Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение берберина из василистника малого

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Сараев, Игорь Владимирович

Введение

1 Аналитический обзор

1.1 Берберинсодержащие растения

1.2 Физические и химические свойства берберина

1.3 Культуры клеток и тканей растений как альтернативный источник получения физиологически активных веществ

1.4 Образование и метаболизм берберина и протобербериновых алкалоидов

1.5 Получение алкалоидов в современном фитохимическом производстве

2 Методическая часть

2.1 Объект исследования

2.2 Определение химического состава

2.3 Определение алкалоидов.

2.4 Определение флавоноидов

2.5 Определение сапонинов.

2.6 Спектрофотометрическое определение содержания белка

2.7 Количественное определение рутина (витамина Р)

2.8 Определение аскорбиновой кислоты

2.9 Разделение липидов на силикагеле.

2.10 Определение индивидуальных моносахаридов методом хроматографии на бумаге

2.11 Определение содержания хлорофиллов А и Б в экстракте

2.12 Количественное определение алкалоидов в культуральной жидкости

2.13 Математическая обработка результатов

2.14. Получение и субкультивирование каллусной культуры ^ *

2.15 Получение суспензионной культуры ^

3 Экспериментальная часть

3.1 Химический состав василистника малого и василистника 54 простого

3.2 Исследование химического состава василистника малого в раз 58 личные периоды вегетации

3.3 Исследование влияния различных экстрагентов на выход 60 биологически активных веществ из василистника малого

3.4. Введение в культуру in vitro Thalictrum minus L.

3.4.1. Влияние способа культивирования на процессы роста и 67 вторичного синтеза в культуре ткани Thalictrum minus L.

3.4.2. Исследование влияния массы пенополиуретановых 73 кубиков и распределения в них биомассы на процесс синтеза берберина иммобилизованными клетками Thalictrum minus L. в условиях продукционной среды.

3.5 Химический состав каллусной ткани Thalictrum minus L.

4 Оптимизация процесса экстракции надземной части 80 василистника малого

4.1. Определение оптимальных условий экстракции.

4.2 Оптимизация процесса

5 Технология получения берберина из василистника малого.

5.3 Технология получения берберина из каллусной ткани 93 василистника малого иммобилизованного на пенополиуретановом матриксе

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение берберина из василистника малого"

На сегодняшний день значительное количество выпускаемых лекарственных препаратов имеет растительное происхождение. Специфическая особенность растений состоит в том, что они способны синтезировать огромное количество самых разнообразных химических соединений различной природы, зачастую весьма сложных по строению, относящихся к разным классам. Однако лечебными свойствами обладают лишь те из них, для которых характерна физиологическая активность и которые по этому признаку объединяются под названием физиологически активные вещества, или биологически активные вещества. Оказывая на организм то или иное физиологическое, точнее фармакологическое действие физиологически активные вещества способны остановить патологический процесс или нормализовать функции пораженных органов.

Среди биологически активных веществ, синтезируемых и накапливаемых растениями, известны также классы природных соединений, как алкалоиды, терпеноиды, фенольные соединения и их гликозиды, а также полисахариды и многие другие [1]. Качественный состав и количество этих веществ зависят от условий произрастания растений, фазы их развития, времени сбора, способа сушки, хранения сырья и других факторов.

Однако, значительное расширение заготовок лекарственных растений, повышающих неспецифическую сопротивляемость организма болезням, интенсивная эксплуатация в народной и традиционной медицине привели к быстрому истощению их природных запасов. В настоящее время многие лекарственные растения находятся на пороге исчезновения.

Василистник малый - многолетнее растение, ежегодный, доступный, возобновляемый источник сырья для получения берберина. Гератопротекторное и холеретическое действие берберина зарекомендовало использование его в народной медицине, кроме того, берберин представляет интерес как источник новых противоопухолевых препаратов созданных на основе его химической модификации. В настоящее время, берберин является импортируемым препаратом. Ранее получение берберина осуществлялось из корней барбариса, но на сегодняшний день в связи с отсутствием плантационных насаждений барбариса производство берберина прекращено. Использование василистника малого позволит сохранить посадки источника сырья - барбариса, который вырубают 1 раз в 25 лет для добычи корней растения и одновременно позволит обеспечить регулярное поступления желчегонного препарата растительного происхождения на потребительский рынок. Новым методом расширения сырьевой базы и охраны окружающей среды является клеточная биотехнология. Культивирование тканей и клеток растений на искусственных питательных средах в условиях in vitro является надежным, экологически чистым, быстрым способом получения целевого продукта в необходимом количестве. Метод культуры ткани обладает рядом преимуществ, таких как отсутствие сезонности производства, независимость от погодных, климатических условий [5].

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Сараев, Игорь Владимирович

Выводы

1. Предложена технология безотходного производства берберина с использованием в качестве сырья надземной части василистника малого и клеточной культуры Thalictrum minus L., иммобилизованной на пенополиуретановом матриксе. Использование культуры клеток в качестве продуцента берберина позволит получать конечный продукт (берберин) независимо от сезонных, погодных, климатических условий.

2. Определен химический состав василистника малого в различные сроки вегетации и даны рекомендации по сроку его сбора. Установлено, что лучшим временем сбора является период май-июнь (содержание алкалоидов в растении 1,26 %, сапонинов 0,12 %), а не середина августа, как считалось ранее. Содержание в растении сапонинов и алкалоидов 0,09 %и 0,96 % соответственно.

3. Экспериментально подтверждено, что имеются значительные отличия в химическом составе растений одного вида Thalictrum minus L., произрастающих в различных условиях. Thalictrum minus L., произрастающий в степной зоне содержит на 0,3 % а.с.м. больше алкалоидов, чем другой фенотип василистника, произрастающий в лесной зоне. Отмечено повышенное содержание сапонинов (0,25 %) и суммарных липидов (6 %) у василистника лесной зоны. Установлен химический состав василистника малого и василистника простого. Количественно определено содержание алкалоидов, витаминов, сапонинов, флавоноидов, содержание липидов в этих растениях. Подтверждено наличие берберина, содержащегося в исследуемых растениях.

4. Получена из дикорастущего растения-донора высокопродуктивная каллусная культура Thalictrum minus L., являющаяся экзометаболитом, способная не только синтезировать берберин, но и выделять значительное его количество в среду культивирования. Определены зависимости накопления биомассы и выделения берберина от способа культивирования. Установлены условия иммобилизации клеток Thalictrum minus L., позволяющие достичь выхода конечного продукта берберина не менее 0,56 г/л среды.

5. Проведен сравнительный анализ содержания биологически активных веществ в каллусной ткани и интактного растения (содержание алкалоидов в каллусной ткани 0,98 %, в интактном растении 1,21. В каллусной ткани содержание сапонинов (0,74 %), флавоноидов (0,08 %), что превышает показатели в интактном растении более чем в 2 раза. Показано, что каллусная ткань содержит значительное количество берберина.

6. Установлены параметры процесса экстрагирования, при которых достигается высокая степень из влечения целевого продукта. Оптимальные условиями экстракции: экстрагент — 60 %-ный этанола, продолжительность — 4 ч, размер частиц сырья 1,4 мм. Предложена математическая модель извлечения берберина, построена поверхность отклика.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Сараев, Игорь Владимирович, Красноярск

1. Бузук Г.Б., Ловкова М.Я. Метаболизм алкалоидов: регуляция на молекулярном уровне, пространственная организация // Прикладная биохимия и микробиология. 1995., т.31, с 467-479

2. Бутенко Р.Г. Рост и дифференциация в культуре клеток растений // Рост растений и природные регуляторы. -М.: Наука, 1977. C.6-2Í.

3. Бутенко Р.Г. Выращивание клеток растений в суспензионной культуре // Известия АН СССР, Серия биологическая. 1977, 5.-С. 697-710.

4. Бутенко Р.Г. Физиология клеточных культур, состояние и перспективы // Физиология растений. 1978. - Т.25, № 5. - С.1009-1024

5. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения // Культура клеток растений и биотехнология. М,: Наука, 1986- - С. 3-28.

6. Гамбург К.З., Рекославская Н.И., Швецов С.Г. Ауксины в культурах тканей и клеток растений.-Новосибирск: Наука. Сиб. Отд-ние, 1990.-243 с.

7. Запрометов М.Н. Вторичный метаболизм в культурах клеток и тканей растений // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. - С.37-51.

8. Лекарственные средства: свойства, применение, противопоказания: Справочник / Под ред. Клюева М.А, М.: Русская книга, 1993. - 576 с.

9. Найдович Л.П., Маслова H.A., Бондаренко Е.В. Спектрофотометрический метод количественного определения берберина //Хим-фарм. журнал. 1978.— №10,— С. 132-134

10. Носов A.M. Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.5-20.

11. Потопальский А. И., Петличная JI. И., Ивасивка С. В. Барбарис и его препараты в биологии и медицине. Киев, 1989.-160 с.

12. Соколов С.Л., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. -М. 1990.-205 с.

13. Фаулер М.В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений М.: ВО Агропромиздат. 1987.- С. 9-42.

14. Холина А. Б., Журавлев Ю. Н., Булгаков В. П., Ожигова И. Т., Елькин Ю.Н. Получение и характеристика каллусной культуры Thalictrum minus L,//Раст, ресурсы, 1991 .Т.27.вып.4.С.81 -86.

15. Холина А.Б., Журавлев Ю.Н. Культура клеток растений как источник протобербериновх алкалоидов.//Раст. Ресурсы. 1996. Т.32 вып.1-2. С 134-149

16. Albersheim P. Oligosaccharins that regulate growth, developments and defense responses in plant// Glycobiology. 1992. Vol 2. № 3 P. 181-198.

17. Archambault J., Volesky В., Kurtz W.G.W. Production of indol alkaloids by surface immobilized C.roseus cells // Biochemical engineering research unit. Monreal. 1990. Vol.35. -P.660-667.

18. Amann M., Nakagura N., Zenk M. H. (S)-tethrahydroprotoberberine oxidase the final enzyme in protoberberine biosynthesis // Tetrahedron Lett. 1984. Vol. 25, N 9. P. 953-954.

19. Amann M., Wanner G., Zenk M. H. Intracellular compartmenation of two enzymes of berberine biosynthesis in plant cell cultures // Planta. 1986. Vol. 167. P. 310-320.

20. Beecher C. W. W., Kelleher W. J. The incorporation of berberine into jattorthizine// Tetrahedron Lett. 1983. Vol. 24, N 5. P. 469-472.

21. Brodelius P., Pedersen H. Increasing secondary metabolic production in plant cell culture by redirecting transport // Trends in Biotechnology. 1993. Vol. 11,NI. P. 30-36.

22. Chasan R. Phytochemical Forecasting // Plant Cell. 1994.Vol.6.NI.P.3-9.

23. Cordell G. A. Introduction to Alcaloids. John Wiley.NewYork.1981.

24. Dalton C.C., Peel E. Product formation and plant cell specialization: A case of photosynthetic development in plant cell cultures // Progr.Indust. Microbiol. 1983. Vol.17.-P.109-166.

25. Васильева В. Д. Химический состав отечественных видов семейства Berberidaceae // Фармация.-1976.- № 4 С. 33-37

26. Kondo Yoshikazu. Organic and biological aspects of berberine alkaloids // Hetero-cycles.- 1976.- № 1, P. 197—219.

27. Машковский M. И. Лекарственные средства.— M. : Медгиз, 1972.—т. 2.- 931 с

28. Иваса Дзюидоэ, Нарито Сюнсу-кэ, Накамура Кандзи Пат. 4992 (Япония) Способ получения 13-алкаилберберина.— Опубл. 19.02.70.

29. Садыков Ю. Д., Дегтярев В. А., Порошин К. Г. Синтез комплексных соединений на основе алкалоида берберина // Докл. АН ТаджССР,- 1968.-№ 10, С. 28—29.

30. Садыков Ю. Д., Дегтярев В. А., Порошин К. Т., Гришна И. Н. Синтез бромпроизводного алкалоида берберина // Докл. АН ТаджССР.-1968.- №8, С. 17—18.

31. Садыков Ю. Д. Химическая модификация берберина : Автореф. дис. .канд. хим. наук.— Душанбе, 1971.— 25 с.

32. Садыков Ю. Д., Буриченко В. К. Соли берберина на основе некоторых аминокислот // Докл. АН ТаджССР.- 1976.- № 5, С. 36—38.

33. Потопальский А. И., Акишина Т. М. Шишка Г. В. Антимикробные и противоопухолевые свойства алкалоидов чистотела большого и их тиофосфамидных производных // Микробиол. журн.-1975.- вып. 6, С. 755—759.

34. Джалилов Д.Р., Горяев М.И., Круглыхина Г.К. Исследование алкалоидов, выделенных из растения Berberis iliensis семейства Berberidaseae // Изв. АН КазССР.-1963.- вып. 3, С. 15

35. ClarkeE.G. С. Isolation and identification of drugs.— London : Acad, press, 1971.— 776p.

36. Шубина.Л. В., Олешка Г. И., Кудымов Г. И. Влияние pH среды и природы органического растворителя на экстракцию берберина из водных растворов // Фармация.- 1974.- 23, Изб, С. 57—58.

37. Debska W. Chromatografia wybranycbralkaloidow jaskotczego ziela (Chelidonium majus L.). Cr. L— Biul. Inst. rosl. leczn., 1958, 4, N 4, P. 323— 329.

38. Gordin H. M., Merrell C. G. Das Gazesche reine Berberin.— Arch. Pharm., 1901, 239, P. 626—637.

39. Faltis F. Ober die Konstitution des Berberins, sowie über einige Abkommliti desselben.—JHon. Chemie, 1910,31, P. 557—581

40. Gaspree Z., Weber K. Studies on the spectra of protoberberine alkaloids. Absorption spectrum of berberine.— Groat chem. acta, 1966, 38, P. 143—154.

41. Петлична Л.1. Кислотний пдрол1з тюфосфамщных модифжацш берберину // Фарм. Журнал.- 1979,- №3, С. 23-28.

42. Муравьева Д. А., Лукащук С. П. Опыт производственного получения берберина сульфата экстракционно-хроматографическим методом.— В кн.: Материалы III Всесоюз. совещ. фармацевтов. Свердловск, 1975, С. 142—143.

43. Jusiak L., Szabelska В. Nowe metody ekstrakcji alkaloidow z surowcow roslinnych.— Acta Pol. Pharm., 1979, 36, N 2, P. 221—225.

44. Станиловская, E.B. Ресурсосберегающая технология выделения алкалоидов из растительного сырья : Автореф. дис.канд.техн. наук: М.-1995,24 с.

45. Государственная фармакопея СССР XI : М.: Медицина, 1987-1990 397 с.

46. А.В. Смирнов, О.А. Гаевская, Д.И. Баирамашвили Биотехнологическое получение берберина из клеточной культуры Thalictrum minus L. // Биотехнология. -2000, №1, С.41-47

47. Dayis G.A., Mavituna F. Reactor for cultivation biological material such as Immobilized cells // New Zealand Qoumal of technology. 1987. - 2,2. -P.71-76.

48. Fuller K.V. Chemicals from plant cell cultures some biochemical and physiological pointers // Chemistry and industry. - Oxford. 1984. Vol. 23. -P.825-833.

49. Furuya Т., Syono K., Ikuta A. Isolation of berberine from callus tissue of Coptis japonica/Phitochem. 1972.Vol.lLP. 175.

50. Galneder E., Rueffer M., Wanner G., Tabata M., Zenk M. H. Alternative final , steps in berberine biosynthesis in Coptis japonica cell cultures // Plant Cell Reports. 1988. Vol. 7. P. 1-4.

51. Gugler K., Funk Ch„ Brodelius P. Elisitor-induced tyrosine decarboxylase in berberine-synthesizing suspension cultures of Thalictrum rugosum // Eur. J. Biochem. 1988. Vol. 170. P.661-666.

52. Нага M., Tanaka S., Tabata M. Induction of a specific methyl transferase activity regulating by cytokinine in Thalictrum minus cell cultures // Phytochem. 1994. Vol. 36.N.2.P.327-332.

53. Hinz H.s Zenk M. H. Production of protoberberine alcaloids by cell suspension cultures of Berberis species //Naturwissenschaften. 1981. Vol. 68, N 12. P. 620-621.

54. Ikuta A., Itokawa H. Berberine and other protoberberine alkaloids incallus tissue of Thalictrum minus. 1982. Vol.21,N8.P. 1419-1421.

55. Kobayashi Y., Fukui H., Tabata M. Berberine production by batch and semi-continuous cultures of immobilized Thalictrum cell in an improved bioreactor // Plant Cell Reports. 1988. Vol. 7. P.249-252.

56. Kobayashi Y., Fukui H., Tabata M. Effect of carbon dioxide and ethylene on berberine production and cell browning in Thalictrum minus cell cultures // Plant Cell Reports. 1991. Vol. 9. P.469-499.

57. Veropoorte R., Heijden R., Hoge J.H.C., Hoopen H.J.G. Plant cell biotechnology for the production of secondary methabolites // Pure and Appl. Chem. 1994. Vol. 10. P.2307-2310.

58. Генри T.A. Химия растительных алкалоидов.:M.,1956.-948c.

59. Орехов А.П. Химия алкалоидов.-2изд.-М.,1965.-937с.

60. Туркевич Н.М., Мусянович В.М. Основные электронные и оптические характеристики хелидонина гидрохлорида // Фармация,-1977.-№3.-С.22

61. Ананичев А.В.,Степаненко О.Б. и др. Колориметрическое определение берберина// Хим. фарм. журнал.- 1987. - № 1. - С. 37-39.

62. Попова Л.Г., Сало Л.П., Киселев В.П. Трава маклейя новое лекарственное растительное сырье // Материалы III Всероссийского съезда фармацевтов. Тез. докл. - Свердловск, сент. 1975. - С. 308-309.

63. Пат.4767861 США, МКИ А61К35/78. Извлечение бензофенантридиновых алкалоидов.

64. Башнева Х.Ш., Ростоцкий Б.К. // Тр.ВИЛР / Химия.- 1979.-t.XV,-С.376-381.

65. Лекарственные растения СССР.- М., 1967.-316 с.

66. Платонова Т.Ф.,Моссачетов П.С. и др. Об алкалоидах растений семейства маковых // Журнал органич. xhm.-1986.-t.XXVI, вып.1.-С.173-180.

67. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР // М.-1986.- 327с.

68. Соколов С.Я.,Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям.- М.: Медицина,984.-3.86 с.

69. Турова А.Д. Лекарственные растения СССР и их применения. М.: Медицина, 1980.-272с.

70. Цесько А.И., Лодыжка Е.Я. Использование тонкослойной хроматографии при количественном определение берберина в растительном сырье спектрофотометрическим методом // Фармация,-1974-№5.-С.27-29.

71. Мусянович В.Н. Спектрофотометрическое определение бисульфата берберина// Хим.-фарм. журнал.-1989.- №10.- С. 134-135.

72. Маслова Г.А., Ласская O.E. // Тр. ВИЛР / Сб. науч. тр. М.,1985,-Вып.8.-С. 162-165.

73. Altef M.,Taha А.// Pharmazie.-I980.-Vol 35.-Р.30-32.

74. Slavik J., Slavikova L.Minor alkaloids from chelidonium majus L.// Collection Czechoslov.Chem.Commun.-1987.-Vol. 42.-P.686-693.

75. Захаров В.В.,Либизов Н.И.,Осланов X.A. Лекарственные вещества из растений и способы их производства.-Ташкент, 1980.-368с.

76. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. М.:Медицина, 1986.-186с.

77. Гончаренко Г.К. Экстракция лекарственных веществ из растительного сырья: Дис.док.хим.наук / Харьков, 1992.-340с.

78. Samma M.G.The isoquinoline alkaloids// Academic Press.-N.Y.-1988.-Vol. 24.-P.978-1001.

79. Станиловская E.B. Ресурсосберегающая технология выделения алкалоидов из растительного сырья: Дис.канд.тех.наук / М., 1995.-238с.

80. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И. Гринкевич/ -М.: Высш.шк.,1989.-176с.

81. Бузук Г.Н., Ловкова М.Я. и др. Определение четвертичных алкалоидов // Новые методы практической биохимии. /Под ред. Кретовича В .А., Шольца К.Ф.-М.: Наука,1988-С.137-140.

82. Адиходтаева К.Б., Баньковский A.M., Глызин В.И. и др. //Фармация,-1977.-№3.-С.24.

83. Мальчуковский Л.Б., Либизов Н.И.// Фармация.-1971.-№2.- С.68-71.

84. Менгер Э.М. Лекции по статистическим методам оптимизации технологических процессов.- Красноярск,1968.-31с.

85. Махов А. А. Зеленая аптека-Красноярск.: Кн. изд-во, 1980.-320 с.

86. Сало В. М. Растения и медицина-М.: Наука, 1968.-243 с.

87. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений.-М.: Мир, 1986.-Т.2-312 с.

88. Рязанова Т. В., Чупрова Н. А., Исаева Е. В. Химия древесины -Красноярск.: КГТА.- 1996. -358 с.

89. Хасси Г. Размножение растений с помощью метода культуры ткани -М.: Мир,- 1987.-125 с.

90. Фролова Л. В. Особенности популяций культивируемых клеток: Культура клеток растений ~М.: Наука, 1981.-305 с.

91. Кретович В. А. Биохимия растений.-М.: Высш. шк., 1980.—476 с.

92. Ловкова М. Я., Рабинович А. М., Пономарева С. Н. Почему растения лечат М.: Наука, 1989-256 с.

93. Катаева Н. В., Аветисов В. А. Клональное размножение растений в культуре клеток М.: Наука.- 1987, - 116 с.

94. Гамбург К. 3. Ауксины в культурах тканей и клеток растений- М.: Наука, 1980-50 с.

95. Щеголев В. В. Методы биохимического анализа растений М.: Изд-во Гос. ун-та, 1981 - 224 с.

96. Адиходтаева К. Б., Баньковский А. И., Глызин В. И. и др. // Фармация , 1977 №3, С. 24

97. Мальчуковский Л. Б., Либизов Н. И//Фармация , 1971 №2, С. 68-71

98. Кулиманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии-М.: Изд-во "Медицина".-1974.-424 с.

99. Кейтс М. Техника липидологии М.: Наука, 1975 - 322 с.

100. Ананичев А.В.,Степаненко О.Б. и др. Колориметрическое определение берберина// Хим. фарм. журнал.- 1987. - № 1. - С. 37-39.

101. Дощннская Н. В., Краснов Е. А., Якунина Г. Д. Поиски биологически активных веществ среди сибирских растений / Тез. I докл. VII делегат, съезда Всесоюз. бот. о-ва.— Л.: Наука. 1Ленингр. отд-ние, 1983.— С. 187—188.

102. Минаева В. Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1978.— 255 с.

103. Юнусов С. Ю. Алкалоиды.— 3-е изд.— Ташкент: Фан, 1981.— 418с.

104. Перельман Я- М. Анализ лекарственных форм.— Л.: Медгиз, 1961.— 616с.

105. Петличная Л. И. Выделение берберин-основания из его солей и экстрактов барбариса обыкновенного.— В кн.: Современные проблемы фармацевтической науки и практики : Тез. докл. Киев.- 1972, С. 404—405.

106. Петличная Л. И., Туркевич H. М. Хроматография и УФ-спектры поглощения некоторых форм берберина.— В кн.: Всесоюзное совещание по аналитическому контролю производства лекарственных и фармацевтических препаратов: Тез. докл. Пермь,- 1974, С. 186—187.

107. Садыков Ю. Д., Буриченко В. К. Соли берберина на основе некоторых аминокислот.— Докл. АН ТаджССР, 1976, 19, № 5, С. 36—38.

108. Такемото Ц., Кондо И., Кондо К. Реакции алкалоидов типа протоберберина. III. Строение продуктов восстановления фенолбетанина.— Якугаку дзасси, 1963, 83, ЛГ«2, С. 1G2—165,— Приводится по: РЖХ, 1964,9ж402.

109. Kondo Yoshikazu. Organic and biological aspects of berberine alkaloids.— Hetero-cycles, 1976, 4, № I, P. 197—219.

110. Берберины на основе желтокорня канадского Hydrastis canadinsis семейства лютиковых//Биохимия.- 1998,-№3 С. 33-35

111. Abourashed ЕА, Khan IA. High-performance liquid chromatography determination of hydrastine and berberine in dietary supplements containing goldenseal. Pharm Sci 2001 Jul;90(7):817-22

112. Ong ES, Woo SO, Yong YL. Pressurized liquid extraction of berberine and aristolochic acids in medicinal plants. J Chromatogr A 2000 Dec 22;904(l):57-64

113. Бузук Г.Н., Ловкова М.Я. и др. Определение четвертичных алкалоидов // Новые методы практической биохимии./Под ред. Кретовича В .А., Шольца К.Ф.-М.: Наука,-1988.-С.137-140.

114. Lindsey К., Yeoman М. The viability and biosinthetlc activity of cells of Capsicum frutescens immobilised in reticulate poliutetane // J. of Experim. Botany, 1964.- 35,10. P. 1684-1696

115. Новые методы практической биохимии. / Под ред. Кретовича В.А., Шольца К.Ф. М.: Наука, 1988. - с. 137-140.

116. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. - Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - М.: Медицина, 1990. - 400 с.

117. Р. 3. Пен Статистические методы моделирования и оптимизации процессов целлюлозно бумажного производства Красноярск.-1982, 191с.

118. Математические методы планирования эксперимента Под ред. В.В. Перненко Новосибирск-1981, 254 с.

119. Гавриленко В.Ф, Ладыгина М.В. Хандобина Л.М. Большой практикум по физиологии растений.-М.:Высш. шк.,1975.-392 с.