Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПУТИ АССИМИЛЯЦИИ УГЛЕРОДА ТКАНЯМИ РАСТЕНИИ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "ПУТИ АССИМИЛЯЦИИ УГЛЕРОДА ТКАНЯМИ РАСТЕНИИ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO"

АКАДЕМИЯ НАУК СССР-ОРДЕНА ЛЕНИНА/ИНСТИТУТ БИОХИМИИ им. .А.Н.БАХА

На правах рукописи

Кузнецова Лидия Геннадиевна.

ПУТИ АССИМИЛЯЦИИ УГЛЕРОДА ТКАНЯМИ РАСТЕНИЙ В КУЛЬТУРЕ 1м у1тно

(Специальность 03.00.04 - биологическая химия)

Автореферат диссертации , на соискание ученой степени кандидата биологически: няук

Москва 1973

<y?7i ü-oo-^v

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ШОХИМИИ им.

А.Н.БАХА

На правах рукописи

Кузнецова Лидия Геннадиевна

ПУТИ АССИМИЛЯЦИИ УГЛЕРОДА ТКАНЯМИ РАСТЕНИЙ В КУЛЬТУРЕ in vitro

(Специальность 03.00.04 - биологическая химия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва ТУ7У

Работа выполнена в Лаборатории автотрофной ассимиляции углерода Ордена Ленина Института биохимии им. А.Н.Баха АН СССР и в Институте фотосинтеза АН СССР.

Научный руководитель -Ч кандидат химических наук Н.Г.Доман

Официальные оппоненты : г

доктор биологических наук П,А.Колесников кандидат биологических наук Н.Б.Пронина

На официальный отзыв работа направлена в Уральский государственный университет им. А.М.Горького.

Автореферат разослан «$«ян6арЛ' 1973 г.

Защита диссертации состоится " «берегам. 1973 г. на заседании Ученого Совета Ордена Ленина Института биохимии ни. А.Н.Баха АН СССР (Москва, В-71, Ленинский проспект, 33).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.

. Ученый секретарь - ч

кандидат биологических наук

Н.Н.Дьячков

; I, ВВЕДЕНИЕ -' .v.:.

Культивирование изолированных тканей растений открывает . новые перспективы в исследовании жизнедеятельности целого растительного организма. Каковы ке достоинства изолированных тка-: ней, определяющие их как интересный "объект исследования? Прежде всего получение фотосинтезирующнх тканей растений в культуре in *ltro даст возможность изучать формирование фотосин-'тетического аппарата и ряд реакций фотосинтеза, не поддаю- , щихся изучению на целой растении. Несомненный интерес пред- . , ставляют вопросы взаимосвязи пластщного и ядерного синтезов, регуляции фотосинтеза ростовыми процессами, морфогене- . зом, органогенезом и влияния гормонального фактора на фермен- , тный аппарат клетви, то есть те проблемы,исследование которых на растениях встречает ряд трудностей. Кроме того, получение полностью автотрофшх тканей позволит поставить воп- ? -рос об их ¡фактическом использовании,-поскольку известно, . что изолированные ткани,подобно микроорганизмам и водорослям, могут быть источником ценных веществ растительного про- , исховдения.таких алкалоиды, витамины, антибиотики» сте-' ; ровды,. глшозиды и так далее. ■/- -

В Институте фотосинтеза АН СССР были начаты работы по использование тканей растений, культивируемых in vitro для исследования некоторых сторон механизма фотосинтеза. Данная .>" работа является составной часты) этих исследований' и рас- : сматривает пути ассимиляции углерода тканями табака и сои в культуре in vitro.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ' \

Объектом исследования были культура ткани стебля табака Nicotian« glauca (клон M3-I0), изолированная Р.Г.Бутенко б 1967 году7и культура ткани первого семядольного листа сои,, растущая в суспензии, изолированная Л.Г.Брегетовой в 1966 : году. Ткань сердцевинной паренхимы табака выращивали на ara-ризованкой питательной среде на свету и в темноте. Изолированная ткань табака раотет недифференцированно, в анатомическом отношении довольно однородна и состоит из клеток разных размеров с большими межклетниками и вакуолями. На свету ткань зеяензет, образуя хлоропласта. Рост ткани табака имеет ярко выраженный аэробный.характер.

Начальная культура ткани сои , так же, как и предыдущая ткань,выращивается на агаре, а при переносе её в жидкую пи- -тательную среду распадается на отдельные клетки и клетки^ , агрегированные в комочки небольших разборов. В суспензии на свету ткань зеленеет и образует хлоропласта.

'' Ткши табака и сои выращивали в течение 21 дня в кондиционированных камерах Станции искусственного климата Института физиологии растений им. К.А.Тиьтирязева АН СССР на свету. -Продолжительность освещения 16 час р сутки, интенсивность света 4500-5000 лосе, температура в камерах 26*Г°С, относительная влажность 60-70)4. Питательные среда готовили'по Мурасиге 'и Скугу (Muraeigfe е. Skoog

Опыты по изучению фото синтетической активности тканей и

продуктов ассЕшаяции углекислоты проводили с помощь» мече. .. ных атомов» Кусочки тканей табака (2-4 г) или отфильтрован. ные'клетки сои(2 г)помещали в 5 мл калий-фосфатного буфера ; •" */ ■ 1/15М, рН 7,6, в отсутствии или присутствии сахарозы. Изотоп :. , ; : вводили в вида раствора бикарбоната натрия, меченого по углеро-•' ду, из расчета 30 мкМ в. каждую пробу. Фиксацию материала после • I..■■ окончания экспозиции проводили 10 мл эб% кипящего>танола,Опы-;:,; • ты проводили при освещенности 8000-9000 люкс и температуре 23-

25°С. В качестве источника света использовали люминесцентные' ^ : лампы дневного света и 300-ваттную зеркальну» лампу. Извлечение " ; ""' /. спиртоводорастворимых соединений проводили непосредственно из ~ всей пробы нисходящими концентрациями этанола по методике, опи-, - ' санной в литературе (Мокроносов, Бубениикова 1961, Ыокроносов. '.

1966). В полученной растворимой фракции, а также фракдии.не-. - ; : ■ растворимой в 96^-40^ этаноле, измеряли^ содержание; радиоизо-Г 4 т. - „ топа; Продукты световой и темновой фиксации углекислоты' оп-ределяпи двухмерной хроматографией на бумаге ♦. хромато-, ;графирование проводили в системе растворителей: I направле— ■:■;■■"> \ ние'- этанод-аммиак-вода (80:4:16); 2 направление - бутанол- г метанол-этанол-цуравьиная кислота-вода (30:30:36:5:20). ' , ' , ' " Л-'Л , для установления расположения .радиоактивных, соединений на

хроматограмиах, последние совмещали с рентгеновскими пленка. ми .типа РТ-Гиди РМ-1. Наентлфикащш радиоактивных'соедине- :

ний проводили по методу нормированного проявления соедине-; , '■;•. ний различных классов (Доман 1955). Содержание радиоизотопа ^

- б -

■ "V- ■. s -'Í,' ' ■ '* ' ■

; : в отдельных соединениях определили на автоматической «ад- .' •

..• костном сцинтилляцаэнном счетчике-в стандартной системе ! толуол-РРО-РОРОР. Радиоактивность соединений считали в " процентах от суммарной радиоактивности соединений обнаружен- - / 'г \ ■

• них на хроматограмме. .- -

Для исследования путей ассимиляции углерода примени- ~: v,",= : ли ивгибирование монофторадетатом а фторидом натрия. Ков- '-'/['¿i'■■■■'■

цэнтрадая ионофторацетата в опытах 5 *IO~s М,!а фторида - натрия - 5 лагг М, время предиикубадии в обоих случаях " ' 30 мяя. Количественное содержание хлорофилла "а" и "в"

. определяли в смеси без. их разделения с спирт-ацетоновой вы- '.-' ■ тянке, полученной из лиофильно рисушенного материала, no we- , :.;.< .тоду Арнона (атооп, 1949). Количественное содершше водораст- . Своримых белков определяли по. методу.Лоури (towry ©tal. 195D. .V Опыты-по обнаружению и определению активности ферментов утле- - V у, .. родного метаболизма. проводили!на препаратах, выделенных из .;. У

тканей. Навеску ткани растирали в 0,01 Ы трис буфере, рН 7,0, .. -О

• содержащем 0,01 М MgCl2 и меркаптоэтанол (0,4 ш/л)гомогенат Л -;■/■' центрифугировали при £0 ООО е 10 иш, супернатант использовали .. ;

. для определения активности форкентов. ' - . / "/ ■'. '"V

; 'Активность рибулозодифос^ат- и фосфоэнолпируват-карбокси-1- " ,-Г-Л лаз1 и НАДФ-" малик*1-энзима определяли радиометрическим методом ■ _-.. по включению меченого' бикарбоната в кислотоустойчивый продукт'; реакции. Активность"- карбоангадразы определяли рН-метрическим ,' * ; методом (Струогиикте, Шпокене, 1966, Wilbur а. Anaer- ,

eon Ахтгзность НАД-малатдегидрогеиазк определяли

спектропотометрлчаски- пра 340нм. Активность.аспартатамино- : трансферазы определяли ш методу Редькиноб с соавт»(196Э).

Результаты исследований изолированных тканей . '/..-.I' растений ^

^ - 1.Содер.таяие хлорофшла и водорастворимых белков в тканях табакэ и сои, культивируемых in vitro. . • Сравнение спектров поглощения■спирт-ацетоновых вытяжек, полученных из.тканей табака и сои и из листьев-этих же растения доказало, что они вдентичны. Содержание хлорофилла в суспендиальной культуре ткани сои и в каллусвой ткани табака было в 10-13 раз ниже; чем в листьях сои и табака (табл.1).. Отношения хлорофилла "а" к хлорофиллу "в" в тканях.табака и сои, цульгивируешх in vitro достаточно близки, но выше значений, подученных для растений (табл.1), Отсутствие в среде выращивания сахарозы приводило к снижению содержания хлоро- ' филла, водорастворимых белков и отрицательно влияло на рост тканей (табл.2, 3)," V" :

: 2. Ассимиляция радиоактивных соединений тканями табака -и сои в культуре in vitro.'

Из таблицы 4 следует, что поглощение меченого бикарбоната :" тканями на свету в 3-10 раз выше, чем в темноте. Отсутствие сахарозы в.среде выращивания1в течение 7 днейьснижало уровень поглощения углекислоты тканью табака П варианта.. Анализ распределения радиоуглерода по отдельным фракциям

■ гК'^.' .•''"• ' •.:. Таблша í.'. : - Содержание пигментов в изолированных тканях,табажа -г;-и■сои -и влистьяхрастений табака и.сои = ■

:(в мг/г сухого веса ткаяи)

•.%>•• Вариадтн. :хло£0фнал г :ХЛ0{Ю<£НЛЛ,/ отношение ;хлотюфиила а/хл.в

■^VJ.". *Ткань табака I вариант '0,341 V 0,090 J 3,8 Г "':-

ткань таоака г:ц вариант ■ 0,237 ; 0,061 •. : 3,9 ; .

листья табака ' 3,34 1.67 ■ 2.0

£ % ;, сусп енд.культура • сои •- 0,234 " 0,066 . 3,5 ■■■■■■■"■:

'tX: .листья сои 3.06 > 1:35 2.27 ■

' вариант - 21, день на среде! с сахарозой, дней на сахарозе и 7 дней в её отсутствии П вариант -14 * "

• -•o'..1 >'• V • ' i'í^^li■'v ;-^таблща ' • ^Рост каллусной /скажи табака на свету и в темноте ; (в гралшат сырого веса) -- ■ ^ - ^ ■

'''Т.; /. i •Вари а н т ы : < i. свет ; ; < - темнота Vr'

'"Г ' I вариант V -'Г '■ ,- JI2„4 ¿ 0.8 : • ■■■■■ 8.7 * 0.5

: "„■ "V , • П вариант 712 ± 0.6 - 2.7 ¿ 0.4 V

■ - -

■' г.:^-;/ ■ ■■■'.'i Таблипа 3t • •

•':, Содержание водорастворима белков в препаратах, '- ^ -1" jn выделенных, из изолированных тканей ■ табака и сои ■ l ■■, ■;■ ■

"Т ,.,,.. : соде ржание. водораство-

i . ■ - гримых белков в мг/г сы- ' . ■ - poro peca ткани--- :

■'. ул -tJj (

В а р и а н т ы

i Ткань табака »выращенная на свету. .;

: I вяряйи1>| -"■' " " ■■ -

• ткань таоака,выращенная в темноте,.:

ЗД ± 0,5

I вариант

. . 2,0 i 0,4

■'-/Л& тканьтабака,выращеяная на свету, . .12 t о 36

з.. S /' •• ■•■•'^■■■■'П вариант - -- ■ •. . . » » -

: ткань таоака,выращенная в темноте, . . п п

•у- - • П вариант* ■■■■■■ : ■ - ■ ■

v■*" ■- - иуспендиальная культура клеток сои, - п оч+ п

.. - ■ ...-. выращенная на свету,-1 ♦ ♦

- ■ : . г- , г . ■ ^ л :

v.i.-\~- ...

' í

i.- : ^клеточного вещества изолированных тканей показал,-что асси-"" . . июифованный углерод находится в основном в 'водорастворимых .: * ^ соединениях как на свету, так и в темноте (табл.4). С увели-. ...< чением времени экспозиции количество С14.возрастает во. фрак-^ . ции пигменты, _лшиды и в спвртоводонерастворимом остатке '. (полисахариды, белви). ~ ... "л-

" - л В таблицах 5,6,7 представлены результаты анализа продук- '• V , тов кратковременного фотосинтеза, тканей'табака и сои, кульгави- 'г руешх in vitro. Основным продуктом 5 сек. экспозиции как ч > - " • . :.. .на свету, так и в темноте является ыалат. (41^-82%). '

При выращивании ткана табака на среде без сахарозы на- 4 блвдается увеличение включения меченого радиоуглерода во • ;. .;• " ■ : ■ фракцию фосфорные эфиры + ИК, причем с увеличением времени .'- ';

' 1 экспозиции в атмосфере C^Og суммарное содержание С14 в ■;■.■/,-■;'- - ;; : ; • указанной фракции растет, -достигая максимума цри. 5-минутном ■ ■ ' фотосинтезе, одновременно уменьшается содержание радиоугле-z;~ .'- рода;в манате (табл.6). ' . \.

Ц -;.:,' ~ - , " В культуре ткани'сои с увеличением времени экспозиции I.-,.'...;:";-[У-"', .; *- наблвдается возрастание содержания меченого аванина, а процент-•-.v . V ное:содержание метки в аспартате и малате, наоборот, уменьшает*^

' ' ся (табл. 7). ' - ; ■/,'".' . - ' "

Д, " /- : Основными продуктами темновой ассимиляции бикарбоната ..г""-.

. являются малат и цитрат, . ..■•;.':

^ Таким образом, качественный состав продуктов световой! ас- ~ ■ ' '." симиляции углекислоты более разнообразен,' чем темновой. . :

^ ■ г. - Таблица 4.

Поглощение МайС^О»' в распределение радиоизотопа ..' - • • • • по различным фракциям клеточного вещества тканями - табака (I и П вариант) и сои, в культуре > ш уКго." /

..Варианты

Условвя;Время э кспа-• Исходная: Ф Р1К Ц И И опыта " ..........

зиции о Лйне'^Гр^акт, в

от исходной радио-;

сек.

¿активности образна-да белка;спирто-.водо- :спир-" :раство-;раст- :то-во-:римая :вори- :доне-: :мая :раст-

: - ; ■ . ■-. ■ :вори-: . . '■.';:. : "■ мая ..'

свет

/ Ткань -табака I вариант-

текнота

: 5 " 60 300 1200

5 60 300 1200

0,033 0,41 2,07 : 9.7

:. 0,0101 0,12 0,58 .. 0.76

0,5 1,83 1 5,4

0,6 1,0

1.7

98.6 97,0 92 I,-89,5

-98,7 97,5 95 4

93.7

0,9 ■4,8

0,7 1,5 3 2

свет

Ткань • табака -П вариант..

.темнота

<£

' 300 1200

5 . 60 300"

0,029 .-' 0,403 1,86 .9,3

0,009 0,113 0,46 О, "

0,6 2^0: 3,2. 5,7

0,4 1,6 1,3 1.7

98.3

96.4 92,2

86.5

99,0 97,5 96,9

-1,1 1,7'

7.8

0,6 0,9 1,8 2.1

Суспевди- ;.ове альная 5 •. 60 - 300 1200 ■ ' - 0,041 . 0,517 2,79 , 12,2 . 1.3 2.4 5,2 5,8 97,7, 94,2 ' 89,1. 66,0. 1,0 , '3,4" 5,7 ■ - 8,2 :

культура клеток -- сои темнота 5 60 : 300 1200 0,0213 0,18 : • 0,408 0,83 . 0,5 0,9 1,3^ 1,7: 98,9 97,6 95.5 93.6 0,6 ' 1,5"-= . 3,2 -. 4 7

', (■ ; : ч ! I-/ ■ ,■ ч - ": i.' .'

Продукта световой и темаовой ассимиляции меченого ' зеленима тканями табака (I вариант)

Таблица;5.

i . ■

Условия:время экспо-^а от радиоактивности соединений.обнаруженных на хроматограмиах

опыта : ■ зшии с :фосф. : . :. : : - ■'.■ ; ; " : : • .

• : : : эфирн :Алания:Аспартат:Глю- :Серии :Ма- ;Цит- :Фума Старт +

ícaxa-: ■ — >:„■ :тамат: + ' :лат :рат :рат :неидент-

:ров + : :глицин: : : . :соедине-

:ФГК + : : : : ■ ■■ ■ ■■:, : ■ ■" : : ния

:сахара: : ■ ;_;' « t i

г сек.

Свет

Темнота

■2-5' 60 ■ 300 ' 1200

2-5 : €0 300 1200

, 16,4 Нет

12,3 Следи

8 6 4 ,Т

7.6 .. 6,9.

Следы Нет

6.7 Нет 2.4 Следы

19.5 Нет Нет 16,1 Следы Нет

9,4 . : 3,2 Следы

,. 11*2 5U 2,4 ,

ЮЛ Нет.

12.6 2,8 Нет '13.3 того Нет

64,0 Следы Нет . 54,9 16,7 Следы

60.4 13,8 Следы -

58.5 6,8 1,5 + + -

82.6 ■ 6,1 Следы 74,4., 3,5 Следы 59.0 I2II 3.2

Продукты световой и темновой ассимиляции меченог.

зелеными тканями табака (Я вариант)

9,8 Следы ; 12,1 Нет Следы

Таблица 6.

2-5

Свет .

1200

Темнота 2gíjj

300' ■ 1200

В Ё-,7

16,4 7,9, ! 26,9

8 Следы" Следы

1,4 6,7

Следы Нет 3,0 . Нет V 2,7

20,2 -13.5

■ 7,5'. Нет. 8,4 • Нет 8.7 Нет

60.3 10,1 Нет

iftiSssffi-

37,7 2,3 О,Г

59*2 6*5 2*8 55 8 17 6 4 1

66.4 6.4 0.6

9,7

Нет

з7б о!з

Нет

■!'> Ч ' '1 '

J

, f ■ / ■■.; , l, г.'';V-

М-г .'.;:*

V!1 Л-

Л"

Условия:Вг ; опыта ;31

;мя экспо-;% от

в-с6к -

V '"»"»V

Свет

Темнота 1

; 60 . -300 1200 -

", 5 60 300' 1200.

:ры Сахаров,:Ала- :Аспар-:Глю- ¡Серии :Ма- :Цит-:$ука*Тре-:Неи- : :+ФГК+оахара:нин :-тат :тамат: +. :лат :рат :рат :ояия:дент.;

-:-'■'■■■■■■•■..{■■ ■ -; ;Глщин; • : ^ ' : ' ■ ; ■■■■■ ;соед./>■^.

V . ■ 6,8 , . Нет - 26,2 Нет Нет ■ 64,5 2,5 1,0 ' Нет 'Нет

■■■ 4,2 ■ , Следы " 19,4 Следы Нет • 62;2 2,9 4,7 Нет 1,7 • ,: '.,./•

■у 7,6 1,3 19 2 2Х Следы. 61 5 2,9 3 2: 0,8 1,0

•• 22 0 28 8 - 9 8 3 9. 1,Г 20 I 41 31 31 3 0

'"Г''

, Нет Нет - 4,6 . Нет Нет 41,4 44,8 Нет Нет 9,2

• Следы Нет 15,3 7,3 Нет 46;6 18,0 1,45 "

Следа Нет 17,3 • 4,6 ■.'■ Нет 66,1 8,2 2,7;

;■ 3,0 .1,7 6,6 8^2 Нет • • 56,1 10,5 7,6 .

Еи 1:1

Нет . . Нет 3,2'

.' и;

••,. 7 -';! > ,-

• • * г

.'.'л1--'/ - 1

> Т ч1 V-

V;

-I: у.

' I ' , 'V '■ .1

I . ' '

."Г '.Г-

(''Л".'- 'Ч1'-■

' . ■ "IV■'■■у'^----*-

fia основании анализа продуктов световой и темновой асси-.милиции углекислоты изолщювашшми тканями табака и сои, ' можно сделать вывод, что; поскольку главным меченым продуктом является малат, реакция, обеспечивающая наибольшее содержание метки в указанном соединении, связанас карбоксшга-рованием. трехуглеродного акцептора фосфопирувата или пирува-та. ; На свету имеет место также и карбоксилироьаниё пятиугле-родного акцептора, так как быстрое появление метки в фосфорных гфирах углеводов и фосфоглицерате скорее всего связано ' с функционированием в тканях восстановительного пентозофос-фатного цикла. . ''-.-:

-, . :Для исследования пути углерода в тканях, выращиваемых; 1л vitro .применили ингибиторы фтористый натрий (0,05М) и . 1монофторацетат (0,005М). Первый из них является ингибитором превращения 'ФГК^-ФЭП (Кузин, Саенко 1956, Михайлова 1967, Freue et al* . 1970 ). Монофторацетат является специфическим ; -ингибитором щшла Кребса (Peterssi95£). :

Следует отметить, что интенсивность ассимиляции бикарбоната снижалась в присутствии обоих ингибиторов (табл.8,9).;, Это, по-ввдимоцу, связано с ингибированием в тканях основных энергетических процессов - дыхания и фотосинтеза.

. Анализ продуктов световой ассимиляции углекислоты показал, что в'присутствии фтористого натрия наблвдается значительное увеличение фракции фосфорных эфиров углеводов и снижение содержания С^ в малате (таблЛО).

-Поглощение меченого бикарбоната в присутствии ---:: Х1Г.Л0.05М) на свету изолированными тканями- та- . - ■'■ : бака (I и II вариант;. Прединкубация с Нз.Р >

ЗО кин, экспозиция с шнс*о4 •• -' ■ 20 мин. " .

■Вариант

Условия опыта

Включение -в расп/шш/

Ткань меченый бикарбонат (контроль) 9,7* 10е

' ИаЕ + меченый'бикарбонат■ ■■..- 2,38* Ю6

VТкань меченый бикарбонат (контроль) 7,6*10ь *> меченый;бикарбонат " .._ 2,31'Ю6

% ингиби-, рования-

75,5

69,6

: у!;;--;1,.1:. ■ . таблица 9«

■Влияние монофторацетата натрия (5*0x10™%) на ■■'■■ • . ассимиляцию бикарбоната на свету.и в темноте '■"< тканями-табака I и П вариантов ч пред инкубация с данофторацетатом в'калий-фосфатном буфере . '■■".. -

71/15М, >рн 7,6,30 мин и 20 мин экспозиция с ■- -

Вариант

Условия опыта

:Включение

1Й6ЛВ6-Х-1СЬ .рования

.Ткань. меченый бикарбонат (контроль! табака ■ • , V ■

1- вар. фторацетат + меченый свет бикарбонат ;

тсмиптя меченый бикарбонат (контроль)■

фторацетат. + меченый - г 7

бикарбонат ■■ "" '

8,85

6,029 3,89::

31,9 ^ 56,3

;Ткань ;; меченый бикарбонат (контроль) ..; ГГвар4 фторацетат Ч меченый свет . ..

бикарбонат

'меченый бикарбонат .(контроль)

тешюта- фторацетат + меченый- " .:-■■".

бикарбонат . ..■: ■ "■.

0,01 7,27

• 3,43 - 1,54

9,2

55,1

. Г. :1

'■ < к : V

'ii ■' ■■■

- - Таблица 10. ' . '

■ '■-.' 1 ■ „ ^ . 1 ■ ■ ■ ' ' ■ ' ТД ■■ " ' ' ' ' ' • ■ ■■■■ ■ Л ''г ■ Г ■ ■■■ ■ '

; Етаяние фтористого натрия (0.05М) яа распределение С в продуктах ■ ■- ' -. фотосинтеза в изолированных тканях.табака Iи Л вариантов ^: :

'.т..

Вариант-Условия ошта:^0^0^иоайт™кости соединевий.обнаруженных^на пдматограммах

•фосфор.. :эфиры !Аланин:Аспар-;Глю-:Серии :саха- ::.•■■ : таг : та-: + •ров • :мат<:глицш)

:ФГК + : . : : : ;рахар : - : '■ ' : " { ■

:Цит-

:лат :рат : рат :

Старт + ■ , ; неавеит. соед. .

Ткань бжарбопа?"3 31-8 !'3 12,6 8,2 1,8 . 24,1 12,4 1,2 6,6 , .5!

табака '.'■ . ■ . 1 : ■'■

I вариант меченый V . ' .г.-

бикарбонат 7,6 '6,9 II,2' 5,1 2,4 ■ 58,5 6,8' 1,5 Нет у '.-.Ч*:'

(контроль) ___;_- ■■■■■... ■ ■■ ■■:■■ ц; ,

Ткань б^аРЕШЙ 38'4 3'4 : 17'6 >3'3,1. 10,6 10,3 3,5 ; 9,8

' табака ■■ . . •. 1 - ■. . ^■

Пвариант меченый

I ! ■■'.''

Л*

контроль;

16,4 . 7,9 / 26,9; 1,4 6,7 37,7 2,3 0,7 Нет '

■ ■ у.' '

... ' -ч :

■1 ■ 1

"■■'г- ,<!

Таким образом, результат этих опытов подтверждают;возможность функционирования в тканях реакций ёосстановитель-ного пентозофосфатного цикла.

V Монофторацетат. в концентрации 0,005М нэ оказывал существенного влияния на перераспределение С*4 бикарбоната по отдельным продуктам как:световой, так и темяовой ассимиляции-Чтайт.П). Можно лишь отметить, что процент радиоугле рода'в'цитрате несколько возрастает, в то гремя как вглюта мате - снижается. Суммарное содержание метки б фосфорных ' эфирах Сахаров также несколько увеличивается, что может сви детельствовать о замедлении оттока С1^ из них, хотя последнее "более'четко проявляется в присутствии фтористого натрия

.Исследование Ферментных систем в тканях-растений, культивируемых 1д уИ;го ■:.■..; : .

;:Исследование путей углерода в тканях растений, выращива емых 1п , не было'бы полным без определения активности основных ферментов углеродного-метабояизма. Особое значение имелоопределение активности карбоксиифутацих ферментов: рибулозо-1,5-ди$осфаткарбоксилазы- и фосфоэнолпируваткарбо-ксилазы,. а также ферментов-карбоангидразы,НАД- и НАДФ-малат-дегидрогеназ и аспартаттрансаминазы, так как с этими фермен тами может быть связана-как первичная ассимиляция углекисло ты (карбоангвдраза;ШДФ-"малик!*-энзим ), так и дальнейшее '_■;.-

1' , г " ':.

Влияние дадафторацетата (0,005М) яа распределение С14 в 1 продуктах световой и темновой ассимиляции меченого бикарбо-г: ната в изолированных тканях, табака (I и П вариант):. ■ , 1

Таблица II-:

Условия опыта. Варианты опыта ' ' • 1 , ' % от общей радиоактивности соединений .обнаруженных на У :У;?' ■ хтюматогракмах ■

фосфор.: ■ . : ■ : зфиры :Ала- :Аспа-:Глв-:Серия. Сахаров:айн :раг. :там.: : +ФГК+ : 1 :к-та :к-та:глицин сахага : -' : - Ма-лат V / , • • ■ . ■ :, Цит-:фума-: Старт + • к..':-. рат : рат :невдент. ■'■-. :: : соед, /.

: ' 7

I вар. :■ V/, . :

Й» 5,3- 10,9 2,8

• : ГЗт^ЙаГ М;_19,8 . 2,2.

темнота меченый бикарбонат , д ^ _ ■ -: ^ ■■ д ^

•'<• 1-. ; ' меченый бикарбонат п » ••■■ , г .ут : ' + моиофгорадетат " " ■ ■ ,х

;о,7 ;о,5

69,6 3,0 58,9.,5,3 76,8 6,9 68,4 13,6

0,8 0^9 6,0; 6,5;

1,5 : 0,2 0,4 0,4

-л

i

П вар, .': и

^ ! • МеЧеЙн5^Й°НаТ ™>3 : 6.4 >.5

. 1:г фторацетаг + 77 п ' й я 7

! меченый'бикарбонат . 11 »и

темнота меченый.бикарбонат ц 5; _ У 10 з

. . • фтсрааетат '+ 1 п ч ■ Тс с

. меченый .бикарбонат., '

-3,2 ,0,9 4,5 1,2'

5,8 5,4

39.1 10,2.

30.2 13,3 71,4 12,1

64.3 17,1 /

1,1; 0,5 0,8, 1.0-

0,4 /

0,2 ' ' 0,3

0,6 .

г1;:'' 'у у

■ 5 •■'■•>1.*

НАРБОАНГИДРАSA (Карбонат-гидро-лааза КФ 4.2.1.1.К ■*- ^ *...

• - Данвие исследования изолированных тканей табака'и сои - :

1. _ . . ' -

на наличие в. них карбоавгадразвой активности предотавленн в табл.12. Из таблицы видео, что активность карбоангядразц в световом вЕрианто выше, чем в теиновои. Высокая активность данного фермента может свидетельствовать о достаточно высоко» уровне.обиена веществ в изолированных тканях табака и сои, а также в свою очередь указывать на то, что реакция,œi-тадизируаиая карбоангидразой-не нохат бнгь лимитирующим фак- 4 тором в усвоения углекислоты. Наши данные по культуре ткани табака показали, что активность карбоангидразы на 14 день выращивания ниже, чем на 21 день* Вполне вероятно, что увеличение активности карбоангадразы связано с увеличением активности основных карбоксилирующих ферментов.'Реакция, нага газируема я карбоангидразой, может Сыть важным звеном в -s; регуляции уровня СО^ в клетках тканей. Не исключена еозмод- " ность существования в тканях лабильной фиксации углекисло-TU, как это показано для бактерии Thiobacilluc thiooxidansSSR

-(Романова с соавт.,1972). •• - ■

РИВУ ЛОЗОДИФОС ФА ТКАРВОКС ИЛА ЗА {З-фосФо-Д-гляцерат-карбокои- ■ -ляаэа, димеризующая КФ 4.1.1.39.). .','

Известно, что рибулозодифосфа ткзрб о кс ила за является од-" '; ним из важных ферментов цикла Кальвина и катализирует реакцию карбоксилирования рибулозо-l,S-дифосфатз. Данные о наличии указанного фермента в изолированных тканях отсутствуют,

■ • .- Таблица 1?. ■■ "

Активность карбоангидразы в препаратах,выделенных . из изолированных тканей табака I и П вариантов и.: ;

:.- ■ суспендиальной культуры клеток сои -'.:" ^ - ■ ■'■<

7;::..- Варианты.;■ Режим выращивания • .-..тканей V-1 ¡Активность,/:' гкарбоангжразы" :в.ед.ак7/мг : белка ■

= ■'"■ Ткань табака I вариант-..(14 дней) - ... ; свет темнота --"■', :4,33±0,04. : - : 3,87±0,04 ;

Ткань" табака;I /вариант' 1 ■ ; . • (21 день) свет . *■..-;;;. темнота "5,16±0,07 5,04*0,05 ..

- Л . ' ^ .' - - 1 .г-.::'.:' ,-■" * ■ свет-темнота* : 5.06*0.03 •

т ..-Ткань табака П вариант'..:■■ ¿ч свет . •4,79*0,17 ..

. • '■■.-■■ ■. - "..■;. - - -темнота л' 4.01^0.06

Ткань сои (суспендиальная) . свет :'.' 5,3 ¿0,02

свет-темнота8: ' 5.00*0.08 -" . "с"'

" ^Вариант: свет-темнота - ткань,' выращенная на свету, перед . ^' А

, вн^дяением карбоангидразы помещалась на 4 часа в темноту -----. -

V хотя фотосинтетическое образование углеродов в тканях, выра-

•"....' щегагах на свету ,' можно бале, бы-отнести за счет функционяро- .

.вания 'в тканях восстановительного пентозофосфатяого цикла, . ■■■':■.•'./■': Г: . 3 изолированных тканях табака и сои, гыращешшх на свету,-V - показано наличие ркбулоэодифосфаткарбоксклазы. Нам не удалось .. ' . :: ~ обнаружить какую-либо активность указанного фермента при вкра-

: ■-щиванид тканей в темноте. Следует отметить, '-что активность 7 РиДО-карбоксилазы сохранялась на урогне 3,2-10~/кк^гшиДт

.- ;; У белка, если в качестве субстрата вместо рибулозо-1,5-ди$ос- .

фата: применяли рибозо-5-фосфат. Отсюда можно заключить,- что' -

помимо указанного фермента в тканях,культивируемых на свету присутствуют и другие ферменты цикла Кальвина*:: ->' Поскольку скорость карбокскпирования пятиуглеродного > акцептора в 2-6 раз ниже скорости карбоксилирования трехугле-родного (табл.13), можно предположить, что карбоксилврованке рибулозо-1,5-дкфосфата пе играет главную роль в поглощении углекислоты. Сравнение активности РиЦФ-карбоксвлазн изолированных тканей табака и сои с интактным листом показало," что в препаратах, выделенных аз листа, активность указанного фермента на два порадка выше. -У

Ф0СФ0ЭН0ЛПИРУВАТКАРБ0КСИЛАЗА (Ортофоофаг-оксадапетат-карбо-кси-лиаза /фосфорилирующая/ КФ 4.1.1.31.). - Опыты показали, что в тканях табака независимо от режима выращивания-на свету они в темноте, на среде с сахарозой или в её отсутствии - фермент активен. На свету в зеленой тка ни табака активность указанного фермента всегда была выпе, чем в тканях, выращенных в темноте. Снижение активности ФЭП-карбонсилазы наблюдалось также в варианте 2,\то есть при культивировании в течение 7. дней на средё^без сахарозы.^ В ткани сои активность ФЗП-карбоксилазы.была на порядок вше чей в тканях табака обоих вариантов (табл.13). Определение; оптимума рН действия данного фермента показало, что он ле- . хит в области 7,4 и 7,6 для суспендиальной культуры ткани сои и каллусдой ткани табака соответственно.

Сравнение активности ФЭП-карбоксидазы 21-дневных тканей

Г-гГ^'- -»т ^

''' Таблица 13. V. ., , V

Активность фосфопируваткарбоксилазы и рибулозоди- • •.. фосфаткарбоксилазы в препаратах, выделенных из изоли- : '

рованных тканей табака ,{1 и П вариант), - суспендиаль -ной 1ультуры клеток сои и листьев табака и сои.

-•'• :Активность фосфопируваткад-Варианты ¡боксилазы вшМсубст/мин/; : ■ мг белка - <■-■ Активность рибулозоди-л-;;: фосфаткарбоксилазы в.:*4; ' мкМ субст/мин/мт белка

„ - . ' ■ |14дней :21день :21 день' '-:1 свет : ,свет :темнота Г (16 час/: (16 час/ .. : сут) : ':■ сут) : ■■'■ : ;; 14дней -.:21девь : свет : : свет ... :деиь - 1 .■"<■'■■ ; '•.: . • ~- :тем- : - : • :нота' .

бШЬ1мр.6'9'10'3 8,3*10-? 4,2*Ю"3 7,9'Ю-3 2,0'Ю^3 г.Г'Ю^ЧЙ'Ю"3: Не 5 ':•' " • обяа- г 2,7-ю3 РУ*ег : .

, Листья. - . о тс«тпЗ табака ' 10 ' - 0,13*;' -' .

Суспенди- "': гагъттоа не опре-з 2.тп-г не:опре-меток^ деляли 1и 'деляли сои / ■■ '.■>'"■. не опре- с п.тп-3 не л • -V.' . деляли - - ^ опре-■:.'.- ч. деля- -. -:. ■..-■.■.- ■ ли

*Листья сои - 2,3*Ю-3 " ~ 0,507* "■. ■

*растения в возрасте 30 дней -■-.■. - л.'. * . . \

* т а б а к а и сои с активностью препаратов, выделенных из .:•;.•''. •листьев указанных растений,показало, что активность ФЭП-кар-,.:-боксилазы в листьях табака и сои примерно того же порядка, ;-' ~ . что:и в'изолированных тканях. Таким образом, •• можно ■ сказать, ••••_".; что поскольку в■изолированных тканях активность ФЭП-нарбокси-глазы в 3-6 раз вше активности РлДФ-карбокеилазы; и первичны-' '. ми продуктами ассимиляции углерода как на свету, так и в тем- • •

ноте являются кислоты - палат я аспартат, то основной реакцией, ответственной за фиксацию углекислоты является вар- " боксилировавие пирувата я фосфопярувата. -НАДФ-ИАЛАТДШ1ДР0ШАЗА ("Малик^нзим) (Ъ -малят: НАДФ-ок-сидоредуктаза, декарбоксидирующзя, КФ I.I.I.40). "

Наша исследования показали, что карбоксилированве диру-^вата при участям эндогешюго ^алик^энзима имеет скорость г реакции почти равную скорости карбоксилирования фосфоэнол-' пирувата (табл.14). Наибольшая активность фермента наблюда— ■ лась в области рН 7,4 и 7,2 в ткани табака и сок соответственно* Эти данные тэкке говорят в пользу того» что в тканях -реакции карбоксилирования идут преимущественно на трех углеродных акцепторах.

-НАДН^-НАДФН^-ДЕГИЛРОГЕНАЗЫ (оксидоредуктазы, действующе \

на восстановленные-формы НАД и НАДФ КФ 1.6.99 )i :

/Определение активностей указанных дегидрогеваз необходимый этап работы при оценке активностей НАД-к НАДФ-зависимых налатдегидрогеназ, особенно при спектрофотометрыческой методе определения. Опыты, проведенные на препаратахгвыде- -ленных из тканей табака и сои,показали, что активность атих. ферментов ничтожно мала и их можно не учитывать приопредр-леняи активности малатдегидрогеназы. ~

МАЛАТЕЕШРОГВНАЗА (L -малат:НАД-оксидоредуктаза КФ X .1.1.3?)

В связи с быстрым образованием меченого малата при кратковременном фотосинтезе"и темновой ассимиляции углекислоты *

~ Таблица 14.

Активность НАД Ф-"малик-энзима ,(Кф 1.1.1.40.)— 1

в препаратах,ввделенных. из изолированных тканей -табака и и и вариант) и суспензии клеток сои " •

Варианты Активность: фермента в мкМСОо/мш/ . , > ■ мг белка • л ' -

2Хдень: выращивания :21день, шраяшванш ■ на свету - : "-■ в темноте -' " ' ■*

Ткань табака 1вар,- -.7,83* КГ* ■ зд'кг3 ■-

Ткань табака П вар, 6,4'Ю'3 . Г; ч не определяли

Суспенд.культура '. клеток сои ■■■ 8,7* КГ3 ' - '■' не определяли -'. -

Таблица Т5.

- Активность НАД-малатдегиирогеназы в препа^ выделенных из:изолированных тканей табака П вариант ) и суспензии клеток сон \

Варианты' Активность НАД-иадатдегидрогеназы в шйЛ/- ' , , - ^бстсата/мин/иг белка "

21"день выращивания: 2Хдень выращивания--^ на свету ■ " : " в темноте

. , Ткань табака I вар. 1,56±0,4 : ; 1,44*0,23 -7 V

Ткапь табака П вар. 1,48±0,17 ' ' / 1,35^0,11 •

Суспевдвальная ' ■ ■ культура: клеток. ■ сои '■ 1,80±0,26 "не - определяли

было проведено сравнение-активности ВДГ. в темновом и свето- * - еом вариантах тканей табака,'а также определение ее активности * в суспензии клеток сои. Определение оптимумов'рН 11АД-малатде-. гидрогеназы тканей.табака и сои показало,'что в условиях калге-,го эксперимента рН равен 8,6 й'8,4 соответственно. >;''":

.'. В "табл. 15 представлены результаты опытов по определению ' активности фермента в указанных объектах, из которых видно, .:

•- что активность МИГ близка во всех тканях; Правда, в темновом , . 1 V варианте тканей табака" она ыеЬколько ниже,' чем в световом. . : • :.-/-"'■■.'■ Снижение.активности малатдегидрогенаэы наблюдалось также и ъ ' случае выращивания ткани табака без сахарозы. У.;"• АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА( Х^-асдартат: 2-оксоглутарат-амино- 'Г-трансфераза КФ 2.6.1.1.). ■ > - л •' ■ - - ' ' ' ■■ "

Необходимость в определении наличия и активности этого -фермента возникла в результате быстрого появления С "

. ' - в аспартате. Последний метится (около 20$) при экспозициях .-/ У '

5.сек. в присутствии меченого бикарбоната'как на свету, так Ч ■" , - ив темноте. Опыты, проведенные с препаратами, выделенными ^■■■■.¿-.■У из тканей табака и сои,показали наличие аспартатаминотранс- V -"; -■"-■■; - - феразы .и высокую её активность. Наибольшей активностью обла-

■ дали препараты, выделенные из тканей табака и сои, культиви- ■-./ . . " ; руемых на свету (табл.16). Снижение активности фермента наб- ■ ; > * ' -лкдалось в,темновом варианте и при выращивании ткани табака '

. .на среде без сахарозы. Сравнение активности аспартатамино-■ V» траноферазы тканей табака и сои с литературными данными - . ■.: ' (Редышна с соавт.1969) показало, что активность обнаруженного фермента равна активности фермента, выделенного из про-:• • ростков гороха. Небольшие'различия в активности.аспартатами- •'.'.'•.

7 нотрансферазы в-вариантах изолированных тканей,' по-видимому, "'->'■ л-.-'^': можно объяснить различиями в уровнях обмена веществ и синтеза ■ ■, ♦ данной аминокислоты. :V7 "У ; "--УК'--''

: ^ - ■ ■ ' -" 1 - * ~ " ' ■ ''.л ,к

' " К/^У ' Г Таблица 16.:\yj\if0:

/Активность аспартатамгоотрансферазы в препаратах,' у т^.-"'. -лЛ",*1--¿чН выделенных из изолированных тканей табака (I и П-■: -■■'■■ ■■* вариант) и суспензии клеток сои ; /.-. '-"

: • Вари анты ':'"

2Г день" выращивания:: 21 день внрадиванвя ' на светт ■ '! -в-темноте

;■>Ткань табака 1вар. 0,07±0,01 :: : ч 0,066^0,012

' Ткань табака Пвар. . . 0,054^0,009. ; _'■;■■'-. . не определяли ^

:Суспецциальная ■■; .---С.'-* 1 ■ -г- ■ -.';■ У: "*« .■ ■ \ .

-', •'' культура клеток - 0,073=0,004 - не'определяли •••..'•"••;•■: -

сои

г "" . " ; / -1 . ■ . , '" ■ " ■ ' -. - \ - . ■' '* ^ -.'у' ^ *■ \

л ■

г.^: • • ••. „ • •• ; -'

'<■"•.•'"-• I. - В результате "исследования. динамики образования: ранних Г; ,!л * ' . продуктов "ассимиляции С1 на свету и в темноте и обнфуже--: '%'

• ния активности основных ферментов,участвующих в этом пропёс-; ' ^ '{_; ;■;'■ ^ се, выяснены основные пути ассимиляции• углерода изолированны-"-ми тканями растений табака и сои. ^Д-;^''-

2. Показано, что ассимиляция углекислоты изолированными :ч . •. . тканями на свету в 3-10 раз выше, чем в темноте, Медду »штен- •. •'

.. ' 'сив'яостью поглощения С02 и количественным содержанием хлоро-, ^ V ' - .филла-и водорастворишх белков, отражавщим степень ди$фереи-- ; . .". ' , 'циации хлоропласта, обнаружена прямая зависимость только для - • -... . • ... тканей табака. Между иптеасивностью ассимиляции углекислоты> '' \• активностью основных карбоксилирупцих фермеГггов прямая' зависи-

■ .';■ ."- У'МЛ-

■ ■■■/.. - 26 - '.'

., мость обнаружена как для тканей табака; так и для тканей сои. ' . -г . '-лЦ.... /.'

. , 3. Присутствие в инкубационной среде фтористых соедине-

ний (фтористого натрия ифторацетата) в значительной степени . икгибирует поглощение меченого бикарбоната, что указывает.на важную роль гликолиза и цикла трикарбоновых кислот в метабо-: : -литических.процессах изолированных тканей. Фторид натрия су-, щественно изменяет картину распределения С14 в продуктах световой ассимиляции углекислоты, ори этом набйцдаетоя медлен- -: шй отток радиоуглерода из фосфоглицерата, .что приводит-к. ; накоплению последнего и фосфорных эфиров углеводов.■Это в свою очередь служит подтверждением того, что указанные соединения образуются в процессе фотосинтеза. ' . А.Анализ продуктов |фатковременной ассимиляции меченого бикарбоната показал, что основным продуктом как на свету, так и в темноте является.малат, который образуется из.оксал-; ' . ацстатз при участии НАД-специфичной малатдегвдрогеназы,:.а

также при непосредственном карбоксилировании пирувата с уча-. ;- ■; стие'м НАДФ-"малик"-энзима.

5. Высокая активность карбоангидразы, обнаруженная в -тканях табака и сои, показывает, что реакция, катализируемая ■ .этим ферментом, не является фактором ^лимитирующим усвоение углекислоты изолированными тканями; Указанный фермент, по-вщимому, вшюлняетрегуляторше функции в клетках, создавая пул бикарбоната, а в случае дефицита СО.-, принимает участие

y-: уУ- .УУ '</;■■:; -, 'г?'.-""-' уУ v.- ./=.:.-"■"..", ' уУуу.-:'^

В ero лабильной связывании . -■','■ . у У- У i'' У -''У

У\У , 6. Полученные лаяние по кинетике включения С^4 угде-■>'-У кислоты в продукты световой и темповой фиксации и наличие -\!'У в препаратах, выделенных-из изолированных тканей,ферментов У :- у фосфопируваткарбокоилазн и НАДФ~пиаляк,,-энзяца> показывают,' . У . что главным путем ассимиляции С02 у тканей растений, куль-'У тивируемых in vitro »является карбоксмлирование трсхугле-родных акцепторов лирузата я фосфопирувата. УуУ

7. Раннее включение' С^*-бикарбоната яа свету в .фосфора ; ■ вые эфиры сахаров, увеличение их суммарного содержания при Уу у-

Уу иягибировании фтористым натрйеми наличие активной рябуло-' ' .. ■ • зодифосфаткярбоксила?а указывает на функционирование в таа- ^ ■у- нях растений, выращиваемых в культуре, восстановительного i У ■: у певтоэофосфатаого цикла . Внеста с тем вышеуказанное свядв- ; у ;: у уУу тельствует о том, что при выращивании изолированных гканей ; -на свету они частично переходят на автотрофный механизм усвоения углокаслоты. ■ > ,-,:ч , .-У.У

' :У РАБОТЫ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ Л - V уУ

I. Полевая B.C., Кузнецова ".Г., Докая И.Г.,1971. У'"у

у'. .-у О фиксаций С зелеными ткаяяка ряотевай в культуре ♦ 'У-УУ Биохимия и биофизика фотосинтеза. Гр.симпозиума.Иркутск. 'у . ;" 2. Кузнецова Л.Г., Половая B.C., Доиан Н.Г.,1971. ■ • ■ ■V^

О фиксации Ci¿f02 изолированными хканяыи растений. У Докл. АН СССР, 200, » 6, IA63. '"■ '.y .L-,'.. у!::у.' -:.."°:у'

3. Кузнецова Л.Г., Опарина Л.А., Долевая B.C., До мак К.Г. У у 1972..0 путях использования углерода культурами тканей у.„У" табака. Биохимия, 37, fe 2, 317. Ууу.

'. ' Doman N,G., Kuzneteova 1,G., Polevaya V.S. Pathwayо 'of . • . Carbon oy green tiesuee of plants in culture in vitro. ■ ■: 1972, Thotoeinthcsie Ш. . j ; ; '■.: ".v:- ,

. '.-i Материалы настоящей работы докладывались на Всесоюзном •стшозиуме "Биохимия и биофизика фотосшиеэа" (Иркутск,.1970),, на 4-ой конференции Прибалтийских "республик и Белоруссии (Вильнюс, 1970), на Меадународном симпозиуме по изучению продуктов • - фотосинтеза (Ленинград, 1971), на П Международном фотосинтети-"';:ческом конгрессе (Италия, 1971).

Т-20850 Подписано в печать 28.12.72 г. . Заказ 866 Р ' ' : , Тира» 200 экз. ■ . ■ .':.'■;.

Отпечатано на' ротапринте в Научном' центре биологических исследований АН СССР. ■ ' .