Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ВО ВЗАИМООТНОШЕНИЯХ КАРТОФЕЛЯ И ЕГО ПАРАЗИТА PHTTOESIHORA INPBSTAKS (MONT.) DE BABY

ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ВО ВЗАИМООТНОШЕНИЯХ КАРТОФЕЛЯ И ЕГО ПАРАЗИТА PHTTOESIHORA INPBSTAKS (MONT.) DE BABY"

Биологический факультет

^t-ІІХб-ґ.

На правах рукописи

ТЕРЕХОВА ВЕРА АШСОДЩРОША

ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ВО ВЗАИМООТНСШЕШЯХ КАРТОФЕЛЯ И ЕГО ПАРАЗИТА РНТТОРНТНОКА UWBSIAHS (MONT.) de BÜKT : (03.00.05 - ботаника)

І-

1

Авт о p e $ e p а ?

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ИЗДАТЕЛЬСТВО МОСКОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА • 197S

' Работа выполнена на кафедре низших растений йюлогического фві^льтета Московского Государственного университета имен* ■ ■ М.В.Ломонооова. .....

Научный руководитель: докторйиологических наук/

доцент Дьяков Ю.Т.

Офвцвальше оппоненте: доктор биологических наук, :

профессор Попкова К.В.

кандидат йиодопиескюс наук, Мазнн В.В."

Ведудая организациям . "■■" "" (научно-иесдедоватадь-ский институт картофельного хозяйства МСХрСіЩР.

Защита диссертации состоится *£9 * 1980 г.

в /^" ^"час. на заседании Сцвивадваированвого Совета * 5 (К, 053.05.14) Московского Государственного универоитета по адресу; Москва* 117234, Ленинские гори, ШояогнчеоквЗ факультет ШУ ни. Й. В. Ломоносова.

С дайсвртацкей можно ознакомиться в библиотеке Яяалогя-чеокого факультета.

Автореферат разослав " 9*9 " " ¿¿Л і?¿¿-1.1 Л- 1980 г.

Ученый секретарь

Г.Г.Щумокая

; ОЩАЯ Хи>ЛКЯШ1СТИКА. РАБОТЫ . .

- Актуальность теми, Изучевиесвецифичности во взаивоотноше-ниях рас тения-хо зяина и паразита - центральная дроблена в об- - ' * ласти иммунитета растений.. Выяснение механизмов, .ответственных заустойчввостьрастендй к паразитирущим микроорганизмам,. име-■. ет особое значение, для такой экономически важной-культуры ;как / ":д.. - картофель.-. Одним из наиболее распространенных и опаснейших заболеваний картофеля является фитофтороз, Потери урожая-клубней: :- отфитофторозасоставляютв нашей стране 20-50£,а вгодыэпи-; фитотиЙ достигают 60-70^ (Дорожкин и др. , ХЭ76). Поэтому объек-. ^томнастоящего^ исследования избрана система картофель - р. -. . ; квав., Генетические работы, проведеннне • со многими болезнями растений, в том.числе и'с фятофторозом картофвдя. нокаэалигчто' ; .' ; специфичность взаимоотношений партнеров находится под обоюдннм : ' генетическим контролем хозяинаи паразита; Однако . сейчас еще .'. нетни одной болезни, для которой быяи бн'достоверно изэестны г'.\- ■ метаболиты,' непосредственно ответственные за раооспепифические - ■ взаимоотногаенияраотети я паразита. Поиск таких метаболнтов; -. выяснение" их химической природа; установление биосинтеза и мест ■ локализации имеет огромное теоретическое и практическое эначе-.,- / ' ние^ Итогом предадувФс исс^юдаванЕЙ. пров^ вэтои наврав--,1 ленив,^служат гипотезы, сохяасно хоторымфактори,! онределяпцне спевд^нчнсотьвов :

Ч „фтороза.локализоваан на периферии кдеток паразита ж жоаяина.

Наша; работа посвящена проверка эткгпшотез ¿: поискан довкх ме- -V V тодов ваявления'специфических метаболитов во

картофеля н-р.1пг«в*а11«. У 'У-7/

Цель И задачи ИССЛяд<уияяия. жплдйтгпняиия / Алгп иэуче-

^инерсишвзаишдейств1шповерхностейжповврхностныхметаболн^

тов в - определении специфических взаимоотношений картофеля И V ■

• " ......' "

. д.-.-.'■ ■, Шиеэда

. . с^ к, д. ь^юс«

Р.1пХ©ЄІ£ШЄ.ДШЇД0СТИЖЄНЕЯЗТОЙ цеди бНЛИ поставлены -.следу ЩИЄ Ч'С-. . задачи; .1. Исследовать^взаимоотношения;, и его ыета- '■ -у10 - ;' ' болитов о протопластами растения картофеля. '2. Изучитьвзаимоот-^::. м

ношения Р.ілГввкапз^о шіазмолязированннш кдетками в ткани клуб- . - *- . .неб картофеля. 3. Изучить влияние метаболитов картофеля на выход: - л,, из гриба соединение, ввдуцирущих фитоалексннришитин. :4Г Опре—; ' • делить влияние метаболитов, извлекаемых при осмотическом шоке: ■.■':■ . , мицелия, ва взаимоотношения картофеля и Р.іпГев^впв./ .

Научная новизна и практическая ценность работа. Дана харак- Д

V ." теристика особенностейкультурн изолированных протопластов как' •' „/ '.

-- модельной системы для изучения взаидаотвоюений,картофеля и

Гввіїшв, Показано. что шіазмолизированнне клетки клуней отве-■ ' чаггг на внедрение'вирулентнойрасы гриба защнтной некротической-У-д: реакцией. 'фи бтомнаблЕДаются изменения, в образовании. фито- у ; . ■-'■; алексина. Эти результаты:следует учитывать цри разработке.мето-.„ -да культуры клеток ипротопдастов в селекции картофеля; ва 'у с той-• .. чивость. ■ с'--' ■ ' •'•••.'•'■ • •'-'

- ' ', • Показано».что метаболиты, образующиеся в клубнях;при пора--

V , нении или поражении грибом, 'способствуют': выгоду индуктора фикй- , '-•'.''

■■:■■ алексина ришнтина из мицелия фитофторы.•' у -1: • ' '.'• ■ Полученные в^работе результаты доказывает, что в системе ., ■.--V; . ^Г картофель-фитофтора факторы,' контролируйте*развитие инфекции, - г V ■". локализованы на'-периферии ЕДгетокр&отения-хозяина;и' могут быть .- :. ^ ■ - '»¿делены при осмотическом шоке из клеток гриба; ::-1:.; - •'/ ■

. Апробация' работа. Материалы диссертации докладывались на IX- / 3 -1.-.. Конференции молодых ученых Биологичеокого факультета МГУу.посвя- . - Стенной 60-лети» ЕШССМ'(Москва, 1977), заседании ка$едры;низштс / ^ растений Биологического факультета Щ7: (Москва,'1977; "1979).у • . ■ -Стиуктгоа и объем диссертации. Диссертация'состоит из вве- - . '■ V ■- -рдения, обзора литератур« (4 главы), ^ксперииентахьной чаісти (4 . . /.*-;/-

s-,.-Ù--

1. •.

глава) ,'/вювгаавдей обсуждение результатов,, заключения, - выводов , i * ; . . списка цитированной литература. Натерналы работы излохены на 156 етраштдят цялпгиоттягиога ^«птя,4 таитг^рирг^рии И

кртсувкаш/. :

; - С0ДЕР5ШИЕ РАБОТЫ v '.'".¡Ч

' ■...'..■'■ ; - Ыатерааш- к методы ■■ 4 - :'.■

. Впро1юяёЫнх>»ясперим&нта1 использовала кзоляга триба Лт^ tophthora infeetene (Mont.) de Вагу (pacH l И 4),-полученные жэ ЕаучноАсследоьатедьского института" картофельного, хозяйства.' Гриб культивировали на овсяно-агаровой среда Дорохова (1937) я жидкое картофельно-минеральной среде Тертнера {sàertneur, 1959). -

,'.■■ Растениякартофеля, ' выращенные Из меристемы клуйней сортов 4 Любимец( Ri ) и ПриекульскиЯ равняй < * ), культивировали на ara- ' ровоЯ среда Ыурасиге-Скуга ( Mrraahig« »scoog1962)в модифика-щш„ШИКХа. :йделение протопластов проводили iia основе: метода, разработанного Бутеяко и сотр. (1976) о помощью ферментного пре- 1 парата ксилавази. Жизнеспособность протопластов оценивали- при . .v.-.j окраске метиденовны синим. Наличие клеточной стенки контролировали флуоресвдетпщ» Красителем Calcoriuor Wblte SI (tfagata, ■ ; Takebe, 1970). Наблюдения sa культурой протопластов проводили под инвертированный микроскопом ME1-I2. . - ' .. .-".".Т4, '

■ Эжотзтга шхуроотков поделали после отделения проростах в та-'- . чекие 16-18 час. спор центрифугирование»«".. .. - . J . ; ;

Экстракта ишвядя получала при гомогенизации его. с .водой. ■ - " V ; или 0,4 M навнитоы: (1г. мицелия на 20 ш экстрагента).После ^ " * '.-'-,дентри^угирования гомогената (3000 об/мин, 15 мин) испытывали î ; ■ '; ^ суперыатантную фракции. ■ ■..' - ' . ,.■:

ЛшгогликопротеиновыЙ комплекс выделяли по методу , валовой и ' '' ; сотр'. (1977) 'при .акстравции неразрушенного мицелия ■ 7055 этиловым спиртом. - Спирт удаляли в вакуумном, испарителе, "а оставшийся вод- ;

ный экстракт вдвое разбавляли водой и диализовалй против вода.;. v После гельфиьтравдга на сефадексе. в -50 липогликопротеиновую " -$ракшшсо0иралн и лю$ш&но высушивал^

Клеточные стенки из мицелия гриба получали по' методу валовой и сотр. (1976). Препарат стенок экстрагировали I н раствором КОНв отношении 100 кг на 10 мл. Экстракт отфильтровывали, ' нейтрализовали, диализовали против воды и использовали для определений, ? . . ■ • ' . . < "

Экстракты тканей картофеля получали при обработке дисков из ткани клубней 96£* спиртом юш ацетоном в течеше~16-18-ти ' часов. Спирт и ацетон выпаривали к доводили1 водой до исходного объема. Споры, проростки или мицвлиадьннв диски добавляли в по-лучениыегкстрактыи инкубировали в теченив-5'часов на качалке. После отдаления гриба жидкость испытывали на способность;кнду- ■,„ іщровать ришигин jB'luqrdHex:іифтофеяя, *

Осмотический шок осущеотвдяди' при обработке мицелия раствор ромКИ (4,82 М) ([Staiart, Debuek, 1971), после чего раотвор. диализовали против проточной вода. Чистоту диалиэа проверядн , по реакции с.азотнокислым серебром. Воздействие шоковой жидкости сравнивали с водным сшвом с мицелия (контроль). у , . Реакцию клубней на'заражение грибом опениваля.по 3-х бадль--ной шкале на 3-4 сутки после выдерживания срезов во влажной камере. Подсчет векротизаровавных клеток осуществляла по-методике" Чалекко и сотр. (1979). * ... ■'• ■:}. •

Поглощение' кислорода определяли на полярографе СН-І02.

' Определение ришитина в клубнях проводили методом даффуза- -; тов (Озерецковская и др.,- 1975); в суспензии протопластов после экстракции и разделения на пластинках "SilufоГ: (Озерецковская • и др., 1975). V: •

Содержание белка"определяли по методу Лоурии сотр. (Low-.

- X

гу ее- а1., 1951)са.сара - фонольным методом. .'г '/^-'Ут': ■' : Матоматсчесюг» обработку результатов гфоводшш до Плохинско-

«у (1970)» V ;'■■..' : '■*■■■ . '

. / Результаты и их обсуздение . • ; ■;

Глава I. Культура меэофпльньх протопластов как модель для „ ' _ изучения: специфичности во взаимоотношениях карт о-

феЛЯ Д.. ' ■ '■ *. , . .' "'-

В растворах о повышенным осмотическим давлением,.необходимых ^ "для поддержания жизнеспособности протопластов картофеля,с шрангии' ' . Р. 1п£ев^опа способш прорастать лишь;прямым способом -гвфоЗ.-Зо-,-. .. Топоры, переведенные;в такие растворы, мгновенно юржсгфовалась иV :* прорастали почти также хорошо как г в воде. , < ;

- При внесении в суспензию протопластов в 0,4 М макните'спор " . I и 4 рас грибе наблюдались различия в-выниваемости протопластов; , в зависимости^ от расо-сортовой .комбинации. -Протопласта универсаль- > . , не восприимчивого сорта ПриекульскиЙ ранний;одинаково реагиро- .■">-.;. вали ка прорастание-спор обеих расг Р»1шев*елв.; Протопласт оор^ да Любимец в сочетании с проростками^авирулентной для этого сорта; " расы 4'оказались шнее:жизнеспособкнш,' чем с проростками вирулент- : . *

ной расы'1 (рис. I). '"-л ..:," * ' ■'■' ■

* .

.100-

§ I

50-

ж;

к О"

. К' +раса I +раса 4' - К +раса I • +раса 4 ;' /сорт ПриекульскиЙ рамщй (г) сорт ЛюбимецВ-, )

Рис, X; .Жизнеспособность протопластов картофеля "в присутствии-.".'

проростков Р» 1аГвв*аавраси I и 4<(через 6 час.) ' * ..

совместимой комбинации - паразит-хозяин ■ отшчадся таете при вайе- -

Сбнии ■ суспензии ; протопластов яа мнцелийгрибана агаровой среде :

(Табл. I)« 1 - ' • г" ■" ' ..:

Таблица I -

. гизкеспособносгьпротошшстов картофеля ( сорт Любимец, R-i ) нанесенных иа мицелий P.iûfeetaae (экспозиция б часов) '

'V Раса' '.' Количество живых протопластов, % _

-V ' - '' •'• ' в контакта < | вне контакта.-• .. с гифами: • : ■■■

. ■ ' 34,1'. - • 100,0

' 22,0 . v Г 35,7 ;

' Эксудаты проростков Р.ЛяГевъапя слабо активируют защитный реакции растения-хозяина. Однако« они могут играть значительную ~роль в процессах узнавания патогена' растением.Ери сравнении ; . воздействия эксудатов 18-ти часовых проростков; вирулентной и • авирулентной рас' гриба на * протопласты' картофеля обнаружено,. что Л в несовместимой комбинации эксудат более токсичен (раса 4). Ри- -г швтин индуцирущая - активность выделений несовместимой расы гри-■ ба также оказалась выше, чем совместимой-(табл. • 2). ,

... ..• ' • •" ' *" -Таблица 2 -

■ ■ Влияние эксудатов проростков Р»1а£вв&аав . на яязнеспо-, : собность протопластов картофеля и образование ришитина^ . .. в жлуйнях.сортов о геном устойчивости(Теш,Любшец)

; ■ Вариант . ■'■/■ ■ - Количество живых протопластов (экспозиция-6 час;)- рятитин, • •ккг/мл. f . : ■ ■ т .

2(К) •

Эксудат ' ^ ' . ." " " "

- ../ . " .расы I ; ;.. ' ' -73,6 - . ' 10;5 ■

расы 4 -Г : 62,0 78,9 ■ ■ ; 16,-

Маннит(контроль) . 78,6 ¿оо;о ■ ' —

, % (К) - здесь и далее в таблицах процент к контролю. - '

• Следовательно, некротизация протопластов, как и клеток тка- v: нв картофеля в контакта с несоииеотииой расой или ее метаболита-! ; us происходит быстреечем с : совместимой» Трофических TSKCHCOB •"•,„ •проростков гриба.кх способности внедряться в протоддасга нивС хидкой культуре,. ни при {нксацва см5оиХ'ВЗаимодейстнутііих~обьек—г . V тов в агаре ве обваружано.' В связи с этим сделано предположение, * что ідо установления вервкчвих взаимоотношений клеток картофеля . и P.liffietaae: необходимо наличие клеточной стенки растения, а , указанные вид» различая в невротизація протоахастов в разных вариавтахобуоловлены воздействжемматаболітов! паразита. : , ч.

Иэ мицелия возбудителя фитофгорова еддедена аесколыю ые- *. w-, таболитов, способных вшголвять роль индукторов домддекйа. sanar-; ных реакцій у картофеля (Иетлидкий ндр., 1976 ; Чалова а др.', •1976; .1977 ж др.). . " - ; - ;; ї' "''V:'-" -

Неяроэ клеток клуйней картофеля и накопление большого коли- ; ' чвстваришнткна в них способна вызывать' экстракты мицелия в во^ де к в 0,4 Мманните. Индуцирующая активность экстрактов юще^ Т, , лив вирулентной к авнрулентной рас iptóa не различалась. ;

. '-.:-. Экстракты, индудлруицие в клубнях свшае ІОСмкг/мя ршштша -, (в разведения 1:20) 'оказнвали сильное ^токсическое действие на / протопласты (тайж.З). При дальнейием разведении токсичность эк- ; страктов'уменьшалась. - ,•. ''' • Тайлипа 3*- • *

" л Влияннеекстраятов іащвдияМііГ*в*«аеі.в манните на. хизяесяосойность протоогастовкартофедяЧсорт Аойвмец^Ц)

Вариант. . .'■ Экстракты в ' разведают ¿

I : 20 1 T"s 2DÛ *

Количество живых протоп*астов, через~ • 4 час. -38 час. 18 чао.

--¡К l-*ut) -1 * (ЛІК) \ % IÍÍW .

- ^у^урддуц г ^ -4 м- 3. расы I 86,9 ' 88,3 ' ; 0 ' 44,2 "80,0 ' ' л расы 4 87,4 • 88,8 0 V - 0 47,3 85,0 -Ыаннит(контроль) ;98,4 100,0„ ^54,8 .100,0 - 54,8 100,0

Г ; : .'8 \ У ': -^ л

Различия я действии экстрактов мицелия разных' рас не бшш.дос-. і 'товарными. Отмиралще протопласты;во всех вариантах выглядели-

одга^ом: "деформированные. сбурешим содэрвиыьм,'. не способные '■;"-в дальнейшей к ресшітезу,клеточной стенки структури.... ■ -"'.-/..;

' Искаедовадосутакае'.влияние -на протопласты высокомолекуляр- ' г - ног > соединения, лшогликопротевда - наиболее активного шщудго-ра защитных реакций (Чалова и др., ' 1977). - - ■ -

' ; ■'" Обнаружено,' (рис. . 2), что при возрастании концентраций от . І до 100 мкг/мл токсическое действие нарастает при дальнейшем . увеличении концентрации эффект стабилизируется.. Сравнение'ток-■ ' сического' дейотвоя /этого ррепарата, вцделенного из разных рас на протопласты из "двух сортов картофеля не показало различий неаду совместимыми и несовместимой комбинациями паразита.и-хо- ' ' 4 эяина. ; .'■ .' ' . ; ;- . ' •".)'■'

V . ' § 100 -

■ж

V і 4

- : ." о • .25--50 ^ .... іоо V ; •• -200 у V. • .,;;

; .у;-:.:: • • ■■■ - ^

■■"■' '■*'" •. '.• " концентрация липогликоцротеида, мкг/шг .

' "" . • :.иэ киц&тя Р. іпГваіапв" (раса 4)" на "протопласты" : '■'■ картофеля (сорт Любимец, іц) через «-3, *-6, ¿-24 д *

.*■■ о-48 час. инкубации. ' С:?/ 1 1 , :■.'

; г. ■ ~ • х ' с '; '■Лі1'-'--* - Л " ': - . ■ ■ . . ■■.. і. ^ ^' ~ ^" -

V-V -

Г '

'■- " Также _ неспетщфачным оказалось воздействие:щелочных^экстрак- " 'тов. клеточных; стенок и$ мицелия' двух рас гриба, , которые содержат . ' : глшана и . ыаннан-с одержалще глшопротеиды - индукторы защитных '. реакций картофеля (Чалова и яр.',:.1976). Эти соединения термо' стабильны ж^ обладает ,относителшо слабой токсичностью по отно-". - " mem® к' протопластам. Поэтоцу условия опыта" позволяла провести набЛцдения за'регенерацией клеточной стенки протопластами, ис- - ■ 7 - штываищими влияние этюс.препаратов.- "I *v* - - ■'■■ * ■ -

V Отмечалось ■ подавление регенерация клеточной стешси црото^ ;

картофеля независимо от комбинации сорт-раса (табл. 4 ),;;'-• ■ *■■-.' 1 ■.■■ ■' Таблица 4" ■;L*;;'.

'■"А.

пластами

щелочных экстрактов клеточных стенок-p.iafeatane на регенерацию клеточной стенки ; . .. протопластами картофеля

Количество клетрк > • :■

. - . Вариант ' í; ^сорт^- - - - COpT . : ■ ■. 1 .. Пржекульский- ранний. '

,¡S(K) _

t. ' \ - Экстракт J •. '■: клет.стенок ". _ расы I ; . ■ ' ~ расы 4 ' - . • --""-. ■i"'--

33.7 24.8 78,7' ч57,9 ::. 21,1 12,9 • 55,8 34,1

Среда (контроль) *; _:. - 42,8 100,0- 37,8 ; 100,0. ' •

Для оцэнки спеш^ичности воздействия щелочннх экстрактов •• клеточных стенок мицелия сравнили скорость поглощения кислорода протоплаотами двухсортов. Установлено, -что суспензия" иротоплас- ^ тов. обоих сортов,, обработанных экстрактами клеточных стенок. v ' гриба раса 4,, более интенсивно поглощают кислород.чеи необработанных,? либо обработанных экстрактадаклеточнюс стенок расы I . ' (табл. 5). ^ В этих же вариантах оказалось больше разрушенных протопластов." Специфичности действия экстрактов клеточных отенок л

не баяо обнаружено.. ■ i J(V¿ -\л

• - г Т

i"'

- -Л !í-■ - .'r' '-'i

Яогфщенго

таявши

г ;.,; -: Ю- ' :..'.; :....

: * ■ V: " Тайпща 5

кислорода протопластами картофеля, обрабо-экотрактамк клеточных стенок 1л£ее(апв

Вариант 5в(К>. количество хнвнх прото--пластов .

• > ед/ин | - * (Ю V

сорт Льбянец ( ) . -. ■ ' ; :: ;

'Экстракт-' клет. стенок ' раса I ; расы -4 2,20: : 3,77 100 160 . 2.2Х104. "'86,9 1,3x1а4 .56,5 .■■

Цаннит(контроль) 2,20 Л 1(ХЬ 2,3x10* 100,0

. . '■ - , ■ сорт Нриекульский ранний (г )

Экстракт-клет.стенок ' расы I .•• расы 4' -„.' Ианнит (контроль) 5,85 ■ 8,05 : . , • 5,78 .'/."■".■- 101 139 100 - 4,1x10* - 82,0 3,3x10* 66,0 б^ОгЮ4. 100,0 .• ' ;

По'данный.Тониямы о сотр. (То»1уааа «Vа1.,Х964) фитоалек-синришнтнн синтезируется в клетках, подаежавдсЕ под инфицирован- ■ вшЕ. откуда он перемещается в .. зону инфицирования. - При - обработ-' ке индукторами .ришитшасуснензжи протопластов картофеля этот 4 - фнтоадексш вами небнлобнаружен. • Вероятно, это мохно объяснить" -М81ашче<жойразобвдшостъюклетоквсуспензин.-'

: •' Особенности ^льтз^лротопдастов как модели для изучения 1 ' специфичности во взаадоотнотениях рао гркбаи сортовкартофеля, очевидно, , обусловлены ¿е"только .иеханичесйой разойщэшостью кле- . ток хоьяинамеаду собой, а'также,клетокхозяина и паразита.- Изо- , лированные протопласты имеиг и еще-одну, особенность - это клет- , ки растения в шазиолизярованжм состоянии. ;Поэтому в-дальнейшей"' работе Ш изучали "ЦТЧЯНИД гияям^тгаиру раятаоргуя навэаимо-отшявнва ^офеоры в тваней картофеля»-; "■'■":■'■■''■■ .-';.■../

Глава Л. Влияние плазмолизирущих растворов на взаимо- - \ j . ■ ;■.. 'V' . ' : отношения клубней картофеля и P.iníeetanfc ^ ■ v; '

. ' .Споры гриба-паразита, имеющие довольно высокое осмотическое ' давлеие. быди способвы.црорастать в испытанных осмотдческдхраст-, . ворах. • При нанесении суспензии проростков Р* tnfeefcene' расы I , - во всех плазмолизирувдш: (маннит 0,4 М - I U, 0,4,М сахароза,

0,2 М KCI) растворах на срезы клубней картофеля восприимчивых . -> сортов обнаружена некротическая реакция. Тогда как те же пророст- -.. ки в воде .(контроль) давали обильное'спороношение на клубнях. ' -Подсчет^числа некротизированных клеток на срезах ткани позволил. -установить,сходство некротической реакции, возник&пцей в ответ. ■■, на заражение спорами вирулентной расиі в 0,4 Ы машите с реак- , -' -' цней на авврулентную к сорту Любимец'расн 4 в воде. Дополнительный , свидетельством о сходстве механизма реакции в том и другом v •■ .■, случае было подавление некрозов антибиотиком трихотецином. Про-

ведя.заражение нормальных и пдазмолизированвых маннитом тканей' . - -■ Í4-' 10 .видами других патогенных грибов и 2 видами бактерий мы устано- ' • " / вили, что превращение совместимой комбинации в несовместимую при ;

плазмолизе не 'является универсальным явлением ж характерно лишь - ' . ДЛЯ P.iBfeetaiL». . _

.'Заражение клубней спорами F. iníeetan» в 0,4 II манните прит : вело к значительному повышению'уровня ришитина. Другие плазмоли- . зжрущие растворы, хорошо цронижащке в клетки - сахароза, jato-

ристый жалий - не способствовали увеличению синтеза ришитина. Та./. кой же эффект наблюдался при определении' кндушіру ще Я способнос-, ти эксудатов (табл. 6)."Проростки, отмытые от'пкаэмоАнзнрупцих :

»

t'-. * растворов, сохраняли свою вирулентность и были способны так же интенсивно индуцировать риштин. как и контрольные проростки в .: • воде. . ' -, •-> • _ V • '■■.'.':■"

Увеличение концентрации фитоадексина под влиянием маннита :

Таблица 6

. Индукция ришитина вкліубнях картофеля (сорт Теш) проростками р. ішсееїапа и ах эксудатами.в плаз- — молизирулцдх растворах

, ■ ■ - :Вариант ' X" ' ' ' " . Концентрация ришитина > ыкг/ш, индуцированного * ^ ,Г проростками ' 1 . - эксудатами ; расы I j расы 4 | расы I | рас;ы 4

.■ ' . - вода 23,9 ' 43,0 17,6- 20,0 Г.

Г '" 0,4 М маннит 40,3 63,0 „ ;20,0 24,0

: 0,4'М сахароза ' 13,0 , 33,0 - 13,0 . 20,0 '

0,2 М КСІ * 27;0 20,0 12,0 9,0 •

может,происходить вследствии воздействия осмотического-раствора _ : * ■ л*либо на один из взаимодействующих организмов, либо систему вце-. лом. Для уточнения этого вопроса определяли индуцирупцую способ- . -' ^ :■. ность:' віад^лі их экаудатов (контроль);.

-.,■ б) спор, пророс№ма^оде и: их эксудатов, к которым-перед внесе- . ■*-. ,нием в лунки'клубней добашіен маишт; в) спор, проросших в 0,4 М ' . .

машите и их эксудатов; Как вадко из таблица 7, маннитусиливает * V индуцирупдуг активность за счет выхода индукторов ришитина в сре- "

■ ду прорастания гриба{эксудаты)и способен воздействием на клетки;--"'-растения-хозяина несколько повысить уровень ришитина в ей. -.

■ • .'-■. ■ Таблица 7 •"'•'•'

Ч '■•ч

•Влияние обработки ■ 0,4 Ы манштом на способность 'клубней картофеля образовывать ришитин под дей- г.' ■ СТВИЄМ пророотков Р.-ІМеаїапз и их эксудатов -

- .«' ,

Концентрация ришитина, икг/мл, индуцированного ;

Вариант -'проростками расы I . 1 расы 4 . ' эксудатами ' " " ^ - '.'расы I J "расы 4

і - ■ ■ ■".- Рост гриба в воде . ,15,5 . • 35,0 ■' ' ; . • 10,6'. /.. .16,5 .

Рост гриба в манни-те ' . 21,0* • з7,о _ 15,0 : " £0,0

■-. Рост гриба в воде, . -"обработка клубней ': ". то'в-' . ■ машитом ' і • 34,0 13,2 ■ ' ..17,1 '

. ■'.■'.■,-■---- _. .. — ■■■ ~

- • ' Согласно гипотезе "двойной индукции" (Цетлицкий и др., 1973);: ' . .:" можно полагать, что маннит приводит к изменению содержания ве— f .fществ в растении,. способны? вызывать.выход индукторов фиоадек-сV, сина яз мицелия трнбяг"51ДальнеЙшеы мы-определяли способность ■ . ^ метаболитов, гприеутствуедих в пораженных или .зараженных гримом' 1 ;;:7 ^^тканя1нартофеля, специфично воздействовать на альтернативные; расы' P.iníeetane. "

'.• ; - Глава Ш. Участие метаболитов картофеля в защитных ...'.. ,

.-"ї^' реакциях цротив. Р.infestaña

_ г' > Для-извлечения метаболитов из клубней картофеля.сорта Люби- ..

? мец,.которые■ реагировали на заражение обеих рас соответственно .V

. . имеющееся гену устойчивости R1 - , использовали универсальные . 7

растворители ацетон и спирт. ■ : ■ . ■ "

■-': Экстракты незначительно изменяш^'процент прорастания и дди-

^^ : Д7 щіороотков. Однако они влияли на мої^юлогию проростков, визы- .

: '• вая утолщение и .образование вздутий на них. ■ - ' V-. : ,*'.'

У-■' :'В ответ.на-поражение или "инфицирование разным по вирулент-.

г:-": , ности расами фитофторы в тканях картофеля происходят физиологи-. ";-'„

^г;Т;-"ческие изменения,-в-частности касадаие отечественного и'коли-

У>чественного' состава' фенольных и стероидных соединений {Рубин л.

др., I975i .Васшова. и др.," 1976; írieád et al,, 1971), При "обра- -' 7

бохке- проростков экстрактами из картофеля в их эксудатах увели чи-

'У - ." . г валось содержание индукторов ришитина, о чем судили до их способ- • ...

- • .; ности вызывать у картофеля образование этого фэтоалексина. Нес- ,-'У"'У

.. - _ колько - большим "эффектом ъ' этом смысле обладали ацетотвае< зкотрак-'У-

7..V■ -те.'.Экстракты, приготовленные из различных тканей/ в разной ст'е-/ г: .У

і ' ч _ пени увеличивали ришитин индуцирующую* активность выделений.фито-- ~ .

'С фторЫ'(табл. 3).* Экстракты'из зараженных тканей более: эффективно

' У ; Устимулировали выход:индукторов ришитина из гриба, 'чем из незара-.' ; -

. ■. аевных; а из.инфицированных несовместимой расой более эффективно, / •

Таблица 8 ^

Индукция ршшгигоа эксудатами шор Р.1дГва1авя, прорастающих , в ацетоновых экстрактах ткани.клубнеВ картофеля сорта

.-. ' . • Любимец 1Ц . .. .. ■-.-,..' ■'"'.-

Экстракты ; Ришитин, икг/кл .

- теса I - раса 4

■ I I I I П -

контроль, (вода) ... 21,7 5,3 21,3 6,0 ,■;•'

в/э 0 чао. . . ; 22.7 '■■ -8,0 29,0 10,3 •

в/э 5 час. ' ■.. . 26,3 .','" 8.0; ■; - 12,0 '

совм.коыб. . . 4о,о ■ 7.3 37,7 8,0 • •

весовм.комб. . " 45,0 _ . 8,0/ 49,0 18,0

Примечания: экстрактами, приготовленными' из не зараженной свеже- • . срезанной ткани,(я/з О чао.), выдержанной 5 часов во - „■ влажной камере .(н/з б чао.), зараженной-расой X ' \/ - (совм.коыб.) и расой 4 .(несовы.комб,).обрабатывали . , У проростки отмытые Ши неотыытне (Г)*от среды про- .

■ ^ растения зооспорангиев гриба. ,. ■ > ■■; ■■

чем из зараженных совместимой. Прогревание в течение 1,5 часов .не., существенно изменяло активность экстрактов. Определенной зависи-. мостя между.содержанием белков и Сахаров в пробах (экстракт клуб-'

вей + эксудаты зтриба) в количеством индуцируемого ими ришитина не

...... ■ ■■':■'■■'■ - .. . - , . ... ■ ■ ■■ '".,.-■--,

оСЬаружено..Эксудатыпроростков авчвулентной к сорту Любимец расы 4, обработанных экстрактами .тканей клубней, в большинстве еду-, чаев содержалл.большее количество индутщрупяих фитоалексин соеда-■: нений, до сравнению с эксудатами в!фулентной расы I.

Относительно короткое время аффективного воздействия экс^г- : рактов, а также растягивание клеточной оболочки гриба' в образо- -ваше вздутий позволяет предположить, что' в результат» взаимо- -действия веществ картофеля о: грибом прежде - всего происходят из- -ыенения в покровах микроорганизма.: По-видиыоьау, при этом^ьо внеш-вхп среду выделяются соединения, участвующие в регуляция' взаимо- У отношений паразита и хозяина* . Это могут 'быть глюканы,: манная—с со держащие гликопротеидн клеточных стевок - известные неспецифичес-

„ • 7> ..■ ■ к - v- : ¡..: ;

" : кие .индукторы фитоалексина - или,другие.соединения, освобождаю^" . ; щиеСя в природных условиях под влиянием метаболитов картофеля. " Одну из возможностей исследования комплекса поверхностных метаболитов, оцредёлящих исход взаимоотношений паразита и хозяина, -, мы видели в применении осмотического шока мицелия гриба.

Глава 17. Участив метаболитов P.lnfestane, выделенных < ■V ■ > . ^ о помаши) осмотического шока,во взаямоотноше- ' няяхпаразита и растения-хозяина -

В данном разделе работы'мы изучали влияние веществ, извлекаемых из мицелия, солевым осмотическим люком, на индуцирование ' * ■ ршатина метаболитами гриба к на заражение клубней спорами и ■ мицелием фитофторы.',. ' . ч

. / При сравнении ришитин индуцирующей активности метаболитов^ .7 " выделенных осмотическим шоком, ;и водных смывов с мицелия оказа-','-. лось; что сорта картофеля, не шеадие генов устойчивости в ответ . на обработку водными смывами-мицелия обеих pao,vобразовывали,боль-. ше рипштана, .чем под влиянием шоковой жидкости зтого; же мицелая, (табл. 9). На сортах о геном устойчивости понижение уровня j ришитина. при .обработке шоковой жидкостью относительно ВОДНОГО / смыва отмечается- только в совместимой комбинации. Дпя несовместимой комбинации характерно повышение количества фитоалекскна, обра*. .■ . ' ".г'1". ■ ■ ' . ■ '■ ' ■ ' >, -

". зушегося в ответ на токовую жидкость. Т.е. при осмотическом шо-*/ке мицелия в.раствор переходят вещества, способные в зависимости ^ отрасо-сортовой Комбинации уменьшать или увеличивать индуциру- ^ -. кщую активность водных смывов. Эти вещества термолабильны, ? : 7 • Поверхностные метаболиты гриба, выделяемые осмотическим шоком не вызывали - подавление ицдуцдрущей активности гомогената .

.. i... ■■•:-г -. л '<• • ■ - . -*' ■ '■'' ■- ■ ' ■ ■ ' '■ V- " .'* ' "■ ■ " » • -

. V 1 мицелия^' основным ршнитш-индуцирушим коыпонентом доторого явля— - * , ^ ется _ЛШОГЛШСОПрОТеИД.: , ' ' " . .-Ч1;- 'tV _:

'■У^: 16 \

■ Таблица 9

Индукция ришитина в клубнях картофеля шоковой жидкостью У -и водным смывом с мицелия р• 1дхевЪел8(расы I -и 4) • •'

. . . ■ ■ . ■ -■ 1 ."-■ . Риштин, мкг/мл - ■ :

Сорт. У , раса I ' ;"У-. : .. . раса 4 " :

~воданй: -смыв —У;-* ШОК.ЖИД-' кость -Г".;. ; ВОДНЫЙ домыв шок.жидкость _ .

Любимец - ( Л,,"') ; ,'.13,0 • ;'У7»4 ... .9.1 ^ У"

Белорусский У ранний ( г ) ■ ■ ■ : У 13,8 ; .'8,6 ; 6,Г 1.9уу

• . Метаболиты проростков и мицелия, содержащиеся в эксудатах; ; -V вероятно, могут выделяться грибом и в'ткань хозяина. Представлен-у. , "ные в таблице 10 данныесвидетельствуют о том, что дюковаяютд-.У ■ кость совшстимой расы сш!иает:индуцЕфующую активность эксудатов -' ■ несовместимой^расы." ' >'-'/' ' - " . /., '/

" •. : ' '"'у ' Таблица 10

,.'■;■■ : Влияние шоковой жидкости на;индукцию ришитина в клубнях

даух сортой картофеля.экс^датами мицелия -р.до^ша;.- ,у ,

Вариант

'Ришитш,; мкг/мл

с.Любнмец )

о. Белорусский л-' ■ ■ > ■

Г ). . ..

У Шок, жидкость' расы 4+' : +эксудат расы 4

: " Шок.жидкость расы 1+ +эксудат расы 4

8,3 : .4,0 ..

6,3 * ' У • 5,7..

- Как показано в главе Ш, под действием экстрактов картофеля У : усиливается выход индукторов ришитина из гриба.. Если мицелий гри- -Да предваритедьно обработать осмотическим люком и удалить' шоковую жидкость, то воэдойстаие7 картофельных экстрактов становится; более аффективным. Добавление шоковой жидкости к метаболитам, выделя-

■ ' : . . -

щтш под влияшем экстрактов ткани - клубней либо' иэ необрабо-7 тайного; (I), 'либо .из обработанного Ш) осмотический шоком мицелия,- уменьшается их активнооть до сравнению с добавлением водно- ; го'смыва мицелия. (табл. И). ■'; * '- . ' ^ „'

"."-''.'■'''1"" - ' < * Таблица II

. Влияние шоковой жидкости мицелия P.iafeetaae (раса 3)' на ввдукцщо ряшитина эксудатами мицелия гриба

'Йндувдругщие компоненты - 1 Вшитин, мягДи

"Эксудат мицелия; обработанного экстрак- ; " . . . ■.:-'<

том.ткани картофеля'- ^ . - 24,1

То же после осмотического шока и уда- * ::.■

ления шоковой жидкоотя П" - ; - ; 41,8; •

I + водаый-смыв мицелия , 2С,0 ' "*_■-■

. I + шоковая жидкость 14,6 '

П + водный смнв мицелия ; ■■.■' 23,0 ""; ■"

П + шоковая жидкость • ■';.'..■''. -*':'16,0 .

- ■> Другим теотом, по.которому ■ мы оценивали участие'веществсо—

. держащихся в шоковой жвдкооти, во взаимоотношениях па^азита - и ^хо^.

. зяша\ было изменение, реакций- клубней на заражение грибом. Срезы ;

' клубней,обработанные шоковой:жидкостью мицелия раЬы 4, -заражали .

;'суспензией своц или кусочками мицелия. В контрольных:вариантах ;

" ткани'1 перед ^ заражением, обрабатывали водным, смивом е ^мицелая .рйса ;

-4. В-зависимости от комбинадаисорт-раса учитывала интенсивно сть<

споронощения или некротической реакции - количество дисков кар-

.тофеля с : максимально выраженной реакций • (С++4 или Н+++) в процея-

Предварительная обработка клубней сортаЛюбимец шововой, жидкостью азирудентной расы способствовала;усилению.некротической. реакции;в-ответ на заражение расой 4 (рис.■3 А) и;существенному 7 * ;;. ослаблению, спороношевня" вирулентной расы - I по_ сравнению с контро-'

г ■ ■

• ■ л'.

t:

«

K-Bo дасков с H+++, % 0 v ¿ ■

11 □ I

S'a і > a » <t> ■■■■■ +

I \лл

Jtg

? f

]

ШШШШШ-::.

» ;.. ■■■ ;.■ : ■ ' . g ь o .va.

E * 1 > : . * . ■ ' ■ № » 1 1 і ■ '

Ö". • ' ' ' л ■ ¿r - Г j 4 -, ■ If : ' - - í, 1' ■■ 1 V : ;.

0 ' K-BO ДИСКОВ С C+++, % " • P ® m •

' м . ' ' , Ж з

' З ñ í1

Js a. *

г

|| " . ;. g-J E: \. ; •

M: "v - ^ 1-і

'І

"'ft

a 9=ís v

w

-> : Й - ™

r - .• • •i l

a § о'- , S • '

•Ç>

S3 •. • • • J «g f •

■ . S I Vі ' ' V-

tu,

-'■"■. v ; w

юс взаимодействия с индукторами гриба и клетками растения-хозяина^ ' г ". ., Подоенные -результата - согласуются с данными Метлищого к сотр.(1379),.обнаруживших в составе клеточных стенок.Р.Infeatsae j С а; его ваделаших'присутствий веществ препятствувдих включению . V защитных реакций у картофеля. _Наличт этих метаболитов отражало *,: специфику - взаимоотношений различных сортов картофеля,и различных '.;. рао' паразита. По мнению этих авторов молекулы "фактора сиецифич- ; _ ности" проникает в клетку картофеля еще до, того, как гифа гриба ^приходит, в контакт с цитоплазматичеосой мембраной картофеля. При " " этоы цронсходит - сшдулацая фактором определенных участков на меи-бране картофеля,"^которые сдужат рецепторами для молекул шадукто--ров фитоалекеинаГНа рисунке 4 предлагается гипотетическая схе-», ' :ма: взаимодействия специфического фактора совместимости (ФС) я ан;' дукторов нз1шшлия Р.1а£вв*аав с рецепторами на мембране рас-тителънойклеткн.-внтекапяая из вышеприведенной гипотезы и данных :*наших' опытов;,,Согласно этоф. схеме внутри ива поверхности мицелия ■ -фитофторы находятся различные вещества (гдгкаиы, глшо- и маннан-содержащие протеада и др.) ивдуцируппие с разной активностью сан- тез ришитина. Некоторые из них выделяется в среду, где растетгриб яоэтоцу аксудат ойвадается индуцируквдей активностью (рис. 4 А),

- раствор, обладающий большой ионной склой (например К+ С1~), вызы-. вает плазыолвз - совращение мембраны и потерт некоторых сіелков, локализованных на мембране ж в периплазме. В результате этого; наряду,' с находящимися там индукторами в 'среду" выходит; ФС, который*

; соединяется, о мембраной хозяина и экранирует участки, служащие ре--Г. цепторами для индукторов ришитина (рис Г 4 В). При поранении, а также прі заражении растений в жх тканях происходят существенные ■ изменения в метаболизма полифенолов. По данным многих исследователей- (рубин,' Арщсрвская, 1968; Tomiyama, 1963; їгеіші «t al.,

- : 1971) в несовместимых комбинациях паразита я хозяина накопление

.--.;■/.:. в.-

екстракт ткани .: едуоіЗеля '

. осмотический шок К+ сі-

после шока и удале-'/НИЯ шоковой жидкости , , экстракт ткани ^ -" картофеля . ( -

• • Д. -.

ляагмоявз

' 1'с^овнне обозначения:

; йЯЕі. . _ • индукторы ришитяна. ■

~ разной активности (ИР) .

- факторі совместимости - (ФС) : - плазмалекма картофеля /

">' ■ рецептор «С I. .

: рецептор ИР Н :.;,.. .;■-;

. -клеточная стенка гриба.

/ ■ ; плазмалемма гриба /

лГипотетическая .схема вэаииодействга :штаболитов "■ ■'"-ч Р'Ш^евігапвіс рецеїітораііи клеток картофеля -' ■'■■V.'-'' (объяснения в тексте) . .

г* -> • - '• •

н окисление фенольних соединенна происходит более интенсивно, чей. в совместимых.'- Накапливавшиеся фенольнне соединения не достиг«]» токсической* концентрации доя мицелия фитофторы, но способны нзмэ-нять проницаемость клеточных мембран паразита (Метлицкий, 1976). .Возможно, вследствии такого изменения под влиянием экстрактов тка-■ ни картофеля в среду роста гриба переходят не только поверхностные, но и находящиеся более глубоко в цитоплазме индукторы фито- , ; алексина (рис. 4 Б). .Соотношение концентрации индукторов к

- обусловливает интенсивность индукции ришитива ексудатами под вял— ; янием экстрактов картофеля. Вели мицелий предварительно подверг' нуть осмотическому току, а . затем удалить шоковую -жидкость, , то ' в '

экстракт ткани картофеля из мицелия перейдут только наиболее ак- ' ■ . тивные внутриклеточные индукторы, которые и вызываю высокий уро- " векь образования-ришитина вклубнях. (рио. 4 Г). " ' '

Г > Таким образом» исход взаимоотношений хозяина и паразита при заражении картофеля P.iufesteoa; согласно приведенной схеме будет Зависеть от преобладания контактов рецептор ,— ФС или рецеп- .

- .торИ -. индуктор при мозаичном расположении рецепторов на мембране. -' Предложенная вами схема объясняет подученные данные о том, что "

под, влиянием, плазмолизирущю: растворов s алубшве развивается не- .совместимая реакция в ответ на заражение вирулентной расой P.infee-tene". При плазмолизе на шазмадемме могут маскироваться участки, , играющие роль рецептаров для ФС (рис. 4 Д). Не исключено .также, ' что отсутствие"внедрения гиф гриба в протопласты картофеля также ... J обусловлено подобным преобразованием шеазмаяеммы клеток растения_

■ В Ы ВОДЫ-. '■;'■'■

V Определены оптимальные условия получения и культивирова-

- : ния изолированных протопластов картофеля с цель» их характеристик

ки как модельной системы для изучения расо-сортовой специфичное- ; / . ти во-взаимоотношениях с Р.infestaría. ' І ,

Ж:-*-.

'' - \ Г

, Эти особенности следующие:» ' " ' -:■

а) гифа гриба.не'шёзфяетса'в взолированшЛ протопласт", вероятно, из-за отсутствия клеточной стенки' или изменений, вызван--V ^ визе плазмолизом на 'мембране; -'. Д • '.; ■' Д;

б) расонеспецифические индукторы фитоалекеша ришитина из ;■„; мицелия - оказнвавт неспецифичесвое токсическое действие на протопласты картофеля, более сальные грибные индукторы ;-'- .'

. ришитина более токсична для'протопластов картофеля; Гл

в) щелочные. экстракты клеточных. отенок' гриба неслеаифично подавюиот ре гене рацию, клеточной стенки -протопластами картофеля • " • • и активируют.поглощение кислорода; : ' .V ;

■'.'_' г) нек выявлена "способность изешгровашшх протопластов сш-" > тезировать ришитин в ответ на действие индукторов этого фито- • 'алексина,. 'У ~ ■■-'-' ■"': ■ ■ ^

2. В присутствии тшазмолизируодях растворов клетки воспри- "• нмчивых растений в ответ на заражение ^отофторой дают сверхчув- . :. " ■ > ; ствитвлъный не^оз^ превращая тем самнм совместимую комбинацию : . : паразита и хозяина в несовместимую. > :■ *■'- '

■ _ 3, Слабо проникающий в клетки осмотический раствор маннита" - > ^вызывает усиление синтеза ришитина■шшзмолизированными клетками-./ : ' клубней, хорошо проникащие растворы сахарозыи хлористого ка- - ' " -лия уменьшают образование фитоалексина. ' ' Г.-.

'4. Ацетоновые и спиртовые экстракты ткани картофеля - содер- _ *' жат термостабильше Метаболиты,' способные' стимулировать выход -- :; ;-.■; индукторов ришитина ИЗ мицелия ГрЕба. ■' ■■ .', "" ; ' : , у

5. Штаболитн из зарааенных-тканей более, эффективно стиму- ; лируют выход индукторов ришитина из мицелия, чем из незаражен-;'ных, а из зараженных несовместимой расой более эффективно,5 чем •; . '' т'. из зараженных совместимой. ;' .* • .., Л* ' " }'. --..Д. - '>■:■

'.>":' • у; •, 2з.;': ••"•• -у *• -уЧЧ^^.-уу^-А--^

•.. 6. Осмотическим шоком из мицелия'вирулентной расы „У-

.-У У'/-" ЛапвУувыделен'специфический термолабильный фактор, способный "

ослаблять.устойчивость тканей: уменьшать индукцию ришитина ^ У V '/.. ' клубнюс ^картофеля ! и усиливать спороношение при заражении картофе- ^ ' .-у -у : ля фитофторой. -" . - ,.

• V ' '7. Специфический фактор вирулентности ингибирует активность '

.';: лишь поверхностных индукторов ришитина и не уменьшает индукцию ' . - ' ришитина гомогенатом мицелия. V

' V ■' Список1 опубликованных работ '• -у . : •

■.:-Г.-- -г ^; '/-"''V—- - ■ ■'. ■. ■-;.■'.

; . :■ ■■ - X.. Окороков Л.А., Сысуев В.А., Терехова В.А.' и Дьяков,Ю.Т. V

У,-' \ Влияние ионов кальция на рост ЕЬ^орЫЛюга евЪелв (Мопс.)й ВТ. у ..

Уу^ЧЫииодогия и $втопатология. 1976,-т. 10, Л б * ■ : • ... .

- " ■ - 2. Сысуев В.А., Коношенко Г.И., Терехова В.А., Окороков Л.А., .: у.

• '^ггДьяков Ю.*Т.» :Кулаев И.С. Фосфогидролазы фитопатогенного гриба - :

-ч - 'РЬу$орШк>га 1а*вв«а«в (М01Л,)с1е Ву. Ьгохимия, 1978, т.43, й 10 - у

у- . , 3. Дьяков.Ю.Т., Терехова В.А., Радзиевская М.Г. Взаимоотношег- ' у*

■ ~ г ^ НИЯ возбудителя фитофгороза ЕЬуЬорЬйюга 1д£«8Ъап9 (иотЪ*)йв'Ваг7

' ". с протопластами мезофилла картофеля. Микология и фитопатология. ~г * • :■

'У'!;/-7 ?197Э;'Т; 13, у. _ . .*■ -у . :яу V ^

у У .-;', 4.' Терехова.В.А., Дьяков Ю.Т, Влияние плазмолизируодих раотво-1

- , . : ; ров на взаимоотношенкя клубней 'картофеля Пч^орь^ога 1л£ев*аюа : ■ :

■ У * У ^ (Иоп-ь. >4в Вату »Вестник Московского университета, серия биология.

: • 1979,/*^3 - - - • - '

. ^ У 5. Терехова В.А., Мустафа М., Дьяков Ю.Т. Влияние метаболи-

. . "тов клубней картофеля на индукцию в них фитоадексша ришитина грй- ■ у-;

;.;.'г бом; РЬ^орЛШога , (Мап*.); йе^Вагу.^ - . Биологические нау-"

У• кй. .1980, *2. У • " • -Г;,'Л-;- "" /у

"-••'/' у иу . ; Д-

■ ^ ; - г- ;

-А, - . .

J ' -j . -1 ■', ■ . ■ H S .

,-Л і:'.-;.-.' '. ■ ■ і ' ■ * '

І ' '

" 4 і

, • Подо, к псяатн fojtu-йл,VW Ф,• ■.■.■;■ v; ■ Vr

; 4 Буи. tan. M : - Ч'.'Г: Фи. n. J.: Уч. au. » К ■■■'■■' ' .

, Тараж /Л' " .■ ; •:■.■..'■ \ ' '

% \ • - ' Иэд-ïo Москоккого унваерситем. Моекм, К-9.

-=>•* ;

І ' Тиогріфвя Илд-ві МГУ. Мосгва.Леягоры

É-г-'.

.л4:" ,..