Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-цитогенетические исследования мозаичных форм численных хромосомных аномалий в постнатальном и эмбриональном развитии
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-цитогенетические исследования мозаичных форм численных хромосомных аномалий в постнатальном и эмбриональном развитии"
>,f
На правах рукописи
КОЛОТОЙ Алексей Дмитриевич
МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЗАИЧНЫХ ФОРМ ЧИСЛЕННЫХ ХРОМОСОМНЫХ АНОМАЛИЙ В ПОСТНАТАЛЬНОМ И ЭМБРИОНАЛЬНОМ РАЗВИТИИ
03 00 15-генетика
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва, 2008
003446944
Работа выполнена в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний Федерального государственного учреждения «Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии Федерального агенства по высокотехнологичной медицинской помощи».
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор
Научный консультант:
доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук
Ворсанова Светлана Григорьевна Кириллова Елена Алексеевна
Курило Любовь Федоровна Голимбет Вера Евгеньевна
Ведущая организация:
Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии (МОНИИАГ)
Защита диссертации состоится « ^ ¿^Ц//Л 2008г в У^""час на заседании Диссертационного Совета Д 212 203 05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу 117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д 8
С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Государственного образовательного учревдения высшего профессионального образования Российского университета дружбы народов, 117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д 6
Автореферат разослан « ее/¿-//р. 2оо8г.
Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент
ОБ Гигани
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы:
Достижения медицинской генетики последних лет связаны с разработкой и внедрением новых высокоэффективных технологий в диагностику наследственной патологии, в том числе и хромосомной Несмотря на эти достижения, проблемы, связанные с изучением мозаичных форм численных и структурных аномалий хромосом и с их влиянием на эмбриональное и постнатальное развитие, по-прежнему остаются недостаточно изученными и актуальными Увеличение частоты врожденной патологии среди новорожденных, наблюдаемое в последнее время, также требует применения эффективных методов генетической диагностики (Ворсанова и др, 1998, 2006, Кириллова и др , 2000, Fritz et al, 2001, lourov et al, 2006, Yurov et al., 2007)
Среди всей хромосомной патологии численные хромосомные аномалии (ХА) остаются одной из основных причин умственной отсталости, врожденных пороков развития, а также отягощенного акушерского анамнеза (Ворсанова и др, 1999, 2006) Так, при общей частоте ХА в 0,5-0,8% у живорожденных доля численных аномалий составляет 50-60% (Bond, Chandley, 1983, Hassold et al,1980, lourov et al, 2006) В группе мертворожденных эти цифры выше при общей частоте хромосомной патологии в 6-7% доля численных аномалий составляет 70-85% случаев (Nielsen, Wohlert, 1991) Наиболее высокая частота численных аномалий хромосом наблюдается в материале спонтанных абортусов (CA) I триместра беременности при общей частоте ХА в 45-65% чистенные ХА в этой группе составляют 92-97% (Jacobs, Hassold, 1995; Warburton et al, 1986)
При численных ХА возможна и эффективна цитогенетическая диагностика. Однако мозаичные формы хромосомной патологии, когда в организме присутствуют две или более клеточных линий, сложны для диагностики, особенно при небольшом клоне аномальных клеток (Ворсанова, 1991, Ворсанова и др, 1989,2006)
Последнее время появляется все ботыые работ, указывающих на связь низкопроцентного мозаицизма с клиническими проявлениями Наличием мозаицизма можно объяснить степень тяжести заболевания при различных хромосомных синдромах Присутствие у больного определенной доли нормальных клеток при таких хромосомных синдромах, как Шерешевского-Тернера, Клайнфельтера, Дауна, Эдвардса, трисомиях хромосом 22 и X предполагает более благоприятный прогноз течения болезни, а своевременная эффективная диагностика мозаичных форм ХА способствует своевременной коррекции, особенно при аномалиях половых хромосом Обнаружение же незначительной доли клеток с ХА может объяснить причину заболевания Выявление «скрытого» хромосомного мозаицизма с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов позволит провести эффективную медико-генетическую консультацию, определить прогноз и соответствующую терапию больному ребенку
В настоящее время методический арсенал для определения частоты мозаичных форм численных ХА весьма ограничен Наиболее применяемым методом молекулярно-цитогенетической диагностики для выявления мозаицизма является метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH), основанный на использовании хромосомоспецифичных ДНК проб Метод многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH) на неделящихся интерфазных клетках позволяет избежать проблем, связанных с получением хромосомных препаратов, дает возможность исследовать клетки различных тканей, и при анализе большого числа клеток за короткое время получить достоверные результаты (Soloviev et al, 1995; Vorsanova et al, 1997, Yurov et al, 2002)
Известно, что около 50% спонтанных абортусов первого триместра беременности этиологически связаны с численными ХА (Hassold et al, 1980, Kalousek, 1987; Jacobs, Hassold, 1995; Vorsanova et al, 2005, Warburton et al, 19S6) При этом доля мозаичных форм ХА оценена недостаточно по причине небольшого числа молекулярно-цитогенетических исследований в этой области Молекулярно-цитогенетические методы позволяют с эффективностью определить долю мозаичных форм ХА в материале спонтанных абортусов и у детей с умственной отсталостью, пороками и/или микроаномалиями развития Мозаицизм низкого уровня может приводить как к внутриутробной гибели плода, так и послужить причиной рождения больного ребенка
Известно, что к наиболее распространенным формам анеуплоидии у детей относятся следующие, трисомия хромосомы 21 (синдром Дауна) с частотой 1 600-800 у новорожденных, трисомия хромосомы 18 (синдром Эдвардса) с частотой 1 7000, трисомия хромосомы 13 (синдром Патау) с частотой 1.6000-13000, моносомия хромосомы X у девочек (сивдром Шерешевского-Тернера) с частотой 1 1900-2500, дисомия хромосомы X у мальчиков (синдром Клайнфельтера) с частотой 1'570-850, трисомия хромосомы X у девочек (синдром трисомии X) с частотой 1 950-1500 и синдром дисомии хромосомы Y с частотой 1 850-1000 новорожденных мальчиков (Бужиевская, Выговская, 1990, Ворсанова и др,1999, 2006, Nielsen, 1975, Nielsen, Wohlert, 1991) Все вышеперечисленные хромосомные синдромы могут встречаться в виде мозаичных форм, однако их частота не определена.
Исследования наиболее распространенных форм численной хромосомной патологии, проведенные в двух группах, а именно, в группе детей с умственной отсталостью, пороками и/или микроаномалиями развития, а также в материале спонтанных абортусов, могли бы способствовать определению частоты пренатального и постнатального хромосомного мозаицизма, пониманию механизмов его возникновения, а также определению частоты мозаичных форм хромосомных аномалий, приводящих к гибели плода на ранних стадиях эмбриогенеза.
Исходя из вышесказанного определялись цель и задачи настоящего исследования
Цель исследования:
С помощью многоцветовой флюоресцентной гибридизации m situ (mFISH) определить частоту мозаичных форм численных аномалий хромосом в эмбриональном и постнатальном развитии и разработать показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики «скрытых» форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития Задачи исследования:
1 Определить частоту различных форм хромосомного мозаицизма наиболее частых численных хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов с помощью методов молекулярно-цитогенетической интерфазной диагностики (группа I)
2 Определить частоту различных форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития с помощью методов цитогенетической и молекулярно-цитогенетической диагностики (группа II)
3 Провести сравнительный анализ частоты различных форм хромосомного мозаицизма в двух обследуемых группах, на основании которого оценить вклад мозаичных форм хромосомной патологии в общую частоту анеуплоидий в раннем онтогенезе
4 Разработать показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики «скрытых» форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития
5 Разработать метод приготовления цитологических препаратов из различных тканей спонтанных абортусов для молекулярно-цитогенетической диагностики Оптимизировать условия проведения метода mFISH для интерфазной молекулярно-цитогенетической диагностики на клетках различных тканей
Научная новизна:
Впервые определена частота мозаичных форм наиболее часто встречающихся хромосомных синдромов у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития Впервые проведена оценка частоты мозаичных форм наиболее частых хромосомных аномалий в раннем эмбриональном развитии на большой выборке спонтанных абортусов с применением методов молекулярно-цитогенетической диагностики Впервые при сравнении различных форм эмбрионального и постнатапьного мозаицизма оценен их вклад в общую частоту численных хромосомных аномалий (анеуплоидий и полиплоидий) на ранних стадиях онтогенеза Впервые показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в четыре раза чаще в эмбриональном, чем в постнатальном развитии, что свидетельствует о высокой летальности плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий в первом - начале второго триместрах беременности Впервые обнаружено преобладание женского пола среди
3
мозаичных форм ХА в эмбриональном и постнатальном развитии соотношение полов (мужской/женский) - 22/37 (0,59), и 4/17 (0,24), соответственно Практическая значимость:
На основании оценки частоты мозаицизма по отдельным хромосомам, включая «скрытые» формы, и анализа фенотипа детей с мозаичными формами хромосомных синдромов определены следующие показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики стертая клиническая картина (forme fruste) таких хромосомных синдромов у детей, как синдромы Дауна, Эдвардса, трисомии хромосомы X, Шерешевского-Тернера, дисгенезия гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом. Эффективность выявления «скрытых» мозаичных форм численных ХА молекулярно-цитогенетическим методом на интерфазных клетках показывает целесообразность использования FISH метода для выявления хромосомной патологии, включая мозаичные формы, в пренатальной и постнатальной диагностике Разработан метод приготовления цитологических препаратов клеток эмбриональных тканей для проведения интерфазной многоцветовой молекулярно-цитогенетической диагностики Оптимизированы условия проведения метода mFISH на интерфазных клетках Внедрение результатов исследования:
Результаты диссертационной работы использованы для диагностики хромосомных аномалий у детей с задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий; при медико-генетическом консультировании супружеских пар с нарушением репродуктивной функции в клинике акушерства и гинекологии Московской медицинской академии им И M Сеченова, консультативном отделении МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий, лаборатории цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН Положения, выносимые на защиту:
1. Определена частота мозаичных форм численных аномалий в эмбриональном развитии на большой выборке спонтанных абортусов ранних сроков беременности по хромосомам 9,13/21,14/22,15,16,18, X и Y и полиплоидии, которя составила 24,6%
2. Определена частота мозаичных форм хромосомных аномалий в раннем постнатальном развитии, которая составила 5,9% в группе детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития
3 Показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в материале спонтанных абортусов в четыре раза чаще, чем у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития Таким образом, значительная часть плодов с мозаичными
формами численных хромосомных аномалий погибает на ранних стадиях эмбриогенеза
4 Разработаны показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики (FISH) с целью выявления «скрытого» мозаицизма детям с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития.
Апробация диссертации:
Результаты исследования были представлены на 4-й Европейской цитогенетической конференции «Цитогенетика в постгеномную эру», 2003, Болонья, Италия; Российских конгрессах «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», 2004, 2007, Москва, научно-практической конференции с международным участием «Современные лабораторные методы исследования наследственной патологии», 2004, Киев, Украина; 5-м съезде Российского общества медицинских генетиков, 2005, Уфа; 14-м Всемирном конгрессе по психиатрической генетике, 2006, Кальяри, Италия, Европейской конференции по генетике человека, 2007, Ницца, Франция Результаты данного исследования были доложены и обсуждены на совместном методическом совещании отдела врожденных и наследственных заболеваний у детей с нарушением психики и лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний Московского НИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий
Публикации: По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ Объем и структура диссертации: Диссертация состоит из следующих глав введение, обзор литературы, объекты и методы исследования, результаты, обсуждение, заключение, выводы и список литературы Работа изложена на 137 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 11 рисунков Библиографический указатель насчитывает 218 источников, включая 187 зарубежных и 31 отечественную работу
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для решения поставленных задач были исследованы две группы (эмбриональная и постнатальная), в которых по данным литературы хромосомная патология выявляется наиболее часто
Группа I 240 спонтанных абортусов сроком от 4 до 15 недель беременности (средний срок 8,4±2,2 недели) Материалом для исследования являлись клетки ворсин хориона, которые были получены в клинике акушерства и гинекологии Московской медицинской академии им И М Сеченова, так называемая эмбриональная группа.
Группа II 354 ребенка в возрасте от 1 недели до 5-ти лет (средний возраст 2г Змес±1г бчес) с задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития, проходивших обследование в Московском НИИ
педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий, так называемая постнатальная группа Материалом исследования являлись культивированные лимфоциты периферической крови
Исследование численных хромосомных аномалий в группе I проводили методом многоцветовой флюоресцентной гибридизации нуклеиновых кислот in situ (mFISH) на интерфазных ядрах, полученных из клеток ворсин хориона с помощью специально разработанной методики Для исследования группы I применялись ДНК пробы на прицентромерные участки хромосом 9,15,16,18,13/21,14/22, X и Y Анализировали 300-600 клеток для каждой ДНК пробы
Для обследования группы II применяли цитогенетический и молекулярно-цитогенетический (FISH) методы диагностики Цитогенетическое исследование проводилось всем пациентам в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий Для анализа использовали препараты метафазных хромосом, полученные из культивированных лимфоцитов периферической крови с помощью стандартных методов (Ворсанова и др, 1999; Захаров и др, 1982) Анализировали как минимум 20 метафаз у одного пациента При обнаружении численной или структурной хромосомной аберрации в одной метафазе число анализируемых клеток увеличивалось в два раза или применялись методы молекулярно-цитогенетической диагностики. Молекулярно-цитогенетическую диагностику методом FISH проводили 29 детям для уточнения или выявления мозаичных форм ХА При этом применялись ДНК пробы на прицентромерные участки хромосом 11, 15, 18, 13/21, 14/22, X и Y Проводился анализ 50-100 метафазных пластинок и 100-1000 интерфазных ядер
В работе использовались ДНК пробы из оригинальной коллекции лаборатории цитогенетики НЦ психического здоровья РАМН и лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий Описание этих ДНК проб представлено в работах проф Ю Б Юрова с соавторами (Юров, 1987; Юров и др, 1989, Yurov et al, 1997) и д-ра И В Соловьева с соавторами (Соловьев и др, 1998, Soloviev et al, 1995,1997)
Флюоресцентную гибридизацию in situ на метафазных и интерфазных клетках проводили согласно протоколу, разработанному в лаборатории цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН (Соловьев и др., 1998; Soloviev et al, 1994, Yurov et al, 1996) При FISH исследовании мозаичные формы определяли на основании следующих данных' доля анеуплоидного по аутосоме или нормального клона учитывалась в 5% клеток и более (Mody et al, 2003, Vorsanova et al, 2005, Yurov et al., 2007), моносомия хромосомы X у детей женского пола учитывалась в том случае, если она была больше 1,6%, те больше значения, определенного в исследовании здоровых детей до 5-ти лет (Guttenbach et al, 1995, Yurov et al, 2007)
Статистическая обработка данных осуществлялась с помощью компьютерной программы «Статистика-6» с применением методов вариационной статистики и
6
корреляционного анализа Результаты считали достоверными, если различие по Т-критерию Стьюдента было незначимым (Урбах, 1975) Исследования одобрены этическим комитетом Московского НИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий и проводились с учетом международных этических и правовых норм для генетических исследований.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Результаты молекулярно-цитогенетического исследования материала спонтанных абортусов (группа I).
В результате интерфазного mFISH исследования 240 спонтанных абортусов сроком от 4 до 15 недель (средний срок беременности 8,4±2,2 недель) с использованием ДНК проб на хромосомы 9, 13/21,14/22,15,16, 18, X и Y численная хромосомная патология была выявлена в 138 образцах, что составило 57,5% По данным литературы при подобном FISH исследовании, но в меньшем числе образцов (60 образцов СА), с ДНК пробами на хромосомы 13,15,16,18,21,22,Х и Y численные ХА были обнаружены в 54,4% (Jobanputra et al., 2002) Таким образом, наши результаты сравнимы с данными литературы
Среди хромосомной патологии наблюдалось 128 (92,7%) случаев с одной ХА, включающих анеуплоидию по одной хромосоме или полиплоидию, и 10 (7,3%) случаев - сочетания анеуплоидии по нескольким хромосомам или анеуплоидии с полиплоидией Случаи с одной хромосомной аномалией включали трисомии аутосом - 51 (39,9%), моносомии аутосом - 9 (7,0%), полиплоидию - 37 (28,9%), анеуплоидию по хромосоме X - 31 (24,2%) Случаи сочетанных ХА включали 8 случаев мозаичной анеуплоидии гоносом с анеуплоидией аутосом и 2 случая мозаичной формы тетраплоидии с анеуплоидией аутосом Все случаи обнаруженной хромосомной патологии представлены в таблицах 1 и 2. Поскольку интерфазное FISH исследование проводилось не по всем хромосомам, будет более корректным в записи кариотипа указывать не количество хромосом, а диплоидный (2п), триплоидный (Зп) или тетраллоидный (4п) хромосомный набор
Среди трисомий аутосом наиболее часто встречалась трисомия хромосомы 16-27 случаев (19,6%, включая случаи с участием нескольких хромосом), что соответствует данным литературы. Вторыми по частоте были трисомии хромосом 13/21 - 9,4% и 14/22-8,0% случаев
В исследовании использовались центромерные ДНК пробы, общие для пар хромосом 13 и 21, 14 и 22 По данным литературы при цитогенетическом исследовании материала СА трисомия хромосомы 21 встречается приблизительно в два раза чаще, чем трисомия хромосомы 13, а трисомия хромосомы 22 наблюдается в 6-8 раз чаще трисомии хромосомы 14 (Boue et al, 1975, Eiben et al, 1990, Hassold, 1982, Turnpenny, Ellard, 2005). Учитывая эти данные, можно с высокой вероятностью
Табл. 1. Случаи выявления хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов (мозаичные случаи выделены жирным шрифтом).
Хромосомные аномалии число средний средние
случаев материнский сроки беременности
возраст (лет) (нед)
анеуплоидия аутосом
2п,+9 2 27 8,5
2п,-9/2п 1 26 5
2п,+15 2 36,5 7,5
2п,+15/2п 2 21,5 8,0
2п,-15/2п 1 33 8-9
2п,+1б 22 31,7 7,7
2п,+16/2п 1 27 8
2п,-1б/2п 1 20 8-9
2п,+18 1 26 7-8
2п,+18/2п 2 30 14
2п,+13 или 21 7 34,1 9,0
2п,+13 или 21/2п 2 37,5 8,5
2п,-13 или 21 4 34,0 8,3
2п,+14 или 22 4 34,5 7,7
2п,+14 или 22/2п 6 33,3 7,1
2п,-14 или 22 2 30,5 8,0
анеуплоидия хромосомы X
2п,Х 15 26,7 10,1
2п,ХХХ - -
2п,ХХХХ 1 30 8-9
2п,Х/2п,ХХ 29,5 7,8
2п,Х/2п,ХХХ/2п,ХХ 1 43 6-7
2п,Х/2пДХХ/2п,ХХХХ/2пДХ 1 24 7
2п,ХХУ 28,5 6,5
2п,ХХУ/2п,ХУ 4 34,3 10,5
2п,ХХУ/2п,ХХХУ/2п,ХУ 1 38 7-8
полиплоидия
Зп.ХХХ 5 32,8 9,3
Зп,ХХХ/2п,ХХ 4 29,3 8,3
3 п,ХХХ/4 п ДХХХ/2 п ,ХХ 28,1 7,1
4п,ХХХХ/2пДХ 1 24 8-9
Зп,ХХУ 12 27,7 9,1
Зп,ХХУ/2пДУ - -
ЗпДХУМгцХХУУ/гп.ХУ 4 23,5 10,9
4п(ХХУУ/2п)ХУ 2 28,5 10,3
Табл. 2. Случаи сочетания различных хромосомных аномалий.
хромосомные аномалии возраст матери (лет) сроки беременности (нед)
2n,XXX,+16[32%]/2n,XXXX,+16[8%]/2n,X,+16[5%]/ 2п,ХХ,+16[55%] 42 7-8
2n,XXX,+16[7%]/2п,ХХ,+16[93%] 29 9
2n,XXY,+16[ 17%]/2n,XY,+16[83%] 29 6
2п,ХХХХ,+13/21 [ 10%]/2п,ХХХ,+13/21 [7%]/2п,ХХ,+13/21 [83%] 36 8-9
2п,Х,+13/21 [77%]/2п,ХХ,+13/21 [13%) 32 8-9
2п,Х[85%]/2п,ХХХ[15%], 2п,+13/21 [50%]/2п[50%] 48 6-7
2n,XXY[60%]/2n,XXXYY[14%]/2n,XXYY[6%]/2n,XY[20%], 2п,+ 13/21 [50%]/2п[50%] 44 8
2n,XXY[15%]/2n,XXYY[7%]/2n,XXXY[5%]/2n,XY[73%], 2n,+9[16%]/2n[82%] 35 9-10
4n,XXXX,+14/22,+14/22[8%]/2n,XX,+14/22 [92%] 31 8-9
4n, XX Y Y,+16,+16 [5%]/2n,X Y,+16[95 %] 27 8-9
*- для более удобного сравнения клонов во всех случаях указаны проценты, а не количество проанализированных клеток, как принято в цитогенетической номенклатуре ОБСЫ, 2005)
предположить, что две трети случаев анеуплоидии 13/21 были по хромосоме 21 и одна треть по хромосоме 13, а большинство выявленной анеуплоидии 14/22 относилась к хромосоме 22 Исходя из этого, трисомия по хромосоме 22 была второй по частоте трисомией аутосомы в нашем исследовании С малой частотой наблюдались трисомии хромосом 9,15 и 18, обнаруженные в 2,2%, 2,9% и 2,2%, соответственно
Моносомии аутосом наблюдались в 9 случаях, что составило 6,5% от всех ХА В литературе по исследованиям CA моносомии аутосом отмечаются редко - в 2-3% Считается, что эмбрионы с моносомией аутосом элиминируются на самых ранних стадиях развитая - до 5 недель (Eiben et al, 1990). В нашем исследовании было обнаружено 6 случаев регулярной моносомии по хромосомам 13/21 и 14/22, которые наблюдались при средних сроках беременности 8,3 и 8,0 недель, соответственно Остальные три случая моносомии аутосом были мозаичными и затрагивали хромосомы 9,15 и 16
Анеуплоидия хромосомы X была наиболее частой среди всех обнаруженных анеуплоидий и составляла 27,5% среди всех ХА, включая образцы с несколькими ХА В литературе по цитогенетическим исследованиям CA обычно упоминается о
регулярной моносомии хромосомы X и редко - о мозаичных случаях. Регулярная моносомия хромосомы X по данным публикаций составляет от 7% до 15% (в среднем, 10,7%) от всех ХА. В данном молекулярно-цитогенетическом исследовании регулярная моносомия X была определена в 10,9%, что соответствует данным литературы (Ве et al., 1997; Eiben et al., 1990).
Полиплоидия (триплоидия и тетраплоидия) встречалась в 28,9% случаев ХА.
В результате mFISH исследования была обнаружена высокая доля мозаичных форм численных ХА - 42,8% от всей хромосомной патологии или 24,6% от общего числа CA. Частота регулярных и мозаичных форм численной хромосомной патологии представленна на рисунке 1.
Рис. 1. Частота и соотношение регулярных и мозаичных форм хромосомных аномалий, включая случаи с несколькими ХА в материале спонтанных абортусов (п=240) (указан процент мозаицизма в пределах конкретной хромосомной аномалии, проценты взяты условно).
0 5 10 15 20 25 30 35 М 45
количество случаев
Частота мозаицизма при определенной хромосомной патологии была следующей: хромосома X - 53,8%, хромосома 9 - 50%, хромосома 15 - 60%, хромосома 18 - 67%, хромосомы 14/22 - 46,2%, хромосомы 13/21 - 23,5% и хромосома 16 - 7,1%, полиплоидия - 56,4%. Мозаицизм был обнаружен при анеуплоидии каждой исследованной хромосомы и при различных формах полипоидии. Из рисунка 1 видно, что анеуплоидия по хромосомам X, 14/22, 18, 15, 9, а также полиплоидия были в большей степени представлены мозаичными формами, чем анеуплоидии хромосом 13/21 и 16. По данным литературы при цитогенетических исследованиях СА мозаичные формы численных ХА наблюдаются в широких пределах: от 2 до 20% случаев (Fritz et al., 2001; Hassold, 1982; Kalousek et al., 1991). Анализ подобных исследований показывает, что, возможно, частота выявляемого мозаицизма в
определенной степени зависит от количества клеток, исследуемых для каждого образца (10-40 клеток) Частота мозаичных форм, определенная в представленном молекулярно-цитогенетическом исследовании, оказалась выше по сравнению с цитогенетическими исследованиями других авторов Это может быть связано с тем, что примененный нами молекулярно-цитогенетический метод с анализом 300-600 клеток на каждую ДНК пробу позволял выявлять те мозаичные формы, которые не выявлялись цитогенетическим методом при стандартном анализе 10-40 клеток Кроме того, данное исследование проводилось на некультивированных интерфазных ядрах, благодаря чему был устранен фактор преобладающего деления нормальных клеток в культуре, препятствующий выявлению малой доли клеток с хромосомной патологией (до 10%)
Наиболее многочисленные группы ХА - анеуплоидия хромосомы X и полиплоидия -были более репрезентативными Среди мозаичных форм анеуплоидии X, составивших 53,8%, наиболее часто наблюдалась форма 2п,Х/2п,ХХ (17,9%) Такая форма мозаицизма, по данным литературы, является наиболее распространенной среди больных с синдромом Шерешевского-Тернера (Sybert, 2002) Мозаицизм 2n,X/2n,XXX/2n,XX составлял 10,3%, формы 2п,Х/2п,ХХХ и 2п,ХХХ/2п,ХХ - по 2,6% Мозаичные формы полисомии X в образцах мужского пола наблюдались в 20,5% При анализе числа клеток с анеуплоидией X в мозаичных случаях результаты были следующими доля анеуплоидии X менее 50% клеток выявлялась в 75% CA женского пола, в образцах мужского пола - в 40% случаев Наше исследование CA показало, что примерно 1/3 плодов с моносомией хромосомы X была представлена мозаичными формами Эти результаты свидетельствуют о том, что значительная часть плодов с мозаичной анеуплоидией хромосомы X погибают в первом - начале второго триместра беременности
Мозаичные формы полиплоидии составили 56,4% от всей обнаруженной полиплоидии Мозаицизм 4n/3n/2n был наиболее частой формой (33,3%) Мозаичные формы 4п/2п наблюдались в 12,8% случаев, Зп/2п - в 10,3% случаев По данным литературы мозаичная форма 4п/2п в материале CA наблюдается чаще мозаичной формы 3n/2n (Eiben et al, 1990) Мозаичные формы полиплоидии типа 4n/3n/2n, выявленные в нашем исследовании, описаны редко, возможно, это связано с исследованием малого числа клеток при цитогенетическом исследовании (10-40 клеток), либо с элиминацией полиплоидных клеточных линий в процессе культивирования Небольшое содержание полиплоидного клона (менее 15%), обнаруженное нами mFISH методом, наблюдалось в 5,1% от всех ХА, из чего можно предположить, что мозаичная полиплоидия низкого уровня также может приводить к гибели плода
Сочетание различных ХА было выявлено в 10 образцах (табл 2) В восьми из них сочеталась анеуплоидия аутосомы с мозаичной анеуплоидией гоносом, преимущественно хромосомы X, а в двух - анеуплоидия аутосом наблюдалась в
И
сочетании с мозаичной тетраплоидией Все 10 случаев включали мозаичные формы ХА
В группе I проводился сравнительный анализ материнского возраста, сроков беременности и соотношения полов При этом были получены следующие статистически достоверные результаты- средний материнский возраст, по сравнению с общей группой (30,5±5,5 лет) (средний возраст ± стандартное отклонение), был значимо ниже при наличии у плода регулярной моносомии X - 26,7±3,8 лет (р<0,01) и мозаичной полиплоидии - 27,2±3,8 (р<0,01), и значимо выше при наличии у плода трисомии хромосом 13 или 21 - 34,5±5,7 лет (р<0,001), а также при сочетании нескольких ХА у одного СА - 35,3±7,2 лет (р<0,01). Эти результаты соответствуют данным литературы (Eiben et al ,1990, Reddy, 1997, Rua et al ,1995, Warburton et al, 1980) Повышенный возраст наблюдался также у матерей, имеющих СА с мозаичной формой анеупловдии X - 34,4±6,7 лет (р<0,01) Известно об увеличении доли анеуплоидии X в соматических клетках у женщин с возрастом (Galloway, Buckton, 1978, Nowinski et al, 1990, Guttenbach et al, 1995) Сопоставив эти данные с такими, как повышенный риск рождения ребенка с трисомией аутосом у женщин более старшего возраста (Ворсанова и др, 1999; 2006; Eiben et al ,1990) и отягощенный акушерский анамнез у женщин с повышенным уровнем анеуплоидии хромосомы X (Ворсанова и др, 1998а, Wu et al., 1993), можно предположить, что мозаичные формы анеуплоидии X являются своего рода свидетельством нестабильности генома, которая приводит к негативному влиянию на развитие плода
Мозаичные формы численных ХА в группе I наблюдались преимущественно у женского пола: соотношение полов (муж/жен) - 22/37 (0,59)*, причем преобладание женского пола наблюдалось по всем ХА: анеуплоидии аутосом (0,78), анеуплоидии хромосомы X (0,63) и полиплоидии (0,43) Регулярная форма триплоидии наблюдалась в два раза чаще у СА мужского пола, чем у женского, и наоборот, -мозаичная полиплоидия более чем в два раза чаще встречается у СА женского пола Это различие было статистически достоверно (р<0,05)
Среди СА с невыявленной патологией наблюдалось преобладание мужского пола - 57/45 (1,27). Можно предположить, что это явление связано с Х-сцепленными заболеваниями, летальными для плодов мужского пола (Бужиевская, Выговская, 1990)
Таким образом, высокий удельный вес мозаичных случаев в материале СА на ранних стадиях эмбриогенеза может свидетельствовать о том, что не только регулярные, но и значительная доля мозаичных форм анеуплоидии и полиплоидии являются причиной внутриутробной летальности плода.
соотношение полов, выраженное отношением числа особей мужского пола к особям женского пола (Hassold et al, 1983)
Для того чтобы оценить удельный вес мозаичных форм анеуплоидии совместимых с жизнью, и сравнить его с долей мозаичных форм, приводящих к гибели плода, а также для определения показаний к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики, нами была обследована группа детей с недифференцированными формами задержки психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития.
Результаты онтогенетического и молекулярно-цитогенетического обследования группы детей с задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития (группа II).
В результате цитогенетического обследования 354 детей возрастом от 1 недели до 5 лет (средний возраст 2гЗм) хромосомная патология была выявлена у 66, что составило 18,6%. Среди них было 28 пациентов с синдромом Дауна (7,9%) и 38 пациентов с другими формами ХА (10,7%).
Среди хромосомной патологии выявлено: 45 (68,2%) численных аномалий и 21 (31,8%) структурных аномалий хромосом. Частота ХА представлена на рисунке 2.
Рис. 2. Частота хромосомной патологии, выявленной в группе II цитогенетическим методом.
трисомня 22 (п=2) 3% Ш-2) 3%
Мозаичные формы хромосомной патологии цитогенетическим методом были выявлены у 12 детей из 354, что составило 3,4% от всех больных или 18,2% от случаев с хромосомной патологией. Мозаичными не считались случаи обнаружения лишь одной клетки, отличающейся кариотипом от преобладающей клеточной линии, согласно общепринятым цитогенетическим правилам (Peschka et al.,1999; Sonntag et al., 2001). Таких случаев было 6, и до проведения FISH диагностики эти случаи учитывались как регулярные формы.
На рисунке 3 представлены все случаи численных аномалий хромосом, с указанием регулярных и мозаичных форм, обнаруженные цитогенетическим методом.
Все мозаичные случаи наблюдались по численным ХА, кроме одного случая с кольцевой хромосомой 11 при кариотипе 46,ХХ,г(11)[16]/47,ХХ,г(11)х2[2]/45,ХХ,-11 [4], который был отнесен к структурным ХА, но мозаицизм в этом случае наблюдался по анеуплоидии хромосомы 11. Кроме этого случая в исследовании рассматривалась только численная хромосомная патология.
Рис. 3. Соотношение мозаичных и регулярных численных хромосомных аномалий, обнаруженных в группе II (п=354) цитогенетическим методом.
22
н ..............
* -- :
11
■1 12
и 1 1 ; I 1 1 1 1
мозаичные формы регулярные формы
число пациентов
Дополнительная FISH диагностика проводилась 29 детям для уточнения цитогенетического диагноза. Среди них были следующие: 12 детей с мозаицизмом, выявленным цитогенетически; 6 детей, у которых при цитогенетическом анализе была обнаружена лишь одна клетка, отличающаяся по кариотипу от преобладающей клеточной линии; 11 детей с регулярным аномальным или нормальным кариотипом, которые имели стертую клиническую картину синдрома.
Данные FISH исследований представлены в таблице 3.
Табл. 3 Результаты FISH диагностики в группе II.
№ п/п возраст клинические проявления результаты цитогенетического исследования результаты FISH исследования подтверждение мозаицизма методом FISH
1 7мес нетипичный фенотип с-ма Дауна, отсутствие характерных лицевых MAP, 47,ХХ,+21[18]/ 46,ХХ[2] 47,ХХ,+21[551] /46,ХХ[49] +
отсутствие поперечной борозды на ладонях
2 Змее ЗПМР, микроцефалия, колобома радужки, глаукома, мышечная гипотония 47,ХХ,+21[14]/ 46,ХХ[7] 47,ХХ,+21[143] /46,ХХ[157] +
3 5лег грубая задержка психоречевого развития, гипертелоризм глазных шелей, готическое небо, гиперпигментированные невусы 47,ХХ,+21[5]/ 46,ХХ[15] 47,ХХ,+21[27]/ 46,ХХ[143] +
4 5лет ЗПРР, ожирение У матери в анамнезе спонтанные аборты 47,ХХ,+22[4]/ 46,ХХ[17] 47,ХХ,+22[14]/ 4б,ХХ[86] +
5 1г2м ЗПРР, MAP монголоида разрез коротких глазных щелей, брахидактилия, поперечная борозда на ладонях 47,ХУ,+22[2]/ 46,ХУ[28] 47,XY,+22[15]/ 46,XY[146] +
6 11м ЗПМР, гипотрофия, готич небо, варусн постановка стоп, открытое овальное окно, низкая граница роста волос 45,Х[2]/ 46,XX,fra(16) (q22)[10]/ 46,ХХ[19] 45,Х[17]/ 46,ХХ[510] +
7 1год ЗПРР, MAP короткая шея, гипертелоризм глазных щелей и сосков 45,Х[3]/ 46,ХХ[23] 45,Х[42]/ 46,ХХ[258] +
8 5лег задержка роста, короткая шея, клинодактилия V кистей 45,Х[3]/ 46,ХХ[40] 45Д[4]/ 46,ХХ[296]
9 5лет задержка роста, признаки СШТ, ЗПРР, клинодакпшм IV и V стоп и рук 45,Х[7]/ 46,X,i(X)(qlO) [14] 45,Х[236]/ 46,X,i(X)(qlO) [364] +
10 Зм Дисгенезия гонад. 45,Х[14]/ 47,ХХХ[4]/ 46,ХХ[7] 45,Х[164]/ 47,ХХХ[21]/ 46,ХХ[15] +
И Зг фенотип синдрома Прадера-Вилли 47,ХХ,+таг[14]/ 4б,ХХ[8] 47,XX,+der(15) [75]/46,ХХ[56] +
12 Юм ЗПМР, микроцефалия, поперечная борозда на ладонях, трезубец пальцев левой стопы, микрофтальм, ангимонголоидный разрез глазных щелей, атрофия дисков зрительных нервов 46,ХХ,г(11) (р15 5q23 3)[1б]/ 47,XX,r(U)x2[2] /45,ХХ,-11[4] 46^СХ,г(11) [295]/ 47,ХХ,г(11)х2 [12]/45,ХХ,-11 [60] +
13 Юдн предположительно с-м Дауна 47,ХХ,+21[20]/ 46,ХХ[1] 47,ХХ,+21[236] /46,ХХ[4б] +
14 5лет ЗПРР, аутизм 47,ХХХ[27]/ 46,ХХ[1] 47,ХХХ[524]/ 46,ХХ[28] +
15 Зг7м ЗПРР, аном уш раков, высокое небо, эпикант, корот мизинцы, пахов грыжа, аномалии половых органов 47,XY,+18[1]/ 46,XY[23] 47,XY,+18[1]/ 46,XY[391]
16 1г ГЗФРиЗПМР, множественные MAP 47,ХХ,+18[1]/ 46,ХХ[26] 46,ХХ[350] —
17 1г Юм ЗПРР, низкий рост, короткая шея, воронкообр гр кл, поперечн ладон борозда, мегалокорнеа 45,Х[1]/ 46,ХХ[26] 45,Х[3]/ 47,ХХХ[1]/ 46,ХХ[546]
18 Зг4м задержка роста, коротк шея, крьшовид складка, аятимонгол разрез глазных щелей,телеканг 45,Х[1]/ 46,ХХ[28] 45,Х[4]/ 46,ХХ[570]
19 Змее нетипичный фенотип синдрома Эдвардса 47,ХХ,+18 47,ХХ,+18[548] /46,ХХ[2] —
20 1мес МВПР пороки сердца и головного мозга, синдактилия, полидактилия 47.ХХ.+18 47,ХХ,+18[534] /46,ХХ[30] +
21 Змее нетипичная клиническая картина синдрома Дауна 47,XY,+21 47,XY,+21[236] /46,XY[28] +
22 Змее МВПР, ЗФР, гипертелоризм коротких глазных щелей, низкопосаженныеуш рак, поперечная борозда на ладони, ВПС 47,XY,+21 47,XY,+21[188] /46,XY[12] +
23 9мес нетипичная клиническая картина синдрома Дауна. 47,XY,+21 47,XY,+21[994] /46,XY[56] +
24 Зг4м ГЗПРР, ВПС, микроцефалия, монголоида разрез глазных щелей, поперечная борозда на ладони, крупные ушные раковины, арахнодактилия 47,XXX 47,XXX[518]/ 48,XXXX[2 ]/ 46,XX[31] +
25 4г предположительно СШТ, ЗПРР, задержка роста, короткая шея, широкая грудная клетка, микроцефалия, попер складка ладони, гипотелоризм глазных щелей 46,XX 45,X[7]/ 47,XXX[2]/ 46,XX[988]
26 1,5г предположительно СШТ в связи с низкорослостью 46,XX 45,Х[28]/ 47,ХХХ[1]/ 46,ХХ[971] +
27 4г5м предположительно СШТ в связи с низкорослостью 46,XX 45,Х[15]/ 46,ХХ[985] -
28 Зг задержка полового развития и роста. 46,XX 45,Х[6]/ 47,ХХХ[7]/ 46,ХХ[500] +
29 5лет предположительно СШТ 46,XX 45,Х[18]/ 47,ХХХ[6]/ 46,ХХ[973] +
«+» мозаицизм подтвержден, «-» мозаицизм не подтвержден
В результате проведения молекулярно-цитогенетической диагностики были получены следующие данные, среди 12 детей с мозаицизмом, обнаруженным цитогенетически, мозаичная форма анеуплоидии подтвердилась в 11 случаях и была исключена в 1 случае, среди 17 детей с немозаичным кариотипом, выявленным цитогенетически, мозаицизм был обнаружен у 10 детей Таким образом, доля мозаичных форм анеуплоидии после FISH исследования увеличилась с 3,4% до 5,9% от общего числа детей (п=354)
Как показало исследование, дети со стертой клинической картиной (forme fruste) синдрома Дауна и трисомии X могут иметь хромосомный мозаицизм с присутствием 5-10% нормального клона клеток в лимфоцитах периферической крови. Так, у всех 4-х детей со стертым фенотипом синдрома Дауна был обнаружен нормальный клон клеток И, таким образом, доля мозаичных случаев синдрома Дауна после проведенных FISH исследований составила 25% (7 из 28) по сравнению с 10,7% (3 из 28), выявленными цитогенетическим методом
Было показано, что выявление при цитогенетическом исследовании одной клетки с кариотипом, отличающимся от преобладающей клеточной линии, может говорить о мозаичной форме синдрома В 2-х случаях наличия нормальной клетки при основном анеуплоидном клоне мозаицизм подтвердился. Обнаружено также, что девочки с отдельными признаками синдрома Шерешевского-Тернера могут иметь «скрытый» мозаицизм с присутствием клона 45,X, который был выявлен у 3 из 7 девочек В связи с этим таким детям может быть рекомендовано молекулярно-цитогенетическое исследование
После проведенного FISH исследования соотношение полов в группе детей с хромосомным мозаицизмом составило 4/17 (0,24), те мозаичные формы ХА наблюдались приблизительно в 4 раза чаще у девочек. Анализ соотношения полов среди детей с синдромом Дауна показал, что в случае регулярных форм трисомии 21 наблюдается преобладание мужского пола - 13/8 (1,63), тогда как мозаичная форма трисомии 21 встречалась чаще у девочек - 3/4 (0,75), что соответствует данным
17
литературы (Ковалева, 2002) Мозаичная анеуплоидия хромосомы X в нашем исследовании была обнаружена только у пациентов женского пола
Таким образом, результаты данного исследования позволили определить показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики больным детям с целью выявления скрытого мозаицизма В проведении FISH исследования для выявления возможного мозаицизма нуждаются пациенты со стертой клинической картиной таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии X, а также девочки с дисгенезией гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом
Сравнение результатов исследования, полученных в двух анализируемых группах.
Мозаичные формы численных ХА в материале CA наблюдались в четыре раза чаще, чем в группе детей - 24,6% и 5,9%, соответственно Эти данные могут говорить о том, что не только регулярные, но и мозаичные формы численных ХА приводят к внутриутробной гибели плода На основании результатов исследования и данных литературы было показано, что в первом триместре беременности погибает 35-50% плодов с мозаичной формой трисомии хромосомы 21.
Мозаичные формы численных ХА в обеих группах наблюдались преимущественно у женского пола, соотношение полов (мужской/женский) составляло 22/37 (0,59) среди CA и 4/17 (0,24) в группе детей В группе I преобладание женского пола наблюдалось по всем ХА (трисомия аутосом, полиплоидия и анеуплоидия X) В группе II преобладание женского пола было обусловлено мозаичной анеуплоидией хромосомы X Среди пациентов с признаками сивдрома Шерешевского-Тернера мозаичные формы наблюдались у 87,5% больных Мозаичная форма анеуплоидии хромосомы X была наиболее частой среди всех мозаичных анеуплоидий в двух группах, что может свидетельствовать о высокой предрасположенности хромосомы X к митотическому нерасхождению. Доля мозаичных форм среди численных ХА в первой и второй исследованных группах составила 42,8% и 44,4%, соответственно Высокий процент мозаичных форм хромосомной патологии, обнаруженный в двух группах, указывает на то, что ошибки в постзиготическом расхождении хромосом происходят, по-видимому, с большой частотой, однако их эффективное выявление возможно только с помощью молекулярно-цитогенетических методов, таких как флюоресцентная гибридизация in situ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Мозаичные формы численных хромосомных аномалий могут являться значимым этиологическим фактором, влияющим на внутриутробное развитие плода, а также на степень тяжести клинических проявлений при хромосомных синдромах В настоящей
18
работе проведена оценка частоты мозаичных форм численных хромосомных аномалий при эмбриональном и раннем постнатальном развитии, где частота хромосомной патологии наиболее высока, а именно в группе (I) спонтанных абортусов ранних сроков беременности и в группе (II) детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития до 5 лет. Для выявления хромосомного мозаицизма, в том числе низкого уровня (до 10%), был применен молекулярно-цитогенетический метод исследования -флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) с использованием ДНК проб, позволяющая определять численные хромосомные аномалии с высокой эффективностью В результате FISH исследования репрезентативного числа спонтанных абортусов (п=240) мозаичные формы численных хромосомных аномалий были выявлены в 24,6% (п=59) от общего числа спонтанных абортусов При определенной форме анеуплоидии мозаицизм был обнаружен в следующих случаях хромосома X - 53,8%, хромосома 9 - 50%, хромосома 15 - 60%, хромосома 18 - 67%, хромосомы 14/22 - 46,2%, хромосомы 13/21 - 23,5% и хромосома 16 - 7,1%, при полиплоидии - в 56,4% Таким образом, мозаицизм был выявлен при анеуплоидии всех исследованных хромосом и полиплоидии Цитогенетическое и молекулярно-цитогенетическое исследования группы детей (п=354) позволили обнаружить хромосомный мозаицизм у 5,9% (п=21) всех обследованных детей, причем с помощью дополнительного FISH исследования удалось выявить «скрытый» мозаицизм у 10 из 17 детей (59%) со стертой клинической картиной хромосомных синдромов и немозаичным кариотипом, определенным цитогенетическим методом При сравнении результатов, полученных в двух группах, было показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов наблюдались в четыре раза чаще, чем в группе детей - 24,6% и 5,9%, соответственно Наиболее частой мозаичной анеуплоидией в двух группах была анеуплоидия хромосомы X Мозаичные формы численных хромосомных аномалий в обеих группах наблюдались преимущественно у женского пола, соотношение полов (мужской/женский) составляло 22/37 (0,59) среди спонтанных абортусов и 4/17 (0,24) в группе детей.
На основании результатов исследования, учитывая высокий уровень хромосомного мозаицизма с присутствием нормальной клеточной линии в материале спонтанных абортусов, можно заключить, что мозаичные формы являются значимым фактором внутриутробной гибели плода, ранее неизвестным в эмбриональном развитии На основании проведенных исследований было определено, что в FISH анализе для выявления возможного мозаицизма нуждается большое число пациентов со стертой клинической картиной (forme fruste) таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы X, а также с дисгенезией гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом Молекулярно-цитогенетические исследования будут способствовать более эффективной диагностике хромосомной патологии и корректному медико-
19
генетическому консультированию семей, имеющих ребенка с хромосомной патологией, включая мозаичные формы
ВЫВОДЫ
1 Определена частота мозаичных форм численных хромосомных аномалий на ранних стадиях внутриутробного развития (в материале спонтанных абортусов сроком от 4 до 15 недель) методом mFISH, которая составила 24,6%
2 Определена частота мозаичных форм хромосомных аномалий среди детей возрастом от 1 недели до 5 лет с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития цитогенетическим методом в 3,4%, а в сочетании с FISH диагностикой - в 5,9%
3 Мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в четыре раза чаще в эмбриональном, чем в постнатальном развитии, что свидетельствует о высокой летальности плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий в первом - начале второго триместрах беременности
4 Разработаны следующие показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики для выявления хромосомного мозаицизма а) детям со стертой клинической картиной (forme fruste) таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы X, б) девочкам с признаками синдрома Шерешевского-Тернера, дисгенезией гонад при нормальном кариотипе, в) детям с хромосомным мозаицизмом, выявленным в малой доле (2-3%) клеток
5 Обнаружено преобладание женского пола среди мозаичных форм хромосомных аномалий в эмбриональном и постнатальном развитии соотношение полов (мужской/женский) - 22/37 (0,59), и 4/17 (0,24), соответственно
6 Разработан способ приготовления цитологических препаратов клеток экстраэмбриональных тканей для проведения многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH) Оптимизированы условия проведения метода интерфазной mFISH на эмбриональных клетках
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Для выявления мозаичных форм хромосомных аномалий в постнатальном развитии рекомендовано проведение молекулярно-цитогенетического исследования (FISH), как дополнительного эффективного метода диагностики хромосомного мозаицизма низкого уровня по следующим показаниям, детям со стертой клинической картиной таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы X; девочкам с отдельными признаками синдрома Шерешевского-Тернера, дисгеяезией гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом, детям с хромосомным мозаицизмом в малой доле (2-3%) клеток, выявленной цитогенетическим методом. При исследовании
20
хромосомного набора спонтанных абортусов рекомендовано применение молекулярно-цитогенетического метода FISH с использованием ДНК проб на хромосомы, наиболее часто вовлеченные в анеуплоидию для выявления «скрытых» мозаичных форм численных хромосомных аномалий. Для более эффективного выявления хромосомного мозаицизма рекомендовано проведение интерфазной многоцветовой FISH с анализом большого числа клеток (300-1000) Рекомендуется приготовление препаратов интерфазных клеток ворсин хориона для FISH диагностики на основе выделения и фиксации клеток в пробирке, а не на стекле. При проведении интерфазного молекулярно-цитогенетического анализа следует учитывать как сроки приготовления препаратов, так и условия их последующей обработки
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВПС - врожденный порок сердца
ЗПРР - задержка психоречевого развития
ЗПМР - задержка психомоторного развития
ЗФР - задержка физического развития
MBITP - множественные врожденные пороки развития
MAP - микроаномалии развития
CA - спонтанные абортусы
СШТ - сивдром Шерешевского - Тернера
ХА - хромосомные аномалии
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Ворсанова С.Г, Юров Ю Б , Соловьев И В , Демидова И А, Шаронин В О , Вехова H В, Берешева А К, Мале Р, Жиоллант М,, Колотий А Д. Кравец В С, Казанцева Л 3 , Ройзес Ж Современные достижения молекулярной цитогенетики в диагностике хромосомной патологии у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии 1998 -43-1 -С 31-36
2. Ворсанова С Г, Юров Ю Б, Соловьев И В , Демидова И А, Шаронин В О, Мале Р., Жиоллант M, Берешева А К, Колотий А Д. Кравец B.C., Руазес Ж Современные методы молекулярной цитогенетики в пре- и постнатальной диагностике хромосомной патологии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - 8 - С 3639
3. Колотий А Д.. Бердникова Е К, Кешишян Е С, Берешева А К, Ворсанова С Г Случай кольцевой хромосомы 11 у девочки 10-ти месяцев использование методов молекулярно-цитогенетической диагностики // Материалы II Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». - Москва, Россия, 2003 -С 145-146
4 Ворсанова С Г, Соловьев И В , Юров И Ю , Демидова И А , Берешева А К, Колотий А Д, Монахов В В , Кравец В С., Юров Ю Б Цитогенетическая и молекулярная диагностика различных форм умственной отсталости у детей // «Южно-Российский медицинский журнал». 2004. - 2 - С 61-66
5. Колотий А Д. Ворсанова С Г, Юров И Ю., Монахов В В, Кириллова Е А, Юров ЮБ Использование многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH) для определения численных хромосомных аномалий спонтанных абортусов // Збфник науковихпраць¡мПЛ Шупика Кшв,Украша 2004 - 13 - 5 -С 140-147.
6. Ворсанова С Г, Колотий АД, Юров И Ю, Кириллова Е А, Монахов В В, Берешева А К, Соловьев И В, Юров Ю Б Диагностика численных хромосомных аномалий в клетках спонтанных абортусов с помощью многоцветовой флюоресцентной гибридизации m situ 11 Клиническая лабораторная диагностика. 2005 - 11 -С30-32
7. Колотий А.Д.. Демидова И А, Берешева А К, Юров И Ю, Кравец В С, Монахов В В, Куринная О С, Новиков П В, Юров Ю Б, Ворсанова С Г. Результаты цитогенетического и молекулярно-цитогенетического (FISH) исследования детей возрастной группы 10-15 лет II Материалы V Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» -Москва, Россия 2006 - С 55-56
8 Yurov Y В , Vorsanova S G, Kolotti А Р., Soloviev IV Interphase FISH analysis of DNA replication at Rett syndrome //Annales de Genetique 2001 -44.-1 -P123.
9 Vorsanova S G, Beresheva А К, Demidova I.A, Kolotii A.D.. Iourov I Y, Baleva L S , Sokha LG, Soloviev IV, Yurov YuB Cytogenetic and molecular-cytogenetic investigation of chromosomal anomalies and variants in children inhabiting regions of Russia polluted after Chernobyl accident //Chromosome Research 2001 -9 -1 -P 187.
10. Yurov Y В , Vorsanova S G, Kolotii A.P . Soloviev IV, D'Esposito M FISH analysis of replication in interphase cells at Rett syndrome the search of the targeting loci in the chromosome X //Chromosome Research 2001 - 9 - 1.-P.189
11. Yurov Y В, Vorsanova S G, Kolotii A.P. Soloviev I.V Interphase FISH studies of replication timing at Rett syndrome using chromosome X specific DNA probes // European Journal of Human Genetics 2001 -9 -1 -P160
12. Yurov Y.B, Vorsanova S G, Kolotii A P, Iourov IY., Shemson P.M, Monakhov V.V FISH analysis of DNA replication of chromosome X loci in Rett syndrome using interphase fluorescence in situ hybridization II Brain Development 2002 - 24 -6 - P 558559
13. Vorsanova S G, Kirillova E A, Yurov Y В , Kolotii A P . Monakhov V V, Iourov IY, Beresheva А К Chromosome abnormalities in spontaneous abortions application of multicolor fluorescent m situ hybridization and original DNA probes for chromosomes 1,9, 13, 14, 16, 18, 21, 22, X and Y // Balkan Journal of Medical Genetics 2003 - 6 - 4 -P 49-53
14. Vorsanova S G , Kirillova E A , Monakhov V V , Kolotn A D , Iourov I Y, Beresheva AK, Yurov YB Molecular-cytogenetic investigation of chromosomal anomalies in spontaneous abortions application of interphase mFISH analysis and original DNA probe collection // Ann Genet 2003 - 46 -2-3 - P 204-205
15. Vorsanova S G., Kolotii A.D.. Iourov IY, Monakhov V V, Kirillova E A, Soloviev I. V., Yurov Yu.B Evidence for high frequency of chromosomal mosaicism m spontaneous abortions revealed by interphase FISH analysis // J Histochem Cytochem, 2005 -53 -3 -P 375-380
16. Iourov IY, Liehr T, Vorsanova S G, Kolotn A P., Yurov Y B Visualization of interphase chromosomes in postmitotic cells of the human brain by multicolor banding (MCB) // Chromosome Research 2006 - 3 - P 223-229.
17. Yurov Y.B, Iourov IY, Vorsanova S G, Liehr T, Kolotii A D . Kutsev SI, Pellestor F., Beresheva A K, Demidova IA, Kravets V S, Monakhov V V., Soloviev IV Aneuploidy and confined chromosomal mosaicism in the developing human brain.// Plos One-2007-2-6 e558
18. Yurov Y B, Vorsanova S G, Iourov IY, Demidova IA, Beresheva A K, Kravets VS, Monakhov V.V, Kolotii A D. Voinova-Ulas V.Y, Gorbachevskaya N.L Unexplained autism is frequently associated with low-level mosaic aneuploidy // J Med Genet 2007-44-8-P521-525
Колотий Алексей Дмитриевич (Россия)
«Молекулярно-цитогенетические исследования мозаичных форм численных хромосомных аномалий в постнатальном и эмбриональном развитии»
Диссертационная работа посвящена выявлению мозаичных форм численных хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов ранних сроков беременности (эмбриональное развитие) и у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития (постнатальное развитие) с помощью метода флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) Определено, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий у спонтанных аборту сов наблюдаются в 24,6%, а в группе детей в 5,9%, из чего можно заключить, что не только регулярные, но и мозаичные формы численных хромосомных аномалий являются значимым этиологическим фактором внутриутробной гибели плода на ранних стадиях эмбриогенеза Разработаны показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики детям для выявления хромосомного мозаицизма Было показано, что хромосомный мозаицизм встречается чаще у индивидуумов женского пола, как в эмбриональном, так и в постнатальном развитии.
Kolotiy Alexey Dmitrievich (Russia)
«Molecular-cytogenetic investigation of mosaic forms of numeric chromosomal abnormalities in postnatal and embryonal development»
The present study was devoted to revealing mosaic forms of numeric chromosomal abnormalities m spontaneous abortions of early term pregnancies (embrional development) and in children with developmental delay, congenital developmental anomalies and/or microanomalies (postnatal development) by means of fluorescence m situ hybridization (FISH) It was determined, that mosaic forms of numeric chromosomal abnormalities in spontaneous abortions were observed m 24,6% and m group of children in 5,9% These data indicate that not only regular, but also mosaic forms of numeric chromosomal abnormalities are a strong aetiological factor of mtrauteral fetal death at early stages of embryogenesis Indications for molecular-cytogenetic diagnosis for revealing chromosomal mosaicism in children were developed It has been established that chromosomal mosaicism is observed more often in females both in embrional and postnatal development
Подписано в печать 14 08 2008 г Печать трафаретная
Заказ № 628 Тираж 100зкз
Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (499) 788-78-56 www autoreferat ru
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Колотий, Алексей Дмитриевич
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.4.
1. ВВЕДЕНИЕ.5.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.11.
2.1 Хромосомные аномалии и клеточный мозаицизм.11.
2.1.1. Классификация хромосомных аномалий.11.
2.1.2. Клеточный мозаицизм по аномалиям хромосом, общая характеристика.12.
2.1.3. Мозаичные формы анеуплоидий.13.
2.1.4. Современные подходы к исследованию мозаичных форм хромосомных аномалий.17.
2.2. Мозаичные формы хромосомных аномалий в эмбриональном развитии.18.
2.2.1. Хромосомные аномалии у спонтанных абортусов.19.
2.2.1.1. Хромосомные аномалии в материале спонтанных абортусов, выявляемые цитогенетическими методами.20.
2.2.1.2. Хромосомные аномалии в материале спонтанных абортусов, выявляемые, с помощью молекулярно-цитогепетических методов.24.
2.2.1.3. Хромосомные аномалии у повторных спонтанных абортусов.28.
2.2.1.4. Хромосомные аномалии у супружеских пар с повторными спонтанными абортами.29.
2.2.2. Летальность эмбрионов при хромосомных аномалиях.32.
2.3. Мозаичные формы различных хромосомных аномалий в постнатальном развитии.34.
2.3.1. Мозаичные формы численных аномалий гопосом (хромосомы X и У).36.
2.3.1.1. Хромосома X.36.
2.3.1.2. Хромосома У.42.
2.3.2. Численные аномалии аутосом, их мозаичные формы.44.
2.3.2.1. Трисомия хромосомы 8.44.
2.3.2.2. Трисомия хромосомы 9.46.
2.3.2.3. Трисомия хромосомы 13 (синдром Патау).47.
2.3.2.4. Трисомия хромосомы 18 (синдром Эдвардса).48.
2.3.2.5. Трисомия хромосомы 21 (синдром Дауна).50.
2.3.2.6. Трисомия хромосомы 22 (синдром «кошачьего глаза»).53.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-цитогенетические исследования мозаичных форм численных хромосомных аномалий в постнатальном и эмбриональном развитии"
Актуальность темы.
Достижения медицинской генетики последних лет связаны с разработкой и внедрением новых высокоэффективных технологий в диагностику наследственной патологии, в том числе и хромосомной. Несмотря на эти достижения, проблемы, связанные с изучением мозаичных форм численных и структурных аномалий хромосом, с их влиянием на эмбриональное и постнатальное развитие, по-прежнему, остаются недостаточно изученными и актуальными. Увеличение частоты врожденной патологии среди новорожденных, наблюдаемое в последнее время, также требует применения эффективных методов генетической диагностики (Ворсанова и др., 19986, 2006; Кириллова и др., 2000; Iourov et al., 2006).
Среди всей хромосомной патологии численные хромосомные аномалии остаются одной из основных причин умственной отсталости, врожденных пороков развития, а также отягощенного акушерского анамнеза (Ворсанова и др., 1999, 2006). Так, при общей частоте хромосомных аномалий в 0,5-0,8% у живорожденных численные аномалии составляют 50-60% (Bond, Chandley, 1983; Hassold et al., 1980; Iourov et al., 2006). В группе мертворожденных эти цифры выше: при общей частоте хромосомной патологии в 6-7% численные аномалии встречаются в 70-85% случаев (Machin, Crolla, 1974; Nielsen, Wohlert, 1991). Наиболее высокая частота численных аномалий хромосом наблюдается в материале спонтанных абортусов 1-го триместра беременности: при общей частоте хромосомной патологии в 45-65% численные хромосомные аномалии в этой группе составляют 92-97% (Jacobs, Hassold, 1995; Warburton et al., 1986).
При численных хромосомных аномалиях возможна и эффективна цитогенетическая диагностика. Однако мозаичные формы хромосомной патологии, когда в организме присутствуют две или более клеточных линий, сложны для диагностики (Ворсанова, 1991; Ворсанова и др., 1989, 2006).
Последнее время появляется все больше работ, указывающих на связь низкопроцентного мозаицизма с клиническими проявлениями. Наличием мозаицизма можно объяснить степень тяжести заболевания при различных хромосомных синдромах. Присутствие у больного определенной доли нормальных клеток при таких хромосомных синдромах, как Шерешевского-Тернера, Клайнфельтера, Дауна, Эдвардса, трисомии по хромосомам 22 и X предполагает более благоприятный прогноз течения болезни, а своевременная эффективная диагностика мозаичных форм хромосомных аномалий способствует лечебной коррекции, особенно при аномалиях половых хромосом. Обнаружение же незначительной доли клеток с хромосомной аномалией может объяснить причину заболевания. Выявление такого «скрытого» хромосомного мозаицизма с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов позволит провести эффективную медико-генетическую консультацию с корректным диагнозом, определить прогноз и соответствующую терапию больному ребенку .
В настоящее время осуществляется множество исследований для определения частоты мозаичных форм численных хромосомных аномалий. Проведение цитогенетических и молекулярно-цитогенетических исследований по наиболее часто встречающимся анеуплоидиям в группе детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития, а также нарушением полового развития е определением их частоты в этой группе является актуальным.
Известно, что около 50% спонтанных абортусов первого триместра беременности этиологически связаны с численными хромосомными аномалиями плода или плаценты (Hassold et al., 1980; Jacobs, Hassold, 1995; Kalousek, 1987; Vorsanova et al., 2005; Warburton et al., 1986). Доля мозаичных форм хромосомных аномалий в этих случаях также оценена недостаточно по причине небольшого числа молекулярно-цитогенетических исследований в этой области. Молекулярно-цитогенетические методы позволяют с эффективностью определить долю мозаичных форм хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов и у детей с умственной отсталостью, пороками и/или микроаномалиями развития. Мозаицизм низкого уровня может приводить как к внутриутробной гибели плода, так и послужить причиной рождения больного ребенка.
Наиболее применяемым методом молекулярно-цитогенетической диагностики для выявления мозаицизма является метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH), основанный на использовании хромосомоспецифичных ДНК проб. Метод многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH) на неделящихся интерфазных клетках различных тканей позволяет избежать проблем, связанных с получением хромосомных препаратов, дает возможность исследования различных тканей, и за счст анализа большого числа клеток за короткое время получить высоко достоверные результаты (Soloviev et al., 1995; Vorsanova et al., 1997; Yurov et al., 2002).
Известно, что к наиболее распространенным формам анеуплоидии у детей относятся следующие: трисомия хромосомы 21 (синдром Дауна) с частотой 1:600-800 у новорожденных (Ворсанова и др., 1999, 2006; Nielsen, 1975), трисомия хромосомы 18 (синдром Эдвардса) с частотой 1 : 7000 у новорожденных (Ворсанова и др., 1999, 2006), трисомия хромосомы 13 (синдром Патау) с частотой 1:6000-13000 (Ворсанова и др., 2006), моносомия хромосомы X у девочек (синдром Шерешевского-Тернера) с частотой 1 : 1900-2500 (Бужисвская, Выговская, 1990; Ворсанова и др., 1999, 2006; Nielsen, Wohlert, 1991), дисомия хромосомы X у мальчиков (синдром Клайнфельтера) с частотой 1 : 570-850 (Ворсанова и др., 1999, 2006; Nielsen, Wohlert, 1991), трисомия хромосомы X у девочек (синдром трисомии X) с частотой 1 : 950-1500 (Ворсанова и др., 1999, 2006; Nielsen, Wohlert, 1991) и синдром дисомии хромосомы Y с частотой 1 : 850-1000 новорожденных мальчиков (Ворсанова и др., 1999, 2006; Nielsen, Wohlert, 1991). Все вышеперечисленные хромосомные синдромы могут встречаться в виде мозаичных форм.
Исследования наиболее распространенных форм численной хромосомной патологии, проведенные в двух группах, а именно, в группе детей с умственной отсталостью, пороками и/или микроаномалиями развития, а также в материале спонтанных абортусов, могли бы способствовать определению частоты пренатального и постнатального хромосомного мозаицизма, пониманию механизмов его возникновения, а также определению частоты мозаичных форм хромосомных аномалий, приводящих к гибели плода па ранних стадиях эмбриогенеза.
Исходя из вышесказанного определялись цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования:
С помощью многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH) определить частоту мозаичных форм численных аномалий хромосом в эмбриональном и постнатальном развитии и разработать показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики «скрытых» форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития.
Задачи исследования:
1. Определить частоту различных форм хромосомного мозаицизма наиболее частых численных хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов с помощью методов молекулярно-цитогенетической интерфазной диагностики (группа I).
2. Определить частоту различных форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития с помощью методов цитогенетической и молекулярно-цитогенетической диагностики (группа II).
3. Провести сравнительный анализ частоты различных форм хромосомного мозаицизма в двух обследуемых группах, на основании которого оценить вклад мозаичных форм хромосомной патологии в общую частоту анеуплоидий в раннем онтогенезе.
4. Разработать показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики «скрытых» форм хромосомного мозаицизма у детей с умственной отсталостью, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития.
5. Разработать метод приготовления цитологических препаратов из различных тканей спонтанных абортусов для молекулярно-цитогенетической диагностики. Оптимизировать условия проведения метода mFISH для интерфазной молекулярно-цитогенетической диагностики на клетках различных тканей.
Научная новизна:
Впервые определена частота мозаичных форм наиболее часто встречающихся хромосомных синдромов у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития. Впервые проведена оценка частоты мозаичных форм наиболее частых хромосомных аномалий в раннем эмбриональном развитии на большой выборке спонтанных абортусов с применением методов молекулярно-цитогенетической диагностики. Впервые при сравнении различных форм эмбрионального и постнатального мозаицизма оценен их вклад в общую частоту численных хромосомных аномалий (анеуплоидий и полиплоидий) на ранних стадиях онтогенеза. Впервые показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в четыре раза чаще в эмбриональном, чем в постнатальном развитии, что свидетельствует о высокой летальности плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий в первом - начале второго триместрах беременности. Впервые обнаружено преобладание женского пола среди мозаичных форм хромосомных аномалий в эмбриональном и постнатальном развитии: соотношение полов (мужской/женский) - 22/37 (0,59), и 4/17 (0,24), соответственно.
Практическая значимость:
На основании оценки частоты мозаицизма по отдельным хромосомам, включая «скрытые» формы, и анализа фенотипа детей с мозаичными формами хромосомных синдромов определены следующие показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики: стертая клиническая картина (forme fruste) таких хромосомных синдромов у детей, как синдромы Дауна, Эдвардса, трисомии хромосомы X, Шерешевского-Тернера; дисгенезия гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом. Эффективность выявления «скрытых» мозаичных форм численных ХА молекулярно-цитогенетическим методом на интерфазных клетках показывает целесообразность использования FISH метода для выявления хромосомной патологии, включая мозаичные формы, в пренаталыюй и постнатальной диагностике. Разработан метод приготовления цитологических препаратов клеток эмбриональных тканей для проведения интерфазной многоцветовой молекулярно-цитогенетической диагностики. Оптимизированы условия проведения метода mFISH на интерфазных клетках.
Практические рекомендации:
Для выявления мозаичных форм хромосомных аномалий в постнатальном развитии, рекомендовано проведение молекулярно-цитогенетического исследования (FISH), как дополнительного эффективного метода диагностики хромосомного мозаицизма низкого уровня по следующим показаниям: детям со стертой клинической картиной таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы X; девочкам с отдельными признаками синдрома Шерешевского-Тернера, дисгенезией гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом; детям с хромосомным мозаицизмом в малой доле (2-3%) клеток, выявленной цитогенетическим методом. При исследовании хромосомного набора спонтанных абортусов рекомендовано применение молекулярно-цитогенетического метода (FISH) с использованием ДНК проб на хромосомы, наиболее часто вовлеченные в анеуплоидию для выявления «скрытых» мозаичных форм численных хромосомных аномалий. Для более эффективного выявления хромосомного мозаицизма рекомендовано проведение интерфазной многоцветовой FISH с анализом большого числа клеток (300-1000). Рекомендуется приготовление препаратов интерфазных клеток ворсин хориона на основе выделения и фиксации клеток в пробирке, а не на стекле, как принято для цитогенетической диагностики. При проведении интерфазного молекулярно-цитогенетического анализа следует учитывать как сроки приготовления препаратов, так и условия их последующей обработки.
Область применения и формы внедрения:
Результаты диссертационной работы использованы для диагностики хромосомных аномалий у детей с задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий; при медико-генетическом консультировании супружеских пар с нарушением репродуктивной функции в клинике акушерства и гинекологии Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова, консультативном отделении МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий, лаборатории цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН.
Положения, выносимые на защиту:
1. Определена частота мозаичных форм численных аномалий в эмбриональном развитии на большой выборке спонтанных абортусов ранних сроков беременности по хромосомам 9, 13/21, 14/22, 15, 16, 18, X и Y и полиплоидии, которая составила 24,6%.
2. Определена частота мозаичных форм хромосомных аномалий в раннем постнатальном развитии, которая составила 5,9% в группе детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития.
3. Показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в материале спонтанных абортусов в четыре раза чаще, чем у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития. Таким образом, значительная часть плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий погибает на ранних стадиях эмбриогенеза. 4. Разработаны показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики (FISH) с целью выявления «скрытого» мозаицизма у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроапомалиями развития.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Колотий, Алексей Дмитриевич
6. ВЫВОДЫ
1. Определена частота мозаичных форм численных хромосомных аномалий на ранних стадиях внутриутробного развития (в материале спонтанных абортусов сроком от 4 до 15 недель) методом mFISH, которая составила 24,6%.
2. Определена частота мозаичных форм хромосомных аномалий среди детей возрастом от 1 недели до 5 лет с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития цитогенетическим методом в 3,4%, а в сочетании с FISH диагностикой - в 5,9%.
3. Мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в четыре раза чаще в эмбриональном, чем в постнатальпом развитии, что свидетельствует о высокой летальности плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий в первом - начале второго триместрах беременности.
4. Разработаны следующие показания к проведению молекулярно-цитогенетической диагностики для выявления хромосомного мозаицизма: а) детям со стертой клинической картиной (forme fruste) таких хромосомных синдромов, как синдромы Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы X; б) девочкам с признаками синдрома Шерешевского-Тернера, дисгенезией гонад при нормальном кариотипе; в) детям с хромосомным мозаицизмом, выявленным в малой доле (2-3%) клеток.
5. Обнаружено преобладание женского пола среди мозаичных форм хромосомных аномалий в эмбриональном и постнатальном развитии: соотношение полов (мужской/жепский) - 22/37 (0,59), и 4/17 (0,24), соответственно.
6. Разработан способ приготовления цитологических препаратов клеток экстраэмбриональных тканей для проведения многоцветовой флюоресцентной гибридизации in situ (mFISH). Оптимизированы условия проведения метода интерфазной mFISH на эмбриональных клетках.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Среди всей хромосомной патологии численные хромосомные аномалии остаются одной из основных причин умственной отсталости, врожденных пороков развития, а также отягощенного акушерского анамнеза (Ворсанова и др., 1999, 2006). Так, у живорожденных численные аномалии хромосом составляют 50-60%, а в материале спонтанных абортусов 1-го триместра беременности - 92-97% от всей хромосомной патологии (Bond, Chandley, 1983; Hassold et al., 1980; Iourov et al., 2006; Jacobs, Hassold, 1995; Nielsen, 1975; Warburton et al., 1986). При численных хромосомных аномалиях возможна и эффективна цитогенетическая диагностика. Однако мозаичные формы хромосомной патологии сложны для определения этим методом (Ворсанова и др., 1989, 1999, 2006; Ворсанова, 1991), особенно, в случае мозаицизма низкого уровня (до 10%). Различия степени тяжести таких хромосомных синдромов, как Шерешевского-Тернера, Дауна, Эдвардса и др. могут быть тесно связаны с наличием хромосомного мозаицизма. Кроме того, известно, что около 50% спонтанных абортусов первого триместра беременности этиологически связаны с численными хромосомными аномалиями (Ворсанова и др., 2006; Hassold et al., 1980; Jacobs, Hassold, 1995; Kalousek, 1987; Warburton et al., 1986). Доля мозаичных форм хромосомных аномалий в этих случаях также оценена недостаточно. Выявление форм «скрытого» хромосомного мозаицизма с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов позволяет провести эффективную медико-генетическую консультацию семьям, имеющим детей с генетическими заболеваниями или спонтанные аборты в анамнезе. Кроме того, применение молекулярно-цитогенетических методов исследования позволяет более корректно определить частоту численных хромосомных аномалий в эмбриогенезе и онтогенезе.
Для определения частоты хромосомного мозаицизма в эмбриональном и постнатальном развитии и оценки внутриутробной летальности эмбрионов с этой формой хромосомной патологии нами были проведены исследования с помощью молекулярно-цитогеиетического метода (FISH) в двух группах: группа I - 240 спонтанных абортусов сроком от 4 до 15 недель, группа II - 354 ребенка в возрасте от 1 недели до 5-ти лет с недифференцированной задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками и/или микроаномалиями развития.
В группе I, интерфазным методом mFISH, используя ДНК пробы на хромосомы 9, 15, 16, 18, 13/21, 14/22, X и Y, было обнаружено 57,5% численных хромосомных аномалий, среди которых мозаичные формы составляли 42,8% или 24,6% от общего числа спонтанных абортусов. Анеуплоидия хромосомы X была наиболее частой среди всех обнаруженных анеуплоидий при исследовании спонтанных абортусов и составляла 27,5% среди всех хромосомных аномалий. Мозаичные формы в материале спонтанных абортусов встречались при анеуплоидии хромосомы X в 53,8%, при полиплоидии - в 56,4%, при анеуплоидиях хромосомы 9 - в 50%, хромосомы 15 - в 60%, хромосомы 18 - в 67%, хромосом 14/22 - в 46,2%, хромосом 13/21 - в 23,5% и хромосомы 16 - в 7,1%.
При анализе материнского возраста в группе I были получены следующие данные: средний материнский возраст был значимо ниже при наличии у плода регулярной моносомии X - 26,7±3,8 лет (средний возраст ± стандартное отклонение) (р<0,01) и мозаичной полиплоидии - 27,2+3,8 (р<0,01); и значимо выше при наличии у плода трисомии хромосом 13 или 21 - 34,5±5,7 лет (р<0,001), а также нескольких хромосомных аномалий в одном образце - 35,3+7,2 лет (р<0,01). Эти результаты соответствуют данным литературы (Eiben et al., 1990; Reddy, 1997; Rua et al., 1995; Warburton et al., 1980). Повышенный возраст наблюдался также у матерей, имеющих спонтанные абортусы с мозаичной формой анеуплоидии X - 34,4+6,7 лет (р<0,01). Таких данных в литературе обнаружено не было. Известно об увеличении доли анеуплоидии X в соматических клетках у женщин с возрастом (Galloway, Buckton, 1978; Guttenbach et al., 1995; Nowinski et al., 1990). Возможно, это явление связано с нестабильностью генома. Подтверждением этого предположения могут служить и такие данные литературы, как повторные спонтанные аборты у женщин с повышенным уровнем анеуплоидии хромосомы X (Ворсанова и др., 1998а; Wu et al., 1993), а также повышенный риск рождения ребенка с трисомией аутосом у женщин более старшего возраста (Ворсанова и др., 1999, 2006; Eiben et al., 1990). Кроме того, в нашем исследовании сроки беременности при мозаичных формах моносомии X у плода были достоверно меньшими, чем при регулярных формах - 7,7нед. и 10,1нед., соответственно (р<0,01). На основании результатов исследования и данных литературы можно предположить, что мозаичные формы анеуплоидии X у спонтанных абортусов являются проявлением нестабильности генома, которая приводит к негативному влиянию на развитие плода, аналогично регулярным формам анеуплоидии хромосомы X.
Мозаичные формы численных хромосомных аномалий в группе I наблюдались преимущественно у женского пола: 22/37 (0,59), причем преобладание женского пола наблюдалось по всем хромосомным аномалиям. Регулярная форма триплоидии наблюдалась в два раза чаще у спонтанных абортусов мужского пола, чем у женского, и наоборот - мозаичная полиплоидия более чем в два раза чаще встречается у спонтанных абортусов женского пола. Это различие было статистически достоверно (р<0,05).
Исследование показало, что анеуплоидии аутосом в материале спонтанных абортусов могут сопровождаться анеуплоидиями хромосомы X и тетраплоидиями.
В группе II численные хромосомные аномалии были выявлены цитогенетическим методом у 12,7% детей, что составило 68,2% от всей хромосомной патологии. Хромосомный мозаицизм, обнаруженный в группе детей после цитогенетического исследования, составил 26,7% от численной хромосомной патологии или 3,4% от общей группы. Дополнительные FISH исследования выявили мозаичные формы у 10 из 17 больных с цитогенетически определенным регулярным аномальным или нормальным кариотипом. Вследствии чего доля мозаичных форм в группе II составила 5,9% или 44,4% от численных хромосомных аномалий. Мозаицизм с присутствием двух и более клеточных линий подтвердился молекулярно-цитогенетическим методом у 11 из 12 детей.
Мозаичные формы численных хромосомных аномалий в материале спонтанных абортусов наблюдались в четыре раза чаще, чем в группе детей - 24,6% и 5,9%, соответственно. Эти данные могут говорить о том, что не только регулярные, но и мозаичные формы численных хромосомных аномалий во многих случаях могут приводить к внутриутробной гибели плода.
Мозаичные формы численных хромосомных аномалий в обеих группах наблюдались преимущественно у женского пола, соотношение полов (мужской/женский) составляло 22/37 (0,59) среди спонтанных абортусов и 4/17 (0,24) в группе детей. В группе I преобладание женского пола наблюдалось по всем хромосомным аномалиям (трисомия аутосом, полиплоидия и анеуплоидия X). В группе II большее преобладание женского пола было обусловлено мозаичной анеуплоидией хромосомы X, обнаруженной у девочек. Среди пациентов с признаками синдрома Шерешевского-Тернера мозаичные формы наблюдались у 87,5% больных. Мозаичная анеуплоидия хромосомы X была наиболее частой среди всех мозаичных анеуплоидий в двух группах.
Доля мозаичных форм среди численных хромосомных аномалий в первой и второй исследованной группе составила 42,8% и 44,4%, соответственно. Большое число мозаичных форм в двух исследованных группах указывает на то, что ошибки в постзиготическом расхождении хромосом происходят с большей частотой, чем следовало ожидать. Эффективное выявление мозаичных форм возможно только с помощью молекулярно-цитогенетических методов, таких как флюоресцентная гибридизация in situ.
На основании проведенных исследований можно заключить, что в FISH анализе для выявления возможного мозаицизма нуждаются пациенты со стертой клинической картиной (forme fruste) таких хромосомных синдромов, как Дауна, Эдвардса, Шерешевского-Тернера, трисомии X, а также девочки с признаками синдрома Шерешевского-Тернера, дисгенезией гонад и нормальным кариотипом, определенным цитогенетическим методом. Дополнительные молекулярно-цитогепетические исследования таким пациентам будут способствовать более эффективной диагностике хромосомной патологии и корректному медико-генетическому консультированию.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Колотий, Алексей Дмитриевич, Б.м.
1. Берешева А.К. Роль молекулярно-цитогенетической диагностики в генетическом консультировании супружеских пар с нарушением репродуктивной функции. // Автореф канд диссер, Харьков, 1995.-17 с.
2. Бужиевская Т.И., Выговская Т.В. Анеуплоидии у человека (факты и гипотезы). // Цитология и генетика, 1990.-24.-3.-66-72.
3. Ворсанова С.Г., Бедельбаева К.А., Никишин В.А., Доронин Г.Л., Демидова И.А. Пренатальная диагностика синдрома Эдвардса: мозаичный случай заболевания. // Вопр охр мат и дет, 1982.-8.-70-71.
4. Ворсанова С.Г., Демидова И.А. Оптимизация условий получения дифференциального окрашивания хромосом с помощью С-метода для диагностики хромосомных аномалий. // МНИИПиДХ МЗ РФ. 1988. Рац. предложение №744.
5. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Александров И.А., Демидова И.А., Миткевич С.П., Доронин Л.Г. Молекулярно-цитогенетическая диагностика наследственных болезней, связанных с различными аномалиями хромосом X. // Педиатрия, 1989.-1.-76-80.
6. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Дерягин Г.В., Соловьев И.В., Бытемская Г.А. К методике диагностики анеуплоидий при помощи гибридизации in situ: анализ интерфазных ядер. // Бюлл экспер биол мед, 1991.-10.-413-415.
7. Ворсанова С.Г., Берешева А.К., Казанцева JI.3., Демидова И.А., Шаронин В.О., Соловьев И.В., Юров Ю.Б. Молекулярно-цитогенетическая диагностика хромосомных аномалий у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции. // Пробл репрод, 1998а.-4.-41-46.
8. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Чернышов В.Н. Хромосомные синдромы и аномалии. Классификация и номенклатура. // Ростов-на-Дону. Молот. - 1999. -192с.
9. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Чернышов В.Н. Медицинская цитогенетика (учебное пособие). // М. МЕДПРАКТИКА-М, 2006,- 300с.
10. Давиденкова Е.Ф., Берлинская Д.К., Тысячник С.Ф. Клинические синдромы при аномалиях половых хромосом. // JI. Медицина, 1973.-198с.
11. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П., Барановская Л.И. Хромосомы человека. // Атлас. М. Медицина, 1982.-255-263.
12. Кириллова Е.А., Никифорова O.K., Жученко H.A., Побединский Н.М., Красников Д.Г. Мониторинг врожденных пороков развития у новорожденных. // Рос вест перинат педиатр, 2000.-1.-18-21.
13. Ковалева Н.В., Бутомо И.В., Берлинская Д.К., Ильяшенко Т.Н., Пантова И.Г., Прозорова М.В., Хитрикова JI.E., Шандлоренко С.К. Кариологические характеристики синдрома Дауна: клинические и теоретические аспекты. // Цитология, 1999.- 41 (12).-1014-1021.
14. Ковалева Н.В. Соотношение полов при синдроме Дауна. // Цитология и генетика, 2002.-36(6).-54-69.
15. Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е., Блинникова O.E. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование.//М. Практика, 1996.-410.
16. Кулешов Н.П. Современные проблемы в клинической цитогенетике. // Сб. научных трудов, М., 1991.-91-163.
17. Курило Л.Ф. Некоторые этапы дифференцировки пола, развития половых клеток и органов половой системы.//Пробл репрод, 1996.-2.-62-70.
18. Курило Л.Ф. Доля генетической патологии у пациентов с нарушением развития половой системы. //Сб."Сексопатология и андрология", Киев, 1998.-4,-12.
19. Лазюк Г.И. Тератология человека. // М. Медицина, 1991.- 480.
20. Маринчева Г.С., Гаврилов В.И. Умственная отсталость при наследственных болезнях. // М. Медицина, 1988.-255.
21. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. // М. Медицина, 1975.-295с.
22. Шаронин В.О., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Мхитарова Е.В. Дисомия хромосом в половых клетках мужчин при нарушении сперматогенеза. // Пробл репрод, 1999.-5.-1.-50-53.
23. Юров И.Ю., Ворсанова С.Г., Монахов В.В., Берешева А.К., Соловьев И.В., Юров Ю.Б. Молекулярно-цитогенетическое исследование робертсоновской транслокации 13; 14 и синдрома Дауна у ребенка 3-х лет. // Цитолог и генет, 2004.-38.-6.- 54-59.
24. Юров И.Ю., Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б. Современные достижения в молекулярно-цитогенетической диагностике наследственных болезней. // Клин лаб диагн, 2005,- 11.-21-29.
25. Юров Ю.Б. Оптимизация условий гибридизации клонированных последовательностей ДНК и дифференциального окрашивания хромосом человека. // Бюл экспер биол и мед, 1984.- 595-598.
26. Юров Ю.Б. Молекулярная цитогенетика гетерохроматиновых районов в геноме человека. // Автореф докт дисс, М, 1987.-ЗЗс.
27. Юров Ю.Б., Александров И.А., Миткевич С.П., Яковлев А.Г., Рогаев Е.И., Ворсанова С.Г. Молекулярные маркеры для гетерохроматиновых районов хромосом человека. // М.Наука, 1989.-63-73.
28. Abramsky L., Chappie J. 47,XXY (Klinfelter syndrome) and 47,XYY: estimated rates of and indication for postnatal diagnosis with implications for prenatal counselling.// PrenatDiagn, 1997.-17.-4.-363-368.
29. Altunyurt S., Acar В., Guclu S., Saygili U., Sakizli M. Mosaic form (45X/46XX) of Turner's syndrome. A case report. // J Reprod Med, 2002.-47(12).-1053-1054.
30. Andrew Т., Dunlop W., Roberts D.F. Cytogenetic studies in spontaneous abortuses. Hum Genet, 1984.- 66,- 77-84.
31. Avramopoulos D., Kennerknecht I., Barbi G., Eckert D., Delabar J.M., Maunoury C., Hallbcrg A., Petersen M.B. A case of apparent trisomy 21 without the Down's syndrome phenotype. // J Med Genet, 1997.-34(7).-597-600.
32. Basaran N., Berkil H., Ay N., Durak В., Ataman C., Ozdemir M., Ozon Y.H., Kaya I. A rare case: mosaic trisomy 22. // Ann Genet, 2001.-44(4).-183-186.
33. Bass H.N., Fox M., Wulfsberg E., Sparkes R.S., Crandall B.F. Trisomy 18 mosaicism: clues to the diagnosis. // Clin Genet, 1982.-22(6).-327-330.
34. Be C., Velasquez P., Youlton R. Spontaneous abortion: cytogenetic study of 609 cases.// RevMedChil, 1997.-125(3).-317-322.
35. Benzacken В., Carbillon L., Dupont C., Siffroi J.P., Monier-Gavelle F., Bucourt M., Uzan M., Wolf J.P. Lack of submicroscopic rearrangements involving telomeres in reproductive failures. // Hum Reprod, 2002.- 17.- 5,- 1154-1157.
36. Benirscke K. Chromosomal studies on abortuses. // Trans N Engl Obstet Gynecol Soc, 1963.-17.-171-183.
37. Beratis N.G., Kardon N.B., Hsu L.Y.F., Grossman D., Hirschhorn K. Parental mosaicism in trisomy 18. // Pediatrics, 1972.-50.-6.- 908-911.
38. Boflnger M.K., Soukup S.W. Cat eye syndrome. Partial trisomy 22 due to translocation in the mother. // Arch Pediatr Adolesc Med, 1977.-131.-8.
39. Bond D.C., Chandley A.C. Aneuploidy. // Oxford. Monographs on Medical Genetics., Oxford University Press, 1983.- 11. -198p.
40. Boue A.J., Boue A.A., Lazar P. Retrospective and prospective epidemiological studies of 1500 karyotyped spontaneous human abortions. // Teratology, 1975.-12.- 11-26.
41. Boue A., Boue J., Gropp A. Cytogenetics of pregnancy wastage. // In: Harris H., Hirschhorn K. (eds) Adv hum genet, 1985.-14.- Plenum, New York.- 1-57.
42. Bielanska M., Tan S.L., Ao A. Chromosomal mosaicism throughout human preimplantation development in vitro: incidence, type, and relevance to embryo outcome. // Hum Reprod, 2002.-17.- 2,- 413-419.
43. Cantu E.S., Eicher D.J., Pai G.S., Donahue C.J., Harley R.A. Mosaic vs. nonmosaic trisomy 9: report of a liveborn infant evaluated by fluorescence in situ hybridization and review of the literature. // Am J Med Genet, 1996.- 24.-62(4).-330-335.
44. Carp H., Toder V., Aviram A., Daniely M., Mashiach S., Barkai G. Karyotype of the abortus in recurrent miscarriage. // Fertil Steril, 2001.-75.-4,- 678-682.
45. Chandley A.C., Hargreave T.B., Fletcher J.M., Soos M., Axworthy D., Price W.H. Trisomy 8. Report of a mosaic human male with near-normal phenotype and normal IQ, ascertained through infertility. // Hum Genet, 1980.-55(l).-31-38.
46. Chang H.J., Clark R.D., Bachman H. The phenotype of 45,X/46,XY mosaicism: an analysis of 92 prenatally diagnosed cases. // Am J Hum Genet, 1990.-46(1).-156-167.
47. Chen M., Yeh G.P., Shih J.C., Wang B.T. Trisomy 13 mosaicism: study of serial cytogenetic changes in a case from early pregnancy to infancy. // Prenat Diagn, 2004.-24(2).-137-143.
48. Crowe C.A., Schwartz S., Black C.J., Jaswaney V. Mosaic trisomy 22: a case presentation and literature review of trisomy 22 phenotypes. // Am J Med Genet, 1997.- 5.-71(4).-406-413.
49. Daniely M., Aviram-Goldring A., Barkai G., Goldman B. Detection of chromosomal aberration in fetuses arising from recurrent spontaneous abortion by comparative genomic hybridization. // Hum Reprod, 1998.-13,- 805-809.
50. Daniely M., Aviram A., Carp HJ., Shaki R., Barkai G. The association between sporadic somatic parental aneuploidy and chromosomally abnormal placentae in habitual abortions. // Early Pregnancy, 2001.-5(3).-153-163.
51. DeBrasi D., Genuardi M., D'Agostino A., Calvieri F., Tozzi C., Varrone S., Neri G. Double autosomal/gonosomal mosaic aneuploidy: study of nondisjunction in two cases with trisomy of chromosome 8. // Hum Genet, 1995.-95,- 519-525.
52. De A Moreira L.M., San Juan A., Pereira P.S., de Souza C.S. A case of mosaic trisomy 21 with Down's syndrome signs and normal intellectual development. // J Intellect Disabil Res, 2000.-44.-91-96.
53. De Vries B.B.A., Winter R., Schinzel A., Van Ravenswaaij-Arts C. // Telomeres: a diagnosis at the end of the chromosomes. // J Med Genet, 2003.- 40.-385-398.
54. Devi A.S., Metzger D.A., Luciano A.A., Benn P.A. 45,X/46,XX mosaicism in patients with idiopathic premature ovarian failure. // Fertil Steril, 1998.- 70(1).-89-93.
55. Eiben B., Borgmann S., Schubbe I., Hansmann I. A cytogenetic study directly from chorionic villi of 140 spontaneous abortions. // Hum Genet, 1987.- 77(2).-137-141.
56. Eiben B., Trawicki W., Hammans W., Gocbel R., Pruggmaycr M., Epplen J.T. Rapid prenatal diagnosis of aneuploidies in uncultured amniocytes by fluorescence in situ hybridization. Evaluation of >3,000 cases. // Fetal Diagn Ther, 1999.-14(4).-193-197.
57. Feingold M., Atkins L. A case of trisomy 9. // J Med Genet, 1973.-10(2).-184-187.
58. Flint J., Wilkie A.O., Bucklc V.J., Winter R.M., Holland A.J., McDermid H.E. The detection of subtelomeric chromosomal rearrangements in idiopathic mental retardation. //Nat Genet, 1995.-9.-132-140.
59. Fitzgerald P.H. A mechanism of X chromosome aneuploidy in lymphocytes of aging women.//Humangenetik, 1975.-28.- 153-158.
60. Frias S., Ramos S., Molina B., del Castillo V., Mayen D.G. Detection of mosaicism in lymphocytes of parents of free trisomy 21 offspring. // Mutat Res, 2002.- 26.-520(1-2).-25-37.
61. Frydman M., Shabtal F., Halbrecht I., Elian E. Normal psychomotor development in a child with mosaic trisomy and pericentric inversion of chromosome 9. // J Med Genet, 1981.-18(5).-390-392.
62. Fryns J.P., Kleczkowska A., Kubien E., Van der Berghe H. XYY syndrome and other Y chromosome polysomies. Mental status and psychosocial functioning. // Genet Couns, 1995.-6.-3.-197-206.
63. Gadow E.C., Lippold S., Otano L., Serafín E., Scarpati R., Matayoshi T. Chromosome rearrangements among couples with pregnancy losses and other adverse reproductive outcomes.//Am J Med Genet, 1991.- l.-41(3).-279-281.
64. Gall J.G., Pardue M.L. Nucleic acids hybridization to cytological preparations. // Metod Enzymol, 1971.-21,- 470-480.
65. Galloway S.M., Buckton K.E. Aneuploidy and ageing: chromosome studies on a random sample of the population using G-banding. // Cytogenet Cell Genet, 1978,-20(1-6).-78-95.
66. Gardo S., Bajnoczky K. Cytogenetic analysis of spontaneous abortions with direct analysis of chorionic villi. // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 1992.- 19.-47(2).-l 17120.
67. Gerard-Blanluet M., Danan C., Sinico M., Lelong F., Borghi E., Dassieu G., Janaud J.C., Odent S., Encha-Razavi F. Mosaic trisomy 9 and lobar holoprosencephaly. // Am J Med Genet, 2002.- 15.-111(3).-295-300.
68. Gersdorf E., Utermann B., Utermann G. Trisomy 18 mosaicism in an adult woman with normal intelligence and history of miscarriage. // Hum Genet, 1990.-84(3).-298-299.
69. Golubovsky M.D. Postzygotic diploidization of triploids as a source of unusual cases of mosaicism, chimerism and twinning. // Hum Reprod, 2003.-18.-2.-236-242.
70. Greve G., Waaler P.E., Rosendahl K. Low frequency mosaicism of normal cells in a 16-year-old girl with trisomy 18. // Clin Genet, 1993.-43(2).-83-87.
71. Griffin D.K., Millie E.A., Redline R.W., Hassold T.J., Zaragoza M.V. Cytogenetic analysis of spontaneous abortions: comparison of techniques and assessment of the incidence of confined placental mosaicism. // Am J Med Genet, 1997.- 31.-72(3).-297-301.
72. Guttenbach M., Koschorz B., Bernthaler U., Grimm T., Schmid M. Sex chromosome loss and aging: in situ hybridization studies on human interphase nuclei. // Am J Hum Genet, 1995.-57,- 1143-1150.
73. Harada N., Abe K., Nishimura T., Sasaki K., Ishikawa M., Fujimoto M., Matsumoto T., Niikawa N. Origin and mechanism of formation of 45,X/47,XX,+21 mosaicism in a fetus. // Am J Med Genet, 1998.- 3.-75(4).-432-437.
74. Hassold T. Mosaic trisomies in human spontaneous abortions. // Hum Genet, 1982,-61(1).-31-35.
75. Hassold T., Abruzzo M., Adkins K., Griffin D., Merrill M., Millie E., Saker D., Shen J., Zaragoza M. Human aneuploidy: incidence, origin and etiology. // Environ Mol Mutagen, 1996,- 28,- 167-175.
76. Hassold T., Benham F., Leppert M. Cytogenetic and molecular analysis of sex-chromosome monosomy. // Am J Hum Genet, 1988.- 42(4).-534-541.
77. Hassold T., Chen N., Funkhouser J., Jooss T., Manuel B., Matsuura J., Matsuyama A., Wilson C., Yamane J.A., Jacobs P.A. A cytogenetic study of 1000 spontaneous abortions. // Ann Hum Genet, 1980,- 44.- 151-178.
78. Hassold T.J., Jacobs P.A. Trisomy in man. // Annu. Rev. Genet., 1984.-18.- 69-97.
79. Hogge W.A., Byrnes A.L., Lanasa M.C., Surti U. The clinical use of karyotyping spontaneous abortions. // Am J Obstet Gynecol, 2003.-189(2).-397-400.
80. Hook E.B., Cross P.K., Mutton D.E. Female predominance (low sex ratio) in 47,+21 mosaics. // Am J Med Genet, 1999.-84.-316-319.
81. Horn D., Rommeck M., Sommer D., Korner H. Phylloid pigmentary pattern with mosaic trisomy 13. // Pediatr Dermatol, 1997.-14(4).-278-280.
82. Horiuchi I., Hashimoto T., Tsuji Y., Shimada H., Furuyama J., Koyama K. Direct assessment of triploid cells in mosaic human fetuses by fluorescence in situ hybridization. //Mol Hum Reprod, 1997.-3.-5.- 445-450.
83. Howard P J., Cramp C.E., Fryer A.E. Trisomy 1 mosaicism only detected on a direct chromosome preparation in a neonate. // Clin Genet, 1995.-48(6).-313-316.
84. Hsu L.Y., Hirshhorn K. The trisomy 22 syndrome and the cat eye syndrome. // In: Chromosomes in biology and medicine. Eds.J.J.Yunis. - Acad. Press. N.Y., 1977. -339-368.
85. Hulley B.J., Hummel M., Cook L.L., Boyd B.K., Wenger S.L. Trisomy 8 mosaicism: selective growth advantage of normal cells vs. growth disadvantage of trisomy 8 cells. // Am J Med Genet, 2003,- 15.-116(2).-144-146.
86. Iourov I.Y., Vorsanova S.G., Yurov Y.B. Chromosomal variation in mammalian neuronal cells: known facts and attractive hypotheses. // Internat Rev Cytol, 2006.249.- 143-191.
87. Iourov I.Y., Vorsanova S.G., Yurov Y.B. Intercellular genomic (chromosomal) variations resulting in somatic mosaicism: mechanisms and consequences. // Current Genomics. 2006.-7.- 7.- 435-446.
88. ISCN 1995; ISCN 2005 An international systeme for human cytogenetic nomenclature, F.Mitelman (ed); S.Karger, Basel, 1995.-115; L.G. Shaffer, N. Tommerup (eds); S.Karger, Basel, 2005.-130.
89. Jacobs P.A., Hassold T.J. The origin of numerical chromosome abnormalities. // Adv Genet, 1995.- 33.- 101-133.
90. Jacobs P. A., Brunton M., Court Brown W.M., Doll R. Change of human chromosome count distribution with age: evidence for a sex difference. // Nature, 1963.-197.- 10801081.
91. James R.S., Jacobs P.A. Molecular studies of the aetiology of trisomy 8 in spontaneous abortions and the liveborn population. // Hum Genet, 1996.-97.- 283-286.
92. Jenkins E.C., Schupf N., Genovese M., Ye L.L., Kapell D., Canto B., Harris M., Devenny D., Lee J.H., Brown W.T. Increased low-level chromosome 21 mosaicism in older individuals with Down syndrome. // Am J Med Genet, 1997.- 20.-68(2).-147-151.
93. Jobanputra V., Sobrino A., Kinney A., Kline J., Warburton D. Multiplex interphase FISH as a screen for common aneuploidies in spontaneous abortions. // Hum Reprod, 2002.-17.-1166-1170.
94. Jyothy A., Kumar K.S., Rao G.N., Rao V.B., Swarna M., Devi B.U., Sujatha M„ Kumari C.K., Reddy P.P. Cytogenetic studies of 1001 Down syndrome cases from Andhra Pradesh, India. // Indian J Med Res, 2000.-111.-133-137.
95. Jyothy A., Rao G.N., Kumar K.S., Rao V.B., Uma Devi B., Reddy P.P. Translocation Down syndrome. // Indian J Med Sci, 2002.-56(5).-225-229.
96. Kajii T., Ferrier A., Niikawa N., Takahara H., Ohama K., Avirachan S. Anatomic and chromosomal anomalies in 639 spontaneous abortuses. // Hum Genet, 1980.-55(1).-87-98.
97. Kalousek D.K. Anatomic and chromosomal anomalies in specimens of early spontaneous abortions: seven year experience. // Birth Defects, 1987.-23.-153-168.
98. Kalousek D.K., Barrett I. Confined placental mosaicism and stillbirth. // Pediatr Pathol, 1994.-14(1).-151-159.
99. Kalousek D.K., Langlois S., Robinson W.P., Telenius A., Bernard L., Barrett I.J., Howard-Peebles P.N., Wilson R.D. Trisomy 7 CVS mosaicism: pregnancy outcome, placental and DNA analysis in 14 cases. // Am J Med Genet, 1996.-11.-65(4).-348-352.
100. Kalousek D.K., Vekemans M. Confined placental mosaicism. // J Med Genet, 1996.-33(7).-529-533.
101. Khoury M.J., Erickson J.D. Recurrent pregnancy loss as an indicator for increased risk of birth defects: a population-based case-control study. // Paediatr Perinat Epidemiol, 1993.-7(4).-404-416.
102. Kim S.S., Jung S.C., Kim H.J., Moon H.R., Lee J.S. Chromosome abnormalities in a referred population for suspected chromosomal aberrations: a report of 4117 cases. // J Korean Med Sci, 1999.-14(4).-373-376.
103. Kohn G., Shohat M. Trisomy 18 mosaicism in an adult with normal intelligence. // Am J Med Genet, 1987.-26(4).-929-931.
104. Kokawa K., Shikone T., Nakano R. Apoptosis in human chorionic villi and decidua during normal embryonic development and spontaneous abortion in the first trimester. //Placenta, 1998.-19(l).-21-26.
105. Kovaleva N.V. Sex-specific chromosome instability in early human development. // Am J Med Genet, 2005.-l.-136(4).-401-413.
106. Kukolich M.K., Kulharya A., Jalal S.M., Drummond-Borg M. Trisomy 22: no longer an enigma. // Am J Med Genet, 1989.-34(4).-541-544.
107. La Marche P.H., Heisler A.B., Kronemer N.S. Disappearing mosaicism. Suggested mechanism is growth advantage of normal over abnormal cell population. // Rhode Island Med J, 1967.-50(3).-184-189.
108. Lalchev S., Tzancheva M., Markova R. A case of trisomy 22 with a probable Robertsonian translocation 21/22. // Hum Genet, 1978.-18.-45(2).-219-223.
109. Lestou V.S., Kalousek D.K. Confined placental mosaicism and intrauterine fetal growth . // Arch Dis Child Fetal Neonat Ed, 1998.-79.-223-226.
110. Lestou V.S., Desilets V., Lomax B.L., Barrett I.J., Wilson R.D., Langlois S., Kalousek D.K. Comparative genomic hybridization: a new approach to screening for intrauterine complete or mosaic aneuploidy. // Am J Med Genet, 2000.- 5.-92(4).-281-284.
111. Lin C.C., Breakeleer M.D., Jamro H. Cytogenetic studies in spontaneous abortion: the Calgary experience. // Can J Genet Cytol, 1985.-27.- 565-570.
112. Lomax B.L., Kalousek D.K., Kuchinka B.D., Barrett I,J., Harrison K.J., Safavi H. The utilization of interphase cytogenetic analysis for the detection of mosaicism. // Hum Genet, 1994.- 93.- 243-247.
113. Lorda-Sanchez I., Trujillo M.J., Gomez-Garre P., de Alba M.R., Gonzalez-Gonzalez C., Garcia-Hoyos M., Ayuso C., Ramos C. Turner phenotype in a girl with a 45,X/46,XX/47,XX,+18 mosaicism. // Am J Med Genet, 2003,- 15.-121(l).-20-24.
114. Lund H.T., Tranebjaerg L. Trisomy 22 mosaicism limited to skin fibroblasts in a mentally retarded, dysmorphic girl. // ActaPaediatr Scand, 1990.- 79(6-7).-714-718.
115. Machin G.A., Crolla J.A. Chromosome constitution of 500 infants dying during the perinatal period // Humangenetik, 1974,- 23.- 183-188.
116. Makino T., Tabuchi T., Nakada K., Iwasaki K., Tamura S., Iizuka R. Chromosomal analysis in Japanese couples with repeated spontaneous abortions. // Int J Fertil, 1990.-35(5).-266-270.
117. Maniatis T., Fritch F.F., Sambrook J. Molecular cloning. // A laboratory manual. Cold spring Harbor laboratory press, New York, 1982.-1329p.
118. Mark H.F., Bier J.A. Disappearing trisomy 8 mosaicism. // Ann Clin Lab Sci, 1997.-27(4).-293-298.
119. McDermid H.E., Duncan A.M., Brasch K.R., Holden J.J., Magenis E., Sheehy R., Burn J., Kardon N., Noel B., Schinzel A. Characterization of the supernumerary chromosome in cat eye syndrome. // Science, 1986.- 232.-646-648.
120. Miharu N., Best R.G., Young S.R. Numerical chromosome abnormalities in spermatozoa of fertile and infertile men detected by fluorescence in situ hybridization. // Hum. Genet, 1994.-93.-502-506.
121. Minguillon C., Eiben B., Porsch S.B., Vogel M., Hansmann I. The predictive value of chorionic villus histology for identifying chromosomally normal and abnormal spontaneous abortions. // Hum Genet, 1989.- 82(4).-373-376.
122. Modi D.N., Sane S., Bhartiya D. Accelerated germ cell apoptosis in sex chromosome aneuploid fetal human gonads. // Mol Hum Rcprod, 2003a.-9.-4.-219-225.
123. Modi D.N., Berde P., Bhartiya D. Down syndrome: a study of chromosomal mosaicism. // Reprod BioMed Online, 2003b.- 6,- 4,- 499-503.
124. Nagaishi M., Yamamoto T., Iinuma K., Shimomura K., Berend S.A., Knops J. Chromosome abnormalities identified in 347 spontaneous abortions collected in Japan. // J Obstet Gynaecol Res, 2004.-30(3).-237-241.
125. Nazarenko S.A., Timoshevsky V.A., Sukhanova N.N. High frequency of tissue-specific mosaicism in Turner syndrome patients. // Clin Genet, 1999,- 56(1).-59-65.
126. Nazer J., Eaglin M.A., Cifuentes L. Incidence of Down syndrome at a University Hospital Maternity of Chile. A 25-year record: 1972-1997. // Rev Med Chil, 1998.-126(4).-383-390.
127. Nicolaidis P., Petersen M.B. Origin and mechanisms of non-disjunction in human autosomal trisomies. //HumReprod, 1998.- 13.-313-319.
128. Nielsen J., Wohlert M. Chromosome abnormalities found among 34,910 newborn children: results from a 13-year incidence study in Arhus, Denmark // Hum Genet, 1991.-87(l).-81-83.
129. Nielsen J. Chromosome examination of newborn children. Purpose and ethical aspects. // Humangenetik, 1975.-26.-215-222.
130. Ogasawara M., Aoki K., Okada S., Suzumori K. Embryonic karyotype of abortuses in relation to the number of previous miscarriages. // Fertil Steril, 2000.-73(2).-300-304.
131. Ohno M., Maeda T., Funato T., Yabe N., Matsunobu A., Yoshihara K. Cytogenetic studies in couples with repeated spontaneous abortions. // Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi, 1989.-41(9).-1387-1393.
132. Ohno M., Maeda T., Matsunobu A. A cytogenetic study of spontaneous abortions with direct analysis of chorionic villi. // Obstet Gynecol, 1991.-77.-394-398.
133. Parmar R.C., Sira P. Prenatal diagnosis of partial trisomy 21 associated with maternal balanced translocation 46XX,der21t(21q;22q) with pericentric inversion of chromosome 9. // J Postgrad Med, 2003.-49.-2,- 154-156.
134. Patriarca A., Piccioni V., Gigante V., Parise G., Benedetto C. Recurrent spontaneous abortion. Etiologic factors. //Panminerva Med., 2000.- 42(2).-105-108.
135. Peschka B., Leygraaf J., Van der Ven K., Montag M., Schartmann B., Schubert R., Van der Ven H., Schwanitz G. Type and frequency of chromosome aberrations in 781 couples undergoing intracytoplasmic sperm injection. // Hum Reprod, 1999.-14.-2257-2263.
136. Philipp T., Philipp K., Reiner A., Beer F., Kalousek D.K. Embryoscopic and cytogenetic analysis of 233 missed abortions: factors involved in the pathogenesis of developmental defects of early failed pregnancies. // Hum Reprod, 2003.-18(8).-1724-1732.
137. Pinkel D., Straume T., Gray J.W. Cytogenetic analysis using quantitative, highsensitive fluorescence hybridization. // Proc Natl Acad Sci, 1986.-83.-2934-2938.
138. Plessis G., Le Treust M., Lemaire F., Maugard T., Cau D. Trisomy 18 mosaicism in a mildly retarded boy with postnatal overgrowth. // Ann Genet, 1997.-40(4).-235-237.
139. Qumsiyeh M.B. Chromosome abnormalities in the placenta and spontaneous abortions. // J Matern Fetal Med, 1998.-7(4).-210-212.
140. Rao V.B., Kumari C.K., Sujatha M., Isaac G.S. Maternal reproductive history and the occurrence of Down's syndrome. // J Indian Med Assoc, 1997.-95(9).-495-496.
141. Rasmussen S.A., Wong L-Y.C., Yang Q., May K.M., Friedman J.M. Population-based analyses of mortality in trisomy 13 and trisomy 18. // Pediatrics, 2003.-111.-4.- 777784.
142. Reddy K.S. Double trisomy in spontaneous abortions. // Hum Genet, 1997.-101(3).-339-345.
143. Robinson W.P., Bernasconi F., Lau A., McFadden D.E. Frequency of meiotic trisomy depends on involved chromosome and mode of ascertainment. // Am J Med Genet, 1999.-7.-84(1).-34-42.
144. Rohrer T.R., Gassmann K.F., Rauch A., Pfeiffer R.A., Doerr H.G. Growth of heterokaryotic monozygotic twins discordant for Ullrich-Turner syndrome during the first years of life. //Am J Med Genet, 2004.-l.-126(l).-78-83.
145. Rua S., Comino A., Fruttero A., Abrate M. DNA flow cytometric analysis of abortions. A simple method for detection of triploidy and tetraploidy in the trophoblastic cells. // Pathologica, 1995.-87(2).-107-111.
146. Sachs E.S., Jahoda M.G., Van Hemel J.O., Hoogeboom A. J., Sandkuyl L.A. Chromosome studies of 500 couples with two or more abortions. // Obstet Gynecol, 1985.-65(3).-375-378.
147. Sangha K.K., Stephenson M.D., Brown C.J., Robinson W.P. Extremely skewed X-chromosome inactivation is increased in women with recurrent spontaneous abortion. // Am J Hum Genet, 1999.-65.-913-917.
148. Sasaki M., Makino S., Muramoto J.I., Ikeuchi T., Shimba H. A chromosome survey of induced abortuses in a Japanese population. // Chromosoma, 1967.-20(3).-267-283.
149. Schinzel A. Catalogue of unbalanced chromosome aberrations in man. // Walter de Gruyter Berlin New York., 1984,- 914.; 2nd ed. Walter de Gruyter Inc., Berlin.-2001.-966p.
150. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes. // Lancet, 1972.-2.-971-972.
151. Slavotinek A., Poyser L., Wallace A., Martin F., Gaunt L., Kingston H. Two unique patients with trisomy 18 mosaicism and molecular marker studies. // Am J Med Genet, 2003.-15.-117(3).-282-288.
152. Soloviev I.V., Yurov Y.B., Vorsanova S.G., Malet P. Microwave activation of fluorescence in situ hybridization: a novel method for rapid chromosome detection and analysis. //Focus, 1994.-16.-4.-115-116.
153. Soloviev I.V., Yurov Y.B., Ioannou P., Georghiou A., Hadjimarcou M., Patsalis P.C., Roizes G., Sharonin V.O., Kravets V.S., Vorsanova S.G. Identification and molecular-cytogenetic characterization of large subset of human plasmids, cosmids PAC and
154. YAC clones: the search of DNA probes for pre- and postnatal diagnosis. // Cs Pediatr, 1997.-52.-7.-529-538.
155. Stephenson M.D., Awartani K.A., Robinson W.P. Cytogenetic analysis of miscarriages from couples with recurrent miscarriage: a case control study. // Hum Reprod, 2002.-17.-446-451.
156. Sumner A.T. A simple technique for demonstrating centromeric heterochromatin. // Exp Cell Res, 1972.-75.-304-306.
157. Sybert V.P. Phenotypic effects of mosaicism for a 47,XXX cell line in Turner syndrome. // J Med Genet, 2002.-39.-217-220.
158. Tarani L., Colloridi F., Raguso G., Rizzuti A., Bruni L., Tozzi M.C., Palermo D., Panero A., Vignetti P. Trisomy 9 mosaicism syndrome. A case report and review of the literature.// Ann Genet, 1994.-37(l).-14-20.
159. Tharapel A.T., Tharapel S.A., Bannerman R.M. Recurrent pregnancy losses and parental chromosome abnormalities: a review. // Br J Obstet Gynaecol, 1985.-92(9).-899-914.
160. Thomas S., Parker M., Tan J., Duckett D., Woodruff G. Ocular manifestations of mosaic trisomy 22: a case report and review of the literature. // Ophthalmic Genet, 2004.-25(1).-53-56.
161. Turnpenny P.D., Ellard S. Elements of medical genetics. 12 ed. // Elsevier, 2005.-443p.
162. Uehara S., Hashiyada M., Sato K., Sato Y., Fujimori K., Okamura K. Preferential X-chromosome inactivation in women with idiopathic recurrent pregnancy loss. // Fertil Steril, 2001,- 76.-908-914.
163. Uehara S., Obara Y., Obara T., Funato T., Yaegashi N., Fukaya T., Yajima A. Trisomy 18 mosaicism associated with secondary amenorrhea: ratios of mosaicism in different samples and complications. // Clin Genet, 1996.-49(2).-91-94.
164. Van Haelst M.M., Van Opstal D., Lindhout D., Los FJ. Management of prenatally detected trisomy 8 mosaicism. // Prenat Diagn, 2001.-21(12).-1075-1078.
165. Van Lijnschoten G., Albrechts J., Vallinga M., Hopman A.H., Arends J.W., Geraedts J. Fluorescence in situ hybridization on paraffin-embedded abortion material as a means of retrospective chromosome analysis. // Hum Genet, 1994.-94(5).-518-522.
166. Van Opstal D., Van den Berg C., Galjaard R.J., Los F.J. Follow-up investigations in uncultured amniotic fluid cells after uncertain cytogenetic results. // Prenat Diagn, 2001.-21(2).-75-80.
167. Vorsanova S.G., Yurov Y.B., Soloviev I.V., Demidova I.A., Malet P., Vechova N.V., Roizes G. Molecular-cytogenetic diagnosis of chromosomal anomalies in genetic counseling. // Cs Pediatr, 1997.-7.-538-544.
168. Vorsanova S.G., Kolotii A.D., Sharonin V.O., Soloviev I.V., Yurov Y.B. FISH analysis of microaberrations at telomcric and subtelomeric regions in chromosomes of children with mental retardation. // Am J Hum Genet, 1998.-65.- Suppl.-154.
169. Warburton D., Kline J., Stein Z., Strobino B. Cytogenetic abnormalities in spontaneous abortions of recognized conceptions. // In: Perinatal Genetics: Diagnosis and Treatment. Porter I.H., Willey A. (eds) Academic Press, New York, 1986.-133-148.
170. Warburton D., Kline J., Stein Z., Susser M. Monosomy X: a chromosomal anomaly associated with young maternal age. // Lancet, 1980.-1.-167-169.
171. Wheeler M., Peakman D., Robinson A., Henry G. 45,X/46,XY mosaicism: contrast of prenatal and postnatal diagnosis. //Am J Med Genet, 1988.-29(3).-565-571.
172. Wiktor A., Van Dyke D.L. FISH analysis helps identify low-level mosaicism in Ullrich-Turner syndrome patients. // Genet Med, 2004.-6(3).-132-135.
173. Winsor E.J., Dyack S., Wood-Burgess E.M., Ryan G. Risk of falsepositive prenatal diagnosis using interphase FISH testing: hybridization of alpha-satellite X probe to chromosome 19.//Prenat Diagn, 1999.-19.-832-836.
174. Wisniewska M., Mazurek M. Trisomy 8 mosaicism syndrome, Case report. // J Appl Genet, 2002.-43(1).-115-118.
175. Wolstenholme J. Confined placental mosaicism for trisomies 2, 3, 7, 8, 9, 16 and 22: their incidence, likely origins and mechanisms for cell lineage compartmentalisation. // Prenat Diagn, 1996.-16,- 511-524.
176. Wooldridge J., Zunich J. Trisomy 9 syndrome: report of a case with Crohn disease and review of the literature. // Am J Med Genet, 1995.-10.-56(3).-258-264.
177. Wu R.C., Kuo P.L., Lin S.J., Liu C.H., Tzeng C.C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. // J Formos Med Assoc, 1993.-92(11).-953-956.
178. Yakut S., Berker-Karauzum S., Simsek M., Zorlu G., Trak B., Luleci G. Telomcre-specific fluorescence in situ hybridization analysis of couples with five or more recurrent miscarriages. // Clin Genet, 2002.-61(l).-26-31.
179. Yu M.Y., Chen Y.L., Qiu J. Cytogenetic analysis on patients with a history of spontaneous abortion. // Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban, 2002.-31(5).-375-378.
180. Yurov Y.B., Soloviev I.V., Vorsanova S.G., Alexandrov I.A., Sharonin V.O., Monachov V. DNA probes for pre- and postnatal diagnosis of chromosomal anomalies: a collection for FISH analysis.//Cs Pediatr, 1997.-7.-550-554.
181. Zaragoza M.V., Millie E., Redline R.W., Hassold T.J. Studies of non-disjunction in trisomies 2, 7, 15, and 22: does the parental origin of trisomy influence placental morphology? // J Med Genet, 1998.-35(11).-924-931.
182. Zinn A.R., Tonk V.S., Chen Z., Flejter W.L., Gardner H.A., Guerra R., Kushner H., Schwartz S., Sybert V.P., Van Dyke D.L., Ross J.L. Evidence for a Turner syndrome locus or loci at Xpl 1.2-p22.1. // Am J Hum Genet, 1998.-63(6).-1757-1766.
-
Колотий, Алексей Дмитриевич
-
кандидата биологических наук
-
Б.м., 2008
-
ВАК 03.00.15
- Роль молекулярно-цитогенетических исследований хромосомных аномалий соматических и половых клеток при нарушении репродуктивной системы у пациентов мужского пола
- Структурно-функциональная организация хромосом при нервно-психических заболеваниях
- Цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования детей с аутизмом и их матерей
- Хромосомные аномалии у детей с недиффиренцированной олигофренией и супружеских пар с отяхощенным акушерским анамнезом по данным молекулярно-цитогенетических исследований
- Фенотипический полиморфизм при синдроме дауна как следствие блокады онтогенеза
