Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах
ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах"

004615191

Г

Нечаев Андрей Юрьевич

ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДОВ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЖИВОТНЫХ НА ПРЕДУБОЙНОМ ЭТАПЕ И ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ МЯСА ПРИ ПИЩЕВЫХ ЗООНОЗАХ

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

-2 пен 2010

Санкт-Петербург - 2010

004615191

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Серко Сергей Афанасьевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Алтухов Николай Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор Долгов Виктор Андреевич

доктор ветеринарных наук, профессор Мухина Нина Васильевна

Ведущая организация ФГОУ ВПО «Московский государственный

университет прикладной биотехнологии»

Защита диссертации состоится «16» декабря 2010 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.02 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной меди-цины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат разослан «2^» октября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Урбан В.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Пищевые зоонозы входят в число наиболее опасных для человека и животных заболеваний. Они распространены как на территории Российской Федерации, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья (В.П. Сергеев, 2001; E.H. Морозова, 2003; В.А. Долгов, 2005; Г.Г. Онищенко, 2005).

Постоянно меняющаяся ситуация, связанная с экологическими проблемами внешней среды, изменением резистентности организма животных и адаптации возбудителей к условиям обитания требует разработки новых методических подходов, отражающих динамику перемен в сообществе живых организмов и природы (В.В. Макаров, A.M. Смирнов, В.В. Сочнев, A.A. Алиев, 2004).

Работами F. Feldhusen, J. Hartung(1997), К. Fehlhaber, Т. Alter (1999) показано, что изменения условий внешней среды, воздействия стрессовых и физических нагрузок снижают защитные функции организма животных и создают условия, стимулирующие жизнедеятельность патогенных микроорганизмов. В таком сообществе только за счет специфической и неспецифической резистентности живой организм способен сохранить гомеостаз и обеспечить в процессе эволюции своё видовое постоянство.

Подобные, но более кратковременные, внешние и внутренние повреждающие факторы воздействуют на животных на предубойном этапе. Установлено, что у 15 - 30 % животных в этот период снижается качество самых ценных частей туши (А. Schütte, 1994; К. Troeger, 1995; F. Feldhusen, J. Härtung, 1997; С. Abraham, 2006).

Пункт 1.2. «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1983) определяет различное отношение к убою животных в зависимости от их состояния, однако, до настоящего времени объективные критерии для определения предубойного состояния животных отсутствуют.

В литературе имеются сведения о снижении резистентности в условиях воздействия различных повреждающих факторов, но исследования показателей гомеостаза у животных на предубойном этапе не проводились (N.N. Lizko, 1987; Е. Fazio, A. Ferlazzo, 2003).

Современные требования к качеству и безопасности продуктов питания предполагают всестороннюю комплексную оценку факторов, воздействующих не только на состояние защитных функций животного, но и на здоровье человека. Наиболее значимой опасностью для благополучия населения является микробное загрязнение продуктов возбудителями инфекций с пищевым путем передачи. Предупреждение пищевых зоонозов требует разработки новых подходов и критериев в системе ветеринарно-санитарного контроля, в том числе и внедрение высокочувствительных и эффективных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа (Б.Д. Маккреди, Д.А. Чимера, 1999; Ю.К. Ерофеева, К.С.

Янковский, Ю.Г. Костенко, 2003; С.А. Шевелева, И.М. Нитяга и соавторы, 2005; Н.Р. Ефимочкина, 2008).

С ростом распространенности и опасности пищевых зоонозов связана необходимость совместных усилий по изучению и оценке методов их выявления. Существующая в России система контроля за качеством и безопасностью продуктов животноводства существенно отличается от системы, принятой в странах ЕС и США (ФЗ №184 - ФЗ «О техническом регулировании» от 27.12.2002; СанПин 2.3.2.1078 - 01; Л.Г. Подунова, 1996; Р.К. Шарма, 1999; В.И. Белоусов, А.С. Герасимов, 2004; Е.Н. Морозова, 2005; А.Н. Иванкин, Т.Г. Кузнецова, 2005).

Для улучшения доступа животноводческой продукции России на мировой рынок требуется совершенствование и гармонизация международных и национальных методов ветеринарно-санитарной экспертизы. Оценка мяса и мясопродуктов в системе международных координат позволит более эффективно решать задачи ветеринарно-санитарной экспертизы по обеспечению стабильного благополучия и безопасности здоровья населения. Объединяющей основой содружественного решения проблем является разработка новых и использование унифицированных методов, основанных на достижениях биохимии, физиологии, патофизиологии, микробиологии, генетики и применении современного аппаратурного оснащения. Это и определяет актуальность темы. Настоящая работа является результатом выполнения научно-исследовательских тем Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины с 1998 по 2008 гг. по кафедрам оперативной хирургии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

Цель работы. Целью проведенных исследований является обоснование методов функциональной диагностики для определения состояния животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью в работе были определены следующие задачи:

1. Провести комплексное исследование функции систем и органов, определяющих их способность сохранять один из показателей гомеостаза (рН крови) у животных в условиях функциональных нагрузок.

2. Определить степень и характер нарушений показателей кислотно-щелочного баланса (КЩБ) у животных при дозированных функциональных нагрузках на предубойном этапе.

3. Изучить механизмы компенсации физиологических систем и органов, обеспечивающих сохранение функционального гомеостаза;

4. По интенсивности развития нарушений установить факт наличия и степени недостаточности функциональных систем, обеспечивающих постоянство рН крови.

5. Разработать и обосновать методические подходы для проведения функциональных исследований у животных на предубойном этапе.

6. Определить взаимосвязь изменений показателей КЩБ при функциональных нагрузках с результатами бактериологических исследований мезентериальных лимфоузлов.

7. Исследовать влияние функциональных нагрузок, полученных животными на предубойном этапе, на физико-химические показатели мяса.

8. Определить эффективность методов, применяемых при экспертизе мяса на Тг. spiralis при наличии слабой инвазии.

9. Провести сравнительную оценку методов по выявлению по выявлению L. monocytogenes и сальмонелл в мясе и мясопродуктах.

10. Сопоставить результаты первичных посевов для избирательного роста листерий и определить возможности для количественного определения L. monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса.

Научная новизна работы. Впервые на основании комплексного физиологического исследования проведена оценка состояния функции систем и органов, обеспечивающих постоянство одной из важнейших констант организма - рН крови в условиях воздействия различных повреждающих факторов внешней и внутренней среды (физических, биологических, стрессовых и др.) на различных стадиях предубойного этапа, связанного с транспортировкой животных к месту убоя. Установлено, что количественная характеристика критериев, обеспечивающих кислотно-щелочной баланс, позволяет не только выявить факт нарушения функционального гомеостаза, но и определить градации степеней недостаточности функциональных систем и органов, обеспечивающих постоянство рН крови.

Впервые показано, что при различных функциональных нагрузках, обусловленных расстоянием от фермы (хозяйства) до убойного пункта и временем транспортировки, в организме животных имеет место тесная связь между соотношением аэробных и анаэробных механизмов энергообразования и величиной рН крови.

Установлена взаимосвязь между физиологическими параметрами, характеризующими функцию систем и органов, лимитирующих окислительные процессы в организме свиней в условиях различных нагрузок, и физико-химическими и микробиологическими показателями мяса.

Впервые введены количественные и качественные критерии, позволяющие определить резистентность (устойчивость) систем и органов, опираясь на их функциональное состояние. Это даст возможность предопределить и объективизировать экспертное заключение о состоянии животного, своевременно устранить выявленные нарушения и в конечном итоге обеспечить выпуск качественной и безопасной мясной продукции.

Предложен унифицированный подход к результатам исследований, полученных различными методами, применяемыми для выявления

трихинелл при слабой инвазии, сальмонелл и L. monocytogenes на основе критериев эффективности, специфичности и чуствительности.

Определены пути совершенствования при выборе питательных сред для идентификации бактерий L. monocytogenes и их количественного определения в колбасных изделиях и продуктах из мяса в соответствии с международными требованиями.

Практическая значимость и реализация результатов работы. Установленные функциональные критерии определения состояния животных и проведение сравнительной оценки методов по выявлению патогенных листерий, сальмонелл и трихинелл в мясе позволяют:

- в комплексе с клинической картиной выявить функциональные нарушения, обеспечивающие гомеостаз, и дать объективную оценку состояния резистентности животного;

- провести коррекцию выявленных нарушений физиологических систем, обеспечивающих постоянство рН крови, у животных до убоя под контролем показателей кислотно-щелочного баланса;

- предупредить микробную контаминацию туш;

- повысить качество и безопасность мяса;

- использовать функциональные методы в практике ветсанэкспертизы на предубойном этапе, ввести количественную характеристику показателей, определяющих функциональное состояние животного и устанавливать не только наличие факта недостаточности той или иной физиологической системы, ответственной за гомеостаз, но и определить степень нарушений;

- обобщить опыт, выбрать и усовершенствовать методы для выявления листерий и сальмонелл, а также для определения трихинелл в условиях слабой инвазии мяса.

Применение современного технического оснащения позволяет в полевых условиях контролировать функцию физиологических систем и органов животных, обеспечивающих резистентность организма. Их применение объективизирует заключение о состоянии животных и дает возможность провести мероприятия, направленные на предупреждение пищевых зоонозов. Суммы средств, вложенных на приобретение такой аппаратуры, значительно меньше, чем суммы затрат на рабочие и лабораторные издержки при выявлении возбудителей и значительно уступают экономическим потерям, связанным с борьбой и ликвидацией последствий заболеваний.

По результатам исследования выпущены методические рекомендации:

1. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез (утв. методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №4 от 19.06.2001 г.)

2. Метод полимеразной цепной реакции (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.)

3. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.)

4. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №2 от 28.02.2007 г.)

5. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

6. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

Материалы работы использованы в учебном процессе на кафедре ветеринарной санитарии и гигиены ФГОУ ВПО СПбГАВМ, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины и Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Результаты исследований с положительным эффектом применяются в хозяйствах Ленинградской области и госветучреждениях Санкт-Петербурга при определении предубойного состояния животных и оценке методов выявления возбудителей пищевых зоонозов по критериям чувствительности и специфичности.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (1997-2009гг.), на заседаниях методической комиссии и ученого совета СПбГАВМ (1998-2009гг.), на заседании издательских советов СПбГАВМ (2001-2009), на межкафедральных заседаниях профессорско-преподавательского состава СПбГАВМ (2000-2008), на 48-й и 49-й международных научных конференциях «Гигиена продуктов животного происхождения» (Гармиш-Партенкирхен, Германия 25-28.09.2007г. и 29.09-02.10.2008 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. «Функциональная диагностика» - новое направление в проведении клинико-функционального заключения при оценке состояния животных на предубойном этапе.

2. Методы функциональной диагностики обеспечивают индивидуальную оценку функционального состояния органов и систем, определяющих рН крови.

3. Показатель гомеостаза рН крови позволяет оценить резистентность организма животного в меняющихся условиях внешней среды и воздействия различных повреждающих факторов.

4. Имеется взаимосвязь между величиной рН крови у животного на предубойном этапе и безопасностью и качеством мяса.

5. Информация о состоянии кислотно-щелочного баланса по поддержанию гомеостаза позволяет провести коррекцию рН крови у животных на предубойном этапе.

6. Критерии рациональных подходов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы при оценке безопасности мяса:

- при слабой инвазии мяса личинками Tr. spiralis;

- при выборе методов для выявления в мясопродуктах сальмонелл и L.monocytogenes

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 40 научных работ, 10 из которых связаны с методами функциональной диагностики по определению состояния животных и возможности его коррекции при воздействии по-вреждающих факторов (оперативных вмешательств, физических, химических и стрессовых нагрузок), 30 посвящены вопросам оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах, включая 2 статьи в зарубежных изданиях. Выпущено 1 учебное пособие и 6 методических рекомендаций. В изданиях, регламентированных ВАК РФ для докторских диссертаций, опубликовано 11 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 291 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Список литературы включает 437 источников, в том числе 210 отечественных и 227 иностранных авторов. Материал иллюстрирован 44 таблицами и 25 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объекты, методы и объемы исследований. Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Для определения функциональных методов исследования при экспертном заключении о состоянии животного было обследовано на различных стадиях предубойного этапа 96 молодых свиней. Свиньи относились к стресс-устойчивой белой латвийской породе и принадлежали фермерским хозяйствам Краславского района. Они были представлены различным полом (40-^ и 56-3), подбирались по сходной зоотехнической характеристике: возрасту (от 6 до 9 месяцев) и массе (80 - 100 кг). В качестве дозированной по длительности и интенсивности функциональной

нагрузки выбраны естественные физические и стрессовые факторы, действующие на животных при транспортировке к месту убоя. Животные транспортировались из ферм и хозяйств, находящихся в радиусе до 3 км; 50км и 70 км. Время в пути при этом составляло соответственно до 0,5 часа; 1,0 часа и 1,5 часа. По степени различали легкую, среднюю (умеренную) и тяжелую функциональную нагрузку и соответственно выделяли три группы свиней: I группу, получивших легкую нагрузку, составляли 35 животных; II группа, перенесших среднюю нагрузку, включала 31 животное; III группа, которым предъявлялась тяжелая нагрузка, состояла из 30 животных.

Таблица 1

Комплекс функциональных показателей для характеристики физиологических систем и органов, обеспечивающих резистентность _животных при транспортировке_

Исследуемые физиологические реакции Характеристика показателей

Резистентность организма рН крови

Уровень энергообмена НЬ - концентрация молочной кислоты (ммоль/л) НС1 - концентрация глюкозы (ммоль/л) ВЕ - дефицит буферных оснований (мэкв/л)

Степень оксигенации крови БаСЬ - насыщение крови кислородом (%) РаСЬ - напряжение кислорода крови (мм рт.ст.)

Эффективность легочного газообмена и кровообращения РаС02 - напряжение углекислого газа в крови (мм рт.ст.) ЧД - частота дыхания в минуту ЧП - частота пульса в минуту

Для определения реакции физиологических систем и органов на функциональную нагрузку выбран комплекс функциональных показателей, который наиболее отчетливо характеризовали исследуемую систему или орган, отвечали цели исследования при работе с животными в естественных производственных условиях (табл.1).

Физиологические параметры регистрировали на каждой из стадий предубойного периода: перед транспортировкой (исходная стадия); после транспортировки - стадия прибытия на убойный пункт; предубойная стадия - непосредственно перед убоем. Продолжительность предубойной стадии составляла во всех группах в среднем 1 час.

Резистентность организма животных оценивали по их способности сохранять один из интегральных показателей гомеостаза - рН крови. Зависимость рН от функции систем и органов, определяющих

метаболический и дыхательный компоненты, представлена в формуле (1), вытекающей из уравнения Гендерсона-Гассельбаха:

[метаболический компонент]

рН « - (1)

[дыхательный компонент]

Это отношение отражает важность физиологических и химических буферных систем, обеспечивающих регулировку концентрации ионов водорода. О возможностях этих систем выполнить гомеостатическую задачу в условиях функциональных нагрузок судили по показателям кислотно-щелочного баланса в артериальной крови: напряжению углекислого газа (РаССЬ, мм.рт.ст), дефициту буферных оснований (BE, мэкв/л), отражающих соответственно дыхательный и метаболический компоненты в формуле (1).

Показатели КЩБ определяли микрометодом Аструпа в модификации Зиггард-Андерсона на газоанализаторе ABL - 520, позволявшим одновременно регистрировать напряжение кислорода (РаСЬ, мм.рт.ст) в артериальной крови.

Взятие крови осуществлялось в гепаринизированные микрокапилляры (~ 0,7 мл) или шприцы 1,0 мл). В последнем случае вместо прокола кожи выполняли пункцию ушной артерии. После взятия проб крови капилляр или шприц герметизировали. Консервация проб гепарином позволяла проводить исследование в течение 24 часов после их отбора.

Источником энергии, обеспечивающим функцию органов и систем животного, являются окислительные процессы. Достаточность обеспечения окислительных процессов кислородом до и после функциональных нагрузок определяли по показателям насыщения крови кислородом (SaC>2%) и напряжения кислорода (Ра02,мм.рт.ст) в артериальной крови. Для наблюдения за динамикой изменения величины SaC>2% использовали пульсоксиметр.

Интенсивность окислительных процессов и соотношение аэробных и анаэробных механизмов энергообразования в условиях воздействия функциональных нагрузок оценивали по показателям лактатметра (Lactate Scout) и глюкометра (Smart Scan), определяющих концентрацию молочной кислоты (HL, ммоль/л) и концентрацию глюкозы (HG1, ммоль/л) в крови.

Таким образом, выбранные для функциональных исследований методы базировались на применении современной доступной и распространенной в медицине, но недостаточно используемой при обследовании животных, диагностической технике. Техническое исполнение многих из приборов предусматривало их применение в полевых условиях (рН-метр, газоанализатор КЩБ, пульсоксиметр, глюкометр, лактатметр). Возможность калибровки приборов, количественный характер

регистрируемых биопараметров обеспечивали сравнение полученных данных на различных стадиях предубойного этапа. Применение стандартизированной аппаратуры позволило провести унификацию подходов к анализу результатов исследования.

Результаты применения функциональных исследований в практике клинических и экспертных дисциплин в медицине (С.П. Боткин, 1888; С.С. Зимницкий, 1927; М.В. Черноруцкий, 1954; J.H. Comroe, 1957; И.И. Лихницкая, 1960), всё более широкое их использование в ветеринарии для решения задач, связанных с определением и коррекцией нарушений жизнеобеспечивающих систем и органов при неотложных состояниях и оперативных вмешательствах в условиях воздействия различных анестетиков (Б.С. Семенов, A.B. Яшин, А.Ю.Нечаев, 2000; М. Marahrens, 1994), позволили сформулировать следующие принципы применения функциональных методов для животных:

1. Функциональная нагрузка, дозированная по длительности и интенсивности, применяется там, где есть необходимость выяснения реакции физиологических систем или органа.

2. Для учета реакции на функциональную нагрузку выбираются методы, которые наиболее отчетливо характеризуют исследуемую систему или орган.

3. Трактовка данных функциональных исследований основана на сопоставлении нормативных (исходных) данных и физиологических параметров, полученных после функциональной нагрузки.

В целом при функциональном исследовании на различных стадиях предубойного периода у 96 животных проведена регистрация 2870 физиологических параметров.

Для определения степени контаминации сальмонеллами проводилось бактериологическое исследование мезентериальных лимфоузлов 95 туш сразу после убоя. Исследование осуществляли согласно ГОСТ 30519 - 97/ ГОСТ Р 50480 - 93 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella», ГОСТ 21237 - 75 «Мясо. Методы бактериологического анализа» и международному стандарту ISO 6579 : 2002.

В послеубойный период было снято 475 физико-химических показателей мяса. Определение pH проводили потенциометром в водной вытяжке проб мяса по общепринятой методике с помощью лабораторного рН-метра «Статус». Для исследования брали пробы из m.semimembranosus. Измерения проводили в течение 24 часов после убоя в интервалах 0,5; 1; 2; 6; 24 часа у 95 туш. Данные измерений pH мяса в водной вытяжке сопоставляли с результатами исследований, полученных при определении pH внутри куска мяса электропотенциальным методом с помощью электрода, встроенного в клинок ножа (рН-метр «Статус-2»), применение которого позволяло исключить предварительную пробоподготовку и ускорить исследование.

С целью сравнительного анализа и оценки эффективности различных методов, используемых в отечественной и зарубежной практике ветсанэкспертизы, проводили лабораторные исследования 50 проб мяса и мясопродуктов на наличие бактерий рода Listeria и бактерий рода Salmonella. Материалом для определения листерий и сальмонелл служили образцы мясного сырья, мясных полуфабрикатов и готовых мясопродуктов. Отбор проб и их исследование на микробиологические показатели качества и безопасности оценивали по характеристикам, нормируемым ГОСТ 26668 - 85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов». В процессе работы применялись: культуральные методы с использованием хромогенных сред; иммуноферментный метод определения на автоматическом анализаторе VIDAS; молекулярно-биологический метод.

Оценка морфологических, культуральных и серологических признаков осуществлялась в соответствии с нормативными документами: ГОСТ 21237 - 75 «Мясо. Методы бактериологического анализа», ГОСТ 30519 - 97/ ГОСТ Р 50480 - 93 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella» и ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes». Подтверждение положительных результатов и идентификацию выделенных бактерий проводили с использованием биохимических панелей API Listeria, API 20 Е - Testkit («BioMerieux») и Enterotube (ISO 6579 : 2002). Исследования выделенных культур на хромогенных средах XLD (Xylose-Lysin-Desoxycholat Agar) и ALOA (Agar Listeria Ottaviani Agosti) производства фирмы «BioMerieux» (Франция) выполняли согласно инструкциям по их применению.

Иммуноферментный метод (фермент-связанного флуоресцентного анализа) определения патогенных листерий и сальмонелл проводили на автоматическом анализаторе VIDAS с использованием наборов тестов VIDAS Salmonella (SLM) и VIDAS Listeria monocytogenes II (LMO 2) производства фирмы «BioMerieux» (Франция).

Молекулярно-биологический метод в реакции полимеразно-цепной реакции (ПЦР) использовали для индикации сальмонелл и патогенных листерий. При выполнении метода Real-Time PCR применяли праймеры (iQ-Check-Salmonella Kit; iQ-Check- Listeria monocytogenes Kit) и реагенты фирмы «Bio-Rad», Германия [19].

Для сравнения эффективности регламентированных методов по выявлению трихинелл при слабом заражении мяса исследовано 144 мышечных пробы. Пробы отбирали из жевательных мышц, ножек дифрагмы, межреберных мышщ, мышц живота, мышц сгибателей и разгибателей плечевого пояса инвазированной трихинеллами свиной туши. Исследования проводили согласно МУК по лабораторной диагностике трихинеллёза животных (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоз-

прода России 28.10.1998 г.) и Предписания Комиссии ЕС № 2075/2005 от 5.12.2005 г.

При компрессорной трихинеллоскопии из исследуемых проб по ходу мышечных волокон вырезались срезы (56 срезов с каждой пробы) величиной с овсяное зернышко (20 мм"), которые раздавливали между стеклами компрессориума и просматривали под микроскопом при 60-кратном увеличении [1,4].

Для исследования методом переваривания в искусственном желудочном соке была использована принятая в странах ЕС в качестве стандартной методика автоматического переваривания в аппарате для выделения личинок трихинелл Trichomatic-35®. Одновременно в аппарате исследовались до 35 мышечных проб массой 1,0 г. Состав искусственного желудочного сока был следующим: медицинский пепсин - 7г., 8,5% соляная кислота - 30 мл, вода - 400 мл. Время переваривания составляло 10 минут. По истечении этого времени под микроскопом исследовалось наличие личинок трихинелл на мембранном фильтре аппарата.

В целом при сравнительном анализе и оценке различных методов для выявления возбудителей трихинеллеза, сальмонеллеза, листериоза в исследуемых пробах было использовано 5 методик, принятых в отечественной и зарубежной практике ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов.

Результаты проведенных исследований обрабатывались с использованием методов вариационной статистики на персональном компьютере с использованием программы: Microsoft Excel 2003, «БИОСТАТ». Достоверность различий показателей в сопоставляемых результатах определялась по критерию Стьюдента. Статистически значимыми считали различия при значениях р<0,05.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Комплексная функционально-диагностическая оценка показателей дыхания, кровообращения и энергообмена у свиней на предубойном этапе

В соответствии с принципами проведения функциональных исследований на всех стадиях предубойного этапа проведена сравнительная оценка физиологических показателей, характеризующих возможности органов и систем животных по обеспечению постоянства рН крови в условиях различных дозированных нагрузок, связанных с транспортировкой к месту убоя.

Полученные исходные физиологические параметры (перед транспортировкой) и их динамика по прибытии на убойный пункт и перед убоем у животных, получавших легкую (I группа), умеренную (II группа) и тяжелую нагрузку (III группа), представлены в таблице 2.

Таблица 2

Функциональные показатели физиологических систем и органов у свиней на различных стадиях предубойного этапа

^адии предубойного

Показатели

Перед транспортировкой-А

По прибытии на убойный пункт - В

Перед убоем -С

Достоверность различий

[А-В А-С В-(

HG1, ммоль/л HL, ммоль/л ВЕ, мэкв/л ЧД в 1 мин. РаССЬ, мм рт.ст. ЧП в 1 мин. Ра02, мм рт.ст. Sa02, %

ЛЕГКАЯ

НАГРУЗКА

5,1 ±0,1 5,6 ±0,1 -0,3 ± 0,28 14 ±0,6 41,5 ±0,7 69 ± 1,0 96,4 ±0,1 97,7 ± 0,07

8,0 ± 0,2 7,7 ± 0,3 -1,6 ±0,24 28 ± 0,7 38,7 ±0,9 88 ± 1,0 92,7 ± 0,2 95,1 ±0,13

7,4 ±0,4 6,4 ±0,1 -0,9 ± 0,32 21 ± 0,4

39.5 ± 0,7 77 ± 1,0

94.6 ± 0,2 96,4 ±0,18

* * * *

* * NS NS *

* *

Не * * *

HG1, ммоль/л HL, ммоль/л ВЕ, мэкв/л ЧД в 1 мин. РаССЬ, мм рт.ст. ЧП в 1 мин. Ра02, мм рт.ст. Sa02, %

УМЕРЕННАЯ

НАГРУЗКА

4,7 ± 0,3 5,5 ±0,1 -0,4 ± 0,26 15 ± 0,4

42.3 ± 0,4 70 ± 1,3

96.4 ±0,1

97.5 ± 0,07

8,4 ± 0,3 10,2 ±0,3 -1,8 ±0,64 36 ± 1,3 37,6 ±2,3 94 ± 0,8 91,4 ±0,1 94,8 ± 0,05

7,0 ± 0,2 12,9 ±0,4 -1,2 ±0,57 27 ± 1,0 38,1 ± 1,0 80 ± 0,9 93,8 ±0,1 96,1 ±0,07

* * * * * * * * * * * * * *

HG1, ммоль/л HL, ммоль/л ВЕ, мэкв/л ЧД в 1 мин. РаССЬ, мм рт.ст. ЧП в 1 мин. Ра02, мм рт.ст. SaP2, %

ТЯЖЕЛАЯ

НАГРУЗКА

5,3 ± 0,2 5,8 ± 0,3 -0,3 ± 0,40 14 ±0,5 40,7 ± 0,4 70 ± 1,1

96.6 ±0,1

97.7 ± 0,08

10,0 ±0,1 12,9 ±0,4 -2,2 ±0,54 45 ± 1,8 34,4 ±1,6 98 ± 1,1 89,1 ± 0,3 94,3 ±0,18

8,4 ± 0,2 9,1 ±0,4 -1,7 ±0,39 29 ± 0,6 37,1 ±0,7 84 ± 1,0 91,3 ±0,1 94,8 ±0,13

* * * * * *

* * NS NS

* * * * j^g

* * * * *

Уровни значимости: NS - р> 0,05

* *

- незначимый; * - р < 0,05 - значимый;

- р < 0,01 - высокозначимый

Содержание глюкозы в крови перед транспортировкой составляло у свиней I группы 5,1 ±0,1 ммоль/л, во II группе - 4,7 ± 0,3 ммоль/л, в III группе - 5,3 ± 0,2 ммоль/л. Статистическая достоверность между значениями 1-й и Н-й групп составляла р>0,05 при tSl=l,38,1-й и III-й групп - р>0,05 при tst=l,16, Н-й и III-й групп р>0,05 при tst=l,66. Таким образом,

существенных различий в исходной концентрации глюкозы в крови у животных всех групп до транспортировки не выявлено.

По прибытии на убойный пункт во всех трех группах отмечалось увеличение содержания глюкозы в крови. После легкой функциональной нагрузки (I группа) концентрация глюкозы составляла 8,0 ± 0,2 ммоль/л. Во II группе животных, перенесших среднюю нагрузку величина HG1 увеличилась до 8,4 ± 0,3 ммоль/л. Наиболее существенное увеличение концентрации глюкозы в крови отмечалось после интенсивной и длительной нагрузки, связанной с транспортировкой, у свиней III группы. Содержание глюкозы составляло 10,0 ± 0,1 ммоль/л. В I группе концентрация глюкозы в крови повысилась на 56,8% (р < 0,01 при ts(=13,18), во II группе - 78,7% (р < 0,01 при tst=8,81), в III группе животных превышение величины HG1 составляло 88,7% (р < 0,01 при tst=21,36).

Полученные данные свидетельствуют о высоко значимых (р < 0,01) превышениях исходных значений величины содержания глюкозы в крови в каждой из трех групп животных после транспортировки. При этом наибольшее увеличение (на 88,7%) отмечалось у свиней, получавших тяжелую нагрузку.

Такая динамика изменений концентрации глюкозы в крови связана с возрастающими энергетическими потребностями организма свиней. По данным W. Kraft, N. М. Dürr (1999), Т. Horsch (2003), Hambrecht et al. (2004) выброс в кровь дополнительного количества глюкозы происходит за счет усиления печеночного гликолиза и направлен на увеличение мышечного гликогена. Последний необходим для более интенсивного метаболизма в мышечной ткани у животных, получавших длительные физические и стрессовые нагрузки.

Результаты исследований показали, что через час после транспортировки во всех трех группах концентрация глюкозы в крови упала в среднем на 13,7%, но оставалась достоверно выше средних исходных величин. В первой группе животных показатель HG1 оставался на 45,1% (р<0,01 при tst= 5,61), во второй - на 48,9% (р<0,01 при tSi= 6,39) и в третьей - на 58,5% (р<0,01 при tSl= 11,07) выше исходных значений.

Таким образом, и после транспортировки окислительные процессы находились на более высоком энергетическом уровне.

Но для окислительных процессов, обеспечивающих аэробное энергообразование и нормальное функционирование органов и тканей в условиях нагрузок, необходимо достаточное количество кислорода. Кислород в организм животных поступает за счет легочного газообмена, кислородсвязывающей функции крови и системы кровообращения.

Приведенные в таблице 2 данные показывают, что частота дыхания у животных по мере увеличения времени в пути и расстояния до убойного пункта возросла в I группе в 2 раза, во И-й - в 2,4 раза, в Ш-й - в 3,2 раза по сравнению с исходными величинами до транспортировки. Но наблюдаемое

изменение частоты дыхания у животных в ответ на физические и стрессовые нагрузки не указывает на повышение эффективности легочного газообмена.

Как свидетельствуют ранее проведенные работы, наиболее информативным показателем эффективности газообмена в условиях воздействия на животных повреждающих факторов является величина напряжения углекислого газа в артериальной крови (Д.П. Дворецкий, 1994; Б.С. Семенов, А.Ю. Нечаев, 2002).

Проведенные исследования показали, что у всех животных увеличение нагрузки сопровождалось различной степенью снижения напряжения СО2 (РаС02) в артериальной крови. Наиболее статистически достоверные различия в динамике этого показателя выявлены у свиней III группы (табл.2). По сравнению с исходным значением (40,7 ± 0,4 мм рт.ст.) величина РаС02 в этой группе составляла после транспортировки 34,4 ±1,6 мм рт.ст., р < 0,01 при 151=3,82. За период восстановления показатель РаС02 увеличился до 37,1 ± 0,7 мм рт.ст., но достоверные различия сохранились только с исходной величиной (р<0,01 при 15(=4,50). Анализ динамики величины РаССЬ свидетельствует об изменении функции внешнего дыхания у животных при тяжелой нагрузке в сторону гипервентиляции, более выраженной сразу после транспортировки.

О гипервентиляционном сдвиге в функции легких при предъявлении животным легких и средних нагрузок указывают достоверное снижение показателя РаССЪ. В I группе величина напряжения углекислого газа снизилась после транспортировки по сравнению с исходной величиной на 2,8 мм рт.ст. (р<0,05 при 151=2,46), а во II группе на 4,7 мм рт.ст. (р<0,05 при (5(=2,07). В этих группах, как и при тяжелой нагрузке, уровень вентиляции оставался повышенным и не восстановился до исходного уровня перед убоем.

Обобщение полученных данных по исследованию респираторного компонента, определяющего величину рН крови (формула 1), свидетельствует о том, что регулирующие механизмы в условиях различных дозированных нагрузок стремятся за счет увеличения частоты дыхания и гипервентиляции легких обеспечить сохранение постоянства рН крови животных.

Вторым функциональным звеном, обеспечивающим в процессе дыхания доставку кислорода к тканям, является кровь. Для характеристи-ки крови как газотранспортной системы у животных проведено исследование частоты сердечных сокращений (ЧСС), напряжения кислорода в артериальной крови (Ра02) и степени насыщения крови кислородом (Ба02) на различных стадиях предубойного этапа (табл. 2).

Данные, полученные при исследовании ЧСС, указывают на высоко достоверную разницу в величине пульса до и после транспортировки. Наиболее значимое различие отмечалось у свиней, преодолевших

наибольшее расстояние до убойного пункта. У них частота сердечных сокращений увеличилась на 40% (с 70 ± 1,1 до 98 ± 1,1, р < 0,01 при ^=17,94). По мере снижения функциональной нагрузки отмечалось меньшее увеличение величины ЧСС: во И группе на 34% (с 70 ± 1,3 до 94 ± 0,8, р < 0,01 при ^=15,69), в I группе на 28% (с 69 ± 1,0 до 88 ± 1,0, р < 0,01 при 151=13,48). Такую динамику физиологических параметров подтверждает опыт других исследователей, свидетельствующий о том, что регистрация того или иного показателя в условиях нагрузок в процентах исходной величины дает возможность наиболее точно выражать результаты функциональных исследований (Н.А. Агаджанян, А.И. Ефимов, 1986).

Анализ данных, представленных в таблице 2, свидетельствуют о прямой зависимости увеличения частоты пульса от величины нагрузки. Следует отметить, что после тяжелой нагрузки у животных не происходило восстановление ЧСС до исходного уровня. После восстановительного периода (перед убоем) его величина оставалась достоверно выше исходного уровня (84 ± 1,0 против 70 ± 1,1, р < 0,01 при ^=10,74), то есть оставалось компенсаторное напряжение системы кровообращения, связанное с необходимостью дополнительного снабжения тканей кислородом.

Результаты исследования напряжения кислорода в крови, полученные у свиней после транспортировки, показали изменение её величины по мере возрастания функциональной нагрузки. Различия в сторону уменьшения по сравнению с исходными величинами были выявлены у всех групп животных. В I группе наблюдалось падение вели-чины РаСЬ на 3,8% (с 96,4 ± 0,1 мм рт. ст. до 92,7 ± 0,2 мм рт.ст., р < 0,01 при ^(=16,82), во II группе РаСЬ уменьшилось по прибытии на убойный пункт на 5,2% (с 96,4 ± 0,1 мм рт. ст. до 91,4 ± 0,1 мм рт.ст., р<0,01 при ^,=35,71). При тяжелой нагрузке отмечалось наиболее значимое уменьшение показателя напряжения кислорода в крови и составляло 7,8% (с 96,6 ± 0,1 мм рт. ст. до 89,1 ± 0,3 мм рт.ст., р < 0,01 при ^=23,44).

Таким образом, с возрастанием нагрузки уменьшалась величина РаОг. Наибольшие изменения отмечались у свиней, перенесших при транспортировке наиболее тяжелую нагрузку.

Анализируя полученные данные, следует отметить, что все регистрируемые физиологические параметры (частота дыхания, напряжение углекислого газа в артериальной крови, частота сердечных сокращений, напряжение кислорода в артериальной крови) характеризуют реакцию органов и систем, составляющих функциональные звенья, определяющие уровень насыщения крови кислородом. Сравнительный анализ динамики изменения полученных показателей по количественным характеристикам позволяет выделить гипердинамическую и гиподинамическую реакцию органов и систем в ответ на предъявленную организму нагрузку. Реакцию легких, малого и большого круга кровообращения по полученным физиологическим параметрам следует оценить как гипердинамическую.

Она направлена на пополнение возросших потребностей организма в кислороде в условиях нагрузки и стресса и свидетельствует о наличии резервных возможностей органов и систем, обеспечивающих доставку кислорода к тканям.

Но резервы органов и систем ограничены. Снижение функциональных возможностей организма животных связано как с явной и скрытой патологией, так и с тяжестью перенесенных нагрузок.

Полученные результаты, представленные в таблице 2, свидетельствуют, что на фоне выраженной гипердинамической функциональной реакции звеньев, обеспечивающих напряжение кислорода в крови при тяжелой нагрузке, наблюдается достоверное различие в сторону снижения этого показателя с исходным значением после восстановительного периода. Величина РаОг перед убоем у животных после тяжелой нагрузки составляла 91,3 ± 0,1 мм рт.ст. и достоверно (р < 0,01 при tst=37,86) отличалась от исходного уровня (96,6 ±0,1 мм рт.ст.). За период нахождения на убойном пункте величина РаСЬ не восстановилась до начального значения.

У животных, перенесших легкую и среднюю нагрузку, за восстановительный период показатель достоверности различий напряжения кислорода в крови соответственно составлял tst= 8,18 и tst= 18,57 и отличался от исходной величины (р < 0,01).

Такое различие в величине РаОг перед убоем указывает на гиподинамическую реакцию и связано со снижением функциональных возможностей у свиней по мере возрастания нагрузок.

Одним из механизмов компенсации, направленном на достаточное обеспечение тканей кислородом, в условиях изменения величины РаОг является доставка его к тканям не за счет растворения в крови, а путем связывания с гемоглобином.

Принимая во внимание S-образную форму кривой диссоциации оксигемоглобина с очень крутым подъемом (между РаОг 10-15 мм рт.ст.) и пологой частью (между РаОг 70-100 мм рт.ст.), можно ожидать, что взаимоотношение колебаний между величинами РаОг и SaOo будет определяться пологой частью.

Исследования Sa02 подтвердили такое предположение. Средний уровень насыщения артериальной крови кислородом у животных I группы после транспортировки снизился на 2,5% (р<0,01 при tSt= 16,00), II группы -на 2,8% (р<0,01 при ts,= 31,40) и III группы на 3,5% (р<0,01 при tSt= 17,9) по сравнению с исходными значениями в каждой группе [12].

Сравнение динамики изменений величины напряжения кислорода и насыщения крови кислородом показывает, что в последнем случае во всех группах наблюдается в меньшей степени выраженная вариабельность. Сопоставление полученных данных показывает, что при одной и той же

функциональной нагрузке большему изменению по величине РаСЬ соответствует меньшее изменение SaCb.

Таким образом, величина напряжения кислорода более чувствительна к нагрузкам, получаемым животным при транспортировке, чем степень насыщения крови кислородом.

Такая форма зависимости по мнению И.И. Лихницкой(1973), В.А. Березовского (1975), М.А. Гриппи (1997), J.N. Cameron (1989) обеспечивает достаточную оксигенацию тканей, даже если РаСЬ снизится до 70 мм рт.ст.

Полученные и представленные в таблице 2 результаты свидетельствуют, что при стрессовых и физических нагрузках, воздействующих на свиней при транспортировке, увеличиваются требования к физиологическим системам и органам, обеспечивающим доставку глюкозы и кислорода. Возрастание энергетических потребностей у животных осуществляется двумя путями окислительного распада глюкозы: аэробным и анаэробным энергообразованием. Конечным компонентом энергообразования является молочная кислота. По изменению её концентрации в крови определялось соотношение аэробных и анаэробных реакций.

При кратковременных нагрузках, в условиях достаточного кислородного обеспечения и запаса мышечного гликогена в работающих мышцах, энергообразование идет в основном за счет аэробного гликолиза. Это определило увеличение концентрации молочной кислоты в крови [HL] у животных I группы на 37,5% и её возрастание с 5,6 ± 0,1 ммоль/л в исходном состоянии до 7,7 ± 0,3 ммоль/л (р<0,01 при tSt= 6,56).

По мере увеличения тяжести функциональных нагрузок в организме животных происходило ограничение резервных возможностей кровообращения, компенсаторное напряжение вентиляции и снижение насыщения крови кислородом. Такая перестройка физиологических систем и органов обусловила сдвиг энергообразования в сторону анаэробного пути. В условиях недостаточного окисления молочная кислота накапливается в мышцах. Выбросом её в кровь объясняется увеличение HL в 1,8 раза у свиней II группы и в 2,2 раза у животных III группы по сравнению с исходными значениями. Величина концентрации молочной кислоты после транспортировки соответственно составляла 10,2 ± 0,3 ммоль/л и 12,9 ± 0,4 ммоль/л. Разность между этими величинами оставалась статистически достоверной (р<0,01 при tst= 5,40), хотя была значительно меньше, чем их отличие от исходных показателей.

Накопление недоокисленных продуктов обмена веществ определило достоверность изменений показателя дефицита оснований в крови (BE) при различных нагрузках по сравнению с исходными данными.

В I группе свиней дефицит оснований увеличился с -0,3±0,28 мэкв/л перед транспортировкой до -1,6±0,24 мэкв/л по прибытии на убойный пункт (р<0,01при tst= 3,59). У животных III группы за счет поступления в кровь

кислых продуктов дефицит оснований увеличился ещё больше с -0,3±0,40 мэкв/л до -2,2±0,54 мэкв/л (р<0,01 при tSl=2,73). Во II группе показатель ВЕ по прибытии на убойный пункт составил -1,8±0,64 мэкв/л против -0,4±0,26 мэкв/л в состоянии относительного покоя до транспортировки (р<0,05 при tSl=2,02).

Таким образом, у животных после транспортировки наблюдалось накопление недоокисленных продуктов, что повлияло на увеличение величины дефицита оснований в крови свиней во всех группах.

Анализ величины дефицита оснований у животных перед убоем показал, что средние значения во всех группах были выше исходных величин, хотя достоверного различия в I группе животных не выявлено (табл.2). Достоверная разница р<0,05 при tSl=2,51 величины ВЕ в восстановительный период (-1,7±0,39 мэкв/л) по сравнению с исходным значением (-0,3±0,40 мэкв/л) отмечалась у свиней III группы и у животных, перенесших среднюю нагрузку. В последнем случае показатель ВЕ за время пребывания на убойном пункте не успел восстановиться и составлял -1,2±0,57 мэкв/л, что достоверно (р<0,05 при tSt=2,03) отличалось от исходного значения (-0,4±0,26 мэкв/л).

Полученные данные свидетельствуют, что реакция на нагрузку, связанную с транспортировкой к месту убоя, по показателю ВЕ, отражающему метаболический компонент pH (формула 1), выражена у всех групп животных, но у свиней, перенесших среднюю и тяжелую нагрузку, количество недоокисленных продуктов обмена перед убоем оставалось высоким и не восстановилось до исходного уровня.

Обобщение результатов исследования физиологических параметров, представленных в таблице 2, указывает на то, что по мере возрастания функциональных нагрузок, то есть увеличения времени транспортировки и расстояния до убойного пункта, растет напряжение физиологических систем и органов, обеспечивающих дыхательный и метаболический компонент pH крови.

Анализ величин, характеризующих динамику физиологических параметров, свидетельствует, что увеличение функциональной нагрузки переводит организм животного на анаэробное энергообразование, сопровождается несоответствием поступления кислорода с интенсивностью обменных процессов, что и определяет изменение величины метаболического компонента. Но наличие в крови кислых продуктов, в частности молочной кислоты, снижает способность гемоглобина связывать кислород в крови. Об этом свидетельствует снижение уровня насыщения крови кислородом, особенно у свиней III группы. Такой физиологический механизм у животных, получивших тяжелую нагрузку, способствует более полной отдаче кислорода мышечной ткани.

Таким образом, динамичность физиологических функций, систем и органов, определяющих у животных респираторный и метаболический

компоненты, обеспечивает постоянство величины рН крови и её устойчивость к воздействию различных физических, химических и биологических факторов. Опыт практического использования подтверждает, что при трактовке патофизиологических состояний у животных, связанных с изменением концентрации ионов водорода в крови, важно учитывать не их абсолютную величину, а соотношение этих компонентов (JI.JL Шик, Н.Н. Канаев, 1980; Б.С. Семенов, А.Ю. Нечаев, 2000; J.N.Cameron, 1989).

2.2.2. рН крови как показатель резистентности организма при функциональных нагрузках

Количественное представление, стандартность и технологичность принципов измерения показателей К1ЦБ и их аналогичная техническая реализация в различных странах дают возможность гармонизировать результаты исследований и выработать единые количественные критерии для объективной оценки состояния резистентности животного на предубойном этапе.

В ходе проведенных исследований показателя рН крови в условиях относительного покоя не выявлено достоверной разницы в его величине в зависимости от пола. У хрячков этот показатель составлял 7,42 ± 0,007 против 7,43 ± 0,009 (р>0,05 при tSt= 0,91) у свинок. Не обнаружилось различия и по возрастным группам. Средние величины рН крови у свиней 67 месячного и 8-9 месячного возраста составляли соответственно 7,42 ± 0,008 и 7,43 ±0,010 (р>0,05 при tst= 0,76).

В исходном состоянии до транспортировки к месту убоя величина рН крови колебалась от 7,36 до 7,55 и в среднем по всем группам составляла 7,43 ±0,01 [31].

Полученные данные, обобщение накопленного материала и опыта зарубежных коллег позволило выделить следующие градации в изменении параметров рН крови, показателей респираторного (рСОг) и метаболического (BE) компонентов (Д. Робинсон, 1969; Р. Хашен, Д. Шейх, 1981; А.Ю. Нечаев, 2001). Наличие этих трех показателей дает возможность определить величину и генез нарушений. Отклонения нормальных величин КЩБ представлены в таблице 3.

Соответственно значениям рН выделяются ацидоз компенсированный (рН=7,55-7,35); субкомпенсированный (рН=7,34—7,30); декомпенсирован-ный (рН=7,29-7,21) и алкалоз компенсированный (рН=7,35-7,55); субкомпенсированный (рН=7,56-7,60); декомпенсированный (рН = 7,617,68).

При клиническом осмотре и результатам исследования показателей рН крови в условиях относительного покоя у 95 обследованных животных перед транспортировкой на убойный пункт отклонений от нормы выявлено не было [28].

Таблица 3

Отдельные показатели кислотно-щелочного баланса крови __у свиней в норме и при патологии _

Показатели Норма Степень нарушений Ацидоз Алкалоз

рН 7,35-7,55 умеренная выраженная тяжелая 7,34-7,30 7,29-7,21 7,20 и ниже 7,56-7,60 7,61-7,68 7,69 и выше

рС02, мм рт. ст. 35,0-45,0 умеренная выраженная тяжелая 45,1 -50,0 50,1 -60,0 61,0 и ниже 34,9-28,0 27,9 - 20,0 19,9 и ниже

ВЕ, мэкв/л +2,5 - - 2,5 умеренная выраженная тяжелая -2,6 - - 5,2 -5,3--7,5 -7,6 и ниже +2,6- + 6,5 +6,6-+12,0 +12,1 и выше

Анализ полученных данных после транспортировки показал, что только у 36 животных (38%) постоянство рН крови обеспечивалось без дополнительного привлечения резервных возможностей физиоло-гических систем и органов, то есть все показатели КЩБ находились в пределах нормы. В 41 случае (43,1%) при нормальном значении рН крови наблюдались изменения дыхательных и метаболических компонентов, то есть имели место компенсированные нарушения систем и органов, обеспечивающих постоянство этого показателя гомеостаза. Субкомпенсированные нарушения величины рН наблюдались у 18 животных (18,9%).

Компенсированный дыхательный ацидоз отмечался в 16 случаях, компенсированный дыхательный алкалоз зарегистрирован у 18 свиней и в 7 случаях имел место компенсированный метаболический ацидоз. При компенсированных расстройствах КЩБ (рН в норме) одновременно наблюдались две противоположно направленных формы сдвигов, из которых одна причинная, другая компенсаторная. Так метаболический ацидоз компенсировался дыхательным алкалозом, дыхательный ацидоз -метаболическим алкалозом. Для определения тяжести предубойного состояния животных, возможности коррекции и прогноза учитывалось, какие из этих нарушений являются причиной, а какие следствием. Заключение основывалось на том, что причинные сдвиги КЩБ выражены значительнее, чем компенсаторные. Так, у одного из животных после транспортировки рН=7,36; РаС02=32,9 мм рт.ст.; ВЕ = -5,5 мэкв/л, то есть при нормальном рН сдвиг метаболического компонента ВЕ выражен больше, чем дыхательного показателя РаС02. В другом случае по прибытии животного на убойный пункт зарегистрированы следующие показатели:

рН=7,47; РаС02=27,2 мм рт.ст.; ВЕ = -3,1 мэкв/л. В этом случае выражено увеличение РаССЬ, а метаболический параметр ВЕ изменен умеренно. Таким образом, в первом наблюдении имеется метаболический ацидоз, компенсированный дыхательным алкалозом, а во втором - дыхательный алкалоз, компенсированный метаболическим ацидозом [6].

Проведенные исследования показали, что количество и степень изменений рН крови находятся в прямой зависимости от величины и степени функциональной нагрузки. Чем дальше расположены фермы от убойного пункта и больше время нахождения в пути, тем значительнее выражены сдвиги в величине рН крови (рис.1).

Степан нарушений

]-отсутствуют! [-компенсированные I-1 -субкомпенсировшные

Рис. 1. Степень и типы нарушений кислотно-щелочного баланса у свиней после дозированных функциональных нагрузок

В 1-й группе из 35 свиней, перенесших легкую функциональную нагрузку, в 83% случаев отсутствовали изменения и только в 6 случаях

(17%) при нормальном рН крови отмечены сдвиги метаболического и респираторного компонентов. Во Н-й группе животных отсутствие нарушений отмечено только у 7 животных, в остальных 23 случаях отмечались компенсаторные нарушения. У всех свиней III группы, перенесших тяжелую функциональную нагрузку, наблюдались нарушения физиологических систем и органов, обеспечивающих постоянство рН крови. Из 30 животных этой группы в 12 случаях имели место компенсированные, в остальных - субкомпенсированные нарушения величины рН крови [34,40].

Сопоставление клинических симптомов и полученных показателей КЩБ позволяет объективизировать заключение о состоянии животных и дать индивидуальную количественную и качественную характеристику его реакции на воздействие повреждающих факторов на всех стадиях предубойного этапа.

Применение функционально-диагностических методов исследования позволяет врачу-ветсанэксперту обосновать свое заключение о состоянии резистентности животного не только опираясь на клиническую симптоматику, но и с учетом степени нарушений физиологических систем и органов, выполняющих гомеостатическую задачу по обеспечению постоянства рН крови, что позволяет своевременно провести коррекцию выявленных нарушений.

Полученные данные подтвердили, что при метаболическом ацидозе основным компенсирующим органом являются легкие. Установлено, что компенсация осуществляется за счет избыточного выведения СО2. Это снижает концентрацию респираторного компонента (РаСО> в крови пациента) и, следовательно, делает рН крови менее кислым. При респираторном алкалозе наблюдалось снижение напряжения углекислого газа в артериальной крови (как результат гипервентиляции альвеол).

Основной задачей, которую должно разрешить любое функциональное исследование, является выяснение резервных возможностей достаточности функции изучаемой системы, определение способности организма животного отвечать адекватной реакцией на предъявляемые к ней требования.

В ходе проведенных исследований показано, что у 95 из 96 животных физиологические системы и органы, обеспечивающие поддержание постоянства рН крови, могут выполнять эту задачу в условиях покоя. При предъявлении дополнительных требований в виде различных по степени тяжести и интенсивности функциональных нагрузок, связанных с транспортировкой животных к месту убоя, только у 36 животных (38%) не обнаружено нарушений, а у 59 (61%) выявлены признаки недостаточности систем и органов (рис.1).

По интенсивности выявленных нарушений физиологических систем и органов, определяющих резистентность организма, и по их способности

решать гомеостатическую задачу по поддержанию постоянства рН крови полученные результаты позволили выделить и обосновать три степени функциональной недостаточности.

Недостаточность I степени - неспособность систем и органов осуществлять функцию по поддержанию постоянства рН крови не обнаруживается в покое, а определяется лишь при предъявлении значительных требований к системе, то есть при максимальных нагрузках. В проведенных исследованиях о такой степени недостаточности указывают компенсированные и субкомпенсированные изменения рН крови, выявленные соответственно у 12 и 18 животных при тяжелой нагрузке.

Недостаточность II степени - нарушение способности системы осуществлять функцию определяется при выполнении умеренной нагрузки, но не обнаруживается в покое. Такая степень недостаточности в виде компенсированных нарушений выявлена в 29 случаях.

Недостаточность III степени - неспособность организма осуществлять функцию по поддержанию рН крови обнаруживается при любой нагрузке, то есть при предъявлении любых повышенных требований, а в покое выявляется ограниченная способность поддерживать постоянство рН. С III степенью недостаточности было выявлено только одно животное.

В ходе проведенных исследований установлено, что величина рН крови является интегральным показателем состояния функции многих взаимосвязанных систем и органов. Поэтому функциональные исследования КЩБ позволяют не только определить степень нарушений функции поврежденной системы, оценить резервные возможности компенсирующих систем и органов, но и распознать преморбидную фазу начинающегося заболевания.

Проведенные исследования по определению способности организма животных сохранять постоянство рН крови не дают представления ни о патологоанатомическом, ни о бактериологическом диагнозе. Они показывают насколько меняется резистентность организма животных, обеспечивающая постоянство его внутренней среды в зависимости от функциональных нагрузок.

По данным ряда авторов установлено, что резистентность позвоночных животных при воздействии повреждающих факторов определяется неспецифическим и специфическим иммунитетом (Задорожин ПА., 1996; Петров A.M., 2006). Для определения степени влияния физических и стрессовых факторов на ослабление иммунитета свиней при различных функциональных нагрузках было проведено

бактериологическое исследование продуктов убоя на контаминацию их сальмонеллами.

2.2.3. Контаминация мезентериальных лимфоузлов

сальмонеллами после функциональных нагрузок

При выбранных функциональных нагрузках различной степени тяжести обследованные животные подвергались одновременному воздействию стрессовых, физических факторов и меняющихся условий внешней среды.

Для выявления, насколько тяжесть перенесенных функциональных нагрузок способствует активности возбудителей пищевых зоонозов, было проведено бактериологическое исследование проб мезентериальных лимфоузлов с целью выявления в них сальмонелл.

Рис.2. Зависимость количества контаминированных сальмонеллами проб от величины функциональной нагрузки на предубойном этапе

Из 95 обследованных проб, взятых после убоя клинически здоровых животных, сальмонеллы были выявлены в 16 (16,8%) случаях (рис.2). По серологическим свойствам культуры были отнесены к следующим серотипам: Б. гурЫтипит - 8, Б. етегШ&в - 7 и Б. апаШт - 1 культура.

Проведенными исследованиями установлено, что в 8% случаев у животных, перенесших при транспортировке легкую нагрузку, в пробах из мезентериальных лимфоузлов были выявлены возбудители сальмонеллеза. После средней нагрузки количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13%, а после тяжелой нагрузки - 30%. Такой результат указывает на повышение частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб по мере увеличения стресса и физического напряжения.

Полученные данные согласуются с литературными источниками, свидетельствующими, что эмерджентные пищевые зоонозы связаны в первую очередь с сырьем и продукцией, полученными от клинически здоровых животных, и подтверждают существующее мнение о влиянии повреждающих факторов на равновесие во взаимоотношении хозяин-паразит (В.И. Покровский, Б.Л. Черкасский, 1993; А.В. Куликовский, 2002).

По мнению исследователей, любые меняющиеся условия ведут к изменению динамического равновесия в отношениях хозяин-паразит, снижая защитные силы организма и стимулируя жизнедеятельность патогенных микроорганизмов, как проживающих в животных, так и обитающих в окружающей среде (N.N. Lizko., 1987; К. Fehlhaber, Т. Alter, 1999).

Сопоставление количества контаминированных проб с характером изменения КЩБ позволило отметить, что по мере нарушения рН крови увеличивается количество случаев выявления сальмонелл. Взаимосвязь частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб и измене-ний величины рН крови указывает на зависимость этих показателей от резистентности организма животных. Отмечено, что в 75% эти случаи наблюдались при дыхательном алкалозе. Вероятно, более благоприятные условия для стимуляции жизнедеятельности сальмонелл в организме облигатного хозяина обеспечиваются при сдвиге рН крови в щелочную сторону.

Установленная взаимосвязь частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб и изменениями величины рН крови у свиней после функциональных нагрузок, связанных с транспортировкой к убойному пункту, определяется зависимостью этих показателей от резистентности организма животного. Таким образом, ещё раз подтверждается точка зрения, определяющая устойчивость организма к повреждающим факторам (биологическим, химическим, физическим и т.д.) как способность сохранять свой гомеостаз.

Являясь интегральным показателем постоянства внутренней среды организма, количественная и качественная характеристика рН крови как индикатор отражает адекватность доставки кислорода и потребность в нем всех систем и органов, обеспечивающих как жизнедеятельность животных, так и их защиту при воздействии повреждающих факторов.

Проведенные исследования показали, что интенсивность окислительных процессов аэробного и анаэробного энергообразования влияет на рН крови и работающих мышц в зависимости от величины функциональных нагрузок, полученных свиньями перед убоем. Для определения влияния таких нагрузок на биохимические свойства мяса, состоящего на 60 — 80% из мышц, выполнялись измерения рН мяса в период его созревания.

2.2.4. Влияние функциональных нагрузок на изменение рН мяса в период его созревания

Несмотря на то, что при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса рН-метрии отводится дополнительное место, главное достоинство определения показателя рН в комплексе регламентированных исследований - его количественная оценка. Сравнительный анализ результатов измерения рН в ш.5еш1шегпЬгапо5и5 (рН т.з.) сразу после убоя показал разницу в её величинах в зависимости от длительности и интенсивности функциональных нагрузок, полученных животными на предубойном этапе.

При длительной (тяжелой) нагрузке у животных III группы рН т.е. имело среднюю величину 6,72 ± 0,12, показатель рН т.е. от животных I группы, получивших кратковременную (легкую) нагрузку, составлял 6,42 ± 0,10 и во II группе, перенесших среднюю нагрузку, рН т.е. имел значения 6,61 ± 0,09. Разность средних величин показателей рН т.э., полученных сразу после убоя, была статистически достоверной между всеми группами животных. Наиболее выраженной достоверность определялась между I и III (р<0,01 при 151= 15,00) и I и II группами (р<0,01 при 151= 10,02). Менее выраженные, но достоверные отличия оставались в этот период у животных II и III групп (р<0,01 при 4,28). Во всех случаях мясо от животных, перенесших тяжелую и умеренную функциональную нагрузку, характеризовалось сдвигом рН т.е. в сторону алкалоза.

Наиболее выраженное снижение величины рН т.э. выявлено в первый час после убоя. В среднем при легкой нагрузке кислотность увеличилась на 15% в мясе животных, перенесших умеренную и тяжелую нагрузку, соответственно на 18% и 9%. В показателях рН т.Б. достоверные различия за этот период сохранялись только между I и III (р<0,01 при 21,92) и II и III групп (р<0,01 при 13[= 20,71).

В остальные временные отрезки периода созревания отмечалось медленное, но стабильное снижение рН т.Б. во всех группах. При этом по мере увеличения функциональных нагрузок сохранялась тенденция к гипоацидным реакциям в мышце [7, 25].

В конечном итоге за весь период созревания снижение величины рН т.з. по сравнению с исходным уровнем составило в среднем во всех группах 20%. Временная характеристика изменений рН т.з. за этот период графически приближалась к гиперболической зависимости. Такая динамика определяет качество мяса, смещая его в зону РБЕ мяса. При этом у животных, перенесших тяжелую нагрузку, в конце периода созревания сохраняется достоверно выраженный сдвиг рН т.Б. в сторону оснований (5,55 ± 0,08) относительно рН т.е. 5,36 ± 0,06 от животных I группы (р<0,01 при 11,89).

Таким образом, при длительном воздействии на свиней стресса и физического напряжения наблюдается сдвиг рН мяса в сторону алкалоза.

Отмечено, что такие изменения не только влияют на качество мяса, но и благоприятствуют развитию в мясе микроорганизмов и предопределяют его меньшую стойкость при хранении.

Результаты проведенных исследований позволяют дать не только количественную характеристику биохимическим процессам, но и прогнозировать качество и безопасность мяса с учетом изменения величины его рН. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее динамичные изменения величины рН мяса происходят в первые часы его созревания, поэтому коррекция в этот период аутолиза наиболее эффективна [30, 33].

2.2.5. К оценке методов выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветерпнарно-санптарной экспертизе мяса и мясопродуктов 2.2.5.1. Результаты исследования проб мяса со слабым уровнем инвазии трихинеллами

С учетом международных и отечественных требований безопасности мяса и различного отношения к методам выявления трихинелл в условиях слабой инвазии (от 2 до 6 личинок в 1 гр. мяса) проведено сравнение эффективности регламентированных методов компрессорной трихинеллоскопии и искусственного переваривания по критериям специфичности и чувствительности.

Результаты исследования, представленные в таблице 4, свидетельствуют о низкой чувствительности метода КТ (компрессорной трихинеллоскопии). Так, ложноотрицательные результаты отмечены в 56,7% от всех отрицательных ответов.

Таблица 4

Результаты сравнительных исследований проб мяса

со слабым уровнем инвазии трихинеллами_

Метод компрессорной трихинеллоскопии (личинок на 1 гр.) Метод искусственного переваривания Итого

положительный отрицательный

Отрицательный 51(56,7%) 39 (43,3%) 90(100%)

Положительный 0-2 2-4 4-6 17(73,9%) 16(88,9%) 12(92,3%) 6 (26,1%) 2(11,1%) 1 (7,7%) 23 (100%) 18 (100%) 13 (100%)

Итого 96 (65,7%) 48 (34,3%) 144 (100%)

Такое количество ложноотрицательных результатов говорит о низкой чувствительности метода - 46,9%. Ложноположительные ответы при КТ составляли 16,7% от всех положительных случаев. Специфичность метода составляла 81,2%. По мере увеличения уровня зараженности специфичность

KT возрастала и при инвазии 4-6 личинок в 1 гр. мышц достигала 97,5% [14, 32].

Таким образом, простой и широко применяемый на практике метод KT недостаточно эффективен при слабом заражении мышц личинками трихинелл. Такой результат обосновывает необходимость обязательного применения метода искусственного переваривания при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов на трихинеллез, так как слабые инвазии являются причиной поражения людей и животных значительно чаще, чем интенсивные и умеренные [3,13. 20].

2.2.5.2. Сравнительный анализ методов контроля

мясопродуктов при сальмоиеллезе и листериозе

Для повышения диагностической достоверности при идентификации возбудителей сальмонеллеза и листериоза были сопоставлены современные методы, применяемые в отечественной и зарубежной практике ветсанэкспертизы при контроле безопасности мяса и мясопродуктов.

В процессе проведения сравнительного анализа различных методов выявления бактерий рода Salmonella было исследовано согласно ГОСТ 30519-97 и международному стандарту ISO 6579 : 2002 50 проб мяса и мясопродуктов в вакуумной упаковке.

Сравнительная оценка культурального, иммуноферментного (VIDAS SLM) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл показала, что число положительных результатов в пробах мясопродуктов, полученных при применении полимеразно-цепной реакции (PCR) превышает число позитивных ответов, полученных другими методами. Такой результат объясняется высокой чувствительностью данного метода и его способностью выявлять не только живые, но и нежизнеспособные сальмонеллы, не дающие рост на питательных средах. Поэтому наибольшее совпадение результатов исследований (98%) определялось при выявлении сальмонелл культуральным и иммуно-ферментным (VIDAS SLM) методами, наименьшее (94%) - между культуральным и молекулярно-биологическим методами [11, 15, 16, 27].

Наибольшая специфичность (97,92%) была отмечена при выявлении сальмонелл культуральным и иммуноферментным методами. Исследования с применением молекулярно-биологического и иммуно-ферментного методов характеризовались высокой автоматизацией процесса исследования и быстротой получения конечного результата [2,18,22, 23].

Согласно отечественным и международным нормативным документам по определению сальмонелл положительные результаты, полученные упомянутыми методами, не являются окончательными и требуют подтверждения. При проведении исследований для подтверждения принадлежности выделенных культур к сальмонеллам использовались биохимические панели системы API 20Е (фирмы «BioMerieux»),

Положительные результаты по выявлению сальмонелл в исследуемых мясопродуктах отмечались в одном случае в свежих пробах и такое же количество случаев в пробах с истекшим сроком реализации.

В процессе проведения сравнительного анализа различных методов выявления бактерий рода Listeria было исследовано согласно вышеупомянутому ГОСТ Р 51921-2002 и международному стандарту ISO 11290-1 50 проб мясопродуктов в вакуумной упаковке.

Из 50 исследованных образцов листерии были выявлены в 11 случаях. При этом 9 из 11 положительных проб были с истекшим сроком реализации продукта. В ходе биохимической идентификации выделенных микроорганизмов рода Listeria, проведенной с помощью стрипов API Listeria, была определена L.monocytogenes в 3-х случаях, в 6-ти - L. welschimeri и в 2-х - L.innocua. Наличие гемолиза на кровяном агаре (SB) и характерная реакция в виде зоны просветления на хромогенной среде ALOA позволяла дифференцировать L.monocytogenes от непатогенных видов листерий. Применение среды ALOA позволило также подавить рост сопутствующей микрофлоры и сократить временные затраты в процессе качественного и количественного определения L.monocytogenes. В отечественной практике ветсанэкспертизы не проводится количественное определение в пищевых продуктах L.monocytogenes, хотя в странах ЕС оно регламентировано ISO 11290-2 и установлена допустимая концентрация Listeria monocytogenes в пищевых продуктах не более 100 КОЕ/г [5, 21, 39 ].

Известно, что листериоз, как многие инфекционные заболевания, возникает в условиях микробной ассоциации, связанной с постоянным присутствием разнообразных микроорганизмов. Результаты исследований по определению наличия роста сопутствующей микрофлоры на различных питательных средах, используемых в работе для выделения листерий, представлены в таблице 5.

В процессе исследований было определено соотношение роста листерий и сопутствующей микрофлоры (JI/C) на средах Oxford, PALCAM и ALOA. На среде PALCAM обнаружен менее интенсивный рост сопутствующей микрофлоры (соотношение Л/С=1,5-1,8), чем на Oxford-агаре (соотношение JI/C=1,0-1,1). Наиболее обильным рост сопутствующей микрофлоры был на Oxford-агаре, её рост одновременно с ростом листерий отмечался во всех чашках свежих проб (6/6), и в 8 чашках из 9 (9/8) проб с истекшим сроком реализации. Наличие сопутствующей микрофлоры на среде ALOA было наименьшим (соотношение JI/C = 2,0-3,0), что подтверждает её более высокую специфичность [8].

В ходе работы была проведена сравнительная оценка методов выявления L.monocytogenes: культурального, иммуноферментного (VIDAS LMO 2) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR).

Таблица 5

Рост бактерий рода Listeria и сопутствующей микрофлоры на средах _Oxford, PALCAM и ALOA_

Виды питательных сред Соотношение листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С)

В свежих пробах В пробах с истекшим сроком реализации

Oxford 6/6(1,0) 9/8(1,1)

PALCAM 3/2(1,5) 9/5(1,8)

ALOA 2/1 (2,0) 9/3 (3,0)

Данные, представленные в таблице 6, показывают, что не все RealTime PCR-положительные результаты подтверждались культуральным методом и тестом VIDAS (LM02), что объясняется высокой чувствительностью метода ПЦР и его возможностью выявлять патогенные листерии в пробах с низким уровнем контаминации, а также не только живые, но и нежизнеспособные L.monocytogenes, не дающие роста характерных колоний на питательных средах [9, 10, 24].

Таблица 6

Частота выявления L.monocytogenes различными методами_

Listeria monocytogenes

Вид продукта Число образцов PCR L.mono Kit+ VIDAS LM02 + Культураль- ный метод +

Мясо-свинина

(свежее) 8 3 (6%) 0 0

Готовые

мясопродукты (свежие) 17 9(18%) 2 (4%) 2 (4%)

Готовые

мясопродукты (с истекшим сроком реализации) 25 20 (40%) 0 1 (2%)

Общее количество 50 32 (64%) 2 (4%) 3 (6%)

Наибольшая специфичность была отмечена при выявлении L.monocytogenes культуральным и иммуноферментным методами. Исследования с применением молекулярно-биологического и иммуно-ферментного методов характеризовались высокой автоматизацией процесса исследования и быстротой получения конечного результата [26, 27, 36]. Согласно отечественным и международным нормативным документам по определению патогенных листерий положительные результаты, полученные упомянутыми методами, не являются окончательными и требуют

подтверждения. При проведении исследований для подтверждения принадлежности выделенной культуры к патогенному виду L.monocytogenes использовались биохимические панели системы API Listeria (фирмы «BioMerieux»). Положительные результаты по выявлению L.monocytogenes в исследуемых мясопродуктах отмечались в 2-х случаях в свежих пробах и в 1-м случае в пробах с истекшим сроком реализации [35, 37,38].

Проведенные сравнительные оценки методов по критериям чувствительности и специфичности при выявлении возбудителей трихинеллеза, сальмонеллеза и листериоза показывают, что для дифференцированного подхода к результатам исследования необходимо стандартизировать методы и питательные среды, применяемые в различных странах. Обобщение накопленного международного опыта позволит повысить диагностическую достоверность и состоятельность результатов исследования, выработать единые критерии для оценки безопасности мяса и мясопродуктов.

ВЫВОДЫ

1. Обоснованы, разработаны и применены функциональные методы исследования с использованием современной техники для проведения мониторинга физиологических параметров, обеспечивающих постоянство важнейшего показателя гомеостаза - рН крови, с целью оценки функционального состояния органов и систем, определяющих устойчивость организма свиней при транспортных нагрузках на предубойном этапе.

2. Установлены изменения величины рН крови свиней по мере возрастания дополнительных требований (нагрузки), связанной с увеличением времени и расстояния при транспортировке к убойному пункту.

При легкой нагрузке у 82,8% свиней нарушений гомеостаза не наблюдалось, в 17,2% случаев постоянство величины рН крови обеспечивалось компенсаторным напряжением буферных систем организма свиней. При умеренной нагрузке у 22,6% свиней отмечалась устойчивость гомеостаза, в 74,2% случаев наблюдались компенсаторные нарушения и в одном случае у свиноматки имели место декомпенсированные изменения величины рН крови. При тяжелой нагрузке у всех свиней по прибытии на убойный пункт наблюдались нарушения гомеостаза. В 40% случаев изменения величины рН крови носили компенсированный характер, в 60% -субкомпенсированный.

3. Мониторинг показателей кислотно-щелочного баланса свиней в условиях транспортных нагрузок по прибытии на убойный пункт выявил изменения как респираторного, так и метаболического компонентов рН крови. Напряжение углекислого газа крови, составляющее респираторный компонент рН крови, уменьшилось по сравнению с исходными значениями во всех группах животных: при легкой нагрузке - на 7,8%, при умеренной

нагрузке - на 11,2%, при тяжелой нагрузке на 15,5%. Дефицит оснований, составляющих метаболический компонент рН крови, увеличился по сравнению с исходным состоянием (-0,3 ± 0,28 мэкв/л) при легкой нагрузке до -1,6 ± 0,24 мэкв/л, а при умеренной нагрузке до -1,8 ± 0,64 мэкв/л. При тяжелой нагрузке накопление кислых продуктов обмена в крови свиней увеличило дефицит оснований до -2,2 ± 0,54 мэкв/л. Различные соотношения респираторного и метаболического компонентов определили разные типы нарушений кислотно-щелочного баланса крови: у 32% свиней наблюдался дыхательный ацидоз, у 45%-дыхательный алкалоз и у 23% -метаболический ацидоз.

4. Установлено увеличение концентрации молочной кислоты в крови свиней на 37,5% после легкой нагрузки, на 85,4% после умеренной нагрузки, на 122,4% после тяжелой нагрузки, которое сопровождалось уменьшением недоокисленных продуктов обмена в мясе в постмортальном периоде. У свиней, перенесших тяжелую нагрузку, наблюдался статистически достоверный сдвиг рН мяса в конце периода созревания в сторону оснований по сравнению с животными, перенесшими легкую нагрузку (5,55 ± 0,08 против 5,36 ± 0,06; р < 0,01).

Таким образом, функциональные исследования энергообмена у свиней установили, что увеличение транспортной нагрузки на предубойном этапе снижает резервы аэробного энергообразования, уменьшает количество кислот и гликогена в мышцах и приводит к снижению пищевой ценности мяса, приближая его к свойствам ББО - мяса, благоприятствуя развитию в нём микроорганизмов, предопределяя его меньшую стойкость при хранении.

5. Результаты бактериологического исследования мезентериаль-ных лимфоузлов в постмортальном периоде установили, что у свиней, получивших легкую нагрузку, сальмонеллы выделены в 8% случаев, у получивших умеренную нагрузку количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13%, а у перенесших тяжелую нагрузку -30%. Учитывая, что обсемененные пробы выявлены только у свиней с нарушениями гомеостаза, то исследование рН крови позволит на предубойном этапе прогнозировать вероятность контаминации мяса патогенными микроорганизмами.

6. Применение мониторинга состояния функции органов и систем, определяющих величину рН крови организма свиней на предубойном этапе, позволяет контролировать качество и безопасность мяса на начальных звеньях пищевой цепочки в процессе производства (животноводческие фермы, убойные пункты и т.д.), когда не затрачены средства и усилия на получение готового продукта, и есть возможность влиять на его качество, реализуя принцип «Здоровое животное - безопасное мясо».

7. Сравнительный анализ регламентированных методов определения возбудителей трихинеллеза при слабой инвазии выявил низкую

чувствительность (46,9%) и эффективность (58,3%) метода компрессорной трихинеллоскопии. Специфичность этого метода по мере снижения уровня инвазии от 4-6; 2-4 и 0-2 личинок в 1г. мышц соответственно уменьшалась от 96,7%, 95,1% и 86,7% относительно метода группового ферментативного переваривания. Результаты исследования свидетельствуют, что наиболее эффективным методом с позиций предупреждения трихинеллеза является метод выделения трихинелл, основанный на ферментативном переваривании мышечных проб.

8. Сравнительная оценка культурального, имунноферментного (VIDAS) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл и патогенных листерий в мясопродуктах по критерию эффективности характеризовалась наименьшим совпадением результатов между культуральным и молекулярно-биологическим методами, составлявшим соответственно 94% и 42%. Наибольшее совпадение результатов (98%) отмечали при применении культурального и иммуноферментного методов. Иммуноферментный метод (VIDAS) позволяет наиболее быстро обнаружить возбудителя в пищевой продукции, что и определяет возможность его применения в экспресс-диагностике сальмонеллеза и листериоза.

9. Сопоставление результатов первичных посевов на питательные среды: ALOA-arap по Оттавиани-Агости, PALCAM-arap и Oxford-arap, применяемых для избирательного роста листерий, показало, что величина соотношения листерий и сопутствующей микрофлоры (JI/C) на этих средах в пробах свежих мясопродуктов, соответственно равнялась 2,0; 1,5 и 1,0, а в пробах с истекшим сроком реализации соответственно 3,0; 1,8 и 1,1, что свидетельствуют о надежности хромогенной среды ALOA-arap по Оттавиани-Агости при идентификации патогенных штаммов листерий и служат основанием её применения для количественного определения L.monocytogenes в мясопродуктах после прямого посева.

10. Унифицированный подход к оценке международных методов и национальных стандартов, применяемых для выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов, на основе критериев эффективности, чувствительности и специфичности позволит обобщить опыт и повысить достоверность и состоятельность результатов исследований.

Автор признателен сотрудникам продовольственно-ветеринарной службы Краславского района Латвии за создание оптимальных условий при содружественном решении проблем, связанных с транспортировкой свиней на убойный пункт, выражает благодарность сотрудникам Института гигиены и технологии продуктов животного происхождения г. Мюнхен (Германия), а также коллективу лаборатории микробиологии и гигиены производства ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова за содействие и большую помощь при выполнении данной работы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Применение функциональных методов диагностики дает возможность с учетом клинической симптоматики определить компенсаторные возможности организма и представить индивидуальное клинико-функциональное экспертное заключение о состоянии животного согласно методическим рекомендациям «Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса», утвержденным Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., и данным, изложенным в методическом пособии «Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы», утвержденном методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №2 от 28 февраля 2007 г.

2. Определение функциональных возможностей организма свиней сохранять свой гомеостаз на всех стадиях предубойного этапа позволяет оценить адекватность реакции органов и систем животного на воздействие повреждающих факторов, связанных с транспортировкой к месту убоя. Полученные данные положены в основу для оптимального решения о выборе места расположения убойного пункта среди близлежащих свиноводческих хозяйств Краславского района (Латвия).

3. Установленная взаимосвязь основных физиологических параметров, определяющих функцию жизнеобеспечивающих систем и органов с кислотно-щелочным балансом (КЩБ) организма животного, дает возможность определить исходную базу для мониторинга функциональных показателей в условиях воздействия повреждающих факторов и проведения своевременной коррекции величины рН крови. Мероприятия (отдых, кормление, содержание, уход), направленные на восстановление выявленных нарушений в предубойном периоде, в конечном итоге повышают качество и безопасность мяса.

4. Применение результатов проведенных функциональных исследований в ветеринарных учреждениях г. Санкт-Петербурга и Ленинградской области показало их эффективность при восстановлении гомеостаза у животных, оказавшихся в чрезвычайных условиях (хирургическое вмешательство, стресс, неотложные и критические состояния).

5. Опыт сопоставления результатов исследований по диагностике пищевых зоонозов, полученных в отечественных и зарубежных лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, по критериям чувствительности и специфичности позволяет гармонизировать методы выявления возбудителей пищевых зоонозов в общепринятой системе международных координат и применять их при ветсанэкспертизе мяса и мясопродуктов согласно методическим рекомендациям: «Исследование

мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №4 от 19.06.2001 г.), «Метод полимеразной цепной реакции» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.), «Применение метода ПЦР в ветеринарной практике» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.).

6. Материалы исследований, изложенные в методических рекомендациях «Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., определили подходы для введения количественных критериев выявления L. monocytogenes в соответствии с международным стандартом ISO 11290-2, регламентирующим методы подсчета бактерий Listeria monocytogenes.

7. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры ветеринарной гигиены и санитарии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ

1. Нечаев А.Ю. Послеубойная диагностика трихинеллеза / АЛО. Нечаев, С.А. Серко // Мясная индустрия. - М., 2003. - №6. - С. 40 - 42.

2. Нечаев А.Ю. Применение автоматического анализатора mini VIDAS для определения сальмонелл /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе - М., 2006. -№3.- С. 35 - 36.

3. Нечаев А.Ю. Проблемы диагностики трихинеллеза в свиноводстве / А.Ю. Нечаев // Свиноводство. - М., 2006. - №4. - С.23 - 25.

4. Нечаев А.Ю. Диагностические возможности ветсанэкспертизы мяса при трихинеллезе / А.Ю. Нечаев // Все о мясе. - М., 2007. - №1. - С. 26 - 28.

5. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А. Ю. Нечаев // Ветеринарная патология. - М., 2007. -№ 1. - С. 141-143.

6. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животного / А.Ю. Нечаев // Ветеринария. - М., 2007. - №3. - С. 54 - 55.

7. Нечаев А.Ю. Применение рН-метрии в процессе ветеринарно-санитарной экспертизы мяса / А.Ю. Нечаев //Мясная индустрия - М., 2007.- №6. - С.58 - 60.

8. Нечаев А.Ю. Применение ускоренных микробиологических методов определения патогенных листерий в мясе /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе. - М„ 2007. - №3. - С.27 - 28.

9. Нечаев А.Ю. Экспресс-методы для определения листерий в мясе и мясных продуктах / А.В. Яшин, А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. - М., 2008. - №8. -С. 51-54.

10. Нечаев А. Ю. Сравнительный анализ результатов выявления Listeria monocytogenes в мясе и мясопродуктах /А.Ю. Нечаев // Международный вестник ветеринарии. - СПб., 2009. - № 3. - С. 13-17.

11. Нечаев А.Ю. Определение сальмонелл в мясе и мясных продуктах / А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. - М., 2009. - №7. - С. 25 - 28.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях

12. Нечаев А.Ю. Методика определения состояния вентиляции и кровотока в легких у животных с помощью оксигемометрии / А.Ю. Нечаев, М.В. Куляко // Материалы 54-й конф. молодых ученых и студентов. - СПб., 2000. - С. 64-65.

13. Нечаев А.Ю. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2001. - 32 с.

14. Нечаев А.Ю. Цистицеркоз крупного рогатого скота и свиней /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Практик. - СПб., 2001. - №5. - С. 6-8.

15. Нечаев А.Ю. К диагностике сальмонеллеза / А.Ю. Нечаев // Практик. -СПб., 2003. -№3/4. - С. 14-15.

16. Нечаев А.Ю. Выявление сальмонелл на пищевых предприятиях методом ПЦР / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2003 - №135,- С. 78 - 79.

17. Нечаев А.Ю. Ветсанэкспертиза мяса и мясопродуктов при цистицеркозе и трихинеллезе / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2003. - 44 с.

18. Нечаев А.Ю. Перспективы внедрения метода ПЦР в ветеринарную практику / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. -СПб., 2004,- С. 92-93.

19. Нечаев А.Ю. Современные методы оценки мясной продукции в кролиководстве /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Международный вестник ветеринарии - СПб., 2004 - № 2,- С.79-82.

20. Нечаев А.Ю. О дополнительных мерах по предупреждению трихинеллеза / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2006,- С. 74.

21. Нечаев А.Ю. К вопросу о безопасности продукции на мясном рынке России / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2006.- С. 99-100.

22. Нечаев А.Ю. Метод полимеразной цепной реакции / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина. - СПб., 2006. - 18 с.

23. Нечаев А.Ю. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина, Ю.Н. Соколова,- СПб., 2006 - 26с.

24. Нечаев А.Ю. Идентификация листерий в пищевых продуктах методом флуоресцентного анализа / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2006 - №138 - С. 62-64.

25. Нечаев А.Ю. О возможностях рН-метрии при ветеринарно-санитарной оценке мяса /А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2006 - №138.- С. 64-65.

26. Нечаев А.Ю. Оценка эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А.Ю. Нечаев // Ветеринарный консультант. - М., 2006. -№19.-С. 21-22.

27. Нечаев А. Ю. Ускоренные методы определения сальмонелл и листерий в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2007 - С. 57-58.

28. Нечаев А.Ю. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2007. - 15 с.

29. Нечаев А.Ю. рН-метрия на различных этапах ветсанэкспертизы мяса / А.Ю. Нечаев // Практик. - СПб, 2007. - №5. - С. 20-25.

30. Нечаев А.Ю. Применение показателей рН для ветеринарно-санитарной оценки мяса / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» СПбГАВМ. - СПб.,

2007,- С. 48-49.

31. Нечаев А.Ю. Кислотно-щелочной баланс как метод оценки функционального состояния животного / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» СПбГАВМ. - СПб, 2007. - С. 46-47.

32. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления трихинелл с низким уровнем инвазии / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2007 - №139 - С. 78-79.

33. Нечаев А.Ю. Крупный рогатый скот: содержание, кормление, болезни, диагностика и лечение: учеб. пособие / А.Ю. Нечаев, А.Ф. Кузнецов, Г.М. Андреев и др. - СПб: Изд-во «Лань», 2007 - 624с.

34. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев. - СПб, 2008. - 17 с.

35. Нечаев А.Ю. Особенности ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, А.В. Яшин // Практик. - СПб,

2008,- №5. -С. 14-19.

36. Нечаев А.Ю. Nachweis von Listeria monocytogenes in Vakuum verpackten Fleischerzeugnissen mittels PCR, VIDAS und kulturellen Methoden / A. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stotle. In: Amtstierarztlicher Dienst und Lebensmittelkontrolle. - Abstractband zur 49

Arbeitstagung des Arbeitsgebietes Lebensmittelhygiene. - Garmisch-Partenkirchen,

2008.-S. 141.

37. Нечаев A.IO. Особенности ветсанэкспертизы мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, A.B. Яшин // Известия СПбГАУ. - СПб., 2008. - № 11 - С. 101 - 104.

38. Нечаев А.Ю. Detection of Listeria monocytogenes in vacuum-packed meat products using real-time PCR, immunoassay and culturing / A. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stolle // Archives for Food Hygiene. -

2009.-Vol. 60.-P. 12-17.

39. Нечаев А.Ю. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса / А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева. - СПб., 2009.-12 с.

40. Нечаев А.Ю. Коррекция нарушений резистентности поросят по показателям кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев, К.В. Племяшов // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2009.- С. 84 - 85.

Подписано в печать 12.10.2010 г. Зак. №26 Объем 3,3 п.л. Тираж 110 экз. Типография «Московские ворота», Московский пр., д. 107

Содержание диссертации, доктора ветеринарных наук, Нечаев, Андрей Юрьевич

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Пищевые зоонозы как проблема взаимоотношений в сообществе живых организмов.

2.2. Резистентность живых организмов как способ защиты гомеостаза в процессе эволюции.

2.3. Физиологические системы организма животных и их функциональные возможности по поддержанию постоянства внутренней среды.

2.3.1. Функциональные методы и их применение для определения состояния систем и органов.

2.3.2. Функциональные исследования энергообеспечения мышц в условиях нагрузки и стресса.

2.3.3. Кислотно-щелочной баланс как показатель состояния физиологических систем, определяющих гомеостаз.

2.4. Предпосылки возникновения и распространения пищевых зоонозов, методы выделения и идентификации возбудителей.

2.4.1. Сальмонеллез.

2.4.2. Листериоз.

2.4.3. Трихинеллез.

2.5. Техническая регламентация методов ветсанэкспертизы и критерии оценки результатов проводимых исследований.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы.

3.1.1. Объекты исследования, их характеристика и выбор функциональных нагрузок при транспортировке свиней.

3.1.2. Методы проведения комплексного функционального исследования животных.

3.1.3. Методы определения физико-химических и микробиологических характеристик мяса.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Динамика показателей степени оксигенации крови, уровня энергообмена и показателей гомеостаза у свиней на различных стадиях предубойного этапа в условиях дозированных нагрузок

4.1.1. Динамика показателей оксигенации крови.

4.1.2. Динамика показателей энергообмена.

4.1.3. Динамика показателей кислотно-щелочного баланса.

4.1.4. Результаты функционального мониторинга физиологических параметров у свиней в условиях дозированных нагрузок.

4.2. Физико-химическая и микробиологическая характеристика мяса свиней в послеубойный период

4.2.1. Динамика показателей pH мяса в период созревания.

4.2.2. Контаминация лимфоузлов сальмонеллами после функциональных нагрузок.

4.3. Обоснование и выбор методов для оценки безопасности мяса и мясопродуктов.

4.3.1. Ускоренные методы выявления бактерий рода Salmonella и Listeria.

4.3.2. Послеубойная диагностика трихинеллеза при слабой инвазии.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах"

Актуальность темы. Пищевые зоонозы входят в число наиболее опасных для человека и животных заболеваний. Они распространены как на территории Российской Федерации, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья (В.П. Сергеев, 2001; E.H. Морозова, 2003; В.А. Долгов, 2005; Г.Г. Онищенко, 2005).

Постоянно меняющаяся ситуация, связанная с экологическими проблемами внешней среды, изменением резистентности животных и адаптации возбудителей к условиям обитания требует разработки новых методических подходов, отражающих динамику перемен в сообществе живых организмов и природы (В.В. Макаров, A.M. Смирнов, В.В. Сочнев, A.A. Алиев, 2004).

Работами F. Feldhusen, J. Hartung(1997), К. Fehlhaber, Т. Alter (1999), и др. показано, что изменения условий внешней среды, воздействия стрессовых и физических нагрузок снижают защитные функции организма животных и создают условия, стимулирующие жизнедеятельность патогенных микроорганизмов. В таком сообществе только за счет специфической и неспецифической резистентности живой организм способен сохранить гомеостаз и обеспечить в процессе эволюции своё видовое постоянство.

Подобные, но более кратковременные, внешние и внутренние повреждающие факторы воздействуют на животных на предубойном этапе. Установлено, что у 15 - 30 % животных в этот период снижается качество самых ценных частей туши (А. Schütte, 1994; К. Troeger, 1995; F. Feldhusen, J. Härtung, 1997; С. Abraham, 2006).

Пункт 1.2. «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1983) определяет различное отношение к убою животных в зависимости от их состояния, однако, до настоящего времени объективные критерии для определения предубойного состояния животных отсутствуют.

В литературе имеются сведения о снижении резистентности в условиях воздействия различных повреждающих факторов, но исследований показателей гомеостаза у животных на предубойном этапе не проводилось (N.N. Lizko, 1987; Е. Fazio, A. Ferlazzo, 2003).

Современные требования к качеству и безопасности продуктов питания предполагают всестороннюю комплексную оценку факторов, воздействующих не только на состояние защитных функций животного, но и на здоровье человека. Наиболее значимой опасностью для благополучия населения является микробное загрязнение продуктов возбудителями инфекций с пищевым путем передачи. Предупреждение пищевых зоонозов требует разработки новых подходов и критериев в системе ветеринарно-санитарного контроля, в том числе и внедрение высокочувствительных и эффективных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа (Б.Д. Маккреди, Д.А. Чимера, 1999; Ю.К. Ерофеева, К.С. Янковский, Ю.Г. Костенко, 2003; С.А. Шевелева, И.М. Нитяга и др., 2005; Н.Р. Ефимочкина, 2008).

С ростом распространенности и опасности пищевых зоонозов связана необходимость совместных усилий по изучению и оценке методов по их раннему выявлению. Существующая в России система контроля за качеством и безопасностью продуктов животноводства существенно отличается от системы, принятой в странах ЕС и США (ФЗ №184 - ФЗ «О техническом регулировании» от 27.12.2002; СанПин 2.3.2.1078 - 01; Л.Г. Подунова, 1996; Р.К. Шарма, 1999; В.И. Белоусов, A.C. Герасимов, 2004; E.H. Морозова, 2005; А.Н. Иванкин, Т.Г. Кузнецова, 2005).

Для улучшения доступа животноводческой продукции России на мировой рынок требуется совершенствование и гармонизация международных и национальных методов ветеринарно-санитарной экспертизы. Оценка мяса и мясопродуктов в системе международных координат позволит более эффективно решать задачи ветеринарносанитарной экспертизы по обеспечению стабильного благополучия и безопасности здоровья населения. Объединяющей основой содружественного решения проблем является разработка новых и использование унифицированных методов, основанных на достижениях биохимии, физиологии, патофизиологии, микробиологии, генетики и применении современного аппаратурного оснащения. Это и определяет актуальность темы. Настоящая работа является результатом выполнения научно-исследовательской темы № 10 «Ветеринарно-санитарная характеристика продуктов животного и растительного происхождения с учетом экологических ситуаций» по кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» с 1998 по 2008 гг.

Цель работы. Целью проведенных исследований является обоснование методов функциональной диагностики для определения состояния животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью в работе были определены следующие задачи:

1. Провести комплексное исследование функции систем и органов, определяющих их способность сохранять один из показателей гомеостаза (рН крови) у животных в условиях функциональных нагрузок.

2. Определить степень и характер нарушений показателей кислотно-щелочного баланса (КЩБ) у животных при дозированных функциональных нагрузках на предубойном этапе.

3. Изучить механизмы компенсации физиологических систем и органов, обеспечивающих сохранение функционального гомеостаза;

4. По интенсивности развития нарушений установить факт наличия и степени недостаточности функциональных систем, обеспечивающих постоянство рН крови.

5. Разработать и обосновать методические подходы для проведения функциональных исследований у животных на предубойном этапе.

6. Определить взаимосвязь изменений показателей КЩБ - при> функциональных на-грузках с результатами бактериологических исследований мезентериальных лимфоузлов.

7. Исследовать, влияние функциональных нагрузок, полученных животными на предубойном этапе, на физико-химические показатели мяса.

8. Определить эффективность методов, применяемых при экспертизе мяса на Tr. spiralis при наличии слабой инвазии.

9. Провести сравнительную оценку методов по выявлению, по выявлению L. monocytogenes и сальмонелл в мясе и мясопродуктах.

10. Сопоставить результаты первичных посевов для избирательного роста листерий и определить возможности для количественного определения' L. monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса.

Научная новизна. Впервые на основании комплексного физиологического исследования проведена оценка состояния функции систем и органов, обеспечивающих постоянство одной из важнейших констант организма - рН крови в условиях воздействия различных повреждающих факторов внешней и внутренней среды (физических, биологических, стрессовых и др.) на различных стадиях предубойного этапа, связанного с транспортировкой животных к месту убоя. Установлено, что количественная характеристика критериев, обеспечивающих кислотно-щелочной баланс, позволяет не только выявить факт наличия нарушения функционального гомеостаза, но и определить градации степеней недостаточности функциональных систем и органов, обеспечивающих постоянство рН крови.

Впервые показано, что при различных степенях тяжести функциональных нагрузок, обусловленных расстоянием от фермы (хозяйства) до убойного пункта и временем транспортировки, в организме животных имеет место тесная связь между соотношением аэробных и анаэробных механизмов энергообразования и величиной рН крови.

Установлена взаимосвязь между физиологическими параметрами, характеризующими функцию систем и органов, лимитирующих окислительные процессы в организме свиней в условиях различных нагрузок, и физико-химическими и микробиологическими показателями мяса.

Впервые введены количественные и качественные критерии, позволяющие определить резистентность (устойчивость) систем и органов, опираясь на их функциональное состояние. Это даст возможность предопределить и объективизировать экспертное заключение о состоянии животного, своевременно устранить выявленные нарушения и в конечном итоге обеспечить выпуск качественной и безопасной мясной продукции.

Предложен унифицированный подход к результатам исследований, полученных различными методами, применяемыми для выявления трихинелл при слабой инвазии, сальмонелл и L. monocytogenes на основе критериев эффективности, специфичности и чуствительности.

Определены пути совершенствования при выборе питательных сред для идентификации бактерий L. monocytogenes и их количественного определения в колбасных изделиях и продуктах из мяса в соответствии с международными требованиями.

Практическая значимость и реализация результатов работы. Установленные функциональные критерии определения состояния животных и проведение сравнительной оценки методов по выявлению патогенных листерий, сальмонелл и трихинелл в мясе позволяют:

- в комплексе с клинической картиной выявить функциональные нарушения, обеспечивающие гомеостаз, и дать объективную оценку состояния резистентности животного;

- провести коррекцию выявленных нарушений физиологических систем, обеспечивающих постоянство рН крови, у животных до убоя под контролем показателей кислотно-щелочного баланса;

- предупредить микробную контаминацию туш;

- повысить качество и безопасность мяса;

- использовать функциональные методы в практике ветсанэкспертизы на предубойном этапе, ввести количественную характеристику показателей, определяющих функциональное состояние животного и устанавливать не только наличие факта недостаточности той или иной физиологической системы, ответственной за гомеостаз, но и определить степень нарушений;

- обобщить опыт, выбрать и усовершенствовать методы для выявления листерий и сальмонелл, а также для определения трихинелл в условиях« слабой инвазии мяса при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов.

Применение современного технического оснащения позволяет в полевых условиях контролировать функцию физиологических систем и органов животных, обеспечивающих резистентность организма. Их применение объективизирует заключение о состоянии животных и дает возможность провести мероприятия, направленные на предупреждение пищевых зоонозов. Суммы средств, вложенных на приобретение такой аппаратуры значительно меньше, чем суммы затрат на рабочие и лабораторные издержки при выявлении возбудителей и уступают экономическим потерям, связанным с борьбой и ликвидацией последствий заболеваний.

По результатам исследования выпущены методические рекомендации:

1. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез (утв. методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №4 от 19.06.2001 г.)

2. Метод полимеразной цепной реакции (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.)

3. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.)

4. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №2 от 28.02.2007 г.)

5. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

6. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

Материалы работы использованы в учебном процессе на кафедре ветеринарной гигиены и санитарии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», в Якутской государственной сельскохозяйственной академии на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства, на кафедрах ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины и Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Результаты исследований с положительным эффектом применяются в хозяйствах Ленинградской области и госветучреждениях Санкт-Петербурга при определении предубойного состояния животных и оценке методов выявления возбудителей пищевых зоонозов по критериям чувствительности и специфичности.

На защиту выносятся следующие положения:

1. «Функциональная диагностика» - новое направление в проведении клинико-функционального заключения при оценке состояния животных на предубойном этапе.

2. Методы функциональной диагностики обеспечивают индивидуальную оценку функционального состояния органов и систем, определяющих рН крови.

3. Показатель гомеостаза рН крови позволяет оценить резистентность организма животного в меняющихся условиях внешней среды и воздействия различных повреждающих факторов.

4. Изменение величины рН крови у животного на предубойном этапе влияет на качество и безопасность мяса.

5. Информация о состоянии кислотно-щелочного баланса по поддержанию гомеостаза позволяет провести коррекцию рН крови у животных на предубойном этапе.

6. Критерии рациональных подходов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы и оценки безопасности мяса:

- при слабой инвазии мяса личинками Tr. spiralis;

- при выборе методов для выявления в мясопродуктах сальмонелл и L.monocytogenes.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Пищевые зоонозы как проблема взаимоотношений в сообществе живых организмов

Многочисленные исследования показали, что различные живые организмы не распределены на Земле случайным образом, а образуют в той или иной местности совместно с- некоторыми неживыми компонентами взаимозависимые сообщества организмов, продуцирующих,, потребляющих или разлагающих органическое вещество. Эти сообщества можно распознать и охарактеризовать по некоторым доминирующим членам группы, обычно растениям, которые дают пищу и кров'многим другим формам растительного и животного мира (Г. А. Викторов; 1976; В-Д. Беляков, Д.Б. Голубев; Г. Д. Каминский, В.В: Тец, 1987).

Отмечено, что каждому члену сообщества свойственны адаптации, обеспечивающие его относительную автономность, способность противостоять различным воздействиям и изыскивать в окружающей среде все необходимое для поддержания жизни. Различные члены сообществ питаются друг другом или паразитируют одни на других; некоторые виды в процессе эволюции приобрели один, несколько или все три типа адаптации (структурно-морфологические, физиологические, поведенческие), ставящие их в выигрышное положение и делающие более процветающими; многие виды кажутся ничем не связанные друг с другом. В трудах Ю. И. Васерина, С.А. Нагорного, Т.И. Твердохлебовой (2000) доказано, что каждый член сообщества наделен множеством приспособлений к сосуществованию с другими членами сообщества и к своему физическому окружению.

И тем не менее, исследователи пришли к заключению, что в сообществе довольно трудно усмотреть ту стабильность, которую обычно подразумевают, говоря о так называемом «равновесии в природе». Изменчивость, а не неизменность - вот ключ к пониманию живых существ (Б.А. Астафьев, O.E. Петров, 2004).

Установлено, что всё разнообразие живых существ, утонченность их адаптации в конечном счете сводится к получению каждым организмом своей доли энергии из пищи (Э. Мэгарран, 1992; Г.П. Краснощеков, 2000). Энергетический поток, получаемый из пищи- организмом животного однонаправлен, чрезвычайно разветвлен, изменчив. В каждом из последовательных звеньев цепи питания - фотосинтезирующие автотрофы, травоядные гетеротрофы, плотоядные гетеротрофы, гнилостные бактерии -число звеньев ограничивается 4-5 из-за значительной потери энергии. Общепринятая схематичность цепи питания отражает однонаправленность потока энергии и представляет всеобщее явление, определяемое законом термодинамики.

Проведенные исследования показали, что пока человек довольствовался собирательством, изменения, вносимые им в окружающую среду, были невелики, он включался в общий кругооборот природного биоценоза (В.Н. Беклемишев, 1970; С.Ю. Чайка, 1998) . Дикий человек был ко нсументом второго и третьего порядка, так как питался соответственно животными, являвшимися первичными консументами продуцентов-растений, и хищниками, пожиравших травоядных. В роли консумента первого порядка он выступал, питаясь ягодами и орехами. Влияние на экосистему человека и других консументов в основном сводилось к трофическим воздействиям. Находясь на ограниченной территории, в определенном биоценозе у животных и людей складывалось динамическое равновесие с физическими и биологическими условиями окружающей среды. В наши дни процесс постепенных изменений в сообществах, прежде растянутый на миллионы лет невиданно ускорился. По мнению видного эколога, Чарльз Элтона, человек значительно изменил естественные цепи питания, выводя зависящие от него породы животных и сорта растений. Даже домашний скот, удовлетворяющий потребностям людей в мясе, в большинстве своем не пасется на естественных пастбищах, а обеспечивается искусственными кормами. Таким образом, человек фактически превратился в консумента первого порядка.

Критерии, отражающие различные типы трофических связей с учетом структуры паразитарных систем и эколого-эпидемиологических признаков, представлены в таблице 1. Несмотря на некоторую условность этой классификации, как и любой другой, она согласуется с классификацией паразитарных зоонозов ВОЗ (Паразитарные зоонозы ВОЗ, 1980), практически удобна с ветеринарно-эпидемиологических позиций, представлена в трудах многих исследователей (A.A. Добровольский, И.А. Евланов, С.С. Шульман, 1994; Г.П. Краснощеков, 2000) и использована при выполнении данной работы.

Согласно современному определению, зоонозы - это инфекции или инфекционные болезни, передающиеся в естественных условиях от позвоночных животных к человеку (В.В. Макаров, 2004; D. Armstrong, 2003; W.H. Heeschen, 2005; М. Härtung, 2006).

Инфекционные болезни - как человека, так и растений и животных -это всего лишь пример широко распространенной среди всех живых существ тенденции добывать необходимое для собственного существования за счет других. Как свидетельствуют работы A.A. Добровольского, И.А. Евланова, С.С. Шульмана и др. (1994), виды, избравшие путь паразитизма, представлены во всех группах растений и животных, однако, чем ниже по эволюционной лестнице находится данная группа, тем больше она включает паразитов. Некоторые группы низших животных, особенно это касается плоских червей, нематод и некоторых членистоногих состоят исключительно из паразитических форм. В царстве растений паразиты широко распространены среди грибов.

16

Таблица 1

Эколого-эпидемиологическая систематика зоонозов

Группы Характерные признаки Зоонозы

Директо- ЗООНОЗЫ Циркуляция возбудителя сводится к передаче от инфицированного животного человеку путем прямого или непрямого контакта Типичные паразитозы -контагиозные инфекции, инвазии у инфестации (бешенство, бруцеллез трихинеллез)

Цикло- ЗООНОЗЫ В жизненном цикле возбудителя требуется участие более одного вида позвоночных животных Паразитозы с промежуточным и дефинитивными хозяевами (эхинококкоз/гидатиоз, тениидозы'

Мета- ЗООНОЗЫ В циркуляции возбудителя передача от инфицированного животного человеку осуществляется через беспозвоночных переносчиков Трансмиссивные инфекции и инваз! (арбовирусные инфекции, риккетсиозы, боррелиозы, шистосомозы)

Орнито- ЗООНОЗЫ Естественными хозяевами возбудителей являются птицы. Передача их от инфицированных птиц человеку осуществляется как при контакте, так и через беспозвоночных переносчиков Болезни общие для птиц и человека (нькжаслская болезнь, птичий грипг орнитоз)

Сапро- ЗООНОЗЫ Возбудители ведут преимущественно свободный образ жизни, не связанный с позвоночными хозяевами. Их резервуарами и источником заражения служат факторы абиотической среды (включая пищу) Типичные сапронозы - почвенные, пищевые инфекции и микозы [сибирская язва, клостридиозы (столбняк, ботулизм), псевдомонозь сальмонеллез (Salmonella enteritidis' бластомикоз, гистоплазмоз]

Фито- ЗООНОЗЫ Возбудители ведут свободный образ жизни, не связанный с позвоночными хозяевами. Их резервуарами и источником заражения служат факторы растительной среды (включая пищу) Отдельные сапронозы - пищевые р оппортунистические инфекции и микозы (иерсиниозы, листериоз, Burkholderia cepacia, актиномикоз) микотоксикозы

Наибольшее число паразитических видов животных по оценкам разных авторов варьирует от б - 7% до 50% от общего числа животных. По усредненным данным относительное количество видов паразитов, составляет порядка 20% (В.А. Догель, 1962; С.Ю. Чайка, В.А. Ройтман, С.А. Беэр, 2004). У позвоночных паразитизм как способ существования встречается крайне редко.

Несмотря на то, что перечень болезней, вызываемых паразитами, весьма, длинен, лишь сравнительно немногие из них долго свирепствуют в одних и тех же районах Земли. G гибелью хозяина-носителя паразита погибает и сам паразит. Фактически в процессе эволюции вирулентность, паразитов скорее уменьшается, чем увеличивается, в то же время хозяин постепенно приобретает иммунитет и невосприимчивость, вырабатывая антитела, которые обезвреживают вторгнувшиеся, микроорганизмы. Так и паразит и хозяин приходят к мирному, сосуществованию, если негармоничному, то по • крайней, мере сохраняющему жизни« обоим. Многие ученые этим объясняют устойчивое существование определенных видов возбудителей пищевых зоонозов (В.А. Догель, 1962; В.Ю. Литвин, А.Л. Гинцбург, В.И. Пушкарева, 1998; P.S. Mead, L. Stutsker, V. Dietz, 1999).

Работы отечественных и зарубежных ученых посвящены в первую очередь изучению • качественных и количественных аспектов взаимоотношений между паразитами и хозяевами и, соответственно, особенностям функционирования паразитарных систем (В.Н. Беклемишев, 1970; A.A. Добровольский, И.А. Евланов, С.С. Шульман, 1994; С.А. Нагорный, Т.И. Твердохлебова и др., 2000; В.А. Ройтман, С.А. Беэр, 2004).

В зависимости от того, какие отношения между паразитом и хозяином рассматриваются в качестве основных, разработаны несколько концепций паразитизма - экологическая, метаболическая, патофизиологическая, иммунологическая и др.

Первые исследования отражали экологическую концепцию паразитизма. Р. Лейкарт (1879) называл паразитами организмы, которые находят пищу и жилище на другом живом организме. Эту сторону жизни паразитов выделяли И.И. Мечников, Г.А. Викторов. В.А. Догель (1962) при этом отмечал, что паразиты, используя других животных в качестве источника пищи среды обитания, возлагают частично или полностью на своих хозяев регуляцию взаимоотношений со средой. Ю.С. Балашов (1991) характеризует паразитов как животных, находящихся в антагонистическом симбиозе с другими животными организмами, которых они используют в качестве источника пищи, среды обитания, и на которых частично или полностью возлагают регуляцию своих отношений с внешней средой.

Таким образом, характеризуя паразитизм, исследователи в разное время отмечают две стороны этого биологического явления - экологическая и метаболическая зависимость паразита от хозяина.

Сторонники метаболической^ концепции паразитизма рассматривают паразитизм как сожительство, когда обмен веществ одного организма полностью зависит от другого (Г.П. Сомов, В.Ю. Литвин, 1988). Известно, что эволюционный прогресс паразитов связан с увеличением степени их интеграции со средой хозяина (средой I порядка по E.H. Павловскому) на отдельных стадиях развития паразита или с комплексом хозяев на уровне жизненного цикла. Это рассматривается в качестве основания1 для того, чтобы достаточным признаком паразитизма считать обитание паразита в среде живого организма (E.H. Павловский, 1934).

В качестве третьего критерия паразитизма многие авторы рассматривают вред, причиняемый паразитом хозяину (A.A. Добровольский, И.А. Евланов, С.С. Шульман, 1994). При этом часто трофический фактор в качестве основного аргумента при выделении паразитов практически не рассматривается, поскольку в противном случае паразиты не будут выделяться от всех других консументов. Критерий вредности отвергается многими паразитологами из-за его субъективности, а также из-за того, что нельзя определять паразита по признаку, принадлежащему хозяину (С.Ю. Чайка, 2004; L. В. Hasenson, L. Kaftyreva, V.G. Laszlo, 1992; H.J. Sinell, 2002).

Тем не менее, по мнению Г.А. Викторова (1976), такое возражение не убедительно, поскольку паразитизм представляет собой одну из форм межвидовых взаимоотношений, и, следовательно, вред, причиняемый одному из партнеров, является признаком обоих партнеров - хозяина и паразита.

Сравнительно недавно Г.П. Краснощекое (2000) обосновал точку зрения, согласно которой паразиты, в отличие от других консументов, влияют на состояние экосистемы не трофическими, а патогенными воздействиями на популяции хозяев. При этом патогенность паразитов является, системным фактором, влияющим как на среду хозяина, так и на биоценозы в связи с нарушением толерантности паразитов и хозяев.

Тем не менее, во многих работах, посвященных паразитизму, отвергается представление о паразитах как об организмах, обязательно наносящих вред хозяину. Отмечается- высокая степень адаптации, в сложившихся системах паразит-хозяин, а в ряде случаев обитание'паразита в среде хозяина может даже приносить пользу последнему (D.R. Lincicome, 1971). Критерий вредоносности неприемлем и при анализе паразитов с точки зрения их биоценотических отношений с хозяевами как регулятор численности последних, поскольку в этом случае паразиты выполняют положительную для популяции хозяина функцию (Ю.С. Балашов, 1991).

Имеются работы, в которых трактовка паразитизма дана с генетической точки зрения. В частности, паразитизм рассматривается как взаимодействие двух видов, при котором паразит зависит от хозяина, по меньшей мере, по одному гену или его продукту (Г.П. Сомов, В.Ю. Литвин, 1988; С.Ю. Чайка, 1998;).

Б.А. Астафьевым и O.E. Петровым (2004) разработана эволюционно-генетическая теория паразитизма, согласно которой паразит и хозяин составляют эволюционно сформированную систему, не только физиологическую, но и генетическую. Авторы считают, что паразитизм - это формирующийся в процессе коэволюции способ жизни патогенных организмов за счет других видов (хозяев). Он детерминируется геномами как паразита, так и хозяина, в результате чего у последнего формируется и постоянно совершенствуются защитные механизмы, а у паразитов - способы уклонения от них.

Спорна попытка ограничить паразитов исключительно эндопаразитами введением термина «истинный паразит» (Г.П. Краснощеков, 2000), что в конечном итоге выводит за круг паразитов эктопаразитов и близких к ним по типу паразитизма организмов.

Многие авторы рассматривают паразитизм как разновидность (или форму) симбиоза в широком понимании этого термина, то есть подразумеваются под симбиозом все формы индивидуального сожительства организмов (В.А. Ройтман, С.А. Беэр, 2004; Ыпсюоше, 1971).

Поиск всё новых критериев для определения того или иного вида паразитизма не дал однозначного результата. Напротив, введение новых критериев, преимущественно иммунологических и генетических, зачастую сужают круг организмов, рассматриваемых в качестве паразитов.

Наличие множества концепций паразитизма подтверждает сложность и многообразие взаимоотношений в динамической системе хозяин-паразит-внешняя среда и любые повреждающие факторы ведут к изменению отношений хозяин-паразит (М.В. Супотницкий, 2005). В этих меняющихся условиях используемые методы должны носить функциональный характер, то есть исследования необходимо проводить в порядке мониторинга.

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Нечаев, Андрей Юрьевич

6. ВЫВОДЫ

1. Впервые обоснованы, разработаны и применены функциональные методы исследования с использованием современной техники для проведения мониторинга физиологических параметров, обеспечивающих постоянство важнейшего показателя гомеостаза - рН крови, с целью оценки функционального состояния органов и систем, определяющих устойчивость организма свиней при транспортных нагрузках на предубойном этапе.

2. Установлены изменения величины рН крови свиней по мере возрастания дополнительных • требований (нагрузки), связанной с увеличением времени и расстояния при транспортировке к убойному пункту. При легкой нагрузке у 82,8% свиней нарушений гомеостаза не наблюдалось, в 17,2% случаев постоянство величины рН крови обеспечивалось компенсаторным напряжением буферных систем организма свиней. При умеренной нагрузке у 22,6% свиней отмечалась устойчивость гомеостаза, в 74,2% случаев наблюдались компенсаторные нарушения и в одном случае у свиноматки имели место декомпенсированные изменения величины рН крови. При тяжелой нагрузке у всех свиней по прибытии на убойный пункт наблюдались нарушения гомеостаза. В 40% случаев изменения величины рН крови носили компенсированный характер, в 60% - субкомпенсированный.

3. Мониторинг показателей кислотно-щелочного баланса свиней в условиях транспортных нагрузок по прибытии на убойный пункт выявил изменения как респираторного, так и метаболического компонентов рН крови. Напряжение углекислого газа крови, составляющее респираторный компонент рН крови, уменьшилось по сравнению с исходными значениями во всех группах животных: при легкой нагрузке - на 7,8%, при умеренной нагрузке - на 11,2%, при тяжелой нагрузке - на 15,5%. Дефицит оснований, составляющих метаболический компонент рН крови, увеличился по сравнению с исходным состоянием (-0,3 ± 0,28 мэкв/л) при легкой нагрузке до -1,6 ± 0,24 мэкв/л, а при умеренной нагрузке до -1,8 ± 0,64 мэкв/л. При тяжелой нагрузке накопление кислых продуктов обмена в крови свиней увеличило дефицит оснований'до -2,2 ± 0,54 мэкв/л. Различные соотношения респираторного и метаболического компонентов > определили разные типы нарушений кислотно-щелочного баланса' крови: у 32% свиней наблюдался дыхательный ацидоз, у 45% - дыхательный алкалоз и у 23% - метаболический ацидоз.

4. Установлено увеличение концентрации молочной- кислоты в крови свиней на 37,5% после легкой<нагрузки, на 85,4% после умеренной нагрузки, на/22,4% после тяжелой нагрузки, которое сопровождалось уменьшением, недоокисленных продуктов обмена в мясе, в постмортальном периоде. У свиней, перенесших тяжелую нагрузку, наблюдался статистически достоверный сдвиг рН мяса в конце периода созревания в сторону оснований по сравнению с животными, перенесшими легкую нагрузку (5,55 ± 0,08 против 5,36 ± 0,06).

Таким образом, функциональные исследования энергообмена у свиней установили, что увеличение транспортной нагрузки на предубойном этапе снижает резервы аэробного энергообразования, уменьшает количество кислот и гликогена в мышцах и приводит к снижению пищевой ценности мяса, приближая его к свойствам БГО - мяса, благоприятствуя развитию в нём микроорганизмов, предопределяя его меньшую стойкость при хранении.

5. Результаты бактериологического исследования мезентериальных лимфоузлов в постмортальном периоде установили, что у свиней, получивших легкую нагрузку, сальмонеллы выделены в 8% случаев, у получивших умеренную нагрузку количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13% и у перенесших тяжелую нагрузку -30%. Учитывая, что обсемененные пробы выявлены только в мезентериальных лимфоузлах свиней, у которых имеются нарушения гомеостаза, то исследование рН крови позволит на предубойном этапе прогнозировать вероятность контаминации мяса патогенными микроорганизмами.

6. Применение мониторинга состояния функции органов и систем, определяющих величину pH крови организма свиней на предубойном этапе, позволяет контролировать качество и безопасность мяса на начальных звеньях пищевой цепочки в процессе производства (животноводческие фермы, убойные пункты и т.д.), когда не затрачены средства и усилия на получение готового продукта, и есть возможность влиять на его качество, реализуя принцип «Здоровое животное - безопасное мясо».

7. Сравнительный анализ регламентированных методов определения возбудителей трихинеллеза при слабой инвазии выявил низкую чувствительность (46,9%) и эффективность (58,3%) метода компрессорной трихинеллоскопии. Специфичность этого метода по мере снижения« уровня инвазии от 4-6; 2-4 и 0-2 личинок в 1г. мышц соответственно^меныналась от 96,7%, 95,1% и 86,7% относительно метода группового ферментативного переваривания. Результаты исследования свидетельствуют, что наиболее эффективным методом с позиций' предупреждения трихинеллеза является метод выделения трихинелл, основанный на ферментативном переваривании мышечных проб.

8. Сравнительная оценка культурального, имунноферментного (VIDAS) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл и патогенных листерий в мясопродуктах по критерию эффективности характеризовалась наименьшим совпадением результатов между культуральным и молекулярно-биологическим методами, составлявшим соответственно 94% и 42%. Наибольшее совпадение результатов (98%) отмечали при применении культурального и иммуно-ферментного методов. Иммуноферментный метод (VIDAS) позволяет наиболее быстро обнаружить возбудителя в пищевой продукции, что и определяет возможность его применения в экспресс-диагностике сальмонеллеза и листериоза.

9. Сопоставление результатов первичных посевов на питательные среды: АЬОА-агар по Оттавиани-Агости, РАЬСАМ-агар и Ох1Ъп1-агар, применяемых для избирательного роста листерий, показало, что величина1 соотношения листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С) на этих средах в пробах свежих мясопродуктов, соответственно равнялась 2,0; 1,5 и 1,0, а в пробах с истекшим» сроком реализации соответственно 3,0; 1,8 и 1,1, что свидетельствуют о надежности! хромогенной среды5 АЬОА-агар по Оттавиани-Агости при идентификации патогенных штаммов листерий и служат основанием её применения для количественного определения Ь.топосу1к^епе5 в мясопродуктах после прямого посева.

10. Унифицированный подход к оценке международных методов и национальных стандартов, применяемых для выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов, на основе критериев эффективности, чувствительности и специфичности позволит обобщить опыт и повысить достоверность и состоятельность результатов исследований.

Автор признателен сотрудникам продовольственно-ветеринарной службы Краславского района Латвии за создание оптимальных условий при содружественном решении проблем, связанных с транспортировкой свиней на убойный пункт, выражает благодарность сотрудникам Института гигиены и технологии продуктов животного происхождения г. Мюнхен (Германия), а также коллективу лаборатории микробиологии и гигиены производства ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова за содействие и большую помощь при выполнении данной работы.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Применение функциональных методов диагностики дает возможность с учетом клинической симптоматики определить компенсаторные возможности организма и представить индивидуальное клинико-функциональное экспертное заключение о состоянии животного согласно методическим рекомендациям «Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса», утвержденным Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., и данным, изложенным в методическом пособии «Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы», утвержденном методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №2 от 28 февраля 2007 г.

2. Определение функциональных возможностей организма свиней сохранять свой гомеостаз на всех стадиях предубойного этапа позволяет оценить адекватность реакции органов и систем животного на воздействие повреждающих факторов, связанных с транспортировкой к месту убоя. Полученные данные положены в основу для оптимального решения о выборе места расположения убойного пункта среди близлежащих свиноводческих хозяйств Краславского района (Латвия).

3. Установленная взаимосвязь основных физиологических параметров, определяющих функцию жизнеобеспечивающих систем и органов с кислотно-щелочным балансом (КЩБ) организма животного, дает возможность определить исходную базу для мониторинга функциональных показателей в условиях воздействия повреждающих факторов и проведения своевременной коррекции величины рН крови. Мероприятия (отдых, кормление, содержание, уход), направленные на восстановление выявленных нарушений в предубойном периоде, в конечном итоге повышают качество и безопасность мяса.

4. Применение результатов проведенных функциональных исследований в ветеринарных учреждениях г. Санкт-Петербурга и Ленинградской области показало их эффективность при восстановлении I гомеостаза у животных, оказавшихся в чрезвычайных условиях (хирургическое вмешательство, стресс, действие анестетиков, неотложные и критические состояния).

Практические предложения по функциональным методам диагностики текущего состояния животных, мониторинга жизнеобеспечивающих систем и органов и коррекции выявленных нарушений изложены в учебном пособии «Основы анестезиологического обеспечения в ветеринарии» (Р.Бетшарт-Вольфенсбергер, А. Стекольников, А-. Нечаев, 2009).

5. Опыт сопоставления результатов исследований по диагностике пищевых зоонозов, полученных в отечественных и зарубежных лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, по критериям чувствительности и специфичности позволяет гармонизировать методы выявления возбудителей пищевых зоонозов в общепринятой системе международных координат и применять их при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов согласно методическим рекомендациям: «Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №4 от 19.06.2001 г.)/«Метод полимеразной цепной реакции» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.), «Применение метода ПЦР в ветеринарной практике» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.).

6. Материалы исследований, изложенные в методических рекомендациях «Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009' г., определили подходы для введения количественных критериев выявления L. monocytogenes в соответствии с международным стандартом ISO 11290-2, регламентирующим методы подсчета бактерий Listeria monocytogenes.

7. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры ветеринарной гигиены и санитарии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора ветеринарных наук, Нечаев, Андрей Юрьевич, Санкт-Петербург

1. Авылов Ч.К. Комплексная система ветеринарно-санитарной и экологической безопасности на крупных предприятиях по производству и переработке свинины: автореф. дис. на соискание учен, степени докт. вет. наук /^.К.Авылов- Москва, 2001. 55 с.

2. Агаджанян H.A. Функции организма в условиях гипоксии и гиперкапнии / H.A. Агаджанян, А.И. Ефимов . М.: Медицина, 1986. - 272 с.

3. Аганезова Е.С. Исследование газов крови и кислотно-щелочного баланса / Е.С. Аганезова // Сб. науч. трудов ВНИИП «Функциональные исследования в пульмонологической практике» Л., 1976. - с.61 - 69.

4. Агапов Ю.Я. Кислотно-щелочной баланс / Ю.Я. Агапов. М.: Медицина, 1968.- 184 с.

5. Адо А.Д. Патологическая физиология / А.Д. Адо, В.В. Новицкий. -Томск: Изд-во Томского ун-та, 1994. 466 с.

6. Алескаров З.А. Токсигенные свойства сальмонелл / З.А. Алескаров// Ветеринария. 2005. - №8. - С. 31-32.

7. Андреянов О.Н. Природный и синантропный трихинеллёз в Центральном регионе России/ О.Н. Андреянов, A.C. Бессонов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы докл. науч. конф. М., 2004. - Вып.5. - С.27-28.

8. Анохин П.К. Очерки по физиологии функциональных систем / П.К. Анохин. М.: Медицина, 1975. - 447 с.

9. Антипова Л.В. Методы исследования мяса и мясных продуктов/ Л.В. Антипова, И.А. Глотова, И.А. Рогов. М.: Колос, 2001. - 376 с.

10. Артемьева С.А. Справочник: Микробиологический контроль мяса животных, птицы, яиц и продуктов их переработки/ С.А. Артемьева, Т.Н.Артемьева, А.И.Дмитриев, В.В. Дорутина- М.: Колос, 2003.-288 с.

11. Аруманян Э.Б. Участие эпифиза в антистрессовой защите мозга / Э.Б. Аруманян // Успехи физиол. наук. 1996. - т.27. - №3. - С.31 - 50.

12. Астафьев Б.А. Генетические основы паразитизма / Б.А. Астафьев, O.E. Петров // Ветеринарная патология 2004. - №3. - С. 13-19.

13. Атанов A.M. Применение системы «БакТрак 4100» / А.М. Атанов, М.А. Белова // Водоснабжение и санитарная техника. 1998. - №7. - С.9-11.

14. Афанасьев E.H. Листериоз — некоторые аспекты распространения и диагностики / E.H. Афанасьев, И.С. Тюменцова, Е.В. Алиева, Т.Н. Егшатян // Вестник ветеринарии. 2003. - №3. - С. 4-6.

15. Ахмадеев P.M. Изучение полипептидных профилей различных штаммов сальмонелл/ P.M. Ахмадеев, Л.И. Зайнуллин, A.M. Алимов // Актуал. пробл. болезней молодняка в современных условиях. Воронеж, 2002. -С. 109-110.

16. Бакулов И.А. Листериоз сельскохозяйственных животных/ И.А. Бакулов. М.: Колос, 1967. - 296 с.

17. Бакулов И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей / И.А. Бакулов // Материалы Международного симпозиума «Листериоз на рубеже тысячелетий» Российская Академия сельскохозяйственных наук.- ВНИИВВМ. Покров, 1999. - С. 43 - 47.

18. Бакулов И.А. Современные проблемы сибирской язвы и листериоза -зооантропонозных болезней бактериальной этиологии / И.А. Бакулов, В.М. Котляров // Вет. и мед. аспекты зооантропонозов. Покров, 2003. -4:1.-С. 22-26.

19. Бакулов И.А. Листериоз как пищевая инфекция. Вопросы диагностики и профилактики / И.А. Бакулов, Д.А. Васильев.-Ульяновск, 1991. 23 с.

20. Бакулов И.А. Листериоз пищевая инфекция: Масштабы опасности, методы индикации и меры борьбы /И.А. Бакулов, В.М. Котляров, Т.И. Душко // Ветеринария. - 1991. - №4. - С. 32-36.

21. Бакулов И.А. Эпидемиологические и эпизоотологические аспекты листериоза / И.А. Бакулов, В.М. Котляров, Т.И. Шестиперова // Журналмикробиологии- эпидемиологии и иммунобиологии. 1994'. - №5. — С. 100-109.

22. Беляков В.Д. Саморегуляция паразитарных систем / В.Д. Беляков, Д.Б. Голубев, Г.Д. Каминский, В.В. Тец Л.: Медицина, 1987. - 240 с.

23. Березанцев Ю.А.Трихинеллез/Ю.А.Березанцев -Л.¡Медицина, 1974.-160с.

24. Березовский В.А. Напряжение кислорода в тканях животных и человека/

25. B.А. Березовский. — Киев: Наукова думка, 1975: 278 с.

26. Бессонов A.C. Распространение трихинеллёза Trichinella spiralis в России-(1980-1994): анализ причин и условий / A.C. Бессонов // Материалы докл. седьмой науч. конф. по трихинеллёзу. М., 1996. - С. 10-12.

27. Бессонов A.C. Виды и вариететы нематоды* рода Trichinella: систематика, эпизоотологическое и эпидемиологическое значение / A.C. Бессонов // Ветеринария 2001.- №6. - С.27-31.

28. Бессонов A.C. Трихинеллёз: современные проблемы борьбы и> профилактики / A.C. Бессонов // Ветеринария: 2001. - №7. - С. 3-7.

29. Бессонов* A.C. Рекомендации международной комиссии по трихинеллёзу (MKT) по методам борьбы с трихинеллёзом домашних и диких животных, мясо которых употребляется в> пищу человеком / A.C. Бессонов // Ветеринария. 2001. - №8. - С.57-63.

30. Бессонов A.C. Трихинеллёз /A.C. Бессонов Киев: «Урожай», 1977.-112с

31. Бессонов A.C. Трихинеллёз: современные проблемы борьбы и профилактики / A.C. Бессонов // Ветеринария с.-х. животных. 2005. - №10. —1. C.4-9.

32. Боровиков В. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов / В. Боровиков. СПб.: Питер, 2001. - 656 с.

33. Боравский В.А. Энциклопедия по переработке мяса в фермерских хозяйствах и на малых предприятиях /В.А. Боравский.- М., 2002.- 576 с.

34. Боткин С.П. Курс клиники внутренних болезней / С.П. Боткин.- Спб., 1912.

35. Бреслав И.С. Регуляция дыхания/ И.С. Бреслав, В.Д. Глебовский. Л.: Наука, 1980. - 280с.

36. Бритов В.А. Возбудители трихинеллёза / В.А. Бритов- М.:Наука, 1982. -272 с.

37. Бутко М.П. Ветеринарная санитария на транспорте / М.П. Бутко,' Т.А. Тарасенко, И.Д. Шупляков, Н.П. Любаков; Под ред. М.П. Бутко. М. Агропромиздат, 1988.-351 с.

38. Васерин Ю.И. Роль паразита во взаимоотношениях с хозяином на различных стадиях трихинеллезной инвазии/ Ю. И. Васерин, С.А. Нагорный, Т.И. Твердохлебова и др. // Статьи и тезисы докл. VIII Всерос. конф. по трихинеллезу. М., 2000. -С.91-92.

39. Васильев Д.А. Роль пищевых продуктов в распространении листериоза / Д.А. Васильев // Ветеринария. 1992. - №4. - С. 46^18.

40. Викторов Г.А. Экология паразитов-энтомофагов / Г.А. Викторов. М.: Наука, 1976.

41. Волков Ф.А. Диагностика трихинеллеза / Ф.А. Волков // Ветеринария. -1996. №9. -С. 36-37.

42. Воробьёв В.В. Трихинеллёз животных, ветеринарно-санитарная оценка мяса и мясопродуктов / В.В. Воробьёв, A.A. Алиев, Л.С. Фогель, H.H. Воевода. СПб., 2001.

43. Ворожцов В.В. Иммунодиагностика трихинеллёза свиней / В.В. Ворож-цов, Н.В. Шеховцов // Восьмая Всероссийская конф. по трихинеллёзу: статьи и тез. докл. М:, 2000. - С.98-99.

44. Вотчал Б.Е. Патофизиология дыхания и дыхательная недостаточность/ Б.Е. Вотчал. М., 1973. - 27 с.

45. Гаркави Б.Л. Особенности распространения и передачи Trichinella (Bessonoviella) pseudospiralis / Б.Л. Гаркави // Тр. Всероссийского ин-та гельминтологии им. К.И. Скрябина. 2004. - Т.40. - С.64-71.

46. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных / В.И. Георгиевский. Мл Агропромиздат, 1990. - 511 с.

47. Гинзбург А.Л. Генодиагностика инфекционных заболеваний /А.Л. Гинзбург // Журн. микробиол. 1998. - №3. - С.86-95.

48. Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. Пер. с англ. М., «Практика», 1999. - 459 с.

49. Головко А.Н. Использование полимеразной цепной реакции для детекции бактерий рода Salmonella / А.Н. Головко, В.В. Кацимон, Н.А. Волошина //Актуал. пробл. инфекц. патологии животных. Владимир,, 2003. - С.244 - 247.

50. ГОСТ 30519 97 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий.рода Salmonella».

51. ГОСТ Р 51921 02 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes».

52. Гребенкин А.А. Трихинеллоскопия в полевых условиях / А.А. Гре-бенкин// Тр. Всерос. института гельминтологии им. К.И. Скрябина 2003. -Т.39.-С. 78-81.

53. Григорян Г. Стрессорезистентность свиней крупной белой породы / Г. Григорян, И. Родин, И. Шейко и др.//Свиноводство.-1982.-№7.-С.28-29.

54. Гриппи М.А. Патофизиология легких/ М.А. Гриппи. — М.: Восточная книжная компания, 1997. 344 с.

55. Гутник Б.Е. Рынок мяса и современный потребитель / Б.Е. Гутник, А.Н. Захаров // Всё о мясе. 2005. - №4. - С.60 - 62.

56. Дворецкий Д.П. Вентиляция, кровообращение и газообмен в легких/ Д.П. Дворецкий//Физиология дыхания-СПб.: Наука, 1994.-с. 197-257.

57. Джупина С.И. Новые фундаментальные знания на службу профилактики инфекционных болезней животных/С.И. Джупина // Ветеринария. 2006. - №8. - С. 16-22.

58. Джупина С.И. Теория эпизоотического процесса /С.И. Джупина. М.: Изд. ООО «Вет. консультант», 2004.

59. Добровольский A.A. Паразитарные системы: Анализ структуры и стратегии, определяющие их устойчивость / A.A. Добровольский, И.А. Евланов, С.С. Шульман // Экологическая паразитология. Петро-заводск : КНЦРАН, 1994.-С. 5-44

60. Догель В.А. Общая паразитология / В.А. Догель. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1962.

61. Долгов В.А. Обеспечение качества и безопасности продуктов животноводства / В.А. Долгов // Ветеринария. 2005. - №10. - С. 9-11.

62. Еремина С.А. Фазы первичной»реакции симпато-адреналовой системы на стресс / С.А. Еремина, Е.И. Беляков //Биол.эксперим.биологии и медицины 1987. - т. 104. - №8. - с. 155-157.

63. Ерофеева Ю.К. Обнаружение листерий в мясном сырье и его санитар-ная оценка / Ю.К. Ерофеева, К.С. Янковский, Ю.Г. Костенко // Все о мясе. -2003. -№3.-С.31-32.

64. Ефимочкина Н.Р. Современные подходы к идентификации листерий при производственном контроле ферментированных мясных продуктов/ Н.Р. Ефимочкина, С.А. Шевелева, И.М. Нитяга и др.// Вопросы питания. -2005. №2. - С. 39 - 45.

65. Ефимочкина Н.Р. Эмерджентные бактериальные патогены в пищевой микробиологии / Н.Р. Ефимочкина М.:Издательство РАМН, 2008.-256 с.

66. Житенко П.В. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животноводства: Справочник / П.В. Житенко, М.Ф. Боровков. М.: Колос, 1998. -335 с.

67. Забродин О.Н. Роль симпато-адреналовой системы в патогенезе травматической болезни/ О.Н. Забродин // Пат.физиология и эксперим. терапия 1994. - №3. - с.59 - 61.

68. Задорожин П.А. Этиологические факторы, патогенез и профилактика стрессов у животных / П.А. Задорожин // Проблемы ветеринарии Примор. края. Уссурийск, 1996. - С.38—41.

69. Зайцева Е.А. Listeria monocytogenes новый микробиологический показатель безопасности пищевых продуктов / Е.А.Зайцева, JI.H. Федя-нина, Г.Н. Коленченко, О.М. Антоненко // Мясная индустрия. - 2006. -№4. - С.30-32.

70. Закон РФ «О ветеринарии» от 14.05.1993 №4979-1.

71. Зыкин Л.Ф. Современные методы лабораторной диагностики листериоза / Л.Ф. Зыкин, Л.В. Савельева, И.А. Касьян // Ветеринария. 1999. - №10-С. 8-9.

72. Иванкин А'.Н. Современные методы оценки качества и безопасности мясного сырья и мясопродуктов / А.Н. Иванкин, Т.Г. Кузнецова // Всё о мясе. 2005. - №4.- С.26.

73. Кайшев В.Г. Мясная индустрия России в 2004 году: состояние и тенденции / В.Г. Кайшев, В.В. Дойков //Мясная индустрия. 2005. - №3. -С.10-15.

74. Калишин Н.М. Листерии в окружающей среде / Н.М. Калишин, А.А. Алиев, М.В. Ломакина// Актульные проблемы вет. медицины: Сб.науч.тр. СПбГАВМ. СПб., 2004. - №136. - С.50 - 52.

75. Калюжный Л.В. Физиологические механизмы регуляции болевой чувствительности / Л.В. Калюжный М.: Медицина, 1984. - 216с.

76. Книзе А.В. Эпизоотическая ситуация по листериозу в странах мира и России / А.В. Книзе, А.И. Бузун, Р.К. Шарма // В сб. Листериоз на рубеже тысячелетий. Покров, 1999. — С. 118-122.

77. Козак С.С. Устойчивость листерий к физическим и химическим факторам окружающей среды / С.С. Козак, Н.Л. Догадова, Л.Г. Хан // Мясная Индустрия. 2009.- №7. - С. 18-21.

78. Козеева О.В. Осторожно, листериоз! /О.В. Козеева// Мясная индустрия. -2006. -№3. С.57-59.

79. Комарова И.Н. Полимеразная цепная реакция современный метод выявления фальсификаций мясного сырья и мясопродуктов / И.Н. Комарова, И.Г. Серёгин, А.Ф. Валихов // Мясная индустрия. - 2004. - №2,-С.34-36.

80. Костенко Ю.Г. Производственный контроль основа получения высококачественной и безопасной мясной продукции / Ю.Г. Костенко, О.А. Матвеев // Мясная Индустрия. - 2009.- №7. - С. 23-24.

81. Костенко Ю.Г. Листерии критерий безопасности мясных продуктов / Ю.Г.Костенко, Т.С. Шагова, К.С. Янковский // Мясная Индустрия. - 1997.-№3. - С. 23-24.

82. Котляров В.М. Проблема листериоза на рубеже тысячелетий / В.М. Котляров // В сб. Листериоз на рубеже тысячелетий. Покров, 1999. - С. 48-52.

83. Краснощеков Г.П. Влияние паразитов на состояние экосистем / Т.П. Краснощеков // Усп. совр.биол. 2000. - №3. - С. 253-264.

84. Кудрявцев В.В. Особенности развития рынка мяса и мясных продуктов при вступлении России в ВТО / В.В. Кудрявцев // Мясная индустрия. -2006.-№6.-С. 12-15.

85. Куликовский А. В. Эмерджентные пищевые зоонозы / A.B. Куликовс-кий. М.: Крафт +, 2004. — 174 с.

86. Кузьмичева М.Б. Тенденции и перспективы развития российского рынка мяса / М.Б. Кузьмичева //Мясная индустрия. 2005. - №11. - С. 54-58.

87. Кузьмичева М.Б. Российский рынок мяса в 2005 г./ М.Б. Кузьмичева //Мясная индустрия. 2006. - №5. - С. 10-15.

88. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований / A.C. Лабинская. М.: Медицина, 1978. — 256 с.

89. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

90. Лаковников Е.А. Выделение сальмонелл из органов поросят / Е.А. Ла-ковников, А.Ф. Парфенов // Ветеринария. 2004. - №6. - С.25 - 27.

91. Лисицын А.Б. Тенденции развития мировой науки о мясе / А.Б. Лисицын // Всё о мясе. 2005. - №4. - С. 14 - 20.

92. Лисицын А.Б. Современное состояние и тенденции развития мирового' производства мяса / А.Б. Лисицын, Т.М. Леонова, Л.В. Симакова // Всё о мясе. 2005. - №3. - С.З - 8.

93. Лисицын А.Б. Рынок мяса и мясных продуктов в 2005 г. / А.Б. Лиси-цын, Т.М. Леонова, H.A. Юмашева // Всё о мясе. 2006. - №2. - С.5-8.

94. Литвин В.Ю. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий / В.Ю. Литвин, АЛ. Гинцбург, В.И. Пушкарева и др. М.: ФАРМУС ПРИНТ, 1998.

95. Лихницкая И.И. Транспорт газов кровью/ И.И.Лихницкая. В кн.: Физиология дыхания. - Л., 1973. - С,83-104.

96. Лукина К.Ф. Сальмонеллоносительство у свиней, выращенных в крупных комплексах /К.Ф. Лукина// Сб. научн. работ ЛВИ №63 Инф. и паразит, заболевания с-х животных. - СПб, 1980. - С.63 - 65.

97. Макаров В.В. Зоонозы / В.В. Макаров // Ветеринарная патология. -2004. №3. С.7-9.

98. Макаров В.В. Эмерджентность, чрезвычайные ситуации и зоонозы/ В.В. Макаров, A.M. Смирнов, В.В. Сочнев, A.A. Алиев // Ветеринарная патология. 2004. - №3. - С.36-45.

99. Маккреди Б.Д. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами / Б.Д. Маккреди, Д.А. Чимера // Молекулярная клиническая диагностика. Методы. 1999. - С.496-506.

100. Мащенко A.C. Своевременная диагностика-залог эффективной борьбьгс сальмонеллезом /A.C. Мащенко// Рос.вет.журнал. С-х животные. 2006. -№4. - С.13.

101. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов / Ф.З. Меерсон. -Mi: Наука, 1986. 635 с.

102. Меерсон Ф.З. Нарушения внешнего дыхания, транспорта и утилизации кислорода при стрессе / Ф.З. Меерсон, В.Г. Пожаров, М.М: Середенко и др. // Патол. физиол. и эксперим.терапия 1989. - №6. - С.20-26.

103. Методические указания- по лабораторной диагностике трихинеллёза животных. Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 28.10.98.-№ 13-7-2/1428.

104. Михайлович В.А. Болевой синдром / В:А. Михайлович, Ю.Д: Игнатов. -Л.: Медицина, 1990. 336 с.

105. Морозова E.H. Гармонизация критериев и методов оценки качества и р безопасности продуктов животного происхождения: автореф. дис. насоискание учен. степ. канд. биол.наук / Е.Н.Морозова1. М., 2005.

106. Мэгарран Э. Экологическое разнообразие и методы его измерения / Э. Мэгарран. М.: Мир, 1992. - 182 с.

107. Мюнх Д. Микробиология продуктов животного происхождения/ Д. Мюнх и др. М.: Агропромиздат, 1985. - 590с.

108. Непоклонов, А.Е. Эпизоотическая ситуация по зооантропонозным болезням Российской Федерации /А.Е. Непоклонов, H.A. Яременко // Вет. и мед. аспекты зооантропонозов. Покров, 2003. - 4.1. - С. 16 - 22.

109. Низовцев В.П. О кислородном балансе при дыхательнойнедостаточности / В.П. Низовцев. В кн.: Кислородный гомеостаз икислородная недостаточность. Киев, 1978.-С. 135-145:

110. Нитяга И.М. Повышение эффективности выявления Listeria monocytogenes и энтерогеморрагических E.coli в мясе и мясных продуктах: автореф. дис. на соискание учен. степ. канд. биол. наук / HiM. Нитяга. -М., 2005.

111. Окара А.И. О возможности и целесообразности использования поли-меразной цепной реакции / А.И. Окара // Мясная индустрия. 2004.- №9. - С.28-29.1 131. Орбели JI.A. Боль и её физиологические эффекты / JI.A. Орбели //

112. Физиологический журнал СССР 1936. - Т.21. - №6. - С. 893.

113. Орешкин Е.Ф. Об эффективности оценки качества мясного сырья стандартными методами / Е.Ф. Орешкин, Ю.Г. Костенко, C.B. Тимченко// Мясная и молочная промышленность. 1991. - №6. - С. 29 - 31.

114. Онищенко Г.Г. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2004 году: Государственный доклад/ Г.Г. Онищенко, А.И. Верещагин.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005.—269 с.

115. Павлов И. П., Физиологическое учение о типах нервной системы/ И.П. Павлов. Поли. собр. соч., т. 3, кн. 2, М.—JL, 1951, с. 77 - 88.

116. Павловский E.H. Курс паразитологии человека / E.H. Павловский. М.- Л., 1934.

117. Пастухова Л.А. Естественная резистентность организма тедят при их транспортировке: автореф. дис. на соискание учен, степени канд. вет. наук / Л. А. Пастухова Москва, 1982. - 15 с.

118. Пенькова P.A. Диагностика трихинеллеза в продуктах убоя домашних и диких животных / P.A. Пенькова, И.Г. Серегин // Ветеринария 1991. -№2.-С. 60-61.

119. Петров A.M. Формирование колострального иммунитета у животных/ А.М. Петров // Ветеринария 2006. - №8. - с. 35-41.

120. Плященко С.И. Стрессы благо или зло? / С.И. Плященко. - Мн.: Ураджай, 1991.- 170 с.

121. Подунова Л.Г. Микробиологический экспресс-анализатор и возможности его использования в практике бактериологических лабораторий и центров Госсанэпиднадзора / Л.Г. Подунова, Н.С. Кривопалова Н.С. и др. М.:ЗниСО.,1994. - 143. - С. 16-17.

122. Подунова Л.Г. Опыт проведения бактериологических исследований с использованием микробиологического экспресс-анализатора / Л.Г. Подунова- М.: ЗниСО.,1996. №2. - С. 5-16.

123. Подунова Л.Г. Ускоренный метод обнаружения и идентификации микроорганизмов при исследовании пищевых продуктов и продовольственного сырья / Л.Г. Подунова // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1996. - №1. - С. 55-57.

124. Поздеев O.K. Медицинская микробиология /O.K. Поздеев.- М.: Гоэтар-мед, 2002. 670 с.

125. Попов М.А. Роль трихинеллеза в общей патологии свиней / М. А. Попов,i

126. С.А. Нагорный, Т.Н. Твердохлебова // Матер. X заседания межвузовского координационного совета по свиноводству и республиканской научно-производственной конф. «Актуальные проблемы производства свинины». -Новочеркасск, 2002. С. 121-122.

127. Попов-М.А. Система локализации синантропных очагов трихинеллеза / М. А. Попов, Ю. И. Васерин, С.А. Нагорный, Т. И. Твердохлебова // Вестник ветеринарии. 2005. - №32. - С.33-35.

128. Пронин В.В. Влияние синдрома стресса на качество мяса / В.В. Пронин // Практик. 2002. - №2. - С.6-7.

129. Пронин В.В. Дифференциальная диагностика трихинеллёза / В.В. Пронин, М.О. Могутова, A.B. Могутов // Ветеринария. 2003. - № 10. - С. 36-38.

130. Пронин В.В. Эффективный метод диагностики трихинеллёза / В.В.

131. Пронин, М.О. Могутова, A.B. Могутов //Ветеринария с.-х. животных. -2005.-№1.-С. 26-27.

132. Робинсон Д. Основы регуляции кислотно-щелочного равновесия / Д. Робинсон. М.: Медицина, 1969. - 54 с.

133. Рогов М.В. Закономерности распределения личинок трихинелл в различных группах мышц хищных млекопитающих / М.В. Рогов, Б.В. Ромашов // 12-й Международный конгресс по болезням мелких дом. животных: Материалы. М., 2004. - С. 237-238.

134. Розанцев Э.Г. Элементы биохимической физики созревания мяса / Э.Г. Розанцев // Мясная индустрия. 2008t - №8. - С.28 - 33.

135. Ройтман В.А. Паразитарные системы: понятия, концепции, структуры, свойства, функции в экосистемах / В.А. Ройтман, С.А. Беэр // Тр. Ин-та паразитологии РАН. М.: Наука, 2004. - Т.44. - С. 273-317.

136. Ромашов Б.В. Трихинеллез в Центральном Черноземье* (Воронежская, область): экология и биология трихинелл, эпизоотология, профилактика и мониторинг трихинеллёза / Б.В. Ромашов, В.В. Василенко, М.В. Рогов. Воронеж: Воронежский гос. ун-т, 2006. - 181с.

137. Рябов F.A. Синдромы критический состояний / Г.А. Рябов. М.: Медицина, 1994. - 368 с.

138. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.

139. Сапунов А.Я. Трихинеллёз серьёзная мировая проблема / А .Я. Сапунов, В.А. Сапунов, Е.А. Логачёва // Практик - 2001. - №1.- С. 8 - 12.

140. Сапунов А.Я. Мышечный тропизм личинок трихинелл, паразитирующих у разных видов животных и птиц / А.Я. Сапунов, М.М. Антонов // Вестник ветеринарии. 2003. - №2. - С. 10-13.

141. Сапунов А.Я. Распределение личинок трихинелл в мышцах свиней при экспериментальном заражении / А.Я. Сапунов, O.A. Митникова, Г.В.

142. Якимов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями : материалы докл. науч. конф. М., 1999. - С.246-248.

143. Саркисова К.Ю. Индивидуальные различия в реакциях на острый стресс, связанные с типом поведения / К.Ю. Саркисова, М.А. Куликов// Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - Т.117. - №1.- С.89-92.

144. Селье Г. На уровне целого организма/ Г. Селье- М.:Наука, 1972.- 122 с.

145. Селье Г. Стресс без дистресса / Г. Селье. М.: Прогресс, 1982. - 124 с.

146. Серегин И.Г. Ветеринарно-санитарная экспертиза пищевых продуктов на продовольственных рынках / И.Г. Серегин, М.Ф. Боровков, Никитченко. М.: Гиорд, 2005. - 465 с.

147. Серёгин И.Г. О болезнях, которые не диагностируют на боенских предприятиях / И.Г. Серегин, Г.И. Брагин, И.Г. Логинов // Мясная индустрия 2005.- №12. - С. 49-54.

148. Скопичев В.Г. Физиолого-биохимические основы резистентности животных / В.Г. Скопичев, H.H. Максимюк. СПб: Изд-во Лань, 2009. -352 с.

149. Смирнов A.M. Контроль качества мяса и мясопродуктов/ A.M. Смирнов // Ветеринария. 2006. - №8. - С. 3-5.

150. Сомов Г.П. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий. Экологические аспекты / Г.П. Сомов, В.Ю. Литвин. Новосибирск, 1988.

151. Сороко О.Л. Европейский рынок мяса / О.Л. Сороко, Ю.С. Гракович // Мясная индустрия 2005. - №12. - С.15 - 16.

152. Сороко О.Л. Мировой рынок мяса / О.Л. Сороко, Н.П. Жук, Л.А. Ра-солько, H.A. Романович // Мясная индустрия 2006. - №4. - С. 10-12.

153. Сперанский В.В. Лабораторные методы по ветеринарно-санитарной экспертизе мяса / В.В. Сперанский, Л.Б. Лубсанова. Улан-Удэ: изд-во ВСГТУ, 2004.- 18 с.

154. Судаков K.B. Стресс: постулаты, анализ с позиций общей теории функциональных систем / К.В. Судаков// Пат.физиология. 1992. - №4. - С.86-93.

155. Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии / М.В. Супотницкий. М.: Вузовская книга, 2005. - 186 с.

156. Тарасов К.И. Проблема обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов / К.И. Тарасов // Всё о мясе 2003. - №4. - С.45 - 46.

157. Тарасов С.А. К диагностике трихинеллеза свиней- / С.А. Тарасов // Ветеринария. 1995. - №3. - С. 38 - 39.

158. Тартаковский И.С. Методические подходы к выделению и идентификации листерий в продуктах питания / И.С. Тартаковский // Профилактическая медицина практическому здравоохранению. - М.: 2001. - Вып. 1- С.92-94.

159. Тартаковский И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика / И.С. Тартаковский, В.В. Малеев, С.А. Ермолаева. М.: Медицина для всех, 2002. — 195 с.

160. Татулов Ю.В. Влияние стресса свиней на качество мясного сырья / Ю.В. Татулов, Т.В. Косачева, С.А. Кузнецова, E.H. Антонова, С.Б. Воскресенский // Мясная Индустрия. 2009.- №7. - С. 54-56.

161. Твердохлебова Т.П. Трихинеллез на юге России: эпидемиология, диагностика и профилактика в современных социально-экономических условиях: автореф. дис.д-ра мед. наук / Т.И. Твердохлебова. М., 2007. - 42 с.

162. Терских В.И. Сапронозы / В.И. Терских // Журн.микробиол. 1958. -№8. - С. 118 - 122.

163. Тигранян P.A. Гормонально-метаболический статус организма при экстремальных воздействиях / P.A. Тигранян. М.: Наука, 1990 - 288 с.

164. Томшина О.Л. Биология, диагностика и профилактика трихинеллеза свиней /О.Л.Томшина //Ветеринария с-х. животных.-2006.-№1.-С.42-43.

165. Тосев А. О стрессе у животных/А.Тосев//Агрокомпас-1994.-№8 С.31.

166. Успенский A.B. Групповая диагностика трихинеллеза свиней / A.B. Успенский // Третья Всесоюзная конф. по трихинеллезу : тез. докл. — Вильнюс, 1981. С.148-150.

167. Успенский A.B. Некоторые особенности распространения трихинеллеза в России / A.B. Успенский // Восьмая Всероссийская конф. по трихинеллезу : статьи и-тез.докл. М., 2000. - С.68-72.

168. Успенский A.B. Оптимизация трихинеллоскопического контроля / A.B. Успенский // Тр. Всерос.ин-та гельминтологии им. К.И.Скрябина. М., 2004: - Т.40. - С. 397 - 401.

169. Успенский A.B. Распространение и диагностика трихинеллеза у диких животных / A.B. Успенский // Ветеринария. 2004. - №10. - С.З - 4.

170. Успенский A.B. Особенности формирования очагов, трихинеллеза / A.B. Успенский, A.A. Гребенкин, A.A. Максимов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями : материалы докл. науч.конф. М., 2002. - Вып.З. - С.343-345.

171. Успенский А. В. Система обеспечения защиты населения от трихинеллеза на основе трихинеллоскопического контроля пищевой продукции / A.B. Успенский, A.A. Гребенкин // Тр. Всерос. ин-та гельминтологии им. К.И.Скрябина. 2006. - Т.42. - С.405-409.

172. Успенский A.B. Профилактика трихинеллеза / A.B. Успенский // Практик. 2007. - №6. - С. 26-30.

173. Фаизов Т.Х. Индикация патогенных сальмонелл в пищевых продуктах/ Т.Х. Фаизов, Л.И. Зайнуллин, Н.М. Александрова // Ветеринария. 2004. - №8. - С. 34 - 36.

174. Федеральный закон «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 02.01.2000 №29-ФЗ.

175. Федеральный закон «О техническом регулировании» от 27.12.2002 № 184-ФЗ.

176. Хазиев Г.З. Профилактика трихинеллеза / Г.З. Хазиев, Г.Ф. Сулей-манова, Р.Г. Фазлаев, A.C. Сагитова // Материалы докл. седьмой науч. конф. по трихинеллезу. М., 1996. - С. 111-114.

177. Хашен Р. Очерки по патологической биохимии / Р. Хашен, Д. Шейх. -М.: Медицина, 1981.-253 с.

178. Хвыля С.И. Идентификация генетически модифицированного сырья и методы ДНК-диагностики (ПЦР) / С.И. Хвыля //Всё о мясе. 2004. -№4.- С.48-49.

179. Хвыля С.И. Перспективные направления биологической и морфологической оценок сырья и мясной продукции / С.И. Хвыля // Всё о мясе. 2005. - №4.- С.35.

180. Шарма Р.К. Совершенствование бактериологического анализа для индикации листерий в продуктах, импортируемых в Россию : автореф. дис. на соискание учен. степ. канд. вет. наук/Р.К.Шарма.-Покров, 1999.

181. Шевелева С.А. Пищевые отравления и инфекции в Российской Федерации за период 1992 2001 гг.: состояние, проблемы и тенденции / С.А. Шевелева, Н.Р. Ефимочкина, A.A. Иванов // Гиг. и сан. - 2003.- №3. -С.38-45.

182. Шик JI.JI. Руководство по клинической физиологии дыхания / JI.JI. Шик, H.H. Канаев. JL: Медицина, 1980. - 376 с.

183. Шитый А.Г. Стресс у животных и его профилактика / А.Г. Шитый // Ветеринария. 1987.- №3. - С.71-72.

184. Чайка С.Ю. Паразитизм существование организмов в составе паразитарных систем / С.Ю. Чайка// Паразитология - 1998.-Т.32, №1. С.3-10.206., Чайка С.Ю. Паразитизм и паразитарные системы / С.Ю. Чайка // Ветеринарная патология. 2004. - №3. - С. 19-26.

185. Черкасский-Б.Л. Пищевые зоонозы у людей в России / Б.Л. Черкасский //Материалы Международного симпозиума «Пищевые* зоонозы, сальмонеллезы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики; лечения и профилактики».-1995.-С.18

186. Юшина Ю:К. Комплекс питательных сред для исследования! мясной продукции на наличие листерий /Ю:К. Юшина, IO.F. Костенко, К.С. Янковский // Мясные технологии. 2006. - №8. - С. 42-46.

187. Янченко А.Е. О лабораторной диагностике трихинеллеза / А.Е. Янченко, Н:Ф. Карасев // Практик. 2005. - №3/4. - С. 10-12:

188. Янковский К.С. Санитарно-микробиологическая оценка, листерий как показателя безопасности мясных продуктов: автореф. дис. на* соискание учен. степ. канд. вет. наук / К.С. Янковский. М.', 2000.

189. Abbas A. Functional diversity of helper T lymphocytes / A. Abbas, K. Muiphy, A. Sher // Nature 1996. - Vol. 383*. - P. 787 - 793.

190. Alisarli M. An investigation on the prevalence of L. monocytogenes and Salmonella spp. in a cattle slaughterhouse / M. Alisarli, L. Akkaya, S. Alemdar // Fleischwirtschaft 2003. - N.3. - P. 41-44.

191. Allerberger F. Listeria: growth, phenotypic differentiation and molekular microbiology / F. Allerberger // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2003. -Vol. 35.-P. 183- 189.

192. Armstrong D. Zoonoses action plan. Salmonella, monitoring program update / D. Armstrong // The Pig Journal- 2003. Vol. 52. - P. 166 - 173:

193. Autio T. Listeria- monocytogenes contamination pattern in pig slaughterhouses / T. Autio, T. Säteri, M. Fredriksson-Ahomaa, M. Rahkio, J. Lunden and Hi Korkeala // J. Food Prot; 2000. - Vof.63. - P. 1438-1442.

194. Aznar« R. PCR detection of Listeria monocytogenes: a study of multiple factors- affecting sensitivity / R. Aznar, B. Alarcön // J Appl Microbiol. -2003. Vol. 95. - P.f 958-966.

195. Barber D.A. Distribution of Salmonella in swine production ecosystems / D.A. Barber, P.B. Bahnson, R. Isaacson, C.J. Jones, R.M. Weigel // J: Food Prot. 2002. - Vol. 65. - P. 1861-1868.

196. Bateiii J. Trichinellosis control in Itali: consideration on> sampling in imported horses and1 their meat / J. Batteli, V.Jourberti, M. Marttiti // Eight Int. Conf. on Trichenellosis. Itali, 1993. - P. 13.

197. Becker B. Schnellnachweis von Listeria monocytogenes in Fleischerzeugnissen / B. Becker, S. Schuler // Fleischwirtschaft 2007. - N.7. - S. 103 - 106.

198. Becker B. Application of a simple PCR assay for the rapid detection of Listeria monocytogenes in*minced^meat / B. Becker, W.H. Holzapfel // Archiv für Lebensmittelhygiene. 2002. - Vol. 53. - S. 73 - 96.

199. Becker H. Nachweis einiger pathogener Mikroorganismen in Lebensmitteln mit kommerziellen Testkits Teil 2: Nachweis von Listerien / H. Becker, G. Schaller, M'. Farouq, E. Märtlbauer // Archiv für Lebensmittelhygiene. - 1998. - Vol. 49. - S. 30 - 34.

200. Bendall J.R. A Review of the Relationships of'pH with Physical Aspects of Pore Quality / J.R. Bendall, HJ. Swatland // Meat Science. 1988. - Vol.24. -S. 85-126.

201. Bergann T. Untersuchungen zum Vorkommen von Listeria spp. in Lebensmitteln / T. Bergann // Mh. Veter.- Med!- 1990. Jg.45, H.22.- S. 801-802.

202. Bergmeyer H.U. Methoden der Enzymatischen Analyse / H.U. Bergmeyer -Weinheim: Verlag Chemie, 1974.

203. Beumer R.R. Confirmation and identification of Listeria sppJ R.R. Beumer, M.C. Te Giffel, M.T. Kok, F.M. Rombouts // Lett. Appl. Microbiol. 1996. -Vol. 22. - №6. - P. 448-452.

204. Beumer R.R. Listeria monocytogenes: diagnostic problems / R.R. Beumer, W.C. Hazeleger // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2003. - Vol. 35. - P. 191-197.

205. Bhagwat A.A. Simultaneous detection of Escherichia coli 0157:H7, Listeria monocytogenes und Salmonella strains by Real-time PCR / A.A. Bhagwat // Int J Food Microbiol 2003. - Vol.84. - P. 217-224.

206. Bohaychuk V.M. Evaluation» of detection methods for screening meat and poultry products for the presence of foodborne pathogens/ V.M. Bohaychuk, G.E. Gensler, R.K. King, et al.// J Food Prot.-2005.-Vob. 68.- P.2637-2647.

207. Borucki M.K. Discrimination among Listeria monocytogenes isolates using a mixed genome DNA microarray / M.K. Borucki, M.J. Krug, W.T. Mu-raoka, D.R. Call // Vet. Microbiol. 2003. - Vol. 92. - P. 351 - 62.

208. Bouvet J. Evolution of pig carcass and slaughterhouse environment contamination by Salmonella / J. Bouvet, C. Bavai, R. Rossel // Revue Med. Vet. 2003. - V.154. - №12. - P. 775-779.

209. Breer C. Listerien in Lebensmitteln / C. Breer, K. Schopfer // Schweiz. Med. Wochenschr. 1989. - Vol.119. - S. 306 - 311.

210. Brenner F.W. Salmonella Nomenclature / F.W. Brenner F.W., R.G. Villar, F.J. Angulo, R. Tauxe, B. Swaminathan // J. Clin. Microbiol. 2000-Vol.38.- P. 2465-2467.

211. Cameron J.N. The respiratory physiology of animals / J.N. Cameron New York, Oxford, 1989. - 393 p.

212. Capita R. Occurence of Listeria species in retail poultry meat and comparison of a cultural/immunoassay for their detection / R. Capita, C. Allonso-Calleja, B. Moreno, M. Garcia-Fernandes // Int. J. Food Microbiol. 2001. -Vol. 65. - P. 75-82.

213. Carnevale M. Vergleichende Untersuchung zum Nachweis von Salmo-nellen in Lebensmitteln und Faeces vom Schwein unter Berücksichtigung von Effizienz, Wirtschaftlichkeit und Praxistauglichkeit verschiedener Methoden:

214. Dissertation / M.Carnevale Institut für Hygiene und Technologie der Lebensmittel tierischen^ Ursprungs München, 1998.

215. Carnevale M. Praxisorientierte Nachweismethoden« für Salmonellen / M. Carnevale, H. Hechelmann, R. Rotheneder, M.Gareis. In: DVG (Hrsg.) Proceedings der 38 Arbeitstagung des Arbeitsgebietes „Lebensmittelhygiene". -Garmisch-Partenkirchen, 1997.

216. Cocolin L. Direct identification in food samples of Listeria spp.and Listeria monocytogenes by molecular methods / L.Cocolin, K. Rantsiou, L. Lacumin et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol.68. - N.12.- P.6273 - 6282.

217. Comroe J.H. The Lung / J.H. Comroe, R.E. Forster u. oth. Chicago, 1957. - 196 c.

218. Cooke V.M. A novel chromogenic ester agar medium for the detection of salmonellae / V.M. Cooke, R.J. Miles, R.G. Price, A.C. Richardson // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 65. - P.807-812.

219. Cornelius L.M. Arterial blood gas and acid-base values in dogs with various diseases and signs of disease / L.M. Cornelius, C.A. Rawlings // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1981.-Vol. 178. - P. 992-995.

220. Counsul Directive 64/433/EEC on health condition for the production and marketing of fresh meat // Official Journal of the European Communities.

221. Curiale M.S. Detektion of Listeria monocytogenes in samples containing Listeria innocua / M.S. Curiale, C. W. Lewus // J. of Food Protection. 1994. -Vol. 57.-P. 1048-1051.

222. D'Aoust J.Y. Salmonella species / J:Y.D'Aoust, J. Maurer, J.S. Bailey. In: M.P. Doyle, L.R. Beuchat, T. J. Montville. Food microbiology: fundamentals and frontiers. Washington: ASM Press, 2001. - P. 141-192:

223. Davies P.R. The role, of contaminated feed in the epidemiology and, control of Salmonella enterica in pork production / P.R. Davies, H.S. Hurd, J.A. Funk, P. J. Fedorka-Cray, F.T. Jones // Foodborne Pathog Dis 2004. - Vol.1- P. 202-215.

224. Dick T.A. Trichinella spp. and Trichinellosis / T.A. Dick, E. Pozio. In: Samuel W.M. et al. Parasitic Diseases of Wild'Mammals. 2nd ed. Iowa State University Press, Ames. - Iowa, 2001. - P. 380-396.

225. Donnelly G.W. Detection» and isolation of Listeria monocytogenes from food samples: implications of sublethal injury / C.W. Donnelly // J AOAC Int. 2002. - Vol. 85. - P. 495-500.

226. Doumith M. Differentiation of the Major Listeria monocytogenes Serovars by Myltiplex PCR / M. Doumith, C. Buchrieser, P. Glaser, C. Jacquet, P.Martin // J Clin Microbiology 2004. - Vol.42, N.8. - P.3819-3822.

227. Dupouy-Camet J. Trichinellosis: a worldwide zoonosis / J. Dupouy-Camet // Veter.Parasitol. 2000. - Vol. 93, N. 3/4. - P. 191 - 200.

228. Dupouy-Camet J. Is human trichinellosis an emerging zoonosis in the European community / J. Dupouy-Camet // Helminthologia 1999. - Vol.36. -P. 201-204.

229. Ehinger B. Morfologische Veränderung der Darmbarriere bei Schlachtschweinen* in Abhängigkeit von Belastungsfaktoren und' deren Bedeutung für Produktsicherheit und Qualität. Dissertation / B. Ehinger. -Universität, Leipzig, 1998.

230. Fantasia M. Salmonella enteritidis in Italy / M. Fantasia, E. Filetici // Int. J. Food Microbiol. 1994. - Vol. 21. - P. 7 - 13.

231. Farber J.M. Listeria monocytogenes a food' borne pathogen / J.M. Färber, P.I. Peterkin // Microbiol. Rev. 1991. - Vol.55. - P.476-511.

232. Fazio E. Evaluation of stress during transport / E. Fazio, A. Ferlazzo // Vet. Res. Commun. 2003. - Vol.27. - №1. - P. 519-524.

233. Fehlhaber K. Untersuchungen zum Salmonella Vorkommen bei tauglich beurteilten Schlachtschweinen / K. Fehlhaber, A. Krüger, M. Schnabel, H.W. Krusch // Fleischwirtschaft - 1996. - Vol. 76. - S. 1467 - 1169.

234. Fehlhaber K. The study of Salmonella enteritidis growth kinetics using Rapid' Automated Bakterial Impedance Technique / K. Fehlhaber, G. Krüger // J. Appl. Microbiol. 1998. - Vol. 84. - S. 945 - 949.

235. Fehlhaber K. Schwierigkeiten und^ Defizite in der Bekämpfung lebensmittelbedingter Salmonellosen / K. Fehlhaber // Fleischwirtschaft.- 2001- N.ll. S.108-110.

236. Feldhusen F. Einfluß von Transport und Schlachtung auf die Fleischqualität / F. Feldhusen, J. Härtung In: DLG (Hrsg.) "Tiergesundheit und Produktqualität". Frankfurt a. M.: DLG Verlag, 1997. - C. 110 - 118.

237. Forbes L.B. Comparison of amodified digestion assay with trichinoscopy for the detectiomof Trichinellä larvae in pork / L.B. Forbes, S. Parker, W.B. Scandrett // J. Food Prot. 20031 - Vo1166. - N.6: - P. 1043-1046. :

238. Förster R.E. Pulmonary gas exchange/. R.E. Forster, E.D. Crandall // Ann. Rev. Physiol: 1976: - Vol:38l - P1.69 - 841

239. Fredricks D:N. Application of polymerase^^chain reaction to the diagnosis of infectious diseases/ D.N. Fredricks, D.A. Relman// Clin. Infect. Dis. 1999; -Vol. 29.-P. 475-488.

240. Gabel R.A. Algorithms for calculating and correcting blood-gas and acid-base variables / R.A'. Gabel // Respir. Physiol.- 1980.- Vol. 42:- P.211-232.

241. Gamble H.R. Factors affecting the efficiency of pooled sample digestion for the recovery of Trichinella spiralis from muscle tissue / H.R. Gamble // Int J Food'MicrobioL 1999! - VoL48¿ - N;L-P.73-78.

242. Gandhi M. Listeria: A foodborne pathogen that knows how to survive / Ml Gandhi, M.L. Ghikindas //Int. J. Food Microbiol -2007.- Vol. 113.- P. 1-15;

243. Garies M. Vorkommen von Salmonella spp. in der Produktionslinie Schweinefleisch / Ml Garies, Rl Rotheneder, H:Hechelmann // Fleischwirtschaft 1996. - Vol. 76. - N.12. - S. 1239 - 1243.

244. Gasanov U. Methods for the isolation und identification of Listeria spp. and Listeria monocytogenes: a review / U. Gasanov, D. Hughes, P.M. Hansbro // FEMS Microbiol Rev 2005. - Vol.29. - P.851-875.

245. Gibson D.M. Automated conductance method for the detection of Salmonella in food: collabariv study/ D.M. Gibson //J. of AOCA- 1992. -№2.-P.293-301.

246. Gobat P. F. Epidemiological studies on Listeria spp. in slaughterhouses / P.F. Gobat, T. Jemmi 11 Fleischwirtschaft 1990. - Vol.70. - P. 1448-1450.

247. Gould S.E. Trichinosis in« man and animals / S.E. Gould. Springfield, Illinosis, USA, 1970: - P. 423-436.

248. Gouws P.A. A polymerase chain reaction procedure for the detection of Salmonella spp. within 24 hours / P.A. Gouws, M. Visser, V.S. Brozel // J. Food Prot. 1998. - Vol.61. - P. 1039 - 1042.

249. Gray M.L. Listeria monocytogenes and listeric infections / M.L. Gray, A.H. Killinger // Bacteriol. Rev. 1996. - Vol. 30. - P. 309 - 382.

250. Gruenewald R. Use of Rambach propylene glycol containing agar for identification of Salmonella spp. / R. Gruenewald; R.W. Henderson, S Yap-pow // J. Clin. Microbiol. 1991. - Vol.29. - P. 2354-2356.

251. Guenter C.A. Respiratory function of the lungs and blood / C.A. Guenter // Clinical aspects of respiratory physiology. Philadelphia, Toronto, 1977. - P. 124- 177.

252. Hambrecht et al. Presslaughter stress and musle energy largely determine pork quality at two commercial processing plants //J Animal Science 2004. - Vol. 82. - P. 1401 - 1409.

253. Hartung M. Ergebnisse der Zoonosenerhebung 2004 in Lebensmitteln / M. Hartung // Fleischwirtschaft 2006. - N.3. - S. 155 -161.

254. Hasenson L.B. Epidemiological and microbiological data on Salmonella enteritidis / L. B. Hasenson, L. Kaftyreva, V.G. Laszlo, E.Woitenkova, M. Nesterova // Acta Microbiol. Hung. 1992. Vol. 39. - P. 31 - 39.

255. Hechelmann H. Möglichkeiten und Grenzen der Diagnostik von Salmonellen / H. Hechelmann, M. Garies // Mitteilungsblatt der Bundesanstalt für Fleischforschung Kulmbach 1995. - Vol.128. - S.174 - 178.

256. Hederding L., Linneweber A., Becker B. Methodenvergleich zum Nachweis von L.monocytogenes in Lebensmitteln / L. Hederding, A. Linneweber, B1 Becker //Fleischwirtschaft 2005. - N.6 - S.106 - 108.

257. Heeschen W.H. Zooosen und1 lebensmittelbedingte Erkrankungen / W.H. Heeschen. Hamburg: B ehr's Verlag, 2005.

258. Hein I. Detection and-Quantification of Listeria monocytogenes and Listeria innocua by a new Real-time quantitative PCR assay / I. Hein, D. Klein, A. Lehner, A. Bubert, E. Brandl, M. Wagner // Research in Microbiology 2001. - Vol.152'.-P.37^16:

259. HenkeS. Einfluss von Kurzzeittransporten (< 8 Std.) auf biochemische und physiologische Reaktionen von Rindern sowie deren Schlachtkörperqualität und' Fleischbeschaffenheit. Dissertation / S. Henke. Tierärztliche Hochschule Hannover, 2003.

260. Hof H. History and epidemiology of listeriosis / H.Hof // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2003. - Vol. 35. - P. 1343 - 1348.

261. Hofmann K. Der pH-Wert ein Qualitätskriterium für Fleisch / K. Hofmann// Fleischwirtschaft. - 1987. - Vol.67. - N.l. - S.557-562.

262. Holt J. G. Bergey's manual of determinative bacteriology / J.G. Holt, N.R. Krieg, P.H. Sneath, J.T. Staley, S.T. Williams. Baltimore, USA: Williams & Wilkins, 1994.-P. 570.

263. Honikel K.O. Aktuelles aus der internationalen Fleischforschung: Fleischqualität, Fleischreifung, Fleischzartheit und Fleischanalytik / K.O. Honikel // Fleischwirtschaft. 2004. - Vol.84. - N.l. - S. 102-104.

264. Honikel K.O. Biochemische Prozesse der Fleischbildung / K.O. Honikel, F. Schwägele. In: W. Branscheid, K.O. Honikel; G. Lengerken, K. Troeger. Qualität von Fleisch und Fleischwaren. Frankfurt am Main: Deutscher Fachverlag, 1998. - S. 593-616.

265. Honikel' K.O. Eine Schnellmethode zur Bestimmung von PSE- und DFD Fleisch beim Schweinen / K.O. Honikel, C. Fischer // Fleischwirtschaft: -1977.-Vol.57.-S. 1015-1017.

266. Horowitz R. Polymerase Chain Reaction. In: R. Horowitz, M.B. Frank ed. Molecular Biology Protocols. Oklahoma City, 1998.

267. Jemmi T. Listeria»monocytogenes: Gesundheitsrisiko und Hygieneindikator/ T. Jemmi, H. Schmid, R. Stephan // Amtstierärztlicher Dienst. 2002. - N2. -P. 98-101.

268. Jemmi T. Listeria monocytogenes: food-borne pathogen and' hygiene indicator / T. Jemmi, R. Stephan // OIE Scientific and Technical Review. 2006. -Vol.25.-P. 571-580.

269. Johansson T. Occurrence and typing of Listeria monocytogenes strains in retail vacuum-packed fish products-and in a production plant / T. Johansson,

270. Kawai T. Innate immune recognition^ viral infection/ T. Kawai, S. Akira// Nat. Immunol. 2006. - Vol.7. - P. 131 - 137.

271. Keer J.T. Molecular methods for the assessment of bacterial viability / J.T. Keer, L. Birch // J Microbiol Methods 2003. - Vol. 53.- P. 175-183.

272. Kerdahi K.F. Rapid determination of Listeria monocytogenes by automated enzyme-linked immunoassay and nonradioactive DNA probe / K.F. Kerdahi, P.F. Istafanos //J. AOAC Int. 2000. - Vol. 83. - P. 86-88.

273. Kerouanton A. Comparison of five typing methods for the epidemiological study of Listeria monocytogenes / A. Kerouanton, A. Brisabois, E. Denoyer, F. Dilasser, J. Grout, G. Salvat, et al. // Int. J. Food Microbiol. 1998. - Vol. 43.-P. 61-71.

274. Klein D. Quantification using real-time PCR technology: applications and limitations / D. Klein // Trends Mol. Med. 2002. - Vol.8. - P. 257-260.

275. Kleinman L.I. Ventilation standards for small mammals / L.I. Kleinman // J. Appl. Physiol. 1964. - Vol.19. - P.360.

276. Knapen F. Control of trichinellosis by inspection and farm management practices / van F. Knapen // Veterinary Parasitology. 2000. - Vol. 93. - P. 385-392.

277. Kofoth C.M. Aktuelles aus der internationalen Fleischforschung: Mikrobiologie des Fleisches / C.M. Kofoth // Fleischwirtschaft 1996 - Vol. 76. -N.ll.-S. 1187- 1188.

278. Korsak N. An efficient sampling technique used to detect four foodborne pathogens on pork and beef carcasses in nine Belgian abattoirs / N. Korsak, G. Daube, Y.Ghafir, A. Chahed, S. Jolly, H. Vindevogel // J. Food Prot. -1998. Vol.61. - S.535 - 541.

279. Kraft W. Klinische Labordiagnostik in der Tiermedizin / W. Kraft, U.M. Dürr. Stuttgart: Verlag Schattauer, 1999.

280. Kreuzer G. Mikrobiel und parasitär bedingte Lebensmittelvergiftungen / G. Kreuzer // Rundschau für Fleischhygiene und Lebensmittel-Überwachung.2002.-N.7.-S.147- 150.

281. Krumbholz L. Nachweis von Listeria spp. mittels fluoreszenzmarkierte Gensonden / L. Krumbholz, R. Pichner, T. Albert, H. Weber, M.Garies // Mitteilungsblatt BAFF. 2003. - Vol.42. - N.161. - S. 191-195.

282. Kuhn G. Postmortale Veränderungen der Fleischqualität beim Schwein / G. Kuhn, U. Kuchenmeister, K.H. Hoppenbrock, K. Ender // Fleischwirtschaft —2003. Vol. 83. - S.95-98.

283. Langermans J, Hazenbos W, van Furth R. Antimicrobial functions of mononuclear phagocytes/ J. Langermans, W. Hazenbos, van R. Furth J Immunol Methods 1994. Vol.174 (1-2). P. 185-94.

284. Leclair D. A preliminary investigation on the infectivity of Trichinella larvae in traditional preparations of walrus meat / D. Leclair, L.B. Forbes, S. Suppa,

285. J.F. Proulx, A.A. Gajadhar // Parasitology Research. 2004. - Vol.93. - N.8. -P. 507-509.

286. Leidreiter MiT. Untersuchungen zum Nachweis von Listeria monocytogenes in Schweinehackfleisch: Kulturelle Referenzmethoden, ELISA, PCR und Microarray. Dissertation / M.T. Leidreiter. Tierärztliche Hochschule Hannover, 2003.

287. Lengerken G. Komponenten* des Schlachttierwertes / G. Lengerken, M. Wicke, K. Fischer. In: W. Branscheid, K.O. Honikel, G. Lengerken, K. Troeger. Qualität von Fleisch und Fleischwaren. Frankfurt am Main: Deutscher Fachverlag, 19981 - S. 205-219.

288. Lincicome D.R. Aspects of biology of symbiosis / D.R. Lincicome -Baltimore-London, 1971. P. 139 - 228.

289. Lindner R. Untersuchungen über die Beziehungen zwischen Glykolyse und Fleischbeschaffenheit beim Schwein -zugleich Beschreibung der Basis eines Selektionsexperimentes. Dissertation / R. Lindner.- Universität, Hohenheim,1991.

290. Lizko N.N. Stress and intestinal microflora / N.N. Lizko // Nahrung 1987. -Vol. 31.-S. 443 - 447.

291. Loessner M.J. Bakteriofagen ermöglichen effiziente Kontrolle von Listeria monocytogenes, Salmonella enterica und Enterobacter sakazakii in1.bensmitteln / M.J. Loessner, K. Kim, S. Günter // 48 Arbeitstagung der DVG, Garmisch-Partenkirchen. 2007.

292. Loncarevic S. Occurrence of Listeria speacies in an abbottor far cattle and pigs in Bosnia, and, Hercegovina / S. Loncarevic, A. Milanovic, F.Caklovica, W.Tham, M.L. Daneilsson-Tham//Acta vet.Scand.- 1994.-Vol.35.-P. 11-15.

293. Low J.C. A review of Listeria monocytogenes and listeriosis / J.C. Low, W. Donachie // Vet J 1997. - Vol. 153. - P. 9-29.

294. Lubenow E. Untersuchungen zum Nachweis von Salmonellen in natürlich und künstlich kontaminierten Lebensmitteln mittels kulturelle Methode, ELISA, PCR und Microarray. Dissertation / E. Lubenow. Tierärztliche Hochschule Hannover, 2002.

295. Lücke F.K. Fleischhygiene: Mikrobiologische Risiken / F. K. Lücke, K. Troeger. In: W. Branscheid, K.O. Honikel, G. Lengerken, K. Troeger. Qualität von Fleisch und Fleischwaren. Frankfurt am Main: Deutscher Fachverlag, 1998. - S. 439 - 505.

296. Lukinmaa S. Application of molecular genetic methods in diagnostic and epidemiology of food-bome bacterial pathogens/ S. Lukinmaa, U.M. Nakari, M. Eklund, A. Siitonen // APMIS.- 2004.-Vol. 112. N. 11-12.- P.908-929.

297. Maassen C. Incidence of Salmonella in minced meat produced in an EU approved cutting plant / C. Maassen, A. Stolle // Fleisch Wirtschaft 2005-Vol.85 - N.2. - S.96-98.

298. Maciorowski K.G. Cultural and immunological detection methods for Salmonella spp. in animal feeds / K.G. Maciorowski, P. Herrera, F.T. Jones, S.D. Pillai, S.C. Ricke // Vet Res Commun 2006.- Vol. 30.- P. 127-137.

299. Malorny B. Interlaboratory diagnostic accuracy of a Salmonella specific PCR-based method / B. Malorny, J. Hoorfar, M. Hugas, A. Heuvelik, P. Fach, L. Ellerbroek, C. Bunge, C. Dom, R. Helmuth // Int. J. Food Microbiol. -2002. Vol. 89. - P. 241 - 249.

300. May R: Phagocytosis and the actin cytoskeleton / R. May, L. Machesky// J Cell Sei-2001.-Vol. 114.-P. 1061 -1077.

301. Mead P.S. Food-related illeness und death in the United States / P.S. Mead; L. Stutsker, V. Dietz; L.F. McCaig, J.S. Bresee, C. Shapiro, P.M. Griffin, R.V. Tauxe // Emerg. Infect. Dis. 1999: - Vol. 5 - P. 607-625.

302. McLauchlin J. The identification of Listeria speciesI J. McLauchlin // International Journal of Food Microbiology 1997. - Vol.38. - S. 77-81.

303. Middleton D. Natural killer cells and their receptors / D. Middleton, M. Curran, L. Maxwell // Transpl Immunol 2002. - Vol. 10. - P. 147-164.

304. Moberg G.P. Stress: diagnosis, cost and management / G.P. Moberg // Proc. SCAW Conf. "Agr.Anim.Res.", Washington. 1992. - P. 58 - 61.

305. Montagné M. Comparison of the performances of two bi-enzymatic sensors for the detection of D-lactate / M. Montagné, H. Erdmann, M. Comtat & J.L. Marty // Sensors Actuators B: Chemical 1995. - Vol. 27. - P: 440 - 443.

306. Müller E. Untersuchungen* über die Beziehungen^ von Fleischanteil, Fleischbeschaffenheit und Stressresistenz bei verschiedenen Schwein-eherkünften / E. Müller // Züchtungskunde. 1994. - Voll 66. - S. 349-358.

307. Murrell K.D: Trichinellosis: the zoonosis that not go quietly / K.D. Murrell, E. Pozio // Int. J. Parasitol. 2000. - Vol.30. - P. 1339-1349.

308. Nöckler K. Ring versuch zum Nachweis von Trichinella-Muskellarven inSchweinefleisch / K. Nöckler // Fleischwirtschaft'- 2005.- N:2! S.99-104.

309. Nöckler K. Nationaler Ring versuch zum Nachweis von Trichinellen' in Fleisch / K. Nöckler, S. Reckinger// Fleischwirtschaft-2006.-N.5.-S. 90-95.

310. Nöckler K. Trichinella spiralis und Trichinella pseudospiralis mixed infection in a wild boar (Sus scrofa) of Germany/ K. Nöckler, S. Reckinger, E. Pozio//Veter.Parasitol.-2006.-Vol. 137. N.3-4.-P. 364-368.

311. Nöckler K. Detection of Trichinella,infection-in food animals / K. Nöckler, E. Pozio, W.P. Voigt, J. Heidrich // Veter.Parasitol. 2000. - Vol. 93. - N.6: - P. 335-350.

312. Nöckler K. Laboratorium diagnostik der Trichinellose / K. Nöckler, I. Reiter-Owona, J. Heidrich // J.Lab.Med.Heft 2002. - N.7-8.- S. 365-371.

313. Norrung B. Microbiological criteria for Listeria monocytogenes in foods under special consideration of risk assessment approaches / B. Norrung // Int. J. Food Microbiol. 2000. - Vol. 62. - P. 217-221.

314. Norton D.M. Polymerase chain reaction-based methods for detection of Listeria monocytogenes: toward real-time screening for food andenvironmental samples / D.M. Norton // J. AOAC Int.- 2000.-Vol.85.- P. 505-515.

315. Nunn J.F. Applied respiratory physiology / J.F. Nunn. Boston: Butterworths Publishers Jnc, 1977. - 380 p.

316. Oravcovä K. A novel real-time PCR-based method for the detection of Listeria monocytogenes in food1 / K.Oravcova, T. Kuchta, E. Kaclikovä // Letters in Applied Microbiology 2007. - Vol.45. - P. 568 - 573.

317. Oravcovä K. Limitation in the detection of Listeria monocytogenes in food in the presence of competing Listeria innocua / K.Oravcovä, T. Trncikovä, T. Kuchta, E. Kaclikovä // J. Appl. Microbiol.-2008.-Vol. 104.- P.429- 437.

318. Pancer Z. The evolution of adaptive immunity / Z. Pancer, M. Cooper // Annu Rev Immunol 2006. - Vol. 24. - P. 497 - 518.

319. Piknova L. Detection of Salmonella in food, equivalent to ISO 6579, by a three-days Polymerase chain reaction-based method / L. Piknova, A. Stefa-novicova, H. Drahovska, M. Sasik, T. Kuchta // Food Contr. 2002.-N.13.-P. 191-194.

320. Porwollik S. Characterization of Salmonella enterica subspecies I genovars by use of inicroarrays / S. Porwollik, E.F. Boyd, C. Choy, P. Cheng, L. Florea, E. Proctor, et al. // J. Bacteriol. 2004. - Vol. 186. - P. 5883 - 5898.

321. Pozio E. Autochthonous and imported Trichinella isolates in Germany / E. ' Pozio, K. Nockler, L. Hoffman, W. Voigt // Veter.Parasitol. 2000. - Vol. 87. - N. 2/3. - P. 157-161.

322. Pozio E. Trichinellosis in the European Union: Epidemiologiy, ecology and economic impact / E. Pozio // Parasitology today 1998. - 14(1). - P.35-38.

323. Pozio E. Trichinella-infected pork products: a dangerous gift / E. Pozio, G. Marucci // Trends in Parasitology. 2003. - Vol. 19. - P. 338-338.

324. Pritchard T.J. Combined secondary enrichment of primary enrichment broths increase Listeria detection / T.J. Pritchard, C.W. Donnelly // J Food Prot 1999. - Vol.62. - P. 532-535.

325. Pyburn D.G. Trichinae certification in the United States pork industry / D. G. Pyburn, H.R. Gamble, E.A. Wagstrom, L.A. Anderson, L.E. Miller // Veter.Parasitol. 2005. - Vol. 132. - N.9. - P. 179-183.

326. Ramisz A. Evalution of the meat carcases assigned for. consumption towards the presence of Trichinella larvae by two methods : trichinoscopy and digestion / A. Ramisz, A. Balicka-Ramisz // Wiad Parazytol. 2006. - Vol. 52. - N.3. - S. 199-204.

327. Rantsious K. Detection, quantification and" vitality of Listeria monocytogenes in food as determined by quantitative PCR / K. Rantsious, V. Alessandria, R. Urso, P. Dolce, L. Cocolin // Int J Food Microbiol 2008. -Vol.121.-P.99- 105.

328. Reissbrodt R. New chromogenic plating media for detection and enumeration of pathogenic Listeria spp. an overview / R. Reissbrodt // J Int Food Microbiol - 2004. - Vol.95. - P. 1-9.

329. Report of 5 World Congress "Foodborne infections and intoxication", Berlin, 7 11 June, 2004// Newsletter WHO Surveillance programme for control of foodborne infections and intoxications in Europe. - 2004. -N. 81/82.-P. 3-6.

330. Reuter G. Mikrobiologie des Fleisches / G. Reuter. In: H. Weber. Mikrobiologie der Lebensmittel Fleisch und Fleischerzeugnisse. - Hamburg: Behr's Verlag, 1996. - S. 3-115.

331. Reuter G. Verfahren' zur Erkennung von Fleischqualitätabweichungen bei Schlachttierkörpern / G. Reuter // Fleischwirtschaft 1982. - Vol.62. -S.1153 - 1156.

332. Rijpens N.P. Molekular methods for identification und detection of bacterial food pathogens / N.P. Rijpens, L.M. Hermann // J; AOAC Int. 2002. -Vol.85. - P. 984-995.

333. Rodrigues-Lazaro D. Rapid quantitative detection of Listeria monocytogenes in meat products: evaluation of pre-real-time PCR strategies/ D. Rodrigues-Lazaro, A. Jofre, T. Aymerich, M. Hugas, M. Pia // J Food Prot -2004. Vol. 68. - P. 1467-1471.

334. Rodrigues-Lazaro D. Rapid quantitative detection of Listeria monocytogenes in meat products by real-time PCR / D. Rodrigues-Lazaro, A. Jofre, T. Aymerich, et al.// Appl. Environ Microbiol.- 2004.-Vol.70.- P.6299-6301.

335. Ryser E.T .Listeria, Listeriosis? andiFood^Safety/ E;T: RyservE;H: Marth- -New York: Markell Dekkcr, 1999.

336. Ryter A. Relationship between ultrastructure and specific functions of macrophages: / A. Ryter // Comp Immunol: Microbiol Infect Dis. 1985:; -Vol.8-P. 119 - 133.

337. SchalchB;.Nachweis von Listeria monocytogenes mit dem sclinellen VIT-Gensondentest-/ B. Schalch, R. Alavi, Th Albert// Fleischwirtschaft- 2005.-N.10- S.113- 115. • •

338. Schmidt U., Listerienfunde in rohen Fleischerzeugnissen^ / U. Schmidt, H!P:R; Seeliger, E. Glenn; B; Langer, L. Leistner // Fleischwirtschaft. 1988. - Vol.68.-S. 1313-1316.

339. Schönenbrücher V. Neue; chromogene Nährmedien zum Nachweis von Salmonellen / V. Schönenbrücher, P; Hattendorf und M. Bülte // Fleischwirtschaft 2004: - N:.8 - S. 218-220: ■

340. Schulz V. Untersuchungen über den Einfluss der Ruhezeit zwischen Transport und Schlachtung auf die:Häufigkeit des Auftretens von Salmonellen bei Schlachtschweinen. Dissertation / V. Schulz. Universität; Gießen, 1983.

341. Schütte A. Tiertransport und Fleischqualität bei Schweincn / A; Schütte, M. Wcnzlawowicz, G. Mickwitz // Fleischwirtschaft 1994.-Vol.74-S. 126-132.

342. Schwägele F. Enzymolögische Untersuchungen über die Ursachen des schnellen pH-Wert-Abfalles in PSE-Muskeln / F. Schwägele // Fleischwirtschaft. 1994. - Vol.74. - N.l. - P.95-101.

343. Schwägele F. Enzymological investigations» on the causes for the, PSE-syndrome / F. Schwägele, P.L. Buesa, K.O. Honikel // Meat Sei. 1996, - Vol; 44. S. 41 -53.

344. Seeliger H.P.R. Genus Listeria Pirie / H.P.R. Seeliger und D. Jones. In: P. H.A. Sneath, N.S. Mair, M.E. Sharpe, J.G. Holt. BERGEY's Manual of Systematic Bacteriology-Baltimore: Williams&Wilkins, 1986.- S. 1235-1245.

345. Seeliger H.P.R. Listeriosis-history and actual development/H.P.R. Seeliger// Infection. 1988. - N. 16. - P. 80 - 84.

346. Sinell H.J. Infektionen und mikrobielle Vergiftungen durch Lebensmittel / HJ. Sinell // Ernährung im Fokus 2002. - N.8. - S. 198 - 203.

347. Skwark M. The detection and determination of potential virulence of Salmonella spp. using PCR method/M. Skwark, P. Nawrotek, I. Czyzewska // Pol. J.Vet. Sei. 2004. - Vol. 7. - №1. - P. 33 - 37.

348. Slifko T.R. Emerging parasite zoonoses associated^ with water and food / T.R*. Slifko, H:V. Smith, J.B. Rose // International Journals for Parasitology -2000. Vol.30. - P. 1379-1393.

349. Slutsker L. Listeriosis / L. Slutsker, M.C. Evans, A. Schuchat // Emerging Infections. 2000. - Vol. 4. - P. 83 - 106.

350. Snaidr J. Scneller und sicherer Nachweis von Listerien und Listeria monocytogenes mit einer neuen Gensondentechnologie / J. Snaidr // Deutsche Molkerei Zeitung 2001. - N. 17 - S. 708-709.

351. Spengler U. Genetischer Nachweis von Salmonellen / U. Spengler // Fleischwirtschaft 2001. - N. 8 - S.18.

352. Standart ISO: Microbiology. General guidelines on methods for detection Salmonella. The International Organisation for Standartization. ISO, Ref. 6579 : 2002.

353. Standart ISO 11290-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs -horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes. Part 1: Detection method. 2002.

354. Standart EN ISO' 22174:2002. Microbiology of food and animal feeding stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food pathogens - General requirements and definitions.

355. Sunaga S. Isolation and some properties of Listeria spp. from pig carcasses an abattoir/ S. Sunaga,,K. Nakauchi, H. Nakajima// J Japan Veter. Med. Assn. -1991.-Vol. 44.-№10.-P. 1051 1056.

356. Swaminathan B. The epidemiology of human, listeriosis / B. Swaminathan; P. Gerner-Smidt // Microb. Infect. 2007. - Vol. 9. - P. 1236 - 1243.

357. Tauxe R.W. Emerging foodborne pathogens / R.W. Tauxe // Int. J. Food Microbiol. 2002. - Vol. 7, issues 1-2. - P. 31 - 41.

358. Thiemig F. Zur Problematik der PSE-Bestimmung bei Schweinefleisch / F.Thiemig, H. Buhr, P. Oelker // Fleischwirtschaft. 1997. - Vol.77. - N.3. -S. 229-237.

359. Tröeger K. Schlachttiertransport Behandlung auf dem Transport und die Folgen für die Produktqualität / K. Troeger // Fleischwirtschaft. - 1995. -Vol.75.-S. 415-418.

360. Verordnung (EG) Nr. 2160/2003 des Europäischen Parlaments und des Rates zur Bekämpfung von Salmonellen und bestimmten anderen durch Lebensmittel übertragbaren Zoonoseerregern // Amtsblatt der Europäischen Union.-2003.-L 325/1.

361. Verordnung (EG) Nr. 2075/2005 der Komission vom 5. Dezember 2005 mit spezifischen Vorschriften für die amtlichen Fleischuntersuchungen auf Trichinen // Amtsblatt der Europäischen Union. 2005. - L338/60-338/82.

362. Vignau M.L. Comparision between two methods for diagnosis of trichinellosis: trichinoscopy and artificial digestion / M.L. Vignau, M.M. del Valle Guardis, M.A. Risso, D.F. Eiras // Mem.Inst.Oswaldo Crus. 1997. -Vol. 92. - P. 585-587.

363. Wagner M. Servey on the Listeria. Contamination of Ready-to-Eat Food Products and Household Environments in Vienna, Austria / M. Wagner, B. Auer, C. Trittremmel, J. Hein, D. Schoder // Zoonoses and Public Health -2007. Vol.54. - N.l. - S.16 - 22.

364. Wall P.G.A case control study of infection within' epidemic strain of multiresistant Salmonella typhimurium DT 104 in England and Wales / P.G. Wall, D. Morgan, K. Lamden et al. // Commun. Dis. Report. 1994. - №4. -P. 130- 140.

365. Wang G.H. Isolation and identification of Listeria monocytogenes from retail meats in Beijing / G.H. Wang, K.T. Yan, X.M. Feng, S.M.Chen, A.P.Lui, Y.Kokubo // J. Food Protect. 1992. - Vol.55. - S. 56-58.

366. Watson W.A. Salmonellosis and meat hygiene: Red meat / W.A. Watson // Vet. Ree. 1975. - Vol. 96. - P. 374-376.

367. Weise E. Listerien in Lebensmitteln ein ungelöstes Problem I E. Weise // Arztl. Lab. - 1989. - Vol. 9. - N 35. - S. 205 - 208.

368. Wilhelm E. Salmonella-Überwachung der Schlachtschwiene / E. Wilhelm, W. Rossmanith, C.Gabler, F. Hilbert//Fleischwirtschaft-2005.-N.5-S.97 99.

369. Wüste T. Aktualität der Trichinenuntersuchung erneuter Fund von Trichinen beim Wildschwein / T. Wüste // Amtstierärztl. Dienst und Lebens-mittelkontr. - 1998. - Vol.5. - S. 154-156.

370. Yang H. Consumer phase risk assessment for Listeria monocytogenes in deli meat / H. Yang, A. Mokhtari, L.-A.Jaykus, R.A. Morales, S. C. Cates and P. Cowen // Risk Analysis 2006. - Vol. 26. - P. 89 - 103.

371. Zamora B.M. Chemiluminescent Immunoassay in comparison with the indirect ELISA as reference method for detecting Salmonella antibodies in swine meat juice / B.M. Zamora, M. Härtung // Berl. Münch, tierärztl. Wschr. 2002. - Vol.115. - P.369-380.

372. Zucker B.A. Auswirkungen von Transportbelastungen auf den Endotoxin-gehalt im Blut von Schlachtschweinen / B.A. Zucker, M. Krüger // Berl. Münch. Tierärztl. Wschr. 1998.-Vol. 111. - S. 208-210.

Информация о работе
  • Нечаев, Андрей Юрьевич
  • доктора ветеринарных наук
  • Санкт-Петербург, 2011
  • ВАК 06.02.05
Диссертация
Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно
Автореферат
Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации