Радиопротекторные свойства препарата "Витулин"

Дегтярев, Михаил Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Радиопротекторные свойства препарата "Витулин"
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Радиопротекторные свойства препарата "Витулин""

На правах рукописи

ДЕГТЯРЕВ Михаил Владимирович

РАДИОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА «ВИТУЛИН»

Специальность: 03.00.01 - радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2006 г.

Работа выполнена на кафедре радиологии и безопасности жизнедеятельности ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель:

Научный консультант

Офнциальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор

Курило Александр Иванович

доктор биологических наук, доцент

Тулева Надежда Павловна доктор медицинских наук, профессор Малаховский Владимир

Николаевич

кандидат медицинских наук Пустовалов Юрий Иннокентьевич Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина».

Защита состоится 9 июня 2006 г. в 13 часов на заседании

диссертационного совета Д 220.059.02 при ФГОУ ВПО «Санкт-

Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по

адресу: 196084, Санкт-Петербург, Черниговская ул., 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО

«Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной

медицины».

Автореферат разослан 8 мая 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук, доцент

Сафронов Б. Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

С 1944 г. в мире произошло более 300 аварий ядерных реакторов с выбросом радионуклидов в окружающую среду. Эти аварии происходили в различных странах и в разное время, в качестве примеров можно привести аварии на ядерном реакторе в Уиндскейле (Великобритания, 1957 г.); на атомном предприятии химкомбината «Маяк» на Южном Урале (СССР, 1957, 1967 гг.); на АЭС Тримайле-Айленд (США, 1979 г.); на Чернобыльской АЭС (СССР, 1986 г.) и на АЭС в Хамме (ФРГ, 1986 г.). Крупнейшей из них является Чернобыльская катастрофа, сопровождавшаяся выбросом в окружающую среду долгоживущих радионуклидов активностью более 50 Мки (Алексахин P.M., Корнеев H.A., Ильязов Р.Г., Сироткин А.Н. 1987г.). Опасность радиационного воздействия на крупный рогатый скот и домашних животных связана с сохранением поголовья и генофонда животных, с обеспечением продовольствием населения и другими социальными аспектами. Это ставит перед ветеринарной наукой проблему предупреждения радиационных поражений животных и разработки соответствующих средств радиационной защиты, которая имеет и общебиологическое, и медицинское значение.

Большой вклад в разработку средств радиационной защиты организма внесли Алексахин P.M.; Анненяков Б.Н.; Варданян Л.П., Воккен Г.Г.; Ильин В.Г.; Ильин Л.А.; Ильязов Р.Г.; Буров Н.И., Белов А. Д.; Клечновский И.М.; Корнеев H.A.; Перцов Л.А., Киршин В.А., Бударков В.А., Злобин B.C., Жербин Е.А., Карташов П.А., Кругликов Б.П., Маргулис У.Я., Румянцев А.П., Исамов H.H.; Пустовалов Ю.И, Курило А.И.; Сироткин А.Н, и др. Большое внимание уделялось изучению механизмов радиационного поражения. Показано глубокое угнетение естественного и искусственного иммунитета и общей резистентности организма (Бутомо Н.В., Гребенюк А.Н., Зарецкая Ю.М.; Легеза В.И., Троицкий В.Л.; Петров Р.В., Ушаков И.Б., Ярилин, A.A.; Ярмонен-ко, С.П.; Бердышев М.С, Цыб А.Ф.). В результате исследований разработан ряд радиозащитных препаратов, получивших название радиопротекторы. К наиболее эффективным из них относятся серосодержащие радиопротекторы (цистамин и гаммафос), а также агонисты биогенных аминов (индралин, нафтизин). Однако они могут применяться лишь в заданное время до облучения; их токсичность может кумулироваться; они неэффективны при облучении низкой интенсивности и при малых дозах облучения. В связи со специфичностью их действия они не находят применений вне чрезвычайной ситуации, поэтому их производство экономически невыгодно.

Другие средства повышения радиорезистентности (иммуномодуляторы, корректоры тканевого метаболизма) имеют свои недостатки (недостаточная эффективность, токсичность, влияние на артериальное давление и процессы нервного возбуждения, аллсргогенность и др.). Поэтому задача поиска эффективных и безвредных средств повышения радиорезистентности остается весьма актуальной.

В СПбГАВМ Тулевым Ю.В. был изобретен, и запущен в серийное производство новый препарат на основе пчелиного мСда - «Витулин», компоненты которого положительно влияют на иммунитет и резистентность организма к неблагоприятным воздействиям. Гипотеза о возможности его применения в качестве радиопротектора и определила основные цель и задачи работы.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение нового иммуностимулирующего препарата «Витулин» как средства противорадиационной защиты организма животных.

Исходя из поставленной цели, необходимо было решить следующие задачи:

1. В опытах на экспериментальных животных исследовать радиозащитную эффективность препарата «Витулин».

2. Определить влияние препарата «Витулин» на состояние гематологических и иммунологических показателей состава крови облученных животных

3. Изучить влияние препарата «Витулин» на проявление морфологических и ультраструктурных изменений в некоторых иммунокомпетентных органах экспериментально облученных животных.

4. Оценить вероятные механизмы радиозащитного действия препарата «Витулин» при однократном и пролонгированном введении экспериментальным животным, подвергнутым облучению.

Научная новизна работы.

Впервые доказана радиозащитная эффективность нового препарата «Витулин» как средства повышения радиорезистентности животных (крысах линии «Вистар») и определена схема его применения с целью профилактики лучевых поражений.

Впервые показано влияние препарата «Витулин» на гематологические, иммунологические и биохимические характеристики крови и морфологию иммунокомпетентных органов после облучения.

Получены данные, свидетельствующие о стимуляции ряда факторов иммунитета у облученных животных, что может быть механизмом пролонгированной профилактики лучевого поражения препаратом «Витулин».

Выявленная совокупность фармакологических свойств препарата «Витулин» позволяет ожидать, что он, по аналогии с другими радиозащитными средствами из класса иммуномоду-ляторов и корректоров тканевого обмена, будет эффективен и как средство ранней патогенетической терапии лучевого поражения, и как средство повышения радиорезистентности при пролонгированных облучениях малой интенсивности, что открывает новые перспективные задачи исследований.

Практическая значимость работы.

1. Полученные в работе доказательства радиозащитной эффективности нового нетоксичного препарата «Витулин», полученного на основе натуральных безвредных компонентов пчелиного меда, позволяют расширить спектр средств, повышающих радиорезистентность организма.

2. Предложен способ многократного применения препарата «Витулин», как наиболее рациональный и удобный при его использовании в качестве радиозащитного средства.

3. Расширен спектр возможных применений иммуномодулятора «Витулин» за счет обнаружения его радиозащитной эффективности, что повышает целесообразность производства данного препарата и его возможную экономическую эффективность.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. При однократном и многократном применении без облучения животных препарат «Витулин» не токсичен и проявляет иммуномодулирующее действие.

2. При профилактическом однократном и, особенно, многократном применении препарат «Витулин» снижает тяжесть радиационного поражения и существенно повышает выживаемость облученных животных.

3. Препарат «Витулин» оказывает положительное влияние на изменение ряда морфологических и биохимических показателей крови облученных крыс.

4. Механизм радиозащитного действия препарата «Витулин», по-видимому, связан с коррекцией тканевого метаболизма и иммуномодулирующим действием.

Апробация работы

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» «Актуальные проблемы ветеринарии» в 2001, 2002, 2003, 2004, 2006 гг.; на конференции «Белые Ночи» - «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2003).

Публикация результатов исследований

По материалам диссертации опубликовано 4 статьи, в т.ч. в научно-теоретическом журнале «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук» №5, стр 9-10,2004 г.

Реализация результатов исследований

Материалы диссертационной работы, нашедшие отражение в опубликованных статьях, используются в учебном процессе на кафедре радиобиологии и безопасности жизнедеятельности Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Результаты работы использованы в отчете по теме НИР №9 «Механизм взаимодействия магнитных, электромагнитных полей, токов промышленной частоты и ионизирующих излучений с биологическими объектами», № Гос. регистрации 0186012583, кафедры ветеринарной радиологии БЖЧС ФГОУ СПбГАВМ.

Структура и объем работы.

Работа иллюстрирована 22 таблицами, 39 диаграммами, 14 рисунками. Указатель использованной литературы включает 204 источника, из которых 45 - зарубежных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено в 2001 - 2004 годах на базе кафедры ветеринарной радиологии, БЖЧС ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» в период с 2001 по 2004 гг. Исследования биохимической структуры препарата «Витулин» проводили на кафедре биохимии, гистологические исследования иммунокомпетентных органов крыс линии «Вистар» - на кафедре патологической анатомии, гематологические исследования крови крыс - на кафедре физиологии животных ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»; облучение животных в ФГУ «Центральный научно-исследовательский рентгенорадио-логический институт» (пос. Песочный).

Для основных исследований использован препарат «Витулин», экспериментально раз-. работанный и полученный кандветнаук, доцентом Тулевым Ю.В.

Препарат «Витулин» получают из безбелковых фракций экспрессорных сортов пчелиного меда с добавлением биологически активных веществ (БАВ) - БАЕМ, содержащий в своем составе триоксифлавон-силибин; БАВ-2-серотонин и БАВ-3 - флавоновые агликаны с примесью гликозидов.

Перечень исследований, проведенных в результате экспериментов, их последовательность, кратность и показатели, по которым они осуществлялись, представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Схема запланированных экспериментов на животных

N п/п Название серии эксперимента N п/п Название исследований Показатели, по которым осуществлялись исследования Период выполнения

1 Изучение токсического действия препарата «Витулин» при введении повышенных доз. 1 Клинические окраска слизистых оболочек, состояние волосяного покрова, пищевая возбудимость, характеристика мочеиспускания, координация движений, температура тела. В течение всего времени эксперимента

2 Изучение профилактических свойств препарата «Витулин» при лучевых поражениях у белых лабораторных крыс линии «Вистар» 2 Клинические состояние волосяного покрова, координация движений, реакция на раздражители в течение всего времени эксперимента

прирост массы тела до облучения, на 1,3,6,10,14,21 и 30 сутки после облучения

3 Гематологические общий анализ до облучения, на 1,3,6, 10, 14,21, 30 сутки после облучения

лейкограмма, оценка морфологического состава клеток крови до облучения, ежедневно после облучения

4 Иммунологические фагоцитарная реакция нейтро-филов, бактерицидная активность, активность лизоцима, содержание ЦИК, уровень иммуноглобулинов. до облучения, на 1,3,6,10,14,21, 30 сутки после облучения

5 Биохимические содержание белков и белковых фракций в сыворотке крови до облучения, на 1,3,6, 10. 14,21, 30 сутки после облучения

Метод постановки токсикологического эксперимента с препаратом «Витулнн» на белых лабораторных крысах линии «Вистар».

В качестве модели было отобрано 50 клинически здоровых самцов (возраст 10 мес.) белых лабораторных крыс линии «Вистар» средней массой 196,5 г.

Для постановки эксперимента были сформированы 5 групп (по 10 крыс в каждой группе): 1 группа животных - биологический контроль; 2 - получавших препарат «Витулин» в дозе 1 мл/кг; 3 — получавших препарат «Витулин» в дозе 2мл\кг; 4 - получавших препарат «Витулин» в дозе 5мл\кг; 5 - получавших препарат «Витулин» в дозе 10мл\кг. Для определения токсичности крысам вводили препарат «Витулин» в дозах от 1.0 мл/кг до 10 мл/кг массы тела, однократно. Препарат растворяли в специальном растворителе, предоставленным производителем, с учетом дозировки и вводили подкожно. За животными наблюдали в течение 10 дней в одно и то же время суток в 12 часов дня, определяя у них температуру тела, дыхание, пульс и внешние

клинические признаки интоксикации Общеклиническое состояние экспериментальных животных оценивали визуально.

После анализа общеклинического состояния экспериментальных животных было сделано заключение, что препарат атоксичен и не вызывает гипертермической реакции у подопытных животных при введении повышенных доз Изменения в клиническом состоянии наблюдались лишь при пятикратной передозировке препарата.

Метод постановки опыта по изучению профилактических свойств препарата «Витулии» при лучевых поражениях у белых лабораторных крыс линии «Вистар».

Данную серию экспериментов проводили в Центральном научно-исследовательском рентгенорадиологическом институте и на кафедре радиологии и безопасности жизнедеятельности ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» в соответствии с методическими указаниями Министерства Здравоохранения по экспериментальному изучению радиозащитных средств (1982 г.).

Было отобрано 420 клинически здоровых самцов (возраст 10 мес.) белых лабораторных крыс линии «Вистар» средней массой 196,5 г.

Для постановки эксперимента были сформированы группы животных по 70 голов в каждой: 1 группа - биологический контроль; 2 - крысы, подвергнутые облучению без применения препарата; 3 — крысы, подвергавшиеся однократному воздействию препарата «Витулин»; 4 — крысы, подвергавшиеся многократному воздействию препарата «Витулин»; 5 - крысы, облученные после многократного применения препарата «Витулин»; б - крысы, облученные после однократного применения препарата «Витулин». Препарат «Витулин» вводился животным инъекци-онно, подкожно, в область кожной складки на холке. Животные 4 и 5 групп получали препарат в дозе 1,0 мл/кг массы тела на 1, 3, 5 сутки (0,6 мл на животное). Животные 3 и 6 групп получали препарат однократно в дозе 1,0 мл/кг массы тела.

Животных 2, 5 и 6 групп подвергли однократному тотальному облучению на аппарате РУМ-17 в дозе 7,2 Гр, мощность дозы 0,56 Гр/мин., фокусное расстояние 56 см.; время облучения 12,85 мин., сила тока 15 мА., напряжение 200 кВ, фильтр 0,5 мм Си и 1 мм А1.

Облучение контрольных и подопытных групп животных проводилось одновременно (в одной посадке).

В качестве клинических тестов служили внешние проявления заболевания, массометрия в сочетании с исследованиями периферического состава крови, изучением незавершенного фагоцитоза нейтрофилов крови, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, содержание иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Кровь для гематологических, биохимических и иммунологических исследований у экспериментальных животных брали из яремной вены на 1, 3, 6, 10, 14, 21, 30 сутки. Анализ лейкоцитарной формулы осуществляли ежедневно.

Статистическая обработка данных производилась с помощью программных пакетов StatSoft Statistica 6.0, SPSS 12 и NCSS Statistical and Data Analysis Software 2004. Оценивались принадлежность исследуемых величин закону распределения Гаусса. Рассчитывались показатели статистики: выборочная средняя (М) и стандартная ошибка выборочной средней (т) по отношению к генеральной средней популяции. Достоверность оценивалась по t-критерию Стьюдента и непараметрическому критерию знаков.

Выявление тяжести острой лучевой болезни осуществляли по методическим указаниям, разработанным Институтом биофизики при Министерстве Здравоохранения СССР (1972).

Методы клинических, гематологических, иммунологических и биохимических исследований экспериментальных животных.

Клинические исследования (окраска слизистых оболочек, состояние волосяного покрова, пищевая возбудимость, характер мочеиспускания, координация движений) проводили методом визуальной оценки, взвешивание крыс проводили на лабораторных весах ВЛКТ-500г-М.

Подсчет форменных элементов крови осуществляли аппаратом Пикаскель по общепринятой методике. Гемоглобин в крови определяли колориметрическим методом по общепринятой методике (с использованием 0,024 н раствора аммиака), цветовой показатель рассчитывали по общепринятым формулам (Бокуняева Н.И., Жевелик Ю.С., 1975). Подсчет количества клеток в мазках, окрашенных по методу Филлипсона, для выведения лейкограммы проводили четырехпольным способом по Шиллингу.

Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу Смирновой В.С.И Кузьминой Т.А. (1979). Определение опсоно-фагощпарной реакции проводили по методу Бермана В.М и Славской Е.М. Активность лизоцима сыворотки крови исследовали фотоэлектроколориметрическим методом по Дорофей-чуку А.Г. (1968). Исследования бета-лизинов сыворотки крови проводили фотоалекгрокалориметрическим методом (по Бухарину О.В., Фролову БА, Луда А.П, 1979). Белки в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом. Определение белковых фракций в сыворотке крови проводам нефелометрическим методом по Оллу и Мак-Корду в модификации Карпюка (1994). Содержание циркулирующих иммунных комплексов определяли спектрофогомегрическим методом преципитации 3,5% раствором полиэтиленгликоля (по Стефани Д.В., Вельнищев Ю.Е., 1996). Определение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом Костиной М.А. (1983 г.)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Действие препарата «Витулин» на интактных животных.

Объектом исследования стали животные 1, 3 и 4 групп. Действие препарата на иммунную систему оценивали по следующим критериям: количество форменных элементов крови, лейкоцитарной формуле, содержанию ЦИК, фагоцитарной активности, фагоцитарной интенсивности, фагоцитарному индексу, содержанию лизоцима в сыворотке крови, бактерицидной актив-

ности сыворотки, уровню иммуноглобулинов, а также состоянию органов иммунной системы (тимус, селезёнка, брыжеечные лимфатические узлы).

За весь период проведения опыта клинические показатели подопытных животных были в пределах физиологической нормы и не отличались от биологического контроля.

Гематологические показатели необлученных лабораторных 1фыс линии «Вистар».

Введение препарата «Витулин» вызывало увеличение количества лейкоцитов по сравнению с биологическим контролем уже на первые сутки после введения, и оставалось стабильно высоким до окончания опыта, причём носило более выраженный характер в группе с многократным введением препарата.

Диаграмма 1

Количество лейкоцитов у необлучённых животных

• 1 группа 3 группа - - - <4 группа

Уровень гемоглобина и количество эритроцитов в группах с применением препарата не повышался по отношению к показателям группы биологического контроля.

ЦПК в группах с введение «Витулина» достоверно повышался, причем наиболее высоким был в группе с многократным введением препарата.

Диаграмма 2

Количество эритроцитов у необлучённых животных

х 1012/л

1 3 6 10 14 21 збУтки

"""" ■ 1 группа 3 группа - - - >4 группа

Таблица 2.

Морфологический состав крови крыс линии «Вистар» биологического контроля (1 группа), группы с однократным введением препарата (3 группа) и группы с многократным введением препарата (4 группа) (М±т).

Показатель Групп? Сроки забора крови (сутки)

1 3 6 10 14 21 30

Лейкоциты Ю'/л 1 11.5*2.32 13,5±1,7 9,5±2,1 14,6±1,95 12,1 ±2,1 11,2±1,65 13,0±2,31

3 14,0±1,00" 15,0* 5,77 17,3± 3,92" 17,5* 3,78 18,0± 2,88" 18,1±1,33" 18,4*1,90"

4 16,0 ±2,30" 16,0 ±2,30 17,66 ± 0,8" 18,33 ±2,90 18,66±1,45" 18,9*1,80" 19,2±2,3"

Гемоглобин г/л 1 96,5*4,57 96,27*4,8 97,3*5,25 96,58*3,44 93,7±3,85 94,29±4,27 95,1±4,62

3 90,3 ± 6,74 90,0 ± 6,42 91,6 ±5,23 94,0 ± 9,45 97,6 ±2,33 101,6±4,45" 104,4±3,32

4 106,66 ± 11,20 107,66 ± 11,20 108,00*5,68" 110,33 ± 3,33" 115,66 ± 7,05" 116,04±3,04" 118,03±5,67*

Эритроциты 10|3/л 1 6,035±0,14 5,89±0,85 5,93±0,68 6,07±0,31 6,15±0,75 5,99±0,47 6,13*0,17

3 5,8 ±0,14 5,76 ± 0,04 5,3 ±0,11 5,58 ±0,58 5,78 ±0,12" 5,79±0,13 5,80±0,48

4 5,98 ± 0,49 5,98 ± 0,49 5,54 ± 0,20 5,72 ±0,10 5,27 ± 0,26" 5,79*0,33 5,98*0,38

Цветовой показатель у.е. 1 0,98*0,026 0,95*0,074 0,99±0,032 1,01±0,08| 0.90±0,021 0,95±0,04| 0,97±0,087

3 0,92± 0,04" 0,94± 0,066 0,98± 0,032 0,98± 0,038 0,91± 0,010 0,93±0,020 0,99*0,067

4 1,08*0,070 |,08± 0,070 1,01± 0,035 1,13± 0,017" 1,16± 0,040" 1,18±0,035" 1,17*0,014"

Таким образом, введение препарата «Витулин» стимулировало лейкопоэз, и грануло-

поэз.

Введение препарата «Витулин» стимулировало повышение содержания общего белка крови подопытных животных по сравнению с биологическим контролем. Максимальные значения в группах с однократным и многократным введением препарата отмечались на 30-е сутки опыта и составили 68,31 и 69,37 соответственно, что на 5-7% выше, чем в группе биологического контроля. Так же стимулировалось повышение содержания всех фракций белка, за исключением у-глобулинов. Более высокие значения отмечены в группе с многократным введением препарата.

Таблица 3

Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови необлученных крыс

линии «Вистар» (М±т)

Глобулины, г/л

Дни эксперимента Группы 5КИ-_ вотных Общий белок г/л Альбумины г/л а Р У

1сутки 1 6У±0Д7 30,15±05 1Ц83±0а 1323±0,12 Щ09±а15

3 65^1 ±0,4 ЗЦ0±025 11,79±0,01 13,18 ±025 Ю24±аз1

4 65,18±05 ЗЩ4±03 11JSÜ0.15 1324±Q13 6i2±ai3*

3 сутки 1 №±12 3Q17±1,1 1±0,13 13.11 ±0,17 9,51 ±0,13

3 6^0±1,1 3023*0,7 11,85 ±02 1327±Д14 lQ65±ai9*

4 66,1 ±1,1 3Q29±Q5 ll£l±CU6 1339±0,11 Ю58±02*

6 сутки 1 ед±033 29J81 ±0,74 нда±ода 13,17±Q19 9.93 ±035

3 662=Щ5 31,Св±Ср 12,ю±02 в,79±оз 93±0,45*

4 6631 ±065 31,1 ±1,0 12в±аи 14,0±028* 9,08±Q22*

10 сутки 1 65,1 ±083 29,99±0£1 120±037 1323±0,47 9^8±а07

3 6627±12 31,47±09 1231±0j6 14,05 ±Q5 8,44±Q15*

4 66*49±1,0 31&И0.96 Ц47±0Д 1421 ±0,4* 7iE±0,l*

14 сутки 1 6»i>±0,47 302±13 1037±024 1381 ±032 Ю52±0,17

3 678±Q41* 3224±026* 1276±03* 14,61 ±0,1 8,19±Q23*

4 6$0±0£1* 32,74*0,44* 13,W±Q27* Ц73±0,95 7,45±Q12*

21 сутки 1 653±0$4 3021 ±0£ UJ83±Ü33 1337±0,71 9#}±0j61

3 68,1±12* Д11±1,1* 13,1 ±аб 1499±09 69±0,7**

4 £&5±0$* 33,61 ±0.9* 132И045** 15,\6±038* (^46±0T54**

30 сутки 1 65,0± 0,51 2997±032 11,61 ±009 12S9±024 1Ц43±Ц13

3 6831 ±0,4* 3337±0,6* Ц36Щ11** 15,11±021* 647±022**

4 6937±0.6* 33<»±05* 13,49±0J2* 15,72±027* 6,i7±ai**

Иммунологические показатели крови необлученных крыс линии «Вистар» после применения препарата.

Фагоцитарная активность (ФА) в группах животных с применением препарата «Виту-

лин» повышалась с первых суток, достигала максимума к концу эксперимента и была выше показателей группы биологического контроля. В группе с однократным введением препарата на протяжение эксперимента ФА была выше, чем в группе биологического контроля, в среднем, на 9,7%; и на 30 сутки составляла 78,4%. В группе с многократным введением препарата ФА была выше, чем в первой группе на 11,1% и на 1,37%, чем в третьей группе; и на 30 сутки составляла 79,03%.

Фагоцитарный индекс (ФИН) претерпевал незначительные изменения на протяжении всего опыта во всех группах. Но к концу опыта (30 день) в группах с применением препарата наблюдалось стабильное повышение этого показателя по сравнению с биологическим контролем: в группе с однократным введение препарата 19,83% (на 8,9% выше, чем в контрольной группе); в

группе с многократным введением препарата 20,31% (на 11,59% выше, чем в контрольной группе).

Диаграмма 3

Показатели фагоцитарной активности у необлучённых животных

85 % 80 75 70 ' 65 60 55 -| 50

~сутки,

14 21

■ 1 группа■

• 3 группа •

- • 4 группа

В группе с введением препарата был отмечен стабильный рост фагоцитарной интенсивности (ФИ) на протяжении всего опыта. Показатель в группе с однократным введением препарата был выше, чем в контрольной группе, в среднем на 8,14%; в группе с многократным введением препарата - в среднем на 8,38%.

Таким образом, применение препарата «Витулин» активизировало фагоцитоз, и многократное применение более эффективно улучшило показатели.

Из показателей неспецифических факторов иммунитета применение препарата «Витулин» наиболее ярко отразилось на лизоцимной активности. В группах с применением препарата активность лизоцима значительно возрастала с первых суток и стабильно повышалась до окончания опыта и ее значения были стабильно выше, чем в группе биологического контроля на 50%. Достоверных отличий между третьей и четвертой группами не выявлено. Диаграмма 4 Показатели лизоцимной активности сыворотки крови

у необлучённых животных

з§ут

" I группа

— 3 группа -11

- -4 группа

Бактерицидная активность сыворотки была пониженной относительно первой группы с первых суток опыта и к 30-м суткам повысилась на 15%. При этом в четвертой группе бактерицидная активность бала незначительно повышена относительно третьей группы на 3-5%.

В группах с введением препарата отмечалось понижение содержания ЦИК с первых по тридцатые сутки. К концу эксперимента показатели были ниже, чем в биологическом контроле в 2-2,5 раза (р<0.05).

Таким образом, применение препарата «Витулин» стимулирует ряд показателей состояния иммунитета. Многократное применение препарата более эффективно улучшает показатели состояния иммунитета.

На содержание иммуноглобулинов сыворотки крови применение препарата «Витулин» не оказало выраженного эффекта: показатели в контрольной группе и в двух группах с введением препарата колебались в пределах физиологической нормы без каких-либо выраженных закономерностей.

Гистологическая картина иммунокомпетентых органов животных контрольной группы и групп с введением препарата не выходила за пределы физиологической нормы и не имела принципиальных отличий у животных разных групп.

Таким образом, исследования, проведённые на группах необлучённых животных, позволяет сделать вывод, что введение препарата «Витулин» стимулирует лейкопоэз, гранулопоэз; повышает содержание общего белка крови и всех фракций белка (кроме у-глобулинов); усиливает фагоцитоз; улучшает показатели неспецифического иммунитета.

Применение препарата «Витулин» для профилактики лучевого поражения.

Объектом исследования стали животные 2, 5 и 6 групп. Действие препарата на иммунную систему оценивали по следующим критериям: количество форменных элементов крови, лейкоцитарной формуле, содержанию ЦИК, фагоцитарной активности, фагоцитарной интенсивности, фагоцитарному индексу, содержанию лизоцима в сыворотке крови, бактерицидной активности сыворотки, уровню иммуноглобулинов, а также состоянию органов иммунной системы (тимус, селезёнка, брыжеечные лимфатические узлы).

Таблица 4

Выживаемость крыс в эксперименте

группы/сутки 1 3 6 10 14 21 30

1-я группа 70 70 70 70 70 70 70

2-я группа 70 65 30 7 1

3-я группа 70 70 70 70 70 70 70

4-я группа 70 70 70 70 70 70 70

5-я группа 70 66 45" 45" 45" 40" 40"

б-я группа 70 66 40 26" 9" 8" 8"

Применение препарата «Витулин» повышало резистентность животных к облучению, способствовало более легкому течению лучевой болезни и повышало выживаемость крыс в эксперименте.

Диаграмма 5

Выживаемость экспериментальных животных

о «О 1

1 3 6 10 14 21 30

1-я, 3-я и 4-я группы - - - -2-я группа — - - 5-я группа — — 6-я группа

Гтатологические показатели крови облучённых лабораторных крыс в дозе 7,2 Гр.

Количество лейкоцитов в облученном контроле снижалось в первые же сутки после облучения (до 1,66 х Ю'/л (р<0,01)), достигало минимальных значений к б суткам (0,08x10'/л (р<0,01)) и незначительно повышалось к 10-14 дню - периоду гибели контрольных животных

Количество лейкоцитов в группах с введением препарата количество лейкоцитов падало менее резко к первым суткам, снижалось к 4, и к 21-30 суткам достигало физиологической нормы. При этом в группе, получавшей «Витулин» однократно, минимальное значение показателя было 0,03хЮ'/л (6 сутки после облучения), повышение отмечалось к 10 суткам, и к 21 суткам было на уровне физиологического контроля. В группе с многократным применением препарата количество лейкоцитов приближалось к физиологической норме уже на 10 сутки, а наименьший показатель наблюдался на 4 сутки после облучения и был равен 1,66х10'/л.

На фоне стойкой лейкопении с 1 по 14 сутки патология лейкоцитов проявлялась появлением атипичных клеток (дегранулированных), азурофильной зернистости в нейтрофилах, бла-стных форм лимфоцитов (рыхлый хроматин, вакуолизация цитоплазмы, наличие хорошо выраженных ядрышек) (\\'..1.Кеа§ап, « а1, 2000). В ядрах некоторых лейкоцитов наблюдался карио-пикноз, а также митотическое деление. Изменения в форменных элементах крови были характерны для животных всех групп.

Диаграмма 6

Показатели количества лейкоцитов крови у экспериментальных животных

20 15 10 5 0

-1 группа.......2 группа группа ~ — '4 группа

-----5 группа ■ 6 группа

В группе крыс, подвергнутых облучению без применения препарата «Витулин», уровень гемоглобина снижался (до 46,66 г/л (р<0,01)), потом повышался и к 10-14 дню (период гибели животных данной группы) составлял 68,66г/л. Уровень гемоглобина в группах с введением препарата снижался меньше (до 62,66 г/л в группе с однократным введением препарата; до 76,6 в группе с многократным введением препарата) и достигал физиологических значений к 14 суткам (105 г/л - 109 г/л). При этом, в группе с пролонгированным введением препарата снижение уровня гемоглобина было менее резко выражено, чем в других группах.

Цветовой показатель в группе облученного контроля увеличился в 2 раза в первые сутки после облучения и удерживался на высоком уровне в течение всего эксперимента. В группе крыс, получавших «Витулин» однократно, цветовой показатель был увеличен только на десятые сутки после облучения. В группе крыс, получавших препарат многократно, данный показатель незначительно увеличивался на десятые сутки.

Таким образом, применение препарата «Витулин» (как однократное, так и многократное) поддерживает гемопоэз (особенно гранулопоэз) у облученных животных, способствует меньшему спаду после облучения и более быстрому восстановлению гемопоэза.

Результаты биохимического исследования сыворотки крови у экспериментальных

животных.

Содержание общего белка в сыворотке крови у облучённых животных снижалось в сравнении с биологическим контролем в первые сутки после облучения во всех группах. Но снижение показателя в группах с применением препарата было меньшее (60,9 г/л - в группе с однократным введением препарата; 61,5 г/л — в группе с многократным введением препарата) в сравнении с группой облученного контроля (66,5 г/л). До 10 суток наблюдалось дальнейшее

сутки 30

снижение содержания общего белка в крови - в группе облученного контроля более выраженное (31,1 г/л), в группах с однократным и многократным введением препарата менее выраженное (45,5 г/л и 44,7 г/л соответственно). Дальше наблюдалась гибель животных группы облучённого контроля, а в группах с введением препарата повышение содержания общего белка: до 56,5 г/л в группе с однократным введение препарата (30 сутки) и до 58,1 г/л в группе с многократным введением препарата (30 сутки).

Диаграмма 7

Показатели содержания общего белка сыворотки крови у экспериментальных животных

70 п г/л 60 50 ■ 40 30

10 14 21 3£

утки

-1 группа.......2 группа —— 3 группа « ~ 14 группа

-----5 группа " 6 группа

Динамика изменения альбуминовой фракции белка крови в подопытных группах, в общих чертах соответствовала динамике изменения общего белка. В группах с применением препарата по сравнению с облученным контролем также наблюдался менее выраженный спад количества белка к 10 дню эксперимента и выраженный рост количества белка к концу эксперимента.

Диаграмма 8 Показатели содержания альбуминов сыворотки крови

у экспериментальных животных

35 -I г/я _ _ _ _

___- ^ — — ИГ~

зо - I- , 11 ——-

25 т •ГТ'--^ т**"""

2015 - ..-*''

Ю -I-г-,---,--,-,-,-,

1 3 6 10 14 21 30утки

-1 группа.......2 группа~^""~3 группа" ~ >4 группа-----5 группа "6 групп:

В группе облучённого контроля уровень а-глобулинов резко снижался и достигал минимального значения к 10 дню (7,5 г/л). В группах с применением «Витулина» уровень а-глобулиновой фракции снижался до 14 суток после облучения (9,3 г/л в группе с однократным введением и 9,4 г/л в группе с многократным введением), а после повышался до конце эксперимента и достигал 10,9 г/л (группа с однократным введением препарата) и 10,9 г/л (группа с многократным введением препарата).

Диаграмма 9

Показатели содержания а-глобулинов сыворотки крови у экспериментальных животных

1 3 6 10 14 21 30

-1 группа.......2 группа группа ~ — '4 группа

— - - 5 группа ~— ■ 6 группа

Диаграмма 10

Показатели содержания р-глобулинов сыворотки кровн у экспериментальных животных

1 группа.......2 группа ——»3 группа ~ ~ "4 группа

5 группа " 6 группа

Спад (5-глобулнноЕой фракции белков сыворотки крови наблюдался также на 10-е сутки: в группе облученного контроля более выраженный (8,1 (р<0,05)), в группах с применением препарата менее выраженный (до 9,8 г/л (р<0,05) в группе с однократным применением; до 9,9 г/л (р<0,05) в группе с многократным применением). В группах с применением препарата к 30 дню после облучения отмечалась тенденция к повышению уровня р-глобулиновой фракции белка: до 11,5 в группе с однократным применением препарата, до 11,9 в группе с многократным применением препарата.

Изменения у-глобулиновой фракции белков сыворотки крови носили волнообразный характер и, в общем, показатели групп с применением препарата «Витулин» в течение всего эксперимента были выше.

Таким образом, в подопытных группах, получавших препарат, происходит менее выраженное падение количества белка и белковых фракций и прослеживается тенденция к восстановлению количества белка и белковых фракций в сыворотке крови.

Иммунологические показатели крови экспериментальных животных.

Фагоцитарная активность (ФА) нейтрофилов в группе облучённого контроля резко снижалась после облучения, достигала к 14 дню минимума (24,66%; (р<0,01)) - 2,7 раза меньше, чем в группе биологического контроля (67,33%)) и примерно на этом уровне держалась до смерти животных. В группах с применением препарата снижение уровня ФГ было меньше (42,33% в группе с однократным применением препарата на 6 сутки; 23,33% на 3 сутки в группе с многократным введением препарата), и к 30 дню эксперимента показатель повышался до 56,33% (группы с однократным введением препарата) и 67,0% (группа с многократным введением препарата).

Диаграмма II Показатели фагоцитарной активности сыворотки крови

у экспериментальных животных

90 80 70 60 -50 -40 30 -I 20

Я ■ ш ■ ■

* _✓ '

3 6 10 14 21 3&УТ

- 1 группа.......2 группа—группа ~ ~ '4 группа

- 5 группа " " 6 группа

Изменения фагоцитарного индекса (ФИН) и фагоцитарной интенсивности (ФИ) и мели ту же тенденцию: сильное снижение и низкий уровень в группе облученного контроля; умеренное снижение и постепенный рост в группах с применением препарата, причем более выраженный- в группе с многократным применением препарата.

Таким образом, фагоцитарная реакция нейтрофилов изменялась следующим образом: в группах с применением препарата к шестым суткам наблюдался спад фагоцитарной активности нейтрофилов, который имел тенденцию к восстановлению с 10 суток до конца эксперимента; в группе облучённого контроля отмечался спад к четырнадцатым суткам, который удерживался на критически низком уровне до окончания опыта.

Иммунологическая реактивность (по показателю бактерицидной активности, активности лизоцима и содержанию ЦИК) в облученных группах снижалась к 6-10 суткам (по отношению к биологическому контролю), причем наиболее сильно в группе облученного контроля. В группе облученного контроля эта тенденция сохранялась до конца эксперимента, а в подопытных группах имело место увеличение активности иммунологических функций.

Результат гистологического исследовании иммунокомпетентных органов облучённых животных.

Раздел 3.4 содержит результаты гистологического исследования иммунокомпетентных органов облученных животных (лимфатических узлов, селезенки, вилочковой железы) для животных тех же групп в динамике с 1 до 30 суток. Во всех группах облученных животных наблюдались выраженные деструктивные изменения в 1-3 сутки после облучения, максимальные к 6 суткам. Начиная с 6 суток (в тимусе с 10 суток) появляются признаки процессов восстановления. В группе облученного контроля деструктивные изменения были выражены сильнее и обнаруживались в иммунокомпетентных органах до конца эксперимента наряду с умеренными признаками восстановления структур.

Морфологическая характеристика иммунокомпетентных органов в группах с применением препарата «Витулин» свидетельствует о менее выраженных деструктивных изменений и более быстром восстановлении нормальной структуры органов по сравнению с облучённых контролем.

Раздел иллюстрирован микрофотографиями. Представленные материалы также подтверждают отсутствие выраженных токсических свойств у препарата «Витулин», его иммуно-,стимулирующие свойства и его положительное влияние в отнршении снижения тяжести лучевого поражения при профилактическом применении.

выводы

1. При профилактическом применении препарат «Витулин» снижал тяжесть лучевого поражения и повышал выживаемость облученных животных. Так, при облучении крыс в дозе 7,2 Гр все животные контрольной группы погибли в первые две недели. При профилактическом однократном применении препарата «Витулин» выжило 11,5% животных, при многократном применении - 57%.(р <0,05 и р <0,01).

2. При применении препарата «Витулин» у необлученных животных прослеживается тенденция к стабильному росту числа лейкоцитов на протяжении всего периода наблюдения. Эта тенденция выражена как при однократном, так и многократном введении препарата и является статистически значимой (р<0,05, критерий знаков).

3. Содержание общего белка в группе необлученных крыс, получавших «Витулин» обнаружило тенденцию к непрерывному возрастанию и к 30 суткам различия были статистически значимы.

4. Фагоцитарная активность нейтрофилов у необлученных животных, получавших «Витулин» однократно и многократно было выше, чем в группе биологического контроля.

5. Впервые использован препарат «Витулин» в качестве иммунопротектора у крыс линии «Вистар», облученных в дозе 7,2 Гр, который при пролонгированном применении способствует повышению выживания экспериментальных животных. Доказаны атоксич-ность и апирогенность «Витулина» при внутрибрюшинных, внутримышечных и подкожных инъекциях, как при дробном, так и при однократном введении в дозах от 1 мл/кг до 1 Омл/кг массы тела.

6. Фагоцитарная активность нейтрофилов после облучения резко снижалась до минимума на 6-14 сутки. При однократном и многократном применении препарата «Витулин» она была значительно выше и проявляла отчетливую тенденцию к нормализации к концу опыта.

7. При пролонгированном введении препарата отмечалась лучшая сохранность клеток и тканевых структур лимфатических узлов и их быстрое восстановление. Восстановление лимфатических узлов при многократном введение препарата происходит быстрее и в большем объеме на протяжении всего опыта. Введение препарата снижает признаки деструкции селезенки на ранних сроках после облучения и ускоряет и усиливает ее регенерацию в последующие сроки. Признаки регенерации появляются на 10-14-е сутки после облучения. Введение препарата облученным животным способствует большей сохранности структур и клеточных элементов тимуса на ранних сроках после облучения и более быстрому и эффективному восстановлению тканей тимуса на 30-е сутки после облучения. Больший эффект от введения препарата наблюдается при многократном его применении.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

С целью расширения арсенала ветеринарных средств, влияющих на иммунную систему, рекомендовать препарат «Витулин» как иммуностимулятор, а также как эффективное средство при терапии иммуносупрессивных состояний (в том числе и при лучевой патологии).

В условиях повышенной радиационной загрязненности окружающей среды рекомендовать применение «Витулина» животным в дозе 0,1 мл/кг массы тела с целью профилактики и коррекции иммуносупрессивных состояний.

Основные положения диссертации рекомендуется использовать в курсе радиологии и БЖ ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» и других высших учебных заведениях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Дегтярев М.В. Применение иммунотропного препарата «Витулин» как стимулятора естественной резистентности облученных животных.// Сборник научных трудов «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», СПб, 2002 г. - с. 53-54. Дегтярев М.В., Курило А.И. Защитные свойства препарата «Витулин» на организм облученных животных.// «Материалы научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ», СПб, 2003 г. - с. 68-69.

Дегтярев М.В., Курило А.И., Тулева Т.П., Тулев Ю.В. Действие препарата «Витулин» на организм обученных животных// «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук», Москва, 2004 г. - с.49-50.

Дегтярёв М.В., Курило А.И., Тулева Н.П.Влияние препарата «Витулин» на морфологическую структуру иммунокомпетентных органов облученных животных.// «Материалы международной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ», СПб, 2006 г., с. 59-61.

Отпечатано в 000«Томас-Петербург», Санкт-Петербург, Средний пр.,д.28, тир. 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дегтярев, Михаил Владимирович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Общая характеристика работы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна работы.

Практическая ценность работы.

Основные положения, выносимые на защиту.

Апробация работы.

Публикация результатов исследований.

Реализация результатов исследований.

Структура и объём диссертации.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль определенных биологически активных веществ в организме животных.

1.1.1. Биологическая роль ЛПС, находящихся в структурах клеток.

1.2. Реакции кроветворения на действие ионизирующих излучений.

1.2.1. Влияние ионизирующих излучений на обмен гемоглобина.

1.3. Влияние ионизирующих излучений на обмен сывороточных белков.

1.3.1. Соотношение белковых фракций плазмы крови при лучевой болезни.

1.4. Действие радиации на факторы иммунитета.

1.4.1. Бактерицидные свойства сыворотки крови при действии ионизирующей радиации.

1.4.2. Влияние ионизирующего облучения на фагоцитоз.

1.4.3. Влияние ионизирующей радиации на количество лизоцима в сыворотке крови.

1.4.4. Изменение количества бета-лизина в сыворотке крови.

1.4.5. Влияние ионизирующего излучения на содержание иммуноглобулинов.

1.5. Обоснование основных направлений исследования.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Общая характеристика объектов и мест исследований, схема экспериментов на животных.

2.2. Метод постановки токсикологического эксперимента с препаратом «Витулин» на белых лабораторных крысах линии «Вистар».

2.3. Метод постановки опыта по изучению профилактических свойств препарата «Витулин» при лучевых поражениях у белых лабораторных крыс линии «Вистар».

2.4. Методы клинических, гематологических, иммунологических и биохимических исследований экспериментальных животных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Действие препарата «Витулин» на интактных животных.

3.1.1. Характеристика препарата «Витулин».

3.1.2. Результаты масс-спектрометрического исследования препарата «Витулин».

3.1.3. Результаты применения препарата «Витулин» у необлучённых белых лабораторных крыс линии «Вистар».

3.1.4. Клинические показатели лабораторных крыс линии «Вистар».

3.1.5. Лейкоцитарная формула у необлучённых крыс линии «Вистар».

3.1.6. Гематологические показатели необучённых лабораторных крыс линии «Вистар».

3.1.7. Иммунологические показатели крови необлученных крыс линии «Вистар» после применения препарата.

3.1.8. Результаты гистологического исследования иммунокомпетентных органов необлучённых животных после применения препарата.

3.2. Применение препарата «Витулин» для профилактики лучевого поражения.

3.2.1. Выживаемость экспериментальных животных после облучения.

3.2.2. Массометрия и клинические показатели у экспериментальных животных.

3.3. Гематологические показатели у экспериментальных животных.

3.3.1. Лейкоцитарная формула у облучённых крыс линии «Вистар».

3.3.2. Гематологические показатели крови облучённых лабораторных крыс в дозе 7,2 Гр.

3.3.3. Результаты биохимического исследования сыворотки крови у экспериментальных животных.

3.3.4. Иммунологические показатели крови экспериментальных животных.

3.4. Результаты гистологического исследования иммунокомпетентных органов облучённых животных.

3.4.1. Морфологическая картина лимфатических узлов облучённых животных.

3.4.2. Морфологическая картина селезёнки облучённых животных.

3.4.3. Морфологическая картина тимуса облучённых животных.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Радиопротекторные свойства препарата "Витулин""

Общая характеристика работы

Работа является самостоятельным разделом исследований свойств нового иммуномодулятора - «Витулин» на кафедре ветеринарной радиологии, БЖЧС ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (Гос. регистрация № 0186012583).

Современный этап развития ядерной энергетики и расширяющееся применение источников ионизирующих излучений в различных сферах деятельности создали потенциальную угрозу радиационной опасности, как для человека, так и для сельскохозяйственных, домашних и диких животных.

Опыт эксплуатации ядерных реакторов показал реальную возможность аварийных ситуаций, связанных с выбросом радиоактивных веществ во внешнюю среду. С 1944 г. в мире произошло более 300 аварий ядерных реакторов с выбросом радионуклидов в окружающую среду. Эти аварии происходили в различных странах и в разное время, в качестве примеров можно привести аварии на ядерном реакторе в Уиндскейле (Великобритания, 1957 г.); на атомном предприятии химкомбината «Маяк» на Южном Урале (СССР, 1957, 1967 гг.); на АЭС Тримайле-Айленд (США, 1979 г.); на Чернобыльской АЭС (СССР, 1986 г.) и на АЭС в Хамме (ФРГ, 1986 г.). Крупнейшей из них является Чернобыльская катастрофа, сопровождавшаяся выбросом в окружающую среду долгоживущих радионуклидов активностью более 50 Мки (Алексахин P.M., Корнеев H.A., Ильязов Р.Г., Сироткин А.Н. 1987 г.). Чернобыльская катастрофа показала реальность радиационного воздействия на крупный рогатый скот и домашних животных на огромных территориях, что напрямую связано не только с сохранением поголовья и генофонда животных, обеспечением продовольствием больших масс населения, но имеет и другие социальные аспекты. Наличие различных источников радиационной опасности ставит перед ветеринарной наукой проблему предупреждения и лечения радиационных поражений животных и разработки соответствующих средств радиационной защиты. Необходимо подчеркнуть, что, поскольку экспериментальная проверка эффективности является незаменимой составляющей разработки радиозащитных препаратов, предназначенных для человека, направленность этой работы не ограничивается ветеринарной наукой, она имеет и общебиологическое, и медицинское значение.

Изучением воздействия радионуклидов и ионизирующих излучений на человека и животных до настоящего времени занимались пор многие научные коллективы и выдающиеся ученые. Большой вклад в развитие отечественной радиобиологии внесли такие ученые, как Алексахин P.M.; Анненяков Б.Н.; Варданян Л.П., Воккен Г.Г.; Ильин В.Г.; Ильин Л.А.; Ильязов Р.Г.; Буров Н.И., Белов А. Д.; Клечковский И.М.; Корнеев H.A.; Перцов JI.A., Киршин В.А., Бударков В.А., Злобин B.C., Жербин Е.А., Карташов П.А., Кругликов Б.П., Маргулис У .Я., Румянцев А.П., Исамов H.H.; Пустовалов Ю.И, Курило А.И.; Сироткин А.Н, и др.

Большое внимание уделяется вопросам, связанным с изучением механизмов физиологических, биохимических, генетических и иммунологических процессов жизнедеятельности организма при воздействии на него ионизирующих излучений, а также совершенствованию методов профилактики, диагностики и лечения лучевых поражений. Сдвиги, вызванные ионизирующей радиацией в организме животного, происходят из-за глубокого подавления естественного и искусственного иммунитета, а также угнетения общей иммунобиологической активности организма (Троицкий B.J1. с соавторами, 1965; Петров Р.В., Зарецкая Ю.М., 1970; Ярилин, A.A., 1981; Ярмоненко, С.П., 1984; Бердышев М.С., Цыб А.Ф., 1985).

В результате выполненных работ к настоящему времени разработан ряд специальных радиозащитных препаратов, получивших название радиопротекторы (Медицинские средства противорадиационной защиты, ред.

Легеза В.И. и Гребенюк А.Н., СПб., изд. «Лань», 2001). К наиболее эффективным из них относятся серосодержащие радиопротекторы (цистамин и гаммафос), а также агонисты биогенных аминов (индралин, нафтизин). Однако возможность применения подобных радиопротекторов связана с существенными ограничениями. Они эффективны лишь при применении за определенное время перед облучением, что крайне затрудняет а иногда делает вообще нереальным их практическое применение. Они имеют ограниченную терапевтическую широту применения, характеризуются острой и хронической токсичностью; их токсическое действие может кумулироваться при многократном употреблении. Они не обеспечивают защиту организма при пролонгированном или фракционированном облучении низкой интенсивности, а также при невысоких дозах облучения. Существенным недостатком этих радиопротекторов с точки зрения их применения в ветеринарии, является специфичность их действия, в связи с чем они не находят применений вне чрезвычайной ситуации, в ожидании которой они не востребованы и должны храниться на складах, где постепенно утрачивают свои свойства. Поэтому их производство не выгодно экономически.

Недостатки традиционных радиопротекторов вынуждают исследователей продолжать поиски радиозащитных средств. В результате длительных поисков был найден другой класс радиозащитных препаратов -средства повышения радиорезистентности организма (Бутомо Н.В. с соавторами, Основы медицинской радиобиологии, СПб., изд. «Фолиант», 2004). Это достаточно широкая группа препаратов, среди которых преобладают различные иммуномодуляторы, а также биологически активные вещества, корректирующие тканевой метаболизм, в том числе адаптогены. Подобные стимуляторы радиорезистентности могут проявлять противолучевую активность не только при остром, но и при хроническом облучении, в условиях как профилактического, так и лечебного применения.

Эти вещества, помимо противолучевой активности, могут обладать широким спектром фармакологического действия, которое может включать повышение неспецифической резистентности организма, стимуляцию различных звеньев иммунитета, улучшение гуморальной регуляции репаративных процессов, антиоксидантное и адаптогенное действие. Таким образом, они могут найти широкое применение вне условий чрезвычайной ситуации, что обеспечит их доступность и при ее наступлении. Существующим препаратам этого класса присущи также те или иные качества, ограничивающие их применение (токсичность, влияние на артериальное давление или процессы нервного возбуждения, аллергогенность и др.). Поэтому задача поиска эффективных и безвредных средств повышения радиорезистентности остается весьма актуальной.

Исследования показали наличие иммуномодулирующих свойств у ряда БАВ, в т.ч. у флавоноидов и липополисахаридных комплексов, выделенных из различных биологических субстратов (Науменко И.В.; Прозоровский В.Б.; Тулев Ю.В.; Бутомо Н.В.). Среди известных зоопрепаратов выраженной радиозащитной активностью обладает прополис. На кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии СПбГАВМ Тулевым Ю.В. был изобретён, и запущен в серийное производство препарат, изготовленный на основе вытяжки из пчелиного мёда - «Витулин». В ходе исследований было установлено, что препарат содержит компоненты — ферменты, флавоноиды, витамины, минеральные соли, липополисахаридные комплексы, которые положительно влияют на иммунитет и резистентность организма к неблагоприятным воздействиям и, в принципе, могут характеризовать наличие радиозащитного эффекта. Поэтому гипотеза о возможности применения иммуностимулирующего препарата «Витулин» в качестве радиопротектора и антиоксиданта представляется достаточно обоснованной. Эта гипотеза и определила основные направления работы: исследование радиозащитных свойств препарата «Витулин» и механизмов его действия. Все изложенное позволило следующим образом сформулировать цель и задачи работы.

Цель и задачи исследования.

Цель исследования — экспериментальное изучение нового иммуностимулирующего препарата «Витулин» как средства противорадиационной защиты организма животных.

Исходя из поставленной цели, необходимо было решить следующие задачи исследования:

1. В опытах на экспериментальных животных исследовать радиозащитную эффективность препарата «Витулин».

Научная новизна работы

Получены данные, свидетельствующие о стимуляции ряда факторов иммунитета у облученных животных, что может быть механизма пролонгированной профилактики лучевого поражения препаратом «Витулин».

Выявленная совокупность фармакологических свойств препарата «Витулин» позволяет ожидать, что он, по аналогии с другими радиозащитными средствами из класса иммуномодуляторов и корректоров тканевого обмена, будет эффективен и как средство ранней патогенетической терапии лучевого поражения, и как средство повышения радиорезистентности при пролонгированных облучениях малой интенсивности, что открывает новые перспективные задачи исследований.

Практическая ценность работы

Полученные в работе доказательства радиозащитной эффективности нового нетоксичного препарата «Витулин», полученного на основе натуральных безвредных компонентов пчелиного меда, позволяют расширить спектр средств, повышающих радиорезистентность организма.

Предложен способ многократного применения препарата «Витулин», как наиболее рациональный и удобный при его использовании в качестве радиозащитного средства.

Расширен спектр возможных применений иммуномодулятора «Витулин» за счет обнаружения его радиозащитной эффективности, что повышает целесообразность производства данного препарата и его возможную экономическую эффективность.

Основные положения, выносимые на защиту

4. Механизм радиозащитного действия препарата «Витулин» по-видимому связан с коррекцией тканевого метаболизма и иммуномодулирующим действием.

Апробация работы

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- Научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ «Актуальные проблемы ветеринарии». Санкт-Петербург (2001-2004гг.);

- Конференции «Белые Ночи» - «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». Санкт-Петербург (2003г);

- Втором международном симпозиуме «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии». Санкт-Петербург (2003г.).

Публикация результатов исследований

По материалам диссертации опубликовано 5 статей, в т.ч. в научно-теоретическом журнале «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук» №5 стр 9-10, 2004г.

Реализация результатов исследований

Материалы диссертационной работы, нашедшие отражение в опубликованных статьях, используются в учебном процессе на кафедре ветеринарной радиобиологии и курса БЖЧС Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Структура и объём диссертации.

Диссертация изложена на 187 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, списка использованной литературы и приложения. Список литературы включает 204 источника, из которых 45 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 39 диаграммами, 14 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Дегтярев, Михаил Владимирович

167 ВЫВОДЫ

1. Впервые использован препарат «Витулин» в качестве иммунопротектора у крыс линии «Вистер», облученных в сублетальных дозах (7,2 Гр), который при пролонгированном применении способствует повышению выживания экспериментальных животных. Доказаны атоксичность и апирогенность «Витулина» при внутрибрюшинных, внутримышечных и подкожных инъекциях, как при дробном, так и при однократном введении в дозах от 1 мл/кг до 10мл/кг массы тела.

5. При профилактическом применении препарат «Витулин» снижал тяжесть лучевого поражения и повышал выживаемость облученных животных. Так, при облучении крыс в дозе 7,2 Гр все животные контрольной группы погибли в первые две недели. При профилактическом однократном применении препарата «Витулин» выжило 11,5% животных, при многократном применении - 57%.(р <0,05 и р <0,01).

7. При пролонгированном введении препарата отмечалась лучшая сохранность клеток и тканевых структур лимфатических узлов и их быстрое восстановление. Восстановление лимфатических узлов при многократном введение препарата происходит быстрее и в большем объёме на протяжении всего опыта. Введение препарата снижает признаки деструкции селезёнки на ранних сроках после облучения и ускоряет и усиливает её регенерацию в последующие сроки. Признаки регенерации появляются на 10-14-е сутки после облучения. Введение препарата облучённым животным способствует большей сохранности структур и клеточных элементов тимуса на ранних сроках после облучения и более быстрому и эффективному восстановлению тканей тимуса на 30-е сутки после облучения. Больший эффект от введения препарата наблюдается при многократном его применении.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

8. С целью расширения арсенала ветеринарных средств, влияющих на иммунную систему, рекомендовать препарат «Витулин» как иммуностимулятор, а также как эффективное средство при терапии иммуносупрессивных состояний (в том числе и при лучевой патологии).

9. В условиях повышенной радиационной загрязненности окружающей среды рекомендовать применение «Витулина» животным в дозе 0,1 мл/кг массы тела с целью профилактики и коррекции иммуносупрессивных состояний.

10.Основные положения диссертации рекомендуется использовать в курсе радиологии и БЖ ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» и других высших учебных заведениях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дегтярев, Михаил Владимирович, Санкт-Петербург

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. — М.: Наука, 1994.-285 с.

2. Акоев И.Г. Теоретические и количественные аспекты радиационного поражения организма // Радиационные поражения организма. — М., Атомиздат. 1976 - С. 190-195.

3. Алексахин P.M. Сельскохозяйственная радиоэкология. М., 1992. - С. 29.

4. Алексахин P.M., Архипов И.П., Бархударов P.M. Тяжелые естественные радионуклиды в биосфере: Миграция и биологические действия на популяции и биоценозы. М., 1990. - С. 120.

5. Амберт Б., Брей Д., Льюис Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Москва. - 1994.-С. 10-12.

6. Анистратенко Т.Н. Алиментарная профилактика пострадиационных эффектов // Гигиена и санитария. 1992. - № 3. - С. 44-46.

7. Балуда В. П, Бритун А.И, Будагов P.C. и др. Патогенез и лечение комбинированных радиационно-термических поражений. -М.: Медицина. 1989.-128 с.

8. Балуда В.П, Володин В.М, Поспишил Я. и др. Радиация и гемостаз. -М.: Энергоатомиздат. 1986. - С. 109-117.

9. Бардычев М.С, Цыб А.Ф. Местные лучевые поражения. — М.: Медицина. — 1985.-41 с.

10. Безазиев С.А., Ряснянский И.В. Показатели метаболической активности форменных элементов крови облученных животных. // Тезисы докл. 3-й Всесоюзн. конфер. по с-х. радиологии. Обнинск. 1990. —т.2. - С. 149-150.

11. Белов А.Д., Киршин В.А. и др. Радиобиология. М.: Колос. - 1999. - С. 145-170.

12. Белов А.Д., Кусурова З.Г., Пак В.В. Влияние рентгеновского излучения на отдельные факторы иммунитета цыплят-бройлеров. // Тезисы докл. 3-й Всесоюзн. конфер. по с-х. радиологии. Обнинск. 1990. - т.2. - С.135-136.

13. Белоусова О.И., Горизонтов П.Д., Федотова М.И. Радиация и система крови. М.- 1979.- 198 с.

14. Беляев И.К. Модификация синтетическим Р-каротином отдаленных последствий инкорпорации 8г-90 // Актуальные проблемы ликвидации последствий аварии на ЧАЭС/ Тез. Докладов Украинск. Научн.-практ. Конф. Киев. - 1992. - С. 24.

15. Бережная М.Н. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. Киев, 1988. -С. 184-190.

16. Бесядовский Р.Н., Иванов К.В., Козюра А.К. Справочное руководство для радиобиологов. М.: Атомиздат. - 1978 - С. 6-43.

17. Блюгер А.Ф., Залцмане В.К., Карташова О.Я. Ультраструктурная патология печени. Рига, Зинатне. - 1989. - С. 94-102.

18. Богатов Л.В. Проблемы изучения ранних и отдаленных последствий инкорпорирования радионуклидов в организме сельскохозяйственных животных. // Тезисы докл. 3-й Всесоюзн. конфер. по с-х. радиологии. — Обнинск. 1990. т.4. - С. 40-42.

19. Бойко В.Н. Исследование радиозащитной эффективности иммуномодуляторов различных групп // Тез. Докл. 1 Съезда иммунологов России, Новосибирск. 1992. - С. 56.

20. Болотников И.А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц. — М.: Россельхозиздат . 1982. С. 109-118.

21. Болотников И.А. Словарь иммунологических терминов. — М.: Госагропром, 1991. 125 с.

22. Болотников И.А., Добротина H.A., Лызлова С.Н. Иммунология. Иммунитет. Иммунологические реакции. Уч. пособие. Петрозаводск. — 1987.-С. 1-96.

23. Болотников И.А., Конопатов Ю.В. Практическая иммунология сельскохозяйственной птицы. Санкт-Петербург, Наука. — 1993. - 114 с.

24. Болотников И.А., Конопатов Ю.В. Физиолого-биохимические основы иммунитета сельскохозяйственных птиц. АН СССР. Наука. Л., 1987. — 170 с.

25. Болотников И.А., Конопатов Ю.В., Рудаков В.В. Содержание нуклеиновых кислот в органах кур после воздействия общего рентгеновского излучения. // Сб. работ ЛВИ. Физиология, морфология и биохимия с/х животных. Вып.44. 1976. - С. 148-152.

26. Бонд В., Флиднер Т., Аршамбо Д. Радиационная гибель млекопитающих. -М.: Атомиздат, 1971. С. 48-60.

27. Бриан А.Е. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопротекторам. -М.: Медицина. 1984. - С. 101-103.

28. Бритун А.И., Будагов P.C., Вагнер Е.А., / Под ред А.Ф.Цыба. Комбинированные радиационные поражения: патогенез, клиника, лечение. М., 1993. - 284 с.

29. Брондз A.B. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании // Москва, «Наука». 1987. - 470 с.

30. Будагов P.C., Конов A.B., Петров В.Н. и др. Изменение уровня сывороточного фибронектина и состояние РЭС при ожогах и радиационно-термических поражениях //Пат. физ. 1985. - №2. - С.27-29.

31. Бударков В.А., Киршин В.А. Ветеринарная противорадиационная защита. -М.:, 1990.

32. Бушнева И.А., Утелин K.P., Иващенко А.Т. Активность аденозинтрифосфатаз мембран эритроцитов облученных животных. -Радиобиология. 1981.-т.21.-N4.-С. 572-574.

33. Бычковская K.M. Проблемы отдаленной радиационной гибели клеток. Москва, Энергоатомиздат. 1986. - С.67-69.

34. Важенин A.B. Радиационная онкология: организация, тактика, пути развития. М. 2003. - 236 с.

35. Василенко И .Я. Токсикология продуктов ядерного деления. М.: Медицина. - 1999.

36. Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Применение природных биорегуляторов в онкологии // Вопросы онкологии. — 2003. — Т.49, №2. — С. 145-151.

37. Виленчик М.М. Нестабильность ДНК и отдаленные последствия воздействия излучений — М.: Энергоатомиздат. 1987. — С. 104-126.

38. Виленчик М.М. Радиобиологические эффекты и окружающая среда. М.: Энергоатоиздат, 1983. - 29 с.

39. Вилли К., Детье В. Биология. Биологические процессы и законы. — М.: изд. Мир, 1974.-С. 147-158.

40. Вичканова С.А., Колхир В.Г., Багинская A.M. и др. Новые флавоносодержащие препараты, эффективные при заболеваниях гепатобииарной системы // Мат-лы 2-го конгресса «Традиционная медицина». Чебоксары, 1996. - С.69.

41. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. М., 1982. 304 с.

42. Володин В.М., Гапонюк Э.И., Дедов В.И. Радиация и организм. Обнинск: Институт мед. радиологии, 1975. - С. 24-25.

43. Воробьев Е.И., Степанов Р.П. Ионизирующие излучения и кровеносные сосуды. М.: Энергоатомиздат, 1985. - 296 с.

44. Гайдышев И. Анализ и обработка данных: Специальный справочник/ И.Гайдышев; гл. ред. Е.Строганова. СПб.: Питер, 2001. - 752 с.

45. Галактионов В. Г. Иммунология. Москва, 1998. - 480 с.

46. Гематология и клиника внутренних болезней // Клиническая медицина, 1982. Т.60. -№ 12. - С. 53-58.

47. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. — Новосибирск, 1990. 333 с.

48. Гозенбук В.И., Киерим-Маркус И.Б. Дозиметрические критерии тяжести острого облучения человека. — М.: Энергоатомиздат. 1988. - 24 с.

49. Голиков С.Н. и др. Общие механизмы токсического действия. Л.: Медицина, 1986. - 279 с.

50. Гольберг Д.И., Гольберг Е.Д. Атлас микрофотограмм костного мозга при острой лучевой болезни и действие цитостатических препаратов. — М., — 1973.- 143 с.

51. Гончаренко E.H., Кудряшов Ю.Б. Противолучевые средства природного происхождения // Успехи современной биологии. 1991. - Т. III, вып.2. -С.302-316.

52. Гордиенко А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов // Фармация. 1990. -№ 3. - С.75-78.

53. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И. Радиация и система крови. М.: Атомиздат, 1979.

54. Груздев Г.П. Острый радиационный костномозговой синдром. — М.: Медицина. 1988. - 144 с.

55. Дадали В.А., Макаров В.Г. Биологически активные вещества лекарственных растений как фактор детоксикации организма // Вопросы питания. 2003. - № 5. - С.49-55.

56. Дешевой Ю.Б., Мороз Б.Б., Лыршикова A.B. и др. Нарушения в системе крови при взаимодействии ионизирующей радиации в низкой дозе в зависимости от длительности эмоционального стресса// Радиац. Биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, № 4. - С.384-389.

57. Домашенко А.Д., Уманский С.Р., Токарская В.И. Радиационное нарушение биосинтеза ядерных белков печени и тимуса крыс. -Радиобиология. 1978. т. 18. - N16. - С.882-885.

58. Дранник Г.Н., Гриневич, Дизик Г.М. Иммунотропные препараты. -Здоровье, 1994. 288 с.

59. Дуплищева А.П., Ромашевская Е.И., Синилова Н.Г. и др. Изучение иммуностимулирующей активности флаваноидов// Фармацевтический журнал. 1987. - № 5. - С.67-69.

60. Егер. Л. Клиническая иммунология и аллергология. М. Медицина. 1990 г.

61. Елисеев В.Г., Субботин М.Я., Афанасьев Ю.А. и др. Основы гистологии и гистологической техники. М., 1967. - 267 с.

62. Ерофеева JI.M., Сапин М.Р., Григоренко Д.Е. Реакция различных клеточных популяций в тимусе мышей на однократное гамма-облучение// Авиакосмическая и экологическая медицина. 1998. - Т.32, № 2. — С.55-60.

63. Злобин B.C. Радиационно-химическая генетика и генная инженерия. Л., изд. ЛВИ. - 1981. - С. 53-54.

64. Змушко Е.И. Клиническая иммунология. СПб.: Питер, 2001. — 576 с.

65. Зяблицкий В.М., Патогенез лучевого геморрагического синдрома.// Радиация и организм. Обнинск, 1982. - С.21-23.

66. Иванов A.A., Мальцев В.И. Иммунологические подходы в лечении и профилактике радиационных поражений// Медицинская радиология и радиационная безопасность. 1999. - №4. - С.5-17.

67. Иванов A.A., Мальцев В.И. Роль системы иммунитета в радиационном поражении организма// Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2000. - Т.46, №3. - С.64-78.

68. Иванов А.Е., Куршакова H.H., Шиходыров В.В. Патологическая анатомия лучевой болезни. -М. 1981. -304 с.

69. Иванов В.А. Особенности репарации ДНК в нервных клетках млекопитающих. Радиобиология. В-б. - 1988. т.28. - С.723-728.

70. Иванов Е.А., Куршакова H.H., Шиходыров В.В. Патологическая анатомия лучевой болезни. М.: Медицина. — 1981. — С.102-107.

71. Ильязов Р.Г. Радиоэкологические аспекты ведения скотоводства при загрязнении с-х угодий в Белоруссии после аварии на Чернобыльской АЭС. Автореф. дисс. докт. биол. наук. Гомель. - 1994. - С. 67-68.

72. Карпенко Л.Ю. К вопросу о патогенезе анемии при заболеваниях почек у собак // Ветеринарная практика. 1998, № 2. - С. 4-6.

73. Карпуть И.М. Гематологический атлас с-х животных. Минск: Урожай. — 1986.-С. 12-13.

74. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. М.: Медицина, 1970. - С. 317-326, 768-784.

75. Киндзельский Л.П., Бутенко А.К. Естественные клетки-киллеры и их роль в противоопухолевой защите организма. Обзор. Эксперимент, онкология.- 1983. -т.5. -N3. -С.3-9.

76. Киреев А. Аллергия. Лечение и профилактика. М.: Ч.А.О. и К., 2001.

77. Киршин В.А., Бурдаков В.А. Ветеринарная противорадиационная защита.- М.: Агропромиздат. 1990. - 207 с.

78. Клаус. Дж. Лимфоциты. Методы. М.: Медицина, 1988.— 256 с.

79. Клемпарская H.H. Нормальные аутоантитела как радиозащитные факторы. М., Атомиздат. - 1978. - 54 с.

80. Клетки крови при лучевой болезни. Атлас. М. - 1959. — 81 с.

81. Коггл Дж. Биологические эффекты радиации. М.: Энергоатомиздат, 1986.-С. 120-122.

82. Кокуричев П. И. Домнин Б.Г., Кокуричева М.П. Патологическая анатомия сельско-хозяйственных животных: альбом, СПб. Агропромиздат, 1994. С.45-60.

83. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология. М., Агропромиздат, 1986. -С.33-42.

84. Кондаков Н.В. Новые аспекты противолучевой защиты ДНК in vitro. В кн: Лучевые поражения и их модификации. -М.: Наука, 1985. -С.40-52.

85. Коноплянников А.Г., Радиобиология стволовых клеток. М.: Энергоатомиздат. - 1984. - С. 16-24.

86. Копылов В.А., Кузин A.M., Ревин А.Ф. Принципиально новые подходы лечения лучевой болезни //Тез. докл. IV Всесоюз. конф. «Химия, фармакология и механизмы действия противолучевых, средств». — М.: Минздрав СССР. Ин-т биофизики, 1990. С. 95-96.

87. Корнеев H.A., Сироткин А.Н. Основы радиоэкологии сельскохозяйственных животных. М.: Энергоатомиздат. - 1987. - С. 3-5.

88. Красновский A.A. Взаимодействие синглетного кислорода с каротиноидами; константы скорости физического и химического тушения. Биофизика. 1983. - т.28. -N5. - С.725-729.

89. Кудряшов Д.А., Барабой В.А., Изможерова H.A. и др. Механизмы природной радиочувствительности и радиорезистентности. М.: Наука, 1980.-С. 21-26.

90. Кудряшов Ю.Б. и др. Механизмы лучевой патологии. М.: Изд. МГУ, 1984.- 133 с.

91. Кузин A.M., Копылов В.А. Радиотоксины. М.: Наука, 1983. - 174 с.

92. Курило А.И. Ветеринарно-гигиенические основы применения биологически активных веществ растительного происхождения для профилактики лучевых поражений: Дисс. на соиск. уч. степ. док. вет. наук. СПб., 1997. - 222 с.

93. Курило А.И. Рекомендации по ветеринарно-гигиеническим основам применения биологически активных веществ растительногопроисхождения для профилактики лучевых поражений. СПб.: СПбГАВМ, 1997.-24 с.

94. Кэтти. Д. Антитела. Методы М., Мир, 1991. - 287 с.

95. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. — М.: Медицина. — 1985.-С. 159-160.

96. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике// М., «Медицина». 1990. - 256 с.

97. Леорковитс И., Пернис Б. Иммунологические методы исследования М. Мир, 1995.

98. Линденбратен Л.Д., Наумов Л.Б. Медицинская радиобиология и рентгенология (основы лучевой диагностики и лучевой терапии): Уч. -М.: Медицина. 1993. - 346 с.

99. Лолор Г., Фишер Т, Адельман Д.: Клиническая иммунология и аллергология. Пер. с англ. М., Практика, 2000. - 806 с.

100. Макар В.Р., Семилетова Н.В., Талибина Н.В. и др. Природные антиоксиданты и клеточный иммунитет в условиях ионизирующего и неионизирующего излучения// Тез. Докл. 2 городск. научн. конф. молодых ученых. Пущино. - 1997. - С. 107-108.

101. Манько В.М. Анализ субпопуляций лимфоцитов и механизмов их влияния на дифференцировку кроветворных клеток// Успехи совр. Биологии. 1981.- Т.92.№ 1. с. 81.

102. Меркушев Г.Н. Поражения РЭС при локальном и внутреннем облучении печени. Меры по их ограничению// Актуальные проблемы радиац. безопас. в медицине. Итоги и перспективы. Л. - 1988. - С. 39-48.

103. Методические указания по биохимии. Л. ЛВИ. - 1980. - С. 6-37.

104. Методические указания по экспериментальному и клиническому изучению радиопротекторов. Москва. - 1982. - С. 8-12.

105. Ш.Минеева Н.Я. Эколого-географические аспекты охраны окружающей среды при обезвреживании радиоактивных отходов: Автореф. дисс. д.г.н. -М., 1991.-С. 3.

106. Моссе И.Б. Радиация и наследственность: генетические аспекты противорадиационной защиты. Минск, Университетское. - 1990. - С. 50.

107. ПЗ.Мусиенко П.И. Действие радиоактивных изотопов на живой организм. -Киев: ВШ, 1991.

108. Назаренко Г.И., Кишкин A.A. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М. Медицина. 2002г.

109. Наточин Ю.В., Немцов В.И., Эмануэль B.JI. Биохимия крови и диагностика. Санкт-Петербург, 1993.

110. Науменко JI.A., Докшина Г.А. Действие облучения на белки и фагоцитарную активность лейкоцитов крыс. — Радиобиология. 1989. -Т.25. — Вып.1. - С. 99-102.

111. Новоженов В.Г., Лысенко Е.А., Подвигин A.B. и др. Изменения перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у больных острой лучевой болезнью // Военно-медицинский журнал. 1993. - № 4. -С.38-40.

112. Оболенцева Г.В., Френкель Л.А., Георгиевский В.П. Флавоноидные препараты с противорадиационным действием // Фармацевтический журнал.-1992.-№5-6.-С. 14-15.

113. Павлович С.А. . Основы иммунологии. Минск, «Высшая школа», 1998. -115 с.

114. Пол У. Иммунология. -М.: Мир. 1989. -T.I. - С. 14-15. -Т.З. - С. 173-179.

115. Портнов B.C. Радиобиология с основами радиационной гигиены и экологии. М.: Колос. - 1993. - С. 92-99.

116. Поспешил М., Ваха И. Индивидуальная радиочувствительность, ее механизмы и проявление. М.: Энергоатомиздат. - 1986. - С. 16-20.

117. Прозоровский В.Б. Практическое пособие по ускоренному определению средних эффективных доз и концентраций биологически активных веществ. Байкальск, 1994. - 46 с.

118. Рачинский В.В. О нормах радиационной безопасности// Медицинская радиология и радиационная безопасность. 1999. № 4. - С.63-67.

119. Ройт А. Основы иммунологии. Пер. с англ. -М.: Мир, 1991.-328 с.

120. Романцев Е.Ф., Блохина В.Д., Жуланова З.И. Биохимические основы действия радиопротекторов. М.: Атомиздат. - 1980. — 168 с.

121. Романцев Е.Ф., Блохина В.Д., Жуланова З.И. Молекулярные механизмы лучевой болезни. М.: Медицина. - 1984. - С. 112-120.

122. Руководство по радиационной гематологии. М.: Медицина. - 1977. - С. 63-101.

123. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М. - 2001. - 256 с.

124. Соколов. Е.И. Клиническая иммунология М., Медицина, 1998. — 270 с.

125. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Иммунология и иммунопатология детского возраста// Руководство для врачей. -М., Медицина, 1996.-384 с.

126. Сторожок С.А., Санников А.Г., Белкин A.B. Зависимость стабильности и деформабильности мембран эритроцитов от межмолекулярных взаимодействий белков цитоскелета// Научн. Вестн. ТГУ. 1996. - T.I. -С. 8-15.

127. Сторожок С.А., Санников А.Г., Бродер И.А. К вопросу о регуляции механических свойств эритроцитов// Всеросс. Научн. Конф.

128. Закономерности морфогенеза и регуляция тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях»: Тез. докл. Тюмень, 1998. - С. 48-49.

129. Сторожок С.А., Санников А.Г., Захаров Ю.М. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства. Тюмень: Изд-во Тюм-ГУ, 1997.- 140 с.

130. Суворова JI.A., Гордеева A.A. Состояние гемопоэза в ранние и отдаленные сроки острой лучевой болезни// Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2000. - Т.45, № 6. - С.5-8.

131. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Тулимкар. Технические условия. (ТУ 9325-00900493362-00). Утверждены Департаментом . ветеринарии Минсельхозпрода, 2000 г., 25 с.

132. Тулев Ю.В., Тулева Н.П. Витулин. Патент №223-62-48. 2004 г., Бюллетень №26, С. 10.

133. Тулева Н.П. Влияние иммуномодуляторов серии «Витулин» при раке пищевода// International Journal on Immunorehabilistation. M., 2002, T 4, №2, С. 284.

134. Тулева Н.П., Граубергер H.A. Применение иммунотропного препарата «Витулин» при лечении хронических иммунодефицитных состояний// Предпосылки и эксперимент в науке. Мат. 2 межвуз. н.-пр. конф. асп. и соискат., СПб, 2004, С. 46-47.

135. Уилсон Д.Х.Т. Молекулярная биология клетки. Сб. М.: Мир. 1994. - С. 318-319.

136. Федоров Ю.Н. , Верховский O.A. Иммунодефициты домашних животных. -М., 1996.-95 с.

137. Федоров Ю.Н., Верховский О.А, Слугин И.В. Основы иммунологии и иммунопатологии собак. Москва, 2000. — 247 с.

138. Фримель Г. Иммунологические методы. М.: Медицина. - 1987. - 62 с.

139. Хаитов P.M. Клиническая аллергология. М., МЕДпресс-информ. - 2002 г.

140. Хаитов P.M. Экологическая иммунология// М., 1995 311 е.;

141. Харкевич Д.А. Фармакология. Уч.-М.: Медицина. 1993.-С. 314-315.

142. Хегглин Р. Дифференчиальная диагностика внутренних болезней. М.: Инженер, 1993.-С. 100-102.

143. Хэм А., Кормак Д. Гистология. М.: Мир. - 1983. - Т.2. - С. 106-108.

144. Чарская И.Л., Чимаева Е.А. Влияние ионизирующего излучения на биологические системы. Йошкар-Ола: МарГУ. - 1996.

145. Шубик В.М. Иммунологические исследования в радиационной гигиене. -М.: Энергоатомиздат. 1987. - 142 с.

146. Шубик В.М. Ионизирующее излучение и иммунитет. М.: Атомиздат, 1977.

147. Щукин М.В. Метаболизм циклических нуклеотидов в лимфоидных органах жвачных животных при внешнем и внутреннем радиационном воздействии: Дисс. на соиск.уч.степ.канд.биол.наук. М., 2000. - 181 с.

148. Эйзде JI.X. Физико-химические основы радиобиологических процессов в защите от излучения. М.: Атомиздат. - 1979. - С. 152-169.

149. Эйдус JI.X. Физико-химические основы радиобиологических процессов и защиты от излучений. М., 1979. - 216 с.

150. Яременко К.В. Адаптогены как средства профилактической медицины. — Томск, 1990.

151. Ярмоненко С.П. Жизнь, рак, радиация. М.: Издат, 1993.

152. Ярмоненко С.П. Проблемы радиобиологии человека в конце XX столетия// Медицинская радиология и радиационная безопасность. — 1998. — Т.43, № 1.-С.30-36.

153. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа. - 1984.-375 с.

154. Abe Н., Katada К., Orita М., et al. J. Pharm. Pharmacol., 1991, #43. P. 22-26.

155. Archambeau J.A., Meta M., Jesseph J.E., Bond V.P. The effect of bile diversion and pancreatic duct ligation on the gastrointestinal syndrome in dogs re-ceving 1500 rads Whole-body irradiation. Rad.Res., 1965, vol. 25, #1.-P. 173-178.

156. Benz E.J.Jr. The erythrocyte membrane and cytoskeleton: structure, function, and disorders. Philadelphia: W.B.Saunders, 1994. P. 257-292.

157. Biffi A., Coradini D., Larsen R. et al. Antiproliferative effect of fermented milk on the growth of a human breast cancer cell line// Nutr.cancer. 1997. - Vol. 28(1) —P.93-99.

158. Blanc M.A., Kimura KLeichu, Jaffe Bernard M.// Regulatory mechanismes in the luminal and portal release ofVIP during vagal stimulation in the cat.// Regul. Peptides, 1986, vol.15, N2. P. 167.

159. Boyko V.N., Zholus R.B., Legeza V.N. A study of the influence of different types of radioprotectors on the survival of mice treated with ionizing radiation ower a wide dose range// Drugs exp. and Clin. Res. 1998. - Vol.24, N 5-6. -P.343-347.

160. Bunn H.F. Sickle hemoglobin and other hemoglobin mutants. The molecular basis of blood diseases. Philadelphia: W.B.Saunders, 1994. P. 207-256.

161. Catapano A.L. Antioxidant effect of flavonoids// Angiology. 1997. - Vol. 48, N 1/ —P.39-44.

162. Classification of human lymphocytes and monocytes with the OK series of monoclonal antibodies/ Diag. Immunol. 1983. — Vol. 1. - P. 129

163. Clinical Pathology. Ames: Iowa State University Press, 1994. - P. 230-245.

164. Colman W.R. et al. Hemostasis and Thrombosis. Philadelphia: J.B.Lippincott, 1994.-P. 3-18.

165. Conard R.A. Some effects of ionizing radiation on the physiology ofgastro-intestinal tract. -Rad. Res., 1956, vol. 5. P. 167-188.

166. Duncan J.R., Prasse K.W., Mahaffey E.A. Veterinary laboratory medicine:

167. Eddy H.A. Tumor vascular responses following irradiation. Microvasc. Res., 1980, vol.20, N2. - P. 195-211.

168. Ewe K. Intestinal transport in constipation and diarrhea// Pharm., 1988, vol. 36, Nl.-P. 73-84.

169. Georkilas F.G., Sakellion L., Sideris E.G., et al. Effects of gamma rays on the stability of DNA// Radiat. Res. 1998. - Vol. 150, N 4. - P.488-491.

170. Jain N.C. Essential of Veterinary Hematology. Philadelphia: Lea and Fe-biger, 1993.-P. 49-64.

171. Janossy Gy. Intestinal blood flow in gastrointestinal irradiation syndrome in the rat. Acta neuropathol., 1976, vol.36. - P. 381-385.

172. Kent Th.H., Osborne J., Wende C.M. Intestinal flora in Whole-body and intestinal x

173. Latimer K.S. Leukocytes in health and disease. In Textbook of Veterinary Internal medicine, vol. 2, 1995. P. 1892-1929.

174. Lee S., Cunningham E.B., Swislocki N.I. Molec. Cell. Biochem., 1991, N106. -P. 75-85.

175. Miller R.A., Britigan B.E. The formation and biologic significance of phagocyte-derived oxidants. J. Invest. Med., 1995. P. 39-49.

176. Ney P.A., Christopher M.M., Nebbel R.P. Blood, 1990, N75. P. 1192.

177. Paglia D.E. Enzymopathies. In: Hoffman R.H. et al. (eds). Hematology: Basic Principles and Practice, 2nd ed. New York: Churchill Livingstone, 1995. P. 656-667.

178. Paiek J., Kahr K.E. Mutations of the red blood cell membrane proteins: from clinical evaluation to detection of the underlying genetic defect. Blood, 1992. -P. 308-330.

179. Quastler H., Lanz E.F., Keller M.E., Osborne J. Acute intestinal radiation death. -Amer. J. PhysioL, 1951, vol. 164, N2.-P. 546-556.

180. Reagan W.J., Sanders T.G., DeNicola D.B. Veterinary Hematology. Atlas of Common Domestic Species. Iowa State University Press: Ames, 2000. - 135 p.

181. Relation to Severity of Bum and Period after Bum// Bums. 1982. - Vol.9, N1. -P.13-16.

182. Remler M.P., Marcussen W.H. Time course of early delayed blood-brain barrier changes in individual cats after ionizing radiation. Exp. Neurol., 1981, vol.73,N1.-P.310-314.

183. Rosen F.S., Cooper M.D., Wedgewood R.J.P. The primary immunodeficiencies. New Engl.J.Med., 1995. P. 431-440.

184. Saba T.M., Diluzio N.R. Effekt of x-irradiation on reticuloendothelial ptago- ' cytic function and serum opsonic activitic// Amer. J. Physiol. 1969. -Vol.216, N4.-P. 910-914.

185. Sagan L.A. What is hormesis and why havent we heard about it before?// Health Phys. 1987. Vol. 52, N5. P. 521-525.

186. Schiffman F.J. Hematologic pathophysiology. Philadelphia: Lippincott-Raven.2001. - 446 p.

187. Schwartz R.S., Silberstein L.E., Berkman E.M. Autoimmune hemolytic anemias. New York: Churchill Livingstone, 1995. P. 710-728.

188. Sedlakova A, Ahlers 1., Ahlersova E. et al. The dynamics of changes in serum lipids during continuous irradiation of rats. Folia biol. (CSSR), 1977, v. 23, p. 291-294.

189. Spivak J.L. Erythrocytosis. New York: Churchill Livingstone, 1995. P. 484-491.

190. Steamer S.Ph., Christian E.J. Late injury to the micro vasculature after neutron or gamma irradiation. Radiation Res., 1975, vol.62, N3. - P. 608-609.

191. Stossel T.P. The machineiy of blood cell movements. Blood, 1994. P. 367-379.

192. SugiharaT., Rawicz W., EvansE.A.,Nebbel R.P. Blood, 1991,N77.-P. 2757-2763.

193. Taketa S.T. Therapy against acute intestinal radiation death. — Rad. Res., 1959, vol. 11, N3-4.-P. 471.

194. Toh B.H., van Driel I.R., Gleeson P.A. Mechanisms of disease: pernicious anemia. New Engl.J.Med, 1997.-P. 1441-1448.

195. Tsubouchi S., Matsuzava T. Correlation of cell transit time with survival time in acute intestinal radiation death of germ-free and conventional rodents. Int. J. Radiat. Biol, 1973, vol. 24, N4. - P. 389-396.

196. Wilson R., Barry A., Bealmear P. Evidence for a toxic substance of bacterial origin in the blood of irradiated mice //Rad. Res., 1970. N2. - P. 89-103.

197. Zweifach B.W., Kivy-Rosenberg E. Microcirculatory effects of whole-body-irradiation and radiomimetic procedures. Amer.J.Phisiol., 1965, vol.208, N3. - P. 492-498.

Информация о работе

Дегтярев, Михаил Владимирович
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2006
ВАК 03.00.01

Диссертация

Радиопротекторные свойства препарата "Витулин" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Радиопротекторные свойства препарата "Витулин" ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Радиопротекторные свойства препарата "Витулин""

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дегтярев, Михаил Владимирович

Введение Диссертация по биологии, на тему "Радиопротекторные свойства препарата "Витулин""

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Дегтярев, Михаил Владимирович

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дегтярев, Михаил Владимирович, Санкт-Петербург

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Радиопротекторные свойства препарата "Витулин"
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология