Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

КАЧЕСТВО ЗАРОДЫШЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И РЕЗУЛЬТАТЫ ИХ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "КАЧЕСТВО ЗАРОДЫШЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И РЕЗУЛЬТАТЫ ИХ ТРАНСПЛАНТАЦИИ"

ВСВСОШШЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМШИ НАУЧНОЧЮСВДОМТЕЛЪСЫШ

ИНСТИТУТ ЮВЭТНОВОДОТВА (НИХ)

На правах рукописи

ЕУКАРОВА Вера Ивановна

УДК 612.646.02

КАЧЕСТВО ЗАРОДЫШ^ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И РЕЗУЛЬТАТЫ ИХ ТРАШПЛАНГАЩИ

рпециальность 03.00.13 ~ Физиология человека и животных (физиология сельскохозяйственных животных)

Автореферат дасоерташш на соискание ученой степени ^сандндата биологических наук

ц. Дуйровнци,

Московской обл., 1985 г.

Работе выполнена во Всесоюзном ордена Трудового Красного . Знаиеюг научно-исследовательском eaotifyre животноводства с 1978 по 198^ гг.

Научный руководиель - доктор бжологичеспгх наук В.И. Сергеев.

Офгцшальйые оппоненты: доктор биологических неук, профессор А.К. Голубев; кандидат биологических наук В.П. Рябих.

Ведущее учреждение: Эстонский научно-исследователъс сий институт животноводстве и ветеринар«*.

Защите диссертации состоятся

1985г.

в час, на ваоедании специализированного Совете Д-01 л но защн*е диссертации не соискание ученой стелена доктора при Всесоюзном ордене Трудового Красного Знамени научнот* доветельмиж шнетитуте животноводства.

Адрес института: I420I2, Московская область, Подолье нос. Дубровицы.

С диссертацией ложно ознакомиться в библиотеке инстг:

Автореферат разослан "//" г.

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат биологических неук

И.И. ШЫЫГИН

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРНО ТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы» Решенаяки ХХЛ съезда я последующих пленумов ШС КПСС предусмотрен дальнейший рост производства продуктов животноводства. В значительной «ере реаеввю этой проблемы будет способствовать разрабатываемая в последнее десятилетне новая технология воспроизводства высокопродуктивных животных, основанная нэ трансплантации эмбрионов.

Несмотря на достигнутые успехи в разработке приемов вызывании множествеиной овуляции у коров и телок-доноров, технике вы* мывания и пересадке зародышей» актуальными остаются исследования по опенне качества зародышей» их кратковременному и длительному хранению.

Правильное определение качестве эмбрионов обеспечивает высокую их приживляемость и в делом успех пересадки. Бтим определяется необходимость разработки доступных и надежных методов оценки качества зародышей» основанных на изучении их морфологии и физиологии ва ранчих стадиях развития.

1.2, Цель, и задачи исследований. Цель исследований заключалась в разработке показателей биологической полноценности све-жеполученных и ззмороженно-оттзяиных эмбрионов, позволяющих повысить эффективность эмбриопересадок. В связи с этим решались следующие основные задачи: ' ^

- изучить морфологию зародышей, полученных от суперовули-ровзвших коров и телок-доноров на сутки после осеменения;

- разработать морфологические показатели оценки качества свекеполученных и заыорожевно-оттаянных эмбрионов. Определить эффективность различных показателей морфологической оценки с использованием метода культивирования эмбрионов вне организма в -

— 1 —

ЦЕН ТРАЛ ычл'я НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА Мое«, сэльшохса. академии

им. К. Д Тиыирпзоеа Инв. Ма^п^УЯЯ.д

питательных средах, исследовать влияние некоторых факторов ва качество эмбрионов;

- по результатам трансплантации съежеполученннх, замороженной паянных. я культивированных эмбрионов резных стадий развитая изучать влиявие их качества вэ приживлнемость.

1.3. путная ронияяа ттЛптнт состоит в той, что впервые в ваше* стране научена морфология аародашей, полученных от сулер-овулировавлшх коров к телок-доноров, разработана морфологические показатели оценки иг качества в связи с трансплантацией. Предложенная методика комплексной оценки качества зародшей крупного рогатого скота с использованием морфологической шкалы опенки морул я бластоцвст, их линейных размеров и метода культивирования, позволяет прогнозировать жизнеспособность как свеяеполученных, так я 88морокенно-оттаннныг эмбрионов, повывает эффективность пересадок. Установлено, что для крпоконсервирования необходимо отбирать эмбрионы только отличного и хоропего качества,

Впервые в стране получено потомство от пересадки свежепо-лученных, культивированных и замороженно-оттаянных эмбрионов, отобранных в соответствии с разработанными нами показателями их качества.

Усовершенствована технология культивирования эмбрионов, позволявшая поддерживать их жизнеспособность в производственных условиях, транспортировать ва дальние расстояния* Изучено влияние уровня суперовуляяии и Сезоне года ва качество вибрионов.

1.4. Практическая значимость работы. В технологии пересадки эмбрионов правильная опенка их качестве -определяет успех пересадки. Разработанный метод оценки качества эмбрионов в целях их трансплантации с использованием морфологической шкалы, линей-

sur размеров эмбрионов и метода культивирования обеспечивает правильный отбор жизнеспособных эмбрионов, роадени е телят после пересадки. . .

1.5. Anprirtafmp прлтчентр; рдаультатов. Основные положения диссертации доложены на ежегодных Ученых Советах ШЖа в отчетах о научно-исследовательских работах (1978-1984 гг.). на научной конференции .молодых ученых и аспирантов БИЖа в 1980 г., на У1 Всесоюзном совещании^эмбриологов (26-31 января 1981 г.. Москва). на первом Всесоюзном совещании по культивированию клеток животных и человека (12-14 мая 1982 г., Пущино), на объединенном заседании научного совета АН СССР по проблеме "Закономерности индивидуального развития животных и управление процессами онтогенеза" и научного совета АН УССР по проблеме "Цитология в генетика" на II совещания по тератологии "Генетика аноьвлий развития" (22-24 сентября 1982 г., Харьков), на 2-м рабочем совещании по консервации генетических ресурсов (апрель 1984 г., Пущино), на республиканской конференции "Фундаменталъ-нне аспекты и практическое применение в медицине и., сельском хозяйстве достижений биотехнологии" (4-8 ишя 1984 г., Тарту), на науч- 4 ной конференции Центра по трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных .животных.ШЕа (17 мая 1985 г.).

1.6. Внедрение. Основные положения диссертации использованы в "Инструкции.по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота" МСХ СССР, M., 1984 г., в "Методических рекомендациях по оценке качества, эмбрионов крупного , рогатого скота при трансплантации" (ШЖ, 1984 Г.).

1.7. фбьем работы. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц и 21 рисунок. Состоит из введения, обзора литературы, материала и методики пссле-

дования, результатов исследования» выводов'и практических пред-* ложений. Список использованной литературу включает 128 источников, в тоы числе 85 иностранных.

2. Материал и методика исследований. Опыты по определению качества зародыаей крупного рогатого скота проводили в лаборатории техники трансплантации и криоконсервирования вибрионов сельскохозяйственных животных Ша о 1978 по 1984 год . на коровах и телках .черно-пестрой породы в возрасте от 18 мео. до 8 лет« принадлежащих опытному хозяйству ВШа "Щапово".

Всего было исследовано 2494 свекепояученных, 305 заморожен-но-оттаянных и 97 культивированных зародышеВ.

, Схема наследований

. Исследуемые показатели ' J Число -зародышей '

Мэрфология зародышей в зависимости от возраста

Морфологические критерии опенки качества эмбрионов:.

свенеполученных v

замороженно-оттаянных

Оценка качества эмбрионов методом культивирования

Качество зародышей в зависимости ох уровня пэдиовуляции

сезона года

Пересажено эмбрионов

Зародыш-получали от суперовулировавших коров и телок-доноров путем промывания рогов матки фосфатно-солевым раствором Дюль-

405

2494 385

97"

860 5^6 240

бекко (ФБС). Заыораяйвали еыбрионы на программном заыорадиватеде ЗП.00,00.00. Харьковского опытного производства, полуавтоматической установке конструкции ВНХа и на английском заморадавате-ле "Планер" в стеклянных пробирках и пластиковых трубочках. Оттаивание эмбрионов при медленном замораживании было медленное, при ускоренном - быстрое.

Морфологическую» оценку свекеполученнцс, культивированных а эаморойенно-оттаянных вибрионов проводила под световым инвертированным микроскопом ШЩ-13 при 100 кратном увеличении.

В качестве дополнительного теста оценки жианеолосэбнэсти эмбрионов использовали усовершенствованные методы их кратковременного (до 5 часов) и длительного (до 48 часов) культивирования .в питательных средах Двльбекко о добавками равличных сывороток, сухой английской (ДМ-335), Ыенаэо.

Линейные размеры эмбрионов определяли о использованием окуляр-микрометра. Сцелан анализ влияния уровня- полиовуляции и сезона года на качество зародышей.

объективность разработанных показателей оценки качества све-жеполученных, культивированных и.заыороженно-оттаяшшх эмбрионов' разных стадий развития а качества оценивалась по результатам 1 их пересадки* .

Полученные данные подвергнуты статистической обработке с помощью соответствующих программ на микрокалькуляторе "Электроника Б3-21п,

3. Результаты исследований

. 3.1. МорфологиЕ зародышей крупного рогатого скота л зависимости от их возраста

Развитие зародышей 1фупного рогатого окота в зависимости от их возраста представлено в таблице I. lia 4 сутки после осеменения

были получены зародыш! преимущественно до 16 бласгомеров {€0,3^).

■ 4 ' ; , Таблица I ,

Развитие зародышей крупного рогатого окота в зависимости от их возраста (п-%)

~ "Стадия Т~~~ . Возраот Ссутки)

развития ^ 5 р5 | б Г

, До 16 блаото- ■

ыеров 23-Ф.5 26-43,3 И-22,0

Морулы:

ранние .1-2,6 24-40,0 12-24,0 4-3,9

поздние 16-32,0 12-И, 9 2-1,9

Блаотоциоты: 1

ранние 2-4,0 55-^,5 12-11,7" 1-1,9

поздние 8-7,9 57-55,3 19-3 5, X

без прозрачной оболочки 15-14,6 29-3,?

Пуотые прозрач--_____ , „ _

вые оболочки 8-21,1 1-2,0 1 7-6,9 4-3,9 , 1-1,9

Дегенерировав- '

вые зародыши 6-12,8 10-16,7 8-16,0 14-13,9 13-12,6 4-7,4

На 5 сутки увеличиьается число ранних морул. Поздние морут-«н были выявлены на 6 сутки. Среди 7 суточных эмбрионов преобладают ранние бластоциеты, доля которых достигает Я,5$.Для 8

суточного возраста характерно, развитие эмбрионов.до стадии позд-

1

ней блаотэцисты - 55,3%. Наибольший процент бластоадот, свободных от прозрачной оболочка, встречаетоя в 9 суточном воэрао-те ( 53,• В промывной жидкооти обнаруживал» также дсгенерированные зародыш и пуотые прозрачные оболочки.

Таким образом, анализ результатов, приведенных в таблице I, показывает, что для целей трансплантации необходимо получать

эмбрионы на б, 7 и 8 сутки поел« осеменения. В возрасте 4-5 суток вибрионы находятся преимущественно на отадив развития до 16 бластоиеров, Получение иг затруднено, так как значительная их часть еще остается в яйцевод ахи извлечёте возможно только хирургическим способом»

3.2. Ыорфаяогичесвгае:показатели оценки качества свежеполучеяных к аамороженно-оттаянных вибрионов

При. морфологической оценке качества 4-9 суточных эмбрионов учитывалисоответствие стаяш- их развития возрасту, состояние оболочек, перивителлинового пространства, бластомеров, бласто-полости, характер связи между блаотомерама, выраженность клеток вмбриобласта и трофоблаота, линейные размеры свеаеполу чеиных и эаыэраженно-оттаянных шруд и-бдастоцист.

По морфологическим особенностям отбирали нормально развитие вибрионы, с частичной дегенерацией, вибрионы, состояние которых необходимо было проверить методом культивирования. Дегене-рированные вибрионы и неоплодотворевные яйцеклетки выбраковыва- -да.

Результаты изучения .качества свежелолученных эмбрионов в . зависимости от стадии их развития приведены в таблице 2.

Из общего числа исследованных вибрионов 16,% были идентифицированы на стадии развития до 16 Йластомеров, 8,5 и 14,1 -ранние и поздние моруяы, 15,7 и 8,4$ - ранние и поздние бласто-щсти и 3,2% - блестошоты без прозрачной оболочки, 30,ф от общего числа зародышей составили неошгодотворенвые яйцеклетки.

По мере увеличения возраста.повышалось число вибрионов от-

Стадия • развития

Таблица 2

Качество свежепонученвых эмбрионов в зависимости от стадия их развития

Гно ва-Ютдичные i хорошие JniJy<3довно- непри-

JteFlL - ' родные

412 4-0,97 47-11,4 20-6,3 12-2,9 323-78,4

До 16 блас-томеров

Морула ранняя

поздняя

Бластоциста

равняя

поздняя

без зовы пеллюцида

213 2-0,9 49-23,0 57-26,8 23-10,8 82-38,5

352 17-4.8 136-38,6X55-44,0 31-8,8 13-3,7

391 76-19,4 219-56.0 81-20,7 6-1,5 . 9-2,3

209 54-25,8 119-56,9 28-13,4 1-0,5 7-3,4

81 5-6,2 67-82,7 ,7-8,6 1-1,2 1-1,2

личного и хорошего качества, одновременно снижалось число непригодных для трансплантации. Среди зародышей настадия развития ■ до 16 Слоетонеров - непригодных для пересадки было 78,4£, а поздних бластоцист - всего 3,4J£. Только 11,4% зародышей стадии pas- . вития до 16 бластонеров были оценена как хорошие по качеству. По мере развития доля хороших по качеству зародышей возрастала до 82,7%.

Качество занороженно-оттаявных эмбрионов в-зависимости от стадии их развития приведено в таблице 3.

После оттаивания у эмбрионов наблюдали повреждения прозрачной оболочки, в виде трещин, сколов, а иногда и полное ее отсутствие, разрушения блзстомеров, сжатие бластооолости* На ста—

Качество ваиороженво-оттаявяыг эмбрионов в зависимости от стадии их развития

~ 'Стада ~В~тои~чйсле~(я-у

развития (аарода- ¡отличные !хороиие {условно-} непри-

2ле* ] , Г !рит1льв1гогнцв i годные

Ыорула « ■

равняя- ? - 1-14,3. 1-14.3 2-28,5 3-42,9

повдвяя " 94 1-1,1 12-12,8 32-34,0 30-31,9 19-20,2

Блэстоциста

ранняя 179 9-5,0 .40-22.3 67-37,4 28-15,6 35-19,6

поздняя 71 3-4,2 17-23,6 28-38,9 10-13,9 13-18,1 без зоны

петаицида 34 - 7-20,6 18-52,9 2-5,6 .7-20,6

дии развития морулы и блаетописты процент отличных и хороших эмбрионов небольшой, преобладает эмбрионы удовлетворительного качества. Необходимо огметигь, что бжастокисты лучше переносят экстремальные условия глубокого замораживания. Наибольший процент непригодных для трансплантации эмбрионов был получен при . замораживании ранних ыоруд -

Исследование линейных размеров эмбрионов позволило использовать эти параметры в качестве дополнительного показателя, повивающего точность морфологической оценки их качества (таблица 4).

Данные таблицы 4 показывают, что у свежеполученных и эамо-рожевно-оттэяннше бластоцист, оцененных как отличные, дизыетр, включая зону пеллюцида, равен в среднем 163 «в, однако, диаметр • внутренней клеточной массы, то-есть самой бластоколости у за-

Размеры.свехепэдучевных и заморохеино-оттаянных % суточных блаотоцвот в зависимости ох качества

Качество вибрионов

{еыбрионов ! олао ioitoo-1Ьарава! eiia^ i с амо а { ¡ты о sоной(нового про- {блаото]

{ ¡паалюцида 1отраиства I

¡бластополости

Свежие

отличные

хорошие

удовлетворительные

Ваыородеяно-о паянные

отличные

хорошо

удовлетворительные

непригодные

9 18

7 3

7 7

Ift+1,3

Iffi+2,3 160+1,2

1б<£1,7 1бб£2,0

139+1,7

134+1,3

136+1,2

138+3,4 130+2,5

137+1,2 I35£3,0

136*2,2 124+2,2

119+2,9

127+6,4 123+6,0

IX »1,7 115+3,0

морохенно-оттаянных бластоциот имеет тенденцию к уменывешш до ' 127 ик, ау бластоциот,непригодных к пересадке - до 115 ш. -

Если у свежеполучешшх эмбрионов отличного качества диаметр клеточной пассы, т.е. самой блаотополости достоверно выше на 17 ык Cf< 0,001), чем у вм5рионов удовлетворительного качества,, то после замораживания и оттаивания эта разница становится менее выраженной и статистически недостоверной.

Коэффициент корреляции между оценкой качества вибрионов в баллах и Диаметром бластополости равен 0,48 (Р< 0,01) по свеже-падученным и 0,42 (Р-^ 0,05) - по заыороленно-оттаянным эмбрионам.

Систематизация морфологически! показателей 4-9 суточных эмбрионов позволила разработать унифицированную 5 балльную шкалу оценки морул и бластоцист при их'пересадке или зриоконсервирова-нии •

Шкале предусматривает идентификацию стадий развития эмбрионов , их форму, целостность оболочек, бластомеров, тип связи между вими, состояние цитоплазмы, бластополости, степени дифференциации клеток трофобласта и эмбриоблэста.

Исходя из этих показателей, эмбрионы классифицировали как отличные, хорошие, удовлетворительные, условно-годные и непри-годнне для трансплантации..

В дополнение к морфологическому методу оценки качества эмбрионов использовали метод кратковременного и длительного культивирования их в питательных средах.

3.3. Оценка качества эмбрионов методом культивирования

Часто от момента получения эмбрионов до их пересадки животным или глубокого замораживания манипуляции с эмбрионами занимают до 5 часов. В течение этого времени необходимо создать для эмбрионов оптимальные условия хранения, обеспечивающие их^жизнеспособность . Культивирование позволяет также дополнить микроскопический метод оценки как свежих, так и оттаянных эмбрионов по морфологический показателях. Нами было проведено 68 опытов по культивированию 97 зародышей. Были испытаны различные питательные среды, возможность развития в них морфологически полной ценных эмбрионов, с морфологическими отклонениями и заведомо неполноценных.

Тетавовлено, что корудн и блзстошсты, оцененные морфологически какполноцевнне при культивирования продолжали свое развита в в 100% случаев (табл. 5).

Таблица 5

Результата культивирования зародыаей вне организма в зависимости о? стадии жх развития и качества

-------'-----, —; ------.-----------

| Ста кия развития

зародшеа ; . до опыта / продолжали дроолениа

Морфологически

полноценные 10/ 8 8 / 8 17 / 17 2/2 С морфологическими

отклонениями 10/ в 12/10 II / 9 3/3

Неполноценные 8/0 9/0 в/0 1/0

Однако, при культявироваайн морфологически полноценны! зародышей из стадии развития до 16 бластомеров, дробление отмечалось в 8 случаях ж» 10.

При культивировании эмбрионов с морфологичес кики отклонениями, как в в опытах с полноценными эмбрионами, отмечена общая закономерность: по мере увеличения возраста .эмбрионов увеличивается процент развившихся. И, наконец, независимо от стадии развития зародышей до культивирования, оцененных как морфологически неполноценные,' дробления не наблюдалось.

3.4, Качество зародышей в-зависимости от уровня суперовуляции и сезона гора

Диализ влияния полиовуляции на качество зародышей показал, что оптимальным с точки зрения количественных в качественных

— 11 —

показателей эмбрионов уровнен полиовуляцви является уровень от . € до 15 овуляций на оба яичника. Животные при указанных уровнях суперовуляция даст достаточное число пригодных для' транспланта- ■ ции эмбрионов при сравнительно приемлемых показателях дегеиера-рованных и неоплодотворенвых яйцеклеток. У доноров', с числом желтых тел более 15, наблюдали нарастание количества дегепернрован-' ных эмбрионов и иеоплодотвореяных яйцеклеток (табл.5).

Таблица 6

Количество зародышей в зависимости от уровня попиовуляцин -

Показатель

Уровень полиовуляции

8-5 : 6-10 : И - 15 : 16 и более

Число кивот ных 81 63 88 15

Среднее число зародышей на донора 8,1 £ 0,1 4,3 ±0,1 8,1 ± 0',2 18,0 1. 0,5

В том числа: -

пригодных 1,0+0,2 2,7 ± 0,7 8,Э±01*е 2,7 ± 0,9

условно-годных 0,3 ±0,1 0,2 ±0,1 0,4 ±0,1 0,9 ±0,4

дегенерированных ' 0,2 ± 0,1 0,8 ± 0,2 1,8±0,8 2,4±0,6

неоплодотворенвых яйцеклеток 0,7 ± 0,2 0,6±0,2 2,6±0,5- 7,0 ± 1,4

При изучении влияния сезона года на качество эмбрионов было исследовано 545 эмбрионов, в том числе 210- весной (март - май}, 79 ~ летом ( июнь - август), 99 осенью (сентябрь - ноябрь) и 15Э - зимой (декабрь - февраль). При этой среднее число эмбрионов ва

донора находилось в пределах 4,5-5,5 без достоверных различий-по

— « —

сезонам.

По числу эмбрионов.пригодных дня пересадки на одного донора, отмечена тенденция к возрастании этого показателя в ле*не-осенннй период по сравнении с весенним и зимним. Количество де-гёнерированных эмбрионов на донора было почти одинаковым во все сезоны года, а число неоплодотворенныхяЯцеклеток несколько возрастало весной и зимой. Эти данные свидетельствуют о том; что летне-осенний период в условиях Носковской области является несколько предпочтительный для получения полноценных эмбрионов, хотя уровень сезонных различий не достигает статистически достоверного порога.

3.5. Результаты пересадки свехепояучевных, культивированных и занорожевно-оттеянных эмбрионов разных стадий развития и качества

Эмбрионы после' оценки по качеству пересаживали коровам и телкам-реципиентам с астральным циклом, синхронность которого с циклом доноров находилась в пределах + 12 часов.

Результаты пересадка эмбрионов показала, что-иг приживляе-мость в значительной мере определяете» качеством эмбрионов {табл. 7).

Так, при пересадка бла сто цист отличного качества стельность составила 76,9^, что на 45,9% выше, чем при пересадке блзстоцяст, оцененных по морфологическим критериям как удовлетворительные..

Пересадки 4 бдастоцист условно-годного качества не вызвали стельность.

Таким образом, пересадка свежеполученных блаетоцист хорошего и отличного качества является более эффективной, так как

- * - Таблица ?

Результаты пересадки свежеполпевиых зародншей разных стадий развития и качества

Стадия развития и качество зародышей

; Пересажено ; зародышей

, Стельность \ (п-!5)

Мортлы "43 в т.ч.

хорошие 15

удовлетворительные 20

условно-годные 8

Бластописты 119 в т.ч.

отличные 13

хорошие '73

удовлетворительные 29

условно-годные • 4

16-37,2

8-53,3 6-30,0 2-25.0

56-47,1

10-76,9 37-50,7 9-31.0

всего:

162

72-44,4

стельность прг это« достигает 50,7-76,9%,

в среднем от пересадки 162 свежеполученных ыорул к^бласто-цист разного качества стельность составила 44,4 процента.

При пересадке культивированных-от б до 48 часов ыорул и * бластопист не выявлено существенных различий в стельности, которая составила 37,5 и 36^ соответственно (тзбл. 8).

В основной стельность' получена при'пересадке амбряонов хорошего качества.

После кратковременного культивирования и пересадки заыоро-женяо-оттаянных эмбрионов наблюдается та же закономерность влия-

Результаты пересадки культивированных, эмбрионов разных стадии развития и качества

¡Переса- Т Качество эмбрионов

Ьтлич- I '____—1УД0Ь-

Стадия развития вибрионов после культивирования

Отель-

i ныё

¡хорошие

Морулы 8 - 6 . г 3-37,5

в Т.ч. ■

ранние 6 - 5 i 3-90,0

поздние 2 - I i 0

Бластоцисты 25 'i 22 _ 2 9-36,0

ь Т.ч.

ранние 16 I 13 2 5-31,3

поздние 9 - 9 ' 4-44,4

ИСЕГО: 33 I 23 4 12-36,4

аия качества на последующую их гграадвл явность, Так, от пересадки эмбрионов, оцененных как хорошие по качеству, стельность составила 73&, от удовлетворительных - 2%t а от пересадки условно-годных еыорионов, ш в одном случае стельиооть не был а з аре-гистрирована. <

При изучении взаимосвязи качества эмбрионов до замораживания о их жизнеспособностью после оттаивания и приживляеыость». после пересадки установлено, что 6-8 суточные эмбрионы, оцененные перед замораживанием как хорошие и отличные в большинства своем после оттаивания были пригодными для пересадки (табл. 9).

Пять стельностей (45,4%) было установлено после трансплантации ZI моруя хорошего и удовлетворительного качества, в том числе 100% от хороших и Ъ1>% от'удовлетворительных.

Влияние качества эмбрионов, стадии развития их до замораживания на жизнеспособность посла оттаивания я приживляеиость от нешрургической трансплантация

Качество эмбрионов в баллах

До замораживания 1 I 1 п ! После оттаивания (п-%) 1 4 } 3 ] 2

Морулы ;

хорошо 7 удовлетворится ьныв 18

условно-годные 3

Пересажено вибрионов" 19 Отельных реципиентов. ~ 5 Бластоциоты: -

отличные II

хорошие 36 удовлетворительные 12

условно-годные I

Пересажено вибрионов 26

Отельных реципиентов б

2-29,0

2

2-100,0

2-18,2 12-31,6

7

I

4-37,0

5-27,8

9

3-33,3

10-26,3

4-33,3

12 , 2-16,7

1-14,0 13-72*, 2

3-100,0 8

О

4-36,3 16-42,1

8-66,7 1-100,0 7 О

При переоадке-19 оттаянных блаотоцяст такого же качества получено 6 стелвностей (31, ВД, г тон числе 97,155 - от хороших и 16; 1% - от удовлетворителвных по качеству вибрионов.

I * \

При замораживании 30 юрул и бластснист, оцененных как удовлетворительные, 21 (70£) были непригодными после оттаивания. В то же время, иа 56 замороженных эмбрионрв хорошего и отличного качества непригодными после1 оттаивания оказались

и наших исследованиях не выявлено значительных различий в прихивлнемостн вамороженно-оттаянных зародышей в зависимости от стадии "их развития. От пересадки ыэрул приживляеюсть составила 26,3%, а Сластоцист - 23,1$.

ВЫВОДЫ

I. Разработанная 5 балльная шкала морфологической оценки качества вибрионов позволяет четко классифицировать их на при годные (©,3%), условно-годные (4, %) н непригодные (26,2$) для трансплантации. В соответствии с задачами амбрнопересадок необходимо получать вибрионы на 6, 7 и 8 сутки астрального цикла.

¿.Результаты пересадки вибрионов находятся в прямой зависимости от их качества.. При переоадке овежеполученных вибрионов отличного н хорошего качества достигнута стельность 54,3«, удовлетворительного и условно-годного - 27,8%, культивированных - 39,3 и 23&, закороженно-оттаянных эмбрионов хорошего и.удовлетворительного качества - 66,3» и 23,8% соответ отвенно. *

3. ^Предложенные методы кратковременного (до 5 часов) и длительного вдлыивирования (до 48 часов) эмбрионов гарантируют поддержание их живнеопособности вне организма в являются, дополнительный тестом, повышающим точность морфологической оценки-качества свежеполученных и замороженно-оттаянных эмбрионов.

4, При оценке качества как свежеполученных, ъак и замороженно-оттаянных бластоцист, следует в качестве дополнительного теста учитывать диаиетр.бластополостн, который'составля-

et y отличных и удовлетворительных бластоцист 136 и 119 мк; 127 и Пбмн соответственно.

5. Для получения достаточного числа еыбрион о s, пригояных в пересадке 1(до 3,3 ва донора) оптимальным уровнем оуперовуля-ции является 6-Х5 овуляций на оба яичиака. О повышением числа овуляций, снижается опяодотворяеыость яйцеклеток и увеличивается доля дсгенерированных эмбрионов.

& Сезон года не оказал достоверного влияния на качество вибрионов. Наблюдается тенденция увеличения пригодных для трансплантации вибрионов в летний и осенний периоды.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПОДиодЕШШ

При пересадке и криоконсервиров&нии ыорул и бластоцист рекомендуем оценивать их качество по 5 оалльвой шкале. Для ' трансплантации целесообразно получать вибрионы 6, 7 и 8 суточного возраста на стадии развития поздней иоруяы, ранней и поздней бластоиисты. Замораживанию подлежат аыбрионы только отличного и хорошего качества.

СПИСОК

опубликованных работ по теме диссертации :

1. Выявление, морфологическая оценка и глубокое замораживание вибрионов крупного рогатого скота. Сборник"Эндокринология а транс плантация зигот сельскохозяйственных животных*, 1932, 76-89 (в соавторстве).

2. Методические рекомендации по оценке качества ембриавов крупного рогатого-скота. Дуброадцы, 1984, 1-30 (в соавторстве).

3. МиАше качества вибрионов до замораживания на их жизнеспособность после отгатаания и приживаяеыость при нехирурги-чеокоб пересадке. Бвллетень ВУЛ, 158S.^-SQ.

S-IOXI4S Подписано к печати 2Э.0?*86г, Формат 60x84/16 Объем 1,25- печ.л. Tnpas 100 экз. Зак.2190 Ротапринт

Типография ШШЭ1ЛР г. Щербинка

— ю —