Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микроэкологический статус кишечного биоценоза и видовая архитектоника бифидобактерий у детей

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микроэкологический статус кишечного биоценоза и видовая архитектоника бифидобактерий у детей"



На правах рукописи

НЕМЧЕНКО Ульяна Михайловна

МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС КИШЕЧНОГО БИОЦЕНОЗА И ВИДОВАЯ АРХИТЕКТОНИКА БИФИДОБАКТЕРИЙ У ДЕТЕЙ

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 г иди гш

Иркутск — 2014

005549496

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ «НЦ ПЗСРЧ» СО РАМН)

Научный руководитель:

доктор биологических наук Попкова София Марковна

Научный консультант:

доктор медицинских наук Рычкова Любовь Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Киборт Рудольф Вадимович

(ГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии)

доктор биологических наук Анганова Елена Витальевна

(ГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения РФ, профессор кафедры эпидемиологии и микробиологии)

Ведущая организация:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Защита состоится 2014 г. в /О-СО часов на заседании Диссертаци-

онного совета ДМ 001.038.01 ФГБУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО РАМН по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте www.nzmedek.ru ФГБУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО

РАМН

Автореферат разослан « П » £. ¿/<2-^2 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Кулеш Дмитрий Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Микробном желудочно-кишечного тракта является наиболее разнообразным по видовому составу и количеству метаболических путей среди всех симбиотических систем человеческого тела. Согласно данным проекта Human Microbiome Project (НМР), общее число бактерий в микробиоме в 10-100 раз превышает число клеток самого человека, а количество генов микробио-ты кишечника в 150 раз превосходит число генов человека (Курильщиков A.M. с соавт., 2012; Li М. et al., 2008; Peterson J. et al., 2009; Tlaskalova-Hogenova H. et al., 2011; Morowitz M. J.et al., 2011; Lita M. Proctor, 2011; Khan A.A. et al., 2012).

Пищеварительный тракт человека населен преимущественно бактериями (90-95 % генетического материала). Доля вирусных геномов составляет примерно 5 %, геномов архей - до 1 %, других эукариот без учета генома человека- не более 1 % (Arumugam М. et al., 2011). Большинство бактерий относятся к родам Bacteroides (до 30 % всех бактерий в кишечнике), Clostridium, Fusobacterium, Eubacterium, Ruminococcus, Peptococcus, Pepto-streptococcus и Bifidobacterium. Кишечная микробиота участвует в метаболических процессах усвоения питательных веществ, является источником некоторых метаболитов, которые человек не может синтезировать сам, влияет на состояние иммунитета и здоровье человека в целом (Sellon R. К. et al., 1998). Одним из наиболее очевидных примеров является усвоение короткоцепочеч-ных жирных кислот, единственным источником получения которых является симбиотическая микробиота кишечника (Lupton J. R., 2004; Qin J. et al, 2010). Основную иммуномодулирующую роль в организме играют бифидобактерии (Шендеров Б.А., 2005; Белоусова Е.А.с соавт., 2008; Orrhage К., 2000; Lyons A. et al., 2010; Feng Т., Elson С.О. 20И; Atarashi К. et al., 2011). Характеристика видового разнообразия бифидобактерии, их качественное и количественное соотношение в кишечнике человека являются важным индикатором степени влияния внешних дестабилизаторов (продуктов техногенного загрязнения, некачественных продуктов питания, лекарственных средств). Обнаружена корреляция между видовым составом бифидобактерий и наличием заболеваний кишечника у детей (Ouwehand А.С. et al., 2001; Collado М.С. ct al., 2008; Kallus S. J. et al., 2012). Высокая численность видов бифидобактерий у детей оказывает видоспецифичное стимулирующее действие на развитие и созревание иммунной системы (Hedmark Н. I., 2011). Одни виды: Bifidobacterium bifidum, В. dentium, В. longitm, воздействуя на Thl и Th2, запускают «цитокиновый каскад» с синтезом провоспалительных цитокинов, другие виды (В. breve) обладают слабо или не обладают (В. adolescentis) этой способностью (Young S.L. et al., 2004).

Несмотря на значительное число исследований, посвященных таксономическим, морфологическим, физиологическим особенностям бифидобактерий, изучению вопросов качественного и количественного состава бифидо-

бактерий (Шкопоров А.Н. с соавт., 2006; Амерханова A.M., 2009; Gavini F. et al., 2001; He F. et al., 2001), молекулярной физиологии и молекулярных механизмов взаимодействия бифидобактерий с организмом хозяина (Иванова Е.В., 2010; Ventura М. et al., 2005; O'Hara Ann M. et al., 2006; De Dea Lindner J. et al., 2007; Perdigón G. et al., 2002; Mediei M. et al., 2005), остается актуальным вопрос, касающийся изучения видового профиля и комбинационного разнообразия бифидобактерий при различных состояниях микробиоценоза кишечника человека. Анализ видового спектра бифидобактерий даст дополнительную информацию для оценки микроэкологического статуса кишечника при функциональных нарушениях желудочно-кишечного тракта (ФН ЖКТ) у детей, сделает возможным конструирование пробиотических консорциумов в соответствии с характеристикой видового профиля бифидобактерий, что, по мнению ряда исследователей, представляет собой новый концептуальный подход к коррекции микрофлоры кишечника (Амерханова

A.M., 2009; Famularo G. et al., 1999; Sanders M.E. et al„ 1999; Dunne С. et al., 1999; Rolfe R.D. et al., 2000; Sarkar S., 2013; Riscuta G„ 2013; Stein R.R. et al„ 2013).

Цель исследования:

Определение видовой архитектоники и предпочтительных ассоциаций видов бифидобактерий у детей с ФН ЖКТ как основы для адекватной коррекции микроэкологических нарушений.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать динамику микроэкологических нарушений у детей с клиническими проявлениями кишечного дисбиоза. Оценить микроэкологический статус биоценоза (эубиоз или дисбиоз) в зависимости от выявленных нарушений в количественном и качественном составе микробиоты кишечника.

2. Изучить при помощи молекулярно-генетических методов видовую архитектонику фекальной бифидофлоры у детей разного возраста и выявить доминирующие виды, возрастные особенности, ассоциации видов.

3. Оценить комбинационное разнообразие ассоциаций видов бифидобактерий у детей разных возрастных групп, с определением характера межвидовой сочетаемости бифидобактерий.

Научная новизна работы и ее теоретическая значимость

Впервые определены предпочтительные ассоциации видов бифидобактерий у здоровых детей и детей с ФН ЖКТ и установлено, что у здоровых детей преобладают многокомпонентные видовые ассоциации бифидобактерий, свидетельствующие о большей стабильности (устойчивости) кишечной экосистемы.

Впервые показано, что независимо от возраста, структура видовой архитектоники бифидобактерий у детей с ФН характеризуется доминированием

B. bifidum, В. catemdatiim, снижением популяционного уровня В. longiun и вегетацией В. adolescerttis у части детской популяции.

Выявлены различия в видовой структуре бифидофлоры у здоровых детей и детей с ФН ЖКТ. У детей с ФН отмечено увеличение состава бифидофлоры до восьми видов по сравнению с шестью видами у здоровых детей. У детей с ФН отсутствовал доминирующий вид, тогда как у здоровых детей превалировал вид В. catena latum.

Полученные в работе данные расширяют представления о роли видового спектра, композиционного состава микроорганизмов кишечника, характера их коммуникаций в норме и при патологии.

Практическая значимость и внедрение результатов исследований

Результаты анализа видового состава бифидобактерий у детей с ФН могут быть использованы в качестве критериев подбора эффективных пробио-тических консорциумов для адекватной коррекции дисбиоза кишечника.

Результаты натурных и экспериментальных исследований легли в основу Базы данных: Микроэкологический пейзаж вагинального и кишечного биотопов у женщин и девочек-подростков города Иркутска: Per. номер св. 2011620075 (24.01.2011); правообладатель Учреждение Российской академии медицинских наук Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека Сибирского отделения РАМН.

Разработано пособие для врачей, научных работников, преподавателей, которое внедрено в практическое здравоохранение: «Региональные особенности микробной экологии у детей Иркутской области» // Пособие для врачей. Иркутск: РИО ИГИУВа, 2009.-36 с./Рец. д.м.н., проф. Киборт Р.В., к.м.н. Ленок Г.В.

Полученные новые данные используются в учебном процессе кафедры эпидемиологии и микробиологии ГБОУ ДПО ИГМАПО, кафедры физико-химической биологии ГОУ ВПО ИГУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Многолетняя динамика структуры кишечных дисбиозов у детей показывает значительное снижение глубоких изменений (IV и III степень) и рост, независимо от возраста, I и II степеней микроэкологических сдвигов, а также отсутствие эубиотических состояний. Микроэкологические нарушения обусловлены низким уровнем популяционной плотности индигенной флоры, появлением кишечных палочек с измененными свойствами, высоким уровнем индикации условно-патогенной микрофлоры (УПМ) в диагностически значимых количествах, а также изменениями межвидовых взаимодействий в составе кишечного микробиоценоза.

2. Независимо от возраста структура видовой архитектоники бифидобактерий у детей с ФН ЖКТ характеризуется доминированием В. bifidum, В. catenulatum, снижением уровня циркуляции В. longum и выявлением В. adolescentis, В. dentinm.

3. Уменьшение видового спектра бифидобактерий в составе перси-стирующих ассоциаций у детей с ФН ЖКТ с характерным наличием антагонистических отношений в парах, образованных доминирующими видами, способствует нестабильности интестинальной микроэкосистемы.

Апробация материалов диссертации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Межрегиональной научно-практической конференции посвященной 90-летию со дня рождения профессора А.Г.Гриневич (Иркутск, 2004 г.), 6-й Объединенной научной сессии и 2-го Международного конгресса по пробиотикам (Санкт-Петербург, 2009 г), 8-й научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири» (Красноярск, 2010 г.), IX научно-практической конференции молодых ученых, посвященная 35-летию У РАМН НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН «Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири» (Красноярск, 2011), Научно-практической конференции для врачей «Научные и практические аспекты дисбиозов» (Иркутск, 2011), Международной заочной научно-практической конференции «Вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2011 г.), XVI Международной научной конференции «Здоровье семьи-ХХ1 век» (Венгрия, 2012), Научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные аспекты инфекционной патологии», посвященной 100-летию Института микробиологии и эпидемиологии ФБГУ «НЦ ПЗСРЧ» СО РАМН (Иркутск, 2012 г.), Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 90-летию организации кафедры инфекционных болезней ГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Минздрава РФ «Актуальные проблемы современной инфектологии» (Иркутск, 2013), IV Межрегиональном семинаре «Организация санитарно-эпидемиологического мониторинга за инфекционными заболеваниями (Иркутск, 2013), Международном конгрессе «Питание и здоровье» (Москва, 2013 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 научных работы, из них 11 — в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ для публикаций материалов диссертационных работ, пособие для врачей, зарегистрирована в Роспатенте РФ база данных.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 147 страницах, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований и обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 20 таблицами, 14 рисунками, 1 фотографией. Библиографический указатель включает 119 наименований отечественных и 153 зарубежных источников литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы, методы и объем исследований

Объекты исследования:

1. Детское население г. Иркутска.

2. Культуры микроорганизмов, выделенные из фекалий детей.

3. Тотальная ДНК бифидобактерий.

Основу исследований составили:

1. Бактериологическое изучение микробиоценоза толстого кишечника у 100 здоровых детей (контрольная группа) и 3788 детей раннего, дошкольного и школьного возраста с клиническими проявлениями дисбиоза кишечника и функциональными нарушениями пищеварения за период с 1990 по 2011 гг. Все дети не имели в анамнезе инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта и не получали антибактериальные и пробиотические препараты в течение 3 месяцев, предшествовавших обследованию.

2. Видовая идентификация бифидобактерий методом полимеразно-цепной реакции (ГТЦР). Идентификация с использованием видоспецифичных олигонуклеотидных праймеров проведена с 282 образцами ДНК бифидобактерий, выделенных из фекалий детей.

Объем выполненных исследований представлен в таблице 1.

Таблица 1

Объем выполненных исследований

1.Оценка состояния нормальной микрофлоры кишечника у детей разного возраста Количество исследований

дети до года дети старше одного года

Многолетняя динамика дисбиозов кишечника 1477 2061 3538

Дети с ФН пищеварения 0-1 мес. 17 1-2 г. 74 250

3-6 мес. 60 4-6 лет 73

12-15 лет 26

Здоровые дети (контрольная группа) 100 100

Итого исследований 3888

2.Видовая идентификация бифидобактерий (8 видов) Количество исследований

Дети с ФН пищеварения 77 173 2000

Здоровые дети (контрольная группа) 32 256

Итого исследований 2256

Бактериологическое исследование качественного и количественного состава содержимого кишечника проводили по методикам Р.В. Эпштейн-Литвак и Ф.Л. Вильшанской в модификации Б.А. Ефимова, В.М. Коршунова и др. («Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника», 1991 г.); Методическим рекомендациям - СПб., 2002, с использованием справочных материалов (Иоргенсен Дж.Х., 2006, Меньшиков В.В., 2009). Идентификация микроорганизмов проводилась в соответствии с Определителем бактерий Берджи, 1997. Степень выраженности дисбиоза толстой киш-

7

ки классифицировали по И.Б. Куваевой, К.С. Ладодо (1991) и Гриневич В.Б. (2003).

Выделение ДНК. Тотальную ДНК бифидобактерий выделяли из 100 мкл суспензии клеток (10б-108 КОЕ/мл) с использованием комплекта реагентов «ДНК-сорб-АМ» ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.

Видовую идентификацию бифидобактерий проводили методом ПЦР с восемью парами видоспецифичных праймеров, комплементарных гену 16S рРНК (В. longum, В. bifidum, В. infantis, В. adolescentis, В. catemilatum, В. angulatum, В. breve и В. dentum) (Matsuki Т., 1998, 2003) по программе: 95 °С - 3 мин, (94°С - 30 с, 5б°С - 30 с, 72°С - 2 мин)><30, 72 °С - 7 мин (для видов В. longum, В. bifidum, В. infantis, В. catemilatum), для видов В. adolescentis, В. angulatiun, В. breve и В. dentum по программе 95 °С - 5 мин, (94° С — 20 с, 56 °С - 20 с, 72 °С - 30 с)*35, 72 °С - 5 мин на амплификаторе Applied Biosystems 2727 Thermal Cycles. Электрофоретическое разделение проводили на приборе HIS (Hoefer Scientific Instruments, USA) в lx ТАЕ-буфере при 120 V и 50МА в течение 40 минут.

Для выявления долевого участия разных видов в структуре биоценоза использовали коэффициент постоянства вида (С) (Bern С., Martines J. et al., 1988): С = p x 100/P, где p - число выборок, содержащих изучаемый вид, Р -общее число выборок. При С > 50 % микроорганизмы считали постоянными; при 25 % < С < 50 % - добавочными; при С < 25 % - случайными. В целях определения количественного взаимодействия между членами микробоцено-за вычисляли коэффициент сходства Жаккара (q) по формуле: q = с / (a+b-c) х 100 %, где а -число наблюдений с видом a; b - число наблюдений с видом Ь; с - число наблюдений, содержащих оба вида. Интерпретация: q < 30 % - условия в биотопе антагонистические; q = 30 - 70 % - бактерии способны к сосуществованию, а их экологическая общность велика (синергизм); q > 70 % -возможно только совместное существование бактерий (мутуализм) (Гайда-шев И. П., 2001).

При оценке характера взаимоотношений между двумя видами в составе микробиоты биотопа рассматривали отношение Р : С, где Р = ab /N (1 формула) - это вероятное число событий, в которых два случайно попавших вида «живут» совместно, С - число событий, в которых одновременно наблюдалось оба исследуемых вида; а - число событий с видом A; b - число событий с видом В; N - вся выборка. Интерпретация: при Р > С (или Р > 1) оба вида исключают друг друга; при Р = С (или Р = 1) виды могут распределяться случайно; при Р < С (или Р < 1) виды склонны к совместному обитанию, разница С—Р - возможность совместного существования. Для определения степени совместимости или расхождения между парами видов использовали показатель К : К = Р/С (2 формула), где показатель К определяет степень совместимости пар видов в микробиоценозе, а количественные значения Р и С используются из выше приведенных расчетов (формула 1). При этом, чем меньше единицы значение К, тем сильнее выражена степень совместимости

пар видов, а чем оно больше единицы, тем выше степень парной несовместимости видов (Медведева П.А., Джиоев Ю.П., 2012).

Статистическая обработка данных произведена при помощи лицензионных прикладных программ «MS Excel for Windows» и «Statgrafics» с учетом конкретных целей решавшейся задачи. Вычислялись основные показатели параметрических методов вариационной статистики (средняя арифметическая, мода, медиана, дисперсия, критерий Стьюдента-Фишера, достоверность полученных результатов) при критическом значении уровня значимости р < 0,05 (Мюллер П., 1982; Кулачёв А.П., 1999; Гайдышев И.В., 2001; ОСТ РИСО 5725-2-2002; Савилов Е.Д. с соавт., 2011).

Исследование одобрено комитетом по биомедицинской этике ФГБУ «НЦ ПЗСРЧ» СО РАМН и выполнено с информированного согласия пациентов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Многолетняя динамика структуры кишечных дисбиозов у детей

Оценка динамики структуры кишечных дисбиозов у детей дошкольного возраста проведена за период с 1990 по 2011 г. Всего обследовано 3538 детей, распределенных на следующие группы: 1) по возрасту - дети до 1 года и дети от 1 года до 6 лет; 2) каждая возрастная группа - в зависимости от периода обследования (1990-1996 гг., 2000-2002 гг., 2006-2007 гг., 2008 г., 2009 г., 2010 г., 2011 г.).

У детей 1990-1996 гг. обследования бактериологически определялся как дисбиоз IV степени (16,0±3,2 % и 10,0±1,4 % соответственно для детей до года и от года до 6 лет), так и III степень дисбиоза кишечника (у 68,0±4,09 % детей до года и у 37,0±2,3 % детей от года до шести лет). У детей, обследованных с 2000 по 2011 г., отсутствовала IV степень дисбиоза, к 2011 г. доля детей, имеющих III степень дисбиоза, снизилась в среднем до 10,58±1,41 % (р < 0,05). У детей в обеих возрастных группах, обследованных в период с 2000 по 2011 г., наблюдается стойкий рост (р < 0,05) дисбиозов I и II степени по сравнению с ранним этапом наблюдений. Так, если в 1990-1996 гг. дисбиоз I и II степени в среднем регистрировался у 11,5±1,3 % и 15,0±1,5 % обследованных соответственно, то к 2011 г. количество этих детей увеличилось до 32,42±2,14 % и 53,3±2,3 % соответственно. Эубиотические состояния кишечного микробиоценоза не регистрировались с 2000 по 2010 г., тогда как в первом периоде наблюдений доля детей с эубиозом составляла 13,0±1,6 % (в 1990-1996 гг. для детей старше 1 года). Эубиоз кишечника был зарегистрирован только через семь лет наблюдений, в 2011 г. у 6,8±0,98 % детей старше одного года (рис. 1,2).

80 "0 60 50 40 30 20 10 О

л А &—° о

\ /

ист * ,

х/ / V/

1990- 2000- ж 2006- 2008 2009 2010 2011

1996 2002 200" 1 1

-О-II -А-III

■IV

• Эубиоч (норма)

Годы обследования

Рисунок 1. Динамика структуры кишечного дисбиоза у детей от 1 месяца до 1 года

80 |--

"0 60 50 40 30 20 10 0

--Ф--1 -II -III -IV

81 Эубиоч (норма)

1990- 2000- 2006- 2008 2009 2010 2011 1996 2002 200"

Годы обследования

Рисунок 2. Динамика структуры кишечного дисбиоза у детей от 1 года до 6 лет

2. Характеристика интестинальных микробиоценозов у детей дошкольного и школьного возрастов

Нарушение формирования адекватной микрофлоры желудочно-кишечного тракта - одно из ведущих звеньев патогенеза ФН пищеварения у детей раннего возраста (Клещенко Е.И., 2012). Бактериологические исследования на дисбиоз кишечника у детей с ФН проводили в двух возрастных группах: I группа - от рождения до года; II группа — от года до 14—15 лет. Функциональные нарушения со стороны ЖКТ у этих детей сопровождались изменением моторной функции, функциональными запорами, коликами в течение не менее 12 недель. Более глубокий анализ дисбиотических нарушений кишечника у детей с ФН органов пищеварения разного возраста показал, что только у 14 % обследованных в этой группе бактериологически определялся эубиоз кишечника. Наиболее значимые изменения в составе нормальной микрофлоры кишечника наблюдались у детей первого года жизни. 10

У 58,4 % детей до года был отмечен не только дефицит бифидобактерий, но и снижение их популяционной плотности до 8,5±1,69 lg КОЕ/г, что ниже показателей физиологической нормы для этого возраста. У 24,7 % детей регистрировался дефицит нормальной кишечной палочки (НКП). И у 32,5±5,3 % детей в значительных концентрациях (7,3±0,63 lg КОЕ/г) выделялась Escherichia coli, утратившая биохимическую активность (слабоферментативные и гемолитические варианты). На фоне дефицита индигенной флоры у 88,0 % детей этой группы определялся повышенный уровень УПМ. По рейтингу встречаемости УПМ из семейства Enterobacteriaceae на первом месте были виды Klebsiella spp. - у 61,0 %; Entcrobacter spp. у 15,5 %; Citrobacter spp. у 10,3 %; Proteus spp. у 5,1 % обследованных, у 53,2 % детей выделялся золотистый стафилококк (табл. 2).

Таблица 2

Частота обнаружения и плотность микроорганизмов в 1 г фекалий у детей до года (77 детей)

Наименование микроорганизма Коэффициент постоянства (С)% M±m lg КОЕ/г

Анаэробные микроорганизмы

Бифидобактерии 100 8.5±1.69

Лактобациллы 100 8.6±1.34

Аэробные микроорганизмы

Эшерихии (всего) 100

НКП 75.3±4.9 6.4±2,21

Дефицит эшерихий с нормальными свойствами 24,7±4.9

Эшерихии с атипичными свойствами (всего) 32.5±5,3 7,3±

в том числе: эшерихии со сниженными ферментативными свойствами 28.6±5.1 7.3±0.63

эшерихии с гемолитическими свойствами 3,9±2.2 7,3±0,58

Золотистый стафилококк 53.2±5.6 5.0±1.1

Энтерококки 50.64±5.7 7.02±0.66

Условно-патогенные из семейства кишечных (суммарно) 72.7±5.0 6,4±1,08

Клостридии 24.67±4.9 5.0±1.25

Патогенные грибы рода Кандида 7.8±3.0 4,7±0.81

В группе детей старше одного года среднее содержание бифидобактерий в кишечнике составляло 7,5±1,17 lg КОЕ/г, дефицит бифидобактерий отмечался у 35,2 %, дефицит высокоактивных эшерихий — 20,8 % обследованных детей. У каждого седьмого ребенка (31,2±3,52 %) выделенные эшерихии определялись как атипичные, с потерей некоторых биохимических свойств (либо слабоферментативные, либо гемолитические). По сравнению с детьми первого года жизни у детей старшего возраста уже статистически значимо реже (р < 0,05) выделялся золотистый стафилококк (12,7±2,53 %), а также УПМ сем. Enterobacteriaceae (у 45,7±3,78 % детей) в диагностически значимой плотности. Однако выделение патогенных грибов рода Candida у детей старше одного года увеличилось (р < 0,05) почти в 2 раза (12,7±2,53 %) по сравнению с младшей группой (7,8±3,0 %) (табл. 3).

Таблица 3

Частота обнаружения и плотность микроорганизмов в 1 г. фекалий у детей старше одного года (173 ребенка)

Наименование микроорганизма Коэффициент постоянства (С) % M±m lg КОЕ/г

Анаэробные микроорганизмы

Бифидобактерии 100 7.5±1.17

Лактобациллы 100 7.0±1.43

Аэробные микроорганизмы

Эшерихии (всего) 100

НКП 79,2±3,08 6,7±1,43

Дефицит эшерихий с нормальными свойствами 20,8±3,08

Эшерихии с атипичными свойствами (всего) 31,2±3,52

в том числе: эшерихии со сниженными ферментативными свойствами 23,1±3,2 6,9±0,54

эшерихии с гемолитическими свойствами 8,1±2,07 6,7±0,57

Золотистый стафилококк 12.7±2,53 4,5±0,81

Энтерококки 49,7±3,8 6,84±0,54

Условно-патогенные из семейства кишечных (суммарно) 45,7±3,78 5,6±1,01

Клостридии 27,7±3,4 4,39±1,55

Патогенные грибы рода Кандида 12,7±2,53 4,0±0,29

Анализ межмикробных взаимоотношений в составе микробиоценоза кишечника у детей с ФН показал, что в обеих возрастных группах представители индигенной флоры - бифидо- и лактобактерии, не проявляли антагонистической активности по отношению к УПМ сем. Enterobacteriaceae и S. aureus. Высокоактивная Е. coli у этих детей формировала симбиотические связи с S. aureus (у детей до года) и УПМ сем. Enterobacteriaceae (у детей старше одного года) и грибами рода Candida. Являющиеся постоянными участниками микробиоценоза, определяющиеся в высоком титре (6-7 lg КОЕ/г) и играющие неоднозначную роль в кишечнике энтерококки (Бондарен-ко В.М., 2007; Корниенко Е.А., 2008), не проявляли антагонизма к условно-патогенной флоре, а формировали с ними симбиотические отношения. Склонность к совместному существованию и высокая экологическая общность отмечена и в группе условно-патогенной микрофлоры - S.aweus и УПМ сем. Enterobacteriaceae (у детей до года).

Незначительный дефицит бифидобактерий, лактобацилл, индикация атипичных эшерихий, стафилококков наблюдался и у здоровых детей. Среднее содержание бифидобактерий в кишечнике составляло 8,2±0,12 lg КОЕ/г, что было ниже нормы по общефизиологическому стандарту, содержание НКП так же было снижено относительно нормативов (табл. 4).

Таблица 4

Частота обнаружения и плотность микроорганизмов в 1 г фекалий у здоровых детей (100 детей)

Наименование микроорганизма Коэффициент постоянства (С) % М±ш lg КОЕ/г

Анаэробные микроорганизмы

Бифндобакгерни 100 8.2±0,12

Лактобациллы 100 6,2±0,10

Аэробные микроорганизмы

Эшерихии (всего) 100

НКП 35.7±4.80 6,2± 0,30

Дефицит эшерихии с нормальными свойствами 64,3±4,80

Эшерихии с атипичными свойствами (всего) 12,7±3.32

в том числе: эшерихии со сниженными ферментативными свойствами 12,7±3,32 6,4±0,44

Золотистый стафилококк 5.6±2.30 3±0,1

Энтерококки 13±3,36 4,1±0,21

Таким образом, зарегистрированный нами рост распространенности среди детей микроэкологического дисбаланса в кишечном микробиоценозе, регистрируемого как дисбиоз 1 и II степени, снижение популяционной плот-

ности и дефицит индигенной флоры, персистенция УПМ сем. ЕШегоЬаМегь асеае у детей старшего возраста, формирование патологического симбиоза с индигенным инфекционным потенциалом, свидетельствуют о снижении защитной роли индигенной микрофлоры у детей с позиции микроэкологии. Для выбора тактики коррекции и лечения таких нарушений необходимо более глубокое изучение структуры микробиоты на уровне видовых особенностей и ассоциативного потенциала бифидобактерий, что и поставило перед нами вопрос об идентификации видовой принадлежности бифидобактерий.

3. Видовая архитектоника бифидобактерий у детей

Видовая диагностика бифидобактерий проводилась методом ПЦР. В результате проведенного исследования было установлено, что лидирующие позиции в кишечном микробиоценозе детей с ФН ЖКТ занимают четыре вида: В. Ы/1<Лшп (64 %), В. 1оп%ит (50,8 %), В. сМетйШит (60,8 %), В. айокясепИх (33,2 %). Частота встречаемости остальных четырех видов бифидобактерий не превышала 20 % (рис. 3). При анализе многолетней динамики частоты встречаемости бифидобактерий отмечен не только рост частоты обнаружения всех видов бифидобактерий с 2008 г., но и повышение их видового разнообразия. Так, среднее количество зарегистрированных нами видов в 2008 г. составило 1,89 (у детей старше одного года), в 2011 г. среднее количество увеличилось до 3,79 видов на одного ребенка. Учитывая, что с увеличением разнообразия компонентов экосистемы возрастает ее способность эффективно отвечать на возможные стрессовые воздействия, данный факт следует считать положительным моментом, способствующим поддержанию стабильности и необходимой гибкости экосистемы (Шкопоров А.Н. с соавт., 2006; МсСапп К.8., 2000; ВаскЬес! Е.й.а!., 2005).

10»» 20"о

50°» 60й

Рисунок 3. Видовая структура бифидобактерий, выделенных из кишечной микробиоты детей с ФН ЖКТ (2008—2011 гг.)

У детей до двухлетнего возраста доминирующими таксонами являлись В. bifidum, В. longum и В. catemdatam. Кроме того, у детей в этом возрасте определялись В. adolescentis и В. breve. У детей 6 лет и у подростков бифи-дофлора в основном была представлена видами В. bifidum, В. catenulatum, В. longum, В. adolescentis и В. dentium (табл. 5). Частота детекции В. bifidum была наибольшей у грудных детей (80,5 %) и статистически значимо снижалась (р < 0,05) с возрастом (до 53,3 %) у подростков, частота же встречаемости В. catenululum, наоборот, имела тенденцию к росту с увеличением возраста. Наиболее физиологичный для детей грудного возраста В. infantis встречался только у 14,2 % грудных детей. В. breve были обнаружены только у детей до 6 лет, в группе подростков 12-15 лет бактерии этого вида отсутствовали. Частота встречаемости В. adolescentis составляла более 30 % во всех возрастных группах. Вид В. angulatum не был обнаружен у детей до одного месяца, в дальнейшем он обнаруживался с частотой от 7,8 % до 11,5 %. Частота обнаружения бифидобактерий вида В. longum в интестинальной микрофлоре детей статистически значимо снижалась к подростковому возрасту до 23 % (р < 0,05). Кроме того, у подростков нами отмечен довольно высокий уровень обнаружения В. dentium — резидента ротоглоточного биотопа, что вероятно связано со стабилизацией кишечного микробиоценоза посредством включения в его состав близкородственных бактерий из других биотопов (Захарова Ю.В. с соавт., 2013).

Таблица 5

Частота встречаемости видов бифидобактерий у детей разного возраста (2008-2011 гг.)

Виды 0-6 месяцев 1-2 года 4-6 лет 12-15 лет

бифидобактерий (п = 77) (п = 74) (« = 73) (п = 26)

I II III IV

В. bifidum 80,5±4.5 59.4±5.7* (11-1) 54.8±5.8' (111-1) 53.8±9,7* (1V-I)

В. longum 51,9±5.6 47,3±5.8 63,0±5.6 23,0±8.2* (IV-UI.III)

В. catenulatum 49.3±5.7 70.3±5.3 (11-1) 65.8±5.5 53.8±9.7

В. infantis 14.2±8.7 8.1±3.1 9.6±3.4 7.7±5,2

В. adolescentis 31.2±8.7 31.0±5.3 36.7±5.6 34.6±9.3

В. breve 27.2±5.0 24.3±4.9 13,7±4,0* (Ш-1) 0

В. angulatum 7.8±3.0 9.5±3.4 8,2±3.2 11.5±6.2

В. dentium 22.0±4.7 14.7±4.1 16.4±4.3 26,9±8.7

Примечание: р < 0,05 (различие статистически значимо между группами детей разного возраста)

4. Видовая сочетаемость бифидобактерий, вегетирующих в кишечном биотопе детей

Сравнительный анализ спектра бифидобактерий у здоровых детей и детей с ФН выявил достоверные отличия в видовом составе их бифидофлоры. Видовой пейзаж бифидобактерий здоровых детей характеризовался доминированием В. catenulatum, который определялся у всех детей (100 %), высоким уровнем детекции В. longitm (75,0 %), В. infantis и В. adolescentís (46,8 %), В. breve (28,1 %). Виды В. dentium и В. angulatam у здоровых детей не были обнаружены.

У детей с ФН и установленным дисбиозом кишечника явного доминирования какого-либо вида выявлено не было, однако относительно здоровых детей у них наблюдалось снижение частоты детекции В. longum (до 50,8 %), В. adolescentís (33,2 %), В. infantis (до 10,4 %) (р < 0,05). У детей с ФН отмечено увеличение видового состава бифидофлоры (восемь видов) по сравнению со здоровыми детьми (шесть видов бифидобактерий). Принимая во внимание как увеличение количества видов бифидобактерий, так и появление редких видов (В. dentium и В. angulatum), можно констатировать, что у детей с ФН нами выявлены особенности кишечной микрофлоры, которые предшествуют развитию заболевания, что согласуется с опубликованными в научной литературе данными (Collado М.С. et al., 2008; Иванова Е.В., 2010; Корниенко Е.А., 2013).

Анализ комбинационного разнообразия бифидобактерий в кишечном биотопе показал, что у детей с ФН ЖКТ видовые композиции встречались реже (74 % случаев), по сравнению со здоровыми (93,8 %). Сравнительный анализ композиционного состава ассоциаций показал, что у здоровых детей моновидовая персистенция бифидобактерий встречалась крайне редко (в 6,2 % случаев), а была обнаружена тенденция к многокомпонентности видовых композиций и увеличению видового разнообразия бифидобактерий в составе ассоциаций. Напротив, у «больных» детей бифидобактерии достаточно часто вегетировали в моновидовом варианте (23,6 %, р < 0,05), а встречаемость многокомпонентных видовых композиций снижалась (4 и более вида у 46,8 % здоровых детей, 26,8 % суммарно - у детей с ФН) (рис.4). Основу всех видовых ассоциаций составлял доминирующий вид, и встречались сочетания доминирующего вида с предоминантными. При этом в контрольной группе определялось безусловное доминирование одной ассоциации с большим отрывом по частоте встречаемости относительно других. У больных же детей явного доминирования какой - либо ассоциации не наблюдалось. У 6 детей с ФН ЖКТ нам не удалось выявить ни один вид из 8 исследуемых, что может свидетельствовать о присутствии в этих изолятах видов бифидобактерий, которые в данном исследовании не типировались.

Рисунок 4. Компонентность (сложность) ассоциаций бифидобактерий в кишечной микробиоте детей с функциональными нарушениями ЖКТ по сравнению со здоровыми

Таким образом, установленное нами сужение спектра видов в составе персистирующих ассоциаций у детей с ФН ЖКТ отражает нестабильность функционирования экосистемы и подразумевает предрасположенность к изменению состава микробиоты под влиянием внешних воздействий, что способствует риску воспалительных заболеваний кишечника (Wu G. D. et al., 201 I).

5. Анализ парных видовых сочетаний бифидобактерий

Проведенный анализ межвидовых коммуникаций бифидобактерий в парных сочетаниях в рамках биоценоза показал избирательное отношение видов к совместному вегетированию. Один из доминантов кишечного микробиоценоза детей с ФН - В. bifidum проявлял склонность к сосуществованию с другим лидером, В. catenulatum (коэффициент К = 0,91) и предоми-нантным - В. adolescenlis (К = 0,63), но был негативен по отношению к В. longum, который, по данным других исследователей, лидирует у здоровых детей (К = 1,15) (Turrón¡ F. et al., 2008). Видовая несовместимость среди лидеров также была отмечена в парах В. catenulatum +В. longum (К = 1,0) и В. longum + В. Adolescenlis (К = 1,22). Пары В. Longum + В. dentium и В. bifidum + В. infantis также демонстрировали отсутствие склонности к совместному существованию. В остальных случаях парных сочетаний видов отмечалась высокая экологическая общность и способность к совместному существованию.

В группе здоровых детей отторжения признанного доминанта не было, и ассоциация В. bifidum + В. longum оценивалась как состоятельная и стабильная (К = 0,83). Пары, образованные «лидирующими» у здоровых детей вида-

ми - В. са1етйаШт и В. 1оп£ит в составе самых распространённых ассоциаций, не были склонны к совместному вегетированию, коэффициент парной совместимости К в этих парах был больше или равен единице. Пары же, образованные минорными видами - В. Ы/ккип, В. асЫехсспйн были склонны к совместному существованию (табл.6).

Таблица 6

Характеристика склонности видов бифидобактерий к совместному обитанию в кишечной микробиоте детей

Видовые ассоциации бифидобактерий Здоровые дети п = 32 Дети с ФН п = 73

Р С склонность к совместному обитанию Р С склонность к совместному обитанию

В. са1епикпит +В. 1оп£ит 24= 24 нет 31,12> 31 нет

В. Ы/1с1шп+ ВАоп^ит 7,5< 9 да 25,40> 22 нет

В.Ы/!с/ит+ В.сагепикаит 10= 10 нет 26,48< 29 да

В. Ы^с!ит +В.ас1о1е5сепги 4.68< 7 да 14,59< 23 да

В. 1оп^т +В.айо1е$сем\% 11.25> 10 нет 17,14> 14 нет

Примечание: «=» - виды могут распределяться случайно; « >» - оба вида исключают друг друга; «<» - оба вида склонны к совместному обитанию

Полученные данные свидетельствуют об изменении межвидовых взаимоотношений бифидофлоры у детей г. Иркутска. Отсутствие толерантности друг к другу препятствует эффективному вегетированию, приводит к дефициту физиологически важных видов бифидобактерий в кишечнике, и может быть дополнительным маркером микроэкологического неблагополучия.

Таким образом, наши исследования дают основание полагать, что при оценке основных параметров микробиоценоза необходимо учитывать видовую композицию бифидобактерий, их ассоциативный потенциал и видовую приоритетность в составе ассоциаций для определения статуса нормы и патологии и выбора перспективных путей коррекции патоценозов. Недостаточная эффективность пробиотикотерапии, возможно, связана со слабой осведомленностью об истинном видовом составе доминирующих микроорганизмов кишечника - бифидобактерий. Поэтому изучение и анализ видового профиля бифидобактерий у детей с ФН, нуждающихся в коррекции дисбио-тических состояний, приобретает особое значение.

ВЫВОДЫ

1. Многолетняя динамика (1990-2011 гг.) структуры кишечных дисбио-зов у детей, независимо от возраста, характеризуется увеличением распространенности I и II степеней и статистически значимым снижением к концу наблюдений (р < 0,05) доли IV и III степеней микроэкологических сдвигов. Эубиотические состояния кишечного микробиоценоза не регистрировались с 2000 по 2010 г.

2. Дисбиотические проявления у детей обусловлены снижением относительно общефизиологических показателей популяционной плотности би-фидобактерий в среднем до 7-8 ^ КОЕ/г, дефицитом бифидобактерий (у более 40 % детей), нормальных эшерихий (у более 20 %), появлением кишечных палочек с измененными свойствами и высоким уровнем индикации УПМ в диагностически значимых (> к' 5-6 КОЕ/г) концентрациях во всех возрастных группах.

3. У детей с ФН пищеварения зафиксированы изменения межвидовых взаимодействий в составе кишечного микробиоценоза с формированием патологических симбиозов с индигенным инфекционным потенциалом, что способствует снижению колонизационной резистентности.

4. Видовая архитектоника бифидобактерий у детей с ФН ЖКТ характеризуется увеличением спектра определяемых видов (восемь видов), отмечается доминирование В. Ырскип (64,0 %), В. сШепиШит (60,8 %) и снижение до 50,8 % уровня вегетации В. Ьпщит (по сравнению с 75 % у здоровых детей). У здоровых детей наблюдается наличие шести видового спектра бифидобактерий, с абсолютным превалированием В. сШепиЫит (100 % случаев). Выявление у детей с ФН не характерных для кишечного биотопа видов {В. с/епИит и В. шщгймит), свидетельствует о нарушении интестинальной микроэкосистемы.

5. У детей с функциональными нарушениями бифидобактерии достаточно часто вегетируют в моновидовом варианте (23,6 %), встречаемость многокомпонентных видовых композиций снижается, тогда как у половины здоровых детей отмечена тенденция к многокомпонентности видовых композиций и увеличению видового разнообразия бифидобактерий в составе ассоциаций.

6. Межвидовые взаимодействия бифидобактерий в кишечном биотопе у детей с функциональными нарушениями характеризуются наличием антагонистических отношений в парах с В. ¡сищит. У доминирующего среди здоровых детей В. сШепиШит отсутствует склонность к совместному вегетирова-нию с другими видами бифидобактерий, что может приводить к нестабильности кишечного микробиоценоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты проведенных исследований могут быть рекомендованы для последующего внедрения в двух направлениях:

1. При конструировании пробиотических консорциумов микроорганизмов, адаптированных для функционального питания детского населения.

2. При комплексном анализе микроэкологического статуса кишечника детей с функциональными нарушениями, включающего изучение видового профиля, ассоциативного потенциала и коммуникативных особенностей би-фидобактерий, что дополнит диагностические критерии, позволит разработать прогностические маркёры и определить параметры последующей терапии функциональных нарушений пищеварения у детей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

В изданиях, рекомендованных ВАК

1. Иммуно-эпидемиологические особенности и этиологическая структура кишечного дисбактериоза у детей раннего возраста в городе с развитой промышленностью / С.М. Попкова, Т.Ю. Циндик, Е.Л.Кичигина, С.И. Лещук, У.М. Немченко // Сиб. мед. журнал. - 2001,- Т. 26, №1. - С. 59-63

2. Характеристика микроэкологических нарушений у детей раннего возраста, проживающих в городах Иркутской области / С.М. Попкова, У.М. Немченко, И.Ю. Сафронова [и др.] // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2003. - № 2. - С. 158-161.

3. Попкова С. М., Лещук С.И., Немченко У.М. Микробная экология человека в промышленных городах Восточной Сибири // Бюллетень ВосточноСибирского научного центра СО РАМН. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 143-146.

4. Особенности микробиоценозов у детей, проживающих в условиях техногенного прессинга / Е.Б. Ракова, С.М. Попкова, У.М. Немченко [и др.] // Гигиена и санитария. — 2011. - № 4. - С. 22-26.

5. Геновидовая структура популяций бифидобактерий, выделенных из кишечного биотопа жителей промышленных городов Иркутской области / Ю.П. Джиоев, С.М. Попкова, У.М. Немченко [и др.] // Бюллетень ВосточноСибирского научного центра СО РАМН. - 2011. - № 5. - С. 136-140.

6. Микроэкологический пейзаж различных биотопов у детей Иркутской области // С.М. Попкова, Е.Б. Ракова, Е.Л. Кичигина, У.М. Немченко [и др.] // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. -2012. - № 5-1(87). - С. 288-292.

7. Региональные особенности антагонистической активности бифидобактерий кишечной микробиоты детей, проживающих в условиях Сибири / Е.Б. Ракова, С.М. Попкова, У.М. Немченко [и др.] // Бюллетень ВосточноСибирского научного центра СО РАМН. - 2012. - № 5-1(87). - С. 300-303.

8. Видовое разнообразие бифидобактерий у детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта / У.М.Немченко, С.М. Попкова, Ю.П. Джиоев [и др.] // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2012. - № 2-1. - С. 50-54.

9. Микроэкологический пейзаж кишечного биоценоза у детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта / У.М. Немченко,

С.М. Попкова, E.JI. Горбунова [и др.] // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2011. - № 5. - С. 89-93.

10. Микроэкологический пейзаж у детей Иркутской области на фоне гигиенических характеристик территории / С.М. Попкова, Е.Б. Ракова, E.JI. Кичигина, У.М. Немченко [и др.] // Известия Иркутского государственного университета. Сер. Биология. Экология. - 2012. - Т. 5, № 4. - С. 44-54.

11. Микроэкологическая характеристика региональных популяций Klebsiella spp. в кишечной микробиоте детей г.Иркутска / Е.В. Бухарова, С.М. Попкова, Е.Б. Ракова, Ю.П. Джиоев, Н.М. Шабанова, Е.И. Иванова, У.М. Немченко [и др.] // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2013. - № 2. - С. 2(90). - С. 93-96.

В других изданиях

12. Микробиологический фенотип кишечника детей раннего возраста, проживающих в городах (Иркутск, Ангарск) с высоким уровнем техногенного загрязнения / У.М. Немченко, С.М. Попкова, И.Ю. Сафронова [и др.] // Материалы Межрегиональной научно-практической конференции. - 2004. — ИГУ. - С. 87-90.

13. Региональные особенности микробной экологии у детей Иркутской области / С.М. Попкова, E.JI. Кичигина, Е.Б. Ракова, Е.В. Анганова, У.М. Немченко // Пособие для врачей. Иркутск: РИО ИГИУВа, 2009. - 36 с. / Рец. д.м.н., профессор Киборт Р.В, к.м.н., Ленок Г.В.

14. Мониторинг структуры кишечных дисбактериозов у детей, рожденных в разные годы / Е.Б. Ракова, С.М. Попкова, А.Г. Леонтьева, У.М. Немченко // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2009. - № 4. - С.33.

15. Некоторые особенности микроэкологического статуса у детей Иркутской области / У.М. Немченко, Е.Б. Ракова, С.М. Попкова [и др.] // Журнал инфекционной патологии. - 2010. - Т. 17, № 4. - С. 45-46.

16. Изучение сочетанности микроэкологических нарушений кишечного биоценоза в семейных парах мать-дитя / Н.М. Шабанова, У.М. Немченко, С.М. Попкова [и др.] // Материалы 8-й науч.-практ. конф. молодых ученых «Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири». - 2010. - С. 77-78.

17. Микробиологическая характеристика кишечного биоценоза у детей с функциональными нарушениями кишечника / Е.И. Иванова, Н.М. Шабанова, У.М. Немченко [и др.] // Материалы IX науч.-практ. конф. молодых ученых, посвящ. 35-летию УРАМН НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН «Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири». Красноярск, 8-9 июня. - Красноярск, 2011. - С. 115-117.

18. Использование современных методов для видовой диагностики би-фидобактерий кишечного биотопа у детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта / У.М. Немченко, Ю.П. Джиоев, С.М. Попкова [и др.] // Сб. материалов Междунар. заоч. науч.-практ. конф. «Вопросы современной медицины». — Новосибирск, 2011. — С.101 —105.

19. База данных «Микроэкологический пейзаж вагинального и кишечного биотопов у женщин и девочек-подростков города Иркутска» / С.М. Попкова, Е.Л. Кичигина, Е.Е. Храмова, Л.В. Сутурина, Н.М. Шабанова, У.М. Немченко, Л.Н. Пигарева; патентообладатель УРАМН НЦ ПЗСРЧ СО РАМН-№2011620075; заявл. 30.11.2010; опубл. 24.01.2011.

20. Видовой профиль бифидобактерий у детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта / У.М. Немченко, Ю.П. Джиоев, С.М. Попкова [и др.] // Материалы XVI Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век». - 2012. - С. 43-44.

21. Особенности формирования микробиоценозов у детей в условиях техногенного прессинга / Е.Б. Ракова, С.М. Попкова, У.М. Немченко [и др.] // Материалы XVI Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век». - 2012. - С. 85-86.

22. Характеристика видового спектра бифидобактерий кишечной мик-робиоты как перспективный критерий для ранней диагностики и диетотерапии заболеваний органов пищеварения / С.М.Попкова, М.В. Савелькаева, Е.Б. Ракова, У.М. Немченко // Материалы Международного конгресса «Питание и здоровье». - М., 2013. - С. 85.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт КОЕ - колониеобразующие единицы НКП — нормальная кишечная палочка ПЦР - полимеразно-цепная реакция УПМ — условно-патогенные микроорганизмы ФН - функциональные нарушения

Научное издание

Немченко Ульяна Михайловна

МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС КИШЕЧНОГО БИОЦЕНОЗА И ВИДОВАЯ АРХИТЕКТОНИКА БИФИДОБАКТЕРИЙ У ДЕТЕЙ

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 15.05.2014. Формат 60x90 1/16 Усл. -печ. л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ 17

Отпечатано с готового оригинал-макета

в типографии Издательства ИГУ 664003, г. Иркутск, бульвар Гагарина, 36