Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.)

Мокшин, Евгений Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.)
ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.)"

На правах ру

Мокшин Евгений Владимирович

МОРФО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ IN VITRO РАЗЛИЧНЫХ СОРТОВ ЛИЛИЙ (LILIUM L.) И ГЛАДИОЛУСОВ (IGLADIOLUS L.)

03.00.12 - физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нижний Новгород 2005

Работа выполнена на кафедре ботаники и физиологии растений биологического факультета Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор A.C. Лукаткин

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор В.П. Лобов

кандидат биологических наук, доцент Т.Н. Кузнецова

Ведущая организация: Главный ботанический сад

им. Н.В. Цицина РАН

Защита состоится « о » ноября 2005 г. в 1S часов на заседании диссертационного совета К 212.166.06 Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского (603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского.

Автореферат разослан « £ » QA3gffiy2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

И.Ф. Александрова

19 £0& ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Луковичные и клубнелуковичные цветочно-декоративные многолетние растения с каждым годом приобретают все большее значение в промышленном цветоводстве и озеленении. Особой популярностью пользуются лилии и гладиолусы; это требует их ускоренного размножения [Лапинская, 1998; Румынии, Агаджанян, Слюсаренко, 1999; Мазур, Калашникова, 2000]. Традиционный вегетативный метод не позволяет быстро и в достаточном количестве размножить новые сорта и гибриды; многие из них имеют низкий коэффициент размножения. Все это сдерживает процесс сортосмены и обедняет ассортимент цветочной продукции.

При дефиците исходного материала значительно ускорить размножение позволяет метод клонального микроразмножения (КМР), который включает следующие этапы: I - введение в культуру in vitro; II - собственно микроразмножение; ИТ - укоренение; IV - перевод растений-регенерантов в культуру ex vitro [Высоцкий, 1983; Бутенко, 1999]. Данный метод был использован для многих декоративных растений, в том числе тюльпана [Bancilhon, 1974; Hussey, 1975; Riviere, Muller, 1979], нарцисса [Hussey, 1982; Выхри-стова, 1983], ириса [Лунева, 1977; Болтенков и др., 2000], фрезии [Bajaj, Pierik, 1974; Катаева, 1981, 1983], гиппеасшума [Рахимбаев и др., 1983] шафрана [Рахимбаев и др., 1985], лилии [Румынии, Слюсаренко, 1989 Chang et al., 2000; Мазур, Калашникова, 2000], гладиолуса [Ziv et al., 1970: Bajaj et al., 1983; Лапинская, 1998]. Однако данные по клональному размножению лилий и гладиолусов неполные. Недостаточно изучено влияние стерилизующих растворов, минеральных и органических компонентов питательной среды, регуляторов роста и условий культивирования на процессы регенерации растений на каждом этапе микроразмножения. Кроме того, практически отсутствуют сравнительные данные по сортовым особенностям клонального микроразмножения лилий и гладиолусов.

Цель и задачи исследования. Целью исследований являлось изучение морфо-физиологических особенностей клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.).

Задачи исследования:

1. Разработать эффективные методы введения различных сортов лилий и гладиолусов в стерильную культуру in vitro-,

1. Выяснить вклад биологических особенностей эксплантов в регенера-ционную активность на этапе введения в культуру in vitro;

3. Изучить влияние минерального и органического компонентов питательной среды на регенерационную активность эксплантов лилий и гладиолусов на Гэтапе КМР;

4. Определить роль отдельных факторов культивирования (состав питательных сред, физические условия) на этапе собственно микроразмножения (П этап КМР);

5. Оптимизировать состав питательных сред и условия культивирования, обеспечивающие высокую укореняемость и регенерацию пробирочных растений (Ш этап КМР);

6. Проанализировать параметры адаптации растений-регенерантов лилий и гладиолусов в условиям еде vitw (IV этап КМР).

J ГОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ J

БИБЛИОТЕК^,

с.«

ЭЖ1

Основные положения, выносимые на защиту.

- Сорта JIA-гибридов лилий (Longiflorum-Asiatic hybrids) и гладиолусов ОGladiolus hybridus hört.) существенно различаются по своим биологическим свойствам.

- Технология клоналыюго микроразмножения разработана для каждого сорта и отличается специфическими элементами.

- Полученные экспериментальные результаты имеют практическое значение.

Научная новизна. Для четырех сортов JIA-гибридов лилий и гладиолусов разработаны эффективные приемы получения асептической культуры первичных эксплантов и выявлены наиболее благоприятные сроки изоляции эксплантов. Впервые для данных видов и сортов изучено влияние физиологического возраста, происхождения и полярности эксплантов на регенерационную активность при введении в культуру in vitro. Выяснено влияние минеральных и органических компонентов питательной среды, экзогенных регуляторов роста и экологических факторов культивирования на регенерационную активность эксплантов гладиолусов и JIA-гибридов лилий на различных этапах КМР.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты вносят вклад в развитие современных представлений об особенностях кло-нального микроразмножения in vitro луковичных и клубнелуковичных декоративных растений. Применение разработанных элементов технологии клонального микроразмножения разных сортов JIA-гибридов лилий и гладиолусов позволит успешно решать проблему ускоренного размножения и оздоровления ценных сортов лилий и гладиолусов, существенно сократит сроки получения посадочного материала. Подана заявка на изобретение (патент РФ) № 2005104318/12 с приоритетом от 17.02.2005.

Основные выводы и результаты работы могут быть использованы в учебном процессе на биологических факультетах университетов, сельскохозяйственных и педагогических вузов.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены и доложены на Международных научных конференциях «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2001, 2003), «Экологическая ботаника: наука, образование, прикладные аспекты» (Сыктывкар, 2002), «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии» (Брянск, 2002), «The Biology of Plant Cell In Vitro and Biotechnology» (Saratov, 2003), «Актуальные вопросы ботаники и физиологии растений» (Саранск, 2004), на V съезде Общества физиологов растений России и Международной конференции «Физиология растений - основа фитобиотехнологии» (Пенза, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции «Физиология растений и экология на рубеже веков» (Ярославль, 2003), на научных конференциях «Роль ботанического сада в интродукции, сохранении редких видов растений и экологическом воспитании» (Саранск, 2000), «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казан!., 2004), «Проблемы озелене-

ния городов» (Москва, 2004), na XXXI Огаревских чтениях (Саранск, 2002), на VII и VIII Научных конференциях молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ им. Н.П. Огарева (Саранск, 2002,2003).

Публикации. Автором по теме диссертации опубликовано 17 работ, в т. ч. 3 статьи в реферируемых .журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов, списка литературы (182 источника, в том числе 70 иностранных). Работа изложена на 152 страницах, содержит 29 рисунков и 35 таблиц.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объект исследований. Для выявления сортовой специфичности использовали 4 сорта JIA-Гибридов лилий (Longijlorum-Asiatic hybrids)'. Сан-сет, Суинс, Вашингтон, Мадонна и 4 сорта гладиолуса (Gladiolus hybridus hort): Черный камень, Оскар, Андрей Первозванный, Лазурный берег. Луковицы лилий и клубнелуковицы гладиолуса - коммерческого происхождения, приобретены во Всероссийском выставочном комплексе (г. Москва) и агрофирме «ФЛОС» (г. Балашиха).

Условия и методика проведения исследований. Работа выполнена в 2000-2004 гг. На первом этапе для эффективного введения лилий и гладиолусов в культуру in vitro использовали 0,1% КМПО4, 70% этанол, 2% хлорамин, 50% Domestos (в различных сочетаниях) при экспозициях от 3 до 25 минут. Эксплантацию проводили в разные сроки: начало вегетации (апрель-май), окончание роста (октябрь), органический покой (ноябрь), вынужденный покой (март). Выясняли зависимость образования микролуковичек лилий от возраста использованной чешуи-донора: молодая (с 1 по 6), средневозрастная (с 7 по 12) и старая (с 13 по 18) и происхождения экс-планта (апикальная, медиальная и базальная часть). Изучали влияние ориентации эксплантов лилий на регенерационную активность (образование микролуковичек) - нормальная полярность (базальным участком вниз), обратная полярность (базальным участком вверх); горизонтальное расположение - внутренней поверхностью вниз или вверх. Варьировали концентрацию макро- и микросолей в среде (по прописи Мурасиге и Скуга, МС) (полная концентрация солей по прописи МС, 1/2 солеи МС, 1/4 солей МС, 1/8 солей МС). На данном этапе в среду добавляли регуляторы роста: наф-тилуксусную кислоту (НУК), 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту (2,4-Д), 6-бензиламинопурин (6-БАП) и кинетин, все в концентрации от 0,5 до 1,5 мг/л. Для выяснения зависимость развития эксплантов от типа и концентрации источника углерода в питательную среду добавляли сахарозу, глюкозу и фруктозу в концентрациях от 10 до 70 г/л.

На этапе собственно микроразмножения изучали зависимость регенерации эксплантов от минерального состава питательной среды (полная, 1/2, 1/4 и 1/8 концентрация солей по прописи Мурасиге и Скуга), концентрации сахарозы в среде (от 10 до 70 г/л), регуляторов роста (6-БАП, НУК и 2,4-Д). Варьировали физические условия культивирования - фотопериод (24 ч, 16 ч, темнота) и температуру (14°С и 23°С). При регенерации растений из пересадочной каллусной ткани варьировали соотношение и концентраций 6-БАП и 2,4-Д в среде (от 0,5 до 2,0 мг/л).

На этапе укоренения изучали зависимость интенсивности ризогенеза от

минерального состава питательной среды (полная концентрация солей по прописи МС, 1/2 солей МС. 1/4 солей МС, 1/8 солей МС), регуляторов роста - тидиазурона (Ю-7, 1(Г, 10"" моль/л), 2,4-Д (0,5-1,5 мг/л), НУК (0,51,5 мг/л) и физических условий культивирования - фотопериода (24 ч, 16 ч, темнота), температуры (14°С и 23°С).

На этапе перевода растений-регенерантов в условия ex vitro изучали зависимость приживаемости пробирочных растений от обработки их регулятором роста - НУК (0-1,5 мг/л) и варьирования физических факторов культивирования - фотопериода (24 ч, 16 ч, темнота) и температуры (14 С и 23°С).

Повторности определений и статистическая обработка. Все

опыты проводили не менее 3 раз, по 10-16 растений или эксплантов в каждом варианте опыта. Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием программ Biostat, Статистика v.2.6, Microsoft Excell 2000. В таблицах и на графиках представлены средние значения из всех опытов с их стандартными ошибками, рассчитанные по стандартным биометрическим критериям. Достоверность различий между вариантами оценивали по t-критерию Стьюдента [Лакин, 1980].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Введение лилий и гладиолусов в культуру in vitro. Стерилизация и исходное качество материала. На первом этапе необходимо получить стерильную, хорошо растущую культуру.

У лилий наиболее эффективной для подавления сапрофитной микрофлоры оказалась комбинация 70% этанола (3 минуты) и 50% раствора Domestos (25 минут). В данном варианте процент инфицированное™ находился в диапазоне от 0 до 23% при высокой жизнеспособности эксплантов.

Для гладиолусов установлено, что та же комбинация стерилизующих агентов оказалась высоко эффективной для обеспечения стерильности in vitro.

Появление внутренней инфекции в процессе культивирования существенно зависело от качества растительного материала (луковицы и клубне-дукбвицы-донора). Наличие некротизированных участков значительно снижало выход стерильной культуры, в связи с чем для работы необходимо использовать растительный материал без повреждений.

Влияние сроков изоляции на начальное развитие эксплантов. Большое влияние на развитие эксплантов на этапе введения в культуру in vitro оказывают календарные сроки выделения. Для лилий показано, что наибольшей регенерационной активностью обладали экспланты, изолированные в фазу активного роста (апрель-май) - в среднем 2 микролуковички на эксплант, а наименьшей - экспланты, изолированные в фазу глубокого покоя (ноябрь) - здесь количество образующихся микролуковичек колебалось от .1,0 (Мадонна) до 1,4 шт./эксплант (Сансет) (табл.1).

У гладиолуса прослеживалась та же тенденция. Показано, что у всех исследованных сортов наибольшее число побегов образовывалось при изоляции в фазу активного роста (апрель-май) - от 3,2 (Лазурный берег) до 5,6 штУэксплант (Андрей Первозванный), а наименьшее - в фазу глубокого покоя - от 2,0 (Черный камень) до 3,5 шт./эксплант (Оскар).

Таблица 1

Число образующихся микролуковичек лилий, в зависимости от _сроков изоляции, шт./эксплант_

Сорт С рок изоляции (фаза развития)

Ноябрь (покой) Март (вынужденный покой) Апрель-май (активный рост) Октябрь (окончание роста)

Сансет 1,410,2" 1,9±0,1 0 2,3±0,100 2,010,1 0

Суинс 1,1±0,1а 1,5±0,2"" 1,9±0,20 1,ЗЮ,За

Вашингтон 1,2±0,3а 1,7±0,3 0 2,010,20 1,510,2ао

Мадонна 1,0±0,1а 1,4±0,1ап 1,710,3 6 1,210,1 а

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

Влияние физиологического возраста и расположения эксплаптов на регенерационную активность при введении в культуру.

Установлено, что у всех сортов молодые (с 1 по 6, начиная от центра) и средневозрастные (с 7 по 12) чешуи обладают большей регенерационной активностью (в среднем 1,6 и 1,0 шт./эксплант) по сравнению со старыми (13-18 чешуи) (0,2 шт./эксплант) (рис. 1).

Образование микролуковичек зависело также от места нахождения сегмента на чешуе. Исследования показали, что максимальное количество микролуковичек (83 %) формировалось на эксплантах из базалыюй части чешуи. На апикальной и медиальной части этот показатель был существенно ниже - 11 % и 6 %, соответственно.

У гладиолуса в качестве эксплантов использовали апикальные и пазушные почки возобновления. Для всех сортов наибольшее побегообразование (от 3,0 до 4,7 шт./эксплант) отмечено при использовании пазушных почек (рис. 2). Максимальная регенерационная активность наблюдалась у сорта Оскар. Использование в качестве экспланта апикальных почек в 2-^

)скар. Использование в качестве экспланта апикальных почек в 2-4 раза снижало коэффициент размножения у всех сортов. При этом побеги, полученные из апикальной почки, имели более высокую скорость роста, а побеги,

эффи

полученные из пазушных почек - больший коэффициент размножения.

12 12 Черный Андрей Лазурный камень Первозванный берег

Рис. 1. Регенерационная способность разновозрастных чешуй лилий: 1 - молодые (1-6), 2 -средневозрастные (7-12), 3 - старые (13-18)

Рис. 2. Влияние происхождения экспланта на побегообразование у разных сортов гладиолуса: 1 - апикальные почки, 2 - пазушные почки

Влияние полярности эксплантов лилий на образование микролуковичек. У всех сортов лилий индукция микролуковичек сильно зависела от способа расположения эксплантов на питательной среде (рис. 3). Максимальное количество луковичек de novo формировалось при вертикальном расположении эксплантов в варианте с обратной полярностью - от 1,4 (Мадонна) до 2,3 шт./эксплант (Суинс). Самая низкая способность эксплантов к органогенезу отмечалась при культивировании эксплантов базальным концом вниз.

Влияние минерального состава питательной среды на регенерацию эксплантов при введении в культуру. Для всех сортов лилий наиболее подходящей оказалась среда, содержащая 1/8 солей от стандартной прописи МС (табл. 2). Увеличение концентрации солей в среде снижало общий выход микролуковичек.

Наиболее активные регене-рационные процессы на всех вариантах сред отмечались для сортов Сансет и Вашингтон, тогда как у сорта Мадонна были самые низкие показатели по образованию микролуковичек. Варьирование концентрации макро- и микросолей в среде оказало влияние не только на количество образующихся микролуковичек, но и на их размер. Самые крупные микролуковички образовывались у сортов Сансет (3,7 мм) и Суинс (5,5 мм) на среде с полным минеральным составом. Напротив, у двух других сортов - Вашингтон и Мадонна - луковички максимального размера (3,5 и 3,0 мм со-охветствешю) формировались на среде с 1/8 солей от стандартной среды МС.

Таблица 2

Влияние концентрации макро- и микросолей в среде на образование _микролуковичек de novo у сортов лилий, шт./эксплант_

Концентрация минеральных солей по прописи Мурасиге-Скуга Сорт

Сансет Суинс Вашингтон Мадонна

Полная 2,7±0,1 а 2,3±0,3с 2,0±0,10 1,0±0,1а

1/2 2,4±0,3с 2,210,3с 2,5±0,2са 1,5±0,2""

1/4 3,1±0,2е 2,6±0,2 а 2,8±0,1 " 1,2+0,3а

1/8 3,4±0Д е 3,0±0,4е 3,8±0Д 1 1,6±0,2"

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

Рис. 3. Зависимость образования микролуковичек у разных сортов лилий от ориентации эксплантов на питательной среде

Максимальное побегообразование у всех сортов гладиолуса наблюдали при культивировании эксплантов на среде с 1/4 содержанием солей (табл. 3). Уменьшение и увеличение концентрации солей в среде приводило к снижению побегообразования у всех сортов.

Таблица 3

Влияние концентрации макро- и микросолей в среде на образование _побегов у сортов гладиолуса, шт./эксплант_

Концентрация минеральных солеи по прописи Мурасиге-Скуга Сорт

Оскар Черный камень Андрей Первозванный Лазурный берег

Полная 2,9±0,3с 3,7±0,3е 3,3+0,1 d 3,0±0,4 м

1/2 2,7±0,1с 3,3±0,3 d 3,3±0,1d 2,3±0,1ь

1/4 3,7±0,3е 4,6±0,8 8 4,1 ±0,3' 3,0±0,3 *

1/8 1,8±0,2а 2,5±0,1ь 2,2±0,4а 1,9±0,2а

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

Концентрация макро- и микросолей оказала влияние и на размеры побегов. У всех сортов гладиолуса побеги максимальной длины - от 3,2 мм (Лазурный берег) до 5,6 мм (Андрей Первозванный) - формировались на среде, содержащей 1/4 часть солей. Увеличение и уменьшение концентрации минеральных солей в среде снижало длину побегов. Во всех изученных вариантах наилучппте показатели были у сортов Оскар и Андрей Первозванный.

Влияние регуляторов роста на органогенез эксплантов. Изучалось совместное действие различных комбинаций ауксинов (НУК, 2,4-Д) и ци-( токининов (6-БАП, кинетин) на регенерационную активность эксплантов.

Максимальное количество луковичек de novo у всех сортов лилий (в среднем 2,6 шт./эксплант) формировалось в варианте с использованием 0,5 мг/л 6-БАП + 1,5 мг/л НУК. В ряде случаев образовавшиеся зачатки луковичек имели неправильную морфологию (утонченные, вытянутые чешуйки). Образование луковичек максимального размера (5,6-8,6 мм)-наблюдали на среде с 0,5 мг/л 6-БАП + 0,5 мг/л 2,4-Д (рис. 4). Использование другого цитокининового препарата -кинетина - вкупе с НУК и 2,4-Д оказалось менее эффективным по обоим показателям (количество микролуковичек и их размер).

У эксплантов гладиолуса совместное применение 6-БАП с НУК или 2,4-Д оказалось неэффективным для

Рис. 4. Микролуковички сорта Суинс, образованные на среде с 0,5 мг/л 6-БАП + 0,5 мг/л 2,4-Д

формирования побегов. Минимальное побегообразование отмечалось только в вариантах с 0,5 мг/л НУК или 2,4-Д. Высокие концентрации НУК и 2,4-Д (1,0 и 1,5 мг/л) ингибировали образование и рост побегов, вызывая активное каллусообразование. В связи с этим побегообразование у гладиолуса индуцировали, добавляя в питательную среду только 6-БАП или кинетин в разных концентрациях (0-4,0 мг/л).

Использование 6-БАП показало его высокую эффективность для регенерации эксплантов у большинства изученных сортов в широком диапазоне концентраций - от 0,5 до 3 мг/л (табл. 4). При этом 6-БАП влиял как на коэффициент размножения (от 3,5 до 12,2 побегов/эксплант), так и на длину побегов. Максимальная длина побегов у всех сортов отмечалась на среде с 1,5 мг/л 6-БАП (от 21,8 мм у сорта Лазурный берег до 37,3 мм у сорта Андрей Первозванный). У всех сортов высокие концентрации 6-БАП (более 2,02,5 мг/л) снижали количество образующихся побегов, а при концентрации 4,0 мг/л отмечалось интенсивное каллусообразование без формирования побегов. Кинетин оказался менее эффективным для побегообразования у эксплантов гладиолуса.

Таблица 4

Зависимость побегообразования различных сортов гладиолуса от

концентрации 6-БАП в питательной среде, шт./эксплант

Концентрация 6-БАП, мг/л Сорт

Оскар Черный камень Андрей Первозванный Лазурный берег

0 1,8±0,2а 1,4±0,1 " 1,1+0,2 а 1,3±0,1а

0,5 3,9±0,3 " 3,5±0,3 й 5,3+0,4d 3,7±0,3"

1,0 7,4±0,5 ' 5,0+0,2d 10,4±0,5 11 4,7±0,3 с

1,5 8,7+0,3 g 9,6±0,5 h 12,2±0,3 1 7,8±0,2 '

2,0 6,6+0,2 е 5,2+0,3 " 9,7±0,4h 4,9+0,5 с

2,5 4,3±0,1 с 3,8±0,2b 3,7+0,2b 3,5±0,2 ь

3,0 2,3±0,3 а 1,4±0,2 а 1,3±0,1а 1,1±0,1 d

3,5 2,1+0,2а 1,2±0,1а 1,1±0,1а 1,1 ±0,2"

4,0 0 0 0 0

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

Зависимость развития эксплантов от типа источника углерода и его концентрации. При изучении регенерационных процессов на этапе введения в культуру in vitro в качестве источника углеродного питания использовали сахарозу, глюкозу и фруктозу в концентрациях от 10 до 70 г/л.

Наибольшее число адвентивных микролуковичек у всех сортов лилий формировалось при культивировании эксплантов на средах, содержащих сахарозу или глюкозу (рис. 5). Количество образующихся микролуковичек повышалось с возрастанием концентрации, с максимальным количеством при дозе от 40 до 60 г/л сахарозы или глюкозы. Наиболее активно регенерационные процессы шли у эксплантов сортов Сансет и Вашингтон. Хуже всего органогенез происходил у эксплантов сорта Мадонна.

У эксплантов всех сортов гладиолуса наибольшее число побегов формировалось на среде, содержащей сахарозу. При этом оптимальной для побегообразования оказалась концентрация 30 г/л (рис. 6). Применение низких и более высоких концентраций было менее эффективным.

4т

3,5 '

Ш Сахароза !с ч 3 '

2,5 '

□ Глюкоза

1 2'

■ Фруктоза п 1,5

с 1

0,5 '

0-1-

10 20 30 40 50 60 70 Концентрация, г/л

В Сахароза

О Глюкоза

I Фрз ктоза

20 30 40 50 60 Концентрация, г/л

Рис. 5. Влияние вида и концентрации углеводов в среде на образование микролуковичек у лилий (усредненные данные)

Рис. 6. Влияние вида и концентрации углеводов в среде на образование побегов у гладиолуса (усредненные данные)

Микроразмножение лилий и гладиолусов. Влияние минерального состава среды на регенерацию растений на этапе собственно микроразмножения. При культивировании эксплантов лилий на средах с разной концентрацией солей наибольшее количество микролуковичек формировалось в варианте с 1/2 МС - от 2,6 до 3,5 шт./эксплант (табл. 5). Наиболее активные регенерационные процессы на всех вариантах сред отмечены у сорта Вашигптон, тогда как у сорта Мадонна были самые низкие показатели по образованию микролуковичек.

Таблица 5

Зависимость образования микролуковичек de novo у сортов лилий на этапе микроразмножения от концентрации макро- и микро солей

Концентрация минеральных солей по прописи Мурасиге-Скуга Сорт

Сансет Суинс Вашингтон Мадонна

Полная 2,7±0,1 b 2,2±0,1 d 2,5+0,1ab 2,0±0,1 а

1/2 3,4+0,3 с 2,9±0,3 b 3,5±0,2 ^ 2,6±0,2 b

1/4 2,3±0,1 J 2,8+0,2b 2,7±0,1 " 2,4±0,2а

1/8 2,2±0,2d 2,5±0,2ab 2,3±0,1а 2,3±0,4а

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

У эксплантов гладиолуса наблюдалась сходная картина. Максимальное побегообразование происходило на среде с половинным содержанием макро- и микросолей. Число побегов варьировало от 4,3 (сорт Лазурный берег) до 8,3 шт./эксплант (сорт Андрей Первозванный).

Влияние концентрации сахарозы на образование микролуковичек и побегов. На этапе собственно микроразмножения в качестве источника углеродного питания в среду вносили сахарозу в концентрации 10-70 г/л. Наиболее эффективной для образования микролуковичек у всех сортов лилий оказалась концентрация 60 г/л. Регенерационные процессы при всех изученных концентрациях сахарозы лучше проходили у эксплантов сортов Вашингтон и Сансет (рис. 7).

Несколько иная картина наблюдалась у эксплантов гладиолуса. Наиболее активное побегообразование происходило при концентрации сахарозы 20-40 г/л (рис. 8). Максимальное число побегов у всех исследуемых сортов формировалось на среде с 30 г/л сахарозы (в среднем 4,9 шт./эксплант).

1234567 1234567 Вашингтон Мадонна

Рис. 7. Влияние концентрации сахарозы в среде на формирование микролуковичек у эксплантов разных сортов лилий на этапе микроразмножения: 1 - 10 г/л, 2 - 20 г/л, 3 - 30 г/л, 4 -40 г/л, 5-50 г/л, 6-60 г/л, 7-70 г/л

1234567 1234367 1234567 1234567 Оскар Черней Андрей Лазуршй

камень Первозвамшй берег

Рис. 8. Влияние концентрации сахарозы в среде на побегообразование у эксплантов разных сортов гладиолуса на этапе микроразмножения: 1 -10 г/л, 2-20 г/л, 3-30 г/л, 4-40 г/л, 5-50 г/л, 6-60 г/л, 7-70 г/л

Длительное культивирование образовавшихся побегов без пассирования на свежую среду приводило к образованию микроклубнелуковичек. Наибольшее их количество формировалось на среде с 30 г/л сахарозы, более всего - у сортов Черный камень и Андрей Первозванный (2,5 и 2,9 шт./эксплант, соответственно).

Влияние регуляторов роста на органогенез при микроразмножении. Значительная роль в протекании регенерационных процессов на этапе размножения принадлежит регуляторам роста. Гормональную регуляцию осуществляли внесением в питательную среду 6-БАП, НУК и 2,4-Д (все в концентрации 0,5-1,5 мг/л).

У лилий наиболее интенсивно регенерационные процессы шли в варианте с использованием 0,5 мг/л 6-БАП +1,5 мг/л НУК, при этом формировалось максимальное количество луковичек de novo у всех сортов (в среднем 3,4 шт./эксплант). Снижение концентрации НУК с 1,5 до 0,5 мг/л при всех исследованных концентрациях 6-БАП уменьшало количество формирующихся микролуковичек у большинства сортов. Совместное применение 6-БАП и 2,4-Д оказалось менее эффективным по выходу адвентивных микролуковичек. Однако использование комбинации 0,5 мг/л 6-БАП + 0,5 мг/л 2,4-Д способствовало формированию микролуковичек максимального размера (от 7,3 до 10,0 мм).

При многократном пассировании побегов гладиолуса на свежие среды

наиболее активное образование побегов у всех сортов отмечалось в варианте 6-БАП + НУК (оба в концентрации 0,5 мг/л) - от 6,4 (у сорта Черный камень) до 14,2 побегов/эксплант (у сорта Андрей Первозванный). Побеги максимальной длины формировались на среде с 1,0 мг/л 6-БАП + 0,5 мг/л НУК - от 68,2 мм (сорт Черный камень) до 95,2 мм (сорт Андрей Первозванный).

Влияние физических условий культивирования на развитие эксплан-тов при микроразмножении. На регенерационную активность эксплантов большое влияние оказывают физические условия культивирования, особенно фотопериод и температура.

Наибольшее число микролуковичек у всех сортов лилий формировалось при круглосуточном освещении - 1,5-2,3 шт./эксгогант (табл. 6), максимально е количество на эксплантах сортов Суинс и Вашингтон (2,3 и 2,2 шт., соответственно). Уменьшение продолжительности освещения до 16 часов и темнота снижали регенерационную активность всех изучаемых сортов.

Таблица 6

Влияние продолжительности фотопериода на образование микролуковичек у разных сортов лилий, шт./эксплант

Сорт Длина светового дня, ч

24 16 0

Суинс 2,3±0,1 ь 1,9±0,1ь 1,1+0,2а

Сансет 1,7±0,1 ь 1,4±0,2а 1,1±0,1а

Вашингтон 2,2±0,2 ь 1,6±0,3 аЬ 1,2±0,3 а

Мадонна 1,5±0,3 а 1,2±0Д а 1,0±0,1а

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

У гладиолуса максимальной регенерационной активностью характеризовались экспланты, также культивируемые при 24-часовом освещении (табл. 7). Количество побегов у всех сортов колебалось от 3,4 до 5,7 штук.

Таблица 7

Влияние продолжительности фотопериода на образование побегов у

Сорт Л дина светового дня, ч

24 16 0

Оскар 4,7±0,3с 3,4±0,5с 2,1±0,1ь

Черный камень 3,4+0,2с 3,1±0,3" 0

Андрей Первозванный 5,7±0,5' 4,8±0,3с 1,3±0Д а

Лазурный берег 3,8±0,111 3,5±0,1 " 0

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

При изучении роли температурного фактора в регенерационной активности использовали два режима культивирования - 14 °С и 23 °С. Выявлено, что при 23 °С у лилий происходило активное образование микролуковичек, максимально - у сорта Вашингтон (2,5 шт./эксплант). Культивирование эксплантов при 14 °С уменьшало индукцию микролуковичек у всех сортов лилий.

У гладиолуса прослеживалась аналогичная тенденция: наиболее интенсивное побегообразование шло при температуре 23 °С, а снижение температуры до 14 °С подавляло формирование побегов у всех сортов.

Регенерация микролуковичек и побегов из каллуса. Наряду с прямой регенерацией растении из экспланта, на этапе клонального микроразмножения исследовали регенерацию растений из пересадочной каллусной ткани. Это связано с тем, что из каллуса можно получить сомаклоны с измененными морфологическими признаками, представляющими большой интерес для селекционеров [Рахимбаев и др., 1985; Мазур, Калашникова, 2000].

Каллусную ткань лилий, полученную на I этапе культивирования, переносили на среду с добавлением (в разных концентрациях) 6-БАТ1 и 2,4-Д. Установлено, чго наиболее активно регенерационные процессы шли в варианте с концентрацией обоих препаратов 0,5 мг/л. При этом происходило формирование максимального количества растений-регецерантов - от 7,8 шт./см поверхности каллуса (сорт Вашингтон) до 9,0 шт./см' (сорт Суинс). Увеличение концентрации 6-БАГГ снижало выход растений-регенерантов, а при концентрации 2,0 мг/л побегообразование полностью подавлялось, происходил дальнейший рост каллусной ткани.

Для индукции побегообразования в каллусной ткани гладиолуса оптимальной оказалась среда с 0,5 мг/л 6-БАП + 0,5-1,5 мг/л 2,4-Д, на которой формировалось максимальное количество побегов (от 10,9 до 17,5 шт./ см каллуса). Иногда в каллусной ткани происходил ризогенез, в результате формировались растения-регенеранты.

Укоренение лилий и гладиолусов. Для успешного перевода пробирочных растений в условия ex vitro большое значение имеет наличие хорошо развитой корневой системы [Высоцкий, 1983; Бутенко, 1999].

Зависимость корнеобразования от минерального состава пита-течъной среды. Выявлено, что концентрация минеральных солей в среде существенно влияла на ризогенез у лилий (табл. 8). Наибольший процеггт укоренения микролуковичек наблюдался в варианте с половинной концентрацией солей МС- от 75 % (сорт Мадонна) до 92 % (сорт Вашингтон). На среде с полной концен фацией солей фиксировался наименьший процент укоренившихся микролуковичек (в среднем 40 % по всем сортам).

Таблица 8

Влияние концентрации минеральных солей в питательной среде на укорененяемость микролуковичек разных сортов лилий, %

Сорт Концентрация мин прописи Myi сральных солей по расига-Скуга

Полная 1/2 1/4 1/8

Суинс 35,2±2,8 J 78,2±1,3 ' 54,5±3,8L 44,2+1,8 u

Сансет 42,5±3,7 11 92,2±2,1 г 77,5±1,3' 65,1 ±4,9J

Вашингтон 34,1±1,5 а 75,4+3,3L 63,2+3,0d 52,1±3,7 u

Мадонна 47,4±3,6" 82,3+3,4к 65,3±1,111 52,5±3,7 11

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

У побегов гладиолуса наиболее интенсивный процесс ризогенеза также происходил на среде с половинной концентрацией солей (табл. 9). Минимальный процент укоренившихся побегов отмечен у сорта Лазурный берег, максимальный - у сорта Андрей Первозванный.

Таблица 9

Влияние концентрации минеральных солей в питательной среде на _укорененяемость побегов разных сортов гладиолуса, %_

Сорт Концентрация мин прописи Му1 еральных солеи по эасига-Скуга

Полная 1/2 1/4 1/8

Оскар 38,1+1,7" 75,2+1,2е 64,1+2,8" 44,8+1,5ь

Черный камень 35,2+2,6а 72,5+2,0е 55,2+2,7с 48,2±2,4ь

Андрей Первозванный 45,8±3,0ь 85,3+3,5 г 71,4±2,0С 63,1 ±2,711

Лазурный берег 41,3±2,8а 70,4+3,0 а 62,2±3,0с 49,5±3,5ь

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

Влияние регуляторов роста на ризогенез. При культивировании микролуковичек лилий на среде, содержащей только НУК, самая высокая ризогсн-ная активность выявлена при концентрации 0,5 мг/л (рис. 9). При этом развивалась сильная и морфологически характерная корневая система. Количество корней колебалось от 4 до 6, а их длина составляла 2-5 см. Увеличение концентрации НУК в среде до 1,0 и 1,5 мг/л приводило к снижению ризогенеза у всех сортов и образованию толстых укороченных корней.

Концентрация НУК,ыг/л Концентрация НУК мг/л

Рис. 9. Влияние концентрации НУК в Рис. 10. Влияние концентрации среде на ризогенез у разных сортов ли- НУК в среде на ризогенез у разных •чий сортов гладиолуса

При всех комбинациях тидиазурона с НУК или с 2,4-Д отмечалось усиленное формирование корневых волосков, которые обильно покрывали всю поверхность корней: особенно интенсивно этот процесс происходил на среде, содержащей 10"1 моль/л тидиазурона + 0,5 мг/л НУК. В этом случае формировалась хорошо развитая корневая система с правильной морфологией. Процент укоренения в среднем составил 96,8 %.

Индукция корнеобразования у побегов гладиолуса наиболее интенсивно происходила в вариантах с НУК в концентрациях 0,5 и 1,0 мг/л (рис. 10). Средний процент укоренения в этих вариантах составил 94 % и 96 %, соответственно. Всегда происходило образование хорошо развитой корневой системы.

Использование 2,4-Д для индукции ризогенеза снижало процент укоре-

нения побегов гладиолуса по сравнению с НУК. Применение тидиазурона не индуцировало образование корней у побегов гладиолуса.

Влияние экологических факторов на ризогенез. Изучение процесса корнеобразования у эксплантов лилий при варьировании фотопериода показало, что максимальное укоренение микролуковичек отмечалось в темноте (табл. 10). Увеличение продолжительности светового дня несколько подавляло этот процесс. Среди сортов наиболее активное корнеобразование при всех вариантах культивирования происходило у сорта Вашингтон.

Таблица 10

Влияние продолжительности фотопериода на укореняемость микролу-_ковичек разных сортов лилий, %_

Сорт Длина светового дня, ч

24 16 0

Суинс 53,1±2,8J 84,4±3,1с 100±0,0d

Сансет 56,5±1,8а 80,3±2,8 с 95,3±3,8 d

Вашингтон 73,3±2,3" 94,1 ±3,3 d 100±0,0d

Мадонна 65,2±4,1 b 81,1±2,5С 99,2±2,4 d

Примечание: разными буквами обозначены достоверно различающиеся при Р = 0,05 варианты.

У побегов гладиолуса наиболее интенсивный ризогенез также происходил при культивировании в темноте

Помимо фотопериода, на этапе укоренения изучали влияние температурного фактора на регенерациониую активность эксплантов лилий и гладиолусов. Наиболее активно корнеобразование у всех сортов лилий шло при 14°С. Процент укоренения варьировал от 75% до 100%. Корневая система была хорошо сформирована. Повышение температуры до 23°С снижа- 1< ло процент укоренения (60-85 %).

У побегов гладиолусов, как и у лилий наиболее активно корнеобразование шло при 14°С (от 80 до 100%). При этом происходило формирование f хорошо развитой корневой системы. Культивирование при температуре 23 С оказалось менее эффективным (70-80%).

Перевод растений-регеиерантов в условия ex vitro. Перенос пробирочных растений в нестерильные условия представляет собой важнейший этап, в случае неудачи способный полностью перечеркнуть всю предшествующую работу.

Зависимость приживаемости пробирочных растений ex vitro от предпосадочной обработки регулятором роста. Для растений-регенераитов лилий предварительное замачивание в растворах с НУК было высоко эффективным. Наибольший процент прижившихся растений отмечен в вариантах с концентрациями НУК 1,0 и 1,5 мг/л - от 97 % (сорт Сансет) до 100 % (остальные сорта).

При перенесении растений-регенерантов гладиолусов в условия ex vitro наблюдалась сходная картина: обработка пробирочных растений раствором НУК увеличивала процент выживаемости растений в нестерильных условиях. В варианте с концентрацией НУК 0,5 мг/л процент прижившихся рас-

тений в среднем составил 87 %, тогда как в контроле - 74 %. Увеличение концентрации НУК до 1,0 и 1,5 мг/л повышало этот показатель до 99-100 %, соответственно.

Влияние экологических факторов на рост и развитие растений-регенерантов в условиях ex vitro. В процессе адаптации пробирочных растений к условиям ex vitro важную роль играют экологические факторы, особенно фотопериод и температура [Stimart, Asher, 1981; Лапинская, 1998].

Максимальную высоту имели растения-регенеранты лилий в варианте с температурой выращивания 23°С и круглосуточным освещением - от 68,2 см (сорт Суинс) до 75,3 см (сорт Сансет). Наименьшую высоту имели растения, выращиваемые при 14°С.

Рост растений-регенерантов гладиолуса в условиях ex vitro был максимальным при температуре 23°С и круглосуточном освещении. Уменьшение температуры до 14 С или 16-часовой световой день снижали этот показатель.

Вегетация растений происходила 6 месяцев, по истечении которых производили сбор урожая. Оценивали влияние условий выращивания (температуры и фотопериода) на количество и размер сформировавшихся луковиц,клубнелуковиц и клубнепочек.

Формирование луковиц максимального размера у всех сортов лилий происходило в варианте с выращиванием растений при круглосуточном освещении и температуре 23°С. Диаметр луковиц варьировал от 2,1 см (сорт Мадонна) до 2,5 см (сорт Суинс). Самым неэффективным оказалось выращивание растений при температуре 14°С вкупе с 16-часовым световым днем.

У растений-регенерантов гладиолуса исследовали влияние температуры и фотопериода на количество формирующихся клубнелуковиц и клубнепочек. В варианте с температурой 23°С и круглосуточным освещением у всех сортов образовалось максимальное количество как клубнелуковиц (1,9 шт./растение), так и клубнепочек (4,0 шт./растение). Условия выращивания оказали влияние не только на количество, но и на размер образующихся клубнелуковиц и клубнепочек; максимальным он был в варианте с круглосуточным освещением и температурой 23°С. Размер клубнелуковиц варьировал от 2,8 см (сорт Лазурный берег) до 3,2 см (сорт Андрей Первозванный), а клубнепочек от 0,8 см (сорт Оскар) до 1,0 см (сорт Андрей Первозванный). Самым неэффективным оказался вариант с температурой 14°С, где диаметр клубнелуковиц варьировал от 1,2 см (сорт Черный камень) до 2,3 см (сорт Андрей Первозванный), а клубнепочек - от 0,2 см (сорт Черный камень) до 0,6 см (сорт Андрей Первозванный).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поэтапное проведение клонального микроразмножения показало, что ЛА-гибриды лилий и сорта гладиолусов являются удобной биологической моделью для выяснения механизмов регуляции морфогенеза в культуре in vitro. Формирование органов in vitro у данных групп растений обнаруживает исключительно большое разнообразие при варьировании эндогенных и экзогенных факторов.

С одной стороны, морфогенетический потенциал культивируемых клеток зависит от генотипа, физиологических особенностей, источника (проис-

хождения), полярности, размеров и физиологического возраста экспланта.

С другой стороны, на процесс клонального микроразмножения in vitro большое влияние оказывают внешние факторы - правильный подбор состава среды и физические условия культивирования. Минеральный состав, источник углеродного питания, регуляторы роста и экологические факторы играют важную роль в индукции деления клеток экспланта и морфогенезе в целом. При этом специальная среда, разработанная эмпирически для индукции дифференциации и органогенеза у одного вида и сорта, не обязательно будет индуктивной в культуре ткани другого. В связи с этим для микроразмножения каждого вида и сорта необходимо разработать специфические методические приемы культивирования in vitro и выявить оптимальное соотношение эндогенных и экзогенных факторов.

ВЫВОДЫ

1. Размножение испытанных сортов JIA-гибридов лилий и сортов гла- ^ диолусов методами in vitro способствует более полной реализации морфо-генетических потенций этих декоративных растений.

2. Наиболее низкая инфицированность и высокая жизнеспособность эксплантов выявлена при стерилизации чешуй лилий и клубнепочек гла- " диолуса в 70% этиловом спирте (3 минуты), с последующей обработкой эксплантов 50% раствором Domestos (25 минут).

3. На этапе введения в культуру большей регенерационной активностью у лилий обладают экспланты, вычлененные из базальной части молодых и средневозрастных чешуй с вертикальным расположением на среде и обратной полярностью. У гладиолуса на этом этапе для увеличения коэффициента размножения необходимо использовать пазушные почки. Наиболее подходящими сроками изоляции эксплантов является фаза активного роста (апрель-май), обеспечивающая максимальную регенерацию микролуковичек и побегов. м

4. Органогенез лилий и гладиолусов на I этапе КМР зависел от концентрации макро- и микросолей в среде МС. Максимальное количество адвентивных микролуковичек лилий формировалось на среде, содержащей 1/8 солей от стандартной среды МС. Для формирования наибольшего числа побегов с максимальной длиной у эксплантов гладиолусов необходима среда с 1/4 солей по прописи МС. В качестве источника углеродного питания оптимальна сахароза, для лилий - в концентрации от 40 до 60 г/л, для гладиолусов - 30 г/л.

Для формирования максимального числа микролуковичек у исследуемых сортов лилий в качестве регуляторов роста в среду необходимо вносить 0,5 мг/л 6-БАП + 1,5 мг/л НУК, для формирования луковичек максимального размера 0,5 мг/л 6-БАП + 0,5 мг/л 2,4-Д. У гладиолуса для получения максимального числа побегов и наибольшей их длины в среду необходимо вносить 1,5 мг/л 6-БАП.

5. На П этапе КМР для увеличения коэффициента размножения, как у лилий, так и у гладиолусов, необходимо использовать питательную среду с половинным содержанием солей по прописи МС. Оптимальной концентрацией сахарозы на данном этапе для лилий является 60 г/л, для гладиолуса 30 г/л. Наибольшее количество микролуковичек/эксплант лилий получено на среде, содержащей 0,5 мг/л 6-БАП + 1,5 мг/л НУК, максимальное коли-

чество побегов у сортов гладиолуса - на среде, содержащей 6-БАП + НУК (по 0,5 мг/л). Коэффициент размножения эксплантов лилий и гладиолусов зависел от физических условий культивирования и достигал максимальных значений при круглосуточном освещении и температуре 23 "С.

6. Укореняемость микролуковичек и побегов на III этапе КМР зависела от состава питательной среды и экологических факторов. Наиболее интенсивное развитие корневой системы у лилий и гладиолусов происходило на среде с 1/2 концентрации солей по прописи MC и в присутствии 10" 1 моль/л тидиазурона + 0,5 мг/л НУК (для лилий) и 1,0 мг/л НУК (для гладиолуса). Корнеобразование у лилий и гладиолусов наиболее активно шло в темноте при температуре 14°С.

7. Эффективность перевода растений-регенерантов лилий и гладиолусов в условия ex vitro повышалась в результате замачивания их перед посадкой в растворе НУК (1,0-1,5 мг/л) и выращивания при постоянном освещении и температуре 23°С. Это приводило к формированию максимального количества крупных луковиц лилий, клубнелуковиц и клубнепочек гладиолусов.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Создание оздоровленного посадочного материала декоративных растений биотехнологическими методами // Роль ботанического сада в интродукции, сохранении редких видов растений и экологическом воспитании: Материалы регион, науч. конф., посвящ. 40-летию ботанического сада МГУ им. Н.П.Огарева. Саранск, 18-20 сент. 2000 г. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2001. - С. 62 - 65.

2. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Зависимость клонального размножения гладиолуса in vitro от состава питательной среды // Регуляция роста, развития и продуктивности растений: Матер. II Междунар. науч. конф. Минск, 5-8 декабря 2001 г. - Минск, 2001. - С. 141 - 142.

3. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Эколого-морфологические особенности клонального микроразмножения лилий // Экологическая ботаника: наука, образование, прикладные аспекты: Междунар. науч. конф.: Тез. докл. -Сыктывкар: Изд-во Сыкт. ун-та, 2002. - С. 164-165.

4. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Масс-клональное размножение ценных гибридов лилий II Bícthík Харювського нацюнального аграрного ушверси-тету. Сетя «Бюлопя». 2002. № 9(1). - С. 77 - 81.

5. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Эффективность клонального размножения гладиолуса in vitro при варьировании компонентов среды // V съезд физиологов растений России: Международная конференция «Физиология растений - основа фитобиотехнологии», Пенза, 15-21 сентября 2003 г.: Тез. докл. - Пенза, 2003. - С. 517.

6. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Влияние регуляторов роста на эффективность клональногоразмножениягибридов лилий при контрастныхусло-виях освещения // VITT International Conference. The Biology of Plant Cell In Vitro and Biotehnology - ABSTRACTS. - Saratov, September 9-13, 2003. -Саратов: Издательство Саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. - С. 204 - 205.

7. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Влияние экзогенных регуляторов роста на регенерационные процессы у растений гладиолуса in vitro II Использова-

ние достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии. Материалы междунар. научно-практической конф. Брянск, 3-6 декабря 2002 г. - Брянск, 2003. - С. 37 -

38.

8. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Действие регуляторов роста на ризоге-нез лилий in vitro II Физиология растений и экология на рубеже веков: Материалы Всероссийской научно-практической конференции / Яросл. гос. ун-т. - Ярославль, 2003. - С. 212 - 213.

9 Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Масс-клональное размножение гладиолусов // Регуляция роста, развития и продуктивности растений: Матер. III Междунар. науч. конф., Минск, 8-10 октября 2003 г. - Минск: ИООО «Право и экономика», 2003. - С. 87 - 88.

10. Мокшин Е.В. Влияние гормонального состава среды на регенера-ционную способность декоративных растений в культуре in vitro II Материалы VIII научной конференции молодых ученых Мордовского государственного университета имени Н. П. Огарева: В 3 ч. Ч. 2: Естественные науки / Сост. С. С. Тремаскина; Отв. за вып. В. Д. Черкасов. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2003. - С. 119 -120.

11. Мокшин Е.В. Клональное размножение in vitro луковичных и клубнелуковичных геофитов семейств Liliaceae и Iridaceae // Актуальные вопросы ботаники и физиологии растений: Материалы Междунар. науч. конф., посвященной 100-летию проф. В.Н. Ржавитина (Первые Ржавитин-ские чтения). - Саранск, 22-25 апр. 2004 г. / Редкол.: A.C. Лукаткин (отв. ред.) и др. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004. - С. 163 - 164.

12. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Каллусогенез и клональное микроразмножение гладиолуса гибридного (Gladiolus hybridus hört.) II Актуальные вопросы ботаники и физиологии растений: Материалы Междунар. науч. конф., посвященной 100-летию проф. В.Н. Ржавитина (Первые Ржави-тинские чтения). - Саранск, 22-25 апр. 2004 г. / Редкол.: A.C. Лукаткин (отв.

ред.) и др. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004. - С. 165 -166. í

13. Мокшин Е.В. Использование технологии in vitro в промышленном цветоводстве // Материалы IX научной конференции молодых ученых, са-пирантов и студентов Мордовского государственного университета имени Н. П. Огарева: В 2 ч. Ч. 2: Естественные и технические науки / Сост.: ' С. С. Тремаскина, О. И. Скотников; Отв. за вып. В. Д. Черкасов. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004. - С. 27 - 29.

14. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Влияние регуляторов роста на морфогенез в каллусной ткани лилий // Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии: Материалы научной конференции: Казань, 17-18 июня 2004 г. / Под ред. Р.Г. Василова. - М.: МАКСПресс, 2004. - С. 61 - 62.

15. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Применение технологий in vitro для решения проблем озеленения городов // Проблемы озеленения городов: альманах / Под общ. ред. Х.Т. Якубова. - Вып. 10. - М.: Прима-М, 2004. -С. 101 -103.

16. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Масс-клональное размножение гладиолуса in vitro II Биотехнология, 2005. - № 1. - С. 19 - 26.

17. Мокшин Е.В., Лукаткин A.C. Влияние регуляторов роста на морфогенез Лонгифлорум-Азиатик гибридов лилий в культуре in vitro II Агрохимия, 2005,- №3.-С. 55-59.

Подписано в печать 23.09.05. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1837.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

t i

i %

I I

»18605

РНБ Русский фонд

2006-4 19806

« w

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мокшин, Евгений Владимирович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Клональное микроразмножение и оздоровление растений.

1.2. Биологические особенности луковичных и клубнелуковичных геофитов.

1.3. Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения луковичных и клубнелуковичных растений в культуре in vitro.

1.3.1. Физиологические особенности растения-донора.

1.3.2. Действие физических факторов.

1.3.3. Состав питательной среды.

Глава 2. Биологическая характеристика объектов исследования.

2.1. Ботаническая характеристика лилии.

2.2. Экологическая характеристика лилий.

2.3. Ботаническая характеристика гладиолуса.

2.4. Экологическая характеристика гладиолуса.

2.5. Использованные сорта, их характеристика, источник получения.

Глава 3. Методы исследования.

3.1. Постановка эксперимента.

3.2. Методы исследования.

Глава 4. Введение лилий и гладиолусов в культуру in vitro.

4.1. Стерилизация и исходное качество материала.

4.2. Влияние сроков изоляции на развитие эксплантов на начальных этапах культивирования in vitro.

4.3. Влияние физиологического возраста и расположения эксплантов на регенерационную активность при введении в культуру. 4.4. Влияние полярности эксплантов лилий на образование микролуковичек.

4.5. Влияние минерального состава питательной среды на регенерацию эксплантов при введении в культуру.

4.6. Влияние регуляторов роста на органогенез эксплантов.

4.7. Зависимость развития эксплантов от типа источника углерода и его концентраций.

Глава 5. Микроразмножение лилий и гладиолусов.

5.1. Влияние минерального состава среды на регенерацию растений на этапе микроразмножения.

5.2. Влияние концентрации сахарозы на образование микролуковичек и побегов.

5.3. Влияние регуляторов роста на органогенез при микроразмножении. 95 ^ 5.4. Влияние физических условий культивирования на развитие эксплантов при микроразмножении.

5.5. Регенерация микролуковичек и побегов из каллусной ткани.

Глава 6. Укоренение регенерантов лилий и гладиолусов.

6.1. Зависимость корнеобразования от минерального состава питательной среды.

6.2. Влияние регуляторов роста на ризогенез.

6.3. Влияние экологических факторов на ризогенез.

Глава 7. Перевод растений-регенерантов в условия ex vitro.

7.1. Зависимость приживаемости пробирочных растений ex vitro от предпосадочной обработки регулятором роста.

7.2. Влияние экологических факторов на рост и развитие растений-регенерантов ex vitro.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.)"

В настоящее время возросли требования к исходному материалу цветочно-декоративных растений, который в соответствии со стандартами должен быть свободен от различных вредителей и болезней [Тамберг, 2000; Петренко, 2001]. Лидирующую роль в получение высококачественного посадочного материала приобретают биотехнологические методы.

Среди декоративных многолетников луковичные и клубнелуковичные цветочно-декоративные растения с каждым годом приобретают все большее значение в промышленном цветоводстве и озеленении. Особой популярностью у цветоводов по всему миру пользуются лилии и гладиолусы. Ускоренное размножение их в течение последних 15-20 лет вызывает огромный интерес, как исследователей-ботаников, биотехнологов, селекционеров, так и производственников [Лапинская, 1998; Румынии, Агаджанян, Слюсаренко, 1999; Мазур, Калашникова, 2000]. Традиционный вегетативный метод не позволяет размножить быстро и в достаточном количестве новые сорта и гибриды. Многие гибриды имеют низкий коэффициент размножения, что препятствует их аттестации на сорт. Обычно для выведения нового сорта селекционеру требуется 10-12 лет [Висящева, Соколова, 1991]. Все это сдерживает процесс сортосмены и обедняет ассортимент цветочной продукции.

При дефиците исходного материала значительно ускорить размножение позволяет метод клонального микроразмножения (КМР), который включает следующие этапы: I. Введение в культуру in vitro, II. Собственно микроразмножение, III. Укоренение, IV. Перевод растений-регенерантов в культуру ex vitro [Высоцкий, 1983; Бутенко, 1999]. Данный метод был использован для некоторых декоративных растений: тюльпана [Bancilhon, 1974; Hussey, 1975; Riviere, Muller, 1979], нарцисса [Hussey, 1982; Выхристова, 1983], ириса [Лунева, 1977; Болтенков и др., 2000], фрезии [Bajaj, Pierik, 1974; Катаева, 1981, 1983], гиппеаструма [Рахимбаев и др., 1983], шафрана [Рахимбаев и др., 1985], лилии [Румынии, Слюсаренко, 1989; Chang et al., 2000; Мазур, Калашникова, 2000], гладиолуса [Ziv et al., 1970; Bajaj et al., 1983; Лапинская, 1998], однако систематические данные по клональному размножению лилий и гладиолусов, в том числе растений разных сортов, нополные. Недостаточно изучено влияние стерилизующих растворов, минерального и органического состава питательной среды, регуляторов роста и условий культивирования на процессы регенерации растений на каждом этапе микроразмножения. Кроме того, практически отсутствуют сравнительные данные по эколого-морфологическим особенностям клонально-го микроразмножения лилий и гладиолусов разных сортов.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение морфо-физиологических особенностей клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.). Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: разработать эффективные методы введения различных сортов лилий и гладиолусов в стерильную культуру in vitro;

- выяснить роль биологических особенностей эксплантов в регенераци-онную активность на этапе введения в культуру in vitro; изучить влияние минерального и органического компонентов питательной среды на регенерационную активность эксплантов лилий и гладиолусов на I этапе КМР; определить роль отдельных факторов культивирования (состав питательных сред, физические условия) на этапе микроразмножения (II этап КМР);

- оптимизировать состав питательных сред и условия культивирования, обеспечивающие высокую укореняемость и регенерацию пробирочных растений (III этап КМР);

- проанализировать параметры адаптации и выращивания растений-регенерантов лилий и гладиолусов в условиях ex vitro (IV этап КМР). м

Основные положения, выносимые на защиту.

- Сорта JTA-гибридов лилий (Longiflorum-Asiatic hybrids) и гладиолусов (Gladiolus hybridus hort.) существенно различаются по своим биологическим свойствам.

- Технология клонального микроразмножения разработана для каждого сорта и отличается специфическими элементами.

- Полученные экспериментальные результаты имеют практическое значение. Научная новизна результатов исследований. Для четырех сортов

JTA-гибридов лилий и гладиолусов разработаны эффективные приемы получения асептической культуры первичных эксплантов и выявлены наиболее благоприятные сроки изоляции эксплантов. Впервые для данных видов и сортов изучено влияние физиологического возраста, происхождения и полярности эксплантов на регенерационную активность при введении в культуру in vitro. Выяснено влияние минеральных и органических компонентов питательной среды, экзогенных регуляторов роста и экологических факторов культивирования на регенерационную активность эксплантов гладиолусов и JIA-гибридов лилий и на различных этапах КМР.

Практическая ценность. Полученные результаты вносят вклад в развитие современных представлений об особенностях клонального микроразмножения in vitro луковичных и клубнелуковичных декоративных растений. Применение разработанных элементов технологии клонального микроразмножения разных сортов ЛА-гибридов лилий и гладиолусов позволит успешно решать проблему ускоренного размножения и оздоровления ценных сортов лилий и гладиолусов, существенно сократит сроки получения посадочного материала. Подана заявка на изобретение (патент РФ) № 2005104318/12 с приоритетом от 17.02.2005.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены и доложены на II и III Международных научных конференциях «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2001, 2003), на Международной научной конференции «Экологическая ботаника: наука, образование, прикладные аспекты» (Сыктывкар, 2002), на Международной научно-практической конференции «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии» (Брянск, 2002), на V съезде Общества физиологов растений России и Международной конференции «Физиология растений - основа фитобиотехнологии» (Пенза, 2003), VIII International Conference «The Biology of Plant Cell In Vitro and Biotechnology» (Saratov, 2003), на Международной научной конференции, посвященной 100-летию профессора В.Н. Ржавитина «Актуальные вопросы ботаники и физиологии растений» (Саранск, 2004), на Всероссийской научно-практической конференции «Физиология растений и экология на рубеже веков» (Ярославль, 2003), на научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004), на Общегородской конференции «Проблемы озеленения городов» (Москва, 2004), на региональной научной конференции, посвященной 40-летию ботанического сада МГУ им. Н.П.Огарева «Роль ботанического сада в интродукции, сохранении редких видов растений и экологическом воспитании» (Саранск, 2000), на VII и VIII Научных конференциях молодых ученых, аспирантов и студентов (Саранск, 2002, 2003), на XXXI Огаревских чтениях (Саранск, 2002).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в т. ч. 3 статьи в реферируемых журналах.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов, библиографического списка, включающего 182 наименования, в том числе 70 на иностранных языках. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста, содержит 29 рисунков и 35 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Мокшин, Евгений Владимирович

135 ВЫВОДЫ

1. Размножение испытанных сортов JTA-гибридов лилий и сортов гладиолусов методами in vitro способствует более полной реализации морфогене-тических потенций этих декоративных растений.

2. Наиболее низкая инфицированность и высокая жизнеспособность эксплантов выявлена при стерилизации чешуй лилий и клубнепочек гладиолуса в 70% этиловом спирте (3 минуты), с последующей обработкой эксплантов 50% раствором Domestos (25 минут).

5. На II этапе КМР для увеличения коэффициента размножения, как лилий, так и гладиолусов, необходимо использовать питательную среду с половинным содержанием солей по прописи МС. Оптимальной концентрацией сахарозы на данном этапе для лилий является 60 г/л, для гладиолуса 30 г/л. Наибольшее количество микролуковичек/эксплант лилий получено на среде, содержащей 0,5 мг/л 6-БАП + 1,5 мг/л НУК, максимальное количество побегов у сортов гладиолуса - на среде, содержащей 6-БАП + НУК (по 0,5 мг/л). Коэффициент размножения эксплантов лилий и гладиолусов зависел от физических условий культивирования и достигал максимальных значений при круглосуточном освещении и температуре 23 °С.

6. Укореняемость микролуковичек и побегов на III этапе КМР зависела от состава питательной среды и экологических факторов. Наиболее интенсивное развитие корневой системы у лилий и гладиолусов происходило на среде с 1/2 концентрации солей по прописи МС и в присутствии 10"11 моль/л тидиазу-рона + 0,5 мг/л НУК (для лилий) и 1,0 мг/л НУК (для гладиолуса). Корнеобра-зование у лилий и гладиолусов наиболее активно шло в темноте при температуре 14°С.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенных исследований выявлены морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro 4 разных сортов ЛА-гибридов лилий и гладиолусов.

Поэтапное проведение процесса клонального размножение показало, что ЛА-гибриды лилий и гладиолусы является удобной биологической моделью для выяснения механизмов регуляции морфогенеза в культуре in vitro. Формирование органов в культуре ткани данных групп растений обнаруживает исключительно большое разнообразие в отношении конкретных эндогенных и экзогенных факторов культивирования.

С одной стороны, морфогенетический потенциал культивируемых клеток зависит от генотипа, сроков изоляции, полярности, источника (происхождения), размеров и физиологического возраста эксплантатов. Вместе с тем реге-нерационная способность эксплантов в значительной степени зависит от таксономической принадлежности растения-донора.

С другой стороны, на процесс клонального размножения in vitro большое влияние оказывает правильный подбор среды (минеральный состав, источник углеродного питания, регуляторы роста) и физических условий культивирования (температура и условия освещения). Все эти факторы играют важную роль в индукции делений как в клетках экспланта, так и морфогенезе в целом. Однако специально подобранная и разработанная эмпирически питательная среда и физические условия культивирования для индукции дифференциации и орга-нообразования у ткани одного вида и даже сорта растения, совсем не обязательно будет индуктивной в культуре ткани другого. В связи с этим для микроразмножения каждого вида и конкретного сорта лилий и гладиолусов необходимо разработать специфические приемы культивирования in vitro и выявить оптимальное соотношение эндогенных и экзогенных факторов.

Таким образом, проведенные исследования показали возможность эффективного размножения испытанных сортов JIA-гибридов лилий и гладиолусов методом культуры in vitro, который способствует более полной реализации морфогенетических потенций. В результате этого нами предложена усовершенствованная технология КМР конкретных сортов ЛА-гибридов лилий и гладиолусов, которая может быть с успехом использована в промышленном цветоводстве для быстрого массового размножения и оздоровления посадочного материала данных луковичных и клубнелуковичных цветочных растений.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мокшин, Евгений Владимирович, Саранск

1. Азизбекова, Н. Ш. Влияние гиббереллина и кинетина на формирование цветочных органов шафрана / 11. Ш. Азизбекова, Э. Л. Миляева, 11. В. Лобова, М. X. Чайлахян // Физиология растений. 1978. - Т .25, вып. 3. - С. 603 - 609.

2. Артюшенко, 3. Т. Развитие луковичных и клубнелуковичных растений и их место в общей системе жизненных форм / 3. Т. Артюшенко // Общие закономерности роста и развития растений. Вильнюс, 1965.-С. 35-41.

3. Артюшенко, 3. Т. Луковичные и клубнелуковичные растения для открытого грунта / 3. Т. Артюшенко. М., Л.: Наука, 1983. — 241 с.

4. Ахвердов, А. А. Биология некоторых декоративных геофитов флоры Армении / А. А. Ахвердов // Бюл. бот. сада АН АрмССР. 1955. - № 15. -С. 5-132.

5. Баранова, М. В. Лилии / М. В. Баранова. Л.: Агропромиздат, 1990.384 с.

6. Болтенков, Е. В. Получение и культивирование каллусной ткани Iris setosa Pall, ex Link / E. В. Болтенков, П. В. Лабецкая, Ю. H. Журавлева // Биотехнология. 2000. - № 5. - С. 47 - 51.

7. Бутенко, Р. Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения / Р. Г. Бутенко // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 3 - 20.

8. Бутенко, Р. Г. Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике / Р. Г. Бутенко // Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М.: Агропромиздат, 1990.-С. 154-235.

9. Бутенко, Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: Учеб пособие / Р. Г. Бутенко. М: ФБК-Пресс, 1999. - 160 с.

10. Былов, В. Н. Выгонка цветочных луковичных растений / В. Н. Бы-лов, Е. I I. Зайцева. М.: Наука, 1990. - 240 с.

11. Былов, В. Н. Гладиолусы: плотность посадки, урожай и качество /

12. В. Н. Былов, Н. И. Райков // Цветоводство. 1974, № 8. - С. 12 - 13.

13. Былов, В. Н. Ускорение селекционного процесса гладиолусов / В. Н. Былов, Н. И. Райков // Интродукция и селекция цветочно-декоративных растений. М. Наука, 1978. - С. 108 - 113.

14. Вакуленко, В. В. Справочник цветовода. 2-е изд. / В. В. Вакуленко, Е. Н. Зайцева, Т. М. Клевенская М.: Колос, 1997. - 446 с.

15. Вечерка, Н. А. Особенности получения сомаклональных вариантов фрезии гибридной in vitro / Н. А. Вечерка // Тез. докл. Междун. конф. «Физиология растений наука III тысячелетия». — Москва. - 1999. — С. 547.

16. Вилцане, JI. Ф. Влияние сорта на размножение фрезии in vitro / JI. Ф. Вилцане, М. Э. Земите // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983.-С. 128- 129.

17. Висящева, Л. В. Промышленное цветоводство / Л. В. Висящева, Т. А. Соколова.-М.: Агропромиздат, 1991.-386 с.

18. Вовченко, Ю. Н. Энциклопедия цветовода / Ю. Н. Вовченко, М. Р. Орехов. СПб.: Литера, 1999. - 480 с.

19. Володин, В. Я. Цветы и другие декоративные растения / В. Я. Володин, В. Г. Шайкин. М.: Стройиздат, 1999. - 560 с.

20. Ворошилов, В. Н. Ритм развития у растений / В. Н. Ворошилов. М.: Наука, 1960.-136 с.

21. Высоцкий, В. А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение / В. А. Высоцкий //Сельскохозяйственная биология. 1983. —№ 7.-С. 42-47.

22. Высоцкий, В. А. Клональное микроразмножение луковичных декоративных растений на жидкой питательной среде / В. А. Высоцкий,

23. М. П. Лапинская, И. А. Шершень // Тез. докл. Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология». Алма-Ата, 1993. - С. 211.

24. Выхристова, Г. И. Перспективы культуры изолированных зародышей в селекции цветочных растений / Г. И. Выхристова // Промышленное цветоводство на юге СССР. Луковичные культуры. Сочи. - 1979. - Вып. 25. -С. 110-115.

25. Выхристова, Г. И. Ускоренное размножение луковичных парными чешуями / Г. И. Выхристова // Цветоводство. 1981. - № 2. - С. 16-17.

26. Выхристова, Г. И. Генотипические особенности морфогенетических потенций эксплантатов нарциссов / Г. И. Выхристова // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983. - С. 125 - 126.

27. Гавел, Л. Использование культуры тканей в селекции лука (Allium сера L.) / Л Гавел, Ф. И. Новак // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983.-С. 141.

28. Глеба, Ю. Ю. Слияние протопластов и генетическое конструирование высших растений / Ю. Ю. Глеба, К. М. Сытник. Киев, 1982. - 104 с.

29. Громов, А. Н. Гладиолусы / А. Н. Громов. М.: Россельхозиздат. -1981.-191 с.

30. Давыдова, И. М. Культура изолированных органов, тканей и клеток растений / И. М. Давыдова, Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1970. - 265 с.

31. Демкив, О. Т. Общие аспекты морфогенеза и его специфика у растений различной сложности / О. Т. Демкив // Рост растений и дифференцировка. -М, 1981.-С. 206-225.

32. Денисова, Л Я. Лилии/Л. Я. Денисова. Фрунзе: Илим, 1983.-26 с.

33. Джумашева, Д. К. Сохранение генофонда унгерии Северцова / Д. К. Джумашева // Тезисы докладов Всесоюзной конференции по теоретическим основам интродукции растений. М., 1983. - С. 321.

34. Джумашева, Д. К. Фитогормоны и ингибиторы унгерии Северцова / Д. К. Джумашева, И. Р. Рахимбаев // Тезисы докладов 1 Всесоюзной конференции по регуляторам роста и развития растений.-М., 1981.-С. 106-107.

35. Дмитриева, Н. Н. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений / Н. Н. Дмитриева // Культура клеток растений. М., 1981. - С. 113 - 123.

36. Дубровицкая, Н. И. Регенерация и возрастная изменчивость растений / Н. И. Дубровицкая. М.: Изд. Al I СССР. - 1969. - 308 с.

37. Дьяченко, А. Д. Луковичные цветочно-декоративные растения открытого грунта / А. Д. Дьяченко. Киев: Наук. Думка, 1989. - 258 с.

38. Дьяченко, А. Д. Луковичные цветочно-декоративные растения открытого грунта: Справочник / А. Д. Дьяченко. Киев: Наук. Думка, 1990. - 320 с.

39. Еременко, Л. Л. Цветочные растения на гидропонике в теплицах Сибири / Л. Л. Еременко. Новосибирск: Наука, 1988. - 158 с.

40. Жулева, В. М. Цветы луковичные и клубнелуковичные / В. М. Жу-лева, Л. Г. Черенок. М.: Издательский дом МСП, 1999. - 320 с.

41. Закутская, Е. С. Размножение гладиолусов: поиск новых путей / Е. С. Закутская, А. В. Мурин // Цветоводство. — 1991. -№ 4. С. 11-12.

42. Иванова, И. В. Приусадебное хозяйство. Декоративное садоводство / И. В. Иванова. М.: ЭКСМО-Пресс, Лик пресс, 2000. - 664 с.

43. Использование культуры тканей и органов в селекции растений и производстве посадочного материала / Г. Лейке, Р. Лабес, К. Эртель, М. Петерсдорф. М.: Колос. - 1980. - 77 с.

44. Калашникова, Е. А. Размножение хвойных пород методом культуры тканей / Е. А. Калашникова // Лесоводство и лесоразведение. 1993. -№ 24. - С. 44.

45. Калинин, Ф. Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Ф. Л. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук. Киев, 1980. - 488 с.

46. Каменецкая, И. И. Регенерация растений из изолированных почек луков / И. И. Каменецкая // Изв. АН КазССР. Сер. биол. 1982. - № 4. -С. 12-16.

47. Каменецкая, И. И. Органогенез в культуре изолированных тканей луков / И. И. Каменецкая, И. Р. Рахимбаев // Вестн. АН КазССР. 1982. - № 9. -С. 43-47.

48. Катаева, Н. В. Клональное размножение растений в культуре ткани / Н. В. Катаева, В. А. Аветисов // Культура клеток растений. М., 1981. -С. 137-149.

49. Катаева Н. В. Культура тканей и органов фрезии / Н. В. Катаева // Физиология растений. 1981. - Т. 28, вып. 5. - С. 1062 - 1064.

50. Катаева, Н. В. Клональное микроразмножение растений / Н. В. Катаева, Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1983. - 97 с.

51. Катаева, Н. В. Оптимизация укоренения побегов фрезии в культуре ткани / Н. В. Катаева, Т. Н. Голикова // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983. - С. 129 - 130.

52. Кефели, В. И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны / В. И. Кефели. М. Наука, 1974. - 253 с.

53. Киреева, М. Ф. Лилии / М. Ф. Киреева. М.: Россельхозиздат, 1984.-206 с.

54. Козицкий, Ю. Н., Борукаева М. Ф., Смирнова Н. С. Регуляторы роста и микроразмножение цветочных культур / Ю. Н. Козицкий, М. Ф. Борукаева, Н. С. Смирнова // Цветоводство. 1980, №2. - С. 13-15.

55. Козицкий, Ю. Н. Культура тканей в цветоводстве / Ю. П. Козицкий //Цветоводство. 1981, №5.-С. 16.

56. Коппель, Л. Развитие апикальных меристем томатов в словиях воздействия светом разного спектрального состава / Л. Коппель, Р. Г. Бутенко // Физиология растений. 1992. - Т. 39, вып. 2. - С. 378 - 392.

57. Крылова, И. Л. Об эволюции морфологической структуры и ритмов развития эфемероидов / И. Л. Крылова // Материалы 5 Московского совещания по физиологии растений. М., 1976. - С. 83 - 84.

58. Кудрявец, Д. Б. Атлас декоративных растений / Д. Б. Кудрявец,

59. Н. А. Петренко. М.: Крон-Пресс, 1996. - 128 с.

60. Кулаева, О. Н. Цитокинины. Регуляторы роста растений / 0.11. Кулаева. М.: Колос, 1979. - С. 86 - 117.

61. Куперман, Ф. М. Современные проблемы морфофизиологии растений / Ф. М. Куперман. М.: Изд-воМГУ. - 1976. - 37 с.

62. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1980.293 с.

63. Лапинская М. А. Клональное размножение промышленных сортов гладиолуса: Автореф. дисс. канд. биол, наук: 06.01.07 / М. А. Лапинская. М., 1998.- 19 с.

64. Лунева, Л. С. Размножение ирисов (Iridaceae) методом культуры апикальных меристем in vitro/ Л. С. Лунева // Бот. журн. 1977. - Т. 62, № 3. -С. 416 -421.

65. Лучник, А. Н. Энциклопедия декоративных растений умеренной зоны /

66. A. 11. Лучник. М.: Институт технологических исследований, 1997. - 464 с.

67. Мазур, А. М. Клональное микроразмножение восточных гибридов лилий / А. М. Мазур // Тез. докл. Моск. физ.-тех. ин-та. 4.2. М.: Наука, 1999. -С. 15-17.

68. Мазур, А. М. Клональное микроразмножение ценных гибридов лилий / А. М. Мазур, Е. А. Калашникова // Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы / Под ред. В. С. Шевелухи М.: Евразия, 2000. - 264 с.

69. Мак-Миллан Броуз, Ф. Размножение растений / Ф. Мак-Миллан Броуз. -М.: Мир, 1992.-192 с.

70. Максимов, В. П. Многофакторный эксперимент в биологии /

71. B. П. Максимов. М.: Изд-во МГУ, 1980. - 69 с.

72. Марьяхина, И. Я. Клональное размножение растений лука и формирование полиплоидных форм in vitro / И. Я. Марьяхина, И. В. Полумордвинова, Н. М. Козлова // Сельскохозяйственная биология. 1983. - № 6. - С. 16-21.

73. Мауриня, X. А. Размножение гиацинтов in vitro на разных этапахпериода покоя луковиц / X. А. Мауриня, С. 3. Штраусе, И. Я. Жола // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983. - С. 127.

74. Митрофанова, О. В. Получение безвирусных клонов луковичных цветочных культур / О. В. Митрофанова, II. II. Иванова // Бюлл. Никитского бот. сада. 1987.-Вып. 62.-С. 37-41.

75. Мурсалиева, В. К. Формирование клубнелуковиц Freesia Hybrida в культуре in vitro / В. К. Мурсалиева, Н. А. Вечерко // Биотехнология. Теория и практика. 1997. - № 2. - С. 76 - 80.

76. Немченко, Э. П. Многолетние цветы в саду / Э. П. Немченко. М.: Фитон +, 2001.-272 с.

77. Непорожный, Г. Д. Гладиолус / Г. Д. Непорожный. М.: Сельхоз-гиз.- 1950.- 163 с.

78. Иддагода, Н. Особенности получения асептической культуры и клональное микроразмножение взрослых растений чая / Н. Иддагода, II. В. Катаева, Р. Г. Бутенко // Сельскохозяйственная биология. 1990. -№ 5. - С. 98 - 104.

79. Нурмуханбетова, Г. А. Каллусообразующая и регенерационная способность тканей шафрана алатавского / Г. А. Нурмуханбетова, И. Р. Рахимбаев // Изв. АН КазССР, 1982. № 6. - С. 20 - 24.

80. Нурмуханбетова, Г. А. Вегегагивное микроразмножение шафранов в культуре органов и тканей / Г. А. Нурмуханбетова, И. Р. Рахимбаев // Научные основы декоративного садоводства. Шевченко, 1983. - С. 121- 122.

81. Петренко, Н. А. Весенние цветы в саду / Н. А. Петренко. М.: Фитон +, 2001.-112 с.

82. Полевой, В. В. Физиология роста и развития растений / В. В. Полевой, Т. С. Саламатова. JI.: Изд-во Ленингр. Университета. — 1991. - 239 с.

83. Полетико, О. М. Декоративные травянистые растения открытого грунта / О. М. Полетико, А. П. Меньшикова. Л.: Наука, 1967. - 456 с.

84. Понтович, В. Э. Тканевые и гормональные взаимодействия при раннем эмбриогенезе in vitro / В. Э. Понтович // Тканевые и клеточные культуры вселекции растений.-М., 1979.-С. 104- 124.

85. Попов, А. С. Криоконсервирование культивируемых тканей и клеток растений / А. С. Попов // Криобиология и биотехнология. Киев: Наукова Думка, 1987.-253 с.

86. Попов, А. С. Некоторые механизмы криоповреждения клеток in vitro и особенности их криосохранения / А. С. Попов // Физиология растений. 1993. - Т. 40, вып. 3. - С. 485 - 496.

87. Попов, А. С. Криосохранение клеточных штаммов и меристем растений / А. С. Попов, JT. А. Волкова // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1981. - 270 с.

88. Попов, А. С. Повреждение плазмалеммы клеток диоскореи, культивируемых in vitro, в процессе их криосохранения / А. С. Попов, Д. Л. Федоровский // Физиология растений. 1992. - Т. 39, вып. 2. - С. 335 - 343.

89. Попов, Ю. Г. Клональное размножение растений семейства Амариллисовых / Ю. Г. Попов, О. А. Черкасов // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983.-С. 125.

90. Производство луковиц и клубнелуковиц цветочных растений / Под ред. В. Н. Былова. М.: Колос, 1987. - 208 с.

91. Рассадина, Г. Н. Эффективность клеточной селекции на устойчивость к кольцевой гнили картофеля / Г. Н. Рассадина, Л. А. Хромова // Использование клеточных технологий в селекции картофеля. Труды НИИКХ. 1987. — С. 57-65.

92. Рахимбаев, И. Р. Вегетативное микроразмножение луковичных растений / И. Р. Рахимбаев, Д. К. Джумашева, Г. Л. Нурмуханбетова. — Алма-Ата: Наука, 1985.- 112 с.

93. Рахимбаев, И. Р. Клональное микроразмножение и сохранение генофонда редких и исчезающих видов луковичных растений / И. Р. Рахимбаев, Г. А. Сыртанова, Д. К. Джумашева // Культура клеток растений и биотехнология. Кишинев, 1983.-С. 128.

94. Ржанова, Е. И. Закономерности органогенеза и жизненных циклов луковичных и клубнелуковичных геофитов / Е. И. Ржанова, Н. А. Тихонова. -М.: Изд-во МГУ, 1976. 29 с.

95. Румынии, В. А. Масс-клональное размножение гладиолусов / В. А. Румынии, И. В. Агаджанян, А. Г. Слюсаренко // Бюл. Гл. ботан. сада. -1990.-Вып. 156.-С. 68-72.

96. Румынии, В. А. Масс-клональное размножение лилий / В. А. Румынии, А. Г. Слюсаренко // Бюл. Гл. ботан. сада. 1989. - Вып. 153. - С. 62 - 68.

97. Седельников, JI. JI. Гладиолусы в Западной Сибири / JI. JI. Седельников, Л. П. Зубкус. Новосибирск: Знание. - 1987. - 34 с.

98. Седова, Е. А. Закономерности органогенеза луковичных и клубнелуковичных геофитов / Е. А. Седова. М.: Изд-во МГУ, 1976. — 30 с.• *f %

99. Серебряков, И. Г. Морфология вегетативных органов высших растений / И. Г. Серебряков. М.: Наука, 1952. - 392 с.

100. Синнот, Э. Морфогенез растений / Э. Синнот. М.: Наука, 1963.-603 с.

101. Скрипчинский, В. В. Эволюция онтогенеза растений / В. В. Скрипчинский. М.: Наука, 1977. - 86 с.

102. Скрипчинский, В. В. Влияние пониженной температуры на рост и развитие весенне-цветущих растений Северного Кавказа и вопрос об их происхождении / В. В. Скрипчинский, Вл. В. Скрипчинский // Бот. журн. 1961.1 Т.46, № 7. С. 949 - 958.

103. Смолов, А. П. Функционирование растительной клетки в культуре in vitro (физиологические исследования) / А. П. Смолов // Известия Академии Наук СССР, серия биологическая, 1990, № 6. С. 805 - 820.

104. Тавлинова, Г. К. Приусадебное цветоводство / Г. К. Тавлинова. — СПб.: Диамант, 1996. 544 с.

105. Ю1.Тамберг, Т. Г. Гладиолусы / Т. Г. Тамберг. Спб.: Динамит, 2000.- г •191 с.

106. Тамберг, Т. Г. Методика первичного сортоизучения гладиолуса гибридного / Т. Г. Тамберг. J1. изд. ВИР. - 1972. - 35 с.

107. ЮЗ.Тахтаджян, A. JI. Система и филогения цветковых растений / A. JI. Тахтаджян. М., JL: Наука, 1966. - 611 с.

108. Туровская, Н. И. Микроразмножение яблони и груши in vitro / 11. И. Туровская // Садоводство и виноградорство. 1994. - вып. 1. - С. 10-12.

109. Федоров, А. А. Атлас по описательной морфологии высших растений / А. А. Федоров, М. Э. Кирпичников, 3. Т. Артюшенко. М., Л.: Наука, 1962.-352 с.

110. Филипс, Р. Декоративные растения в вашем саду / Р. Филлипс, М. Рикс. М.: БММ АО, 1999. - 320 с.

111. Фурманова, М. П. Клональное размножение Zephyranthes robusta в культуре / М. П. Фурманова, Г. Олендзка // Культура клеток растений. — Абовян, 1979.-С. 154- 155.

112. Холодова, В. П. Рост и метаболизм углеводов в культуре ткани растений / В. П. Холодова // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. - С. 17.

113. Цоглин, Л. Автоселекционные процессы при микрокло-напьном размножении растении / Л. Цоглин, Н. Габель // Физиология растений. — 1994. — Т. 41, вып. 3.-С. 436-439.

114. Чуб, В. А. Каллусогенез и морфо генез в культуре генеративных органов весеннецветущих видов Crocus L. / В. А. Чуб, Т. А. Власова, Р. Г. Бутенко // Физиология растений. 1994. - Т. 41, вып. 6. - С. 815 - 820.

115. Ш.Ширяева, Г. А. Фотосинтез и культура изолированных тканей растений / Г. А. Ширяева, К. 3. Гамбург // Биофизика и биохимия фотосинтеза. -Иркутск, 1971.-С. 196.

116. Юскевич, Н. Н. Промышленное цветоводство России / Н. Н. Юскевич, Л. В. Висящева, Т. Н. Краснова. М.: Росагропромиздат, 1996. -306 с.

117. Anderson, W. С. Rapid propagation of Lilium. cv. Red Carpet /

118. W. С. Anderson // In vitro. 1977. - V.13, №1. - P. 145.

119. Ashihara, H. Profiles of enzymes involved in batch suspension culture / II. Ashihara, T. Horikosi, X. N. Li et al. // J. Plant Physiol. 1988. -V. 133, № 1.-P.38.

120. Bajaj, Y. P. S. Tissue and organ culture / Y. P. S. Bajaj, R. Pierik // Neth. J. Agr. Sci. 1974. - V. 22, № 2. - P. 153 - 159.

121. Bajaj, Y. P. S. Some factors affecting the in vitro propagation of gladiolus / Y. P. S. Bajaj, V. M. S. Sidhu, A. P. S. Gill // Sci hort. 1983. - V. 18, № 3. -P. 269-275.

122. Bancilhon, L. Gibberellin biosynthesis and control / L. Bancilhon // C. R. Acad. Sci. Ser. D. 1974. - V. 279, № 4. - P. 983 - 986.

123. Bennici, A. Cytological chimeras in plants regenerated from Lilium longiflorum tissues grown in vitro / A. Bennici //Z. Pflanzenzuchtung. 1979. — B.d. 82, № 3. - S. 349 - 353.

124. Bowen, B. Anthocyanin genes as visual markers in transformed maize tissues / B. Bowen / GUS protocol. Gallangher SR, Acad. Press Inc. Sydney, 1992. -P. 163-177.

125. Button, F. The effects of some carbohydrates on the growth and organization of Citrus ovular callus / F. Button // Z. Pflanzenphysiol. 1978. - V. 88, № 1.-P.61.

126. Chang, Ch. A tissue culture protocol for propagation of a rare plant, Lilium speciosum Thunb. var. gloriosoides Baker / Ch. Chang, Ch.-T. Chen, Y.-Ch. Tsai, W.-Ch. Chang // Bot. Bull. Acad. Sin. 2000. - V. 41, № 3. - P. 139 - 142.

127. Chu, C. Haploids in plant improvements / C. Chu // Plant improvement and somatic cell genetics. (Ed. J. Vasil, W. Scowcroft, K. Frey). Acad. Press., 1982. -P. 129- 158.

128. Cocking, E. A method for the isolation of plant protoplasts and vacuoles / E. Cocking // Nature. 1960. - V. 187, № 8. - P. 962 - 963.

129. D'Amato, F. Cytogenetics of plant cell and tissue cultures and theirregenerates / F. D'Amato // Critical reviews in plant sciences. 1985. - V. 3, №1.- P. 73-112.

130. Davies, D. Clonal multiplication of carnation by micropropagation /ч

131. D. Davies, P. Helsop // Ann. Rep. John Innes Inst. 1972. - V. 63, № 3. - P. 64.

132. Doss R., Christian J. Mass propagation of Iris / R. Doss, J. Christian // Physiol, plantarum. 1979. - V. 45, № 2. - P. 215 - 218.

133. Falavigna, A. Moltiplicazione in vitro della cipolla (Aliium сера) / A. Falavigna, G. Hussey // Genet, agr. 1980. - V. 34, № 1-2. - P. 165 - 166.

134. Ginzburg, C. Mass propagation of new Gladiolus hybrids / C. Ginzburg, M. Ziv // Ann. Bot. 1973. - V. 37, № 6. - P. 219 - 224.

135. Hussey, G. In vitro propagation of Gladiolus by precocious axillary shoot formation / G. Hussey // Sci. hort. 1977. - V. 6., № 4. - P. 287 - 296.

136. Hussey, G. In vitro propagation of the onion Allium сера by axillary and adventitious shoot proliferation / G. I lussey // Sci. hort. 1978. - V. 9, № 3. - P. 227 - 236.

137. Hussey, G. In vitro propagation of monocotiledonous bubles and corms / G. Hussey // Plant Tissue Culture (A. Fujiwara, ed.). Tokyo: Marzuzen, 1982.- P. 677-680.

138. Jana, B. Callus tissue / B. Jana // Indian Hortic. 1981. - V. 25, № 4. P. 11-13.-• r >

139. Kato, Y. Plantlet formation and differentiation of epidermal tissues ingreen callus cultures from excised leaves of Lilium / Y. Kato, Y. Yasutake // Phyto-morphology. 1977. - V. 27, № 7. - P. 390 - 396.

140. Kevers, C. Physiological and biochemical events leoding to vitrification of plant cultured in vitro / C. Kevers, M. Coumans, M. Coumans-Gilles, T. Caspar // Physiol, and pi. 1984. - V. 6, № 1. - P. 69 - 74.

141. Kim, Y. New technologies in plant tissue culture / Y. Kim // Hort Science. 1981. - V. 16, № 5. - P. 645 - 647.

142. Kinnon, M. Expression of non selectable markers in wheat and rice tissues / M. Kinnon, M. Abedina, R. Henry // Plant, tissue culture and biotechnology. 1996. -V. 2, № l.-P. 24-32.

143. Kubitz, K. Tissue culture of the monocot Lilium / K. Kubitz, R. Borner, P. Richter // Arch. Gartenbau. 1979. - V.27, № 2. - P. 61 - 71.

144. Laroche, M. Essal de multiplication rapide «in vitro» de l'echalote (Allium ascalonicum L.) / M. Laroche, M. Verhoyen // Meded. Fac. landbouwweteuch. Rijksuniv. Gent. 1980. - V. 45, № 12. - P. 323 - 333.

145. Le Nard, M. Plant propagation principles and practices / M. Le Nard // Ann. Amelior. Plant. 1972. - V. 22, № 1. - P. 39 - 52.

146. Le Nard, M. Carnation propagation from shoot tips cultured in liquid medium / M. Le Nard, J. Cohat // Ann. Amelior. Plant. 1968. - V. 18, № 2. - P. 181 - 215.

147. Logan, A. E. Rapid in vitro propagation of virus-indexed Gladiolus / A. E. Logan, F. W. Zettler//Acta Horticulture. 1985. -№ 164. - P. 169 - 180.

148. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F. Skoog // Physiol, plant. 1962. - V. 15, № 1. -P. 473-497.

149. Nishiuchi, Y. In vitro plant cloning system / Y. Nishiuchi, H. Myodo //

150. J. Japan Soc. I lort. Sci. 1976. - V. 45, № 1. - P. 59 - 64.

151. Novak, F. J. Tissue culture propagation of Lilium hybrids / F. J. Novak, E. Petru//Sci. Hort.- 1981.-V. 14, №7.-P. 191-199.

152. Paek, J. Ecological and morphological features of a clonal micropropa-gation of hyacinth / J. Paek, Y. Kee // Plant Tissue Cult. 1982. - P. 713 - 714.

153. Pierik, R. Effects of auxins, cytokinins, gibberellins, abscisic acid, and ethephon on regeneration and growth of bulblets on excised bulb-scale segments of hyacinth / R. Pierik, A. Post // Sci. Hortic. 1975. - V. 3, № 3. - P. 293 - 297.

154. Pierik R., Ruibing M. In vitro hardening and acclimatization of tissue culture plants / R. Pierik, M. Ruibing // Neth. J. Agr. Sci. 1973. - V. 21, № 9. - P. 129 - 138.

155. Pierik R. Control of precocious freesia corm and cormel formation in tissue culture / R. Pierik, H. Steegmans // Neth. J. Agric. Sci. 1975. - V.23, N 4. -P. 334-337.

156. Pierik, R. In vitro propagation of Hyacinthus orientalis L. / R. Pierik, J. Woets//Acta Hortic. 1971. - V. 23, № 7. - P. 423 - 428.

157. Reinert, I. Applied and fundamental aspects of plant cell tissue and organ culture /1. Reinert, Y. P. S. Bajaj. В.: Heidelberg; N.Y.: Springer, 1977. - 803 p.

158. Riviere, S. Summary of panel discussion on phenotypic and genotypic stability of tissue cultured plants / S. Riviere, J. Muller // Can. J. Bot. 1979. - V. 57, № l.-P. 1986-1993.

159. Robb, S. The culture of excised tissue from bulb scales of Lilium speciosum Thunb / S. Robb // J. Exp. Bot. 1957. - V. 8, № 7. - P. 348 - 352.

160. Saniewski, M. Plant cell culture a practical approach / M. Saniewski, I. Novak, R. Rudnicki // Plant Sci. Letters. 1974. - V. 8, № 2. - P. 373 - 376.

161. Seabrook, J. In vitro culture in plant breeding / J. Seabrook, B. Gumming // Sci. Horlic. 1982. - V. 16, № 2. - P. 185 - 190.

162. Sharp, W. R. Haploidy in Lilium / W. R. Sharp, R. S. Raskin // Phytomorphology. 1971. - V. 21, № 2. - P. 334 - 337.

163. Sheridan, W. F. Tissue culture of the monocot Lilium / W. F. Sheridan //

164. Planta. 1968. - V. 82, № 2. - P. 189 - 192.

165. Simmonds, J. A. Propagation of Lilium hybrids. 2. Production of plantlets from bulbscale callus cultures for increased propagation rates / J. A. Simmonds, B. G. Camming // Sci. hort. 1976. - V. 5, № 1. - P. 161 - 170.

166. Simonsen, I. In vitro growth and differentiation of Gladiolus plants from callus culture / I. Simonsen, A. C. Hildebrandt // Canad. J. Bot. 1971. - V. 49, № 10.-P. 1817-1819.

167. Stanzel, M. Transport of glucose, fructose and sucrose by Streptanthus suspension cells / M. Stanzel, R. D. Sjolund, E. Komor // Planta. 1988. - V. 174. №2.-P. 201.

168. Steinitz, B. Somatic embryogenesis / B. Steinitz, H. Yahel // Hort. Sci. -1982. V. 17, № 3. - P. 333 - 334.

169. Steward, F. Plant cell culture a practical approach / F. Steward // Amer. J. Bot. 1975. - V. 45, № 8. - P. 693 - 703.

170. Stimart, D. P. Tissue culture of bulb-scale sections for asexual propagation of Lilium longiflorum Thunb / D. P. Stimart, P. D. Asher // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1978. - V. 103, № 15. - P. 182 - 184.

171. Stimart, D. P. Development responses of Lilium longiflorum bulblets to constant or alternating temperatures in vitro / D. P. Stimart, P. D. Asher // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1981. - Vol. 106. - P. 450 - 454.

172. Stimart, D. P. Plants from callus of the interspecific hybrid Lilium «Black Beauty» / D. P. Stimart, P. D. Ascher, J. S. Zagorski // Hort. Sci. 1980. -V. 15, № 5. - P. 313-315.

173. Takayama, S. The types of bioreactors used for shoots and embryos / S. Takayama, M. Akuma // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1994. - V. 39, №23.-P. 147-156.

174. Takayama, S. Differentiation in Lilium bulbscales grown in vitro. Effects of activated charcoal, physiological age of bulbs and sucrose concentration on differentiation and scale leaf formation in vitro / S. Takayama, M. Misawa // Hort.

175. Sci. 1980. - V. 48, № 3. - P. 121-125.

176. Takayama, S. Regulation of organ formation by cytokinin and auxin in Lilium bulbscales grown in vitro / S. Takayama, M. Misawa // Plant and Cell Physiol.t *- 1982. V. 23, № 3. - P. 67 - 74.

177. Takayama, S. A scheme for mass propagation of Lilium in vitro / S. Takayama, M. Misawa// Sci. hort. 1983. - V. 18,№ 1.-P. 353-362.

178. Tamura, S. Variations in clonal propagation / S. Tamura // J. Japan Soc. Hort. Sci. 1978. - V. 464, № 7. - P. 501 - 508.

179. The Horticultural Classification of Lilies (The International Lily Register). London, 1969. - 67 p.

180. Tompsett, A. Studies on the growth in culture plant cells / A. Tompsett // Roy. Hortic. Soc. London, 1973. - 33 p.

181. Van Aartrijk, J. Some influences of naphtylacetic acid on the differentiation of meristems of Lilium speciosum 'Rubrum' nr. 10 in vitro / J. Van Aartrijk, G. J. Blom-Barnhoorn // Acta Hort. 1979. - V. 91, № 8. - P. 269 - 279.

182. Wilfret, G. J. Shoot tip culture of Gladiolus: an evaluation of nutrient media for callus tissue development / G. J. Wilfret // Proc. Fla. State Hort. Soc.f .1971.-V.-84, №3. —P. 389-393.

183. Yanagawa, T. Plant propagation / T. Yanagawa, Y. Sakanishi // J. Japan Soc. Hort. Sci. 1977. - V. 46, № 2. - P. 250 - 260.

184. Ziv, M. Transplanting Gladiolus plants propagated in vitro / M. Ziv // Sci. hort. 1979. - V. 11, № 3. - P. 257 - 260.

185. Ziv, M. Organs and plantlets regeneration of Gladiolus through tissue culture / M. Ziv, A. Halevy, R. Shilo // Ann. Bot. 1970. - V. 34, № 1. - P. 671 - 676.

Информация о работе

Мокшин, Евгений Владимирович
кандидата биологических наук
Саранск, 2005
ВАК 03.00.12

Диссертация

Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий (Lilium L.) и гладиолусов (Gladiolus L.) - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы