Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение адипокинов и полиморфизма генов, регулирующих обмен липидов у больных с ожирением

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изучение адипокинов и полиморфизма генов, регулирующих обмен липидов у больных с ожирением"

На правах рукописи

Черняк Ольга Олеговна

ИЗУЧЕНИЕ АДИПОКИНОВ И ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ, РЕГУЛИРУЮЩИХ ОБМЕН ЛИПИДОВ У БОЛЬНЫХ С ОЖИРЕНИЕМ

03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005555975 27 НОЯ 2014

Москва - 2014

005555975

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт питания»

Научные руководители: доктор медицинских наук, академик РАН, профессор Тутельян Виктор Александрович

доктор медицинских наук, профессор Сенцова Татьяпа Борисовна

Официальные оппоненты: Панченко Леонид Федорович

доктор медицинских наук, академик РАН, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный научный центр наркологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий лабораторией биохимии; Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», заведующий лабораторией молекулярных основ болезней зависимости.

Кушлинскии Николай Евгеньевич

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАН, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой клинической биохимии и лабораторной диагностики; Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина», заведующий лабораторией клинической биохимии

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н.Ореховича»

Защита состоится « 22 » декабря 2014 г. В 16-00 ч. на заседании Диссертационного совета Д.001.002.01 при ФГБНУ «НИИ питания» (109240, г.Москва, Устьинский проезд, д.2/14)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «НИИ питания». Автореферат разослан «. IL» UjC\3jCT.ul- 2014 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Коденцова В.М.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы

В настоящее время ожирение представляет собой актуальную медико-социальную проблему. По данным Российского мониторинга экономического положения и здоровья населения в 2011 году среднее значение индекса массы тела (ИМТ) среди взрослого населения России составило 25,06. По сравнению с 2001 годом этот показатель вырос на 23,5% (Тутельян В.А., Батурин А.К. 2103). Экономические исследования, проведенные в период с 1990 по 2009 годы показали, что затраты на лечение ожирения и сопутствующих ему заболеваний составляет 0,7% и 2,8% от общих расходов на здравоохранение (Vajro Р., Lenta S., Socha Р., et al. 2012). Ожирение - доказанный фактор риска развития инсулинорезистености, сахарного диабета 11-го типа, заболеваний сердечно-сосудистой системы, неалкогольной жировой болезни печени и некоторых видов онкологических заболеваний (Дедов И.И., Мельниченко Г.А, 2004).

Благодаря развитию биологических наук в последнее десятилетие доказано, что выявление генетического риска имеет важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению ожирения, а также ассоциированных с ним заболеваний (Дедов И.И., Тюльпаков А.Н., Чехонин В.П. 2012). Вместе с тем, сложность прогноза и расчета риска развития ожирения как мультифакторного заболевания, связана с различной степенью реализации наследственной предрасположенности и факторами внешней среды (Романцова Т.И. 2011).

В частности, остаются недостаточно изученными методологические подходы к использованию результатов геномных и постгеномных технологий у больных с ожирением. На сегодняшний день в клинической медицине проводятся многочисленные исследования по выявлению «генов-кандидатов», структурные изменения которых могут рассматриваться как возможные факторы, определяющие предрасположенность к развитию дислипидемии и ожирения (Дедов И. И., Мельниченко Г. А. 2006). Кроме того, анализ клинических работ по изучению генной регуляции липидного обмена у больных с ожирением показал чрезвычайную сложность механизмов белково-метаболических взаимодействий, что определяет трудности в проведении диагностики (Батурин А. К., Сорокина Е.Ю., Погожева A.B., Тутельян В.А. 2012).

Несмотря на значительные успехи в выявлении факторов, регулирующих энергетический обмен у больных с ожирением, ряд вопросов, касающихся диагностического значения протеомных и метаболомных биомаркеров при различных полиморфных вариантах гена АроЕ и LPL у больных с ожирением, остается недостаточно изученным. В связи с этим, особую актуальность приобретает усовершенствование методов диагностики и подходов к

3

персонализированной диетотерапии, применение которой неэффективно без данных геномных и постгеномных исследований.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР ФГБНУ «НИИ питания» в рамках тем №121 «Критерии клинико-иммунологической диагностики и индивидуализация комплексной терапии у больных с ожирением», №133 «Разработка системы биомаркеров нарушения метаболизма и персонификация дието- и фармакотерапии при ожирении у детей и взрослых», №135 «Разработка системы диагностики, мониторирования и коррекции нарушений питания у детей и взрослых на популяционныом и индивидуальном уровнях с целью профилактики неинфекционных заболеваний», №138 «Разработка инновационных технологий персонализированной диетотерапии для больных с хроническими заболеваниями печени различной этиологии».

Целью исследования явилось изучение адипокинов и полиморфизмов 5ег447Тег гена ЬРЦ СуБ1\2кт% и А^158Суз гена АроЕ у больных с ожирением.

1.2 Задачи исследования:

1. Выявление взаимосвязи полиморфных аллелей Сук 112Аг0, Аг§158Сух гена АроЕ и 5ег447Тег гена 1_РЬ с развитием ожирения.

2. Выявление геномных, протеомных и метаболомных предикторов развития атеросклероза и неалкогольной жировой болезни печени у больных с ожирением.

3. Исследование содержания адипокинов и маркеров воспаления у пациентов с ожирением при различном индексе массы тела.

4. Оценка эффективности диетотерапии при нарушении липидного обмена у больных с ожирением при наличии различных полиморфных вариантов генов АроЕ и ЬРЬ.

5. Обоснование целесообразности определения полиморфизмов Суз112А^, А^158Су8 гена АроЕ и 8ег447Тег гена ЬРЬ, уровней цитокинов и адипокинов для диагностики и проведения персонализированной диетотерапии у больных с ожирением.

1.3 Научная новизна

Впервые проведено изучение полиморфных аллелей Су5112А^, А^158Суз гена АроЕ и 5ег447Тег гена 1_РЦ содержания адипокинов и цитокинов у больных с ожирением с последующим обоснованием их использования в диагностике у больных с ожирением.

Доказано, что при выявлении полиморфного аллеля А^158Суз (¿2) гена АроЕ в большей степени увеличивается риск развития ожирения, чем при наличии аллелей Суэ112А^ (е4) и еЗ.

Впервые определено диагностическое и прогностическое значение выявления у больных с ожирением и атеросклерозом генотипа е2/е2/еЗ гена АроЕ, повышения концентрации окисленных липопротеинов низкой плотности, Ь-ИАВР, ИЛ-6, й1САМ и снижения уровня адипонектина. Выявлены такие предикторы развития неалкогольной жировой болезни печени у больных с ожирением, как генотип еЗ/еЗ/е4 гена АроЕ, увеличение синтеза Ь-ЕАВР, окисленных липопротеинов низкой плотности и снижение концентрации адипонектина.

Впервые показана взаимосвязь полиморфных вариантов СуБ112А^, А^158Су5 гена АроЕ и 5ег447Тег гена ЬРЬ с вариабельностью уровней адипокинов и иммунологических маркеров воспаления у больных с ожирением.

Проведен метаболомный анализ у больных с различными степенями ожирения. Впервые показано, что максимально выраженные изменения протеомных и метаболомных биомаркеров диагностируется у пациентов с двумя и более нуклеотидными заменами в генах АроЕ и ЬРЬ.

Установлено положительное влияние на показатели липидного обменов использование гипокалорийной диетотерапии у пациентов с генотипами еЗ/еЗ, е2/еЗ гена АроЕ и 5ег4475ег гена ЬРЬ. Доказана перспективность использованного геномного, протеомного и метаболомного анализов в осуществлении принципов персонализированной диетотерапии.

1.4 Практическая ценность

Анализ клинической картины и изучение полиморфизмов Су5112А^, А^158Су5 гена АроЕ и 5ег447Тег гена ЬРЬ дает возможность определить вероятность развития ожирения и сопутствующих заболеваний, таких как атеросклероз и неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП).

На основании определения полиморфизмов 8ег447Тег гена ЬРЬ, Аг$158Сув (е2) и Суя112Аг«158 (е4) гена АроЕ, уровней адипокинов и цитокинов в крови разработаны диагностические и прогностические тесты, применение которых позволит повысить эффективность профилактических мероприятий у лиц с избыточной массой тела и персонализировать диетотерапию у больных с ожирением.

Предложенный методологический подход к диагностике больных с ожирением рекомендуется для внедрения в работу стационаров диетологического и терапевтического профиля. Результаты работы внедрены в практическую деятельность отделения профилактической и реабилитационной диетологии Клиники ФГБНУ «НИИ питания».

1.4 Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века» (Москва, 2012); The European Academy of Allergy and Clinical Immunology Congress (Geneva ,2012); XIV Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» с международным участием (Москва, 2012); 20th European Congress on Obesity (Liverpool, 2013); 20th International Congress of Nutrition (Granada2013); 21th European Congress on Obesity (Sofia2014); The European Academy of Allergy and Clinical Immunology Congress (Milan, 2013); The European Academy of Allergy and Clinical Immunology Congress(Copenhagen, 2014); XV Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов с международным участием (Москва, 2014).

1.6 Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России.

1.7Личный вклад соискателя

Планирование, организация и проведение исследований, работа с методами иммуноферментного анализа, полимеразной цепной реакции, спекгрофотомерии, статистическая обработка полученных данных и их интерпретация проведены непосредственно самим соискателем.

1.8 Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 124 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка сокращений, указателя литературы, включающего 180 источников, из них 97 отечественных и 83 зарубежных авторов, содержит 21 таблицу и 10 рисунков.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Было обследовано 242 пациента в возрасте от 18 до 66 лет. В основную группу

включены 217 больных (52 мужчин и 165 женщин), находившихся на лечении в отделении

профилактической и реабилитационной диетологии ФГБНУ «НИИ питания» (зав.отделением - к.м.н. Гаппарова К.М.). Группу контроля составили 25 практически

6

здоровых лиц в возрасте от 7 до 57 лет (11 мужчин и 14 женщин), посещавшие Клинику ФГБНУ «НИИ питания» с целью диспансерного обследования.

Всем больным проводили физикальное и антропометрическое исследование: определяли рост, масса тела с последующим расчетом индекса массы тела (ИМТ) по формуле: ИМТ (кг/м2) = масса тела (кг) / рост2 (м)

На основании ИМТ все больные были разделены на 3 группы: 1-ю группу составили больные с I степенью ожирения (п=55), 2-я группа - больные с II степенью ожирения (п=70), 3-я группа - больные с III степенью ожирения (п=92) (таблица 1).

Таблица 1

Сравнительная характеристика больных с различными степенями ожирения (М ± т)

Показатель I II III

Возраст 36,74 ±2,24 41,68 ± 1,99 39,43 + 1,53

Масса тела, кг 89,71 ± 1,38 104,5 ± 1,44 138,80 ±3,53

Индекс массы тела, кг/м2 32,44+ 0,22 37,49± 0,18 46,90± 0,93

Соотношение ОТ/ОБ 0,86 ±0,02 0,97 ±0,01 1,01 ±0,02

Жировая масса, кг 38,32 ±1,09 48,23 ±0,83 68,56 ± 2,25

Масса висцерального жира, кг 13,44 ±0,38 18,16 ± 1,74 20,10 ±0,76

Оценка состояния сердечно-сосудистой системы проводилась в отделении сердечнососудистой патологии Клиники ФГБНУ «НИИ питания» (зав.отделением - к.м.н. Богданов А.Р.) и включала определение показателей кардиограммы с помощью аппарата Schiller АТ-2 plus (Германия), данные эхокардиографии, полученные с помощью ультразвукового аппарата Vivid 7 («General Electric», США). На основании выявленных результатов, была выделена группа больных со II-III степенями ожирения (п=73), осложненного атеросклерозом.

В ходе динамического наблюдения на базе отделения гастроэнтерологии и гепатологии Клиники ФГБНУ «НИИ питания» (зав.отделением - д.м.н. Исаков В.А.) больным с ожирением проводили ультразвуковую эластографию и стандартное ультразвуковое исследование печени с использованием приборов «Echosenes» и ProSound 5500 SV фирмы «Aloka». На основании полученных результатов обследования были выделены 22 больных со П-Ш степенями ожирения, осложненного неалкогольной жировой болезнью печени.

Методы исследования

Молекулярно-генетические. Единичные нуклеотидные полиморфизмы (SNP) Cysll2Arg (е4), Argl58Cys (с2) в гене АроЕ и Ser447Ter в гене LPL выявляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме «реального времени», при котором

проводится мониторинг и количественный анализ накопления продуктов ПЦР, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов.

Выделение геномной ДНК из цельной крови проводили с использованием реактива «Проба-Рапид-Генетика» фирмы «ДНК-технология» (Россия). В основе метода экстракции ДНК лежит способность органического детергента лизировать клетки крови и их ядра, инактивировать ингибиторы и клеточные нуклеазы.

Генотипирование образцов осуществляли с использованием наборов фирмы «ГосНИИ генетика» (Россия), микропробирок фирмы «Greiner bio-one» (США) и детектирующего амплификатора «ДТ-96» фирмы ДНК-технология» (Россия). В процессе амплификации проводили детекцию продуктов ПЦР по наличию флуоресценции и качественный анализ, сопоставляя кривые накопления продукта в исследуемых образцах с охарактеризованными стандартами.

Биохимические. Для исследования состояния углеводного и липидного обменов использовали фотометрические методы детекции изучаемых биохимических маркеров по спектрам их светопоглощения.

Определение уровней общего холестерина (ХС), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), трилицеридов (ТГ), аполипопротеинов А и В (АпоА и АпоВ) проводили на биохимическом анализаторе Konelab 60i (Финляндия) с использованием тест-систем фирм «Vital Development Corporation» (Россия) и «Thermo Scientific» (Финляндия).

Фотометрический блок прибора представлен одноканальным фотометром с интерференционными светофильтрами, в котором используется принцип референсного расщепления луча. Диапазон спектра измерения - 340-800 нм. Анализ образцов проводили в кинетическом, турбидиметрическом режиме и по конечной точке.

Для оценки результатов применяли линейную, нелинейную калибровку и калибровку со смещением, а также с использованием отдельных образцов стандарта (калибратора).

Иммунологические.

Содержание адипокинов. Определение концентраций адипонекгина, грелина, резистина, апелина, висфатина осуществляли методом непрямого иммуноферментного анализа с использованием специфических биотинилированных антител, входящих в состав наборов реактивов фирм «BioVender R&D» (Чехия), «Peninsula laboratories LLC» (США), «Phoenix Pharmaceuticals Inc» (США) и «RayBio» (США).

Содержания цитокинов и молекул адгезии. Изучение уровней ФНО-альфа, ИЛ-1альфа, sICAM, CRP, ИЛ-6 проводили методом неконкурентного иммуноферментного

анализа с использованием коммерческих наборов фирм «BioSource International Inc» (Бельгия), «Invitrogen» (США).

Содержания белков, регулирующих обмен липидов и маркеров апоптоза. Для исследования содержания аннексина V, белка-транспортера жирных кислот L-FABP, окисленных ЛПНП (oxLDL) и МДА-модифицированных окисленных ЛПНП (MDA-oxLDL) применяли конкурентный иммуноферментный анализ с использованием биотинилированных моноклональных антител и ферментного конъгогата - стрептавидин-биотин-пероксидазы, входивших в состав наборов реактивов фирм Biomedica GruPPE» (Австрия), «Cusabio biotech LTD» (Китай) и «BioSource International Inc» (Бельгия).

Для учета результатов и построения калибровочной кривой использовался вертикальный спектрофотометр Sunrise фирмы «ТЕСАМ»(Австрия) с прилагаемым программным обеспечением.

Статистическая обработка данных выполнена с помощью электронных таблиц «Microsoft Excel» и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» v. 6.0, Stat Soft Inc. (США), SPSS 13.0. Для каждого количественного параметра были определены: среднее значение (М), среднеквадратическое отклонение (5), ошибка среднего (ш), медиана (Me), 25% и 75% квартили, 95% доверительный интервал, для качественных данных - частоты (%). Для сравнения числовых данных использовали t-критерий Стъюдента для 2-х независимых выборок. Для сравнения непараметрических данных применяли критерий Манна-Уитни (для 2-х групп) для несвязанных совокупностей. Для нахождения различий между качественными показателями использовали метод %2 с поправкой Йетса на непрерывность, для вычисления, которого прибегали к построению сетки «2x2» и «3x2», а также точный критерий Фишера для небольших выборок. Связь между изучаемыми показателями оценивалась по результатам корреляционного анализа с вычислением коэффициента корреляции Пирсона (г) или Спирмена (R). Частоту аллелей вычисляли по формуле: f=n/2N, где п - количество раз встречаемости аллеля (у гомозигот он учитывался дважды).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Изучение аллельных полиморфизмов генов АроЕ и LPL у больных с ожирением

При исследовании частоты встречаемости полиморфизма Argl58Cys (с.526 С>Т; е2)

гена АроЕ у больных с ожирением установлено, что частота генотипа еЗ/е2 гена АроЕ у

больных с ожирением составляла 19,4%, в то время как у здоровых индивидов данный генотип встречался с частотой 4,0%. Кроме этого, генотип е2/е2 (Т/Т) АроЕ у больных с

ожирением был представлен в 18% случаев, в то время как в контрольной группе данный генотип не был обнаружен (X2 =11,23; р=0,004). Доказано, что частота встречаемости

9

полиморфного маркера е2 гена АроЕ была статистически достоверна выше по сравнению с контрольной группой (X2 =15,73; р<0,001), что указывает на существенное значение данного полиморфного локуса в развитии ожирения (Таблица 2).

Таблица 2

Распределение частот полиморфизмов генов ЬРЬи АроЕ у больных с ожирением

Генотипы и аллели Больные с ожирением Контрольная группа X2 Р ОЯ (95% со

Абс. Частота Абс. Частота

Полиморфный локус А^158Сув (с.526С>Т) гена АроЕ

ас (еЗ/еЗ) 136 0,627 24 0,960 11,23 0,004 0,07 (0,01-0,53)

С/Т (еЗ/е2) 42 0,194 1 0,040 5,76 (0,76-43,79)

ТТ (е2/е2) 39 0,180 0 0,000 11,29 (0,67 - 189,35)

N=217 N=25

С (еЗ) 0,724 0,980 15,73 0,00007 0,05 (0,01-0,39)

Т (е2) 0,276 0,020 18,73 (2,56-137,13)

Большой интерес представляет оценка риска развития ожирения у носителей различных генотипов. Так, при генотипе еЗ/е2 (САГ) гена АроЕ риск развития ожирения был в 5,69 раз выше, а при генотипе е2/е2 (Т/Т) в 11,22 раза выше по сравнению с носителями генотипа еЗ/еЗ (С/С). Проведенное исследование показало, что аллель е2 значительно увеличивает риск развития ожирения в случае гомозиготного носительства.

Сравнительный анализ распределения генотипов и аллелей полиморфного варианта СувША^ (с.388Т>С; е4) гена АроЕ и 5ег447Тег гена ЬРЬ (с.1595С>С) у больных с ожирением по сравнению с контрольной группой не дал статистически достоверных результатов (р>0,05).

Таким образом, впервые получены новые данные, свидетельствующие о том, что риск развития ожирения в российской популяции ассоциирован с носительством полиморфизма Агё158Су8 (с2) гена АроЕ (СЖ=18,73; 95% С1 [2,56 - 137,13]). На основании исследования 217 больных с различной степенью ожирения доказано, что носительство гетерозиготного генотипа е2/еЗ гена АроЕ увеличивает риск развития ожирения в -6 раз (95% С1 [0,76 -43,79]), а гомозиготный генотип е2/е2 гена АроЕ увеличивает риск развития ожирения в -11 раз (95% С1 [0,67 - 189,35]) по сравнению с генотипом еЗ/еЗ (95% С1 [0,01 - 0,53]).

3.2 Характеристика геномномных, протеомных и метаболомных маркеров и оценка их диагностического значения у больных с ожирением и атеросклерозом

Сравнительный анализ уровней адипокинов, цитокинов, показателей липидного и углеводного обменов выявил достоверное увеличение содержания глюкозы, холестерина, триглицеридов, охЦЗЦ апелина, ИЛ-6, 51САМ, Ь-РАВР и снижение содержания адипонектина у больных с П-Ш степенями ожирения, осложненного атеросклерозом по сравнению с группой больных с I степенью ожирения (таблица 3).

Таблица 3

Протеомные и метаболомиые маркеры у больных с ожирением и атеросклерозом

(М±м; Me (Qi, Q3))

Показатель Больные с I степенью ожирения (п=50) Больные со П-Ш степенями ожирения и атеросклерозом (п=73) Р

Глюкоза (ммоль/л) 4,99+0,16 5,72+0,21 <0,05

ХС общий (ммоль/л) 4,62+0,11 5,39+0,16 <0,05

ТГ (ммоль/л) 1,13+0,06 1,74+0,11 <0,05

лпвп (ммоль/л) 1,31 ±0,06 1,25±0,05 >0,05

лпнп (ммоль/л) 2,94+0,10 3,29+0,16 >0,05

oxLDL (мЕ/мл) 18,01 (0,48; 27,67) 89,97 (22,29; 217,5) <0,05

L-FABP (пг/мл) 9,39 (3,58; 13,40) 11,95 (6,78; 26,08) <0,05

Адипонектин (мкг/мл) 4,07 (2,07; 5,13) 1,79 (1,36; 3,20) <0,05

Грелин (пг/мл) 40,26 (14,20; 113,70) 24,88 (2,18; 142,5) >0,05

Резистин (нг/мл) 1,89 (5,44; 10,42) 3,03 (5,05; 9,06) >0,05

Апелин (нг/мл) 1,67 (0,75; 3,25) 2,46 (1,59; 4,02) <0,05

Висфатин (нг/мл) 9,15 (2,25; 22,45) 10,63 (3,70; 32,32) >0,05

sICAM (нг/мл) 71,88 (32,17; 117,00) 94,74 (73,58; 183,90) <0,05

CRP (нг/мл) 6384 (2447; 9990) 6355 (3448; 10820) >0,05

ИЛ-6 (пг/мл) 3,74 (2,71; 5,38) 5,25 (3,61; 9,20) <0,05

ФНОа (пг/мл) 5,72 (2,39; 8,89) 4,78 (2,92; 7,36) >0,05

ИЛ-1а (пг/мл) 14,02 (7,48; 25,97) 10,17 (7,69; 15,78) >0,05

Проведенное исследование показало, что у больных с ожирением с генотипом е2/е2/еЗ гена АроЕ были снижены концентрации адипонектина и общего холестерина и повышено содержание эГСАМ, ИЛ-6, триглицеридов, окисленных ЛПНП (ох!ЛЗЬ) и Ь-БАВР по сравнению с носителями генотипа еЗ/еЗ/еЗ, что свидетельствует о проатерогенном характере липидного профиля (рисунок 1). Анализ полиморфизма гена УРЬ выявил достоверные различия в содержании резистина. Однако достоверных изменений адипокиновго и цитокинового статуса, а также липидного профиля выявлено не было.

IVÍ-6 (пг/ил)

Рисунок 1. Протеомные и метаболомные маркеры у больных с ожирением и атеросклерозом при различных полиморфных вариантах генов АроЕ

Известно, что oxLDL вызывают повреждение клеток эндотелия, стимулируют моноциты, подавляют обратный транспорт макрофагов в кровеносное русло и инфильтрируют стенки кровеносных сосудов (Буеверова Е.Л., Драпкина О.М., Ивашкин В.Т. 2008; Гуревич B.C. 2006).

Доказано, что адипоциты способны синтезировать значительное число регуляторных молекул, таких как провоспалительные цитокины ФНОа и ИЛ-6. При генотипе е2/е2/еЗ увеличивается синтез молекул адгезии и цитокинов, что может способствовать развитию воспалительного процесса в сосудистой стенке.

Таким образом, сравнительный анализ проатерогенных биомаркеров у больных с ожирением и атеросклерозом выявил, что у носителей гомозиготного генотипа е2/е2/еЗ гена АроЕ достоверно увеличивается содержание триглицеридов (на 47%), окисленных липопротеидов низкой плотности oxLDL (на 390%), ИЛ-6 (на 51%), sICAM (на 201%), L-FABP (на 177%) и снижается уровень адипонектина (на 51%), что позволяет отнести их к клинически значимым предикторам атеросклероза.

3.3 Характеристика геномномных, протеомных и метаболомных маркеров и оценка их диагностического значения у больных с ожирением и неалкогольной жировой болезнью печени

Сравнительный анализ уровней адипокинов, цитокинов, показателей липидного и углеводного обменов у больных со Н-Ш степенями ожирения, осложненного неалкогольной жировой болезнь печени, выявил достоверное увеличение содержания глюкозы, триглицеридов, ФНОа, Ь-БАВР и снижение содержания адипонектина по сравнению с группой больных с I степенью ожирения (таблица 4).

Таблица 4

Протеомные и метаболомные маркеры у больных с ожирением и НАЖБП

(М+м; Ме (}з))

Показатель Больные с I степенью ожирения (п=50) Больные со П-Щ степенями ожирения и НАЖБП (п=22) Р

Глюкоза (ммоль/л) 5,32+0,09 5,87+0,32 <0,05

ХС общий (ммоль/л) 5,14+0,09 5,58+0,21 >0,05

ТГ (ммоль/л) 1,75+0,15 2,99+0,90 <0,05

ЛПВП (ммоль/л) 1,28+0,03 1,21+0,08 >0,05

ЛПНП (ммоль/л) 3,30+0,08 3,41+0,20 >0,05

охЬГЗЬ (мЕ/мл) 32,24 (8,65; 118,60) 30,30 (0,40; 107,20) >0,05

Ь-БАВР (пг/мл) 8,79 (3,56; 12,28) 13,53 (11,62; 23,76) <0,05

Адипонектин (мкг/мл) 2,98 (1,89; 4,44) 1,57 (0,89; 3,21) <0,05

Грелин (пг/мл) 40,20 (9,17; 134,90) 32,80 (6,46; 157,10) >0,05

Резистин (нг/мл) 5,66 (2,63; 10,42) 8,00 (5,31; 12,98) >0,05

Апелин (нг/мл) 2,23 (1,02; 3,54) 2,56 (1,03; 4,21) >0,05

Висфатин (нг/мл) 2,42 (6,81; 17,66) 22,00 (2,46; 361,50) >0,05

в1САМ (нг/мл) 71,90 (36,46; 191,80) 96,66 (67,00; 151,60) >0,05

ИЛ-6 (пг/мл) 3,53 (2,69; 5,87) 5,06 (2,44; 14,53) >0,05

ФНОа (пг/мл) 4,69 (2,17; 7,47) 17,13 (14,88:30,11) <0,05

У носителей полиморфного маркера £2/еЗ/еЗ было выявлено сниженное содержание глюкозы, а у носителей гомозиготного генотипа е2/е2/еЗ гена АроЕ, кроме этого, установлено снижение концентрации адипонектина по сравнению с группой пациентов с генотипом еЗ/еЗ/еЗ.

У пациентов с ожирением и НАЖБП, у которых был выявлен генотип еЗ/еЗ/е4 гена АроЕ, обнаружено снижение уровней триглицеридов, глюкозы, адипонектина и увеличением содержания Ь-РАВР. Повышение концентрации Ь-РАВР связано, по-видимому, с тем, что в гепатоциты транспортируется высокая концентрация жирных кислот, образовавшихся в результате гидролиза триглицеридов. Избыточное поступление и накопление в гепатоцитах жирных кислот является доказанным фактором риска повреждения и стеатоза печени. Таким образом, достоверное увеличение концентрации Ь-РАВР опосредованно указывает на интенсификацию транспорта свободных жирных кислот в гепатоциты (рисунок 2).

Глюкоза (мыоль'л)

6,33

_ Больные с

I —1 генотнпом

Й/ЕЗ/ЕЗ

Больные с 1 . . . ~1 генотипом 2.07 ТГ ЕЗАЗМ

(ммоль/л)

4.04 Адипонестлн (мкг/ыл)

Рисунок 2. Протеомные и метаболомные маркеры у больных с ожирением и НАЖБП при различных полиморфных вариантах генов АроЕ

Полученные данные позволяют рассматривать наличие полиморфизма £3/еЗ/е4 гена АроЕ, снижение содержания глюкозы (5,18-5,68 ммоль/л), триглицеридов (1,62-1,66 ммоль/л), адипонектина (0,96-1,71мкг/мл) и увеличение концентрации белка-транспортера жирных кислот Ь-РАВР (26,75-79,72 пг/мл) в качестве предикторов развития неалкогольной жировой болезни печени у больных с ожирением.

3.4 Изучение содержания адипокинов у больных ожирением

Анализ содержания адипокинов у больных с I степенью ожирения не выявил достоверных различий по сравнению с контрольной группой (рисунок 3).

■ Адипонектин мкг/мл

ч Грелнн пг/ыл

*< Апелин нг/мл

II Резистин нг/мл

= Висфатин нг/мл

I степень П ожирения о>

II степень Щ степень Контрольная ожирения ожирения труппа

Рисунок 3. Содержание адипокинов у больных ожирением;* - Р<0,05.

Установлено, что у больных со II степенью ожирения концентрация адипонектина была ниже, чем в контрольной группе (1,52-4,48 мкг/мл и 3,46-6,90 мкг/мл; р=0,04). Сравнительный анализ уровней грелина, резистина, апелина и висфатина достоверных отличий не выявил.

При исследовании адипокинового статуса больных с III степенью ожирения было установлено снижение содержания адипонектина по сравнению с контрольной группой (1,68-3,70 мкг/мл и 3,46-6,90 мкг/мл; р=0,02). Исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что адипонектин является одним из ранних маркеров ожирения.

Проведенный корреляционный анализ выявил отрицательную взаимосвязь уровня адипонектина и ИМТ (г= -0,71; р=0,003).

Таким образом, на основании изучения уровней адипокинов установлена зависимость концентрации адипонектина от индекса массы тела, что позволяет рассматривать адипонектин в качестве одного из ранних маркеров развития ожирения. Поскольку реализация биохимических процессов при регуляции энергетического метаболизма происходит при участии различных адипокинов, то представляется целесообразным исследовать их в комплексе.

3.5 Изучение содержания цитокинов у больных с ожирением

Сравнительный анализ содержания цитокинов у больных с I степенью ожирения не выявил достоверных различий с контрольной группой. Установлено, что у больных со II степенью ожирения уровни адгезивных молекул sICAM и С-реактивного белка (CRP) выше по сравнению с контрольной группой (56,90-183,20 нг/мл и 30,41-80,65 нг/мл; р=0,05; 620112650 нг/мл и 3134-5170 нг/мл; р=0,04 соответственно).

Исследование цитокинового статуса у больных с III степенью ожирения позволило установить достоверное увеличение sICAM (57,91-209,60 нг/мл и 30,41-80,65 нг/мл; р=0,04) и CRP (8875-9973 нг/мл и 3134-5170 нг/мл; р=0,03) по сравнению с группой контроля (рисунок 4).

Корреляционный анализ выявил положительную взаимосвязь индекса массы тела с концентрациями CRP (г=0,56; р=0,04) и адгезивных молекул sICAM (г=0,62; р=0,03). Известно, что CRP представляет собой неспецифический маркер развития воспаления. Достоверное увеличение его концентрации при ожирении подтверждает гипотезу о связи дисбаланса иммунологических механизмов с изменениями энергетического метаболизма.

Рисунок 4. Содержание цитокинов у больных ожирением; *- Р<0,05.

При изучении цитокинового статуса у больных с ожирением с индексом массы тела свыше 35 выявлено достоверное увеличение концентраций таких неспецифических маркеров воспаления, как адгезивные молекулы бГСАМ (56,90-209,60 нг/мл; г= 0,62) и С-реактивный белок (6201-12650 нг/мл; г= 0,56), поэтому представляется перспективным использовать их в качестве маркеров в оценке иммунологических изменений у больных с ожирением.

3.6 Изучение содержания маркеров углеводного и пипидного обменов у больных с ожирением

Проведенное биохимическое исследование позволило установить, что у больных с I степенью ожирения по сравнению с контрольной группой были достоверно выше концентрации общего холестерина (5,18-5,52 ммоль/л и 5,00-5,28 ммоль/л; р<0,01), триглицеридов (1,35-1,63 ммоль/л и 0,97-1,27 ммоль/л; р<0,05), липопротеинов низкой плотности (3,23-3,49 ммоль/л и 2,93-3,35 ммоль/л; р<0,05) и окисленных липопротеинов низкой плотности (8,16-86,15 мЕ/мл и 0,17-0,50 мЕ/мл; р<0,05) (таблица 5).

Метаболомные показатели у больных с ожирением (М±м; Ме (Qi, Q3))

Глюкоза Общий ХС ТГ ЛПВП ЛПНП oxLDL

(ммоль/л) (ммоль/л) (ммоль/л) (ммоль/л) (ммоль/л) (нг/мл)

1. Больные с I степенью ожирения (п=55) 4,93+0,08 5,35+0,17 1,49+0,14 1,39+0,05 3,36+0,13 27,57 (8,160;86,15)

2. Больные со II степенью ожирения (п=70) 5,29+0,11 5,28+0,14 1,73+0,13 1,27+0,04 3,30+0,12 78,85 (6,46; 193,8)

3. Больные с III степенью ожирения (п=92) 5,72±0,14 5,06±0,12 2,05±0,24 1,16±0,03 3,19±0,10 30,14 (18,16;94,02)

Контрольная группа (п=25) 5,15+0,17 5,14±0,14 1,12+0,15 1,88+0,13 3,14+0,21 0,50 (0,17;0,50)

Р|-к >0,05 <0,01 <0,05 >0,05 <0,05 <0,05

Р2-к >0,05 <0,05 <0,05 >0,05 <0,05 <0,05

Рз-« <0,005 <0,05 <0,005 >0,05 >0,05 <0,001

Pl-2 <0,005 >0,05 <0,05 >0,05 >0,05 <0,05

Pl-3 <0,001 >0,05 <0,05 >0,05 >0,05 >0,05

Р2-3 <0,005 >0,05 <0,05 >0,05 >0,05 <0,05

В группе больных с П степенью ожирения выявлено увеличение концентрации общего холестерина (5,14-5,42 ммоль/л и 5,00-5,28 ммоль/л; р<0,01), триглицеридов (1,60-1,86 ммоль/л и 0,97-1,27 ммоль/л; р<0,05), ЛПНП (3,18-3,42 ммоль/л и 2,93-3,35 ммоль/л; р<0,05) и окисленных ЛПНП (6,46-193,80 мЕд/мл и 0,17-0,50 мЕ/мл; р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

При исследовании метаболомных показателей у больных с III степенью ожирения обнаружено увеличение содержания глюкозы (5,58-5,86 ммоль/л и 4,98-5,32 ммолъ/л; р<0,005), триглицеридов (1,81-2,29 ммоль/л и 0,97-1,27 ммоль/л; р<0,005) и окисленных ЛПНП (18,16-94,02 мЕ/мл и 0,17-0,50 мЕ/мл; р<0,005). Однако уровень общего холестерина был ниже, чем в контрольной группе (4,94-5,18 ммоль/л и 5,00-5,28 ммоль/л; р<0,05), что может быть обусловлено существенным снижением его содержания в составе ЛПВП.

Таким образом, дискоординационные изменения липидного спектра крови является одним из ранних маркеров, характеризующих степень нарушений энергетического метаболизма. Метаболомные исследования больных с ожирением позволяют идентифицировать клинически не проявляющиеся нарушения энергетического обмена и своевременно провести персонализированную диетотерапию.

3.7 Характеристика геномномных, протеомных и метаболомных маркеров и оценка их диагностического значения у больных с ожирением

Принципиально важными следует считать данные, полученные проведении корреляционного анализа протеомных и метаболомных маркеров у больных с ожирением с различными полиморфными вариантами гена АроЕ. Как следует из данных рисунка 5, у больных с ожирением с генотипом еЗ/еЗ/еЗ развитие дислипидемии сопровождается инициацией неспецифической воспалительной реакции за счет прямой корреляционной зависимости содержания CRP и концентрации триглицеридов (г=0,77; р<0,05) и обратной корреляции с уровнем ЛПВП (г= -0,70; р<0,05).

Рисунок 5. Результаты корреляционного анализа геномных, протеомных и метаболомных маркеров у больных с ожирением при генотипе еЗ/еЗ/еЗ гена АроЕ.

Корреляционный анализ протеомных и метаболомных маркеров у больных с генотипом е2/еЗ/еЗ установил прямую зависимость уровня АпоВ от содержания холестерина (г=0,76; р<0,001), тритлицеридов (г=0,83; р<0,001) и ЛПНП (1^0,92; р<0,001), что объясняется способностью АпоВ транспортировать липиды низкой плотности. Особый интерес представляет обратная зависимость уровня АпоВ и ИЛ-б (г=-0,59; р<0,05), что указывает на вовлеченность провоспалительных цитокинов в развитие дисбаланса липидного обмена.

Особый интерес представляет тот факт, что у носителей гомозиготного генотипа е2/е2/еЗ гена АроЕ выявлена взаимосвязь содержания аполипопротеина В с концентрацией адипонектина (г=-0,55; р<0,05).

При изучении больных с ожирением с генотипом еЗ/еЗ/е4 изменения липидного обмена характеризовались наличием прямой зависимости концентраций холестерина и триглицеридов от содержания аполипопротеина В (г=0,71; р<0,05; г=0,92; р<0,001 соответственно) и аполипопротеина А (г=0,70; р<0,05; г=0,56; р<0,05 соответственно). Не вызывает сомнения, что уровни липидных фракций и транспортных молекул находятся в тесной взаимосвязи (рисунок 6). Таким образом, полученные данные обосновывают целесообразность применения при генотипе еЗ/еЗ/е4 методов контроля гипергликемии и индивидуального подхода к диетотерапии.

Маркерылипидного обмена - Цигокияыи молекулы адзегии Маркеры повреждения гепатоцитов

Рисунок 6. Результаты корреляционного анализа геномных, протеомных и метаболомных маркеров у больных с ожирением при генотипе еЗ/еЗ/е4 гена АроЕ

Особый интерес представляют результаты корреляционного анализа у больных с генотипом е2/еЗ/е4, в частности взаимозависимость провоспалительных цитокинов ИЛ-1а и ФНОа (г=0,70; р<0,05) и Ь-БАВР (г=0,66; р<0,05), что свидетельствует об активации иммунной системы и развитии воспалительной реакции при избыточном поступлении свободных жирных кислот в гепатоциты.

Результаты исследования протеомных и метаболомных маркеров у носителей генотипа е2/е2/е4 демонстрировали обратную связь уровня висфатина с содержанием аполипопротеина В (г= -0,95; р<0,05). Также выявлена прямая зависимости содержания

19

резистина от концентрации аннексина V (г=0,68; р<0,05) (рисунок 7). Таким образом, при генотипе в2/82/е4 гена АроЕ дисбаланс регуляторных механизмов углеводного обмена тесно связан с адипокиновым статусом больных с ожирением.

Маркерылипидного обмена Маркеры повреждения гепатоцитов Цитокины и молекулы адгезии Адипокины

Рисунок 7. Результаты корреляционного анализа геномных, протеомных и метаболомных маркеров у больных с ожирением при генотипе е2/е2/е4 гена АроЕ

Принципиальную важность играют данные, полученные при изучении полиморфных вариантов гена ЬРЬ. Так, у носителей генотипа 8ег4475ег гена ЬРЬ была выявлена достоверная взаимосвязь содержания холестерина, триглицеридов, ЛПНП и аполипопротеина В (1=0,76; р<0,001; г=0,75; р<0,001; г=0,66; р<0,001 соответственно), а у больных с генотипом 5ег447Тег гена ЬРЬ выявлена обратная корреляционная зависимость уровней АЛТ, МОА-модифицированных ЛПНП, 51САМ и адипонектина (г= -0,58; р<0,05; г= -0,51; р<0,05; г= -0,50; р<0,05 соответственно) (рисунок 8).

('^у Маркерылипидного обмена

Маркерыповреждения гепатоцитов ^Цитокины и мопегупы адгезии Адипокины

Рисунок 8. Результаты корреля11ионного анализа геномных, протеомных и метаболомных маркеров у больных с ожирением при генотипе 5ег447Тег гена ЬРЬ

Таким образом, проведенное исследованием создало предпосылки для проведения диагностики и персонализированной диетотерапии больных с ожирением. В настоящем исследовании выявлены полиморфизмы генов АроЕ и ЬРЬ, сопряженные с теми или иными изменениями, возникающими при дислипидемии. Получены данные, позволяющие оценить

значимость единичных нуклеотидных полиморфизмов генов АроЕ и LPL в реализации протеомных и метаболомных изменений у больных с ожирением.

3.8 Оценка эффективности диетотерапии при различных полиморфных вариациях генов АроЕ и LPL у больных с ожирением

После использования стандартного варианта гипокалорийной диеты больным с ожирением была проведена оценка динамики биохимических показателей крови. Установлено, что при генотипах еЗ/еЗ/еЗ и е2/еЗ/еЗ гена АроЕ содержание липидов и глюкозы у больных с ожирением статистически значимо снижалось, что указывало на высокую эффективность проводимой диетотерапии. У больных с генотипами е2/е2/еЗ и еЗ/еЗ/е4 такой закономерности выявлено не было (рисунок 9).

При изучении динамики биохимических показателей крови носителей различных полиморфных маркеров гена LPL было выявлено, что максимальный выраженный положительный эффект от диетотерапии у больных с ожирением был выявлен при полиморфном варианте Ser/Ser гена липопротеинлипазы (рисунок 10).

Полученные данные указывают на существенные отличия в эффективности проведенной диетотерапии в зависимости от генотипа.

Г»вотипгЗ/ЕЗ/ЕЗ Ггн0таиг2г3/£3

Рисунок 9. Динамика биохимических показателей метаболизма у носителей полиморфных

вариантов гена АроЕ, больных ожирением в процессе диетотерапии

*Р<0,05

ГсвотипБег'вег

Л _I 111111*

ШШм

I Ш . ■......9

Обашй Трипишеризы ЛПВП ЛПНП Глюьаи

холестерин (кмольл) (ккозь'я) (мыоль'л) (инолк'д)

Рисунок 10. Динамика биохимических показателей метаболизма у носителей полиморфных

вариантов гена ЬРЬ, больных ожирением в процессе диетотерапии

*Р<0,05

На основании полученных данных можно заключить, что эффективность диетотерапии при нарушении липидного и углеводного обменов у больных с ожирением значительно выше у носителей генотипов еЗ/еЗ/еЗ (на 19% снижается уровень общего холестерина, на 18% -триглицеридов, на 17% - липопротеидов низкой плотности, на 20% - липопротеидов высокой плотности, на 7% - глюкозы), е2/еЗ/еЗ гена АроЕ (на 20% снижается содержание общего холестерина, на 23% - триглицеридов и на 15% - липопротеидов высокой плотности) и 8ет4475ег гена ЬРЬ (на 17% снижается концентрация общего холестерина, на 21% -триглицеридов, на 14% - липопротеидов высокой плотности, на 16% - липопротеидов низкой плотности, на 8% - глюкозы).

Таким образом, определение полиморфизмов 5ег447Тег гена ЬРЬ, А^158Суз (е2) и Су5112А^158 (е4) гена АроЕ, уровней адипокинов и цитокинов в крови рекомендовано в качестве диагностического и прогностического тестов у лиц с избыточной массой тела, а также для разработки персонализированной диетотерапии у больных с ожирением.

ВЫВОДЫ

1. Впервые получены новые данные, свидетельствующие о том, что риск развития ожирения в российской популяции ассоциирован с носительством полиморфизма А^158Суз (е2) гена АроЕ (011=18,73; 95% С1 [2,56 - 137,13]).

2. На основании исследования 217 больных с различной степенью ожирения доказано, что носительство гетерозиготного генотипа е2/еЗ гена АроЕ увеличивает риск развития ожирения в ~6 раз (95% С1 [0,76 - 43,79]), а гомозиготный генотип е2/е2 гена АроЕ увеличивает риск развития ожирения в -11 раз (95% С1 [0,67 - 189,35]) по сравнению с генотипом еЗ/еЗ (95% С1 [0,01 - 0,53]).

3. Сравнительный анализ проатерогенных биомаркеров у больных с ожирением и атеросклерозом выявил, что у носителей гомозиготного генотипа е2/е2/еЗ гена АроЕ достоверно увеличивается содержание триглицеридов (на 47%), окисленных липопротеидов

Г>нотнп5егТег

Обппй Тркгашкрюы ЛПВП .ЛПНП Гстокя»

югесирик («шал»«} (югавд) (кколья) (квоаы) (югаа-л)

низкой плотности oxLDL (на 390%), интерлейкина-6 (на 51%), адгезивных молекул sICAM (на 201%), белка-транспортера жирных кислот L-FABP (на 177%) и снижается уровень адипонектина (на 51%), что позволяет отнести их к клинически значимым предикторам атеросклероза.

4. Впервые показано, что наличие генотипа еЗ/еЗ/е4 гена АроЕ, снижение содержания глюкозы (5,18-5,68 ммоль/л), триглицеридов (1,62-1,66 ммоль/л), адипонектина (0,96-1,71мкг/мл) и увеличение концентрации белка-транспортера жирных кислот L-FABP (26,7579,72 пг/мл) являются предикторами развития неалкогольной жировой болезни печени у больных с ожирением.

5. На основании изучения уровней адипокинов установлена обратная корреляционная зависимость концентрации адипонектина от индекса массы тела (г= -0,71), что позволяет рассматривать адипонектин в качестве одного из ранних маркеров развития ожирения.

6. При изучении цитокинового статуса у больных с ожирением с индексом массы тела выше 35 выявлено достоверное увеличение концентраций неспецифических маркеров воспаления - адгезивных молекул sICAM (56,90-209,6 нг/мл; г= 0,62) и С-реактивного белка (6201-12650 нг/мл; г= 0,56).

7. Эффективность диетотерапии при нарушении липидного и углеводного обменов у больных с ожирением значительно выше у носителей генотипов еЗ/еЗ/еЗ (снижение уровня общего холестерина на 19%, триглицеридов - на 18% , липопротеидов низкой плотности - на 17%, липопротеидов высокой плотности - на 20%, глюкозы - на 7%), е2/еЗ/еЗ гена АроЕ (снижение содержания общего холестерина на 20%, триглицеридов - на 23% и липопротеидов высокой плотности - на 15%) и Ser447Ser гена LPL (снижение концентрации общего холестерина на 17%, триглицеридов - на 21%, липопротеидов высокой плотности -на 14%, липопротеидов низкой плотности - на 16%, глюкозы - на 8%).

8. Определение полиморфизмов Ser447Ter гена LPL, Argl58Cys (е2) и Cysll2Argl58 (е4) гена АроЕ, уровней адипокинов и цитокинов в крови рекомендовано в качестве диагностического и прогностического тестов у лиц с избыточной массой тела и для разработки персонализированной диетотерапии у больных с ожирением.

Список работ, опубликованных по теме диссертации: Роботы, опубликованные в ведущих рецензируемых журналах, определенных ВАК:

1. Кириллова О.О. Современные представления о полиморфизме генов, регулирующих обмен липидов. // Вопросы питания. - 2012. -№4. - С.48-52. (0,625 печл.)

2. Кириллова О.О., Ворожко И.В., Гаппарова K.M., Чехонина Ю.Г., Сенцова Т.Б., Тутельян В.А. Полиморфные варианты Ser447Ter гена липазы липопротеинов, Cysl 12Arg и

23

Argl58Cys гена аполипопротеина Е у больных ожирением. //Вопросы питания. - 2013. -№4 (Т.82), - С.4-9. (0,75 печ.л.)

3. Кириллова О.О., Ворожко И.В., Гаппарова К.М., Чехонина Ю.Г., Сенцова Т.Б., Тутельян В.А. Адипокины и метаболизм ключевых пищевых веществ у больных с ожирением. //Терапевтический архив. - 2014. - №1. - С.45-48. (0,458 печ.л.)

4. Сенцова Т.Б., Кириллова О.О., Тутельян В.А., Ворожко И.В., Ревякина В.А., Гаппарова К.М. Генетические маркеры метаболизма в оценке цитокинового статуса у больных ожирением // Иммунология. - 2014. - №5. - с.241-244 (0,552)

Материалы научных конференций

1. Кириллова О.О., Тутельян В.А., Сенцова Т.Б., Гаппарова К.М. Полиморфизмы Cysll2Arg , Argl58Cys гена АроЕ и Ser447Ter гена LPL у больных с ожирением. // Конференция Инновационные технологии в медицине 21 века. - Москва, 2012. - с.86-88. (0,11 печ.л.)

2. Кириллова О.О., Гаппарова К.М. Содержание адгезивных молекул SICAM при полиморфизмах Cysll2arg и Argl58Cys гена АроЕ у больных с ожирением. // XIV Всероссийский Конгресс диетологов и нутрициологов с международным участием. Вопросы диетологии. - 2012. - т. 2 (прил. 1). - с.38-39. (0,06 печ.л.)

3. Sentsova Т., Kirillova О., Vorozhko I., Gapparova К., Pavlovskaya Е. The level of adhesive molecules sICAM in patients with obesity // 20th European Congress on Obesity (ECO 2013). In. Obesity Facts. -2013. - Vol.6, Suppl. 1. - P.69 (0,05 печ.л.)

4. Kirillova O.O., Tutelyan V.A., Sentsova T.B., Vorozhko I.V., Gapparova K.M., ChekhoninaYu.G. Ser/ter LPL gene polymorphism, Argl58Cys and Cysll2Arg ApoE gene polymorphisms are diet efficiency markers in obese patients. // IUNS 20th International Congress of Nutrition. In. Annals of Nutrition and Metabolism. - 2013. - Vol.63, Suppl. 1. - P.325 (0,05 печ.л.)

5. Kirillova O.O., Sentsova T.B., Vorozhko I.V., Gapparova K.M., Chekhonina Yu.G. The level of adhesive molecules sICAM, TNF-a and IL-6 in obesity patients. //Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology. - Milan, 2013. (0,04 печ.л.)

6. Kirillova O., Sentsova Т., Vorozhko I., Gapparova K.M., Chekhonina Yu. Genetic markers Ser447Ter of LPL gene, E2 and E4 of ApoE in evaluation of cytokine status in obese patients. // Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology. -Copenhagen, 2014 (0,04 печ.л.)

7. Kirillova O., Sentsova T., Vorozhko I., Gapparova K.M., Chekhonina Yu. The polymorphism of Argl58Cys ApoE gene in patients with obesity. // Obesity Facts. - 2014. -Vol.7, suppl 1. - P.61 (0,04 nei.ji.)

8. Sentsova T., Kirillova O., Vorozhko I., Gapparova K.M., Chekhonina Yu. Adipokines in the regulation of carbohydrate and lipid metabolism in patients with obesity. \\ Obesity Facts. -2014. -Vol.7, suppl 1. - P.74 (0,05 net.n.)

Подписано в печать 12.11.2014г.

Усл.п.л. -1.5 Заказ №24214 Тираж: 120 экз.

Копицентр «ЧЕРТЕЖ.ру» ИНН 7701723201 107023, Москва, ул.Б.Семеновская 11, стр.12 (495) 542-7389 www.chertez.ru