем при соотношении 2:1. Это позволяет' ократить продолжительность сушки при максимальной концентрации селена, оторая составила 465±5 мкг/100 г, продолжительность сорбции -2 ч. Таким бразом, установлено, что при соотношении модифицированного селеном адролизата эластина и цеолита 1:1 обеспечивается их качественное *аимодействие и равномерное распределение селена.

Рисунок 3. Динамика сорбции селена на цеолитах при использовании модифицированного селеном гидролизата белка: 1- комплекс 8е-ГЭ на цеолите при соотношении 2:1; 2 - комплекс 8с-ГЭ на цеолите при соотношении 1:1

После процесса сорбции образец сушили до влажности 7% при тературе 40°С. Более высокие температуры сушки приводили к дественным потерям микроэлемента, при температуре ниже 40°С скорость :ки заметно понижалась. Разработанная кормовая добавка охлаждалась до щатной температуры 18-20°С и фасовалась по 0,2 кг в полиэтиленовые мешки

0

3 4 5 6 7 Время, ч

ГОСТ 1341-97.

На основании полученных результатов разработана технологическая схема новой кормовой добавки для крупного рогатого скота (рис. 4).

Рисунок 4. Технологическая схема получения селенсодержащей кормовой добавки для крупного рогатого скота.

Результаты тестов на токсичность разработанной селенсодержащ кормовой добавки представлены в таблице 1.

Таблица 1

Оценка токсичности различных концентраций селенита натрия и модифицированного селеном гидролизата эластина, сорбированного на цеолитах

Холинского место рожден ия

№ п/п Носитель селена Молярность растворов Т^еОз Количество селена на носителе, мкг/г Токсичность (+ или -)

1 Бе+цеолит 0,0001 2,3 -

2 Бе+цеолит 0,001 5,4 -

3 Бе+цеолит 0,01 51,0 +

4 Бе+цеолит 0,05 437,0 ++

5 Ц+модифицированный селеном гидролизат эластина 0,0001 1,6

6 Ц+моди ф и цированны й селеном гидролизат эластина 0,001 4,6

7 Ц+модифицированный селеном гидролизат эластина 0,01 148,0

8 Ц+модифицированный селеном гидролизат эластина 0,05 632,0

Примечание. - не токсично; + средне токсично; ++ сильно токсично.

Как видно из таблицы 1, токсичность неорганического селена, сорбированного на чистом цеолите, проявлялась в количестве 51 мкг/г, что соответствовало 0,01 М раствору селенита натрия. Цеолит с комплексом гидролизат эластина, модифицированный селенитом натрия, не проявлял токсичность при таких концентрациях и даже при концентрации селена 632 мкг/г, что соответствовало 0,05 М раствору селенита натрия. На основании вышеизложенного был сделан вывод, что белковый гидролизат, модифицированный селеном, сорбированный на цеолитовых туфах, не токсичен по сравнению с неорганическим селеном, сорбированным на цеолите. Таким образом, технология кормовой добавки обеспечивает получение нетоксичной селенсодержащей кормовой добавки.

Исследование биологической безопасности селенсодержащей кормовой добавки в соответствии с гигиеническими нормативами, установленными Санитарными нормами и правилами (СанПин 2.3.2.1078-01), показало

незначительный рост количества КМАФАнМ, не превышающий предельно допустимого уровня - 5*105 КОЕ/г. Патогенной микрофлоры не обнаружено..

Разработана и утверждена нормативная документация (ТУ 2163-00226754156-2008), требованиям которой должна соответствовать селенсодержащая кормовая добавка для КРС (табл. 2).

Таблица 2

Характеристики селенсодержащей кормовой добавки для КРС

по ТУ 2163-002-26754156-2008

JSr<-п/п Наименование, единицы измерений Показатели

1 Внешний вид Зернистый порошок

2 Цвет Светло-серый

3 Запах Без посторонних запахов

4 Массовая доля влаги, %, не более 6,0

5 Массовая доля металломагнитной крошки (металлического железа) размером до 2 мм включительно, мг/кг 10-30

6 Наличие металломагнитной примеси Не допускается

7 Крупность помола, мм, не более 0,1-1,0

8 Содержание КМАФАнМ, не более 5x105 КОЕ/г

9 Содержание бактерий группы кишечной палочки Не допускается

10 Содержание патогенных микроорганизмов, в том числе Salmonella Не допускается

И Эффективная удельная активность естественных радионуклидов, Бк-кг, не более 370

12 Содержание селена, 'мг/кг 4,65±0,05

Себестоимость 1 кт селенсодержащей кормовой добавки для КРС составила 37,92 руб., оптовая цена (без учета НДС) - 45,50 руб.

Рекомендуемая суточная норма потребления селена для КРС, предотвращающая все формы заболеваний, обусловленных селеновой недостаточностью - 500-1500 мкг [Атлавин, Апсите, 1990]. Рекомендуемая масса кормовой добавки для включения в суточный рацион КРС составила 200 г, она эквивалентна 931 мкг селена.

Разработанная кормовая добавка была апробирована на молочных коровах симментальской породы (помесь). Исходное содержание селена в общем корме составило 0,0013±0,001 мкг/г. Кормовая добавка вводилась в рацион КРС в составе комбикорма. Суточное потребление селена опытной группой - 931 мкг. Селен и витамин Е относятся к антиоксидантам, обеспечивающим защиту организма на различных стадиях перекисного окисления [King, МсСау,

1983]. На протяжении натурных экспериментов определялись концентрации селена и витамина Е в коровьем молоке, полученном от контрольной (не получавшей добавку) и опытной групп (рис. 5, 6).

0,3 -

1— 2 0,25

<я

X <и 0,2

С?

о к 0,15 ■

и СЗ 0,1 -

а-

в <и 0,05 |

о 0 -

Рисунок 5. Динамика накопления селена в молоке коров, не получавших и получавших кормовую добавку: 1 - контрольная группа; 2 - опытная группа

Рисунок 6. Динамика накопления витамина Е в молоке коров, не получавших и получавших кормовую добавку: 1 - контрольная группа; 2 - опытная группа В опытной группе наблюдалось повышение содержания селена в молоке после 14 суток включения в рацион коров кормовой добавки. Максимальная концентрация селена в молоке зафиксирована на уровне 0,270±0,026 мкг/мл, которая поддерживалась на этом уровне в течение всего периода кормления (83

дня). Повышенная концентрация селена в молоке коров опытной группы при введении в корм кормовой добавки объясняется образованием органической формы селена, способной накапливаться в организме в виде определенного селенового пула и медленно расходоваться по мере необходимости. Следует отметить, что неорганический селен имеет ограниченный пул в организме и его метаболизм быстр [Гмошинский, 1999]. После прекращения кормления концентрация селена в молоке коров опытной группы через 28 сут снижалась до 0,083±0,006 мкг/мл.

Повышение содержания витамина Е в молоке коров опытной группы наблюдалось в течение первого месяца введения кормовой добавки. Максимальная концентрация витамина Е составила 1,61 ±0,08 мкг/мл. По-видимому, увеличение концентрации селена предотвращает участие витамина Е в окислительно-восстановительных реакциях и, соответственно, увеличивается его содержание в молоке.

Далее, исследовали качественные показатели молока, полученного с использованием кормовой добавки и без таковой. По физико-химическим показателям молоко коров, получавших кормовую добавку и не получавших ее, не отличалось. Достоверных отклонений не наблюдалось, кроме содержания жира: 3,44±0,12% в молоке коров контрольной группы и 4,21±0,26% в молоке коров опытной группы. Повышенное содержание жира в молоке коров, получавших селен в виде добавки, по-видимому, можно объяснить повышением перевариваемости кормов и усвоением питательных веществ за счет цеолитов и антиоксидантных свойств селена.

В результате использования разработанной кормовой добавки в рационе кормления КРС было получено селенсодержащее молоко, которое может быть использовано для производства молочных продуктов, содержащих селен.

Влияние технологических режимов переработки молока на содержание селена в молочных продуктах

Молоко является исходным сырьем для получения молочных продуктов. В связи с этим исследовали влияние технологических режимов на содержание селена в молочных продуктах (пастеризованного и стерилизованного молока, сладкосливочного несоленого масла), выработанных из сырого молока, которое было получено от коров опытной и контрольной групп.

Установлено, что тепловая обработка сырого молока существенно не влияла на содержание селена в молоке, потери составили соответственно 1,6 и 2,9% для пастеризованного и стерилизованного молока (табл. 3).

Таблица 3

Содержание селена в пастеризованном и стерилизованном молоке, полученном от коров контрольной и опытной групп, мкг/мл

Режим Контрольный образец Опытный образец

Молоко сырое 0,054±0,007 0,212+0,002

Пастеризация (70-72°С) 0,054±0,006 0,208±0,001

Стерилизация (110-120°С) 0,053±0,008 0,206±0,001

Таблица 4 Содержание селена в продуктах, полученных из молока коров контрольной и опытной групп

Продукт Количество селена, мкг/мл (мкг/гдля сливочного масла)

Контрольный образец Опытный образец

Молоко сырое 0,058±0,006 0,225±0,010*

Эбезжиренное молоко 0,032±0,001 0,122±0,008*

Гливки 0,028±0,001 0,092±0,007*

Иливочное масло 0,021 ±0,001 0,080±0,007*

Тахта 0,009±0,001 0,010±0,005

" Достоверно относительно контрольной группы (р<0,01).

Как видно из таблицы 4, содержание селена в опытных образцах продуктов уменьшается в ряду: молоко, обезжиренное молоко, сливки, сливочное масло и пахта. Известно, что селен в процессе метаболизма способен замещать серу в белковых молекулах [5\уашоп е1 а1, 1991]. Содержание белка в сливках и сливочном масле незначительное. Поэтому полагаем, что уменьшение содержания селена в ряду молочных продуктов обусловлено снижением в них содержания белка. Характерной особенностью селенсодержащих белков, к числу которых относятся окислительно-восстановительные ферменты, является участие в защите организма от оксидативного стресса. вРХ-4 (РНвРХ) -единственный липофильный фермент из группы глутатионпероксидаз, осуществляющий восстановление гидроперекисей жирнокислотных остатков фосфолипидов без предварительного гидролиза фосфолипазой А [ТутелЕгян, Княжев, 2002], наличием которого, по-видимому, можно объяснить содержание органической формы селена в сливках и сливочном масле.

Были получены образцы сливочного масла, выработанные по стандартной технологии, включающей сепарирование молока, нормализацию и пастеризацию сливок, охлаждение и созревание, сбивание сливок, промывку масляного зерна, обработку масла и формирование монолита.

По органолептическим и физико-химическим показателя? свежевыработанные образцы сливочного масла, полученные из опытного 1 контрольного образцов сливок молока, не отличались. Следовательно селенсодержащее сливочное масло удовлетворяет установленным требованиям ] отношении вкусовых свойств, структуры, консистенции. Содержание селена 1 сливочном масле, выработанном из молока коров контрольной и опытной групп составляло соответственно (0,021±0,001)мкг/г и (0,080±0,007)мкг/г.

По ГОСТ 37-91 сливочное масло в потребительской таре должн< храниться при температуре не выше -3°С и относительной влажности воздух; 80% не более 90 сут со дня выработки.

Органолептические показатели образцов сливочного масла, получении! из опытного и контрольного проб сливок молока, оценивали по 20-балльно( шкале в соответствии с ГОСТ 37-91. Баллы между показателями распределялиа следующим образом: вкус и запах - 10, консистенция и внешний вид - 5, цвет -2, упаковка - 3. В зависимости от общей балльной оценки масло относят I одному из сортов: высшему сорту при общей оценке 13-20 баллов, к 1-му сорту при оценке 6-12 баллов. Так из таблицы 5 видно, что опытный и контрольный образцы отнесены к высшему сорту, при хранении опытный образец сохранял свои потребительские свойства до 5 месяцев.

Таблица 5

Органолептическая оценка масла в процессе хранения

Оценка масла по 20-балльной шкале (ГОСТ 37-91)

Срок хранения, мес.

0 1 2 3 4 5

Сливочное масло (контрольный образец) 20 20 18 17 15 10

Сливочное масло (опытный образец) 20 20 20 19 17 15

В процессе переработки и хранения пищевые продукты, содержащие в своем составе жиры, подвергаются окислению кислородом воздуха, что ведет к снижению их пищевой ценности, ухудшению органолептических свойств и уменьшению срока годности продукции [Федоров, Барышев, Стародубцева, 2007]. Так, были изучены изменения показателей перекисного числа в процессе хранения сливочного масла. Динамика изменения перекисных чисел молочного жира, выделенного из контрольного и опытного образцов масла, представлена на рисунке 7. Показатели перекисного числа в контрольных образцах при хранении были выше, чем в опытных образцах. Существенное повышение перекисного числа в опытном образце наблюдалось после четырех месяцев хранения, тогда как в контрольной пробе - после двух месяцев хранения. Перекисное число в контрольных образцах масла на четвертый месяц хранения было ниже

эегламентируемого СанПиНом 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования эезопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» на 9,6%, а в опытных -на 49,8%. По-видимому, замедление окислительных процессов в опытной пробе связано с антиоксидантными свойствами селена.

° "а а ч

Продолжительность хранения, мес.

-•-Сливочное масло (контрольный образец)

-о-Сливочное масло (опытный образец)

1 '" — Максимально допустимое значение перекисного числа

Рисунок 7. Изменение перекисного числа сливочного масла в процессе хранения

На основании полученных результатов сделан вывод, что более стойким к хранению является опытный образец, содержащий селен. Срок хранения сливочного масла, содержащего органическую форму селена, может быть увеличен до 5 месяцев со дня изготовления.

Таким образом, использование молока, содержащего селен, позволит расширить ассортимент молочных продуктов, содержащих органическую форму селена.

выводы

1. Разработан способ получения селенсодержащей кормовой добавки на основе цеолитов Холинското месторождения для крупного рогатого скота. Экспериментально показано, что максимальная концентрация иммобилизированного на пептидах эластина селена достигала 1,0 мкг/мл через 2 часа. Установлено, что оптимальным соотношением модифицированного селеном гидролизата эластина и частиц цеолита диаметром 0,1-1,0 мм является соотношение 1:1, обеспечивающее концентрацию связанного селена в добавке (465±5 мкг/100 г).

2. Установлено, что максимальная концентрация селена в молоке коров, получавших новую кормовую добавку, достигала 0,270±0,026 мкг/мл. При этом 1 стакан молока (200 мл) содержит 54±0,2 мкг селена, что составляет 36% от средней суточной потребности взрослого человека. Также показано, что максимальная концентрация витамина Е в селенсодержащем молоке достигала 1,61±0,08 мкг/мл.

3. Тепловая обработка сырого молока (пастеризация, стерилизация) не вызывала существенного снижения концентрации селена в молоке. Потери составили 1,6% и 2,9% для пастеризованного и стерилизованного молока, соответственно. Установлено, что содержание селена в выработанных молочных продуктах уменьшается в ряду: молоко, обезжиренное молоко, сливки, сливочное масло и пахта.

4. При выработке сладкосливочного несоленого масла установлено присутствие селена (0,080±0,007 мкг/г). Более того, срок хранения селенсодержащего сливочного масла может быть увеличен до 5 месяцев со дня изготовления.

5. На основании полученных результатов утверждена нормативная документация на кормовую добавку (ТУ 2163-002-26754156-2008), производственная проверка которой проведена в ОАО «Оронго» Иволгинского района Республики Бурятия.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Нимацыренова Л.Г., Мангутова Е.В., Жамсаранова С.Д. Изучение режимов сорбции модифицированного селеном гидролизата белка на цеолитах Холинского месторождения (0,1-1,0 мм) // Сборник науч. тр. ВСГТУ. Серия: Химия и биологически активные вещества природных соединений. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2007. - Вып. 12. - С. 23-24.

2. Нимацыренова Л.Г., Мангутова Е.В., Жамсаранова С.Д. Использование цеолитов в качестве сорбента в кормовой добавке // Проблемы устойчивого развития региона: Материалы VI школы-семинара молодых ученых России. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2007. - С. 143-144.

3. Нимацыренова Л.Г., Мангутова Е.В., Жамсаранова С.Д. Способ обогащения продуктов питания органической формой селена // Актуальные проблемы технологии живых систем: Материалы II междунар. науч.-техн. конф. молодых ученых. - Владивосток, 2007. - С. 336-337.

4. Нимацыренова Л.Г., Козлова A.C., Жамсаранова С.Д. Оценка эффективности новой селенсодержащей кормовой добавки для лактирующих коров // Сборник науч. тр. ВСГТУ. Серия: Химия и биологически активные вещества природного происхождения. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2008. - Вып.13. - С. 35-41.

5. Жамсаранова С.Д., Мангутова Е.В., Нимацыренова Л.Г. Селенсодержащая кормовая добавка// Молочная промышленность. 2008. - №7. - С. 23.

6. Нимацыренова Л.Г., Жамсаранова С.Д. Исследование сливочного масла, выработанного из молока коров, получавших новую кормовую добавку // Сборник науч. тр. ВСГТУ. Серия: Химия и биологически активные вещества природного происхождения. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2009. -Вып. 14,- С. 3-7.

7. Жамсаранова С.Д., Нимацыренова Л.Г. Селенобогащенная добавка для молока и сливочного масла // Сыроделие и маслоделие. - 2009. - №3. - С.

8. Нимацыренова Л.Г., Бубеев И.Т., Жамсаранова С.Д. Прижизненное формирование качества сырья животного происхождения // Здоровая молодежь - будущее России: Материалы Байкальского молодеж. форума. - Улан-Удэ: Новапринт, 2009. - С. 67-70.

55-56.

Подписано в печать 16.09.2009г. Формат 60x841/16. Усл. печ. л. 1,16. Тираж 100 экз. Заказ № 215

Издательство ВСГТУ. 670013, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40в.

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Нимацыренова, Любовь Георгиевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Роль селена в питании человека.

1.1.1. Биологическая роль селена.

1.2. Способы коррекции дефицита селена.

1.2.1. Создание селенсо держащих Б АД к пище.

1.2.2. Разработка селенсодержащих удобрений и кормовых добавок.

1.3. Прижизненное обогащение пищевого сырья селеном.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Общие методы исследований.

2.2.1. Физико-химические методы исследования.

2.2.2. Биологические методы исследования.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕНСОДЕРЖАЩЕЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ОСНОВЕ ЦЕОЛИТОВ ХОЛИНСКОГО

МЕСТОРОЖДЕНИЯ.

3.1. Анализ и выбор компонентов кормовой добавки для крупного рогатого скота.

3.2. Разработка технологии кормовой добавки для крупного рогатого скота.

3.3. Расчет себестоимости производства селенсодержащей кормовой добавки для крупного рогатого скота.

ГЛАВА 4. ВВЕДЕНИЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ В РАЦИОН

КОРМЛЕНИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.

4.1. Изучение динамики накопления селена и витамина Е в коровьем молоке.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ РЕЖИМОВ ПЕРЕРАБОТКИ МОЛОКА НА СОДЕРЖАНИЕ СЕЛЕНА В МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ

5.1. Исследование влияния тепловой обработки молока на содержание селена в пастеризованном и стерилизованном молоке.

5.2. Исследование влияния кормовой добавки на качественные характеристики сливочного масла.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка новой кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена"

Актуальность темы. В настоящее время не ослабевает интерес исследователей к селену - микроэлементу, необходимому для нормальной жизнедеятельности организма человека и животных. Селен обеспечивает нормальную функцию печени, обладает антиоксидантными, иммуномодулирующими и детоксицирующими свойствами. Дефицит селена в организме, как известно, вызывает нарушение обмена веществ, снижение роста, дегенеративные изменения мышечной ткани, печени, кардиомиопатию и репродуктивные дисфункции (104). На клеточном уровне недостаток селена ведет к нарушению целостности клеточных мембран, снижению активности ферментов, накоплению кальция внутри клеток, нарушению метаболизма аминокислот и кетокислот, подавлению энергопродуцирующих процессов (109). В механизме действия селена большое значение имеет формирование им активных центров ферментов, например, глутатионпероксидазы, глицинредуктазы и др. (84, 141, 143).

Потребление селенсодержащих продуктов питания, в том числе молока и молочных продуктов, имеет важное значение для селендефицитных регионов. С этой целью в сельском хозяйстве в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота (КРС) широко применяются неорганические соединения селена в виде селенита и селената натрия. Они недостаточно эффективны ввиду малой биодоступности (20-30%) и высокой токсичности, быстро действуют, но не кумулируются в организме (4). Органические соединения селена обладают меньшей токсичностью для животных, по сравнению с неорганическими (24). Малая степень аккумулирования неорганического селена в органах и тканях, невысокий биологический эффект и возможность токсикозов животных при передозировках определяют поиски производных селена с меньшей токсичностью. Создание новой кормовой добавки для прижизненного формирования микроэлементного состава сырья животного происхождения является актуальным.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом работ Проблемной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО Восточно-Сибирского государственного технологического университета по научному направлению «Биотехнология пищевых продуктов нового поколения».

Цель работы. Разработать технологию кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие основные задачи:

1. Оптимизировать режимы получения связанной формы селена с пептидами соединительно-тканного белка.

2. Разработать технологию кормовой добавки для крупного рогатого скота.

3. Изучить динамику накопления селена и витамина Е в коровьем молоке при использовании селенсодержащей кормовой добавки.

4. Оценить влияние тепловых режимов переработки сырого молока, полученного от коров опытной группы, на содержание селена.

5. Исследовать содержание селена в молочных продуктах, полученных из молока, содержащего органическую форму селена.

Научная новизна. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность связывания неорганической формы селена с функциональными группами пептидов эластина. Предложена модель связывания селенита натрия с пептидами эластина. Отработаны режимы сорбции комплекса селен-пептиды эластина на цеолитах Холинского месторождения с диаметром измельчения 0,1-1,0 мм. Установлены режимы получения кормовой добавки на основе цеолитов Холинского месторождения для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена. Исследована безопасность кормовой добавки. На модельных экспериментах установлено, что введение кормовой добавки в рацион лактирующих коров из расчета 200 г в сутки, содержащей 931 мкг связанной формы селена, уже на 14 сутки кормления приводит к увеличению содержания селена в молоке. Максимальное содержание органической формы селена в молоке достигало 0,270±0,026 мкг/мл через 42 дня включения кормовой добавки в рацион лактирующих коров, которое поддерживалось в течение всего периода кормления.

Экспериментально установлено, что накопление селена в молоке коров, получавших кормовую добавку, способствует увеличению содержания витамина Е в молоке. Тепловая обработка сырого молока, полученного от коров, получавших кормовую добавку, не вызывала существенного снижения содержания селена в молоке. Потери составили 1,6-2,9%.

Новизна исследований оформлена в заявке на патент РФ(№ 2008146737 (061090) от 26.11.2008 г.)

Практическая значимость. Разработана технология кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена. Разработаны и утверждены проекты нормативной документации (Технические условия и Технологическая инструкция) на кормовую добавку «Цеохол-Бе» для крупного рогатого скота (ТУ 2163-002-26754156-2008). Разработан способ получения молока и молочных продуктов, содержащих органическую форму селена. Проведено промышленное внедрение селенсодержащей кормовой добавки «Цеохол-Бе» на базе ОАО «Оронго» (акт внедрения от 26.03.2009 г.). Выработана опытно-промышленная партия сладкосливочного несоленого масла из селенсодержащих сливок на базе предприятия ОАО «Молоко» (акт выработки от 30.03.2009 г.).

Работа поддержана грантом «Молодые ученые ВСГТУ» (2008 г.).

Апробация работы. Основные положения работы и результаты исследований доложены и обсуждены на II Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2007 г.); VI школа-семинар молодых ученых России «Проблемы устойчивого развития региона» (Улан-Удэ, 2007 г.); ежегодной научно-практической конференции преподавателей, научных сотрудников и аспирантов ВСГТУ (Улан-Удэ, 2007-2009 г.г.); Байкальском молодежном форуме «Здоровая молодежь - будущее России» (Улан-Удэ, 2009 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 2 статьи в журналах из перечня, рецензируемого ВАК.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Нимацыренова, Любовь Георгиевна

выводы

1. Разработан способ получения селенсодержащей кормовой добавки на основе цеолитов Холинского месторождения для крупного рогатого скота. Экспериментально показано, что максимальная концентрация иммобилизированного селена достигает 1,0 мкг/мл через 2 час. Установлено, что оптимальным соотношением модифицированного селеном гидролизата эластина и частиц цеолита диаметром 0,1-1,0 мм является соотношение 1:1, обеспечивающее максимальную концентрацию связанного селена в добавке (465±5 мкг/100 г).

2. Установлено, что максимальная концентрация селена в молоке при использовании новой кормовой добавки достигает 0,270±0,026 мкг/мл, на 1 стакан молока (200 мл) приходится 54±0,2 мкг селена, что составляет 36% от средней суточной потребности взрослого человека. Также показано, что максимальная концентрация витамина Е в селенсодержащем молоке достигает 1,61±0,08 мкг/мл.

3. Тепловая обработка сырого молока (пастеризация, стерилизация) не вызывает снижения концентрации селена в молоке. Потери составили 1,6% и 2,9% для пастеризованного и стерилизованного молока, соответственно. Установлено, что содержание селена в выработанных молочных продуктах уменьшается в ряду: молоко, обезжиренное молоко, сливки, сливочное масло и пахта.

4. При выработке сладкосливочного несоленого масла установлено присутствие селена (0,080±0,007 мкг/г). Более того, срок хранения селенсодержащего сливочного масла может быть увеличен до 5 месяцев со дня изготовления.

5. На основании полученных результатов утверждена нормативная документация на кормовую добавку (ТУ 2163-002-26754156-2008), производственная проверка которой проведена в ОАО «Оронго» Иволгинского района РБ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Нимацыренова, Любовь Георгиевна, Улан-Удэ

1. Атлавин, А.Б. Ассимиляция селена в организме животных / А.Б. Атлавин, М.Р. Апсите, Б.В. Питран // Сборник научных статей. Рига, 1990. -С. 30-65.

2. Балым Ю.П. Влияние препаратов селена на продуктивность крупного рогатого скота и качество мяса / Ю.П. Балым, В.И. Беляев, C.B. Шабунин // Все о мясе. М.: Изд-во ВНИИМП, 2007 - С. 36.

3. Беседнова, H.H. Иммуноактивные пептиды из гидробионтов и наземных животных: учеб. пособие для вузов / H.H. Беседнова. -Владивосток: ТИНРО-центр, 2004. С. 248.

4. Битуева, Э.Б. Перспективы использования эластина / Э.Б. Битуева // Успехи современного естествознания. 2003. - №7. - С. 37-38.

5. Брусиловский, Л.П. Оборудование для молочной промышленности, смежных отраслей и торговли: учеб. пособие для вузов / Л.П. Брусиловский. М.: 1998.

6. Буров, А.И. Сырьевая база природных цеолитов в России / А.И. Буров // Природные цеолиты России. Новосибирск, — 1992. Т.1.

7. В Татарстане наладят производство селенизированного мяса Электронный ресурс. / Татар-Информ; Шакиров Ш. Электрон, дан. 2008. — Режим доступа: http://tatar-inform.ru

8. Ван, A.B. Целебные камни: учеб пособие для вузов. / A.B. Ван -Новосибирск, 1997. С. 70.

9. Вапиров, В.В. Селен. Некоторые аспекты химии, экологии и участия в развитии патологии (Обзор) / В.В. Вапиров, М.Э. Шубина, Н.В. Вапирова. Петрозаводск, 2007.

10. Винтер, Г. Витамины, травы, минеральные и пищевые добавки: учеб пособие для вузов. / Г. Винтер. М.,: Изд-во Фаир-Пресс, 2002. - 10000 экз. - ISBN - 5-8183-0191-5, 1-55561-165-6.

11. Вощенко A.B. Алиментарная селендефицитная эндемическая делатационная кардиомиопатия (Кешанская болезнь) / A.B. Вощенко. Чита, 1996.-С. 95.

12. Вышемирский Ф.А. Маслоделие в России: история, состояние, перспективы / Ф.А. Вышемирский. Углич: Рыбинский Дом печати, 1998. С. 589.

13. Гелдыш, Т.Г. Влияние ферментных препаратов на мышечную и соединительную ткани говядины / Т.Г. Гелдыш, В.Г. Вересков, С.А. Докучаев // Мясная индустрия. М., 2000. - №7. - С. 30-31.

14. Гмошинский, И.В. Минеральные вещества в питании человека. Селен: всасывание и биодоступность / И.В. Гмошинский, В.К. Мазо // Вопросы питания. -М., 2006, -№5. С. 15-21.

15. Гмошинский, И.В. Микроэлемент селен: роль в процессах жизнедеятельности: обзорная информация / И.В. Гмошинский и др. // Экология моря HAH Украины. 2000, - Вып. 54. - С. 5-19.

16. Гмошинский, И.В. Селен в питании: краткий обзор / И.В. Гмошинский, В .К. Мазо // Medicina Altera. 1999, - № 4. - С. 18-22.

17. Голубкина, H.A. Гомеостаз селена при экспериментальной анафилаксии у крыс на фоне приема восстановленного глутатиона и селеобогащенной спирулины / H.A. Голубкина и др. // Вопросы мед. химии. 2000. -№1.- С. 28-32.

18. Голубкина, H.A. Влияние биологически активной добавки автолизата обогащенных селеном пекарских дрожжей на состояние кишечного барьера у крыс при анафилаксии / H.A. Голубкина и др. // Вопросы питания. М., 1998.-№3.-С. 18-22.

19. Голубкина, H.A. Динамика перераспределения селена в крови / H.A. Голубкина, Я.А. Соколов, Б.Н. Емельянов: Микроэлементозы в медицине М., 2003. - Т. 4. Вып. 1. - С. 17-20.

20. Голубкина, H.A. К вопросу обогащения пищевых продуктов селеном / H.A. Голубкина, С.А. Хотимченко, В.А. Тутельян // Микроэлементы в медицине. М., 2003. С. 1-5.

21. Голубкина, H.A. Обеспеченность селеном различных групп населения республики Башкортостан / H.A. Голубкина, М.В. Шагова, В.Б. Спиричев // Вопросы питания. — М., 1996. №4. - С. 3-5.

22. Голубкина H.A. Селен в питании: растения, животные, человек: учеб. пособие для вузов / H.A. Голубкина, Т.Т. Папазян. М.: Изд-во Печатный город, 2006. - С. 18-20. - ISBN - 5-98467-002-Х.

23. Голубкина, H.A. Селен в продуктах питания Уральского экономического региона / H.A. Голубкина, С.А. Хотимченко // Гигиена и санитария. М., 1994. - С. 54-57.

24. Голубкина, H.A. Селен в экологии и медицине / H.A. Голубкина, В.А. Скальный, Я.А. Соколов. М.: Изд. КМК, 2002. - С. 110.

25. Голубкина, H.A. Селенобогащенные дрожжи Saccharomyces cerevisiae / H.A. Голубкина, Я.А. Соколов, С.А. Хотимченко // Биотехнология. М., 1996. - №5. - С. 52-56.

26. Горбатова, К.К. Биохимия молока и молочных продуктов: учеб. пособие для вузов / К.К. Горбатова. СПб.: Изд-во ГИОРД, 2003.

27. Горбатова, К.К. Физико-химические и биохимические основы производства молочных продуктов: учеб. пособие для вузов / К.К. Горбатова. СПб.: Изд-во ГИОРД, 2004.

28. Гореликова, Г.А. Нутрицевтик селен: недостаточность в питании, меры профилактики / Г. А. Гореликова, Л. А. Маюрникова, В.М. Позняковский // Вопросы питания. — М., 1997. №5. - С. 18-21.

29. Горелов, A.B. Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта и принципы коррекции нарушений ее состава / A.B. Горелов // Русск. медиц. журнал, 2008-№18.-С. 1173.

30. Горлов, И.Ф. Повышение пищевой ценности молока за счет обогащения рациона коров органическим селеном / И.Ф. Горлов, В.Н. Храмова // Хранение и переработка сельхозсырья. М., 2006. - №4. - С. 4952.

31. ГОСТ 37-91. Масло коровье. Технические условия. Введ. 1992-01-01. -М.: Изд-во Стандартинформ, 2006.

32. ГОСТ 0410-96. Методы измерений массовой доли витаминов А и Е в пробах пищевых продуктов и пищевого сырья на анализаторе жидкости «Флюорат-02» хроматографическим методом. СПб., 2000.

33. ГОСТ 1341-97. Пергамент растительный. Технические условия. -Введ. 1997-10-13. -М.: Изд-во Стандартинформ, 1997.

34. ГОСТ 3624-92. Молоко и молочные продукты. Титриметрические методы определения кислотности. Технические условия. -Введ. 1994-01-01. М.: Изд-во Стандартинформ, 1995.

35. ГОСТ 3625-84. Молоко и молочные продукты. Методы определения плотности. Технические условия. Введ. 1985-07-01. — М.: Изд-во Стандартинформ, 1989.

36. ГОСТ 3626-73. Молоко и молочные продукты. Методы определения влаги и сухого вещества. Технические условия. Введ. 1974-0701. - М.: Изд-во Стандартинформ, 1974.

37. ГОСТ 5867-90. Молоко и молочные продукты. Методы определения жира. Технические условия. Введ. 1991-07-01. - М.: Изд-во Стандартинформ, 1991.

38. ГОСТ 8218-89. Молоко. Метод определения чистоты. Титриметрические методы определения кислотности. Технические условия. — Введ. 1990-01-01.-М.: Изд-во Стандартинформ, 1990.

39. ГОСТ 13496.7-97. Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности. Технические условия. -Введ. 1998-01-01. -М.: Изд-во Стандартинформ, 1999.

40. ГОСТ 25179-90. Молоко. Методы определения белка. Технические условия. Введ. 1991-01-01. - М.: Изд-во Стандартинформ, 1991.

41. ГОСТ Р 51453-99. Жир молочный. Метод определения перекисного числа в безводном жире. Технические условия. Введ. 1999-1222. - М.: Изд-во Стандартинформ, 1999.

42. ГОСТ Р 52054-2003. Молоко натуральное коровье сырое. Технические условия. - Введ. 2004-01-01. - М.: Изд-во Стандартинформ, 2004.

43. Громова, O.A. Антиоксид анты: метод, пособие. / O.A. Громова, Т.В. Авдеенко, A.B. Скальный. Иваново, 1996. С. 23-26.

44. Драчева, Л.В. Селендефицит и биовозможности его устранения / Л.В. Драчева. Материалы IV съезда общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. М.: Изд-во ООО «Макс Пресс», 2006. С. 68-70. - 18ВМ-13: 978-5-317-01801-6, КВЫ-Ю: 5-317-01801-3.

45. Егорова, Е.А. Получение и экспериментальная оценка новых пищевых источников органических форм селена: дисс. канд. биол. наук (03.00.04) / Егорова Екатерина Александровна. М., 2006. - С. 121. -Библиогр.: С. 121. -РГБ ОД, 61:06-3/929.

46. Ермаков, В.В. Геохимическая экология как следствие системного изучения биосферы / В.В. Ермаков // Проблемы биогеохимии и геохимической экологии. — М., 2000 -Т.23. С. 152-182.

47. Ермаков, В.В. Биологическое значение селена / В.В. Ермаков, В.В. Ковальский. -М.: Изд-во Наука, 1974. С. 298.

48. Замана, С., Соколов А. Восполнение потребности животных в минеральных элементах / С. Замана, А. Соколов // Комбикорма. М., 2001, -№6. - С. 46-48.

49. Зобкова, З.С. Технологические решения повышения стойкости в хранении биоактивных молочных продуктов / З.С. Зобкова // Молочная промышленность. М., 2005 - №3.

50. Золотов, П.А. Разработка и применение новых видов хлеба, обогащенного органической формой селена / П.А. Золотов и др. // Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека. М., 1999. - С. 16.

51. Казицына, Л.А. Применение УФ, ИК, ЯМР и масс-спектроскопии в органической химии. / Л.А. Казицына, Н.Б. Куплетская. — М.: Изд-во Наука, 1979. 260- 2000 экз. - ISBN 5-8076-0089-5 (в пер.)

52. Калачнюк, Г.И. Механизм действия цеолитов в организме животных: учеб. пособие. / Г.И. Калачнюк. Новосибирск, 1993.

53. Кирова, Ю.И. Антиоксидантное и антитоксическое действие новых селеноорганических соединений: дисс. канд. биол. Наук (03.00.04) / Кирова Юлия Игоревна. Ростов-на-Дону, 2004. — С. 186. - Библиогр.: С. 187-194. -РГБ ОД, 61:04-3/1410.

54. Ковалевский А.Л. Селен уникальный, жизненно важный, незаменимый микроэлемент / А.Л. Ковалевский // Геохимия биосферы: I междунар. совещание. - Новосибирск, 1994. - С. 54-55.

55. Кравченко, Л.В. Селенсодержащие спирулина и фикоцианин как источник биодоступного селена / Л.В. Кравченко, О.Л. Гладких, И.В. Гмошинский, В.К. Мазо // Вопросы питания. М., 2008. - Т. 77. - №4. - С. 63-65.

56. Креймак, С.Е. Изучение методов оценки качества вологодсткого масла / С.Е. Креймак, С.И. Шнейдерман. Владивосток, 2001. С. 4-9.

57. Кругляков, Г.Н. Товароведение продовольственных товаров / Г.Н. Кругляков, Г.В. Круглякова. Ростов-на-Дону: Изд. ц-р «МарТ», 2000.

58. Куваева, З.И., Селенсодержащие комплексы аргинина и лизина / З.И. Куваева и др. // Химико-фармацевтический журнал. М., 2007. - Т. 41. - №3. - С. 37-39.

59. Кузнецов, С.Г. Использование природных цеолитов в животноводстве / С.Г. Кузнецов. М.: Изд-во Агропром, 1994. - С. 44.

60. Кузнецов, С. Микроэлементы в кормлении животных / С. Кузнецов, А. Кузнецов // Животноводство России, М., 2000.

61. Кузьмичева, В.П.О существования гидроселенит-иона в водных растворах / В.П. Кузьмичева и др. // XXVI Герценские чтения: химия: сб. науч. докладов. Леннинград, 1973. - С. 139-140.

62. Кунижев, В.Д. Новые технологии в производстве молочных продуктов / В.Д. Кунижев, В.А. Шуваев, М.: ДеЛи принт, 2004. ISBN: 594343-073-3.

63. Лобанов, В.Г. Биохимия: учеб. пособие для вузов / В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова. М.: Изд-во ГИОРД, 2003. - Библиогр. - 10000 экз. - ISBN 5-901065-61-1.

64. Лужен, Гу. Дефицит селена: причины и следствия / Институт питания Heinz // Дефицит микронутриентов у детей грудного и раннего возраста: IV международ, симпоз., сент. 1995. С. 93- 105.

65. Мазо, В.К. Микроводоросль спирулина в питании человека / В.К. Мазо, И.В. Гмошинский, И.С. Зилова // Вопросы питания. М., 2004., - №1. -С. 45-53.

66. Максимюк, H.H. Исследование биохимических свойств белковых гидролизатов / H.H. Максимюк // Химия. Технология. Качество: Состояние. Проблемы и перспективы развития: межвуз. сб. науч. тр. Магнитогорск: Изд-во МГТУ, 2005, С. 112.

67. Методы и технологические режимы производства сливочного масла Электронный ресурс.; ред. Константинов А. Электр, дан. - М., 2005 - http://SavErKon.ru/.

68. Минина, JI.A. Селендефицит у населения Забайкалье / JI.A. Минина и др. // Геохимическая экология и биохимическое таксонов биосферы: Материалы IV Росс, биохимич. школы. М.: Изд-во Наука, 2003. -С. 238-239.

69. МУК 04-33-2004. Методика выполнения измерений массовой доли селена в пробах пищевых продуктов и продовольственного сырья флюометрическим методом на анализаторе жидкости «Флюорат-02». СПб, 2004.

70. Мухачев A.B. Стратегия развития предприятия / A.B. Мухачев // Молочная промышленность. М., 2003. №9. - С. 10.

71. Мухин, В.А. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование /

72. B.А. Мухин, Мурманск: ПИНРО, 2001. С. 97.

73. Никитина, Л.П. Селен в жизни животных и человека / Л.П. Никитина, В.Н. Иванов. М.: Изд-во КМК, 1995. С. 242; 22 см. - Библиогр.:

74. C. 30-35. 2000 экз. - ISBN 3-5674-56674-1.

75. Паничева, А.М. Разработка концепции биологического действия цеолитов; схемы и дозировки БАД к пище «Литовит» / А.М. Паничева, А.Н. Гулькова, Новосибирск, 1998.

76. Папазян, Т.М. Обогащение продуктов животноводства селеном / Т.М. Папазян // Животноводство России, М., 2001.

77. Пат. 2103874 Российская Федерация, МПК А 21 Б 008/02. Способ производства хлеба / Золотов П. А., Тутельян В. А., Княжев В. А.; заявитель и патентообладатель: Золотов Петр Александрович. № 97106690, 1998.

78. Пат. 2189762 Российская Федерация, МПК А 23 К 1/16, А 23 I 3/20. Биостимулирующая кормовая добавка / Аликин Ю.С.; Клименко В.П.;

79. Сенженко JI.П.; заявитель и патентообладатель: Гос. науч. центр вирусологии и биотехнологии "Вектор". -№ 99105165/13; 1995.

80. Петункин, Н.И. Проблемы исследований применения цеолитов в молочной промышленности и сельском хозяйстве / Н.И. Петункин, A.A. Черновский // Новейшие исследования процессов производства молочно-белковой продукции. Новосибирск. 1991. С. 107-115.

81. Подколзин, A.A. Факторы малой интенсивности в биоактивации и иммунокоррекции./ Подколзин A.A., Донцов В.И., М., 1995. С. 109-127.

82. Проскурина, И.К. Биохимия: учеб. пособие для вузов / И.К. Проскурина. М.: Изд-во Владос-Пресс, 2004. - С. 236.: ил. - Библиогр.: С.230-232.

83. Решетник, Л.А. Биохимическое и клиническое значение селена для здоровья человека / Л.А. Решетник, O.E. Парфенова // Микроэлементы в медицине. М., 2001. -Т.2. Вып.2. - С. 2-8.

84. Решетник, Л.А. Способы определения и методы коррекции обеспеченности селеном. / Л.А. Решетник, Е.О. Парфенова, A.B. Скальный. // Экология моря, 2000 Вып.54 - С. 68-74.

85. Риш, М.А. Наследственные микроэлементозы // Техногенез и биогеохимическая эволюция таксонов биосферы: тр. биохим. лабор. М.: Изд-во Наука, 2003. Т. 24. - С. 301-348.

86. Родионова, Т.Н. Фармакодинамика селеноорганических препаратов и их применение в животноводстве: дисс. докт. биол. наук (16.00.04) / Родионова Тамара Николаевна; Краснодар, 2004. С. 296. - РГБ ОД, 71:05-3/57.

87. Савченко, М.Ф. Клинико-гигиеническая оценка обеспеченности селеном населения Иркутской области: пособие для врачей и специалистов медико-биологического профиля / М.Ф. Савченко и др.. Иркутск, 2001. С. 26.

88. Садовникова, Н. Преимущества природной формы селена в кормлении скота / Н. Садовникова // Молочное и мясное скотоводство. М., 2005,- №8. С. 11-12.

89. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы.

90. Серебрянский, Е.П. Комплексный подход к элементному анализу волос с использованием методов ИСП-АЭС и ИСП-МС / Е.П. Серебрянский,

91. A.B. Скальный, О.Ю. Чечеватова, М.Г. Скальная, В.А. Демидов""// Микроэлементы в медицине. М., 2003. Т.4 (№1). - С.41-46.

92. Скальный, A.B. Микроэлементозы человека. / A.B. Скальный, М.: Изд-во Научный мир, 1999. С. 96.

93. Скальный A.B. Микроэлементы для вашего здоровья /„ A.B. Скальный. М.: Изд-во ОНИКС 21 век, 2003. С. 238.

94. Скворцова, В.И. Лечение и профилактика ишемического инсульта / В.И. Скворцова, Л.В. Стаховская // Диагностика и терапия в клинике внутренних болезней: лекции для практикующих врачей: X Росс, нац. конгр. М., 2004. - С. 142-160.

95. Скурихин, В.Н. Методы анализа витаминов А, Е, Д и каротина в кормах, биологических объектах и продуктах животного происхождения /

96. B.Н. Скурихин, C.B. Шабаев. М., Химия, 1996.

97. Смагулов, А.К. Качество и безопасность сельскохозяйственной пищевой продукции: учеб. пособие для вузов / А.К. Смагулов и др., Алматы: КазНаУ, 2002. С. 543.

98. Спиричев, В.Б. Коррекция дефицита микронутриентов в России -опыт и перспективы / В.Б. Спиричев, JI.H. Шатнюк, О.В. Большаков // Пищевая промышленность. М., 2000, №4. - С. 98-101.

99. Спиричев, В.Б. Обогащение пищевых продуктов микронутриентами: научные подходы и практические решения / В.Б. Спиричев // Пищевая промышленность. М., 2003. №3. - С. 10-16.

100. Степанова, Л.И. Справочник технолога молочного производства: технологии и рецептуры: в 4 т. / Л.И. Степанова. СПб.: Изд-во ГИОРД, 2003. - Т.2. - Масло коровье и комбинированное. - ISBN 5901065190:406.98.

101. Стрейн, Дж. Последствия повышения рекомендуемой суточной дозы микронутриентов: фолиевой кислоты и селена / Дж. Стрейн // Вопросы питания. М., 2000. - №3 - С. 50-53.

102. Твердохлеб Г.В. Технология молока и молочных продуктов / Г.В. Твердохлеб, З.Х. Диланян, Л. В. Чекулаева, Г. Г. Шиллер. М.: Изд-во Агропромиздат, 1991. С. 463.

103. Телишевская, Л .Я. Белковые гидролизаты: получение, состав, применение. / Л.Я. Телишевская. М.: Изд-во Аграрная наука, 2000. - С. 295.

104. Трифонов, А.Н Исследование комбинированных масел отечественного производства по физико-химическим показателям. / А.Н. Трифонов, Г.В. Твердохлеб. Новосибирск, 2006. - С. 3.

105. ТУ-2163-001-12763074-97. Природный цеолит для производства премиксов, наполнителей, биологически-активных добавок и пр., 1997.

106. Тутельян, В.А. Ваше здоровье в Ваших руках / В.А. Тутельян // Пищевая промышленность. - М., 2005, - №4. - С. 6-8.

107. Тутельян, В.А. Микронутриенты в питании здорового и больного человека / В.А. Тутельян и др. М.: Изд-во Колос, 2002. - С. 424.

108. Тутельян, В.А. Селен в организме человека: метаболизм, антиоксидантные свойства, роль в канцерогенезе / В.А. Тутельян и др.. М.: Изд-во РАМН, 2002. С. 224.

109. Федоров, В.Е. Метод Rancimat 743 для оценки окислительной устойчивости жиров и масел / В.Е. Федоров, А.Г. Барышев, Л.Н. Стародубцева // Масла и жиры. М.: Изд-во ООО «Отраслевые ведомости» -2007. -№11.

110. Харитонов, В.Д. Краткий справочник специалиста молочной промышленности / В.Д. Харитонов. СПб., 2003.

111. Хасина, М.А. Витамины и минеральные вещества в жизни человека / М.А. Хасина, O.A. Артюкова, А.Ф. Беляев, М.Ю. Хасина. Владивосток: Изд-во Дальневосточ. ун-т, 2001. С. 114.

112. Цветкова, Н.С. Витамин В и Se в кормлении свиней / Н.С. Цветкова//Зоотехния. М., 1993.- №7.-С. 13-16.

113. Цикуниб, А.Д. Обеспеченность селеном населения Республики Адыгея / А.Д. Цикуний, С.А. Завгородский // Вопросы питания. М., 2008. — №2. - С. 72-74.

114. Шаховская, А.К. О применении органической формы селена в питании гастроэнтерологических больных / А.К. Шаховская, И.В. Гмошинский, A.B. Васильев // Экология моря. Севастополь, 2000. - Т.54 -С. 83-86.

115. Шевченко, С.А. Эффективность использования селена, йода и их сочетаний в птицеводстве, свиноводстве и животноводстве: автореф. дис. докт. сельскохоз. наук / Шевченко Сергей Александрович. Барнаул, 2006. — С. 26-31.

116. Щеплягина, JI.A. Пренатальная и постнатальная профилактика и коррекция дефицита микроэлементов у детей / JI.A. Щеплягина // Русск. медиц. журнал: Науч. ц-р здоровья детей РАМН, 2001 Т.9 - № 19. - С. 809.

117. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник для вузов / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова, А.Д. Минакова; 2-е изд., перераб. и доп. -СПб.: Изд-во ГИОРД, 2003. - С. 439:ил. - Библиогр.: С. 412-413.

118. Шишков, Ю.И. Производное селеноцистеина микронутриент с протективными свойствами / Ю.И. Шишков и др. // Хранение и переработка сельхозсырья. М., 2002, - №7. - С. 51-55.

119. Штутман, З.М. Обменные связи между витамином Е, селеном и серусодержащими аминокислотами / З.М. Штутман, Р.В. Чаговец // Вопросы питания. М., 1970. №5. - С. 13-20.

120. Abdulla, М. Chmielnicka G. New aspects the distribution and metabolism of essencial elements after dietary exposure to toxic metals / M. Abdulla, G. Chmielnicka // Boil. Trace Elem. Res. 1990. - Vol. 23. - P. 25-53.

121. Arthur, J.R. Functional indncator of iodine and selenium status / J.R. Arthur // Proc. Nurt. Soc. 1999. №58 (r). - P. 507-512.

122. Arthur, J.R. Role of selenium in type I iodothyronine 5'-deiodinase and in thyroid hormone and iodine metabolism / J.R. Arthur, G.J. Beckett // R.F.

123. Burk (ed). Selenium in biology and human health. N.Y.: Springer Verlag., 1994. -P. 93-115.

124. Arthur, J.R. The role selenium in thyroid hormone metabolism / J.R. Arthur // Can 1. Physiol. And Pharmacol. 1991. - Vol. 69. - №11. - P. 16481952.

125. Bayard, C. Bioanalytical characterization of proteins / C. Bayard, F. Lottspeich. Max-Planck-Institute for Biochemistry, D-82152 Martinsried, Germany. 2001.

126. Boulegue, C. Synthesis of cystine-rich peptides / C. Boulegue et al. // Chemistry Today. 2006.

127. Brown, K.M. Selenium, selenoproteins and human health: a review / K.M. Brown, J.R. Arthur // Public. Health. Nutr. 2000. №4. - P. 593-599.

128. Burger, I.H. The effect of vitamin E and beta-carotene on the incidence of lung cancer and other cancer in male smokes. The Alpha-Tocopherol, Beta- Carotene Cancer Prevention Study Group / I.H. Burger // N. Eng. J. Med. -1994; 330 (15).-P. 1029-1035.

129. Chan, S. The role of copper, molybdenum, selenium and zink in nutrition and health / S. Chan, B. Gerson, S. Subramaniam // Clin. Lab. Med. -1998. Vol. 18, №4. - P. 673-685.

130. Clark, L.C. Effects of selenium supplementation for cancer prevention in patiens with carcinoma of the skin / L.C. Clark, G.F. Combs, B.W. Turnbull // JAMA. 1996.-Vol. 276, №26.-P. 1957-1963.

131. Combs, G.F. Antioxidants and Disease Prevention / G.F. Combs. CRC Press, Boca Ration, 1997. P. 97-113.

132. Ermakov, V.V. Problem of extremal geochemical ecology and biochemical study of the biosphere / V.V. Ermakov // Biogeochemistry and Geochemical Ecology. M.: Publ. GUN NPC TMG MZ RF, 2001. P. 98-144.

133. Gissel-Nielsen, J.G // Ann. Clin. Res. 1986.-V. 18.-P.61-64.

134. Gladysbev, V.N. Selenocysteine containing proteins in mammals / V.N. Gladysbev, D.L. Hatfield//J. Biomed. Sei. 1999. - Vol. 6, №3. - P. 151-160.

135. Golubkina, N.A. Selenium in food chain of Buriatia /N.A. Golubkina, G. Alfthan, S.D. Munkueva // Proc. "Twenty Years of Selenium Fertilization" -Sept. 8-9, Helsinki, Finland, 2005. ed. M. Eurola P. 87.

136. Guyot, H. Comparative responses to sodium selenite and organic selenium supplements in Belgian Blue cows and calves / H. Guyot et al. Swiss College of Agriculture Zollikofen, Switzerland, 2002.

137. Holmberg, R.E. Interrelation ships of selenium, cadmium and arsenic in mammalian teratogenesis / R.E. Holmberg, V.H. Ferm // Arch. Environ. Health. 1969.-Vol. 18.-P. 873.

138. Kessler, J. Carence en selenium cherles ruminants: measures prophylactivues / J. Kessler // Revue Suisse Agric. 1993. - Vol. 25, №1. - P. 2126.

139. Konvicka, Olarion Ger. Offen. DE 3737566 (A 01 H 5/00). 1984. -(Chem. Abstr. - V. 112. - Ref. 84191).

140. Knowles, S.O. Reasons and means for manipulating the micronutrient composition of milk from grazing dairy cattle / S.O. Knowles et al. Food, Metabolism and Microbiology Section, Food and Health Group. New Zealand. 2006.

141. Leth, S. Fluid-tight flexible tube connection for use in milking technology and tube, especially milk tube and pulsator tube / S. Leth, M. Krook, E.G. Hornsten. The Swedish Institute for Food and Biotechnology, Ideon. Pub. No.: WO/2007/022950, 2007.

142. Levander, O.A. Selenium requirements as discussed in the 1996 joint FAQ /IAEA/ WHO expert consultation on trace elements in human nutrition / O.A. Levander // Biomed Environ Sci. 1997. - 10, №2-3. - P. 214-219.

143. Moroder, L. From basic synthesis to automated technology / L. Moroder. ChemBioChem, 2006. №7 - P. 551.

144. Pappa, E.C. Selenium content in selected foods from the Greek market and estimation of the daily intake / E.C. Pappa, A.C. Pappas, P.F. Surai. National Agricultural Research Foundation, Dairy Research Institute, Katsikas, Ioannina, Greece, 2006.

145. Patching, S.G. Recent developments in selenium metabolism and chemical speciation: a review / S.G. Patching, P.H.E. Gardiner // J. Trace Elements Med. Biol., 1999.-Vol. 13.-P. 193-214.

146. Petermeier, H. Hybrid model of the fouling process in tubular heat exchangers for the dairy industry / H. Petermeier. Technical University Munich, 2001.

147. Presson-Moskos, M. Selenoprotein P in senum as a biochemical marker of selenium status / M. Presson-Moskos, W. Huang, T.S. Spikumar, B. Akesson, S. Lindenberg // Analyst. 1995. - V. 120. - P. 833-836.

148. Shchrauser, H.W. Selenium // Elemens and their Compounds in the Environment / H.W. Shchrauser. Nonmetals. Ed. Merian et al. Wiley VCH Verlag, 2003. - Vol. 3. P. 100-106.

149. Swanson, C.A. Human (75 Se) selenium amino acids metabolism /

150. C.A. Swanson, B.H. Patterson, O.A. Levander, C. Vellón // Biofactors, 1991 -Vol. 10.-P. 257-262.

151. Thickness shear mode resonators ("mass-sensitive devices") in bioanalysis Fresenius // Journal of Analytical Chemistiy. Vol. 366, №6-7, 2000. ISSN 0937-0633.

152. Toledo, P. Composition of raw milk from sustainable production systems / P. Toledo, A. Andrén, L. Bjorck. Swedish University of Agricultural Sciences, S 750 07 Uppsala, Sweden, 2001. *

153. Vitoux, D. Selenium glutathione peroxidase, and platelet functions /

154. D. Vitoux et al. // Ann. Biol. Clin. 1996. - Vol. 54. - P. 181-187.

155. Weiss, W.P. Relationship among selenium, vitamin E and mammary glang health in commercial dairy herds / W.P. Weiss et al. // J. Dairy Sci.- 1990. -Vol. 73.-P. 381-390.

156. Whanger, P. Metabolism of subtoxic levels of selenium in animals and humans / P. Whanger et al. // Ann Clin Lab Sci., 1996 P. 99-113.

157. Wittwer, A.J. Selenium containg tRNA and tBNA Lys from Escchericha coli: purification, codon specificity and translational activity / A.J. Wittwer, W.-M. Ching // Biofactors, 1989. - Vol. 2. - P. 27-34.

158. Yang, X. Revision of Charnell's procedure towards the synthesis of large and uniform crystals of zeolites A and X / X.Yang, D. Albrecht, J. Caro. Institute of Physical Chemistry and Electrochemistry, University of Hanover, D-30167, Germany, 2005.

159. Zhao, M // Turant (Nanjing) (Chem. Abst. V. 117. - Ref.47356) -1991. - V.23. - №5. - P.236-240.