Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКУЛОВИРУСОВ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ЧИСЛЕННОСТИ ВРЕДНЫХ НАСЕКОМЫХ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКУЛОВИРУСОВ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ЧИСЛЕННОСТИ ВРЕДНЫХ НАСЕКОМЫХ"

А-ЗШ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА /

И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени КА.ТИМИРЯЗЕВА

на правах рукописи ЕРМАКОВА Надежда Ивановна

ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКУЛОВИРУСОВ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ЧИСЛЕННОСТИ ВРЕДНЫХ НАСЕКОМЫХ 06.01.11 - защита растений от вредителей и болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА 1995

Работа выполнена на кафедре энтомологии Новосибирского Государственного аграрного университета и Сибирском научно - исследовательском институте земледелия и химизации сельского хозяйства ( СибНИ-ИЗХИМ).

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор М.В. Штерншис.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Р Р. Азизбекян; доктор биологических наук, профессор Г. А Бегляров; доктор биологических наук, профессор Л.М.Тарасевич .

Ведущая организация - Институт систематики и экологии животных Сибирского отделения Российской Академии наук. ^

Защита диссертации состоится /¿-.вМЯ^Д 1995 г. в//'..час. на заседании диссертационного совета Д. 12035 09 в Московской сельскохозяйственной академии имени КА. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва, Тимирязевская ул., 49, Ученый совет МСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.

Автореферат разослан 1995 г.

Ученый секретарь днссертационног совета -

доцент В А. Шкаликов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Мировой опыт показывает, что любая смете ма земледелия в условиях интенсификации сельского хозяйства невозможна без проведения защитных мероприятий как фактора, определяю* щего высокие урожаи. Однако основными средствами защиты растений настоящее время являются неизбирательные химические, что приводит к распространению пестицидов во внешней среде. Следствием являются уничтожение полезной энтомофауны и отравление людей пестицидами (Мельников, 1977; De Fanti, 1989; Чесноков, 1990). Таким образом, инте ресы защиты растений вступают в противоречия с интересами охраны окружающей среды и грозят "экологической катастрофой" ( Дубинин, 1977; Голышин, 1985; Celli, 1986; Coutin, 1987). В связи с этим большое значение придается биологическим средствам защиты растений в экологизации сельского хозяйства, проблемы которой обсуждались на Всероссийском научно-практическом совещании" Экологически безопасные и беспестицидные технологии получения растениеводческой продукции", состоявшемся в Краснодаре в 1994 г.

Известно,- что в биоценозах, не подвергавшихся антропогенному воздействию, регуляция численности вредных видов происходит в основном за счет энтомопатогенов, часто вызывающих острые эпизоотии (Гулий, 1973;Тарасевич, 1985; Maramorosch, Sherman, 1985; Caballero, Aldebis, 1992). В связи с этим появился интерес к инфекционным агентам, способным стать основой микробиологических препаратов. Доминировали по всем позициям препараты на основе Bacillus thuringiensis. Однако недав-

. ЦЕНТРАЛЬНАЯ ГАУЧ !' Í) С. ¡¿/»ОТЕКА f.:cc4. *..ь . оо-з академии

нее обнаружение устойчивости у чешуекрылых к B.thunngiensis (Donald, 1992) вызвало беспокойство специалистов, в связи с чем повысился интерес к энтомопатогенным вирусам. Последние наиболее широко распространены в природе (известно более 600 видов насекомых мировой фауны, у которых зарегистрированы вирусные болезни), вызывая эпизоотии разного характера, установлена высокая селективность действия патогенов.

Несмотря на успехи в области изучения энтомопатогенных вирусов, достигнутые в последние 10-15 лет, имеются косвенные свидетельства того, что рассматриваемая область знания находится еше на начальных этапах развития. Даже такие виды насекомых, как медоносная пчела и тутовый шелкопряд, являющиеся предметом длительных и многочисленных исследований, нельзя считать удовлетворительно изученными с точки зрения вирусной патологии, так как у них все еше продолжается выделение новых форм вирусов Некоторые важные в хозяйственном отношении насекомые оказались совершенно неизученными. Так, неисследованным остается луговой мотылек - Pyrausta (Loxostege) sticticahs L

Следует признать, что результаты от применения вирусных препаратов трудно предсказуемы и нестабильны, что сдерживает их широкое применение в практике защиты растений. В связи с этим необходимы исследования биоэкологических взаимоотношений вирусов с насекомыми, изучение изменений состояния популяций фитофагов и связанных с ними спонтанных вирусных эпизоотий, разработка способов управления численностью насекомых с учетом природных механизмов ограничения численности, поиск способов повышения эффективности микробиологического контроля вредных видов, в том числе выяснение потенциальных возможностей сочетаний энтомопатогенов с разным механизмом действия. Актуальными остаются выделение и идентификация новых патогенных микроорганизмов из важных в хозяйственном отношении видов

вредителей. Наконец, не используются в полной мере возможности самих-патогенов вирусной природы при создании препаратов на их основе. Следовательно, необходимы исследования по биотехнологии вирусных препаратов.

Таким образом, объективная оценка роли вирусов как регуляторов численности вредных насекомых и возможность использования их в качестве высокоэффективных агентов биологического контроля сдержи-. ваются неизученностью целого ряда ключевых вопросов.

' Цель и задачи исследований. Основная цель исследований - экологическое обоснование ошимизации использования энтомопатогеиных ви-' русов для контроля численности вредных видов (на примере лугового мотылька) на основе изучения их биоэкологических свойств и закономерностей проявления вирусных заболеваний. .

Основные задачи:

- поиск перспективных штаммов бакуловнрусов хозяйственно важных вредителей-фитофагов и изучение их биоэкологических свойств,

- определение роли энтомопатогенов в регуляции численности лугового мотылька,

- разработка приемов непрерывного разведения лугового мотылька в лабораторных условиях на искусственной питательной среде и анализ состояния популяции фитофага, ~

- выявление некоторых аспектов внуфипопупяционного механизма управления численностью насекомых на примере лугового мотылька;

- поиск путей повышения эффективности энтомопатогенов,

- разработка биотехнологии вирусных препаратов,

- испытание различных препаративных форм вирусных препаратов в полевых условиях и разработка тактики биологического контроля численности вредных видов.

Научная новизна. Впервые выявлены, выделены и идентифицированы вирусы ядерного полиэдроза (ВЯП) и гранулеза (ВГ) у лугового мотылька - ( Р. зисмса!» Ь.) в Сибирском регионе, причем ВГ у этого вредителя ранее не был известен. Изучены биоэкологические свойства выделенных вирусов и определена их роль в регуляции численности этого особо опасного вредителя.

На основании биоэкологических исследований 58 поколений лугового мотылька, полученных в лабораторных условиях, обнаружена циклическая динамика основных репродуктивных параметров популяции и заболеваемости вирусами, взаимообусловливаюшими друг друга. На основании полученных результатов высказана гипотеза, что в природных условиях обнаруженный механизм должен приводить к устойчивым циклическим колебаниям численности

Впервые изложены представления о ведущей роли эндогенных механизмов (бакуловирусы как часть структуры популяции) в регуляции численности насекомых и тактике использования энтомопатогенов для ограничения численности фитофагов.

Получены новые сведения о том, что латентное вирусоносительство является нормой для чешуекрылых насекомых и под влиянием эндогенных механизмов периодически переходит в остро протекающие заболевания, причем возбудители заболевания (бакуловирусы) отличаются по биологическим свойствам. Обнаружены изменения чувствительности лугового мотылька к специфическим энтомопатогенным вирусам на разных фазах развития популяции Показано, что в постэпизоотический период восприимчивость к патогенам падает и повышается по мере приближения к следующему массовому вирусному заболеванию.

Разработаны методологические основы использования смешанных инфекций для биологического контроля численности вредных фитофагов. Выявлен оптимальный вариант смешанной вирусно-бактериальной ин-

фекции с пролонгированным сроком действия на последующие поколения лугового мотылька.

Получены новые сведения о роли фермента с хитиназной активностью в усилении энтомоцидного действия бакуловирусов и разработаны новые формы вирусных препаратов.

Практическая ценность работы. Выделены высокоэффективные штаммы ВГ и ВЯП из лугового мотылька ( P. sticticalis L.), которые защищены патентами (Ермакова, 1987; Ермакова, Штерншис, 1992). По результатам токсикологических исследований штаммы не обладают патогенными свойствами для теплокровных и могут быть использованы в качестве инфекционного начала вирусных препаратов.'

На основе ВГ разработан регламент производства экологически ' чистого вирусного препарата (официальное название - ВИРИН-ГЛМ - -жидкий), предназначенный для биолабораторий. ^

Установлена возможность использования природных минералов - - * . цеолитов в качестве компонента сухой формы препаратов на основе бакуловирусов. Указанный минерал обладает способностью защищать инфекционное начало от вредного воздействия факторов внешней среды, в том числе УФ-облучения.

Предложен состав новых форм вирусных препаратов с усиленной эн-томоцидной активностью и сокращенным инкубационным периодом.'

Разработана методика круглогодичного выращивания лугового мо- • тылька на искусственной питательной среде (ИПС) оригинального состава с целью накопления биомассы бакуловирусов - основы вирусных препаратов. Кроме того, луговой Мотылек успешно апробирован в качестве тест-объекта для оценки качества биопрепаратов на Бердском заводе биопрепаратов, что нашло свое отражение в методических рекомендаци-

ях (Москва, 1990), Р. зИсиса!» включен в технические условия на производство препарата ЛЕСТ.

Предложена тактика борьбы с вредными насекомыми на основе использования информации о состоянии популяции вида.

Положения, выносимы" на защиту:

_- целесообразность поиска перспективных штаммов бакуловирусов у

хозяйственно важных вредителей-фитофагов и изучения их биоэкологических свойств,

- роль энтомопатогенов в регуляции численности лугового мотылька,

- циклические изменения состояния лабораторной популяции лугового мотылька,

- эндогенные механизмы циклической динамики основных репродуктивных параметров популяции и заболеваемости вирусами, взаимно обусловливающими друг друга,

- доказательства возможности повышения эффективности энтомопатогенов,

- экологическое обоснование биотехнологических возможностей получения и применения биологического препарата на основе ВГ лугового мотылька и его усовершенствованных модификаций для контроля численности этого опасного вредителя.

Апробация работы Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на всесоюзных конференциях по биологическим средствам защиты растений (Кишинев, 1984; Минск, 1984; 1990; Рига, 1988; Новосибирск, 1988; Веяегож, 1986, 1989; Москва. 1981), Всесоюзной конференции по промышленному разведению насекомых (Москва, 1989), советско-болгарском симпозиуме по биологической защите растений (Пловдив, 1988), Втором симпозиуме стран членов СЭВ по микробным пестицидам (Москва, 1990), шестом и седьмом съездах энтомологов Сибири (Новосибирск, 1985; 1989), Всероссийском научно - произвол-

ственном совещании "Экологически безопасные и беспеспшидные технологии получения растениеводческой продукции" (Краснодар, 1994), а также совещаниях для работников защиты растений различных краев и • областей.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 34 работы, в том числе патенты, методические рекомендации. Экспериментальные данные, представленные в диссертации, получены лично соискателем и в соавторстве с сотрудниками, работавшими под его руководством, и в процессе творческих контактов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 310 страницах машинописного текста, содержит 31 рисунок, 42 оригинальные фотографии, 22 таблицы; состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, пяти экспериментальных глав, заключения и выводов. Список литературы включает 354 наименования, из них 172 - иностранных авто-- ' ров. В приложении представлена научно-техническая документация получения и применения ВИРИН-ГЛМ-жидкого, а также акты испытаний препарата.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Вирусные болезни насекомых и перспективы их использования для биологического контроля вредных видов

(обзор литературы)

Приведены сведения об основных свойствах бакуловирусов. Рассматриваются данные по морфологии, вирулентности, видовой специфичности патогенов, патогенезу и патоморфолопш вирусных болезней насекомых. Анализируются вопросы биоэкологических связей вирусов с насекомыми,

в том числе с динамикой численности хозяина. Показаны существующие препятствия для широкого внедрения вирусных препаратов в сельскохозяйственное производство и пути их преодоления. Рассматриваются вопросы, связанные с производством и применением биопрепаратов на основе энтомопатогенных вирусов. Дается оценка современного состояния вирусологического контроля вредных видов.

2. Объекты и методы исследований

Объекты исследований - фитофаги-вредители овощных и плодовых культур: луговой мотылек (Р. зИсисаЬз Ь.). капустная совка (Матезна Ьга8$1сае Ь.) и белянка (Р1еш Ьгаздсае Ь.), яблонная плодожорка (Сагро-сарза рошопеИа Ь.), а также бакуловирусы этих вредителей (ВЯП и ВГ): природные цеолиты трех месторождений (Пегасского, Холинского, Рад-денсхого); фермент с хитиназной активностью; бактериальный препарат лепидоцид; антиоксиданты.

Сбор, учет живых, больных и погибших насекомых осуществляли по методикам, рекомендуемым для каждого вида насекомого (Евлахова, Швецова. 19б5;Трибель, 1989).

Для выявления и идентификации патогенов, а также определения локализации вирусов в тканях насекомых и ульта структурных изменений последних применяли методы световой, эмиссионной и сканирующей электронной микроскопии (Уикли, 1975; Чухрий, 1982; Гулий, Рыбина, 1989)

Методика непрерывного выращивания лугового мотылька на ис кусственной питательной среде (ИПС) включала разработку питательной среды и условий содержания фитофага (Ермакова, 1989; Ермакова, Киншт, Сычужникова, 1992). В качестве изменяемых взято семь компонентов среды, содержание которых задавали на трех уровнях - нулевом, среднем и максимальном (табл.1). Экспериментальные составы сред вы-

бирали на основе ортогонального множества латинских квадратов шестого порядка. В результате проверено 19 ИПС. В эксперименте фиксировали 17 энтомологических показателей (параметров). Данные обрабатывали методом главных компонент (Браверман, Мучник, 1983) на ЭВМ БЭСМ-6. В результате разработаны ИПС дня выращивания гусениц лугового мотылька и методика непрерывного лабораторного разведения.

Таблица 1

Компоненты ИПС (факторы) и их содержание

Компонент Фактор Сода зжание, г/л

Люцерна (мука) Х( 0 30 60

Отруби Х2 0 17 34

Дрожжи пивные сухие Хз 0 15 30

Соевая мука Х4 0 42.5 75

Масло подсолнечное Хз 0 1.5 • 3

Аскорбиновая кислота X« 0 2.5 5

Личинки домашних мух (мука) X? 0 7,5 15

Установившуюся популяцию лугового мотылька анализировали в течение 58 последовательных генераций. Полученные данные обрабатывали методом главных компонент (Кендалп, Стьюарт, 1976). Объектами служили поколения, признаками - характеристики состояния популяции. В таблице 2 приведены собственные векторы (XI ООО) корреляционной матрицы, где 1- 3 • номера главных компонент, 1-16 - характеристики состояния популяции (признаки).

Экспериментальное заражение насекомых проводили в лабораторных условиях скармливанием заданного количества корма (ИПС), обработанного суспензией патогена. Учет гибели проводили, как правило, на 3-,

5-, 7-, 10 - и 15 - е сутки. Тигр полиэдров определяли в камере Горяева. Для подсчета гранул использовали метод Виноградского- Шульгиной -Брида (1985), а также пользовались электронным микроскопом.

Таблица 2

Собственные векторы (хЮОО) корреляционной матрицы (1-3 - номера

векторы; I - 16 - признаки)

№ Признак Главные компоненты

1 2 3

1 количество фертильных яиц, % 351 * 008 065

2 гибель гусениц 1-2 возраста 273* -087 145

3 » » 3-4» » 317* -160 055

4 » » 5 » » 331* 053 033

5 длительность генерации 038 -211 501*

6 масса куколок, мг -017 391* -274*

7 сигма массы, мг 169 217 234

8 вылетело самок нормальных -328* 107 057

9 » » деформированных 326* 082 -410*

10 вылетело самцов нормальных -340* 093 085

11 » » деформированных 322* 088 -367*

12 гибель пронимф 250 -024 411*

13 осталось живых пронимф -171 -363* -117

14 гибель куколок 172 282* 237*

15 плодовитость имаго -053 515* 130

16 сигма плодовитости -073 456* 146

дисперсия 6.07 3.03 1.26

% 37.9 18.9 7.9

Степень вирулентности определяли по ЛКзо. которую рассчитывали по формуле Кербера и системе пробитов (Гулий, Иванов, Штерншис, 1985). Одновременно в опытах устанавливали ЛТзо. Помимо прямых способов определения инфекционной активности бакуловирусов изучали возможность косвенной оценки этого признака биохимическими методами. Для

этого извлеченные по методике Л.Г. Щеголевой и Ю.Б.Филлиповича (1969) органы и ткани насекомых замораживали жидким азотом и гомогенизировали. Наличие конечного продукта перекисного окисления ли-пидов - малонового диальдегида - регистрировали по реакции с 2 - тио-барбитуровой кислотой. Количество мапонового ди альдегида рассчитывали исходя из молярного коэффициента экстинкции 1,56*10s см 1 М1.

Влияние моно- и смешанных инфекций на насекомых определяли оценкой параметров распределений методом максимального правдоподобия решением экстремальной задачи (Кендалл, Стьюарт, 1976; Захс, 1976). Управляемыми факторами опыта служили концентрации патогенов (ВГ, ВЯП и лепидоцида), последовательность их внесения и температура.

Оптимальные условия накопления вирусной биомассы отрабатывали при постановке экспериментов на гусеницах разных весовых групп, при . этом рассматривали четыре фактора ( температура, влажность, весовая группа, содержание вируса в ИПС ) на двух уровнях, определяли личиночный эквивалент (ЛЭ). . - .

Для стабилизации инфекционных свойств бакуловирусов и опытных партий препаратов на их основе использовали протекторы фенозан, гидрохинон, 2,5 - диметилрезорцин, ионол в конечной концентрации 0,1%.

Устанавливали оптимальную тонину помола цеолитовых туфов, а также стабильность и смачиваемость рабочей суспензии сухой препаративной формы ВИРИН-ГЛМ. \„

Полевые испытания препаративных форм ВИРИН-ГЛМ и смешанных вирусных и внрусно-бактериальных композиций осуществляли по методике Б А.Доспехова (1985) на посевах люцерны и моркови. Учеты проводили по общепринятым методикам (Лахидов, 1976; Белов, 1977; Романен-ко, Гринберг, 1985). Степень повреждения растений учитывали по шестибальной шкале, фитотоксичность - по шкале КА.Гара (1963).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. Бакуловирусы в популяциях некоторых насекомых - вредителей сельскохозяйственных культур

Выявлены и выделены ВЯП и ВГ из лугового мотылька (Иркутская, Новосибирская, Восточно-Казахстанская области), причем ВГ выделен впервые, депонирован и хранится в коллекции ВИЗР, зашишен патентом России (патент СССР № 1381749, Ермакова, 1991) Кроме того, выявлены и выделены ВЯП у капустной совки и ВГ у белянки вирусная патология которых довольно полно изучена, в том числе в ранних работах автора (Гулий .Северина, 1971;Северина, 1973: Северина, Крупко, 1975:Северина. 1977) и представляли интерес как сочлены одного биоценоза с основным изучаемым объектом - Р. эпспсаЬз.

Установлено, что при полиэдрозе лугового мотылька формируются включения в виде ромбических тетраэдров, кубооктаэдров, куботетра-эдров (Ермакова. Киншт, 1986). В белковый матрикс включены палочковидные вирионы, расположенные пучками, число пучков в плоскости среза варьирует от 10 до 30. Длина вирионов 246 ± 12 нм, ширина -53+4 нм.

Выделенные включения ВГ отнесены к округлым формам криво-гранных кристаллов, внутри которых заключена одна вирусная частица размером 0,29 ± 0,04 * 0,06 ± 0,001 ммк; величина гранул 0,48 ± 0,05 * 0,23 ± 0,06 ммк.

Инфекционная активность первично выделенных ВЯП и ВГ лугового

мотылька, выраженная в Л Кзо, составила 0,63 и 0,26 * 103 пол. гранАш соответственно. Установлена корреляция между количеством малонового диальдегида - продукта перекисного окисления липидов - в кишечнике гусениц, зараженных ВЯП и ВГ(8,34 ± 0,02 и 83,12 ± 0,28 моль-ЧСТ1 соот-

ветственно) и большей вирулентностью последнего при биологическом . тестировании.

При определении специфичности выделенных бакуловирусов лугового мотылька придерживались следующих принципов: использовали насекомых, занимающих одну экологическую нишу (М. Ьгавзюае Ь., Р.Ьгамюае Ь., Р. 511сг1саНз Ь.), заражали представителей одного семейства (ЕрЬезйа киесЬгаеИа Ь., ваНепа те11опе11а Ь., Р. висисаКз Ь.). Обнаружена высокая специфичность выделенных энтомопатогенов: ВГ поражает только представителей близких родов семейства РугаПс1ае (мельничная огневка): ВЯП вызвал вирусное заболевание у капустной совки. Однако микроскопический анализ выявил морфологическое отличие введенных полиэдров от выделенных из погибших гусениц М. Ьгаввгсае, т.е. в данном случае имеет место активация латентной инфекции.

При экспериментальном полиэдрозе у лугового мотылька вирусные включения формируются в ядрах клеток жирового тела , гемоцитов, эпителия трахей и гиподермы, а также гонадах в перечисленной последовательности.

. Деструктивные изменения при гранулезе наблюдали в клетках жирового тела, эпителия трахей и гиподермы, гемоцитах.

На ультра структурном уровне обнаружено, что столбчатые клетки -среднего отдела кишечника являются местом первичного формирования вирионов, однако полного цикла репродукции вируса с образованием белковых включений не выявлено. Общим характерным признаком вирусного заболевания является формирование виропластов, вегетативных и зрелых форм вируса. Включения ВЯП обнаружены в ядрах пораженных клеток, хотя деструктивные изменения наблюдаются и в цитоплазме. Образование зрелых включений ВГ происходит как в цитоплазме, так ив ядре инфицированных клеток. ' ' ' ,

4, Некоторые аспекты внутрипопуляционного механизма регуляции насекомых на примере лугового мотылька

Массовое размножение лугового мотылька наблюдали в регионе Сибири в 1983 - 1985 гг., в отдельных очагах плотность вредителя достигала 100-120 особей/м2. Маршрутные обследования, проведенные в Иркутской и Новосибирской областях, выявили высокую смертность лугового мотылька от заболеваний, вызванных облигатными патогенами. Помимо бакуловирусов обнаружены микроспоридии и энтомофторовые грибы, однако основной причиной гибели насекомых были энтомопато-генные вирусы (90% и выше).

Несмотря на высокую смертность личинок лугового мотылька первого поколения в Иркутской области (гибли гусеницы 4-5 возрастов), второе поколение было многочисленным, с плотностью 50-60 особей/м2. Анализ гусениц второго поколения показал высокую пораженность ВЯП ("2%) Тем не менее средняя плотность фитофага по зимующему запасу (проним-фы) оставалась высокой (25-30 экземпляров/м2), что, согласно СА.Три -белю (1989), создавало сильную угрозу от гусениц первого поколения. Однако при анализе собранных коконов было установлено, что живые особи составляют 9,7-11,5% общего числа пронимф. Численность гусениц первого поколения оставалась высокой (60-70 особей/м2), однако острая вирусная эпизоотия (ВЯП) уничтожила 94-96% насекомых: второе поколение лугового мотылька было малочисленным, плодовитость имаго составляла 30-40 яиц на самку.

В Новосибирской области в 1984 г в результате деятельности комплекса биотических факторов (ВЯП, ВГ, микроспорндии, энтомофторовые грибы) погибло 96% вредителя.

Обнаруженные наряду с бакуловирусами другие облигатные патогены присутствовали в популяции в виде смешанных с вирусными инфекций.

Моноинфекции представлены исключительно бакуловирусами (ВЯП и ВГ). Микроспоридии и энтомофторовые грибы в чистом виде у изучаемого объекта не обнаружены. Установлено, что микроспоридии присутствуют в сочетании с ВЯП, а энгомофторовый гриб отмечен у насекомых с признаками вирусной патологии, но не встречался в сочетании с мик-" роспоридиями. В цепом смешанные инфекции обнаружены у 7-40% насекомых. с обязательным присутствием бакуловирусов, что позволяет рассматривать последние в качестве основных регуляторов численности вида в период массового размножения.

Разработанный метод непрерывного ведения культуры лугового мотылька позволил выявить оптимальные условия получения вирусной биомассы - основы вирусных препаратов. Согласно результатам экспериментов, для максимального получения биомассы ВГ следует использовать гусениц массой 7-10 мг, инфицировать суспензией вируса, смешанной с ИПС из расчета 0,8 * 107 гранул на 1 г среды. Насекомых содержат в термостате при температуре 26°С, влажности 60-80% и 18 - часовом световом дне. Личиночный эквивалент при соблюдении указанных условий равен 7,4-8,1 *1010 гранул-гусеницу, в 1 мг погибшей гусеницы (сырая масса) содержится 0,2 - 0,26*1010 гранул. Гибель насекомых начинается на -шестые сутки и завершается на десятые-одиннадцатые. Максимальный выход биомассы ВЯП получен при заражении гусениц массой 5-7 мг ИПС с содержанием включений 0,8*107 в 1 г среды. При этом личиночный эквивалент равен 0,33-0,62*1010полиэдров/гусеницу, в 1 мг погибшей гусеницы (сырая масса) содержится 1,07-2,1 б* I О8 полиэдров.

Проведены биоэкологические исследования 58 последовательных генераций лугового мотылька, не подверженных, в отличие от природных, воздействию факторов среды, создающих "шумы", так как находились в стабильных абиотических условиях, при постоянной повышенной плотности, в замкнутом пространстве, на ИПС (Ермакова, Сычужникова,

1S

1987; Ермакова, 1992) , без конкурентов. Тем не менее обнаружена периодическая смертность фитофага, причиной которой были бакуловиру-сы (Ермакова, Ефимов, 1995). Этот факт заслуживает особого внимания , поскольку общеизвестно, что энтомопатогенные вирусы способны резко снизить численность насекомых в природных условиях, причем пики подъема и спада численности фитофага коррелируют со вспышками инфекционных заболеваний (Adrade, Habib, 1984; Sun Faren, 1988)

Данные обрабатывали методом главных компонент. Динамика первой главной компоненты, сформированной из признаков, указывающих на явно неблагополучное состояние популяции (повышенная гибель всех фаз насекомого, повышенный относительно среднего вылет деформированных имаго и тл ), изображена на рисунке 1. Компонента демонстрирует четкую цикличность с периодом шесть - девять поколений, ее максимумы совпадают с массовой гибелью насекомых вследствие вирусных эпизоотии. а минимумы соответствуют благополучному состоянию популяций. Такую же четкую цикличность с тем же периодом демонстрирует и вторая главная компонента (см. рис.1.), основной вклад в которую сделали признаки, связанные с проявлением репродуктивного потенциала популяции. Ее максимумы предшествуют максимумам первой и наступают на одно -два поколения раньше.

В фазовом пространстве двух первых главных компонент (рис.2) отчетливо прослеживается циклическая смена состояний популяции. Популяция последовательно проходит через благополучные состояния с постоянно растущим уровнем воспроизводства (левая часть рисунка) к менее благополучному с максимальным уровнем воспроизводства (верхняя часть), после чего следуют эпизоотия с резким снижением репродуктивного потенциала (правая нижняя часть рисунка) и возврат в течение одного - двух поколений к прежнему состоянию.

Динамика состояния популяции в фазовом пространстве первой и третьей главных компонент изображена на рисунке 3. Благополучные поколения в левой части рисунка образуют плотную компактную группу и практически не различаются по значениям третьей компоненты, которую сформировали различия в состоянии популяции тех поколений, на которые приходится массовая гибель насекомых, причем эта гибель на разных циклах происходит по различным сценариям. Поколения с макси-мольным значением третьей компоненты (51 и 44) характеризуются задержкой в развитии особей, преобладающей гибелью на стадии пронимф и куколок и пониженным вследствие этого вылетом деформированных особей, которым удалось дожить до этого.

' Поколения с минимальным значением третьей компоненты (18 и 26) характеризуются, наоборот, ускоренным развитием, пониженной гибелью пронимф и куколок, но повышенным вылетом деформированных особей. То есть во время эпизоотии преобладающая часть популяции гибнет либо на стадии пронимф и куколок, либо на стадии взрослых особей.

Смертность гусениц лабораторной популяции лугового мотылька . происходила синхронно во всех садках, но эпизоотии ни разу не приводили к полной гибели фитофага, а бакуловирусы, вызывающие заболевания, во всех случаях отличались по биологическим свойствам (морфология и ультраструюура, вирулентность, тканевый тропизм).

Обнаружена разная чувствительность насекомых к первично выделенным бакуловирусам в промежутке между вирусными эпизоотаями. Так, в постэпизоотический период (два поколения после вспышки) ЛКл> патогенов составляет 0.5-1 * I О8 полиэдров, гранул/мл, то есть повышается на четыре порядка по сравнению с минимальной (0,5-1 * 104 полхранУмл), зафиксированной за два поколения до вирусной эпизоотии. Средние поколения фитофага (третье - пятое либо третье - шестое) характеризуются

средней чувствительностью к вирусным патогенам - ЛК50 - 0,5-1*10® пол.гранЛт.

В ряде случаев отмечены явления интерференции межцу энтомопато-генными вирусами, что выражалось в обратной зависимости смертности гусениц лугового мотылька от дозы вводимого бакуловируса и невосприимчивости к энтомопатогену при заражении дозой, вызывающей в обычных условиях 50% - ю смертность

Получены важные результаты по циклическим изменениям состояния лабораторной популяции лугового мотылька, которые следует отнести к приоритетным. Установлено, что циклическая смена состояний исследованной лабораторной популяции полностью соответствует цикличности, обычно наблюдаемой в природных популяциях и приуроченной к фазам динамики численности (Ефимов, Галактионов, 1983) Природные популяции так же проходят через благополучные состояния с постепенно возрастающим коэффициентом воспроизводства (фаза подъема), достигающим максимума во время вспышек массового размножения (пик), после чего наблюдаются эпизоотии, резкое понижение численности и репродуктивных возможностей популяции (спад) и более или менее длительно продолжающееся снижение численности или пребывание в состоянии низкой численности (депрессия) вплоть до начала следующего цикла. Однако по условиям эксперимента в описываемой лабораторной популяции никакой динамики численности не было, так как для каждой фазы развития в разных поколениях оставлялось одно и то же число особей.

Так как внешние факторы тоже отсутствовали, то причиной циклической смены состояний в наблюдаемом случае могли быть только сами состояния, т.е. прямое влияние структуры предшествующего состояния

Рис 1 Динамика первых двух главных компонент состояния популяции (ось X - поколения, ось У - значения компонент)

ОБ

-0.4 -0.2 О 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Рис.2. Траектория состояния популяции на фазовой плоскости первых двух компонент (ось X - первая компонента, ось У - вторая компонента) -

»» и

Рис 3 Траектория состояния популяции на фазовой плоскости 1 и 3 главных компонент (ось X - первая компонента, ось У - третья компонента)

популяции на структуру следующего за ним, причем без участия плот-ностно-зависммых механизмов регуляции, однако при непосредственном воздействии вирусов, которые являются наследуемой на уровне генома частью структуры популяции (Ермакова, Ефимов, 1995).

5. Пути повышения эффективности энтомопатогенов

Применение биологических средств защиты растений предусматривает максимальное использование их положительных качеств с учетом механизма взаимоотношений макро- и микроорганизмов, биохимических аспектов взаимодействия, условий сохранности инфекционных свойств патогена - основы биопрепарата. Представлялось целесообразным выявить оптимальные условия сочетания вирусных и бактериальных патогенов для получения необходимого энтомоцидного эффекта на луговом мотыльке.

Анализ собственных и литературных данных показывает, что в случае вирусно-бактериальных инфекций имеют значение концентрации инфекционных агентов, последовательность введения патогенов, физиологическое состояние хозяина, а также температура, при которой содержатся инфицированные насекомые. Оценка параметров полунормального распределения, которому подчиняется процесс гибели лугового мотылька, показала, что наиболее продуктивными по энтомоцидному эффекту являются смешанные инфекции. Последовательное заражение личинок ба-куловирусами с первичным инфицированием ВЯП и через пять суток ВГ вызывает смертность 90-92% насекомых ( Ö = 10,6154) против 50-60% при моноинфекциях.

В случае вирусно-бактериальных инфекций гибло 70-90% насекомых, причем в варианте с ВЯП первичным патогеном являелся бакуловирус, а в варианте с ВГ - лепидоцид.

Согласно оценке параметров распределений Вейбулла, синхронное заражение лугового мотылька лепидоцидом и ВГ в уменьшенных в 10 раз отрекомендуемых концентрациях оказывает длительное депрессируюшее влияние на лугового мотылька (Ермакова, Глейм, Цой, 1994). Последействие патогенов прослеживается во всех фазах развития насекомого.

Результаты бнотестирования сопровождались электронно - микроскопическими исследованиями. При одновременном заражении личинок равными дозами ВЯП и ВГ формируются вирионы, как при развитии гранулеза, однако образование гранул затягивается. Образуются редкие скопления вирионов по типу пучков, но не заключенных в общую оболочку. Сформировавшихся полиэдров не выявлено. В итоге насекомые гибнут в результате развития гранулеза, хотя инкубационный период ВГ г длиннее, чем у ВЯП.

Не обнаружено вегетативных клеток и спор В. сЬит^егаю на ультратонких срезах тканей гусениц, зараженных смесью бакуловирусов и препарата лепидоцид как при одновременном, так и при последовательном заражении лугового мотылька.

Другая возможность повышения энтомоцидной активности бакуловирусов заключается в возможности воздействия на биохимические процессы , происходящие при инфицировании насекомых, а именно разрушении хитина перитрофической мембраны, что ускоряет попадание патогена в гемоцель хозяина. Установлено, что смертность гусениц лугового мотылька при экспериментальном заражении суспензией гранул с титром 10 млн в мл на пятые сутки составляет 85,5%, при воздействии суспензии с титром I млн гранул/мл и добавлении фермента с хитиназной активностью (0,002%) - 91,1%.

Кроме того, на гусеницах лугового мотылька, капустной совки и яблонной плодожорки выявлено сокращение инкубационного периода вирусного заболевания на двое - трое суток при совместном применении

бакуловирусов с ферментным препаратом. Полученные результаты могут стать основой вирусных препаратов нового поколения.

Важным аспектом повышения энтомоцидной активности бакуловиру-сов является защита их от вредного воздействия факторов внешней среды. Установлено, что гидрохинон в конечной концентрации 0,1% стабилизирует патогенные свойства бахуловирусов при хранении; этот протек-тант, а также 2,5-диметилрезорцин эффективно защищают вирусные включения от УФ-облучения.

б. Биотехнология вирусных препаратов

Полученные данные о биологических свойствах бахуловирусов лугового мотылька позволили подойти к разработке вирусного препарата на основе ВГ. Разработаны регламент и технические условия на получение , вирусного препарата в условиях биолабораторий, официальное название препарата - ВИРИН-ГЛМ-жидкий (Технологический регламент на производство ВИРИН-ГЛМ, М., 1992).

Согласно этому регламенту, биомасса ВГ нарабатывается на лабораторной пинии лугового мотылька, очищается, разбавляется 50%-й суспензией глицерина в воде, титр препарата в момент выпуска не менее 1*109 гранул/см3.

По мере совершенствования наших знаний о биоэкологических осо- -бенностях бакуловирусов лугового мотылька, их взаимоотношениях с организмом насекомого-хозяина, возможностях усиления энтомоцидной активности патогенов была усовершенствована жидкая форма препарата ВИРИН-ГЛМ, а также сформулирована композиция опытного образца препарата на основе ВЯП с включением антиоксидантов и фермента с хи-тиназной активностью.

Собственные исследования и анализ литературных данных свидетельствуют о том, что жидкие формы препаратов имеют существенный недостаток - ограниченный срок хранения. Более стабильны композиции сухих форм вирусных препаратов. Разработка сухих препаративных форм вирусных инсектицидов имеет целью повышение устойчивости во внешней среде, улучшение физико-химических свойств и увеличение срока хранения.

На основании результатов исследований, изложенных в предыдущих главах, детально изучена возможность использования природных цеолитов в качестве наполнителя сухого вирусного препарата. Установлено, что среднелетальная концентрация ВГ в композиции с цеолитами Пегас-ского месторождения в 2-2,5 раза ниже, чем стандарта (чистая биомасса вирусных включений). Показано, что цеолиты активируют латентную инфекцию в популяции лугового мотылька, и усиление энтомоцидного эффекта при их применении с ВГ можно объяснить аддитивным эффектом в ряде случаев двух бакуловирусов (ВЯП-активированный и ВГ) (Штерншис, Ермакова, Цветкова, 1994). Кроме того, композиция ВГ с пе-гасским цеолитом сохраняет инфекционные свойства при хранении и УФ-облучении. Следовательно, в случае применения ВГ с цеолитом Пегас-ского месторождения отпадает необходимость введения антиоксидантов.

7. Испытание препаративных форм бакуловирусов против лугового мотылька в полевых условиях и разработка тактики биологического контроля его численности

Полевые испытания вирусных препаратов против лугового мотылька явились завершающим этапом проведенных исследований. В условиях агробиоценоза опробированы препараты ВИРИН-ГЛМ-жидкий, сухая препаративная форма с цеолитом в качестве наполнителя и смешанные

препараты. Результаты испьпания различных препаративных форм вирусного препарата дали возможность сделать заключение об их эффективности в отношении насекомого-хозяина - Р. зНс^саНз. Смертность насекомых составляет 82-90% при численности вредителя от 30 до 120 гусеницам2. V

Смешанное инфицирование гусениц половинными от рекомендуемых дозами ВИРИН-ГЛМ и коммерческого препарата лепидоцид сокращает срок ожидания энтомоцидного действия, гибель насекомых уже на третьи сутки составляет 59%, что в 1,3 раза превышает смертность особей от чистого ВИРИНа. На десятые сутки эффективность от смешанной инфекции достигает 94,9%, что на 7,7- 20,4% выше смертность вредителя от моноинфекций. Поврежденность растений моркови в опыте с ВИРИНом и смеси его с лепидоцндом была низкой, средневзвешенный балл повреж- ' дения - 0,77, т.е. листовая поверхность практически не повреждена .'Эффект от применения ВИРИН-ГЛМ (сухая форма) и его. смеси с лепидоци-дом по урожайности на люцерне представлен в таблице 3.

Таблица 3

Влияние обработки биопрепаратами и их смесью против гусениц лугового мотылька на урожайность люцерны

Вариант ЛТ», дни Урожайность, Прибавка

т/га урожая, т/га

ВГ+пегассин ва 3,65 0,9 .

(0,1 кг/га) ;

ВГ+пегассин 8,0 3,18 0,43

(0,05кг/га)

ВГ+пегассин (0,05 4,4 4,01 1,26

кг'га)+лепндошщ

(0,5 кг/га)

Лепидоцид(] кг/га) 3,8 3,95 1,20

Лепидоцид (0,5кг/га) 7,1 2,98 0,23

Контроль - 2,75 -

Таким образом, полевые испытания показали высокую эффективность вирусного препарата ВИРИН-ГЛМ и его смеси с бакпрепаратом против гусениц лугового мотылька в полевых условиях при высокой численности вредителя. При микроскопировании больных и погибших насекомых выявлены включения как полиэдров, так и гранул, т.е. активировался присутствующий в популяции ВЯП. Отношения между вирусами в данном случае складывались по типу независимого размножения, что в целом обеспечило аадитивный эффект.

На основании накопленных в процессе исследований знаний о биоэкологических особенностях бакуловирусов лугового мотылька и анализа литературы можно предложить тактику применения патогенов для контроля численности вредных видов. Во-первых, биоконтроль препаратами на основе бакуловирусов целесообразно осуществлять в конце эруптивной и на пике численности фитофага. В этом случае дозу патогена можно снижать в 100 раз и более от рекомендуемых. Наоборот, в период спада численности вида концентрация включений в рабочей суспензии должна быть увеличена минимум на два порядка. Во-вторых, необходимо учитывать обязательную циркуляцию латентного вируса в популяции вредителя, следовательно, отношения между циркулирующим и вводимым патогенами могут складываться по-разному, но поскольку более

пластичным по сравнению с БГ является ВЯП, предпочтительнее препараты на основе ВГ.

Наиболее продуктивной по энтомоцидному эффекту является комбинация вирусного патогена с бактериальным. Такие комбинированные препараты можно применять в период начала нарастания численности вредного вида. В этом случае токсическое действие бактериального препарата обеспечивает быструю гибель фитофага, а далее численность вредителя контролируется стрессирующим влиянием вирусного патогена, причем свойственный виду вирус является более сильным активатором латентной инфекции по сравнению с чужеродным патогеном.

Заключение н выводы

В катастрофическом ухудшении экологической ситуации немалая рол1 принадлежит универсальному химическому методу подавления размножения вредных видов. В связи с этим большое внимание в последнее время уделяется профилактическим средствам, классическому биометоду, микробиосредствам. Не случайно за рубежом, в частности в США и европейских странах производству экологически чистой продукции и связанным с ним исследованиям по биозащите уделяется повышенное внимание (Hamm, 1984; Pelerens, 1988; Соколов, 1993).

Среди биоагентов особый интерес представляют энтомопатогенные вирусы, адекватные представители биоценозов, практически постоянно сопутствующие вспышкам массового размножения вредителей (Гулий, Рыбина, 1987). Внимание исследователей привлекает многообразие энто-мопатогенных вирусов, ]фоме того, у одних и тех же видов насекомых постоянно выделяют изоляты, отличающиеся по ряду биологических свойств. Это свидетельствует не только об их космополитизме, но и о важной роли в регуляции численности вредных насекомых.

Совершенствование наших знаний о биоэкологических особенностях энтомопатогенных вирусов, в том числе ранее неизвестных, позволяет считать, что эта уникальная группа микропаразитов тесно связана с организмом хозяина на уровне генома и является частью структуры популяции фитофага. Циклические колебания численнности видов и вспышки вирусных эпизоотий взаимообусловливают друг друга. Таким образом, вирусные болезни, связанные с динамикой численности, являются не внешними по отношению к популяции, а передаются через геном хозяина, что может, по-видимому, обеспечить инерционность, необходимую для устойчивых колебаний.

Обнаруженная зависимость чувствительности насекомых к энтомопа-тогенным вирусам от фазы развития популяции фитофага может объяснить нестабильность энтомоцидного действия вирусных препаратов.

В связи с этим при разработке тактики использования вирусов для биологического контроля насекомых следует принимать во внимание внутреннее состояние популяции контролируемого вида.

Полученные результаты исследований представлены в виде следующих выводов:

1. В природных популяциях лугового мотылька (Ругала зпспсакв Ь.) выявлены, выделены и идентифицированы вирусы ядерного полиэдроза (ВЯП) и гранулеза (ВГ). причем ВГ выделен впервые (Ермакова, 1991).

2. Проведено изучение биологических свойств выделенных вирусов.

2.1. Установлено, что ВЯП формирует включения в виде ромбических тетраэдров, кубооктаэдров и куботетраэдров, во всех изолятах ВЯП ви-рионы расположены пучками. Гранулы относятся к округлым формам кривогранных кристаллов, внутри белкового матрикса заключена одна вирусная частица.

2.2. Оба инклюзионных вируса облагают высокой вирулентностью по отношению к восприимчивому виду - луговому мотыльку. ЛЮо первич-

новыделенных ВЯП и ВГ - 0,63? 101 и 0,26* 103 полиэдровдранул/мл соответственно, т.е. ЛКзо ВГ в 2,5 раза ниже, чем ВЯП. Показана высокая специфичность выделенных инфекционных агентов, что характеризует их как безопасные агенты микробиологического контроля лугового мотылька.

23. Изучены динамика поражения органов и тканей гусениц лугового мотылька и ультраструктурные изменения в клетках пораженного виро- . зом вредителя. Показано, что необратимые изменения основных органов и тканей лугового мотылька (гемоциты, жировое тело, эпителий трахей и гиподермы) приводят в большинстве случаев к гибели фитофага в личиночной стадии.

3. Установлено, что решающую роль в ограничении численности лугового мотылька в период массового размножения играют бакуловирусы. Смешанные инфекции (вирусно-михроспоридийные и вирусно- грибные) обнаружены у 7-40% особей. С учетом моно- и смешанных инфекций на долю бакуловирусов приходится 100% погибших насекомых.

4. Разработаны приемы непрерывного разведения лугового мотылька на искусственной питательной среде оригинального состава, что позволило проанализировать 58 последовательных поколений вредителя в лабораторных условиях и обнаружить циклические изменения состояния лабораторной линии фитофага, сопровождавшиеся спонтанно возникающими вирусными эпизоотиями.'

4.1. Впервые показано, что циклическая смена состояний исследованной лабораторной популяции практически полностью соответствует цикличности. обычно наблюдаемой в природных популяциях и приуроченной к фазам динамики численности. Однако отсутствие внешних факторов и -динамики численности по условиям эксперимента (лабораторная популяция с фиксированным дня каждой фазы развития в разных поколениях числом особей) позволяет предполбжить, что причиной циклической сме-

ны состояний могли быть только сами состояния, т.е. прямое влияние структуры предшествующего состояния популяции на структуру следующего -¡а ним, причем безучастия плотностно-зависимых механизмов регуляции, но при непосредственном воздействии вирусов, которые являются наследуемой на уровне генома частью структуры популяции.

4.2. Установлено, что вспышки вирусных заболеваний были вызваны разными по биологическим свойствам бакуловирусами, причем в подавляющем большинстве ВЯП, что свидетельствует с одной стороны о гетерогенности популяции по вирусоносительству, а с другой - о большей пластичности ВЯП.

4.3. Обнаружены изменения чувствительности лугового мотылька к специфическим энтомопатогенным вирусам на разных фазах развития популяции. Показано, что в постэпизоотическин период восприимчивость падает и повышается по мере приближения к следующему массовому вирусному заболеванию

4 4 Определены оптимальные условия накопления биомассы ВГи ВЯП. при которых личиночный эквивалент равен 7.4-8.1 *1010 гранул/гусеницу и 0,33-0,62*!010 полиэдров/гусеницу. Для этого необходимо инфицировать гусениц массой 7-10 и 5-" чг соотвественно вирусной суспензией. смешанной с ИПС в конечной концентрации 8* 106 гранул, полиэдров/г среды, и содержать насекомых при 26-28°С, 80% - й влажности воздуха и 18 -часовом световом дне.

5. Наиболее продуктивными по энтомоцидному эффекту являются смешанные инфекции. Оценка параметров распределений, которым подчиняется гибель насекомых, позволила выявить композиции и условия получения высокой биологической эффективности и длительного депрес-снрующего влияния на популяцию лугового мотылька, а также сократить сроки ожидания биошщного действия.

- 6. Показано,' что низкие дозы фермента, обладающего хитиназной активностью, добавленные в суспензию бакуловирусов, позволяют на порядок снизить дозу инфекционного агента без потерн биологической активности и на двое - трое суток сокращают латентный период вирусного заболевания.

7. Экспериментально показано, что добавление протекторов (гидрохинон, 2,5-диметилрезорцин) способствует предохранению вирусных включений от потери инфекционных свойств при хранении и защитите их от инактивирующего влияния УФ-лучей.

8. Проведенные исследования явились основанием для разработки препаративных форм вирусного препарата против лугового мотылька.

8.). Разработан технологический регламент производства препарата ВИРИН-ГЛМ-жидкий на основе высоковирулентного штамма вируса гранулеза лугового мотылька.

8.2. Получены исходные данные для разработки регламента получения сухой препаративной формы ВИРИН-ГЛМ с природными цеолитами в качестве наполнителей. Показано, что цеолитовые туфы Пегасского месторождения являются перспективными для введения в состав препаративной формы внринов, выполняя одновременно две функции: пролонгируя срок хранения вирусного препарата и противодействуя его ннактива-ции во внешней среде.

9. Проведены полевые испытания препаративных форм ВИРИН -ГЛМ и баковой смеси ВИРИН-ГЛМ с бактериальным препаратом лепи-доцидом. Показана высокая инсектицидная активность жидкой и сухой форм вирусного препарата со смертностью вредителя 87-90%.

10. При совместном применении вирусного и бактериального препаратов повышается энтомоцидный эффект, снижается повреждаемость защищаемых культур, увеличивается урожай сельскохозяйственной продук-

ции. в 2 раза уменьшается расход дорогостоящего вирусного инсектицида.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Пат. 1381749 СССР. Штамм вируса Baculovirus granulosis Loxostege sticticahs L. для получения препарата против лугового мотылька Ермакова Н.И.- № 3951951; Заявлено 6.09.1985 г.

2. Ермакова Н.И. Значение энтомопатогенов в регуляции численности лугового мотылька // Матер. VII съезда ВМО. - Т.7: (С.- х. микробиология). - Алма-Ата. - 1985 - С. 176-177.

3 Ермакова Н.И. Смешанные вирусные инфекции у лугового мотылька / Микробиологические средства зашиты растений. - Новосибирск. -1986.-С. 52-55.

4. Ермакова Н.И., Киншт А.В. Морфология и ультраструюура вируса ядерного полиэдроза лугового мотылька // Там же. - С. 55-59.

5 Ермакова Н.И. Значение облигатных паразитов в регуляции численности лугового мотылька // Сиб. вестн. с.-х. науки. - 1986. - № 1. - С. 93-96.

6 Ермакова Н.И. Инфекционная активность вирусов ядерного полиэдроза и гранулеза лугового мотылька для гусениц капустной совки и белянки // Пути совершенствования микробиологической борьбы с вредными насекомыми и болезнями растений. - Велегож. - 1986. - С. 177-178.

Ермакова Н.И. Облигатные патогены лугового мотылька //Экология и география членистоногих Сибири. - Новосибирск: Наука. - 1987. -С. 171.

8. Ермакова Н.И., Штерншис М.В. Инфекционность бакуловирусов, вьщеленных из лугового мотылька // С.-х. биология. - 1987. - Na 4. - С. 34-36.: •

9. Ермакова Н.И. Возрастная чувствительность гусениц лугового мотылька к энтомопатогенам // Итерированная зашита растений от вредителей. - Новосибирск. - 1987. - С. 65-70.

10. Ермакова Н.И., Сычужникова Г.Г. Разведение лугового мотылька . (Loxostege sticticalis L.) в лабораторных условиях //Там же. - С.70-74.

11. Ермакова Н.И., Кнор И.Б., Осинцева Л А., Штерншис М.В. Роль микроорганизмов в регуляции численности лугового мотылька // Ресурсы животного мира Сибири. - Новосибирск. - 1987. - С. 165-166.

12. Ермакова Н.И. Экспериментальные вирозы у лугового мотылька при выращивании на искусственной среде II Энтомопатогенные вирусы и их роль в защите растений. - Новосибирск. - 1988. - С. 55-56.

13. Ермакова Н.И. Оценка чувствительности чешуекрылых насекомых к энтомопатогенным микроорганизмам II Матер. Советско-Болгарского симпозиума по микробным пестицидам. - Пловдив. - 1988. - С. 192 - 193.

14. Осинцева Л А., Штерншис М.В., Ермакова Н.И. Опыт внесения микробных инсектицидов в биоценоз с использованием аэрозольного генератора//Там же. - С. 212 - 213.

15. Ермакова Н.И. Гемолимфа лугового мотылька при вирозах// Науч.- техн. бюл/- ВАСХНИЛ СО. - 1989. - №3. - С. 33 - 39.

16. Ермакова Н .И. Отбор стабильных по вирулентности штаммов бакуловирусов лугового мотылька II Проблемы создания и применения * микробиологических средств защиты растений. - М. - 1989. - С. 176.

17. Ермакова Н.И., Штерншис М.В. Поиск оптимальных способов хранения бакуловирусов лугового мотылька // Там же. - С. 194.

18. Ермакова Н.И., Штерншис M.B. Выращивание лугового мотылька как субстрата для накопления бакуловирусов И Тез докл. II Всесоюз. конф. по пром. разведению насекомых. - М. - 1989. - С. 85.

19 Ермакова Н.И., Кнншт A.B. Оптимизация среды для выращивания гусениц лугового мотылька // Матер. Всесоюз. конф. по вирусным болезням насекомых. - Новосибирск - 1989.

20 Ьрмлкова Н И., Штерншис М.В Непрямое действие вируса грану-леза на лугового мотылька II Микроорганизмы в сельском хозяйстве. -Минск. - 1990 - С. 107-108.

21. Ермакова Н.И., Цой Е.Б.. Глейм Н.Ю.. Цветкова В.П. Анализ смешанных бактериально-вирусных инфекций на примере лугового мотылька "Там же. - С. 121-122.

22. Ермакова Н.И.. Штерншис М.В. Технология получения вируса гранулеза лугового мотылька на маточной культуре // Тездокл. 11 Симпозиума стран-членов СЭВ по микробным пестицидам. - М. - 1990. - С. 12^

23. Ермакова Н И.. Штерншис М.В. Новый метод оценки биологической активности бактериальных инсектицидов II Тездокл.И Симпозиума стран-членов СЭВ по микробным пестицидам. - М. - 1990. - С. 127.

24. Ермакова Н.И., Штерншис М.В. Восприимчивость лугового мотылька к вирусу ядерного полиэдроза Autographa califomica L. // Молекулярная биология вирусов - Киев. -1990.

25. Штерншис М.В., Ермакова Н.И., Зурабова Э.Р.. Исангалин Ф.С. Определение биологической активности препарата ЛЕСТ на луговом мотыльке ' Метод рекомендации- М. - 1990 - 14 С.

26. Цветкова В.П., Ермакова Н.И., Штерншис М.В. Влияние смешанной бактериально-вирусной инфекции на лугового мотылька Н Проблемы аграрной науки в условиях перехода производства к рынку - Новосибирск. - 1991.-С. 139-140.

27. Ермакова Н.И., Кишит A.B., Сычужникова Г.Г. Определение оптимального состава питательных сред для выращивания гусениц лугового' мотылька//С.-х. биология. - 1992.-№3.-С. 151-155.

28. Ермакова Н.И. Луговой мотылек как перспективный тест-объект для оценки качества бактериальных препаратов //Там же. - №5. - С. 160-"165. . . -■•■•".-■"" ■

29. Цветкова В.П., Ермакова Н.И. Протектанты к вирусу гранулеза лугового мотылька от УФ-облучения // Проблемы науки и производства в условиях аграрной реформы. - Новосибирск. - 1993. - С. 55-56.

30. Ермакова Н.И., Цветкова В.П. Влияние смешанной внрусно-бактериальной инфекции на численность лугового мотылька // Сиб. вестн с.-х. науки. - 1993. - № 4. - С. 18 - 23.

31. Мирошниченко О.С., Бобровская М.Г., Штерншис М.В., Ермакова Н.И., Козлов ЭЛ. Исследование некоторых физико-химических свойств. полиэдрина вируса ядерного полиэдроза лугового мотылька // Биополимеры и клетка. - Киев. - 1993. - 9, №5. - С. 25-29. *

32. Ермакова Н.И., Глейм Н.Ю., Цой Е.Б. Об оценивании параметров распределений при изучении влияния ассоциаций энтомопатогенов на насекомых // Сиб. вестн. с.-х. науки. - 1994. - Мо1-2. - С. 32-38.

33. Штерншис М.В., Ермакова Н.И., Цветкова В.П. Совершенствование вирусных препаратов для защиты растений от вредителей //Экологически безопасные и беспестицидные технологам получения растениевод- -ческой продукции. - Краснодар. -1994. - С. 205-207.

34. Ермакова Н.И., Ефимов В.М. Циклические изменения состояния лабораторной популяции лугового мотылька Loxostege sticticalis L. ii Журн. общ. биологии. - 1995. -МЗ.

. - : I/J^^

Подписано к печати 31 07. 95 г. Формат 60x84/16. Объем 2, 5 печ. п. Гираж 100 экз. Заказ Из 492.

Рвдакиионно-полиграЛическое объединение ОО РАСХН ротапринт. 633128, Новосибирская область.