Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка комплексной технологии получения высокоочищенных иммуноглобулинов из плазмы крови человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Змачинская, Татьяна Брониславовна

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Препараты иммуноглобулинов.

1.2. Методы фракционирования плазменных белков.

1.2.1. Разделение белков путем адсорбции.

1.2.2. Разделение белков путем осаждения.

1.2.3. Методы получения комплекса иммуноглобулинов - IgG, M, А.

Глава II. Материалы и методы исследований.

11.1. Материалы.

11.2. Методы.

11.2.1. Количественное определение содержания классов иммуноглобулинов.

11.2.2. Определение молекулярного состава исследуемых препаратов методом колоночной гель-хроматографии.

11.2.3. Определение электрофоретической однородности белков методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы.

11.2.4. Определение общих липидов.

11.2.5. Определение белкового состава исследуемых препаратов методом иммуноэлектрофореза.

11.2.6. Определение содержания белка, показателей цветности, прозрачности.

11.2.7. Определение активности плазминогена.

11.2.8. Определение уровня антител.

11.2.9. Определение пирогенности, токсичности.

П.2.10.Методы статистической обработки.

Глава III. Результаты и их обсуждение.

III. 1. Разработка комплексной технологической схемы выделения иммуноглобулинов с целью максимального использования иммунологического потенциала плазмы крови.

III. 1.1. Распределение иммуноглобулинов по фракциям в процессе спиртового метода фракционирования плазмы крови человека.

III. 1.2. Усовершенствование технологии спиртового фракционирования плазмы крови в процессе получения высокоочищенных препаратов иммуноглобулинов для внутримышечного введения.

III. 1.3. Технологические аспекты дополнительного извлечения иммуноглобулина G из осадка Б.

III. 1.4. Разработка метода получения комплекса иммуноглобулинов - IgG, IgM и IgA.

III.2. Характеристика полученных препаратов иммуноглобулинов.

111.2.1. Физико-химические и биологические свойства иммуноглобулина для внутримышечного введения.

111.2.2. Характеристика иммуноглобулина G, выделенного из осадка Б.

111.2.3. Показатели качества комплексного иммуноглобулинового препарата, содержащего IgG, IgA, IgM.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка комплексной технологии получения высокоочищенных иммуноглобулинов из плазмы крови человека"

Необходимость разработки комплексных методов выделения иммуноглобулинов из плазмы крови человека диктуется медицинской и экономической целесообразностью. Это обусловлено тем, что клиническая практика требует расширения спектра препаратов антибактериальной и антивирусной направленности, активными компонентами, которых являются иммуноглобулины. Известно, что антивирусные и антитоксические антитела содержатся в и ^А, в то время как антибактериальные антитела, в основном, в иммуноглобулинах класса М (32, 120, 122, 162). Выделение комплекса белковых препаратов увеличивает возможность повышения выходов производимых продуктов из такого дорогостоящего и уникального сырья, каким является плазма крови человека.

Для получения иммуноглобулинов для внутримышечного введения класса О используют, в основном, метод фракционирования с помощью этанола при низких температурах. Несмотря на многолетний опыт производства этих препаратов, остается не решенным целый ряд проблем, связанных с технологией производства и качеством препаратов. Технология основного фракционирования позволяет выделять не более 60% этого белка, содержащегося в исходном сырье. Ранее этот показатель был выше, проводилось дополнительное извлечение 1^0. Однако, клиническое применение таких препаратов было запрещено, так как они не удовлетворяли требованиям по степени очистки от денатурированных белков и протеолитических ферментов; в процессе хранения препаратов изменялись физические свойства, резко увеличивалось содержание фрагментированных молекул в части серий был обнаружен HBsAg (20, 29). Наличие примесей различных белков, включая иммуноглобулины других классов, даже в препаратах полученных в процессе основного фракционирования не желательно, так как установлено, что только способен проникать через интерстициальное пространство. Примеси, по меньшей мере, являются балластом и депонируются в мышечной ткани до разрушения их протеолитическими ферментами (138), а в ряде случаев они вызывают побочные реакции (10, 40, 41, 45, 48, 57, 67, 70, 71, 113, 139). Поэтому существует необходимость дополнительной очистки препаратов иммуноглобулинов (103). Стандартные препараты содержат преимущественно иммуноглобулины класса О. В большинстве производств иммуноглобулины классов А и М теряются в процессе фракционирования, а там где их выделяют, метод получения обособлен от основной схемы спиртового фракционирования. Становится очевидной необходимость разработки комплексной технологии фракционирования, позволяющей в едином технологическом процессе выделять дополнительно и иммуноглобулины других классов.

Поэтому, создание условий максимального выделения высокоочищенных иммуноглобулинов разных классов является актуальной задачей.

Цель исследования - создание комплексной технологической схемы выделения высокоочищенных иммуноглобулинов из плазмы крови человека.

Задачи исследования:

1. Изучить распределение иммуноглобулинов по стадиям спиртового фракционирования.

2. Разработать специальные методы очистки препаратов от белковых примесей.

3. Разработать технологию дополнительного извлечения вирусинактиви-рованного

4. На основе сравнительной оценки различных способов разработать метод получения комплекса иммуноглобулинов - 1§А, ^М для пе-рорального применения.

5. Изучить физико-химические и биологические свойства полученных препаратов иммуноглобулинов.

Научная новизна

На основании изучения распределения классов иммуноглобулинов по фракциям плазмы крови человека, взаимодействия различных белков в процессе спиртового метода фракционирования и оценки состава препаратов разработана комплексная технология получения высокоочищенных иммуноглобулинов, позволяющая дополнительно выделять ^А и ^М из плазмы, включающая: а) Изменение условий основного процесса фракционирования на стадии отделения от Р-глобулинов. Показано, что проведение процесса в условиях, близких к изоэлектрической точке белковых примесей при рН 5,35-5,4, вместо 5,1-5,2, концентрации этанола 17% вместо 13% приводит к дополнительной очистке ^О от протеолитических ферментов, липидов и денатурированных белков. Новые элементы технологии вошли в патент на изобретение «Способ получения иммуноглобулинового препарата» № 2183971 приоритет от 07.09.00 г. и «Способ получения иммуноглобулинового препарата» № 2192279 приоритет от 07.09.00 г. б) Метод дополнительного извлечения из неиспользуемых осадков Б. Он включает получение спиртовым методом и дополнительное переосаждение иммуноглобулина со стадией отделения примесей в условиях их изоэлектрической точки. На способ получения иммуноглобулинового препарата получен патент № 2192280 приоритет от 10.11.02 г. в) Метод выделения комплекса иммуноглобулинов - 1§0, ^А, ^М, включающий очистку иммуноглобулинов из фракции III от примесей, в том числе и от липидов, выделение и концентрирование этанолом, стабилизацию полученного препарата в растворе глицина при рН 4,0-5,0. На способ получения и состав препарата получен патент №2158137 приоритет от 27.10.00 г. и решение о выдаче патента по заявке №2001120387/(021553) от 20.07.2001 г.

Практическая значимость

Полученные в работе экспериментальные данные внедрены в производство иммуноглобулинов Нижегородского государственного предприятия по производству бактерийных препаратов. Они включены в:

1. Регламент производства иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного введения №1049-00, утв. 9.11.2000 г.

2. Изменения №1 к РП №1049-00 (для производства иммуноглобулина человека антистафилококкового жидкого), 10.11.2000 г.

3. Изменения №2 (для производства иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита), 10.11.2000 г.

4. Изменения №3 (для производства иммуноглобулина человека противоаллергического жидкого для внутримышечного введения), 5.02.01 г.

5. Проект изменений к РП для дополнительного извлечения

6. Проект регламента производства на Комплексный иммуноглобулино-вый препарат - ИммуноМАГ.

Изменения, касающиеся содержания белковых примесей, протеолити-ческих ферментов и агрегированных форм белков, внесены в фармакопейные статьи предприятия (ФСП) на:

1. Иммуноглобулин человека нормальный для внутримышечного введения ФСП 42-0100-1789-01.

2. Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита ФСП42-0100-1317-01.

3. Проект ФСП на иммуноглобулин человека антистафилококковый жидкий.

Положения, выносимые на защиту

1. Новые методы очистки препаратов для внутримышечного введения от белковых и липидных примесей.

2. Технология дополнительного извлечения

3. Метод получения комплекса иммуноглобулинов - ^О, 1§А, ^М.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Змачинская, Татьяна Брониславовна

выводы

1. Установлен уровень потерь иммуноглобулинов в процессе спиртового метода фракционирования плазмы крови человека - основание для оптимизации технологического процесса.

2. Показано, что основными примесями в препаратах ^О для внутримышечного введения являются протеолитические ферменты, липиды и денатурированные белки.

3. Разработана комплексная технология, позволяющая выделять свыше 70%

16% и 35% ^М плазмы, включающая: а) дополнительную очистку ^О от плазминогена, липидов и денатурированных белков посредством изменения параметров основного процесса фракционирования на стадии отделении ^О от а- и (З-глобулинов в условиях, близких к изоэлектрической точке этих примесей, и повышения концентрации осадителя; б) метод дополнительного извлечения заключающийся в экстрагировании из неиспользуемых осадков Б, двукратной очистке спиртовым методом с последующим проведением стадии инактивации вирусов на стадии полуфабриката; в) извлечение комплекса иммуноглобулинов - 1§А, путем очистки иммуноглобулинов из фракции Б1 от примесей хлороформом и этанолом, концентрирования этанолом, стабилизации в растворе 0,ЗМ глицина при рН 4,0-5,0 и лиофилизации препарата.

4. Комплексная проверка препаратов для внутримышечного введения показала, что содержание примесей и полимеров в них значительно ниже допустимых требований, предусмотренных общей фармакопейной статьей, что явилось основанием для введения новых нормативов по этим показателям в ФСП.

102

5. Удаление примесей из препаратов для внутримышечного введения замедляет процесс фрагментации. Установлено, что при одинаковых сроках хранения содержание фрагментов в очищенных иммуноглобулинах ниже, чем полученных традиционным методом, не менее чем в 2 раза. Эти результаты являются основанием для увеличения срока годности препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Создание комплексной технологии получения основных классов иммуноглобулинов — G, А, М обусловлено заинтересованностью производителей в максимальном извлечении этих белков из плазмы и потребностью клинической практики в препаратах, содержащих весь спектр противовирусных и антибактериальных антител плазмы крови человека. Поэтому препараты иммуноглобулинов нашли широкое применение для профилактики и лечения различных заболеваний бактериальной, вирусной или смешанной этиологии. Известно, что противовирусные и антитоксические антитела сосредоточены, в основном в IgG и IgA , а антибактериальные - в IgM.

В настоящее время существует целый ряд методов выделения отдельных иммуноглобулинов или всего их комплекса. Для промышленного получения IgG используется только ионообменная хроматография, или в сочетании с фракционирующими агентами этанолом, полиэтиленгликолем, спиртовый метод. Концентраты иммуноглобулинов G, А, М также получают методами хроматографии (49, 104), осаждением полиэтиленгликолем (47, 130, 165, 170), каприловой кислотой (115, 164), риванольно-солевым (145), каприлат-но-спиртовым (33) методами с последующей обработкой различными реагентами (1, 8). В большинстве производств иммуноглобулины классов А и М теряются в процессе фракционирования. Предлагаемые методы получения в значительной степени обособлены от основной схемы выделения. Большая часть методов защищена патентами.

Крупномасштабное производство препаратов крови в мире, включая и нашу страну, базируется на спиртовом методе Кона, с использованием которого наряду с другими препаратами крови получают, в основном, иммуноглобулин G и только ряд зарубежных фирм производят иммуноглобулины других классов. По сведениям, приведенным в статье Norrby-Teglund А. et al. (120), фирма «Биотест» Германия производит пентаглобин, который содержит IgG, IgA, IgM, фирма «Иммуно» Австрия - игабулин, содержащий IgG,

А. В России разработка методов получения подобных препаратов проводилась в 70-х годах прошлого столетия (8, 9), но только один метод, разработанный в МНИИЭМ им. Габричевского ограниченно используется для получения комплексного иммуноглобулинового препарата ^А, ^М) для пе-рорального применения (1,2). Большая часть методов защищена патентами.

Существующая в России технология позволяет извлекать не более 60% из плазмы, тогда как полнота извлечения этого белка у ряда зарубежных фирм значительно выше. Повышаются требования и к качеству препарата. В настоящее время между различными формами иммуноглобулинов не делается различий по ряду показателей качества. В рекомендациях ВОЗ имеются одинаковые требования к допустимому содержанию примесей и агрегатов в иммуноглобулинах для внутривенного и внутримышечного введения.

Не претендуя на полноту освещения проблемы, связанной с производством иммуноглобулинов нами преследовалась цель - разработать комплексную технологию, обеспечивающую максимальное выделение ^А, ^М из плазмы крови человека, с последующим получением из них препаратов для внутримышечного и перорального применения.

В основу разработки комплексной технологии был положен спиртовый метод. Поскольку процесс получения данным методом многостадийный и связан с выделением изолированных фракций, на первом этапе работы ставилась задача оценить уровень потерь 1§0 и изучить распределение других иммуноглобулинов О^А, ^М) по стадиям спиртового фракционирования, тем более, что, несмотря на общность технологических схем, у каждого производителя иммуноглобулинов имеются свои особенности производства.

Анализ полученных данных свидетельствовал, что потери в процессе производства составили 37,3%. Из них 4,7% связаны с осаждением этого иммуноглобулина в неиспользуемые фракции Ав и центрифугаты Аь а 10% уходило с центрифугатом А, предназначенным для производства альбумина. Основная часть потерь - 22,6% связана с переходом в осадок Б. Распределение других иммуноглобулинов по фракциям показало, что 35% ^А от общего количества этого белка в плазме уходило из процесса с центрифуга-том А. Основная же его часть - 48,75% сосредотачивалась в осадке Б. ^М практически полностью переходил в эту фракцию. В небольшом количестве и ^М, в качестве примесей присутствовали в конечном продукте -осадке В.

Таким образом, были подтверждены результаты, полученные другими авторами (\^е1ааг Б. е1 а1., 1974), что помимо фракции В, и иммуноглобулины других классов концентрируются в осадке Б, который может стать и дополнительным источником получения 1^0, и сырьем для извлечения иммуноглобулинов других классов. Вместе с тем, нами впервые показано, что при разделении осадка А и альбуминовой фракции (центрифугат А) происходит значительный переход и ^А в альбуминовую фракцию. Этот феномен может стать предметом дальнейших исследований — оптимизации условий разделения иммуноглобулинов на этой стадии.

Прежде чем приступить к решению основной задачи - создания комплексной технологии получения иммуноглобулинов различных классов, необходимо было достичь получения высокоочищенных иммуноглобулинов О в процессе базовой технологии производства различных препаратов - спиртового метода. Несмотря на то, что выпускаемые препараты иммуноглобулинов для внутримышечного введения полностью отвечали национальным требованиям, это достигалось удлинением технологического цикла производства.

Исследования состава препаратов показали, что существовавший процесс выделения иммуноглобулинов не обеспечивал достаточной очистки конечных препаратов от агрегатов и протеолитических ферментов. Для отделения нерастворимых агрегатов использовали стадию выстаивания полуфабрикатов, но она удлиняла технологический цикл на 60-90 дней.

Основываясь на слабой растворимости агрегатов в бессолевых растворах, с нашим участием разработан другой вариант решения этой проблемы - удаление агрегированных белков и белковых примесей из растворов с низкой ионной силой. Это позволило удалить нерастворимые агрегаты и исключить стадию выстаивания полуфабрикатов. Однако, введение этой стадии не привело к освобождению препаратов от следовых количеств протеолитических ферментов. При решении этой проблемы были использованы два подхода. Поскольку наибольшая фрагментация наблюдалась в препаратах, полученных из гемолизированной плазмы, мы исключили это сырье из производства иммуноглобулинов. Для максимальной очистки препаратов от следовых количеств протеолитических ферментов были пересмотрены условия разделения от р-глобулинов. Если ранее это разделение происходило при рН 5,1 ионной силе 0,018-0,02, концентрации этанола 13%, температуре -4°С, то, как показали наши исследования в тесте ускоренной деградации, степень фрагментации может быть существенно уменьшена, если разделение этих фракций проводить в условиях, близких к изоэлектрической точке плазмино-гена. Поэтому нами были внесены изменения в процесс фракционирования. Оптимальными условиями разделения были определены рН 5,4, концентрация этанола 17%, ионная сила 0,01. Температура в конце осаждения была снижена до -6°С (допустимый предел, при которым происходит замерзание водно-спиртовой смеси).

Анализ состава препаратов, полученных с введением в производство стадий очистки, каждой в отдельности или обеих вместе, показал целесообразность их одновременного использования, так как при изменении условий фракционирования лучше удалялись протеолитические ферменты, а при использовании обработки иммуноглобулинов в растворах с низкой ионной силой - агрегированные белки. Внесение этих изменений позволило существенно уменьшить содержание 1§А и ^М в препаратах что является положительным моментом, так как ^М нестабилен в водных растворах при хранении, а с примесью ^А связывают побочные реакции у больных с дефицитом ^А. В то же время это не отразилось на выходе препарата с 1 л сырья. Новые элементы технологии вошли в патент на изобретение «Способ получения иммуноглобулинового препарата №2183971 приоритет от 07.09.00 г. и №2192279 приоритет от 07.09.00 г.

В дальнейшем, условия получения очищенного на стадии отделения от Р-глобулинов были испытаны при отработке метода дополнительного извлечения этого белка из осадков Б. При этом удалось дополнительно выделить этот иммуноглобулин. Но оказалось, что однократное проведение фракционирования по данной схеме приводило только к получению препарата с содержанием примесей в среднем 13,9%. Вероятно, этот факт был связан с составом осадков Б, которые наряду с иммуноглобулинами других классов содержали основную часть липопротеидов плазмы и плазминоген. Известно, что при комплексировании липопротеидов с белками происходит изменение растворимости белков, в том числе, и в водно-спиртовых растворах (5), и они вследствие низкой плотности сами контаминируют препарат и являются поддерживающей средой для других белковых примесей. Поэтому, достаточной очистки удалось достичь только после переосаждения полученного иммуноглобулина в тех же условиях и последующего удаления примесей из растворов с низкой ионной силой.

Для того чтобы исключить присутствие в препарате вирусов, введена стадия их инактивации при рН 4,2-4,3, 37°С в течение 48 часов. До проведения этой стадии из препарата удаляли остаточный этанол с помощью ультрафильтрации, так как его присутствие способствует агрегации молекул. После проведения стадии инактивации вирусов иммуноглобулин концентрировали, коррегировали белок и рН до значений, предусмотренных фармакопейной статьей, и получали готовый препарат.

При сравнении иммуноглобулинов с препаратами, полученными по основной схеме фракционирования, установлено, что они на 1,5% больше содержали примесей других белков, на 2% — агрегированных молекул. Несколько выше в них было и содержание протеолитических ферментов и ли-пидов. Другие показатели приближались к иммуноглобулинам, полученным по основной схеме фракционирования. В то же время, полученные серии полностью соответствовали по показателям качества требованиям фармакопейной статьи. Степень концентрации противовирусных и антитоксических антител была в 8 раз выше по сравнению с исходной плазмой. Внедрение метода позволит увеличить выход с 1 л плазмы на 10%. На «Способ получения иммуноглобулинового препарата» получен патент № 2192280 приоритет от 20.07.01 г.

Дальнейшие исследования были направлены на получение всего, оставшегося в осадке комплекса иммуноглобулинов - 1§А и 1§М. Предварительная оценка известных методов получения этих иммуноглобулинов осаждением полиэтиленгликолем или каприловой кислотой показала, что использование ПЭГ не обеспечивало достаточной очистки от нежелательных примесей (10-15)%. Кроме того, в полученном препарате обнаруживалось лишь незначительное количество ^М (2-4)%. Хорошая очистка достигалась при использовании каприловой кислоты с последующей стадией этанольно-хлороформенного осаждения. Данный метод позволял получать препарат с повышенным содержанием ^М - до 40%. Однако, полученный препарат содержал значительное количество денатурированного белка, что практически делало невозможным проведение стадий осветляющей и стерилизующей фильтрации. Кроме того, иммуноглобулины, содержащие хлорид натрия, после лиофильной сушки плохо растворялись в воде, резко повышалась оптическая плотность растворов.

В связи с этим нами были предприняты исследования для получения этого препарата при использовании в качестве фракционирующего агента этанола, поскольку использование этанола хорошо встраивалось в существующую технологическую схему получения и не требовало дополнительного оборудования для приготовления и хранения осадителя.

Проведенные исследования позволили определить оптимальные параметры экстрагирования ^А, ^М из осадков Бь при которых практически все иммуноглобулины переходили из осадка в раствор. Было установлено, что наибольшей растворимостью иммуноглобулины обладали в 0,05М ацетатном буферном растворе при рН 4,1 ±0,1.

Разработаны условия очистки иммуноглобулинов от липидов и других примесей из экстракта с помощью хлороформа. Установлена концентрация этанола для очистки от белковых примесей.

Метод выделения концентрата иммуноглобулинов включал:

1. Растворение осадка Б1 в 0,05М ацетатном буферном растворе, рН 4,1 ±0,1, при соотношении осадка и буфера 1:15.

2. Очистку иммуноглобулинов в растворе от примесей, в том числе и от липидов, посредством добавления хлороформа до 10%, рН 4,1-4,2, ионная сила 0,1;

3. Очистку от примесей 4-6% этанолом, рН 4,9-5,0;

4. Концентрирование иммуноглобулинов 26% этанолом, рН 7,1-7,3;

5. Растворение осадка иммуноглобулинов в, М, А в растворе 0,ЗМ глицина при рН 4,0-5,0;

6. Выдерживание препарата при комнатной температуре в течение месяца;

7. Стерилизующую фильтрацию и разлив во флаконы;

8. Лиофильное высушивание готового препарата;

9. Контроль препарата.

Полученный препарат представлял улучшенный аналог комплексного иммуноглобулинового препарата, сухого для энтерального применения (ФС 42-3347-97) и являлся лиофилизированным концентратом иммуноглобулинов в, А, М для перорального применения. При сохранении высокой степени очистки и оптимального соотношения классов иммуноглобулинов, для повышения стабильности, изменены параметры pH препарата. Вместо предусмотренного ранее нейтрального pH (6,5-7,5), в полном соответствии с Европейской фармакопеей, кислотность препарата была установлена на уровне 4,0-5,0. Как известно, такая кислотность среды препятствует агрегации молекул. Одновременно, такой подход позволил ввести в технологический процесс дополнительную стадию вирусной инактивации (выдерживание раствора при комнатной температуре в течение 1 месяца при pH 4,0-5,0). Кроме того, кислый pH способствует лучшей адаптации иммуноглобулинов при прохождении через кислую среду желудка.

Из состава препарата был полностью исключен хлорид натрия и заменен на хорошо зарекомендовавший себя в качестве стабилизатора иммуноглобулинов - глицин. Эта замена позволила устранить повреждающее действие солей в процессе лиофильной сушки, а при растворении лиофилизированного препарата ускорить гидратацию белков.

Данным способом получены 23 экспериментальные серии препарата. Основные требования к препарату приближены к иммуноглобулину человека нормальному для внутримышечного введения. Однако, комплексный имму-ноглобулиновый препарат содержал иммуноглобулины трех классов - IgG, IgA и IgM в количестве (60,9±2,1)% IgG, (20,8*1,2)% IgM, (18,3±1,1)% IgA. Титры антибактериальных антител к Salmonella составили 1:320-1:640, к Shigella flexneri - 1:640. Антибактериальные антитела превышали уровни антител, содержащихся в иммуноглобулине человека нормальном в 16 раз. Таким образом, был получен препарат направленного антибактериального действия.

Технология производства препарата защищена патентом №2158137, приоритет от 17.12.99 и приоритетной справкой (заявка №2001120387/(021553), приоритет от 20 июля 2001 г.). Полученные в работе экспериментальные данные внедрены в производство иммуноглобулинов Нижегородского государственного предприятия по производству бактерийных препаратов. Они включены в:

1. Регламент производства иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного введения №1049-00, утв. 9.11.00 г.

2. Изменения №1 к РП №1049-00 (для производства иммуноглобулина человека антистафилококкового жидкого), утв. 10.11.00 г.;

3. Изменения №2 (для производства иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита), утв. 10.11.00 г.;

4. Изменения №3 (для производства иммуноглобулина человека противоаллергического жидкого для внутримышечного введения), утв. 5.02.01 г.

5. Проект регламента производства на Комплексный иммуноглобулиновый препарат - ИммуноМАГ.

6. Проект изменений к РП №1049-00 для дополнительного извлечения IgG.

Изменения, касающиеся содержания белковых примесей, протеолитических ферментов и агрегированных форм белков внесены в фармакопейные статьи предприятия (ФСП) на:

1. Иммуноглобулин человека нормальный для внутримышечного введения ФСП 42-0100-1789-01;

2. Проект ФСП на иммуноглобулин человека антистафилококковый жидкий;

3. Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита ФСП 42-0100-1317-01.

В результате проведенных исследований создана комплексная технология, позволяющая выделять свыше 70% IgG, 16% IgA и 35% IgM от их содержания в плазме.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Змачинская, Татьяна Брониславовна, Нижний Новгород

1. Алешкин В.А., Борисова И.В., Холчев Н.В., Пономарева A.M., Быко-Янко Г.В. Способ получения иммуноглобулинового препарата // авт. свид.-№1815820.- 03.05.90.

2. Алешкин В.А., Борисова И.В., Новикова Л.И. Способ получения иммуноглобулинового препарата // авт. свид.- №2073525.- 22.06.93

3. Анастасиев В.В. Применение иммуноглобулинов // Иммуноглобулины. Сб.науч.тр.- Н.Новгород.- 1993.- С. 14-37.

4. Анастасиев В.В. Иммуноглобулин для внутривенного введения.-Н.Новгород.- 2000.- 168 с.

5. Анастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека: Дисс. докт. биол. наук.- М.- 1997.

6. Андреева Н.Е., Чернохвостова Е.В. Иммуноглобулинопатии.- М.: Медицина.- 1985.- 241 с.

7. Болотников И.А., Добротина H.A., Лызлова С.Н. Биохимические аспекты иммунологических реакций.- Петрозаводск.- 1989.- 100 с.

8. Борисова И. В., Мухина H.A. Получение и исследование иммуноглобулинов из отходов производства препаратов крови // Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека. Сб. науч. тр.- М.- 1976.- С. 69-76.

9. Борисова И.В. Экспериментальные исследования по получению комплексных иммуноглобулиновых препаратов из сывороток плацентарной крови: Дисс. канд. биол. наук.- М.- 1979.

10. Ю.Быко-Янко П.В., Борисова И.В., Мухина Е.К. О стандартизации препаратов нормального и специфического иммуноглобулина человека // Иммунобиологические препараты.- М.- 1989 С. 43-50.

11. П.Глинн JI., Стюард М. Структура и функции антител.- М.: Мир.- 1983.200 с.

12. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика.-М.:Мир.- 1991.- С. 464-467.

13. Киселева И.А. Изучение защитных свойств IgM в эксперименте на животных // ЖМЭИ.- 1976.- № 3.- С. 44-48.

14. Киселева И.А., Кандюрина В.Г., Тимофеева Г.В. Comparative study of the antibody concentration and protective activity against Pseudomonas aeruginosa of gamma-globulin and IgM-enriched immunoglobulin preparations // ЖМЭИ,-1986.-№ 4.-C. 68-71.

15. Киселева И.А., Савкина M.А. Способ получения иммуноглобулина, обогащенного IgM, для перорального применения // авт. свид.- №1767742.11.06.90.

16. Лакин Г.Ф. Биометрия.- М.: Высшая школа.- 1990.- 352 с.

17. Левина Л.А., Мигунов В.Н., Темпер P.M. Prospects for designing immunoglobulins to prevent and treat purulent-inflammatory diseases // Vestn.Ross.Akad.Med.Nauk.- 1996.- № 8.- C. 26-31.

18. Ленинджер А. Биохимия.- M.: Мир.- 1974,- С. 71-73, 845-850.

19. Минакова Л.В., Козлова Н.Е., Шалунова Н.В., Бочарова Н.Г. Проблемы качества препаратов иммуноглобулинов и пути их совершенствования // Иммуноглобулины и другие препараты крови. Сб.науч.тр.- Горький.-1986.- С. 5-10.

20. Носкова О.В., Малафеева Л.К., Тенцер П.С., Потепун В.К. Методы имму-ноаффинной хроматографии в получении иммуноглобулиновых препартов // Иммуноглобулины и другие препараты крови. Сб.науч.тр.- Горький.- 1986.- С. 30-33.

21. Пономарева Н.А., Нечаева А.С. Гамма-глобулин.- М.- 1965.

22. Ройт А. Иммунология.- М.: Мир.- 2000.- С. 97-113.

23. Русанов В.М., Скобелев Л.И. Фракционирование белков плзмы в производстве препаратов крови М.: Медицина.- 1983.- 224 с.

24. Скоупс Р. Методы очистки белков.- М.: Мир.- 1985.- С. 56-196.

25. Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов // ФС 42-3874-99.

26. Флейшер Т., Грейси Д. Иммунодиагностика // Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Лолор Л.- М.: Практика.- 2000.- С. 607-623.

27. Холчев Н.В. Гамма-глобулин (методы получения и стандартизации): Дисс. докт. АМН.-М.- 1965.

28. Холчев Н.В. Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека // В кн.: Очистка и стандартизация препаратов крови человека. Сб.трудов.- М.- 1980.- С. 3-14.

29. Холчев Н.В., Колесникова Л.И. Исследования по очистке и концентрированию противокоревых сывороток. I. Методика получения очищенной гамма-глобулиновой фракции.- ЖМЭИ.- №5.- 1947.- С. 6.

30. Albertsson P. Partition of cell particles and macromolecules. Ed. Wiley J.- New York.- I960.- P. 154.

31. Alem M., Alem N., Cohen H., England Т., Hamedi N., Moussazadeh M., Roth J., Shen G. Diagnostic value of detection of IgM antibodies to Helicobacter pylori // Exp.Mol.Pathol.- 2002.- vol. 72(1).- P.77-83.

32. Audran R., Pejaudier L., Steinbuch M. Preparation of immunoglobulins G,A,M (IgGAM) for therapeutic use. Conditions for enrichment in IgA or in IgM // Rev. Fr. Transfus. Immunohematol.- 1975.- 18(2).- P.l 19-135.

33. Autenrieth I., Schwarzkopf A., Ewald J., Karch H., Lissner R. Bacterial properties of Campylobacter jejuni-specific immunoglobulin M antibodies in commercial immunoglobulin preparations // Antimicrob.Agents Chemother.- 1995.-vol. 9.-P. 1965-1969.

34. Barandun S., Kistler P., Jeunet F., Isliker H. Intravenous administration of human gamma-globulin // Vox. Sang.- 1962.- vol. 7 (157).- P. 1-74.

35. Barandun S., Isliker H. Development of immunoglobulin preparations for intravenous use//Vox. Sang 1986.- vol. 51.- P. 157-160.

36. Baumstark J., Laffin R., Bardawil W. A preparative method for the separation of 7S gamma-globulin from human serum // Arch.Biochem.Biophys.- 1964.-vol. 108.- P.514-522.

37. Bertolini J. Chromatographic purification of immunoglobulins // Downstream.-1999.- vol. 31.- P.20.

38. Bjomson A., Detmers P. A The pentameric structure of IgM is necessary to enhance opsonization of bacteroides thetaiotaomicron and bacteroides fragilis via the alternative complement pathway // Microb.Pathog.- 1995.- vol. 19.-P. 117-128.

39. Bjorkander J., Hammarstrom L., Edward Smith C. Immunoglobulin prophylaxis in patients with antibody deficiency syndromes and anti-IgA antibodies // J.Clin.Immunol.- 1987.- vol. 7.- P. 8-15.

40. Bleeker W., Agterberg J., Rigter G., de Vriesvan Rossen A., Bakker J. An animal model for the detection of hypotensive side effects of immunoglobulin preparation // Vox. Sang.- 1987.- vol. 52.- P. 281-290.

41. Bos O., Sunye D., Nieuweboer C., van Engelenburg F., Schuitemaker H., Over J. Virus validation of pH 4-treated human immunoglobulin products producedby the Cohn fractionation process // Biologicals.- 1998.- vol. 26 (4).-P. 267-276.

42. Boyle M., Langone J. A simple procedure to use whole serum as a source of either IgG- or IgM-specific antibody // J. Immunol. Methods.- 1980.- 32 (1).-P.51-58.

43. Brewer J., Randall R., Parkhouse R., Corley R. IgM hexamers? // Immunol. Today.- 1994.-vol. 15.-P. 165.

44. Bridonneau P., Lederer F. Behavior of human immunoglobulin G subclasses on thiophilic gels: comparison with hydrophobic interaction chromatography // J. Chromatogr.- 1993.- vol. 616.- P. 197.

45. Bruer Ch.B. Isolation of gammaglobulin preparations enriched of IgA and IgM using polyethylene glycol // Patent USA.- № 3808189.- 30.04.74.

46. Burks A., Sampson H., Buckley R. Anaphylactic reactions after gammaglobulin administration in patients with hypogammaglobulinaemia // N.Engl.J.Med.-1986,-vol. 314,- P. 560-564.

47. Chase H., Machielse B., Naveh D. Characteristics of the adsorption of immunoglobulin M onto Q Sepharose Fast Flow ion-exchangers // Bioseparation.- 1997.- vol. 7 (1).- P.47-55.

48. Cohn E., Edsall T. Interactions between organic solvents and dipolar ions estimated from solubility ratios // In: Proteins, amino acids and peptides.- Eds. Cohn E, Edsall J.- New York.- 1943.- P. 196-216.

49. Condie R. Pure intravenous human and anumal gamma-globulins//USA Pat. №4296027.- 1981.

50. Cripps A., Neoh S., Smart I. Isolation of human IgA and IgM from normal serum using polyethylene glycol precipitation and affinity chromatography // J.Immunol.Methods.- 1983.- vol. 57 (1-3).-P. 197-204.

51. Cuatrecasas P., Wilchec M., Anfinsen C. Selective enzyme purification by affinity chromatography // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1968.- vol. 61 (2).-P. 636-43.

52. Cunningham-Rundles C., Wong S., Bjorkander J. Use of an IgA-depleted intravenous immunoglobulin in a patient with an anti-IgA antibody // Clin. Immunol. Immunopathol.- 1986.-vol. 38.- P. 141-149.

53. Curling J., Berglof J., Lindquist L., Eriksson S. A chromatographic procedure for the purification of human plasma albumin // Vox.Sang.- 1977.- vol. 33 (2).-P. 97-107.

54. Cuthbertson B., Perry R., Foster P., Reid K., Crawford R., Yap P. The viral safety of intravenous immunoglobulin // J. Infect.- 1987.- vol. 15 (2).-P. 125-133.

55. Czok R., Bucher T. Crystallized enzymes from the myogen of rabbit skeletal muscle//Adv.Protein.Chem.- I960.-vol. 15.- P. 315-415.

56. Dam J. Plasma fractionation based on chromatography and precipitation by polyethylene glycol and caprylic acid // Downstream.- 1999.- vol. 31.- P. 17.

57. Dean P., Brown P., Leyland M., Watson D., Angal S., Harvey M. Electropho-retic desorption of affinity adsorbents // Biochem.Soc.Trans.- 1977.- vol. 5.-P. 1111-1113.

58. Deutch H., Gosting L., Alberty R., Williams J. Biophysical studies of blood plasma proteins. III. Recovery of gamma-globulin from human blood protein mixtures // J. Biol. Chem.- 1946.- vol. 164.- P. 109-118.

59. Deutsch D., Mertz E. Plasminogen: purification from human plasma by affinity chromatography // Science.- 1970.- vol. 170.- P. 1095-1096.

60. Dichtelmuller H., Stephan W. The effect of immunoglobulin M-enriched intravenous immunoglobulins against bacterial infections and on the neutralization of bacterial toxins // Arzneimittelforschung.- 1987.- vol. 37(11).-P. 1273-1276.

61. Dixon M., Webb E. Enzyme fractionation by salting out: A theoretical note // Adv.Protein Chem.- 1961.- vol. 16.-P. 197-219.

62. Duhem C., Dicato M., Ries F. Side-effects of intravenous immune globulins // Clin.Exp.Immunol.- 1994.- vol. 97 (1).- P. 79-83.

63. Eketorp R. Affinity chromatography in industrial ethanol fractionation of human plasma // In: Methods of plasma proteins fractionation.- Ed. Curling J.-NewYork.- 1980.-P. 175-188.

64. Falksveden L. US Patent № 3,869,436.- 1975.

65. Ferreira A., Garcia Rodriguez M., Lopez Trascasa M. Anti-IgA antibodies in selective IgA deficiency and in primary immuno-deficient patients treated with y-globulin // Clin. Immunol. Immunopathol.- 1988.- vol. 47.- P. 199-207.

66. Ferreira A., Garcia Rodriguez M., Fontan G. Follow-up of anti-IgA antibodies in primary immunodeficient patients treated with y-Globulin // Vox. Sang.-1989.- vol. 56.-P. 218-222.

67. Finger U., Briimer W., Knieps E., Thommes J., Kula M. Investigations on the specificity of thiophilic interactions for monoclonal antibodies of different subclasses // J. Chromatogr.- 1996,- vol. 675.- P. 197.

68. Folch G., Less M., Stanley A. Simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // Biol. Chem.- 1957.- vol. 226 (2).- P. 497509.

69. Friedli H., Kistleer P. // Chimia.- 1978.- vol. 26.- P. 25-27.

70. Garbett N., Munro C., Cole P. Opsonic activity of a new intravenous immunoglobulin preparation: Pentaglobin compared with sandoglobulin // Clin.Exp.Immunol.- 1989.- vol. 76 (1).- P. 8-12.

71. Grabar P., Williams C. Metode permettant l'etude conjuguee des propriétés electrophoretiques d'un melange de proteines // Biochim. Biophys. Acta.-1953.-vol. 10.-P. 193-194.

72. Hamalainen E., Suomela H., Ukkonen P. Virus inactivation during intravenous immunoglobulin production // Vox. Sang.- 1992.- vol. 63 (1).- P. 6-11.

73. Hao Y., Ingham K., Wickerhauser A. Fractional precipitation of proteins with polyetyleneglycol // In: Methods of plasma proteins fractionation.- Ed. Curling J.- New York.- 1980.- P. 57-74.

74. Henin Y., Maréchal V., Barre-SInoussi F., Chermann J., Morgenthaller J. Inactivation and partition of human immunodeficiency virus during Kistler and

75. Nitschmann fractionation of human blood plasma // Vox. Sang.- 1988.-vol. 54.- P. 78-83.

76. Holland P., Alter H., Purcell R., Lander J., Sgouris J., Schmidt P. Hepatitis B antigen and antibody in cold-ethanol fractions of human plasma // Transfusion.-1972.- vol. 12.-P. 363-370.

77. Hoofnagle J., Gerety R., Thiel J., Lewellys F. The prevalence of hepatitis B surface antigen in commercially prepared plasma products // J.Lab.Clin.Med.-1976.-vol. 88.-P. 102-113.

78. Hoppe H., Krebs H., Mester T., Hennig W. Production of anti-Rh gamma globulin for preventive immunization // Munchener Med.Wochenschr.- 1967.-vol. 34.- P. 1749-1752.

79. Hoppe H., Mester T., Hennig W., Krebs H. Prevention of Rh-immunization modified reduction of IgG anti-Rh for intravenous application by ion exchange cromatography (IEC) // Vox.Sang.- 1973.- vol. 25 (4).- P. 308-316.

80. Horeisi G. O ucinki rivanolu na bilkoviny krevnino sera // Cas.Lec.cesk.-1952.- vol. 91 (24-25).- P.704-707.

81. Horeisi G., Smetane P. The isolation of gamma-globulin from blood serum by rivanol // Acta.med.Scand.- 1956.- vol. 15 (5).- P. 65-70.

82. Hughey C., Brewer J., Colosia A., Rosse W., Corley R. Production of IgM hex-amers by normal and autoimmune B cells: implications for the physiologic role ofhexameric IgM//The J. of immunology.- 1998.- vol. 161.- P. 4091-4097.

83. Jackson S., Parton J., Barnes R., Poynton C., Fegan C. Effect of IgM-enriched intravenous immunoglobulin (Pentaglobin) on endotoxaemia and anti-endotoxin antibodies in bone marrow transplantation // Eur.J.Clin.Invest.-1993.- vol. 23 (9).- P. 540-545.

84. Jasuda J., Ueno G., Kuratsuka K. Japanese minimum rewuirements for albumin preparations//Develop.Biologic.Stand.- 1980.-P. 143-152.

85. Jehanli H., Hough D. A rapid procedure for the isolation of human IgM myeloma proteins // J.Immunol.Methods.- 1981.- vol. 44 (2).- P. 199-204.

86. Joustra M., Lundgren H. In: Peptides of the biological fluids.- Ed. Peeters H.Oxford.- 1969.- vol. 17.- P. 511-515.

87. Kistler P., Friendli H. Ethanol purification // In: Methods of plasma proteins fractionation.- Ed. Curling J.- New York.- 1980.- P. 3-15.

88. Kistler P., Nitschmann H. Large scale production of human plasma fractions // Vox.Sang.- 1962.- vol. 7.- P. 414-424.

89. Laufer J. et al. IgA and IgG immune complexes increase human macrophage C3 biosynthesis // Immunology.- 1995.- vol. 84.- P. 207-212.

90. Lebing W., Lee D., Davies A., Nixon C., Paul H. Development and scale up of a production-scale chromatographic process for the production of human IgG // Downstream.- 1999.- vol. 31.- P. 19.

91. Leveque P., Drouet J., Schmitthaeusler R., North M., Amouch P., Malgras J. HBs antigen in human plasma fractions // Vox. Sang.- 1975.- vol. 28 (1).-P. 1-8.

92. Litzman J., Broz P., Krai V., Lokaj J. Uspesna gamaglobulinova lecba u nemocneho s anti-IgA protilatkami // Vnitr. Lek.- 1997.- 43.- № 2.-P. 102-104.

93. Loomes L., Stewart W., Mazengera R., Senior B., Kerr M. Purification and characterization of human immunoglobulin IgAi and IgA2 isotypes from serum // J.Immunolog.Methods.- 1991.-vol. 141 (2).-p. 209-218.

94. Lowe C., Harvey M., Craven D., Kerfoot M., Hollows M., Dean P. The purification of nicotinamide nucleotide-dependent dehydrogenases on immobilized cofactors // Bochem.J.- 1973.-vol. 133.-P.507-513.

95. Mancini G., Carbonara A., Heremans J. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion // Imunochemistry.- 1964.- vol. 2.-P. 235-254.

96. Mazanec M., Nedrud J., Kaetzel C., Lamm M. A three-tiered view of the role of IgA in mucosal defense // Immunol.Today.- 1993.- 14 (9).- P. 430-435.

97. Mc Cabe W., De Maria A., Berberich H., Johns M. Immunization with rough mutant of Salmonella minnesota: protective activity of IgM and IgG antibody to the Re595 (Ro Chemotype) mutant // J.Infect.Dis.- 1988.- vol. 158.-P. 291-300.

98. McCue J., Hein R., Tenold R. Three generations of immunoglobulin G preparations for clinical use // Rev. Infect. Dis.- 1986.- vol. 8 (S4).- P. 374-381.

99. Melander W., Hovath C. Salt effect on hydrophobic interactions in precipitation and chromatography of proteins: an interpretation of the lyotropic series // Arch.Biochem.Biophys.- 1977.-vol. 183.- P. 200-215.

100. Middleton S., Bennett I., Smith J. A therapeutic concentrate of coagulation factors II, IX and X from citrated, factor VHI-depleted plasma // Vox.Sang.-1973.- vol. 24,- P. 441-446.

101. Miller-Andersson M., Borg H., Andersson L. Purification of antithrombin III by affinity chromatography // Thromb.Res.- 1974.- vol. 5.- P. 439-452.

102. Misbah S., Chapel H. Adverse effects of intravenous Immunoglobulin // Drug.Saf.- 1993.- vol. 9.- P. 254-262.

103. Mitra G., Wong M., Mozen M., McDougall J., Levy J. Elimination of infectious retroviruses during preparation of Immunoglobulins // Transfusion.-1986.- vol. 26.- P. 394-397.

104. Moller W., Piechaczek D. Unmodified intravenously administered immunoglobulin preparations containing immunoglobulin M and/or A // US patent №5,410,025.- 1995.

105. Monteiro R. Cellular distribution, regulation and biochemical nature of an FCa receptor for IgA // J.Exp.Med.- 1990.- vol. 171.- P. 597-613.

106. More J. Characterization and formulation development of a new liquid intravenous immunoglobulin: Vigam Liquid // Downstream.- 1999.- vol. 31.-P. 22-23.

107. Morgenthaler J. Effect of ethanol on viruses // In: Virus inactivation in plasma products.- 1989.- Basel: Karger.- P. 109-121.

108. Nitschmann H., Rickli E., Kistler P. Fractionation of human plasma with polyphosphate //Vox.Sang.- I960.- vol. 5.- P. 232-252.

109. Nys M. Damas J., Damas P., Laub R., Cloes J., Lamy M. Study of the protective effects of hyperimmune immunoglobulins G and M against endotoxin in mice and rats // Med.Microbiol.Imrnunol.(Berl).- 1999.- vol. 188 (2).- P. 55-64.

110. Oesser S., Schulze C., Seifert J. Protective capacity of a IgM/IgA-enriched polyclonal immunoglobulin-G preparation in endotoxemia // Res.Exp.Med. (Berl).- 1999.- vol. 198 (6).- P. 325-339.

111. Ohhs H., Fischer S., Virant F., Lee M. et al. Non-A, non-B hepatitis and intravenous immunoglobulin//Lancet.-1985.- vol. 1 (8425).- P. 404-405.

112. Oncley J., Enders J., Janeway C. Report on the stability of serum gamma globulin // A memorandum to the U.S. Navy Department of Medicine and Surgery.- 1945.

113. Oncley J., Melin M., Richert D., Cameron J., Gross P. The separation of antibodies, isoagglutinins, prothrombin, plasminogen and beta-lipoproteins into sub-fractions of human plasma // J.Am. Chem.Soc.- 1949.- vol. 71.- P. 541-550.

114. Opferkuch W. Immunoglobulin M Physiologische mechanismen und Wirkungsweise // In: Bakterein, Endotoxin, Sepsis - Immunoglobulin M.-1985.- Springer Verlag.- 19.- P. 54-59.

115. Oscarsson S., Porath, J. Protein chromatography with pyridine- and alkylthioether-based agarose adsorbents // J. Chromatogr.- 1990.- vol. 499.-P. 235.

116. Painter R., Minta J. Stability of immune serum globulin during storage: Effects of modifications of the fractionation scheme // Vox. Sang.- 1969.-vol. 17.- P. 434-444.

117. Penny R., Coller I., Simons P. Plasma proteins // Med.J.Austral.- 1969.-vol. 18.-P. 494-506.

118. Peteriy F., Miholics E., Boros B. Improved method for isolation of human IgM as a by-product // Ann. Immunol. Hung.- 1975.- 18.- P.123-129.

119. Peters T., Taniuchi H., Anfmsen C. Affinity chromatography of serum albumin with fatty acids immobilized on agarose // J.Biol.Chem.- 1973.- vol. 248.-P. 2447-2451.

120. Poison A., Potgieten G., Largier J., Mears G., Jourbet F. The fraction of protein mixtures by linear polymers of high molecular weight // Bio-chim.Biophys.Acta.- 1964.- vol. 82.- P. 463-475.

121. Porath J. Maisano, F., Belew, M. Thiophilic adsorption a new method for protein fractionation // FEBS.- 1985.- vol. 185.- P. 306.

122. Porath J. Salt-promoted adsorption: recent developments // J. Chromatogr.-1986.-vol. 376.-P. 331-341.

123. Randall T., King L., Corley R. The biological effects of IgM hexamer formation //Eur. J. Immunol.- 1990.- vol. 20.- P. 1971.

124. Randall T., Brewer J., Corley R. Direct evidence that J-chain regulates the polymeric structure of IgM in antibody secreting B cells // J. Biol. Chem.-1992.- vol. 267.-P. 18002.

125. Rieben R. Comparison of IgG, IgA and IgM preparations for their capacity to scavenge the activated complement components C4b and C3b // 4th German Interdisciplinary Congress for Intensive Care and Emergency Medicine.- Humburg.- 1997.

126. Rousell R., McCue J. Antibody purification from plasma // In book: Blood separation and plasma fractionation.- New York.-1991.- P. 307-308.

127. Salama A., Schwind P., Schonhage K., Genth R., Cotting C., Hustinx H, Krieg R., Nydegger U., Aebischer I. Rapid detection of antibodies to immunoglobulin A molecules by using the particle gel immunoassay // Vox. Sang.- 2001.-vol. 81(1).- P.45-48.

128. Sampson I., Hodgen A., Arthur I. The separation of immunoglobulin M from human serum by fast protein liquid chromatography // J. Immunol. Methods.-1984.-vol. 69(1).- P. 9-15.

129. Schneider W., Lefevre H., Fiedler H., McCarty L. An alternative method of large scale plasma fractionation for the isolation of serum albumin // Blut.-1975.- vol. 30 (2).-P. 121-134.

130. Schroeder B., Mozen M. Australia antigen. Distribution during Cohn ethanol fractionation of human plasma// Science.- 1970.-vol. 168.-P. 1462-1464.

131. Schultze H., Heremans J. Nature and metabolism of extracellular proteins // Molecular biology of human proteins with special reference to plasma proteins.- Amsterdam.- 1966.- P. 246.

132. Schwick H.G. et al. Human IgA and IgM globulins for clinical use // Progr. Immunobiol. Standart New-York.- 1968.-4.- P.86-91.

133. Seifert J. IgM Gegenstand aktueller klinischer Forschung // Krankenhauspharmazie.- 1988.- vol. 9.- P. 17-20.

134. Sorensen V. , Sundvold V., Michaelsen T., Sandlie I. Polymerization of IgA and IgM: roles of Cys309/Cys414 and the secretory tailpiece // The J. of immunology.- 1999.- vol. 162.- P. 3448-3455.

135. Spackman D., Stein W., Moore S. // Anal.Biochem.- 1958.- vol. 30.- P. 1190.

136. Steinbuch M., Audran R., Pjeaudier L., Blatrix C. Preparation of an IgM and IgA enriched fraction for clinical use // Prep. Biochem.- 1973.- vol. 3 (4).-P.363-373.

137. Stephan W. et al. Eigenschaften und Wirksamkeit eines humanen Immunglobulin M-Praparates fur die intravenöse Anwendung // Drug.research.- 1985.-vol. 35 (6).- P. 933-936.

138. Stephan W. Elimination of component fixation in gamma-globulin by modification with ß-propiolacton // Chemical abstracts.- 1969.- vol. 71 (11).- P. 187.

139. Stephan W. Concentrated immunoglobulin solution suited for intravenous administration // Eur.Patent №4318902.- 09.03.82.

140. Stiehm E.R., Fudenberg H.H. Serum levels of immune globulins in health and disease: A survey // Pediatrics.- 1966.- 37.- P.715.

141. Stocking C. // Science.- 1956.- vol. 123.- P. 1032-1035.

142. Stucki M., Moudry R., Kempf C., Omar A., Schlegel A., Lerch P. Characterisation of a chromatographically produced anti-D immunoglobulin product // J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl.- 1997.- vol. 700 (1-2).-P. 241-248.

143. Sulk B., Birkenmeier G., Kopperschlager G. Application of phase partitioning and thiophilic adsorption chromatography to the purification of monoclonal antibodies from cell culture fluid // J.Immunol.Methods.- 1992.- vol. 149 (2).-P. 165-171.

144. Suomela H. An ion exchange method for immunoglobulin G production // In: Methods of plasma proteins fractionation.- Ed. Curling J.- New York.- 1980.-P. 107-116.

145. Suomela H., Himberg J. High-performance liquid chromatography in the quality control of immunoglobulin preparations during production and storage // J.Chromatogr.- 1984.- vol. 3 (297).- P. 369-373.

146. Tanaka K., Sawatani E., Shigueoka E., Campos T., Nakao N., Dias G., Fujita R., Arashiro F. A Chromatographic method for the production of a human immunoglobulin G solution for intravenous use // Brasilian J.Med.Biol.Res.-1998.- vol. 31.-P. 1375-1381.

147. Tanford C. The hydrophobic effect: formation of micelles and biological membranes.- New York.- 1980

148. Tsay G., Walnut G. Virucidal euglobulin precipitation // US patent №5,110,910.- 1992.

149. Tsay G., Walnut G., Jesmok G. Heat-treated IgM antibody preparations // Eur. pat. № 0450412 Bl.- 1997.

150. Van Der Hoven A., Conradie J., Bubb M. The isolation of immunogenically pure IgM from Cohn fraction 3 of pooled normal human plasma // Immunochemistry.- 1973.- vol. 10 (2).-P. 107-114.

151. Vogelaar F., Brummelhuis H., Beentjes S., Krijnen H. Contributions to the optimal use of human blood. IV. Quantitative analysis of the immunoglobulin isolation // Vox. Sang.- 1974.- vol. 27 (3).- P. 193-206.

152. Wichman A. // Biochem.Biophys.Acta.- 1977.- vol. 490,- P. 363-369.

153. Wichman A. Affinity chromatography of human plasma low- and high-density lipoproteins. Elution by selective cleavage of a bond in the spacer // Biochem J.- 1979,-vol. 181 (3).-P. 691-698.

154. Wickerhauser M., Hao J.L. Large scale preparation of macroglobulins // Vox. Sang.- 1972.-23.- 1-2.- P. 119-125.

155. Yap P.L. Intravenous immunoglobulin and hepatitis C virus: an overview of transmission episodes with emphasis on manufacturing data // Clin. Ther.-1996.- vol. 18.- Suppl B.- P. 43-58.