Механизмы дезинтеграции овариального фолликула в оогенезе низших позвоночных

Трубникова, Оксана Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы дезинтеграции овариального фолликула в оогенезе низших позвоночных
ВАК РФ 03.03.05, Биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы дезинтеграции овариального фолликула в оогенезе низших позвоночных"

На правах рукописи

ТРУБНИКОВА Оксана Борисовна

МЕХАНИЗМЫ ДЕЗИНТЕГРАЦИИ ОВАРИАЛЬНОГО ФОЛЛИКУЛА В ООГЕНЕЗЕ НИЗШИХ ПОЗВОНОЧНЫХ

Специальность 03.03.05 - биология развития, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 7 ФЕЗ 2011

Москва-20 И

4854470

Работа выполнена в лаборатории экспериментальной эмбриологии им. Д.П.Филатова Учреждения Российской академии наук Института биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН

Научные руководитель:

доктор биологических наук, ВАСЕЦКИЙ Сергей Григорьевич,

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

БРОДСКИЙ Всеволод Яковлевич

доктор биологических наук, профессор БЕЛОУСОВ Лев Владимирович

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Институт биохимии им. А.Н.Баха РАН

Защита диссертации состоится « 2 » марта 2011г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 002.238.01 в Учреждении Российской академии наук Институте биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН по адресу: 119334, Москва, ул. Вавилова, д. 26. Сайт: http://idbras.comcor.ru/; e-mail: idbras@bk.ru.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Учреждения Российской академии наук Института биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН.

Автореферат разослан » 2011 года.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Абрамова Е.Б.

cle0806@vandex.ru

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Тонкое взаимодействие соматической и герминативной составляющих овариального фолликула делает его объектом высочайшего уровня сложности. При этом ключевым этапом в развитии фолликула является их функциональное и пространственное разобщение на завершающих этапах оогенеза, когда под влиянием гормонального стимула ооцит возобновляет мейотические деления и, завершив созревание, покидает яичник. Этот процесс дезинтеграции фолликула, когда он прекращает свое существование как единое целое, сопровождается включением сложных регуляторных каскадов, изучению которых в последние десятилетия было посвящено множество работ (обзоры Hammes, 2004; Mehlmann, 2005; Скоблина, 2009). Эти работы, несомненно, обогатили представления о физиологических, молекулярных и генетических детерминантах фолликуло-генеза, однако «понимание механизмов клеточного поведения в овариальном фолликуле остается недостаточным для успешного контроля репродуктивной функции организма и моделирования поведения репродуктивной системы в различных условиях» (Albertini et al., 2001). Поэтому в настоящее время одной из актуальных проблем изучения фолликулогенеза становится вопрос о реализации различных форм клеточной активности в целостной системе фолликула на завершающих этапах его дифференцировки.

Актуальность проблемы связана также с двумя особыми обстоятельствами:

- интенсивным применением в медицине и животноводстве вспомогательных репродуктивных технологий, при недостаточном понимании механизмов функционирования фолликула ("Assisted reproductive technology", 2002),

- развитием компьютерных технологий и математического моделирования, способствующих изучению сложности биологической организации в рамках новой дисциплины - биологии систем (Systems biology), которая направлена на выяснение наиболее общих принципов функционирования целостных биологических объектов (Adami, 2002; Davidson et al., 2003).

Богатейший опыт изучения закономерностей фолликулогенеза низших позвоночных, в том числе с использованием системы культивирования фолликулов in vitro, получен в Лаборатории экспериментальной эмбриологии им. Д.П. Филатова ИБР РАН. Результаты исследований, проведенных в лаборатории, позволили изучать вышеописанную проблему на моделях бесхвостых амфибий и осетровых рыб, близких к амфибиям по строению фолликула.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось формирование представления о системной организации фолликула как целостной структурно-функциональной единицы яичника (на основе данных об изменениях стенки овариального фолликула на завершающих стадиях его существования в норме и при экспериментальных воздействиях).

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать пространственную организацию стенки дифференцированного овариального фолликула на световом и ультраструктурном уровнях.

2. Описать морфофункциональные стадии дезинтеграции стенки фолликула под влиянием гормонов гипофиза in vivo и in vitro.

3. Провести ультраструктурный анализ влияния антагониста серотонина (инмекарба) на процессы, протекающие в стенке фолликула.

4. Провести сравнительный ультраструктурный анализ влияния цитостатиков (цитохалазина В и колхицина), а также ингибиторов синтеза белка (циклогексимида), стероидов (аминоглютетимида) и простагландинов (индометацина).

5. Охарактеризовать динамику синтезов РНК и суммарного белка в стенке фолликула под влиянием гормонов гипофиза и прогестерона.

6. Исследовать пространственное распределение синтезов РНК клетками стенки, индуцированных гормонами гипофиза, прогестероном и простаглан-динами F2o и Е2.

Научная новизна. В результате проведенного исследования впервые:

- В системной организации фолликула выделены два новых структурных элемента стенки: совокупность отростков фолликулярных клеток как радиальный сократимый орган фолликула, выполняющий функцию внешней связи стенки фолликула с ооцитом, и капиллярное сплетение фолликула с функцией внешней связи с организмом.

- Выявлено сопряженное формирование капиллярного сплетения и вегетативного полюса ооцита на стадии большого роста.

- Вычленены морфофункциональные стадии процесса дезинтеграции: радиальная контракция фолликулярных клеток и их отростков, апоптоз фолликулярного эпителия (по морфологическим признакам), начало апоптоза внутренней теки в области стигмы (по морфологическим признакам), тангенциальная контракция наружной теки. Обосновано принципиальное значение ортогональной ориентации контракций, приводящих последовательно к расслоению и разрыву фолликула.

- На ультраструктурном уровне описано прогестероноподобное действие антагониста серотонина (инмекарба) на овариальный фолликул. Результат указывает на возможную донервную роль серотонина в процессе созревания ооцита, а также свидетельствует в пользу предложенной < для млекопитающих модели подобия отростков фолликулярных клеток аксонам.

- Проведен сравнительный анализ влияния ингибиторов синтеза белка (циклогексимида), прогестерона (аминоглютетимида), простагландинов (индометацина), а также цитостатиков (цитохалазина В и колхицина) на изменения ультраструктуры фолликула в процессе его дезинтеграции. Выявлены «точки приложения» известного подавляющего действия цитохалазина В при овуляции: предотвращение радиальной контракции за счет повреждения микрофиламентов в отростках фолликулярных клеток и тангенциальной

контракции за счет нарушения целостности поверхностного гладкомышечного слоя. Для осетровых рыб подтверждено известное для млекопитающих влияние индометацина на перитонеальный эпителий.

- Обнаружена корреляция между интенсивностью синтеза РНК под действием гипофиза и простагландинов и степенью васкуляризации стенки.

Теоретическая и практическая значимость. Выявленные в работе структурные и функциональные характеристики фолликулов низших позвоночных и предложенная модель многослойной эластичной сферы с внутренней антисимметрией можно рассматривать как основу для последующего математического моделирования некоторых аспектов фолликулогенеза. Полученные результаты представляют общебиологический интерес и могут быть использованы при чтении курса лекций по биологии развития.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались на Всесоюзной конференции по биохимии мышц (Махачкала, 1987), совещании «Репродуктивная физиология рыб» (Минск, 1991) и Национальной конференции «Математическое моделирование в экологии» (Пущино, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ: 4 статьи в журналах из списка ВАК и тезисы четырех докладов.

Структура и объем диссерпшции. Диссертационная работа изложена на 140 страницах, содержит 29 рисунков, 7 таблиц и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы (210 ссылок).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе использованы овариальные фолликулы севрюги Acipenser stellaíus Pall. (Волгоградский осетр, завод), травяной лягушки Rana temporaria L. (природная популяция, Моск. обл.), шпорцевой лягушки Xenopus laevis L. (аквариальная культура).

Электронная микроскопия. Объектом исследований служили фолликулы севрюги. Было проведено две серии фиксаций. В первой серии для стимуляции созревания и овуляции завершившие рост (исходные) яйцевые фолликулы помещали в модифицированный для осетровых (Гончаров, 1978) раствор Рингера (МРР) с прогестероном (5 мкг/мл). Опыты проводили при температуре 21-22°. Стадию созревания определяли, разрезая зафиксированные кипячением ооциты и просматривая их под бинокулярным микроскопом. У данной самки созрели 100%, овулировали 82% ооцитов, в контроле созревания и овуляции не наблюдалось. При определения временных параметров использовались безразмерные единицы т0 (Детлаф, Детлаф, 1961). Через 11 т0 после начала воздействия прогестерона ядро ооцита (зародышевый пузырек, ЗП) располагался вблизи поверхности, через 12 т0 происходило разрушение ЗП, а через 21 т0 - экструзия ооцитов (овуляция). Исследованы стенка исходного фолликула и стенка фолли-

кула через 11 т0, 16 т0 и 21 тс. Во второй серии фиксировали фолликулы, взятые щупом из тела инъецированной суспензией гипофиза самки на тех же стадиях, что и в первой серии. Фиксация и обработка материала для трансмиссионного и сканирующего электронно-микроскопических исследований (ТЭМ, СЭМ) проводилась в соответствии с общепринятыми для методикам.

Антагонисты серотонина. Опыты проводили на исходных ооцитах шпорцевой лягушки. Использованы антагонисты 5-НТ креатининсульфата инмекарб гидрохлорид (1НС) и инмекарб иодметилат (ИМ). Для проведения исследования была отобрана партия ооцитов, созревающих в 100% случаев при действии прогестерона и IIM; при одновременном внесении обоих веществ у 10 % ооцитов наблюдалась овуляция. Интактные ооциты и изолированные стенки фолликулов инкубировали сутки при 20-24° С в РР, содержащем прогестерон (3,2 мкМ), 1IM (50 или 200 мкМ), IHC (200 мкМ) или прогестерон вместе с одним из антагонистов 5-НТ, после чего подготавливали для ТЭМ и СЭМ.

Сравнительный ингибиторный анализ. Для стимуляции созревания и овуляции самке севрюги инъецировали суспензию гипофизов осетровых рыб по общепринятой методике (Детлаф и др., 1981). У данной самки период от инъекции до овуляции составил около 35тс. Фолликулы извлекали из тела самки перед инъекцией и через 17т0 и 25т0. Их помещали на разные сроки (17-21т0, 25-29т0, 17-35т0, 25-35т0) в МРР, содержащий ингибиторы, после чего фиксировали и подготавливали для ТЭМ И СЭМ. Помимо влияния ингибиторов на клеточную ультраструктуру учитывали степень их воздействия на интенсивность овуляции in vitro.

Сцинцилляционная радиометрия. Фолликулы севрюги инкубировали в МРР, содержащем суспензию гипофизов (1 экв. гип./730 мл), прогестерон (5 мкг/мл), либо простагландин F2„ (10 мкг/мл), перемещая с интервалов в 6 часов по 10 шт. в аналогичные растворы с добавлением [|4С]-уридина либо меченых [14С]-аминокислот. Стенка фолликула была удалена микрохирургически. Уровень включения изотопов оценивали на сцинцилляционном счетчике.

Авторадиография. Ооциты травяной лягушки инкубировали при 17°С в содержащих [3Н]-уридин растворах: РР, экстракт гипофизов (1 экв. гип./730 мл), прогестерон (5 мкг/мл), простагландинов Е2 либо F2a (Ю мкг/мл). Через 24 ч пинцетами отделяли стенку фолликула и распластывали ткань на предметном стекле. После нанесения фотоэмульсии препараты были экспонированы в течение 2-х недель, проявлены, окрашены гематоксиллином Каррачи и заключены в бальзам. Подсчет метки проводили в области стигмы, капиллярного пятна и артериол. Внутри каждой зоны обсчитывали по 10 фолликулярных, эндотелиальных, гладкомышечноподобных клеток и фибробластовя (по 3 препарата для каждого варианта среды). Для статистической обработки использован дисперсионный анализ (ANOVA) с применением теста Крускала-Уоллеса и последующим множественным сравнением с контролем методом Даннета в программе SigmaStat 3.00 (значение Р< 0,05 принято как достоверное).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Структура фолликула в конце периода большого роста Морфометрия фолликулов

Фолликулы старшей генерации представляют собой целостные морфологические структуры, внутри которых располагаются ооциты, обладающие компетенцией к созреванию и овуляции (Рис. 1). Наиболее общими характеристиками фолликулов является их объем и форма, близкая к эллипсоидной. Обе морфо-метрические характеристики несколько меняются на завершающих стадиях развития фолликула in vivo. При изучении этого вопроса на фолликулах травяной лягушки в период зимовки было установлено, что популяция ооцитов старшей генерации не только подрастает, но и становится более гомогенной по этому параметру. Форма меняется на более округлую, однако гетерогенность популяции по этому признаку остается прежней (Рис. 2). При этом размер и коэффициент сферичности коррелируют между собой слабо, что отражает возможность изменения формы фолликула без изменения объема.

средний диаметр х 2. мм коэффициент сферичности

Рис. 1. Различающиеся по размеру и форме фолликулы севрюги.

Рис. 2. Изменение морфометрических характеристик фолликулов у популяции травяной лягушки на протяжении зимовки, (•) — октябрь, (т) - март. По оси у — плотность распределения.

Кровеносная система фолликула

Формирование общей структуры сосудистой системы завершается в период большого роста, когда поступающий в ооцит вителлогенин интенсивно аккумулируется в вегетативной части ооцита. Это вызывает растяжение тканей и наращивание площади стенки фолликула в прилежащем районе. Потребность в кровеносном обеспечении вновь образовавшихся клеточных территорий удовлетворяется за счет активного ангиогенеза, что приводит к формированию в этой области капиллярного сплетения, обладающего повышенным микроциркуляционным обменом между кровью и окружающими тканями, а также обилием ростовых факторов. В зависимости от степени васкуляризации можно выделить три различных зоны в стенке фолликула: практически лишенную сосудов и ограниченную обводящим крупным сосудом область стигмы на вершине фолликула; область ветвления артериол и область капиллярного пятна (Рис. За).

Рис. 3. Строение фолликула, а - ортогональное соотношение осей фолликула и ооцита и васкуляризация стенки. А-В - анимально-вегетативная ось ооцита: б - тканевые слои стенки фолликула.

капиллярное

¿ртериолм

Оя я

Ультраструктура стенки фолликула

Гистологический комплекс стенки включает ткани четырех типов: перито-неальный эпителий, внутренний эпителий, соединительную ткань и фолликулярный эпителий (Рис. 36. Рис. 4). Наружная тека (НТ) представлена I ладкомышечно-подобными клетками (ГМПК). Наличие в них развитого сократимого аппарата свидетельствует о регулярных пульсациях слоя (по собственным предварительным данным - суточных). Внутренняя тека (ВТ) представлена соединительной тканью (СТ) и отделена базалъными мембранами (БМ). Внутри слоя проходят сосуды кровеносной системы, строение которой рассмотрено выше. Клетка фолликулярного эпителия (гранулезы) состоит из тела клетки и длинных отростков, проходящих внутри пор яйцевой оболочки. Цитоплазма фолликулярной клетки (ФК) помимо стероидогенных элементов содержит хаотически расположенные контпактигтьнме пемрнты г

■! . ,1-Ч'№ !-■ н.шрукле-

лш 1 иоцша крупные огростки, «заякоривают» ооцит, соединяясь с его мембраной при помощи щелевых контактов. По нашим данным, строение отростков ФК как у севрюги (Рис. 4г,д,е), так и у шпорцевой лягушки аналогично строению трансзональных отростков млекопитающих (ТЗО), что делает возможным применение по отношению к ним гипотезы о сходстве с аксонами и синаптоподобном способе передачи сигналов между ФК и ооцитом (А1Ьег1ш е1 а1., 2001). Строение, количество и расположение отростков позволяет рассматривать совокупность их микрофиламентарных пучков как чопочнитечьный в системе фочлик\'ча компонент котрчктии.ной прнролы

инч'нный с ооцмшч чщапюподоинымп котамами.

Функциональные характеристики структуры

Функции внутренние (тканевые). Архитектоника гистологического комплекса стенки фолликула обеспечивает пластичность стенки, ее ригидность, функцию кровоснабжения, стероидогенную функцию, метаболическую связь с ооцитом и некоторые другие свойства.

"Примечание. Антисимметрия - симметрия объектов по геометрическим координатам и по иегеометрической переменной, принимающей противоположные значения +1 (Шубников. Концик, 2004).

Рис. 5. Антиспммеграчностъ теки и гранулемы: перпендикулярным пучкам микрофипаментов внутри отростков ФК соответствуют продольные пучки промежуточных фияаментов ШИК (*), цмпоскелету ФК внеклеточный каяяагеиовын матрикс вокруг сосудов и фибробдастов (»•), подмембранной сети (тс) ФК базачьная мембрана соединительно-тканного слоя (•»•).

/ мнм I .«/си

Рис. 4, Стенка фолликула севрюги, и поперечный срез стенки ; б - десмосомы большой протяженности между ГМПК; в БШ-и батальная область ФК; г - основание отростка ФК; д, е -отростки ФК; ж- вершина фолликула, ПЭ, СО, студенистая оболочка; ОФК, отросток ФК; ОЯ, окаймленная ямка; Я, ядро, а~д~ ТЭМ, е - ж: - СЭМ.

Антисимметричность слоев. Пространственная ориентация структурных элементов стенки обладает особенностью, которую условно можно обозначить как зеркальную нетождествен ную симметрию слоев (антисимметрия*): структура гранулезы зеркально «отражается» в антиравную структуру теки, меняя при этом не только пространственное расположение элементов, но и их материальное наполнение (Рис. 5). Данная структурная антисимметрия подразумевает зеркальное подобие слоев по функциям и разительное отличие по способу воплощения этих функций

способу воплощения этих функций (в частности, микрофиламентарную и гладкомышечную контракцию внешних по отношению к плоскости симметрии слоев). Можно предположить, что именно это свойство стенки проявляется при осуществлении прогестероно-зависимого «созревании фолликула» и простагландино-зависимой овуляции, которые должны регулироваться соответствующими «антисимметричными» генными сетями.

Регионализсп^ия слоев в наружной теке выражается в разделении на перитонеальный (ПЭ) и внутренний (ВЭ) эпителии. Во внутренней теке она связана со степенью васкуляризации слоя, в гранулезе - с «возрастным градиентом», возникающим по мере увеличения объема ооцита в период роста.

Функции внешние (межуровневые) обеспечиваются двумя компартмен-тами. Благодаря повышенной проницаемости капиллярное сплетение осуществляет связь с организмом, включая восприятие и дальнейшую трансформацию эндокринных сигналов; слой отростков ФК-связь с ооцитом, за счет взаимодействий в терминальном районе отростков (А1Ьег11П1 е1 а!., 2001). Условное вычленение этих компонентов позволяет представить структуру стенки как объединение в единое целое семи компартментов, обладающих разными свойствами (Рис. 6).

Функции сферические. Замкнутость тканевых слоев в сферу придает фолликулу дополнительные свойства, обусловленные взаиморасположением описанных выше компартментов (Рис. 6). В частности, в слое ВТ это означает сближение капиллярной и артериальной областей (компарт-менты 3, 4), между которыми оказывается заключенной лишенная капилляров область стигмы (компартменты 5, 7). Очевидно, что, ввиду различия свойств, их сближение должно сказываться и при функционировании структуры.

Таким образом, при условном вычленении совокупности отростков ФК в самостоятельный слой можно констатировать наличие антисимметрии в структурной организации слоев теки и гранулезы. Первоначальное разделение стенки на внешнюю и внутреннюю по отношению к полости яичника части дополняется по мере роста фолликула возрастным градиентом внутри тканевых пластов. На уровне кровеносной системы эта возрастная характеристика имеет морфологическое проявление в виде капиллярного пятна и области артериол, которые различаются по проницаемости стенок сосудов и обилию факторов ангиогенеза. Сопряжение осей 0011ита и фолликула связано, таким образом, со строением кровеносной системы фолликула. Сферичность структуры позволяет рассматривать радиачьно-тангенциальные свойства фолликула как ее основной наиболее общий принцип организации.

фолликула. 1- отростки внутри пор яйцевой оболочки, 2 - фолликулярный эпителий. 3 - капилляры и фибробласты, 4 — артериолы и фибро-бласты, 5 - фибробласты, 6 - внутренний эпителий, 7 -перитонеальный эпителий, О - зародышевый пузырек

Центробежный процесс дезинтеграции фолликула

Изменения в гранулезе. «Созреванию фолликула» сопутствует сокращение не только отростков, но и тела ФК. Оно обеспечивается сократительной системой, опирающейся на подмембранную сеть филаментов в базальной части клетки. Особенностью осетровых рыб является увеличенная толщина яйцевой оболочки и длина отростков (Габаева,1970, 1974), поэтому стадия контракции ФК у них выражена необыкновенно ярко. В дальнейшем сократительная система релаксирует, ФК вторично уплощаются и появляются признаки интенсивной наружной секреции, связанной с выработкой наружной части яйцевой оболочки (Чинарева, Кричинская, 1975; Motta et al., 1994). Эти процессы сопровождаются также появлением морфологических признаков апоптоза, осуществление которого доказано на биохимическом уровне для клеток гранулезы у млекопитающих (Murdoch, 2000). Поскольку его признаки проявляются после продолжительного сокращения ФК, направленного перпендикулярно к БМ, охватывающего весь слой и приводящего к беспрецедентной нагрузке на его контакты с БМ, можно предположить, что в ФЭ осуществляется специфический тип апоптоза, индуцируемый повреждением контактов с внеклеточным матриксом - анойкис (Frisch, Ruoslahti, 1997; Ma et al., 2008).

Изменения во внутренней теке. В дне фолликула и его боковых частях не обнаружено явных признаков лизиса коллагена. Основные события, связанные с разрушением коллагена протекают в месте будущего разрыва. Согласно одной из гипотез об источниках протеолитических ферментов, на этом этапе происходит прекращение синтеза коллагена фибробластами на фоне его постоянного разрушения (Espey, 1982; Murdoch, 1999). Важно отметить, что признаки разрушения коллагенового слоя отчетливо проявляются в области стигмы и отсутствуют (вероятно, ингибируются) в других частях фолликула. В пользу предположения об ингибиции апоптоза теки в дне фолликула, говорят факты об антиапоптозных свойствах гонадотропинов (Svanberg et al., 2000), прогестерона (Peluso, 2003), основного фактора роста фибробластов (McGee et al., 1997) у млекопитающих. С другой стороны, в новейших исследованиях эндотелиальных клеток млекопитающих установлено ингибирующее влияние ангиогенеза на апоптоз: повышение уровня циклоксигеназы 2 увеличивает содержание цАМФ, что ведет к усилению синтеза сосудистого эндотелиального фактора роста, стимулированию ангиогенеза и снижению апоптоза (White et al., 2009). Эти данные обосновывают обнаруженную в данной работе обратную зависимость между проявлением признаков апоптоза и васкуляризацией стенки.

Изменения в наружной теке. По нашим данным, у севрюги также можно констатировать наличие в наружном слое теки ГМПК, которые образуют эластичный мешок, способный при сокращении создавать выталкивающую силу. На вершине фолликула сокращение ПЭ сопровождается утратой межклеточных контактов и последующей потерей целостности тканевого пласта.

ВЯВВ

ЙЯМ

Рис. 7. Стенка фолликула севрюги вскоре после разрушения ЗП. а, б-НТ: в, д - сокращение ФК. г - базальная область ФК: е - ФК. окаймленные пузырьки. ТЭМ.

Рис. 8 (справа). Стенка фолликула севрюги на стадии овуляции, а - НТ; б - участок а, цистерны саркоплазматического ретикулума между пучками Ф; в - общий вид ВТ и ФЭ; г — клетки ВТ, заполненные вакуолями; д, ж- апикальная поверхность ФК; е - образование разрыва в стигме; з-ВЭ, ГМПК. Масштаб^— з :1мкм. А -г-ТЭМ, д-з-СЭМ.

Обозначения: К, кавеолы; Ф, филаменты; КОЛ, коллаген; ПСФ, подмембранная сеть Ф;

ПФ, пучки Ф: ОП, окаймленные пузырьки; MTX; М. митохондрии; ФБ. фибробласт. Динамика изменений.] четверть npoi\ecca (ЗП вблизи мембраны ооцита): становится более заметной ПСФ в базальной части ФК (Рис. Те,г). II четверть процесса (Рис. 7) (разрушение ЗП): ретракция отростков и сокращение ФК. III четверть процесса: ретракция отростков завершена, начинается вторичное уплощение ФК, их цитоплазма сильно вакуолизирована, межклеточные пространства расширены. IV четверть процесса (Рис. 8) ФК уплощенной формы (д, ж), их ядра изогнуты, цитоплазма наполнена вакуолями и цистернами гранулярного ЭР, появились признаки, характерные для средней стадии апоптоза: кариоплазма уплотнена, хроматин сконденсирован вдоль ядерной мембраны. Пространство между ФК и БМ2 расширено (е). Коллаген внутри CT на вершине фолликула деградирует, а поперечная исчерченность БМ2 нарушена (е). В фибробластах также наблюдаютя пучки филаментов (а, е). Встречаются структуры, заполненные крупными вакуолями (ж). Состояние ПЭ соответствует начальным стадиям апоптоза: ядра приобрели неправильную форму, происходит разъединение клеток, утеря клеточных контактов, уменьшение объема клеток (СЭМ, е). В слое ВЭ происходит контракция ГМПК (г, з). В субкортикальной части клеток располагаются пучки промежуточных филаментов и цистерны ретикулума, в центральной части клеток - множество митохондрий (я, б).

Описанные изменения можно сгруппировать в восемь основных организованных во времени событий (Табл.1).

Таблица 1. Преовуляторные изменения стенки фолликула

Морфологические проявления Формы клеточной активности Фазы

1. 2. Сокращение отростков Сокращение ФК Контракция(К 1) «Созревание фолликула»

3. 4. 5. «Вторичное уплощение» ФК Вакуолизация ФК Деградационные изменения ФК Лпоптоз (А 1)

6. Деградация коллагена СТ Коллагенолитический процесс Лпоптоз фибробластов (А2) Овуляторные

7. Сокращение ВЭ изменения

8. Разъединение ПЭ

Морфологическое проявление процесса дезинтеграции стенки начинается с прерывания щелевых контактов фолликулярных клеток с ооцитом. Далее он распространяется кнаружи как радиальная контракция отростков ФК, а заканчивается, как тангенциальная контракция НТ. Первая сопряжена с созреванием ооцита (снятием блока мейоза), вторая — с овуляцией созревшего ооцита в полость тела. Временной промежуток между этими контрактильными событиями включает развитие апоптозных изменений во внутренней части стенки, которые также распространяются изнутри наружу и несколько позже проявляются на вершине фолликула, поэтому возникающая тангенциальная контракция НТ, приводит к сокращениям ВЭ без утраты целостности пласта и ПЭ с утратой целостности пласта.

Ключевым моментом в этой последовательности событий является возникающая беспрецедентная нагрузка на внутреннюю базальную мембрану (БМ2), к которой приводит максимальная контракции ФК, связанная, в свою очередь, с ретракцией длинных отростков. Эта нагрузка может служить повреждающим фактором (или сигналом) для связанных с БМ2 структур: полудесмосом между БМ2 и ФЭ с внутренней стороны и ближнего коллагенового слоя, окаймляющего БМ2 с наружной стороны. Итогом такого напряжения после завершения ретрации отростков становится разобщение стенки на ооцит, яйцевую оболочку, гранулезу и теку. Следовательно, первый крупный этап дезинтеграции можно определить как этап расслоения сферы. Далее следует этап релаксации, сопровождающийся вторичным уплощением ФК и началом их апоптоза (анойкиса). Позже начинается апоптоз теки (анойкис), однако в дне фолликула он может ингибироваться факторами ангиогенеза, что обеспечивает сохранность слоев в этой области. Наступающая затем контракция ГМПК наружной теки приводит к разрыву сферы там, где апоптозные изменения не ингибируются и стенка постепенно теряет присущую ей прочность - на вершине фолликула (Табл. 2).

Таблица 2. Дезинтеграция овариального фолликула низших позвоночных

Процессы Морфологичес кие проявления Результаты

Щ Снятие ингибиции мейоза - реинициация мейоза, начало радиальной контракции фолликулярного эпителия. Утрата межклеточной связи между ооцитом и ТЗО, ретракция ТЗО. Расслоение 1 - утрата непосредственной связи герминативной и соматической частей фолликула.

щ Созревание ооцита и «созревание фолликула», приводящее к апоптозу фолликулярных клеток. Контракция, вторичное уплощение и апопотоз ФК. Расслоение 2 - утрата связи между гранулезой и текой.

щ Возникновение ингибиции апоптоза фибробластов по всей сфере кроме области стигмы -апопотоз фибробластов и нарушение протеолити-ческого гомеостаза в стигме. Деградация коллагена в области стигмы. Локальное ослабление теки в области стигмы.

Тангенциальная контракция Г наружной теки, приводящая к | возникновению стягивающего эффекта внутри пласта. Продолжение контракции создает выталкивающую силу. Овуляция. Сокращение гмпк. Стягивание оболочки и экструзия ооцита. Разрыв сферы - утрата связи между капиллярной и артериальной частями в области стигмы. Разобщение соматической и герминативной частей фолликула при экструзии ооцита.

Радиально-тангенциальный принцип организации фолликула должен быть дополнен центробежностью наблюдаемого процесса. В соответствии со структурной антисимметрией гранулезы и теки контракция и апоптоз ФК («созревание фолликула», сопровождающее снятие ингибиции мейоза при созревании ооцита) зеркально, но нетождественно «отражается» в возникновение блока апоптоза фибробластов по всей теке за исключением области стигмы и контракцию наружной теки.

Ингиби горный анализ процесса дезинтеграции фолликула

Влияния антагониста серотонина на интактные фолликулы.

Обнаруженный ранее эффект влияния инмекарба на состояние ооцитов (Никитина и др., 1988; Бузников и др., 1990а, 19906) изучен на уровне ультраструктуры. Установлено прогестероноподобное влияние инмекарба, а также гипофизоподобное влияние при совмещении его с П (Рис. 10). Результаты подтвердили данные, полученные при изучении физиологических эффектов -способность этих веществ вызвать созревание и овуляцию ооцитов. В основе эффекта должно лежать его взаимодействие с поверхностными рецептивными

структурами фолликулярных клеток и ооцитов и обусловливающим их чувствительность к обладающему гидрофобными свойствами ИМ. По-видимому, они могут быть отнесены к числу серотонинорецепторов, поскольку 5-НТ снимает действие ИМ как на интактные, так и на дефолликулированные ооциты. Возможно, они идентичны рецепторам, обнаруженным у интактных ооцитов лягушки электрофизиологическими методами (Greenfild et al., 1990).

Представляется наиболее вероятным, что существует несколько источников эндогенного 5-НТ как регулятора оогенеза амфибий. Первоначально 5-НТ различного происхождения (в том числе, нейрональный) может поступать к поверхности ооцитов из крови. Позднее начинает функционировать 5-НТ ФК и ооцитов (о его присутствии в интактных ооцитах амфибий - Buznikov, 1990). Предполагается, что переход от дефинитивных функций 5-НТ к донервным происходит как раз во время созревания ооцитов. При всем разнообразии физиологических эффектов 5-НТ они могут иметь общий биохимический механизм - негативную модуляцию активности протеинкиназы С (Бузников и др., 1993). Вполне вероятно также, что 5-НТ имеет непосредственное отношение к регуляции паракринных взаимодействий между ФК и ооцитом, которые обсуждаются в «аксонной модели», рассматривающей подобие ТЗО млекопитающих и аксонов (Albertini et al., 2001).

Полученные результаты на ультраструктурном уровне подтверждают физиологические данные относительно действия инмекарба как положительного модулятора действия гормонов созревания. Предполагается, что 5-НТ участвует в регуляции созревания ооцитов как функциональный антагонист прогестерона и гормонов гипофиза и может быть активным участником регуляторных процессов, обеспечивающих дезинтеграцию фолликула.

Влияние цитохалазина В, колхицина, циклогексимида, аминоглю-тетимида и индометацина на преовуляторные изменения фолликула.

Устойчивость процессов дезинтеграции была исследована на фолликулах самки севрюги, стимулированной экстрактом гипофизов. На фоне 100%-ной овуляции в контроле при инкубации фолликулов на протяжении III и IV четвертей процесса наиболее сильное ингибирующее действие на овуляцию оказывали циклогексимид (ЦГ), цитохалазин В (ЦХ) и аминоглютетимид (АГ), в период охватывающий III четверть процесса - АГ и ЦХ.

Действие ингибиторов на процесс ультраструктурных изменений изучено с помощью ТЭМ и СЭМ (Табл.3). Степень влияния ингибиторов цитоскелета сильно различалась. Если цитохалазин В (ЦХ) оказался вторым после циклогексимида по эффективности блокирования овуляции in vitro, то действие колхицина было выражено гораздо слабее. На ультраструктурном уровне воздействие ЦХ приводило прежде всего к нарушению клеточных контактов между ФК, а также контактов ФЭ и ВЭ с базальными мембранами. Более длительное воздействие повреждало сократительный аппарат ФК и блокировало ретракцию их отростков, что могло создавать механическое

препятствие при высвобождении ооцита. В то же время ЦХ практически не нарушал систему промежуточных филаментов клеток ВЭ и не препятствовал ее сокращению, но, повреждая клеточные контакты, нарушал целостность пласта ВЭ. Это неспецифическое действие в сочетании с блокированием ретракции отростков, вероятно, и приводило к предотвращению овуляции.

Особенностью воздействия колхицина (КХ) являлось сильно выраженное ошаривание ФК на всех сроках воздействия - при деполимеризации микротрубочек под влиянием КХ сеть филаментов конденсировалась вблизи ядра. Однако это не затрагивало связанных с овуляцией функций ФК и не нарушало соответствующих физиологических процессов.

В последней четверти преовуляторного периода цнклогексимид (ЦГ) не подавлял овуляцию in vitro и не препятствовал морфологическим изменениям, однако в середине периода его действие блокировало процессы, следующие за вторичным уплощением ФК. Результаты согласуются с данными, полученными на фолликулах млекопитающих (Espey, 1986) и показавшими, что действие ЦГ сказывается лишь на начальных этапах. Согласно мнению этого автора подавляющее влияние ЦГ связано с подавлением стероидогенеза. Наши данные по действию аминоглютетимида (АГ) косвенным образом подтверждают это: остановка изменений происходила на тех же стадиях, что и при действии ЦГ, однако АГ вызывал частичное подавление овуляции и в последней четверти периода, что говорит об участии стероидов и на завершающих стадиях.

Ингибитор циклоксигеназы 2 индометацин (ИМ) не предотвращал сокращения ВЭ, как можно было бы ожидать на основании данных о стимулирующем влиянии ПГ на ГМПК фолликула у костистых рыб (Jalabert, 1976). Точкой приложения его действия являлся ПЭ, что согласуется с данными, полученными для млекопитающих (Espey et al., 1981; Espey, 1982). Ингибирующее влияние ИМ было выражено слабее, чем влияние других ингибиторов. Согласно одной из гипотез он не изменяет количественного соотношения ПГ серии Е и F. В норме такое изменение может происходить под действием П, который активизирует простагландин-Е2-9-кеторедуктазу, переводящую ПГ Е2 в ПГ F2a (Murdoch et al., 1986).

Результаты исследования, позволяют заключить, что синтез необходимых для овуляции белков завершается к началу последней четверти преовуляторного периода и связан, вероятно, с образованием стероида (прогестерона); влияние стероида существенно на протяжении всего периода, в том числе в течение последней четверти; синтез простагландинов de novo необходим для разрушения стенки в месте разрыва, но не сказывается на сократительной функции ВЭ; морфологическая целостность клеточного пласта ВЭ играет исключительно важную роль в процессе его сокращения при овуляции.

Показано что, нарушение любого из четырех основных взаимосвязанных клеточных процессов (К1-А1-А2-К2) отражается на конечном результате — высвобождении зрелого ооцита из фолликула. Влияние ингибитора оказывается не только тем стьнее, чем более ранний этап он повреждает, но и чем

более глубокий слой сферы фолликула он затрагивает. Это принципиально важно в рамках данного исследования и отражает центробежный характер процесса дезинтеграции стенки фолликула.

Таблица 3. Влияние ингибиторов на ультраструктурные изменения овариального фолликула в преовуляторный период при инкубации в течение П1 и IV четвертей процесса_

Преовуляторные изменения стенки фолликула

в норме t »присутствии ингибиторов

ЦГ АГ ИМ кх их

ФЭ- контракция радиальная 1. Сокращение ТЗО + + + +

2. Сокращение ФК + + + + —

3. «Вторичное уплощение» ФК + + - - • +

ФЭ - анойкис 4. Вакуолизация ФК - - + + +

5. Деградационные изменения ФК — патология + + +

СТ- деградация коллагена стигмы 6. Деградация коллагена СТ - - + + +

ВЭ- контракция тангенциальная 7. Сокращение ВЭ - - + + + /разъединение пласта

ПЭ- апоптоз 8. Разъединение ПЭ - - - - +

Пространственно-временные закономерности синтетической активности клеток стенки фолликула

Динамика транскрипции и трансляции

На данном этапе рпботм '~члп нс-лскчшн динамика общей транскрипц-|| ;: и и фансляционной активности, сопровождающей дезинтеграционные изменения при гормональных воздействиях. Фолликулы севрюги культивировали в растворах, содержащих экстракт гипофизов (Г) либо прогестерон (П) с добавлением [|4С]-уридина в одной серии и меченых [14С]-аминокислот в другой. Интенсивность синтеза РНК и тотального белка в клетках стенки оценивали методом сцинцилляционной радиометрии.

Опыт был проведен незадолго до наступления нереста (май), поэтому у обеих самок проявилась инерция к созреванию в контрольном растворе, не содержащем гормонов (100% и 40%). Эффект овуляции наблюдался в суспензии Г (92 и 90%), а у второй самки и в П (93%).

Пси леек "фанскриицпи в период созревания ооцита и «созревания фолликула» приводил к последующему падению трансляции, если препарат вызывал овуляцию (Г, а у второй самки и П) (Рис. 9). И напротив, увеличение интенсивности синтеза РНК было слабее, а синтез белка продолжался, если происходило только созревание, но не овуляция.

Результаты согласуются с имеющимися представлениями о том, что для осуществления овуляции требуется в два раза большая концентрация гонадо-тропинов, чем для созревания. Интенсификация синтеза РНК при действии П у

200 150 100 50

200 150

12 18 24 30 36

18 24 30 36

Рис. 9. Динамика включения [|4С]-уридина в РНК (а, б) и [|4С]-аминокислот в суммарные белки (в, г) в тканях стенки фолликулов травяной лягушки при культивировании в Г (—•), П (—■) и РР (—о). По оси х — время (часы), по оси у - радиоактивность (К)"2 имп/мин). Разрушение ЗП наступило через 12 ч, овуляция через 29 ч. На протяжении 18 ч уровень включения уридина в Г (а у самки 2 и в П) превышал и лишь непосредственно перед овуляцией сравнялся с контрольным. Уровень включения аминокислот в начальный период был близок к контрольному, в дальнейшем он обнаруживал отчетливую тенденцию к снижению, в то время как в контрольном растворе, в котором проходило спонтанное созревание ооцитов без овуляции, он увеличивался.

второй самки, коррелирующая с проявлением у нее эффекта овуляции, свидетельствует об участии П не только в механизме созревания, но и в овуляторных изменениях. По мнению Мердока оно заключается в способности П увеличивать активность простагландин-Е2-9-кеторедуктазы, переводящей ПГ Е2 в ПГ F2a (Murdoch et al., 1986). Обнаруженное затухание белкового синтеза согласуется с предположением ряда авторов (Espey, 1982; Dennefors et al., 1982) о механизме протеолитического разрушения коллагена при овуляции за счет прекращения синтеза коллагена на фоне его постоянного разрушения.

Таким образом, в норме воздействие гонадотропинов гипофиза приводит к временной интенсификации синтеза РНК в стенке фолликула в период созревания и последующему затуханию синтеза белка при подготовке к овуляции, связанному, по-видимому, с прекращением синтеза коллагена.

Пространственная локализация транскрипционной активности клеточных элементов внутри стенки при дезинтеграции фолликула.

Трехмерная картина распределения синтезов РНК в стенке фолликула получена методом радиоавтографии с применением [3Н]-уридина. Для приготовления препаратов были использованы стенки фолликулов травяной лягушки после культивирования фолликулов в растворах суспензии гипофизов (Г), прогестерона (П), простагландинов F2a либо Ел(ПГР, ПГЕ).

41 1

- || 1 г-,Ги1 £

— ■_1331_] ■■ ■ ■_—______Р'Ч___ шш

После культивирования в РР во всех компартментах сферы фолликула наблюдалась полная гомогенность по степени интенсивности синтезов. П индуцировал синтезы внутри гранулезы, ПГ Р2а -внутри теки в зоне капилляров, а воздействие ПГ Е2 и ИМ приводило к подавлению синтезов в зоне артериол. Влияние Г, напротив, вызывало поляризацию в уровне интенсивности синтезов в клетках теки. (Рис. 10, 11): в прилежащей к вегетативному полюсу ооцита области капилляров происходило значительное усиление синтезов, а в области артериол, прилежащей к анимальному полюсу -их снижение. При этом вполне отчетливо противоположные эффекты проявлялись и в районе стигмы. Если другие воздействия приводили либо к усилению, либо к ослаблению интенсивности синтеза РНК, то влияние Г в этом районе вызывало появление обоих эффектов в непосредственной близости тканей различной природы. Этот эффект можно рассматривать как проявление механизма разбалансировки состояния гистологического комплекса в стигме при действии гормонов гипофиза. То, что очень близкий вариант, подобный воздействию Г, возникает при искусственном суммировании противоположных действий ПГ Р2а и ПГ Е2 (Рис. 10, 11) указывает на участие обоих простагландинов при действии гонадотропинов.

Клеточные компартменты стенки фолликула по-разному реагируют на гормонапъные воздействия. Влияние прогестерона в наибольшей степени отра-

ГКЭКФбФК Капиллярное пятно

ГК ЭК Фб ФК Стигма

ГКЭК ФбФК Область артериол

Рис. 10. Относительная интенсивность включения [3Н]-уридина в клетки стенки фолликула при гормональных воздействиях. Черным цветом обозначены характеристики, полученные, из абсолютных значений, достоверно отличающихся от контроля. Сокращения: ГК - гладкомышечно-подобные клетки, ЭК - эндотелиальные клетки, Фб -фибробласты, ФК - фолликулярные клетки.

жается на интенсивности синтезов в гранулезе, вызывая ее увеличение. Влияние гормонов гипофиза и обоих проста-гландинов — на активности клеток теки, при этом изменения в различных областях носят противоположный характер. Корреляции интенсивности этих синтезов со степенью васкуляриза-ции стенки свидетельствует о значении ангиогенеза в процессе дезинтеграции фолликула.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Механизмы дезинтеграции фолликула

Овариальный фолликул низших позвоночных как структурно-функциональная единица (Хрущов, Бродский, 1961) яичника представляет собой содержащий ооцит 4-слойный эластичный эллипсоид с внутренней радиальной и тангенциальной зеркальной антисимметричностью за счет бинарной оппозиционности некоторых характеристик этих слоев. На завершающих стадиях оогенеза фолликул прекращает свое существование как целое за счет последовательного разобщения сначала герминативной (ооцит) и соматической (стенка) частей, затем гранулезы и теки, и, наконец, артериальной и капиллярной частей теки - в области стигмы (Рис. 12). В результате ооцит оказывается в состоянии свободно покинуть яичник и получить возможность дальнейшего развития. Таким образом, можно утверждать, что в основе изменений, происходящих при дезинтеграции фолликула, лежит единый механизм - нарушение структур, соединяющих антисимметричные компартменты фолликула.

Необходимо отметить, что эти изменения сопровождают проходящие внутри ооцита процессы интеграции, морфологическим проявлением которых является, в частности, объединение кариоплазмы с цитоплазмой при разрушении зародышевого пузырька. Именно соотношение процессов интеграции внутри одноклеточной герминативной части фолликула с дезинтеграцией внутри многоклеточной соматической части отражает уровень биологической сложности фолликула как структурно-функциональной единицы.

Сравнение с млекопитающими показывает, что у последних структура фолликула на завершающих стадиях оогенеза усложняется за счет накопления внутренних асимметрий. Происходит разделение гранулезы на кумулюс и пристеночную гранулезу, формирование обширной внутрифолликулярной полости, утрата внутренней бинарности в строении кровеносной системы и другие структурные изменения. Таким образом, в сравнительном эволюционном плане фолликул низших позвоночных выступает как архаичная исходная структура с более строгой внутренней антисимметричной бинарностью.

Рис. 11. Эффект поляризации интенсивности синтезов РНК в разных областях стенки фолликула при действии гормонов гипофиза и простагландинов.

ФОЛЛИКУЛ

Л----------------" к

ООЦИТ (оолемма-ТЗО) СТЕНКА

-к

ГРАНУЛЕЗА (ФК-БМ2) ТЕКА

КАПИЛЛЯРЫ (стигма) АРТЕРИОЛЫ

Рис. 12. Антисимметричные элементы структуры фолликула и границы их последовательного разобщения при дезинтеграции

Выводы

На основании проведенного исследования можно сделать следующие выводы, относящиеся к разным аспектам системной организации фолликула:

1. Структура. Установлено наличие внутренних антисимметрии в структурной организации гистологического комплекса, составляющего стенку фолликула: радиальной антисимметрии теки и гранулезы и тангенциатьной антисимметрии в строении теки (за счет разделения кровеносной системы на артериальную и капиллярную части). Различие свойств артериол и капилляров (повышенная проницаемость и активный ангиогенез последних) определяет ортогональное сопряжение осей ооцита и фолликула.

2. Процесс. Морфологические проявления дезинтеграции фолликула возникают приблизительно в середине преовуляторного периода и распространяются изнутри наружу как (1) радиальная контракция гранулезы, (2) апоптоз гранулезы, (3) апоптоз внутренней теки на вершине фолликула, (4) тангенциальная контракция наружной теки. Нарушение целостности стенки происходит в результате последовательного расслоения и разрыва стенки фолликула.

3. Инициация процесса включает нарушение взаимодействия между соматической и герминативной составляющей фолликула (контактов отростков фолликулярных клеток с оолеммой). Установленное на ультраструктурном уровне прогестероноподобное действие инмекарба свидетельствует об ингиби-рующем влиянии серотонина и его участии в поддержании блока мейоза.

4. Устойчивость процесса. Сравнительный ингибиторный анализа показал, что ингибитор действует тем эффективнее, чем более ранний этап он нарушает и чем более глубокий слой затрагивает. Такая зависимость отражает центро-бежность процесса дезинтеграции и доминирующую роль ранних преобразований в наиболее глубоких слоях стенки фолликула.

5. Пространственно-временная регуляция процесса. Зависимость между временным увеличением интенсивности транскрипции в период созревания и последующим снижением интенсивности трансляции при подготовке к овуляции подтверждает гипотезу о происходящем нарушении протеолитического гомеостаза, вероятно, за счет затухания синтеза коллагена при апоптозе фибро-бластов. Пространственное распределение синтезов РНК определяется различной реакцией клеточных компартментов стенки фолликула на гормональные воздействия. Корреляции интенсивности синтезов РНК со степенью васкуля-ризации стенки при действии гормонов гипофиза и простагландинов свидетельствует о существенном значении ангиогенеза в функционировании фолликула.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Трубникова О.Б., Рябова J1.B. Предовуляторные изменения фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall. // Онтогенез. 1989. Т. 20. №5. С. 532 -542.

2. Никитина Л.А., Трубникова О.Б., Бузников Г.А. Действие нейротрансмиттеров и их антагонистов на созревание ооцитов. Действие антагонистов серотонина на созревание in vitro ооцитов амфибий // Онтогенез. 1993. Т. 24. № 24. С. 29-38.

3. Buznikov G.A., Nikitina L.A., Galanov Y.U., Malchenko L.A., Trubnikova O.B. The control of oocyte maturation in the starfish and amphibians by serotonin and its antagonists // International Journal of Developmental Biology. 1993. V. 37. N 2. P. 362-363.

4. Трубникова О.Б. Влияние циклогексимида, аминоглютетимида, индометацина, цитохалазина В и колхицина на овуляцию и ультраструктуру стенки овариального фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall. // Онтогенез. 2003. Т. 34. С. 142-153.

5. Трубникова О.Б., Рябова J1.B. Функциональная роль контрактильной системы фолликула в течение овуляции Acipenser stellatus Pall. // Тез. докл. всес. конф. по биохимии мышц, Махачкала, 1987. С.68.

6. Трубникова О.Б. Ингибиторный анализ предовуляторных изменений ультраструктуры стенки фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall. // Тез. докл. всес. совещ. «Репродуктивная физиология рыб», Минск, 1991. С. 47.

7. Трубникова О.Б., Фельгенгауэр П.Е. Влияние гормонов гипофиза, прогестерона и простагландина F2a на синтез РНК и белка в стенке фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall, в предовуляторный период // Тез. докл. всес. совещ. «Репродуктивная физиология рыб», Минск, 1991. С 48.

8. Трубникова О.Б, Трубников Б.А. Квази-паретовский закон и оогенез лягушки// Тез. докл. национ. конф. с межд. участием "Математическое моделирование в экологии", Пущино, 2009. С. 282-283.

Список сокращений

тэм трансмиссионная ЭМ СТ соединительная ткань

СЭМ сканирующая ЭМ ГМПК гладкомышечноподобные клетки

г гипофиз ЗП зародышевый пузырек

п прогестерон ФК фолликулярная клетка

пг простагландин ФЭ фолликулярный эпителий

им индометацин ГР гранулеза

цх цнтохалазин НТ.ВТ наружная тека, внутренняя тека

ЦТ циклогексимид БМ базальная мембрана

АГ аминоглтотетимид ЭР эндоплазматический ретнкулум

кх колхицин ЖО желточная оболочка

пэ перитонеальный эпителий

вэ внутренний эпителий

Подписано в печать 26.01.2011 г. Тираж 100 экз. Заказ № 170 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел. (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 www.allaprint.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Трубникова, Оксана Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ КЛАССИЧЕСКОГО МОРФО-ФУНКЩЮНАЛЬНОГО ПОДХОДА И СОВРЕМЕННЫХ

МОЛЕКУЛЯРНО-БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ООГЕНЕЗА

1.1. ОСНОВНЫЕ КАТЕГОРИИ И ПРОБЛЕМЫ ИЗУЧЕНИЯ ОВАРИАЛЬНОГО ФОЛЛИКУЛА.

1.2. ГОРМОНАЛЬНЫЕ РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ОВАРИАЛЬНОГО ФОЛЛИКУЛА НА ЗАВЕРШАЮЩИХ СТАДИЯХ ООГЕНЕЗА.

1.2.1. Созревание и стероидогенез.

1.2.2. Овуляция и производные арахидоновой кислоты.

1.2.3. Участие донервных нейротрансмиттеров в функционировании фолликула.

1.3. КЛЕТОЧНЫЕ ОСНОВЫ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ОВАРИАЛЬНОГО ФОЛЛИКУЛА НА ЗАВЕРШАЮЩИХ СТАДИЯХ ООГЕНЕЗА.

1.3.1. Паракринные взаимодействия во внутренней части фолликула.

1.3.2. Структурное ремоделирование и разрыв фолликула при овуляции.

1.3.3. Контракция.

1.3.4. Участие поверхностного овариального эпителия.

1.3.5. Апоптоз в тканях яичника.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы дезинтеграции овариального фолликула в оогенезе низших позвоночных"

Актуальность проблемы. Взаимодействие соматической и герминативной составляющих овариального фолликула во время его роста и развития делает этот фолликул объектом высочайшего уровня сложности. Процессы, обеспечивающие функциональное и пространственное разобщение этих частей на завершающих этапах оогенеза являются ключевым моментом его развития, поскольку прекращение существования фолликула как единого целого не является следствием пассивной инертности, а сопровождается включением сложных регуляторных каскадов. Мы исследовали проявление позиционного принципа в функционировании клеточных элементов овариального фолликула на этих этапах с помощью комплексного подхода, включающего световую, трансмиссионную и сканирующую электронную микроскопию, метод ингибиторного анализа, методику анализа общей транскрипционной и трансляционной активности и авторадиографии.

Вопрос о реализации различных форм клеточной активности, приводящих к образованию и высвобождению зрелой, способной к оплодотворению и дальнейшему развитию яйцеклетки становится в настоящее время одной из наиболее актуальных проблем фолликулогенеза. Изучение этой проблемы включает три основных аспекта: (1) изучение разнообразия форм клеточной активности в этот период, (2) изучение характера их локализации внутри структуры фолликула и (3) изучение их скоординированности во времени. Однако решение проблемы требует, прежде всего, определения основных топологических особенностей пространственной структуры, внутри которой осуществляются эти формы клеточной активности (плоскость, трубка, сфера, тор и др.). С этой точки зрения овариальный фолликул представляет собой многослойный эластичный пузырек, а базовой характеристикой его пространственной организации можно считать сферичность, что, собственно, и отражено в названии (лат. /оШсиШ - мешочек). Необходимо отметить, что это свойство присуще не только овариальному фолликулу, но и многим другим целостным тканевым образованиям, поэтому проявление сферичности изучают в биологии давно. Сферичность связана с такими характеристиками как обособленность системы, наличие геометрического центра, использование минимальной ограничивающей поверхности и минимальных расстояний при передаче внутренних сигналов. Применение позиционного принципа, в описании процессов фолликулогенеза позволяет изучать все три указанных выше аспекта клеточной активности с учетом заданных этим свойством радиально-тангенциальных координат.

Регуляция процессов фолликулогенеза проходит в условиях функционирования репродуктивной системы в целом наряду с процессами гонадогенеза. и оогенеза. Яичник включает полный набор ооцитов,, находящихся в состоянии блока мейоза, а именно — на стадии профазы 1 деления мейоза, но на разных стадиях роста. Гонадотропины, действуя на ткани яичника, стимулируют в фолликулах старшей генерации каскад процессов, приводящих к снятию блока мейоза и созреванию ооцитов, т.е. реинициации в них дальнейших мейотических стадий вплоть до новой остановки на метафазе II. Ооциты приобретают способность к овуляции (экструзии в полость тела), подготовка и осуществление которой также представляет собой каскад процессов, приводящих к дезинтеграции фолликула у низших позвоночных и ремодуляции фолликула у млекопитающих (с учетом последующего формирования у них желтого тела).

Изучению механизмов, обеспечивающих функционирование овариального фолликула на завершающих стадиях оогенеза, когда под влиянием гормонального стимула ооцит возобновляет мейотические деления и, завершив этот этап развития, покидает яичник, посвящено множество работ последних десятилетий (см. обзоры Mehlmann, 2005; Hammes, 2004; Скоблина, 2009). Несмотря на то, что представления об этих механизмах обогатились обширной информацией о физиологических, молекулярных и генетических детерминантах фолликулогенеза, понимание механизмов клеточного поведения в овариальном фолликуле недостаточно для успешного контроля репродуктивной функции организма и моделирования поведения репродуктивной системы в различных условиях (Albertini et al., 2001).

Поэтому наряду с ее теоретическим значением актуальность обсуждаемой проблемы связана с двумя дополнительными обстоятельствами. Первым является интенсивное применение репродуктивных технологий в медицине и животноводстве, несмотря на недостаточное понимание механизмов функционирования сложной системы фолликула ("Assisted reproductive technology", 2002). Вторым можно считать развитие компьютерных технологий и математического моделирования, на фоне которых вновь становится актуальным подход, изучающий системность биологических объектов. Итогом этого явилось развитие в последние годы Биологии систем (Systems biology), направленной на выяснение наиболее общих принципов функционирования сложных целостных биологических объектов (Adami, 2002; Davidson et al., 2003)

В этом плане необходимо отметить большое значение работ, проведенных в Лаборатории экспериментальной эмбриологии им. Д.П.Филатова. В ней накоплен богатейший опыт изучения закономерностей оогенеза низших позвоночных, в том числе с помощью системы культивирования фолликулов in vitro. Основополагающие исследования лаборатории, связанные с именами Т.А. Детлаф, А.С. Гинзбург, О.И. Шмальгаузен и успешно развитые в работах С.Г. Васецкого, Б.Ф. Гончарова, М.Н. Скоблиной, Л.В. Рябовой и Л.А. Никитиной, позволили изучать вышеописанную проблему на моделях бесхвостых амфибий и на древней и уникальной группе - осетровых рыбах, близких к амфибиям по строению фолликула.

Объектами диссертационного исследования служили овариальные фолликулы севрюги Acipenser stellatus Pall., травяной лягушки Rana temporaria L. и шпорцевой лягушки Xenopus laevis L.

Предмет диссертационного исследования. Были исследованы ультраструктурные и биохимические изменения стенки овариальных фолликулов в условиях созревания и овуляции ооцитов in vivo и при культивировании in vitro под влиянием различных гормональных воздействий.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось формирование представления о системной организации фолликула как целостной структурно-функциональной единицы яичника (на основе исследования изменений стенки овариального фолликула на завершающих стадиях его существования в норме и при экспериментальных воздействиях).

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать пространственную организацию стенки дифференцированного овариального фолликула на световом и ультраструктурном уровнях;

2. Описать морфофункциональные стадии дезинтеграции стенки фолликула под влиянием гормонов гипофиза in vivo и in vitro;

3. Провести ультраструктурный анализ влияния антагониста серотонина (инмекарба) на процессы, протекающие в стенке фолликула;

5. Охарактеризовать динамику синтезов РНК и белка в стенке фолликула под влиянием гормонов гипофиза, прогестерона и простагландина F2a;

6. Исследовать пространственное распределение синтезов РНК клетками стенки, индуцированных гормонами гипофиза, прогестероном и простаглан-динами F2a и Е2.

Научная новизна результатов диссертационного исследования. Впервые проведено комплексное исследование дезинтеграции стенки овариального фолликула севрюги на ультраструктурном уровне, вычленены морфофункциональные стадии этого процесса. Обоснован радиально-тангециальный принцип в тонком строении стенки и прослежено центробежное распространение процесса в соответствии с этим строением. В результате проведенного исследования впервые:

- В системной организации фолликула выделены два новых структурных элемента стенки: совокупность -отростков фолликулярных клеток как радиальный сократимый орган фолликула, выполняющий функцию внешней связи стенки фолликула с ооцитом, и капиллярное сплетение фолликула с функцией внешней связи с организмом.

- На ультраструктурном уровне описано прогестероноподобное действие антагониста серотонина (инмекарба) на овариальный фолликул. Результат указывает на возможную донервную роль серотонина в процессе созревания ооцита, а также свидетельствует в пользу предложенной для млекопитающих модели подобия отростков фолликулярных клеток аксонам.

- Проведен сравнительный анализ влияния ингибиторов синтеза белка циклогексимида), прогестерона (аминоглютетимида), простагландинов индометацина), а также цитостатиков (цитохалазина В и колхицина) на изменения ультраструктуры фолликула в процессе его дезинтеграции. Выявлены «точки приложения» известного подавляющего действия цитохалазина В при овуляции: предотвращение радиальной контракции за' счет повреждения микрофиламентов в отростках фолликулярных клеток и тангенциальной контракции за счет нарушения целостности поверхностного гладкомышечного слоя. Для осетровых рыб подтверждено известное для млекопитающих влияние индометацина на перитонеальный эпителий.

Теоретическая и практическая значимость. Выявленные в работе структурные и функциональные характеристики фолликулов низших позвоночных и предложенная модель многослойной эластичной сферы с внутренней антисимметрией можно рассматривать как основу для последующего математического моделирования процессов фолликулогенеза. Полученные результаты представляют общебиологический интерес и могут быть использованы при чтении курса лекций по биологии развития.

1. Трубникова О.Б., Рябова JT.B. Предовуляторные изменения фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall. // Онтогенез. 1989. Т.20. №5. С.532 -542.

2. Никитина JT.A., Трубникова О.Б., Бузников Г.А. Действие нейротрансмит-теров и их антагонистов на созревание ооцитов. Действие антагонистов серотонина на созревание in vitro ооцитов амфибий // Онтогенез. 1993. Т.24. № 24. С.29-38.

3. Buznikov G.A., Nikitina L.A., Galanov Y. U., Malchenko L.A., Trubnikova O.B. The control of oocyte maturation in the starfish and amphibians by serotonin and its antagonists // Int. J. Dev. Biol. 1993. V. 37. N 2. P. 362-363.

4. Трубникова О.Б. Влияние циклогексимида, аминоглютетимида, индомета-цина, цитохалазина В и колхицина на овуляцию и ультраструктуру стенки овариального фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall. // Онтогенез. 2003. Т. 34. №2. С. 142-153.

5. Трубникова О.Б., Рябова JI.B. Функциональная роль контрактильной системы фолликула в течение овуляции Acipenser stellatus Pall. // Материалы Всесоюзн. конф. по биохимии мышц, Махачкала, 1987. С.68.

6. Трубникова О. Б. Ингибиторный анализ предовуляторных изменений ультра-структуры стенки фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall.// Тез. докл. Всесоюзн. совещ. «Репродуктивная физиология рыб», Минск, 1991. С. 47.

7. Трубникова О.Б., Фелъгенгауэр П.Е. Влияние гормонов гипофиза, прогестерона и простагландина F2a на синтез РНК и белка в стенке фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall, в предовуляторный период // Тез. докл. Всесоюзн. совещ. «Репродуктивная физиология рыб», Минск, 1991. С 48.

8. Трубникова О.Б, Трубников Б.А. Квази-паретовский закон и оогенез лягушки// Тез. докл. Национальной конф. с межд. участием "Математическое, моделирование в экологии", Пущино, 2009. С. 282-283.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 140 страницах, содержит 26 рисунков, 7 таблиц и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 210 цитируемых источников.

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Трубникова, Оксана Борисовна

ВЫВОДЫ

На основании проведенного исследования можно нарисовать общую картину дезинтеграции овариального фолликула низших позвоночных. Ее можно охарактеризовать в разных аспектах, каждому из которых посвящен ниже приводимый развертутый тезис.

1. Структура. Установлено наличие внутренних антисимметрий в структурной организации гистологического комплекса, составляющего стенку фолликула: радиальной антисимметрии теки и гранулезы и тангенциальной антисимметрии в строении теки (за счет разделения кровеносной системы на артериальную и капиллярную части). Различие свойств артериол и капилляров (повышенная проницаемость и активный ангиогенез последних) определяет ортогональное сопряжение осей ооцита и фолликула.

3. Инициация процесса включает нарушение взаимодействия между соматической и герминативной составляющей фолликула (контактов отростков фолликулярных клеток с оолеммой). Установленное на ультраструктурном уровне прогестероноподобное действие инмекарба свидетельствует об ингибирующем влиянии серотонина и его участии в поддержании блока мейоза.

4. Устойчивость процесса. Сравнительный ингибиторный анализа показал, что ингибитор действует тем эффективнее, чем более ранний этап он нарушает и чем более глубокий слой затрагивает. Такая зависимость отражает центробежность процесса дезинтеграции и доминирующую роль ранних преобразований в наиболее глубоких слоях стенки фолликула.

5. Пространственно-временная регуляция процесса. Зависимость между временным увеличением интенсивности транскрипции в период созревания и последующим снижением интенсивности трансляции при подготовке к овуляции подтверждает гипотезу о происходящем нарушении протеолитического гомеостаза, вероятно, за счет затухания синтеза коллагена при апоптозе фибробластов. Пространственное распределение синтезов РНК определяется различной реакцией клеточных компартментов стенки фолликула на гормональные воздействия. Корреляции интенсивности синтезов РНК со степенью васкуляризации стенки при действии гормонов гипофиза и простагландинов свидетельствует о существенном значении ангиогенеза в функционировании фолликула.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Механизмы дезинтеграции фолликула

Овариальный фолликул низших позвоночных как структурно-функциональная единица (Хрущов, Бродский, 1961) яичника представляет собой содержащий ооцит 4-слойный эластичный эллипсоид с внутренней радиальной и тангенциальной зеркальной антисимметричностью за счет бинарной оппозиционности некоторых характеристик этих слоев. На завершающих стадиях оогенеза он прекращает свое существование как целое за счет последовательного разобщения сначала герминативной (ооцит) и соматической (стенка) частей, затем гранулезы и теки, и, наконец, между артериальной и капиллярной частей теки - в области стигмы (рис. ЗКЛ-1 и рабл. ЗКЛ -1). В результате ооцит оказывается в состоянии свободно покинуть яичник и получить возможность дальнейшего развития. Таким образом, можно утверждать, что в основе изменений, происходящих при дезинтеграции фолликула, лежит единый механизм — распад структур, соединяющих антисимметричные части фолликула.

ФОЛЛИКУЛ

ООЦИТ (оолемма-ТЗО) СТЕНКА

ГРАНУЛЕЗА (ФК-БМ) ТЕКА

КАПИЛЛЯРЫ (стигма) АРТЕРИОЛЫ

Рис. ЗКЛ-1. Антисимметричные элементы структуры фолликула и границы их последовательного разобщения при дезинтеграции

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Трубникова, Оксана Борисовна, Москва

1. Бузников Г.А. Низкомолекулярные регуляторы зародышевого развития.1. М.: Наука, 1967. 266 с.

2. Бузников Г.А., Загоревский В.А., Ракич JL, Рогач JL, Шаркова JI.M.

3. Рецепция и внерецепторное связывание цитостатических антагонистов серотонина ранними зародышами морского ежа Arbacia lixulall Ж. эвол. биохим. физиол. 1988. Т. 24. № 5. С. 611-619.

4. Бузников Г.А., Мальченко Л.Ф., Никитина Л.А., Галанов А.Ю., Еманов

5. B.C. Действие нейротрансмиттеров и их антагонистов на созревание ооцитов. I. Влияние серотонина его антагонистов на чувствительность ооцитов морских звезд к I-метиладенину// Онтогенез. 1990а. Т. 21. № 5. С. 531-536.

6. Бузников Г.А., Мальченко Л.А., Никитина Л.А., Галанов А.Ю., Погосян

7. C.А., Папаян Г.Л. Действие нейротрансмиттеров и их антагонистов на созревание ооцитов. 2. Влияние антагонистов серотонина на чувствительность ооцитов морской звезды к форсколину и иономицину//Онтогенез. 19906. Т. 21. № 5. С. 612-619.

8. Волкова О.В., Алкарадская И.М., Миловидова Н.С. Морфологическиеизменения в яичнике при овуляции (обзор)// Арх. анатом., гистол. и эмбриол. 1980. Т. 79. Вып. 8. С. 5-18.

9. Габаева Н.С. К сравнительной гистологии фолликулярного эпителия в рядупозвоночных// Арх. анатом., гистол. эмбриол. 1970. Т. 79. Вып. 4. С. 20-39.

10. Габаева Н.С. Развитие фолликула и формирование яйцевой оболочки входе оогенеза осетра// Биол. Науки. 1974. № 12. С. 15-21.

11. Гончаров Б.Ф. Влияние состава среды культивирования на созреваниеооцитов осетровых рыб, индуцируемое гонадотропными гормонами и прогестероном// Онтогенез. 1997. Т. 28. № 1. С. 55-64.

12. Гончаров Б.Ф. Влияние состава среды культивирования на способностьфолликулов осетровых рыб реагировать созреванием на действие гонадотропных гормонов// Вопросы раннего онтогенеза рыб. Киев: Наук. Думка. 1978. С. 77-78.

13. Детлаф Т.А. Становление организации зрелого яйца у амфибий и рыб назаключительных стадиях оогенеза и в период созревания. III. 2.4. Овуляция (обзор)// Современные проблемы оогенеза. М.: Наука, 1987. С. 112-113.

14. Детлаф Т.А., Гинзбург A.C., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб.1. М.: Наука, 1981. С.22.

15. Детлаф Т.А., Детлаф A.A. О безразмерных характеристикахпродолжительности развития в эмбриологии // Докл. АН СССР. 1960. Т. 134. С. 199-202.

16. Епифанова О.И., Терских В.В., Захаров А.Ф. Радиоавтография. М.: Высшаяшкола., 1977, 265 с.

17. Казанский Б.И. Влияние гипофиза на ядерные процессы в овоцитах у рыб //

18. Докл. АН СССР. 1950. Т. 75. № 2. С. 311-314.

19. Казанский Б.Н. Завершение овуляции вне организма у осетровых // Докл.

20. АН СССР. 1952. Т. 83. № 6 С. 965-968.

21. Никитина JI.A., Мальченко JI.A., Теплиц H.A., Бузников Г.А. Действиесеротонина и его аналогов на созревание in vitro ооцитов амфибий// Онтогенез. 1988. Т. 19. № 5. С. 499-507.

22. Никитина Л.А., Трубникова О.Б., Бузников Г.А. Действие нейротрансмиттеров и их антагонистов на созревание ооцитов. Действие антагонистов серотонина на созревание in vitro ооцитов амфибий// Онтогенез. 1993. Т.24. № 24. С. 29-38.

23. Скоблина М.Н. Стимуляция in vitro овуляции ооцитов костистых рыбгонадотропными и стероидными гормонами// Онтогенез. 2009. Т. 40. № 4. С. 245-253.

24. Скоблина М.Н. Участие щелевых контактов в стимуляции созреванияооцитов травяной лягушки in vitro низкими концентрациями прогестерона // Онтогенез. 2004. Т. 35. № 5. С. 350-355.

25. Трубникова О.Б. Влияние циклогексимида, аминоглютетимида,индометацина, цитохалазина В и колхицина на овуляцию и ультраструктуру стенки овариального фолликула севрюги Acipenser stellatus Pall.// Онтогенез. 2003. Т. 34. № 2. С. 142-153.

26. Трубникова О.Б. Ингибиторный анализ предовуляторных измененийультраструктуры стенки фолликула севрюги// В сб. « Репродуктивная физиология рыб», Минск, 1991. С. 47.

27. Трубникова О.Б., Рябова JI.B. Преовуляторные изменения фолликуласеврюги Acipenser stellatus Pall.// Онтогенез. 1989. Т.20. №5. С. 532542.

28. Трубникова О.Б., Рябова JI.B. Функциональная роль контрактильнойсистемы фолликула в течение овуляции Ascipenser stellatus Pall II Тез. докл. Всесоюзн. конф. по биохимии мышц. Махачкала, Дагестан 1987.С. 68.

29. Трубникова О.Б, Трубников Б.А. Квази-паретовский закон и оогенезлягушки// Тез. докл. Национальной конф. с межд. участием "Математическое, моделирование в экологии", Пущино, 2009. С. 282283.

30. Трубникова О.Б., Фельгенгауэр П.Е. Влияние гормонов гипофиза,прогестерона и простагландина F2a на синтез РНК и белка в стенке фолликула севрюги в предовуляторный период // В сб. «Репродуктивная физиология рыб», Минск. 1991. С. 48.

31. Хрущов Г.К., Бродский В.Я. Орган и клетка (некоторые проблемыцитологии и гистологии)// Усп. совр. биол. 1961. Т. 52. Вып. 2. С. 181— 207.

32. Чинарева И.Д., Кричинская Е.Б. Электронно-микроскопические исследования формирования яйцевых оболочек ооцитов последнего года раз-вития пеледи // Арх. анатом., гистол. и эмбриол. 1975. Т. 65. № 5. С. 965-968.

33. Шубников А.В. Симметрия и антисимметрия конечных фигур. М.: Изд-во1. АН СССР, 1951, 172 с.

34. Шубников А.В., Копцик В.А. Симметрия в науке и искусстве. Москва

35. Ижевск: Институт компьютерных исследований, 2004, 650 с.

36. Acosta T.J. Studies of follicular vascularity associated with follicle selection andovulation in cattle// J. Reprod. Dev. 2007. V. 53. N 1. P. 39-44.

37. Acosta T.J., Hayashi K.G., Ohtani M., Miyamoto A . Local changes in bloodflow within the preovulatory follicle wall and early corpus luteum in cows.// Reprod. 2003. V. 125. N 5. P. 759-767.

38. Adami C. What is complexity? // BioEssays. 2002. V. 24. P.1085-1094.

39. Albertini D.F., Combelles C.M., Benecchi E., Carabatsos M.J. Cellular basis forparacrine regulation of ovarian follicle development// Reprod. 2001. V. 121. P 647-653.

40. Alexander C.M., Selvarajan S., Mudgett J., Werb Z. Stromelysin-1 regulatesadipogenesis during mammary gland involution// J. Cell Biol. 2001. V. 152. N4. P. 693-703.

41. Allworth A.E., Albertini D.E. Meiotic maturation in cultured bovine oocytes isaccompanied by remodeling of the cumulus cell cytoskeleton// Develop. Biol. 1993, V. 158. P. 101-112.

42. Anderson J.M., Yatwin M.B. Metabolic and ultrastructural changes in the frogovarian follicle in response to pituitary stimulation // Cell Biol. 1970. V. 46. N4. P. 491-504.

43. Assisted Reproduction Technology (ed. by De Jonge C.J., Barratt C.L.R.)

44. Cambridge University Press, 2002. 431 p.

45. Auersperg N., Wong A.S.T., Choi K.-C., Kang S.K., Leung P.C.K. Ovariansurface epithelium: biology, endocrinology, and pathology // Endocr. Reviews. 2001. V. 22. N. 2. P. 255-288.

46. Bagowski C.P., Myers J.W., Ferrell Jr J.E. The classical progesterone receptorassociates with p42 MAPK is involved in phosphatidylinositol 3-kinase signaling in Xenopus oocytes// J Biol. Chem. 2001. V. 276. P.37708-37714.

47. Bayaa M., Booth R.A., Sheng Y., Liu X.J. The classical progesterone receptormediates Xenopus oocyte maturation through a nongenomic mechanism// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 12607-12612.

48. Bobe J., Montfort J., Nguyen T., Fostier A. Identification of new participants inthe rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) oocyte maturation and ovulation pro-cesses using cDNA microarrays// Reprod. Biol. Endocrinol. 2006, V. 4, P. 39-55.

49. Bonello N., Jasper M.J., Norman R.J. Periovulatory expression of intercellularadhesion molecule-1 in the rat ovary// Biol. Reprod. 2004. V. 71. P. 13841390.

50. Bonello N., McKie K., Jasper M., Andrew L., Ross N., Braybon E., Brannstrom

51. M., Norman R.J. Inhibition of nitric oxide: effects on interleukin-1 beta-enhanced ovulation rate, steroid hormones, and ovarian leukocytedistribution at ovulation in the rat// Biol. Reprod.1996. V. 54. N 2. P. 436445.

52. Bortolussi M., Zanchetta R., Doliana R., Castellani I., Bressan G.M., Lauria A.

53. Changes in the organization of the extracellular matrix in ovarian follicles during the preovulatory phase and atresia. An immunofluorescence study// Basic Appl. Histochem. 1989. V. 33. N 1. P. 31-38.

54. Bradley J.A., Goetz F.W. The inhibitory effects of indomethacin, nordihydroguaiaretic acid, and pyrrolidinedithiocarbamate on ovulation and prostaglandin synthesis in yellow perch (Perca flavescens) follicle incubates// Prostagl. 1994. V. 48. P. 11-20.

55. Brannstrom M., Enskog A. Leukocyte networks and ovulation// J. Reprod.1.munol. 2002. V. 57. P. 47-60.

56. Brannstrom M., Zackrisson U., Hagstrum H.G., Josefsson B., Hellberg P.,

57. Granberg S., Collins W.P., Bourne T. Preovulatory changes of blood flow in different regions of the human follicle// Fertil. Steril. 1998. V. 69. N 3. P. 435-442.

58. Browne C.L., Dumont J.N. Hormonal regulation of intercellular communica-tionbetween the oocyte and follicle cells of Xenopus laevis /! J. Cell Biol. 1978. V. 79. N2. P. 176.

59. Buccione R., Schroeder A.C., Eppig J.J. Interactions between somatic cells andgerm cells throughout mammalian oogenesis// Biology of Reproduction. 1990. V. 43. P. 543-47.

60. Buznikov G.A. Neurotransmitters in embryogenesis. Chur: Harwood Academic1. Publishers, 1990, 526 p.

61. Buznikov G.A., Nikitina L.A., Galanov Y.U., Malchenko L.A., Trubnikova O.B.

62. The control of oocyte maturation in the starfish and amphibians by serotonin and its antagonists // Int. J. Dev. Biol. 1993. V. 37. N 2. P. 362363.

63. Cajander S., Bjersing L. Further stadies of the surface epitelium coveringpreovulatory rabbit follicles with special reference to lysosomal alterations// Cell Tissue Res. 1976. V. 169. N 2. P. 129-141.

64. Carson R., Trounson A., Mitchel M. Regulation of prostaglandine biosynthesisby human ovarian follicular fluid a mechanism for ovulation?// Prostagl. 1986. V. 32. N l.P. 49-56.

65. Christopher B. Immunolocalization of transforming growth factor-beta 1 duringfollicular development and atresia in the mouse ovary// Endoc. J. 2000. V. 47. N 4. P. 475-480.

66. Chun S.Y., Eisenhauer K.M., Kubo M., Hsueh A.J.W. Interleukin-1 betasuppresses apoptosis in rat ovarian follicles by increasing nitric oxide production//Endocrinology. 1995. V. 136. N 7. P. 3120-3127.

67. Chun S.Y., Hsueh A.J.W. Paracrine mechanisms of ovarian follicle apoptosisreview)// J. Reprod. Immunol. 1998. V. 39. N 1-2. P. 63-75.

68. Conti M., Andersen C.B., Richard F., Mehats C., Chun S.Y., Homer K., Jin C.,

69. Tsafriri A. Role of cyclic nucleotide signaling in oocyte maturation// Mol Cell Endocrinol. 2002. V. 187. P. 153-159.

70. Curry T.E.Jr., Song L., Wheeler S.E. Cellular localization of gelatinases andtissue inhibitors of metalloproteinases during follicular growth, ovulation, and early luteal formation in the rat// Biol. Reprod. 2001. V. 65. P. 855865.

71. Dascal N., Yekuel R., Oron Y. Cholinergik modulation of progesterone indu-cedmaturation ofXenopus oocytes in vitro// Gamete Res. 1985. V. 12. P. 171182.

72. Davidson E.H., McClay D.R., Hood L. Regulatory gene networks and theproperties of the developmental process// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2003. V. 100. N. 4. P. 1475-1480.

73. Davis B.J., Lennard D.E., Lee C.A., Tiano H.F., Morham S.G., Wetsel W.C.,1.ngenbach R. Anovulation in cyclooxygenase-2-deficient mice is restored by pros-taglandin E2 and interleukin-1 beta// Endocrinology. 1999. V. 140.1. N6. P. 2685-2695.

74. Dennefors B., Tuigum J., Norstrom A. Collagen synthesis inhibition by prostaglandin E2 within the human follicular wall one possible mechanism underying ovulation// Prostagl. 1982. V. 24. N 3. P. 295-302.

75. Detlaff T.A., Dettlaff A.A. On relative dimension-less characteristics of thedevelopment duration in embryology // Arch. Biol. (Liege). 1961. V. 72. N l.P. 1-16.

76. Downs S.M., Longo F.J. Prostaglandins and preovulatory follicular maturationin mice// J. Exp. Zool. 1983. V. 228. P. 99-108.

77. Dumont J.N., Brummet A.R. Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). V.

78. Relation-ships between developing oocytes and their investing follicular tissues I I J.Morph. 1978. V. 155. N 1. P. 73-98.

79. Elvin J.A., Clark A.T., Wang P., Wolfman N.M., Matzuk M.M. Paracrineactions of growth differentiation factor-9 in the mammalian ovary// Mol. Endocrinol. 1999. V. 13. N 6. P. 1035-1048.

80. Elvin J.A., Yan C., Matzuk M.M. Growth differentiation factor-9 stimulatesprogesterone synthesis in granulosa cells via a prostaglandin E2/EP2 receptor pathway// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 1028810293.

81. Elvin J.A., Yan C., Wang P., Nishimori K., Matzuk M.M. Molecular characterization of the follicle defects in the growth differentiation factor 9-deficient ovary// Mol. Endocrin. 1999. V. 13. P. 1018-10134.

82. Epler P., Bieniarz K. In vitro ovulation of european eel {Angulla angulla)oocytes following in vivo stimulation of sexual maturation// Ann. Biol. Animal. Bioch. Biophys. 1978. V. 18. P. 991-995.

83. Eppig J.J. Prostaglandin E2 stimulates cumulus expansion and hyaluronic acidsynthesis by cumuli oophori isolated from mice// Biol. Reprod. 1981. V. 25. P. 191-195.

84. Eppig J.J., Wigglesworth K., Pendola F.L. The mammalian oocyte orchestratesthe rate of ovarian follicular development// Proc Natl Acad Sei USA. 2002. V. 99. P. 2890-1894.

85. Espey L.L. A review of factors that could influence membrane potentials ofovarian follicular cells during mammalian ovulation // Acta Endocrinol. 1992. V. 126. Suppl. 2. P. 1-30.

86. Espey L.L. An overview of 37 years of research on ovulation. In: Adashi, EYeds). Ovulation: evolving scientific and clinical concepts: In Proceedings in the Serono symposium USA series. N.Y.: Springer-Verlag, 2000. P. 1-6.

87. Espey L.L. Current status of the hypothesis that mammalian ovulation iscomparable to an inflammatory reaction// Biol. Reprod. 1994. V. 50. P. 233-238.

88. Espey L.L. Cycloheximide inhibition of ovulation, prostaglandin biosynthesisand steroidogenesis in rabbit ovarian follicles // J.Reprod.Fert. 1986. V.78. P.679-683.

89. Espey L.L. Effect of various substances on tensile strength of sow ovarianfollicles//Am. J. Physiol. 1970. V. 219. P. 230-233.

90. Espey L.L. Evaluation of proteolitic activity in mammalian ovulation. In: Proteases and biological control. N.Y.: Cold Spring Harbor LAB., 1976. P. 295302.

91. Espey L.L. Optimum time for administration of indomethacin to inhibitovulation in the rabbit// Prostagl. 1982. V.23. P.329-335.

92. Espey L.L. Ovarian contractility and its relation to ovulation// Biol.Reprod.1978. V. 19. N4. P. 540-551.

93. Espey L.L. Ovarian proteolytic enzymes and ovulation // Biol. Reprod. 1974. V.10. P. 216-235.

94. Espey L.L., Coons P.J., Marsh J.H., LeMaire E. Effect of indomethacin onpreovulatory changes in the ultrastructure of rabbit graafian follicles // Endocrinol. 1981. V. 108. N. 3. P. 1040-1048.

95. Espey L.L., Rondell P. Collagenolytic activity in the rabbit and sow Graafianfollicle during ovulation//Am. J. Physiol. 1968. V. 214. P. 326-329.

96. Espey L.L., Yoshioka S, Russell D.L., Robker R.L., Fujii S., Richards J.S.

97. Ovarian expression of a disintegrin and metal loproteinase with thrombospondin motifs during ovulation in the gonadotropin-primed immature rat// Biol. Reprod. 2000. V. 62. N 4. P. 1090-1095.

98. Ferrara N., Chen H., Davis-Smyth T., Gerber H.P., Nguyen T.N., Peers D.,

99. Chisholm V., Hillan K.J., Schwall R.H. Vascular endothelial growth factor is essential for corpus luteum angiogenesis// Nat. Med. 1998. V. 4. N 3. P. 336-340.

100. Fraser H.M. Regulation of the ovarian follicular vasculature// Reprod. Biol.

101. Endocrinol. 2006. V.12. N 4. P. 18.

102. Fraser H.M., Wulff C. Angiogenesis in the primate ovary// Reprod. Fertil. Dev.2001. V. 13. N7. P. 557-566.

103. Frisch S.M., Ruoslahti E. Integrins and anoikis // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. V.9. P. 793-799.

104. Gallo C.J., Hand A.R., Jones T.L., Jaffe L.A. Stimulation of Xenopus oocytematuration by inhibition of the G-protein a S subunit, a component of the plasma membrane and yolk platelet membranes// J. Cell Biol. 1995. V. 130. P. 275-284.

105. Gaytan F., Bellido C., Gaytan M., Morales C., Sanchez-Criado J.E. Differentialeffects of RU486 and indomethacin on follicle rupture during the ovulatory process in the rat// Biol. Reprod. 2003. V. 69. N 1. P. 99-105.

106. Gittens J.E.L., Barr K.J., Vanderhyden B.C., Kidder G.M. Interplay betweenparacrine signaling and gap junctional communication in ovarian follicles// J. Cell Sci.2005. V. 118. P. 113-122.

107. Goetz F.M. Follicle and extrafollicular tissue interaction in 17alpha,20betadihydroxy-4-pregnen-3-one-stimulated ovulation and prostaglandin synthesis in the yellow perch (Perca flavescens) ovary // Gen.Comp. Endocrinol. 1997. V. 105. N. 1. P.121-126.

108. Goetz F.W., Garczynski M. The ovarian regulation of ovulation in Teleost Fish//

109. Fish Physiol. Biochem. 1997. V. 17. P. 33-38.

110. Grosse J., Bulling A., Brucker C., Berg U., Amsterdam A., Mayerhofer A.,

111. Gratzl M. Synaptosome-associated protein of 25 kilodaltons in oocytes and steroid-producing cells of rat and human ovary: molecular analysis and regulation by gonadotropins// Biol. Reprod. 2000. V. 63. P. 643-650

112. Gyraya S.S. Recent advances in the morphology, histochemistry, andbiochemist-ry of ateroid-synthesizing cellular sites in the nonmammalian vertebrate ovary// Int. Rev. Cytol. N.J: Acad. Press, 1976. V. 47. P. 99-136.

113. Hagglund A.C., Ny A., Leonardsson G., Brannstrom M. Regulation andlocaliza-tion of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in the mouse ovary during gonadotropin-induced ovulation//Endocrinol. 1999. V. 140. P.4351^1358.

114. Hammes S.R. Steroids and oocyte maturation a new look at an old story //

115. Mol. Endocrin. 2003. V. 18. N 4. P. 769-775.

116. Hazzard T.M., Stouffer R.L. Angiogenesis in ovarian follicular and luteal development// Baillieres Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2000. V. 14. P. 883-900.

117. Heilbrunn L.Y., Daugherty K., Wilbur K.M. Initiation of maturation in the frogegg//Physiol. Zool. 1939. V. 12. P. 97-100.

118. Hellberg P., Thomsen P., Janson P., Brannstrum M. Leukocyte supplementationincreases the luteinizing hormone-induced ovulation rate in the in vitro-perfused rat ovary// Biol. Reprod. 1991. V. 44. N 5. P. 791-797.

119. Holland A., Findlay J., Clements J. Kallikrein gene expression in thegonadotrophin-stimulated rat ovary// J. Endocrinol. 2001. V. 170. P. 243250.

120. Holmbeck K., Bianco P., Caterina J., Yamada S., Kromer M., Kuznetsov S.A.,

121. Mankani M., Robey P.G., Poole A.R., Pidoux I., Ward J.M., BirkedalHansen H. MTl-MMP-deficient mice develop dwarfism, osteopenia, arthritis, and connective tissue disease due to inadequate collagen turnover// Cell. 1999. V. 99. N 1. P. 81-92.

122. Horner K., Livera G., Hinckley M., Trinh K., Storm D., Conti M. Rodentoocytes express an active adenylyl cyclase required for meiotic arrest// Dev. Biol. 2003. V. 258. P. 385-396.

123. Jalabert B. In vitro oocyte saturation and ovulation in rainbow trout (Salmogairdneri), northern pike (Ecox lucius), and goldfish (Carassius auratus) II Fish Res. Board Can. 1976. V.33. N 4. Pt 2. P. 974-988.

124. Jalabert B., Szollosi D. In vitro ovulation of trout oocytes: effect ofprostaglandin on smooth muscle-like cells of the theca// Prostagl., 1975,V. 9, P. 765-778.

125. Jo M., Curry T.E. Regulation of matrix metalloproteinase-19 messenger RNAexpression in the rat ovary// Biol. Reprod. 2004. V. 71. P. 1796-1806.

126. Jones R.E., Austin H.B., Summers C.H. Spontaneous, rhythmic contractions ofthe ovarian follicular wall of a lizard (Anolis carolinensis) \\ Gen. Comp. Endocrinol. 1984. V. 56. N 2. P. 252-257.

127. Kagawa H., Nagahama Y. In Vitro effects of prostaglandins on ovulation inooldfish, Carassius auratiisll Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish. 1981. V. 47. P. 1119-1121.

128. Kagawa H., Tanaka H.I., Unuma T. Role of prostaglandin in the control ofovulation in the japanese eel Anguilla japónica!7 Fish. Sci. 2003. V. 69. P.234-241.

129. Kam P.C.A., Fereh N.I. Apoptosis: mechanisms and clinical implications //

130. Anaesthes. 2000. V. 55. N. 11. P. 1081-1084.

131. Kerr J.F. A personal account of events leading to the definition of the apoptosisconcept//Results Probl.Cell Differ. 1999. V. 23. P. 1-10.

132. Kugu K., Ratts V.S., Piquette G.N., Tilly K.I., Tao X.J., Martimbeau S.,

133. Aberdeen G.W., Krajewski S., Reed J.C., Pepe G.J., Albrecht E.D., Tilly J.L. Analysis of apoptosis and expression of bcl-2 gene family members in the human and baboon ovary// Cell Death. Differ. 1998. V. 56. N 1. P. 6776.

134. Larsen J.Y., Schroeder P.C, Waldo F.E. Structure and function of the amphibianfollicular epithelium during ovulation // Cell Tissue Res. 1977. V. 181. N 4. P. 505-518.

135. Lee Y.S., Nakajima H., Chang Y.C. Park K.I., Mitsui Y., Magae J., Saida K.

136. Alleviation of apoptosis by serum in Chinese hamster ovary cells ectopically expressing human Fas antigen// Mol. Cells. 1998. V. 8. N 3. P. 272-279.

137. Leo C., Vitt U., Hsueh A. The ovarian kaleidoscope database: an online resource for the ovarian research community// Endocrinol. 2002. V. 141. P. 3052-3054.

138. Li C., Yang C.W., Ahn H.J. Kim W.Y., Park C.W., Park J.H., Lee M.J., Yang

139. J.H., Kim Y.S., Bang B.K. Colchicine decreases apoptotic cell death in chronic cyclosporine nephrotoxicity// J. Lab. Clin. Med. 2002. V. 139. N. 6. P.3 64-371.

140. Lim H., Paria B.C., Das S.K., Dinchuk J.E., Langenbach R., Trzaskos J.M., Dey

141. S.K. Multiple female reproductive failures in cyclooxygenase 2-deficient mice// Cell. 1997. V. 91. N 2. P. 197-208.

142. Liu L., Dai Y., Moor R.M. Role of secreted proteins and gonadotrophins inpromoting full maturation of porcine oocytes in vitro// Mol. Repr. . Develop. 1997. V. 47. P. 191-199.

143. Liu Z., Patino R. High-affinity binding of progesterone to the plasma membraneof Xenopus oocytes: characteristics of binding and hormonal and developmental control// Biol. Reprod. 1993. V. 49. P. 980-988.

144. Lutz L.B., Jamnongjit M., Yang W.H., Jahani D., Gill A., Hammes S.R.

145. Selective modulation of genomic and nongenomic androgen responses by androgen receptor ligands// Mol. Endocrinol. 2003. V. 17. P. 1106-1116.

146. Ma Z., Liu Z., Myers D.P., Terada L.S. Mechanotransduction and anoikis: deathand the homeless cell// Cell Cycle. 2008. V. 7. N 16. P. 2462-2465.

147. Mailer J.L., Krebs E.G. Regulation of oocyte maturation// Curr. Top Cell. Regul.1980. V. 16. P. 271-311.

148. Masui Y., Clarke H.J. Oocyte maturation// Int. Rev. Cytol. 1979. V.57. P. 185282.

149. Matousek M., Carati C., Gannon B., Mitsube K., Bronnstrum M. Changes inintrafollicular pressure in the rat ovary by nitric oxide and by alteration ofsystemic blood pressure// Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2001. V. 98. N l.P. 46-52.

150. Matzuk M.M., Burns K.H., Viveiros M.M., Eppig J.J. 2002 Intercellularcommunication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation// Science. 2002. V. 296. P. 2178-2180.

151. McGee E., Spears N., Minami S., Hsu S.Y., Chun S.Y., Billig H., Hsueh A.J.

152. Mehlmann L.M. Stops and starts in mammalian oocytes: recent advances inunderstanding the regulation of meiotic arrest and oocyte maturation// Reprod. 2005. V. 130. N 6. P. 791-799.

153. Mehlmann L.M., Jones T.L., Jaffe L.A. Meiotic arrest in the mouse folliclemaintained by a Gs protein in the oocyte// Science. 2002. V. 297. P. 13431345.

154. Mermillod P., Oussaid B., Cognie Y. Aspects of follicular and oocyte maturationthat affect the developmental potential of embryos// J. Reprod. Fert. Suppl. 1999. V. 54. P. 449-460.

155. Minge C.E., Ryan N.K., Van Der Hoek K.H., Robker R.L., Norman R.J.

156. Troglitazone regulates peroxisome proliferator-activated receptors and inducible nitric oxide synthase in murine ovarian macrophages// Biol. Reprod. 2006. V. 74. N 1. P. 153-160.

157. Morrill G.A., Schatz F., ICostellow A.B., Poupko J.M. 1977 Changes in cyclic

158. AMP levels in the amphibian ovarian follicle following progesterone induction of meiotic maturation. Effect of phosphodiesterase inhibitors and exogenous calcium on germinal vesicle breakdown// Different. 1977. V. 8. P. 97-104.

159. Motta P.M., Makabe S., Naguro T., Correr S. Oocyte follicle cells associationduring development of human ovarian follicle. A study by high resolution scanning and transmission electron microscopy// Arch. Histol. Cytol. 1994. V. 57. P. 369-394.

160. Motta P.M., Nottola S.A., Pereda J., Croxatto H.B., Familiari G. UltrastYructureof human cumulus oophorus: a transmission electron microscopic study on oviductal oocytes and fertilized eggs// Hum.' Reprod. 1995. V. 10.N 9. P. 2361-2367.

161. Murdoch M.J., Lund S.A. Prostaglandin-independent anovulatory mechanism ofindomethacin action: inhibition of tumor necrosis factor alpha induced sheep ovarian cell apoptosis // Biol Reprod. 1999. V.61. N. 6. P. 16551659.

162. Murdoch M.J., Peterson T.A., Van Kirk E.A., Vincent D.L., Inskeep E.K.1.teractive roles of progesterone, prostaglandins, and collagenase in the ovulatory mechanism of the ewe // Biol.Reprod. 1986. V.35 N. 5. P. 1187— 1194.

163. Murdoch W.J. Proteolytic and cellular death mechanisms in ovulatory ovarianrupture // Biol Signals Recept. 2000. V. 9. N 2. P. 102-114.

164. Murdoch W.J. Perturbation of sheep ovarian surface epithelial cells byovulation: evidence for roles of • progesterone and poly(ADP-ribose) polymerase in the restoration of DNA// J. Endocrinol. 1998. V. 156. N 3. P. 503-508.

165. Murdoch W.J., Van Kirk E.A. Steroid hormonal regulation of proliferative, p53tumor suppressor, and apoptotic responses of sheep ovarian surface epithelial cells//Mol. Cell Endocrinol. 2002. V. 186. N 1. P. 61-67.

166. Murdoch W.J., Wilken C., Young D.A. Sequence of apoptosis and inflammatorynecrosis within the formative ovulatory site of sheep follicles// J. Reprod. Fertil. 1999. V. 117. P. 325-329.

167. Nagahama Y., Adachi S. Identification of maturation-inducing steroid in ateleost, the amago salmon (Oncorhynchus rhodurus)!/ Dev. Biol. 1985. V.109. P. 428^435.

168. Neulen J., Yan Z., Raczek S., Weindel K., Keck C., Weich H.A., Marmu D.,

169. Ny A., Leonardsson G., Hagglund A.C., Huggluf P., Ploplis V.A., Carmeliet P.,

170. Ny T. Ovulation in plasminogen-deficient mice// Endocrin. 1999. V. 140. N 11. P. 5030-5035.

171. Ochsner S.A., Russell D.L., Day A.J., Breyer R.M., Richards J.S. Decreasedexpression of tumor necrosis factor-a-stimulated gene 6 in cumulus cells of the cyclooxygenase-2 and EP2 null mice// Endocrinol. 2003. V. 144. N 3. P. 1008-1019.

172. Ogiwara K., Takano N., Shinohara M., Murakami M., Takahashi T. Gelatinase

173. A and membrane-type matrix metalloproteinases 1 and 2 are responsible for follicle rupture during ovulation in the medaka// Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2005. V. 102. N 24. P. 8442-8447.

174. Osman P., Dullaart J. Intraovarian release of eggs in the rat after indomethacintreatment at proestrus// J. Reprod. Fértil. 1976. V. 47. P. 101-103.

175. Palotie A., Peltonen L., Foidart J.M., Rajaniemi H. Immunohistochemicallocalization of basement membrane components and interstitial collagen types in preovulatory rat ovarian follicles// Coll. Relat. Res. 1984. V. 4. N 4. P. 279-287.

176. Pankhurs N.W. Final maturation and ovulation of oocytes of the goldeye,

177. Hiodon alosoides (Rafinesqae) in vitro// Can. J. Zool. 1985. V. 63. P. 1003-1009.

178. Patiño R., Thomas P., Yoshizaki G. Ovarian follicle maturation and ovulation:an integrated perspective//U.S. Fish Physiol, and Bioch. 2003. V. 28. P. 1-4.

179. Peluso J J. Progesterone as a regulator of granulosa cell viability (review)// J.

180. Steroid Biochem. 2003. V. 85. N 2-5. P. 167-173.

181. Pendergrass P., Schroeder P.C. The ultrastructure of the thecal cell of the teleost,

182. Oryzias latipes, during ovulation in vitro// J. Reprod. Fert. 1976. V. 47. N 2. P. 229-233.

183. Pinter J., Thomas P. Characterization of a progestogen receptor in the ovary ofthe ovarian follicle by hormones//Biol. Reprod. 1972. V. 6. N 1. P. 67-77.

184. Pinter J., Thomas P. Induction of ovulation of mature oocytes by the maturationinducing steroid 17,20(3,2 l-trihydroxy-4-pregnen-3-one in the spotted seatrout// Gen. Comp. Endocrinol. 1999. V. 115. P. 200-209.

185. Razandi M., Oh P., Pedram A., Schnitzer J., Levin E.R. ERs associate with andregulate the production of caveolin: implications for signaling and cellular actions// Mol. Endocrinol. 2002. V. 16. P. 100-115.

186. Renaud F., Parisi E., Capasso A., de Prisco E.P. On the role of serotonin and 5methoxytryptamine in the regulation of cell division in sea urchin eggs//

187. Dev. Biol. 1983. V. 98. P. 37^17.

188. Robker R.L., Russell D.L., Espey L.L., Lydon J.P., O'Malley B.W., Richards

189. J.S. Progesterone-regulated genes in the ovulation process: ADAMTS-1 and cathepsin L proteases// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. N 9. P. 4689-4694.

190. Rodgers R.J., Irving-Rodgers H.F., Russell D.L. Extracellular matrix of thedeveloping ovarian follicle//Reprod. 2003. V. 126. P. 415^124.

191. Rugh R. Ovulation in the frog. I. Pituitary relations in induced ovulation// J.

192. Exp. Zool. 1935. Y. 71. P. 149-162.

193. Rugh R. Experimental embriology. Minneapolis,Burgess Publ. Co, 1962, 500p.

194. Ryan F.J., Grant R. The stimulus for maturation and for ovulation of the frog'segg//Physiol. Zool. 1940. V. 13. P. 383-390.

195. Saat T.V. Oocyte maturation and ovulation in carp in different in vitro media//

196. Uchen. Zap. Tart. Gos. Univ. 1988. N 805. P. 5-34.

197. Sadler S.E., Mailer J.L. Progesterone inhibits adenylate cyclase in Xenopusoocytes. Action on the guanine nucleotide regulatory protein// J. Biol. Chem. 1981. V. 256. P. 6368-6373.

198. Sadler S.E., Mailer J.L., Cooper D.M. Progesterone inhibition of Xenopusoocyte adenylate cyclase is not mediated via the Bordetella pertussis toxin substrate// Mol. Pharmacol. 1984. V. 26. P. 526-531.

199. Scliroeder P.C., Talbot P. Intrafollicular pressure decreases in hamsterpreovulatory follicles during smooth muscle cell contraction in vitroll J. Exp. Zool. 1982. V. 224. N 3. P.417-426.

200. Schroeder P.C., Talbot P. Ovulation in the animal kindom a review with aemphasis on the role of contractile processes// Gamete Res. 1985. V. 11. N2. P. 191-221.

201. Schuetz A.W. Induction of structural alterations in the preovulatory amphibianovarian follicle by hormones// Biol Reprod. 1972. V. 6. N 1. P. 67—77.

202. Schuetz A.W. Hormonal dissociation of ovulation and maturation of oocytes:

203. Ovulation of immature amphibian oocytes by prostaglandin // Gamete Res. 1986. V. 15. N2. P. 99-113.

204. Shaul P.W. Regulation of endothelial nitric oxide synthase: location, location,location// Annu. Rev. Physiol. 2002. V. 64. P. 749-774.

205. Sheng Y., Tiberi M., Booth R.A., Ma C., Liu X.J. Regulation oiXenopus oocytemeiosis arrest by G protein 13 gamma subunits// Curr. Biol. 2001. N 11. P. 405-416.

206. Shukovski L., Tsafriri A. The involvement of nitric oxide in the ovulatoryprocess in the rat// Endocrinol. 1994. V. 135. P. 2287-2290.

207. Simoncini T., Fornari L., Mannella P., Varone G., Caruso A., Liao J.K.,

208. Genazzani A.R. Novel non-transcriptional mechanisms for estrogen receptor signaling in the cardiovascular system. Interaction of estrogen receptor alpha with phosphatidylinositol 3-OH kinase// Steroids. 2002. V. 67. P.935-939.

209. Smith D.M., Tenney D.Y. Effects of steroids on mouse oocyte maturation invitro!/ J. Reprod. Fertil. 1980. V. 60. P. 331-338.

210. Smith L.D., Ecker R.E. The interaction of steroids with Rana pipiens oocytes inthe induction of maturation// Dev. Biol. 1971. V. 25. P. 232-247.

211. Smith L.D., Ecker R.E., Subtelny S. In vitro induction of physiologicalmaturation in Rana pipiens oocytes removed from their ovarian follicles// Dev. Biol. 1968. V. 17. P. 627-643.

212. Smith M.F., Gutierrez C.G., Ricke W.A., Armstrong D.G., Webb R. Productionof matrix metalloproteinases by cultured bovine theca and granulosa cells// Reprod. 2005. V. 129. N 1. P. 75-87.

213. Solovyeva E.V., Hayashi M., Margi K., Barkats C., Klein C., Amsterdam A.,

214. Hsueh A .J., Tsafriri A. Growth differentiation factor-9 stimulates rat theca-interstitial cell androgen biosynthesis// Biol. Reprod. 2000. V. 63. P. 1214— 1218.

215. Stacey N.E., Pandy S. Effects of indomethacin and prostaglandins on ovulationof goldfish//Prostagland. 1975. V. 9. P. 597-607.

216. Stickens D., Behonick D.J., Ortega N., Heyer B., Hartenstein B., Yu Y., Fosang

217. A.J., Schorpp-Kistner M., Angel P., Werb Z. Altered endochondral bone development in matrix metalloproteinase 13-deficient mice// Development. 2004. V. 131. N23. P. 5883-5895.

218. Stouffer R.L.,Duffy D.L. Luteinizing hormone acts directly at granulosa cells tostimulate periovulatory processes: modulation of luteinizing hormone effects by prostaglandins// Endocrin. 2003. V. 22. P. 249-256.

219. Suzuki H., Jeong B.S., Yang X. Dynamic changes of cumulus-oocyte cellcommunication during in vitro maturation of porcine oocytes// Biol. Reprod. 2000. V. 63. P. 723-729.

220. Tadakuma H., Okamura H., Kitaoka M., Iyama K., Usuku G. Association ofimmunolocalization of matrix metalloproteinase 1 with ovulation in hCG-treated rabbit ovary// J. Reprod. Fertil. 1993. V. 98. N 2. P. 503-508.

221. Tilly J.L., Kolesnick R.N. Sphingolipids, apoptosis, cancer treatments and theovary: investigating a crime against female fertility// Biochim. Biophys. Acta. 2004. V. 1585. N 2-3. P. 135-138.

222. Tsafriri A. Ovulation as a tissue remodelling process. Proteolysis and cumulusexpansion// Adv. Exp. Med. Biol. 1995. V. 377. P. 121-140.

223. Tsafriri A., Bicsak T.A., Cajander S.B., Ny T., Hsueh A.J. Suppression ofovulation rate by antibodies to tissue-type plasminogen activator and a 2-antiplasmin// Endocrinol. 1989. V. 124. N 1. P. 415-421.

224. Van Nassauw L., Sys S.U., Harrisson F., Callebaut M. In vitro study of thecontractility of the wall of the preovulatory follicle in the Japanese quail II Biol. Reprod. 1993. V. 49. N 2. P. 359-364.

225. Wang J., Liu X.J. A G protein-coupled receptor kinase induces Xenopus oocytematuration//J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 15809-15814.

226. Wilson C.L., Heppner K.J., Labosky P.A., Hogan B.L., Matrisian L.M. Intestinaltumorigenesis is suppressed in mice lacking the metalloproteinase matrilysin// Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1997. V. 94. N 4. P. 1402-1407.

227. Wright P.A. Factors affecting in vitro ovulation in the frogII J. Exp. Zool. 1945.1. V. 100. P. 570-575.

228. Wright P.A. The influence of colchicine on ovulation in vitro in the frog, Ranapipiens II Gen. Comp. Endocrinol. 1962. V.8. N.2. P.389-394.

229. Wu J., Zhang L., Li T. The effect of sex steroids on human ovarian granulosacell apoptosis// Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 1998. V. 33. N 3. P. 157159.

230. Wu R., Van der Hoek K.H., Ryan N.K., Norman R.J., Robker R.L. Macro-phagecontributions to ovarian function// Hum. Reprod. Update. 2004. V. 10. N 2. P.119-133.

231. Yang W.H., Lutz L.B., Hammes S.R. Xenopus laevis ovarian CYP17 is a highlypotent enzyme expressed exclusively in oocytes. Evidence that oocytes play a critical role in Xenopus ovarian androgen production// J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 9552-9559.

232. Yaron Z. Observations on the granulosa cells of Acanthobrama terracsanctaeand Tilapia nilotica (Teleostei)// Gen. Comp. Endoer. 1971. V. 17. N 2. P. 247-252.

233. York W.S., Patino R., Thomas P. Ultrastractural changes in follicle cell-oocyteassociations during development and maturation of the follicle in Atlanticcroaker//Gen. Comp. Endocrinol. 1993. V. 92. P. 402-418.

234. Yoshida H., Takakura N., Kataoka H., Kunisada T., Okamura H., Nishikawa S.I.

235. Stepwise requirement of c-kit tyrosine kinase in mouse ovarian follicle development// Devel. Biol. 1997. V. 184. P. 122-137.

236. Yu Y.S., Sui H.S., Han Z.B., Li W., Luo M.J., Tan J.H. Apoptosis in granulosacells during follicular atresia: relationship with steroids and insulin-like growth factors// Cell Res. 2004. V. 14. N 4. P. 341-346.

237. Zhu Y., Bond J., Thomas P. Identification, classification, and partial characterization of genes in humans and other vertebrates homologous to a fish membrane progestin receptor// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003a. V. 100. P. 2237-2242.

Информация о работе

Трубникова, Оксана Борисовна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.03.05

Диссертация

Механизмы дезинтеграции овариального фолликула в оогенезе низших позвоночных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы