Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Полиморфизм микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота красно-пестрой породы

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота красно-пестрой породы"

На правах рукописи

ШУМКИНА СВЕТЛАНА ГРИГОРЬЕВНА

ПОЛИМОРФИЗМ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ ЛОКУСОВ ДНК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА КРАСНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ

06.02.01 - Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лесные Поляны Московской области 2004 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте

племенного дела.

Научный руководитель:

доктор биологических наук Калашникова Любовь Александровна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Фомичев Юрий Павлович

доктор сельскохозяйственных наук Букаров Нурмагомед Гаджикулиевич

Ведущая организация:

Московская государственная сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева

Защите состоиться 10 сентября 2004 ода в 11 часов на заседании

диссертационного совета Д 220.017.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте племенного дела.

Адрес института: 141212, Московская область, Пушкинский район, п. Лесные Поляны, ВНИИплем.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института племенного дела.

Автореферат разослан _ 1 _ июля 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор Ерохин А.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Генетическая оценка животных стала значительно более эффективной в результате открытия семейств повторяющихся последовательностей, дислоцированных по всему геному (минисателлитов и микросателлитов). Микросателлитные последовательности ДНК в последнее время играют доминирующую роль в качестве неисчерпаемого источника генетических маркеров. В настоящее время выделено и описано более 2000 микросателлитов в геноме крупного рогатого скота (база данных INRA, Франция), и их количество увеличивается с каждым днем.

Микросателлиты имеют ряд преимуществ перед другими маркирующими системами: они множественны, высокополиморфны, широко распространены по всем хромосомам, легко выявляются и идентифицируются.

С открытием микросателлитов появилась возможность точно определить достоверность происхождения животных, а так же осуществить маркировку некоторых генетических локусов, связанных с продуктивностью (George M. et al., 1993; Ron M. et al.,1994; Charlier С. et al., 1995; Georges M. et al., 1995; Ohba Y et al.,1999; Velmala R.J. et al., 1999; Ashweii M.S. et al., 1999; Heyen D. W. et al., 1999; Kalm E. et al., 1999; Velmala R., Vilkki J. et al., 1995).

В настоящее время микросателлиты составляют значительную группу генетических маркеров, удобных для целого ряда исследований, таких как характеристика генетической структуры популяций и степени инбредности, оценка генетических расстояний между семействами, линиями, породами и видами животных, филогенетических исследований (Machugh D.E. et al., 1998; Peelnian L.J. et al., 1998; Slate J. et al., 1998).

Применение микросателлитных маркеров даёт возможность определять корреляцию между хозяйственно-полезными признаками и определяющими их генетическими структурами, проводить отбор животных с желательными генотипом в любом возрасте (Lipkin E.et.al., 1998; Spelman R.J. et.al.,, 1998).

Породы и популяции крупного рогатого скота различаются по количеству аллельных вариантов и уровню гетерозиготности изученных микросател-литных локусов. Данные по генетической гетерогенности крупного рогатого скота отечественной селекции практически отсутствуют. Имеются лишь результаты исследований нескольких микросателлитных локусов у коров черно-пестрой породы (Симоненко В.Н., 1999; Шмидт Т.Ю., 2001).

Цель нашей работы - оценка полиморфизма микросателлитных локу-сов генома красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

Были поставлены следующие задачи:

1. Отобрать потенциально информативные микросателлитные локусы для красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

2. Разработать метод ПЦР - анализа генома, пригодный для выявления полиморфных вариантов микросателлитных последовательностей

ДНК.

3. Определить частоту встречаемости аллельных вариантов и генотипов микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота.

4. Определить уровень гетерозиготности и информативной ценности выбранных микросателлитных локусов ДНК.

5. Оценить возможность использования микросателлитных последователей ДНК для оценки генетического разнообразия животных красно-пестрой породы.

Научная новизна работы. Впервые проведено генотипирование крупного рогатого скота отечественной селекции с использованием ряда микроса-теллитных маркеров, определен уровень гетерозиготности микросателлитных последовательностей ДНК и изучена частота встречаемости аллельных вариантов и генотипов в популяциях животных красно-пестрой и черно-пестрой породы. Выявлен высокий уровень полиморфизма микросателлитных локусов RM388, DIK083, ЕТН10 и ЕТН225. Установлено наличие 41 аллельного варианта микросателлитных локусов у крупного рогатого скота красно-пестрой породы (в среднем 10,2 аллеля на локус). Средняя фактическая гетерозиготность изученных локусов составила 0,78.

Практическая значимость работы. Предложен вариант ПЦР - диагностики, пригодный для анализа микросателлитных последовательностей ДНК крупного рогатого скота, без использования секвенирующих гелей и радиоактивного мечения. Высокий уровень гетерозиготности и значений показателя информативной ценности (PIC) микросателлитных локусов RM388, DIK083, ЕТН10 и ЕТН225, который составил от 0,87 до 0,99, позволяет рекомендовать их использование для оценки генетического разнообразия животных красно-пестрой и черно-пестрой породы, оценки достоверности происхождения и поиска взаимосвязи с хозяйственно-полезными признаками.

Апробация работы. Результаты исследований обсуждены на заседаниях Ученых Советов ВНИИплем (2002-2003 гг.), на Международной научной конференции «Генетика и селекция в XXI веке» (Минск, 2002), на научно-производственной конференции "Современные ресурсосберегающие технологии производства продукции животноводства", (Вологда, 2004).

Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликованы 4 научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, выводов, предложений производству и списка литературы. Диссертация содержит 21 таблицу и 26 рисунков. Список использованной литературы включает 162 источника, в том числе 122 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ в лаборатории ДНК-технологии ВНИИплем с 2001 по 2004 год. Экспериментальные исследования проводились на маточном по-

головье красно пестрой и черно-пестрой породы крупного рогатого скота согласно представленной схеме.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Выбор микросателлитных локусов для оценки генетической дифференциации красно-пестрой породы крупного рогатого скота

-1-

Оптимизация ДНК-технологии оценки полиморфизма микросателлитных _локусов генома крупного рогатого скота_

Выявление полиморфизма микросателлитных локусов ДНК _крупного рогатого скота_

| - Красно - пестрая порода || Черно - пестрая порода |

__--—ПИ—^--^Г—1^^

ЯМ388 || Б1К083 | ЕТН10 || ЕТН225 |

Определение частоты встречаемости аллелей и генотипов, уровня гетеро-зиготности и информативной ценности микросателлитных локусов ДНК

Оценка возможности использования микросателлитных локусов ДНК для выявления меж- и внутрипородной генетической дифференциации _крупного рогатого скота красно-пестрой породы_

Были отобраны пробы крови от 127 коров красно-пестрой породы в СХП «1Мая» и ОГУП «Светлый путь» Елецкого района Липецкой области и от 60 коров черно-пестрой породы в племрепродукторе «Москворецкий» Одинцовского района Московской области.

Ядерную ДНК выделяли из крови фенольно-детергентным методом (В1т N Staflъrd D.W., 1976) с собственными модификациями. Концентрацию и на-тивность ДНК определяли электрофорезом в 2% агарозном геле.

Праймеры к микросателлитным локусам ДНК крупного рогатого скота были синтезированы в Институте биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН. Характеристика праймеров приведена в табл.1.

Для локусов ЕТН 225 и ЕТН 10 использоватись следующие параметры амплификации: «горячий старт» -95°С - 5 мин; денатурация - 95°С - 1 мин, отжиг - 61°С - 1 мин, элонгация - 72°С -1 мин. Для локусов ЯМ 388 и D1K083 режим амплификации отличался температурой отжига - 60°С (Шгапъ Т. й а1., 1996; Къ&агек Ь.М. й а1., 1996).

Для разделения продуктов реакции использовали не денатурирующий 512% полиакриламидный (ПААГ) и 7% денатурирующий ПААГ с формамидом

или мочевиной. В качестве маркера длин фрагментов ДНК нами использовался Gene Ruler™ 50 и 100 bp DNA Ladder.

Таблица 1

_ Характеристика праймеров и температуры отжига при амплификации ; микросателлитных локусов ДИК крупного рогатого скота

Название локуса Последовательность праймеров Температура отжига

ЕТН 225 1: 5'- GATCACCTTGCCACTATTTCCT-3', 2: 5'- ACATGACAGCCAGCTGCTACT-3' 61° С 61°С

ЕТН 10 1: 5-GTTCAGGACTGGCCCTGCTAACA-3' 2: 5'-CCTCCAGCCCACHTCTCTTCTC-3' 61" с 61°С

D1K083 i 1: 5-TGTGCATCTTGTCCAGTTTAG-3', 2: 5'-CCACCAATGCTCTCCTCTCA-3' 60иС 60°С

_RM 388 1: 5'-GGGGACCATCACGTACACTC-3', 2: 5-GGGACAGCCAGTCTTCTCAG-3' 60иС 60° с

Размер амплифицированных участков ДНК каждого микросателлитного локуса определяли в соответствии с включенными в каждый гель маркерными фрагментами с помошью компьютерной программы UN-SCAN-GEL.

Основные характеристики популяции, такие как частоты генотипов и частоты аллелей, рассчитывали по стандартным методикам. Для оценки отклонений наблюдаемых частот генотипов от теоретически ожидаемых по закону Харди-Вайнберга применяли критерий % (Животовский Л.А., 1991).

Уровень ожидаемой гетерозиготности проводили, исходя из частот алле-

п

лей в популяции: НЕТ„ = 1 р* , где р,-частота 1-го аллеля. Показатель ин-

1-1

формативной ценности полиморфизма (PIC-polymorphism information content) рассчитывался по следующей формуле (Das М., Sakul et al, 2000)-

»-I п

, где р,-частота 1-го аллеля, Pj-J-ro аллеля.

, где, р,,ргчастота аллелей.

PIC=I- Цр,2 -ZZ2ÄV,

V 1=1 ) 1=1 j=ft-i

Вероятность исключения (РЕ) вычисляли по формуле Jamieson (1994):

РЕ=1>,(1 -ЯF -¿äß xPjf х[4"3(р, ,

Вероятность исключения при отсутствии данных о втором родителе рассчитывали по формуле Garber R.A и Morris J.W (1983):

Вероятность исключения обоих неправильных родителей (в случае подмены потомка) рассчитывали по формуле Grandel Н. и Reetz(1981)

Комбинативная вероятность исключения для нескольких локусов была найдена по Fredholm и Wintero (1996):

PEc=l-(l-PE for locus 1)(1-РЕ for locus2)(l- РЕ for locus3)(l- РЕ for lo-cus4)...(l-PE for locus n).

Дистанция по Хеленжеру рассчитывалась по формуле (Devlin В, Risch

N., 1992): -Jл /'' - * , где л/"-частота аплеля i в популя-

ции 1, пГ частота аллеля i в популяции 2.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Оптимизация ДНК-технологии оценки полиморфизма микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота

Нами была поставлена задача разработать метод оценки полиморфизма микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота без использования дорогостоящих секвенаторов и без применения радиоактивного мечения.

Полученные из крови животных образцы ДНК использовались для ПЦР-амплификации, продукты которой были проанализированы в обычных и денатурирующих полиакриламидных гелях различной концентрации и с разными денатурирующими агентами.

Для проведения ПЦР необходимо было подобрать оптимальный режим амплификации. Температура отжига была подобрана таким образом, чтобы появилась возможность проводить одновременную амплификацию микросателлитных локусов попарно. Достройка матрично-праймерных комплексов при 72°С в конце амплификации была увеличена до 60 мин, что положительно сказалось на результатах амплификации.

Наиболее качественные и стабильные результаты амплификации были получены при добавлении в реакционную смесь от 30 до 60 нг ДНК-матрицы.

Концентрацию праймеров подбирали в интервале от 30 до 200 пМ на 25 мкл реакционной смеси. Повышение концентрации праймеров от 50 до 80 пМ сопровождалось существенным улучшением визуализации продуктов реакции. Дальнейшее повышение концентрации праймера до 200 пМ не привело к улучшению результатов.

Увеличение концентрации хлорида магния от 1,5 до 4 мМ привело к повышению эффективности амплификации.

При увеличении концентрации фермента Taq-полимеразы от 0,3 до 0,7 ед. акт. наблюдалась стабильная хорошо воспроизводимая картина. При увеличении концентрации Taq-полимеразы от 1 до 2,5 ед. акт. наблюдалось снижение яркости полос.

Концентрацию dNTP подбирали в интервале 20-300 мкМ. При увеличении количества dNTP от 100 до 200 мкМ продукты амплификации были видны наиболее отчетливо.

Наиболее эффективным для разделения продукюв реакции явился 7% ПААГ без добавления денатурирующих агентов и 7% денатурирующий ПААГ

4 М

Рис I Этектрофоретическое разде1ение аллетьных вариантов микросателтитного лок\са RM488 (Kj I -4) ДНК коров красно-пестрой породы в 7° о денат>рир\ющеч Г1ААГ с добавпением формамида, М - Маркер Ladder 100 bp

D1K084

RM388

ЕТН10

ЕТН225

Рис 2 Penльтаты лектрофоретнческого раздетения апетьны\ вариантов микросатепшныч ток\сов ДНК животных красно - пестрой породы при одновременном проведении амплификации 1- RM^SS-DIKOSi, 2-ЕТН225 - ETHiO М-Маркер Ladder 100 bp

с формамидом (рис 1) Использование гелей другой концентрации и других денатурирующих агентов не позволяло добиться четкого разделения аллелей

Для улучшения разделения продуктов амплификации проводилась температурная денатурация фрагментов перед электрофорезом в течение 5 мин при 95 С Для нанесения проб на денатурирующий гель нами предложен состав, включающий 540 мл формамида и 60 мл 6х буфера Gene Ruler (Латвия)

Метод ПЦР позволяет осуществить одновременную амплификацию различных локусов в одной пробирке при добавлении соответствующих праймеров Нами были предпринята попытка одновременной амплификации локусов RM388 и DIK083 при температуре отжига 61°С и локусов ЕТН225 и ЕТН10 при 60°С Результаты проведения дуплексных ПЦР приведены на рис 2

Значительное различие длин фрагментов ДНК, относящихся к подобранным парам локусов, позволяет избегать совпадения полос и осуществлять разделение фрагментов в одной дорожке геля Сокращение времени и затрат реактивов на амплификацию и электрофоретическое разделение фрагментов существенно снижает себестоимость генотипирования

Программа UN-SCAN-GEL Automated Digitizing System (Version 5 1 (32bit), Silk Scientific, Inc P О Box 533 Orem, Utah 84059 USA, Customer Support) позволяет совершать все необходимые операции по обработке результатов электрофореза, автоматически определяет линии и метки, подсчитывает молекулярный вес, количество, площадь и интенсивность пиков

Результаты эаектрофоретического разделения аллелей каждого из 4-х локу-сов были четырежды независимо подвергнуты анализу Стандартное отклонение при расчете длин фрагментов с помощью компьютерной программы UN-SCANGEL зависело от качества препарата и было для локуса RM388 <0,4 п н, для ЕТН10 <0,5 п н , для ЕТН225<0,4 п н, для DIK083 <0,1 п н

Амплификация микросателлитных локусов генома крупного рогатого скота с выбранными праймерами при соблюдении указанных выше условий проведения ПЦР, разделения и визуализации фрагментов позволила выявить полиморфные микросателлитные последовательности ДНК, доступные для анализа с помощью компьютерных программ обработки данных

3.2. ПОЛИМОРФИЗМ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ ЛОКУСОВ ГЕНОМА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

На основании собранной информации в литературе и в банках данных сети Интернет проведен отбор 4-х локусов ЕТН225, ЕТН10, ЯМ388 и DIK.083 Основной критерий, по которому отбирались локусы, был высокий уровень гетерози-готности Особенно важно это требование для анализа сцепления, так как высокая гетерозиготность маркеров увеличивает число информативных мейозов и эффективность тестов сцепления

Выбранные маркеры имеют уровень гетерозиготности не менее 50% и сведения о хромосомной локализации и о праймерах для детекции. Диапазон длин аллельных вариантов подобран таким образом, чтобы он не перекрывался, что позволяет объединять локусы попарно в мультиплексных ПЦР.

3.2.1. Полиморфизм микросателлитного локуса ИМ388

В результате анализа ДНК по локусу RM388 у исследованных животных красно-пестрой породы обнаружено 14 аллелей длиной от 137 до 165 п.н., в основном отличающихся друг от друга на 2 п.н.

Частота встречаемости аллелей локуса RM388 у животных красно-пестрой породы приведена в табл. 2. Наиболее часто встречаются аллели длиной 155 п. н. (0,20), 141 (0,17), 143 (0,14) и 159 п.н. (0,13).

Таблица 2.

Частота встречаемости аллелей локуса 1Ш388 у животных красно-пестрой породы (п=51)

№ Аллели, Количество Количество Частота

п/п п.н. голов аллелей аллелей

1 137 1 1 0,01

2 139 2 2 0,02

3 141 16 17 0,17

4 143 13 14 0,14

5 145 4 4 0,04

6 147 5 5 0,05

7 149 3 3 0,03

8 151 3 4 0,04

9 153 11 12 0,11

10 155 15 20 0,20

11 157 5 5 0,05

12 159 10 13 0,13

13 161 1 1 0,01

14 165 3 3 0.03

В исследуемой выборке (п=51) выявлено 27 различных генотипов по локусу RM388 (табл. 3). Фактическая гетерозиготность локуса составила 0,83, что несколько ниже ожидаемого уровня гетерозиготности 0,88, рассчитанного исходя из уровня частоты встречаемости аллелей в популяции.

Наиболее часто в исследованной группе животных встречаются следующие генотипы: 141/153 и 155/155 (частота 0,10), 141/155 и 143/159 (0,08). Появление в популяции гомозиготных генотипов 141/141, 143/143, 153/153, 155/155 и 159/159 в целом соответствует частоте встречаемости выявленных аллелей.

Таблица 3.

Частота встречаемости генотипов по локусу ЯМ388 у животных красно пестрой породы (п=51)

№ пп Генотип Число голов Частота генотипа № пп Генотип Число голов Частота генотипа

1 137/147 1 0,02 15 143/159 4 0,08

2 139/147 1 0,02 16 143/161 1 0,02

3 139/153 1 0,02 17 145/155 2 0,04

4 141/141 1 1 0,02 18 145/159 1 0,02

5 141/149 Г 1 0,02 19 147/155 1 0,02

6 141/151 3 0,06 20 147/159 1 0,02

7 141/153 5 0,10 21 147/157 1 0,02

8 141/155 4 0,08 22 149/159 1 0,02

9 141/157 2 0,04 23 151/165 1 0,02

10 143/143 1 0,02 24 153/165 2 0,04

11 143/149 1 0,02 25 153/153 1 0,02

12 143/153 2 0,04 26 155/155 5 0,10

13 143/155 2 0,04 27 159/159 3 0,06

14 143/157 2 0,04

Таблица 4.

Частота встречаемости аллелей локуса 1Ш388 у животных черно-пестрой породы (п=10)

№ Аллели, Количество Количество Частота

п/п п.н голов аллелей аллеля

1 135 1 1 0,05

2 137 1 1 0,05

3 139 1 1 0,10

4 145 2 2 0,10

5 149 2 2 0,10

6 151 2 2 0,10

7 153 1 1 0,05

8 155 3 3 0,15

9 159 2 2 0.10

10 165 1 1 0.05

11 167 2 2 0,10

12 169 1 1 0,05

Для проведения сравнительной генетической характеристики локуса ИМ388 и выявления межпородных различий нами были проанализированы пробы ДНК у коров черно-пестрой породы. Обнаружено 12 аллелей длиной от 135 до 169 п. н. (табл.4).

Как и у животных красно - пестрой породы, в исследованной группе черно - пестрого скота чаще других встречался аллель длиной 155 п. н. (0,15). В исследуемой выборке (п=10) выявлено 10 различных генотипов по локусу ИМ388: 135/145, 137/149, 139/149, 149/151, 145/155, 151/165, 153/159, 155/167, 155/167, 159/169.

3.2.2. Полиморфизм мнкросателлнтного локуса ЕТН10

При анализе ДНК в изучаемой группе животных было выявлено 10 аллелей локуса ЕТН10 размером от 214 до 250 п.н. (табл. 5). Наибольшая частота встречаемости отмечена для аллелей длиной 220 (0,16) и 244 п.н. (0,16).

Таблица 5.

Частота встречаемости аллелей локуса ЕТН10 у животных красно-пестрой породы (п= 19)

№ п/п Аллели, п.н. Количество Количество Частота алле-

голов аллелей ля

1 ! 214 3 3 0.08

2 218 3 3 0.08

3 220 6 6 0,16

4 226 5 5 0.13

5 230 2 2 0.05

6 238 3 3 0,08

7 242 3 3 0,08

8 244 6 6 0.16

9 248 4 4 0.11

10 250 з 3 0.08

В исследуемой группе выявлено 10 различных генотипов (табл. 6). Гомозиготные особи не обнаружены. Значение ожидаемой гетерозиготности локуса ЕТН10, исходя из данных о частоте встречаемости аллелей, достигло 0,89. Наиболее часто встречались генотипы 220/244 (0,26) и 226/250 (0,16).

При анализе ДНК коров черно-пестрой в изучаемой группе животных (п=5) было выявлено 6 аллелей локуса ЕТН10 длиной 200, 202, 210, 216, 218 и 220 п.н. Более часто встречались аллели длиной 202 и 216 п.н. (0.20). а также 210 п.н. (0.30). В исследуемой группе у 5 животных выявлено 5 различных генотипов: 200/216, 202/210, 202/216, 210/218. 210/220. Гомозиготные особи не выявлены. Уровень значения ожидаемой гетерозиготности достиг 0,82.

Табтица 6

Частота встречаемости генотипов по локусу ЕТН10 у животных красно-пестрой породы (п=19)

№пп Генотип Число голов Частота генотипа

1 214/238 2 0 11

2 214/242 1 1 0 05

3 218/238 1 | 0 05

4 218/242 1 ' 0 05

5 218/244 1 0 05

6 | 220/242 1 0 05

7 I 220/244 5 0 26

8 1 226/248 2 0 11

9 I 226/250 3 0 16

10 | 230/248 2 0 11

3.2.3. Полиморфизм мнкросателлитного лок}са ЕТН225

У всех исследованных животных красно - пестрой породы после проведения ПЦР с праймерами к лок)су ЕТН225 удалось виз>ализировать и оценить ал-лельные варианты последовательностей ДНК Выявлено 8 аллельных вариантов локуса ЕТН225 с размером от 139 до 153 п н (табл 7)

Таблица 7

Частота встречаемости аллелей локуса ЕТН 225 у животных красно-пестрой породы (п=36)

№ Алле пи. Количество Копичество Частота

п/п п н голов аллелей аллеля

1 139 13 18 0.25

2 141 11 15 0.22

3 143 5 6 0 08

4 145 3 5 0,07

5 147 5 6 0.08

6 149 9 14 0.19

7 151 6 7 0.10

8 , 153 1 1 1 0 01

Наибольшее распространение имели алтели длиной 139 (0,25). 141 (0,22) и 149 п н (0,19) У 36 исследованных животных выявлено 18 генотипов по ЕТН225 (табл 8). 17 особей имели гомозиготные генотипы 139 139, 141/141, 143/143.

147/147, 149/149 и 151/151. Фактическая гетерозиготность по л окусу ЕТН225 составила 0,53, что значительно меньше ожидаемой величины - 0,99.

Таблица 8.

Частота встречаемости генотипов по локусу ЕТН225 у животных красно-пестрой породы (п=36)

№ пп Генотип Число голов Частота генотипа № пп Генотип Число голов Частота генотипа

1 139/139 5 0,14 10 141/145 2 0,06

2 139/145 2 0,06 11 141/149 2 0,06

3 139/147 1 0,03 12 143/143 1 0.03

4 139/149 1 0,03 13 143/149 1 0,03

5 139/143 1 0,03 14 143/151 2 0,06

6 139/151 2 0,06 15 145/151 1 1 0,03

7 139/153 1 0,03 16 147/147 0,03

8 141/141 4 0,11 17 149/149 5 0,14

9 141/147 3 0,08 18 151/151 1 0,03

У черно-пестрых животных (п=31) выявлено 11 аллельных вариантов локу-са ЕТН225 размером от 133 до 153 п.н. (табл.9). Наибольшее распространение имел аллель длиной 143 п.н. Выявлено 20 различных генотипов (табл.10). Чаще других встречались генотипы 143/149, 143/151 и 145/151. Фактическая гетерози-готность у животных черно - пестрой породы по локусу ЕТН225 составила 0,94, что несколько выше расчетной величины ожидаемой гетерозиготности - 0,89.

Таблица 9.

Частота встречаемости аллелей по локусу ЕТН225

№ п п Аллели, п. н. Количество Количество Частота ал-

голов аллеля леля

1 133 1 1 0,01

2 135 5 6 0,10

3 137 5 6 0,10

4 139 1 1 0,01

5 141 7 7 0,11

6 143 11 11 0,18

7 145 8 8 0,13

8 147 5 5 0,08

9 149 6 6 0,10

10 151 6 6 0,10

11 153 5 5 0,08

Полиморфизм микросателлитного локуса Б1К 083 представлен 9 аллелями размером от 228 п н. до 250 п н. (табл.11). Наибольшее распространение имели аллельные варианты 242 (0,19), 232 и 244 п.н. (0,17).

Среди изученной группы животных красно-пестрой породы (п=21) обнаружено 18 различных генотипов (табл.12). Выявлено 5 гомозиготных особей. Фактическая гетерозиготность составила 0,76, что немного ниже ожидаемой - 0,87.

Таблица 11.

Частота встречаемости аллелей локуса 01К 083

№ Аллели, Количество Количество Частота

п/п п н. голов аллелей аллеля

1 228 3 3 0,07

2 230 3 5 0,12

3 232 5 7 0.17

4 234 1 1 0.02

5 242 4 8 0,19

6 244 5 7 0,17

7 246 3 3 0,07

8 248 3 5 0,12

9 250 3 3 0,07

Таблица 12.

Частота встречаемости генотипов по локусу DIK 083

№ Генотип Число Частота № Генотип Число Частота

п/п голов генотипа п/п голов генотипа

1 228/242 1 0.05 10 232/248 1 0.05

2 228/246 1 0.05 11 232/250 1 0.05

3 228/248 1 0.05 12 234/246 1 0.05

4 230/230 1 0.05 13 242/242 0.09

5 230/242 1 0.05 14 242/248 1 0.05

6 230/244 2 0.09 15 242/250 I 0.05

7 232/232 1 0.05 16 244/244 1 0.05

8 232/244 2 0.09 17 244/250 1 0.05

9 232/246 1 0.05 18 248/248 1 0.05

3.3. Оценка возможности использования полиморфизма микросателлитных локусов 1Ш388, ЕТН10, ЕТН225, 01К083 для оценки генетической дифференциации красно - пестрого скота

В результате проведенных исследований установлен высокий уровень полиморфизма микросателлитных локусов генома, характеризующихся высоким уровнем гетерозиготности и информативной ценности. Число аллелей изучаемых локусов животных красно - пестрой породы варьировало от 8 до 14. Среднее число аллелей на локус составило 10,2. Уровень гетерозиготности всех изучаемых микросателлитных локусов превысил 0,50 (табл.13). Средняя гетерозигот-ность составила 78%, что дает возможность использовать эти локусы в исследованиях сцепления с локусами хозяйственно - полезных признаков.

Таблица 13

Уровень полиморфизма и информативной ценности

Локусы НЕТ0 НЕТ* PIC

ЕТН225 0,99 0,53 0,98

ЕТН10 0,89 1 0,99

DIK083 0,87 0,76 0,87

RM388 0,88 0,83 0,88

Чем больше величина PIC (показателя информативной ценности) для локу-са, тем информативнее оказывается его использовании в качестве маркера. Принято считать, что при РГС>0,5 локус высоко информативен. У животных красно -пестрой породы все изученные микросателлитные локусы имели значение

PIC>0.5 (табл. 13). следовательно, эти лок\сы могут быть с успехом использованы в дальнейших исследованиях. Значение Р1С составило от 0.87 для локуса DIK.083 до 0.99 для ЕТН10. Среднее значение PIC для всех локусов достигло 0,93

Сушествуют различия в количестве и распределении частот встречаемости выявленных аллелей между изученными группами животных красно - пестрой и черно - пестрой породы. Уровень генетического сходства изученны.х групп животных по Хеленджер} (1997) составил для микросателлитного локуса RM388 0,54, для локуса ЕТН225 - 0.69, для лок> са ЕТН 10 - 0.71.

Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о наличии выраженной индивидуальной генетической гетерогенности по изучаемым локусам генома. Так. при изучении полиморфизма локуса RM388 лишь у 2-5 животных красно - пестрой породы из 51 изученных были обнаружены сходные генотипы. По локусу ЕТН 10 из 19 животных одинаковые генотипы имели не более 5 голов. По локусу ЕТН225 из 36 животных только у 2-5 голов выявлены одинаковые генотипы. По локусу DIK083 из 21 животного идентичные генотипы имели только 2 головы.

Высокий уровень индивидуальной изменчивости предоставляет возможность использования полиморфизма микросателлитных лок\сов ДНК в генетической паспортизации особей и подтверждении достоверности происхождения.

Наиболее часто исследователям приходится выяснять вопросы отцовства. При этом сопоставляются генотипы матери, потомка и предполагаемого отца Вероятность исключения неправильного предка (РЕ-ргоЪаЫШу exclusion) в этом сл>чае варьир\ег от 0.46 для локуса ЕТН 10 до 0,77 для DIK083 (табл. 14). Если бы частоты встречаемости аллелей имели равные значения, то максимальная теоретическая величина РЕ для локуса RM388 составила бы 0,85. для ЕТН 10 - 0.79. для ЕТН225 - 0.81, для DIK083 - 0,77.

В том сл\час, когда данные об одном из родителей отсутствуют, и нет возможности произвести его генотипирование. PEj для изучаемых локусов ДНК составляет от 0.36 для локуса ЕТН 10 до 0.59 для RM388 (табл.14)

Если имеются в наличии результаты генотипирования обоих родителей и потомка, можно выявить подмену потомка Вероятность исключения обоих неправильных родителей РЕ2 имеет более высокие значения и колеблется от 0.83 для локуса ЕТН225. до 0,91 для RM388.

Использование результатов исследования двух и более лок>сов существенно увеличивает эффективность выявления индивид\атьных различий. Комбина-тивная вероятность исключения (РЕ1) при одновременном анализе по дв>м лок>-сам составляет от 0.83 до 0.99 При отсутствии данных о втором родителе РЕ0 составляет от 0.66 до 0.82. Выявление случаев подмены потомка при использовании двух локусов можно осуществить с вероятностью от 0.90 до 0.98.

Использование данных по трем локлсам уве.тичивает значение РЕ, до 0.95 -0,98 При отсутствии данных о генотипе второго родителя РЕ0 составит от 0.86 до 0.91. Подмена потомка будет выявлена с вероятностью 0.99.

Таблица 14

Вероятность исключения неправильного предка (РЕ) по полиморфизму микросателлитных локусов для животных красно - пестрой породы

Наименование локусов РЕ РЕ, РЕ-»

По одному локусу

ЯМ388 0.75 0,59 0,90

ЕТН10 0.46 0,36 0,91

ЕТН225 0.68 0.48 0.83

01К.083 0.77 0,58 0,88

По двум локусам

ЯМ388+ШК083 0,99 0.82 0,98

1Ш388+ЕТН225 0,87 0,79 0,90

1Ш388+ЕТН10 0,92 0,74 0,99

ШК083+ЕТНЮ 0,88 0,73 0,98

01К083+ЕТН225 0,92 0,78 0,97

ЕТН10+ЕТН225 0,83 0,66 0,98

По трем локусам

ЯМ388+01К083+ЕТН10 0,97 0,89 0,99

1Ш388+01К.083+ЕТН225 0,98 0,91 0,99

01К083+ЕТН10+ЕТН225 0,96 0,86 0,99

ЯМ388+ЕТН10+ЕТН225 0,95 0,86 0,99

По четырем локусам

1Ш388+ЕТН10+ЕТН225+ШК083 0.99 0,94 0,99

Максимальная эффективность при анализе достоверности происхождения будет наблюдаться при одновременном тестировании 4-х локусов ДНК - 0,99. При отсутствии данных о генотипе второго родителя она составляет 0,94, а при выявлении случаев подмены потомка (исключение обоих родителей) - 0,99.

На основании полученной характеристики аллельного разнообразия и частот генотипов исследуемых микросателлитных локусов ЯМ388, ЕТН10, ЕТН225, Б1К083 можно заключить, что все они соответствуют основным требованиям, делающим их привлекательными для анализа генетической дифференциации животных красно-пестрой породы - высокий уровень полиморфизма, хорошо сбалансированные частоты аллелей, высокая степень гетерозиготности. Результаты исследований позволяют рекомендовать локусы ЯМ388, ЕТН10, ЕТН225, Б1К083 для характеристики генофонда красно-пестрой породы скота, оценки внутрипо-родной генетической дифференциации, идентификации групп животных и отдельных особей. Высокий уровень полиморфизма и кодоминантный характер наследования открывают возможность поиска взаимосвязей аллельных вариантов микросателлитных локусов с продуктивными признаками животных.

ВЫВОДЫ

1. Предложен вариант ДНК-диагностики, основанной на полимеразной цепной реакции, позволяющий выявить и охарактеризовать аллельные варианты мик-росателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота без использования радиоактивного мечения и секвенирующих гелей.

2. В результате генотипирования по 4-м микросателлитным локусам генома животных красно-пестрой породы обнаружен 41 аллельный вариант: 14 аллелей локуса ЯМ388, 10 - ЕТН10, 8 - ЕТН225, 9 - Б1К083. Выявлено 29 аллелей мик-росателлитных локусов генома у животных черно-пестрой породы: 12 -ЯМ388, 6 - ЕТН10, 11 - ЕТН225. Представлены данные о размерах аллелей и частоте их встречаемости.

3. Уровень фактической гетерозиготности всех изученных микросателлитных ло-кусов у животных красно-пестро и породы превысил 0,5 и составил 0,83 для локуса ЯМ388, 1,0 для локуса ЕТН10, 0,53 - для ЕТН225, 0,76 - для Б1К083. Средний уровень гетерозиготности исследованных локусов равен 0,78.

4. Все изученные микросателлитные локусы являются высокоинформативными для оценки генетической гетерогенности и анализа сцепления. Показатель информативной ценности составляет от 0,87 для локуса Б1К083 до 0,99 для локуса ЕТН10.

5. В результате генотипирования по микросателлитным локусам обнаружены выраженные индивидуальные различия, что позволяет использовать полиморфизм микросателлитных локусов ЯМ388, ЕТН 10, ЕТН225 и Б1К083 для генетической паспортизации животных и оценки достоверности их происхождения.

6. Вероятность исключения неправильно записанного в родословной предка РЕ при анализе генотипов отца, матери и потомка составляет для животных красно-пестрой породы от 0,46 для локуса ЕТН 10 до 0,77 для локуса Б1К.083. При отсутствии данных о втором родителе вероятность исключения неправильно записанного предка составляет от 0,36 для локуса ЕТН 10 до 0,59 для локуса ЯМ388. Вероятность обнаружения подмены потомка (исключения обоих родителей) составляет от 0,83 для локуса ЕТН225 до 0,91 для локуса ЕТН10.

7. Использование результатов одновременного генотипирования по нескольким локусам увеличивает вероятность исключения неправильных записей в родословных. Комбинативная вероятность исключения неправильно записанного предка по четырем локусам достигает 0,99 в случае подтверждения отцовства, 0,94 при отсутствии данных о втором родителе и 0,99 в случае подмены потомка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Рекомендуем использование микросателлитных локусов ИМ388, ЕТН 10,

ЕТН225 и Б1К083 для оценки генетической дифференциации красно-пестрой породы крупного рогатого скота, идентификации групп животных и отдельных

особей, установления их родства. Высокий уровень полиморфизма и кодоми-

нантный характер наследования микросателлитных локусов генома предоставляют возможность поиска ассоциаций с локусами хозяйственно-полезных признаков животных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Калашникова Л.А, Шумкина С.Г, Медведев Ю.Б, и др. ДНК-диагностика племенных качеств сельскохозяйственных животных // В сб.«Генетика и селекция в XXI веке», г. Минск, 2002 г. - С. 210-212.

2. Шумкина С.Г, Калашникова Л.А, Медведев Ю.Б. Полиморфизм крупного рогатого скота красно-пестрой породы по микросателлитным локусам ДНК // Селекция, кормления, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства: Сб. науч. тр. ВНИИплем. - М. -2004.-Вып. 16. - т. 1.- С. 21-28.

3. Шумкина С.Г, Медведев Ю.Б. ДНК-диагностика гетерогенности микросател-литных локусов крупного рогатого скота черно-пестрой породы // Селекция, кормления, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства: Сб. науч. тр. ВНИИапем. - М. -2004. -Вып. 16.-т. 2.-С. 14-19.

4. Калашникова Л.А, Шумкина С.Г, Денисенко Е.Д., Тинаев А.Ш. Использование ДНК-диагностики в селекции молочного скота // В сб.«Современные ресурсосберегающие технологии производства продукции животноводства», г.Вологда, 2004 г. - С. 25-33.

Заказ№ 11 Объем 1 п л. Тираж 60 экз.

Типография ВНИИплем

»135 OS

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шумкина, Светлана Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генетическая характеристика микросателлитных локусов генома

1.2. Методы исследования микросателлитов

1.3. Использование полиморфизма микросателлитных локусов генома для оценки генетической гетерогенности крупного рогатого скота

1.4. Использование микросателлитных локусов для оценки продуктивных признаков крупного рогатого скота

2 .МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3 .РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Оптимизация ДНК-технологии оценки полиморфизма микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота

3.2. Полиморфизм микросателлитных локусов генома крупного рогатого скота

3.2.1. Полиморфизм микросателлитного локуса RM

3.2.2. Полиморфизм микросателлитного локуса ЕТН

3.2.3. Полиморфизм микросателлитного локуса ЕТН

3.2.4. Полиморфизм микросателлитного локуса DIK

3.3. Оценка возможности использования полиморфизма микросателлитных локусов RM388, ЕТН10, ЕТН225, DIK083 для оценки генетической дифференциации красно - пестрой породы скота.

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Полиморфизм микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота красно-пестрой породы"

Актуальность работы. Для совершенствования селекционно-племенной работы требуются новые критерии отбора, помогающие выявить животных с высокими племенными характеристиками. Достижения молекулярной биологии дают возможность оценки животных не только по фенотипическим признакам, но и непосредственно по генотипу, что обеспечит селекционерам возможность точной и быстрой идентификации животных с высоким генетическим потенциалом по определенным признакам продуктивности.

Генетическая оценка животных стала значительно более эффективной в результате открытия семейств повторяющихся последовательностей, дислоцированных по всему геному (минисателлитов и микросателлитов). Микросателлитные последовательности ДНК в последнее время играют доминирующую роль в качестве неисчерпаемого источника генетических маркеров. В настоящее время выделено и описано более 2000 микросателлитов в геноме крупного рогатого скота (база данных INRA, Франция) и их количество увеличивается с каждым днем.

Микросателлиты имеют ряд преимуществ перед другими маркирующими системами: они множественны, высокополиморфны, широко распространены по всем хромосомам, легко выявляются и идентифицируются.

С открытием микросателлитов появилась возможность точно определить достоверность происхождения животных, а так же осуществить маркировку некоторых генетических локусов, связанных с продуктивностью (George М. et al., 1993; Ron М. et al.,1994; Charlier С. et al., 1995; Georges M. et al., 1995; Ohba Y. et al.,1999; Velmala R.J. et al., 1999; Ashweii M.S. et al., 1999; Heyen D. W. et al., 1997; Kato Y. et al., 1998; Peelman L., Mortiaux F., et al., 1998; Velmala R., Vilkki J. et al., 1995).

В 1996 году Международным обществом генетиков (ISAG) было рекомендовано использование молекулярных генетических тестов, основанных на полиморфизме микросателлитных локусов ДНК, для определения достоверности происхождения крупного рогатого скота.

В настоящее время идентифицированные микросателлиты составляют значительную группу генетических маркеров удобных для целого ряда исследований, таких как характеристика генетической структуры популяций и степени инбредности, оценка генетических расстояний между семействами, линиями, породами и видами животных, филогенетических исследований (Machugh D.E. et al., 1998; Peelman L.J. et al., 1998; Slate J. et al., 1998).

Применение микросателлитных маркеров даёт возможность определять корреляцию между хозяйственно-полезными признаками и определяющими их генетическими структурами, проводить селекционную работу с линиями, популяциями, породами и стадами, а так же вести отбор животных с желательными генотипом в любом возрасте (Lipkin Е. et al., 1998; Spelman R.J., Bovenhuis H., 1998).

Следует отметить, что породы и популяции крупного рогатого скота различаются по количеству аллельных вариантов и уровню гетерозиготно-сти изученных микросателлитных локусов. Данные по генетической гетерогенности крупного рогатого скота отечественной селекции практически отсутствуют. Имеются лишь результаты исследований нескольких микросателлитных локусов у коров черно-пестрой породы (Симоненко В.П., 1999; Шмидт Т.Ю., 2001).

Цель нашей работы - оценка полиморфизма микросателлитных локусов генома красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

Были поставлены следующие задачи:

1. Отобрать потенциально информативные микросателлитные локусы для красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

2. Разработать метод ПЦР - анализа генома, пригодный для выявления полиморфных вариантов микросателлитных последовательностей ДНК.

3. Определить частоту встречаемости аллельных вариантов и генотипов микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота.

4. Определить уровень гетерозиготности и информативной ценности выбранных микросателлитных локусов ДНК.

5. Оценить возможность использования микросателлитных последователей ДНК для оценки генетического разнообразия животных красно-пестрой породы.

Научная новизна работы. Впервые проведено генотипирование крупного рогатого скота отечественной селекции с использованием ряда микросателлитных маркеров, определен уровень гетерозиготности микросателлитных последовательностей ДНК и изучена частота встречаемости аллельных вариантов и генотипов в популяциях животных красно-пестрой и черно-пестрой породы. Выявлен высокий уровень полиморфизма микросателлитных локусов RM388, DIK083, ЕТН10 и ЕТН225. Установлено наличие 41 аллельного варианта микросателлитных локусов у крупного рогатого скота красно-пестрой породы (в среднем 10,2 аллеля на локус). Фактическая гетерозиготность изученных локусов составила от 0,53 до 1,0.

Практическая значимость работы. Предложен вариант ПЦР - диагностики, пригодный для анализа полиморфизма микросателлитных последовательностей ДНК крупного рогатого скота без использования дорогостоящих секвенаторов и радиоактивного мечения. Высокий уровень гетерозиготности и значений показателя информативной ценности микросателлитных локусов RM388, DIK083, ЕТН10 и ЕТН225, который составил от 0,87 до 0,99, позволяет рекомендовать их использование для оценки генетического разнообразия животных красно-пестрой и черно-пестрой породы, для определения достоверности происхождения и поиска взаимосвязей с хозяйственно-полезными признаками.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Оптимизация ДНК-технологии оценки полиморфизма микро-сателлитных локусов генома крупного рогатого скота.

2. Выявление полиморфизма микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота.

3. Определение частоты встречаемости аллелей и генотипов, уровня гетерозиготности и информативной ценности микросателлитных локусов ДНК.

4. Оценка возможности использования микросателлитных локусов ДНК для выявления меж- и внутрипородной генетической дифференциации крупного рогатого скота красно-пестрой породы.

Апробация работы. Результаты исследований обсуждены на заседаниях Ученых Советов ВНИИплем (2002-2003 гг.), на Международной научной конференции «Генетика и селекция в XXI веке» (Минск, 2002 г.), на научно-производственной конференции "Современные ресурсосберегающие технологии производства продукции животноводства" (Вологда, 2004 г.).

Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликованы 4 научные работы.

1. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Шумкина, Светлана Григорьевна

ВЫВОДЫ

1. Предложен вариант ДНК-диагностики, основанный на полимеразной цепной реакции, позволяющий выявить и охарактеризовать аллель-ные варианты микросателлитных локусов ДНК крупного рогатого скота без использования радиоактивного мечения и секвенирующих гелей.

2. В результате генотипирования по 4-м микросателлитным локусам генома животных красно-пестрой породы обнаружен 41 аллельный вариант: 14 аллелей локуса RM388, 10 - ЕТН10, 8 - ЕТН225, 9 -DIK083. Выявлено 29 аллелей микросателлитных локусов генома у животных черно-пестрой породы: 12 - RM388, 6 - ЕТН10, 11 -ЕТН225. Представлены данные о размерах аллелей и частоте их встречаемости.

3. Уровень фактической гетерозиготности всех изученных микросателлитных локусов у животных красно-пестрой породы превысил 0,5 и составил 0,83 для локуса RM388, 1,0 для локуса ЕТН10, 0,53 - для ЕТН225, 0,76 - для DIK083. Средний уровень гетерозиготности исследованных локусов равен 0,78.

4. Все изученные микросателлитные локусы являются высокоинформативными для оценки генетической гетерогенности и анализа сцепления. Показатель информативной ценности составляет от 0,87 для локуса DIK083 до 0,99 для локуса ЕТН10.

5. В результате генотипирования по микросателлитным локусам обнаружены выраженные индивидуальные различия, что позволяет использовать полиморфизм микросателлитных локусов RM388, ЕТН10, ЕТН225 и DIK083 для генетической паспортизации животных и оценки достоверности их происхождения.

6. Вероятность исключения неправильно записанного в родословной предка РЕ при анализе генотипов отца, матери и потомка составляет для животных красно-пестрой породы от 0,46 для локуса ЕТН10 до 0,77 для локуса DIK083. При отсутствии данных о втором родителе вероятность исключения неправильно записанного предка составляет от 0,36 для локуса ЕТН10 до 0,59 для локуса RM388. Вероятность обнаружения подмены потомка (исключения обоих родителей) составляет от 0,83 для локуса ЕТН225 до 0,91 для локуса ЕТН10.

7. Использование результатов одновременного генотипирования по нескольким локусам увеличивает вероятность исключения неправильных записей в родословных. Комбинативная вероятность исключения неправильно записанного предка по четырем локусам достигает 0,99 в случае подтверждения отцовства, 0,94 при отсутствии данных о втором родителе и 0,99 в случае подмены потомка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Рекомендуем использование микросателлитных локусов RM388, ЕТН10, ЕТН225 и DIK083 для оценки генетической дифференциации красно-пестрой породы крупного рогатого скота, идентификации групп животных и отдельных особей, установления их родства. Высокий уровень полиморфизма и кодоминантный характер наследования микросателлитных локусов генома предоставляют возможность поиска ассоциаций с ло-кусами хозяйственно-полезных признаков животных.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Шумкина, Светлана Григорьевна, п. Лесный Поляны Московской обл.

1. Асеев М.В., Скакун В.Н., Баранов B.C. Анализ аллельного полиморфизма четырех коротких тандемных повторов в популяции народов Северо Западного региона России. // Генетика. - 1995. - Т.31, №5. -С.705-711.

2. Алтухов Ю.П. Салменкова Е.А. Полиморфизм ДНК в популяцион-ной генетике. // Генетика. 2002. - Т.38, №9. - С. 1173-1195.

3. Балацкий В.Н. Генетический полиморфизм соматотропина и ассоциация его аллелей с количественными признаками животных. // Сельскохозяйственная биология. 1998. №4. - С.43-54.

4. Беридзе Т.Г. "Сателлитные ДНК" Москва. - Наука. - 1982. - 120с.

5. Газарян К.Г., Тарантул В.З. «Геном эукариот». М. - 1983. - 263с.

6. Глазко В.И. Облап Р.В, Кушнир А.Н, Щирский О.Н. Генетические маркеры лошадей. // Сельскохозяйственная биология. Москва.1999. №6. - С. 38-46

7. Глазко В.И., Дунин И.М., Глазко Г.В., Калашникова JI.A. Введение в ДНК-технологии. М. 2001. - 436с.

8. Глазко В.И., Глазко Г.В. ДНК-технологии в популяционно генетических исследованиях сельскохозяйственных видов. // «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». - Боровск. - 6-8 сентября2000. С.387-389.

9. Глазко В.И., Созинов И.А. Генетика изоферментов животных и растений. // Киев <Урожай> 1993. - 528с.

10. Ю.Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПБ.: «Специальная Литература». - 1997. - 287с.

11. Дейвис К. Анализ генома. // Методы. -М.: Мир. 1990. - 243с.

12. Животовский Л.А. Показатель сходства популяций по полиморфным признакам. // Общая биология. 1979. - Т.40, №.4. - С.587-602.

13. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., Эрнст Л.К., Брем Г. Введение в молекулярную генетику сельскохозяйственных животных. // ВИЖ. -2002.- 112с.

14. Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И., Рыжова Н.В., Голубина Е.П. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных. // Изд. ВНИИплем. 1999. - 147с.

15. Калашникова Л.А., Рыжова Н.В. Рестриктный полиморфизм частых повторов ДНК овец и коз. // Тезисы докладов 2-й Международной конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных". -Киев. 1996. - С. 10.

16. П.Калашникова Л.А., Яшчак К. Метод генетического анализа химерных животных // Тезисы докладов. Вторая международная конференция "Актуальные проблемы биологии в животноводстве". - Боровск. - 1995. - С. 183.

17. Калашникова JI.A., Шумкина С.Г., Медведев Ю.Б., Рыжова Н.В. ДНК-диагностика племенных качеств сельскохозяйственных животных. // В сб.«Генетика и селекция в XXI веке». Минск. 2002. - С. 210-212.

18. Калашникова JI.A., Шумкина С.Г., Денисенко Е.Д. Использование ДНК-диагностика в селекции молочного скота. // В сб.«Современ-ные ресурсосберегающие технологии производства продукции животноводства». Вологда. - 2004. - С.25-33.

19. Кленовицкий П., Марзанов Н. Старые проблемы новые решения. // Животноводство. - 1999. - №.2. - С.12-13.

20. Корохов Н.П., Логинова Ю.А., Симоненко В.Н., Ефимов A.M., Че-ряева О.Г. Физическое картирование и секвенирование микросател-лит-содержащих последовательностей ДНК Bos taurus L. // Молекулярная генетика маркеры животных. - Киев. - 1996. - С. 12-13.

21. Лакин Г.Ф. Биометрия. // Москва. Высшая школа. - 1980. - 287с.

22. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. // М.: "Мир"-1984.-480с.

23. Прохоренко П.Н., Сердюк Г.Н. Перспективы использования иммуно-генетики в сохранении генофонда и совершенствования пород сельскохозяйственных животных. // Сельскохозяйственная биология. -2002. №6. - С.3-7.

24. Рысков А.П., Гордон И.О. Полиморфизм ДНК и геномная дактилоскопия // Сельскохозяйственная биотехнология .- 1992. Т.З. - С.3-12.

25. Рысков А.П., Кудрявцев И.В., Васильев В.А., Потапов С.Г., Сипко Т.П. Диагностические возможности молекуляроно-генетических подходов к таксономии Bovini. // Зоотехнический журнал.-1994,-Т.73. -Вып.11. С. 115-125.

26. Симоненко В.Н. Микросателлитные последовательности (TG)n типа генома крупного рогатого скота. // Автореферат дис. канд. биол. наук. Боровск. 1999. - 25с.

27. Сулимова Г.Е. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ДНК. Методология и свойства. // Сельскохозяйственная биология. -1989. -№3-С.60-67.

28. Сулимова Г.Е. Возможности использования ДНК-маркеров хозяйственно-ценных признаков крупного рогатого скота в селекционных программах. // «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Боровск. - 5-8 сентября 1995. - С.224-225.

29. Турбеков М.З., Саитбекова Н.Д., Шубина Е.А., Гордон Н.Ю., Медиков Б.М. Полиморфные повторяющиеся последовательности ДНК в геномах диких и домашних овец. // Доклады Академии Наук СССР.-1988. Т.302. - №5. - С. 1265-1269.

30. Федоров А.Н., Гречко И.О., Слободянюк С.Я., Федорова JI.M., Ти-мохина Г.И. Таксономический анализ повторяющихся элементов ДНК. // Молекулярная биология. 1992. - Т.26 - Вып. 2. - С.464-469.

31. Шевченко В.Г., Шмидт Т.Ю. Генетические маркеры в селекции крупного рогатого скота. // «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Боровск. - 6-8 сентября 2000. - С.442-443.

32. Шмидт Т.Ю., Шевченко В.Г. Возможность использования микросателлитных маркеров для генетического картирования локусов хозяйственных признаков (Quantitative Trait Loci QTL). // Сб. науч. тр. МГАВМиБ им. Скрябина. - Москва. - 2000. - С. 176.

33. Шмидт Т.Ю., Симоненко В.Н., Шевченко В.Г. Генетическое картирование генома крупного рогатого скота. // Современные проблемы биотехнологии и биологии продуктивных животных: /Сб. науч. тр. ВНИИФБиП. 2001. - Т.40. - С.210.

34. Шмидт Т.Ю. Изменение полиморфизма миросателлитных маркеров шестой и девятой хромосоме крупного рогатого скота черно-пестрой породы. // Автореферат дис. канд. биол. наук. Боровск. - 2001. -С.24.

35. Alhussein J., Matthes Н. Vertfizierung der Pedigrees von Fjall-Rindern mit Hilfe der DNA-Microsatelliten analyse. // Zuchtungskunde. 2000. -V.72.-№.2-P.81-87.

36. Arnheim N, Li H, Cui X. PCR analysis of DNK sequences in single cells: single sperm mapping and genetic disease diagnosis. // Genomics 1990. - №8. - P.415-419.

37. Arranz J.J., Bayon Y., San Primitivo F. Comparison of protein markers and microsatellites in differentiation of cattle populations. // Animal Genetics. 1996. - V.27. - P.415-419.

38. Ashwell M.S., Van Tassell C.D. Detection on putative loci atfecting milk, health and type traits is a US Holstein population using 70 microsatellite markers in agenome scan. // J. Dairy Sc. 1999. - V.82. - №.11. -P.2497-2502.

39. Barendse W., Armitage S.M., Kassarek L.M. A genetic linkage map of the bovine genome. // Nature Genetics. 1994. № 6. - P.227-35.

40. Barendse W., Armitage S.M., Kossarek L.M. A preliminary map of the bovine genome. // Nature Genetics. 1994. - V.6. - P.226-235.

41. Barendse W., Vaiman D., Kemp S.J. A medium-density genetic linkage map of the bovine genome. // Mammalian Genome. 1997. №8. - P.21-28.

42. Barre-Dir A., Basedow M., Looft C. Genetic distance between German cattle breeds. // Animal Genetics. 1996. - V.31. - P. 18.

43. Bates S., Lange K. Exclusion probabilities of 22 bovine microsatellite markers in fluorescent multiplexes for automated parentage verification. // Animal Genetics. 1996. - V.31. - P. 17-42.

44. Bishop M.D., Kappes S.M., Keele J.W. A genetic linkage map for cattle. // Genetics. 1994. - №139. - P.619-639.

45. Blin N., Stafford D.W. A general method for isolation of high molecular weigh DNA from eukaryotes. // Nucl. Acids Res. 1976. - V.3. - P.2303-2308.

46. Buckland R.A. Sequence and evolutio of related Bovine and Caprine satellite DNAs. Identification of a short DNA amplification // J. Mol. Biol. -1985. V.186.-P.25-30.

47. Charlesworth В., Sniegowski P., Stephan W. The evolutionary dynamics of repetitive DNA in eukaryotes. // Nature. 1994. - V.371. - P.215-220.

48. Clowatzki Mullis M.L., Fries R. Parentage control in cattle by genotyp-ing microsatellites // Advances in Forensic Haemogenetics. - 1995. - Y.5. -P.207-209.

49. Comincini S., Leone P., Redaelli L., Ciuli D. E., Zhang Y., Ferretti L. Characterization of bovine microsatellites by silver staining // Journal of Animal Breeding and Genetics. 1995. - V.l 12. - № 5/6. - P.415-420.

50. Cui X., Li H., Goradia T M., Lange K., Kazazian H.H., Galas D.J., Arn-heim. Single sperm typing: determination of genetic distance between G-gamma globin and parathyroid hormone loci. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - V.86. - P.9389-9393.

51. Da Y., Ron M., Yanai A. The Dairy Bull DNA Repository: A resource for mapping quantitative trait loci. // Proceedings of the 5th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production. 1994. - №21. - P.229-32.

52. Das M., Sakul N., Kong J. A set of interrepeat sequence PCR markers for high-throughput genotyping. // Physiol genomic. 2000. - №4. - P. 13-24.

53. Devlin В., Risch N. Ethnic differentiation at VNTR loci, with special reference to forensic applications. // Am. J. Hum. Genet. 1992. №51. -P.532-548.

54. Dolf G., Glowatzki M-L., Gaillard C. DNA fingerprinting in cattle using the probe pv47. // Animal Genetics. 1992. - V.23. - P. 63-69.

55. Edwards A., Civitello A., Hammond H.A., Caskey C.T. DNA typing and genetic mapping with trimeric and tetrameric tandem repeats. // Amer. J. Hum. Genet. 1991. - Vol.49. - P.746-756.

56. Ellegeren H. Mutaion rates at porcine microsatellite loci. // Mammalian Genome. 1995. - №6. - P.376-7.

57. Erlich H.A. PCR-Technology // Perkin-Elmer Cetus. 1993. - P.247.

58. Ewen K.R., Matthews M.E. VIAS-H39, an equine tetranucleotide repeat: microsatellite repeat polymorphism. ANIM. // Genet. 1994. - V.25. -№6. - P.433-438.

59. Fredholm M., Wintero A.K. Efficient resolution of parentage in doge by amplification of microsatellite. // Animal Genetics. 1996. - V.27. - P. 1923.

60. Fries R., Eggen A., Stranzinger G. The bovine genome contains polymeric microsatellites // Genomics 1990. - V.8. - P.403-406.

61. Genzini E., Blasl M., Capuano M. Amplification of seven microsatellites for parentage identification in Italian buffalo. // Animal Genetics. 1998. -V.29. - P.10.

62. Georges M. & Massey J.M. Polymorphic DNA markers in Bovidae, WO Publication no. // World Intellectual Property Organization, Geneva. -1992. V.92. - P.131-142.

63. Georges M., Gunawardana A., Threadgill D.W. Characterization to a set of variable number of tandem repeat markers conserved in Bovidae. // Genomics. 1993. - №12. - P.25-32.

64. Georges M., Hilbert E., Lee B. Polymorphism in the trid intron of somatotropin gen and its association with selection for milk yield. // J. Anim. Sci. 1995.-V. 72.-P.316.

65. Georges M., Nielsen D., Mackinnon M. Mapping quantitative trait loci controlling milk production in dairy cattle by exploiting progeny testing. // Genetics. 1995. - V.139. - P.902-20.

66. Georges V., Lathrop M., Hilbert P., Marcotte A. On the use of DNK fingerprints for linkage studies in cattle // Genomic. 1990. - №6. - P.461-474.

67. Glowatzki-Mullis M.L., Gaillard C., Wigger G. & Fries R. Microsatellite-based parentage control in cattle. // Animal Genetics. 1995. - V.26. -P.7-12.

68. Goradia T.M, Stanton V.P, Cui X., Aburatani H., Lange K. Ordering three DNA polymorphisms on human chromosome 3 by sperm typing. // Genomics. -1991. №10. - P.748-755.

69. Gray I.C., Jeffreys A. Evolutionary transience of hypervariable minisatel-lites in man and the primates. // Proc. R. Soc. Lond. 1991. - V.243. -P.241-253.

70. Grosz M.D., Solinas-Toldo S. Chromosomal localization of bovine mi-crosatellites markers. // Animal Genetics. 1997. - V.28. - P.39-40.

71. Grundel H. & Reetz I. Exclusion probabilities obtained by biochemical polymorphisms in dogs. // Animal Blood Groups and Biochemical Genetics. 1981. - №12. - P.123-132.

72. Hirano Т., Nakane S., Mizoshita K. Characterization of 42 highly polymorphic bovine microsatellite markers. // Animal Genetics. 1996. -V.27. -P.365-368.

73. Hollm L-E. & Bendixen C. Usefullness of microsatellites from the ISAG comparison test for parentage control in Danish Black-and White cattle. // Animal Genetics. 1996. - V.27. - P. 17.

74. Hubert R., James L., Weber R. A new source of polymorphic DNA markers for sperm typing: analysis of microsatellite repeats in single cells. // Am. J. Hum. Genet. 1992. - V.51. - P.985-991.

75. Hubert R., Stanton VP Jr., Aburatani H., Waren J., Li H., Housman D., Arnheim N. Sperm typing allows accurate measurement of the recombination fraction between D3S2 and D3S3 on the short arm of human chromosome 3. // Genomic. 1990. - №12. - P.683-687.

76. Jamieson A. Electromoqjhs and erroneous pedigrees. Proceedings of the XVIth International Conference on Animal Blood Groups and Biochemical Polymorphism, Leningrad 1978. - 4 Vols. The National Committee of USSR. 27p.

77. Jamieson A. The effectiveness of using codominant polymorphic allelic series for (1) checking pedigrees and (2) distinguishing full-sib pair members. // Animal Genetics. 1994. - V.25 (Suppl. 1). - P.37-44.

78. Jamieson A. The genetics of transferrin in cattie. // Heredity. 1965. -V.20. - P.419-441.

79. Jamieson A., Taylor C.S. Comparisons of thee probability formulae for parentage exclusion. // Animal Genetics. 1997. - V.28. - P.379-400.

80. Jeanpierre M., Weil D., Gallano P., Creau-Goldberg N., Junien C. The organization of two related subfamikes of a human tandemly repeated DNK is chromosome specific. //Hum. Genetics. 1985. - V.70. - P.302-310.

81. Jeffreus A.J., Wilsog V., Thein S.L. Hypervariable «minisatellite» regions in human DNA. // Nature. 1985. - V.314. - P.67-73.

82. Jeffreys A.J., Wilson V., Thein S.L. Individual-specific «fingerprints» of human DNA. //Nature (London). 1985. - V.316. - P.76-79.

83. Jeffreys A.J., Tamaki K. Complex gene conversion events in germline mutation at human minisatellites. // Nature Genetics. 1994. - V.6. -P.134-145.

84. Jouquand S., Priat C., et al. Identification and characterization of a set of 100 tri- and dinucleotide microsatellites in the canine genome. // Animal Genetics. 2000. - V31. - V.266-212.

85. Kanmaki M., Tanabe Y., Katsumoto K. Bovine chromosome 12haplotypes as markers for identification of individuals and parentage. // Animal Genetics. 1996. - V.31. - P.21.

86. Kappes S.M., Keele J.W. A second-generation linkage map of the bovine genome. // Genome Research. 1997. - №7. - P.235-249.

87. Kappes S.M., Keele J.W., Stone R.T. A second generation linkage map of the bovine genome. // Genome Research. - 1994. - №7. - P.235-49.

88. Kashi Y., Nave A., Darvasi A., Gruenbaum Y., Soller M. & Beck-mann J.S. How is it that microsatellites and oligomers uncover DNK fingerprint patterns. // Mammalian Genome. 1994. - V.5. - P.525-530.

89. Kato Y.,Tani Т., Sotomaru Y., Kurokawa K., Kato J. Eight calves cloned from somatic cells of a singfe adult. // Science. 1998. - V.282. -P.2095-2098.

90. Kossarek L., M., Grosse W.M., Einlay O., Su, X., McGraw R.A. Six bovine dinucleotide repeat polymophisms: RM042, RM051, RM066, RM088, RM103 and RM113. // Animal Genetics. 1996. - V.26. - P.61-62.

91. Lander E. & Kruglyak L. Genetic dissection of complex traits: guidelines for interpreting and reporting linkage results. // Nature Genetics.'- 1995. -№ll. -P.241-7.

92. Li H., Gyllensten U., Cui X., Saiki R., Erlich H., Arnheim N. Amplification and analysis of DNA sequences in single human sperm. // Nature. 1988. - №335. - P.414-417.

93. Linderssoh M., Andersson Eklund L., Koning D., Lunden A., Maki-Tanila A., Anderssont G. Mapping of serum amylase -land guanti-tative trat loci for milk production trats to cattle chromosome. // J. Dairy Sc.-1998. - V.81. -№5. - P.1454-1461.

94. Lipkin E., Mosig M.O., Darvasi A. Quantitative trait locus mapping in dairy cattle by means of selective milk DNA pooling using dinucleotide microsatellite markers: // analysis of milk protein percentage. // Genetics. 1998. - V.149. - P.1557-1567.

95. Litt M, & Luty J.A. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene. // American journal of Human Genetics. 1989. - №44. - P. 397401.

96. Ma R, I Russ Z., Park C., Heyen D.W., Beever J.E., Green C.A., Lewin H.A. Isolation and characterization of 45 polymorphic microsatellites from the bovine genome. // Animal Genetics. 1996. - V.27. - P.43-47.

97. Machugh D.E., Loftus R.T., Bradley D.G. Genetic structure о seven European cattle breeds assessed using 20 microsatellite markers. // Animal Genetics. 1998. - V.29. - P.333-340.

98. Maddox J.F., Riffkin C.D., Beh K.J. Dinucleotide repeat polymorphism at the ovine McMAl, McMA2, McMA5, McMA8, MCMA9, McMAl 1, McMA20, McMA24, McMA26 loci. // Animal Genetics. -2000. -V.31. -№ 2. P. 148-149.

99. Martin I-Burriel., Garcia E-Muro., Zaragoza P. Genetic diversity analysis of six Spanish native cattle breeds using microsatellites. // Animal Genetics 1999. - V.30. - P. 177-182.

100. Martin-Burriel I., Eggen A., Eldugue C., Petit E., Barhi Darwich I., Laurent Cenetic and physical mapping of four cosmidderlved mick-rosatellites in cattle. // Areh. Zootecn. - 1996. - V.45. - V. 170/171. -P.349-353.

101. McGraw R.A., Grosse W.M., Kappes S.M., Beattie C.W., Stone C.W. Thirty-four bovine microsatellite markers. // Animal Genetics. -1997. V.28 - P.66-68.

102. Moazami-Goudarzi K., Laioe D., Furet J, P., Grosclaude F. Analysis of genetic relationships between 10 cattle breeds with 17 microsatellites. // Animal Genetics. 1997. - V.28. - P.338-345.

103. Mommens G., Peelman L.J. Genetic distances between Bos taurus breeds and a possible phylogenetic tree with a Bison outgroup. // Animal Genetics. 1998. - V.29. - P. 10.

104. Mullis K.B, Faloona F.A. Specific synthesis of DNA vitro via a polymerase catalyzed chain reaction. // Methods Enzymol. 1987. - V.155.- P.335-351.

105. Nave A., Kashi Y., Soller M. Minisatellite and microsatellite length variation at a complex bovine VNTR locus. // Animal Genetics. 1997. -V.28. -P.52-54.

106. Peelman L., Mortiaux F., Van Zeveren A., Dansercoer A. Evaluation to the genetic variability of 23 bovine microsatellite markers in tour Belgian cattle breeds. // Animal Genetics. 1998. - V.29. - V.3. - P. 161167.

107. Radko A. Markery mikrosatelitarne DNA w kontrli pockodzenia bydla. // Med. Wetter. 2000. - V.56. - V.6. - P.376-378.

108. Reed P.W., Davies J.L., Copeman J.B. Chromosome-specific microsatellite sets for fluorescence-based, semi-automated genome mapping. //Nature Genet. 1994. - V.7. - P.390-395.

109. Rolfs A., Schumacher H.C. PCR topics use of Polymerase Chain Reaction in genetic and infectious disease. // Eds. Springer Verlag. 1993.

110. Ron M., Weidle U., Lenz H. Response of somatotropin, prolactin and thyroxine to selection for milk yild in Holsteins. // J. Dairy Sci. -1994. V.73. -P.2470-2479.

111. RT-PCR, Methods and Applications. Clontech. Labs. Inc. 1991. 55p.

112. Saiki R.K, Gelfand D.H, Stoffel S., Scharf S.J. Primer directed amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. // Science. -1988. V.239. -P.487-491.

113. Saiki R., Scharf S., Faloona F. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequence and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. // Science. 1985. - V.230. - P.1350-1354.

114. Schnabel R.D., Ward T.J., Derr J.N. Validation of 15 microsatellites for parentage testing in North American bison, Bison bison and domestic cattle. // Animal Genetics. 2000. - V.31. - P.360-366.

115. Shubitowski D.M., Venta P.J. Polymorphism identification within 50 equine gene-specific sequence tagged sites. // Animal Genetics. 2001. - V.32. -P.78-88.

116. Slate J., Coltman D.W. Bovine microsatellite loci are highly conserved in red deer (Cervus elaphus), sika deer (Cervus nippon) and Soay sheep (Ovis aries). // Animal Genetics. 1998. - V.29. - P.307-315.

117. Soller M. & Beckmann J.S. Restriction fragment length polymorphisms and genetic improvement. Proceedings of the 2nd World Congress on Genetics Applied to Livestock Production. Madrid. Spain. VI. 1982 396p.

118. Soller M. Marker assisted selection an overview. // Animal Biotechnology. - 1994. - V.5. - P. 193-195.

119. Sonstegard T.S., Kappes S.M., Keele J.W., Smith T.P. Refinement ot bovine chromosome 2 linkage map near the me locus reveals rearrangements between the bovine and human genomes. // Animal Genetics. 1998. - V.29. - V.5. - P.341-347.

120. Spelman R.J., Bovenhuis H. Moving from QTL experimental results to the utilization of QTL breeding programmes. // Animal Genetics. -1998. V.29. -P.77-84.

121. Steffen P.A., Eggen A.B., Dietz J.E., Womack G., Seranzinger R. Isolation and mapping of polymorphic microsatelliites in cattle. // Animal Genetics. 1993. - V. - 24. - P.121-124.

122. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers. // Nucleic Acids Research. 1989. -V.17. - P. 6463-6471.

123. Taylar J.F., Lutaaya E., Sandekes J.O., Turner J.W., Daviis S.K. Amedium density micresatellite map of BTA-10: reassignment of INRA68. // Animal Genetics. 1997. - V.5. - P.133-136.

124. Vaiman D., Eggen A., Mercier D. A genetic and physical map of bovine chromosome 3. // Animal Genetics. 1995. - V.26. - P.21-25.

125. Velmala R.J., Vilkki J.H., Elo K.T. A search for quantitative trait loci for milk production traits on chromosome 6 in Finnish Ayrshire cattle. // Animal Genetics. 1999. - V.30. -P.136-143.

126. Vemala R., Vilkki J., Elo K. Gasein haplotypes and their association with milk production traits in the Finnish Ayrshire cattle. // Animal Genetics. 1995. - V.26. - P.419-426.

127. Weber J. & May P.E. Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction. // American Journal of Human Genetics. 1989. - V.44. - P.388-396.

128. Weber, J.L. & Wong C. mutation of human short tandem repeats. // Human Molecular Genetics. 1993. - V.2. - P. 1123-1128.

129. Weissenbach J., Gyapay G., Dib C. A second-generation linkage map of human genome. //Nature. 1992. - V.359. - P.794-801.

130. Weller J.I., Kashi Y. & Soller M. Power of daughter and granddaughter designs for determining linkage between marker loci and quantitative trait loci in dairy cattle. // Journal of Dairy Science. 1990. - V.73. -P.2525-2537.

131. Witte J.S., Elston R.C. & Schork N.J. Response to genetic dissection of complex traits. // Genetics. 1996. - V.12. - P.355-356.

132. Willard H.F. Chromosome-specific organization of human alphoid repeated DNK// Cytogenet. Cell Genetics. 1984. - V.37. -P.608-609.

133. Willki M., Orita M., Gordon R. Mapping quantitative trait loci controlling milk production in dairy cattle. // Genetic. 1997. - V.139. -P.907-920.

134. Womack J.E. & Moll Y.D. Gene map of the cow: conservation of linkage with mouse and man. // Journal of Heredity. 1986. - V.77. - P.2-7.

135. Yazawa S., Aoyagi Y., Mizoshita K., Inohae S., Suginoto Y. Analysis of microsatellite DNA polymorphism of Japanese Black cattle produced by nuclear transfer. // Animal Genetics. 1997. - V.68. - №.12. -P.1166-1169.

136. Zhang L., Cui X., Schhmitt K. Whole genome amplification from a single cell: implications from genome analysis. // Proc Natl Acad Sci USA. 1992. - V.86. - P.5847-5851.

137. Weber J.L. & May P.E. Abundant class of human DNK polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction. // Ameriьcan Journal Human Genetics. 1989. - V.68. - №.44. - P.388-396.

138. Rohrer G.A., Alexander L.J., Keele J.W., Smith T.P., Beattie C.W. A microsatellite linkage map of the porcine genome. // Genomics. 1994. - V.136. - P.231-245.

139. Georges M., Nielsen D. Mapping quantitative trait loci controlling milk production in dairy cattle by exploiting progeny-testing. // Genomics. 1995. - V.139. - P.907-920.

140. Moore S.S., Sargeant L.L., King T.J. The conservation of dinucleo-tide microsatellites among mammalian genomes allows the use of get-erologous PCR primer pairs in closely related species. // Genomics. -1991.-V.10.-P.654-660.

141. Bodnar J.S., Chatterjee A. Positional cloning of the combined hy-perlipidemia gene Hyplipl. // Nat. Genet. 2002. - V.30. - P. 110-116.

142. Grisart В., Coopetees W., Farnir F. Positional candidate cloning of a QTL in dairy cattle: identification of a missence mutations in the bovine DGATI gene with major effect on milk yield and composition. // Genome Research. 2002. - V.12. - P.222-231.

143. Pershouse M., Li J., Yang C., Su H. ВАС contig from a 3-cM region of mouse chromosome 11 surrounding Brcal. // Genomics. 2000. -V-69. - P. 139-142.

144. Zhang S., Krahe R. Physical and transcript map of a 2-Mb region in Xp22.1 containing candidate genes for X-linked mental retardation and short stature. // Genomics. 2002. - V-79. - P. 274-277.