Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка и применение аналитической системы диагностики маркерных генов плодовитости свиней

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка и применение аналитической системы диагностики маркерных генов плодовитости свиней"

На правах рукописи

КУНАЕВА Елена Константиновна

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ АНАЛИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ДИАГНОСТИКИ МАРКЕРНЫХ ГЕНОВ ПЛОДОВИТОСТИ С ВИНЕЙ

03.00 23 - Биотехнология

06.02.01 - Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ииаи5Э071

Дубровины - 2007

003059071

Диссертационная работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства и на кафедре зоотехнии Российского университета дружбы народов

Научные руководители: кандидат биологических наук

Гладырь Елена Александровна

кандидат сельскохозяйственных наук Державина Галина Павловна

Официальные оппоненты, доктор биологических наук,

профессор Шихов Игорь Яковлевич

доктор сельскохозяйственных наук, академик РАСХН (иностранный член) Глазко Валерий Иванович

Ведущая организация Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологий имени К И Скрябина

Защита состоится « 29 » мая 2007 г в 10— часов на заседании диссертационного совета Д 006 013 01 во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства (ВИЖ)

Адрес института: 142132, Московская обтасть, Подольский район,

пос Дубровицы, ВИЖ Факс 8 (4967)651101

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЖа Автореферат разослан « » апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного < кандидат биологических наук / %¿^¿¿г-^В^П Губанова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Развитие свиноводства является наиболее перспективным направлением возрождения мясного комплекса России, так как эта отрасль животноводства позволяет в короткие сроки при высокой конверсии корма получать мясную продукцию (Ведомственная целевая программа «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006 -2010 г г и до 2015 года, 2005) Производство мяса и эффективность селекции свиней могут быть увеличены за счет повышения многоплодия свиноматок (Зиновьева H А , Эрнст J1 К , 2006)

Одним из путей повышения эффективности ведения отрасли свиноводства, является маркерная селекция, существенная роль в которой отводится полиморфным ДНК-маркерам В настоящее время широкое применение в качестве маркера плодовитости свиней нашел ген ESR Его применяют в селекционных программах в России, Белоруссии и ряде зарубежных фирм (PIC întei national Group, JSR Farming Group, Cotswoid Pig Development Company Rattlerow Seghers, ARK-Genomics Рослинского института Великобритании) Но использование полиморфизма гена ESR в качестве маркера плодовитости свиней в большинстве европейских пород свиней лимитируется отсутствием желательного аллеля В гена ESR (Зиновьева H А , 2001)

Научные разработки американских ученых Li Ning, W U Changxin, и др (2001) показали, что аллельные варианты гена р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона могут применяться в качестве маркеров плодовитости свиней

В нашей стране подобные исследования проводились лишь на ограниченном поголовье свиней, импортированных из-за рубежа (Адаменко В А, 2004) Дальнейшее изучение полиморфизма гена р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона и возможность его использования в качестве маркера плодовитости у наиболее распространенной в России крупной белой породы и ряда локальных пород свиней имеет большое научное и практическое значение

Цель и задачи исследований Цель диссертационной работы состояла в разработке аналитической системы диагностики полиморфизма гена р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) и использование ее самостоятельно и в комплексе с геном ESR в качестве критерия оценки воспроизводительных качеств свиней различных пород

Для достижения цели были поставлены следующие задачи

1 Разработать тест-систему анализа полиморфизма гена р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона с использованием метода ПЦР

2 Выполнить генотипирование свиней различных пород по гену FSHB

3 Провести анализ генетической структуры популяций свиней различных пород по гену FSHB

4 Выявить ассоциативные связи полиморфных вариантов гена FSHB с хозяйственно-полезными признаками

5 Апробировать методы сравнительной оценки комплексного влияния генотипов по генам FSHB и ESR на воспроизводительные качества свиней Научная новизна. Разработана тест-система диагностики полиморфизма гена-кандидата плодовитости (FSHB), выявлен полиморфизм у свиней пород крупная белая, черно-пестрая, уржумская, ливенская, эстонская беконная, дюрок, белорусская мясная и помесных свиноматок Изучена плодовитость свиноматок различных пород в зависимости от генотипов по гену FSHB Впервые выполнен анализ комплексного влияния генотипов по генам плодовитости FSHB и ESR на воспроизводительные качества свиней

Практическая значимость. Разработана тест-система диагностики полиморфизма гена FSHB, являющегося потенциальным маркером плодовитости свиней Проведена апробация системы для определения частоты встречаемости аллелей и генотипов изучаемого гена в 11 популяциях свиней пород крупная белая, черно-пестрая, уржумская, дюрок, ливенская, эстонская беконная, белорусская мясная и помесных свиноматок Показано предпочтение комплексной оценки воспроизводительных качеств свиней по двум генам плодовитости (FSHB и ESR)

Основные положения, выносимые на защиту:

• Аналитическая тест-система диагностики полиморфизма гена FSHB

• Популяционно-генетическая характеристика исследуемых популяций свиней по гену FSHB

• Ассоциации полиморфных вариантов гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней исследуемых пород

• Эффективность использования комплексной системы диагностики генов FSHB и ESR для оценки воспроизводительных качеств свиней Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных

работ, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК («Зоотехния», №4, 2007)

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были заслушаны и обсуждены на

• V международной научной школе-конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», ВИЖ, Дубровицы, 2005 г,

• научных конференциях Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ 2005, 2006 гг ,

• студенческом научном кружке кафедры зоотехнии аграрного факультета РУДН, 2006, 2007 гг ,

• межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки», Чебоксары, 2006 г

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах, содержит 27 таблиц, 37 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения, выводов,

практического предложения Список использованной литературы включает 170 источников, в том числе 80 на иностранных языках

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в лаборатории молекулярной генетики и цитогенетики животных в период с 2003 по 2006 гг в соответствии с планом научно-исследовательской работы Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖа и на кафедре зоотехнии Российского университета дружбы народов

Общая схема исследований приведена на рисунке 1

Исследования были выполнены на 703 свиньях 11 популяций 7 пород

1 Крупная белая (п=59), СГЦ «Заднепровский» Оршанский район, Витебская область Республики Беларусь,

2 Крупная белая (п=155), РСУП «Свинокомплекс Борисовский» Республики Беларусь,

3 Крупная белая (п=73), ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь,

4 Черно-пестрая (п=111), РСУП «Свинокомплекс Борисовский» Республики Беларусь,

5 Эстонская беконная (п=15), с-к «Южный» Гомельского района Республики Беларусь,

6 Эстонская беконная (п=11), ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь,

7 Уржумская (п=89), ГПЗ «Мухинский» Кировская область,

8 Ливенская (п=70), ГПЗ «им Георгиевского АС» Орловская область,

9 Белорусская мясная (п=7), ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь,

10 Дюрок (п=7), ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь,

11 Помесные (трехпородные свиноматки, крупная белая х белорусская мясная х эстонская беконная) (п=106), ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь

Для получения образцов ДНК были использованы пробы ткани (ушные выщипы) Консервирование проб проводили замораживанием при температуре -20°С непосредственно после взятия или помещали на время транспортировки в 96%-й спирт, далее хранили при -20°С до момента использования (Зиновьева Н А, Попов А Ни др, 1998)

ПОРОДЫ И ПОПУЛЯЦИИ СВИНЕИ

¡н

0.0 $ О. О-Д К

ссчйп с

!§ -О. ЦТ

н | =

§11 о. с 8

а>>, §._

5

__ т

г '-о

ш 5 =

8

у

о

Ц.т85

Ж гг

о & о.? 23 с£Й

К Ш

Я о-

8 1 о я

О х!

с "д

о> ко

из 5Й

«В 8

3 3

х I ||

ОО

ЕЙ

§

I 1

ГШ -

О о-^ л

Э ^ \о 8 1

II '

огс(

Получение образцов ткани. Обновление Банка ДНК

РАЗРАБОТКА АНАЛИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ДИАГНОСТИКИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА РЭИВ

X

ПЦР анализ гена РБНВ

а

ф

ос

Н

з 1 ¡1

* §

л 5-11

|1

11 а" * ™ 1 3 е •5-1 2 5 8-а

III

Изучение популяционно-генетической структуры исследуемых пород свиней по гену Ё^НВ

Выявление ассоциативных свя признаками свиней крупной бе пород и помеси зей с хозяйственно-полезными лой, черно-пестрой, уржумской ых свиноматок

Метод описательной статистики

Индексный метод

Сравнительная оценка комплексного влияния генотипов по генам РБНВ и ЕБ^* на воспроизводительные качества свиноматок крупной белой и уржумской пород

Рис I Схема исследований

Выделение ДНК проводили посредством лизиса в буфере Кавасаки или перхлоратным методом с модификациями (Зиновьева Н А , Гладырь Е А и др , 2002, Зиновьева Н А , Попов АН и др , 1998) Концентрацию ДНК и степень ее очистки определяли по методике Зиновьевой НА с соавторами (1998) Выделенную ДНК тестировали по 2 аллелям гена FSHB методом ПЦР-анализа с модификациями

Исследование полиморфизма гена ESR выполнено совместно Кайлачаковой О Н (2005)

Оценку продуктивных качеств свиней проводили по данным зоотехнического учета (карточка племенной свиноматки - форма 2-СВ)

Генетическое равновесие оценивали по уравнению Харди-Вайнберга, проверку нулевой гипотезы проводили по критерию хи-квадрат (jf) (Меркурьева Е К ,1983) Кластерный анализ проводили на основе Эвклидовых метрик с использованием стратегии агломерации (метод кластеризации Joining) и пакета программ STATISTICA 6 0 (Боровиков В П , 2001)

Описательную статистическую обработку проводили по стандартным методикам с использованием STATISTICA 6 0 и Exel Office 2003 Достоверность разности между признаками определяли на основании критерия Уайта для несопряженных (непарных) наблюдений (Гатаулин А М , 1970)

Индексную оценку свиноматок по комплексу воспроизводительных качеств проводили с использованием методики профессора Михайлова Н В (1989,2000)

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка тест-системы молекулярной диагностики полиморфизма гена ß-субъединицы фолликулостимулируюшего гормона (FSHB)

Для решения поставленной задачи нами была разработана система молекулярной диагностики полиморфизма гена ß-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) с использованием метода ПЦР Система состоит из четырех этапов

• подбор необходимых для проведения реакции олигонуклеотидных праймеров,

• определение температурно-временного режима проведения полимеразной цепной реакции,

• оптимизация реакционной смеси ПЦР,

• идентификация и интерпретация полученных результатов

Для детектирования полиморфных аллелей гена FSHB были выбраны два очигонуклеотидных праймера, фланкирующие фрагмент длиной 525 п о содержащий внутри себя ретропозон

Для проведения полимеразной цепной реакции был подобран состав реакционной смеси Реакции проводили в конечном объеме 15 мкл В пробирки объемом 0,5 смЗ (типа Eppendorf) вносили, соответственно, по 14 мкл реакционной смеси, состоящей из 1х ПЦР буфера (16,6 мМ (NH4)2S04, 67,7

мМ Трис - HCl, pH = 8.8; 0,1 (v/v) Tween 20); 1,5 мМ MgC12; 200мкМ диоксинуклеозйдтрифосфатов; 30 пмоль каждого из гтраймеров и 1 Ь'Д Taq -полимеразы; и добавляли 1 мкл исследуемой геномной ДНК и сверху наслаивали 25 мкл минерального масла для предотвращения испарения.

Исходя из температуры плавленая прайм еров и типа ПЦР-прибора были определены тем п ер атур но- временные режимы анализа: после начальной денатурации при 95° С в течение 5 минут выполняли 40 циклов амплификации в следующем режиме:

Температура Время

95°С 1 минута

56°С 1 минута

72°С 1 минута

Для идентификации амплифицировапных фрагментов ДНК использовали метод горизонтального гель-электрофореза (рис. 2). Электрофоретическос разделение проводили при напряжении 120 вольт в 2,2 % агарозном геле с добавлением бромистого димидия до конечной концентрации 30 мг/ см" в буфере ТАН, после чего визуализировали ПЦР- продукты под ультрафиолетовым светом. Документацию результатов осуществляли, используя программу Bio Test.

_ 525 п.о.

— 233 И.о.

Рис, 2. ПЦР- анализ вариантов гона Р5НВ свиней

Верхний фрагмент, содержащий ретропозон соответствует аллслю А, нижний - аллелю В. Для генотипа АА характерно наличие одной верхней полосы, для генотипа ВВ - одной нижней. Гетерозиготный генотип АВ характеризуется наличием двух фрагментов.

3.2 Генотипирование свиней различных пород но гену РЙНВ

Результаты популяционно-генетических исследований свиней семи пород и помесных свиноматок по вариантам гена Р5НВ представлены в таблице 1.

Свиньи характеризовались наличием трех генотипов АА, АВ и ВВ. Полученные данные показали высокую частоту генотипа ВВ, которая колебалась от 45,71% у свиноматок ливенской породы до 100% у хряков породы дюрок. Не установлено животных, носителей генотипа АА в популяциях свиней пород дюрок, крупной белой, белорусской мясной (ЗАО «Нарцизово»), а гак же у хряков черно-песгрой породы (РСУП

«Свинокомплекс Борисовский») У других популяций свиней на долю животных с данным генотипом приходилось от 0,9 (у свиноматок крупной белой породы РСУП «Свинокомплекс Борисовский) до 20,2% (у свиноматок уржумской породы)

Однако даже в пределах одной породы, но в разных хозяйствах были выявлены значительные различия по распределению генотипов Так в ЗАО «Нарцизово» и РСУП «Свинокомплекс Борисовский» на долю животных крупной белой породы с генотипом АА приходится соответственно 0-0,90%, то в СГЦ «Заднепровский» этот показатель равен 3,39%

Табпща 1

Частоты встречаемости генотнпов гена ГБНВ у свиней различных пород

№ п/п Порода хозяйство, пол п Частота генотипа, % Генетическое равновесие

АА АВ вв X3 Р

1 Крупная белая' свиноматки 59 3,39 32,20 64,41 0 >0,05

2 Крупная белая2 в том числе свиноматки хряки 155 1,29 1,94 96,77 0 >0,05

109 0,90 1 80 97,30

46 2,18 2 18 95,64

3 Крупная бе тая в том числе свиноматки хряки 73 0 6 85 93,15 0 >0 05

63 0 6,35 93,65

10 0 10,00 90,00

4 Черно-пестрая 2 в том числе свиноматки хряки 111 1,80 1 80 96,40 0 >0,05

80 2,50 1,25 96 25

31 0 3,23 96,77

5 Ливенская4 свиноматки 70 15,71 38,57 45,71 041 >0 05

6 Эстонская беконная\ свиноматки 15 6,67 6 67 86,76 0 >0,05

7 Эстонская беконная3,хряки 11 18,18 9,10 72 72 1,62 >0,05

8 Беторусская мясная1, хряки 7 0 14,29 85,71 0 >0,05

9 Дюрок3, хряки 7 0 0 100,00 0 >0 05

10 Уржумская , свиноматки 89 20 20 19,10 60,70 0 >0,05

11 Помеснь^ , свиноматки 106 1,90 7,50 90,60 0 >0,05

'Крупная бетая СГЦ «Заднепровсьий» Республики Беларусь 2 Крупная белая и черно-пестрая РСУП «Свинокомтекс Борисовский», я Крупная белая эстонская беконная белорусская мясная дюрок и помесные свиньи ЗАО «Нарцизово» Республики Беларусь, 4Лииенская ГПЗ «им Георгиевского А С » Орловская область РФ, 5 Эстонская беконная с -к «Южный» Республики Бетарусь, 6 Уржумская ГПЗ «Мухинский» Кировская область РФ

Частота встречаемости гетерозиготного генотипа АВ в исследованных выборках пород свиней колебалась от 0 до 38,57% Статистический анализ показал, что все анализируемые популяции находятся в генетическом равновесии Распределение аллелей гена РБНВ в этих популяциях свиней представлено на рисунке 3

100% 90% Ш% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10%

0%

Л- > > / У у У / / у

/ У </ У / # У / / / / / У М / у У </ У ^ У & / / / ^ /

/ ^ / # ■две

Яыс, Частота встречаемости аллелей в исследованных породах

Частота встречаемости аллеля А колебалась от 0% у хряков породы дюрок до 45% у эстонской беконной и? РСУП «Свинокомплекс Борисовский» Максимальной частотой встречаемости предпочтительного аллеля В характеризовались хряки породы дюрок, белорусской селекции.

3.3 Анализ генетической структуры популяций свиней различных пород по гену РвНВ

Для оценки генетического сходства исследованных выборок животных, был проведен кластерный анализ. Метод основан на критерии минимума генетического расстояния. В качестве переменных были выбраны частоты встречаемости аллелей гена Р8НВ (рис. 4).

РЗНВ

о, ¿ь

Рис. 4. Дендрограмма генетических расстояний между 11 популяциями свиней по гену Р8НВ

крупная белая 1 Крупная белая Мер но-по-с трал 2 Дюрок Э Крупная бел?»* 3 Помеси 3 Эстонская беконная 3 6влоруеек*я ияенал 3 Эстонская Законная 5 Уржум с кия 6 ЛИ8рнС1'ЗЯ 4

3

0.05 О.Ю 0,15

Генетические рвьстояии

Кластерный анализ показал наибольшее сходство между собой свиней пород эстонская беконная, белорусская мясная, дюрок, крупная белая и помесных свиноматок ЗАО «Нарцизово», которые образуют общий кластер с животными пород крупной белой и черно-пестрой РСУП «Свинокомплекс Борисовский» Несколько удалены от них свиньи уржумской породы ГПЗ «Мухинский» и популяции эстонской беконной из с -к «Южный», образующие общий кластер Наиболее удалены от всех свиньи крупной белой породы из СГЦ «Заднепровский» и свиноматки локальной ливенской породы, разводимые в ГПЗ «им Георгиевского АС»

3.4. Ассоциативная связь генотипов по гену РБНВ с воспроизводительными качествами свиноматок различных пород

Для изучения преимущества принадлежности к тому или иному генотипу по воспроизводительным качествам нами был проведен сравнительный анализ средних показателей за весь период продуктивного использования у свиноматок с генотипами АА, АВ и ВВ Для анализа были взяты свиноматки двух пород крупной белой (СГЦ «Заднепровский»), уржумской и трехпородные помеси Крупная белая была выбрана, как самая распространенная в России и Беларуси порода Она участвовала в создании ряда отечественных пород, в том числе исследованных нами уржумской и белорусской черно-пестрой Уржумская является уникальной породой отечественной селекции, приспособленной к районам Предуралья Анализ помесных животных представляет интерес при решении вопросов применения генетических маркеров в товарном свиноводстве

Средние показатели реализации генетического потенциала по воспроизводительным качествам за весь период использования свиноматок крупной белой породы из СГЦ «Заднепровский» представлены в таблице 2 В исследованной выборке гомозиготы по аллелю А отсутствовали

Таблица 2

Средние показатели воспроизводительных качеств у свиноматок _крупной белой породы с различными генотипами_

АВ ВВ Разница

т±Л л: + 5х ВВ к АВ

Многоплодие, готов 11,52±0 40 12,17±0,58* +0,65

Масса поросенка при рождении, кг 1,34±0,06 1 40±0,05 +0,06

Молочность 57,32±1,83 58,32±1,99* +1,00

Голов при отъеме (45 дней) 9 13±0,37 9 32±0,21 +0,19

Масса гнезда при отъеме, кг 109,66±5,96* 106,71±3,90 -2 95

Сохранность поросят к отъс\п„ % 79,25 76,58 -2,67

*) Здесь и далее достоверность разницы в показателях продуктивности у свиноматок различных генотипов рассчитывалась по критерию для непараметрических данных Уайта Разность достоверна при Р<0,05

Матки с генотипом ВВ по РБНВ достоверно превосходили гетерозиготных свиноматок (Р<0,05) по многоплодию и молочности Установлена достоверная корреляционная зависимость между молочностью и принадлежностью к генотипу ВВ свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» (г=0,36)

Характеристика воспроизводитель«ых качеств свиноматок уржумской породы в среднем за весь период использования приведена в таблице 3. Среди исследованных свиноматок помимо животных с генотипами ВВ и ЛВ присутствовали гомозиготы по аллею А, также включенные в анализ.

Таблица $

Средние показатели воспроизводительных качеств свиноматок

уржумской породы с различными генотипами

Генотипы Раз пика ВВ I

Показатели АА АН ВВ к АА _к АВ

Многоплодие, голов 11É5 ±0.31 12.16 + 0.85 +1,01 +0,42

Масса поросенка при рождении, кг 1.03 ±0.01 1,08 ± 0,01 1.06 + 0,04 -1-0,03 -0,02

Молочность, КГ 51.00± 1,61 51.14 ± 0,85 50,55 ±0,94 -0,45 -0.59 {

Голов при отъеме (60 дней) 7.05 ± 0,87 7.21 ± 0,79 7,55 ± 0,25* +0,50 +0,34

Масса гнезда при отъеме, К! 115.81 ± 14,56 120,78+ 16.71 122,54 ±6,70* +6,74 + 1,76 ,

Сохранность поросят к отъему, % 61.00 59.30 60,00 -1,00 1 +0,70

По многоплодию, массе гнезда и количеству поросят при отъеме уржумские свиноматки генотипа ВВ превосходили гомо- и гетерозигот по аллелю А (Р<0,05).

Сравнение показателей воспроизводительных качеств помесных свиней из ЗАО «Нарцизово» гомозиготных и гетерозиготных по аллелю В не выявило достоверных различий между анализируемыми группами. Средние значения исследованных признаков у свиноматок обоих генотипов находились практически на одном уровне.

Анализ результатов индексной оценки свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» показал, что более желательным является генотип ВВ. Количество животных с этим генотипом, имеющих индекс вьггие средних показателей по стаду, составило 60,6%, что на 4,35% выше, чем у особей с тештиром АВ ^S6,2S%) (рис. Щ, _ _______

150

£ 100 пз

0 50

X

1 о

2

¡ -50

3

s -100 -150

а)

Рис, 5. Распределение индексов (а) и процент свиноматок (Ь) с положительным индексом среди свиней крупной белой породы СГЦ ^Залщелровскии» _____ _____ ___________ ______

Таким образом, свиноматки с генотипом ВВ как при индексной оценке, так и при оценке методами описательной статистики обладают лучшими показателями воспроизводства по сравнению с гетерозиготными животными.

Распределение свиней уржумской породы по индексам выявило максимальное число животных с отрицательными значениями среди свиней с генотипом АА. Анализ полученных результатов показал, что 50% свиноматок, имеющих гетерозиготный генотип, имеют индекс, превышающий средний по стаду (рис, 6). V свиноматок с генотипом ВВ этот показатель составил 44,4%.

100 50

I о =

с

Ï -50

-100

-150

а)

Рис. 6. Распределение индексов (а) н процент свиноматок (Ь) с положительным индексом среди свиней уржумской породы ГПЗ I« Мухи некий» _ _____________

Таким образом, анализ репродуктивных качеств у свиноматок крупной белой и уржумской пород с использованием как методов описательной статистики, так и индексной оценки показал, что свиноматки - носители аллеля А имеют показатели воспроизводства ниже, чем свиноматки, несущие В-аллель.

В результате проведенного индексного анализа помесных свиноматок из ЗАО «Нарцизово» установлено, что 70% свиней с генотипом ВВ имеют положительный индекс, что на 28% выше, чем у гетерозиготных животных (рис.7). При этом наибольшее число свиноматок с генотипом ВВ имеют индекс в пределах от 10 до 60 и лишь треть имеют показатели воспроизводства ниже средних по стаду.

Вероятно, у помесных свиноматок различных генотипов значительно нивелируются различия в многоплодии и сопряженных с ним признаках, вызванные влиянием главных генов.

а) .........Ь)_________

Рис. 7. Распределение индексов (а) и процент свиноматок (Ь) с положительным индексом среди помесных свиней ЗАО «Нарцизово»

Суммируя полученные данные, можно говорить о том, что ассоциативная связь аллелей гена FSHB с признаками, характеризующими репродуктивные качества свиноматок, проявляется четко лишь при чистопородном разведении. При скрещивании нескольких пород этот эффект, вероятно, сглаживается в результате проявления эффекта гетерозиса.

3.5 Сравнительная оценка комплексного влияния генотипов по генам ß-субъединицы фолликуяостимулирующего гормона (FSHВ) и эстрогенового рецептора (ESR) на воспроизводительные качества свиноматок

На многоплодие и другие воспроизводительные качества свиноматок влияет целый ряд ДНК-маркеров (ESR, FSHB, KS HR, NCOA1, OPN, RBP4, PRLR), но для практического применения необходимо знать эффективность использования одних ДНК-маркеров по сравнению с другими.

Ген, аналогичный по фен »типическому проявлению гену FSHB, был ранее выявлен у свиней породы мейшан. Было показано, что различие в многоплодии у них связано с полиморфизмом по гену эстрогенового рецептора (FSR): матки с генотипом ВВ превосходили по многоплодию животных, гомозиготных по аллелю А А, в среднем на 1,5 поросенка по трем опоросам (Rothschild, etal-, 1994, 19%).

Для характеристики пород свиней по частоте встречаемости аллелей генов FSHB и ESR был проведен кластерный анализ генетических расстояний (рис. 8).

Согласно рисунку 8 животные эстонской беконной и трехпородные помеси ЗАО «Нарцизово» встали в один общий кластер, что можно объяснить тем, что в процессе получения помесей были использованы свиньи крупной белой, белорусской мясной и эстонской беконной породы. Свиньи уржумской и ливенской пород формируют второй кластер к которому примыкают свиньи крупной белой породы из СГЦ «Заднепровский», что было показано при кластерном анализе но гену FSHB.

Крупная белая 1 Уржумская 6 Ливенская 4 Эстонская беконная 3 Помеси 3

010 015 020 0,25 0 30 0 35

Генетические расстояния

FSHSHESR

Рис 8 Дендрограмма генетических расстояний между 5 выборками свиноматок по гену FSHB и ESR

Ряд авторов (Rothschild, et al, 1994, 1996, Хейн Ван дер Стин, 1998, Зиновьева НА с соавт 2000, Гладырь Е А с соавт, 2002, Волкова П В , Гладырь Е А, 2003, Кайлачакова О Н, 2005) в своих работах многократно упоминали об использовании гена эстрогенового рецептора в качестве маркера плодовитости свиней На основе данных Li Ning (2001) и материалов данной работы было выявлено положительное влияние В аллеля гена ß-субъединицы фолликулостимулирующего гормона на воспроизводительные качества свиноматок Для изучения эффективности использования в селекции по воспроизводительным качествам свиноматок маркеров FSHB, ESR, и возможности их совместного применения был выполнен сравнительный анализ показателей воспроизводства свиноматок крупной белой и уржумской пород, имевших разные сочетания генотипов

Анализ был проведен на свиноматках двух пород крупной белой и уржумской Уржумская представляет в этом плане интерес не только как уникальная порода отечественной селекции, но и как имеющая генетическое сходство по генам FSHB и ESR с животными ливенской и крупной белой пород Следовательно, полученные закономерности на основе анализа эффективности использования ДНК-маркеров плодовитости на свиноматках этих двух выборок можно применять и к популяциям, имеющим с ними генетическое сходство

Для выявления лучших сочетаний изучаемых генов мы проанализировали многоплодие за весь период использования свиноматок по выявленным сочетаниям аллелей генов FSHB и ESR

Многоплодие свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» в зависимости от принадлежности к разным генотипам по генам FSHB и ESR представлено на рисунке 9

Многоплодие, голов

15,00 12,00 9.00 6,00 3,00 0,00

FSHB+ESR АВ-АА АВ-АВ АВ-ВВ ВВ-АА ВВ-АВ ВВ-ВВ

I I 1 опорос lam з опорос —»—в среднем за весь период исполозован^я

32 опорос

- -4- - в среднем за 3 опороса

Рис.9 Многоплодие свиноматок крупной белой породы с различными сочетаниями генотипов по гену FSHB и ESR в динамике по опоросам

Наибольшим многоплодием характеризуются свиноматки крупной белой породы, имеющие генотип ВВ по двум маркерам, как в нервом-третьем опоросе, так и в среднем за весь период продуктивного использования. Так разница между этим показателем у свиноматок с сочетанием генотипов АВ-АА и ВВ-ВВ составила в первом, втором и третьем опоросе, соответственно 1,00; 3,42 и 2,07 головы, а в среднем за весь период продуктивного использования 2.53 поросенка.

На рисунке 10 приведены данные по многоплодию свиноматок уржумской породы из ГШ «Мухинский» в зависимости от их принадлежности к разным генотипам по Генам FSHB и HSR. В исследованной Популяции выявлено 8 различных сочетаний. Свиноматки с комплексными генотипами АА-ВВ, АВ-АА, АВ-ЛВ и АВ-ВВ встречались крайне редко.

Разница между многоплодием свиней с генотипами АА-АВ и ВВ-ВВ составила по первым трем опоросам 0,59; 2,14 и 1,28 поросенка, соответственно, В среднем ча весь период продуктивного использования от свиноматок желательной комбинацией генотипов за один опорос получено на 0,95 поросенка больше.

Анализ этих данных однозначно указывает на то, что у свиноматок как крупной белой, так и уржумской породы двойные гомозиготы по аллелю В sa весь период их использования стабильно превосходят животных, в генотипе которых преобладает аллель А. В зависимости от опороса и породы свиней это превосходство составляло 0,59 — 3,42 поросенка.

I > \ I ■ ] 7 ОПЗДОС

I'" ■ > 3 опарас - * - п среднем за 3 опороса

——в среднем за весь г.ериод использовании

*) данные сочетания генотипов представлены 1 головой свиноматок **) данные сочетания генотипов представлены 2 головами свиноматок

Рис. К) Многоплодие свиноматок уржумской породы с различными сочетаниями генотипов по гену Р$НВ и ЕКИ в динамике по опоросам

С целью детального изучения эффективности влияния этих генов на показатели собственной продуктивности мы проанализировали данные по воспроизводству свиноматок с генотипом ВВ по генам РЭНВ и по отдельности и в сочетании за весь период продуктивного использования свиней. Результаты обработки представлены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4

Средние показатели воспроизводства у свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» в зависимости от принадлежности к генотипам по

РБНВ и Е£К

Генотип ВВ

Показатели по гену но гену ЕКЯ ККНВ + ЕКК

(л«34> (п=]3> (и=8)

Многоплодие, голов 12.17±0,5К 11,96±0,54 !3,43±2,10*

Масса гнезда при рождении, кг 16.69=0,81 1й,37±!,11 18,23*3,40*

Количество голов ц 21 лень 9,57±0,21 9,55±0,14 8.93=0,63

Масса гнезда в 21 день, кг 58,32*1,99 57,95=2,07 57,03±6,87

Количество голов при отъеме 9,32±0,21 * 9,14±0,20 8.92±042

Сохранность пороснт к отъему, % 72.60 76,42 66,42

Из приведенных данных видно, что преимущество по многоплодию и массе гнезда имеют свиноматки желательного генотипа по обоим маркерам Разница в многоплодии у этих свиноматок в сравнении со свиноматками генотипа ВВ по РБНВ составляет 0,6 поросенка и 1,44 поросенка - со свиноматками генотипа ВВ по ЕБЯ (при Р<0,05) При этом самая высокая сохранность поросят у гомозигот В по ЕБЯ, имевших меньшее многоплодие (табл 4)

Следует отметить, что свиноматки желательного генотипа по гену РБНВ имеют преимущество по молочности, достоверно (Р<0,05) превышая на 1,3 кг свиноматок с желательным генотипом по двум генам и на 370 г свиноматок с генотипом ВВ по гену ЕБЛ

Данные, характеризующие воспроизводительные качества уржумских свиноматок за весь период их продуктивного использования, представлены в таблице 5

Табища 5

Средние показатели воспроизводства у свиноматок уржумской породы ГПЗ «Мухинский» в зависимости от принадлежности к генотипам по _маркерам Г8НВ и ЕБИ_

Г енотип ВВ

Показатели по гену по ген} РБНВ +

Р5НВ(п=44) Е8Щп=12) (п=9)

Многоплодие голов 12,58 ± 0,32* 12 4±0,6 12,2±0,5

Масса поросенка при рождении кг 1 06 ± 0 04 1,03±0,01 1,03±0,01

Молочность, кг 50 55 ±0,94 53,3±1,2 53,5±1 6

Кочичество голов при отъеме (60

дней) 7 55 ±0 25 8 03±0 3 8,27±0,4"

Масса гнезда при отъеме, кг 122 54 ±6 70 140±8 149*10*

Масса поросенка при отъеме кг 15 94 ±0 65 17 1±0,5 17,7±0,5*

Сохранность % 60 00 64,75 67,80

По многоплодию и массе поросенка при рождении преимущество имеют уржумские свиноматки с генотипом ВВ по гену РБНВ У этих животных повышенное количество полученных поросят не приводило к снижению их живой массы при рождении Однако сохранность поросят оказалась ниже по сравнению со свиноматками с генотипом ВВ по ЕБЯ и по двум маркерам (60 против 64,8 и 67,8%, соответственно)

Масса поросенка при отъеме у свиноматок с желательным генотипом по двум маркерам на 1,76 кг больше, чем у гомозигот В по гену Р8НВ (Р<0,05) У свиноматок желательного генотипа по обоим маркерам обнаружена и высокая молочность - 53,5 кг, что на 3 кг больше, чем у свиноматок с генотипом ВВ по гену РБНВ (Р<0,05)

Проведенный сравнительный анализ крупной белой и уржумской пород позволяет заключить, что выбор того или иного гена в качестве маркера зависит от целей селекции Для свиноматок уржумской породы при необходимости проведения селекции на многоплодие достаточно проводить ее

по одному маркеру - по гену ЕБНВ Если же необходимо улучшить молочность, сохранность и массу поросенка при отъеме, то лучше использовать в сечекции 2 маркера

При селекции свиноматок крупной белой породы по многоплодию и массе гнезда при рождении, а значит и массе поросенка, лучше использовать два ДНК-маркера - ген эстрогенового рецептора и ген р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона Если необходимо увеличить только массу гнезда к отъему и молочность свиноматок - достаточно провести оценку свиноматок по гену р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона и провести селекцию с учетом желательного генотипа по этому маркеру

ВЫВОДЫ

1 Разработана тест-система диагностики аллелей А и В гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона с использованием метода ПЦР Методика экспериментально апробирована на 703 головах свиней 11 популяций 7 пород и помесных животных

2 Выявлен полиморфизм гена ЕБНВ у свиней крупной белой, черно-пестрой, уржумской, ливенской, эстонской беконной, белорусской мясной пород, а так же помесных свиноматок Частота встречаемости желательного аллеля В колебалась от 0,55 у хряков эстонской беконной породы до 1,00 у хряков породы дюрок Доли предпочтительных генотипов ВВ варьировали в зависимости от породы от 45,71% (ливенская) до 100,00% (дюрок) Установлены большие межпопуляционные различия у свиней крупной белой (рв=0,805-0,977) и эстонской беконной (рв=0,550-0,900) пород Все анализируемые популяции находятся в генетическом равновесии

3 Кластерный анализ по частотам аллелей гена Р8НВ выявил наименьшие генетические расстояния между породами свиней эстонская беконная, белорусская мясная, дюрок, крупная белая и помесными свиноматками ЗАО «Нарцизово», которые образуют общий кластер с животными пород крупной белой и черно-пестрой РСУП «Свинокомплекс Борисовский» (0,02-0,08) Наиболее удалена от всех пород популяция ливенских свиней (0,23)

4 Выявлены ассоциативные связи аллеля В гена РБНВ с показателями воспроизводства у чистопородных свиноматок (Р<0,05) В среднем по всем опросам достоверное превосходство свиноматок с генотипом ВВ над животными с генотипами АВ и АА составило в крупной белой породе (СГЦ «Заднепровский») 0,65 поросенка (ВВ>АВ), в уржумской породе (ГПЗ «Мухинский») - 0,42 и 1,03 поросенка (ВВ>АВ и ВВ>АА) У помесных животных не установлено влияния генотипа ВВ на показатели воспроизводства

5 Установлена достоверная корреляционная зависимость между молочностью и принадлежностью к генотипу ВВ свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» (г=0,36)

6 Оценка свиноматок по индексу воспроизводительных качеств подтвердила предпочтительность использования в племенном свиноводстве животных-носителей генотипа ВВ по гену РБНВ, обеспечивающего превышение многоплодия, молочности и массы поросенка при рождении над среднепопуляционными значениями

7 Оценено комплексное влияние генотипов по генам Р8НВ и ЕБЯ с использованием разработанной аналитической системы диагностики Показано, что при отборе по двум генам в сочетании ВВ-ВВ установлено достоверное увеличение многоплодия и массы гнезда при рождении у свиней крупной белой породы, и массы гнезда при отъеме у уржумской Превосходство по многоплодию за весь период использования составило у крупной белой породы 2,53 поросенка (ВВ-ВВ>АВ-АА), у уржумской 0,95 поросенка (ВВ-ВВ>АА-АВ) на опорос

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Лабораториям, занимающимся молекулярно-генетическими

исследованиями свиней рекомендуем использовать предложенную нами тест-систему

Племенным предприятиям Российской Федерации и Республики Беларуси с целью повышения плодовитости рекомендуем проводить мониторинг популяций свиней по генам РБНВ и Е8Ы с использованием предложенной комплексной аналитической системы

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Гладырь Е А , Использование гена фолликулостимулирующего гормона бета-субъединицы (FSHP) как генетического маркера в селекции свиней / Е А Гладырь, Г П Державина, Е К Кунаева, Г Т Сафина, Н А Зиновьева// Материалы межвузовской научно-практической конференции студентов, аспирантов и преподавателей аграрных вузов РФ - М РУДН, 2005 - с 144-146 - (Сб материалов конференции)

2 Зиновьева Н А, ДНК-маркеры как рычаг повышения многоплодия свиней/ Н А Зиновьева, Е А Гладырь, О В Костюнина, К М Шавырина, Е К Кунаева // Промышленное и племенное свиноводство -2005 - N 5 -С 18-21

3 Кунаева Е К, Влияние полиморфизма гена бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона на воспроизводительные качества свиней / Е К Кунаева, Е А Гладырь, Г П Державина, Г Т Сафина, Н А Зиновьева // Методы исследований в биотехногии сельскохозяйственных животных, Дубровицы, 2005 - с 94-99 - (Сб материалов школы-практикума, под ред профессора, доктора биологический наук Зиновьевой Н А)

4 Кунаева Е К , Использование гена фолликулостимулирующего гормона бета-субъединицы (FSHP) как генетического маркера в свиноводстве / Е К Кунаева, Н А Зиновьева, Е А Гладырь, Г П Державина // Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки - Чебоксары, Изд ЧГСХА, март 2006 г - с 204-206 - (Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов)

5 Зиновьева Н А , Методы маркер-зависимой селекции /НА Зиновьева, Е А Гладырь, Г П Державина, Е К Кунаева // Животноводство России -2006,-№5,-С 29-31

6 Кунаева Е К , Использование гена фолликулостимулирующего гормона бета-субъединицы (FSHP) как потенциального маркера воспроизводительных качеств в свиноводстве / Е К Кунаева, Е А Гладырь, Г П Державина, Н А Зиновьева // Чебоксары ЧГСХА, 2006 -с 269-272 (Материалы Всероссийской конференции, посвященной 75-летию со дня открытия Чувашской государственной сельскохозяйственной конференции)

7 Кунаева Е К, Повышение эффективности селекции свиней с использованием генов FSHB и ESR / Е К Кунаева, Г П Державина, Е А Гладырь, Е П К удина, Н А Зиновьева//Зоотехния - №4, - 2007, - с 1619

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25 09 2000 г Подписано в печать 27 04 07 Тираж 100 экз Уел п л 1,32 Печать авторефератов (495) 730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кунаева, Елена Константиновна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Использование ДНК-маркеров в генетических исследованиях

1.2.Маркер-зависимая селекция

1.2.1. Использование маркер-зависимой селекции в свиноводстве

1.2.2. Маркеры воспроизводительных качеств свиней 24 1.3 .Физиолого-биохимические свойства фолликулостимулирующе- ^ го гормона (FSH)

1.3.1. Полиморфизм гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) и его влияние на воспроизводи- 35 тельные качества свиней

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.Материалы

2.1.1. Животные

2.1.2. Реактивы

2.1.3. Оборудование

2.2.Методы

2.2.1. ПЦР-анализ

2.2.2. Статистический анализ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖ

ДЕНИЕ

3.1.Разработка тест-системы молекулярной диагностики полиморфизма гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормо- 44 на (FSHB)

3.2.Генотипирование свиней различных пород по гену FSHB

3.3.Анализ генетической структуры популяций свиней различных пород по гену FSHB

3.4.Ассоциативная связь генотипов и аллелей гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней

3.4.1. Ассоциативная связь генотипов и аллелей гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней крупной белой 55 породы СГЦ «Заднепровский»

3.4.2. Ассоциативная связь генотипов и аллелей гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней крупной белой и черно-пестрой породы РСУП «Свинокомплекс Борисовский»

3.4.3. Ассоциативная связь генотипов и аллелей гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней уржумской по- 69 роды ГПЗ «Мухинский»

3.4.4. Ассоциативная связь генотипов и аллелей гена FSHB с воспроизводительными качествами помесных свиней ЗАО 75 «Нарцизово»

3.5.Сравнительная оценка комплексного влияния генотипов по генам (3-субъединицы фолликулостимулирующего гормона

FSHB) и эстрогенового рецептора (ESR) на воспроизводительные качества свиноматок

3.5.1. Комплексные генотипы по генам FSHB и ESR и воспроизводительные качества свиноматок

3.5.2. Сравнительный анализ показателей воспроизводства свиноматок с предпочтительными генотипами по генам FSHB 92 и ESR по отдельности и в комплексе

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка и применение аналитической системы диагностики маркерных генов плодовитости свиней"

Актуальность темы

Развитие мясного животноводства на современном этапе невозможно без внедрения новых биотехнологических методов оценки признаков продуктивности сельскохозяйственных животных, базирующихся непосредственно на анализе наследственной информации. Успехи в области молекулярной биологии, молекулярной генетики и генной инженерии привело к широкому использованию молекулярно-генетических методов в различных областях науки и практики, в том числе и в животноводстве. (Зиновьева Н.А., 1998) В этой связи, разработка и внедрение в практическое животноводство генной диагностики (ДНК-диагностики) является актуальной задачей фундаментальной и прикладной биотехнологии, одной из областей применения которой является разведение и селекция сельскохозяйственных животных. (Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К., 2004)

Свиноводство является наиболее перспективным направлением возрождения мясного комплекса России, так как эта отрасль животноводства позволяет в короткие сроки при высокой конверсии корма получать мясную продукцию (Ведомственная целевая программа «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006 - 2010 г.г. и до 2015 года, 2005).

Успешное развитие отрасли свиноводства во многом зависит от эффективности селекционно-племенной работы. Производство мяса и эффективность селекции свиней могут быть увеличены за счет повышения многоплодия свиноматок (Зиновьева Н.А., Эрнст JI.K., 2006).

Интенсификация селекционного процесса требует научно-обоснованных подходов при проведении племенного отбора. Необходимым условием повышения эффективности племенного отбора является получение точной информации о продуктивности животных в раннем его возрасте, а так же возможности использования полного его генетического потенциала.

Общепринятые методы селекции свиней не позволяют полностью использовать генетический потенциал существующих пород, поэтому необходимы дальнейшие теоретические и практические разработки и внедрение в производство новых эффективных приемов селекции для улучшения адаптивных и воспроизводительных качеств свиней с учетом современных интенсивных технологий (Г.В. Орлова, С.В. Никитин и др., 1999). Генетический прогресс в свиноводстве может быть достигнут только в результате комплексного применения традиционных методов селекции и современных ДНК-технологий (Епишко Т.И., Шейко Р.И. и др., 2004).

Важной задачей практической генетики является поиск комплексных генотипов с наиболее желательными хозяйственно-полезными признаками и максимально адаптированных к конкретным экологическим условиям. В настоящее время это направление называется "маркер-зависимая селекция" (Marker Assisted Selection - MAS) и разрабатывается в странах с развитым животноводством (Г.В. Орлова, С.В. Никитин и др, 1999; Хейн Ван Дер Стин, 1998).

В качестве маркеров предлагается рассматривать полиморфные генетические системы. Наличие полиморфизма является необходимым условием использования генетического локуса в качестве маркерного. Например, гены, кодирующие биохимические признаки, могут использоваться в качестве маркеров, если они детерминируют варианты, различающиеся по электрофоретиче-ской подвижности (продукты полиморфных локусов представлены на электро-фореграммах спектрами полос, предполагающими кодоминантную экспрессию, то есть, гетерозиготы характеризуются по крайней мере двумя полосами активности, а гомозиготы - одной полосой с различными скоростями миграции) (Г.В. Орлова, С.В. Никитин и др, 1999).

Использование генетических маркеров в селекционной практике различных отраслей животноводства нашей страны начато недавно, по меньшей мере, на 10 лет позднее, чем такие работы были развернуты в практике зарубежного животноводства. Масштабы применения ДНК-маркеров крайне ограничены и несопоставимы с опытом зарубежных стран, где в рамках научных исследований и сугубо коммерческих работ ежегодно тестируется значительное поголовье сельскохозяйственных животных.

Научные разработки американских ученых Li Ning, W.U. Changxin, и др (2001) показали, что аллельные варианты бета - субъединицы гена фолликуло-стимулирующего гормона могут применяться в качестве маркеров плодовитости свиней. В нашей стране подобные эксперименты проводились лишь на ограниченном поголовье отдельных популяций свиней, импортированных из-за рубежа (Адаменко В.А., 2004). Дальнейшее изучение полиморфизма гена (3-субъединицы фолликулостимулирующего гормона и возможность его использования в качестве маркера плодовитости у наиболее распространенной в России крупной белой породы и ряда локальных пород свиней имеет большое научное и практическое значение и являются актуальным.

Цель диссертационной работы состояла в разработке аналитической системы диагностики полиморфизма гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) и использование ее самостоятельно и в комплексе с геном ESR в качестве критерия оценки воспроизводительных качеств свиней различных пород.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать тест-систему анализа полиморфизма гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона с использованием метода ПЦР.

2. Выполнить генотипирование свиней различных пород по гену FSHB.

3. Провести анализ генетической структуры популяций свиней различных пород по гену FSHB.

4. Выявить ассоциативные связи полиморфных вариантов гена FSHB с хозяйственно-полезными признаками.

5. Апробировать методы сравнительной оценки комплексного влияния генотипов по генам FSHB и ESR на воспроизводительные качества свиней.

Научная новизна

Разработана тест-система диагностики полиморфизма гена-кандидата плодовитости (FSHB), выявлен полиморфизм у свиней пород крупная белая, черно-пестрая, уржумская, ливенская, эстонская беконная, дюрок, белорусская мясная и помесных свиноматок. Изучена плодовитость свиноматок различных пород в зависимости от генотипов по гену FSHB. Впервые выполнен анализ комплексного влияния генотипов по генам плодовитости FSHB и ESR на воспроизводительные качества свиней.

Практическая значимость

Разработана тест-система диагностики полиморфизма гена FSHB, являющегося потенциальным маркером плодовитости свиней. Проведена апробация системы для определения частоты встречаемости аллелей и генотипов изучаемого гена в 11 популяциях свиней пород крупная белая, черно-пестрая, уржумская, дюрок, ливенская, эстонская беконная, белорусская мясная и помесных свиноматок. Показано предпочтение комплексной оценки воспроизводительных качеств свиней по двум генам плодовитости (FSHB и ESR).

Основные положения, выносимые на защиту;

• Аналитическая тест-система диагностики полиморфизма гена FSHB.

• Популяционно-генетическая характеристика исследуемых популяций свиней по гену FSHB.

• Ассоциации полиморфных вариантов гена FSHB с воспроизводительными качествами свиней исследуемых пород.

• Эффективность использования комплексной системы диагностики генов FSHB и ESR для оценки воспроизводительных качеств свиней.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК («Зоотехния», №4,2007).

Апробация работы

Материалы диссертационной работы были заслушаны и обсуждены на:

• V международной научной школе-конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии: современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», ВИЖ, Дуброви-цы, 2005 г.;

• научных конференциях Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ 2005, 2006 гг.;

• студенческом научном кружке кафедры зоотехнии аграрного факультета РУДН, 2006, 2007 гг.;

• межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки», Чебоксары, 2006 г.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах, содержит 27 таблиц, 37 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практического предложения. Список использованной литературы включает 170 источников, в том числе 80 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Кунаева, Елена Константиновна

выводы

1. Разработана тест-система диагностики аллелей А и В гена Р-субъединицы фолликулостимулирующего гормона с использованием метода ПЦР. Методика экспериментально апробирована на 703 головах свиней 11 популяций 7 пород и помесных животных.

2. Выявлен полиморфизм гена FSHB у свиней крупной белой, черно-пестрой, уржумской, ливенской, эстонской беконной, белорусской мясной пород, а так же помесных свиноматок. Частота встречаемости желательного аллеля В колебалась от 0,55 у хряков эстонской беконной породы до 1,00 у хряков породы дюрок. Доли предпочтительных генотипов ВВ варьировали в зависимости от породы от 45,71% (ливенская) до 100,00% (дюрок). Установлены большие межпопуляционные различия у свиней крупной белой (рв=0,805-0,977) и эстонской беконной (рв=0,550-0,900) пород. Все анализируемые популяции находятся в генетическом равновесии.

3. Кластерный анализ по частотам аллелей гена FSHB выявил наименьшие генетические расстояния между породами свиней эстонская беконная, белорусская мясная, дюрок, крупная белая и помесными свиноматками ЗАО «Нарцизово», которые образуют общий кластер с животными пород крупной белой и черно-пестрой РСУП «Свинокомплекс Борисовский» (0,02-0,08). Наиболее удалена от всех пород популяция ливенских свиней (0,23).

4. Выявлены ассоциативные связи аллеля В гена FSHB с показателями воспроизводства у чистопородных свиноматок (Р<0,05). В среднем по всем опросам достоверное превосходство свиноматок с генотипом ВВ над животными с генотипами АВ и АА составило в крупной белой породе (СГЦ «Заднепровский») 0,65 поросенка (ВВ>АВ), в уржумской породе (ГПЗ «Мухинский») - 0,42 и 1,03 поросенка (ВВ>АВ и ВВ>АА). У помесных животных не установлено влияния генотипа ВВ на показатели воспроизводства.

5. Установлена достоверная корреляционная зависимость между молочностью и принадлежностью к генотипу ВВ свиноматок крупной белой породы СГЦ «Заднепровский» (г=0,36).

6. Оценка свиноматок по индексу воспроизводительных качеств подтвердила предпочтительность использования в племенном свиноводстве животных-носителей генотипа ВВ по гену FSHB, обеспечивающего превышение многоплодия, молочности и массы поросенка при рождении над среднепопуляционными значениями.

7. Оценено комплексное влияние генотипов по генам FSHB и ESR с использованием разработанной аналитической системы диагностики. Показано, что при отборе по двум генам в сочетании ВВ-ВВ установлено достоверное увеличение: многоплодия и массы гнезда при рождении у свиней крупной белой породы, и массы гнезда при отъеме у уржумской. Превосходство по многоплодию за весь период использования составило у крупной белой породы 2,53 поросенка (ВВ-ВВ>АВ-АА), у уржумской 0,95 поросенка (ВВ-ВВ>АА-АВ) на опорос (Р<0,05).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Лабораториям, занимающимся молекулярно-генетическими исследованиями свиней рекомендуем использовать предложенную нами тест-систему.

Племенным предприятиям Российской Федерации и Республики Беларуси с целью повышения плодовитости рекомендуем проводить мониторинг популяций свиней по генам FSHB и ESR с использованием предложенной комплексной аналитической системы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кунаева, Елена Константиновна, п. Дубровицы Московской обл.

1. Алтухов, Ю.П. Генетические процессы в популяциях / Ю.П Алтухов. -М.: Наука, 1989.-328 с.

2. Алтухов, Ю.П. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике / Ю.П. Алтухов, Е.А. Салменкова // Генетика. 2002. - Т. 98, № 9. С. 1173 - 1195.

3. Ананин В.Н. Технологии и методы разведения свиней на малых фермах с использованием генетических маркеров: дисс. Канд. С.-х. наук: 06.02.04: защищена 18.11.1999; утв. 22.05. 2000 / Ананин Владимир Николаевич. п. Лесные Поляны МО, 1999. -Библогр. 105-118.

4. Арсиенко, Р.Ю. Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABR), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней: авто-реф. дис. канд. биол. наук: 03.00.23 / Арсиенко Роман Юрьевич. Дубровицы, 2003. - 26 с.

5. Балацкий, В.Н. ДНК-диагностика стресс-синдрома свиней и ассоциация RYRI-генотипов с жизнеспособностью поросят раннего возраста / В.Н. Балацкий, Е.Н. Метлицкая // Цитология и генетика. 2001. Т. 35, № 3. - С. 43-49.

6. Боровиков, В.П. Программа STATISTICA для студентов и инженеров / Боровиков В.П.- Изд. 2-е. М.: КомпьютерПресс, 2001.-301 с.

7. Брем Г., Бренинг Б. Использование в селекции свиней молекулярно-генной диагностики злокачественного гипертермического синдрома (MHS) // Генетика. 1993. -Т. 29. - № 6. - С.1009-1013.

8. Булат, С.А., ДНК-полиморфизм фитопатогенного гриба Pyrenophora tritici- repentis (Died.) Drechsler / C.A. Булат, H.B. Мироненко // Генетика. 1989. T.25. №11. C.2059-2064.

9. Гатаулин A.M. Методическое пособие математической статистике. / A.M. Гатаулин. М.: МСХА им. К.А Тимирязева. - 1970. - 214 с.

10. Генетика и биотехнология в селекции животных / П.М. Кленовицкий, Н.С. Марзанов, В.А. Багиров, М.Г. Насибов. М.: ФГУП «Эксплор», 2004. -285 с.

11. Генетические ресурсы сельскохозяйственных животных в России и сопредельных странах / Сост. Л.К. Эрнст, Н.Г. Дмитриев, И.А. Паронян. С-Пб.: РАСХН, 1994.-473 с.

12. Герасимов, В. Свиноводческий комплекс колхоза / В. Герасимов, Е. Пронь // Свиноводство. 2005. - №5. - С. 19-20

13. Глазко В.И. ДНК-технологии животных / В.И. Глазко. К.: Нора -Принт, 1997.- 173с.

14. Глазко В.И. Методы ДНК-технологий в институте агроэкологии и биотехнологии / В.И. Глазко, А.А. Созинов // Молекулярно-генетические маркеры животных. Киев: Нора - принт, 1999. - С. 7. - (Тезисы докладов третьей международной конференции).

15. Глазко В.И. ДНК-технологии в популяционно-генетических исследованиях сельскохозяйственных видов / В.И. Глазко, Г.В. Глазко // Актуальные проблемы биологии в животноводстве. Боровск, 2000. - С. 387-389. - (Сб. третьей международной конференции).

16. Глазко В.И. Варианты молекулярно-генетических маркеров и их использования / В.И. Глазко // Научно-практическая конференция посвященная 70-летию ВНИИ коневодства. Дивово, 2000. - с. 48-51. - (Тезисы докладов).

17. Голубев, М.И., Развитие половой системы, плодовитость и эмбриональная смертность у домашней свиньи / М.И. Голубев, Ю.Ф. Красавцев // Незаразные болезни с.-х животных. Горький, 1985. - С.61-70. - (Сб. научн. тр. / Горьк. с.-х. ин.-т.).

18. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих / под ред. К. Остина, Р. Шорта. М.: Мир, 1987. 304 с.

19. Гостимский, С.А. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений / С.А. Гостимский, З.Г. Кокаева, В.К. Боброва // Генетика. -1999. Т.35, №11. - С. 1538-1549.

20. Грудев, Д.И. Фенотип многоплодия свиней / Д.И. Грудев, Э. Сильвин-ская, В. Смирнова, И. Лимонова // Свиноводство. 1980. - № 1. - С.32-36.

21. Гудилин И.И., Интерьер и продуктивность свиней. / И.И. Гудилин, B.JI. Петухов, Т.А. Дементьева.- Новосибирск. 2000. - С.3-21.

22. Данкверт С.А., свиноводство стран мира в конце XX века. / С.А. Дан-кверт, A.M. Холманов, О.Ю. Осадчая. М.: 2004. - 142 с.

23. Евсиков, В.И. Генетико-эволюционные аспекты проблемы гомеостаза плодовитости млекопитающих (на примере норок) / В.И. Евсиков // Генетика. -1987. Т. 23, № 6. - С.988-1002.

24. Забаровский, Е.Р. Альтернативные подходы к картированию и секвениро-ванию генома / Е.Р. Забаровский // Молекулярная биология. 2001. - Т. 35, №2. - С. 224.

25. Захаров И.А. Генетические карты сельскохозяйственных животных / И.А. Захаров // Государственная научно-техническая программа России «Приоритетные направления генетики». М.:, 1995. - 35 с. - (Информационно-справочные материалы. Вып. 2).

26. Зиновьева, Н.А. Молекулярно-генетические аспекты в решении задач современного животноводства: автореф. дисс. докт. биол. наук: 03.00.23 / Зиновьева Наталья Анатольевна. Дубровицы, - 1998. - 32 с.

27. Зиновьева Н.А., Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н.А. Зиновьева, А.П. Попов, JI.K. Эрнст, Н.С. Марзанов, В.В. Бочкарев, Н.И. Стрекозов, Г. Брем. Дубровицы: ВИЖ, 1998. - 47 с.

28. Зиновьева, Н.А. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, Е. А. Гладырь, Л.К. Эрнст, Г. Брем. Дубровицы, ВИЖ, 2002. 112 с.

29. Зиновьева, Н.А. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, Л.К. Эрнст. Дубровицы, ВИЖ, 2004. 316 с.

30. Зиновьева, Н.А. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, Л.К. Эрнст. Изд. 2-е, дополненное. - Дубровицы, ВИЖ, 2004. - 329 с.

31. Кабанов В.Д. Интенсивное производство свинины / В.Д. Кабанов. М.: МГСХА им. Скрябина, 2003. - 400 е.: ил. - (Учебники и учеб. Пособия для студентов высших учебных заведений).

32. Кабанов В.Д. Свиноводство / В.Д. Кабанов. М.: Колос, 2001. - 431 е.: ил. - (Учебники и учеб. Пособия для студентов высших учебных заведений).

33. Калашнокова JI.A. Генная диагностика стрессчувствительности свиней / J1.A. Калашникова, Н.А. Рыжова, Н.В. Гупалов // Молекулярно-генетические маркеры животных. Киев: Аграрная наука, 1996. - С. 10 (Тезисы докладов 2-й международной конференции).

34. Календарь Р.Н. Типы молекулярно-генетических маркеров и их применение / Р.Н. Календарь, В.И. Глазко // Физиология и биохимия культурных растений. 2002. - Т. 34. - №4. - С. 279-296.

35. Кленовицкий П.М. Изучение возможностей повышения многоплодия свиней с использованием зоотехнических и цитогенетических методов: авто-реф. дисс. канд. с.-х. наук: 06.02.01. / Кленовицкий Павел Михайлович. Дубровицы, - 1981. - 32 с.

36. Кленовицкий, П.М., Генные карты сельскохозяйственных животных / П.М. Кленовицкий, В.А. Багиров, Н.С. Марзанов, Н.А. Зиновьева / МО, Подольский р-н, п. Дубровицы, ВИЖ, 2003. с. 55

37. Костюченко М.В., ДНК-технологии для оценки генетического разнообразия пород лошадей отечественной селекции / М.В. Костюченко, И.Г. Удина, A.M. Зайцев, J1.A. Храброва, Г.Е. Сулимова //Сельскохозяйственная биология. -2001. №6. - С.29-32.

38. Красавцев Ю.Ф. Цитогенетический мониторинг в свиноводстве / Ю.Ф. Кпасавцев // Цитогенетика и биотехнология. J1.:, 1989. - С.74-76. - (Матер. 2-й Всесоюзн. конф. по цитогенетике с.-х. животных).

39. Красавцев Ю.Ф. Цитогенетический мониторинг в животноводстве и ветеринарии / Ю.Ф. Красавцев // Генетика и селекция. Киров, 1988. - С.99-104. -(Сб. научн. тр. НИИСХ Северо-Востока).

40. Красавцев Ю.Ф. Генетический мониторинг в свиноводстве и оценка сельскохозяйственных животных по комплексу признаков: автореф. дисс. докт. биол. наук: 06.02.01 / Красавцев Юрий Федорович. СП-Б., 2001.-44 с.

41. Кулаичев А.П. Методы и сходства комплексного анализа данных / Ку-лаичев А.П. 4-е изд. - М.: ФОРУМ: ИНФРА-М, 2006. - 512 с.

42. Куликов JI.B. математическое обеспечение эксперимента в животноводстве. / JI.B. Куликов, А.А. Никишов // М.: Изд. РУДН. 1994. - 131 с.

43. Кунаева Е.К., Повышение эффективности селекции свиней с использованием генов FSHB и ESR / Е.К. Кунаева, Г.П. Державина, Е.А. Гладырь, Е.П. Кудина, Н.А. Зиновьева//Зоотехния. №4, - 2007, - с. 16-19.

44. Лэнд, Р.Б. Генетика воспроизведения у овец / Р.В. Лэнд, Д.У. Робинсон; перевод с англ А.И. Гольцблата М.: Агропромиздат, 1987. - 455 е.: ил.

45. Малышев С.В., Молекулярные маркеры в генетическом картировании растений / С.В. Малышев, Н.А. Картель // Молекулярная Биология. -1997. -Т.31. -N.2. С.197-201.

46. Мартыненко, Н.А. Эмбриональная смертность сельскохозяйственных животных и меры ее предупреждения / Н.А. Мартыненко. Киев: Урожай, - 1971. -С. 125.

47. Меркурьева Е.К Генетика с основами биометрии / Е.К. Меркурьева, Г.Н. Шангин-Березовский. М.: Наука - 1983. - С.400

48. Михайлов Н.В. Конструирование и использование селекционных индексов в свиноводстве. / Н.В. Михайлов.- Персиановка. 1989. - 18с.

49. Михайлов Н.В. Метод построения селекционных индексов отбора. / Н.В. Михайлов // Интенсификация селекционного процесса в свиноводстве. Персиановка, 1989. - С.5-9. - (Межвузовский сборник научных трудов).

50. Моисейкина, Л.Г. Генетические основы современной селекции / Л.Г. Моисейкина, П.М. Кленовицкий. М.: Элиста, 2001,- 68с.

51. Никитин, В.Я. Ветеринарное акушерство и биотехника размножения / В .Я. Никитин, М.Г. Миролюбов. М.: Колос, 2000. - С.23-30.

52. Панков Ю. А., Структура и свойства гипофизарных гормонов. / Ю.А. Панков // Проблемы эндокринологии. 1974. - Т. 20. - № 3. - с. 98-102.

53. Петухов B.JT. Генетические основы селекции животных / Петухов B.JL, Эрнст JI.K., Гудилин И.И. и др. М.:Агропромиздат, 1989. С.448.

54. Плохинский Н.А. Биометрия. / Н.А. Плохинский. М.: Наука. - 1970. -С.366

55. Понд, У. Биология свиньи / У. Понд, К. Хаупт. М.: Колос, 1983. - С.20-25.

56. Розен В.Б. Основы эндокринологии / В.Б. Розен. М.: Высшая школа, -1980.-344 с.

57. Савенко Н.А. Племенная работа в животноводстве Московской области / Н.А. Савенко // М.: МСХиП МО, 2006. - 84 с.

58. Скопичев, В.Г. Физиология животных и этология / В.Г. Скопичев, Т.А Эйсымент и др. М.: Колос, 2003, С.368-369.

59. Смирнов, O.K. Цитогенетика в селекции животных / B.C. Смирнов, И.Л. Гольдман, И.К. Живалев и др. // Животноводство. 1984. - № 9. - С. 17-21.

60. Созинов, А.А. Молекулярно-генетические маркеры у сельскохозяйственных видов животных / А.А. Созинов, // Молекулярно-генетические маркеры животных. Киев: Аграрная наука, 1996. - С. 3-5 (Тезисы докладов 2-й международной конференции).

61. Сулимова Г.Е. Генотипирование локуса каппа-казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции /Т.Е. Сулимова, Г.О. Шай-хаев, Э.М. Берберов, А.Ю. Маркарян, Л.Г. Кандалова // Генетика. 1991. - Т.27. -N.12. -С.2053-20062.

62. Сулимова Г.Е. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов у сельскохозяйственных животных: методы изучения, перспективы использования / Г.Е. Сулимова // Успехи современной генетики. 1993. - Вып. 18. - С.3-35.

63. Сулимова, Г.Е. ДНК-полиморфизм гена BoLA-DBR3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу / Г.Е. Сулимова, И.Г. Удина, Г.О. Шайхаев, И.А. Захаров // Генетика. 1995. - Т.31, N.9. - С. 1294 - 1299.

64. Ткачук, В.А. Введение в молекулярную эндокринологию / В.А. Ткачук. -М.: Изд. МГУ, 1983 с.85-90.

65. Хейн Ван Дер Стинг. Генетика кому она нужна? / Хейн Ван Дер Стинг // Свиноводство. - 1998. - №3. - С.28-29.

66. Эндокринология и метаболизм / Под ред. Ф. Флига, Дж. Д. Бакстера и др. -М.: Медицина, 1985, С. 69-80.

67. Alfonso L., Estimates of genetic parameters for litter size at different parities in pigs // L. Alfonso, J.L. Noguera, D. Babot, J. Estany // Livest. Prod. Sci. 1997. - V. 47.-P. 149-156.

68. Andersson L., Genetic mapping of quantitative trait loci for growth and fatness in pigs / Andersson L., C. S. Haley, H. Ellegren, S.A. Knott et al. // Science. 1994. -V. 236. P. 1771-1774.

69. Andersson-Eklund, L., Mapping quantitative trait loci for carcass and meat quality traits in a wild boar x Large White intercross / L. Andersson-Eklund, L. Marklund, K. Lundstrom, C.S. Haley et al. // J. Anim. Sci. 1998. - V. 76. - P. 694700.

70. Avise J.C. Molecular markers, natural history and evolution. Chapman and HALL: An International Thomson Publishing Company, 1994. 122 p.

71. Archibald A.L. The PiGMaP consortium linkage map of the pig (Sus scrofa) / Archibald A.L., Haley J.F., Brown S. et al. // Mamm. Genome. 1995. - V. 6. - P. 157175.

72. McLaren, D.C. Beckmann J.S. Restriction fragments length polymorphisms in genetic improvement: Metodologies, mapping and costs. /J.S. Beckmann, M. Soller // Theoret. Appl. Genet. 1983. - V.67. - P.35.

73. Beckmann J.S. Restriction fragments length polymorphisms in genetic improvement of agricultural species. / J.S. Beckmann, M. Soller // Euphitica. 1986. -V.35. -N.l. -P.l 11.

74. Boddecker I., Assoziations- und Kopplungsstudien zur Analyse von Kandidatengenen. / Boddecker I. Dtsch. Med. Wschr. - 2000. - P. 810 - 815.

75. Bolet G., Selection sur la prolificat chez le pore / G. Bolet, L. Ollivier, P. Dando // Genet. Sel. Evol. 1989. - V. 21. - P.93-106.

76. Botstein D, White RL, Skolnick M, Davis RW. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms // Am J Hum Genet. 1980. - V.32 (З).-Р.314-31.

77. Cardenas H., Control of ovulation rate in swine / H. Cardenas, W.F. Pope // J. Animal Science . 2002. - V. 80. - P. 36-37.

78. Chen K.F. The genetic effect of estrogen receptor (ESR) on litter size traits in pig / Chen K.F., Huang L.S., Li N., Zhang Q. et al. // Acta genet, sinica. 2000. - V. 27.-№ 10.-P.853-857.

79. Cunningham PJ. Selection for ovulation rate in swine corelated response in litter size and weght / Cunningham P.J., England M.E., Yuong L.D., Zimmerman D.R. // J. Anim. Sci. 1979. - V. 48. - P.509-515.

80. Dekkers J.C.M. Commercial application of marker- and gene-assisted selection in livestock: Strategies and lessons / Dekkers J. С. M. // J. Anim. Sci. 2004. - Vol. 82(E. Suppl.).-P.313-328.

81. Drogemuller C., An Aval and a MspAlI polymorphism at the porcine oestrogen receptor (ESR) gene / Drogemuller C., Thiven U., Harlizius B. // Animal Genetics.-1997.-V. 28.-P. 58-71

82. Dvorak J., Detection and genotype frequency of two polimorphisms in estrogen receptor (ESR) locus is in pigs / Dvorak J., Svoboda M., Vrtkova I. // Acta Univ. Ag-ric. Silvic. 1998. - V. 46. - № 3. - P.21-25.

83. Dodgson J.B., DNA Marker Technology: A Revolution in Animal Genetics / Dodgson J.B., Cheng H.H., Okimoto R. // Poultry Science. 1997. - V. 76 - № 8. -P.l 108-1114.

84. Estany J., Estimation of genetic parameters for litter size in Danish Landrace and Yorkshire pigs. / J. Estany, D. Sorensen // Anim. Sci. 1995. - V. 60. - P. 315 -324.

85. Fujii J. Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignant hyperthermia / J. Fujii, K. Otsu, F. Zorzato. // Science. 1991. - V. 253.- P.448-451.

86. Georges M. Microsatellite mapping of the gene causing weaver disease in cattle will allow the study of an associated quantitative trait locus / Georges M., Dietz A.B., Mishra A. et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993. - V. 90. - P.1058-1062.

87. Georges M. DNA fingerprinting in domestic animals using for different minisatellite probes. / M. Georges, A.S. Lequarre, M. Castelli // Cytogenetic and Cell Genetic. 1988. -V. 47.- P. 127-131.

88. Gerbens, F., Characterization, chromosomal localization, and genetic variation of the porcine heart fatty acid-binding protein gene / F. Gerbens, G. Rettenberger, J.A. Lenstra, J.H. Veerkamp, M.F. Те Pas // Mamm. Genome. 1997. - V. 8. - P. 328-332.

89. Gerbens F., A dimorphic microsatellite in the porcine H-FABP gene at chromosome 6 / F. Gerbens, F.L. Harders, M. A. Groenen, J.H. Veerkamp, M.F. Те Pas // Anim Genet. 1998. -V. 29(5). - P. 408- 409.

90. Guethri H.D., Follicle-stimulating hormone and insulin-like groth factor I attenuate apoptosis in cultured porcine granukosa cells. / H.D. Guethri, W.M. Garred, B.S. Cooper // Biol. Reprod. 1998. - V. 58. - P. 390-396.

91. Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J., Owen J.L. // Theoret. Appl. Genet. 1994. V.89. P.998.

92. Haley C., Genetic components of growth and ultrasonic fat depth traits in Me-ishan and Large White pigs and their reciprocal crosses / C. Haley, E. Agaro, M .Ellis // An. Prod. 1992. -№ 266. - P. 105.

93. Hansel W., Control of ovarian function in domestic-animals. / W. Hansel, S.E. Echternk // Journal of animal science. 1983. - V. 57/ - P. 404-424

94. Hedge G.A, Clinical endocrine physiology. / G.A. Hedge, H.D. Colby, R.L. Goodman // W.B. Saunders company, 1987. Режим доступа: (http://obi.img.ras.ru/humbio/endocrinology/000d4ac5.htmN).

95. Hirai Т. The gene for the beta subunit of porcine FSH: absence of consensus oestrogen-responsive element and presence of retroposons / T. Hirai, H. Takikawa, Y. Kato // Journal of Molecular Endocrinology. 1990. -V. 5. - P. 147-158.

96. Irang, R., Genetic parameters for litter size of different parities in Duroc, Land-race, and Large White sows. / R. Irang,, J.A. Favero, B.W. Kennedy // Anim. Sci. -1994. V. 72. - P. 2237 - 2246.

97. Isler B.J., Investigations of the estrogen receptor gene and its association with reproductive tract traits in swine / В J. Isler, K.M. Irvin S.M. Neal // Research and Reviews. 1999. -№ 164. -P.49-51.

98. Isler B.J. The effect of the estrogen receptor gene of litter traits in swine / Isler B.J., Irvin K.M., Neal S.M. et al. // Research and Reviews. 1999. - № 171. - P.50-53.

99. Isler B.J. Examination of the relation ship between the estrogen receptor gene and reproductive tract components in swine / Isler B.J., Irvin K.M., Neal S.M. et al. // Research and Reviews. 1999. - № 177. - Р.54-59/

100. Jeffreys A.J., Hyppervariable DNA and genetic fingerprints. // A.J. Jeffreys, J. Hillel, N. Hartley // Anim. Genet. 1987. - V.l8. Suppl.l. - P. 141.

101. Kaminski S., Ruse A., Wojtasik K. Simultaneous identification of ryanodine receptor 1 (RYR1) and estrogen receptor (ESR) genotypes with the miltiplex PCR-PFLP method in Polish Large White and Polish Landrace pigs // J. Appl. Genet. 43(3), 2002,331-335

102. Kaminski S., Ruse A., Wojtasik K. Simultaneous identification of ryanodine receptor 1 (RYR1) and estrogen receptor (ESR) genotypes with the miltiplex PCR-PFLP method in Polish Large White and Polish Landrace pigs // J. Appl. Genet. 43(3), 2002,331-335

103. Kim J. J., M. F. Rothschild, J. Beever, S. Rodriguez-Saz and J. С. M. Dekkers. 2005. Joint analysis of two breed cross populations in pigs to improve detection and characterization of quantitative trait loci. J. Anim. Sci.83:1229-1240.

104. Koning, D.J., Detection of quantitative trait loci for backfat thickness and intramuscular fat content in pigs (Sus scrofa) / D.J. Koning, L.L.G. Janss, A.P. Rattink, P.A.M. van Oers et.al // Genetics. 1999. - V. 152. - P. 1679-1690.

105. Lander E.S. Mapping mendelian factors underlying quantitative traits using RFLP linkage maps / Lander, E.S., Botstein, D. // Genetics. 1989. - Vol. 121(1).-P. 185-199.

106. Landry D.S. Methods and amplications of restrictions fragments length polymorphism analysis to plant / D.S. Landry, R.W. Michelmore // Tailoring genes for crop improvement. N. Y.: Plenum press. 1987. - P. 25-44.

107. Lee Y.J. Untersuchungen iiber die Abhangigkeit der Zartheit von Rindermuskeln / Lee, Y. J. Schoen L. // Fleischwirtschaft Frankfurt/M. - 1986. -Vol. 66. - S. 600-603.

108. Legaut C. Amelioration genetiq des performances de reproduction du pore / C. Legaut // C.R. Acad Agr. Fr. 1988. - V. 74. - № 2. - P.9-21.

109. Legaut C. Breeding for largest litters in swine / Legaut C. // Proc.of Pork Ind. Con. Univ.of Illin. 1983. - P.26.

110. Leo C., The SRC farming of nuclear receptor coactivators / C. Leo, J. D. Chen // Gene. 2000. - T. 245. - P. 1-11.

111. Li Ning, DNA markers for pig litter size. / Li Ning, W.U. Changxin Zhao Yaofeng / United States Patent. September 18,2001.

112. Linville R. C., Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovulation rate in swine. / R. C.Linville, D. Pomp, R. K. Johnson, M. F. Rothschild // 1994. Режим доступа: (http://jas.fass.Org/cgi/reprint/79/l/60.pdf)

113. McLaren, D.C. Genetic influences of reproductive performance / D.C. McLaren, M Bovey // Vet Clin North Am Food Anim Pract. 1992. - V. 8. - # 3. -P. 435-459.

114. Mote B.E., SNP detection and linkage mapping of pig genes involved in growth / B.E. Mote, M. F. Rothschild // Animal Genetics/ 2006.- V. 37- P. 295-296

115. Mote B.E., Cracking the Genomic Piggy Bank: Identifying Secrets of the Pig Genome / B. Mote, M. F. Rothschild // Genome Dynamics. 2006. - № 2. - P. 86-96.

116. Olliver G. Les anomalise hereditarics dans l'espese parcine / G. Olliver // 11 ernes Jorn. Rech. pors. France. 1979. - P. 371-382.

117. Putnova L. Association study of osteopontin (SPP1) and estrogen receptor (ESR) genes with reproduction traits in pigs / Putnova L., Kolarikova O., Knoll A., Dvorak J. // Acta univ. agric. et silvic. Mendel. Brun. 2001. - V. 49. - № 4. - P.69-74.

118. Pierce J. G., Properties of pituitary thyroid-stimulating hormone in comparison with those of the gonadotropins / J. G. Pierce // Biochemical Society Transaction. -1974.-V. 2.- №5.-P. 216-218.

119. Rathje T.A., Evidence for quantitative trait loci affecting ovulation rate in pigs./ T.A. Rathje, G.A. Rohrer, R.K. Johnson // J. Anim. Sci. 1997 - V. 75, - P. 1486-1494

120. Robison O. W. The influince of maternal effects on the efficiency of selection. / O.W Robison // Science. 1981. -V. 8. - P. 121 -137

121. Roehe R., Estimation of genetic parameters for litter size in Canadian Yorkshire and Landrace swine with each parity of farrowing treated as a different trait. / R. Roehe, B.W. Kennedy // Anim. Sci. 1995. - V. 73. - P. 2959 - 2970.

122. Rohrer G.A. A mikrosatellite linkage map of the porcine genome / Rohrer G.A., Alexander L.J, Keel J.W. et al. // Genetics. 1994. - V. 136. - P.231-245.

123. Rothschild M.F.; Reproduction,growth and carcass performance of Chinese pigs and their crosses / M.F. Rothschild, L.L. Christian; C.Y. Hsieh // Iowa State Univ.Coop.Extens.Serv. 1991. -V. 619. -P. 23-26.

124. Rothschild M.F. A major gene for litter size in pigs / M.F. Rothschild, C. Ja-cobson, D. A. Vask // Proc. 5th World Congr. Genet. Appl. Livest. Prod. 1994. - V. 21. -P.225-228.

125. Rothschild M.F.; Discovery of a major gene for litter size in pigs / M.F. Rothschild, C. Jacobson; D.A. Vaske; C.K. Tuggle // Iowa State Univ.Coop.Extens.Serv. -1995.-N629.-P. 82-84.

126. Rothschild M.F., The estrogen receptor locus is associated with a major gene influencing litter size in pigs / M.F. Rothschild, C. Jakobson, D. Vaske, Chr. Tuggle, L. Wang, T. Short, G. Eckardt, et al.// Genetics. V. 93. - 1996. - P. 201-205.

127. Saiki RK. Enzymatic amplification of p-globulin genomic sequences and restriction site analisis for diagnosis of sickle cell anemia / Saiki RK., Scharf S.J., Faloona F. et al. // Science. -1985. -V. 230. -P.1350-1354.

128. Sairam M.R., The role of follicle-stimulating hormone in spermatogenesis: lessons from knockout animal models. / M.R. Sairam, H. .Krishnamurthy // Archives of medical research.- 2001. №32(6). -P.601-608.

129. Sites C.K., Development of a sensitive porcine granulosa cell bioassay for follicle-stimulating hormone (FSH). / C.K. Sites, E.H. Taylor, S J. Lewis, J.R. Brumsted // Mol Hum Reprod. 2002. - №8(4). - P. 311-317.

130. Smith C.L., Analyses of genome organization and rearrangements by pulsed field gradient gelelectrophoresies / C.L. Smith, P.E. Warburton, C. Cantor // Genetic engeneering N.Y.: Plenum press. 1986. - V. 8. - P. 45-70.

131. Smith C., The use of genetic plimorphismsin liveshtock improvement / C. Smith, S.P. Simpson // Journal of Animal Breeding Genetic 1986. - V.103. - P.205.

132. Soller M. Genetic mapping of the Bovine Genome Using Deoxyribonucleic Acid-Level Markes to Identify Loci Affecting Quantitative Traits of Economic Importance // J. Dairy Sci. 1990. - V.73. - P.2682-2646.

133. Steinheuer R., Schatzung von Varianzkomponenten und Kandidatengeneffekten fur die paternale und maternale Komponente von Fruchtbarkeitsmerkmalen beim Schwein / R. Steinheuer // Hannover, 2001. 267p.

134. Urban Т., A study of associations of the H-FABP genotypes with fat and meat production of pigs / T. Urban, R. Mikolasova, J. Kuciel, M. Ernst, I. Ingr // J. Appi. Genet., 2002. -V. 43(4). - P. 505-509.

135. Vincent, A.L. The prolactine gene receptor is associated with increased litter size in pigs / A.L. Vinsent, Т.Н. Short, G.R. Eckardt / Proc 6 World Congress Quantitative Genetics of Livestock. 1998. - T. 27. - P. 15-18

136. Wilke, V.L., SNP association analyses in candidate genes for rupture of the cranial cruciate ligament in the dog / V.L. Wilke, M.G. Conzemius, M.F. Rothschild // Animal Genetics. 2005

137. Young L.D., Genetic variation in testicular develepment and its relationship to female reprodive traits in swine / L.D. Young, K.A. Leymaster, D.D. Lunstra // Journal of Animal Science. 1986. -V. 63. -№ 1. - P. 17-26.

138. Zhao Y.} Lin F., Chen Y., Wuch X. Preliminary research on RFLP's of the FSH beta subunit gene // Acta Vet. Zootech. Sinica, 1998,29,23-26.