Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение окислительного метаболизма и антиоксидантной защиты липидов крови при различных способах холецистэктомии, их коррекция альфа-токоферолом

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменение окислительного метаболизма и антиоксидантной защиты липидов крови при различных способах холецистэктомии, их коррекция альфа-токоферолом"

На правах рукописи

Кобелев Максим Владимирович

ИЗМЕНЕНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО МЕТАБОЛИЗМА И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ЛИПИДОВ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ, ИХ КОРРЕКЦИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛОМ

03.01.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 0 '.ч С1

........14.

Тюмень - 2012

005042889

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Кадочникова Галина Дементьевна

Официальные оппоненты:

Шаповалов Петр Яковлевич - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой гигиены с основами экологии ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения I социального развития Российской Федерации.

Сумная Дина Борисовна - доктор медицинских наук, профессор профессор кафедры биохимии ГБОУ ВПО «Уральский государственныГ университет физической культуры».

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинска академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российски Федерации.

Защита состоится « 25 » мая 2012 года в 10.00 часов на заседани! диссертационного совета Д 208.101.02 при ГБОУ ВПО «Тюменска государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения социального развития Российской Федерации по адресу г.Тюмеш ул. Одесская, 54.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Тюменска государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения социального развития Российской Федерации.

Автореферат разослан « 20 » апреля 2012 года

Ученый секретарь ./ / --------

диссертационного совета гЙА/М<Г\ СА- °РЛ0В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В последнее десятилетие актуальной становиться проблема лечения желчнокаменной болезни (ЖКБ) [П.С. Ветшев и др., 2004; Г.Ю. Феденко и др., 2008]. По данным клинических наблюдений, в последние 40 лет заболеваемость ЖКБ за каждые 10 лет удвоилась, а по некоторым данным за последние 25 лет она выросла примерно в 2,8 раза [В.В. Стрижелецкий, 2004.].

В настоящее время хирургический метод сохраняет лидирующие позиции в лечении желчнокаменной болезни [Г.Ю. Феденко и др., 2008; П.С. Ветшев и др., 2004; С.А. Гордеев и др., 2008]. Основной операцией используемой для лечения неосложненного калькулезного холецистита является холецистэктомия, существующие способы её выполнения имеют свои показания и противопоказания [B.C. Савельев, 2006; А.Д. Тимошин и др., 2003]. Классическим методом оперативного лечения, так называемым золотым стандартом, с которым сравнивают эффективность и безопасность новых технологий, считают традиционную холецистэктомию (ТХЭ), преимущества которой - широкий обзор операционного поля, наименьшее число интраоперационных осложнений. Недостатки - значительное травматическое воздействие на ткани, выраженный болевой синдром в послеоперационном периоде. К преимуществам лапароскопической холецистэктомии (ЛХЭ) можно отнести малую травматичность, возможность ревизии почти всей брюшной полости и выполнение сочетанных вмешательств. Однако, существуют многочисленные данные, где отмечается существенный риск нарушений функций дыхания при ЛХЭ как следствие напряженного карбоксиперитонеума, что может потребовать коррекции параметров искусственной вентиляции легких и других компонентов общей анестезии [С.Р. Добровольский и др., 2004; B.C. Савельев, 2006; М. Pelosi и др., 1993].

Существенную роль в развитии ЖКБ отводят свободно-радикальным процессам липидов. Одним из наиболее важных патогенетических механизмов, связанных с процессом пероксидации, является способность образующихся свободных радикалов взаимодействовать с фосфолипидами клеточных мембран. В результате наступают структурные изменения мембран, нарушается взаимосвязь функциональной активности системы пероксидного окисления липидов - антиоксидантной защиты (ЛПО-АОЗ), происходит накопление токсических продуктов окисления и изменение метаболизма липидов в клетке [С.С. Абидова и др., 2003; Т.С. Брюзгина и др., 1991]. Нарушение липидного обмена в мембранах характеризуется изменением соотношения между количеством фосфолипидов и холестерола, концентрация последнего значительно повышается [Е.Б. Бурлакова и др., 1985]. Существующая взаимообусловленность между скоростью окисления и изменением состава липидов рассматривается как физико-химическая основа гомеостаза процесса липидпероксидации [З.С. Баркагак и др., 1999; Е.Б. Бурлакова, 1980].

Оперативное лечение в свою очередь может вызвать дополнительную активацию ЛПО, как ответ организма на хирургический стресс [В.А. Бородач и

др., 2002; П.С. Ветшев и др., 2002]. Было доказано, что активацию ЛПО могут индуцировать препараты, используемые для анестезии. Показано прямое воздействие анестетиков, выражающееся в их антиоксидантном или прооксидантном эффекте, и опосредованное влияние путем изменения метаболизма липидов, активности ферментов, уровня гормонов, кровоснабжения тканей и органов [А.И. Вислобоков и др., 2001; O.A. Долина и др., 1987; И.В. Косникова, 2004]. Операционный стресс, хирургическое вмешательство и его последствия, течение раневого процесса приводят к повышению интенсивности липидпероксидации на фоне истощения факторов антиоксидантной защиты [A.B. Александрович, 1993; Т.Д. Звягинцева и др., 1998; Е.В. Макаренко и др., 1989]. В литературе не достаточно освещены данные о влиянии хирургического доступа на процессы липидпероксидации и антиоксидантной защиты у оперируемых пациентов.

Очень значима степень нарушения функций жизненно важных органо! непосредственно во время операции и в ближайшие часы после нее. К част« встречающимся периоперационным осложнениям относят тромбоэмболически* осложнения [Н.В. Безручко и др., 2008; С.А. Шапошников и др., 2008] несмотря на проводимую тромбопрофилактику. Причины тромбоэмболически: осложнений различны, среди них нарушения свойств сосудистой стенки реологии крови, длительный карбоксиперитонеум, высокое инсуфляционно давление в брюшной полости [С.А. Шапошников и др., 2008; С.М. Samama i др., 1998].

Знание динамики протекания процессов ЛПО и АОЗ во время операции i в ближайшем послеоперационном периоде, правильная оценка и своевременна: коррекция этих изменений позволит избежать более глубоких нарушений послеоперационном периоде.

Цель исследования. Изучить процесс окислительного метаболизм липидов мембран эритроцитов, тромбоцитов и плазмы крови у больны: хроническим калькулезным холециститом при выполнении холецистэктомии зависимости от выбора оперативного доступа и выявить возможност фармакологической коррекции процесса а-токоферолом.

Задачи исследования.

1. Исследовать изменение показателей системы ЛПО-АОЗ плазмы кровк мембран эритроцитов и тромбоцитов у больных при лапароскопическо! холецистэктомии в периоперационный период.

2. Определить особенности динамики показателей системы ЛПО-АО' плазмы крови, мембран эритроцитов и тромбоцитов у больных пр традиционной холецистэктомии в периоперационный период.

3. Изучить особенности окислительного метаболизма липидо эритроцитов, тромбоцитов и плазмы крови при различных способа холецистэктомии, определить его взаимосвязь с выраженностью процесса ЛПС

4. Выявить эффективность использования а-токоферола для коррекци равновесия в системе ЛПО-АОЗ липидов плазмы крови, мембран эритроците и тромбоцитов у больных а зависимости от способа холецистэктомии.

5. Оценить результаты лечения и эффективность применения а-токоферола для коррекции окислительного метаболизма липидов плазмы крови, мембран эритроцитов и тромбоцитов у больных ЖКБ при различных способах холецистэктомии.

Научная новизна исследования. Впервые проведен комплексный анализ изменений в системе ЛПО-АОЗ в условиях лапароскопической и традиционной холецистэктомии интраоперационно и в раннем послеоперационном периоде. Получены новые данные, существенно дополняющие сведения о характере окислительного метаболизма липидов крови в зависимости от выбора способа холецистэктомии.

Впервые выявлен разнонаправленный эффект метаболического влияния способа холецистэктомии на этапах оперативного лечения. Окислительный метаболизм липидов характеризуется интраоперационным однонаправленным изменением скорости окисления липидов и увеличением содержания продуктов ЛПО, при одновременном снижении концентрации общих липидов. Указанные изменения наиболее выражены в условиях ЛХЭ в сравнение с ТХЭ.

Полученные данные свидетельствуют о значительном угнетении процесса ЛПО в условиях анестезии с тиопентапом натрия на интраоперационном этапе, что подтверждается снижением скорости окисления липидов, динамикой изменений содержания фракций фосфолипидов (увеличение) и холестерола (снижение), при сопряженном снижении коэффициента ОХС/ОФЛ. Установленный антиоксидантный эффект компонентов анестезии с тиопенталом натрия наиболее выражен в мембранных липидах, в сравнении с липидами плазмы.

Впервые показано, что процесс перфузии тканей в раннем послеоперационном периоде имеет существенные различия в динамике показателей ЛПО-АОЗ в зависимости от варианта ХЭ. Метаболические изменения носят фазный характер с максимальной активацией ЛПО и снижением АОЗ на 3-сутки после операции в липидах эритроцитов, менее выраженные - тромбоцитов в условиях ЛХЭ. Указанные изменения носят более стабилизирующий характер в условиях ТХЭ.

Впервые установлено, что антирадикальный и мембранотропный эффект а-токоферола проявляется на всех этапах исследования и более выражен в условиях ТХЭ, сопровождается угнетением ЛПО, увеличением содержания ОФЛ и снижением коэффициента ОХС/ОФЛ. Эффект стабилизирующего влияния а-токоферола проявляется в большей степени в мембранных липидах, затем плазматических.

Выявленные метаболические сдвиги в системе ЛПО-АОЗ на этапах оперативного лечения позволяют определить адекватность анестезиологической защиты больного от хирургического стресса, возможность ограничивать гомеостатические и гемокоагуляционные сдвиги путем введения в протокол анестезии компонентов с антиоксидантными свойствами, а также прогнозировать возможные направления послеоперационных осложнений.

Практическая значимость работы. Полученные результаты показали разнонаправленный характер влияния варианта ХЭ на состояние системы ЛПО-

АОЗ, что необходимо учитывать при хирургическом лечении холецистита с целью повышения компенсаторных возможностей организма.

Установленные нарушения процессов ЛПО-АОЗ в условиях холецистэктомии, дальнейшая активация на этапах лечения и их патогенетическая роль усиливают актуальность проблемы профилактики и коррекции этих нарушений антиоксидантами в период подготовки больного к операции, а так же во время операции и в ближайшее время после ее окончания.

Результаты исследования обращают внимание практикующих врачей на возможность ограничивать гомеостатические и гемокоагуляционные сдвиги путем введения в протокол лечения хирургических больных препаратов с антиоксидантной активностью, что обеспечивает более высокую гемодинамическую стабильность, нормализует метаболические процессы мембранных и плазматических липидов, улучшает АОЗ в клетке, снижает риск послеоперационных осложнений.

Полученные данные использованы при подготовке кафедрами биологической и аналитической химии ТюмГМА книги: «Окислительный метаболизм липидов крови при критических состояниях» (Тюмень: ООО «Печатник», 2010. - 88 е.).

По материалам исследования подготовлены и опубликованы методические рекомендации: «Анализ состояния системы липидпероксидацш и антиоксидантной защиты крови при критических состояниях» (Тюмень, 2008 - 69 е.); «Состояние системы липидпероксидации крови у больных пр1 хирургическом лечении хронического калькулезного холецистита I зависимости от выбора анестетика» (Тюмень, 2008. - 27 е.); «Использовани< эндогенных антиоксидантов у больных при хирургическом леченш хронического калькулезного холецистита» (Тюмень, 2008. - 35 е.).

Комплексный анализ состояния системы ЛПО-АОЗ клетки включен I рекомендательный протокол лечения больных при критических состояниях I отделения анестезиологии и реанимации ГБУЗ ТО ОКБ №2, ГБУЗ ТО ОКБ №1 (6 актов внедрения), а также используется в элективных курсах кафеду аналитической и органической химии, биологической химии ГБОУ ВПС ТюмГМА Минздравсоцразвития России (2 акта внедрения).

Положения, выносимые на защиту.

1. Хирургическое лечение холецистита сопровождаете: разнонаправленным изменением показателей ЛПО-АОЗ крови, динамика I диапазон которых зависит от выбора варианта холецистэктомии и этап; оперативного лечения.

2. Специфический эффект влияния способа холецистэктомии н; состояние системы ЛПО-АОЗ (активация или угнетение) не имее существенных различий интраоперационно, снижается в первые сутки поел' операции и зависит от мембран клеток-мишеней (эритроцитов, тромбоците! или плазмы крови).

3. Процесс перфузии тканей в раннем послеоперационном периоде имеющий существенные различия в динамике показателей ЛПО-АОЗ от выбор;

способа холецистэктомии, характеризуется усилением ЛПО и снижением АОЗ на 3-сутки после операции в условиях ЛХЭ, в условиях ТХЭ установлен более стабилизирующий характер процесса.

4. Активацию ЛПО можно уменьшить путем введения в протокол хирургического лечения а-ТФ, антирадикальный и мембранотропный эффект которого более выражен в условиях ТХЭ в сравнение с ЛХЭ.

Апробация работы. Результаты работы доложены на общем заседании кафедр аналитической и органической химии, биохимии, гигиены (2012); конгрессе терапевтов "Урал-2009"; VI съезде ассоциации анестезиологов-реаниматологов северо-запада России (Санкт-Петербург, 2011); на Всероссийской научно-практической конференции "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении" (Санкт-Петербург, 2011); межрегиональных научно-практических конференциях (Екатеринбург, 2009; Тюмень, 2009); 42-й и 45-й Всероссийских научных конференциях с международным участием студентов и молодых ученых (Тюмень, 2008, 2011).

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 18 печатных работах, включая 5 статей в медико-биологических изданиях, рекомендованных ВАК для публикации диссертационных исследований, и два раздела в монографии «Окислительный метаболизм липидов крови при критических состояниях» - Тюмень: ООО «Печатник», 2010. - С. 18-28, 35-41.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, включает «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение результатов», «Заключение», «Выводы» и «Список литературы» (233 отечественных и 70 зарубежных источников). Работа представлена 20 таблицами и иллюстрирована 27 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика групп исследования. Проведено комплексное обследование 127 больных калькулезным холециститом (женщины, возраст 45,2±4,4 года). Всем пациентам выполнена холецистэктомия в 2006-2010 гг. ГБУЗ ТО ОКБ №1. У 106 (83,5%) больных имелась сопутствующая патология: хронические обструктивные заболевания легких - 27 (21,3%), сахарный диабет - 24 (18,9%), ожирение - 95 (74,8%), ИБС - 86 (67,7%). Отбор пациентов в группы проводили на основании данных клинического обследования до операции, тестирования состояния системы ЛПО-АОЗ по показателям ЛПО эритроцитов: СО, ПИ, ДК и ОЛ. Окончательное формирование групп проводили в зависимости от варианта холецистэктомии и использования а-токоферола: 1-я группа (34 пациента) - ЛХЭ; 2-ая группа (32 пациента) - ТХЭ; 3-я группа (31 пациент) - ЛХЭ + а-ТФ; 4-ая группа (30 пациентов) - ТХЭ + а-ТФ. Назначали а-ТФ («Эвитол», фирма КРКА) в виде 20% раствора внутримышечно по схеме: 600 мг за 12 часов до операции; 200 мг - во время вводного наркоза; 200 мг - во время основного наркоза; далее в течение 5-ти суток по 600 мг/сутки. В протокол анестезиологического обеспечения всех

исследуемых групп были включены следующие препараты: тиопентап натрия (не более 1000 мг за операцию), фентанил (5-10 мкг/кг в час), миоплегия поддерживалась ардуаном (0,05-0,1 мг/кг в час). Тиопентал натрия, фентанил (подавляют процесс ЛПО), ардуан (нет данных о влиянии на ЛПО) [O.A. Долина и др., 2002; П.Г. Сторожук и др., 1999]. Длительность операции: 58,6±3,8 мин. Интраоперационных и послеоперационных осложнений в исследуемых группах не было. Группы больных ЖКБ сравнимы по возрасту, сопутствующим заболеваниям, уровню исследуемых показателей в предоперационном периоде.

Используемые приемы и методы. Кровь на исследование брали из периферической вены на следующих этапах: 1 - предоперационный, данные характеризуют исходное состояние системы ЛПО-АОЗ крови; 2 -интраоперационный (через 50,3 ± 3,4 мин. от начала операции), выявляется влияние компонентов анестезии на состояние системы ЛПО-АОЗ на фоне хирургического стресса; 3 - (1-е сутки), 4 - (на 3-й сутки) и 5 - (на 5-е сутки) -послеоперационного периода, в течение которого возможно усиление ЛПО за счет процесса реперфузии тканей. Состояние окислительного метаболизма липидов (ЛПО и АОЗ) оценивали в эритроцитах, тромбоцитах и плазме крови. Липиды эритроцитов и плазмы экстрагировали 10-кратным избытком смеси гептана и изопропилового спирта (1:1), тромбоцитов - 50-кратным избытком этой же смеси.

Показатели ЛПО определяли в гептановой фазе [В.Н. Ушкалова и др. 1987]: скорость окисления (СО, мм3/мин), период индукции (ПИ, мин/мл; определяли при инициированном динитрилазобисизомасляной кислотой окислении липидов и выражали ПИ как время поглощения пробой 25 мм 02, < СО - как угол наклона линейного участка кинетической кривой; содержание диеновых коньюгатов (ДК, мкМ/мл) устанавливали по оптической плотное™ (к = 232 нм); общие липиды (ОЛ, мг/мл) - по величине оптической плотности Q = 534 нм), после реакции с фосфорнованилиновым реактивом. Содержаниб фосфолипидов (ФЛ, мкМ/мл) - по реакции неорганического фосфора с малахитовым зеленым (к = 260 нм); содержание СХС и ЭХС (мкМ/мл) - пс реакции с хлоридом железа (111) (к = 540 нм) [B.C. Карпищенко, 2002].

Анализ результатов. Математическую обработку полученны> количественных данных проводили с помощью медико-биологическо1 программы Biostat 4.03 (С.А. Гланц, 1998) методом вариационной статистию для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М) среднюю ошибку средней арифметической (т) и среднее квадратично! отклонение (а). Достоверность отличий оценивали, вычисляя доверительны! коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Взаимосвяз! переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена (rs) Различия между сравниваемыми группами рассматривали как достоверные npi значениях степени вероятности <0,05. Графический анализ результате! проводили в системе Microsoft Graf (приложение WS Word 2003) i

построением графиков, корректность которых характеризовали коэффициентами аппроксимации (Я2).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ в мембранных липидах в зависимости от варианта холецистэктомии. Операционный стресс, хирургическое вмешательство и его последствия (ацидоз, гипоксия), течение раневого процесса приводят к повышению интенсивности ЛПО на фоне истощения факторов АОЗ, что свидетельствует о дисбалансе системы ЛПО-АОЗ. Полученные данные показали, что у больных при ЛХЭ (1-ая группа) изменения показателей (содержание ДК и ОЛ, величина СО и ПИ), отражающие состояние системы ЛПО-АОЗ в эритроцитах, носят фазовый характер в зависимости от этапа исследования (табл. I).

На интраоперационном этапе содержание ДК в мембранах эритроцитов увеличивалось на 49,78% (р<0,01), в сравнении с предоперационным состоянием. Далее выявлено снижение концентрации ДК практически до исходного уровня (3-й этап). На 3 сутки после операции (4-й этап) вновь наблюдалось увеличение показателя на 18,15% (р<0,05) и на 5-е сутки величина ДК не имеет достоверных различий с исходным уровнем. Одновременно установлены нарушения в системе «липолиз - липогенез», на что косвенно указывало прогрессирующее снижение концентрации ОЛ к 5-м суткам в 2,05 раза (р<0,001) в сравнении с исходным уровнем, при этом не получено достоверной корреляции между исследуемыми показателями. Указанные изменения свидетельствуют о развитии тканевой гипоксии, универсальными механизмами которой являются - интенсификация процессов свободно-радикального окисления липидов, активация фосфолипазы Аг и анаэробный гликолиз.

Таблица 1

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов эритроцитов в условиях ЛХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т)

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (1-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,27±0,12 3,40±0,12с 2,33±0,11 0 2,75±0,09а 2,30*0,11а

СО, мм'Умин 0,28±0,011 0,16±0,013с 0,32±0,008 е 0,41 ±0,009с 0,31=ь0,011ь

ПИ, мин/мл 231,4±4,35 277,6±6,31а 226,7±4,39а 179,3±5,47а 219Д±6,01а

ОЛ, мг/мл 4,21±0,15 3,32±0,12а 2,85±0,12а 2,33±0,П а 2,05±0,13а

Стандартный протокол + а-ТФ (3-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,29±0,11 1,74±0,12" 2,26±0Д1 " 2,31±0,09 2,28±0,13

СО. мм'/мин 0,31 ±0,011 0,19±0,012 с 0,32±0,008с 0,25±0,008ь 0,23±0,013

ПИ, мин/мл 227,4±4,32 253,8±6,12 221,2±4,53 244,3±5,62с 245,7±6,15

ОЛ, мг/мл 3,89±0,15 4,54±0,13а 3,93±0,11 3,43±0,11 2,92±0,14а

Примечание: - р<0,05 '-р<0.01 с>-р<0,001 в сравнении с предыдущим этапом.

Показатель СО на интраоперационном этапе изменяется разнонаправлено (снижение на 42,86%; р<0,01) в сравнении с показателем ДК, Выявленное обстоятельство может свидетельствовать об изменении фракционного состава фосфолипидов мембран эритроцитов в сторону компонентов, имеющих в своем составе меньше высших ненасыщенных жирных кислот, и служит подтверждением антиоксидантной активности компонентов анестезии с тиопенталом натрия. В раннем послеоперационном периоде (4-й этап) динамика СО и ДК не имеет различий (увеличением на 46,43% и 18,15%; р<0,05 соответственно).

Результаты исследований показали разнонаправленный характер изменения показателей ПИ и СО, более высокой скорости окисления соответствует наименьшее значение периода индукции (г = -0,98; р<0,05) с максимальными изменениями на 2-м этапе (повышение ПИ на 19,97 %; р<0,05 и снижение СО на 42,86%; р<0,01) и 4-м этапе (снижение ПИ на 22,52%; р<0,05 и повышение СО на 28,12%; р<0,05). К 5-м суткам показатели ПИ и СО не имеют различий с дооперационными значениями.

Усиление ЛПО в раннем послеоперационном периоде (4-й этап) является следствием развития тканевой гипоксии при наложении карбоксиперитонеума и процесса реоксигенации. Этот факт является неблагоприятным для клетки и организма в целом, поскольку первичные продукты ЛПО являются наиболее токсичными и инициируют каскад окислительных реакций, которые приводят к истощению АОЗ клетки и дестабилизации морфофункциональной организации мембраны эритроцитов, что значительно ускоряет процессы дезинтеграции и гибели эритроцитов. Поврежденная популяция клеток утрачивает необходимую функциональную активность, усугубляя развивающиеся патологические изменения в организме.

Проведенные исследования состояния системы Л ПО-АОЗ в эритроцитах показали, что у больных 2-й группы в условиях ТХЭ, также как и при ЛХЭ в 1 -й группе, динамика исследуемых показателей (содержание ДК и ОЛ, величина СО и ПИ) на интраоперационном этапе изменяется разнонаправленно, но с меньшей выраженностью при ТХЭ (табл. 2). На 1-е сутки (3-й этап) выявлена активация ЛПО, интенсивность которой сохраняется к 5-м суткам и не достигает предоперационного уровня показателей (~ на 17% увеличение ДК, СО и снижение ПИ), в отличие от ЛХЭ. Выявленная динамика может свидетельствовать о более выраженном хирургическом стрессе при лапаротомии и снижение антиоксидантной активности компонентов анестезии с тиопенталом натрия.

Динамика показателя ОЛ свидетельствует о менее выраженных нарушениях в системе «липолиз-липогенез» в условиях ТХЭ в сравнение с ЛХЭ, что подтверждается уменьшением содержания ~ в 2 раза меньшем диапазоне изменения (на 21,13% и на 51,42% соответственно) к 5-м суткам по отношению к 1-м. Выявленная динамика ОЛ указывает об активации липолиза и угнетении липогенеза в условиях ЛХЭ в большей степени в сравнение с ТХЭ, как результат более выраженной гипоксии.

Таблица 2

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов эритроцитов в _условиях ТХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т)_

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

1-е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (2-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,35±0,13 2Д1±0,11 2,95±0,12с 2,76±0,13 2,71±0,12

СО, мм3/мин 0,35±0,007 0,26±0,009" 0,51 ±0,009° 0,47±0,008 0,41 ±0,007

ПИ, мин/мл 219,3±4,21 183,4±3,39а 155,8±4,07а 138,1±5,01 180,8±4,77ь

ОЛ, мг/мл 4,12±0,12 4,23±0,13 4.29±0,09 4,31±0,11 3,05±0,13ь

Стандартный протокол + а-ТФ (4-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,41±0,13 2Д8±0,И 231±0,12 2,27±0,13 2,39±0,12

СО, мм^/мин 0,33±0.007 0,28±0,009а 0,39±0,009ь 0,30±0,008а 0,26±0,007

ПИ, мин/мл 229,5±4,21 233,4±3,39 183,1±4,07а 225,9*5,01° 257,б±4,77а

ОЛ, мг/мл 4,05±0.12 3,44±0,13а 3,51±0,09 4,42±0,11ь 4,58±0,13

Примечание: - р<0.05 п>-р<0,01 с'-р<0.001 в сравнении с предыдущим этапом.

Особенности влияния хирургического доступа на процесс липидпероксидации, установленные в мембранах эритроцитов, сохраняются и при воздействии на тромбоцитарные мембраны (табл. 3 и 4). Одновременно не получено достоверных различий в тромбоцитах между данными показателей 5-го этапа в сравнении с исходным уровнем в группах сравнения, кроме содержания ОЛ. В условиях ЛХЭ показано снижение ОЛ (на 41,44%; р<0,01), в отличие от недостоверного изменения показателя в условиях ТХЭ.

Таблица 3

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов тромбоцитов

в условиях ЛХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т)

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (1-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,86 ±0,13 3,57±0,11 2,99±0,12а 3,69 ±0,13 2,29 ±0,12"

СО, мм7мин 0,44± 0,007 0,37 ±0,009а 0,48± 0,009ь 0,86 ±0,008' 0,51 ±0,007с

ПИ, мин/мл 148,3 ±4,21 152,5 ±3,39 139,1± 4,07 87,4 ±5,01" 149,8 ±4,77с

ОЛ. мг/мл 5,31±0,12 4,41±0,13а 3,84±0,09а 3,54 ±0,11 3,П±0,13а

Стандартный протокол + а-ТФ (3-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,79±0,12 2,21±0,11а 2,45±0,13 2,68±0,12 2,81±0,121

СО, мм3/мин 0,69±0,008 0,41±0,009е 0,35±0,012а 0,26±0,009" 0,27±0,012

ПИ, мин/мл 167,4±4,41 178,6£3,37 158,1±4,56 239Д±4,26С 230,5±4,41

ОЛ. мг/мл 3,75±0,11 3,84±0,11 3,76±0,12 2,96±0,13а 2,45±0,13а

Примечание: - р<0,05 "'-р<0,01 с>- р<0.001 в сравнении с предыдуи1им этапом.

Полученные данные изменения показателей ЛПО свидетельствуют о, • более высоком антиоксидантном потенциале в мембранах тромбоцитов при ТХЭ, в сравнении с ЛХЭ. Предполагается, что связь между

липидпероксидацией и гемостазом реализуют тромбоциты через изменение синтеза простагландинов, соединения антиоксидантного типа ограничивают гемокоагуляционные сдвиги при гипероксидации, снижая при этом частоту тромбических осложнений.

Дополнение а-ТФ в протокол хирургического лечения больных при различных вариантах холецистэктомий выявило различия в характере и глубине изменений показателей ЛПО-АОЗ на этапах исследования в сравнении с 1-й и 2-й группами. Необходимо отметить, что в условиях холецистэктомии а-ТФ проявляет выраженный антирадикальный эффект, на что указывают отсутствие статистически значимых изменений содержания ДК в мембранах эритроцитов, уменьшение СО на 2-м, а также на 4-м этапах, при сопряженном-повышении ПИ на этапах исследования и в сравнении с 1-м этапом. Наиболее стабилизирующая динамика установлена для показателей ЛПО в условиях ТХЭ. Дополнительным подтверждением служит прогрессирующее повышение содержания ОЛ к 5-м суткам до предоперационных значений, в отличие от ЛХЭ, где показано снижение показателя на 24,94% (р<0,05).

Таблица 4

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов тромбоцитов

в условиях ТХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т)

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (2-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,73±0,13 2,98±0,11 2,82±0,12 3,15±0,13 2,86±0,12

СО, мм"7мин 0,38±0,007 0,22±0,009с 0,45± 0,009 е 0,41 ±0,008 0,33±0,007 ь

ПИ, мин/мл 154,3±4,21 238,1±3,39е 149,7:44,07° 153,4±5,01 181, 1±4,77 а

ОЛ. мг/мл 5,17±0,12 4,93±0,13 5,08±0,09 5,11 ±0,11 5,03±0,13

Стандартный протокол + а-ТФ (4-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,56±0,13 2,31±0,11 2,29±0,12 2,49±0,13 2,63±0Д2

СО.мм7мин 0,32±0,007 0,26±0,009а 0,29±0,009 0,30±0,008 0,28±0,007

ПИ, мин/мл 223,6±4,21 233,4±3,39 230,1 ±4,07 229,5±5,01е 235,7±4,77

ОЛ, мг/мл 4,93±0,12 5.23±0,13 5,28±0,09 5,31 ±0,11 5,49±0,13

Примечание: -р<0,05 '-р<0,01 с'-р<0,001 в сравнении с предыдущим этапом.

В тромбоцитах антирадикальный эффект а-ТФ более выражен, чем в эритоцитах в условиях ЛХЭ, что проявляется снижением показателя СО (60,81%; р<0,001), повышением ПИ (на 37,72%; р<0,05) к 5-м суткам в сравнение с 1-м этапом. При этом получены недостоверные изменения показателей в условиях ТХЭ. Активация липолиза сохраняется в тромбоцитах при ЛХЭ (снижение ОЛ на 34,67%; р<0,05), в отличие от ТХЭ, где не получено достоверных различий в сравнении с 1-м этапом.

Анализ полученных данных свидетельствует, что дополнительное назначение а-ТФ пациентам при выполнении ХЭ позволило уменьшить влияние операционного стресса на гомеостатические сдвиги в организме.

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ в липидах плазмы крови в зависимости от варианта холецистэктомии. Проведенные исследования состояния системы ЛПО-АОЗ липидов плазмы крови в зависимости от варианта холецистэктомии пациентов 1-ой и 2-ой групп показали, что изменение показателей имеют некоторые различия в сравнении с мембранными липидами (табл. 5 и 6). Следует обратить особое внимание на однонаправленное изменение показателя СО (повышение на 29,41% и 61,92%, соответственно при ЛХЭ и ТХЭ), в отличие от мембранных липидов, где установлено его снижение при всех вариантах холецистэктомии на интраоперационном этапе. Отличительной особенностью ЛПО в плазме является прогрессирующее снижение (примерно в 2 раза, р<0,01) содержания ОЛ в группах сравнения к 5-му этапу в сравнении с предоперационным уровнем. Выявленный факт, вероятно, можно объяснить многократно большей растворимостью тиопентала натрия в липидном слое мембран клеток крови, чем в плазме, что и обусловливает снижение антиоксидантного эффекта на интраоперационном этапе.

Таблица 5

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов плазмы крови в

условиях ЛХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т)

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

I -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (1-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,21±0,11 2,65*0,11° 2,43±0,14 3,5*0,14° 2,38*0,13°

СО, мм7мин 0,17±0,007 0,22*0,009° 0,19±0,008а 0,39*0,010° 0,18*0,008'

ГШ, мин/мл 265,3*3,37 235,2*4,41 252,1±5,68 173,8*4,05° 253,4*4,25°

ОЛ, мг/мл 5,02±0,12 4,36*0,13 3,71*0,15" 3.26*0,0 9 2,93*0,13

Стандартный протокол + а-ТФ (3-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,41±0,11 2,12±0,11 2,36*0,12 2,55*0,14 2,39*0,12

СО, мм7мин 0,21 ±0,009 0,23±0,009 0,17*0,011" 0,11*0,01 Iе 0,13*0,009"

ПИ, мин/мл 232,1±3,19 233,4*4,45 261,2±5,24 294,5*4,62 279,6*4,28

ОЛ, мг/мл 4,52*0,14 5,73*0.15" 5,15±0,13 4,28*0,12" 3,64*0,12"

Примечание: -р<0,05 "'-р<0,01 с)-р<0.001 в сравнении с предыдущим этапом.

Величина периода индукции в плазме крови разнонаправленно изменяется в сравнении с показателями ДК и СО на этапах исследования, при этом динамика изменения ПИ более сходна с таковым в эритроцитах. В целом следует отметить достоверное снижение антиоксидантного потенциала на 5-е сутки в сравнении с предоперационным состоянием.

Сравнительный анализ окислительной стабильности мембранных и плазматических липидов на интраоперационном этапе показал (2-ой этап), что наибольший диапазон изменений характерен для липидов эритроцитов, затем тромбоцитов и плазмы, вне зависимости от варианта холецистэктомии. При этом важно отметить, что направление изменений стабилизирующего характера на состояние системы ЛПО-АОЗ в раннем послеоперационном периоде, в' большей степени проявляется при ТХЭ.

Таблица 6

Динамика показателей состояния системы ЛПО-АОЗ липидов плазмы крови в _условиях ТХЭ и дополненной а-ТФ (М ± т) _

Показатели Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеоперационный

1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

Стандартный протокол (2-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,35±0,11 2,13±0,11 2,19*0,14 2,33±0,14 2,18±0,13

СО, мм"7мин 0,21 ±0,007 0,34±0,009с 0,19±0,008с 0,38±0,010с 0,37±0,008

ПИ, мин/мл 233,4±3,37 181,7±4,41ь 242,9±5,68с 179,4±4,05с 180,5±4,25

ОЛ, мг/мл 5,11±0,12 4,18±0,13 * 4,08±0,15 2,93±0,09° 2,34±0,13ь

Стандартный протокол + а-ТФ (4-ая группа)

ДК, мкмоль/мл 2,36±0,11 2,12±0,11 2,28±0,14 2,11±0,14 2,17±0,13

СО. мм'/мин 0,25±0,007 0,21±0,009'1 0,17±0,008а 0,22±0,010° 0,27±0,0083

ПИ, мин/мл 259,7±3,37 246,1±4,41 254,2±5,68 243,3±4,05 225,4±4,25

ОЛ, мг/мл 5,05±0,12 4,38±0,13а 4,23±0,15 4,86±0,09а 4,97±0,13

Примечание: "' -р<0,05 '-р<0,01 с'-р<0.001 в сравнении с предыдущим этапом.

Дополнительное введение а-ТФ при ХЭ приводит к снижению активности ЛПО на всех этапах исследования, наиболее выраженные изменения установлены в условиях ТХЭ, в сравнение с ЛХЭ. Указанные изменения характеризуются снижением содержания ДК и СО, повышением ПИ, снижением ОЛ в меньшем диапазоне при сравнении показателей в 1-й и 2-й группах.

Динамика показателей окислительного метаболизма липидов в зависимости от варианта холецистэктомии. Исследование процесса липидпероксидации показало, что специфические различия влияния способов холецистэктомии более выражены в послеоперационном периоде. В то же время, на 3-й и 5-е сутки исследования для большинства показателей системы ЛПО-АОЗ выявлен однонаправленный характер динамики, имеющиеся различия касаются в большей степени диапазона изменений.

В мембранах эритроцитов в условиях ЛХЭ установлен интраоперационно более высокий уровень ОФЛ (в 1,83 раза; р<0,05), который не имеет достоверных различий с уровнем ОФЛ на послеоперационном этапе (табл. 7). Указанные факты отражают разнонаправленное изменение фракций ФЛ: увеличение ФЭА - на 31,21% (р<0,05), ФХ - на 48,47% (р<0,01), ЛФХ - на 79,17% (р<0,01) в сравнении с предоперационным состоянием. Выявлено интраоперационное снижение ОХС и его фракции (СХС на 27,84%, ЭХС на 52,73%), в ранний послеоперационный период показано повышение ОХС, что привело к повышению коэффициента ОХЛ/ОФЛ ~ в 3 раза в сравнении с исходным уровнем. Указанное обстоятельство свидетельствует о деструктивных изменениях в мембранах, как внутреннего слоя (ФЭА), так и наружного (ФХ), и отражает резко возросшую потребность клеток в антиоксидантном потенциале для их нормального функционирования в послеоперационном периоде. При ЛХЭ в эритроцитах установлена слабая

корреляционная зависимость с положительным вектором между ФЛ (ФЭА+ФХ) и ДК (г = 0,58; р<0,05), при этом не найдено корреляционной зависимости с показателем СО. Холестерол относится к трудноокисляемым компонентам липидов, поэтому повышение концентрации холестерола, а соответственно и увеличение коэффициента ОХС/ОФЛ, приводит к ослаблению корреляционной зависимости между указанными показателями.

Таблица 7

Динамика показателей липидного состава эритроцитов в зависимости от способа _холецистэктомии (М ± т)_

Показа тели (мкМ/мл) Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеопера ционный 1 -е сутки (3 этап) послеопера ционный 3-й сутки (4 этап) послеопера ционный 5-е сутки (5 этап)

ЛХЭ (1-ая группа)

ОФЛ 0,735 ±0,002 1,345±0,004с 0,794± 0,003 е 0,637±0,002а 0,781±0,003 а

ФЭА 0,173±0,002 0,227±0,001с 0,168±0,002ь 0,135±0,002а 0,182*0,002"

ФХ 0,262 ±0,003 0,389 ± 0,002' 0,279 ± 0,003" 0,224±0,002а 0,251±0,003

ЛФХ 0,048±0,002 0,086±0,001с 0,044±0,002с 0,032±0,002ь 0,039±0,002а

схс 2,256±0,025 1,628±0,018" 2,441 ±0,015е 2,342±0,016 2,344±0,018

эхе 1,633±0,09 0,772±0,007 ь 3,071±0,014с 5,782±0.021с 1,867±0,011с

охс 3,889±0,018 2,400±0,016" 5,512±0,017с 8,124±0,017с 4,211±0,016°

ТХЭ (2-ая группа)

ОФЛ 0,797±0,002 1,439±0,004с 0,906±0,008" 1,833±0,003с 0,894±0,002с

ФЭА 0.163±0,002 0,278±0,001с 0,220±0,002а 0,256±0,002а 0,206±0,001а

ФХ 0,211±0,001 0,26&±0,001ь 0,153±0,001с 0,326±0,00г 0,187±0,001с

ЛФХ 0,062±0,001 0,113±0,002е 0,075±0,001с 0,091 ±0,001ь 0,046±0,001с

схс 2,209±0,025 0,982±0,018с 2,759±0,015с 3,727±0,016с 2,181±0,014°

эхе 1,543±0,09 1,233±0,007а 4,317±0,014с 5,253±0,01а 4,317±0,014а

охс 3,752±0,018 2,215±0,016с 7,706±0,017е 8,98±0,017а 6,498±0,015°

Примечание."'- р<0,05; ы-р<0,01; с'-р<0,001 по сравнению с предыдущим этапом.

Таблица 8

Коэффициенты отношений фракций ОХС/ОФЛ в зависимости _от способа ХЭ (М ± т)_

Этапы исследования

Группа предопера интраопера послеопера послеопера послеопера

ционный ционный ционный ционный ционный

(1 этап) (2 этап) 1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

эритроцитов

ЛХЭ 4,46±0,03 1,68±0,02с 7,19±0,03 12,75±0,02с 5,39±0,03с

ТХЭ 4,71 ±0,03 1,54±0,02с 7,81 ±0,03" 4,89±0,02" 7,27±0,03с

тромбоцитов

ЛХЭ 15,9±0,03 7,95±0,02с 21,01±0,02с 31,04±0,03с 16,05±0,02с

ТХЭ 20,68±0,03 7,36±0,02с 15,91±0,02с 15,29±0,02 !6,48±0,02

плазмы крови

ЛХЭ 10,13±0,03 6,28±0,03с 13,96±0,002с 13,29±0,003 18^39^=0,002°

ТХЭ 9,65±0,03 4,13±0,03с 8,52±0,02с 6,30±0.02ь 10.68±0.02с

При изучении показателей, отражающих обмен ФЛ и ХС в мембранах эритроцитов в условиях ТХЭ, не получено существенных различий в динамике показателей в сравнении с ЛХЭ. Однако изменения были более выраженные на всех этапах исследования в условиях ТХЭ. Наблюдается увеличение уровня ОФЛ на интраоперационном этапе в 1,81 раза (р<0,01), на третьи сутки - 2,3 раза (р<0,01) по сравнению к исходному уровню. На 5 сутки происходит восстановление уровня до исходного состояния. В условиях ТХЭ установлены максимальное снижение ХС и его фракций на интраоперационном этапе и повышение на 3 сутки послеоперационного периода в 2,4 раза (р<0,01).

Разнонаправленный характер изменения содержания ОХС и ОФЛ при обоих вариантах холецистэктомий приводит к фазному изменению коэффициента ОХС/ОФЛ на этапах операции с тенденцией увеличения к 5-му этапу в большей степени в условиях ТХЭ (табл. 8). Выявленная динамика изменений коэффициента ОХС/ОФЛ на этапах операции свидетельствует о сохранении интенсивности ЛПО в эритроцитах групп сравнения.

При исследовании липидной фазы мембран тромбоцитов при ЛХЭ (табл. 9) не получено различий в динамике показателей в сравнении с эритроцитами, однако, изменения носили менее выраженный характер. Диапазон изменений (от 26% до 75%) зависит от этапа исследования и характеризуется разнонаправленным изменением содержания фракций ФЛ (увеличением) и ХС (снижением). Указанная тенденция сохраняется к 5-му этапу в сравнении с 1-м, что обеспечивает не достоверное изменение коэффициента ОХС/ОФЛ.

Таблица 9

Динамика показателей липидного состава тромбоцитов в зависимости от способа

холецистэктомии (М ± т)

Поката Этапы исследования

тели предопера интраопера послеопера послеопера послеопера

(мкМ/мл) ционныи ционный ционный ционный ционныи

(1 этап) (2 этап) 1 -е сутки (3 этап) 3-й сутки (4 этап) 5-е сутки (5 этап)

ЛХЭ (1-ая группа)

ОФЛ 0,253*0,003 0,353±0,002а 0,228*0,005° 0Д85±0,002а 0,282±0,003с

ФЭА 0,054±0,001 0.071 ±0.002" 0,043±0,004с 0,032±0,001" 0,067±0,002с

ФХ 0,067± 0,002 0,0985±0,(ЮГ 0,067±0,001ь 0,053±0,002а 0,075±0,001с

ЛФХ 0,015±0,001 0,018±0,002а 0,017±0,002 _, 0,014±0,00г 0,011 ±0,001а

СХС 1,521±0,015 0.911±0,016е 1,345±0,011с 1,211±0,012 1,403±0,014а

эхе 2,647±0,009 1.913±0,011ь 3,256±0,007с 4,532±0,006с 3,122±0,008ь

ОХС 4Д68±0,015 2,824±0,014ь 4,601±0,018 5,743±0,016ь 4,525±0,017а

ТХЭ

ОФЛ 0,224±0,003 0,384±0,002е 0,248±0,005 0,357±0,002с 0Д56±0,002

ФЭА 0,052±0,001 0,087±0,002с 0,053±0,004с 0,087±0,002с 0,049±0,001с

ФХ 0,062±0,002 0,095±0,002с 0,063±0,001с 0,094±0,002с 0,051±0,0010

ЛФХ 0,012±0,001 0.015±0,001ь 0,013±0,001 0,017±0,002" 0,012±0,001ь

СХС 1,707±0,015 0,546±0,016с 1,134±0,011с 1,632±0,013с 0,819±0,012с

эхе 2,925±0,009 1,979±0,011ь 2,513±0,007ь 3,844±0,010с 3,402±0,009

ОХС 4,632±0,015 2,825±0,014° 3,947±0,018с 5,476±0,013 4,221±0,016

Примечание. -р<0,05: - р<0,01; с> - р<0,001 по сравнению с предыдущим этапом.

Изучение окислительного метаболизма в условиях ТХЭ не выявило существенных различий в динамике показателей ФЛ на этапах исследования при одновременном более выраженном изменении СХС (снижение на 52,63%; р<0,001), недостоверных различиях ЭХС и ОХС в группах сравнения по отношению к 1-му этапу. Полученные данные имеют положительное прогностическое значение на течение послеоперационного периода. Степень интенсивности процессов ЛПО в данном случае может служить маркером структурной целостности и функциональной активности клеток, так как повышение агрегационной способности эритроцитов и тромбоцитов тесно сопряжено с изменениями липидного состава и активацией процессов ЛПО в их мембранах.

Исследование метаболизма липидов плазмы крови (табл. 10) показало, что стрессорный ответ организма при ЛХЭ вызывает однотипное изменение параметров, как и в мембранных липидах. Установлено интраоперационое увеличение ОФЛ и его фракций (диапазон изменений от 15% до 57%), при сопряженном снижение ХС и его эфиров (диапазон изменений от 26% до 35%). Указанные изменения наименее выражены в плазме, значения которых в 1,5 - 2 раза (р<0,01) меньше по сравнению с мембранными липидами. В раннем послеоперационном периоде выраженность изменений в липидах плазмы значительно увеличивается, что совпадает по направленности показателей, соответствующих динамике в мембранных липидах. Коэффициент отношения ОХС/ОФЛ в липидах плазмы прогрессирующе увеличивается к 5-му этапу (на 81,54%; р<0,01). Таблица 10

Динамика показателей липидного состава

плазмы крови в зависимости от способа холецистэктомии (М ± т)

Показа тели (мкМ/мл) Этапы исследования

предопера ционный (1 этап) интраопера ционный (2 этап) послеопера ционный I -е сутки (3 этап) послеопера ционный 3-й сутки (4 этап) послеопера ционный 5-е сутки (5 этап)

ЛХЭ (1-ая группа)

ОФЛ 0,635±0,003 0,850±0,004 ь 0,744±0,002 0,913±0,003а 0,721 ±0,0021

ФЭА 0,110*0,001 0.173±0,002с 0,081±0.002с 0,154±0,002с 0,132±0,001а

ФХ 0,188±0,001 0,269±0,002с 0,284±0,002 0,396±0,002с 0,203±0,002с

ЛФХ 0,075±0,002 0,115±0,003с 0,085±0,001ь 0,134±0,002с 0,087±0,001с

СХС 1,914±0,018 1,278±0,016с 3,414±0,013с 4,70540,010' 5,84840,012"

ЭХС 5,370±0,008 3,941 ±0,009" 7,322±0,011е : 7,428±0,007 7,409±0,013

ОХС 7,284±0,017 5,219±0,015ь 11,736±0,019с 1 12,133±0,014 13,257±0,016

ТХЭ

ОФЛ 0,812±0,003 1,573±0,007с 0,954±0,010с 1,625±0,004с 1,157±0,003

ФЭА 0,132±0,001 0,175±0,002в 0,098±0,002с 0,186±0,002с 0,151±0,00Г

ФХ 0,168±0,001 0,365±0,002с 0,172±0,002с 0,389±0,002с 0,187±0,001с

ЛФХ 0,072±0,001 0,153±0,002с 0,134±0,002 0,19!±0,00Г 0,102±0,001с

СХС 2,522±0,018 4,245±0,016с 4,943±0,013а 4,352±0,015 4,797±0,014

эхе 5.312±0,008 2.256±0,009с 3,193±0,011е 5,892±0,008с 7,561 ±0,011 ь

ОХС 7,834±0,017 б,501±0,015а 8,13640,019й 10,244±0,015ь 12,35&Н),016а

Примечание. -р<0.05: " - р<0,01: с'-р<0.001 по сравнению с предыдущим этапом.

Физико-химические свойства мембран во многом определяются жирнокислотным составом фракций фосфолипидов. Мембраны клеток, формирующие различные органы, существенно не отличаются по фосфолипидному составу. Поэтому исследование мембран, особенно эритроцитарных, вполне отражает состав фосфолипидов в любом органе, в том числе и гепатоцитов печени. На восстановление структуры и функции мембран, повышение активности гепатоцитов печени, как положительный результат выбора варианта ХЭ, указывает положительная динамика холестеролсинтезирующей функции печени, что подтверждается повышением в эритроцитах коэффициентов в условиях ЛХЭ и ТХЭ: ФХ/СХС (недостоверно), ФЭА/СХС (недостоверно и на 27,31%), ЭХ/СХС (на 54,43% и в 2,84 раза), ФЭА/ФХ (недостоверно и на 42,56%) , а также снижение ЛФХ (на 18,75% и 25,81%) в сравнении с 1-ми сутками (табл. 7, 11).

Таблица 11

Коэффициенты отношений фракций фосфолипидов эритроцитов в зависимости

от способа ХЭ (М ± т) _

Отно шения фрак ций Труп па Этапы исследования

предопера ционный (I этап) интраопера ционный (2 этап) послеопера ционный 1 -е сутки (3 этап) послеопера ционный 3-й сутки (4 этап) послеопера ционный 5-е сутки (5 этап)

эхе/ СХС ЛХЭ 0,516±0,011 0,474±0,008 1,258*0,013е 2,469*0,011' 0,796±0,012°

ТХЭ 0,698*0,009 1,25640,01 Iе 1,565±0,011° 1,409±0,014 1,97910,013 е

ФЭА/ СХС ЛХЭ 0,077*0,001 0,139±0,01 Iе 0,069*0,01° 0,058±0,002а 0,078*0,002"

ТХЭ 0,074±0,002 0,283±0,011е 0,079±0,001с 0,089*0,002 0,094*0,003

ФХ/ СХС ЛХЭ 0,116*0,011 . 0,239*0,012' 0,114±0,009е 0,096*0,001а 0,107*0,009

ТХЭ 0,096±0,001 0,273±0,01 Г 0,055*0,001' 0,087*0,002' 0,086*0,001

ФЭА/ ФХ ЛХЭ 0,660*0,012 0,584*0,012 0,602*0,011 0,603±0,011 0,725*0,012а

ТХЭ 0,773*0,013 1,037*0,013' 1,438*0,012" 0,785±0,011е 1,102*0.012е

Примечание."'-р<0.05; - р<0,01: с'-р<0.001 по сравнению с предыдущим этапом.

Специфичность варианта доступа, выражающаяся в разном диапазон! изменения показателей окислительного метаболизма липидов, проявлялась 1 мембранных и плазматических липидах крови на всех этапах исследования Установленный характер изменения ФЛ и ХС в плазме и мембранах клето! крови свидетельствует об активном обмене между ними жирнокислотным: компонентами и холестеролом. Это факт может рассматриваться кш компенсаторный процесс, необходимый для нормализации функций мембран который способствует снижению активности ЛПО, путем регуляции состав липидов мембран клетки.

Как показали исследования, окислительный стресс и активаци: фосфолипаз являются одним из ведущих механизмов окислительноп метаболизма мембранных и плазматических липидов. Дополнение а-Т<1 протокола хирургического лечения больных оказывает корригирующее влияни на состояние системы ЛПО-АОЗ и усиливает мембранотропный эффект мембранных и плазматических липидах крови, что позволяет рекомендовать и: включение в комплексную интенсивную терапию хирургических больных.

выводы

1. Метаболическое влияние варианта холецистэктомии на липиды эритроцитов и тромбоцитов у больных при хирургическом лечении хронического калькулезного холецистита сопровождается однонаправленным изменением показателей ЛПО-АОЗ на интраоперационном этапе: повышением содержания первичных продуктов липидпероксидации, уменьшением концентрации общих липидов, увеличением периода индукции, снижением скорости окисления липидов. В тоже время для липидов плазмы крови установлено снижение периода индукции и повышение скорости окисления.

2. В раннем послеоперационном периоде влияние варианта холецистэктомии на окислительный метаболизм липидов эритроцитов, тромбоцитов и плазмы крови у больных при хирургическом лечении хронического калькулезного холецистита сопровождается разнонаправленным изменением показателей ЛПО-АОЗ, имеющие максимальное увеличение или уменьшение на 3-й сутки. Метаболические изменения носят фазный характер, более выраженные в направлении стабилизации в условиях ТХЭ в сравнении с предоперационным уровнем.

3. Хирургический стресс в сочетании с влиянием способа холецистэктомии активируют нарушения в системе «липолиз - липогенез» в клеточных мембранах и плазме крови, разнонаправлено изменяют содержание фосфолипидов и холестерола. На интраоперационном этапе не выявлено существенных различий в зависимости от способа холецистэктомии, специфические метаболические нарушения липидного обмена проявляются в раннем послеоперационном периоде и более выражены в мембранных липидах в условиях ЛХЭ, по сравнению с ТХЭ.

4. Окислительный метаболизм и липолиз на этапах исследования в условиях ТХЭ вызывают наименьшие деструктивные изменения в липидах тромбоцитов, более выраженные - эритроцитов и плазмы крови, в сравнении с ЛХЭ.

5. Антирадикальный и мембранотропный эффект а-токоферола при хирургическом лечении холецистита при ТХЭ на всех этапах операции сопровождается выраженным угнетением ЛПО, более широким диапазоном изменений содержания фракций ФЛ и холестерола в мембранных и плазматических липидах, в отличие от метаболического эффекта а-ТФ в условиях ЛХЭ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Учитывая наличие изменений в состоянии системы ЛПО-АОЗ при хирургическом лечении хронического калькулезного холецистита, целесообразно проводить профилактику а-токоферолом на этапе подготовки больных и во время операции, а также в послеоперационном периоде.

2. Необходимо обратить внимание врачей на возможность ограничения' гомеостатических и гемокоагуляционных сдвигов путем введения в протокол

хирургического лечения больных а-токоферола, что обеспечит более высокую гемостатическую стабильность, нормализует метаболические процессы мембранных и плазматических липидов, улучшит антиоксидантную защиту в клетке.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кадочникова Г.Д. Эффекты альфа-токоферола на окислительный метаболизм липидов эритроцитов в условиях анестезии с пропофолом / Г.Д. Кадочникова, С.Л. Галян, М.В. Кобелев, В.В. Тихонова // Материалы медико-фармацевтической научно-практической конференции УралФО «Актуальные вопросы лекарственного обеспечения населения УралФО в системе дополнительного лекарственного обеспечения». - Тюмень, 2006. - С. 153-158.

2. Галян С.Л. Влияние альфа-токоферола на липидпероксидацию эритроцитов в условиях анестезии с пропофолом / С.Л. Галян, Г.Д. Кадочникова, М.В. Кобелев, В.В. Тихонова // Материалы медико-фармацевтической научно-практической конференции УралФО «Актуальные вопросы лекарственного обеспечения населения УралФО в системе дополнительного лекарственного обеспечения». - Тюмень, 2006. - С. 148-153.

3. Кадочникова Г.Д. Влияние компонентов анестезии на процесс липидпероксидации крови у хирургических больных / Г.Д. Кадочникова, М.В. Кобелев, О.З. Мустаев//Материалы Всероссийской научно-методической конференции «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ».-Воронеж, 2007.—С. 149—151.

4. *Кобелев М.В. Окислительный метаболизм липидов мембран эритроцитов в зависимости от выбора протокола анестезии при лапароскопической холецистэктомии / М.В. Кобелев, A.B. Финкель, Г.Д. Кадочникова, A.B. Махнев, Н.С. Бессонова // Медицинская наука и образование Урала. - Тюмень, 2008. - № 5. - С. 62-64.

5. Кадочникова Г.Д. Влияние компонентов анестезии на развитие окислительного метаболизма липидов эритроцитов в раннем послеоперационном периоде при холецистэктомии / Г.Д. Кадочникова, М.В. Кобелев, В.Н. Немцов, Т.Д. Журавлева // Актуальные проблемы фармацевтической помощи в современных условиях. - Тюмень, 2008. — С. HS-HS.

6. Финкель A.B. Влияние выбора анестетика на развитие окислительного стресса при хирургическом лечении желчекаменной болезни / A.B. Финкель, Г.Д. Кадочникова, С.Л. Галян, М.В. Кобелев, Н.С. Бессонова // Вестник интенсивной терапии. - Москва, 2008. - № 5. - С. 104-106.

7. Бессонова Н.С. Сравнительная оценка влияния компонентов анестезии на развитие окислительного стресса при хирургическом лечении желчекаменной болезни / Н.С. Бессонова, М.В. Кобелев, A.B. Финкель // Материалы 42-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической,

экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2008. - С. 31-32.

8. Кобелев М.В. Воздействие анестезиологических препаратов на липидпероксидацию мембран эритроцитов при холецистэктомии / М.В. Кобелев, Н.С. Бессонова, A.B. Финкель // Материалы 42-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2008. - С. 37-38.

9. Кадочникова Г.Д. Метаболические эффекты компонентов анестезии на липолиз в эритроцитах / Г.Д. Кадочникова, Н.С. Бессонова, A.B. Финкель, М.В. Кобелев // Межрегиональный сборник материалов научно-практической конференции «Фармацевтическая наука, образование и практика: реалии и перспективы развития». - Тюмень, 2009. -С. 194-198.

10. Кадочникова Г.Д. Оценка эффектов компонентов анестезии на процесс липидпероксидации в эритроцитах / Г.Д. Кадочникова, М.В. Кобелев, Н.С. Бессонова, A.B. Финкель // Межрегиональный сборник материалов научно-практической конференции «Фармацевтическая наука, образование и практика: реалии и перспективы развития». - Тюмень, 2009. - С. 198-201.

11. ""Кадочникова Г.Д. Влияние комбинированной анестезии с использованием изофлурана на процесс липидпероксидации эритроцитов при лапароскопической холецистэктомии / Г.Д. Кадочникова, A.B. Финкель, В.А. Петров, М.В. Кобелев, Н.С. Бессонова // Материалы V съезда ассоциации анестезиологов-реаниматологов северо-запада России. - Эфферентная терапия. - Санкт-Петербург, 2009. - Т. 15. - № 1 -2. - С. 63-65.

12. Кадочникова Г.Д. Окислительный метаболизм липидов эритроцитов в условиях анестезии с изофлураном / Г.Д. Кадочникова, A.B. Финкель, В.А. Петров, М.В. Кобелев, Н.С. Бессонова, Н.С. Киянкж // Материалы конгресса терапевтов «Актуальные вопросы диагностики и лечения наиболее распространенных заболеваний внутренних органов». - Тюмень, 2009. - С. 6364.

13. ""Кадочникова Г.Д. Исследование процессов липероксидации в эритроцитах и плазме крови в условиях анестезии с пропофолом и тиопенталом натрия / Г.Д. Кадочникова, A.B. Финкель, М.В. Кобелев, A.B. Махнев, В.А. Петров // Медицинская наука и образование Урала.-Тюмень, 20Ю.-№ 2.-С.62-64.

14. Кобелев М.В. Исследование процессов липидпероксидации крови в условиях анестезии с пропофолом или тиопенталом натрия / М.В. Кобелев, A.B. Махнев // Глава в монографии C.J1. Галян, Г.Д. Кадочникова, Т.Д. Журавлева «Окислительный метаболизм липидов крови при критических состояниях». - Тюмень: ООО "Печатник", 2010. - С. 18-28.

15. Бессонова Н.С. Исследование влияния анестезии с тиопенталом натрия на метаболизм липидов / Н.С. Бессонова, М.В. Кобелев, В.А. Петров // Глава в монографии С.Л. Галян, Г.Д. Кадочникова, Т.Д. Журавлева, «Окислительный метаболизм липидов крови при критических состояниях». -Тюмень: ООО "Печатник", 2010. - С. 35-41.

16. *Кобелев M.B. Активность процессов свободно-радикального окисления и антиоксидантной активности липидов крови при анестезии пропофолом или тиопенталом натрия / М.В. Кобелев, Г.Д. Кадочникова, A.B. Финкель // X Юбилейная Всероссийская научно-практическая конференция «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении». - Вестник Российской Военно-медицинской академии.

- Санкт-Петербург, 2011. - № I (33). - С. 424-425.

17. Кобелев М.В. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная активность липидов крови при анастезии тиопенталом натрия и пропофолом / М.В. Кобелев, Д.А. Мальцев, Д.И. Бояринцев // Материалы 45-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». - Тюмень, 2011. - С. 35.

18. Кадочникова Г.Д. Оценка влияния кетамина и тиопентала натрия на окислительный метаболизм липидов крови / Г.Д. Кадочникова, Н.С. Бессонова, М.В. Кобелев, В.А. Петров, Т.Ю. Ильиных // Материалы VI съезда ассоциации анестезиологов-реаниматологов северо-запада России. - Эфферентная терапия.

- Санкт-Петербург, 2011. - Т. 17. - № 3. - С. 42-43.

( * - публикации в журналах, рекомендованных ВАК)

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а-ТФ - альфа-токоферол

АОЗ - антиоксидантная защита

ДК - диеновые конъюгаты

ЖКБ - желчнокаменная болезнь

ЛПО - липидпероксидация

ЛФХ - лизофосфатидилхолин

ОЛ - общие липиды

ОФЛ - общие фосфолипиды

ТХЭ - традиционная

ПИ

ОХС -

общий холестерол период индукции

СО -СХС -ФХ -ФС -

фосфатидилхоин фосфатидилсерин

скорость окисления свободный холестерол

ФЭА —

фосфатидилэтаноламин

холецистэктомия

ЛХЭ-

ЭХС-

эфиры холестерола

лапароскопическая холецистэктомия

АКМ - активные кислородные метаболиты

Кобелев Максим Владимирович

ИЗМЕНЕНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО МЕТАБОЛИЗМА И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ЛИПИДОВ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ, ИХ КОРРЕКЦИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛОМ

03.01.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 01.03.2012 Формат 60x84/16. Печ. л. 1,0. Печать ризограф. Тираж 100. Зак. №04/13.

Типография ООО «Печатник», лицензия ПД № 17-0027 Тюмень, ул. Республики, 148 корп. 1/2. Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-86