Паразитарная система Echinococcus spp.

Черникова, Евгения Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Паразитарная система Echinococcus spp.
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Паразитарная система Echinococcus spp."

На правах рукописи

Черникова Евгения Анатольевна

ПАРАЗИТАРНАЯ СИСТЕМА ECHINOCOCCUS SPP. (МОДЕЛИРОВАНИЕ, СИСТЕМНЫЙ И ПРИКЛАДНОЙ АСПЕКТЫ)

03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва-2005

Работа выполнена в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Николай Васильевич Чебышев Доктор биологических наук, профессор Владимир Васильевич Горохов Доктор биологических наук, профессор Игорь Дмитриевич Дрынов

Ведущая организация:

Институт паразитологии РАН ' Защита диссертации состоится «ШЬ » «Ш><Р//8 » 2005 г.

на заседании диссертационного совета Д. 208.040.12 в Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

Адрес:, 119992 Москва, ул. Трубецкая дом 8, стр.2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И.М Сеченова (117998 Москва, Нахимовский проспект, дом 49) Автореферат разослан

« « Ан^Л У » 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Александра Александровна Фролова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эхинококкозы - актуальная глобальная проблема медицинской паразитологии. Эхинококкозы представляют собой сложные паразитарные системы, структурными компонентами которых являются цестоды рода Echinococcus на разных стадиях развития, а также животные и человек, являющиеся хозяевами разных стадий жизненного цикла паразита. Популяция паразитов - интегрирующее звено паразитарной системы, образованной конкретной популяцией паразита и поддерживающими ее существование популяциями всех хозяев. В основе паразитарной системы лежит выработанное в ходе эволюции взаимодействие популяций паразита и хозяев.

Ларвальные эхинококкозы (цистный и альвеолярный) тканевые гельминтозы, характеризующиеся длительным хроническим течением заболевания, тяжелой органной и системной патологией, обширностью поражения, приводящие к инвалидности и нередко заканчивающиеся смертью больного.

Эхинококкозы человека и сельскохозяйственных животных представляют серьезную социально-экономическую проблему, требующую разработки новых подходов для ее разрешения. Одним из таких подходов может стать интегративно-функциональный. Применительно к паразитарной системе Echinococcus spp. этот подход определяет методологию изучения механизмов взаимодействия разных стадий развития паразита с организмами хозяев и их роли в реализации инвазионного процесса.

Для изучения указанных механизмов могут быть использованы известные лабораторные модели эхинококкозов, разработанные в России, недостатком, которых является использование большого числа экспериментальных животных, так как при пассаже лабораторные животные-доноры погибают. До сих пор ограничены сведения об инвазионности паразита от естественных хозяев разных видов для лабораторных животных. Отсутствуют методы длительного поддержания лабораторного штамма возбудителя, гарантирующие сохранение возбудителем морфологических особенностей и полноценных инвазионных свойств. Особый интерес в этом аспекте представляют стабильное воспроизведение и поддержание лабораторных штаммов возбудителей эхинококкозов, отработка стандартизованных лабораторных моделей метацестодной стадии и разработка новых моделей стробилярной стадии Echinococcus spp. Большое теоретическое и прикладное значение имеет создание моделей с использованием в качестве донорского материала паразитов, полученных от оперированных больных альвеококкозом для уточнения конкретных параметров паразито-хозяинных отношений.

Интегративно-функциональный подход служит эффективным инструментом определения механизмов реализации биологических возможностей (ресурсов или потенциалов) паразита на всех стадиях его развития в организме различных хозяев. Моделирование условий, в которых паразит вынужден использовать все имеющиеся биологические ресурсы для обеспечения своего развития и сохранения, в том числе и при неблагоприятных для него условиях, позволит определить механизмы взаимодействия и особенности биологического потенциала разных стадий паразита.

С целью выявления новых возможностей в разработке профилактических мероприятий и лечения промежуточных и окончательных хозяев, а также использования стандартизованных экспериментальных моделей в скрининговых исследованиях противоцес-тодных препаратов, начиная с 1999 года в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины (ИМПиТМ) им. Е. И. Марциновского ММА им. И. М. Сеченова проводились специальные исследования в рамках НИР по решению заданий программы «Оптимизация профилактики паразитарных болезней» договор № 034/146/052 от 16.07.03 отраслевой научно-исследовательской программы «Эпидемиология и микробиология» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Автор выражает признательность:

ведущему научному сотруднику лаборатории экспериментальной химиотерапии паразитарных болезней доктору медицинских наук Ф. П. Коваленко за его консультативную и методическую помощь в совместной экспериментальной работе;

академику РАМН, профессору В.П.Сергиеву за конструктивные обсуждения общетеоретических и методологических аспектов наших исследований и поддержку данной работы.

Цель исследования: Разработка методологии моделирования паразитарной системы Echinococcus spp. для применения в экспериментальной медицине и биотехнологии.

Для достижения поставленной цели потребовалось решить следующие задачи: • определение системных элементов, инфраструктурных (самосохранительных) це-

лей на разных стадиях жизненного цикла паразита и механизмов активации данных элементов паразитарной системы Echinococcus spp.;

• воспроизведение, модификация и стандартизация экспериментальных моделей биоваров возбудителей цистного и альвеолярного эхинококкозов на лабораторных животных;

• использование «очищенных» свободных микроскопических ацефалоцист, полученных из метацестоды от оперированного больного альвеолярным эхинококкозом, для создания лабораторного штамма экспериментального альвеококкоза;

• совершенствование и оптимизация методов моделирования кишечных форм цестод для изучения особенностей развития зрелых форм паразита;

• определение и стандартизация параметров культивирования стробилярной стадии альвеолярного эхинококка на лабораторных грызунах;

• изучение возможности использования экспериментальных моделей биоваров возбудителей альвеолярного и цистного эхинококкозов для скрининга противоцестодных препаратов

Научная новизна результатов исследования

В результате проведенных исследований нами впервые:

• обоснована целесообразность применения интегративно-функционального подхода для анализа взаимоотношений в паразитарных системах, который позволяет определять механизмы активации разных стадий развития паразита Echinococcus spp. в организмах разных видов хозяев,

• отработаны методические приемы поддержания стандартизованных лабораторных штаммов и моделей эхинококка;

• показана ведущая роль ацефалоцист в выживании и увеличении популяции паразита в организме промежуточного хозяина;

• доказана возможность лабораторного воспроизведения экспериментального альвеолярного эхинококкоза при использовании в качестве паразитарного донорского материала очищенных свободных микроскопических ацефалоцист из метацестод от оперированных больных альвеококкозом;

• создана принципиально новая методология лабораторного поддержания экспериментальных моделей цестод путем искусственной трансплантации незрелых стробилярных форм цестод из кишечника экспериментально зараженного животного-донора в желудок неинвазированного животного-реципиента, с последующим развитием паразита в кишечнике грызуна до стадии формирования инвазионных яиц. Этот подход определяет новое направление в моделировании гельминтозов;

• на основе метода искусственной трансплантации незрелых и зрелых стробилярных форм эхинококков доказан новый для науки факт - возможность оперативной трансплантации взрослых цестод и нематод из кишечника животного-донора в желудок животного-реципиента с последующим развитием гельминта в кишечнике донора до стадии зрелых яиц;

• обнаружен новый биологический феномен - возможность экзогенного почкования личиночной стадии Echinococcus granulosus в организме человека.

Практическая ценность работы. Результаты исследований позволили оптимизировать и стандартизировать методы экспериментального моделирования разных стадий развития Е. granulosus и E.multilocularis. Значимость работы для практического использования заключается в следующем:

1. Обоснована возможность применения интегративно-функционального подхода для анализа взаимоотношений в паразитарных системах, который позволяет определять механизмы активации разных стадий развития паразита Echinococcus spp. в организмах разных видов хозяев;

2. Получен новый лабораторный штамм E.multilocularis «восточно-европейского» биовара [от оперированного больного (21)], - продуцент большого числа протосколексов.

3. Отработана безопасная для экспериментаторов модель стробилярных цестод с использованием «восточно-европейского» и «камчатского» биоваров эхинококка.

4. Отработана методика трансплантации кишечных цестод и нематод у экспериментальных животных, что обеспечивает стандартизацию и сокращение стоимости моделей.

5. Создана высокопродуктивная модель кишечного альвеолярного эхинококкоза на золотистых хомяках, упрощающая скрининг химиопрепаратов и позволяющая получать большие объемы антигенного материала для целей биотехнологии, производства диагностических тест-систем, создания и конструирования вакцин против эхинококкоза у окончательных хозяев.

6. Доказана эффективность использования стандартизованных лабораторных моделей эхинококка для скрининга противоэхинококковых препаратов и отработки новых подходов к терапии, в том числе:

6.1. на экспериментальной модели кишечного альвеолярного эхинококкоза золотистых хомяков выявлена высокая противоцестодная активность полимерной формы альбендазо-

ла, представляющей собой металлокоплекс альбендазола и меди, дополнительно включенного в микрокапсулы из ацетилцеллюлозы (ПФА), флузамида, микрокапсулированно-го комплекса альбендазола и кобальта, препарата Г - 1141 и препарата растительного происхождения - кукурбина;

6.2. выявлен феномен адаптации хозяина к постепенно и постоянно повышаемым суточным дозам препаратов группы карбаматбензимидазолов в течение продолжительных непрерывных курсов лечения, что открывает новые подходы к терапии;

6.3. установлено, что терапевтическая активность эффективных противоэхинококковых препаратов на экспериментальных моделях ларвальных эхинококкозов характеризуется быстрой первоначальной и равномерной во всей популяции паразитов деструкцией про-тосколексов и последующим замедленным и неравномерным отмиранием микро- и макро-ацефалоцист метацестоды эхинококка.

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы исследований использованы при подготовке с личным участием автора нормативно-методических документов, утвержденных Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации:

1. Санитарные правила и нормативы (СанПиН) 3.2.1333-03 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации". Утверждены Министерством здравоохранения РФ 28.05.03 г. Зарегистрированы в Министерстве Юстиции РФ 09.06.03 №4662.

2. Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями: Методические указания (МУ 3.2. 1156 - 03), М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава Рос-сии.-2004.

3. Получены патенты на изобретение:

3.1. Антигельминтное средство. Патент РФ № 2195280. - 2002.

3.2. Способ скрининга антигельминтных препаратов. Патентная заявка № 2001134511/14. Приоритет 21.12.01

4. Материалы диссертации были использованы в педагогической работе на сертификационных циклах для врачей паразитологов, эпидемиологов и других специалистов ЦГСЭН; терапевтов, педиатров, инфекционистов и других специалистов лечебно-профилактических учреждений на тематических циклах усовершенствования на кафедре паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И. М. Сеченова (2001 - 2004 гг.); в курсе «Тропические паразитарные болезни» для иностранных студентов 6 курса лечебного факультета ММА им. И. М. Сеченова (2000 - 2004 гг.).

Апробация работы.

Основные результаты исследования были доложены и обсуждены со специалистами на: Международной научно-практической конференции «Проблемы эхинококкоза» в Махачкале (2000 г.); научно-практической конференции «Тканевые гельминтозы: диагностика, патогенез, клиника, лечение и эпидемиология» в Витебске (2000 г.); XXI Международном Конгрессе гидатидологов в г. Кусадаки (Турция, 2001 г.); 1-ой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия профессором К. И. Виноградовым сибирской двуустки у человека в Томске (2001г.); Международной научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы) в Москве (2002 г.); Ш-ей Международной Российско-Иранской Конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы» в Москве (2002 г.); X Международном Конгрессе по паразитологии в Ванкувере (Канада, 2002 г.); XI Международном гельминтологическом симпозиуме «Гельминты, гельминтозы и окружающая среда» в Старо Леста (Словакия, 2003 г.); XXI Симпозиуме Скандинавского общества паразитологов в Бергене (Норвегия, 2003 г.); XIX Международной конференции Всемирной ассоциации прогресса ветеринарной паразитологии в Нью Орлеане (США, 2003 г.); XXI Международном Конгрессе гида-тидологии в Найроби (Кения, 2004 г.); Объединенной сессии Центрального Совета ОГ РАН и секции «Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных»; Отделении ветеринарной медицины РАСХН в Москве (2002 - 2003 г.г.); заседании Ученого Совета ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского ММА им. И. М. Сеченова (2002 - 2004 г.г.).

Диссертация апробирована на заседании Специализированной комиссии по предварительной экспертизе диссертаций в ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского ГОУ ММА им. И.М.Сеченова (протокол № 79 от 07 сентября 2004 г.).

Публикации по теме работы. Результаты диссертации отражены в 48 печатных работах (из них: 6 в журналах, включенных в перечень ВАК; 19 в зарубежных изданиях), 1 Сан-ПиНе, 1 методическом указании, 2 патентах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена в виде монографии на 233 страницах машинописного текста. Она состоит из введения, шести глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список литературы включает отечественных и 162 зарубежных публикаций. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 41 рисунком.

МАТЕРИАЛЫ И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ.

В работе применяли методы экспериментального моделирования. Для экспериментального заражения лабораторных животных использовали материал (биовары Echinococcus spp.), полученный нами от спонтанно инвазированных, лабораторных животных и человека (табл. 1) и поддерживаемый в ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского.

Таблица 1

Характеристика биоваров Echinococcus multilocularis и Echinococcus granulosus

Вид паразита Название биовара Стадия развития паразита при получении от естественного хозяина Вид спонтанно ин-вазиро-ванного хозяина паразита Параметры пассирования биовара на лабораторных грызунах

Метод заражения при пассажах Общее число выполненных пассажей

первом последующих

Echinococcus multilocularis казахстанский стробилярная лисица первичное* вторичное ** 122

камчатский стробилярная волк первичное* вторичное** 51

восточноевропейский -1 метацестода человек вторичное** вторичное** 8

Echinococcus granulosus казахстанский метацестода овца вторичное** вторичное *** 3

восточноевропейский -1 метацестода корова вторичное** вторичное*** 3

восточноевропейский - II метацестода человек вторичное** вторичное** 4

восточноевропейский - III метацестода человек вторичное*** вторичное*** 3

Примечание: * - заражение яйцаМи в желудок;

** - инъекционное заражение микроскопическими зародышевыми элементами; *** - оперативное заражение целыми незрелыми или зрелыми ларвоцистами

Моделирование экспериментальных эхинококкозов осуществляли на лабораторных животных (табл.2):

Таблица 2.

Лабораторные животные, использованные в экспериментах

№ п./п. Вцд лабораторного животного Масса тела лабораторного животного Число животных использованных в эксперименте

1 золотистые хомяки (Mesocricetus auralus) 35-120 г 411 шт.

2 хлопковые крысы (Sigmodon hispidus) 80-100 г 96 шт.

3 аутбредные мыши (Mus musculus) 18-22 г 538 шт.

4 белые крысы (Raltus norvegicus) 140-180 г. 316 шт.

Всего 1361 шт.

В изучении биоваров Echinococcus spp. использовали методы микроскопического паразитологического, гистологического анализа.

Для заражения лабораторных животных и воспроизведения экспериментального эхинококкоза использовали методики экспериментального моделирования эхинококкозов (Коваленко Ф. П., 1998).

Для внутрибрюшинного заражения использовали по 1000-2000 живых протоско-лексов в 0,5-1,0 мл стерильного физиологического раствора с антибиотиками (8000 ЕД/мл пенициллина и 1,28 мг/мл гентамицина).

В качестве иммунодепрессанта использовали микрокристаллическую суспензию ацетата гидрокортизона (А.О. Гедеон Рихтер, Венгрия).

Изучение общего количества и размеров крючьев проводили при помощи калибровочного окулярного микрометра под микроскопом PZO при увеличении 1050. Общую длину крючка и длину лезвия измеряли по Sweatman G.K. и Williams R.J. (1963). Подготовка протосколексов и стробил к измерениям проводили по Ястребу В.Б. и Скворцовой Ф.К. (1991). Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента.

В исследованиях были использованы высокоактивные соединения группы карба-матбензимидазолов, как широко известные (суспензия альбендазола производство фирмы INVESA, Испания), так и новые - полимерная форма альбендазола (ПФА) и микрокапсу-лированный комплекс альбендазола и кобальта, синтезированные во Всероссийском институте гельминтологии им. К. И. Скрябина (ВИГИС); флузамид, препараты: Г - 1741, Г -1742, Г- 1743, Г- 1744, Г - 1745 синтезированные в Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии (СПХФА) и ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского; препарат растительного происхождения - кукурбин, разработанный НПО «Европа - Биофарм» (г. Волгоград). Препараты вводили инвазированным животным в желудок однократно преимущественно в виде суспензии в растительном масле (ПФА, микрокапсулированный альбендазол, микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта). Флузамид вводили в 1%-ном крахмальном геле.

Активность соединений группы карбаматбензимидазолов оценивали по показателю индекса химиотерапевтической активности (ИХТА), которую рассчитывали по формуле:

где Ми, Мк, Мл - среднее значение массы выявленных ларвоцист паразита на 1 животное; Ми — исходное, Мк - контрольное и Мл - животные, получавшие высокоактивные соединения.

Интенсивность инвазии (интенс-эффективности - ИЭ) рассчитывали по средним показателям инвазии у контрольных групп животных (Мк) и групп, получавших высокоактивные соединения по формуле:

Для объективной оценки действия активных соединений в динамике, животных в течение опыта подвергали ультразвуковому исследованию (УЗИ) и диагностической ла-паротомии. УЗИ выполняли с помощью аппарата «SIQUOE» фирмы «ACUSON» (США) с конвексным датчиком (частота 2,5 - 5 мГц).

Макро- и микроскопические исследования пунктатов, из кистозных образований и самих цист от больных, оперированных по поводу цистного и альвеолярного эхинококко-за различной локализации, проводили визуально, под малым (х8) и большим (х40) увеличением микроскопа Nikon.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Результаты проведенных исследований позволили сформулировать и обосновать три основных положения диссертации, представляемых к защите.

ПЕРВОЕ ПОЛОЖЕНИЕ. Интегративно-функциональный подход открывает новые возможности в изучении патогенеза эхинококкозов. Он позволяет рассматривать проявления особых биологических ресурсов паразита (экзогенное почкование E.granulosus по типу альвеолярного, развитие ацефалоцист E.multilocularis внутрь паразитарного узла и другие), как основную причину выживания и увеличения популяции паразита, приводящую к рецидивам инвазии.

В основе интегративно-функционального подхода в изучении паразитарных систем лежит понимание системы как целостного и целесообразного комплекса причинно-следственных связей, обеспечивающего устойчивое сохранение паразита как вида Сущность данного подхода состоит в том, что в качестве элементов системы рассматриваются ее функции (т.е. элементарные причинно-следственные связи, имеющие существенное значение для функционирования системы). В этом случае целостность системы определяется результатом их интеграции. При этом система рассматривается как механизм взаимодействия составляющих ее элементов.

В рассматриваемом подходе системным элементом выступает элементарная причинно-следственная связь, включающая два свойства: свойство-следствие и свойство-причину.

Причинно-следственная связь - взаимообусловленность проявления различных свойств паразита и хозяина, характеризующая их функциональные зависимости.

Для паразита - это разные аспекты взаимодействия конкретной стадии развития с организмом хозяина или окружающей средой. Элементарной причинно-следственной связью паразитарных систем является вирулентность инвазионной стадии (яйца, личинки и др.) и восприимчивость (комплекс ответных реакций) хозяина, приводящие к развитию заболевания.

Свойством-следствием в паразитарных системах является биологический ресурс или потенциал системного элемента, т.е. возможность влияния на ход некоторого процесса с использованием свойства-причины системного элемента. Для различных стадий развития паразита это - возможность активации его инвазивности (вирулентности).

Организм хозяина, как промежуточного, так и дефинитивного выступает в паразитарной системе не только как биотическая среда, но и как её структурный элемент, обладающий или не обладающий чувствительностью к данному объекту, т.е. способностью синтезировать активные вещества (или клетки) для инактивации патогена или метаболитов последнего.

Свойством-причиной в паразитарных системах является механизм активации, т.е. способ или механизм, при помощи которого реализуется потенциальная возможность заражения и паразитирования возбудителя, несмотря на защитную реакцию организма хозяина. Для паразита - это реализация факторов инвазивности, обеспечивающих сохранность данной стадии развития в организме хозяина и возможность дальнейшего развития или размножения; для организма хозяина - реализация комплекса последовательных реакций, способствующих развитию паразита или препятствующих этому развитию.

Совокупность элементных механизмов активации в системе составляет интегра-тивный (суммарный) механизм активации.

Взаимодействие патогенного воздействия паразита и защитных механизмов хозяина являются сутью паразито-хозяинных отношений. Превалирование паразитарного воздействия (высокая вирулентность) приводит к развитию тяжелого заболевания. Наоборот, превалирование защиты ведет к «абортированию» патологического процесса.

Таким образом, при использовании настоящего подхода основой изучения становятся не морфологические особенности, а взаимодействие паразита и хозяина, то есть патогенез болезни.

Структурная организация паразитарной системы Echinococcus spp. включает двух хозяев - дефинитивного и промежуточного и три стадии развития гидатид - стробиляр-ную или зрелую; яйцо с онкосферой и личиночную - метацестоду или ларвоцисту.

Основными системными элементами, с позиций интегративно-функционального подхода, в паразитарной системе гидатид являются:

1 - вирулентность онкосферы и восприимчивость промежуточного хозяина, обуславливающие развитие метацестоды. В данном элементе можно выделить две составляющие: вирулентность онкосферы, обеспечивающая возможность развития онкосфе-ры в организме промежуточного хозяина, и, как следствие этого, образование личиночной стадии - метацестоды, содержащей зрелые протосколексы и ацефалоцисты; и восприимчивость промежуточного хозяина, т.е. способность реагировать на внедрение в организм онкосферы и как следствие - развитие заболевания. Другим сценарием развития является гибель онкосферы в резистентном организме. Совокупность факторов вирулентности (биотический потенциал), обеспечивает трансформацию организма промежуточного хозяина с целью создания оптимальных или достаточных условий для реализации «стадийной цели» - активации онкосферы и развитие метацестоды с образованием внутри нее протосколексов и ацефалоцист.

Исходя из выше сказанного, мы можем определить биологический потенциал данной составляющей системного элемента как наличие возможности активации онкосферы и обеспечение развития метацестоды.

2 - степень патогенности элементов метацестоды и восприимчивость (видовая) окончательного хозяина,.обуславливающие развитие стробилярной стадии. Этот элемент также имеет две составляющие: степень патогенности протосколексов, обеспечивающая возможность эмбриональной и соматической дифференциации протосколексов и развитие стробилярной стадии, и образование зрелых яиц с онкосферой в организме дефинитивного хозяина и восприимчивость (видовая) дефинитивного хозяина, т.е. способность реагировать на внедрение в организм элементов метацестоды и обеспечивать условия для:

• развития стробилярной стадии паразита - у высоко восприимчивых видов;

• гибели протосколексов или ацефалоцист - у невосприимчивых видов плотоядных.

Комплекс реакций, способствующих развитию паразита, включает не только особенности питания окончательного хозяина (количество и качество белка в пище), но и наличие дезоксихолевой кислоты в желчи. О высокой степени адаптации паразита и хозяина говорит тот факт, что эхинококкоз у плотоядных хозяев обычно протекает бессим-

птомно, даже при большой интенсивности инвазии. Реакции хозяина носят преимущественно местный характер в виде обильного вьщеления слизи в кишечнике и местного воспаления в анальной области.

Таким образом, в паразитарной системе Echinococcus spp-можно выделить два основных системных элемента, обуславливающих ее существование как системы (рис.1).

Рис.1. Взаимодействие системных элементов паразитарной системы Echinococcus spp. с позиций интегративно-функционального подхода

Метацестода, развивающаяся в организме человека (промежуточного хозяина), не может дать продолжения существования вида Echinococcus spp., так как человек является биологическим тупиком в данной паразитарной системе. Особенности взаимодействия

комплекса реакций, способствующих развитию паразита и реакций хозяина, позволяющих, реализовать биологический потенциал инвазионной стадии обуславливают, патогенез цистного и альвеолярного эхинококкоза.

Нами проведен анализ особенностей патогенеза эхинококкозов с позиций интегра-тивно-функционального подхода

Анализ механизмов взаимодействия паразита и промежуточного хозяина (человека) с позиций интегративно-функционального подхода проведен нами по результатам макро- и микроскопического паразитологического исследования пунктатов из кистозных образований от больных, оперированных по поводу цистного и альвеолярного эхинококкоза различной локализации. Исследование данных материалов позволило более подробно проанализировать особенности процесса роста и развития метацестоды у человека.

Нами впервые обнаружен и описан феномен увеличения популяции метацестод Е. granulosus у человека путем экзогенного почкования паразитарной кисты по типу, характерному для альвеолярного эхинококка. Он был выявлен у больной П., 69 л., оперированной по поводу гидатидозного эхинококка. Из полости печеночной паразитарной кисты (диаметром 150 мм) была выделена дочерняя киста (диаметром 50 мм), несущая на поверхности 9 плотных шаровидных наростов беловатого цвета (диаметром 10-30 мм) с бугристо-фестончатой поверхностью, напоминающих по внешнему виду кочаны цветной капусты в миниатюре. При микроскопии содержимого этих образований выявлено множество тесно прилегавших друг к другу мелких паразитарных кист диаметром 0,1-3 мм. Наиболее крупные из них содержали выводковые капсулы с живыми юными и зрелыми ввернутыми протосколексами. Основание этих образований имело 1-2 полых ветвящихся канала, устья которых сообщались с полостью дочерней паразитарной кисты и были четко различимы в виде 1-2 отверстий диаметром 2-3 мм на внутренней поверхности дочерней кисты (рис. 2).

Аналогичное развитие метацестоды было выявлено у больной Ш. (39 лет) с диагнозом - множественный рецидивный эхинококкоз большого сальника, корня брыжейки подвздошной кишки, забрюшинной клетчатки, париетальной и висцеральной брюшины. Размеры и масса кист у этой больной (с соединительно-тканной фиброзной капсулой) составляли 7x9 см (масса - 451 г.) и 8,5x11 см (масса - 462 г.). После удаления соединительно-тканной капсулы с более крупной кисты обнаружено, что под общей капсулой

располагались две материнские кисты, поверхность наиболее крупной из которых несла конгломерат наружных дочерних кист, диаметр которых варьировал от 0,5 до 15 мм (рис 3)

Обнаружение феномена экзогенного почкования у дочерних паразитарных кист свидетельствует о формировании новых очагов за счет локальной экзогенной пролиферации клеток герминативной оболочки паразита Это позволяет с принципиально новых позиций объяснять механизм послеоперационного рецидива эхинококковой болезни у человека Возможно, это дополнительный (вновь выявленный) механизм появления дочерних (дремлющих) цист

Рис 2 Фрагмент оболочки печеночной метацестоды Е granulosus у больной П

1 — внешняя поверхность оболочки метацестоды, 2 — внутренняя поверхность оболочки метацестоды

Рис 3 Эхинококковые кисты из большого сальника больной Ш Фиброзная капсула удалена Обе кисты располагались под общей соединительно-тканной капсулой На поверхности крупной материнской кисты (1) расположен конгломерат наружных дочерних кист (2), развившихся в результате экзогенной пролиферации клеток герминативной оболочки материнской кисты Нативный препарат

Факты экзогенного почкования у человека были подтверждены проведенным па-разитологическим анализом пунктатов из кистозных образований и самих цист от ряда больных, оперированных по поводу цистного эхинококкоза различной локализации. Обращают на себя внимание синхронные процессы дегенерации материнских кист и пролиферация отдельных клеток герминативной оболочки с формированием дочерних и внучатых кист.

В пунктатах от других больных (8 человек), даже в погибших кистах, обнаруживались по нескольку жизнеспособных ацефалоцист. При обнаружении зрелых и юных про-тосколексов (свободных и заключенных в выводковые капсулы) примерно в 20-30 % случаев наблюдалось описанное ранее развитие ацефалоцист (диаметром 10-120 мкм) из герминативных клеток «ножки» протосколексов. Это является признаком злокачественной экзогенной пролиферации элементов метацестоды паразита.

Ведущая роль в развитии прогрессирования заболевания и разбалансировании иммунной системы, проводящая к появлению «аномально» развивающихся опухолей, паразитарного происхождения отводится цитокинам и лимфокинам.

Анализируя результаты наблюдений, мы предположили, что, вероятно, у больных произошло ослабление функциональной активности лимфокинов и

цитокинов а это привело к активному экзогенному почкованию

дочерних и внучатых ларвоцист.

Исследование метацестоды E.multilocularis было проведено на материале, поступившем из ФХК им. Н. Н. Бурденко ММА им. И. М. Сеченова. Нами проведены микроскопические исследования жидкого содержимого из кистозных образований и биопсий-ных образцов ткани из периферической зоны метацестоды альвеококка у 4-х больных аль-веококкозом (табл.3).

В жидком содержимом были обнаружены множественные погибшие ацефалоцисты (от 5181 до 256). Число живых элементов метацестоды в каждой пробе варьировало от 23 до 68 экз., что составляло около 6% от общего числа обнаруженных, их диаметр варьировал от 15 мкм до 100 мкм. Выявленные ацефалоцисты были представлены двумя типами: округлые (не почкующиеся) и неправильной формы с перетяжками, древовидными ответвлениями, на концах которых располагались более мелкие (делящиеся и почкующиеся).

Таблица 3

Результаты микроскопического анализа жидкого содержимого из метацестод от больных альвеолярным эхинококкозом

Число ацефалоцист

№ больного Число проб, в пробе В том Характер живых ацефалоцист

объемом 0,5 мл числе живых экз. Не почкующиеся Поч-кующиеся толщина стенки до 15 мкм толщина стенки до 100 мкм

1 2300 56 27 29 28 28

2 900 27 18 9 10 17

1 3 720 64 22 42 26 38

4 800 23 9 14 12 11

5 711 36 10 16 22 14

Среднее абс/ % 1086 41,5/3,82 17,2/41,4 22,0/53,0 19,5/47,9 21,5/52,0

1 5181 54 22 32 25 29

2 4894 38 16 22 18 20

2 3 3789 49 30 19 26 20

4 3168 51 23 28 27 24

5 2683 26 10 16 14 12

Среднее абс/ % 3943 43,6/1,1 20,2/46,3 23,4/53,7 22,0/50,4 21,0/48,2

1 1503 68 23 45 31 37

2 967 64 36 28 29 35

3 3 720 66 28 38 37 29

4 484 67 31 36 28 39

5 306 68 42 26 32 36

Среднее абс/ % 796 66,6/8,37 26,4/39,6 34,6/51,9 31,4/51,6 35,2/52,8

1 1067 68 43 25 35 33

2 860 57 24 33 28 29

4 3 563 65 37 28 34 31

4 354 66 31 35 37 37

5 256 53 26 27 26 27

Среднее абс/ % 620 61,8/9,97 32,2/52,1 29,6/47,8 32,0/51,7 31,4/50,8

Соотношение по типам форм ацефалоцист соответственно - не почкующиеся -44,84 %, почкующиеся - 51,6 %. По толщине хитиновой оболочки ацефалоцисты можно разделить на тонкостенные (толщина стенки до 15 мкм) и толстостенные (толщина стенки до 100 мкм); соответственно 50,4 5 и 50,9 %. Живые ацефалоцисты в каждой пробе составляли от 1,10 % до 9,97 % всех выявленных.

В биопсийном образце ткани паразитарной опухоли («столбик» ткани длиной 7 мм и толщиной 0,5 мм), выявлено около 50 живых ацефалоцист диаметром 30-150 мкм, представленными преимущественно округлыми тонкостенными формами. Были найдены живые ацефалоцисты в зоне распада (некроза) в центральной части паразитарной опухоли и в толще соединительно-тканного матрикса паразитарного «узла», что показывает существование пролиферации у паразита не только в периферической области наружу, как это считалось ранее, но и внутрь паразитарного узла.

Таким образом, по результатам макро- и микроскопического паразитологического анализа нами впервые были выявлены новые особенности развития метацестод у человека: способность к экзогенному почкованию по типу альвеолярного у метацестоды E.granulosus, и возможность пролиферации ацефалоцист Е. multilocularis внутрь паразитарного узла. В филогенетическом аспекте экзогенное почкование E.granulosus подтверждает существование единого предка у E.granulosus и Е. multilocularis.

Предложенный нами интегративно-функциональный подход дает возможность анализировать функционирование элементов паразитарной системы Echinococcus spp., как результат взаимообусловленного проявления биологических особенностей каждой составляющей, что обеспечивает системный подход к изучению патогенеза болезни. При использовании настоящего подхода основой изучения становятся не морфологические особенности паразита и хозяина, а их взаимодействие или патогенез паразитоза.

Способность метацестод цистного эхинококкоза к экзогенному почкованию у человека является неизвестной ранее видовой особенностью E.granulosus. Механизмом активации данного феномена и формирование из «ножки» протосколексов дочерних и внучатых ацефалоцист, вероятно, является ослабление пролиферации лимфокинов и цитоки-нов Txi-типа иммунного ответа хозяина (человека).

Механизмом активации пролиферации ацефалоцист внутрь паразитарного узла в метацестоде альвеолярного эхинококка, возможно, является преимущественная гибель большинства ацефалоцист, вызванная или естественной гибелью паразита, или воздействием на метацестоду активных химиотерапевтических препаратов.

Интегративно-функциональный подход позволяет рассматривать особенности проявления особых биологических ресурсов паразита (экзогенное почкование, развитие ацефалоцист внутрь паразитарного узла), как основную причину, приводящую к рецидивам инвазии.

Паразитарная система Echinococcus spp. многокомпонентна, каждое звено (каждый элемент) которой находится, в сложных функциональных взаимосвязях с другими структурными элементами. Характер взаимодействия в пределах этой системы определяется видовыми и индивидуальными свойствами каждого из них.

Нами обоснована возможность применения интегративно-функционального подхода для анализа взаимоотношений в паразитарных системах, который позволяет рассматривать особенности проявления особых биологических ресурсов паразита, как основную причину выживания и увеличения популяции паразита, приводящую к рецидивам инвазии. Раскрытие указанных механизмов патогенеза заболевания открывает перспективы разработки методов диагностики и профилактики послеоперационных рецидивов эхинококковой болезни у человека.

Одним из возможных механизмов активации экзогенного почкования метацестоды цистного эхинококкоза может служить ослабление пролиферации лимфокинов и цитоки-нов у больного человека. Определение функциональной активности лимфокинов Txi-типа может помочь в расчете риска развития метацестоды цистного эхинококкоза по типу альвеолярного эхинококкоза и возможного метастазирования паразита Это, в свою очередь, определит необходимость назначения соответствующих иммуномодуляторов для профилактики рецидивов заболевания у человека.

ВТОРОЕ ПОЛОЖЕНИЕ Созданный универсальный спектр стандартизованных экспериментальных моделей эхинококкозов позволяет проводить изучение всех стадий развития паразита. Отработанные для этой цели методические приемы - диагностическая лапаротомия и интестинотомия, ультразвуковое и рентгенологическое исследование - обеспечивают выявление инвазии, определение размеров и степени зрелости метацестод. На модели кишечного альвеолярного эхинококкоза показана возможность трансплантации препатентной и стробилярной сними развития паразита.

Для создания возможности углубленного изучения паразитарной системы Echinococcus spp были усовершенствованы и оптимизированы известные лабораторные модели эхинококкозов и разработаны новые модели для поддержания отдельных стадий паразитирования эхинококков на лабораторных животных.

Для характеристики лабораторных штаммов E.granulosus, были применены следующие критерии: восприимчивость белых мышей к внутрибрюшинному заражению про-тосколексами E.granulosus и морфология крючьев протосколексов. Указанные критерии, признаны значимыми, для характеристики биоваров цистного эхинококкоза.

Восприимчивость лабораторных животных к парентеральному заражению инвазионным материалом от спонтанно инвазированных убойных сельскохозяйственных животных (овец, крупного рогатого скота) была достаточно высока и примерно одинакова (83,5% и 72,2% соответственно) и статистически значимо превышая таковую к инвазионному материалу от свиней (27,6%).

Результаты исследований показали, что биологические варианты эхинококка различались между собой по основным показателям инвазивности для белых мышей - восприимчивости к вторичному заражению и срокам формирования зрелых протосколексов в развившихся ларвоцистах (табл. 4).

Таблица 4

Восприимчивость белых мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами, выделенными из ларвоцист цистного эхинококка от разных хозяев

Доноры ларвоцист Белые мыши - реципиенты

Количественная характеристика крючьев протосколексов Процент заразившихся животных Максимальные показатели ларвоцист при экспериментальной инвазии

Общее число крючьев Общая длина больших крючьев Общая длина малых крючьев Диаметр ларво-цист, мм Масса лар-воцист на 1 животное, г

Овца 32,37 ±0,51 22,94 ±0,08 20,43 ±0,08 85,3 16,3 8,29

Свинья 32,80 ±0,45 27,37 ± 0,09 23,44 ±0,10 30,0 7,3 0,96

Крупный рогатый скот 32,20 ±0,42 26,75 ±0,06 22,42 ±0,08 72,2 28 14,14

Наибольшую инвазивность проявили биовары от овец. Результаты исследований показали, что число крючьев у протосколексов недостаточно варьировало в зависимости от вида промежуточного хозяина. Различия в средних показателях размеров малых и больших крючьев протосколексов E.granulosus, полученных от разных промежуточных хозяев, не были статистически значимыми. Таким образом, наши исследования показывают, что лабо-

раторные штаммы, полученные от биоваров E.granulosus, обладают способностью к вторичному заражению лабораторных животных. Можно говорить о разных диапазонах нормы реакции, в отношении данного свойства. Интегрально-функциональный подход позволяет объяснить эти различия: каждый биовар E.granulosus обладает свойствами, которые позволяют паразиту проявить адаптационные реакции в организме промежуточного хозяина, но биологический потенциал у биоваров (имеющих преобладающее развитие в определенных видах промежуточных хозяев) не одинаковы, что и получило подтверждения в наших опытах (рис.4).

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

число крючьев длина болльших крючьев длина малых крючьев число заразивши хся диаметр ларвоцист масса ларвоцист

□ овца 32,37 22,94 20,43 85,5 16,3 8,29

■ КРС 32,2 26,75 22,42 72,2 28 14,14

П свинья 32,8 27,37 23,44 30 7,3 0,96

Рис.4. Характеристика лабораторных штаммов E.granulosus от спонтанно инвазированных сельскохозяйственных животных

Нами впервые была показана возможность оперативного удаления подавляющего большинства ларвоцист E.granulosus (у экспериментально зараженных белых мышей с интенсивной инвазией) с целью сохранения жизни животного-донора. Одновременно была отработана методика трансплантации ларвоцист от доноров интактным лабораторным грызунам-реципиентам (белые мыши, хлопковые и белые крысы).

Выявленная нами возможность пассирования ларвального E.granulosus на лабораторных грызунах (белые мыши и крысы) методом оперативной трансплантации ларвоцист с сохранением жизни доноров обеспечивает возможность поддержания лабораторных

штаммов паразита в лабораторных условиях до 2-х лет (срок наблюдения) для экспериментальных исследований (рис. 5).

ECHINOCOCCUS GRANULOSUS

БЕЛАЯ МЫШЬ.

заражение 500 - 2000 протосколексами

БЕЛАЯ МЫШЬ -заражение 20 — 30 ацефалоцистами (неоперативным путем)

+ БЕЛАЯ КРЫСА заражение 20 - 30 ларвоцистами (оперативным путем)

БЕЛАЯ МЫШЬ, ХЛОПКОВАЯ И БЕЛАЯ КРЫСЫ

Трансплантация удаленных ларвоцист

Оперативное удаление большинства метацестод

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЛАПАРОТОМИЯ Выявление наличия инвазии, размеры ларвоцист и их, степень зрелости ларвоцист

Рис. 5. Схема экспериментального моделирования Echinococcus granulosus

Фактически, метод диагностической лапаротомии позволяет стабильно поддерживать культуру лабораторных штаммов E.granulosus, обладающих известными свойствами, и пассировать их необходимое число раз для изучения биологических свойств и использовать предложенный нами метод в скрининге противоцестодных препаратов.

При моделировании альвеолярного эхинококкоза нами были взяты три лабораторных штамма E.multilocularis, полученных от разных биологических вариантов из географически удаленных регионов (табл.1). Для экспериментальной модели альвеолярного эхинококкоза нами использован новый биологический вариант E.multilocularis, полученный от оперированного больного и названый нами «восточно-европейский» (21). На основе данного биовара был создан и охарактеризован новый лабораторный штамм этого паразита.

«Восточно-европейский» лабораторный штамм был получен нами при использовании в качестве донорского источника - очищенных свободных микроскопических лар-воциет из метацестоды от оперированного больного (жителя Тульской области). При па-разитологическом анализе послеоперационного материала было установлено непрочное соединение ацефалоцист с соединительно-тканной оболочкой метацестоды. Эта особенность позволила выделить чистые ацефалоцисты и применить выделенный материал для имплантации в брюшную полость лабораторным животным (аутбредные и хлопковые крысы). С 2000 года методами имплантации и лапаротомии было выполнено 8 пассажей

для характеристики данного лабораторного штамма, а также использования его в скри-нинговых исследованиях противоцестодных препаратов.

Данный штамм обладает высокой продуктивностью протосколексов от 836330 до 876368 на одно животное. Восприимчивость белых крыс к заражению протосколексами «восточно-европейского» изолята E.multilocularis составила 100 %. Скорость роста мета-цестоды «восточно-европейского» биовара у хлопковых крыс составила - 10-14 мес, у белых крыс - 8-11 мес. Масса конгломерата ларвоцист составила от 80 г до 120 г. Биологические и морфологические особенности данного штамма позволяют рассматривать его как один из самых продуктивных в отношении наработки протосколексов для нужд биотехнологии.

При моделировании альвеолярного эхинококкоза нами впервые применен метод парентерального вторичного заражения конгломератами ацефалоцист (рис.6).

ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS

ХЛОПКОВЫЕ КРЫСЫ-первичное заражение яйцами в желудок

ХЛОПКОВЫЕ КРЫСЫ_»ХЛОПКОВЫЕ КРЫСЫ 4_

инъекционное teSOO -1000 мелкими »алоцистами

вторичное инъекционное заражение ацефалоцистами

вторич! заражен аце )i

Подкожное заражение конгломератам ацефалоцист

ХЛОПКОВЫЕ КРЫСЫ (СОСУНЮП

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЛАПАРОГОМИЯ ■*-

Рис. 6. Схема экспериментального моделирования Echinococcus multilocularis

При внутрибрюшинном введении конгломератов ацефалоцист все животные погибли; при подкожном - живы (табл.5). Рост метацестоды медленный за счет иммунной реакции хозяин против трансплантата, т.к. пересадке подлежат не только ацефалоцисты, но и соединительно-тканная оболочка донора.

В условиях дефицита животных и для поддержания лабораторного штамма можно поводить подкожное заражение двумя типами E.granulosus и Е. multilocularis - это постоянно действующая модель на протяжении жизни лабораторного животного (белая крыса).

Примененные методы диагностической лапаротомии и диагностической интести-нотомии позволяют выявить наличие инвазии, размеры ларвоцист и их конгломератов,

степень зрелости паразитов при ларвальных цистном и альвеолярном эхинококкозах. Эта методика обеспечивает выживаемость 100% животных и их сохранение для дальнейших экспериментов на протяжении жизни лабораторного животного.

Таблица 5

Результаты заражения лабораторных животных конгломератами ацефалоцист Е multilocularis.

Животные-доноры Число животных -доноров Число животных-реципиентов Введение конгломератов ацефалоцист Число животных, выживших после заражения

подкожное внутри-брюшинное Абс. %

хлопковые крысы 3 8 + 8 100

3 8 + 8 100

5 10 + 1 10

4 10 + - 0

белые крысы 4 9 + 9 100

3 9 + 9 100

4 10 + - 0

5 8 + - 0

Разработанная нами удобная и сравнительно безопасная оригинальная лабораторная модель стробилярной формы альвеолярного эхинококкоза у золотистых хомяков позволяет изучать функционирование этой стадии паразита в эксперименте и одновременно использовать эту модель для тестирования потенциальных паразитоцидных антигельмин-тиков. С этой целью мы изучали приживаемость в кишечнике введенных в желудок золотистых хомяков протосколексов альвеококка

Характерной особенностью ранней стробилярной стадии являлось формирование экскреторных каналов, начало сегментации тела паразита и выраженная двигательная активность хоботка, присосок и последней проглоттиды При изучении стробилярной стадии альвеолярного эхинококка на поздних сроках развития оценка числа паразитов была более простой, так как стробилы Е шиШ1оси1аш значительно выступали над поверхностью слизистой оболочки тонкого кишечника (на 2-3 мм) и хорошо видны невооружен-

ным глазом. В терминальном членике при этом четко выявлялась матка в виде белого овального образования, заполненная зрелыми яйцами. Микроскопическое исследование позволило определить число зрелых (покрытых эмбриофорой) яиц у каждого паразита.

На ранних стадиях развития стробилярные формы локализовались во всех отделах тонкого кишечника, включая двенадцатиперстную кишку. Спустя 2 недели место их локализация смещалась в нижнюю половину, а через 3 недели - в нижнюю треть тонкого кишечника. При гиперинвазии стробилы эхинококка распределялись равномерно по ходу всего тонкого кишечника, включая двенадцатиперстную кишку. Это связано с тем, что при развитии паразиты продвигались по кишечнику вниз, к анальному отверстию. Следует также отметить, что развитие стробилярных форм E.multilocularis было несинхронным.

Инвазивность яиц каждого биовара E.multilocularis была подтверждена биопробой на 6-11 молодых хлопковых крысах обоего пола массой тела 50-70 г, подвергнутых первичному заражению (каждому животному вводили в желудок по 20-30 зрелых стробил альвеококка), в результате которого в печени у животных развились ларвоцисты E.multilocularis. У всех хлопковых крыс, вскрытых через 23-42 дня после заражения, большая часть паренхимы печени была замещена ларвоцистами альвеококка, масса которых достигала 90% от массы тела хозяина; к концу 6-й недели развития в ларвоцистах формировались зрелые протосколексы.

При изучении стробилярной стадии альвеолярного эхинококка на поздних сроках развития оценка числа паразитов была более простой, так как стробилы Е multilocularis значительно выступали над поверхностью слизистой оболочки тонкого кишечника (на 2-3 мм) и хорошо визуализировались невооруженным глазом.

С целью оптимизации экспериментальной модели кишечного альвеолярного эхи-нококкоза было предпринято исследование по выяснению возможности пассирования просветной формы паразита на лабораторных грызунах.

Результаты исследования показали, что все хомяки, получившие внугрижелудоч-ное заражение стробилами E.multilocularis, оказались зараженными стробилярными формами альвеококка. Подавляющее большинство стробил было зрелыми (до 90%). Паразиты проявляли выраженную двигательную активность, их сколекс был прочно фиксирован между ворсинками тонкой кишки. Длина цестод достигала 1,5 мм, а число проглоттид не превышало трех. Число паразитов у хомяков варьировало от 6 до 2018 экз. на 1 животное. Число зрелых яиц в терминальной проглоттиде колебалось от 16 до 206 экземпляров.

Все исследования проводились при строгом соблюдении противоэпидемического режима работы в лаборатории.

Инвазивность яиц оценивали с помощью биопробы на молодых хлопковых крысах массой 50-60 г путем введения в желудок животным по 10-15 стробил E.multilocularis, содержащих зрелые яйца.

Результаты биологической пробы были положительными. Все 5 хлопковых крыс, использованных в биопробе, заразились метацестодной стадией альвеококка. Печень крыс была практически полностью замещена ларвоцистами альвеококка, которые содержали юные и зрелые протосколексы, их масса варьировала от 40 до 110 г на крысу.

В ходе исследований мы установили возможность пересадки стробилярного эхинококка из кишечника экспериментально зараженных иммуносупрессированных золотистых хомяков-доноров в кишечник как интактных, так и иммуносупрессированных лабораторных животных-реципиентов путем введения взрослых паразитов в желудок последним. Нами доказана возможность использования в качестве реципиентов не только иммуносупрессированных, но и интактных белых мышей-сосунков, белых крыс-отьемышей и молодых золотистых хомяков. 100% интактных и иммуносупрессированных белых мышей-сосунков (12 и 6 гол. соответственно) заразились 15-ти дневными стробилами E.multilocularis. Число паразитов в тонком кишечнике животных изменялось в зависимости от срока, прошедшего после заражения. Срок выживания единичных паразитов в тонком кишечнике не превышал 7 дней. При трансплантации 20-ти дневных стробил E.multilocularis интактным и иммуносупрессированным белым крысам-отьемышам заразились 41,7% и 75% животных соответственно.

Максимальная продолжительность выживания единичных паразитов составляла 4 и 6 дней. Все интактные и иммуносупрессированные молодые золотистые хомяки заражались 15-ти дневными стробилами альвеококка.

В результате проведенного исследования нами был описан новый для науки факт -способность стробилярных форм альвеококка выживать в верхнем отделе пищеварительного тракта здоровых грызунов-реципиентов и развиваться в тонкой кишке до стадии формирования инвазионных яиц

Установленный в эксперименте феномен успешной трансплантации стробилярной формы альвеококка был применен нами для пассирования препатентной стадии развития паразита на золотистых хомяках и использован в скрининговых исследованиях по опреде-

лению эффективности и перспективности новых химиотерапевтических препаратов для лечения эхинококкоза у окончательных хозяев (рис.7). Возможность трансплантации гельминтов на препатентной и стробилярной стадиях развития была впервые описана нами (27).

СТРОБИЛЯРНАЯ СТАДИЯ ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS

Рис. 7. Схема экспериментального моделирования стробилярной стадии Echinococcus multilocularis

Можно полагать, что выявленная нами способность к успешному «переселению» стробилярной стадии свойственна не только цестодам, но и гельминтам других классов. Возможно, реализация выявленного в эксперименте феномена «переселения» цестод существует и в природных условиях.

В результате проведенного исследования нами впервые доказана, способность стробилярных форм альвеококка выживать в верхнем отделе пищеварительного тракта здоровых грызунов-реципиентов (среде повышенной агрессивности для просветных форм паразитов, не адаптированных к ней в процессе онтогенеза), приживаться в тонкой кишке реципиентов и развиваться в ней до стадии формирования инвазионных яиц.

Возможность трансплантации гельминтов на препатентной и стробилярной стадиях развития не была ранее описана в научной литературе.

Созданный нами спектр целевых лабораторных моделей разных стадий развития эхинококкозов определяет возможность углубленного изучения элементов паразитарной системы Echinococcus spp. и имеет большое медицинское и ветеринарное значение.

Разработанная нами удобная и безопасная для исследователя лабораторная модель стробилярной формы альвеолярного эхинококкоза у золотистых хомяков позволяет изучать функционирование этой стадии паразита в эксперименте и одновременно использовать эту модель для тестирования потенциальных паразитоцидных антигельминтиков.

ТРЕТЬЕ ПОЛОЖЕНИЕ. На основе стандартизованных экспериментальных моделей отработана оригинальная методика ускоренного скрининга антигельминтиков, позволившая выявить ряд перспективных для дальнейшего изучения противоцес-тодных препаратов. Поступательное увеличение дозы вводимых препаратов, испытанное на лабораторных моделях эхинококкозов, предложено для повышения эффективности терапии этих заболеваний.

На лабораторных моделях эхинококкозов были изучены условия, при которых в качестве факторов, активирующих использование элементами паразитарной системы Echinococcus spp. дополнительных незадействованных (в оптимальных для паразита условиях) биологических потенциалов (ресурсов), были применены препараты группы кар-баматбензимидазолов.

В наших исследованиях на моделях ларвального и кишечного альвеококкоза были испытаны созданные с нашим участием: полимерная форма альбендазола (ПФА), и флу-замид. В качестве препарата контроля была использована суспензия альбендазола (производство фирмы INVESA, Испания).

Все препараты вводили лабораторным животным в постепенно повышаемых суточных дозах действующего вещества, но не более максимальной нелетальной дозы. Каждое животное, имеющее индивидуальную метку, взвешивали 1 раз в день в течение 1-2 нед.

Показателем специфической активности соединений являлось выраженное и стабильное снижение массы тела животного по сравнению с исходным показателем в течение всего срока наблюдения. Это являлось результатом уменьшения массы паразита. Дополнительно отмечали наличие и выраженность деструктивных изменений элементов в ме-тацестоде альвеококка при вскрытии животных в конце эксперимента

Показателями гибели протосколексов служили исчезновение известковых телец, деформация или отпадение короны крючьев, нарушение целостности тегумента, сглаженность структуры, зернистость и потемнение паренхимы тела протосколексов.

Признаками гибели ацефалоцист являлись потемнение и зернистость паренхимно-го слоя, его отслоение от кугикулярной оболочки, нарушение её целостности, коллапс ацефалоцист.

После окончания применения противоцестодных соединений жизнеспособность ларвальной стадии паразита оценивали путем микроскопического исследования нативных препаратов метацестоды ларвального эхинококкоза у опытных и контрольных животных. Изучали наличие и выраженность деструктивных изменений зародышевых элементов, руководствуясь вышеприведенными критериями гибели протосколексов и ацефалоцист. Для объективной оценки действия активных соединений в динамике, животных, в течение опыта, подвергали ультразвуковому исследованию (УЗИ) и диагностической лапарото-мии.

Если суточная доза исследуемых химиотерапевтических соединений оставалась постоянной, то у метацестоды наблюдалась продолжительная эндо- и экзогенная пролиферация герминативных клеток. В данном случае можно говорить о возможности развития устойчивости метацестоды к действию высокоактивных соединений.

Постепенное увеличение суточной дозы карбаматбензимидазолов на протяжении продолжительных курсов применения, приводит к адаптации лабораторных животных разных видов к токсическим дозам препаратов и ускоряет подавление пролиферации герминативных клеток паразита в опытной группе лабораторных животных.

Для изучения были взяты модели ларвального альвеолярного эхинококкоза хлопковых крыс и белых мышей, а также ларвального цистного эхинококкоза белых крыс на поздней стадии развития. На этой стадии паразит проявляет наибольшую устойчивость к воздействию активных соединений, которая чаще всего характеризуется бурным ростом паразитарных метацестод и быстрой гибелью животных от инвазии.

Полимерная форма альбендазола представляет собой металлокоплекс альбендазола и меди, который был дополнительно включен в микрокапсулы из ацетилцеллюлозы (12) Вводили данное соединение лабораторным животным в виде суспензии в растительном масле. Введение в состав антигельминтного средства металлокомплекса альбендазола позволило повысить его терапевтическую активность, а включение данного комплекса в микрокапсулы из ацетилцеллюлозы обеспечивало пролонгированный целевой эффект, необходимый для радикальной химиотерапии ларвальных эхинококкозов

Воздействие ПФА вызывало коллапс ларвоцист альвеококка, приводило к резкому уменьшению массы метацестоды и появлению разной степени выраженности деструктивных изменений у зародышевых элементов паразита (табл 6).

Таблица 6.

Эффективность полимерной формы альбендазола (ПФА) и альбендазола суспензии (АС) при ларвальном альвеококкозе хлопковых крыс на поздней стадии инвазии

Применяемые препа раты Число животных Продолжительность применения препарата, дни Суммарная доза ДВ, г/кг Характеристика ларвоцист ИХТА, %

Средняя масса ЛА на 1 животное, г Деструкция протос-колексов* Деструкция ацефа-лоцист

ПФА 8 10 2,6 8,87 ± - 91,7

8 21 4,3 3,69 + ± 98,4

7 42 8,0 2,19 + 100,3

О 7 10 2,6 59,87 - - 25,7

6 21 4,3 38,16 ± - 53,8

6 42 8,0 24,06 + - 72,0

контроль 9 - - 79,78 - - -

* - деструкция всех (+) или подавляющего большинства (±) зародышевых элементов мета-цестоды. Большинство или все зародышевые элемента метацестоды живые (-).

Таким образом, выявлена ведущая роль ацефалоцист в выживании и увеличении массы метацестоды паразита и их ответственность за рецидивы заболевания у промежуточного хозяина после консервативного и оперативного лечения.

При альвеококкозе белых мышей с более высокой исходной интенсивностью инвазии, чем у хлопковых крыс, ПФА проявила большую активность при меньшей продолжительности введения препарата. Показатели УЗИ и результаты ДЛ свидетельствовали о том, что деструкция подавляющего большинства ларвоцист у экспериментальных животных наступала уже к концу первой недели применения ПФА. У мышей экспериментальной группы, получивших ПФА в суммарной дозе 3,8 г/кг масса ларвоцист в 2,8-3 раза меньше, чем у мышей контрольной группы и примерно в 2 раза меньше исходной (табл.7).

При микроскопии содержимого этих образований, представленных казеозным детритом, выявлено множество деформированных или разрушенных протосколексов и микроскопических ацефалоцист с деструктивными изменениями.

Данные микроскопии свидетельствовали о том, что гибель ларвоцист у экспериментальной группы животных наступила раньше срока вскрытия животных. Полученные результаты убедительно свидетельствуют в пользу целесообразности использованной тактики постепенного повышения суточной дозы активных соединений группы карбаматбен-зимидазолов.

Данные, полученные на лабораторных моделях, получили подтверждение в клинических наблюдениях. Выявленная на модели ларвального альвеолярного эхинококкоза повышенная чувствительность протосколексов, в сравнении с ацефалоцистами, к губительному действию высокоактивных препаратов группы карбаматбензимидазолов свидетельствует в пользу концепции о ведущей роли ацефалоцист в выживании и их ответственности за рецидивы заболевания у человека после консервативного и оперативного лечения. Таким больным показаны длительные курсы химиотерапии карбаматбензимидазолов в высоких дозах, что было отмечено на примере больной Я-о Е. А. (47).

Применяемые активные противоцестодные соединения первоначально воздействовали сравнительно быстро и равномерно, вызывали деструкцию протосколексов и, в последующем, замедленное и неравномерное отмирание ацефалоцист. При воздействии ПФА на модели гидатидозного эхинококкоза белых крыс наблюдалась гибель и последующий коллапс метацестод у животных экспериментальной группы.

Результаты исследования ПФА при экспериментальном альвеолярном эхинококко-зе показали высокую терапевтическую активность данного препарата, проявившего способность вызывать деструкцию всех элементов метацестоды. Подобной активностью не обладает ни один из известных специфических препаратов в условиях орального применения. При вскрытии у леченых животных конгломераты ларвоцист альвеококка были представлены аморфными бесструктурными образованиями желтого цвета При микроскопии содержимого этих образований, представленных казеозным детритом, выявлено множество деформированных или разрушенных протосколексов и микроскопических ацефалоцист с далеко зашедшими деструктивными изменениями. Данные микроскопии свидетельствуют о том, что гибель метацестоды альвеолярного эхинококка у леченных животных наступила гораздо раньше срока вскрытия животных. Надежность терапевтического эффекта подтверждена отдаленным сроком вскрытия животных после окончания лечения, показателями УЗИ, результатами диагностической лапаротомии и данными рентгеноскопического анализа.

Таблица 7.

Эффективность действия полимерной формы альбендазола (ПФА) при ларвальном альве-ококкозе белых мышей на поздней стадии инвазии.

Группа животных Число животных Число курсов применения Продолжительность применения Интервал между курсами, дни Суммарная доза ДВ, г/кг Показатели активности препарата

Средняя масса ларвоцист на 1 животное, г ИХТА, % деструкция про-тоско-лексов* деструкция аце-фалоцист*

животные, леченные ПФА 6 1 5 - 0,96 8,16 ±1,67 87,8 ± -

б 1 10 - 1,92 7,34 ± 1,23 107,4 + ±

7 1 20 2 3,84 6,53 ±0,94 126,8 + ±

8 2 5 5 1,92 7,24 ±1,19 109,8 + ±

9 2 10 10 3,84 3,87 ±0,72 190,4 + +

8 2 10 15 3,84 4,16 ±0,89 183,5 + +

контрольные 12 11,83 ±2,35 - - -

• (+) - деструкция всех или (±) - подавляющего большинства зародышевых элементов в ларвоцистах; (-) - большинство или все зародышевые элементы в ларвоцистах живые.

Полученные результаты убедительно свидетельствуют в пользу предпринятой нами тактики лечения, подтверждая целесообразность постепенного повышения суточной дозы высокоактивного препарата на протяжении всего курса лечения с целью профилак-

тики развития у паразита лекарственной устойчивости и адаптации хозяина к повышенным дозам препарата, обеспечивающим радикальный терапевтический эффект. А также о большей эффективности ПФА по сравнению с альбендазол-суспензией и повышенной биодоступности данного препарата в сравнении с известными специфическими препаратами в условиях орального применения.

Терапевтическую активность флузамида оценивали на экспериментальной модели кишечного эхинококкоза у золотистых хомяков. В опытах исследовали флузамид-субстанцию с содержанием действующего вещества (ДВ) 99,3% и дисперсностью частиц 10-12 мкм. Препарат применяли в виде суспензии в 1%-ном крахмальном геле.

При выраженной гиперинвазии золотистых хомяков юными формами развития паразита в возрасте 7-ми дней флузамид проявил высокую терапевтическую активность (ИЭ = 98,3% и 99,8 % соответственно) и в дозах 0,15 и 0,29 г/кг показал четкий доза-зависимый эффект. Однако излечения всех подопытных животных не наблюдалось. У хомяков контрольной группы интенсивность инвазии варьировала в пределах 21800 - 53700 паразитов на 1 животное (табл.8).

Таблица 8

Эффективность флузамида при экспериментальной инвазии золотистых хомяков юной просветной формой E.multilocularis на фоне медикаментозной иммуносупрессии животных

Групп животных Доза препарата, г/кг Число животных Среднее число паразитов в тонкой кишке при вскрытии животных ИЭ, %

средняя вариация

Леченные флуз амидом 0,15 0,29 0,14-0,17 0,27-0,33 5 4 582+182 53 + 28 98,3 99,8

Контрольные - - 7 35371 ±4519 -

В результате исследований выявлена высокая терапевтическая активность флузамида при экспериментальном кишечном альвеококкозе. При этом юные E.multilocularis оказались гораздо более резистентными к препарату (ИЭ=98,3-99,8%), чем половозрелые цестоды (ИЭ=100%). Полученные результаты соответствуют данным других авторов в отношении возрастной чувствительности к антигельминтикам просветных форм альвеокок-ка, гидатидозного эхинококка и карликового цепня. Полученные нами данные о повы-

шенной резистентности юных стробилярных форм E.multilocularis к флузамиду, позволили обосновать целесообразность использования безопасной и удобной модели кишечного альвеококкоза на ранней стадии инвазии для скрининга противоцестодных препаратов. Следует отметить, что специфическая активность флузамида была испытана без предварительной токсикологической оценки препарата. Ориентировочные данные о переносимости этого высокоактивного реагента были получены нами в процессе первичного скрининга. Эти данные являются исходными для дальнейшей расширенной оценки биологической активности флузамида.

Традиционно применяемая методика фармакологических исследований антигель-минтиков более трудоемка и сопряжена с использованием патогенного для человека материала моделей кишечных цестодозов. Недостатком таких исследований является то, что они выполняются на здоровых животных. Однако известно, что чувствительность организма инвазированных гельминтами животных к токсическому действию испытуемых агентов выше таковой здоровых животных и прямо зависит от интенсивности экспериментальной инвазии.

В наших исследованиях флузамид испытан не только при высокой интенсивности инвазии, но и на фоне выраженной медикаментозной иммуносупрессии, что существенно повышает информационную ценность полученных данных о переносимости данного препарата.

Не меньшее значение имеет и большая рентабельность используемого нами метода тестирования специфической активности препарата, в сравнении с традиционным методом скрининга, сопряженного с высоко затратной и бесполезной предварительной токсикологической оценкой неэффективных препаратов.

Проведенные исследования позволили нам предложить новый способ скрининга противоцестодных препаратов. Для проведения данных исследований нами были использованы препараты, синтезированные в ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского, СПХФА и ВИГИС: Г-1741; Г-1742; Г-1743; Г-1744; Г-1745; микрокапсулированный альбендазол; микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта; а также препарат растительного происхождения - кукурбин, разработанный НПО «Европа-Биофарм» г. Волгограда.

Скрининг данных противоцестодных препаратов осуществляли на модели кишечного альвеолярного эхинококкоза. Препараты вводили инвазированным животньш в желудок однократно преимущественно в виде суспензии в растительном масле. В качестве препарата контроля использовали готовую суспензию альбендазола. У всех животных контрольной группы, вскрытых через 7 дней после трансплантации им гельминтов, выяв-

лена инвазия E.multiloculaгis. При этом интенсивная инвазия (более 200 цестод) отмечена 66,6 % животных. Для дальнейшего изучения перспективными считаем следующие препараты: микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта, Г-1741, Г-1742 и ку-курбин (ИЭ=94,2-100%) (рис.8).

Рис. 8. Интенс - эффективность первичного скрининга противоцестодных препаратов. ОСА - официнальная суспензия альбендазола; МА - микрокапсулированный альбендазол; МАиК - микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта.

Ориентировочные данные о переносимости исследованных препаратов были получены нами в ходе первичного скрининга. Эти данные являются исходными для дальнейшей расширенной оценки их биологической активности и требуют дальнейшего уточнения, так как в экспериментальных группах было по 2-3 животных.

В наших опытах препараты испытаны не только при высокой интенсивности инвазии, но и на фоне выраженной медикаментозной супрессии, что существенно повышает информативную ценность полученных сведений об их переносимости.

Проведенные нами исследования по изучению воздействия активных противоцес-тодных препаратов на лабораторных моделях позволили выявить, что гибель популяции протосколексов не вызьшает гибель паразита. За рецидивы заболевания и последующий рост метацестоды ответственна популяция ацефалоцист, что подтверждает целесообразность применения губительных для ацефалоцист препаратов системного и контактного действия при консервативном и оперативном лечении эхинококкозов.

ВЫВОДЫ:

1. Интегративно-функциональный подход обеспечивает возможность комплексного изучения патогенеза эхинококкозов человека и механизмов возникновения рецидивов заболевания. В результате исследования с позиций интегративно-функционального подхода морфо-биологических особенностей развития паразита в организме больного доказано, что деструкция протосколексов не приводит к гибели метацестоды Echinococcus spp. Ведущая роль в выживании, увеличении популяции паразита и возникновении рецидивов эхинококкоза у человека принадлежит микроскопическим дочерним и внучатым цистам и ацефалоцистам паразита.

2. Разработанные стандартные условия воспроизведения экспериментальных лабораторных моделей позволяют проводить анализ различных биологических вариантов Echinococcus spp. по совокупности параметров развития паразитов на метацестодной и стробилярной стадиях и использовать эти модели для скрининга противоцестодных препаратов.

3. Определены параметры использования паразитарного материала от оперированных больных эхинококкозом людей для создания лабораторных штаммов. Полученный таким способом «восточно-европейский» штамм Echinococcus multilocularis, обладает высокой продуктивностью протосколексов (от 836330 до 876368 на одно животное). Восприимчивость лабораторных животных к заражению протосколексами данного штамма составила 100 %, что позволяет рассматривать его как один из самых продуктивных в отношении наработки протосколексов для нужд биотехнологии.

4. Разработанные методы оперативной диагностики экспериментальных эхинококкозов (диагностическая лапаротомия и интестинотомия) у грызунов обеспечивают выявление инвазии, исследование изменения морфологии паразита под влиянием противоцес-тодных препаратов и получение донорского паразитарного материала с сохранением жизни подопытных животных.

5. Доказана возможность успешного пассирования стробил кишечных гельминтов на лабораторных грызунах, что позволило разработать безопасную для экспериментатора методику моделирования кишечного альвеококкоза. В результате эксперимента выявлена высокая приживаемость юных препатентных форм стробилярного эхинококка у молодых или иммуносупрессированных взрослых лабораторных животных.

6. На экспериментальных моделях выявлена высокая противоцестодная активность новых лекарственных форм альбендазола - микрокапсулированного комплекса альбенда-зола с металлами (медью и кобальтом), интенс-эффективность которых, в суммарной дозе ДВ - 2,19 г/кг и 0,19 г/кг соответственно, составила 100%.

7. Предложенная схема последовательного повышения суточной дозы высокоактивных противоцестодных препаратов позволяет добиваться полной гибели зародышевых элементов метацестоды в эксперименте, что открывает перспективы нового подхода к химиотерапии эхинококковой болезни человека.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Интегративно-функциональный подход может быть использован в качестве эффективного инструмента для изучения патогенеза и разработки новых методов диагностики, уточняющих течение и исход болезни, лечения и профилактики послеоперационных рецидивов эхинококкоза у человека.

Одним из возможных механизмов активации особых биологических ресурсов паразита служат ослабление пролиферации лимфокинов и цитокинов у больного человека. Определение функциональной активности лимфокинов Txj-типа может помочь в расчете риска возможного метастазирования паразита.

2. Представленные экспериментальные модели ларвальных и стробилярных эхино-коккозов позволяют проводить сравнительный анализ биологических вариантов Echinococcus spp. от спонтанно зараженных животных, а также могут быть использованы для биотехнологических исследований по скринингу и оценке терапевтической активности препаратов, эффективных при данных паразитарных болезнях.

Скрининг и оценку терапевтической активности препаратов, эффективных при лар-вальных эхинококкозах целесообразно осуществлять на экспериментальной модели ларвального альвеококкоза, применение которой, в отличие от модели цистного эхино-коккоза, обеспечивает большую надежность полученных результатов и меньшие затраты на эксперименты. Наиболее перспективным является заражение лабораторных животных «восточно-европейским» лабораторным штаммом, который обладает высокими продуктивными в отношении протосколексов свойствами. В опытах по экспериментальной химиотерапии ларвального альвеококкоза в оценке эффективности испытуемых препаратов

важную роль играет микроскопическое исследование нативных препаратов всех паразитарных ларвоцист, выявленных при вскрытии каждого леченого животного, на присутствие единичных выживших ацефалоцист альвеококка. Наиболее объективным и надежным критерием радикальной экспериментальной химиотерапии ларвальных эхинококкозов является отсутствие рецидива инвазии у леченных животных в отдаленные сроки после окончания лечения. Для подтверждения эффективности и радикальности химиотерапии удобны УЗИ и диагностическая лапаротомия с сохранением жизни животным, обеспечивающие объективную оценку противопаразитарной активности испытуемых препаратов в динамике.

3. Быстрая предварительная оценка эффективности потенциальных противоэхино-кокковых препаратов и их лекарственных форм осуществляется при использовании экспериментальной модели ларвального альвеококкоза хлопковых крыс и белых мышей на терминальной стадии инвазии и на малом числе животных с помощью метода, основанного на феномене раннего обратимого коллапса паразитарных ларвоцист у инвазированных животных под влиянием высокоактивных ларвицидных противоэхинококковых препаратов.

5. Новый подход к методике применения химиотерапевтических препаратов: поступательное повышение суточной дозы лекарства, позволяет обеспечить эффективность лечения без проявления побочного действия. Постепенное увеличение суточной дозы на протяжении продолжительных курсов применения, приводит к адаптации лабораторных животных разных видов к токсическим дозам препаратов. Такой подход позволяет добиться полной деструкции всех элементов метацестоды и обеспечивает радикальный терапевтический эффект.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Черникова Е. А. Сравнительный анализ био- и иммунохимических характеристик состава эхинококковой жидкости цист от промежуточных хозяев из двух географически удаленных регионов. // Международная научная конференция: «Актуальные проблемы медицинской и ветеринарной паразитологии», Витебск,- 1993.- С. 24-26.

2. Черникова Е. А., Никитин С. А. Характеристика эколого - географических субпопуляций однокамерного эхинококка. //Материалы 3-й научно-практической конференция «Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных», Волгоград. - 1995. - С. 12.

3. Ярулин Г. Р., Адельшин Ф. К., Черникова Е. А., Адельшина Г. А., Никитин С. А. Иммунодиагностика эхинококкозов: проблемы, поиск, перспективы. // Вестник Волгоградской медицинской академии. Волгоград. - 1995. - №1. - т.51. - вып.1. - С.168 -169.

4. Черникова Е. А. Микробиоценоз кишечника человека при поражении гельминтозами и возможная его коррекция. // Сб.: «Экспериментальные и клинические аспекты патологии органов пищеварения». Волгоград. - 1996 г.- С. 32 - 34.

5. Черникова Е. А. Особенности эколого-географических субпопуляций Echinococcus granulosus. // Материалы 5-ой всероссийской научной конференции Актуальные вопросы медицинской паразитологии.- Санкт-Петербург. - 1998.- С. 140 -141.

6. Черникова Е. А. Антигельминтная эффективность препарата кукурбин при лечении гельминтозов человека и животных. // Материалы XXVI межвузовской научно-практической конференции по проблемам биологии и медицинской паразитологии. -Санкт-Петербург. - 1999.-с.24.

7. Коваленко Ф. П., Новик Т.С., Черникова Е. А., Михалев В. Ю. Эффективность препарата МКБ - 1 при экспериментальных ларвальных эхинококкозах. // Материалы международной научно - практической конференции «Проблемы эхинококкоза». - Махачкала. - 2000.-С.70-71.

8. Коваленко Ф. П., Дадвани С. А., Мусаев Г. X., Черникова Е. А. Экзогенное почкование ларвоцист гидатидозного эхинококка у человека. // Материалы международной научно - практической конференции «Проблемы эхинококкоза». - Махачкала. - 2000. - С.68 -69.

9. Коваленко Ф. П., Новик Т. С, Черникова Е. А., Михалёв В. Ю., Лебедева М. Н., Дад-вани С. А., Мусаев Г. X., Рябова В. А., Шатверян Г. А., Журавлёва Н. А., Бессонов А. С, Буланова Т. Е. Изучение терапевтической активности препарата МКБ - 1 при экспериментальных ларвальных альвеолярном и гидатидозном эхинококкозах. // Труды научно - практической конференции: «Тканевые гельминтозы: диагностика, патогенез, клиника, лечение и эпидемиология». - Витебск. - 2000. - С. 192 - 193.

10. Kovalenko F. P., Musaev G.X., Chernikova E. A., Gorovaya N. S. Exogenic budding of larval Echinococcus granulosus (case report). // XXth international congress of hydatidology, Kusadasi-Turkey. - 2001. - v. 34. - P.283.

11. Kovalenko F.P., Novik T. C, Chernikova E. A., Bessonov A. S., Lebedeva V. N., Musaev G.X., Shatveryan G. A., Starkova T. V., Bulanova Т. Е., Rusakov S. V. Efficacy of polymeric albendazole at experimental hydatidoses. XXth international congress of hydatidology. // XXth international congress of hydatidology, Kusadasi-Turkey. - 2001. - v. 34. - P.309.

12. Антигельминтное средство. Патент РФ № 2195280. Коваленко Ф. П., Новик Т. С, Бессонов А.С., Черникова Е. А., Михалев В. Ю., Лебедева М. Н., Шатверян Г. А., Му-саев Г. X., Журавлева Н. А., Буланова Т. Е. - 2002.

13. Коваленко Ф. П., Черникова Е. А., Новик Т. С, Михалев В. Ю., Бессонов А. С, Журавлева Н. А., Лебедева М. Н., Шатверян Г. А., Мусаев Г. X., Старкова Т. В., Буланова Т. Е., Русаков С. В. Эффективность полимерной формы альбендазола при экспериментальных ларвальных альвеолярном и гидатидозном эхинококкозах. // Сборник научных работ «Актуальные проблемы медицинской биологии». - Томск. - 2002. - С.76 - 79.

14. Коваленко Ф. П., Черникова Е. А., Бессонов А.С., Архипов И. А., Русаков С. В. Оценка эффективности медамина и полимерной формы мебендазола при экспериментальном описторхозе с помощью альтернативного метода первичного скрининга ант-гельминтных препаратов. // Материалы научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы)». Москва.- 2002.- Выпуск 3. -С. 163 -164.

15. Коваленко Ф. П., Перчун Н. И., Черникова Е. А., Бессонов А.С. Влияние искусственной обтурации общего желчного протока у котят на восприимчивость животных к оральному заражению протосколексами Echinococcus multilocularis. // The 3-rd International Iran and Conference Agriculture and Natural Resources. - Moscow. - 2002, - p. 136.

16. Перчун Н. И., Черникова Е. А., Коваленко Ф. П. Морфологическая характеристика крючьев протосколексов Echinococcus multilocularis трех географических изолятов. // The 3-rd International Iran and Conference Agriculture and Natural Resources. - Moscow. -2002,-p. 155-156.

17. Перчун Н. И., Коваленко Ф. П., Черникова Е. А., Легоньков Ю. А. Штаммовая характеристика изолятов Echinococcus multiloculans на модели имагинального эхинокок-коза золотистых хомяков. // The 3-rd International Iran and Conference Agriculture and Natural Resources. - Moscow. - 2002, - p. 158 - 159.

18. Kovalenko F.P., Shatveryan G. A., Chernikova E. A., Bessonov A. S., Musaev G.X. Comparative susceptibility of Echinococcus multiloculans protoscolices and acephalocysts to effects of some germicidal agents. // The tenth international Congress ofParasitology. Vancouver. - Canada. - 2002. - p.243.

19. Kovalenko F.P., Chernikova E. A., Novik T. C, Bessonov A. S., Musaev G.X., Arkhipov I. A., Zhuravleva N. A., Rusakov S. V. Efficacy of polymeric formulation of experimental Larval Echinococcoses. //The tenth international Congress of Parasitology. Vancouver. - Can-ada.-2002. -p.243-244.

20. Kovalenko F.P., Bessonov A. S., Chernikova E. A., Arkhipov I. A., Rusakov S. V. Susceptibility of cestode scolex to biologically active substances during ontogenesis. //The tenth international Congress ofParasitology. Vancouver. - Canada. - 2002. - p.290 - 291.

21. Chernikova E. A., Kovalenko F.P., Legonkov Yu., A., Musaev G.X., Bessonov A. S., Gorovaya N. S. Susceptibility of laboratory rodents to parenteral infection Echinococcus mul-tilocularis larval cysts of human origin. // The tenth international Congress of Parasitology. Vancouver. - Canada. - 2002. - p. 300 -301.

22. Kovalenko F.P., Chernikova E. A., Perchun N. В., Bessonov A. S., Legonkov Yu. A., Terenina N. В., Rusakov S. V. Strain characterization ofEchinococcus multiloculans isolates on imaginal echinococcusis model in golden hamsters. // The tenth international Congress of Parasitology. Vancouver. - Canada. - 2002. - p. 310.

23. Черникова Е. А. Новые подходы к изучению паразитарной системы Echinococcus spp. // Сборник статей: «Актуальные проблемы естественно-научных исследований». -Курск.-2003,.-с. 106-114.

24. Коваленко Ф. П., Перчун Н. И., Черникова Е. А., Севбо Д. П., Трусов С. Н., Михай-лицин Ф. С, Бессонов А. С, Легоньков Ю. А. Разработка новых отечественных анти-гельминтиков. Оценка терапевтической активности флузалида на новых экспериментальных моделях кишечных цестодозов. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - Москва, - 2003. - № 2 - с.ЗЗ -39.

25. Перчун Н. И., Черникова Е. А., Коваленко Ф. П. Морфологическая характеристика крючьев протосколексов Echinococcus multilocularis трех географических изолятов. // Труды Всероссийского института гельминтологии им. К. И. Скрябина. -Москва. - 2003. -T0M.39.-C.206-210.

26. Chernikova E. A., Kovalenko F.P., Perchun N. B., Bessonov A. S., Arkhipov I. A., Le-gonkov Yu. A. Experimental imaginal echinococcosis: precipitating characteristics of blood serum from infected golden hamsters with respect to isolated strobilar form and protoscolices Echinococcus multilocularis. // Ninth International helminthological symposium.- Slovak Republic. - 2003. - p. 81.

27. Chernikova E. A., Kovalenko F.P., Perchun N. B., Bessonov A. S., Terenina N. B., Legon-kov Yu. A., Arkhipov I. A. Experimental imaginal echinococcosis: possibility of passaging of strobilar Echinococcus multilocularis in golden hamsters. // Ninth International helmintho-logical symposium. - Slovak Republic. - 2003. - p. 81.

28. Chernikova E. A., Kovalenko F.P., Perchun N. B., Bessonov A. S., Terenina N. B., Arkhi-pov I. A., Legonkov Yu. A. Stain characterization of Echinococcus multilocularis isolates on imaginal echinococcosis model in golden hamsters. // Ninth International helminthological symposium. - Slovak Republic. - 2003. - p. 82.

29. Chernikova E. A., Kovalenko F.P., Perchun N. B., Novik T. C, Michaleva M. A., Bes-sonov A. S., Terenina N. B., Arkhipov I. A., Legonkov Yu. A. Screening novel anticestodal agents using experimental models of intestinal cestodoses. // Ninth International helminthological symposium.- Slovak Republic. - 2003. - p. 85.

30. Kovalenko F.P., Chernikova E. A., Michalev V. Yu., Shatveryan G. A., Bessonov A. S., Arkhipov I. A. Susceptibility of golden hamsters to the infection with metacercariaes Opistorchis felineus artificial exclusion of common biliare duct from parasite's migration pathway in experimental host. // Ninth International helminthological symposium. - Slovak Republic. - 2003. - p. 86.

31. Chernikova E. A., Perchun N. I, Kovalenko F.P., Bessonov A. S. Morphological and developmental characteristics of three geographical isolates of Echinococcus multilocularis at larval stage in experimentally infected laboratory rodents. // Bulletin of the Scandinavian Society for Parasitology with Proceedings of XXI Symposium of the Scandinavian Society for Parasitology. - Bergen. - 2003. - v.12 - 13. - p.33 -34.

32. Kovalenko F.P., Chernikova E. A., Perchun N. I., Bessonov A. S., Bolotov A. S. Therapeutic activity of nocodazole at experimental larval echinococcosis. 1. Efficacy of intramuscular and injections of nocodazole at Echinococcus multilocularis infection in cotton rats. // Bulletin of the Scandinavian Society for Parasitology with Proceedings of XXI Symposium of the Scandinavian Society for Parasitology. - Bergen.- 2003.- v.12-13. - p.40-41.

33. Kovalenko F.P., Cheraikova E. A., Perchun N. I., Bessonov A. S., Bolotov A. S. Therapeutic activity ofnocodazole at at experimental larval echinococcosis. 1. Efficacy of subdermal injections of nocodazole at Echinococcus granulosus infection in white mice. // Bulletin of the Scandinavian Society for Parasitology with Proceedings of XXI Symposium of the Scandinavian Society for Parasitology. - Bergen. - 2003. - v.12 - 13. - p.41 - 42.

34. Kovalenko F.P., Perchun N. I., Chernikova E. A., Sevbo D. P., Mikhailitsyn F. S., Bessonov A. S., Legonkov Yu. A. Evaluation of therapeutic activity of fluzamide at exherimen-tal model of intestinal cestodoses. // Bulletin of the Scandinavian Society for Parasitology with Proceedings of XXI Symposium of the Scandinavian Society for Parasitology. - Bergen. -2003.-v.12-13- p.42.

35. Kovalenko F. P., Perchun N. I., Darchenkova N. N., Yastreb V. B. Bessonov A. S., Chernikova E. A. Statistics of sickness of larval echinococcosis of the population and agricultural animals in the Russian Federation in 1989 - 2001. // Proceedings ofthe 19th International Conference of the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology. New Orleans. - Louisiana USA. - 2003. - p.209.

36. Kovalenko F. P., Chernikova E. A., Dubinina G.N.,Bessonov A. S., Perchun N. I. Changes of enzymes in urine of cotton rats infected with larval Echinococcus multilocularis at chemotherapy of experimental infection. // Proceedings of the 19th International Conference of the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology. New Orleans. - Louisiana USA. - 2003. - p.209.

37. Kovalenko F. P., Chernikova E. A., Ballad N. E., Perchun N. I., Bessonov A. S. Estimation of activity of specific and nonspecific antigens at experimental secondary alveolar echinococ-cosis of Laboratory rodents. // Proceedings of the 19th International Conference of the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology. New Orleans. - Louisiana USA.-2003.- p.210.

38. Романенко Н. А., Сергиев В. П., Черникова Е. А. Роль паразитов в эволюции человека. // Профилактическая медицина - практическому здравоохранению: Сборник научных статей, посвященный 10-летию медико-профилактического факультета последипломного профессионального образования ММА им. И. М. Сеченова, М- 2003. - Вып.2. - с.344-347.

39. Сергиев В. П., Черникова Е. А., Романенко Н. А. Значение паразитарных болезней в патологии человека. // Профилактическая медицина - практическому здравоохранению: Сборник научных статей, посвященный 10-летию медико-профилактического факультета последипломного профессионального образования ММА им. И. М. Сеченова, М.-2003. - Вып.2. - с.374-377.

40. Черникова Е. А., Сергиев В. П., Романенко Н. А. Роль и место паразитарных болезней в патологии человека. // Профилактическая медицина - практическому здравоохранению: Сборник научных статей, посвященный 10-летию медико-профилактического факультета последипломного профессионального образования ММА им. И. М. Сеченова, М- 2003. - Вып.2. - с.377 - 380.

41. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации: Санитарные правила и нормы (СанПиН 3.2.1333-03). Утверждены Министерством здравоохранения РФ 28.05.03 г. Зарегистрированы в Министерстве Юстиции РФ 09.06.03 №4662

42. Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями: Методические указания (МУ 3.2. 1756 - 03), М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России. -2004.

43. Черникова Е. А. Новые подходы в изучении паразитарных систем. // РЭТ - инфо, М. -2004-№3(51). -с. 60-62

44. Способ скрининга антигельминтных препаратов. Патентная заявка № 2001134511/14. Приоритет 21.12.01

45. Коваленко Ф. П., Перчун Н. И., Дарченкова Н. Н., Ястреб В. Б., Бессонов А. С, Черникова Е. А., Легоньков Ю. А., Мусаев Г. X., Шатверян Г. А., Гудовский Л. М., Паршин В. Д., Андреянов О. Н. Заболеваемость эхинококкозами населения и сельскохозяйственных животных в Российской Федерации в 1989 - 2002 г.г. // Труды Всероссийского института гельминтологии им. К. И. Скрябина, М. -Том 41. - 2004, - с. 192 -211.

46. Черникова Е. А. Теоретико-системная концепция структурно-функциональной организации паразитарных систем. // Ветеринарный консультант, М., 2004 — № 4 (11). — с. 102-107.

47. Черникова Е. А., Легоньков Ю. А., Коваленко Ф. П. Экспериментальное обоснование оптимизации химиотерапии альвеококкоза. //Медицинская паразитология и паразитарные болезни, М. - 2005 - № 1. - с. 43. - 45.

48. Черникова Е. А Эхинококкозы: современное систематическое положение, распространение, изменчивость биологических вариантов. //Медицинская паразитология и паразитарные болезни, М. - 2005 - № 2. - с. 44 - 49.

(

i - ' \

I * : -}

19 МАЙ 2005

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Черникова, Евгения Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 1. МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ В ИЗУЧЕНИИ ПАРАЗИТАРНЫХ СИСТЕМ.

1.1. Учение о паразитарных системах, современные представления

1.2. Интегративно-функциональный подход в изучении паразитарных систем.

ГЛАВА 2. ПРИМЕНЕНИЕ ИНТЕГРАТИВНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПОДХОДА ДЛЯ АНАЛИЗА ПАРАЗИТАРНОЙ СИСТЕМЫ ECHINOCOCCUS SPP.

2.1. Паразитарная система рода Echinococcus

2.2. Характеристика внутривидовых вариантов Echinococcus granulosus

2.3. Характеристика внутривидовых вариантов Е. multilocularis

2.4. Паразитарная система Echinococcus spp.c позиций интегративно-функционального подхода

2.4.1. Определение системных элементов и комплекса стадийных и инфраструктурных целей системных элементов паразитарной системы Echinococcus spp.

2.4.2 . Взаимодействие и взаимное влияние биологических ресурсов и механизмов активации системных элементов паразитарной системы Echinococcus spp.

ГЛАВА 3. ПАТОГЕНЕЗ ЛАРВАЛЬНЫХ (ЦИСТНОГО И АЛЬВЕОЛЯРНОГО) ЭХИНОКОККОЗОВ С ПОЗИЦИЙ ИН-ТЕГРАТИВНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПОДХОДА.

3.1. Метацестода E.granulosus.

3.2. Феномен экзогенного почкования метацестод гидати-дозного эхинококка у человека.

3.3. Метацестода E.multilocularis.

3.4. Особенности развития метацестоды E.multilocularis у человека.

ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЛАРВАЛЬНЫХ ЭХИНОКОККОЗОВ

4.1. Экспериментальное моделирование ларвального диетного эхинококкоза.

4.1.1. Лабораторная модель ларвального цистного эхинококкоза.

4.1.2. Методика получения протосколексов Е.granulosus.

4.1.3. Методика заражения лабораторных животных биова-рами цистного эхинококкоза. v 4.1.4.Восприимчивость белых мышей к внутрибрюшинно-му заражению протосколексами Е.granulosus от промежуточных хозяев разных видов.

4.1.5. Характеристика лабораторных штаммов Е.granulosus по морфологии крючьев протосколексов.

4.1.6. Оптимизация методов сохранения и поддержания лабораторных штаммов Е.granulosus.

4.2. Экспериментальное моделирование ларвального альвеолярного эхинококкоза.

4.2.1. Лабораторная модель ларвального альвеолярного эхинококкоза.

4.2.2. Инвазионный материал E.multilocularis.

4.2.3. Методика получения протосколексов E.multilocularis

4.2.4. Подсчет числа протосколексов в инокуляте.

4.2.5.Усовершенствование метода парентерального вторичного заражения.

4.3. Характеристика лабораторных штаммов

E.multilocularis.

4.3.1. Продуктивность метацестод лабораторных штаммов E.multilocularis в отношении протосколексов и ацефало-цист от экспериментальных промежуточных хозяев одного вида.

4.3.2. Восприимчивость белых крыс к парентеральному заражению протосколексами биоваров E.multilocularis.

4.3.3. Морфология хоботковых крючьев биоваров E.multilocularis.

4.3.4. Характеристика лабораторного штамма «восточноевропейского» биоваров E.multilocularis.

ГЛАВА 5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ СТРОБИЛЯРНОГО ЭХИНОКОККОЗА

5.1. Разработка лабораторной модели стробилярной стадии развития E.multilocularis.

5.2. Характеристика изолятов E.multilocularis по особенностям роста и развития стробил.

5.3. Характеристика изолятов E.multilocularis по морфологии крючьев.

5.4. Искусственная трансплантация стробил E.multilocularis иммуносупрессированным и интактным лабораторным грызунам.

5.5. Метод диагностической интестинотомии при экспериментальном стробилярном альвеококкозе.

ГЛАВА 6. ПРАКТИЧЕСКИЕ И ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ 165 МОДЕЛЕЙ ЭЛЕМЕНТОВ ПАРАЗИТАРНОЙ СИСТЕМЫ ECHINOCOCCUS SPP.

6.1. Методика изучение воздействия группы новых проти-воцестодных препаратов на моделях ларвального и кишечного альвеококкоза.

6.2. Результаты воздействия полимерной формы альбенда-зола (ПФА) на метацестоду паразита.

6.3. Изучение действия флузамида на стробилярную стадию развития E.multilocularis.

6.4. Способ скрининга антигельминтных препаратов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Паразитарная система Echinococcus spp."

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Эхинококкозы - актуальная глобальная проблема медицинской паразитологии. Эхинококкозы представляют собой сложные паразитарные системы, структурными компонентами которых являются цестоды рода Echinococcus на разных стадиях развития, а также животные и человек, являющиеся хозяевами разных стадий жизненного цикла паразита. Популяция паразитов - интегрирующее звено паразитарной системы, образованной конкретной популяцией паразита и поддерживающими ее существование популяции всех хозяев. В основе паразитарной системы лежит выработанное в ходе эволюции взаимодействие популяций паразита и хозяев.

Ларвальные эхинококкозы (цистный и альвеолярный) тканевые гельминтозы, характеризующиеся, длительным хроническим течением заболевания, тяжелой органной и системной патологией, обширностью поражения, приводящие к инвалидности и нередко заканчивающиеся смертью больного.

Эхинококкозы широко распространены во многих странах мира [93, 103, 106, 131, 137, 240, 241]. Распространение гидати-дозов в России за последние годы остается примерно на одном уровне - около 1,1 случаев на 100 тысяч населения [36, 173].

Echinococcus spp. этот подход определяет методологию изучения механизмов взаимодействия разных стадий развития паразита с организмами хозяев и их роли в реализации инвазионного процесса.

Для изучения указанных механизмов могут быть использованы известные лабораторные модели эхинококкозов, разработанные в России [38, 50]. Недостатком, которых является использование большого числа экспериментальных животных, так как при пассаже лабораторные животные-доноры погибают. До сих пор ограничены сведения об инвазионности паразита от естественных хозяев разных видов для лабораторных животных [156, 161,162,163, 211]. Отсутствуют методы длительного поддержания лабораторного штамма возбудителя, гарантирующие сохранение возбудителем морфологических особенностей и полноценных инвазионных свойств [40,56]. Особый интерес в этом аспекте представляют стабильное воспроизведение и поддержание лабораторных штаммов возбудителей эхинококкозов, отработка стандартизованных лабораторных моделей метацестодной стадии и разработка новых моделей стробилярной стадии Echinococcus spp. Большое теоретическое и прикладное значение имеет создание моделей с использованием в качестве донорского материала паразитов, полученных от оперированных больных альвеококкозом для уточнения конкретных параметров паразито-хозяинных отношений.

С целью выявления новых возможностей в разработке профилактических мероприятий и лечения промежуточных и окончательных хозяев, а также использования стандартизованных экспериментальных моделей в скрининговых исследованиях противо-цестодных препаратов, начиная с 1999 года в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины (ИМПиТМ) им. Е. И. Марциновского ММА им. И. М. Сеченова проводились специальные исследования в рамках НИР по решению заданий программы «Оптимизация профилактики паразитарных болезней» договор № 034/146/052 от 16.07.03 отраслевой научно-исследовательской программы «Эпидемиология и микробиология» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Разработка методологии моделирования паразитарной системы Echinococcus spp. для применения в экспериментальной медицине и биотехнологии.

ДЛЯ ДОСТИЖЕНИЯ ПОСТАВЛЕННОЙ ЦЕЛИ ПОТРЕБОВАЛОСЬ РЕШИТЬ СЛЕДУЮЩИЕ ЗАДАЧИ: определение системных элементов, инфраструктурных (са-мосохранительных) целей на разных стадиях жизненного цикла паразита и механизмов активации данных элементов паразитарной системы Echinococcus spp.; воспроизведение, модификация и стандартизация экспериментальных моделей биоваров возбудителей цистного и альвеолярного эхинококкозов на лабораторных животных; использование «очищенных» свободных микроскопических ацефалоцист, полученных из метацестоды от оперированного больного альвеолярным эхинококкозом, для создания лабораторного штамма экспериментального альвеококкоза; совершенствование и оптимизация методов моделирования кишечных форм цестод для изучения особенностей развития зрелых форм паразита; определение и стандартизация параметров культивирования стробилярной стадии альвеолярного эхинококка на лабораторных грызунах; изучение возможности использования экспериментальных моделей биоваров возбудителей альвеолярного и цистного эхинококкозов для скрининга противоцестодных препаратов;

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ:

В результате проведенных исследований нами впервые: • обоснована целесообразность применения интегративно-функционального подхода для анализа взаимоотношений в паразитарных системах, который позволяет определять механизмы активации разных стадий развития паразита Echinococcus spp. в организмах разных видов хозяев;

• на основе метода искусственной трансплантации незрелых и зрелых стробилярных форм эхинококков доказан новый для науки факт — возможность оперативной трансплантации взрослых цестод и нематод из кишечника животного-донора в желудок животного-реципиента с последующим развитием гельминта в кишечнике донора до стадии зрелых яиц;

• обнаружен новый биологический феномен — возможность экзогенного почкования личиночной стадии Echinococcus granulosus в организме человека.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Результаты исследований позволили оптимизировать и стандартизировать методы экспериментального моделирования разных стадий развития Е. granulosus и E.multilocularis. Значимость работы для практического использования заключается в следующем:

2. Получен новый лабораторный штамм E.multilocularis «восточно-европейского» биовара (от оперированного больного [78]) -продуцент большого числа протосколексов.

3. Отработана безопасная модель стробилярных цестод с использованием «восточно-европейского» и «камчатского» биова-ров эхинококка.

5. Создана высокопродуктивная модель кишечного альвеолярного эхицококкоза на золотистых хомяках, упрощающая скрининг химиопрепаратов и позволяющая получать большие объемы, антигенного материала для целей биотехнологии, производства диагностических тест-систем и конструирования вакцин против эхинококкоза окончательных хозяев.

6. Доказана эффективность использования стандартизованных лабораторных моделей эхинококка для скрининга противоэхино-кокковых препаратов и отработки новых подходов к терапии, в том числе:

6.1. на экспериментальной модели кишечного альвеолярного эхинококкоза золотистых хомяков выявлена высокая противоцестод-ная активность: полимерной , формы альбендазола, представляющей собой металлокоплекс альбендазола и меди, дополнительно включенного в микрокапсулы из ацетилцеллюлозы (ПФА), флуза-мида, микрокапсулированного комплекса альбендазола и кобальта, препарата Г - 1741 и препарата растительного происхождения - кукурбина;

6.2. выявлен феномен адаптации хозяина к постепенно и постоянно повышаемым суточным дозам препаратов группы карбамат-бензимидазолов в течение продолжительных непрерывных курсов лечения, что открывает новые подходы к терапии;

6.3. установлено, что терапевтическая активность эффективных противоэхинококковых препаратов на экспериментальных моделях ларвальных эхинококкозов характеризуется быстрой первоначальной и равномерной во всей популяции паразитов деструкцией проторколексов и последующим замедленным и неравномерным отмиранием микро- и макроацефалоцист метацестоды эхинококка.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ В ПРАКТИКУ.

2. Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями: Методические указания (МУ 3.2. 1756 - 03), М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России. - 2004.

3. Получены патенты на изобретение:

3.1. Антигельминтное средство. Патент РФ № 2195280.

2002.

3.2. Способ скрининга антигельминтных препаратов. Патентная заявка № 2001134511/14. Приоритет 21.12.01

4. Материалы диссертации были использованы в педагогической работе на сертификационных циклах для врачей паразитологов, эпидемиологов и других специалистов ЦГСЭН; терапевтов, педиатров, инфекционистов и других специалистов лечебно-профилактических учреждений на тематических циклах усовершенствования на кафедре паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И. М. Сеченова (2001 -2004 гг.); в курсе «Тропические паразитарные болезни» для иностранных студентов 6 курса лечебного факультета ММА им. И. М. Сеченова (2000 - 2004 гг.).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Интегративно-функциональный подход открывает новые возможности в изучении патогенеза эхинококкозов. Он позволяет рассматривать проявления особых биологических ресурсов паразита (экзогенное почкование Е.granulosus по типу альвеолярного, развитие ацефалоцист E.multilocularis внутрь паразитарного узла и другие), как основную причину выживания и увеличения популяции паразита, приводящую к рецидивам инвазии.

2. Созданный универсальный спектр стандартизованных экспериментальных моделей эхинококкозов позволяет проводить изучение всех стадий развития паразита. Отработанные для этой цели методические приемы — диагностическая лапаротомия и интести-нотомия, ультразвуковое и рентгенологическое исследование — обеспечивает выявление инвазии, определение размеров и степени зрелости метацестод. На модели кишечного альвеолярного эхинококкоза показана возможность трансплантации препатент-ной и стробилярной стадий развития паразита.

3. На основе стандартизованных экспериментальных моделей отработана оригинальная методика ускоренного скрининга анти-гельминтиков, позволившая выявить ряд перспективных для дальнейшего изучения противоцестодных препаратов. Поступательное увеличение дозы вводимых препаратов, испытанное на лабораторных моделях эхинококкозов, предложено для повышения эффективности терапии этих заболеваний.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации были доложены на:

Международной научно-практической конференции «Проблемы эхинококкоза», Махачкала, 2000 г.

Научно-практической конференции «Тканевые гельминтозы: диагностика, патогенез, клиника, лечение и эпидемиология», Витебск, 2000 г.

XXI Международный Конгресс Гидатидологов, Турция, г. Кусадаки, 2001 г.

I Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия профессором К. И. Виноградовым сибирской двуустки у человека, Томск, 2001 г.

Научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы), Москва, 2002 г.

III Международной Российско-Иранской Конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы», Москва, 2002 г.

X Международном Конгрессе Паразитологии, Канада, г. Ванкувер, 2002 г.

XI Международном Гельминтологическом Симпозиуме «Гельминты, гельминтозы и окружающая среда», Словакия, г. Старо Леста, 2003 г.

XXI Симпозиуме Скандинавского Общества Паразитологов, Норвегия, г. Берген, 2003 г.

XIX Международной Конференции Всемирной Ассоциации Прогресса Ветеринарной Паразитологии, США, г. Нью Орлеан, 2003 г.

XXI Международном Конгрессе Гидатидологии, Кения, г. Найроби, 2004 г.

Научно- практической конференции: «Теория и практика борьбы с гельминтозами». ВИГИС, г.Москва, 2002, 2003, 2004.

Объединенной сессии Центрального Совета ОГ РАН и секции «Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных». Отделение ветеринарной медицины РАСХН, г. Москва, 2002, 2003 г.г.

Заседании ВОГ РАН, г. Москва, 2002, 2003, 2004 г.г.

Заседании Ученого Совета ИМПиТМ им. Е. И. Марциновско-го ММА им. И. М. Сеченова (2002 - 2004 г.г.)

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ.

Результаты диссертации отражены в 48 печатных работах (из них 6 в журналах, включенных в перечень ВАК; 19 в зарубежных изданиях), 1 СанПиНе, 1 методическом указании, 2 патентах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена в виде монографии на 233 страницах машинописного текста. Она состоит из введения, шести глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список литературы включает 86 отечественных и 162 зарубежных публикаций. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 41 рисунком.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Черникова, Евгения Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Интегративно-функциональный подход обеспечивает возможность комплексного изучения патогенеза эхинококкозов человека и механизмов возникновения рецидивов. В результате исследования с позиций интегративно-функционального подхода морфо-биологических особенностей развития паразита в организме больного доказано, что деструкция протосколексов не приводит к гибели метацестоды Echinococcus spp. Ведущая роль в выживании, увеличении популяции паразита и возникновении рецидивов эхинококкоза у человека принадлежит микроскопическим дочерним и внучатым цистам и ацефалоцистам паразита.

4. Разработанные методы оперативной диагностики экспериментальных эхинококкозов (диагностическая лапаротомия и интестинотомия) у грызунов обеспечивают выявление инвазии, исследование изменения морфологии паразита под влиянием противоцестодных препаратов и получение донорского паразитарного материала с сохранением жизни подопытных

Зс.ИВ0^М1зана возможность успешного пассирования стробил кишечных гельминтов на лабораторных грызунах, что позволило разработать безопасную для экспериментатора методику моделирования кишечного альвеококкоза. В результате эксперимента выявлена высокая приживаемость юных препатентных форм стро-билярного эхинококка у молодых или иммуносупрессированных взрослых лабораторных животных.

6. На экспериментальных моделях выявлена высокая противо-цестодная активность новых лекарственных форм альбендазола -микрокапсулированного комплекса альбендазола с металлами (медью и кобальтом), интенс-эффективность которых, в суммарной дозе ДВ - 2,19 г/кг и 0,19 г/кг соответственно, составила 100%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Одним из возможных механизмов активации особых биологических ресурсов паразита служат ослабление пролиферации лимфокинов и цитокинов у больного человека. Определение функциональной активности лимфокинов Txi-типа может помочь в расчете риска возможного метастазирования паразита.

2. Представленные экспериментальные модели ларвальных и стробилярных эхинококкозов позволяют проводить сравнительный анализ биологических вариантов Echinococcus spp. от спонтанно зараженных животных, а также могут быть использованы для биотехнологических исследований по скринингу и оценке терапевтической активности препаратов, эффективных при данных паразитарных болезнях.

Скрининг и оценку терапевтической активности препаратов, эффективных при ларвальных эхинококкозах целесообразно осуществлять на экспериментальной модели ларвального альвеокок-коза, применение которой, в отличие от модели цистного эхинококкоза, обеспечивает большую надежность полученных результатов и меньшие затраты на эксперименты. Наиболее перспективным является заражение лабораторных животных «восточноевропейским» лабораторным штаммом, который обладает высокими продуктивными в отношении протосколексов свойствами. В опытах по экспериментальной химиотерапии ларвального альвео-коккоза в оценке эффективности испытуемых препаратов важную роль играет микроскопическое исследование нативных препаратов всех паразитарных ларвоцист, выявленных при вскрытии каждого леченого животного, на присутствие единичных выживших ацефалоцист альвеококка. Наиболее объективным и надежным критерием радикальной экспериментальной химиотерапии лар-вальных эхинококкозов является отсутствие рецидива инвазии у леченных животных в отдаленные сроки после окончания лечения. Для подтверждения эффективности и радикальности химиотерапии удобны УЗИ и диагностическая лапаротомия с сохранением жизни животным, обеспечивающие объективную оценку противопаразитарной активности испытуемых препаратов в динамике.

3. Быстрая предварительная оценка эффективности потенциальных противоэхинококковых препаратов и их лекарственных форм осуществляется при использовании экспериментальной модели ларвального альвеококкоза хлопковых крыс и белых мышей на терминальной стадии инвазии и на малом числе животных с помощью метода, основанного на феномене раннего обратимого коллапса паразитарных ларвоцист у инвазированных животных под влиянием высокоактивных ларвицидных противоэхинококковых препаратов.

4. Метод ускоренного скрининга позволил выявить перспективные химиопрепараты для дальнейшего исследования. Этот метод позволяет определять антигельминтную активность эффективных противоцестодных препаратов без предварительных высоко затратных токсикологических исследований и быстро выявлять наиболее перспективные из них для дальнейших клинических исследований. Исследованные в нашей работе эффективные проти-воцестодные препараты (ПФА, микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта, Г - 1741, кукурбин и флузамид) могут быть рекомендованы для дальнейших клинических исследований. 5. Новый подход к методике применения химиотерапевтиче-ских препаратов: поступательное повышение суточной дозы лекарства, позволяет обеспечить эффективность лечения без проявления побочного действия. Постепенное увеличение суточной дозы на протяжении продолжительных курсов применения, приводит к адаптации лабораторных животных разных видов к токсическим дозам препаратов. Такой подход позволяет добиться полной деструкции всех элементов метацестоды и обеспечивает радикальный терапевтический эффект.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Черникова, Евгения Анатольевна, Москва

1. Абуладзе К. И. К вопросу о классификации тениат. // Материалы научной конференции, посвященной 40 летию Московской ветеринарной академии. - М. - I960.- С.66.

2. Абуладзе К. И. О номенклатуре тениатозов. // Материалы 5-ой научной конференции по инфекционным и инвазионным заболеваниям сельскохозяйственных животных.- М.- 1959 г.-С.46.

3. Абуладзе К. И. Основы цестодологии. Т.IV. Тениаты — ленточные гельминты животных и человека и вызываемые ими заболевания.- М.Наука 1964

4. Анохин П. К. Принципиальные вопросы общей теории функциональных систем. // Принципы системной организации функций. М.: Наука - 1973. - С.5 - 62

5. Антигельминтное средство. Патент РФ на изобретение № 2195280 2002 г

6. Астафьев Б.А. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М„ 2000. - С. 309-318.

7. Астафьев Б.А., Яроцкий Л.С., Лебедева М.Н. Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине. М., Наука, 1989. - С.41-123

8. Бахур А. Б. Системные идеи в современной инженерной практике (интегративно-функциональный подход к исследованию сложных систем). М.: Пров-пресс, 2000 - 57 с.

9. Безопасность работы с микроорганизмами III и IV групп па-тогенности и гельминтами: Санитарные правила (СП 1.2.73199) М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минзрава России - 1999. -107 с.

10. Беклемишев В. Н. Биоцеиологические основы сравнительной паразитологии. М., Наука - 1970.- 499 с.

11. Беклемишев В. Н. Об общих принципах организации жизни. //Бюлл. МОИП. т. LXIX. вып. 2., 1964

12. Беляков В. Д. Проблемы саморегуляции паразитарных систем и механизмы развития эпидемического процесса // Вестник АМН СССР 1993 - № 5 с. 3 - 9

13. Беляков В. Д., Голубев Д. В., Каминский Г. Д., Тец В. В. Саморегуляция паразитарных систем.- JL, Медицина. -1987- 240 с.

14. Бессонов А. С. Альвеолярный эхинококкоз и гидати-доз.- М. 2003. - 335 с.

15. Бессонов А. С. Тениаринхоз цистицеркоз. - М. -1999,- 302 с.

16. Бессонов А.С., Ястреб В.Б. «Идентификация штаммов Echinococcus granulosus по развитию вторичных ларвоцист у мышей» // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. 1992. - Т.31.- С. 31-38

17. Беэр С. А. , Ройтман В. А. Паразитарные системы: понятия, концепции, структуры. Свойства, функции в экосистемах. //В сб. Успехи общей паразитологии.- М.: Наука-2004.-С.273 317.

18. Беэр С. А., Завойкин В. Д.Трематодозы // Эпидемиологический процесс как социоэкологическая система / Под ред. Б. Л. Черкасского. М.: ЦНИИЭ МЗ СССР, 1986. -С. 78 88

19. Богданов А. А. Всеобщая организационная наука (Тек-тология).- М.: Экономика, 1989. -36 с.

20. Бор Н. Моделирование в биологии. М., Иностранная литература, 1963. - 256 с

21. Вернадский В. И. Размышления натуралиста.- М.: «Наука», 1975.

22. Винер Н. Кибернетика.- М.: «Советское радио», 1968

23. Воинственский М. А. Системный отбор и его роль в эволюции: естественный и искусственный отбор с позиций общей теории систем. / Киев. Институт зоологии. НАН Украины, 1996.- 30 с.

24. Волох Ю. А. Эхинококкоз и альвеококкоз человека.-Фрунзе, 1965. 156 с.

25. Волощук С.Д. «О существовании разных штаммов эхинококка на территории УССР» // Тез. докл. 9-й науч. конф. Укр. об-ва паразитол-в. 1980.- 4.1. - С. 130-131

26. Горский Ю. М. Основы гомеостатики. -М.: Из-во ИГЭФ., 1998. 53 с.

27. Гранович А. И. Моллюски и трематоды как компоненты паразитарных систем: Автореф. Дис. д-ра биол. наук. -СПб., 2000

28. Гранович А. И. Паразитарные системы и структура популяций паразитических организмов // Паразитология.-1996. -Т.30- № 4 С. 343 - 356

29. Догель В. А., Общая паразитология. JL: Изд — во ЛГУ, 1962. - 464 с

30. Доклиническое изучение антигельминтной активности фармакологических средств. // Ведомости фармакологического комитета. 1998.- № 4. - С.23 - 32

31. Дрынов И. Д., Малышев Н. А., Сергиев В. П. Основные понятия эпидемиологии развивающаяся система взглядов.-М.: «П-ЦЕНТР»., 2002. - С.88 - 120, 178 - 181

32. Евланов А. В. Основные факторы коэволюции в паразитарной системе (на примере лещ Digramma interrupta) // Эволюция паразитов: Материалы Первого Всесоюз. Симпоз. (Тольятти, 16 - 19 окт. 1990 г.).- Тольятти, 1991. - С. 73 -77.

33. Иммунология. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. М.: Мир, 2000. - С. 335 - 360.

34. Исаков С.И., Сафронов М.Г. «Штаммы эхинококков и альвеококков в Якутии. Эпизоотология и профилактика болезней животных в условиях Якутии», СО РАСХН, Новосибирск, 1984.- С. 49-52.

35. Коваленко Ф.П. «Джунгарские хомячки экспериментальная модель альвеококкоза и эхинококкоза» // Мед. пара-зитол. и паразитарн. болезни. - 1976. - № 2. - С. 226-227.;

36. Коваленко Ф.П. «Поиск новых лабораторных моделей эхинококкоза и альвеококкоза» // Тез. докл. III республ. съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Ереван, 1983. С. 124-126.

37. Коваленко Ф.П. «Экспериментальные модели эхинококкозов: оптимизация и применение в разработке новых методов диагностики, профилактики и лечения эхинококкозов человека и животных». Дисс.д.м.н. М., 1998. - 69 с.

38. Коваленко Ф.П. и др. «Способ моделирования ларвального альвеококкоза» А.с. СССР № 991485 // Бюл. «Открытия и изобретения».- 1983.- № 3. С. 238.

39. Коваленко Ф.П. и др. «Экспериментальный имагиналь-ный многокамерный эхинококкоз золотистых хомяков» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1990.- № 6. - С. 4143

40. Коваленко Ф.П., Кротов А.И., Новикова Н.Н. «Заражение лабораторных животных вторичным альвеококкозом путем внутрибрюшинного введения ацефалоцист Alveococcusmultilocularis» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни.-1979.- № 1. С. 84-86.

41. Контримавичус В. Л., Ашрашкевич Г. И. (1982), Паразитарные системы и их значение в популяционной биологии гельминтов // Паразитология.- 1982. Т. 16 - № 3, С.177 -187.

42. Краснощеков Г. П. Паразитарные системы: воспроизводство популяций паразита и их биоценологические взаимодействия. Институт экологии волжского бассейна, Тольятти. 1996 - 67с

43. Краснощеков Г. П. Паразитарные системы: Среда обитания и особенности адаптации паразитов. Тольятти. 1996 а. - 50 с.

44. Краснощеков Г. П., Розенберг Г. С. Принципы устойчивости биологический систем // Проблемы устойчивости биологических систем. М.: Наука, 1992. - С.40 - 51

45. Кротов А. И., Коваленко Ф. П. Методы моделирования ларвального альвеолярного эхинококкоза. //Эхинококкозы (методы исследований, лечение, профилактика). Под ред. Яроцкого Л. С. М. Министерство культуры СССР, 1990 -С. 221 - 228

46. Кротов А.И. «К вопросу о подвидах и штаммах представителей рода Echinococcus Rudolphi, 1801» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1979. - № 6. - С. 22-26.

47. Кротов А.И. «Основы экспериментальной химиотерапии гельминтозов». М., Медицина, 1973. - С. 210

48. Кротов А.И., Коваленко Ф.П. «Физиология личинок цестод отряда Cyclophillidea braun, 1900 (обзор литературы)» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1974.- № 5. - С. 587-594

49. Kuznetsov M.I. et al. «Epizootological, biological and morphological differences in hydatidosis in Uzbekistan and in the western regions of the USSR» // Helmintol. Abstr. 1980.-V. 49. - Ab. No. 5214.

50. Курбанбердыев К. К. Эхинококкоз печени. Ашхабад-Ылымю, 2001.- 197 с.

51. Лукашенко Н. П. Альвеококкоз (альвеолярный эхинококкоз).- М.: «Медицина», 1975. с.327

52. Лысенко А. Я., Владимова М. Г., Кондрашин А. В., Майори Дж. Клиническая паразитология. Женева:ВОЗ, 2002. - С.483 - 498

53. Ляпунов А. А. Теоретические проблемы кибернетики. -М., 1961.- 214 с.

54. Маленков А. Г. Гомеостаз и конвариантная репродукция: (об основаниях теоретической биологии) // В сб. Онтогенез, эволюция, биосфера. М., Наука, 1989. - С.15 - 30

55. Малышев Н. А., Дрынов Г. И., Дрынов И. Д., Сергиев В. П. Системное представление кризисных состояний при инфекциях. М.: «П-ЦЕНТР», 2003. - 200 с.

56. Парин В. В., Баевский Р. М. Введение в медицинскую кибернетику. М.: Прага, 1966. - 297 с.

57. Петров А. М. К обнаружению возбудителя альвеолярного эхинококкоза Echinococcus multilocularis у домашних идиких животных в СССР. // Бюллетень научно-технической информации ВИГИС.- М., 1958. в.З. С.36,

58. Путягин В. П. Клиника и оперативное лечение эхинококковой болезни легких. Дисс.канд.мед. наук. М.,1958

59. Сабгайда Т. П. Паразитарная система трехдневной малярии: Математическое и информационное моделирование.- М.:Агат-мед, 2001 173 с

60. Сергиев В. П. Актовая речь. Болезни человека как отражение межвидовой борьбы. М: Издательский дом «Русский врач», 2003. - 56 с.

61. Сетров М. И. Организация биосистем. Методологический очерк организации живых систем. Д.: Наука. - 1971

62. Скрябин К. И., Шульц Р. С. Гельминтозы человека, т.1.- М., 1931 г

63. Slavyanskaya Т. A. Immunopathology and phenotype characteristics of blood lymphocytes. // International journal on immunorehabilitation. 2004.- v.6 - № 2 - p.235

64. Слепнев H.K. Хозяинная специфичность Echinococcus granulosus от свиней в Белоруссии // Тр. Белорус, науч.-исслед. ин-та эксп. вет. 1975.-Т. 13. - С. 113-116.

65. Сомов Г. П., Литвин В. Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий: Экологические аспекты. Новосибирск: Наука, 1988 - 207 с.

66. Сонин М. Д., Бейер С. А., Ройтман В. А.Некоторые биосоциальные аспекты изучения разнообразия паразитических организмов // В сб.: Взаимоотношения паразита и хозяина. М., ИНПА РАН. - 1999. - С.93 - 100

67. Сопрунов, Ф. Ф. Молекулярные основы паразитизма. -М., 1987

68. Супотницкий М. В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. М.: Вузов, кн. - 2000.- 376 с.

69. Тумольская Н. И. Цестодозы. //Качество жизни. -М.:Медицина, 2005 -. № 1(8).- С. 35 44

70. Уркхарт Г. М., Эриур Дж., Дункан Дж., Данн А. М., Дженнингс Ф. В. Ветеринарная паразитология. М.: «АКВАРИУМ ЛТД», 2000. - С.157 -161.

71. Хеммонд П. Теория обратной связи и ее применение. -М.: Физматиздат, 1961, 194 с.

72. Черкасский Б. Л. Эпидемический процесс как система. Сообщение 1. Структура эпидемического процесса. -Ж.микробиол. 1985 - № 3 - С.45 - 51

73. Шайхет Г. X., Жалко-Титоренко В. П. Моделирование эпидпроцесса и химическая кинетика. // Врачебное дело -1968 № 6 - С.17 - 24

74. Шмальгаузен И. И. (1961), Интеграция биологических систем и их саморегуляция. Бюлл. МОИП, - М.:1961 - т.66 - № 2, - С.118 - 133

75. Шульц Р.С. «О некоторых вопросах эпидемиологии эхинококкозов и методах борьбы с ними» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1962. - Т. 31. - С. 272

76. Энциклопедический словарь медицинских терминов.-М.: «Советская энциклопедия»., 1982. Т.1. 464 с

77. Яроцкий JI. С., Эпидемиолого-эпизоотологические особенности эхинококкозов и методологические основы эпидемиологического надзора за ними. //Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики. Под ред. Л. С. Яроцкого. М., 1990 -С. 5-14

78. Яроцкий Л.С., Мартыненко В.Б., Коваленко Ф.П. «Штаммы эхинококков, их роль в эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1987. - №4. - С. 35-40.

79. Ястреб В.Б. «Морфологические особенности свиного и овечьего штаммов Echinococcus granulosus (Batsch, 1786)» // Бюл. Всес. ин-та гельминтол. 1986. - Вып.44. - С. 67-71

80. Ястреб В.Б., Скворцова Ф.К., Бондарь Л.Ф. «Штаммы Echinococcus granulosus в Молдове» // Тез. докл. науч. конф. Экологобиологические и фаунистические аспекты гельмин-тозов, Ереван 20-22 мая 1991. М., 1991. - С. 130-131.

81. Aguilar X., Fernandezmuixi J., Magarolas R., Sauri A., Vidal F., Richart C. An unusual presentation of secondary pleural hydatidosis. // Eur. Reshir.J. 1998.- V.ll. - P. 243 -245

82. Akhan O., Ozmen M.N.,Dincer A., Sayek I., Gocmen F. Liver hydatid disease: long-term results of percutaneius treatment.// Radiology. 1996. - V.198. - P.259 - 264

83. Ali Khan Z,Siboo R. Pathogenesis and host reponse in subcutanecus alveolar hydatidosis I. Histogenesis of alveolar cyst and a qualitative analysis of the inflammatory infiltrates.// Z. Parasitenkunde. - 1980. - V.62 - N 3. - P.241-254

84. Ali-Khan Z., Siboo R., Gomersall M.,Faucher M. Cysto-lytic events and the possible role of germinal cells in metastasis in chronic alveolar hydatidosis. // Ann. Trop. Med. Parasitol. -1983.- V.ll. P.497 - 512.

85. Ammann R.W., Hirsbrunner R., Cotting J., Steiger U.,Jacquier P.,Eckert J. Recurrence rate after discontinuation of long-term mebendazole therapy in alveolar echinococcosis (preliminary results). // Am.J.Trop.Hyg. 1990. - V.43. - P.506 -515.

86. Anonymous. A collaborative study of echinococcosis by physicians of Alaska and the Soviet Far East. A progress report. // Alaska Medicine. 1991. - V.33. - P.34 - 35

87. Arambulo P. Public health importance of cystic echinococcosis in Latin America. // Acta Trop. 1997. - V.67. - P.113 - 124

88. Arru E., Garippa G., Manger B.R. «fficacy of epsiprantel against Echinococcus granulosus infections in dogs. // Res. Vet. Sci. 1990. - V. 49. - № 3. - P. 378-379.

89. Baron R.W. & Tanner С. E. The effect of immunosuppression on secondary Echinococcus multilocularis infections in mice. // Internation Journal of Parasitology. 1976. - V.6. -P.37 - 42.

90. Bertalanffy L. Von. General System Theory (Foundation, Development, Application). G. Brazillier. N. - Y., 1973;

91. Bortoletti G. & Ferretti G., Ultrastructural aspects of fertile and sterile cysts of Echinococcus granulosus developed in hosts of different species // Int. J. Parasitol. 1978. - V. 8. - P. 421-431

92. Bowles J., Blair D., McManus D. P. Genetic variants within the genus Echinococcus identified by mitochondrial DNA sequencing // Mol. And Biochem. Pfrfsitol. 1992. - V.54. - P. 165 - 174

93. Bowles J., Blair D., McManus D.P. A molecular phylogeny of the genus Echinococcus// Parasitology. 1995. - V.110. -P.317 - 328

94. Bowles J., McManus D. P. Molecular variation in Echinococcus.// Acta Tropica. 1993. - V.53. - P.291 -305

95. Bowles J., McManus D. P. NADH dehydrogenase 1 gene sequences compared for species and stains of the genus Echinococcus // Int. J. Parasitol. 1993 a. - V. 23. - P. 969 - 972

96. Breijo M., Spinelli P., Ferreira A.M., Echinococcus granulosus: An Intraperitoneal Diffusion Chamber Model of Secondary Infection in Mice.//Experimental Parasitology. -1998. N 2.- V.13. - P.270 - 276

97. Cameron T.W.M., Webster G.A. The ecology of hydatido-sis // In: Studies in disease ecology, Washington, D.C.: Am. Geograph. Soc. 1961. - V.2. - P. 141-160.

98. Cameron T.W.M., Webster G.A. The histogenesis of the hydatid cyst (Echinococcus spp.). Part 1. Liver cysts in large mammals // Can. J. Zool. 1969. - V. 47. - P. 1405-1410

99. Clarkson M. Hydatidosis in Britain // Vet. Ann. Bristol. -1981. V. 21. - P. 251-254

100. Cook B. R. The epidemiology of Echinococcus granulosus in Great Britain. // Ann. Trop. Vtd. Parasitol. 1989. - V.83 (1).-P. 51 - 61.

101. Craig P. S., Eckert J., Jenkins D.J., Macpherson C.N.L., Thakur A. Epidemiolody and control of hydatid disease. In: Echinococcus and hydatid disease (eds Thompcon R.C.A., Lym-bery A.J.) Walligford: CAB Int. - 1995. - P. 233 - 244, 286 -288.

102. Czechowski J.,Gustavsson M., Aust-Kettis .Ultrasound investigation during treatment of liver hydatid disease with denzimidazole-carbamates. Ultrason. Pol., - 1992 - V.23 - P.29 -39

103. D'Alessandro A. et al. Echinococcus vogeli in man, with a reiew of polycystic hydatid disease in Colombia and neighboring countries // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1979. - V. 28. - P.303.317 »

104. D Alessandro A. Polycystic echinococcosis in tropical America: Echinococcus vogeli and E. oligartbrus.// Acta Trop. -1997. V.67. - P.43 - 65

105. De Rosa F., Teggi A. Treatment of Echinococcus granulosus hydatid disease with albemdazole //Ann. Trop Med. Parasi-tol. 1990. - V.84. - P.467 - 472

106. De Rycke P.H., Grembergen G. Echinococcus granulosus in cattle and swine // Congreso Mundial de Medic., Vet., Zo-otec. (XIX), Mexico City, 1971. Mexico, 1971. - V. 1. - P.136-139.

107. Deplazes P., Alther P., Tanner I., Tompson R.C.A. Eckert J. Echinococcus multilocularis coproantigen detection by enzyme-linked immunosorbent assay in fox, dog, and cat population. J. Parasitol. 1999. - V. 85- P.l 15 - 121

108. Deve F. Ecinococcose primitive experiventale. Resistance vitale des ocufs du teniaecninocogue. C. R. Soc. Bool. Paris. -1908. № 65. - P. 296

109. Diaz A., Irigoin F., Ferrira F., Sim R.B. Contril of complement activation by the Echinococcus granulosus hydatid cyst. Immunopharmacology. 1999. - V.42. - N 3. - P.91 - 98

110. Digenis G. A., Thorson R.E., Konyalian. Cholesterol biosynthesis and lipid biochemistry in the scolex of Echinococcus granulosus. // J. Pharm. Sci. 1970 - V.59. - P.676 - 679

111. Dreweck C.M., Soboslay P.Т., Schulz-Key H., Gottstain

112. В., Kern P. Cytocine and chemokine secretion by human peripheral blood cells in response to viable Echinococcus multilocularis metacestoda vesicles. // Parasite Immunol. 1999. - V.21 -P.433-438

113. Durie P.H., Riek R.F. The role of the dingo and wallaby in the infestation of cattle with hydatids Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) Rudolphi, 1801. in Queensland // Aust. Vet. J. -1952.- V. 28. P. 249-254

114. Eckert J. et al. Efficacy evaluation of epsiprantel (Cestex) against Echinococcus mutilocularis in dogs and cats // Berl Munch Tierarztl Wochenschr. 2001. - V.114. - № 3-4. - P. 121-126

115. Eckert J. et al. Proliferation and metastasis formation of larval Echinococcus multilocularis. I. Animal model, macro-scopical and histological findings // Z. ParasitKde. 1983. — V. 69. - P. 737-348.

116. Eckert J., Tompson R.C.A. Intrespecific variation of Echinococcus granulosus and related species with emphasis on their infectivity to human. // Acta Trop. 1997. - V. 64. - P. 19— 34

117. FAO 1982. Echinococcosis/ hydatidosis surveillance, prevention and control: FAO/UNEP/WHO guidelines, FAO Animal Production and Health Paper No. 29. Rome: Food and Agriculture Organization of the United Nations. 1982

118. Ferreira F., Irigoin F,Breijo M., Sim R.B, Diaz A. How Echinococcus granulosus Deals with Complement. Parasitology. 2000. - V.16. - N 4. - P.168 - 172

119. Frayha G.J. A study on the synthesis and absorption of cholesterol in hydatid cysts (Echinococcus granulosus). Сотр. Biochem. Physiol.- 1968. V.27. - P.875 - 878

120. Garcia J.I.L., Alonso E., Gonzalezuriarte J., Romano D.R. Evaluation of scolicidal agents in an experimental hydatid disease model. // Eur. Surg. Res. 1997. - V.29. - P.202 - 208

121. Gasser R.B., Xingquan Zhu, McManus D. P. Dideoxy fingerprinting: application to jenotyping of Echinococcus // Int. J. Parasitol. 1998. - V.28. - P. 11775 - 1779.

122. Gasser R.B., Xingquan Zhu, McManus D. P. NADH dehydrogenase subunit 1 sequences compared for nine members of the genus Taenia (Cestoda) // Int. J. Parasitol. 1999. - V. 29.- P. 1965 1970

123. Gebreel A.O., Gilles H.M., Prescott J.E. Studies on the se-roepidemiology of endemic diseases in Libya // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1983. - V. 77. - P. 391-397

124. Gemmell et al. The effecH of prasiquantel on Echinococcus granulosus, Taenia hydatigena and Taenia ovis infections in dogs // Rev. Vet. Sci. 1977. - V. 23. - № 1. - P. 121-123

125. Gemmell M. A. Hydatidosis control: a global view. // Aust. Vet. J. 1979. - V.55. - P.118 - 124

126. Gottstein B, Mowatt MR. Sequencing and characterization of an Echinococcus multilocularis DNA probe and its use in the polymerase chain reaction. // Mol. Biochem. Parasitol. 1991.- V. 44(2).- P.183-193.

127. Gottstein B. Molecular epidemiology for Echinococcus multilocularis // The Tenth Int. Cong, of Parasitology, 4-9 Fugust, 2002. Abstracts. - 2002. - P.38.

128. Gottstein В., Eckert J., Fey H. Serological differentiation between Echinococcus granulosus and E.multilocularis infection in man // Z. ParasitKde. 1983. - V. 69. - P. 347-356

129. Gottstein В., Hemphill A. Immunopathology of echinococcosis. Chem. Immunol., 1997. - V.66. - P.177 - 208

130. Graber M., Thai J. A biochemical study of adult and cystic stages of Echinococcus granulosus of human and animal origin from Kenya // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1980 - V. 33 -P.51-59.

131. Gustavsson I.-L. M. Echinococcus spp. In:Parasites of the Colder Climates/ Edited by Akuffo H., Lider E., Ljungstrom I., Wahlgren M. Taylor & Francis. London and New York. 2003. -P.177 183, 306 - 313

132. Haldane, J. B. S. Disease and evolution. Ric. Scient. Suppl., 1949 V. 18 - P.68 - 76

133. Hatch C., Smyth J.D. Echinococcus granulosus equinus: attempted infection of sheep // Res. Vet. Sci. 1975. - V. 19. - P. 340.

134. Heath D.D. The life cycle of Echinococcus granulosus // In: «Recent advances in hydatid disease», R.W. Brown, J.R. Salisbury, W.E. White (eds.), Victoria, Australia: Hamilton Medical and Veterinary Assotiation. 1973.

135. Heath D.D., Lawrence S.B. Echinococcus granulosus: development in vitro from oncosphere to immature hydatid cyst // Parasitology. 1976. - V. 73. - P. 417-423.

136. Hobbs R.P., Lymbery A.J., Thompson R.C.A. Rostellar hook morphology of Echinococcus granulosus (Batsch,1786) from natural and experimental Australian hosts, and implication for strain recognition. Parasitology. 1990. - V. 101.- P.273-281

137. Hustead S. Т. & Williams J. F., Permeability studies on taeniid metacestodes. Hfrt I. Uptake of proteins by larval stages of Taenia taeniaformis, Taenia crassiceps and Echinococcus granulosus. J. Parasitol.- 1977. V.63. - P.314 - 321.

138. Ishizu H., Uchino J., Sato N., Aoki S., Suzuki K., Kuriba-yashi H. Effect of albendazole on recurrent and residual alveolar echinococcosis of the liver after surgery// Hepatology -1997 Mar -. V. 25 (3) P. 528 - 53 1

139. Jederberg J. Infection diseases as an evolutionary paradigm. Everg.Infet.Dis., 1997 V.3 -№4 - P.417 - 423R

140. Jenkins D.J., Romig T. Efficacy of Droncit Spot-on (praziquantel) 4% w/v against immature and mature Echinococcus multilocularis in cats // Int. J. Parasitol. 2000. - V. 30. -№ 8. - P. 959-962

141. Kamiya M. et al. Characteristic responses of nude mice in angiostrongyliasis and echinococcosis // In Proc. of the Third Int. Workshop on Nude Mice (ed. Reed N.D.). Gustav Fisher, New York. -1982. P. 133-145.

142. Kamiya M., Sato H. Complete life cycle of the canid tapeworm, Echinococcus multilocularis, in laboratory rodents. // FASEB J, Dec. 1990b. V.4. - P.3334 - 3339

143. Kamiya M., Sato H. Survival, strobilation and sexual maturation of Echinococcus multilocularis in the small intestine of golden hamsters // Parasitology. 1990a. - V.100. - P.125-130.

144. Kumaratilake et al. Intraspecific variation in Echinococcus granulosus in Australia // In: Proc. 3rd European Multicollo-quium Parasit., Cambridge, England, Sept 7-13, 1979.

145. Kumaratilake L.M., Thompson R.C.A. A Review of the Taxonomy and Speciation of the Genus Echinococcus Rudolphy 1801. // Z. ParasitKde. 1982. - V. 68. - № 2. - P. 121-146.

146. Lascano E.F. et al. Fine structure of the germinal membrane of Echinococcus granulosus cysts // J. Parasitol. 1975. — V. 61. - P.853-860.

147. Le Riche, Sewell M.M.H. Identification of Echinococcus granulosus strains by enzyme electrophoresis. // Res.Vet.Sci. -1978. V. 25, №2. - P.247-24837

148. Lethbridge R.C. The biology of the oncosphere of cyclo-phyllidean cestodes // Helminthol. Abstr. 1980. - V.49. - P. 59-72.

149. Lubinsky G. The variability of the number of rostellar hooks in two species of Echinococcus from North America // Can. J. Zool. 1960. - V. 38. - P. 605-612.;

150. Luchi S., Vincenti A., Messina F., Parenti M., Scasso A., Campatelli A. Albendazole treatment of human hydatid disease. // Scand. J. Infect.Dis. 1997 - V.29. - P. 165 - 167

151. Lymbery A.J. Genetic diversity, genetic differentiation and speciation // In: Echinococcosis and Hydatid Disease (eds Thompson R.C.A., Lymbery A.J.), Walligford: CAB Int. 1995. - P. 51-87.

152. Macpherson C. N., Suleman M. Experimental infection of the baboon (Papio cynocephalus) with Echinococcus granulosusof camel, sheep and goat origin from Kenya. // J. Helminthol., -1986. V.60. - P.213 - 217

153. Martini E. Wege def Seuchen Ledensgemeinschaft. Stuut-gart. 1936.- V. 96 - P.36

154. Matsuo K. et al. Development and sexual maturation of Echinococcus vogeli in an alternative definitive host, Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus) // Acta Trop. 2000. -V.75. - № 3. - P.323-330.

155. Macpherson C.N.L. An active intermediate host role for man in the life cycle of Echinococcus granulosus in Turkana, Kenya // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1983. - V. 32. - P. 397-404.,

156. Macpherson C.N.L. Ecological and experimental evidence of wildlife cycles of Echinococcus spp. In Africa // XXth Int. Congress of Hydatidology, 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. -2001.- P. 91.

157. McManus D.P., Bryant C. Biochemistry and physiology of Echinococcus. / In:The biology of Echinococcus and Hydatid Disease. (Edited by Thompson R.C.A.). London: George Allen & Unwin.- 1986. - P.114 - 142

158. McManus D.P., Smyth J.D. Differences in the chemical composition and carbohydrate metabolism of Echinococcus granulosus (horse and sheep strains) and E.multilocularis // Parasitol. 1978. - V. 77. - P.103-109

159. McManus D.P., Smyth J.D. Isoelectric focusing of some enzymes from Echinococcus granulosus (horse and sheep strains) and E. multilocularis // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1979. - V.73. - P. 259-265.

160. Mehlhorn H. et al. On the nature of the proglottids of cestodes: a light and electron microscopic study on Taenia, Hy-menolepis and Echinococcus // Z. ParasitKde. 1981. - V. 65. -P. 243-259

161. Mehlhorn H. et al. Proliferation and metastases formation of larval Echinococcus multilocularis. II. Ultrastructural investigations // Z. ParasitKde. 1983. - V. 69. - P. 749-763

162. Morseth D.J. Chemical composition of embryophoric blocks of Taenia hydatigena, Taenia ovis and Taenia pisiformis eggs // Exp. Parasitol. 1966. - V. 18. - P.347-354

163. Morseth D.J. Fine structure of the hydatid cyst and proto-scolex of Echinococcus granulosus // J. Parasitol. 1967. — V. 53. - P.312-325.

164. Movsessian S. O., Nikogosian M., Gevorgian A. Geographical distribution of Echinococcus granulosus and the strans'occurrence in Russian Federation and CIS. / In Main achievements and perspectives of Parasitology development.-2004. P.175 - 183.

165. Nicksch-Rosenegk M. V., Frank В., Lucius R. Discrimination of Echinococcus multilocularis starins be two different molecular biology methods // XVII Inte. Congress of Hydatidol-ogy. Cyprus, 1995. - P.156

166. Nieland M.L. Electronmicroscope observations on the eggs of Taenia taeniaeformis // J. Parasitol. 1968. - V. 54. - P. 957-969.

167. Ortlepp R.J. South African helminths. Part I. //Onderstepoort of Vet. Sci. 1937. - V. 9. - P. 311-366.

168. Pathak K.M.L., Gaur S.N.S. Effect of immunosuppressants and antihistaminics on the development of Taenia solium in golden hamsters // Indian J. of Vet. Med. 1985. - № 5. - P. 10-12

169. Paul M., Stefaniak J. Detection of specific Echinococcus granulosus antigen 5 in liver cyst bioptate from human patients. // Acta trop. 1997. - V.64. - P.65 - 67.

170. Ponce Gordo F., Cuesta Bandera C. Differentiation of Spanish strains Echinococcus granulosus using larval rostellar hook morphometry // Int. J. Parasitol. — 1997a. V.27, № 1. -P. 41-49

171. Ponce Gordo F., Cuesta Bandera C. Echinococcus granulosus: characterization of the Spanish strains in vitro vesicular development // J. Helminthol. 1997b. - V.71, № 1. - P. 61-67.

172. Porretti D-j. Felleisen E., Grimm F., Pfister M., Teuscher F., Zuercher C., Reichen J., Gottstein B. Differential immunodi-agnosis between cystic hydatid disease and other cross-reactive pathologies. //Am.J.Trop.Med.Hyd. 1999. - V.60. - P.193 -198.

173. Posselt A. Sur la nature de l'echinococcus et la differentiation avec l'echinococcuse hydatique.//Cong. Intern. Hath. Сотр. Ahenes.- 1936. P.15.

174. Rausch R. L., Schiller E. L.Studies on the helminth fauna of Alaska. XXV. The ecology and public health significance of Echinococcus sibiricensis Rausch and Schiller. St. Lawrence Island. Parasitol. 1956.- №46.- P.395

175. Rausch R.L. A consideration of intraspecific categories in the genus Echinococcus Rudolphi, 1801 (Cestoda: Taeniidae) // J. Parasitol. 1967. - V. 53. - P. 484-491

176. Rausch R.L. Studies on the helminth fauna of Alaska. XX. The histogenesis of the alveolar larva of Echinococcus spp. // J. Infect. Dis. 1954. - V.94. - P.178-186.

177. Rausch R.L. «Taeniidae» // In: «Diseases transmitted from animals to man», W.F. McCulloch, P.R. Schurrenberger (eds.). Springfield, 111.: Thomas. 1975. - P. 678-707

178. Rausch R.L. Life cycle patterns and geographic distribution of Echinococcus species// In:The biology of Echinococcus and hydatid disease (ed. Tompson R.C.A.) George Allen and Unwin, London. 1986. - P.44 - 80.

179. Rausch R.L., Rausch V.R., D'Alessandro A. Discrimination of the larval stades of Echinococcus oligarthrus (Diesing, 1863) and E.vogeli Rausch and Bernstein, 1972 (Cestoda: Taeniidae) // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1978. - V.40. - № 6. - P. 1195-1202

180. Rausch R.L., Richards S.H. Observations on parasite-host relationships of Echinococcus multilocularis Leuckart, 1863, in North Dakota // Can. J. Zool. 1971. - P. 1317-1330.

181. Rinder H. et al. Limited range of genetic variation in E.multilocularis // J. Parasitol. 1997. - V. 83.- P. 1045-1050

182. Sakamoto T. Electron microscopical observations on the egg of Echinococcus multilocularis // Mem. Fac. Agr. Kago-shima Univ. 1981. - V. 17. - P. 165-174.

183. Sakamoto Т., Sugimira M. Studies on echinococcosis. XXIII. Eleectron microscopical observations on histogenesis of larval Echinococcus multilocularis // Jap. J. Vet. Res. 1970. -V. 18. - P. 131-144.

184. Schantz P.M., Schantz P.M. Echinococcosis // In CRC handbook series in zoonoses, Section C: Parasitic zoonoses, J. Steel (ed.). Boca Raton, Fla: CRC Press. 1982. - V.l. - P. 231-277

185. Schantz P.M., Van den Bossche H., Eckert J. Chemotherapy for larval echinococcosis in animals and humans: report of a workshop // Z. ParasitKde. 1982. - V.67. - P. 5-26

186. Schiller E.L. Studies on the helminth fauna of Alaska. XXVI. Some observations on the cold resistance of eggs of Echinococcus sibiricensis. Rabsch and Schill.// J. Parasitol. -1955. V. 41. - P. 578 - 582

187. Schwabe C.W. Epidemiology of echinococcosis // Bull. WHO. 1968. - V. 39. - P. 131-135.

188. Scott JC, Stefaniak J, Pawlowski ZS, McManus DP. Molecular genetic analysis of human cystic hydatid cases from Poland: identification of a new genotypic group (G9) of Echinococcus granulosus. // Parasitology. 1997. - V.114 (Pt 1). - P. 37-43

189. Slais J. Functional morphology of cestode larvae // Adv. Parasitol. 1973. - V. 11. - P. 395-480

190. Slais J., Vanek M. Tissue reactions to spherical and lobular hydatid cysts of Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) // Folia Parasitol. 1980. - V. 27. - P. 135-143.

191. Smyth J.D. Changes in the digestive surface of cestodes during larval/adult differentiation // In: «Functional aspects of parasite surfaces, Taylor & Muller (eds.), Symp. Br. Soc. Parasitol. Oxford: Blackwell Scientific. 1972. - V. 10. - P. 41-70.

192. Smyth J.D. Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis: in vitro culture of the strobilar stages from pro-toscoleces // Agnew. Parasitol. 1979. - V. 20. - P. 137-147.

193. Smyth J.D. Lysis of Echinococcus granulosus by surface-active agents in bile and the role of this phenomen in determining host-specificity in helminthes // Proc. Roy. Soc., B. 1962. - V.156. - P. 553-572.

194. Smyth J.D. The physiology of cestodes. Edinburgh: Oliver & Boyd, 1969.

195. Smyth J.D., Davies Z. Occurrence of physiological strains of Echinococcus granulosus demonstrated by in vitro culture ofprotoscoleces from sheep and horse hydatid cysts // Int. J. Para-sitol.-1974. V. 4. - P. 443-445.

196. Smyth J.D., Howkins А.В., Barton M. Factors controlling the differentiation of the hydatid organism, Echinococcus granulosus into cystic or strobilar stages in vitro // Nature, London. 1966. - V.213. - Pi 1374-1377

197. Smyth J.D., Miller H.J., Howkins A.B. Further analysis of the factors controlling strobilisation, differentiation and maturation of Echinococcus granulosus in vitro // Expl. Parasit. — 1967. V.21. - P. 31-41

198. Smyth J.D., Smyth M.M. Natural and experimental hosts of Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis, with comments on the genetics of speciation in the genus Echinococcus // Parasitol. 1964. - V. 54. - P. 493-514.

199. Smyth J.D., Smyth M.M. Self insemination in Echinococcus granulosus in vivo // J. Helminthol. 1969. - V. 43. - P. 383-388.

200. Sweatman G.K. и Williams R.J. Comparative studies on the biology and morphology of Echinococcus granulosus from domestic livestock, moose and reindeer // Parasitol. 1963. - V. 53.-P. 339-390.

201. Thompson R.C.A. The importance of taxonomy in echinococcosis // XIX Int. Congress of Hydatidology. Argentina, 1999. - P. 137 - 145

202. V 216. Thompson R.C.A. Biology and speciation of Echinococcusgranulosus // Aust. Vet. 1979. - V.55. - P. 93-98

203. Thompson R.C.A. Biology and systematic of Echinococcus // In: Echinococcosis and Hydatid Disease (eds Thompcon R.C.A., Lymbery A.J.) Walligford: CAB Int. - 1995. - P. 150.).

204. Thompson R.C.A. Echinococcus and Giardia: variation on a theme // Int. J. Parasitol. 1991. - V.21. - P. 291-297

205. Thompson R.C.A. Growth, segmentation and maturation of the British horse and sheep strains of Echinococcus granulosus in dogs // Int. J. Parasitol. 1977a. - V. 7. - P. 281-285.,

206. Thompson R.C.A. Growth, segmentation and maturation of the British horse and sheep strains of Echinococcus granulosus in dogs // Int. J. Parasitol. 1977a. - V.7. - P. 281-285

207. Thompson R.C.A. The Mongolian gerbil (Meriones ungui-culatus) as a laboratory host for the cystic stage of Echinococcus granulosus of British horse origin // Int. J. Parasitol. -1976. V.6. - P. 505-51 1.

208. Thompson R.C.A., Eckert J. Observations on Echinococcus multilocularis in the definitive host // Z. ParasitKde. 1983. -V.69. - P. 335-345.;

209. Thompson R.C.A. «Biology of Echinococcus spp. Taxonomy.» // Archiv. int. de la hidatid., 18th Int. Cong, of Hydatidol., 1997, Lisboa-Portugal. 1997. - V. 32. - P. 121. 125.

210. Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M. Intraspecific variation in Echinococcus granulosus: the Australian situation and perspectives on future // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1982. - V. 76. - P. 13-16.m

211. V 225. Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M., Eckert J. Observations on Echinococcus granulosus of cattle origin in Switzerland // Int. J. Parasitol. 1984. - V.14. - P. 283-291.

212. Thompson R.C.A., Lymbery A. J. Echinococcus: biology and strain variation. //J. Parasitol. 1990. - V.4. - P. 457 -470.

213. Thompson R.C.A., Reynoldson J.A., Manger B.R. In vitro and in vivo efficacy of epsiprantel against Echinococcus granulosus // Res Vet Sci. 1991b. - V. 51 (3). - P. 332-334.

214. Thompson R.C.A., Smyth J.D. Attempted infection of the rhesus monkey (Macaca mulatta) with the British horse strain of Echinococcus granulosus // J. Helminthol. 1976. - V. 50. - P. 175-177.

215. Thompson R.C.A., Smyth J.D. Equine hydatidosis: a review of the current status in Great Britain and the results of an epidemiological survey//Vet. Parasitol. 1975. - V. 1. - P. 107127.

216. Venkatesan P. Albendazole. //Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 1998. - V. 41. - P. 145 - 147

217. Verster A. Hydatidosis in the Republic of South Africa // South African J. Sci. 1962. - V.58. - P. 71-74.

218. Verster A. Review of Echinococcus species in South Africa // Onderstepoort of Vet. Sci. 1965. - V.37. - P. 7-118.

219. Vogel H. On echinococcus multilocularis in Southern Germany II. Development of the larval stages and histopa-thological reactions in common vole, microtus arvalis (author's transl) // Tropenmed. Parasitol. 1977. - V.28. - P. 409-427.

220. Vogel H. Uber den Echinococcus multilocularis Sud-deutschlands. I. Das Bandwormstadium von Stammen menschlicher und tierischer Herkunft // Z. Tropenmed. und Parasitol. 1957. - V.8. - P. 404-456.

221. Vogel H. Wie wachst der Alveolarechinokokkus. // Tropenmed. Parasitol. 1978. - V.29. - P. 1-11.

222. Vogel H. Uber die spezifische Natur und Entwiklung des Alveolar Echinococcus in Europa. // Arch.int.Hydatid. 1957 b. № 16. P. 517.

223. Webster G.A. & Cameron T.W.M. Observations on experimental infections with Echinococcus in rodents // Can. J. Zool. 1961. - V. 39. - P. 877-891

224. WHO 1992. Report of the WHO Workihg Group Meetihg Medicine and Chemotherahy of Alveolar and Cestic Echinococcosis. WHO.CDS.VPH. 1993. - 118 pp.

225. WHO, WHO 1979 // Parasitic zoonoses. Report of WHO expert committee with the participation of FAO. WHO, Geneva, Tech Rep Ser No. 637

226. WHO/ FAO/ UNEP 1981 // Guidelines for surveillance, prevention and control of echinococcosis/ hydatidosis, WHO VPH/ 81.28. Geneva: WHO

227. Williams R.J., Sweetman G.K. On the transmission, biology and morphology of Echinococcus granulosus equinus, a newsubspecies of hydatid tapeworm in horses in Great Britain // Parasitol. 1963. - V.53. - P. 391-407

228. Wilson J.F., Diddams A.C., Rausch R.L. Cystic hydatid disease in Alaska. A review of 101 autochthonous cases of Echinococcus granulosus infection // Am. Rev. Resp. Dis. -1968. V.98. - P. 1-15.

229. Wilson J.F., Rausch R.L. Alveolar hydatid disease. A review of clinical features of 33 indigenous cases of Echinococcus multilocularis infection in Alaskan Eskimos // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1980. - V. 29. - P. 1340-1355

230. Young E. Echinococcosis (hydatidosis) in wild animals of the Kruger National Park // J. South African Vet. Ass. 1975. -V.46. - P. 181-183.

231. Zhang L. (a), Eslami A., Hosseini S. H., McManus D. P. Indication of the presence of two distinct strains of Echinococcus granulosus in Iran by mitochondrial DNA markers // Amer. J. Trop. Med. And Hyg. 1998. - V.59. - P. 171 - 174.

232. Zhang L. (b), Chai J. J., Jiao W., Osman Y., McManus D. P. Mitochondrial genomic markers comfirm the presence of the camel strain ( G6 genotype) of Echinococcus granulosus in north-western China // Parasitology. 1998. - V. 116. - P. 29 -33.

Информация о работе

Черникова, Евгения Анатольевна
доктора биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.19

Диссертация

Паразитарная система Echinococcus spp. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы