Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга
ВАК РФ 03.00.26, Молекулярная генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга"

На правах рукописи

ТУПИЦЫНА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

Молекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга

ООЗОВ4Т52

03.00.26 - Молекулярная генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 2007 г.

003064752

Работа выполнена в Институте молекулярной генетики РАН

Научный руководитель: д б н. Сломинский П А

Официальные оппоненты: д б н. Карпухин А В

д м н Метельская В А

Ведущая организация:

ФГУ Российский НИИ геронтологии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита диссертации состоится «/у» 2007 г в Ж часов

на заседании Диссертационного совета Д00101601в ГУ Медико-генетический научный цент РАМН по адресу 115478, Москва, ул. Москворечье, д 1

ч

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Медико-генетического научного центра РАМН

Автореферат разослан «__»_2007 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

д б н. проф Курило Л Ф

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы.

Достижения современной молекулярной генетики по расшифровке

генома человека способствовали рождению новой науки — медицинской

геномики, одно из центральных мест в которой занимают исследования по

изучению влияния генетических факторов на формирование патологических

состояний человека Особое место в данных исследованиях занимают

заболевания сердечно-сосудистой системы (ССЗ), так как они широко

распространены, характеризуются тяжелым течением, приводящим к

инвалидизации, и высоким уровнем смертности [Оганов Р Г , 2002]. Большое

внимание уделяют таким заболеваниям, как шпемическая болезнь сердца (ИБС)

и ишемическая болезнь мозга (ИБМ) В структуре смертности от ССЗ на долю

этих заболеваний приходится около 85-90% [Оганов Р Г, 2002] Социальную

значимость проблемы усиливает наблюдающаяся в последние годы тенденция

к возникновению инсультов и инфарктов у лиц молодого возраста В связи с

этим исследования, посвященные изучению данных заболеваний, приобретают

особую актуальность

В основе развития ИБС и ИБМ лежит взаимодействие различных

генетических факторов с факторами внешней среды Сложность патогенеза

создает большие трудности при изучении природы этих заболеваний В связи с

этим проблема исследования генетических механизмов ССЗ является

достаточно сложной и связана с разработкой адекватных подходов и методов

анализа, что отмечается многими авторами [Huang S ,2000, Todd J А, 1999]

Один из эффективных подходов к изучению роли генетических механизмов

развития ССЗ связан с выделением группы генов с потенциально наибольшим

вкладом в патогенез заболевания - это так называемые гены-кандидаты

Одним из основных пусковых механизмов патогенеза ИБС и ИБМ

является нарушение функциональных свойств эндотелия, что в дальнейшем

приводит к изменению тонуса сосудистой стенки и дальнейшему развитию и

3

прогрессированию патологического процесса В связи с этим большой интерес представляют гены, продукты которых участвуют в регуляции сосудистого тонуса

Другой хорошо известный механизм развития ССЗ связан с нарушением липидного обмена [Dawber TR, 1980, Shaper AG, 1985] Недавно были найдены новые белки, участвующие в обмене липидов [Dean М et al., 2001; Van der Vliet HN. et a], 2001] Изменение их структуры и функций может быть фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, в связи с чем, гены этих белков могут рассматриваться в качестве генов-кандидатов ИБС и ИБМ

В последние годы в качестве потенциального патогенетического фактора при различных ССЗ рассматривается также апоптоз [Isner JM et al, 1995] Известно, что апоптоз является одним из механизмов ишемического повреждения клетки и, возможно, основным фактором увеличения зоны инфаркта мозга при инсульте В связи с этим, особую актуальность приобретают исследования, направленные на изучение генов, продукты которых вовлечены в реализацию программы клеточной гибели, что позволит в дальнейшем раскрыть молекулярно-генетические основы ишемического повреждения мозга и выявить факторы индивидуальной чувствительности вещества мозга к ишемии

Существует несколько подходов к изучению мультифакториальных заболеваний, в том числе ИБС и ИБМ Наиболее широко используются методы ассоциативного анализа типа "случай-контроль" На современном этапе наиболее эффективным методом изучения ИБС и ИБМ является сибсовый анализ [Spielman R S , Ewens W J-, 1998] Сибсовый метод позволяет проводить анализ сцепления между геном и заболеванием, поиск ассоциаций для выявления возможных связей между анализируемым полиморфизмом гена и различными клиническими проявлениями заболевания, как в группе пробандов, так и в группе их сибсов, а также оценить риск развития того или иного заболевания у лиц с отягощенным семейным анамнезом

В связи с тем, что работы по изучению молекулярно-генетических основ наследственной предрасположенности к ИБС и ИБМ в России малочисленны, а с использованием сибсового метода не проводились вообще, особую значимость приобретает проведение подобного рода исследований среди населения России

Цель исследования.

Целью настоящей работы является изучение вклада полиморфизма ряда генов-кандидатов в развитие ССЗ у больных с ангиографически подтвержденной ишемической болезнью сердца, у больных с хронической ишемической болезнью мозга и ишемическим инсультом, а также у их сибсов, с помощью сибсового и ассоциативного методов, изучение влияния полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза на формирование инфаркта мозга и течение острого ишемического атеротромботического инсульта, выявление генетических маркеров данных заболеваний

Задачи исследования.

1 Изучить частоты генотипов и аллелей по М235Т полиморфизму гена ангиотензиногена (АТГ), инсерционно-делеционному полиморфизму гена ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), 4а/4Ь полиморфизму минисателлита гена эндотелиальной NO-синтетазы (eNOS), R219K и R1587K полиморфизмам гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа Al (АВСА1), S19W и -1131Т>С полиморфизмам гена аполипопротеина A-V (АРОА5), C311S полиморфизму гена параоксоназы 2 (PON2), R72P полиморфизму гена р53 и С/А полиморфизму З'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ (EFNB3) (полиморфизм GDB 181497) у больных ИБС, ИБМ и их сибсов

2 Проанализировать возможное сцепление полиморфных участков каждого изучаемого гена с ИБС и ее основными клиническими проявлениями -инфарктом миокарда (ИМ) и стенокардией, а также с хронической ишемической болезнью мозга и инсультом, используя сибсовый тест на неравновесность передачи

3 Провести корреляционный анализ изучаемых ДНК-маркеров с ИБС, ИБМ и основными клиническими проявлениями этих заболеваний в группах пробандов и сибсов.

4 Изучить полиморфизмы rs3219023 и rs2048426 в гене полимеразы 1 поли(АДФ)-рибозы (PARP1), полиморфизм rs 189994 в гене апоптоз-индуцирующего фактора (AIF), полиморфизм rs2906766 в гене каспазы 9 (CASP9), С/А полиморфизм в З'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ (EFNB3), IVS9-6750A полиморфизм в гене индуцируемого гипоксией фактора 1 (HIF-1A) у больных с острым ишемическим атеротромботинеским инсультом и проанализировать влияние этих полиморфизмов на формирование инфаркта мозга и течение заболевания

5 Выявить генетические маркеры ИБС и ИБМ и оценить их вклад в развитие данных ССЗ.

Научная новизна работы.

Впервые, используя сибсовый метод, проведен анализ вклада десяти диаллельных ДНК-маркеров в развитие ИБС и ИБМ у лиц, относящихся к русскому этносу Показано, что ни один из изучаемых генов-кандидатов ССЗ не является главным геном ИБС и ИБМ, что подчеркивает многофакторный характер этих заболеваний.

При изучении пар сибсов обнаружено, что инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц с отягощенным по ИБС семейным анамнезом Генетическим маркером заболевания является генотип DD Впервые показано, что DD генотип также ассоциирован с развитием ИБС у сибсов с отягощенной по инсульту наследственностью.

Впервые установлено, что R219K полиморфизм гена АВСА1 ассоциирован с развитием ИБС Аллель 219К и генотипы, его содержащие (К219К, R219K), являются фактором повышенного риска развития и вариантом более тяжелого течения данного заболевания

Установлено, что R1587K полиморфизм гена АВСА1 ассоциирован с развитием ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии. Аллель R1587 и генотип

6

11158711 являются фактором повышенного риска развития этих заболеваний у лиц с отягощенным семейным анамнезом

Впервые обнаружена достоверная корреляция -1131Т/С полиморфизма гена АРОА5 с параметрами, характеризующими выраженность атеросклеротического процесса в коронарных артериях у больных ИБС Показано, что генотипы -1131С/С и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий

Впервые показана ассоциация Л72Р полиморфизма гена р53 с риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС Установлено, что аллель Р является протективным фактором и наличие в генотипе аллеля Р приводит к снижению риска развития ГЛЖ у этих больных

Впервые установлено, что СЗ118 полиморфизм гена РОЫ2 ассоциирован с развитием инфаркта миокарда и гипертрофии миокарда левого желудочка у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью Фактором повышенного риска развития данных заболеваний является аллель СЗ 11 и генотип СЗ 11С

Впервые проведен анализ вклада полиморфных вариантов ряда генов-регуляторов апоптоза в патогенез ишемического инсульта. Показана корреляция А>в полиморфизма в первом интроне гена РАЯР1 (гз3219023) и С/А полиморфизма в З'-фланкирующей области гена ЕРЫВЗ (ОБВ 181497) с объемом инфаркта мозга и тяжестью состояния больных Установлено, что генотип А/А по гену РАЯР1 и генотипы А/А и С/А по гену ЕРЫВЗ ассоциированы с развитием и прогрессированием инсульта и являются вариантом тяжелого течения заболевания у больных из России

Впервые обнаружено, что аллель С по ГУБ9-675С>А полиморфизму гена НШ-Ы и генотипы С/С и С/А являются факторами повышенного риска развития ишемического инсульта в русской популяции Практическая значимость.

Полученные данные позволяют оценить роль ряда генетических систем в

развитии таких ССЗ, как ишемическая болезнь сердца и ишемическая болезнь

мозга, и являются основанием для разработки методов молекулярно-

генетической идентификации лиц с повышенным риском развития данных

7

заболеваний Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных участков генов-кандидатов ССЗ могут использоваться для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления лиц с высоким риском развития заболевания и проведения донозологической профилактики Учитывая результаты генотипирования больных ИБС и ИБМ, возможно выделение группы пациентов с более тяжелым течением заболевания, что поможет дифференцировать у них лечебно-профилактические мероприятия

Положения, выносимые на защиту.

1 Инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием шпемической болезни сердца у лиц с отягощенной по ИБС и по инсульту наследственностью Маркером повышенного риска развития заболевания являются аллель D и генотип DD

2 Полиморфизмы R219K и R1587K гена АВСА1 ассоциированы с развитием шпемической болезни сердца и ее основных клинических проявлений Аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС, стенокардии, артериальной гипертонии и вариантом более тяжелого течения данных заболеваний у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью Аллель R1587 ассоциирован с повышенным риском развития ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии у лиц с отягощенным семейным анамнезом

3 Полиморфизм -1131Т/С гена АРОА5 у больных ИБС коррелирует с параметрами, характеризующими выраженность атеросклероза в коронарных артериях - индексом стеноза и окклюзией сосудов Генотипы -I131C/C и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий.

4 R72P полиморфизм гена р53 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС - аллель 72Р является протективным фактором и приводит к снижению риска развития ГЛЖ у больных ИБС C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка, а также инфаркта миокарда у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью - аллель С311 и генотип С311С являются фактором повышенного риска развития данных заболеваний

8

5 Полиморфизм IVS9-675C>A гена HIF-1A ассоциирован с развитием ишемического атеротромботического инсульта в русской популяции -фактором повышенного риска развития данного заболевания является аллель С и содержащие его генотипы С/С и С/А Замена A>G в первом интроне гена PARP1 (полиморфизм rs3219023) и С/А полиморфизм в 3'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB'181497) коррелируют с объемом инфаркта мозга у больных с острым атеротромботическим инсультом и тяжестью их состояния Генотип А/А по гену PARP1, генотипы А/А и С/А по гену EFNB3 являются вариантом более тяжелого течения инсульта и дальнейшего прогрессирования патологического процесса

6 М235Т полиморфизм гена АТГ, 4а/4Ъ полиморфизм гена eNOS, S19W полиморфизм гена АРОА5, полиморфизм rs2048426 гена PARP1, полиморфизм rs 189994 гена AIF и полиморфизм rs2906766 гена CÄSP9 не ассоциированы с развитием ИБС и ИБМ в русской популяции и не оказывают влияния на течение этих сердечно-сосудистых заболеваний у больных из России

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ

Апробация диссертации.

Результаты, полученные в данной работе, были представлены на конференциях Американского Общества Генетики Человека (ASHG) 2003-2004 г г, Европейского Общества Генетики человека (ESHG) 2003-2006 г г, съездах Российского общества медицинских генетиков 2001 и 2005 г г, изложены на конкурсах работ на стипендию фонда «Будущее молекулярной генетики» (Москва, ИМГ РАН, 2004 и 2006 г г) Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научном семинаре Медико-генетического научного центра РАМН 22 июня 2006 г

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, 3-х глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, выводов, библиографического указателя Список литературы

состоит из 411 источников, среди которых 36 источников отечественной и 375 источников зарубежной литературы

Текст диссертации изложен на 196-ти страницах машинописного текста, иллюстрирован 31 таблицей и 20 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В исследование были включены пациенты, относящиеся к русскому этносу, после подписания ими или их ближайшими родственниками информированного согласия об участии в исследовании

В первую группу были включены 85 пациентов с ишемической болезнью сердца, составляющих выборку пробандов, и 100 их родных братьев и сестер, составляющих выборку сибсов. Выборка сибсов является независимой выборкой неродственных друг другу индивидуумов, но представляет собой смещенную выборку, так как она сформирована на основании родства каждого сибса с соответствующим пробандом Наличие родства между сибсом и больным ИБС в каждой отдельной паре "пробанд-сибс" позволяет охарактеризовать сибсов как выборку лиц с семейной предрасположенностью к развитию ишемической болезни сердца

Всем лицам, включенным в исследование, проводилось комплексное клинико-инструментальное обследование Диагноз ИБС был поставлен на основании анализа совокупности данных анамнеза, физикального обследования, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики и затем был верифицирован с помощью коронароангиографии (КАГ) КАГ проводилась всем пробандам, а также сибсам, у которых на основании всего комплекса диагностических исследований была выявлена ИБС

Во вторую группу было включено 85 больных с ишемическим атеротромботическим инсультом и 93 их сибса, 48 больных с хронической ИБМ и 53 их сибса; а также 60 больных с острым ишемическим атеротромботическим инсультом, поступивших в неврологическое отделение ГКБ №20 и ГКБ №31 г. Москвы в первые 12 часов с момента развития

10

заболевания Диагноз каротидного ишемического атеротромботического инсульта основывался на сборе данных анамнеза развития заболевания, исследовании соматического и неврологического статусов, данных клинико-инструментальных методов исследования

Для типирования полиморфных вариантов изучаемых генов-кандидатов ССЗ были использованы препараты ДНК, полученные из 5 мл венозной крови пробандов и их сибсов Выделение ДНК из лейкоцитов венозной крови человека проводилось стандартным методом фенол-хлороформной экстракции [Sambrook et al, 1989] Определение полиморфизма проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей рестрикцией амплифицированного фрагмента ДНК соответствующими рестриктазами

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ "Statistica for Windows 6 0", программного обеспечения MS Excel 2000 (Microsoft), компьютерной программы RxC (Rows and Columns) [Roff DA., Bentzen P, 1989] и программы для оценки неравновесия по сцеплению в парах сибсов (sibs' transmission/'disequilibrium test- S-TDT) [Spielman R S , Ewens W J , 1998] Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя относительного риска (ОР) по формуле

OP = [А/(А+В)] / [C/(C+D)], где А - число лиц с наличием, В - с отсутствием маркера среди больных, С и D - число лиц соответственно с наличием и отсутствием маркера среди здоровых

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Изучение вклада полиморфизма генов АТГ, АПФ, eNOS, АБСА J, АРОА5, PON2, р53, EFNB3 в развитие ИБС и ИБМ проводилось в несколько этапов с помощью ассоциативного метода в выборках различных типов.

Ассоциативный анализ ДНК-маркеров с использованием теста неравновесности передачи в парах сибсов.

На первом этапе для оценки возможной ассоциации между данными генами и заболеванием был использован непараметрический S-TDT Этот

11

метод основан на совместном анализе распределения в парах сибсов аллельных вариантов исследуемого гена и клинических фенотипов. Он позволяет выявить высоко значимые ассоциации (сильное сцепление) между геном и заболеванием С этой целью использовалась величина z-балла Достоверными считали значения р менее 0.05, чему для диаллельных ДНК-маркеров соответствует значение z-балла более 2 47 [Spielman R.S., Ewens W.J., 1998]

В результате проведенного анализа не было установлено сцепления между исследуемыми полиморфизмами генов АТГ, АПФ, eNOS, АВСА1, АРОА5, PON2, р53, EFNB3 и ишемической болезнью сердца, а также ее основными клиническими проявлениями - инфарктом миокарда и стенокардией z-балл не достигает значения 2,47 (р > 0,05) Не было выявлено сцепления между изучаемыми генами и ишемическим инсультом, а также хронической ишемической болезнью мозга.

Таким образом, анализ ассоциации с использованием S-TDT показал, что ни один из исследуемых генов не является главным геном, отвечающим за развитие таких заболеваний, как ИБС и ИБМ Патогенез этих ССЗ обусловлен сложным взаимодействием различных генетических факторов друг с другом, а также с факторами внешней среды

Корреляционный анализ в группах пробандов с ИБС и их сибсов.

На следующем этапе для изучения возможного вклада каждого из генов-кандидатов ИБС в развитие патологического процесса проводился поиск ассоциаций для выявления возможных связей между анализируемым полиморфизмом гена и заболеванием в группе пробандов и в группе их сибсов Для этого был выполнен непараметрический корреляционный анализ (метод у), позволивший проанализировать корреляции между десятью ДНК-маркерами и клиническими признаками, описывающими состояние сердечно-сосудистой системы у больных ИБС и их сибсов Выявленные статистически достоверные корреляции были затем проанализированы с использованием других более жестких методов статистического анализа (точный двусторонний критерий Фишера, критерий Ньюмана-Кеулса)

Анализ вклада R219K полиморфизма гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа AI в развитие ИБС.

В результате корреляционного анализа в группе пробандов нами были выявлены статистически достоверные корреляции R219K полиморфизма гена АВСА1 с параметрами, характеризующими выраженность атеросклеротического поражения коронарных артерий - сосудистым индексом (у = -0 318, р = 0 006), индексом стеноза (у = -0 328, р = 0 001), окклюзией (у = -0 326, р = 0 027), стенокардией по функциональному классу (ФК) (у = -0 295, р = 0 011), хронической сердечной недостаточностью (ХСН) (у = -0 297, р = 0 039) В группе сибсов данный полиморфизм достоверно коррелирует с ИБС (у = -0 325, р = 0 012), стенокардией (у = -0 378, р = 0 007), артериальной гипертонией (АГ) (у = -0 325, р = 0 008), гипертрофией ЛЖ (у = -0 397, р = 0 011), уровнем ХС ЛПОНП (у = -0 229, р = 001) и ТГ (у = -0 259, р = 0 003)

На следующем этапе каждая достоверная корреляция анализировалась путем сравнения частоты аллельных вариантов данного полиморфного локуса у лиц с разными фенотипами В связи с низкой численностью гомозигот по редкому аллелю 219К гена АВСА1 пациенты с генотипами К219К и R219K были объединены в одну группу

В группе пробандов оценивалась степень атеросклеротического поражения коронарных артерий у пациентов с разными генотипами по результатам КАГ с помощью трех параметров сосудистого индекса, индекса стеноза и наличия окклюзии крупных сосудов

При изучении распределения средних значений индекса стеноза у пробандов с разными генотипами по гену АВСА1 было выявлено, что среднее значение этого индекса достоверно выше в объединенной группе больных с генотипами К219К и R219K (10,07±4,15) при сравнении с гомозиготами по R219 аллелю (7,29±4,57), р = 0,004.

Обнаружено, что у пациентов с К219К и R219K генотипами достоверно чаще наблюдается 2-х и 3-х сосудистое поражение коронарных артерий, а у лиц

с R219R генотипом - 1-о сосудистое поражение (%2 - 7 44, р = 0 001, таблица 1) Таким образом, К219К и R219K генотипы гена ABC Al ассоциированы с более тяжелым атеросклеротическим поражением коронарных артерий.

Таблица 1. Сосудистый индекс, характеризующий степень атеросклеротического поражения коронарных артерий у больных ИБС с разными генотипами по R219K полиморфизму гена ABC Al.

Параметры Генотипы KKhRK Генотип RR Р

1 11% 41%

Сосудистый индекс 2 48% 27% 0,001*

3 41% 32%

В группе сибсов исследуемый полиморфизм гена АВСА1 статистически достоверно коррелирует с ИБС, стенокардией и АГ. Анализ распределения частот генотипов показал, что у сибсов с вышеперечисленными заболеваниями достоверно повышена частота генотипов К219К, И219К и аллеля 219К и достоверно понижена частота генотипа К219Я и аллеля И219 (таблица 2)

Таблица 2. Развитие ИБС, стенокардии и АГ у сибсов с К219К и R219K

генотипами.

Параметры ИБС Стенокардия АГ

есть нет есть нет есть нет

Генотипы КК и RK 67% 46% 74% 46% 63% 35%

Генотип RR 33% 54% 26% 54% 37% 65%

Р 0,044* 0,027* 0,023*

ОР 2,38 з,з 2,87

ДИ 1,02-5,80 1,08-10,23 1,26-6,56

Аллель К 43% 27% 47% 28% 39% 24%

Аллель R 57% 73% 53% 72% 61% 76%

P 0,019* 0,007* 0,019*

Таким образом, генотипы К219К и Я219К ассоциированы с повышенным риском развития ИБС, стенокардии и АГ у лиц с отягощенным семейным анамнезом

Из полученных данных видно, что средние уровни ХС ЛПОНП и ТГ достоверно выше в объединенной группе сибсов с генотипами К219К и 11219К по сравнению с гомозиготами по 11219 аллелю (р = 0 038, 0 023) (диаграмма 1)

ц 40-г

2 30л" 5 20-1 ш о

а.

>>

'1 §:2°°Т1

9=Е 1:в

KK+RK

генотипы

КК+ЯК ЯЯ генотипы

А Б

Диаграмма 1.

А. Средний уровень ХС ЛПОНП у сибсов с разными генотипами по гену АВСА1. Средний уровень ХС ЛПОНП у сибсов с генотипами К219К и 11219К равен 30,49±12,63 мг/дл, у сибсов с генотипом И219Я - 25,25±12,15 мг/дл (р = 0,038)

Б. Средний уровень ТГ у сибсов с разными генотипами по гену АВСА1.

Средний уровень ТГ у сибсов с генотипами К219К и Я219К равен 157,25±72,86 мг/дл, у сибсов с генотипом И219Ы- 126,21±60,79мг/дл (р = 0,023)

Таким образом, все данные, полученные при анализе ассоциации между И219К полиморфизмом гена АВСА1 и ИБС как в группе пробандов, так и в группе сибсов, указывают на то, что аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС и более тяжелого варианта течения данного заболевания

Анализ вклада Ш587К полиморфизма гена АВСА1 в развитие ИБС.

При изучении влияния Ы1587К полиморфизма гена АВСА1 на клинические параметры ИБС и биохимические показатели в группе больных не

было выявлено статистически достоверных корреляций исследуемого полиморфизма с основными клиническими проявлениями заболевания - ИМ и стенокардией, а также со степенью атеросклеротического повреждения коронарных артерий, R1587K полиморфизм не ассоциирован и с уровнем фракций липопротеидов крови

В группе сибсов были установлены статистически достоверные корреляции между R1587K полиморфизмом гена АВСА1 и ИБС (у = -0 671, р < 0 001), ИМ (у = -0 951, р = 0.0006), стенокардией (у = -0 493, р = 0 011)

На следующем этапе сравнивали частоты распределения аллельных вариантов данного полиморфного локуса у сибсов с разными фенотипами В связи с низкой численностью гомозигот по редкому аллелю 1587К гена ÂBCA1 сибсы с генотипами К1587К и R1587K были объединены в одну группу

Проведенный анализ показал, что у сибсов с ИБС, ИМ и стенокардией достоверно повышена частота генотипа R1587R и аллеля R1587 и достоверно понижена частота генотипов К1587К, R1587K и аллеля 1587К (таблица 3)

Таблица 3. Развитие ИБС, ИМ и стенокардии у сибсов с R1587R генотипом.

Параметры ИБС ИМ Стенокардия

есть нет есть нет есть нет

Генотипы КК и RK 13% 43% 9% 36% 15% 39%

Генотип RR 87% 57% 91% 64% 85% 61%

Р 0,043* 0,050* 0,045*

ОР 4,88 6,18 3,59

ДИ 4,14-7,62 2,26-10,1 2,00-5,18

Аллель К 7% 24% 5% 21% 8% 21%

Аллель R 93% 76% 95% 79% 92% 79%

Р 0,005* 0,025* 0,047*

Таким образом, из полученных данных можно сделать вывод о том, что R1587K полиморфизм гена АВСА1 не влияет на степень тяжести заболевания у больных ИБС, однако аллель R1587 является фактором повышенного риска

развития таких ССЗ, как ИБС, ИМ и стенокардия (ОР = 4 88, б 18, 3 59 соответственно)

Анализ вклада -1131Т>С полиморфизма гена аполипопротеина А-У в развитие ИБС.

Для выявления возможных связей между анализируемым полиморфизмом гена АРОА5 и развитием заболевания в группе сибсов, а также тяжестью его течения (степенью атеросклеротического поражения коронарных артерий, уровнем липидного спектра и др характеристиками) в группе пробандов был проведен непараметрический корреляционный анализ В связи с низкой частотой встречаемости аллеля -1131С сибсы с генотипами -1131Т/С и -1131 С/С были объединены в одну группу (в выборке больных частота генотипа -1131С/С равна 0)

В группе пробандов исследуемый полиморфизм статистически достоверно коррелирует со стенокардией по ФК (у = 0 403, р = 0 041), уровнем ТГ в плазме крови (у = 0 373, р = 0021) и параметрами, характеризующими выраженность атеросклероза в коронарных артериях - индексом стеноза (у = 0 365, р = 0 026) и окклюзией (у = 0 612, р = 0 002)

При изучении распределения средних значений индекса стеноза у пробандов с разными генотипами по гену АРОА5 было установлено, что среднее значение этого индекса достоверно выше в группе больных с генотипом ТС (11,50+5,72) по сравнению с больными, имеющими генотип ТТ (8,36±4,29), р = 0,039

В результате проведенного анализа были установлены также статистически достоверные различия в распределении частот генотипов у пробандов с окклюзией коронарных артерий и без нее Как видно из данных, представленных в таблице 4, у больных, имеющих окклюзию крупных коронарных артерий, статистически достоверно повышена частота генотипа ТС и понижена частота генотипа ТТ (р = 0,039) (таблица 4)

Таблица 4. Развитие окклюзии у больных ИБС с генотипом ТС по -1131Т>С полиморфизму гена АРОА5.

Параметры Генотип ТС Генотип ТТ Р

Окклюзия есть 20,5% 79,5% 0,039*

нет 6% 94%

В группе сибсов были выявлены статистически достоверные корреляции -1131Т>С полиморфизма гена АРОА5 с ИБС (у = -0 627, р = 0 03) и с развитием гипертрофии миокарда ЛЖ (у = -0 997, р = 0 032) Однако, при попарном сравнении частот генотипов и аллелей у сибсов с наличием заболевания и без него не было выявлено статистически достоверных различий в распределении частот генотипов и аллелей как между сибсами с ИБС и без ИБС, так и между сибсами с ГЛЖ и без ГЛЖ

В результате проведенных исследований можно сделать вывод о том, что -1131Т>С полиморфизм гена АРОА5 не влияет на риск развития ИБС и ее основных клинических проявлений, но может оказывать влияние на степень тяжести заболевания - у больных ИБС с генотипом ТС наблюдается более тяжелое атеросклеротическое поражение венечных артерий

Анализ вклада C311S полиморфизма гена параоксоназы 2 в развитие

ИБС.

Как показали результаты корреляционного анализа, в группе сибсов была выявлена статистически достоверная корреляция C311S полиморфизма гена РОЖ с ИМ (у = 0 523, р = 0 007 ) и с ГЛЖ (у = 0 351, р = 0 028 ) При изучении распределения частоты встречаемости генотипов и аллелей у сибсов, перенесших ИМ и без него, были установлены статистически достоверные различия в распределении частоты генотипов и аллелей между двумя группами сибсов У сибсов, перенесших ИМ, наблюдается достоверное повышение частоты генотипа СС и аллеля С (х2 = 7 25, 5 59, р = 0 007, 0 018) СС генотип ассоциирован с повышенным риском развития данного заболевания (ОР = 5 3, ДИ [1 52, 18 71]) У сибсов с гипертрофией миокарда ЛЖ также достоверно

18

повышена частота генотипа СС (х2 = 4 76, р = 0 029) и наблюдается тенденция к повышению частоты аллеля С (%2 = 3 32, р = 0 068) по сравнению с сибсами без ГЛЖ Относительный риск развития ГЛЖ у сибсов с СС генотипом повышен в 3 раза (таблица 5)

Таблица 5. Распределение частот генотипов и аллелей по СЗИв полиморфизму гена РОШ у сибсов с ИМ и с гипертрофией ЛЖ

Параметры ИМ ГЛЖ

есть нет есть нет

Частота генотипа СС 37,5% 7% 25% 7%

Частота генотипов вБ и С8 62,5% 93% 75% 93%

Р 0,007* 0,029*

ОР 5,33 2,96

да 1,52-18,71 1,21-7,27

Аллель С 56% 28% 44% 27%

Аллель 8 44% 72% 56% 73%

Р 0,018* 0,068

Таким образом, C311S полиморфизм гена PON2 не ассоциирован с параметрами, определяющими степень тяжести ИБС у больных Однако данный полиморфизм ассоциирован с риском развитая гипертрофии миокарда ЛЖ и ИМ и может, таким образом, оказывать влияние на формирование этих заболеваний у лиц с отягощенным по ИБС семейным анамнезом

Анализ вклада инсерционно-делеционного полиморфизма гена АПФ в развитие ИБС.

В результате проведенного корреляционного анализа было установлено, что в группе сибсов I/D полиморфизм гена АПФ достоверно коррелирует с ИБС (у = 0 354, р = 0 004), ИМ (у = 0.453, р = 0 016), стенокардией (у = 0 374, р = ООН) и атеросклеротическим поражением клапанов сердца (у = 0 275, р = 0 019)

В группе сибсов с ИБС достоверно повышена частота генотипа DD по сравнению с сибсами без ИБС (р = 0 025) и отмечается тенденция к повышению частоты аллеля D (р = 0 082) Таким образом, DD генотип ассоциирован с повышенным риском развития ИБС у лиц, брат или сестра которых уже болеют ИБС (ОР = 2 8, ДИ [1 12, 7 04]) Наиболее сильная корреляция исследуемого полиморфизма в группе сибсов выявлена с ИМ (у ~ 0 453, р = 0 016) При попарном сравнении частот генотипов и аллелей у сибсов, перенесших документированный ИМ, обнаружено достоверное повышение частоты генотипа DD (р = 0 018), и аллеля D (р = 0 015) и, соответственно, достоверное понижение частоты генотипа П и аллеля I по сравнению с сибсами без заболевания Относительный риск развития инфаркта миокарда у сибсов с DD генотипом повышен (ОР = 5.5, ДИ [1 37, 22 04]) Аналогичные данные получены и при изучении распределения частот генотипов у сибсов со стенокардией и без нее Установлено, что у сибсов со стенокардией достоверно повышена частота генотипа DD (р = 0 028) Таким образом, DD генотип ассоциирован с повышенным риском развития стенокардии у сибсов (ОР = 3 3, ДИ [1 14, 9 59]) (таблица 6)

Таблица 6. Развитие ИБС и ее основных клинических проявлений у сибсов с ББ

генотипом.

Параметры ИБС Стенокардия ИМ Поражение клапанов

есть нет есть нет есть нет есть нет

Частота генотипа D/D 43% 21% 48% 21% 60% 21% 33% 22%

Частота генотипа Ш 57% 79% 52% 79% 40% 79% 67% 78%

Р 0,025* 0,028* 0,018* 0,174

ОР 2,8 з,з 5,5 1,34

ДИ 1,12-7,04 1,14-9,59 1,37-22,04 0,55-5,78

Аллель D 58% 46% 60% 46% 75% 46% 51% 49%

Аллель I 42% 54% 40% 54% 25% 54% 49% 51%

Р 0,082 0,087 0,015* 0,444

Таким образом, в нашей выборке больных DD генотип является фактором повышенного риска развития ишемической болезни сердца и ее основных клинических проявлений (ИМ и стенокардии)

Анализ вклада R72P полиморфизма гена белка р53 в развитие ИБС.

Нами был проведен анализ возможной связи R72P полиморфизма гена белка р53 с клинической картиной ИБС и характером развития патологического процесса В результате проведенного анализа в группе пробандов нами была выявлена статистически достоверная корреляция между R72P полиморфизмом гена р53 и наличием гипертрофии миокарда левого желудочка у больных ИБС (у = 0 373, р = 0 010)

При попарном сравнении частот аллелей у пробандов с наличием ГЛЖ и без нее было установлено, что у пробандов без гипертрофии ЛЖ достоверно повышена частота аллеля Р и соответственно достоверно понижена частота аллеля R по сравнению с пробандами с наличием гипертрофии ЛЖ (%2 = 5 22; р = 0 03) При сравнении частоты генотипов между двумя группами больных было выявлено, что у пробандов без ГЛЖ наблюдается тенденция к повышению частоты генотипов Р/Р и R/P по сравнению с больными, имеющими гипертрофию ЛЖ (%2 = 424, р = 0.07) Таким образом, можно сделать вывод о том, что аллель Р, вероятно, является протективным фактором и наличие в генотипе больных ИБС аллеля Р (у гомозигот Р/Р и гетерозигот R/P) приводит к снижению риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у этих больных (ОР = 0 8, ДИ [0 79, 0 81]) (таблица 7)

Таким образом, R72P полиморфизм в 4 экзоне гена р53 не влияет на развитие ИБС, ИМ у лиц с отягощенной наследственностью, не оказывает влияния также и на развитие атеросклеротического процесса в коронарных артериях у больных ИБС Однако он ассоциирован с риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка у больных ИБС и может, таким образом, способствовать развитию структурных и функциональных изменений миокарда, получивших название ремоделирования

Таблица 7. Развитие гипертрофии миокарда левого желудочка у больных с R/R

генотипом.

Параметры глж

наличие отсутствие

Генотипы Р/Р и R/P 73% 90,5%

Генотип R/R 27% 9,5%

Р 0,07

ОР 0,8

ДИ 0,79-0,81

Аллель Р 59% 77%

Аллель R 41% 23%

Р 0,034*

Анализ вклада полиморфизма генов-кандидатов ССЗ в развитие ишемической болезни мозга.

В результате проведенного корреляционного анализа в группах пробандов с ишемическим инсультом и их сибсов была выявлена статистически достоверная корреляция между I/D полиморфизмом гена АПФ и развитием ИБС у сибсов (у = -0 299, р = 0 018) При попарном сравнении частот генотипов было выявлено, что у сибсов с ИБС статистически достоверно повышена частота генотипа DD по сравнению с сибсами без заболевания (р = 0,01) (диаграмма 2)

Относительный риск развития ишемической болезни сердца у сибсов с DD генотипом повышен в 12 раз Таким образом, у лиц с отягощенным по инсульту семейным анамнезом I/D полиморфизм гена АПФ ассоциирован с повышенным риском развития другого ССЗ - ишемической болезни сердца (ОР = 11 98, ДИ [11 03, 12 69])

генотипы

Диаграмма 2.1Л) полиморфизм гена АПФ и развитие ИБС в группе сибсов с отягощенной по инсульту наследственностью.

Изучение влияния генов-регуляторов апоптоза на развитие инфаркта мозга и на тяжесть заболевания у больных с ишемическим атеротромботическим инсультом.

Ассоциация полиморфизма ГУ89-675С>А в гене ННЧа с развитием ишемического атеротромботического инсульта.

В результате проведенного сравнительного анализа частоты генотипов и аллелей между группой больных и контрольной группой были установлены статистически достоверные различия в распределении частот генотипов и аллелей по гену НПМа

Таблица 8. Сравнительный анализ генотипов и аллелей по 1У89-675С>А полиморфизму гена НДО-1а у больных с ишемическим атеротромботическим инсультом и в контрольной выборке.

Варианты генотипов и аллелей Частота, % Р

Инсульт Контроль

ИШ-1А (А/А) 62 81 0,0016*

НШ-Ы (С/А) 38 15 0,0016*

НШ-1А (С/С) 0 4 0,0016*

Н1Р-1А (А) 81 88,5 0,043*

НШ-1А (С) 19 11,5 0,043*

Как видно из данных таблицы 8, как в группе больных, так и в контрольной группе с наибольшей частотой встречается генотип А/А, причем в контрольной выборке наблюдается повышение частоты этого генотипа (на 19,1%) по сравнению с больными Частота аллеля А также больше в контрольной выборке, в то время как частота аллеля С повышена в группе больных Выявленные различия в распределении частот генотипов и аллелей в обеих группах являются статистически достоверными (р = 0 0016, 0 043) На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что аллель С и генотипы, его содержащие, связаны с повышенным риском развития инсульта в русской популяции Относительный риск развития инсульта у лиц с генотипами С/С и С/А повышен в 2 раза (ОР = 1 99, ДИ [1 92, 2 03])

Ассоциация полиморфизма в гене PARP1 с клиническим течением ишемического атеротромботического инсульта.

Нами был проведен анализ A>G полиморфизма в первом интроне гена PARP1 (полиморфизм rs3219023) В связи с низкой численностью гомозигот по редкому аллелю G гена PARP1 пациенты с генотипами G/G и A/G были объединены в одну группу

В результате проведенного корреляционного анализа между полиморфизмом rs3219023 и сопутствующими заболеваниями (ИБС и ИМ), а также клиническими характеристиками инсульта нами были выявлены статистически достоверные корреляции анализируемого полиморфизма гена PARP1 с объемом очага ишемического повреждения и с тяжестью состояния больных на разных сроках обследования

Распределение средних величин объема ишемического очага в зависимости от полиморфных вариантов гена PARP1 на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от развития инсульта представлено на рис 1 А,В, C,D

Как видно из представленных данных, у пациентов с генотипом А/А на всех сроках обследования достоверно чаще встречались очаги инфаркта большого объема по сравнению с носителями G/G и A/G генотипов

На рис 2A,B,C,D показано распределение средних значений степени тяжести больных с разными генотипами по гену PARP1 на разных сроках обследования Тяжесть состояния пациентов и степень выраженности у них неврологического дефицита оценивали по шкале Оргогозо. оценка 0 баллов соответствует смерти пациента, 100 баллов — отсутствию неврологического дефекта Было выявлено, что среди носителей А/А генотипа преобладали пациенты с тяжелым течением инсульта, а у больных с генотипами G/G и A/G наблюдалось заболевание средней степени тяжести

Таким образом, rs3219023 полиморфизм гена PARP1 ассоциирован с развитием и прогрессированием инсульта у больных - G/G и A/G генотипы являются вариантом более легкого течения заболевания, а А/А генотип связан с развитием тяжелого инсульта.

Ассоциация С/А полиморфизма в З'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ с развитием ишемического атеротромботического инсульта.

В результате проведенного корреляционного анализа были выявлены статистически достоверные корреляции С/А полиморфизма гена EFNB3 с объемом очага ишемического повреждения на 1-е и 3-й сутки от начала заболевания и со степенью тяжести инсульта на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от момента его наступления

При изучении распределения средних значений объема инфаркта мозга было установлено, что на 3-й сутки от развития заболевания у больных с генотипом С/С достоверно чаще встречались очаги малого объема по сравнению с носителями А/А и С/А генотипов, имеющими очаги большого объема (р = 0,015) (рисунок 3)

р = 0,018

В

Генотипы

р = 0,012

Генотипы

D

р = 0,006

Генотипы

[—| WaanfSE Mean±1,fl6-SE

р = 0,036

Генотипы

0 Меап QMejiniSE Меап±1 96 SE

Рисунок 1. Зависимость объема инфаркта мозга от rs3219023 полиморфизма гена PARP1 на 1-е (А), 3-й (В), 7-е (С) и 21-е сутки (D) от развития заболевания 1 - генотип А/А, 2 - генотипы G/G и A/G

Генотипы

_Mean

I I MeantSE T Mwnit,«

В

1 2 Генотипы

_Mean

I I MeantSE 17 Mw4t,9e*se

D

Генотипы

_Mean

i ) MeantSE T~Mcan±1 S6S*S£

0,0043

Рисунок 2. Зависимость тяжести состояния пациентов по шкале Оргогозо от rs3219023 полиморфизма гена PARP1 на 1-е (А), 3-й (В), 7-е (С) и 21-е сутки (D) от развития заболевания 1 - генотип А/А, 2 - генотипы G/G и A/G,

Рисунок 3. Зависимость объема инфаркта мозга от полиморфизма гена ЕРМВЗ на 3-й сутки от развития заболевания.

Нами была проведена оценка тяжести состояния пациентов с разными генотипами по С/А полиморфизму гена ЕРМВЗ по шкале Оргогозо на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от возникновения инсульта В результате проведенного анализа было выявлено, что среди носителей гомозиготного генотипа С/С преобладают пациенты средней тяжести, а у больных с А/А и С/А генотипами наблюдается тяжелое течение заболевания (менее 50 баллов по шкале Оргогозо)

Таким образом, С/А полиморфизм 3'-фланкирующей области гена ЕРЫВЗ ассоциирован с формированием очага ишемического повреждения при инсульте и тяжестью заболевания А/А и С/А генотипы являются неблагоприятными факторами, так как их носительсгво способствует развитию обширного очага повреждения при ингемическом инсульте и тяжелой формы заболевания

ВЫВОДЫ

1 Инсерционно-делеционный (Г/О) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц с отягощенной

по ИБС и по инсульту наследственностью Маркером повышенного риска развития заболевания являются аллель D и генотип DD

2 Полиморфизмы R219K и R1587K гена АВСА1 ассоциированы с развитием ишемической болезни сердца и ее основных клинических проявлений у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью Аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС, стенокардии, артериальной гипертонии и вариантом более тяжелого течения данных заболеваний Аллель R1587 ассоциирован с повышенным риском развития ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии у лиц с отягощенным семейным анамнезом

3 Полиморфизм -1131Т/С гена АРОА5 у больных ИБС коррелирует с параметрами, характеризующими выраженность атеросклероза в коронарных артериях - индексом стеноза и окклюзией сосудов Генотипы -1131 С/С и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий

4 R72P полиморфизм гена р53 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС - аллель 72Р является протективным фактором и приводит к снижению риска развития ГЛЖ у больных ИБС C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка, а также инфаркта миокарда у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью — аллель С311 и генотип С311С являются фактором повышенного риска развития данных заболеваний

5 Полиморфизм IVS9-675C>A гена HIF-1A ассоциирован с развитием ишемического атеротромботического инсульта в русской популяции -фактором повышенного риска развития данного заболевания является аллель С и содержащие его генотипы С/С и С/А Замена A>G в первом интроне гена PARP1 (полиморфизм rs3219023) и С/А полиморфизм в 3'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB 181497) коррелируют с объемом инфаркта мозга у больных с острым атеротромботическим инсультом и тяжестью их состояния Генотип А/А по гену PARP1, генотипы А/А и С/А по гену EFNB3 являются

вариантом более тяжелого течения инсульта и дальнейшего прогрессирования патологического процесса

6 М235Т полиморфизм гена АТГ, 4а/4Ь полиморфизм гена eNOS, S19W полиморфизм гена АРОА5, полиморфизм rs2048426 гена PARP1, полиморфизм rs 189994 гена AIF и полиморфизм rs2906766 гена CASP9 не ассоциированы с развитием ИБС и ИБМ в русской популяции и не оказывают влияния на течение этих сердечно-сосудистых заболеваний у больных из России

Список опубликованных работ

1 Slommsky Р А, Shadnna МI, Kondratyeva Е А , Tupitsina Т V , Levitsky G N, Skvortsova VI, Limborska S A CuZn-superoxide dismutase gene in sporadic amyotrophic lateral sclerosis patients from Russia Asp90Ala (D90A) mutation and novel rare polymorphism IVS3+35 A->C Hum Mutat 2000 Sep, 16(3) 277-278

2 VI Skvortsova, PA Slommsky, LV Gubsky, EA Koltsova, IM Shetova, IA Platonova, T V Tupitsma, A V Khrunm, S A Limborska The association of р5Ъ gene BamHI RFLP polymorphism with the volume of brain infarction m patients with carotid atherothrombotic ischemic stroke Restorative Neurology and Neuroscience 2004, №2 V22 P 81-85

3 Скворцова В И, Сломинский П А, Кольцова Е А , Тупицына Т В , Милосердова О В , Боцина А Ю , Лимборская С А Изучение роли миссенс-мутации (М235Т) в гене ангиотензиногена в развитии ишемической болезни мозга Мол Генетика, микробиология и вирусология 2003 №1 с 52-54

4 Скворцова В И, Лимборская С А, Сломинский П А, Губский Л В , Кольцова Е А, Шетова И М, Шамалов Н А , Тупицына Т В , Платонова И А Ассоциация между BamHI RFLP в гене р53 и размер области инфаркта у больных с атеротромботическим ишемическим инсультом Журнал неврологии и психиатрии им Корсакова 2003 Доп №8 с 24-29

5 Аронов Д М., Лимборская С А , Юферева Ю М, Сломинский П А , Тупицына Т В , Жидко Н И., Мазаев В П, Перова Н И, Жаворонкова Е А Анализ вклада инсерционно-делеционного полиморфизма гена ангиотензин-

превращающего фермента в развитие коронарной болезни сердца. Кардиоваскулярная терапия и профилактика 2004 №5 с 38-44

6 Аронов Д М, Лимборская С А, Юферева Ю М, Сломинский П А, Тупицына Т В , Жидко Н И, Мазаев В П, Перова Н И, Жаворонкова Е А Анализ вклада И219К полиморфизма гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа А1 в развитие коронарной болезни сердца Кардиоваскулярная терапия и профилактика 2004 №5 с 22-26

7 ТВ Тупицына, П А Сломинский, М И Шадрина, И М Шетова, В И Скворцова, С А Лимборская. Ассоциация полиморфизма 1У89-675С>А в гене НИР-1а с развитием острого атеротромботического инсульта в московской популяции Генетика 2006 №5, Т 42 С 703-705

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тупицына, Татьяна Викторовна

Список сокращений и условных обозначений ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Патогенез атеросклероза

1.2. Дисфункция эндотелия и сердечно-сосудистые заболевания

1.2.1. М235Т полиморфизм гена ангиотензиногена в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний

1.2.2. Инсерционно-делеционный полиморфизм гена ангиотензинпревращающего фермента в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний 33 1.2.3.4а/4Ь полиморфизм минисателлита гена эдотелиальной синтетазы оксида азота (eNOSAzJAh) в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний

1.3. Нарушение липидного обмена в патогенезе сердечнососудистых заболеваний

1.3.1. Полиморфизм гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа А1 в определении риска сердечнососудистых заболеваний

1.3.2. Полиморфизм гена аполипопротеина A-V в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний

1.3.3. Полиморфизм гена параоксоназы 2 в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний

1.4. Роль апоптоза в развитии сердечно-сосудистых заболеваний

1.4.1. Апоптоз, опосредованный действием белка р53. Роль р53 в норме и при патологии. Полиморфные ДНК-маркеры в области гена р53 в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний

1.4.2. Семейство каспаз. Механизм активации каспазы 9. Роль каспаз в механизме программированной клеточной гибели

1.4.3. AIF - фактор, индуцирующий апоптоз по независимому от каспазного каскада пути

1.4.4. Конечный этап апоптоза. Характеристика полимеразы 1 поли(АДФ-рибозы)

1.4.5. Роль HIF-1 в развитии ишемического повреждения мозга

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Характеристика пациентов

2.2. Клинико-функциональные методы исследования

2.3. Используемые химические соединения

2.4. Генетические методы исследования

2.4.1. Выделение ДНК из клеток крови человека

2.4.2. Методика проведения ПНР

2.4.3. Проведение электрофореза в ПААГ

2.4.4. Рестрикционный анализ

2.5. Методы статистического анализа результатов исследования

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1. Краткая клиническая характеристика обследованных пациентов

3.2. Ассоциативный анализ ДНК-маркеров с использованием теста неравновесности передачи в парах сибсов

3.3. Корреляционный анализ в группах пробандов с ИБС и их сибсов

3.3.1. Анализ вклада R219K полиморфизма гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа А1 в развитие

3.3.2. Анализ вклада R1587K полиморфизма гена АВСА1 в развитие ИБС

3.3.3. Анализ вклада -11311>С полиморфизма гена аполипопротеина A-V в развитие ИБС

3.3.4. Анализ вклада S19W полиморфизма гена аполипопротеина А-V в развитие ИБС

3.3.5. Анализ вклада С311S полиморфизма гена параоксоназы в развитие ИБС

3.3.6. Анализ вклада инсерционно-делеционного полиморфизма гена АПФ в развитие ИБС

3.3.7. Анализ вклада М235Т полиморфизма гена ангиотензиногена в развитие ИБС

3.3.8. Анализ вклада 4а/4Ь полиморфизма минисателлита гена эндотелиальной NO-синтетазы в развитие ИБС

3.3.9. Анализ вклада R72P полиморфизма гена бежа р53 в развитие ИБС

3.3.10. Анализ вклада полиморфизма гена эфрина ВЗ в развитие ИБС

3.4. Анализ вклада полиморфизма генов-кандидатов ССЗ в развитие ишемической болезни мозга

3.4.1. Изучение влияния генов ПАРП-1, AIF, HIF-la, р53, эфрина ВЗ и каспазы 9 на развитие инфаркта мозга и на тяжесть заболевания у больных с ишемическим атеротромботическим инсультом

3.4.1.1. Ассоциация полиморфизма IVS9-6750A в гене HIF-la с развитием ишемического атеротромботического инсульта

3.4.1.2. Ассоциация полиморфизма в гене ПАРП-1 с развитием ишемического атеротромботического инсульта

3.4.1.3. Ассоциация С/А полиморфизма в 3'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ с развитием ишемического атеротромботического инсульта

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетический анализ факторов риска коронаросклероза и ишемической болезни мозга"

Достижения современной молекулярной генетики по расшифровке генома человека способствовали рождению новой науки - медицинской геномики, одно из центральных мест в которой занимают исследования по изучению влияния генетических факторов на формирование патологических состояний человека. Анализ роли генетических факторов в патологии человека имеет большое значение для понимания причин и механизмов развития многих заболеваний. В настоящее время для большинства наследственных моногенных заболеваний уже осуществлено картирование генов на хромосомах, их клонирование, анализ структуры, а также описаны мутации, определяющие данные заболевания. На современном этапе развития медицинской геномики делаются шаги в исследовании молекулярно-генетических механизмов формирования сложных, так называемых мультифакториальных заболеваний, обусловленных как генетическими факторами, так и факторами внешней среды.

Особое место в работах по изучению роли генома в патологических процессах занимают заболевания сердечно-сосудистой системы (ССЗ), так как они широко распространены, характеризуются тяжелым течением, приводящим к инвалидизации, и высоким уровнем смертности [21]. Большое внимание уделяют таким заболеваниям, как ишемическая болезнь сердца (ИБС) и ишемическая болезнь мозга (ИБМ). В структуре смертности от ССЗ на долю этих заболеваний приходится около 85-90% [21]. Социальную значимость проблемы усиливает наблюдающаяся в последние годы тенденция к возникновению инсультов и инфарктов у лиц молодого возраста. В связи с этим исследования, посвященные изучению данных заболеваний, приобретают особую актуальность.

В основе развития ИБС и ИБМ лежит взаимодействие различных генетических факторов с факторами внешней среды. Сложность патогенеза создает большие трудности при изучении природы этих заболеваний. Это связано с разработкой адекватных подходов и методов исследования [148,152,363,392,393]. Один из эффективных подходов к изучению роли генетических механизмов развития ССЗ связан с выделением группы генов с потенциальным вкладом в патогенез заболевания - это так называемые гены-кандидаты [152,363,392,393].

Одним из основных пусковых механизмов патогенеза ИБС и ИБМ является нарушение функциональных свойств эндотелия, что в дальнейшем приводит к его повреждению и нарушению его структуры, к изменению тонуса сосудистой стенки и дальнейшему развитию и прогрессированию патологического процесса. Важным фактором эндотелиальной дисфункции является хроническая гиперактивация ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС). В связи с этим большой интерес представляют гены, продукты которых участвуют в регуляции сосудистого тонуса. В первую очередь, к ним относятся гены белков РААС (ангиотензиногена, ангиотензинпревращающего фермента) и ген эндотелиальной NO-синтетазы.

В 1912 г. Н.Н. Аничков и С.С. Халатов предложили теорию, согласно которой важным патогенетическим звеном в развитии сердечнососудистых заболеваний являются нарушения липидного обмена [1]. В результате проведенных в течение последних 50 лет многочисленных экспериментальных, эпидемиологических и клинических исследований была подтверждена связь между изменением липидного спектра крови и развитием атеросклероза, заболеваемостью и смертностью от ИБС, инфаркта миокарда и инсульта [3,15,99,108,258,277,289,325]. Недавно были найдены новые белки, участвующие в обмене липидов - АТФ-связывающий кассетный транспортер типа А1 и аполипопротеин A-V, функция которых заключается соответственно в транспорте холестерина и триглицеридов в клетке. Изменение их структуры и функций может быть фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, поэтому гены этих белков могут рассматриваться в качестве генов-кандидатов ИБС и ИБМ.

В настоящее время известно, что основной вклад в клеточную гибель при атеросклерозе вносит апоптоз. В связи с этим апоптоз привлек к себе внимание ученых как потенциальный патогенетический фактор при различных сердечно-сосудистых заболеваниях, в особенности при ишемической болезни сердца и инсульте. Морфологические признаки апоптоза обнаружены в сосудах и миокарде в ответ на воздействие гипоксии, окислительного стресса, реперфузии при ишемии миокарда, постинфарктных изменениях, при развитии сердечной недостаточности и при формировании коронарного атеросклероза [28]. Известно также, что апоптоз является одним из механизмов ишемического повреждения клетки и, возможно, основным фактором увеличения зоны инфаркта мозга при инсульте. В связи с этим, в последние годы особую актуальность приобретают исследования, направленные на изучение генов, продукты которых вовлечены в реализацию программы клеточной гибели, что позволит в дальнейшем раскрыть молекулярно-генетические основы ишемического повреждения мозга и выявить факторы индивидуальной чувствительности вещества мозга к ишемии.

Существует несколько подходов к изучению мультифакториальных заболеваний, в том числе ИБС и ИБМ. Наиболее широко используются методы ассоциативного анализа типа "случай-контроль", основанные на исследовании полиморфных вариантов генов-кандидатов в выборках больных и случайных контрольных выборках. Такие исследования дают возможность установить вовлеченность в патогенез заболевания конкретных генов-кандидатов и на основе этого в дальнейшем выявить группы лиц с риском развитая ССЗ. На современном этапе наиболее эффективным методом изучения ИБС и ИБМ является сибсовый анализ [334]. Сибсовый метод позволяет проводить анализ сцепления между геном и заболеванием, поиск ассоциаций для выявления возможных связей между анализируемым полиморфизмом гена и различными клиническими проявлениями заболевания, как в группе пробандов, так и в группе их сибсов, а также оценить риск развития того или иного заболевания у лиц с отягощенным семейным анамнезом.

В связи с тем, что работы по изучению молекулярно-генетических основ наследственной предрасположенности к ИБС и ИБМ в России малочисленны, а с использованием сибсового метода не проводились вообще, особую значимость приобретает проведение подобного рода исследований среди населения России.

В связи с этим целью настоящей работы является изучение вклада полиморфизма ряда генов-кандидатов в развитие ССЗ у больных с ангиографически подтвержденной ишемической болезнью сердца, у больных с хронической ишемической болезнью мозга и ишемическим инсультом, а также у их сибсов, с помощью сибсового и ассоциативного методов; изучение влияния полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза на формирование инфаркта мозга и течение острого ишемического атеротромботического инсульта; выявление генетических маркеров данных заболеваний.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить частоты генотипов и аллелей по М235Т полиморфизму гена ангиотензиногена (АТГ), инсерционно-делеционному полиморфизму гена ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), 4а/4Ь полиморфизму минисателлита гена эндотелиальной NO-синтетазы (eNOS), R219K и R1587K полиморфизмам гена АТФ-связывающего кассетного транспортера типа A1 (АВСА1), S19W и -1131Т>С полиморфизмам гена аполипопротеина A-V (АРОА5), СЗ11S полиморфизму гена параоксоназы 2 (PON2), R72P полиморфизму гена р53 и С/А полиморфизму З'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ (EFNB3) (полиморфизм GDB: 181497) у больных ИБС, ИБМ и их сибсов.

2. Проанализировать возможное сцепление полиморфных участков каждого изучаемого гена с ИБС и ее основными клиническими проявлениями - инфарктом миокарда и стенокардией, а также с хронической ишемической болезнью мозга и инсультом, используя сибсовый тест на неравновесность передачи.

3. Провести корреляционный анализ изучаемых ДНК-маркеров с ИБС, ИБМ и основными клиническими проявлениями этих заболеваний в группах пробандов и сибсов.

4. Изучить полиморфизмы rs3219023 и rs2048426 в гене полимеразы 1 поли(АДФ)-рибозы (PARP1), полиморфизм rs 189994 в гене апоптоз-индуцирующего фактора (AIF), полиморфизм rs2906766 в гене каспазы 9 (CASP9), С/А полиморфизм в З'-фланкирующей области гена белка эфрина ВЗ (.EFNB3), IVS9-675C>A полиморфизм в гене индуцируемого гипоксией фактора la (HIF-1A) у больных с острым ишемическим атеротромботическим инсультом и проанализировать влияние этих полиморфизмов на формирование инфаркта мозга и течение заболевания.

5. Выявить генетические маркеры ИБС и ИБМ и оценить их вклад в развитие данных ССЗ.

Научная новизна работы.

Впервые, используя сибсовый метод, проведен анализ вклада десяти диаллельных ДНК-маркеров в развитие ИБС и ИБМ у лиц, относящихся к русскому этносу. Показано, что ни один из изучаемых генов-кандидатов

ССЗ не является главным геном ИБС и ИБМ, что подчеркивает многофакторный характер этих заболеваний.

При изучении пар сибсов обнаружено, что инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц с отягощенным по ИБС семейным анамнезом. Генетическим маркером заболевания является генотип DD. Впервые показано, что DD генотип также ассоциирован с развитием ИБС у сибсов с отягощенной по инсульту наследственностью.

Впервые установлено, что R219K полиморфизм гена АВСА1 ассоциирован с развитием ИБС. Аллель 219К и генотипы, его содержащие (К219К, R219K), являются фактором повышенного риска развития и вариантом более тяжелого течения данного заболевания.

Установлено, что R1587K полиморфизм гена АВСА1 ассоциирован с развитием ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии. Аллель R1587 и генотип R1587R являются фактором повышенного риска развития этих заболеваний у лиц с отягощенным семейным анамнезом.

Впервые обнаружена достоверная корреляция -1131Т/С полиморфизма гена АРОА5 с параметрами, характеризующими выраженность атеросклеротического процесса в коронарных артериях. Показано, что генотипы -1131 С/С и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий.

Впервые показана ассоциация R72P полиморфизма гена р53 с риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС. Установлено, что аллель Р является протективным фактором и наличие в генотипе аллеля Р приводит к снижению риска развития ГЛЖ у этих больных.

Впервые установлено, что C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием инфаркта миокарда и гипертрофии миокарда левого желудочка у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью.

Фактором повышенного риска развития данных заболеваний является аллель СЗ11 и генотип СЗ11С.

Впервые проведен анализ вклада полиморфных вариантов ряда генов-регуляторов апоптоза в патогенез ишемического инсульта. Показана корреляция A>G полиморфизма в первом интроне гена PARP1 (rs3219023) и С/А полиморфизма в 3'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB:181497) с объемом инфаркта мозга и тяжестью состояния больных. Установлено, что генотип А/А по гену PARP1 и генотипы А/А и С/А по гену EFNB3 ассоциированы с развитием и прогрессированием инсульта и являются вариантом тяжелого течения заболевания у больных из России.

Впервые обнаружено, что аллель С по IVS9-675C>A полиморфизму гена HIF-1A и генотипы С/С и С/А являются факторами повышенного риска развития ишемического инсульта в русской популяции.

Показано, что М235Т полиморфизм гена АТГ, 4а/4Ь полиморфизм гена eNOS, S19W полиморфизм гена АРОА5 не ассоциированы с развитием ИБС и ИБМ в русской популяции.

Впервые проведенное в данной работе исследование полиморфных вариантов генов р53, AIF и CASP9 и их вклада в патогенез цереброваскулярных заболеваний показало, что R72P полиморфизм гена р53, полиморфизм rs 189994 гена AIF и полиморфизм rs2906766 гена CASP9 не ассоциированы с риском развития ишемического инсульта в русской популяции и не оказывают влияния на течение заболевания у больных из России.

Практическая значимость.

Полученные данные позволяют оценить роль ряда генетических систем в развитии таких ССЗ, как ишемическая болезнь сердца и ишемическая болезнь мозга, и являются основанием для разработки молекулярно-генетических методов определения лиц с повышенным риском развития данных заболеваний. Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных участков генов-кандидатов ССЗ могут использоваться для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления лиц с высоким риском развития заболевания и проведения донозологической профилактики. Учитывая результаты генотипирования больных ИБС и ИБМ, возможно выделить группы пациентов с более тяжелым течением заболевания и дифференцировать у них лечебно-профилактические мероприятия, что важно для прогностических целей.

Положения, выносимые на защиту.

1. Инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц с отягощенной по ИБС и по инсульту наследственностью. Маркером повышенного риска развития заболевания являются аллель D и генотип DD.

2. Полиморфизмы R219K и R1587K гена АВСА1 ассоциированы с развитием ишемической болезни сердца и ее основных клинических проявлений. Аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС, стенокардии, артериальной гипертонии и вариантом более тяжелого течения данных заболеваний. Аллель R1587 ассоциирован с повышенным риском развития ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии у лиц с отягощенным семейным анамнезом.

3. Полиморфизм -1131 Т/С гена АРОА5 у больных ИБС коррелирует с параметрами, характеризующими выраженность атеросклероза в коронарных артериях - индексом стеноза и окклюзией сосудов. Генотипы -1131 С/С и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий.

4. R72P полиморфизм гена р53 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС - аллель 72Р является протективным фактором и приводит к снижению риска развития ГЛЖ у больных ИБС. C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка, а также инфаркта миокарда у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью - аллель С311 и генотип С311С являются фактором повышенного риска развития данных заболеваний.

5. Полиморфизм IVS9-675C>A гена HIF-1A ассоциирован с развитием ишемического атеротромботического инсульта в русской популяции - фактором повышенного риска развития данного заболевания является аллель С и содержащие его генотипы С/С и С/А. Замена A>G в первом интроне гена PARP1 (полиморфизм rs3219023) и С/А полиморфизм в З'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB: 181497) коррелируют с объемом инфаркта мозга у больных с острым атеротромботическим инсультом и тяжестью их состояния. Генотип А/А по гену PARP1, генотипы А/А и С/А по гену EFNB3 являются вариантом более тяжелого течения инсульта и дальнейшего прогрессирования патологического процесса.

6. М235Т полиморфизм гена АТГ, 4а/4Ь полиморфизм гена eNOS, S19W полиморфизм гена АРОА5, полиморфизм rs2048426 гена PARP1, полиморфизм rs189994 гена AIF и полиморфизм rs2906766 гена CASP9 не ассоциированы с развитием ИБС и ИБМ в русской популяции и не оказывают влияния на течение этих сердечно-сосудистых заболеваний у больных из России.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная генетика", Тупицына, Татьяна Викторовна

выводы

1. Инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц с отягощенной по ИБС и по инсульту наследственностью. Маркером повышенного риска развития заболевания являются аллель D и генотип DD.

2. Полиморфизмы R219K и R1587K гена АВСА1 ассоциированы с развитием ишемической болезни сердца и ее основных клинических проявлений. Аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС, стенокардии, артериальной гипертонии и вариантом более тяжелого течения данных заболеваний у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью. Аллель R1587 ассоциирован с повышенным риском развития ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии у лиц с отягощенным семейным анамнезом.

3. Полиморфизм -1131Т/С гена АРОА5 у больных ИБС коррелирует с параметрами, характеризующими выраженность атеросклероза в коронарных артериях - индексом стеноза и окклюзией сосудов. Генотипы -1131С/С и -1131Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий.

4. R72P полиморфизм гена р53 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС - аллель 72Р является протективным фактором и приводит к снижению риска развития ГЛЖ у больных ИБС. C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием гипертрофии миокарда левого желудочка, а также инфаркта миокарда у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью - аллель С311 и генотип С311С являются фактором повышенного риска развития данных заболеваний.

5. Полиморфизм IVS9-675C>A гена HIF-IA ассоциирован с развитием ишемического атеротромботического инсульта в русской популяции - фактором повышенного риска развития данного заболевания является аллель С и содержащие его генотипы С/С и С/А. Замена A>G в первом интроне гена PARP1 (полиморфизм rs3219023) и С/А полиморфизм в 3'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB:181497) коррелируют с объемом инфаркта мозга у больных с острым атеротромботическим инсультом и тяжестью их состояния. Генотип А/А по гену PARP1, генотипы А/А и С/А по гену EFNB3 являются вариантом более тяжелого течения инсульта и дальнейшего прогрессирования патологического процесса.

6. М235Т полиморфизм гена АТГ, 4а/4Ь полиморфизм гена eNOS, S19W полиморфизм гена АРОА5, полиморфизм rs2048426 гена PARP1, полиморфизм rs189994 гена AIF и полиморфизм rs2906766 гена CASP9 не ассоциированы с развитием ИБС и ИБМ и не оказывают влияния на течение этих сердечно-сосудистых заболеваний у больных из России.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В настоящее время происходит интенсивный процесс накопления информации о роли полиморфных локусов генов-кандидатов ССЗ в патологическом процессе при развитии ишемической болезни сердца и ишемического инсульта. Поиск ассоциаций этих генов с заболеваниями и их клиническими характеристиками с использованием анализа сибсовых пар является одним из наиболее плодотворных подходов. В развитии атеросклероза и формировании развернутой клинической картины ИБС и ИБМ участвует несколько патогенетических механизмов. В детерминации риска развития данных заболеваний принимает участие несколько генных локусов, при этом наблюдается сложная динамика взаимодействия генетических факторов друг с другом и с факторами внешней среды на разном генетическом фоне, что обуславливает наличие или отсутствие ассоциаций в различных популяциях. Изучение генетики ССЗ является чрезвычайно важной задачей, как с научной, так и с теоретической точки зрения.

В данной работе было проведено исследование вклада полиморфизмов ряда генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний в развитие ишемической болезни сердца и ишемической болезни мозга у лиц, относящихся к русскому этносу. В данном исследовании нами был использован подход, основанный на сочетании теста неравновесности передачи в парах сибсов (S-TDT), позволяющего выявлять наличие или отсутствие главного гена заболевания, с методами ассоциативного анализа, которые позволяют проводить анализ корреляций между полиморфными вариантами генов и фенотипическими признаками как в выборке больных, так и в выборке их сибсов. При этом выборка сибсов изучается путем сопоставления частоты встречаемости генотипов по каждому исследуемому локусу между группой сибсов с наличием какой-либо сердечно-сосудистой патологии и группой сибсов с отсутствием данной патологии. Таким образом, изучив распределение частот генотипов и аллелей в этих двух группах сибсов и установив различия между ними, можно рассчитать риск развития заболевания у лиц, имеющих в генотипе "плохой" аллель. Данное исследование можно определить как один из вариантов исследования типа "случай-контроль", в котором сибсы с заболеванием являются изучаемой группой, а сибсы без заболевания выступают в качестве контрольной группы. Однако данный метод с использованием сибсовых пар отличается от популяционных исследований типа "случай-контроль" тем, что позволяет оценить риск развития заболевания не в популяции в целом, а у лиц с семейной предрасположенностью. На наш взгляд, использование такой смещенной селектированной выборки позволяет повысить мощность исследования и более успешно выявлять ассоциированные с заболеванием полиморфные варианты генов-кандидатов.

С использованием теста неравновесности передачи в парах сибсов (S-TDT) было показано, что сильная ассоциация (сцепление) между исследуемыми полиморфизмами генов-кандидатов ССЗ и ишемической болезнью сердца, инфарктом миокарда, стенокардией, ишемическим инсультом и хронической ишемической болезнью мозга отсутствует. Следовательно, ни один из изучаемых генов не является главным геном, ответственным за развитие этих заболеваний.

Для дальнейшей оценки вклада каждого гена в развитие ИБС и ИБМ использовался ассоциативный анализ. По сравнению с тестом неравновесности передачи методы ассоциативного анализа обладают менее жесткими критериями для оценки статистических данных и поэтому позволяют выявить менее сильные ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов ССЗ с риском развития и характером течения патологического процесса, которые не выявляются при использовании S-TDT.

При изучении пар сибсов обнаружено, что инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АПФ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда и стенокардии у лиц с отягощенным по ИБС семейным анамнезом. Генетическим маркером заболевания является генотип DD. Полученные нами результаты согласуются с результатами многих исследований [73,113,255,279,361,408]. Данные, полученные в этих работах, были подтверждены с использованием методов мета-анализа [186,336].

Большое количество работ посвящено изучению риска развития ишемического инсульта у лиц с DD генотипом [37,76,227,256,286,326,368, 409]. В результате проведенного исследования нами не было найдено ассоциации между DD генотипом и риском развития ишемического инсульта. Однако нами впервые показано, что DD генотип ассоциирован с развитием ИБС у лиц с отягощенной по инсульту наследственностью.

Нами была проведена оценка вклада R219K и R1587K полиморфизмов гена АВСА1 в развитие и течение ИБС. Аллель 219К является фактором повышенного риска развития ИБС, стенокардии, артериальной гипертонии и вариантом более тяжелого течения данных заболеваний у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью. Работы по изучению ассоциаций между R219K полиморфизмом гена АВСА1 и ИБС немногочисленны. Cenarro A. et al. [78] из Испании исследовали данный полиморфизм гена АВСА1 у больных семейной гиперхолестеринемией с развитием преждевременной ИБС и без ИБС, Clee S. et al. [88] из Дании - у больных ИБС. Было выявлено, что в этих этнических группах аллель К ассоциирован с пониженным риском развития преждевременного атеросклероза и ИБС. Таким образом, в различных этнических группах наблюдается разнонаправленное действие полиморфизма R219K на развитие ИБС и тяжесть ее течения. Такой феномен этноспецифического влияния данного полиморфизма может быть обусловлен как минимум двумя различными механизмами.

Во-первых, данный полиморфизм сам по себе может не являться функционально значимым и быть маркером пока не описанного варианта гена АВСА1, обуславливающего его влияние на риск развития ИБС. При этом патогенетически значимые или, наоборот, протективные варианты в разных этносах могут отличаться и возникать на основании разных аллельных вариантов гена АВСА1. В России таким патогенетическим вариантом является аллель К, тогда как у датчан и испанцев - вариант R. j

Во-вторых, фенотипическая реализация данного полиморфизма не является простым одноступенчатым процессом. Как известно, в метаболизме ЛПВП, кроме АВСА1, важную роль играет ряд других белков. Сложность и вариабельность генетической организации системы метаболизма липидов может по-разному влиять на реализацию варианта R219K полиморфизма гена АВСА1 в различных популяциях, что и приводит поэтому к противоположным эффектам на состояние сердечнососудистой системы.

Нами впервые установлено, что R1587K полиморфизм гена АВСА1 ассоциирован с развитием ИБС, инфаркта миокарда и стенокардии. Аллель R1587 и генотип R1587R являются фактором повышенного риска развития этих заболеваний у лиц с отягощенным семейным анамнезом. Clee S. et al. не обнаружили статистически достоверных ассоциаций данного полиморфизма со степенью атеросклероза, с частотой коронарных событий у больных ишемической болезнью сердца, а также с развитием этого заболевания. Однако у носителей 1587К аллеля наблюдается понижение уровня ХС ЛПВП по сравнению с больными, имеющими R1587R генотип [88]. Известно, что низкий уровень ХС ЛПВП в плазме крови является независимым фактором риска развития атеросклероза и

ССЗ. Таким образом, наличие в генотипе аллеля 1587К, который способствует сдвигу липидного спектра в сторону атерогенности, может детерминировать процессы атерогенеза и атеротромбоза у представителей датской популяции. Разнонаправленное действие полиморфизма R1587K гена АВСА1 в различных популяциях подтверждает сложность генетической организации системы метаболизма липидов и также может быть объяснено вышеперечисленными причинами.

Впервые обнаружена достоверная корреляция -1131 Т/С полиморфизма гена АРОА5 с параметрами, характеризующими выраженность атеросклеротического процесса в коронарных артериях. Показано, что генотипы -1131С/С и -1131 Т/С ассоциированы с более высокой степенью поражения венечных артерий. В исследованиях, проведенных за рубежом, было выявлено повышение уровня ТГ в плазме крови у лиц с генотипами -1131С/С и -1131Т/С [58,154]. Также было установлено, что -1131С аллель ассоциирован с повышенным риском развития инфаркта миокарда [154]. Таким образом, аллель -1131С по -1131Т/С полиморфизму гена АРОА5 может рассматриваться в качестве фактора повышенного риска развития ишемической болезни сердца и более тяжелого варианта ее течения.

В данной работе впервые показана ассоциация R72P полиморфизма гена р53 с риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у больных ИБС. Установлено, что аллель Р является протективным фактором и наличие в генотипе аллеля Р приводит к снижению риска развития ГЛЖ у этих больных. Гипертрофия миокарда левого желудочка возникает в результате структурных и функциональных изменений в сосудистой стенке, получивших название процесса ремоделирования. Ремоделирование сердечно-сосудистой системы является обязательным компонентом ИБС, являясь с одной стороны ее осложнением, а с другой стороны - фактором ее прогрессирования. В прогрессировании патологического процесса важную роль играет пролиферация ГМК [337]. Важная роль в регуляции пролиферации гладкомышечных и других клеток в сосудистой стенке принадлежит белку р53, чем многие авторы и объясняют возможное влияние гена р53 на риск развития атеросклероза и ИБС [60,146,318,333]. Вероятно, белок с вариантом R (аргинин) в 72 положении, обладает повышенной активностью. Являясь транскрипционным фактором, р53 увеличивает экспрессию генов различных факторов роста, что приводит к повышению пролиферации ГМК и других клеток в сосудистой стенке и развитию гипертрофии миокарда левого желудочка у больных с генотипом R72R.

Нами было выявлено, что C311S полиморфизм гена PON2 ассоциирован с развитием инфаркта миокарда и гипертрофии миокарда левого желудочка у лиц с отягощенной по ИБС наследственностью. Фактором повышенного риска развития данных заболеваний является аллель С311 и генотип С311С. Результаты работ, проведенных различными исследователями, являются противоречивыми. Данные настоящего исследования совпадают с результатами исследования, проведенного в Италии [231]. Однако в некоторых работах было показано, что фактором повышенного риска развития ишемической болезни сердца являются генотипы SS, CS и аллель S [209,298]. Возможно, изученный полиморфизм гена параоксоназы 2 не является функционально значимым, а служит маркером для других функциональных вариантов, которые еще предстоит выявить.

Необходимо еще раз подчеркнуть, что в данном исследовании для оценки риска развития ИБС и ее основных клинических проявлений мы используем выборку, состоящую из сибсовых пар. На наш взгляд, данный подход позволяет успешно выявлять ассоциированные с заболеванием полиморфные варианты генов в небольших по размеру выборках и оценить риск развития заболевания не в популяции в целом, а у лиц с семейной предрасположенностью. Чтобы оценить популяционный риск развития заболевания для генетических маркеров, выявленных в селектированной выборке, необходимо проведение дополнительных исследований с использованием выборок "случай-контроль"; при этом в анализ будут включены только те полиморфные локусы, для которых показаны их ассоциации с риском развития ССЗ в селектированных выборках.

Результаты молекулярно-генетических исследований ишемической болезни сердца имеют непосредственное значение для медицинской практики, в области профилактической медицины, поскольку они позволят выделить группы риска, осуществлять профилактику заболевания у лиц, попадающих в группу риска, конкретизировать патогенетические механизмы развития ИБС у отдельного больного и, учитывая патогенез заболевания, проводить целенаправленное лечение.

Особый интерес представляет изучение наследственных факторов индивидуальной чувствительности вещества мозга к ишемии, среди которых большое значение имеют гены-регуляторы апоптоза и антиапоптозной защиты, а также гены белков, участвующих в неоангиогенезе, клеточной пролиферации и дифференцировке, нейрональной передаче. В последнее время внимание ученых в качестве потенциальных генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний, и в частности ишемического инсульта, привлекли гены белков полимеразы 1 поли(АДФ-рибозы) (ПАРП-1), эфрина ВЗ (EFNB3), индуцируемого гипоксией фактора la (HIF-la). Участие этих генов в формировании очага ишемического повреждения при инсульте было продемонстрировано только в модельных экспериментах, ранее не проводилось исследований по изучению влияния различных полиморфных вариантов этих генов на развитие ишемического инсульта. Подобные исследования в данной работе проводятся впервые.

Нами впервые установлено, что генотип А/А по A>G полиморфизму в первом интроне гена PARP1 (rs3219023) и генотипы А/А и С/А по С/А полиморфизму З'-фланкирующей области гена EFNB3 (GDB:181497) являются вариантом тяжелого течения заболевания у больных из России. Впервые обнаружено, что генотипы С/С и С/А по IVS9-675C>A полиморфизму гена HIF-1A и аллель С ассоциированы с повышенным риском развития ишемического инсульта в русской популяции.

Полученные результаты предоставляют возможность в дальнейшем разработать комплексные методы обследования лиц из групп риска и проводить у них профилактические мероприятия. Данные результаты позволят также уже на ранних стадиях развития церебральной ишемии у больных, имеющих в генотипе "плохой" аллель, вовремя использовать нейропротективную терапию с целью предотвращения дальнейшего развития обширного инфаркта мозга и тяжелого инсульта у этих больных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тупицына, Татьяна Викторовна, Москва

1. Аничков Н.Н. II Русск. врач. 1915. № 8, С. 184-186; № 9, С. 207-211.

2. Аронов Д.М. Лечение и профилактика атеросклероза. М.: Триада-Х. 2000. С.50-57.

3. Аронов Д.М. Лечение и профилактика атеросклероза. М.: Триада-Х. 2000. С.411.

4. Арутюнов Т.П. Статины и острые коронарные синдромы. Мы на пороге нового стандарта лечения. Клин, фармакол. и терапия. 2001. Т.З, №10. С.2-7.

5. Белова Л.А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов. Биохимия. 1997. Т.62, вып.6. С.659-668.

6. Белова Л.А. (Ангиотензин П)-образующие ферменты. Биохимия. 2000. Т.65, №12. С.1589-1599.

7. Бражник В.А., Горашко Н.М., Минушкина Л.О. Полиморфные маркеры I/D и G7831A гена фермента, превращающего ангиотензин, и гипертрофия миокарда у больных артериальной гипертонией. Кардиология. 2003. №2. С.44-49.

8. Брюне Б., Сандау К., фон Кнетен А. Биохимия. 1998;63:966-975.

9. Винк Д.А., Водовоз Й., Кук Дж.А. и др. Биохимия. 1998;63:948-957.

10. Гомазков О.А. Пептиды в кардиологии. Биохимия. Физиология. Патология. Информация. Анализ. М.: Материк Альфа, 2000. С. 143.

11. Демографический ежегодник России. Статистический сборник. Москва. 2002.

12. Дзяк Г.В., Коваль Е.А. Клинико-иммунологические критерии оценки прогноза и лечения атеросклероза и ревматизма. Журнал АМН УкраТни. 1998. Т.4, №1. С.78-87.

13. Затейщиков Д.А., Минушкина Л.О., Кудряшова О.Ю. и др. Полиморфизм генов NO-синтетазы и рецептора ангиотензина II 1-го типа иэндотелиальный гемостаз у больных ишемической болезнью сердца. Кардиология. 2000. №11. С.28-32.

14. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. СПб.: Питер Пресс. 1995. С.138-141.

15. Климов А.Н. Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. СПб.: Питер Ком. 1999. С.512.

16. Копнин Б.П. Мишени действия онкагенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия. 2000. Т.65. С.5-33.

17. Котовская Ю.В., Кобалаева Ж.Д., Сергеева Т.В. и др. Полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой системы и гена эндотелиальной NO-синтазы и макрососудистые осложнения при сахарном диабете типа 2. Артериальная гипертензия. 2002. Т.8, №3. С.86-90.

18. Маеда X., Акаике Т. Биохимия. 1998;63:1007-1019.

19. Малыгина Н.А., Костомарова И.В., Криводубская Т.Ю. и др. Анализ полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента у больных ишемической болезнью сердца и гипертонией. Кардиология. 2004. №4. С. 19-22.

20. Никитин Ю.П., Малютин С.Н., Долгих М.М. и др. Гипертрофия левого желудочка: популяционное и молекулярно-генетическое исследование. Кардиология. 1999. №6. С.27-32.

21. Оганов Р.Г. Профилактика сердечно-сосудистых заболеваний: возможности практического здравоохранения. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2002. №1. С.5-9.

22. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. М.: Медиа Сфера. 2002. С.166-180,191-194.

23. Северина И.С. Биохимия. 1998;63:939-947.

24. Скворцова В.И. Участие апоптоза в формировании инфаркта мозга. Инсульт. Приложение к Журн. Неврол. и психиатр. 2001;(2):12-18.

25. Скворцова В.И., Лимборская С.А., Сломинский П.А. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных с ишемической болезнью головного мозга. Инсульт. 2001. №3. С.21-27.

26. Соболева А.В., Киселев И.О., Рудоманов О.Г. и др. Влияние генотипа белков ренин-ангиотензинового каскада на структурно-функциональное состояние миокарда у спортсменов. Артериальная гипертензия. 2002. Т.8, №3. С.99-103.

27. Степанов В.А., Пузырев К.В., Спиридонова М.Т. и др. Полиморфизм ангиотензин-превращающего фермента и NO-синтазы у лиц с артериальной гипертензией, гипертрофией левого желудочка и гипертрофической кардиомиопатией. Генетика. 1998. Т.34, №11. С. 157881.

28. Сторожаков Г.И., Утешев Д.Б. Роль апоптоза в развитии атеросклероза, ишемии миокарда и сердечной недостаточности. Сердечная недостаточность. 2000. Т.1, №4.

29. Творогова М.Г. Обратный транспорт холестерина. Кардиология. 2001. №2. С.66-71.

30. Чистяков Д.А., Воронько О.Е., Савостьянов К.В. и др. Полиморфные маркеры генов эндотелиальной NO-синтазы и сосудистого рецептора ангиотензиногена II и предрасположенность к ишемической болезни сердца. Генетика. 1999.

31. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью. Биохимия. 2000. Т.65. С.34-47.

32. Шадрина М.И., Сломинский П.А., Жидко Н.И., Перова Н.В., Лимборская С.А. Анализ полиморфизма гена ангиотензиногена у больных ИБС и в случайной выборке из Московской популяции. Генетика. 1998;34(2):1-5.

33. Шляхто Е.В., Конради А.О. Роль генетических факторов в ремоделировании сердечно-сосудистой системы при гипертонической болезни. Артериальная гипертензия. 2002. Т.8, №3. С.107-114.

34. Шулутко Б.И. Артериальная гипертензия. СПб.: Гиппократ, 2001. С.382.

35. Ярилин А.А. Оригинальные статьи. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме. ГНЦ Институт иммунологии Минздрава России, Москва. www.EyeNews.ru.

36. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. С.608.

37. Aalto-Setala К., Palomaki Н., Miettinen Н., et al. Genetic risk factors and ischaemic cerebrovascular disease: role of common variation of the genes encoding apolipoproteins and angiotensin-converting enzyme. Ann Med. 1998 Apr;30(2):224-33.

38. Adams R.H., Wilkinson G.A., Weiss C., et al. Roles of ephrinB ligands and EphB receptors in cardiovascular development: demarcation of arterial/venous domains, vascular morphogenesis, and sprouting angiogenesis. Genes Dev. 1999 Feb l;13(3):295-306.

39. Addison C., Jenkins J.R., Sturzbecher H.W. The p53 nuclear localisation signal is structurally linked to a p34cdc2 kinase motif. Oncogene. 1990 Mar;5(3):423-6.

40. Agerholm-Larsen В., Nordestgaard B.G., Tybjaerg-Hansen A. ACE gene polymorphism in cardiovascular disease: meta-analyses of small and large studies in whites. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000 Feb;20(2):484-92.

41. Albina J.E., Reichner J.S. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis. Cancer Metastasis Rev. 1998 Mar;17(l):39-53.

42. Alnemri E.S., Livingston D.J., Nicholson D.W., et al. Human ICE/CED-3 protease nomenclature. Cell. 1996;87:171.

43. Amant C., Bauters C., Bodart J.C., et al. D allele of the angiotensin I-converting enzyme is a major risk factor for restenosis after coronary stenting. Circulation. 1997 Jul l;96(l):56-60.

44. An W.G., Kanekai M., Simon M.S., et al. Stabilization of wild-type p53 by hypoxia-inducible factor la. Nature. 1998;392:405-408.

45. Araki S., Shimada Y., Kaji K., et al. Apoptosis of vascular endothelial cells by fibroblast growth factor deprivation. Biochem Biophys Res Commun. 1990;168:1194-200.

46. Arends M.J., Morris R.G., Wyllie A.H. Apoptosis. The role of the endonuclease. Am J Pathol. 1990 Mar;136(3):593-608.

47. Ariumi Y., Masutani M., Copeland T.D., et al. Suppression of the poly(ADP-ribose) polymerase activity by DNA-dependent protein kinase in vitro. Oncogene. 1999;18:4616-4625.

48. Attie A.D., Kastelein J.P., Hay den M.R. Pivotal role of ABCA1 in reverse cholesterol transport influencing HDL levels and susceptibility to atherosclerosis. J Lipid Res. 2001 Nov;42(l l):1717-26.

49. Ault K.A., Cannon C.P., Mitchell J., et al. Platelet activation in patients after an acute coronary syndrome: results from the TIMI-2 trial. Thrombolysis in myocardial infarction. J Amer Coll Cardiology. 1999;33:634-639.

50. Aviram M., Rosenblat M., Bisgaier C.L., et al. Paraoxonase inhibits high-density lipoprotein oxidation and preserves its functions. A possible peroxidative role for paraoxonase. J Clin Invest. 1998 Apr 15;101(8):1581-90.

51. Ayub A., Mackness M.I., Arrol S., et al. Serum paraoxonase after myocardial infarction. Arterioscler Thromb Vase Biol. 1999;19:330-335.

52. Bakalkin G., Yakovleva Т., Selivanova G., et al. p53 binds single-stranded DNA ends and catalyzes DNA renaturation and strand transfer. Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Jan4;91(l):413-7.

53. Bakondi E., Bai P., Bak I., et al. Role of poly(ADP-ribose) polymerase in contact hypersensitivity (Abstract). FASEB J. 2002;16:A674.

54. Barley J., Blackwood A., Miller M., et al. Angiotensin converting enzyme gene I/D polymorphism, blood pressure and the renin-angiotensin system in Caucasian and Afro-Caribbean peoples. J Hum Hypertens. 1996 Jan;10(l):31-5.

55. Barley J., Markus H., Brown M., Carter N. Lack of association between angiotensinogen polymorphism (M235T) and cerebrovascular disease and carotid atheroma. J Hum Hypertens. 1995 Aug;9(8):681-3.

56. Baum L., Tomlinson В., Thomas G.N. APOA5 -1131T>C polymorphism is associated with triglyceride levels in Chinese men. Clin Genet. 2003 May;63(5):377-9.

57. Bennett M.R., Evan G.I., Schwartz S.M. Apoptosis of rat vascular smooth muscle cells is regulated by p53-dependent and -independent pathways. Circ Res. 1995 Aug;77(2):266-73.

58. Bergeron M., Yu A.Y., Solway K.E., et al. Induction of hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) and its target genes following focal ischaemia in rat brain. Eur J Neuroci. 1999;11:4159-4170.

59. Berliner J. Introduction. Lipid oxidation products and atherosclerosis. Vascul Pharmacol. 2002 Apr;38(4): 187-91.

60. Bhakdi S., Torzewski M., Klouche M., Hemmes M. Complement and atherogenesis: binding of CRP to degraded, non-oxidized LDL enhances complement activation. Arterioscler Thromb Vascular. Biol. 1999; 19:23482354.

61. Bi N., Yan S.K., Li G.P., et al. Polymorphsims in the apolipoprotein A5 gene and apolipoprotein C3 gene in patients with coronary artery disease. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2005 Feb;33(2): 116-21.

62. Bochkov V.N., Mechtcheriakova D., Lucerna M., et al. Oxidized phospholipids stimulate tissue factor expression in human endothelial cells via activation of ERK/EGR-1 and Ca2+/NFAT. Blood. 2002 Jan 1;99(1): 199-206.

63. Bodzioch M., Orso E., Klucken J., et al. The gene encoding ATP-binding cassette transporter 1 is mutated in Tangier disease. Nat Genet. 1999 Aug;22(4):347-51.

64. Britten M.B., Schachinger V., Dimmeler S., et al. ecNOS-polymorphism is associated with coronary endothelial disfunction. Eur Heart J 1999;20(144):907.

65. Brooks-Wilson A., Marcil M., Clee S.M., et al. Mutations in ABC1 in Tangier disease and familial high-density lipoprotein deficiency. Nat Genet. 1999 Aug;22(4):336-45.

66. Brugada R., Kelsey W., Lechin M., et al. Role of candidate modifier genes on the phenotypic expression of hypertrophy in patients with hypertrophic cardiomyopathy. J Investig Med. 1997 Dec;45(9):542-51.

67. Burkle A. Physiology and pathophysiology of poly(ADP-ribosyl)ation. Bioessays. 2001;23:795-806.

68. Cai H., Wilcken D.E., Wang X.L. The Glu298~>Asp (894G-->T) mutation at exon 7 of the endothelial nitric oxide synthase gene and coronary artery disease. J Mol Med. 1999 Jun;77(6):511-4.

69. Cambien F., Poirier O., Lecerf L., et al. Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction. Nature. 1992 Oct 15;359(6396):641-4.

70. Cao G., Minami M., Pei W., et al. Intracellular Bax translocation after transient cerebral ischemia: implications for a role of the mitochondrial apoptosis signaling pathway in ischemic neuronal death. J Cereb Blood Flow Metab. 2001;21:321-333.

71. Carmeliet P., Dor Y., Herbert J-M., et al. Role of HIF -la in hypoxia-mediated apoptosis, cell proliferation and tumour angiogenesis. Nature. 1998;394:485-490.

72. Catto A., Carter A.M., Barrett J.H., et al. Angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and cerebrovascular disease. Stroke. 1996 Mar;27(3):435-40.

73. Celentano A., Mancini F.P., Crivaro M., et al. Cardiovascular risk factors, angiotensin-converting enzyme gene I/D polymorphism, and left ventricular mass in systemic hypertension. Am J Cardiol. 1999 Apr 15;83(8):1196-200.

74. Cenarro A., Artieda M., Castillo S., et al. A common variant in the ABCA1 gene is associated with a lower risk for premature coronary heart disease in familial hypercholesterolaemia. J Med Genet. 2003 Mar;40(3): 163-8.

75. Cervellera M.N., Sala A. Poly(ADP-ribose) polymerase is a B-MYB coactivator. J Biol Chem. 2000;275:10692-10696.

76. Chiang F.T., Lai Z.P., Chern Т.Н., et al. Lack of association between angiotensin-converting enzyme gene polymorphism and coronary heart disease in a Chinese population. Jpn Heart J. 1997 Mar;38(2):227-36.

77. Chinnaiyan A.M., Dixit V.M. The cell-death machine. Curr Biol. 1996;6:555-562.

78. Cho Y., Gorina S., Jeffrey P.D., Pavletich N.P. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations. Science. 1994 Jul 15;265(5170):346-55.

79. Chobanian A.V., Haudenschild C.C., Nickerson C., Drago R. Antiatherogenic effect of captopril in the Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit. Hypertension. 1990 Mar;15(3):327-31.

80. Chowdary D.R., Dermody J.J., Jha K.K., Ozer H.L. Accumulation of p53 in a mutant cell line defective in the ubiquitin pathway. Mol Cell Biol. 1994 Mar;14(3):1997-2003.

81. Clarkson P.B., Prasad N., MacLeod C., et al. Influence of the angiotensin converting enzyme I/D gene polymorphisms on left ventricular diastolic filling in patients with essential hypertension. J Hypertens. 1997 Sep;15(9):995-1000.

82. Clee S.M., Kastelein J.J., van Dam M., et al. Age and residual cholesterol efflux affect HDL cholesterol levels and coronary artery disease in ABCA1 heterozygotes. J Clin Invest. 2000 Nov;106(10):1263-70.

83. Clee S.M., Zwinderman A.H., Engert J.C., et al. Common genetic variation in ABCA1 is associated with altered lipoprotein levels and a modified risk for coronary artery disease. Circulation. 2001 Mar 6;103(9):1198-205.

84. Cregan S.P., Fortin A., MacLaurin J.G., et al. Apoptosis-inducing factor is involved in the regulation of caspase-independent neuronal cell death. J Cell Biol. 2002 Aug 5;158(3):507-17. Epub 2002 Jul 29.

85. Crumrine R.C., Thomas A.L., Morgan P.F. Attenuation of p53 expression protects against focal ischemic damage in transgenic mice. J Cereb Blood Flow Metab. 1994 Nov; 14(6):887-91.

86. D'Agostini F., Fronza G., Campomenosi P., et al. Cancer biomarkers in human atherosclerotic lesions: no evidence of p53 involvement. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1995 Mar;4(2):l 11-5.

87. Dameron K.M., Volpert O.V., Tainsky M.A., Bouck N. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin-1. Science. 1994 Sep 9;265(5178):1582-4.

88. Dameron K.M., Volpert O.V., Tainsky M.A., Bouck N. The p53 tumor suppressor gene inhibits angiogenesis by stimulating the production of thrombospondin. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1994;59:483-9.

89. D'Amours D., Desnoyers S,. D'Silva I., Poirier G.G. Poly(ADP-ribosyl)ation reactions in the regulation of nuclear functions. Biochem J. 1999;342:249-268.

90. D'Amours D., Sallmann F.R., Dixit V.M., Poirier G.G. Gain-of-function of poly(ADP-ribose) polymerase-1 upon cleavage by apoptotic proteases: implications for apoptosis. J Cell Sci. 2001;114:3771-3778.

91. Daniel Т.О., Stein E., Cerretti D.P., et al. ELK and LERK-2 in developing kidney and microvascular endothelial assembly. Kidney Int Suppl. 1996 Dec;57:S73-81.

92. Daugas E., Susin S.A., Zamzami N., et al. Mitochondrio-nuclear translocation of AIF in apoptosis and necrosis. FASEB J. 2000;14:729-739.

93. Davies MJ. Coronary disease: the pathophysiology of acute coronary syndromes. Heart. 2000;83:361-366.

94. Dawber T.R. Incidence of coronary heart disease, stroke and peripheral arterial disease in the Framingham Study: the Epidemiology of Atherosclerotic Disease. Cambridge, M. A., Harvard University Press, 1980. P.59-75.

95. Dawson V.L., Dawson T.M., Bartley D.A., et al. Mechanisms of nitric oxide-mediated neurotoxicity in primary brain cultures. J Neurosci. 1993 Jun;13(6):2651-61.

96. Dean M., Hamon Y., and Chimini G. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. J Lipid Res. 2001;42:1007-1017.

97. De Murcia G., Huletsky A., Lamarre D., et al. Modulation of chromatin superstructure induced by poly(ADP-ribose) synthesis and degradation. J Biol Chem. 1986;261:7011-7017.

98. De Murcia G., Menissier de Murcia J. Poly(ADP-ribose) polymerase: a molecular nick-sensor. Trends Biochem Sci. 1994;19:172-176.

99. De Murcia G., Schreiber V., Molinete M., et al. Structure and function of Poly(ADP-ribose) polymerase. Mol Cell Biochem. 1994;138:15-24.

100. Donehower L.A., Harvey M., Slagle B.L., et al. Mice deficient for p53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours. Nature. 1992 Mar 19;356(6366):215-21.

101. Doria A., Warram J.H., Krolewski A.S. Molecular characterization of a DDEI melting polymorphism at the angiotensin I-converting enzyme (ACE) locus. Hum Mutat. 1994;4(2): 155-7.

102. Durbin L., Brennan C., Shiomi K., et al. Eph signaling is required for segmentation and differentiation of the somites. Genes Dev. 1998 Oct 1;12(19):3096-109.

103. Dyslipidemia and coronary heart disease. The ILIB LipidHandbook for Clinical Practice. 3rd ed. N.Y.: ILIB, 2003. P.242.

104. Esterbauer H., Wang G., Puhl H. Lipid peroxidation and its role in atherosderosis. Br Med Bull. 1993;49:566-76.

105. Estevez A.G., Spear N., Manuel S.M., et al. Role of endogenous nitric oxide and peroxynitrite formation in the survival and death of motor neurons in culture. Prog Brain Res. 1998;118:269-80.

106. Estevez A.G., Spear N., Pelluffo H., et al. Examining apoptosis in cultured cells after exposure to nitric oxide and peroxynitrite. Methods Enzymol. 1999;301:393-402.

107. Evans D., Beil F.U. The association of the R219K polymorphism in the ATP-binding cassette transporter 1 ( ABCA1) gene with coronary heart disease and hyperlipidaemia. J Mol Med. 2003 Apr;81(4):264-70. Epub 2003 Mar 26.

108. Evans A.E., Poirier О., Kee F., et al. Polymorphisms of the angiotensin-converting-enzyme gene in subjects who die from coronary heart disease. Q J Med. 1994 Apr;87(4):211-4.

109. Ewen M.E., Miller S.J. p53 and translational control. Biochim Biophys Acta. 1996 Mar 18;1242(3): 181-4.

110. Fasola Т., et al. Plasma renin activity during supine exercise in offspring of hypertensive parents. J Appl Physiol. 1968;25:410-415.

111. Fernandez-Llama P., Poch E., Oriola J., et al. Angiotensinogen gene M235T and T174M polymorphisms in essential hypertension: relation with target organ damage. Am J Hypertens. 1998 Apr;l 1(4 Pt l):439-44.

112. Ferns G.A., Galton D.J. Haplotypes of the human apoprotein AI-CIII-AIV gene cluster in coronary atherosclerosis. Hum Genet. 1986 Jul;73(3):245-9.

113. Ferns G.A., Shelley C.S., Stocks J., et al. A DNA polymorphism of the apoprotein All gene in hypertriglyceridaemia. Hum Genet. 1986 Nov;74(3):302-6.

114. Fisher N.D., Allan D.R., Gabomy C.L., Hollenberg N.K. Intrarenal angiotensin II formation in humans. Evidence from renin inhibition. Hypertension. 1995 May;25(5):935-9.

115. Flanagan J.G., Vanderhaeghen P. The ephrins and Eph receptors in neural development. Annu Rev Neurosci. 1998;21:309-45.

116. Francis G.S. ACE inhibition in cardiovascular disease. N Engl J Med. 2000 Jan 20;342(3):201-2.

117. Fredrickson D.S., Altrocchi P.H., Avioli L.V., et al. Tangier disease: combined clinical staff conference at the National Institutes of Health. Ann Intern Med. 1961;55:1016-1031.

118. Friedl W., Krempler F., Paulweber В., et al. A deletion polymorphism in the angiotensin converting enzyme gene is not associated with coronary heart disease in an Austrian population. Atherosclerosis. 1995 Jan 20; 112(2): 137-43.

119. Furchgott R.F., Zawadzki J.V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. Nature. 1980 Nov 27;288(5789):373-6.

120. Gaillard-Sanchez I., Mattei M.G., Clauser E., Corvol P. Assignment by in situ hybridization of the angiotensinogen gene to chromosome band lq4, the same region as the human renin gene. Hum Genet. 1990 Mar;84(4):341-3.

121. Gale N.W., Yancopoulos G.D. Growth factors acting via endothelial cell-specific receptor tyrosine kinases: VEGFs, angiopoietins, and ephrins in vascular development. Genes Dev. 1999 May 1; 13(9): 1055-66.

122. Geng Y.J., Ubby P. Evidence for Apoptosis in Advanced Human Atheroma. Colocalization with Interleukin-Ip-Converting Enzyme. Am J Pathol. 1995;147(2):251-66.

123. Germain M., Affar E.B., D'Amours D., et al. Cleavage of automodified poly(ADP-ribose) polymerase during apoptosis. Evidence for involvement of caspase-7. J Biol Chem. 1999;274:28379-28384.

124. Ginsberg D., Mechta F., Yaniv M., Oren M. Wild-type p53 can down-modulate the activity of various promoters. Proc Natl Acad Sci USA. 1991 Nov 15;88(22):9979-83.

125. Glomset J.A. The plasma lecithinsxholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res. 1968 Mar;9(2): 155-67.

126. Goldbourt U., Yaari S., Medalie J.H. Isolated low HDL cholesterol as a risk factor for coronaiy heart disease mortality. A 21-year follow-up of 8000 men. Arterioscler Thromb Vase Biol. 1997 Jan;17(l):107-13.

127. Goldstein J.L., Hobbs Hh., Brown M.S. Familial hypercholesterolemia. In: The metabolic and molecular bases of inherited disease. Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, editors. New York: McGraw-Hill, USA. 2863-2913.

128. Goto S., Xue R., Sugo N., et al. Poly(ADP-ribose) polymerase impairs early and long-term experimental stroke recovery. Stroke. 2002 Apr;33(4):l 1016.

129. Grayston J.T. Background and current knowledge of Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. J Infect Disease. 2000;181(3):402-410.

130. На H.C., Snyder S.H. Poly(ADP-ribose) polymerase is a mediator of necrotic cell death by ATP depletion. Proc Natl Acad Sci USA. 1999 Nov 23;96(24): 13978-82.

131. Han D.K.M., Haudenschild C.C., Hong U.K., et al. Evidence for Apoptosis in Human Atherogenesis and in a Rat Vascular Injury Model. Am J Pathol. 1995;147(2):267-77.

132. Harrington E.A., Fanidi A., Evan G.I. Oncogenes and cell death. Curr Opin Genet Dev. 1994 Feb;4(l): 120-9.

133. Heagerty A.M. Angiotensin II: vasoconstrictor or growth factor? J Cardiovasc Pharmacol. 1991;18(2):S14-9.

134. Helbling P.M., Saulnier D.M., Robinson V., et al. Comparative analysis of embryonic gene expression defines potential interaction sites for Xenopus EphB4 receptors with ephrin-B ligands. Dev Dyn. 1999 Dec;216(4-5):361-73.

135. Hingorani A.D., Liang C.F., Fatibene J., et al. A common variant of the endothelial nitric oxide synthase (Glu298~>Asp) is a major risk factor for coronary artery disease in the UK. Circulation. 1999 Oct 5;100(14):1515-20.

136. Hixson J.E., Powers P.K. Detection and characterization of new mutations in the human angiotensinogen gene (AGT). Hum Genet. 1995 Jul;96(l): 110-2.

137. Hogenesch J.B., Chan W.K., Jackiw V.H., Brown R.C., et al. Characterization of a subset of the basic-helix-loop-helix-PAS superfamily thatinteracts with components of the dioxin signaling pathway. J Biol Chem. 1997;272:8581-8593.

138. Holder N., Klein R. Eph receptors and ephrins: effectors of morphogenesis. Development. 1999 May;126(10):2033-44.

139. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., Harris C.C. p53 mutations in human cancers. Science. 1991 Jul 5;253(5015):49-53.

140. Holtzman D.M., Deshmukh M. Caspases: a treatement target for neurodegenerative disease. Nature Medicine. 1997;3:954-955.

141. Holtzman N.A., Marteau T.M. Will genetics revolutionize medicine? N Engl J Med. 2000 Jul 13;343(2): 141-4.

142. Hou L., Osei-Hyiaman D., Yu H., et al. Association of a 27-bp repeat polymorphism in ecNOS gene with ischemic stroke in Chinese patients. Neurology. 2001 Feb 27;56(4):490-6.

143. Hsu L.A., Ко Y.L., Chang C.J., et al. Genetic variations of apolipoprotein A5 gene is associated with the risk of coronary artery disease among Chinese in Taiwan. Atherosclerosis. 2006 Mar; 185(1 ):143-9. Epub 2005 Jul 27.

144. Huang L.E., Gu J., Schau M., Bunn H.F. Regulation of hypoxia-inducible factor la is mediated by an 02-depended degradation domain via the ubiquitin-proteasome pathway. Proc Natl Acad Sci USA. 1998;95:7987-7992.

145. Huang S. The practical problems of post-genomic biology. Nat Biotechnol. 2000 May;18(5):471-2.

146. Hubacek J.A. Apolipoprotein A5 and triglyceridemia. Focus on the effects of the common variants. Clin Chem Lab Med. 2005;43(9):897-902.

147. Hubacek J.A., Skodova Z., Adamkova V., et al. The influence of APOAV polymorphisms (T-1131>C and S19>W) on plasma triglyceride levels and risk of myocardial infarction. Clin Genet. 2004 Feb;65(2): 126-30.

148. Hupp T.R., Meek D.W., Midgley C.A., Lane D.P. Regulation of the specific DNA binding function of p53. Cell. 1992 Nov 27;71(5):875-86.

149. Iadecola С., Zhang F., Casey R., et al. Delayed reduction of ischemic brain injury and neurological deficits in mice lacking the inducible nitric oxide synthase gene. J Neurosci. 1997 Dec l;17(23):9157-64.

150. Ichihara A., Tanaka K. Roles of proteasomes in cell growth. Mol Biol Rep. 1995 ;21 (1):49-52.

151. Ichihara S., Yamada Y., Fujimura Т., et al. Association of a polymorphism of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene with myocardial infarction in the Japanese population. Am J Cardiol. 1998 Jan l;81(l):83-6.

152. Ignarro L.J. Biological actions and properties of endothelium-derived nitric oxide formed and released from artery and vein. Circ Res. 1989 Jul;65(l):l-21.

153. Ignarro L.J. Nitric oxide. A novel signal transduction mechanism for transcellular communication. Hypertension. 1990 Nov; 16(5):477-83.

154. Imai Y., Morita H., Kurihara H., et al. Evidence for association between paraoxonase gene polymorphisms and atherosclerotic diseases. Atherosclerosis. 2000 Apr;149(2):435-42.

155. Ishanov A., Okamoto H., Yoneya K., et al. Angiotensinogen gene polymorphism in Japanese patients with hypertrophic cardiomyopathy. Am Heart J. 1997 Feb;133(2): 184-9.

156. Isner J.M., Kearney M., Bortman S., Passeri J. Apoptosis in human atherosclerosis and restenosis. Circulation. 1995 Jun 1;91(11):2703-11.

157. Iwai N., Ohmichi N., Nakamura Y., Kinoshita M. DD genotype of the angiotensin-converting enzyme gene is a risk factor for left ventricular hypertrophy. Circulation. 1994 Dec;90(6):2622-8.

158. Iwai N., Shimoike H., Ohmichi N., Kinoshita M. Angiotensinogen gene and blood pressure in the Japanese population. Hypertension. 1995 Apr;25(4 Pt 2):688-93.

159. Iyer N.V., Kotch L.E., Agani F., et al. Cellular and developmental control of 02 of hypoxia-inducible factor la. Genes & Dev. 1998;12:149-162.

160. Janus F., Albrechtsen N., Dornreiter I., et al. The dual role model for p53 in maintaining genomic integrity. Cell Mol Life Sci. 1999 Jan;55(l): 12-27.

161. Janus F., Albrechtsen N., Knippschild U., et al. Different regulation of the p53 core domain activities 3'-to-5' exonuclease and sequence-specific DNA binding. Mol Cell Biol. 1999 Mar; 19(3):2155-68.

162. Jayaraman J., Prives C. Activation of p53 sequence-specific DNA binding by short single strands of DNA requires the p53 C-terminus. Cell. 1995 Jun 30;81(7):1021-9.

163. Jeng J.R. Left ventricular mass, carotid wall thickness, and angiotensinogen gene polymorphism in patients with hypertension. Am J Hypertens. 1999 May;12(5):443-50.

164. Jeunemaitre X. Genetic polymorphisms in the renin-angiotensin system. Therapie. 1998 May-Jun;53(3):271-7.

165. Jeunemaitre X., Soubrier F., Kotelevtsev Y.V., et al. Molecular basis of human hypertension: role of angiotensinogen. Cell. 1992 Oct 2;71(1): 169-80.

166. Jin K.L., Мао X.O., Nagayama Т., et al. Induction of vascular endothelian growth factor and hypoxia-inducible factor la by global ischaemia in rat brain. Neuroscience. 2000;99:577-585.

167. Kallio P.J., Wilson W.J., O'Brien S., et al. Regulation of hypoxia-inducible transcription factor la by the ubiquitin-proteasome pathway. J Biol Chem. 1999;274:6519-6525.

168. Kamitani A., Rakugi H., Higaki J., et al. Association analysis of a polymorphism of the angiotensinogen gene with essential hypertension in Japanese. J Hum Hypertens. 1994 Jul;8(7):521-4.

169. Kamitani A., Rakugi H., Higaki J., et al. Enhanced predictability of myocardial infarction in Japanese by combined genotype analysis. Hypertension. 1995 May;25(5):950-3.

170. Kanai Y., Tanuma S., Sugimura T. Immunofluorescent staining of poly(ADP-ribose) in situ in HeLa cell chromosomes in the M phase. Proc Natl Acad Sci USA. 1981;78:2801-2804.

171. Kannan P., Yu Y., Wankhade S., Tainsky M.A. PolyADP-ribose polymerase is a coactivator for AP-2-mediated transcriptional activation. Nucleic Acids Res. 1999;27:866-874.

172. Karathanasis S.K., Ferris E., Haddad I.A. DNA inversion within the apolipoproteins AI/CIII/AIV-encoding gene cluster of certain patients with premature atherosclerosis. Proc Natl Acad Sci USA. 1987 0ct;84(20):7198-202.

173. Karjalainen J., Kujala U.M., Stolt A., et al. Angiotensinogen gene M235T polymorphism predicts left ventricular hypertrophy in endurance athletes. J Am Coll Cardiol. 1999 Aug;34(2):494-9.

174. Kaski J.C., Zouridakis E.G. Inflammation, infection and acute coronary plaque events. Eur Heart J. 2001;3(I):10-15.

175. Katsuya Т., Koike G., Yee T.W., et al. Association of angiotensinogen gene T235 variant with increased risk of coronary heart disease. Lancet. 1995 Jun 24;345(8965): 1600-3.

176. Kelm M., Schrader J. Control of coronary vascular tone by nitric oxide. Circ Res. 1990 Jun;66(6): 1561-75.

177. Kennon В., Petrie J.R., Small M., Connell J.M. Angiotensin-converting enzyme gene and diabetes mellitus. Diabet Med. 1999 Jun;16(6):448-58.

178. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer.1972 Aug;26(4):239-57.

179. Kim T.-W., Warren H.P, Jung Y.-K. Alternative cleavage of Alsheimer-associated Presenilins during apoptosis by a caspase-3 family protease. Science 1997;277:373-376.

180. Kimura S., Mullins J.J., Bunnemann В., et al. High blood pressure in transgenic mice carrying the rat angiotensinogen gene. EMBO J. 1992 Mar;ll(3):821-7.

181. Kishimoto Т., Akira S., Narazaki M., et al. IL-6 family of cytokinesand gpll30. Blood. 1995;86:1243-1254.

182. Kitchen B.J., Masters C.J., Winzor D.J. Effects of lipid removal on the molecular size and kinetic properties of bovine plasma aiylesterase. Biochem J.1973 Sep; 135(1 ):93-9.

183. Kiyokawa E., Takai S., Tanaka M., et al. Overexpression of ERK, an EPH family receptor protein tyrosine kinase, in various human tumors. Cancer Res. 1994;54:3645-3650.

184. Klabunde Т., Strater N., Frohlich R., et al. Mechanism of Fe(III)-Zn(II) purple acid phosphatase based on crystal structures. J Mol Biol. 1996 Jun 21;259(4):737-48.

185. Klos K.L., Hamon S., Clark A.G., et al. APOA5 polymorphisms influence plasma triglycerides in young, healthy African Americans and whites of the CARDIA Study. J Lipid Res. 2005 Mar;46(3):564-71. Epub 2004 Dec 16.

186. Ко L.J., Prives С. р53: puzzle and paradigm. Genes Dev. 1996 May 1;10(9): 1054-72.

187. Ко Y.L., Ко Y.S., Wang S.M., et al. Angiotensinogen and angiotensin-I converting enzyme gene polymorphisms and the risk of coronary artery disease in Chinese. Hum Genet. 1997 Aug; 100(2):210-4.

188. Kobashi G. A case-control study of pregnancy-induced hypertension with a genetic predisposition: association of a molecular variant of angiotensinogen in the Japanese women. Hokkaido Igaku Zasshi. 1995 Jul;70(4):649-57.

189. Koenig W. Atherosclerosis involves more than just lipids: focus on inflammation. Eur Heart J. 1999; 1 (T): 19-26.

190. Krizanova O., Obdrzalkova D., Polakova H., et al. Molecular variants of the renin-angiotensin system components in the Slovak population. Physiol Res. 1997;46(5):357-61.

191. Krull C.E., Lansford R., Gale N.W., et al. Interactions of Eph-related receptors and ligands confer rostrocaudal pattern to trunk neural crest migration. Curr Biol. 1997 Aug l;7(8):571-80.

192. Kussie P.H., Gorina S., Marechal V., et al. Structure of the MDM2 oncoprotein bound to the p53 tumor suppressor transactivation domain. Science. 1996 Nov 8;274(5289):948-53.

193. Lacolley P., Gautier S., Poirier O., et al. Nitric oxide synthase gene polymorphisms, blood pressure and aortic stiffness in normotensive and hypertensive subjects. J Hypertens. 1998 Jan;16(l):31-5.

194. Lavigueur A., Maltby V., Mock D., et al. High incidence of lung, bone, and lymphoid tumors in transgenic mice overexpressing mutant alleles of the p53 oncogene. Mol Cell Biol. 1989 Sep;9(9):3982-91.

195. Leduc Y., Lawrence J.J., de Murcia G., Poirier G.G. Cell cycle regulation of poly(ADP-ribose) synthetase in FR3T3 cells. Biochim Biophys Acta. 1988;968:275-282.

196. Lee S., Elenbaas В., Levine A., Griffith J. p53 and its 14 kDa C-terminal domain recognize primary DNA damage in the form of insertion/deletion mismatches. Cell. 1995 Jun30;81(7): 1013-20.

197. Lei S.Z., Pan Z.H., Aggarwal S.K., et al. Effect of nitric oxide production on the redox modulatory site of the NMDA receptor-channel complex. Neuron. 1992 Jun;8(6): 1087-99.

198. Leri A., Liu Y., Claudio P.P., et al. Insulin-like growth factor-1 induces Mdm2 and down-regulates p53, attenuating the myocyte renin-angiotensin system and stretch-mediated apoptosis. Am J Pathol. 1999 Feb;154(2):567-80.

199. Leus F.R., Zwart M., Kastelein J J., Voorbij H.A. PON2 gene variants are associated with clinical manifestations of cardiovascular disease in familial hypercholesterolemia patients. Atherosclerosis. 2001 Feb 15;154(3):641-9.

200. Levine A.J., Momand J., Finlay C.A. The p53 tumour suppressor gene. Nature. 1991 Jun 6;351(6326):453-6.

201. Libby P. Molecular bases of the acute coronary syndromes. Circulation. 1995;91:2844-2850.

202. Lin J., Chen J., Elenbaas В., Levine A.J. Several hydrophobic amino acids in the p53 amino-terminal domain are required for transcriptional activation, binding to mdm-2 and the adenovirus 5 El В 55-kD protein. Genes Dev. 1994 May 15;8(10): 1235-46.

203. Lindahl Т., Satoh M.S., Poirier G.G., Klungland A. Post-translational modification of poly(ADP-ribose) polymerase induced by DNA strand breaks. Trends Biochem Sci. 1995;20:405-411.

204. Lindpaintner K., Pfeffer M.A., Kreutz R., et al. A prospective evaluation of an angiotensin-converting-enzyme gene polymorphism and the risk of ischemic heart disease. N Engl J Med. 1995 Mar 16;332(11):706-11.

205. Lipton S.A., Choi Y.B., Pan Z.H., et al. A redox-based mechanism for the neuroprotective and neurodestructive effects of nitric oxide and related nitroso-compounds. Nature. 1993 Aug 12;364(6438):626-32.

206. Liuzzo G., Colussi C., Ginnetti F., et al. C-reactive protein directly induces the activation of the transcription factor NFkB in human monocytes: a clue to pathogenesis of acute coronary syndromes? (Abstr.). Eur Heart J. 2001;22:372.

207. Liuzzo G., Goronzy J J., Yang H., et al. Monoclonal T-cell proliferation and plaque instability in acute coronary syndromes. Circulation. 2000; 101:28832888.

208. Lumsden A., Krumlauf R. Patterning the vertebrate neuraxis. Science (Washington DC). 1996;274:1109-1115.

209. Mackness M.I., Arrol S., Durrington P.N. Paraoxonase prevents accumulation of lipoperoxides in low-density lipoprotein. FEBS Lett. 1991 Jul 29;286(l-2): 152-4.

210. Mackness M.I., Harty D., Bhatnagar D., et al. Serum paraoxonase activity in familial hypercholesterolaemia and insulin-dependent diabetes mellitus. Atherosclerosis. 1991 ;86:193-199.

211. MacLeod M.J., Dahiyat M.T., Cumming A., et al. No association between Glu/Asp polymorphism of NOS3 gene and ischemic stroke. Neurology. 1999 Jul 22;53(2):418-20.

212. Magal E., Holash J.A., Toso R.J., et al. B61, a ligand for the Eck receptor protein-tyrosine kinase, exhibits neurotrophic activity in cultures of rat spinal cord neurons. J. Neurosci. Res. 1996;43:735-744.

213. Mallat Z., Besnard S., Duriez M., et al. Protective role of interleukin-10 in atherosclerosis. Circ Res. 1999;85:17-24.

214. Marcil M., Brooks-Wilson A., Clee S.M., et al. Mutations in the ABC1 gene in familial HDL deficiency with defective cholesterol efflux. Lancet. 1999 Oct 16;354(9187):1341-6.

215. Marian A.J. Genetic markers: genes involved in human hypertension. J Cardiovasc Risk. 1997 Oct-Dec;4(5-6):341-5.

216. Markus H.S., Hambley H. Neurology and the blood: haematological abnormalities in ischaemic stroke. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1998 Feb;64(2): 150-9.

217. Markus H.S., Mendall M.A. Helicobacter pylori: a risk factor for ischaemic cerebrovascular disease and carotid atheroma. J Neurol Neurosurg. Psychiat. 1998;64:104-107.

218. Markus H.S., Ruigrok Y., Ali N., Powell J.F. Endothelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma. Stroke. 1998 Sep;29(9): 1908-11.

219. Martin S.J., Green D.R. Protease activation during apoptosis: death by a thousand cuts? Cell. 1995 Aug 11;82(3):349-52.

220. Martinelli N., Girelli D., Olivieri O., et al. Interaction between smoking and PON2 Ser311Cys polymorphism as a determinant of the risk of myocardial infarction. Eur J Clin Invest. 2004 Jan;34(l): 14-20.

221. Martinez E., Puras A., Escribano J., et al. Threonines at position 174 and 235 of the angiotensinogen polypeptide chain are related to familial history of hypertension in a Spanish-Mediterranean population. Br J Biomed Sci. 2002;59(2):95-100.

222. Maru Y., Hirai H., Takaku F. Overexpression confers an oncogenic potential upon the eph gene. Oncogene. 1990;5:445-447.

223. Maseri A., Cianflone D. Inflammation in acute coronary syndromes. Eur Heart J. 2002;4(B):8-13.

224. Mazen A., Menissier de Murcia J., Molinete M., et al. Poly(ADP-ribose)polymerase: a novel finger protein. Nucleic Acids Res. 1989; 17:46894698.

225. McElveen J., Mackness M.I., Colley C.M., et al. Distribution of paraoxon hydrolysing activity in the serum of patients after myocardial infarction. Clin Chem. 1986;32:671-673.

226. Menard J., el Amrani A.I., Savoie F., Bouhnik J. Angiotensinogen: an attractive and underrated participant in hypertension and inflammation. Hypertension. 1991 Nov;18(5):705-7.

227. Miettinen H.E., Korpela K., Hamalainen L., Kontula K. Polymorphisms of the apolipoprotein and angiotensin converting enzyme genes in young North Karelian patients with coronary heart disease. Hum Genet. 1994 Aug;94(2):189-92.

228. Miyahara K., Kawamoto Т., Sase K., et al. Cloning and structural characterization of the human endothelial nitric-oxide-synthase gene. Eur J Biochem. 1994 Aug l;223(3):719-26.

229. Miyashita Т., Reed J.C. Tumor suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. Cell. 1995 Jan 27;80(2):293-9.

230. Mochizuki H., Scherer S.W., Xi Т., et al. Human PON2 gene at 7q21.3: cloning, multiple mRNA, and missense polymorphism in coding sequence. Gene. 1998;213:149-157.

231. Molinete M., Vermeulen W., Burkle A., et al. Overproduction of the poly(ADP-ribose) polymerase DNA-binding domain blocks alkylation-induced DNA repair synthesis in mammalian cells. EMBO (Eur Mol Biol Organ) J. 1993;12:2109-2117.

232. Moore J.H., Reilly S.L., Ferrell R.E., Sing C.F. The role of the apolipoprotein E polymorphism in the prediction of coronary artery disease age of onset. Clin Genet. 1997 Jan;51(l):22-5.

233. Moore K.W., O'Garra A., de Waal Malefyt R., et al. lnterleukin-10. Annu Rev Immunology. 1993;11:165-190.

234. Moreno P.R. Atherothrombosis: the global approach for a global disease. Pathophysiology of atherothrombosis. Highlights monograph from an International expert meeting on atherombosis. Milan, 1998. P.25.

235. Mosner J., Mummenbrauer Т., Bauer C., et al. Negative feedback regulation of wild-type p53 biosynthesis. EMBO J. 1995 Sep 15;14(18):4442-9.

236. Mott S., Yu L., Marcil M., et al. Decreased cellular cholesterol efflux is a common cause of familial hypoalphalipoproteinemia: role of the ABCA1 gene mutations. Atherosclerosis. 2000 Oct; 152(2):457-68.

237. Moyer C.F., Sajuthi D., Tulli H., Williams J.K. Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis. Amer J Pathology. 1991 ;138:951-960.

238. Mummenbrauer Т., Janus F., Muller В., et al. p53 Protein exhibits 3'-to-5' exonuclease activity. Cell. 1996 Jun28;85(7): 1089-99.

239. Nabika Т., Nasreen S., Kobayashi S., Masuda J. The genetic effect of the apoprotein AV gene on the serum triglyceride level in Japanese. Atherosclerosis. 2002 Dec;165(2):201-4.

240. Nagele A. Poly(ADP-ribosyl)ation as a fail-safe, transcription-independent, suicide mechanism in acutely DNA-damaged cells: a hypothesis. Radiat Environ Biophys. 1995;34:251-254.

241. Nakagami H., Ikeda U., Maeda Y., et al. Coronary artery disease and endothelial nitric oxide synthase and angiotensin-converting enzyme gene polymorphisms. J Thromb Thrombolysis. 1999 Oct;8(3): 191-5.

242. Nakai К., Itoh С., Miura Y., et al. Deletion polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene is associated with serum ACE concentration and increased risk for CAD in the Japanese. Circulation. 1994 Nov;90(5):2199-202.

243. Nelson M.R., Kardia S.L., Ferrell R.E., Sing C.F. Influence of apolipoprotein E genotype variation on the means, variances, and correlations of plasma lipids and apolipoproteins in children. Ann Hum Genet. 1999 Jul;63 (Pt 4):311-28.

244. Neri Serneri G.G., Prisco D., Martini F., et al. Acute T-cell activation is detectable in unstable angina. Circulation. 1997;95:1806-1812.

245. Nicholson D.W., Thornberry N.A. Caspases: Killer proteases. Trends Biochem Sci 1997; Vol. 22:299-306.

246. Nishimori H., Shiratsuchi Т., Urano Т., et al. A novel brain-specific p53-target gene, BAI1, containing thrombospondin type 1 repeats inhibits experimental angiogenesis. Oncogene. 1997 0ct;15(18):2145-50.

247. Nishiuma S., Kario K., Kayaba K., et al. Effect of the angiotensinogen gene Met235~>Thr variant on blood pressure and other cardiovascular risk factors in two Japanese populations. J Hypertens. 1995 Jul; 13(7):717-22.

248. Oei S.L., Shi Y. Poly(ADP-ribosyl)ation of transcription factor Yin Yang 1 under conditions of DNA damage. Biochem Biophys Res Commun. 2001;285:27-31.

249. Ohkubo H., Kawakami H., Kakehi Y., et al. Generation of transgenic mice with elevated blood pressure by introduction of the rat renin and angiotensinogen genes. Proc Natl Acad Sci USA. 1990 Jul;87(13):5153-7.

250. Oleksowicz L., Mrowiec Z., Zuckerman D., et al. Platelet activation induced by interleukin-6: evidence for a mechanism involving arachadonic acid metabolism. Thromb Haemostasis. 1994;72:302-308.

251. Oliver F.J., Menissier de Murcia J., Nacci C., et al. Resistance to endotoxic shock as a consequence of defective NF-kappaB activation in poly (ADP-ribose) polymerase-1 deficient mice. EMBO (Eur Mol Biol Organ) J. 1999; 18:44464454.

252. Oram J.F. ATP-binding cassette transporter Al and cholesterol trafficking. Curr Opin Lipidol. 2002 Aug;13(4):373-81.

253. Owen-Schaub L.B., Zhang W., Cusack J.C., et al. Wild-type human p53 and a temperature-sensitive mutant induce Fas/APO-1 expression. Mol Cell Biol. 1995 Jun;15(6):3032-40.

254. Paillard F., Chansel D., Brand E., et al. Genotype-phenotype relationships for the renin-angiotensin-aldosterone system in a normal population. Hypertension. 1999 Sep;34(3):423-9.

255. Palmer R.M., Ashton D.S., Moncada S. Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine. Nature. 1988 Jun 16;333(6174):664-6.

256. Palmer R.M., Moncada S. A novel citrulline-forming enzyme implicated in the formation of nitric oxide by vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun. 1989 Jan 16;158(l):348-52.

257. Palmer R.M., Rees D.D., Ashton D.S., Moncada S. L-arginine is the physiological precursor for the formation of nitric oxide in endothelium-dependent relaxation. Biochem Biophys Res Commun. 1988 Jun 30;153(3):1251-6.

258. Pan J.P., Lai S.T., Chiang S.C., et al. The risk of coronary artery disease in population of Taiwan is associated with Cys-Ser 311 polymorphism of human paraoxonase (PON)-2 gene. Zhonghua Yi Xue Za Zhi (Taipei). 2002 Sep;65(9):415-21.

259. Pandey A., Shao H., Marks R.M., et al. Role of B61, the ligand for the Eck receptor tyrosine kinase, in TNF-alpha-induced angiogenesis. Science. 1995 Apr 28;268(5210):567-9.

260. Pearson T.A. The prediction of midlife coronary heart and hypertension in young adults: the J. Hopkins multiple risk equations. Am J Prev Med. 1990;6:23-28.

261. Pennacchio L.A., Olivier M., Hubacek J.A., et al. An apolipoprotein influencing triglycerides in humans and mice revealed by comparative sequencing. Science. 2001 Oct 5;294(5540): 169-73.

262. Perola M., Sajantila A., Sarti C., et al. Angiotensin-converting enzyme genotypes in the high- and low-risk area for coronary heart disease in Finland. Genet Epidemiol. 1995;12(4):391-9.

263. Perticone F., Maio R, Cosco C., et al. Hypertensive left ventricular remodeling and ACE-gene polymorphism. Cardiovasc Res. 1999 Jul;43(l): 192-9.

264. Poirier О., Mao C., Mallet C., et al. Polymorphisms of the endothelial nitric oxide synthase gene no consistent association with myocardial infarction in the ECTIM study. Eur J Clin Invest. 1999 Apr;29(4):284-90.

265. Pontremoli R., Ravera M., Viazzi F., et al. Genetic polymorphism of the renin-angiotensin system and organ damage in essential hypertension. Kidney Int. 2000 Feb;57(2):561-9.

266. Prisco M., Hongo A., Rizzo M.G., et al. The insulin-like growth factor I receptor as a physiologically relevant target of p53 in apoptosis caused by interleukin-3 withdrawal. Mol Cell Biol. 1997 Mar; 17(3): 1084-92.

267. Pullicino P., Kwen P.L., Greenberg S., et al. Angiotensin-converting enzyme gene and lacunar stroke. Stroke. 1996 Mar;27(3):569-70.

268. Pullinger C.R., Hakamata H., Duchateau P.N., et al. Analysis of hABCl gene 5' end: additional peptide sequence, promoter region, and four polymorphisms. Biochem Biophys Res Commun. 2000 May 10;271(2):451-5.

269. Rabizadeh S., LaCount D.J., Friesen P.D., Bredesen D.E. Expression of the baculovirus p35 gene inhibits mammalian neural cell death. J Neurochem. 1993 Dec;61(6):2318-21.

270. Randomised trial of cholesterol lowering in 4444 patients with heart disease: the Scandinavian Simvastatin Survival Study (4S). Lancet. 1994;344:1383-1389.

271. Raycroft L., Wu H.Y., Lozano G. Transcriptional activation by wild-type but not transforming mutants of the p53 anti-oncogene. Science. 1990 Aug 31;249(4972): 1049-51.

272. Reed V.C., Hardwick S.J., Mitchinson M.S. Fragmentation of DNA in P388D1 macrophages exposed to oxidised low-density lipoproteins. FEBS Lett. 1993;332:218-20.

273. Reed M., Woelker В., Wang P., et al. The C-terminal domain of p53 recognizes DNA damaged by ionizing radiation. Proc Natl Acad Sci USA. 1995 Oct 10;92(21):9455-9.

274. Reisman D., Elkind N.B., Roy В., et al. -Мус trans-activates the p53 promoter through a required downstream CACGTG motif. Cell Growth Differ. 1993 Feb;4(2):57-65.

275. Reisman D., Loging W.T. Transcriptional regulation of the p53 tumor suppressor gene. Semin Cancer Biol. 1998;8(5):317-24.

276. Reisman D., Rotter V. The helix-loop-helix containing transcription factor USF binds to and transactivates the promoter of the p53 tumor suppressor gene. Nucleic Acids Res. 1993 Jan 25;21(2):345-50.

277. Robbins M., Topol E.J. Inflammation in acute coronary syndromes. Acute coronary syndromes / E.J. Topol. 2nd ed., revised and expanded. N.Y.: Marcel Dekker Inc., 2001. P. 1 -31.

278. Robertson K.S., Hawe E., Miller G.J., et al. Human paraoxonase gene cluster polymorphisms as predictors of coronary heart disease risk in the prospective Northwick Park Heart Study II. Biochim Biophys Acta. 2003 Nov 20;1639(3):203-12.

279. Rodriguez J., Lazebnik Y. Caspase-9 and APAF-1 form an active holoenzyme. Genes Dev. 1999 Dec 15; 13(24):3179-84.

280. Roff D.A., Bentzen P. The statistical analysis of mitochondrial DNAлpolymorphisms: % and the problem of small samples. Mol Biol Evol. 1989 Sep;6(5):539-45.

281. Rosenblat M., Draganov D., Watson C.E., et al. Mouse macrophage paraoxonase-2 activity is increased whereas cellular paraoxonase-3 activity is decreased under oxidative stress. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2003;23:468-474.

282. Rosenfeld M.E., Yla-Herttuala S., Lipton B.A., et al. Macrophagecolony-stimulating factor mRNA and protein in atherosclerotic lesions of rabbits and humans. Amer J Pathology. 1992;140:291-300.

283. Rosse Т., Olivier R., Monney L., et al. Bcl-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c. Nature. 1998 Jan 29;391(6666):496-9.

284. Rotimi C., Morrison L., Cooper R., et al. Angiotensinogen gene in human hypertension. Lack of an association of the 235T allele among African Americans. Hypertension. 1994 Nov;24(5):591-4.

285. Rotimi C., Puras A., Cooper R., et al. Polymorphisms of renin-angiotensin genes among Nigerians, Jamaicans, and African Americans. Hypertension. 1996 Mar;27(3 Pt 2):558-63.

286. Roy В., Beamon J., Balint E., Reisman D. Transactivation of the human p53 tumor suppressor gene by c-Myc/Max contributes to elevated mutant p53 expression in some tumors. Mol Cell Biol. 1994 Dec;14(12):7805-15.

287. Rubanyi G.M., Polokoff M.A. Endothelins: molecular biology, biochemistry, pharmacology, physiology, and pathophysiology. Pharmacol Rev. 1994 Sep;46(3):325-415.

288. Ruggieri S., Gregori L., Natalini P., et al. Evidence for an inhibitory effect exerted by yeast NMN adenylyltransferase on poly(ADP-ribose) polymerase activity. Biochemistry. 1990 Mar 13;29(10):2501-6.

289. Rust S., Rosier M., Funke H., et al. Tangier disease is caused by mutations in the gene encoding ATP-binding cassette transporter 1. Nat Genet. 1999 Aug;22(4):352-5.

290. Saikku P., Mattila K. Niemien M., et al. Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. Lancet. 1998;2:983-986.

291. Salceda S., Caro J. Hypoxia-inducible factor la (HIF-la) protein is rapidly degraded by the ubiquitin-proteasome system under normoxic conditions. Its stabilization by hypoxia depends on redox-induced changes. J Biol Chem. 1997;272:22642-22647.

292. Salvesen G.S., Dixit V.M. Caspase activation: the induced-proximity model. Proc Natl Acad Sci USA. 1999 Sep 28;96(20): 10964-7.

293. Samani N.J., Thompson J.R., O'Toole L., et al. A meta-analysis of the association of the deletion allele of the angiotensin-converting enzyme gene with myocardial infarction. Circulation. 1996 Aug 15;94(4):708-12.

294. Schelling P., Fischer H., Ganten D. Angiotensin and cell growth: a link to cardiovascular hypertrophy? J Hypertens. 1991 Jan;9(l):3-15.

295. Schmidt S., Sharma A.M., Zilch O., et al. Association of M235T variant of the angiotensinogen gene with familial hypertension of early onset. Nephrol Dial Transplant. 1995;10(7):1145-8.

296. Schwartz L.M., Milligan C.E. Cold thoughts of death: The role of ICE proteases in neuronal cell death. TINS. 1996;19:555-562.

297. Schwenke D.C., Carew Т.Е. Initiation of atherosclerotic lesions in cholesterol-fed rabbits. II. Selective retention of LDL vs. selective increases in LDL permeability in susceptible sites of arteries. Arteriosclerosis. 1989 Nov-Dec;9(6):908-18.

298. Selter H., Montenarh M. The emerging picture ofp53. Int J Biochem. 1994 Feb;26(2): 145-54.

299. Semenza G.L., Jiang B.H., Leung S.W., et al. Hypoxia response elements in the aldolase A, enolase 1, and lactate dehydrogenase A gene promoters contain essential binding sites for hypoxia-inducible factor 1. J Biol Chem. 1996;271:32529-32537.

300. Semenza G.L., Roth P.H., Fang H.M., Wang G.L. Transcriptional regulation of genes encoding glycolytic enzymes by hypoxia-inducible factor 1. J Biol Chem. 1994;269:23757-23763.

301. Sethi A.A., Nordestgaard B.G., Agerholm-Larsen В., et al. Angiotensinogen polymorphisms and elevated blood pressure in the general population: the Copenhagen City Heart Study. Hypertension. 2001 Mar;37(3):875-81.

302. Sethi A.A., Nordestgaard B.G., Gronholdt M.L., et al. Angiotensinogen single nucleotide polymorphisms, elevated blood pressure, and risk of cardiovascular disease. Hypertension. 2003 Jun;41(6): 1202-11. Epub 2003 May12.

303. Shaper A.G. Risk factors for ischemic heart disease: The prospective phase of the British regional Heart Study. J Epidemiology and Community Health. 1985;39:197-209.

304. Sharma P., Carter N.D., Barley J., Brown M.M. Molecular approach to assessing the genetic risk of cerebral infarction: deletion polymorphism in thegene encoding angiotensin 1-converting enzyme. J Hum Hypertens. 1994 Aug;8(8):645-8.

305. Shaulsky G., Ben-Ze'ev A., Rotter V. Subcellular distribution of the p53 protein during the cell cycle of Balb/c 3T3 cells. Oncogene. 1990 Nov;5(ll): 1707-11.

306. Shimasaki Y., Yasue H., Yoshimura M., et al. Association of the missense Glu298Asp variant of the endothelial nitric oxide synthase gene with myocardial infarction. J Am Coll Cardiol. 1998 Jun;31(7): 1506-10.

307. Simonovic M., Denault J.B., Salvesen G.S., et al. Lack of involvement of strand sl'A of the viral serpin CrmA in anti-apoptotic or caspase-inhibitory functions. Arch Biochem Biophys. 2005 Aug l;440(l):l-9.

308. Sing C.F., Davignon J. Role of the apolipoprotein E polymorphism in determining normal plasma lipid and lipoprotein variation. Am J Hum Genet. 1985 Mar;37(2):268-85.

309. Smith A., Robinson V., Patel K., Wilkinson D.G. The EphA4 and EphBl receptor tyrosine kinases and ephrin-B2 ligand regulate targeted migration of branchial neural crest cells. Curr Biol. 1997 Aug l;7(8):561-70.

310. Soubrier F., Alhenc-Gelas F., Hubert C., et al. Two putative active centers in human angiotensin I-converting enzyme revealed by molecular cloning. Proc Natl Acad Sci USA. 1988 Dec;85(24):9386-90.

311. Speir E., Modali R., Huang E.S., et al. Potential role of human cytomegalovirus and p53 interaction in coronary restenosis. Science. 1994 Jul 15;265(5170):391-4.

312. Spielman R.S., Ewens W.J. A sibship test for linkage in the presence of association: the sib transmission/disequilibrium test. Am J Hum Genet. 1998 Feb;62(2):450-8.

313. Srinivasula S.M., Ahmad M., Fernandes-Alnemri Т., Alnemri E.S. Autoactivation of procaspase-9 by Apaf-1-mediated oligomerization. Mol Cell. 1998 Jun;l(7):949-57.

314. Staessen J.A., Wang J.G., Ginocchio G., et al. The deletion/insertion polymorphism of the angiotensin converting enzyme gene and cardiovascular-renal risk. J Hypertens. 1997 Dec;15(12 Pt 2):1579-92.

315. Stein E., Lane A.A., Cerretti D.P., et al. Eph receptors discriminate specific ligand oligomers to determine alternative signaling complexes, attachment, and assembly responses. Genes Dev. 1998 Mar l;12(5):667-78.

316. Stengard J.H., Kardia S.L., Hamon S.C., et al. Contribution of regulatory and structural variations in APOE to predicting dyslipidemia. J Lipid Res. 2006 Feb;47(2):318-28. Epub 2005 Nov 29.

317. Stengard J.H., Pekkanen J., Ehnholm C., et al. Genotypes with the apolipoprotein epsilon4 allele are predictors of coronary heart disease mortality in a longitudinal study of elderly Finnish men. Hum Genet. 1996 May;97(5):677-84.

318. Stevnsner Т., Ding R., Smulson M., Bohr V.A. Inhibition of gene-specific repair of alkylation damage in cells depleted of poly(ADP-ribose) polymerase. Nucleic Acids Res. 1994;22:4620-4624.

319. Strosznajder R.P., Gadamski R., Czapski G.A., et al. Poly(ADP-ribose) polymerase during reperfiision after transient forebrain ischemia: its role in brain edema and cell death. J Mol Neurosci. 2003 Feb;20(l):61-72.

320. Strosznajder R.P., Walski M. Effects 3-aminobenzamide on ultrastructure of hippocampal CA1 layer after global ischemia in gerbils. J Physiol Pharmacol. 2004 Sep;55(3): 127-33.

321. Sturzbecher H.W., Brain R., Addison C., et al. AC-terminal alpha-helix plus basic region motif is the major structural determinant of p53 tetramerization. Oncogene. 1992 Aug;7(8): 1513-23.

322. Sun X., Shimizu H., Yamamoto K. Identification of a novel p53 promoter element involved in genotoxic stress-inducible p53 gene expression. Mol Cell Biol. 1995 Aug;15(8):4489-96.

323. Susin S.A., Daugas E., Ravagnan L., et al. Two distinct pathways leading to nuclear apoptosis. J Exp Med. 2000; 192:571-580.

324. Susin S.A., Lorenzo H.K., Zamzami N., et al. Molecular characterization of mitochondrial apoptosis-inducing factor. Nature. 1999 Feb 4;397(6718):441-6.

325. Sutter C.H., Laughner E., Semenza G.L. HIF-la protein expression is controlled by oxygen-regulated ubiquitination that is disrupted by deletions and missense mutations. Proc Natl Acad Sci USA. 2000;97:4748-4753.

326. Talmud P.J., Hawe E., Martin S., et al. Relative contribution of variation within the APOC3/A4/A5 gene cluster in determining plasma triglycerides. Hum Mol Genet. 2002 Nov 15;11(24):3039-46.

327. Tang Y.B., Sun P., Guo D.P., et al. Association between apolipoprotein A5 -1131T>C polymorphism and susceptibility of coronary artery disease in Chinese. Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2005 Jun;22(3):281-3.

328. Tanne D., Yaari S., Goldbourt U. High-density lipoprotein cholesterol and risk of ischemic stroke mortality. A 21-year follow-up of 8586 men from the Israeli Ischemic Heart Disease Study. Stroke. 1997 Jan;28(l):83-7.

329. Tanuma S.I., Enomoto Т., Yamada M.A. Changes in the level of poly ADP-ribosylation during a cell cycle. Exp Cell Res. 1978; 117:421-430.

330. Tanuma S., Yagi Т., Johnson G.S. Endogenous ADP ribosylation of high mobility group proteins 1 and 2 and histone HI following DNA damage in intact cells. Arch Biochem Biophys. 1985;237:38-42.

331. Tarunina М., Jenkins J.R. Human p53 binds DNA as a protein homodimer but monomeric variants retain full transcription transactivation activity. Oncogene. 1993 Nov;8( 11 ):3165-73.

332. Tessier-Lavigne M. Eph receptor tyrosine kinases, axon repulsion, and the development of topographic maps. Cell. 1995;82:345-348.

333. Tewari M., Quan L.T., O'Rourke K., et al. Yama/CPP32 beta, a mammalian homolog of CED-3, is a CrmA-inhibitable protease that cleaves the death substrate poly(ADP-ribose) polymerase. Cell. 1995;81:801-809.

334. The World Health Report 2003e. Geneva, Switzerland: World Health Organization; 2003. Available on-line at: http://www.who.int/whr/2003/en/Annex2-en.pdf.

335. Thompson G.R. Towards a new era: is coronary artery disease reversible? Cardiology. 1990;77(4):66-9.

336. Thompson G.R. Mobilisation of tissue cholesterol by apheresis. Prog Clin Biol Res. 1990;337:183-7.

337. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within. Science. 1998 Aug 28;281(5381):1312-6.

338. Tiret L., Kee F., Poirier O., et al. Deletion polymorphism in angiotensin-converting enzyme gene associated with parental history of myocardial infarction. Lancet. 1993 Apr 17;341(8851):991-2.

339. Tiret L., Rigat В., Visvikis S., et al. Evidence, from combined segregation and linkage analysis, that a variant of the angiotensin I-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels. Am J Hum Genet. 1992 Jul;51(l):197-205.

340. Todd J.A. Interpretation of results from genetic studies of multifactorial diseases. Lancet. 1999 Jul;354(1): 15-6.

341. Tokgozoglu S.L., Alikasifoglu M., Atalar E., et al. Angiotensin converting enzyme gene polymorphism and the risk and extent of ischemic heart disease among Turkish patients. Coron Artery Dis. 1997 Mar-Apr;8(3-4): 137-41.

342. Tong W.M., Hande M.P., Lansdorp P.M., Wang Z.Q. DNA strand break-sensing molecule poly(ADP-ribose) polymerase cooperates with P53 in telomere function, chromosome stability and tumor suppression. Mol Cell Biol. 2001;21:4046-4054.

343. Trzeciak Т., Szymczynska-Mullauer A., Kwiatkowska J., et al. Analysis of angiotensin converting enzyme (ACE) polymorphism in patients with myocardial infarction in the Polish population. Pol Arch Med Wewn. 1996 Jan;95(l):35-40.

344. Tsukada Т., Yokoyama K., Arai Т., et al. Evidence of association of the ecNOS gene polymorphism with plasma NO metabolite levels in humans. Biochem Biophys Res Commun. 1998 Apr 7;245(1): 190-3.

345. Ueda S., Weir C.J., Inglis G.C., et al. Lack of association between angiotensin converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism and stroke. J Hypertens. 1995 Dec;13(12 Pt 2):1597-601.

346. Ushmorov A., Ratter F., Lehmann V., et al. Nitric-oxide-induced apoptosis in human leukemic lines requires mitochondrial lipid degradation and cytochrome С release. Blood. 1999 Apr l;93(7):2342-52.

347. Van der Vliet H.N., Sammels M.G., Leegwater A.C., et al. Apolipoprotein A-V: a novel apolipoprotein associated with an early phase of liver regeneration. J Biol Chem. 2001 Nov 30;276(48):44512-20. Epub 2001 Sep 27.

348. Van Meir E.G., Polverini P.J., Chazin V.R., et al. Release of an inhibitor of angiogenesis upon induction of wild type p53 expression in glioblastoma cells. Nat Genet. 1994 Oct;8(2): 171-6.

349. Vasku A., Soucek M., Znojil V., et al. Angiotensin I-converting enzyme and angiotensinogen gene interaction and prediction of essential hypertension. Kidney Int. 1998 Jun;53(6): 1479-82.

350. Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis. Proc Natl Acad Sci USA. 1996 Mar 19;93(6):2239-44.

351. Venot С., Maratrat M., Sierra V., et al. Definition of a p53 transactivation function-deficient mutant and characterization of two independent p53 transactivation subdomains. Oncogene. 1999 Apr 8;18(14):2405-10.

352. Vidal F., Colome C., Martinez-Gonzalez J., Badimon L. Atherogenic concentrations of native low-density lipoproteins down-regulate nitric-oxide-synthase mRNA and protein levels in endothelial cells. Eur J Biochem. 1998 Mar 15;252(3):378-84.

353. Vogelstein В., Lane D., Levine A.J. Surfing the p53 network. Nature. 2000 Nov 16;408(6810):307-10.

354. Walker K.K., Levine A.J. Identification of a novel p53 functional domain that is necessary for efficient growth suppression. Proc Natl Acad Sci USA. 1996 Dec 24;93(26): 15335-40.

355. Wang G.L., Jiang B.H., Rue E.A., Semenza G.L. Hypoxia-inducible factor 1 is a basic-helix-loop-helix-PAS heterodimer regulated by cellular O2 tension. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92:5510-5514.

356. Wang H.U., Anderson D.J. Eph family transmembrane ligands can mediate repulsive guidance of trunk neural crest migration and motor axon outgrowth. Neuron. 1997;18:383-396.

357. Wang H.U., Chen Z.F., Anderson D.J. Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4. Cell. 1998 May 29;93(5):741-53.

358. Wang J., Burnett J.R., Near S., et al. Common and rare ABCA1 variants affecting plasma HDL cholesterol. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000 Aug;20(8): 1983-9.

359. Wang X.L., Mahaney M.C., Sim A.S., et al. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels. Arterioscler Thromb Vase Biol. 1997 Nov;17(l 1):3147-53.

360. Wang X.L., Wang J., Wilcken D.E. Interactive effect of the p53 gene and cigarette smoking on coronary artery disease. Cardiovasc Res. 1997 Aug;35(2):250-5.

361. Wang X.Y., Xue Y.M., Wen S.J., et al. The association of paraoxonase 2 gene C311S variant with ischemic stroke in Chinese type 2 diabetes mellitus patients. Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2003 Jun;20(3):215-9.

362. Watson A.D., Berliner J.A., Hama S.Y., et al. Protective effect of high density lipoprotein associated paraoxonase. Inhibition of the biological activity of minimally oxidized low density lipoprotein. J Clin Invest. 1995 Dec;96(6):2882-91.

363. Wesierska-Gadek J., Schmid G., Cerni C. ADP-ribosylation of wild-type P53 in vitro: binding of P53 protein to specific P53 consensus sequence prevents its modification. Biochem Biophys Res Commun. 1996;224:96-102.

364. West M.J., Summers K.M., Wong K.K., Burstow D.J. Renin-angiotensin system gene polymorphisms and left ventricular hypertrophy. The case against an association. Adv Exp Med Biol. 1997;432:117-22.

365. Wiener C.M., Booth G., Semenza G.L. In vivo expression of mRNAs encoding hypoxia-inducible factor 1. Biochem Biophys Res Common. 1996;225:485-488.

366. Wilson K.P., Black J.A., Thomson J.A., et al. Structure and mechanism of interleukin-1 beta converting enzyme. Nature. 1994 Jul 28;370(6487):270-5.

367. Wilson P.W., Abbott R.D., Castelli W.P. High density lipoprotein cholesterol and mortality. The Framingham Heart Study. Arteriosclerosis. 1988 Nov-Dec;8(6):737-41.

368. Winkelmann B.R., Hager J. Genetic variation in coronary heart disease and myocardial infarction: methodological overview and clinical evidence. Pharmacogenomics. 2000 Feb;l(l):73-94.

369. Winkelmann B.R., Hager J., Kraus W.E., et al. Genetics of coronary heart disease: current knowledge and research principles. Am Heart J. 2000 Oct; 140(4): SI 1-26.

370. Winkelmann B.R., Russ A.P., Nauck M., et al. Angiotensinogen M235T polymorphism is associated with plasma angiotensinogen and cardiovascular disease. Am Heart J. 1999 Apr;137(4 Pt l):698-705.

371. Winslow J.W., Moran P., Valverde J., et al. Cloning of AL-1, a ligand for an Eph-related tyrosine kinase receptor involved in axon bundle formation. Neuron. 1995;14:973-981.

372. Wong W.M., Hawe E., Li L.K., et al. Apolipoprotein AIV gene variant S347 is associated with increased risk of coronary heart disease and lower plasma apolipoprotein AIV levels. Circ Res. 2003 May 16;92(9):969-75. Epub 2003 Apr 3.

373. Woods A., Brull D.J., Humphries S.E., Montgomery H.E. Genetics of inflammation and risk of coronary artery disease: the central role of interleukin-6. Eur Heart J. 2000;21:1574-1583.

374. Woods D.B., Vousden K.H. Regulation of p53 function. Exp Cell Res. 2001 Mar 10;264(l):56-66.

375. Wright W.T., Young I.S., Nicholls D.P., et al. SNPs at the APOA5 gene account for the strong association with hypertriglyceridaemia at the

376. АРОА5/А4/СЗ/А1 locus on chromosome llq23 in the Northern Irish population. Atherosclerosis. 2006 Apr;185(2):353-60. Epub 2005 Aug 25.

377. Wyllie A.H. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation. Nature. 1980 Apr 10;284(5756):555-6.

378. Yahashi Y., Kario K., Shimada K., Matsuo M. The 27-bp repeat polymorphism in intron 4 of the endothelial cell nitric oxide synthase gene and ischemic stroke in a Japanese population. Blood Coagul Fibrinolysis. 1998 Jul;9(5):405-9.

379. Yamada Y., Doi Т., Hamakubo Т., Kodama T. Scavenger receptor family proteins: roles for atherosclerosis, host defence and disorders of the central nervous system. Cell Mol Life Sci. 1998 Jul;54(7):628-40.

380. Yamakawa-Kobayashi K., Arinami Т., Hamaguchi H. Absence of association of angiotensinogen gene T235 allele with increased risk of coronary heart disease in Japanese. Lancet. 1995 Aug 19;346(8973):515.

381. Yan S.K., Cheng X.Q., Song Y.H., et al. Apolipoprotein A5 gene polymorphism -1131T—>C: association with plasma lipids and type 2 diabetes mellitus with coronary heart disease in Chinese. Clin Chem Lab Med. 2005;43(6):607-12.

382. Yoshizumi M., Perrella M.A., Burnett J.C.Jr., Lee M.E. Tumor necrosis factor downregulates an endothelial nitric oxide synthase mRNA by shortening its half-life. Circ Res. 1993;73:205-209.

383. Yuan J., Shaham S., Ledoux S., et al. The C. elegans cell death gene ced-3 encodes a protein similar to mammalian interleukin-1 beta-converting enzyme. Cell. 1993 Nov 19;75(4):641-52.

384. Zee R.Y., Bennett C.L., Schrader A.P., Morris B.J. Frequencies of variants of candidate genes in different age groups of hypertensives. Clin Exp Pharmacol Physiol. 1994 Nov;21(l l):925-30.

385. Zee R.Y., Ridker P.M., Stampfer M.J., et al. Prospective evaluation of the angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and the risk of stroke. Circulation. 1999 Jan 26;99(3):340-3.

386. Ziegler M., Oei S.L. A Cellular survival switch: poly(ADP-ribosyl)ation stimulates DNA repair and silences transcription. Bioessays. 2001;23:543-548.

387. Zwarts K.Y., Clee S.M., Zwinderman A.H., et al. ABCA1 regulatory variants influence coronary artery disease independent of effects on plasma lipid levels. Clin Genet. 2002 Feb;61(2):l 15-25.