Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья

Артюков, Александр Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья
ВАК РФ 03.02.14, Биологические ресурсы

Автореферат диссертации по теме "Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья"

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки •океанский институт биоорганической химии им. Г.Б.Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук

На правах рукописи

АРТЮКОВ АЛЕКСАНДР АЛЕКСЕЕВИЧ

Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья „ ^

03.02.14- биологические ресурсы

Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук

Владивосток - 2012

005июэ

005046914

Официальные оппоненты:

Зориков Петр Семенович, доктор биологических наук, npocf: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Горнота станция им. B.JL Комарова Дальневосточного отделения Российской ака наук, директор

Пивненко Татьяна Николаевна, доктор биологически профессор, Федеральное государственное унитарное предприятие Тихоо научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, заведующая сектором б

Крылов Александр Васильевич, доктор биологических

профессор, Амурский филиал Федерального государственного бюдао учреждения науки Ботанический сад-институт Дальневосточного отд< . Российской академии наук, главный научный сотрудник

Ведущая Организация; Федеральное государственное образовате учреждение высшего профессионального образования "Приме государственная сельскохозяйственная академия"

Защита состоится «28» сентября 2012 г. в 10.30 часов на засе, диссертационного совета Д. 005. 005. 02 при Федеральном государсш бюджетном учреждении науки Тихоокеанский институт биоорганической > им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (TI ДВО РАН) по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку ТИБОХ ДВО РАН.

Факс: (4232)314050, e-mail: komand@piboc.dvo.ru

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в филиале Центр

научной библиотеки ДВО РАН (г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку 159 ТИБ< РАН)

Диссертация в виде научного доклада разослана 2012 г

Ученый секретарь диссертационного

совета Д 005.005.02

кандидат химических наук, доцент

Командрова H.A.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Биотехнология является одной из ведущих )аслей науки и промышленности в большинстве экономически развитых стран ра. В дальнейшем ее роль, в связи с сокращением традиционных источников алогического сырья на планете, будет только возрастать. Основой этехнологии является использование современных наукоемких технологий в эизводстве лекарственных, пищевых, кормовых и других ценных веществ, эбходимых для обеспечения нормальной жизнедеятельности человека, а также в фанении биоразнообразия и воспроизводстве природного и 1ьскохозяйственного сырья. По оценкам Продовольственной и 1Ьскохозяйственной организации Объединенных Наций (РАО), 25-30 миллионов ш совокупного мирового вылова гидробионтов теряются в результате правильного обращения с сырьем, и примерно столько же теряется в качестве кодов их промышленной переработки. Эти потери представляют собой очень пьшой сырьевой резерв, который не используется должным образом. В тоже ;мя морские гидробионты являются уникальным возобновляемым сырьем для оизводства различных по химическому строению и биологической активности иродных соединений. При обработке промысловых видов морских гидробионтов отходы составляют 60% от массы улова. Основные исторически сложившиеся направления исполь-зания таких отходов - производство кормовой муки и жира. В настоящее время у кого не вызывает сомнения тот факт, что отходы промышленной переработки рских организмов, в особенности беспозвоночных (моллюсков, иглокожих, (сообразных) и водорослей, представляют ценное сырье для получения биологи-:ки активных веществ (БАВ) различной химической природы. Эти биологически гивные вещества, обладающие противомикробным, противовирусным и отивораковым действием, могут эффективно использоваться для профилактики и чения различных заболеваний иммунной, сердечно-сосудистой и костно-1шечной систем, а также для коррекции липидного и углеводного обмена. В эанах, расположенных на побережье Мирового океана, среди средств народной дицины значительную роль играют препараты морского происхождения. В стоящее время особую актуальность приобретают научные исследования, правленные на поиск и отбор новых БАВ, проявляющих высокую эффективность отив "заболеваний века" - иммунодефицита, лучевого поражения и злокачест-нных новообразований. Состояние здоровья населения России ухудшается в язи с неблагоприятной экологической обстановкой и недоброкачественными одуктами питания. Только 15% городского населения проживает на территориях уровнем загрязнения атмосферного воздуха в пределах гигиенических рмативов. Улучшение экологической обстановки в регионах невозможно без зработки новой методологии оценки экологических факторов и внедрения временных наукоемких технологий утилизации, а также переработки отходов

производств. Для сохранения здоровья населения необходимо создавать I функциональные продукты питания, снижающие воздействие неблагопрш факторов на здоровье населения, а в отдельных случаях устраняющие его.

Однако производство и широкое применение БАВ из морских орган! ограничивается в настоящее время их высокой себестоимостью. Одним из 1 снижения стоимости БАВ является создание комплексных малоотхо технологий переработки сырья морского происхождения, включая произво, пищевой, кормовой, технической продукции, биологически активных до Г (БАД), фармакологических субстанций и лекарственных препаратов.

Цель диссертационной работы:

расширить сырьевую базу производства БАВ и лекарственных субстанц: счет введения новых промысловых видов морских гидробионтов И ИСПОЛЬЗО! отходов рыбоперерабатывающей промышленности;

разработать безотходные комплексные технологии получения БАВ океанического сырья для применения в фармацевтической, косметическ! пищевой промышленности;

создать на их основе лекарственные и парафармацевтические препара разработать рекомендации по их применению.

Задачи исследования: оценить ресурсный потенциал возобновляе океанического сырья, отходов рыбоперерабатывающей промышленност марикультуры как источников БАВ; определить содержание БАВ в сыр разработать лабораторные методы их выделения; провести испытания мед биологических свойств БАВ и продуктов на их основе; разработать технол получения БАВ, обладающих перспективными медико-биологичеа свойствами; создать рецептуры новых лекарственных и парафармацевтиче препаратов; разработать рекомендации по использованию биологически акти] добавок и парафармацевтических препаратов; организовать произвол лекарственных субстанций на опытном производстве Тихоокеанского инстк биоорганической химии им. Г.Б. Елякова (ТИБОХ) ДВО РАН и выпустить опьг партии; адаптировать разработанные технологии к конкретным производствам.

Научная новизна. Работа объединяет многолетние исследования, связанн поиском новых БАВ в океаническом сырье, его ресурсоведческой оцек выполнением всего цикла работ по созданию технологий от лабораторных мет< до опытного и промышленного производства. Разработаны новые технол< получения биологически активных соединений из ряда непромысловых В] морских гидробионтов, а также отходов переработки марикультурного сырья, и крабов. Впервые исследованы физико-химические и фармакологические свой полученных соединений: зостерина, уронофукана, полигидроксинафтохино каротиноидов, розмариновой кислоты, сульфатированных флавоноидов, лекти гемоцианина, оксигемоглобина, коллагенового белка апостат протеолитических ферментов, а также продуктов биокаталитической конвер

ков - пептидов морского коллагена. Впервые изучен водорастворимый щставитель витаминов группы Р - 7,3'-дисульфат лютеолина. Выполненные ледования позволяют создать производство БАВ для фармацевтической, девой и косметической промышленности. Новизна принятых в работе научных и нических решений подтверждена 6 международными патентами (USA, ЕР и )) и 54 патентами Российской Федерации.

Практическая значимость работы. В результате скрининга выявлены >ресурсы морского происхождения, которые содержат БАВ, обладающие неолитической и коллагенолитической активностью, противовирусным, икоагулянтным и противовоспалительным действием. Определены запасы 1более перспективных источников БАВ, разработаны методы их добычи, шения и транспортировки. Исследован состав отходов рыбоперерабатывающих зизводств и разработаны способы извлечения из них биологически активных ¡станций. Созданы высокоэффективные технологии получения биологически ивных веществ из морских гидробионтов и промышленных отходов боперерабатывающих предприятий. Разработаны пилотные установки для пуска опытно-промышленных партий морских полисахаридов, белков и рментов, низкомолекулярных соединений, в том числе пептидов. Разработаны атно-промышленные регламенты получения лекарственных субстанций инохрома А и коллагеназы камчатского краба) для выпуска лекарственных гпаратов серии "Гистохром" и ферментного препарата "Коллагеназа КК". дготовлена и утверждена нормативно-техническая документация на эизводство лекарственных средств и биологически активных добавок. На говании результатов, полученных ТИБОХ ДВО РАН, Федеральным управлением цико-биологических и экстремальных проблем при Министерстве )авоохранения России утверждены "Методические указания по применению ;терина в лечебно-профилактическом питании на свинцово-цинковых эизводствах и предприятиях поливалентных металлов" (Москва, 1995г.). В 2003 iy постановлением Министерства труда РФ разрешено использовать напитки дшы VITA, содержащие пектин морской травы Zostera marina, как лечебно-офилактические средства охраны труда. Технология получения пектина ютерина) была дважды реализована по неисключительной лицензии на бокомбинатах Приморского края. Технология получения фукоидана из minaría japónica реализована по неисключительной лицензии на ООО иополимер". В ТИБОХ ДВО РАН выпускаются в настоящее время биологически гивные добавки к пище: "Гербамарин", "Экстракт морского ежа", "Зостерин", [арихит" и "Хитохром С". Бальзамы серии "Гербамарин" получили серебряную даль на Международной выставке изобретений в Брюсселе "Brussels Eureka-99" к высокотехнологичная наукоемкая продукция.

Основные положения, выносимые на защиту:

"иорссурсы морского происхождения - богатый источник БАВ.

2. Биологически активные субстанции, полученные из морских гидр< представляют собой уникальные полисахариды, белки и витамино] соединения, отсутствующие в других видах лекарственного сырья, котор являться основой нового направления - морской фармакологии.

3. Разработанные комплексные технологии получения БАВ из отходов промь переработки океанического сырья позволяют значительно расширить сырье и рационально использовать биологические ресурсы.

4. Особенности механизма действия пигментов морских ежей выделяют их известных биоантиоксидантов и открывают перспективу для создания на I лекарственных препаратов нового поколения - корректоров метаболизма.

5. Пектин зостерин из морских трав семейства гс^егасеае обладает широким биологической активности, проявляя антидотное, гипохолестеринел антибактериальное, противоязвенное и антиаллергическое действие.

6. Полифенольные соединения морских трав семейства гс^егасеае (розм кислота, 7,3'-дисульфат лютеолина, лютеолин, диосметин и хризоэринол, ] кислота и ее этиловый эфир) представляют собой уникальный набо лекарственных субстанций противовоспалительного, иммуномодулир канцерпревентивного и антивирусного действия.

7. Разработанная универсальная технология комплексной переработки морско Райпа ресНт/ега позволяет получать биологически активные пептиды кол обогащенные астаксантином каротиноидные препараты, проя] иммуномодулирующую, противовоспалительную и антиоксидантную актив!

8. Апостатин, продукт биотрансформации коллагеновых белков голотурии Ар о ]аротст, обладающий антикоагулянтной и противоопухолевой активш также безопасный при длительном применении, перспективен для создан* лекарственных препаратов и профилактических биологически активных ] добавок.

Личный вклад автора заключается в теоретическом обосновании пробл выборе направления исследования и непосредственном участии в выполн экспериментальных и методологических исследований, а также создан! оформлении нормативно-технической документации, внедрении технолог] производство и выпуске опытно-промышленных партий продукции. Аг результатов медико-биологических исследований БАД, их теоретиче обоснование, разработка концептуальных представлений об адаптацио) действии полигидроксилированных нафтохинонов как метаболиче корректоров осуществлены лично автором.

Апробация работы. Исследования проводились в соответствии с темат! ким планом НИР Тихоокеанского института биоорганической химии им. Елякова ДВО РАН в период с 1987 по 2011 гг., в ходе выполнения хоздоговорн инновационных работ в рамках государственных программ "Мировой ок< "Новейшие методы биоинженерии. 1992-2005 гг.", "Соя", "Дети России", "Ры

государственных контрактов Министерства образования и науки РФ № 522.11.2013 и № 16.512.11.2271.

Разделы работы доложены и получили положительную оценку на научных румах: V Всесоюзной конференции "Методы получения и анализа эхимических препаратов" (Юрмала, 1987); Всесоюзном семинаре "Проблемы эизводства продукции из красных и бурых водорослей" (Владивосток, 1987); есоюзном совещании "Биологически активные вещества при комплексной шизации гидробионтов" (Владивосток, 1988); на X, XI и XIII Международных [ференциях по лектинам (Prague, 1988; Tartu, 1989, Berlin, 1991); Всесоюзной научно-зктической конференции "Иерсиниозы (микробиология, эпидемиология, яника, патогенез, лабораторная диагностика)" (Владивосток, 1989); на гиональной конференции Сибири и Дальнего Востока "Перспективы развития лотоннажной химии" (Красноярск, 1989); на VI, IX и XI Международных симпозиумах по 1СКИМ природным продуктам (Dakar, 1989; Townsville, 1998; Sorrento, 2004); на есоюзной конференции "Методы получения, анализа и применения ферментов" )рмала, 1990); на Всесоюзной конференции по химии пищевых веществ, зйствам и использованию биополимеров в пищевых продуктах (Могилев, 1990); III Всесоюзном совещании "Культивирование клеток животных и человека" ущино, 1990); на Рабочем совещании "Иммуномодуляторы природного оисхождения" (Владивосток, 1990); на Всесоюзном совещании "Биологически гивные вещества гидробионтов - новые лекарственные, лечебно-офилактактические и технические препараты" (Владивосток, 1991); на есоюзной конференции "Рациональное использование биоресурсов Тихого гана" (Владивосток, 1991);на 8 Международной конференции по применению мических веществ в лечении рака (Kyoto, 1993); на Межгосударственной научной нференции "Комплексная переработка пищевого сырья и основные направления гширения ассортимента продуктов питания" (Владивосток, 1993); на гиональной Ассамблее "Здоровье населения Дальнего Востока" (Владивосток; 96); на Научной конференции ТИБОХ "Исследования в области физико-мической биологии и биотехнологии" (Владивосток, 1998); на III льневосточной региональной конференции с всероссийским участием "Новые учные технологии в Дальневосточном регионе " (Благовещенск, 1999); на 5-ой гждународной конференции по морской биотехнологии (Townsville, 2000); на учной конференции "Биоактивные вещества из морских макро- и жроорганизмов и наземных растений Дальнего Востока" (Владивосток, 2001); на эм Международном конгрессе "Биотехнология - состояние и перспективы звития" (Москва, 2002); на III Съезде Биохимического общества (Санкт-:тербург, 2002); на VII и VIII Международных съездах "Актуальные проблемы здания новых лекарственных препаратов природного происхождения " (Санкт-:тербург-Пушкин, 2003; Финляндия, Миккели, 2004); на 1-й и 2-й Региональных учных конференциях "Исследования в области физико-химической биологии и ^технологии" (Владивосток, 2004; 2006); на V Дальневосточном региональном

конгрессе с международным участием "Человек и лекарство" (Владивосток, 2( XVI Российском симпозиуме по растровой электронной микроског аналитическим методам исследования твердых тел РЭМ'2009 (Черног 2009); на Научно-практической конференции "Биологически активные ве] фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения" Украина, 2009); на Научном форуме "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге (Санкт-Петербург, 2009); на Конференции с международным участием "Акту проблемы химии природных соединений" (Ташкент, 2010); на Межрегион форуме "Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисципли проблемы" (Санкт-Петербург, 2010); на международной научно-техни конференции "Инновационные технологии переработки продовольственного (Владивосток, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 178 научных работ, которых 1 монография, 41 статья (в том числе 28 в журналах, рекомендованны РФ), 60 российских и международных патентов и 1 положительное решение о ] патента РФ.

Благодарности. Автор выражает свою искреннюю признательность за пок работе, консультации и проведение медико-биологических испытаний сотру; ТИБОХ ДВО РАН, а также коллегам из других институтов (Тихоокеанский н исследовательский рыбохозяйственный центр, Научно-исследовательский ин эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, Владивостокский государств медицинский университет). С глубокой благодарностью автор вспоминает п директора ТИБОХ ДВО РАН академика Г.Б. Елякова, создавшего лабора биотехнологии и постоянно поддерживавшего это направление. О благодарность автор выражает д.х.н., профессору Л.А. Еляковой за всесторс поддержку исследований и д.х.н, профессору Козловской Э.П. за много сотрудничество, консультации и неоценимую помощь.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Сбор и заготовку океанического сырья осуществляли во время командире на предприятия рыбодобывающей и перерабатывающей промышленн< Дальнего Востока (Сахалин, Камчатка, Приморье), на Морской экспериментал! станции ТИБОХ ДВО РАН, расположенной в бухте Троицы залива По Японского моря (Хасанский район Приморского края).

При исследовании противоопухолевой активности БАВ были использов следующие штаммы опухолей мышей: лимфоидная лейкемия (1.1210), эпидерм ная карцинома легкого Льюиса (LLC), солидные и асцитные варианты саркомь и карциномы Эрлиха (тетраплоидный штамм). Все перечисленные штаммы ш чены из Российского Онкологического Научного Центра им. H.H. Блохина PAMI Москва). Клетки карциномы Эрлиха, адаптированные для роста in vitro, -Института по изысканию новых антибиотиков РАМН (г. Москва). Экспертам

оводились на белых аллогенных мышах, линейных мышах C57BL/6, DBA/2, JA/C3H, BALB/C, CD-I и мышах-гибридах BDF, (C57BL х DBA/2).

Индивидуальные биологически активные соединения из морских гидробионтов [ли получены непосредственно при разработке лабораторных методик и следованы физико-химическими методами (ядерно-магнитный резонанс, масс-ектрометрия, высокоэффективная жидкостная хроматография - ВЭЖХ, ИК- и D-спектроскопия и методы кругового дихроизма) в ТИБОХ ДВО РАН.

Клинические испытания биологически активных веществ и препаратов на их нове проводили с использованием современного арсенала методов охимического и клинического анализа (определение холестерина, липидов, токинов, глюкозы, инсулина, С-пептида, печеночных проб), имеющихся в едобъединении ДВО РАН (г. Владивосток) и Приморском кардиологическом нтре.

Противовирусную активность БАВ в отношении вирусов иммунодефицита ловека (ВИЧ) и клещевого энцефалита (ВКЭ) определяли на моделях in vitro ультуры клеток) и in vivo (лабораторные животные). Эксперименты с ВИЧ юводили в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и шробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (г. Москва), а с ВКЭ - НИИ эпидемиологии и шробиологии СО РАМН (г. Владивосток).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Ракообразные: разработка технологии комплексной переработки крабов 1.1. Комплекс протеолитических ферментов из отходов переработки промысловых видов крабов.

Многолетние исследования ферментов морских организмов, проводимые в -1БОХ ДВО РАН, показали, что наиболее перспективными источниками щучения протеолитических ферментов в промышленных масштабах являются юмысловые виды крабов. В настоящее время промысловое значение на Дальнем зстоке имеют три вида крабов Paralithodes camtschaticus (камчатский), P. platypus иний) и P. brevis (колючий). Общий объем вылова крабов составляет более 100 1сяч тонн в год. Согласно технологическим нормам для данного вида сырья ходы производства составляют 26% от сырой массы. Основными отходами ляются панцирь (10-15%) и внутренности краба (3-5%), которые в измельченном ще выбрасываются в море, что значительно ухудшает экологическую ситуацию в адиционных районах промысла. Внутренности краба содержат 70-80% воды, 10-'<% белка, 3-10% жира. Панцирь краба в зависимости от возраста имеет следую-ий состав: хитин - 5-18%, вода - 60-85%, липиды - 0.2-0.8%, органический азот -5-2.4%, минеральные соли - 9-12%. Таким образом, в море ежегодно сбрасы-ется 10-15 тысяч тонн органических соединений, в том числе 15 тысяч тонн шка. Следует отметить, что в течение последних десятилетий постоянно ощу-ается дефицит полноценного белкового питания для основной массы населения

России. В связи с вышесказанным ясно, что разработка технологии комплеи переработки отходов крабоперерабатывающей промышленности и ее внедре! производство позволяет решить две проблемы: во-первых, получить деш источник промышленных ферментов, полноценного белка и продуктов гидролиза, минеральных добавок и сорбентов и, во-вторых, улуч: экологическую ситуацию в районах промысла.

Рис. I. Схема комплексной переработки промысловых видов крабов ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты; АДГ - 1-О-алкил-диацилглицери'

« удалось разработать достаточно простую и весьма эффективную схему деления ряда индивидуальных ферментов (эластазы, коллагеназы, |боксипептидаз А и Б) и комплекса протеолитических ферментов, названного ш "Коллагеназа" (рис. 1). Комплекс пептид-гидролаз "Коллагеназа" (ТУ 9281->-02698170-93) обладает широким спектром действия и превосходит по удельной ивности такие известные коммерческие препараты(как "Проназа", "Протелин", ;ррилитин", "Субтилизин", "Протосубтилин" и "Химопсин". Комплекс устойчив диапазоне pH 4.8-12.0, стабилен в течение 4-х лет и обладает способностью фолизовать нативные коллаген и эластин (Сахаров, Литвин, Артюков и др., 58, 1992; Sakharov, Dzunkovskaya, Artyukov, Zakharova, 1993; Sakharov, Litvin, yukov, 1994). В настоящее время комплекс пептид-гидролаз "Коллагеназа" пускается опытным производством ТИБОХ ДВО РАН.

Широкий спектр действия, высокая активность и стабильность комплекса тгид-гидролаз определили такие области его использования как медицина, геринария, косметическая, пищевая и кожевенная промышленность, эизводство моющих средств.

здицина. Лекарственный препарат "Коллагеназа КК® 250 ЕД", гистрационный номер 96/252/2, 96/252/7, 96/252/1. Приказ МЗ РФ № 252 от ,06.1996г. Результаты проведенных доклинических и клинических исследований дико-биологических свойств комплекса пептид-гидролаз показали рспективность создания на его основе нового лекарственного препарата, падающего рядом преимуществ по сравнению с ферментными препаратами [вотного и микробиального происхождения. Разработанный нами лекарственный епарат "Коллагеназа КК 250 ЕД", представляющий собой высокоочищенный мплекс коллагенолитических ферментов, получаемый из гепатопанкреаса краба мчатского P. camtschaticus, был зарегистрирован ТИБОХ ДВО РАН под торговой ркой "Коллагеназа КК". Сравнение активности известных коммерческих дицинских ферментов: "Химопсина", "Террилитина", "Карипазима", "Протеазы ', "Лизоамидазы" и "Коллагеназы КК" показало, что последняя обладает более [сокой некролитической и фибринолитической активностью и эффективнее ищает гнойные раны у экспериментальных животных. Министерство равоохранения РФ рекомендовало использовать препарат для ферментативного ищения ран различной этиологии, любой локализации и на любой стадии невого процесса, включая лечение длительно незаживающих ран при наличии

их поверхности влажного некроза или избытка фибрина, препятствующего живлению.

Выпущена опытно-промышленная партия (100000 ампул) "Колагеназы КК" на Э "Биомед" им И.И.Сеченова в виде лиофильного порошка в ампулах по 250 ед. шнические испытания проводились в Московской медицинской академии им. М. Сеченова, Институте хирургии им. A.B. Вишневского РАМН и МНТК 4икрохирургия глаза" (г. Москва). Препарат использовали при лечении

абсцессов, флегмон, гнойных бурситов, хронического остеомиелита (сви. форма), парапроктита, карбункулов, подкожных панарициев и рож] воспалений (буллезно-некротическая форма). Кроме того, в отделении экстр, хирургии Городской детской клинической больницы (г. Владивосток) "Коллаг КК" использовали для лечения детей с разлитым острым перитонитом. Совмес Военно-медицинской академией (г. Санкт-петербург) разработаны способы ле склеродермии и рубцов с использованием "Коллагеназы КК".

На основе "Коллагеназы КК" и синтетического сорбента "Гелевин" создано ранозаживляющее средство "Коллавин". Сравнение сорбци литического эффекта "Коллавина" и известных раннозаживляющих ср ("Гелевина", "Лизосорба", "Теральгима", "Сипралина", "Дальцекс-Трипс "Профезима") показало, что при наличии в ранах большого колич некротических тканей наиболее эффективным средством является "Колла Выпуск "Коллавина" осуществлен на базе опытного производства С Петербургской государственной химико-фармацевтической академии.

Клинические испытания в Главном военном клиническом госпитале Н.Н.Бурденко (одна тысяча ампул препарата была передана в МЧС) позво также рекомендовать "Коллагеназу КК" для использования в воепно-по; хирургии и при формировании аптечек для Гражданской обороны и МЧС.

Ветеринария. На основе ферментного комплекса "Коллагеназа" созданы маз] лечения некробактериозов и других гнойно-некротических процессов у живот "Некролаза" (РУ № ООООбЭ-ОП, ТУ 10.07.093-92); "Колхит" (РУ № 000096-0г 9337-008-02698170-93); "Неогелаза" (РУ № 000095-0п, ТУ 9337-006-0269817С "Хитокол" (РУ № 000097, ТУ 9937-007-02698170-93). Препараты успешно пр< расширенные клинические испытания в животноводческих хозяйствах Москов области и Приморского края и были рекомендованы Главным ветеринар управлением к использованию на территории Российской Федерации.

Пищевая промышленность. Из результатов многолетних исследований изве< что по количеству незаменимых аминокислот белки из тканей мор беспозвоночных не уступают, а часто и превосходят традиционные источ] белкового питания. Технологический процесс производства легко усвояе белковых гидролизатов из отходов перерабатывающей промышленност использованием протеолитического комплекса "Коллагеназа" включает следую стадии: измельчение сырья, ферментолиз, фильтрация или центрифугировг упаривание, ультрафильтрация, сушка. Изучение физико-химических иммунохимических свойств гидролизатов белков, полученных с использова! "Коллагеназы", показало, что они представлены средними и неболыг пептидами, аминокислотами и практически не содержат антигенных стру: исходных белков (белков сои, кальмара, минтая, казеина).

По предложенной нами технологии выпускаются гидролизаты белков: краба У 9267-020-02698170-94); кальмара (ТУ 9267-025-02698170-94); рыбной муки У 9267-021-02698170-94); молок (ТУ 9267-012-02698170-94); мидии (ТУ 92672-02698170-94); сои (ТУ 9267-026-02698170-94); казеина (ТУ 9267-023-02698170); минтая (ТУ 9267-022-02698170-94) и желатина (ТУ 9267-024-02698170-94). їздана новая технология получения желатина с использованием "Коллагеназы", торая прошла успешную апробацию на Московском желатиновом заводе, ¡птиды желатина нашли широкое применение в питательных комплексах для ортсменов. На все виды гидролизатов утверждена требуемая нормативно-хническая документация. В малотоннажном объеме гидролизаты выпускаются ытным производством ТИБОХ ДВО РАН и используются при выпуске ологически активных добавок (БАД) "Гербамарин" на ОАО "Уссурийский льзам" (г. Уссурийск) с 1995 года. Пищевые гидролизаты всех вышеуказанных дов предназначены для использования в качестве белково-аминокислотной бавки при производстве продуктов питания и БАД. Гидролизаты предназначены кже для использования в биотехнологии и в медицинской промышленности омпоненты питательных сред и парентерального питания).

Следует отметить, что использование "Коллагеназы" в пищевой юмышленности не ограничивается только получением легко усвояемых белковых юдуктов. Комплекс нашел широкое применение в пивоваренной юмышленности для повышения качества солода, а также для осветления и абилизации пива. Выпуск новых сортов пива с использованием "Коллагеназы" У9281 -009-02698170-93) осуществлялся на Экспериментальном заводе напитков

Хамовниках Всероссийского НИИ пивоваренной, безалкогольной и ;нодельческой промышленности Российской академии сельскохозяйственных ,ук (1993-1997 гг.).

эжевенная промышленность. Разработана технология получения одежных кож кож для верха обуви из сырья крупного рогатого скота, а также особо эластичных їж из свиного сырья с использованием ферментного комплекса "Коллагеназа" (ТУ 181-009-026998170-93). Технология позволяет сократить общую юдолжительность процесса, улучшить качество кож и экологическую ситуацию і кожевенных заводах за счет отказа от введения поверхностно-активных веществ сульфида натрия на стадии "отмока" и двукратное сокращение количества льфида натрия на стадии "золение". Эффективность технологии была оценена на Московском кожевенно-обувном комбинате" и кожевенном заводе им. Э. ;льмана (АО "Роскон", г. Москва). По физико-химическим свойствам кожи, іработанньїе с использованием "Коллагеназы", соответствуют нормам ГОСТ 939-

осметика. В НПО "Косметология" МЗ РФ (г. Москва) было проведено :спериментальное изучение безопасности, фармакологических свойств и шхимических механизмо в действия "Коллагеназы", а также её влияния на

морфологическую структуру кожи. На основании проведенных исследов рекомендовано использование комплекса ферментов "Коллагеназа" (ТУ 9281 02698170-93) в концентрации 0,75% для разработки косметических сре предназначенных для ухода за увядающей кожей лица. В ТИБОХ ДВО разработана рецептура крема "Молодость".

Комплекс "Коллагеназа" используется для получения пептидов коллагена 9267-024-02698170-94) и растительных белков (ТУ 9267-026-02698170-94; ТУ < 014-02698170-94), широко применяемых в косметических средствах.

Моющие средства. Изучение физико-химических свойств и спектра дейс ферментного комплекса "Коллагеназа" (ТУ 9281-009-02698170-93) показало, » его состав входят нейтральные и щелочные протеиназы, амилазы, липазы глюканазы. Комплекс устойчив при щелочных значениях рН (до 13,0). свойства позволяют использовать "Коллагеназу" в качестве биологической доб в моющих средствах (порошки, пасты) для удаления различных загрязнений.

Присутствие в комплексе "Коллагеназа" высоко активных коллагеназ и элг позволило создать на его основе шампунь для удаления перхоти. Выпуск шам "Шахноз" осуществлен совместным Узбекско-Корейским предприятием Ташкент).

1.2 Хитин и хитозан

Среди обилия известных полисахаридов растительного, микробног. животного происхождения хитин и хитозан занимают особое место, так ка: молекулы построены не из глюкозы, как у большинства углеводов (напри целлюлоза), а из Ы-ацетил-О-глюкозамина (хитин) или Б-глюкозамина (хито: Эти линейные полисахариды представляют собой углеводные цепи, в коте мономеры 2-ацетамид-2-дезокси-0-глюкозы превращаются в полимер за образования Р-1,4-глюкозидных связей. Обычно полностью дезацетилирован хитин (хитозан) не встречается в природе, а получается химическим гидрол! амидных связей в хитине (дезацетилирование).

Основным промышленным сырьем для получения хитина являл представители ракообразных (Сп^асеа), в том числе морского происхожде: панцири крабов, креветок, омаров и криль. При создании технологии комплекс переработки отходов крабового промысла нами были разработаны пилот установки для выпуска опытно-промышленных партий хитина и хитозан использованием кислотно-щелочного способа. Предложенные технологичес приемы и аппаратурно оформленные линии были внедрены на крабодобывающ] перерабатывающих предприятиях Дальнего Востока (Приморье: рыбокомбинат Попова, пос. Зарубино, рыбоколхоз "Восток"; Камчатка: рыбколхоз им В.И.Ленина), а также на химфармзаводе (г. Партизанск). Выпускаемый хитозан I реализован как на территории России, так и за рубежом. Его успешно использов научно-исследовательские институты для разработки технологий очистки вод почвы, а также при ликвидации последствий загрязнения окружающей ср<

ционуклидами. Одним из элементов разработанной нами технологии является ерация предварительного извлечения белка из панциря промысловых крабов и еветок в виде белковых гидролизатов, пептиды которых содержали значительное личество незаменимых аминокислот, таких как лизин и триптофан (Балаганский, )тюков, 1991; Артюков и др., 1993; Козловская, Артюков и др., 1997). ¡рментолиз белков панциря и других белоксодержащих остатков осуществляли :рментным комплексом "Коллагеназа", также получаемым из отходов реработки крабов.

2. Иглокожие: разработка комплексной технологии переработки морских

ежей, звезд и голотурий

I Морские ежи: разработка технологии получения эхинохрома А и создание на

0 основе лекарственных и профилактических препаратов

Морские ежи (ЕсЫпо1(1еа) - представители большинства биоценозов льневосточных морей, могут быть использованы не только как промысловые ъекты в пищевой промышленности, но и как богатый источник уникальных юлогически активных веществ. К таким веществам относятся, в первую очередь, щигидроксинафтохиноновые пигменты панцирей и игл - спинохромы. ;есторонние исследования выявили ценную особенность спинохромов -южественность механизмов, по которым они способны осуществлять свое ггиокислительное действие: перехват свободных радикалов, хелатирование гталлов - катализаторов пероксидации, регуляция активности некоторых фментов, в том числе и липоксигеназ, во многом определяющих окислительный атус клеток организмов. В отличие от эндогенных антиоксидантов, таких как [тамин Е и убихинон, нафтохиноны способны нейтрализовать действие основных шциаторов неферментативного процесса окисления липидов мембран - катионов злеза, накапливающихся в зоне ишемического повреждения ткани, еречисленные особенности механизма действия выделяют пигменты морских кей из ряда известных биоантиоксидантов и открывают перспективу для создания

1 их основе лекарственных препаратов нового поколения с широким спектром :йствия.

В 1985 году творческий коллектив, созданный на базе лабораторий ТИБОХ ВО РАН и Всероссийского кардиологического научного центра (ВКНЦ, г. :осква), приступил к созданию новых кардиологических средств на основе одного 1 пигментов морских ежей - эхинохрома А (ЭХА). Разработка технологии шучения этого соединения и организация его опытно-промышленного юизводства были выполнены в лаборатории биотехнологии ТИБОХ ДВО РАН. хема технологических процессов комплексной переработки различных эедставителей семейства иглокожих, разработанных нами и реализованных на эоизводстве, приведена на рис 2. Согласно предложенной схеме рациональной феработки представителей семейства иглокожих в настоящее время производятся ХА, комплекс каротиноидов и пептиды коллагена.

Препараты серии ТистохромВ"

Рис. 2. Схема комплексной переработки различных представителей семейства иглокожи:

ЭХА, природный пигмент нафтохиноновой природы, выделяют из плос морских ежей Scaphechinus mirabilis, где он присутствует в виде кальциевых натриевых солей в составе игл и панциря. При обработке ежей этаноло] присутствии разбавленной серной кислоты происходит разрушение сс эхинохрома с высвобождением последнего в Н+-форме, которая хор< растворима в этаноле. Серная кислота, освобождая эхинохром из соле комплексов, нейтрализуется кальций карбонатной основой панциря ежей (СаСС образованием нерастворимого в воде и этаноле сульфата кальция (CaS04, ги После концентрирования экстракт, содержащий эхинохром, очищают сопутствующих примесей перерастворением эхинохрома в хлороформе последующим удалением растворителя. ЭХА кристаллизуют из диоксана, сушг сублимируют. Аппаратурная схема производства фармакологической су'бстан] "Эхинохром А" приведена на рис. 3.

Эхинохром А - витаминоподобное природное вещество, сходное по химическому строению как с витаминами группы К, так и с витамином С (ЕШп, СЬегеёшсЬепко, КоИвоуа, АПуикоу, 2011). Как видно из рис. 4, ЭХА, в отличие от витамина К2, является сильно гидроксилированным природным нафтохиноном. Гидроксилирование нафтохинонов уменьшает их способность свертывать кровь от 10 до 500 раз в зависимости от степени и места замещения (Березовский, 1973). Установлено, что ЭХА, в отличие от витаминов группы К, не обладает способностью коагулировать кровь и останавливать кровотечение.

О сн3

Витамин К2

Рис. 4. Структура эхинохрома А, витаминов К2 и С

Утратив основную функцию коагулировать кровь и участвовать в образова: С1а-белков, полигидроксилированный ЭХА сохраняет другие функции соедине] группы витаминов К, а именно участвует в процессах, связанных с транспорт электронов, и может принимать участие в регуляции тех же физиологичес процессов, что и витамины этой группы.

Наличие редуктоновой группировки в структуре ЭХА, сближает его физиологическому действию с другим известным витамином - аскорбино] кислотой. Редокс-соединения обычно характеризуются стандартными окислитель восстановительными потенциалами.

Таблица. Окислительно-восстановительные потенциалы эхинохрома А и некот<

антиоксидантных витаминов

Витамин Окислительно-востановительный потенциал (милливольты)

Убихинон (кофермент СЬо) 100

Аскорбиновая кислота (витамин С) 80

Эхинохром А 80

Токоферол (витамин Е) 300

Менадион (витамин КЗ) 394

Как видно из таблицы, окислительно-восстановительные потенциалы в итам * С и ЭХА равнозначны, поэтому эти соединения могут быть взаимозаменяемым] ряде окислительно-восстановительных реакций, протекающих в организме.

Следует отметить, что потенциал ЭХА незначительно отличается от такового Ля убихинона Q10, то есть ЭХА способен переносить электроны в реакциях, в оторых обычно функционирует убихинон Q ю-

Витамин С (аскорбиновая кислота) - соединение, которое попадает в организм еловека только с пищей, всасываясь в желудочно-кишечном тракте. Попав в ровь, аскорбиновая кислота может проникнуть в клетки двумя путями: 1) в результате окисления, в том числе ферментом - аскорбатоксидазой, она [ереходит в форму дегидроаскорбиновой кислоты, которая транспортируется в летки по глюкозным каналам (Glut-1 и др.); далее в цитозоле клетки [егидроаскорбиновая кислота восстанавливается NADH, NADPH и GSH вновь до скорбиновой кислоты (Кольман, Рем, 2000);

:) в результате взаимодействия с транспортными белками альбуминовой фракции :рови HSVCT-1 и HSVCT-2 (витамин С транспортные белки человека); в этом лучае аскорбиновая кислота поступает в цитозоль клетки в нативном виде (Wang, luang et al., 1999; Daruwala, Rumsey et al., 1999).

Аскорбатоксидаза "узнает" редуктон ЭХА и окисляет его до тетраольного фрагмента со скоростью, близкой к таковой окисления аскорбиновой кислоты. Сроме того, эхинохром А за счет наличия "редуктонового" фрагмента связывается ранспортерами витамина С и доставляется в клетки методом облегченной (иффузии подобно флавоноидам (Song, Kwon et al., 2002).

Таким образом, ЭХА может проникать в клетку теми же транспортными путями, что и витамин С. Кроме белков HSVCT-1 и HSVCT-2, ЭХА может :вязываться с другими альбуминовыми транспортерами, занимая в них центры :вязывания, например, жирных кислот. ЭХА, проникнув в клетку посредством облегченной диффузии с транспортерами аскорбиновой кислоты HSVCT-1 и HSVCT-2, попадает в зону действия конституционного фермента плазматических мембран клеток - хинонзависимой оксидоредуктазы (NQ01; DT-диафораза) (De Grey, 2003). При взаимодействии ДТ-диафоразы (NQOl) с различными нафтохино-нами и NADPH происходит их двухэлектронное восстановление до нафтохинолов, которые самопроизвольно поглощают кислород (02) и превращаются обратно в исходные нафтохиноны, образуя при этом Н202 (пероксид водорода) (Buffinton et al., 1989; Kruger-Zeitzer et al., 1990; Ollinger et al., 1991). На рис. 5 изображена схема взаимодействия ДТ-диафоразы (NQ01) с эхинохромом А в присутствии NADPH и 02. Расходование внутриклеточного кислорода при реакции взаимодействия ЭХА и ДТ-диафоразы в присутствии NADPH, и образование в этой реакции пероксида водорода создает в клетках дефицит кислорода. Образующийся в результате реакции дополнительный для клетки пероксид водорода играет роль биохимического мессенджера, который, через ряд внутриклеточных посредников, активирует семейство ядерных рецепторов клетки, индуцирующих пролиферацию пероксисом (peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs) (Фаллер, Шилдс, 2004; Gough, 2009). Это семейство транскрипционных факторов (PPARa, PPARp и PPARy) играет ключевую роль в регуляции метаболизма клетки и уменьшает

воспаление (Мооге-Саггавсо ег а!., 2008). Проведенные клинические исследов; действия низких концентраций эхинохрома А полностью подтверл предполагаемый механизм действия этого соединения как агониста семей' факторов РРАК

ЭХА

+ 2ЫАОРН

+2№

этилполигидроксинафталт

он он

+ О,

+ Н

но' ^ >г "он он о исходный ЭХА

Рис. 5. Схема взаимодействия ДТ-диафоразы (N001) с эхинохромом А в присутст ИАОРН и кислорода

ЭХА уменьшал количество глюкозы в крови не только у пациентов ишемической болезнью сердца (ИБС), но и у больных диабетом 2 типа, положительно влиял на углеводный обмен: снижал количество инсулина, пептида и гликолизированного гемоглобина. ЭХА нормализовал липидный ста крови, уменьшая количество холестерина и липопротеидов низкой плотности. Э понижал уровень адреналина, предотвращал ишемические и гипоксивные процес в кардиомиоцитах, уменьшал количество кортизола в крови, увеличи физическую выносливость и ослаблял воспалительную реакцию. ЭХА влиял эндотелиальную дисфункцию, увеличивая уровень N0 в крови и сню количество тканевых металлопротеиназ ММП-9/ТИМП (Лупач, Потапов, Хлудее Баофен, Артюков и др., 2007; Потапов, Лупач, Веселкина, Артюков, 2008, 20 Цибульский, Попов, Артюков и др., 2011; Артюков и др., 2012 ).

Таким образом, ЭХА, выполняя в клетке функции витаминов группы К антиоксидантов (витамина С, убихинона С,0), может быть отнесен к лекарственн: препаратам, объединяемым по физиологическому действию на организм в груг корректоров метаболизма, и может применяться в качестве средства лечения профилактики заболеваний, относящихся к метаболическому синдрому, таких *

ердечно-сосудистые, нарушение липидного и углеводного обмена, старение (Кривошапко, Попов, Артюков, 2009; Krivoshapko, Popov, Artyukov et al., 2011).

В настоящее время в ТИБОХ ДВО РАН на основе эхинохрома А разработаны :екарственные препараты, которые выпускаются под торговой маркой Гистохром . Раствор Гистохрома 1% для инъекций" (PN002363/01 от 23.07.2008) применяется при лечении острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца. Слинические испытания показали, что препарат уменьшает зону некроза в 1,5 раза, юсстанавливает функцию левого желудочка, уменьшает частоту реперфузивных аритмий, способствует восстановлению сократительной функции сердца, ингибирует агрегацию эритроцитов и не имеет побочных и токсичных эффектов. Раствор Гистохрома 0.02% для инъекций" (PN002363/02 от 23.07.2008) применяется для лечения воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаза. Результаты клинических испытаний показали, что препарат эффективен при [ечении гемофтальмов, химических ожогов, диабетической ретинопатии, дистрофии сетчатки, увеитов, кератитов и катаракты.

На основе эхинохрома А разработаны и выпускаются биологически активные (обавки к пище: "Тимарин", "Экстракт морского ежа", "Марихит " и "Хитохром С", которые прошли клиническую апробацию в Приморском кардиологическом центре и в Медобъединении ДВО РАН (г. Владивосток) и подтвердили свою эффективность как препараты метаболической коррекции.

2.2 Морские звезды: разработка технологии получения комплекса каротиноидов и пептидов коллагена

Каротиноиды - жирорастворимые пигменты, синтез которых осуществляют только растения, в том числе водоросли и фитопланктон. Каротиноиды определяют окраску растений и животных от желтой ((3-каротин, зеаксантин) до розовато-красной (астаксантин, кантаксантин). Они защищают клетки и ткани от окислительного стресса, предотвращают коронарные заболевания сердца и сосудов, укрепляют иммунную систему организма, ингибируют развитие некоторых опухолей. Наиболее известним физиологическим эффектом каротиноидов является провитаминная активность.

но

.он

Рис. 6. Структура астаксантина

Самым эффективным антиоксидантом среди каротиноидов, улавливаю! свободные радикалы и гасящим синглетный кислород, является астаксантин (] 6), который обладает солнцезащитным (УФ-протекторным), противовосго тельным и иммуномодулирующим свойствами (Fasset, Coombes, 2011). Природ! источником астаксантина являются микроводоросли рода Haemcitococ Ракообразные аккумулируют в своих панцирях приобретенный в процессе пита астаксантин. Красно-розовой цвет мяса лососевых рыб также является результа накопления каротиноидов, главным образом, астаксантина, полученного вмест пищей. Продукты и пищевые добавки, содержащие природный астаксантин, им< высокую питательную ценность. Искусственное разведение лососевых i определяет высокую потребность в астаксантине, который является важ составной частью их рациона питания. Синтетический астаксантин высокотокси и неустойчив во времени. В большинстве случаев источником каротинои служат отходы, получаемые при переработке ракообразных. При этом конечь продукт представляет собой концентрат каротиноидов, в состав которого вхо астаксантин и его эфиры в комплексе с фосфолипидами. Содержание астаксант в конечном продукте составляет в среднем 4-5%. Известны способы экстраю каротиноидов из зоопланктона и из морских ежей, в основном, из панцирей, иг гонад. К недостаткам данных технологий относится низкое содержа] астаксантина в целевом продукте, а также пожароопасность произволе вследствие использования серного эфира, ацетона и гексана. Еще ощ природным источником каротиноидов, в том числе астаксантина, могут служ морские звезды. Основными каротиноидами этих иглокожих являю катаксантины и стереоизомеры астаксантина. Известные способы получе1 каротиноидов из морских звезд обладают рядом недостатков, среди котор главными являются низкий выход каротиноидов, обусловленный, вероятно, низ» содержанием их в сырье, и использование пожароопасных (ацетон) и токсичн (метанол) реактивов.

На сублиторали дальневосточных морей широко распространены мора звезды, в том числе Patiria pectinifera. В связи с развитием марикультуры : хищные иглокожие в массовом количестве скапливаются на морских плантаци Необходимость сбора и уничтожения этих хищников обеспечивает одновремег достаточные ресурсы для производства каротиноидных препаратов (Купе Артюков и др., 1991). Используя традиционные способы предварителы обработки влагосодержащего сырья перед процессом экстракции липидн материалов, мы разработали технологию комплексной переработки морской звез Р. pectinifera. Сущность метода заключается в последовательном проведен операций обезвоживания, экстракции, хроматографической очистки каротиноид деминерализации отходов, депротеинизации, ферментолиза и получения пептщ морского коллагена.

Рис. 7. Хроматограмма образцов астаксантина (по оси X - время удерживания вещества; по оси Y - интенсивность поглощения при 475 нм). (А) - комплекс каротиноидов Patina pectinifera, (В) - астаксантин (Sigma). ВЭЖХ проводили на жидкостном хроматографе LaChrom (Merck Hitachi) с колонкой Zorbax Eclipse XDB C-18, 35цт, 4,6x75 мм (Agilent Technologies) в градиенте Н20:ацетонитрил

После хроматографической очистки концентрата экстракта получают комплекс каротиноидов, обогащенный астаксантином, лютеином и зеаксантином (рис. 7). Выход комплекса каротиноидов составляет 0.80-1.00% от веса исходного сырья (4-5% от сухого веса), а содержание астаксантина в нем - до 50%. Морские звезды после экстракции каротиноидов деминерализуют соляной кислотой или растворами разрешенных комплексонов (этилендиаминтетрауксусная кислота) и депротеинизируют раствором едкого натра. Полученные коллагеновые остовы звезд гидролизуют протеолитическим комплексом "Коллагеназа" и получают биологически активные пептиды коллагена.

С точки зрения новых источников коллагена интересен еще один представитель семейства иглокожие - голотурия (трепанг) Apostichopus japonicus.

2.3 Голотурии: разработка технологии получения пептида коллагена из

Apostichopus japonicus

Продукт биотрансформации коллагенов дальневосточного трепанга, получивший название апостатин, был получен путем гидролиза тела голотурии Apostichopus japonicus ферментным комплексом "Коллагеназа". По данным физико-химического анализа (метод масс-спектрометрии) он представляет собой полипептид с молекулярной массой 12212 дальтон. Данные масс-спектрометрического анализа свидетельствуют о высокой чистоте препарата, полученного из голотурии A. japonicus (рис. 8). В отличие от коллагенов, выделенных из других источников, апостатин характеризуется повышенным содержанием отрицательно заряженных

аминокислот - аспарагиновой и,особенно, глутаминовой, оксикислот - сери треонина и, особенно, тирозина, а также валина. По содержанию глицина, ок пролина и пролина выделенный белок не отличается от классического коллагена.

Апостатин обладает выраженной антикоагулянтной способностью, нетоксич! безопасен при длительном применении и обладает высокой растворимостью биосовместимых жидкостях и растворах. На его основе могут быть разработа: антикоагулянтные препараты, косметические средства и биологически активн пищевые добавки как средства профилактики и дополнительной терапии п заболеваниях опорно-двигательного аппарата и ухода за кожей (л восстановления коллагеновых связей и придания коже особой упругости), экспериментах на животных с использованием солидного и асцитного вариант опухолей нами показано, что апостатин обладает выраженной противоопухолев активностью, сходной с действием эндостатина и сульфатированм полисахаридов (Попов, Артюков и др., 2011).

3. Морские травы и водоросли 3.1 Разработка технологии комплексной переработки растений семейства

Zosteraceae

Высшие морские растения (морские травы) широко распространены в мор) омывающих территорию России. В дальневосточных морях России наибол распространенными видами являются филлоспадикс (Phyllospadix iwatensis) и д вида зостеры (Zostera marina и Z. asiaticá). Морские травы семейства Zosterace являются стабильно возобновляемыми ресурсами. Запасы Z marina только в залю

Петра Великого Японского моря определены в 16 тыс. тонн сырой массы, Z. asiatica - 28 тыс. тонн, а общая биомасса Phyllospadix iwatensis у материкового побережья Японского моря составляет 140-190 тыс. тонн (Кизеветтер и др., 1981; Паймеева, 1982). Данные многолетних исследований морских трав семейства Zosteraceae (Паймеева, 1973; 1974; 1979; 1981) показали, что они являются богатым источником клетчатки (до 25%), углеводов (до 30%), белка (до 2,5%) и минеральных веществ (до 20%). В морских травах обнаружены алкалоиды, аминокислоты, витамины, дубильные вещества, моно- и олигосахариды, полиненасыщенные жирные кислоты, пектины, полисахариды, фенолкарбоновые кислоты и флавоноиды (Лоенко, Артюков и др., 1997). Схема комплексной переработки трав семейства Zosteraceae, разработанная в лаборатории биотехнологии ТИБ ОХ ДВО РАН, приведена на рис. 9.

Травы семейства Zosteraceae

(Промывка) ( Шинковани^

Рис. 9. Схема комплексной переработки трав семейства Zosteraceae

3.1.1. Зостерин.

Среди многообразия органических природных соединений морсю происхождения полисахариды морских водорослей и трав представляют сам внушительную по своей биомассе "продукцию" Мирового океана. Полисахари обеспечивают ряд физико-механических и физико-химических свойс необходимых морскому растению для выживания в столь своеобразной сре Морские полисахариды обладают уникальными свойствами, которые изуче далеко не полностью, и есть все основания полагать, что исследования этой груп соединений могут привести к впечатляющим открытиям. Одним из таї полисахаридов является зостерин, получивший свое название в соответствии источником его выделения - морскими травами, принадлежащими к семейс-гозіегасеае. В результате многолетних исследований сотрудниками ТИБОХ бь полностью расшифрована структура молекулы зостерина, который представл: собой сложный полимер пектиновой природы, основная цепь которого состоит блоков ос(1—>4) полигалактуроновой кислоты, соединенных между собой (1-связями рамнозы. Примерно на четверть молекула зостерина представляет соб апиогалактуронан, содержащий уникальный моносахарид О-апио присоединенную (1—>2) и (1—>3) связями к галактоуронану. Другие боковые це зостерина содержат О-ксилозу, Б-галактозу, Ь-арабинозу и 2-0-метил-0-ксил< (Шибаева, Оводов, Оводов, 1971, 1974; Оводова, 1971).

Пектины - растворимые пищевые волокна, которые используют в пищеві косметической и фармацевтической промышленности. Наиболее рентабельны источниками пектина являются яблочный и свекольный жмых, кожура цитрусов и корзинки подсолнечника. Содержание пектина в таком сырье составляет от 10 35%. Содержание зостерина в морских травах составляет 10-20 % от сухого ве Важными особенностями структуры зостерина, отличающими его от друг широко используемых пектинов (яблочного, свекловичного, цитрусового подсолнечного) являются низкая степень метоксилирования и наличие остат апиозы. Низкая степень метоксилирования обеспечивает высокие адсорбционн свойства зостерина, а остаток апиозы обусловливает его относительна устойчивость к действию внеклеточных ферментов и, тем самым, возможность е пролонгированного применения. Как было установлено при ликвидац радиационного загрязнения, вызванного аварией на Чернобыльской АЭС, зостер ускоряет выведение инкорпорированных радионуклидов (в том числе изотоп цезия) из организма экспериментальных животных и человека (Заключен Украинского научного центра радиационной медицины, Киев, 1991; Заключен НИИ радиационной медицины, МЗ БССР, Минск, 1991). Широкомасштабні исследования, проведенные Межотраслевой проблемной лабораторні учрежденной Минцветметом СССР и Академией наук СССР, показали высок} эффективность зостерина в лечебно-профилактических мероприятиях по оздорс лению персонала свинцово-плавильных и горно-обогатительных предприятий СС< (Приморский край, Казахстан, Украина, Северная Осетия), а также целесообразное

его использования в составе новых антидотных и антимутагенных лекарственных препаратов. Исключительный интерес представляют экспериментальные данные о противоопухолевых свойствах зостерина и его способности продлевать жизнь нормальных животных, т.е. выступать в качестве потенциального геропротектора, а также его способность снижать содержание холестерина в крови, что обеспечивает антисклероти-ческий эффект. В настоящее время на основе зостерина разработаны антидотные композиции - таблетки, безалкогольные бальзамы, пасты. Большинство из этих продуктов прошли успешную апробацию в клинике НИИ питания РАМН и уже рекомендованы Институтом питания к промышленному выпуску в качестве лечебно-профилактических продуктов специального назначения.

Начатое в 1986 г исследование медико-биологических свойств зостерина вызвало большой интерес у врачей, продолживших изучение прикладных аспектов этого уникального биополимера. В немалой степени данному процессу способствуют формы применения зостерина (растворы, коктейли, пищевые добавки, композиции), органолептические показатели, совместимость со многими видами медикаментозной терапии, а также свойство зостерина уменьшать дозу и продолжительность приема известных лекарственных средств.

Исследование медико-биологической активности зостерина в значительной степени стимулировало дальнейшее изучение его физико-химических, гелеобразу-ющих и катионосвязывающих свойств. Доступность растительного сырья в экологически чистых морях Дальнего Востока, простота производственного процесса извлечения зостерина позволили ТИБОХ ДВО РАН впервые спроектировать производственные линии для получения зостерина по бесспиртовой технологии, а также развернуть производство этого биопрепарата на территории Приморского края.

Осуществляемый с 1986 г. промышленный выпуск зостерина позволил не только оценить его медико-биологические свойства, но и привел к появлению на рынке зостерин-содержащей парафармацевтической продукции: антидотных напитков специального назначения группы "Vita", безалкогольных бальзамов и таблетированных композиций, объединенных общим названием "Гербамарин". Проведенные токсикологические исследования показали отсутствие какого-либо негативного влияния зостерина на жизненно важные функции организма. Слабой стороной большинства работ по изучению активности перорально назначаемых биополимеров является отсутствие данных по фармакокинетике. Изучение поступления 3Н-зостерина и его метаболитов в кровяное русло и ткани органов указывает на возможность всасывания, по крайней мере, низкомолекулярных фрагментов зостерина в тонком кишечнике с последующим распределением его молекул по органам и тканям организма. Полученные результаты по фармакокинетике зостерина позволяют объективно оценивать его медико-биологические свойства и прогнозировать эффект воздействия на организм (Попов, Лямкин, Артюков и др., 1990).

АКТИВНОСТЬ

Иммуно-модулирующая

Противовирусная

Антибактериальная

Противоопухолевая

Гилохолестери-немическая

Противоязвенная

Геропротекторная

Антиаллергическая

Амтадотная

о\о

Радиозащитная и

анти-геморрагичесхая

о\о

о\а

Стимуляция иммунных реакций гуморального и клетсиного типа, снижение активности Т-супрессороа, митогенное действие

Ингибироеание инфекцион-ности вирусов: полиомиелита Ii типа, Коксаки А7, Коксакн В 2, аденовируса 7 типа_

Подавление роста микроорганизмов: Yersenia pseudotuberculosis. Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Salmonella typhimurium

Подавление роста и метаста зирования экспериментальных опухолей: карциномы Эрлиха. карциномы легкого Льюис, вирусицдуцирован-ного лейкоза Раушеоа

аушео

Препятствие кровотечению у облученных животных посредством усиления восстановительных процессов

Связывание холестерина и его биосинтетических предшественнике«

Нормализация морфофункциональных особенностей желудка и двенадцатиперстной кишки, подавление роста Helicobacter pylori

продпбБаййа'&реднбй

должителькости жизни экспериментальных животных, посредством попифункцио-нального влияния (энтеро-сорбция, иммуномодуляция, снижение уровня холестерина и тд.) на физиологический статус организма

Нейтрализация аллергизирующих субстанций

Связывание катионов

Рис.10. Биологическая активность зостерина (Лоенко, Артюков и др., 1997)

На рисунке 10 представлены виды биологической активности зостерина, непо-)едственно наблюдаемые эффекты и прогнозируемое специфическое действие олекул зостерина. Анализ биологической активности, антидотного действия, ганико-терапевтических эффектов зостерина позволил связать биологические [)фекты с особенностями молекулярной структуры, физико-химическими юйствами и фармакокинетикой исследуемого биополимера. С одной стороны, ютерин является высокоактивным полианионным адсорбентом, который в елудочно-кишечном тракте связывает и выводит из организма ионы тяжелых гталлов, желчные кислоты, патогенные микроорганизмы, проявляет антидотную, [Похолестеринемическую, антибактериальную, геропротекторную, противоязвен-гю и антиаллергическую активность. С другой стороны, низкомолекулярный стерин и его фрагменты, попадая в кровяное русло, ткани и органы, непосред-венно контактируют с клетками, в частности, иммунокомпетентными, что в свою [ередь индуцирует реактивные изменения их функционального состояния. При учении механизма иммуностимулирующего действия зостерина нами тановлено специфическое влияние его молекул на иммунокомпетентные клетки и 1гоциты в изолированной системе in vitro (Лоенко, Артюков и др., 1997).

3.1.2. Полифенольный комплекс.

Полифенольные соединения, наряду с белками, углеводами и нуклеиновыми слотами, являются компонентами растительных тканей, которые участвуют в гуляции роста, формировании опорно-структурной системы растений и защите стений от агрессивных воздействий среды. Поступая с пищей в организм ловека, они попадают в кровь в неизменном или модифицированном клетками шечника виде, и проявляют широкий спектр биологической активности. >еспеченность организма человека растительными полифенольными единениями в значительной степени зависит от рациона. Следует обратить имание на то, что содержание биофлавоноидов в растениях колеблется в вольно широком диапазоне от 15-30 мг до 1-2 г на кг. Суточная норма обходимого потребления биофлавоноидов для человека составляет 50-100 мг, и стигнуть такого потребления только за счет продуктов питания довольно сложно, настоящее время выпускается достаточно много биологически активных добавок пище на основе биофлавоноидов. В качестве источников биофлавоноидов тользуют лозу и семена винограда, мелиссу, мяту, розмарин, ромашку, барбарис, уванчик, воробейник, незабудочник. В отличие от присутствующих на рынке эдуктов, полифенольный комплекс (ПФК) морской травы Zostera marina 1ержит более широкий набор флавоноидов (лютеолин, сульфаты лютеолина, ггенин, диосметин, хризоэриол, гиспидулин) и фенолкарбоновых кислот (п-фоксибензойная, протокатехиновая, ванилиновая, галловая, кофейная, розма-товая и феруловая). По оценкам перспективных рынков возможный рыночный генциал разрабатываемых технологий на основе ПФК зостеры составляет от 500 800 миллионов рублей в год в России и 10—15 миллионов долларов — за рубежом. пИБОХ ДВО РАН разработаны способы получения ПФК из зостеры, а также

индивидуальных полифенолов: розмариновой кислоты (РК) и 7,3'-дисульс лютеолина. Хроматограммы ПФК, РК и 7,3'-дисульфата лютеолина, получен методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, представлены на рис.

а б

•»И 1183 ,И1 12Л5

I-

Рис. 11. Хроматограммы полифенольных соединений морской травы зостеры: (а) спирт экстракт (ПФК); (б) очищенная розмариновая кислота (РК); (в) высокоочищенная РК 7,3'-дисульфат лютеолина. ВЭЖХ проводили на хроматографе LaChrom (Merck Hitas колонкой Zorbax Eclipse XDB C-18, 35цт, 4,6x75 мм (Agilent Technologies) в град1 Н20:ацетонитрил

Розмариновая кислота, Ci8H1608, содержащаяся во многих лекарстве! растениях, особенно в растениях семейства Lamiaceae, является природ полифенольным антиоксидантом. Она является сложным эфиром кофейной и гидроксифенил молочной кислот (рис.12) и обладает широким спектром 6hoj ческой активности: противовирусной, антикомплементарной, антидепрессант антимутагенной, нейропротекторной, иммуномодулирую-щей, антилейкоз но Г противоопухолевой. Однако широкое применение РК лимитировано недостаточ

! выпуском в связи с ограниченностью сырьевой базы и сложностью биологических процессов производства. В основном она представлена леновыми препаратами в виде экстрактов.

Рис. 12. Структура розмариновой кислоты

Общая средняя годовая потребность только в розмариновой кислоте в России (енивается в объемах около 5 тонн в год, если ее будет употреблять только 1% шьных вирусным гепатитом С (флавивирус).

Проведенные исследования подтвердили эффективность противовирусного йствия РК и в отношении другого представителя флавивирусов - вируса ещевого энцефалита (Крылова, Леонова, Попов, Артюков и др., 2009, 2011; зылова, Леонова, Майстровская, Попов, Артюков, Козловская, 2010). Полученные нные по антивирусной активности РК и наличие стабильного и возобновляемого [рья позволяют начать фармакологическое изучение этого природного лифенольного соединения для создания нового противовирусного препарата.

Флавоноиды, в частности, лютеолин и его дисульфат (рис.13), обладают тиоксидантными, капилляроукрепляющими, противо-воспалительными, ггоэстрогенными, антиаллергическими, канцерпревентивными, антибактериаль-1ми и противовирусными эффектами.

Рис.13. Структура лютеолина (а) и 7,3'-дисульфата лютеолина (б).

Они оказывают антиспазмолитическое действие, в том числе на сосуды сердца головного мозга; положительно влияют на обменные процессы в миокарде; падают антиаритмическим действием; тормозят агрегацию тромбоцитов и их хзию к эпителию сосудистой стенки; нормализуют текучесть крови и углеводный мен; проявляют антиатеросклеротическое, антигипертензивное, противоязвенное епатопротекторное действия.

Полигидроксифенольные соединения растений были отнесены к витаминам /ппы Р. Эти соединения не синтезируются в организме человека, но многие кные физиологические процессы не могут осуществляться без участия этих личных растительных метаболитов. Всемирная организация здравоохранения

(ВОЗ) и Американское агентство по надзору в области питания и лекарствен средств рекомендуют для сохранения здоровья и продления жизни употреблят менее 50 мг лютеолина в день (USDA Database for the Flavonoid Contens of Sel« Foods, 2003; Lopez-Lazaro, 2009). В ряде случаев действие лютеолина превосх< эффекты кверцетина, широко используемого в медицине. Особо следует отме его фитоэстрогенное действие, которое приводит к уменьшению риска разв рака молочной железы, продляет детородный возраст, ослабляет последсп связанные с наступлением климакса. Преимущество лютеолина, полученног зостеры, в том, что он находится в водорастворимой форме, и потому достижения эффекта его требуется значительно меньше, чем в случае выдел этого флавоноида из другого растительного сырья.

Изучение биологической активности лютеолина и его дисульфата, проведе нами на экспериментальных моделях аллоксанового диабета и гиперлипиде показало, что оба соединения нормализуют углеводный и липидный обмег действующие концентрации дисульфата лютеолина были значительно меньше, лютеолина (Попов, Кривошапко, Артюков, 2011).

Исследование ПФК из зостеры показало, что его составляющие обла, широким спектром биологической активности и перспективны для создания Н( лекарственных препаратов.

3.2 Разработка технологии получения полисахаридов из отходов переработки бурой водоросли Laminaría japónica

Бурые водоросли своим названием обязаны присутствующему в них бу; пигменту фукоксантину. Из наиболее ценных и распространенных полисахар бурых водорослей заслуживает внимания альгиновая кислота, содержащаяся во крупных бурых водорослях в количестве до 40% от массы сухого вещества. Др полисахариды бурых водорослей (фукоиданы или фукансульфаты) опреде обычно по наличию в гидролизатах L-фукозы - основного моносахарида в coi вышеназванных полисахаридов. В последнее время особое вним исследователей обращено к сульфатированным полисахаридам водорослей в < с их ярко выраженной антикоагулянтной активностью. Актуальность поиска т соединений связана в первую очередь с профилактикой и лечением тромбоэмб< вызванных осложнениями многих заболеваний и хирургическим вмешательс Из литературных источников известно, что, в результате фракционировани бурых водорослей Sargassum linifolium, Dictyota dichotoma, Padina pavonia, Ei bicyclis и Laminaria religiosa удалось получить препараты, которые антикоагулянтной активности не уступают гепарину или даже превосходят (Abdel-Fattah et al., 1974, 1978; Hussein et al., 1980; Usui et al., 1980; Maruyama ' 1987).

Антикоагулянтный эффект фукоидана оценивался in vivo и in vitro (Роз* др., 1988, 1989). Действие фукоиданов на свертывание крови реализуется по> ством ингибирования активности факторов "внутреннего" пути (факторы XI, VII), а не через антитромбин III (AT-III), как это происходит в случае гепа--

) есть, фукоиданы могут быть эффективны при проведении антикоагулянтной рапии у больных с врожденным или приобретенным дефицитом AT-III. Мори с авторами (Mori et al., 1982), изучая полисахариды бурой водоросли Undciria nnatifida, обнаружили зависимость антикоагулянтной активности (в том числе и особности снижать содержание липопротеидов в сыворотке крови) от молярного отношения входящих в их состав фукозы и галактозы.

Фукоиданы, как природные полиэлектролиты} обладают высокой степенью

0 детва с двухвалентными катионами тяжелых металлов. Различия в сорбционных свойствах фукоиданов зависят от источника их получения, ггановлено, что фукоидан из бурой водоросли Ascophyllum nodosum связывает ухвалентные катионы в следующей последовательности: Pb > Ва > Cd > Sr > Cu >

> Со > Zn > Mg > Mn > Cr > Ni > Hg > Ca. Необходимо отметить очень низкое одство фукоидана к ионам кальция, которые играют существенную роль в внедеятельности организмов. В экспериментах на животных сочетанное введение инца и фукоидана приводило к значительному снижению всасывания свинца и ступления его в организм. Биологическая активность фукоидана из Ascophyllum dosum зависела от вязкости его растворов, а также от наличия и положения в лекуле функциональных групп.

Известно, что сульфатированные полисахариды морских водорослей зетающе действуют на РНК- и ДНК-содержащие вирусы. В этом плане коиданы не являются исключением. Установлено, что фукоиданы из бурых порослей Macrocystis pyrifera и Fucus vesiculosus ингибируют цитопатическое Яствие вируса везикулярного стоматита (Mayer et al., 1987). Исключительно кными являются результаты работ, указывающие на перспективность поиска 1ьфатированных полисахаридов, обладающих в условиях in vitro селективным гибирующим действием на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Как и другие 1ьфатированные полисахариды, фукоиданы блокируют процесс узнавания и [зывания между гликопротеином оболочки gpl20HIV и клеточным рецептором >4 . Следует добавить, что анти-ВИЧ активность сульфатированных тисахаридов не коррелирует с их антикоагулянтными свойствами и, вероятнее то, эти два эффекта взаимонезависимы. Обнадеживающие данные получены жскими исследователями, установившими усиление анти-ВИЧ эффекта in vitro

1 сочетанном применении фукоидана с азидотимидином (Sugawara, 1989). ¡считанные для клинического применения дозы состаляют 0.1 мкг/мл фукоидана .014 мкМ азидотимидина. Создание такой концентрации препаратов в сыворотке )ви больных ВИЧ вполне достижимо. Использование фукоидана в комбинации с дотимидином, вероятно, позволит значительно снизить побочные эффекты, никающие при лечении больных.

Принимая во внимание фармакологическую важность полисахаридов бурой юросли Laminaria japónica, мы разработали технологии извлечения уронофукана фукоидана из отходов ее промышленной переработки. Традиционная обработка 'aponica - варка шинкованной водоросли и получение из нее пищевой продукции, 'одами этого производства являются выварочные воды, представляющие собой

типичный экстракт водорослей, полученный "горячим способом". Кипячен* japónica приводит к значительной деградации биополимеров, денатурации 6ej образованию новых соединений в результате реакции конденсации. Учитывая аспекты, мы все же рискнули разработать технологию получения из отваров б; водорослей низкомолекулярных фрагментов полисахаридов, способных прояЕ противовирусную активность и антидотные свойства (рис. 14).

Рис. 14. Схема технологического процесса получения кислых полисахаридов из от промышленной переработки Laminaria japónica

Используя современные приемы выделения биополимеров с зада молекулярной массой, и освободившись от присутствия альгиновых khcj помощью соляной кислоты, мы получили высокоочищенный пр< полисахаридной природы. Физико-химический анализ показал, что данный пр< имеет в своем составе фрагменты уроновых кислот и сульфатированную фу Молекулярная масса полученного полисахарида = 20-24 кДа. Анализ методом показал, что полученный продукт представляет собой не смесь уроновых кис. фукоидана, а единый полисахарид - сульфатированный уронофукан, стру] которого устойчива к высокотемпературному режиму во время кипячен: japónica.

Вторым полисахаридом L. japónica, выделенным из отходов промышленной зреработки этой бурой водоросли, являлся фукоидан. В последние годы огромную эпулярность приобрело пищевое использование водорослей в виде гелеобразных íct. Однородная консистенция паст, получаемая за счет гелеобразующих свойств [Ьгиновой кислоты, и отсутствие термообработки позволяет сохранять набор злезных микро- и макроэлементов водорослей, йод-содержащих соединений, тидов и других внутриклеточных ингредиентов. Необходимо отметить, что »доросли, обитающие в растворимом "содержании таблицы Менделеева" (морская >да), накапливают и ионы тяжелых металлов, концентрация которых иногда >евышает безопасные нормы, предусмотренные санитарным законодательством Поэтому обязательной стадией обработки шинкованной L. japónica должна ляться кислотная обработка, приводящая к удалению ионов тяжелых металлов из аней водоросли в виде водорастворимых хлоридов. При мягкой кислотной ¡работке ламинарии, особенно при пониженной температуре 2-4°С, происходит олодная" экстракция кислоторастворимого фукоидана в наиболее нативном ысоко полимерном) виде. Используя предложенную технологию переработки ходов водорослей и последующую ультрафильтрацию с применением мембран, юпускающих глобулярные белки с размерами 100 и 300 kDa, мы получили «параты фукоидана с молекулярной массой 150-300 kDa и чистотой 93%. Данная хнология позволяет получать любые соли фукоидана (Н+, Na+, К+, Mg2+).

Уронофукан показал высокое противовирусное действие в экспериментах in го на Т-лимфобластоидных клетках МТ4, инфицированных ВИЧ-1. Установлена йтрализация вируса in vitro низкими дозами уронофукана, а также ингибирование сорбции вируса на клетках-мишенях, предварительно обработанных этим ополимером, что обеспечивает полную защиту клеток МТ4 от цитопатического йствия вируса иммунодефицита человека 1-типа. Выявлено дозозависимое гибирование уронофуканом активности обратной транскриптазы.

Серьезным ограничением на пути использования сульфатированных лисахаридов в медицине является их высокая антикоагулянтная активность. Мы гановили, что антикоагуляционный эффект уронофукана был более чем в 10 раз же такового для гепарина, и в 2 раза ниже, чем у фукоидана. Хотя уронофукан и оявлял анти-ВИЧ активность при концентрациях, более чем в 100 раз ниже, чем > антикоагуляционная активность, этот препарат был снят со второй стадии 1ытаний в США (поиск новых анти-ВИЧ препаратов) вследствие его побочного триноидного действия.

При изучении ингибирующего влияния уронофукана на развитие вирус-цуцированного лейкоза Раушера исследуемый полисахарид мы вводили ^трибрюшинно лабораторным мышам ежедневно в течение 5 дней. Введение шофукана тормозило гибель мышей только на ранних стадиях развития Секции. Судя по наблюдаемым эффектам, сульфатированные фукозосодержащие

полисахариды влияют на процессы лиганд-рецепторных взаимоотношений м£ вирусом и клеткой-мишенью (Шапошникова, Бородина, Попов, Артюков и 1992).

Была исследована также способность уронофукана и фукоидана выво ионы свинца из организма лабораторных животных. Как показали г. эксперименты, их антидотное действие слабее, чем у зостерина, поэтому лече профилактические продукты на их основе обладают умерен детоксицирующими свойствами (Ьуаткт, Айуикоу, Ьоепко, 1989).

4. Моллюски. Биогликаны и лектины из отходов промышлег переработки мидии СгепотуШт grayanus

Двустворчатые моллюски - наиболее распространенный класс моллюско! промысловых двустворчатых моллюсков наиболее широко известны ми устрицы, гребешки. Многотоннажная добыча этого океанического сырья ст вопрос о его комплексной переработке с целью получения максималь количества полезной для человека продукции. Нами была разработана технол комплексной переработки моллюсков для получения биогликанов, лекп оксигемоглобина и гидролизатов белков (рис.15).

4.1 Технология получения митилана и лектинов

Мидия СгепотуШия grayanus широко распространена в морях Даль Востока и является одним из массовых объектов, перерабатываемых производства деликатесной пищевой продукции. Трудности "ручного" вскр раковин стимулировали технологов рыбной индустрии к созданию аппарат производственных режимов разделки, где добытую мидию обрабатывают го Проводимая термообработка мидии приводит к естественному раскрытию ств и внутренняя жидкость моллюска совместно с пароконденсатом являются отхо, первой стадии переработки мидий Химический анализ отходов, выполненн ТИБОХ ДВО РАН, показал наличие в них значительного колич< биополимеров, низкомолекулярных органических и минеральных вещ Основным биополимером выварочных вод оказался биогликан - мит] выделенный ранее экстракционными методами из мантии мидий (Ово, Глазкова, Оводов, Молчанова, Гефт, Михейская, Артюков, Лоенко, 1989). Мш состоит из углеводного и белкового компонентов, которые связаны прочной, 1 ковалентной связью. Молекулярная масса митилана составляет 3 МБа. Углево, компонент митилана является гликогеноподобным а-1,4-В-глюканом, содержг небольшое число а-1,2 и а-1,3 глюкозидных связей в точках разветвлен отличающимся высокой степенью разветвленности цепи.

Отходы, содержащие белок

Ферментолиз ("Коллагеназа КК")

Гидролизаты гидробионтов

Функциональные продукты питания

Железосодержащий белок

Рис. 15. Схема комплексной переработки моллюсков

Используя физико-химические особенности биогликана мидий (высокая лекулярная масса, водорастворимость и кислотоустойчивость), мы разработали снологию получения митилана из отходов промышленной переработки мидий, огликан, полученный предложенным способом, соответствовал по всем эактеристикам образцу, выделенному ранее из целой мидии и проявлял те же №1 фармакологической активности при испытании на экспериментальных вотных.

Одновременно с митиланом используемые мидийные воды содержали зкомолекулярные белки, проявляющие способность агглютинировать ггроциты и опухолевые клетки. Данные белки были выделены из раствора годом аффинной хроматографии с использованием в качестве сорбента актозо-содержащие сшитые полимеры. Были получены лектины Л-1 и Л-2. ктин Л-1 был обычным галактозоспецифическим лектином, а Л-2 оказался

агглютинином с неизвестной углеводной специфичностью. J1-1 выдерж термообработку при 55-60°С, a JI-2 сохранял свою агглютинирующую актив! при нагревании до 100°С. Оба лектина (JI-1 и JI-2) входили в состав 6ej ассоциированных с митиланом. При изучении физиологической активн лектинов мидии JI-1 и JI-2 in vivo (на моделях асцитной и солидной карциномь была обнаружена их противоопухолевая активность. Для выяснения механ действия белковых компонентов митилана была исследована дина; взаимодействия JI-1 с клетками карциномы Эрлиха. Результаты экспериме показали, что JI-1 вызывает выход ионов калия из клеток карциномы 3pj Добавление в инкубационную среду галактозы (0.2 шМ), специфич блокирующей лектиновую активность, приводило к значительному СКИЖ( выхода ионов К+, что свидетельствовало о специфическом взаимодействии J углеводными лигандами клеток карциномы Эрлиха (Лоенко, Глазкова, Apnoi др., 1987; Loenko, Artyukov, Glazkova, Rutskova, 1988).

Предложенная технология получения биологически активных соединен* отходов переработки мидии позволяет получать фармакологические субстанг высокоочищенном или индивидуальном состоянии.

Биогликан митилан выпускался в 1987-2000 гг. на опытном произвол ТИБОХ ДВО РАН для проведения различных медико-биологиче исследований. На основе митилана созданы композиции косметических кр< которые выпускались на фабрике "СВОБОДА" (г. Москва). Лектины мидии т применяются в тест-системах для определения присутствия онкологиче маркеров.

4.2 Оксигемоглобин морского моллюска Scapharca broughtoni (Anudara broughtoni)

По данным Всемирной организации здравоохранения, железодефивд анемией (ЖДА) страдают 2 миллиарда человек в мире. Скрытый дефицит ж-(предстадия ЖДА) обнаруживается у 30% жителей Европы и России. : возникает при уменьшении количества гемоглобина крови, по сравнен! физиологической нормой, из-за недостаточности поступления железа с пищ( настоящее время в мире интенсивно ведутся поиски альтернативных источг гемопротеинов. Это связано с тем, что крупный рогатый скот (КРС), традицио источник гемопротеинов медицинского назначения, подвержен виру1 заболеваниям, опасным для человека. Возможность загрязнения вирус! инфекциями конечной медицинской продукции, получаемой из крови KP определяет важность и актуальность поиска альтернативных сырьевых источ! гемосодержащих белков.

Многие белки морских гидробионтов, запасающие кислород и переносящг по организму, являются гемосодержащими протеинами. К ним отно гемоцианины и рассеянные гемоглобины, которые могут быть использованы профилактики железодефицитных состояний человека. На основании проведи

¡¡следований нами разработана технология получения биологически активной елезосодержащей пищевой добавки из гемолимфы морского моллюска Есаркагса 'ощЫот. Гемолимфу, являющуюся отходом промышленной переработки этого оллюска и содержащую большое количество дыхательных пигментов, мораживают для удобства транспортировки и хранения. Замороженную ¡молимфу дефростируют, центрифугируют, фильтруют на мембране с размером эр 0.2 мкм, концентрируют и отмывают от посторонних примесей водой на 1ьтрафильтрационной установке с мембраной, пропускающей глобулярные белки молекулярной массой 300 кДа и ниже. По данным рентгеновской флюоресценции оптической спектроскопии полученный препарат содержал 0.2% железа и являлся всеянным оксигемоглобином (рис.16).

Рис. 16. Спектр поглощения оксигемоглобина из Зсаркагса Ьгог^Ыот

Но 340 400 500 500 700

нм

Далее оксигемоглобин подвергали частичному ферментативному гидролизу я соотношении Гемопротеин : фермент 100:1-2 в течение 4-5 часов при шературе 29-39°С. В качестве фермента использовали комплекс протеиназ 1чатского краба "Коллагеназа". Гемопротеин отмывали дистиллированной водой низкомолекулярных продуктов гидролиза, концентрировали на ультрафильтра-5нной установке с мембраной для отделения полипептидов с молекулярной :сой выше 30 кДа и высушивали сублимационным методом. Полученый ¡парат гемопротеиновой природы содержал двухвалентное железо в количестве 5% от массы сухого вещества. Таким образом, железосодержащая биологически ивная пищевая добавка из Б. Ъгоифгот по содержанию железа в 15-20 раз ¡восходила аналогичные препараты, существующие на современном рынке, эме того, железосодержащий продукт из моллюска более

безопасен по сравнению с препаратами из крови животных и не тре дополнительной противовирусной очистки. Разработанная технология позво использовать новое (нетрадиционное) океаническое сырье для получ железосодержащей биологически активной добавки.

5. Биологически активные добавки к пище 5.1 Свойства и характерные особенности сиропных бальзамов "Гербамар

Состав безалкогольных сиропов бальзамных "Гербамарин" предстаЕ собой гармоничное сочетание биологически активных веществ (БАВ). Источи их получения являются лекарственные растения и морские гидробионты (кал! мидия, лосось, зостера и ламинария). При получении БАВ из мор гидробионтов используются современные технологии, разработанные запатентованные в Тихоокеанском институте биоорганической химии. В с< бальзамов входят следующие БАВ: аминокислоты, пептиды, полисахар витамины, флавоноиды, органические кислоты и минеральные вещества.

Действие природных веществ, особенно их комплексов, значительно л действия синтетических лекарственных средств, поскольку по химиче структуре они гораздо ближе к метаболитам организма человека и поэтому 01 воспринимаются им как чужеродные. Особенностью действия комплекса "Гербамарина" является не арифметическое суммирование их активное! синергизм, обусловленный взаимодействием и взаимовлиянием входящих I состав компонентов. Системный и специфический характер действия на отдел органы, ткани и рецепторы организма каждого из видов сиропов бальзамных с "Гербамарин" составляет основу их уникальности. Эффект специфич! достигается действием отдельных компонентов, схожих по эффекту, но отли по механизму его реализации, а также пролонгацей циркуляции этих компонен организме человека.

Сироп бальзамный "Гербамарин® общеукрепляющий", представляет с композицию БАВ с иммуностимулирующими и энтеросорбентными СВОЙСТ] Сироп рекомендуется использовать как дополнительное эффективное и безоп; средство для восстановления больных, перенесших тяжелые инфе: подвергшихся неблагоприятным воздействиям внешней среды и име* нарушения психоэмоционального статуса. Кроме того, его следует приш населению, проживающему в экологически неблагополучных районах подвергнувшемуся неблагоприятному воздействию внешней среды. Акта компоненты этого бальзама нормализуют нарушенный обмен вей способствуют улучшению пищеварения, устранению запоров и отёков, что, в очередь, ведет к нормализации веса у людей, склонных к ожирению.

Сироп бальзамный "Гербамарин® для больных гипертонией и ожирен содержащий композицию БАВ с кардиотропными и гипотензивными свойст! является эффективным и безопасным средством профилактики гипертонии-

олезни (ГБ). Благодаря сбалансированному и дозированному сочетанию БАВ астений и морских организмов этот бальзам обладает такими качествами, как [ягкость фармакологического действия, плавность нарастания максимального ечебного эффекта, широта терапевтического спектра, наличие соединений с азличным и часто взаимно потенцирующим действием. Рекомендуется в качестве рофилактического и вспомогательного средства при терапии сердечно-сосудистых аболеваний.

Сиропный бальзам "Гербамарин® печеночный" содержит натуральные нгредиенты растительного и морского сырья. Растительные ингредиенты одобраны таким образом, чтобы их совместное терапевтическое действие было а правлено на различные функции гепатобилиарной системы организма.

Сиропный бальзам "Гербамарин® диабетический" содержит композицию БАВ, эрмализующих углеводный обмен. Рекомендуется в качестве вспомогательного эедства при сахарном диабете. При использовании этого бальзама в комплексной :рапии сахарного диабета появляется возможность уменьшить дозы эотиводиабетических препаратов, а при диабете лёгкой степени тяжести даже "казаться от них. Его можно сочетать с диетой, используемой в качестве энотерапии, а также с сахаропонижающими препаратами.

Медико-биологические исследования бальзамов, проведённые в клинических феждениях (НИИ питания РАМН; Российская медицинская академия >следипломного образования, Москва; Медицинское объединеие ДВО РАН; гнтр медицины катастроф, неотложных состояний и скорой медицинской »мощи, Москва; Дальневосточная клиническая центральная бассейновая больница 'дздрава МЗ РФ, Владивосток), подтверждают системный и многоцелевой рактер их действия на организм человека. "Гербамарин" оказывает лечебное йствие постепенно. Эти бальзамы полезны и здоровым людям. Они защищают ганизм от широкого спектра современных факторов риска (стрессы, патогенные 1кроорганизмы, вирусы, токсины, химиотерапевтические средства, низирующее излучение) и обеспечивают организм набором жизненно важных мпонентов.

5.2 Свойства и характеристика биологически активной добавки

"Золотой рог"

"Золотой рог" - серия оригинальных лечебно-профилактических пищевых мпозиций на основе биологически активных веществ морских гидробионтов и да. БАД рекомендуется как общеукрепляющее средство для коррекции эушенных физиологических функций организма. Постоянное применение ¡личных форм композиций «Золотой рог» позволяет оказывать системное рмакологическое действие на организм человека.

^ "Золотой рог" 1. В композиции присутствует новый антиоксидант нафтохиноно-1 природы - эхинохром А. При резком повышении интенсивности перекисного -сления липидов (при различных видах стресса и других патологиях),

приводящем в конечном итоге к развитию широкого спектра патологичес состояний, наблюдается корригирующее влияние эхинохрома на состоя антиоксидантной системы организма. Поскольку ЭХА слабо растворим в вод] средах, применение в сочетании с мёдом оптимизирует его растворимост биоусвояемость. Данную композицию рекомендуется применять сублингваш оставляя во рту под языком в течение нескольких минут, что способствует бс эффективному всасыванию этого антиоксиданта в кровь.

"Золотой рог" 2. Данная композиция наряду с ЭХА содержит биологиче активные вещества липидной природы из морского ежа. Липидная компонента 2 композиции в сочетании с мёдом способствует повышению его эффективности поступлении в организм через желудочно-кишечный тракт.

"Золотой рог" 3. В состав композиции входит комплекс Б AB из б> водоросли ламинарии (Laminaria japónica). Фармакологическое дейст композиции обусловлено высоким содержанием хлорофилина (в виде комплек ионами меди), полиненасыщенных жирных кислот, каротиноидов, фитостеринс также уникальным микроэлементным составом^близким по составу человечес крови, и высоким содержанием легко усвояемого природного йода, большая ч которого (90%) находится в виде йодитов. Данная композиция рекомендуется профилактики атеросклероза, улучшения обменных процессов в гепатоцита ускорения восстановления мембран клеток при гепатитах, циррозах и др:

поражениях печени.

"Золотой рог" 4. В состав композиции входит комплекс биологич< активных веществ, полученных из уникального диетического продукта - мор< водоросли Fucus sp. Главными активными компонентами этой композг являются аминокислоты, пептиды и широкий спектр витаминов (А, В1, В2, ВЗ. В12, С, Д, Е). Данная композиционная форма оказывает благотворное влияни регенерационные процессы и обладает пластической функцией. Рекомендуется применения при болезнях метаболического профиля.

Исследование, проведенное на репрезентативной группе больных различными степенями алиментарного ожирения, с привлечением биохимиче( методов диагностики, позволило выявить положительный эффект лече профилактических пищевой композиций "Золотой рог" с ЭХА, направлен; главным образом, на улучшение потенциала антиоксидантной системы оргаш Данные клинического изучения действия этих БАД свидетельствуют, чт комплексной терапии ишемической болезни сердца они нормализуют липщ обмен, достоверно понижая коэффициент атерогенности. К концу второго ме терапии уровень систолического артериального давления у больных, по дан казуального измерения, снижается на 20%, по сравнению с исходным. Клинич антиоксидантный эффект БАД проявился в увеличении порога толерантное физической нагрузке и преимущественном уменьшении эпизодов безбол ишемии миокарда. На фоне курсовой терапии выявлено позитивное влияни психоэмоциональный статус больных.

Результаты клинических испытаний свидетельствуют о хорошей ереносимости и высоких органолептических свойствах композиций "Золотой эг", которые нормализуют ритм сердечной деятельности, способствуют снижению герогенного фактора, оказывают положительное влияние на состояние белкового углеводного обмена, гепатобилиарной системы и системы гемостаза (Иванова и э., 1999, 2000).

Целесообразно рекомендовать применение БАД "Золотой рог" в лечебно-эофилактических целях при соматических заболеваниях, сопровождающихся фушением липидного обмена и снижением антиоксидантной защиты организма |жирение, атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь, ;йроциркуляторная дистония).

Заключение

Прогрессирующее из года в год освоение биоресурсов Мирового океана и язанное с этим истощение их запасов и накопление большого количества отходов авит задачи комплексного и полного использования океанического сырья. В :зультате возникает необходимость в технологиях комплексной и безотходной реработки этих ресурсов для получения полезных высокорентабельных юдуктов. Поэтому развитие биотехнологических исследований, направленных на 1иск БАВ морских гидробионтов, и разработка эффективных приемов их влечения является ключевым в процессе создания новых лекарственных 1епаратов, косметических и парафармацевтических средств и функциональных юдуктов питания. Следует отметить, что до последнего времени основные карственные препараты производились с применением микробного сырья, земных растений и животных. Проведенные исследования показали рспективность использования океанических ресурсов для получения карственных препаратов, лечебно-профилактических средств охраны труда, 'нкциональных продуктов питания и биологически активных добавок! >епараты, созданные на основе БАВ морского происхождения, обладают фоким спектром фармакологического действия, а некоторые из них могут быть несены к препаратам нового поколения - метаболическим корректорам.

ВЫВОДЫ

Определены виды и ресурсный потенциал возобновляемого океанического сырья, отходов рыбоперерабатывающей промышленности и марикультуры как перспективных источников БАВ, обладающих коллагенолитической активностью, противовирусным, антикоагулянтным, антидотным, противоопухолевым и противовоспалительным действием.

Разработаны технологии получения БАВ из отходов промышленной переработки океанического сырья (комплекс пептид-гидролаз из гепатопанкреаса краба, гидролизаты белков рыб и моллюсков, лектины, биогликан митилан, спинохром Е, уронофукан) и непромысловых видов гидробионтов (эхинохром А, зостерин, полифенольный комплекс, розмариновая кислота, дисульфат лютеолина, астаксантин, коллагены и их пептиды).

3. Впервые на основе БАВ морских гидробионтов - пигмента морских е эхинохрома А и комплекса протеолитических ферментов камчатского кра< созданы новые лекарственные препараты "Гистохром" и "Коллагеназа I которые используются в медицине для лечения кардиологичес офтальмологических и гнойно-некротических заболеваний.

4. Предложено и апробировано использование комплекса пептид-гидр^ "Коллагеназа" в ветеринарии, производстве косметических и моющих cpei микробиологической, кожевенной и пищевой промышленности.

5. Установлено, что полигидроксинафтохинон морских ежей (эхинохром нормализует нарушения липидного и углеводного обмена, способст: коррекции эндотелиальной дисфункцию, увеличивает уровень N0, сни> количество кортизола в крови и может применяться в качестве средства леч< и профилактики метаболического синдрома.

6. Разработана технология получения зостерина из морских трав семей Zosteraceae и определены медико-биологические свойства этого пектина.

7. Новая технология переработки морских трав сем. Zosteraceae позволяет полу полифенольные соединения (розмариновая кислота, 7,3'-дисульфат лютеол лютеолин, диосметин, хризоэринол, кофейная килота и ее этиловый 3<J которые обладают не только витаминной, но и другими видами биологиче( активности, в том числе противовирусными и канцерпревентивными свойств и могут являться перспективными лечебно-профилактическими препаратами.

8. Разработана технология комплексной переработки морской звезды Ра pectinifera, позволяющая получать биологически активные пептиды коллаге обогащенные астаксантином каротиноидные препараты, которые прояв; иммуномодулирующую, противовоспалительную и антиоксидант активности.

9. Парафармацевтические препараты "Зостерин", "Гербамарин", "Золотой \ "Экстракт морского ежа", "Марихит" и "Хитохром С", напитки группы "1 прошли клиническую апробацию и выпускаются в России более 20 лет.

10. Технологии получения лекарственных субстанций (эхинохром А и комп пептид-гидролаз "Коллагеназа") внедрены на опытном производстве ТИ ДВО РАН.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Монография

1. Лоенко Ю.Н., Артюков A.A., Козловская Э.П., Мирошниченко В.А., Еляков Зостерин / Владивосток: Дальнаука, 1997. 212 с.

Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК, и международ

журналах

2. Пирожникова В.В., Артюков A.A. Выделение и свойства дезоксирибонукл из молок горбуши (Oncorhynchus gorbuscha (Walb.) // Известия СО АН С< Сер. биол. 1987. №3. С. 112-115.

. Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е., Артюков А.А., Кофанова Н.Н. Очистка и характеристика коллагенолитической протеазы А из гепатопанкреаса Paralithodes camtschciticci // Биохимия. 1988. Т. 53. № 11. С. 1844-1849.

. Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Лямкин Г.П., Глазкова В.Е., Руцкова Т.А. Лектины и агглютинины морских водорослей II Раст. ресурсы. 1990 Т 26 № 2 С 263274.

. Попов A.M., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Еляков Г.Б. Изучение фармакокинетики зостерина - пектина из морской травы Zostera asiatica И Докл АН СССР. 1990. Т. 315. № 1. С. 232-235.

. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Еляков Г.Б. Биологически активные полисахариды морских водорослей и морских цветковых растений // Раст ресурсы. 1991. Т. 27. № 3. С. 150-160.

Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Оводова Р.Г. Лектины морских беспозвоночных // Успехи современной биологии. 1992 Т 112 №5-6 С 785794.

Шапошникова Г.М., Бородина Н.П., Снегирева А.Е., Шевлягин В.Я., Лоенко Ю.Н., Попов A.M., Артюков А.А., Еляков Г.Б. Ингибирующее влияние полисахаридов морского генеза на развитие вирусиндуцированного лейкоза Раушера // Докл. РАН. 1992. Т. 324. № 4. С. 881-884. Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е., Артюков А.А. Физико-химические свойства коллагенолитической протеазы С камчатского краба // Биохимия 1992 Т 57 № 1.С. 40-45. ' • • • -

). Sakharov I.Y., Dzunkovskaya A.V., Artyukov A.A., Zakharova N.N. Purification and some properties of elastase from hepatopencreas of king crab Paralithodes camtschatica II Сотр. Biochem. Physiol. 1993. V. 106B, N 3. P. 681-684. . Sakharov I.Y., Litvin F.E., Artyukov A.A. Purification and characterization of 2 serine collagenolytic proteases from crab Paralithodes camtschatica И Comp Biochem. Physiol. 1994. Vol. 108B, N4. P. 561-568.

:. Rasskazov V.A., Elyakova L.A., Kozlovskaya E.P., Sova V.V., Artyukov A.A. Hydrolytic enzymes of marine invertebrates and prospects for their utilization // Marine Technol. Soc. J. 1996. Vol. 30, N 1. P. 29-34.

. Касьяненко Ю.Н., Ковалева Ю.В., Эпштейн Л.М., Артюков А.А. Получение и свойства производных ДНК из молок лососевых // Известия ТИНРО 1997 Т 120. С. 37-43.

. Крылова С. Г., Зуева Е. П., Разина Т. Г., Амосова Е. Н., Попов А. М., Артюков А.А., Козловская Э. П. Влияние апотромбостатина и тиакарпина на эффективность цитостатической терапии крыс с перевиваемой опухолью II Вестник ДВО РАН. 2007. № 6. С. 111-115.

. Лупач Н.М., Потапов В.Н., Хлудеева Е.А., Баофен Я., Артюков А.А., Лукьянов П.А. Оксидантный статус и эндотелиальная дисфункция у больных стабильной стенокардией II Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2007. № 25. С. 51-

16. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Майстровская С Козловская Э.П. Противовирусная активность комплексного npenaj розмариновой кислоты, полученной из Zostera asiatica в отношении возбудит клещевого энцефалита // Тихоокеанский мед. журн. 2009. № 3. С. 86-88.

17. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Майстровская О.С., Попов А.М., Артюков А Козловская Э.П. Изучение активности препарата Люромарин in vitr< отношении вируса клещевого энцефалита // Антибиотики и химиотерапия. Ъ

Т. 55. № 7-8. С. 17-19.

18. Ehrlich H., Elkin Yu.N., Artyukov A.A., Kozlovskaya E., Stomk V.A., Safrc P.P., Kurek D.V., Bazhenov V.V., Kummer K., Vyalikh D., Molodtsov S.L., Su V.N., Born R., Ruhnow M., Meissner H., Richter G. The Spines of sand di Scaphechinus mirabilis (Agassiz 1863): analytical and structural study // J. i Microscopy Res. 2010. V. 5. N 2. P. 100-109.

19. Елькин Ю.Н., Чередниченко А.И., Кольцова E.A., Артюков А.А. M спектрометрия с ионизацией захватом электронов эхинохрома А // M спектрометрия. 2011. Т. 8. № 2. С. 147-149.

20. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская . Изучение эффективности препарата Люромарин при эксперименталь клещевом энцефалите у мышей // Антибиотики и химиотерапия. 2011. T. 5( 7—8 С 13—15

21. Крылова Н.В., Попов А.М., Леонова Г.Н., Артюков А.А., Майстровская С Сравнительное изучение противовирусной активности лютеолина и дисульфата лютеолина // Антибиотики и химиотерапия. 2011. Т. 56, № 11—17-10.

22. Попов А.М., Артюков А.А., Глазунов В.П., Мандрон Е.В., Кривошапко С Козловская Э.П. Противоопухолевая и антикоагулянтная активн коллагенового белка из голотурии Apostichopus japonicus, модифицирован протеолитическими ферментами // Биология моря. 2011. Т. 37, № 3. С. 217-2:

23. Попов А.М., Кривошапко О.Н., Артюков А.А. Сравнительная оц фармакологической активности лютеолина и 7,3'-дисульфата лютеолина моделировании разных патологий // Биофарм. журн. 2011. Т. 3, № 4. С. 27-33.

24. Попов А.М., Портнягина О.Ю., Артюков А.А., Санина Н.М., Мазейка i Костецкий Э.Я., Цыбульский А.А Адъювантный эффект тубуля} иммуностимулирующих комплексов, модифицированных эхинохромом J отношении порового белка из Yersinia pseudotuberculosis II Мед. иммунол(

2011. Т. 13, №2-3. С. 139-144.

25. Цыбульский А В., Попов А.М., Артюков А.А., Костецкий Э.Я., Кривош О.Н., Мазейка А.Н., Козловская Э.П. Сравнительное изучение лечеб действия лютеолина, розмариновой кислоты и эхинохрома А экспериментальной кардиопатологии индуцированной стрессом // Бис химия. 2011. Т. 57, № 3. С. 314-325.

i. Ehrlich H., Elkin Yu. N.. Artyukov A.A., Stonik V.A., Safronov P.P., Bazhenov V.V., Kurek D.V., Varlamov V.P., Born R„ Meissner H., Richter G. Simple method for preparation of nanostructurally organized spines of sand dollar Scaphechinus mirabilis (Agassiz, 1863)//Marine Biotechnol. 2011. V. 13, N3. P. 402-410. '. El'kin Y.N., Cherednichenko A.I., Kol'tsova E.A., Artyukov A.A. Electron capture mass spectrometry of echinochrom A // J. Anal. Chem. 2011. V. 66 N 14 P 14771479.

. Krivoshapko O.N., Popov A.M., Artyukov A.A., Kostetsky E. Y. Peculiarities of the corrective effects of polar lipids and bioantioxidants from sea hydrobionts in impairments of lipid and carbohydrate metabolism // Biochemistry (Moscow) Suppl. Ser. B: Biomed. Chem. 2011. Vol. 5, N 2. P. 152-157.

. Артюков A.A., Попов A.M., Цыбульский A.B., Кривошапко О.Н., Полякова H.B. Фармакологическая активность эхинохрома А отдельно и в составе БАД "Тимарин" // Биомед. химия. 2012. Т. 58, № 3. С. 281-290.

Патенты

. A.c. 1343591 СССР, МКИ4 А 61 К 35/56. Способ получения коллагеназы / Сахаров И.Ю., Джунковская A.B., Артюков A.A., Сова В.В., Саканделидзе О Г Козловская Э.П. № 3992368/28-14. Заявл. 13.12.85. Опубл. 30.04.92. Бюл. № 16 . A.c. 1464322 СССР, МКИ4 А 61 К 37/46. Способ получения протеина, обладающего противоопухолевой активностью / Оводова Р.Г., Глазкова В.Е., Артюков А.А, Курика A.B., Беседнова H.H., Лоенко Ю.Н., Оводов Ю.С № 3972074/28-14. Заявл. 03.10.85. Опубл. 07.03.89. Бюл. № 9.

A.c. 1526226 СССР, МКИ4 С 12 N 9/64. Способ получения коллагеназы / Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е, Артюков A.A., Кофанова H.H. № 4340904/30-13 Заявл. 09.12.87. Опубл. 30.11.89. Бюл. №44.

A.c. 1567626 СССР, МКИ5 С 12 N 11/04. Способ получения иммобилизованных клеток, обладающих сорбитолдегидрогеназной активностью / Кощеенко CA., Донова М.В., Ковалев В.В., Артюков A.A., Оводова Р.Г. № 4379646/31-13 Заявл. 17.02.88. Опубл. 30.05.90. Бюл. № 20. A.c. 1693051 СССР, МКИ5 С 12 N 11/04. Способ получения гранулированного ¡иокатализатора / Ковалев В.В., Донова М.В., Артюков A.A. № 4729056/13. !аявл. 08.08.89. Опубл. 23.11.91. Бюл. №43.

Пат. 1508535 Российская Федерация, МКИ4 С 07 С 50/32. Способ получения ,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков A.A., Кочергина \Ю., Купера Е.В., Кольцова Е.А., Петухов П.В. № 4328761/31-04. Заявл. 4.09.87. Опубл. 27.08.96. Бюл. № 24.

Пат. 1624973 Российская Федерация, МКИ5 С 08 В 37/00 /С 08 J 11/04. Способ олучения биогликана из мидий / Оводова Р.Г., Глазкова В.Е., Оводов Ю.С., 1олчанова В.И., Гефт В.Н., Михейская Л.В., Артюков A.A., Лоенко Ю.Н № 648483/05. Заявл. 26.01.89. Опубл. 20.08.96. Бюл. № 23.

37. Пат. 1782601 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 35/78. Способ леч< гастроэнтерологических заболеваний / Мирошниченко В.А., Папернова H Оводов Ю.С., Оводова Р.Г., Щеникова Н.В., Лямкин Г.П., Артюков A.A., Ло Ю.Н. № 4877596/14. Заявл. 02.10.90. Опубл. 23.12.92. Бюл. № 47.

38. Пат. 1814764 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 31/557 /А 61 К 4' Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран / Гаф Ю.М., Василенко С.К., Артюков A.A., Костив Е.П. № 4848928/14. 3: 20.04.90. Опубл. 20.03.95. Бюл. № 8.

39. Пат. 1833544 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 31/33. Веще« проявляющее кардиопротекторную активность / Левицкий Д.О., Лебедев > Садретдинов С.М., Швилкин A.B., Афонская Н.И., Руда М.Я., Ундровинас у Розенштраух Л.В., Флейдервиш И.А., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Коль Е.А., Артюков A.A., Глебко Л.И., Новиков В.Л., Ануфриев В.Ф., Еляков Серебрякова Л.И., Цкитишвили О.В., Черпаченко Н.М. № 4764884/14. 3¡ 06.12.89. Опубл. 07.08.93. Бюл. № 29.

40. Пат.№ 1699350 СССР МПК С 12 N 9/64 Способ очистки коллагеназы / Сах И.Ю., Артюков A.A., Березин В.И. № 4806988. Заявл. 29.03.90. Опубл.15.1 Бюл. №31.

41. Пат. СССР №1833167 (приоритет от 13.12.91). Безалкогольный нап "FLORA-VITA" / Платова Е.А., Кудряшова A.A., Артюков A.A., Лоенко К Иванов Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев A.B., Козловский В.А.

42. Пат. СССР № 1833165 (приоритет от 22.12.91). Безалкогольный напиток "V MARINA"/ Платова Е.А., Кудряшова A.A., Артюков A.A., Лоенко Ю.Н., Ив Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев A.B., Козловский В.А.

43. Пат. СССР № 1833166 (приоритет от 13.12.91). Безалкогольный тонизирук напиток "ALGUE-VITA" / Платова Е.А., Кудряшова A.A., Артюков A.A., Лс Ю.Н., Иванов Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев A.B., Козловский В.А

44. Пат. 1836085 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 31/18, 35/60, А 23 J Способ получения белкового гидролизата / Артюков A.A., Козловская Сахаров И.Ю., Кофанова H.H., Лагуткин Н.Г., Платова Е.А., Федосов Ю. 5037717/14. Заявл. 18.05.92. Опубл. 23.08.93. Бюл. № 31.

45. Пат. 1836100 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 37/18, 35/60, А 23 J Способ получения белкового гидролизата / Артюков A.A., Кофанова Балаганский А.П., Сахаров И.Ю., Платова Е.А., Федосов Ю.В. № 503771 Заявл. 18.05.92. Опубл. 23.08.93. Бюл. № 31.

46. Пат. 2000064 Российская Федерация, МКИ5 А 23 L 1/0524. Способ получ пектина из морских трав / Артюков A.A., Лоенко Ю.Н., Ковалев В.В., Пл! Е.А., Федосов Ю.В., Еляков Г.Б. № 5037519/13. Заявл. 15.04.92. Опубл. 07.С Бюл. № 33.

47. Пат. № 2014086 Российская Федерация, МКП А 61 L 15/12. Способ удаг некротических тканей / Сахаров И.Ю., Глянцев С.П., Адамян A.A., Добыш Литвин Ф.Е., Артюков A.A., Кузнецова В.А. № 5002616/14. Заявл. 19.С Опубл. 15.06.94. Бюл. № 14.

Пат. 2019186 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 35/80. Способ ингибиции ВИЧ-инфекции / Быковский А.Ф., Миллер Г.Г., Покидышева Л.Н., Титова И.В., Артюков A.A., Попов A.M., Прозоровский C.B., Лоенко Ю.Н., Хесс ДжозефОУБ),' Еляков Г.Б., Стоник В.А., Исаков В.В. № 4915132/14. Заявл. 28.02.91 Опубл' 15.09.94. Бюл.№ 17.

'. Пат. 2039460 Российская Федерация, МКИ6 А 23 J 3/00. Способ получения белкового гидролизата / Артюков А.А, Козловская Э.П., Козловский A.C., Кофанова H.H., Альшевская Е.К., Сахаров И.Ю., Вожжова Е.И. № 93031307/13' Заявл. 09.06.93. Опубл. 20.07.95. Бюл. № 20.

. Пат. 2040261 Российская Федерация, МКИ6 А 61 К 35/26. Способ получения гемоцианина / Артюков А.А, Козловский A.C., Козловская Э.П., Руцкая Т.А Сахаров И.Ю. № 93028930/14. Заявл. 18.06.93. Опубл. 27.07.95. Бюл. № 21. . Пат. № 2031939 Российская Федерация. МКП С12 N1/20 Способ получения основы питательных сред для культивирования микроорганизмов / Гиршович Е.С.; Сахаров И.Ю.; Герасимова Г.А.; Козлова Н.В.; Артюков A.A.; Литвин Ф Е № 93016879/13. Заявл. 31.03.1993. Опубл. 27.03.1995. Бюл. № 24. . Пат. 2055482 Российская Федерация, МКИ6 А 23 J 3/04, 3/00, 3/34, А 61 К 35/60. Способ получения белково-нуклеинового гидролизата / Гафуров Ю.М., Козловская Э.П., Рассказов В.А., Галкин В.В., Артюков A.A., Козловский A.C.', Арзамасцев Е.В. № 94017640/13. Заявл. 13.05.94. Опубл. 10.03.96. Бюл. № 7.

Пат. 2058135 Российская Федерация, МКИ6 А 61 К 7/50, С 11 D 3/386. Биологическия добавка к моющим средствам для удаления белковых загрязнений Артюков A.A., Козловская Э.П., Козловский A.C., Гафуров Ю.М., Батырева ^.К., Сахаров И.Ю. № 93028929/14. Заявл. 18.06.93. Опубл. 20.04.96. Бюл. № 11. Пат. 2088104 Российская Федерация, МКИ6 А 23 J 3/34, 3/30, 3/04, 3/08, 3/10, 1/12, 3/14. Способ получения белковых гидролизатов из белоксодержащего сырья Козловская Э.П., Артюков A.A., Альшевская Е.К., Козловский A.C., ¡алаганский А.П., Корниенко В.Г. № 96108006/13. Заявл. 30.04.96 Опубл' 7.08.97. Бюл. № 24.

Пат. 2092077 Российская Федерация МКИ6 А 23 L 1/09, 1/30? А 61 К 35/78. композиция ингредиентов для сиропа бальзама "Гербамарин" / Гафуров Ю.М., [оенко Ю.Н., Горовой П.Г., Рассказов В.А., Козловская Э.П., Козловский A.C., фтюков A.A., Емец Ю.А., Мазурик В.Г., Колей О.Н., Савостьянова Г.Е., Еляков '.Б., Бокарев A.B. №. 96121711/13. Заявл. 14.11.96. Опубл. 10.10.97.. Бюл. № 28. Пат. 2093046 Российская Федерация, МКИ6 А 23 L 1/30, 1/308, А 61 К 35/78, А 3 L 2/00. Лечебно-профилактическая пищевая композиция «Гербамарин» / [оенко Ю.Н., Козловская Э.П., Артюков A.A., Ковалев В.В., Козловский A.C., оровой П.Г., Гафуров Ю.М., Рассказов В.А., Попов A.M., Еляков Г.Б. № 6108185/13. Заявл. 06.05.96. Опубл. 20.10.97. Бюл. № 29. Пат. 2093166 Российская Федерация, МКИ6 А 61 К 35/39. Ранозаживляющее эедство "Коллагеназа КК" широкого спектра действия / Козловская Э.П., ртгоков A.A., Козловский A.C., Вожжова Е.И., Кофанова H.H., Еляков Г.Б. № 422189/14. Заявл. 29.12.95. Опубл. 20.10.97. Бюл. № 29.

58. Пат. 2122856 Российская Федерация, МКИ 61К35/60. Способ получ< нуклеопротеидного комплекса / Эпштейн JIM., Касьяненко Ю.Н., Артюков . №95111141/14. Заявл. 28.06.95. Опубл. 10.12.98.

59. Пат. 2134107 Российская Федерация, МКИ6 А 61 К 31/05, 9/08. Преп "Гистохром" для лечения воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев ( Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков A.A. № 98118370/14. Заявл. 2.1< Опубл. 10.08.99. Бюл. № 22.

60. Пат. 2137400 Российская Федерация, МКИ6 А 23 L 1/30, 1/305, 1/308, А ( 35/78, 35/12. Способ производства лечебно-профилактической пищ композиции «Золотой Рог» / Козловская Э.П., Лоенко Ю.Н., Артюков i Козловский A.C., Максимов О.Б., Елякова Л.А., Звягинцева Т.Н., Еляков Эпштейн Л.М., Касьянов С.П., Акулин В.Н. № 98108343/13. Заявл. 12.05.98.1 №26.

61. Пат. 2137472 Российская Федерация, МКИ6 А 61 К 31/05, 9/08. Лекарстве* препарат "Гистохром" для лечения острого инфаркта миокарда и ишемиче болезни сердца / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова 1 Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков A.A. № 98118361 Заявл. 12.10.98. Опубл. 20.09.99. Бюл. № 26.

62. Пат. 2165161 Российская Федерация, МПК7 А 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, G 3/06, А 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. К Мазурик В .Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко . Козловская Э.П., Козловский A.C., Артюков A.A., Рассказов В.А., Еляков Попов A.M. № 2000117778/13. Заявл. 07.07.00. Опубл. 20.04.01. Бюл. № 11.

63. Пат. 2165162 Российская Федерация, МПК7 А 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, G 3/06, А 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. В Мазурик В.Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко . Козловская Э.П., Козловский A.C., Артюков A.A., Рассказов В.А., Еляков Попов A.M. № 2000117779/13. Заявл. 07.07.00. Опубл. 20.04.01. Бюл. № И.

64. Пат. 2165719 Российская Федерация, МПК7 А 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, G 3/06, А 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. К Мазурик В.Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко . Козловская Э.П., Козловский A.C., Артюков A.A., Рассказов В.А., Еляков Гафуров Ю.М., Горовой П.Г., Бокарев A.B. № 2000117780/13. Заявл. 07.0 Опубл. 27.04.01. Бюл. № 12.

65. Пат. 6,384,084 США, МПК7 А 61 К 31/05. Histochrome and its therapeutic и ophthalmology disease / Elyakov G.B., Maximov O.B., Mischenko N.P., Kol EA Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. App 09/832,789, Filed: Apr. 12,2001. Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118370 (RU).

66. Пат. 6,410,601 США, МПК7 A 61 К 31/12. Histochrome and its therapeutic i: acute myocardial infarction and ischemic heart disease / Elyakov G.B., Maximov Mischenko N.P., Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya Artjukov A.A. Appl. № 09/832,864, Filed: Apr. 12, 2001. Priority data: Oct. 12, № 98118369 (RU).

7. Заявка WO 00/21518 Россия, МПК7 А 61 К 31/122, 9/08, А 61 Р 43/00. Лекарственный препарат "Гистохром"для лечения глазных заболеваний / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков A.A. № PCT/RU99/00248. Заявл. 21 07 99 Опубл' 20.04.00. Приор. 12.10.98, № 98118370 (Россия).

5. Заявка WO 00/21519 Россия, МПК7 А 61 К 31/122, 9/08, А 61 Р 9/10. Лекарственный препарат "Гистохром"для лечения острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков A.A.' PCT/RU99/00249. Заявл. 21.07.99. Опубл. 20.04.00. Приор. 12.10.98, № 98118369 (Россия).

>. Pat. ЕР 1121929 B1 European Patent Office, Int.CI.7 A 61 К 31/122/ Composition comprising di- and trisodiumsalts of echinochrome for treating ocular conditions / Elyakov G.B., Maximov О.В/, Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. 03.11.2004. Filed: 21.07.1999. Priority data' Oct. 12, 1998, №98118369 (RU).

». Pat. EP 1121930 B1 European Patent Office, Int.CI.7 A 61 К 31/122. Drug preparation "Histochrom" for treating acute myocardial infarction and ischemic heart disease / Elyakov G.B., Maximov O.B/,Mischenko N.P., Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. 14.11.2007. Filed" 21 07 1999 Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118369 (RU).

. Пат. 2280076 Российская Федерация, МПК С 12N9/48, С 12N9/64. Ферментный препарат из гепатопанкреаса промысловых видов крабов и способ его получения / Артюков A.A., Мензорова Н.И., Козловская Э.П., Кофанова H.H., Козловский A.C., Рассказов В.А. №2004135771. Заявл. 06.12.04. Опубл. 20.07.06. Бюл. №20. . Пат. 2283298 Российская Федерация, МПК С 07С 50/32. Способ получения 2,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков A.A., Купера Е.В., Кольцова Е.А.Ю Кочергина Т.Ю., Руцкова Т.А. № 2005126564. Заявл. 22 08.05' Опубл. 10.09.06. Бюл. №25.

. Пат. 2286162 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 17/00. Способ лечения кожных проявлений склеродермии / Козловская Э.П., Артюков А.А, Козловский A.A., Самцов A.B., Барбинов В.В., Озерская О.С., Атаманчук A.A. № 2005111606. Заявл. 19.04.05. Опубл. 27.10.05. Бюл. №30.

Пат. 2286685 Российская Федерация, МПК А 23 L 1/333. Способ получения железосодержащей биологически активной пищевой добавки / Руцкова Т.А., Кофанова H.H., Козловская Э.П., Глазунов В.П., Артюков A.A. № 200510788б' Заявл. 21.03.05. Опубл. 10.11.06. Бюл. №31. Пат. 2286791 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 17/02. Способ [ечения рубцов / Козловская Э.П., Артюков А.А, Козловский A.A., Самцов A.B., Барбинов В.В., Озерская О.С., Атаманчук A.A. № 2005111607. Заявл 19 04 05 Опубл. 10.11.06. Бюл. №31.

76. Пат. 2302250 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 7/02. Среде обладающее антикоагулянтным действием, и способ его получения / Попов А Артюков А.А, Ли И.А., Глазунов В.П., Кофанова H.H., Козловская Э.П 2006104772/15. Заявл. 15.02.06. Опубл. 10.07.07. Бюл. №19.

77. Пат. 2302429 Российская Федерация, МПК С 08 В 037/15. Способ получ( фукоидана из ламинарии / Врищ Э.А., Ковалев H.H., Эпштейн Л.М., Якуш ] Беседнова H.H., Артюков A.A., Кузнецова Т.А., Запорожец №2005132687/13. Заявл. 24.10.2006. Опубл. 10.07.07. Бюл.№10.

78. Пат. 2335127 Российская Федерация, МПК А 01 N 1/02. Способ консерв! плоского морского ежа / Артюков А.А, Купера Е.В., Руцкова Т.А., Глаз; В.П., Долгих С.Н., Козловская Э.П. № 2007123813/15. Заявл. 25.06.07. Ог

10.10.08. Бюл. №28.

79. Пат. 2337696 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 3/06. Сп коррекции нарушения липидного обмена / Потапов В.Н.. Лупач Н.М., Весел Е.Ю., Хлудеева Е.А., Артюков A.A., Курика A.B., Козловская Э.П., Расск В.А.,Долгих С.Н. № 2007109006/14. 3аявл.12.03.06. Опубл. 10.11.08. Бюл. №

80. Пат. 2340216 Российская Федерация, МПК А 23 L 1/30. Биологически акти добавка к пище и способ ее получения / Артюков A.A., Глазунов ] Козловская Э.П., Козловский A.C., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Курика , Попов А.М.№ 2007122609/13. Заявл.15.06.07. Опубл. 10.12.08. Бюл. № 34

81. Пат. 2352554 Российская Федерация, МПК С07С 50/32. Способ получ 2,3,5,7,8,-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков A.A.. Козлов Э.П.,' Купера Е.В., Руцкова Т.А.. Балаганский А.П.. Глазунов В.П., Махан В.В.' № 2007131681. Заявл. 20.08.07. Опубл. 20.04.09. Бюл. № 11.

82. Пат. 2359686 Российская Федерация, МПК А61К 35/56, А61Р 9/00. Сп коррекции эндотелиальной дисфункции / Потапов В.Н.. Лупач Н.М., Весел Е Ю Хлудеева Е.А., Артюков A.A., Курика A.B., Козловская Э.П., Раса В.А., Долгих С.Н., Лукьянов П.А. № 2007125205/14. Заявл. 03.07.07. Ol

27.06.09. Бюл. № 18.

83. Пат. 2360683 Российская Федерация, МПК А61К 31/722, А61Р Композиция для коррекции патологических нарушений углеводного, липца обмена и антиоксидантного статуса организма / A.A. Артюков, Э.П. Козлов А.М. Попов, В.П. Глазунов, A.C. Козловский, Е.В. Купера, Т.А. Руцкова, Курика и А.П. Балаганский. № 2008114994. Заявл. 16.04.08. Опубл. 10.07.09. № 19.

84. Пат. 2362573 Российская Федерация, МПК А61К 35/56, А61К 38/17. Сг получения спинохрома А и белка морских ежей, взаимодействующе полигидроксинафтохиноном / A.A. Артюков, Е.В. Купера, Т.А. Руцкова, Кофанова, A.B. Курика, В.П. Глазунов, Э.П. Козловская. № 2008114993. 3 16.04.08. Опубл. 27.07.09. Бюл. № 21.

85. Пат. 2396244 Российская Федерация, МПК С07С 49/215. Способ полу пурпурогаллина / Артюков A.A.. Маханьков В.В., Купера Е.В., Руцкова Козловская Э.П. № 2008151492. Заявл. 23.12.08. опубл. 10.08.10. Бюл. № 22.

. Пат. 2401827 Российская Федерация, МПК С07С 69/732. Способ получения розмариновой кислоты / Артюков A.A., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Маханьков В.В., Новиков В.Л., Глазунов В.П., Козловский A.C., Попов A.M., Козловская Э.П., № 2009105341, заявл. 16.02.2009. опубл. 20.10.10. Бюл. № 29. . Пат. 2411939 Российская Федерация, МПК А 61 К 31/122. Способ получения 2,3,6,7-тетрагидроксинафтазарина / Артюков A.A., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Маханьков В.В., Глазунов В.П.,. Козловская Э.П., Кольцова Е.А., N° 2009126951' заявл. 13.07.2009. опубл. 20.02.11. Бюл. № 5.

. Пат. 2432959 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/88. Средство, обладающее антиоксидантным, кардиопротекторным, противодиабетическим, противовоспалительным, гепатопротектовным, противоопухолевым и противовирусным действием / Попов A.M., Артюков А.А, Кривошапко О.Н., Крылова Н.В, Леонова Г.Н., Козловская Э.П. № 2010141686/15 Заявл' 11.10.2010. Опуб. 10.11.11. Бюл. №31.

Пат. 2432960 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/88. Способ получения 7,3'-дисульфата лютеолина / Артюков А.А, Кочергина Т.Ю., Руцкова Т.А., Купера Е.В., Новиков В.Л., Глазунов В.П., Маханьков В.В., Козловская ЭП № '>010141321. Заявл. 7.10.2010. Опуб. 10.11.11. Бюл. № 31. Способ получения каротиноидного комплекса из морских звезд / Артюков А.А, 'уцкова Т.А., Купера Е.В., Маханьков В.В., Глазунов В.П., Козловская Э.П.' Толожительное решение о вылаче патента от 25.07.2012 по заявке № 2011127572 15(040853). Заявл. 05.07.2011.

Статьи, опубликованные в других изданиях

Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков A.A., Руцкова Т.А., Оводова Р.Г. 1ротивоопухолевая активность нового галактозомпецифического лектина из [ромыслового моллюска Crenomytüus grayanus // Химиотерапия опухолей в :ССР. 1987. № 50. С. 120-123.

Лоенко Ю.Н., Оводова Р.Г., Ковалев В.В., Артюков A.A. Противоопухолевая ктивность зостерина - пектина из морской травы Zosteraceae // Химиотерапия пухолей в СССР. 1987. № 50. С. 141-144.

Глазкова В.Е., Купера Е.В., Лоенко Ю.Н., Артюков A.A. Оптимизация стадии кстракции в технологическом процессе получения митилана, обладающего ммуностимулирующей противоопухолевой активностью II Химиотерапия пухолей в СССР. 1988. № 51. С. 120-125.

Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков A.A., Михайлов В.В., Курика A.B., »водова Р.Г., Руцкова Т.А. К характеристике нового галактозоспецифического ектина из мидии Японского моря Crenomytüus grayanus II Изучение и рименение лектинов. Тарту, 1989. Т. 1: Общие вопросы. Химия и биохимия актинов (Уч. зап. Тартус. ун-та; Т. 869. Тр. по химии, вып. 19): С. 145-147. Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Лямкин Г.П., Лоенко Ю.Н., Артюков A.A. лияние зостерина - пектина из морской травы Zostera на выживаемость ивотных с экспериментальным псевдотуберкулезом // Иерсиниозы (микро-яология, эпидемиология, клиника, патогенез, лабораторная диагностика): Тез. сесоюз. науч.-практ. конф. (12-13 сент. 1989 г.). Владивосток, 1989. Ч. 2. С. 27-29.

96. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Ковалев В.В., Иванов Модифицирующее действие зостерина на метастатический процес эксперименте // Химиотерапия опухолей в СССР. 1991. № 56. С. 53-55.

97. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Ковалев В.В., Артюков А.А., Иванов Снижение зостерином токсического действия 5-фторурацила в эксперимен-мышах // Химиотерапия опухолей в СССР. 1991.№ 56. С. 50-52.

98. Шляхова А.В., Богданович Р.Н., Артюков А.А., Козловская Иммунопрофилактика хронической патологии респираторного тракта: докл.] объед. иммунол. форума, Санкт-Петербург, 30 июня - 5 июля 2008 // иммунол. журн. 2008. Т. 2. № 2-3: С. 207-208.

99. Кривошапко О.Н., Попов А.М., Артюков А.А. Применение биоантиоксидг при нарушениях липидного и углеводного обмена //Здоровье. Медицш экология. Наука, 2009. № 4-5 (39-40). С. 86-89.

100. Попов А.М., Артюков А.А., Кривошапко О.Н., Петровичева С.Е., Цыбул£ А.В., Козловская Э.П. Противовоспалительные и иммуномодулируг свойства препарата "Люромарин" при окислительном стрессе: материалы форума "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2009", Санкт-Петербург, июня 2009 г. // Мед. иммунол. 2009. Т. 11, № 4-5. С. 331-332.

101. Попов А.М., Цыбульский А.В., Артюков А.А., Кривошапко О.Н. Вл1 лютеолина, розмариновой кислоты и эхинохрома А на иммунитет моделировании стресс-индуцированной кардиопатологии : труды межре форума "Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии междисциплинарные проблемы", (27 - 30 сент. 2010 г., Санкт-Петербург) h аллергол. журн. 2010. № 5, вып. 1. С. 228-229.

102. Попов А. М., Артюков А. А., Цыбульский А. В., Кривошапко О. H. Oi иммуномодулирующей активности эхинохрома А из морского ежа Scaphec mirabilis: XIV всерос. науч. форум Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, : мая 2011 г. // Мед. иммунол. 2011. Т. 13, № 4-5. С. 329-330.

103. Попов А. М., Артюков А. А., Мищенко Н. П., Федореев С. А., Козлове» П. Создание нанокомплексов на основе биологически активных соедго морских гидробионтов и исследование их свойств // Перспекти направления развития нанотехнологий в ДВО РАН : результаты с конф. в рамках Целевой комплексной программы фундаментальных иссл. ДВО РАН на период 2008-2012 гг. «Получение, исследован моделирование биогенных и биомиметических наноструктурирован материалов», 2011 г. - Владивосток : Дальнаука, 2011. - Т. 4. - С. 144-152.

Артюков Александр Алексеевич

Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья

Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 20.08.2012. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 3.25. Уч. изд. л. 3.2. Тираж 100 экз. Заказ № 47.

Отпечатано в типографии «БАЛС». Лицензия ПД № 20-0035. Владивосток

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора биологических наук, Артюков, Александр Алексеевич, Владивосток

Информация о работе

Артюков, Александр Алексеевич
доктора биологических наук
Владивосток, 2012
ВАК 03.02.14

Диссертация

Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы