Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клинико-экспериментальная и биофармацевтическая оценка эффективности наружного применения мебетизола в комплексной терапии микозов стоп

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Клинико-экспериментальная и биофармацевтическая оценка эффективности наружного применения мебетизола в комплексной терапии микозов стоп"

^ #

На правах рукописи

ВОЛЬПОВ ВАДИМ ЕВГЕНЬЕВИЧ КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ МЕБЕТИЗОЛА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ МИКОЗОВ СТОП

03.00.24- микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

На правах рукописи

ВОЛЬПОВ ВАДИМ ЕВГЕНЬЕВИЧ КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКЛЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ МЕБЕТНЗОЛА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ МИКОЗОВ СТОП

03.00.24 - микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена на кафедре кожных и венерических болезней Днепропетровской государственной медицинской академии, кафедре технологии лекарств Запорожского государственного медицинского университета и на базе Днепропетровского городского кожно-венерологического диспансера.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.П. Федотов Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, профессор В.А. Головкин Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук Антонов Виталий Борисович Доктор биологических наук Конев Юрий Ефимович

Ведущее учреждение: Санкт-Петербургская государственная

медицинская академия им. И.И.Мечникова.

Защита состоится «_8_»_мая_1998г. в _13_ часов на

заседании Специализированного совета Д 074.16.04 при Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования ( 193015, г. Санкт-Петербург, ул. Салтыкова-Щедрина, д.41).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан

1998г.

Ученый секретарь совета Кандидат медицинских наук

А.В.Соболев.

Актуальность проблемы.

По мнению большинства исследователей около 20% населения земного шара страдает грибковыми заболеваниями как кожи, так и других органов (В.М. Рукавишникова, 1989; Г.Н. Михеев, 1991; I. Buxton, 1988). В тоже время микоз стоп является доминирующей инфекцией и составляет 78-92% среди всех грибковых заболеваний. Возбудителем заболевания в основном является T.rubnim и значительно реже - Т, Mentagrophytes interdigitale (Г.М. Новикова, В.Г. Сыркина, 1976; П.Н.Кашюш, В.В. Лисин, 1983; Л.Н. Ковалева, Н.В. Ксшик, 1994). Широкая распространенность микоза стоп, несмотря на многочисленные исследования, объясняется недостаточно изученными вопросами эпидемиологии, механизма развития, терапии и профилактики этой инфекции ( Н.Д. Шеклаков, В.М. Рукавишникова, 1971; Г.И. Суколин с соавт., 1991; Ю.А.Петрук с соавт., 1995 ). Одним га ведущих факторов механизма развития микозов стоп являются нарушения иммунного статуса. Несмотря на обилие работ но этой тематике, многие стороны изменений реакций иммунитета остаются не изученными, поскольку не до конца выяснен характер ответных реакций организма на антигенное воздействие возбудителей с участием различных иммуннокомпетентных органов и клеток (В.П. Федотов, 1980; А.Д. Юцковский, 1985; А.Б. Сулейманова, 1996; J. Корнмейн, С. Асгар, 1983 ).

До настоящего времени нет еще законченной концепции высокоэффективной комплексной терапии, направленной как на устранение этиотропного фактора, так и нормализацию нарушенных функций организма. Из этиотропных препаратов общего действия широко применяют гризеофульвин, низорал, ламизил и другие средства. Однако, эти препараты в основном импортные, дорогостоящие, нередко гепатотоксичные, лечение продолжительное, нередки рецидивы ( Н.Д. Шеклаков, В.М. Лещенко, 1979; D. Wheatleyetall., 1988). Определенное место в лечении микоза стоп занимают наружные средства. Однако эти препараты в основном зарубежного производства, мало доступны для нашего населения, не всегда

достаточно эффективны, обладают раздражающим действием (И.М. Корсунская с соавт., 1988; Ж.В. Степанова с соавг., 1996). По этому разработка антимикотических средств для наружного применения отечественного производства является весьма перспективным направлением и экономически выгодным, и после внедрения в практическое здравоохранение позволит расширить арсенал фармакологических средств в терапии микоза стоп.

Все это и послужило предпосылкой для проведения данного клинико-экспериментального исследования.

Цель исследования.

Разработать показания, методику и дать оценку комплексной терапии больных микозом стоп с использованием иммуномодуляторов, а также наружно мази мебетизоловой, предварительно изучив ее биофармацевтические, фунгицидные и токсические свойства в условиях микробиологического эксперимента у животных, зараженных грибной инфекцией.

В соответствии с целью, были поставлены следующие задачи :

1.У больных микозом стоп в зависимости от клинических особенностей, течения и длительности инфекции в динамике наблюдения изучить активность неспецифических факторов защиты, состояния Ти В. звеньев иммунитета, обратив особое внимание на роль нейгрофилов в формировании инфекционного процесса.

2. Основываясь на сопоставительном анализе клинических особенностей и течения микоза стоп, длительности инфекции, наличия сопутствующей патологии, состояния иммунного статуса, неспецифических факторов защиты распределить изученных больных в патогенетически обоснованные клинико-терапевтические группы.

3. Основываясь на данных биофармацевтических исследований, результатов микробиологического эксперимента и изучения

фармакокинетики препарата дать оценку антифунгалышх и проникающих свойств мебетизола, разработать его оптимальную ингибирующую концентрацию с целью разработки технологии изготовления мази мебетизоловой.

4. Определить биофармацевтические и фунгицидные свойства мази мебетизоловой, а также на основании клинических , микроскопических., микологических, гистоморфологических данных, дать оценку ее эффективности в лечении экспериментальго микоза у животных, выяснив при этом возможность ее токсического, раздражающего и сенсибилизирующего влияния на организм.

5. Разработать методику и дифференцированные показания комплексной терапии больных микозом стол с использованием иммунномодуляторов и наружно мази мебетизоловой с последующей кликико-лабораторной оценкой ближайших и отдаленных результатов лечения, предложить рациональную профилактику.

Научная новизна.

При комплексном изучении иммунного статуса, во взаимосвязи с активностью неспецифических факторов защиты, состоянием Т-и В- звеньев иммунитета, дана оценка функциональной активноста макрофагов при грибковой инфекции стоп.

Впервые больные с микозом стоп объединены в клинико-терапевтические группы, что позволило разработать и научно обосновать дифференцированные показания и методику комплексной терапии с использованием нммуномодуляторов и наружно мази мебетизоловой.

Впервые для наружного лечения микоза стоп предложен мебетизол в виде мази, предварительно изучены его физико-химические, фармацевтические и микробиологические характеристики, определены его фунгицидные свойства, предложен состав и технология изготовления ебетизоловой мази 5%.

Разработана оригинальная модифицированная методика инфицирования животных красным трихофитоном и показана высокая эффективность мебетизоловой мази 5% в терапии экспериментального микоза.

В процессе комплексного лечения больных микозом стол с использованием иммуномодуляторов и наружно мебетизоловой мази 5% дана клшшко-лабораторная оценка эффективности его, не установлены токсические и аллергизируквдие свойства препарата.

Практическая ценность работы

Практическому здравоохранению предложены дифференцированные показания и методика комплексного лечения больных микозом стоп с использованием этиотропных средств, иммунномодуляторов и наружно мебетизоловой мази 5%.

Врачам дермато-венерологам предложен рациональный доступный способ определения принадлежности больного микозом стоп к той или иной клинико-терапевтической группе.

Для широкого применения и внедрения в практическое здравоохранение разработана и рекомендуется в качестве нового антимикогаческого средства мебетизоловая мазь 5%, которая эффективна в наружной терапии больных микозом стоп.

Внедрение в практику

Мазь мебетизоловая 5 %, утверждена фармакологическим комитетом СССР для медицинского применения у взрослых в качестве противогрибкового средства для лечения микозов стоп от 13.02.91, протокол№1.

Препарат «Мазь мебетизоловая 5%» разрешен Фармакологическим комитетом Украины к медицинскому применению и промышленному выпуску. На препарат и его субстанцию- мебетизол утверждены временные

форм акопешше статьи (ВФС 42У-87-94 и ВФС 42У-86-94, соответственно).Разработан технологический регламент на мазь мебетизоловую 5%, экспериментальный выпуск которой осуществлен на ОАО «Лубныфарм».

МЗ Украины и НПО «Укрфармация» утверждены и изданы методические рекомендации «Лекарственные формы для лечения дерматофитий и кандидоза, приготовленные в условиях аптеки. Киев, 1993, стр.9».

Издан и разослан во все дерматовенерологические диспансеры Украины информационный лист «5% мебетизоловая мазь в комплексной терапии больных микозом стоп», утверждено Ученым Советом ДГМА, 27 ноября 1997 г., ПротоколЖХШ.

Материалы диссертации внедрены в практику работы дерматовенерологических учреждений Ставропольского края, Днепропетровской, Тернопольской, Хмельницкой и Кировоградской областей и используются в процессе преподавания на кафедрах кожных и венерических болезней Днепропетровской и Ивано-Франковской государственных медицинских академиях, Луганского, Одесского и Донецкого государственных медицинских университетов.

Основные положения выносимые па защиту.

1-Мебетизол обладает выраженной фунгицидной активностью в отношении Trichophiton mentagrophytes, Candida albicans .Microsporum canis.

2.Препарат лишен токсичности и сенсибилизирующего действия, проникает в глубокие слои дермы и в кровь, сохраняя в течение 5-7 часов фунпщидную концентрацию про одноразовом введении.

3.Установлена эффективность мази мебетизоловой %5 в терапии экспериментального микоза.

4. Для успешной терапии больных микозом, обусловленным Tr. rubrum, пациенты подлежат делению на две клинико-терапевтические группы, основываясь на возрасте, наличии сопутствующих и перенесенных заболеваний, клинических проявлениях, течении микоза, состоянии иммунного статуса, с дифференцированным использованием иммуномодуляторов и наружно мебетизоловой мази 5%.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации изложены и обсуждены на: С Первом конгрессе дерматовенерологов Казахстана (г.Алма-аты) в 1997 году;

Е2 Научно-практической конференции (г.Владивосток) в 1997 году; ö Обласной научно-практической конференции в г. Харькове в 1997 году; ö Обласной научно-практической конференции в г. Запорожье в 1997 году; В Обласной научно-практической конференции в г. Днепропетровске в 1996 и в 1997 годах.

В На научно-практической конференции в г. Хмельницкий в 1996 году. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Работа изложена на .137 страницах машинописного текста, в том числе .119 страниц авторского текста, содержит .20. таблиц,4 рисунка, 2 выписки из истории болезни. Библиографический указатель включает .223 названия работ на русском языке и 56 на. иностранном.

Основная часть работы выполнена лично при методической помощи кафедры кожных и венерических болезней Днепропетровской

государственной медицинской академии и кафедры технологии лекарств Запорожского государственного медицинского университета.

Содержание работы.

Методика работы заключалась в определении специфической активности мебетнзоловой мази 5% на модели экспериментальной руброфитии у морских свинок; изучении высвобождения мебетизола из мазей методом равновесного диализа; острой и хронической токсичности препарата с определением функции центральной нервной, дыхательной, сердечно-сосудистой и мочеполовой систем, измерением температуры тела, производили исследования гематологических, биохимических показателей, патогистологические параметры различных органов животных. Об общем состоянии организма больных судили на основании общеклинических исследований, данных анамнеза. Тщательно описывали клинические проявления микоза, производили микроскопические и микологические исследования по общепринятым методикам. У всех больных микозом до и после лечения определяли количество Е-РОК , ЕАС-РОК , Ло , а также РОК, !\тс-РОК , N0 , число Тн и Тя , соотношение их, проводили поставку РБТЛ с ФГА, подсчет числа плазмоцитов, уровень ^ в , IgM и IgA, ЦИК, показатели ФАЛ и титра комплемента, «кожного окна». В заключение у каждого конкретного больного проводили сопоставительный анализ всех изученных параметров и объединяли их в клинико-терапевтические группы. Дифференцированное лечение проводили комплексно, как по общепринятым методам , так и назначали предложенную нами корригирующую терапию с наружным применением мебетизоловой мази 5% .Осуществлялась диспансеризация больных. Все материалы подвергали обработке методом вариационной статистики.

Под наблюдением находилось 150 больных микозом, обусловленным красным трихофитоном (МОКТ) (94 - опытной подгруппы и 56 - подгруппы сравнения). Ограниченный микоз стоп установлен у 26 больных, микоз кистей и стоп у - 64, кистей, стоп и крупных кожных складок у - 35, генерализованный - у 25. Мужчин было 95, женщин - 55 в возрасте преимущественно 25-55 лет, с длительностью инфекции от 0,5 до 20 лет и более. Диагноз во всех случаях подтвержден обнаружением элементов гриба при микроскопических исследованиях, а также получением культуры T.rubrum . Развитие заболевания большинство больных связывало с посещением бассейна, душевых, бани, использования чужих носков, чулок, обуви, нарушением целостности кожи из-за нерациональной обуви, повышенной потливостью стоп, пользованием общими мочалками, полотенцами, тазиками. В социальном составе заболевших преобладали рабочие и колхозники. Сопутствующие заболевания выявлены у 82 больных, преимущественно с распространенными и генерализованными формами микоза в возрасте старше 45 лет. Наиболее часто обнаруживали гнойно-вослалительные процессы, болезни желудочно-кишечного тракта, дыхательной и сердечно-сосудистой систем, эндокринные заболевания. Перенесенные патологические процессы установлены у большинства исследованных, главным образом инфекционные заболевания, преимущественно у пациентов с распространенным и генерализованным микозом.

Ревматизм, туберкулез зарегистрированы только у 6 из 150 исследованных. При изучении гемограммы ускоренная РОЭ отмечена у 8,2% наблюдаемых, лейкоцитоз - у 12%, эозинофилия - у 5,8%, .При исследовании мочи обнаружены эритроциты у 8% больных, следы белка - у 5%, что также было обусловлено сопутствующей патологией. Клинически заболевание характеризовалось появлением на коже ладоней, подошв сквамозно-гнперкератотических очагов с явлениями шелушения. В области паховых и межягодичных складок, на коже бедер, ягодиц, мошонки, шеи, лица и

туловища отмечались эритематозно-шелушащиеся очаги с периферическим валиком, гиперпигментацией и шелушеиием в центре поражения. Микроскопически грибы обнаруживали в виде мицелия и артроспор в чешуйках кожи, в пушковом волосе, микологически - получали типичные колонии с характерным пигментом.

Основываясь на данных микробиологических исследований о хорошей антимикробной активности мебетизола, подробно изучены физико-химические и биофармацевтические особенности мебетизола. Выпускаемый отечественной промышленностью 2-меркаптобензтиазол является химически чистым и относится к высоко гидрофобным веществам и его использование возможно при разработке мягких лекарственных форм.

Для успешного лечения грибковых заболеваний необходимо, чтобы мебетизол имел низкий процент связывания с белками крови. Для данного препарата этот показатель составил 3,88 ± 0,38%, что значительно ниже показателя для гризеофульвина. При этом уровень концентрации мебетизола во вводимом растворе не оказывает существенного влияния на процесс связывания с белками крови. Результаты этих исследований послужили основанием для разработки методики количественного определения мебетизола в крови. Открываемый минимум метода количественного определения мебетизола в сыворотке крови был 0,01 мкг/мл.

При изучении свойств препарата in vitro установлено, что он имеет высокую и достаточно широкую фунгицидную и бактериостатическую активность. Антимикробная активность устанавливалась по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК), выраженной в мкг/мл, полученным при воздействии данного вещества на колонии микроорганизмов на среде Сабуро. МИК мебетизола при воздействии на группу бактерий оказалась 6,25 мкг/мл, при воздействии на группу хрибов она была выше. Microsporum canis - 257 и Trichoph. mentagrophytes 1 и 1 114783 составила 31,2 мкг/мл; Candida albicans 544 - 7,78 мкг/мл.

В результате проведенных исследований, подобраны различные гидрофильно-липофильные основы, обеспечивающие легкую смываемость, не вызывающих сенсибилизации организма и токсических реакций. Мебетизол вводился во все основы после предварительного растворения в полиэтиленоксиде - 400. Было разработано девять композиций мази. Все полученные мазевые композиции с мебетизолом получены в одинаковых условиях по качеству и формам соответствовали требованиям ГФ СССР XI, вып.2, с. 145. У всех образцов мазей устанавливали динамику высвобождения мебетизола. Наиболее эффективная по качеству и способности высвобождения вещества оказалась пропись мази №1 следующего состава: мебетизол - 5,0; полиэтиленоксид 400-15,0; натрий карбоксиметилцеллюлоза -5,0; глицерин - 5,0; вода дистиллированная - до 100,0.

Изучение реологических свойств этой мази и ее носителя показали хорошую токсотропную систему соответствующую требованиям, предъявляемым к высоко устойчивым мазевый композициям.

Проведены исследования стабильности 5% мебетизоловой мази в тубах (пропись №1) путем количественного содержания действующего вещества в процессе хранения до двух лет, определяли также антимикотическую активность образцов мази с различными сроками хранения. Результаты исследования показали, что основные качества мебетизоловой мази в тубах не изменяются при хранении ее в течение 24 месяцев при температуре +5 ± 3 °С и +20 ± 5 °С. Количественное содержание в мази действующего вещества, мебетизола, и ее антимикотическая активность не изменяется при хранении до двух лет.

При изучении кинетики поступления мебетизола в кровь после накожной апликации установлено, что мебетизол находящийся в составе мази, легко высвобождается из композиции мазевого соединения и в незначительных количествах определяется в сыворотке крови. Это

подтверждает факт проникновения мебетизола после аппликаций не только в поверхностные, но и в глубокие слои дермы.

Нами изучена сравнительная антимикотическая активность 5% мебетизоловой мази, а также мазей отечественного производства «Ундецин», «Цинкундан» и левориновой, Чехии - «Микозолон», «Микосептшг», Венгрии - 2% низораловая и Польши - крема клотримазолового. Определялась их активность по отношению штаммов грибов Candida albicans, Trich mentagrophytes, M. canis методом диффузии в агар (метод двухслойных агаровых пластинок или метод «колодцев»). Оказалось, что фунгицидная активность 5% мебетизоловой мази in vitro была выше указанных образцов отечественных и зарубежных наружных антимикотгасов.

Специфическую противогрибковую активность мебетизола в виде 5% мази изучали на модели экспериментального МОКТ у 36 морских свинок обоего пола, массой 600-800 г. Заражение животных производили по модифицированной нами методике с травматизацией кожи животных и последующим смазыванием этих участков кожи животных раствором ДНХБ и трехкратным нанесением под целлофан индикаторного штамма красного трихофитона. На 16-й день формировался характерный очаг поражения микоза, из которого обнаруживали мицелий гриба. Лечение начинали на 22-й день применением двукратного втирания мази мебетизоловой 5%, а в контрольной группе - смазыванием 2% раствором йода и втирания 33% серной мази. Регресс клинических проявлений в опытной группе наступал в среднем на 19,6 ± 7,3 день, а в контрольной 21,4 ± 2,37 день; исчезновение свечения под лампой Вуда - на 14,0 ± 2,4 день и на 20,2 ± 2,3 день, элиминация грибов зарегистрирована на 20,0 ± 3,0 день и на 33,3 ± 7,4 день. Осложнения в виде возбуждения и зуда, дерматита отмечены у 3 из 16 животных контрольной группы, рецидивы - у 2 этой же группы. Как видно из представленных показателей, более благоприятные, результаты лечения отмечены в опытной группе, состоящей из 20 животных, что было статистически достоверно (р<0,05). Общие анализы крови, исследования

мочи, р - липопротеидов, холестерина, тимоловой и сулемовой проб, белковых фракций крови и общего белка у исследованных животных до, в процессе и после лечения были аналогичными в опытной и контрольной группа,и не отличались от нормальных показателей. Также не претерпевала существенных сдвигов ЭКГ в I - III стандартных отведениях как в опытной, так и в контрольной группе животных. После завершения эксперимента производилось паталогоанатомическое вскрытие животных обеих групп. Макро - и - микроскопические изменения кожи отмечены у 3 больных контрольной группы, что было расценено как проявление контактного дерматита. В целом во всех органах и системах макроскопических и гистологических изменений не выявлено как в опытной, так и в контрольной группах морских свинок.

Иммунный статус изучен у всех 150 больных МОКТ. Анализ гематологических показателей выявил рост абсолютного числа лимфоцитов у больных микозом (2,7 ± 0,2х109 л ), в отличие от контрольной группы (2,05 ± 0,29 х109/я ), уменьшение абсолютного числа нейтрофилов (2,3 ± 0,12 против 3,36 ± 0,32 х !0"'л в контроле). Все различия оказались статистичечки значимы (р< 0,0052 изменения других форменных элементов крови были статистически не достоверны (р>0,1).

Лимфоцитарный индекс по Шагану (лимфоциты к нейтрофилам) у больных микозом составил 1,17 (а в контроле - 0,61). Лимфоцитарно-моноцитарный индекс составил, соответственно,8,4 и 6,5.

При изучении неспецифических факторов защиты отмечено статистически значимое (р<0,05) снижение ФЧ у больных микозом стоп (56,4 ± 2,4% против 86,2 ± 11,4% в контрольной группе) и рост уровня ЦИК (76,8 ± 4,8 ед. опт. плот, против 41,5 ± 5,2 ед. опт. плот., при р<0,01). ФИ и титр комплемента также были снижены у больных микозом стоп, однако было статистически не значимо (р>0,1), отмечено статистически достоверное (р<0,05) снижение числа относительного до 19,1 ± 1,6% и абсолютного (р<0,01) до 0,72 ± 0,48 х 109"1 спонтанных розеткообразующих нейтрофилов

в отличие от контрольных лиц (29,4 + 4,2% и 1,13 + 0,16 х 10 л). Одновременно наблюдалось статистически значимое (р<0,05) снижение у больных микозом стоп цитохимического показателя в НСТ - тесте до 1,44 ± 0,05% (против 2,1 ± 0,18% в контроле). Отмечена более интенсивная статистически значимая (р<0,05) миграция макрофагов в «кожное окно» у больных микозом стоп, на физиологический раствор ( 4,6 ± 0,22% против 3,5 ± 0,5% в контроле и торможение - на ФГА (8,19 ± 1,2% против 8,29 + 1,19% в контроле). В связи с чем индекс миграции у больных микозом оказался 1,7 (2,5 - в контрольной группе, при (р<0,05).

Следует отметить, что наиболее выраженное угнетение неспецифических факторов защиты отмечено у исследованных больных старше 45 лет, при длительности инфекции более 1 года и у пациентов с генерализованным микозом, с сопутствующей патологией внутренних органов.

У больных микозом стоп установлено статистически значимое (р<0,01) снижения относительного (35,6±2,2% против 58,3±9,88% в контроле) и абсолютного (0,78±0,1x109л против 1,3+0,21х109/л в контроле) числа Т-лимфоцитов (Е-РОК). Обращала на себя внимание, что наиболее низкие уровни Е-РОК зарегистрированы у больных микозом с высоким уровнем ЦИК при низких показателях числа нейтрофилов в крови. Наиболее выраженные изменения уровня Е-РОК отмечены у больных микозом стоп в возрасте старше 45 лет, болеющих более одного года, а также у пациентов с генерализированной формой микоза с сопутствующей патологией.

Функциональная активность пула Т-лимфоцитов в РБТЛ , стимулированной ФГА, была также статистически достоверно (р<0,001) сниженной у больных микозом стоп (24,8± 1,98%), в сравнении с контрольной группе (59,2±8,9%).

При изучении субпопуляции Т-лимфоцитов у больных микозом стоп отмечено статистически значимое (р<0,01) снижение абсолютного количества Тн (0,16±0,003х109 л ). В тоже время у исследованных больных

статистически достоверно (р<0,05) увеличивалось число Те (0,21±0,03х109/л), в сравнении с контролем (0,16±0,02х109/л ). Обращает на себя внимание снижение индекса соотношения Тн:Тз у больных микозом стоп до 0,8 (в контроле - 1,8), что было статистически достоверно (р<0,01).Статистически значимо(р<0,01) у больных микозом стоп было увеличено до 1,3±0,1х109/л количество Ло ( в контроле - 0,58±0,06х109л ). Все эти показатели клеточного иммунитета были более измененные у больных распространенным микозом , который существовал 2 года и более, а также у пациентов старше 45 лет, с перенесенными заболеваниями внутренних органов.

При анализе гуморальных иммунологических реакций обращало на себя внимание статистически достоверное (р<0,01) увеличение в сравнении с контролем уровня М (1,98±0,12г/л против ],1±0,18 г/л). Изменение , А, а также ЕАС - РОК (В -лимфоцитов) было статистически не достоверно (р>0.1). Изменение уровня % М было главным образом при генерализованном микозе и у лиц старше 45 лет ,при наличии большого числа сопутствующих и перенесенных заболеваний, особенно инфекционных, эндокринных и ЖКТ.

Проведенный сопоставительный анализ у каждого конкретного больного микозом сопутствующих и перенесенных заболеваний клинических особенностей и течения дарматоза, состояния иммунного статуса позволил объединить их в две клинико-терапевтические группы. Первая включала 70 больных (44-опытной подгруппы., а 26 - подгруппы сравнения) распространенным и генерализованным микозом в возрасте 45 лет и более с длительностью инфекции 1-2 года и более. В анамнезе у этих пациентов выявлены различные инфекционные процессы, а из сопутствующих - эндокринные, болезни дыхательной системы и ЖКТ. В иммунном статусе у них отмечено снижение нейтрофилов, № - РОК, Е-РОК, Тн, индекса Тн: Те за счет роста числа Те, увеличения Ло плазмоцитов, 1ц М, угнетение ФЧ, РБТ с ФГА, индекса миграции макрофагов в «кожное окно».

Во второй юшнико-терапевтичесхой группе оказалось 80 больных (50 -опытной подгруппы и 30 - подгруппы сравнения) микозом стоп или стоп и кистей в возрасте до 45 лет, с длительностью инфекции до 1 года. В иммунном статусе обнаружено лишь незначительное угнетение ФЧ и НСТ теста, увеличение уровня ЦИК , несущественное снижение №-РОК, Е-РОК и нейтрофилов.

Больные микозом стоп (опытной и контрольной подгрупп) получали по показаниям этиотропные препараты: гризеофульвин или низорал, а также витамины Вц , Вь аскорбиновую кислоту, лирогенал, метилурацил в традициошсых дозировках.

Больным первой клинико-тералевтической группы опытной подгруппы дополнительно назначили рузам подкожно по 0,2 мл 1 раз в 5-7 дней, 10 инъекций и бемитил по 0,5г 2 раз в сутки. Также рекомендовали оротат калия по 0,5г дважды в день или аевит по 1 капе. Трижды в день, 20-30 дней.

Больным второй клинико-терапевтической группы опытной подгруппы назначали дополнительно внутримышечные инъекции 2,5% раствора тиотриазолина по 0,2 мл ежедневно, на курс 10-15 инъекций, 25 дней. Также больным рекомендовали нуклеинат натрия по 0,5 трижды в день, 20 дней или пентоксил по 0,2 трижды в день, 20 дней.

Все больные опытной подгруппы обеих клинико-терапевтических групп получали наружно втирание 2 раза в сутки мази мебетизоловой 5% в течении 15-26 дней, контрольной по - аналогичной методике втирания клотримазоловой мази или миконазола.

Ближайшие результаты лечения оценены нами у всех 150 больных микозом. Средняя длительность пребывания на стационарном лечении больных с ограниченным микозом составила 21,4± 1,6 койко-дня и продолжалось от 14 до 30 дней, распространенным и генерализованным -24,6±1,6 койко-дней и была от 17 до 44 дней. В тоже время при лечении традиционными методами, соответственно, - 26.4±1,6 и 30,1+2,2 койко-дня. Терапия способствовала регрессированию клинических проявлений: на 4-й -

6-й день устранялись эритема и уменьшалось шелушение, на 7-й - 8-й день -очаги отчищались от чешуек и корок, на 13-й 14-й день - восстанавливался нормальный цвет и рисунок кожи., что было на 4-5 дней быстрее чем в подгрупппе сравнения, леченных традиционно. Элиминация грибов наступила на 16-17 дни лечения.

Переносимость комплексной терапии была удовлетворительной, осложнений не установлено.

Иммунномодулирующая терапия, с применением наружно мази мебетизоловой 5%, наряду с регрессом клинических проявлений и элиминацией грибов, способствовала нормализации иммунного статуса и повышению защитных сил организма в борьбе с инфекцией.

К концу лечения у 44-х больных первой клинико-терапевтической группы опытной подгруппы , получавших предложенные нами иммуннокорректоры, в отличие от 26-ти больных подгруппы сравнения., принимавших только традиционную терапию, отмечено увеличение числа №-РОК до 0,99±0,15х109/л , снижение уровня ЦИК до 47,6±7,1 ед. опт. плот., в концентрации ^ М до 1,36±0,18 г/л, рост числа Е-РОК до 1,6±0,24х 109/л,Тн до 0,28±0,042х109/л, снижение уровня 'Гэ до 0,18±0,03x109'1 . Также возрастала активность РБТ на ФГА до 42,415,62%, НСТ - теста 1,97 до 1,97±0,28%,индекс Тн:Т$ - до 1,5. (до лечения он был 0,8, в подгруппе сравнения - 1,0). Также положительно изменялась разница в индексе миграции макрофагов в «кожное окно» на ФГА. Если до лечения она составила 0,2, то после предложенной нами терапии - 0,8 , а при традиционной - 0,4 (в контрольной группе - 0,9). Следует отметить, что положительные сдвиги указанных показателей, в основном не достигали уровня у лиц контрольной группы. Остальные показатели иммунного статуса также имели тенденцию к положительным сдвигам после лечения, особенно в опытной подгруппе, однако, они были статистически не достоверными,

У 50 больных второй клинико-терапевтической группы, опытной подгруппы после лечения, в отличие от 30 пациентов с микозом, леченным традиционными методами ( подгруппа сравнения) отмечено увеличение ФЧ до 88,2± 12.4%, Ив - РОК - до 1,2±0,17х109/л и уменьшения ЦИК - до 42,1±6,1 ед. опт. плотн., что было статистически значимо (р < 0,01). Если число ЕАС-РОК статистически достоверно не изменилось (р > 0,1), то количество Е-РОК к концу лечения составило 1,23±0,03х109л (р < 0,01). Также в этой группе отмечена положительная динамика показателей НСТ -теста, индекса миграции макрофагов на ФГА, субпопуляций Т-лимфоцитов и иммуннорегуляторного индекса, однако они были статистически не значимы (р>0,1).

Приведены две выписки из историй болезни больных микозом стоп.

Из 94 больных опытной подгруппы клиническое выздоровление наступило у 85, значительное улучшение - у 6 и улучшение - у 3, и у 56 больных подгруппы сравнения, соответственно, - у 36, 9,6 и без результатов - у 5 ,т.е. благоприятный результат лечения получен, соответственно - у 96% и 80%.

Отдаленные результаты лечения в сроки от 1 до 3 лет изучены у 138 больных, рецидивы зарегистрированы у 3,2% больных микозом опытной подгруппы и у 13% - подгруппы сравнения.

Больные в процессе диспансеризации являлись 1-2 раза в месяц на осмотр и коррекцию терапии. Больные амбулаторно проводили лечение очагов хронической инфекции и наружно использовали профилактические средства в течение 1,5 - 2-х месяцев. При отсутствии клинических проявлений и неоднократно отрицательных исследованиях на грибы и соответствующей дезинфекции эти лица переводились на диспансерное наблюдение.

В процессе диспансерного наблюдения проводили исследования общего анализа крови и мочи, наблюдали за общим состоянием и кожей переболевших, трудоустраивали их при соответствующих санитарно-

профилактических мероприятиях. Больньм рекомендовали физические упражнения, водные процедуры, массаж, физиопроцедуры, правильное чередование труда и отдыха. Больным рекомендовали устранить сопутствующие заболевания, особенно нарушающие гемодинамику в области нижних конечностей. Переболевшим разъяснялись правила профилактики при посещении душевых, бань, бассейнов. Выявляли и устраняли неблагоприятные внешние факторы, способствующие развитию микоза, которые возникали в процессе бытовых и трудовых факторов. Проведение этих диспансерных мероприятий обеспечивало устранение болезненного процесса, предупреждало обострение и рецидивы. Правильно организованная диспансеризация позволила выявить основные факторы, способствующие возникновению, распространению, обострению, рецидиву заболевания и осуществить радикальные меры воздействия на них, а также обеспечить эффективную профилактику и лечение.

Выводы

1. Сопутствующие и перенесенные заболевания ( главным образом, инфекционные процессы, болезни ЖКТ, эндокринной, дыхательной и сердечно-сосудистой систем) выявлены у 52-76% из 150 исследованных больных микозом стоп, преимущественно у лиц с распространенным и генерализованным кожным поражением (60 пациентов), в возрасте старше 45 лет.

2. Нарушение иммунного статуса у больных микозом стоп характеризовалось снижением числа нейтрофилов, ФЧ ,Ns-POK, угнетением НСТ - теста, индекса миграции макрофагов в «кожное окно», уменьшением количества лимфоцитов крови, Е-РОК, угнетением РБТЛ с ФГА, снижением индекса Th:Ts, увеличением Ло, Ig М, а также ЦИК, что зависело от клинических особенностей, течения микоза и возраста пациентов, наличия сопутствующих и перенесенных заболеваний.

3. Мебетизол обладал слабой связываемостыо с белками и в оптимальной 5% концентрации в мази на разработанных нами носителях обладал высокой, в сравнении с общепринятыми противогрибковыми наружными средствами, ингибирующей активностью в отношении грибов, хорошо высвобождался из достаточно стабильной композиции, быстро пенетрируя в кровь, где уровень препарата был довольно высоким при определении мебетизола по предложенной нами методике.

4. Мазь мебетизоловая 5% не обладает местно-раздражающим, аллегризирующим действием, острой и хронической токсичностью, дает высокий терапевтический эффект при экспериментальном микозе у морских свинок: быстрый, в сравнении с традиционным наружным лечением, регресс клинических проявлений, элиминацию грибов, исчезновение свечения при отсутствии осложнений или рецидивов инфекции, при нормальных гематологических, биохимических, функциональных и патогистологических показателях у животных после лечения.

5. Анализ возрастных особенностей, наличия сопутствующих и перенесенных болезней, клинических проявлений и течения микоза, состояния иммунного статуса позволил выделить два клинико-лабораторных уровня сдвигов: первый - больные распространенным и генерализованным микозом в возрасте старше 45-ти лет, болеющие 1-2 года и более, со значительным количеством сопутствующих и перенесенных болезней, с выраженными нарушениями нейтрофильных и макрофагальных реакций, угнетением Т-звена иммунитета, дискоординацией В-звена, увеличением ЦИК; второй - больные микозом стоп либо стоп и кистей, в возрасте до 45 лет, болеющие не более одного года, с незначительным угнетением функции нейтрофилов, уменьшением количества Т-клеток.

6. Предложена комплексная терапия больных микозом, с дифференцированным назначением рузама, беметила, оротата калия или

аевита, тиотриазолииа, нуклеината натрия или пентоксила, а также наружно мебетизоловой мази 5%, которая позволила получить , в отличие от больных подгруппы сравнения, благоприятные клинические ближайшие результаты, тенденцию к нормализации показателей иммунного статуса, предложить рациональные методы профилактики.

Практические рекомендации

1. В целях выбора рациональной патогенетически обоснованной терапии больных микозом стоп необходимо на основании клинических особенностей, течения дерматозов, лабораторных исследований определить принадлежность к одной из двух клинико-терапевтических групп.

2. В комплексной терапии больных микозом стоп, наряду с этиотропными препаратами, необходимо рекомендовать средства для коррекции иммунного статуса, адапгогены.

3. При лечении больных микозом стоп целесообразно, наряду с общей терапией, назначать наружно мебетизоловую мазь 5%, промышленный выпуск которой освоен и будет налажен в ближайшее время на АО «Лубныфарм».

4. Больные микозом стоп после окончания лечения нуждаются в диспансеризации и назначении профилактических курсов лечения.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации.

1.Экспериментальные методики определения аллергического и токсического действия мебетизоловой мази 5%.//Медичш перспективи № 4 1997 р. Дтпропетровськ. С. 15-18.

2,Обоснование дифференцировки больных по группам при комплексном лечении микозов стоп с применением наружно мази мебетизоловой 5%.// Вестник проблем биологии и медицины. Полтава - Харьков - 1997г. Выпуск 23. С.72-75.

3.Состояние иммунного статуса у различных групп больных микозом стоп. Вестник проблем биологии и медицины. Полтава - Харьков - 1997г. Выпуск 15.С.9-14.

4.Комплексная этиопатогенетическая терапия больных руброфитией.// Актуальные вопросы фтизиатрии ,пульмонологии и смежных клинических дисциплин.( Сборник статей ). Выпуск 2, Запорожье 1997 г. С.64-66.

5.Некоторые физико-химические и микробиологические параметры мебетизола.// Актуальные вопросы медицины и биологии. ( Сборник статей ). Днепропетровск 1997г. Выпуск 9.С.352.

6.Биофармацевтическое и микробиологическое изучение мебетизола.// Сучасш прблеми в дерматологи .косметологи та у прав л ¡нш охороною здоров'я ( Науково практичний зб)рник )Харюв, «Основа», 1997 piK. Випуск 1. С. 120121.

7.Разработка 5% мебетизоловой мази и ее биофармацевтические и антимикотические свойстваУ/Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии( Научно-практический сборник). Владивосток ,1997г. Выпуск З.С.55-56.

8.Методика разработки 5% мебетизоловой мази и оценка ее биофармацевтических и антимикотических свойствУ/Актуальные вопросы дерматовенерологии. ( Научно-практический сборник). Днепропетровск-Хмельницкий. 1997г. Выпуск 10. С. 155.

9.Биофармацевтическое и микробиологическое изучение мебетизола.// Актуальные вопросы дерматовенерологии.( Научно-практический сборник). Днепропетровск-Хмельницкий. 1997г. Выпуск 10. С. 156.

Ю.Экспериментальные исследования безвредности препарата «мазь мебетизоловая 5%» Актуальные вопросы дерматовенерологии. ( Научно-практический сборник). Днепропетровск-Хмельницкий. 1997г. Выпуск 10. С. 132.