Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование метафазных хромосом на начальных стадиях дробления зародышей мышей

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сорокин, Александр Викторович

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава I. ХРОМОСОМЫ В НАЧАЛЬНОМ ЭМБРИОГЕНЕЗЕ ЖИВОТНЫХ.

Некоторые морфологические особенности становления генетического аппарата у ряда видов животных.

Хромосомы млекопитающих на ранних стадиях эмбриогенеза.

Глава 2. ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ ЯДЕРНОГО АППАРАТА

В НАЧАЛЬНОМ ЭМБРИОГЕНЕЗЕ МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

Глава 3. ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

УЧАСТКОВ ГЕНОМА НА ПРЕПАРАТАХ ш situ

Глава 4. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования

Методы приготовления и окраски препаратов

РЕЗУЛЬТАТЫ

Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ И ЦИТОХИМИИ ХРОМОСОМ

В НАЧАЛЬНОМ ЭМБРИОГЕНЕЗЕ МЫШЕЙ.

Формирование метафазы первого деления дробления

Изучение хромосом первого деления дробления с использованием метода дифференциальной окраски.

Изучение хромосом второго деления дробления

Сопоставление длин хромосом первого и второго делений дробления.

Влияние БУдРА и Хехста 33258 при культивировании зигот in vitro на хромосомы

Окрашивание хромосом первого деления дробления различными флуорохромами.

Глава 6. адРЫШКООБРАЗУКЩИЕ РАЙОНЫ ХРОМОСОМ В

НАЧАЛЬНОМ ЭМБРИОГЕНЕЗЕ МЫШЕЙ.

Выявление ядрышкообразунцюс районов метафазных хромосом у эмбрионов с нормальным кариотипом.

Определение времени начала экспрессии ЯОР отцовского и материнского происхождения.

Окрашивание серебром интерфазных ядер эмбрионов мышей

Попытка выявления активных кластеров генов р-РНК при помощи реакции ник-трансляции m situ

Глава 7. ОБСУВДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование метафазных хромосом на начальных стадиях дробления зародышей мышей"

В 1972 г. академик Б.Л.Астауров, открывая 2-ой съезд Всесоюзного Общества генетиков и селекционеров, сказал: "Я твердо уверен, что именно решение проблем осуществления наследственной информации в процессах индивидуального развития, проблем генетики развития, стало сейчас направлением главного удара не только генетики, но и всей современной общей биологии" (Астауров Б.Л., 1972).

Прошедшие годы полностью подтвердили предвидение Б.Л.Астауро-ва. В настоящее время проблемы генетики индивидуального развития, в целом, и генетики развития млекопитающих, в частности, привлекает внимание широкого круга специалистов самого различного профиля. Особенно интенсивно разрабатываются молекулярно-биологиче-скпе аспекты генетики развития, механизмы активации и инактивации генетических локусов (см.монографии: Корочкин Л.И., 1977; Нейфах А.А., Тимофеева М.Я., 1977; Кафиани К.А., Костомарова А,А., 1978), в том числе и в исследованиях, выполненных на зародышах млекопитающих (см. обзоры: Mintz, 1974; McLaren, 1976; Sherman, 1979; Magnuson, Epstein, 1981; Johnson, 1981).

Однако молекулщшо-биологические и молекулярно-генетические подходы отнюдь не могут считаться единственными способами изучения механизмов реализации генетической информации в раннем эмбриогенезе млекопитающих, необходимо знать, каковы особенности структурной организации хромосомного аппарата у ранних зародышей, т.е. цроводить цитогенетические исследования.

Цитогенетические аспекты развития млекопитающих разработаны крайне недостаточно. Это направление начало успешно развиваться пооле создания современных методов метафазного анализа хромосом ранних зародышей, т.е. лишь в середине 70-х и начале 80-х гг. (Дыбан А.П., 1970, 1974; Дыбан А.П., Баранов B.C., 1978; Дыбан А.П., 1979; Баранов B.C., 1983). В этих работах основное внимание обращено на влияние различных хромосомных аномалии на течение эмбриогенеза, т.е. на выявление стадии и конкретных патогенетических процессов, которые нарушаются при трисомиях и моносо-миях. Полученные факты позволили сформулировать гипотезу о дифференциальной активности хромосом в раннем эмбриогенезе млекопи-тащих, т.е. предположить наличие в геноме млекопитающих "ран-ню: генов", локализованных в некоторых, но отнвдь не во всех хромосомах, и определенным образом влияющих на морфогенетические процессы» осуществляющиеся еще в доимплантационном периоде (Дыбан А.П., 1979). Развивая эту гипотезу, было высказано предположение и о взаимодействии гомологичных хромосом еще на одноклеточной стадии, благодаря которому происходит активация генетических локусов, т.е. "ранних генов" (Баранов B.C., 1983).

Это направление исследований с полным правом следует отнести к феногенетике млекопитавдих, так как посредством патогенетических и эмбриологических методов в данных работах выявлялись фе-нокритические фазы для трисомий и моносомий, т.е. решалась задача, органически входящая в основную цроблему феногенетики: "Поиску различий между мутантными и немутантными особями, начиная: с первых стадий эмбриогенеза . накоплению данных о фено-кржтических фазах в развитии (Тимофеев-Ресовский Н.В. и др., 1977).

Однако, несмотря на то, что применение новейших методов цито-ген:етики в области экспериментальной эмбриологии, является многообещающим, следует признать, что в настоящее время этот подход в познании закономерностей онтогенеза млекопитающих используется недостаточно. В основном это объясняется трудностью црило-жения современных цитогенетических приемов, т.е. необходимостью серьезной их модификации цри исследованиях хромосом у ранних зародышей млекопитающих. Особенно велики методические трудности цри исследовании самых начальных стадий развития, когда из хромосомны:: наборов отцовской и материнской гамет формируется хромосомный аппарат эмбриона. "Определенный ход цитогенетических "процессов в этот момент обеспечивает цреобразование дозародышевой (материнской) генетической конституции в дефинитивную конституцию потомка и обеспечивает новую возникающую индивидуальность генетической информацией на оставшийся отрезок индивидуального развития" (Астауров Б.Л., 1968). Именно на этих стадиях могут возникать те нарушения хромосомного аппарата, которые приводят к хромосомным эмбриопатиям, что представляет существенный интерес для экспериментальной медицины.

Таким образом, важность изучения структурной организации ядра и особенностей хромосомного аппарата зиготы и первых бластомеров зародышей млекопитающих не вызывает сомнения. Вместе с тем, именно эти стадии эмбриогенеза млекопитающих цитогенетически изучены крайне недостаточно. Так, например, одним из основных цитологических явлений, присущих эмбриогенезу животных, является гетероцик-личность родительских наборов хромосом у ранних зародышей (Проко-фьева-Бельговская А.А., 1947, 1964, 1981; Берг Р. Д., 1965). Это явление твердо доказано для эмбриогенеза различных классов животных (Прокофьева-Бельговская А.А., 1947, 1964, 1981) и предложено биологическое объяснение его смысла для эмбриогенеза некоторых насекомых (Beriowitz, 1974). Гетероцикличность родительских наборов хромосом замечена и у ранних зародышей млекопитающих (Удало-ва Л.Д., 1969; Donahue, 1972, 19726), однако, эти наблюдения сделаны на немногих зародышах и остается невыясненной динамика изменения родительских наборов хромосом в ходе первых делений дробления зародышей млекопитающих.

Между тем, в настоящее время существует реальная возможность так модифицировать методы приготовления и окраски метафазных хромосом ранних зародышей мышей, чтобы не только детально изучить само явление гетероцикличности родительских наборов хромосом, но и исследовать рисунок дифференциальной окраски гомологичных хромосом и измерить их величину. Данный вопрос являлся основной задачей настоящей работы.

Одним из возможных цитогенетических подходов для изучения функциональной активности генов в раннем эмбриогенезе млекопитающих может служить метод визуализации в метафазных хромосомах активных рибосомальных генов. В настоящее время это достаточно хорошо разработанные методы, которые позволяют на цитологических препаратах метафазных хромосом выявлять кластеры генов р-РНК (ядрыжообразущие районы хромосом - ЯОР хромосом),которые были активными в предшествовавшей интерфазе (Howell, 1982; Wachtier, Schwarzacher, 1983). Применение этой цитогенетической методики для исследования раннего эмбриогенеза млекопитающих может позволить не только устанавливать саму по себе активность генов р-РНК, но и определять количество функционирующих кластеров рибосомальных генов и их локализацию на хромосомах. Таким образом, изучение активации генов р-РНК, по-видимому, являющихся у зародышей мышей одними из "ранних" генов (Дыбан А.П., 1979), имеет существенный интерес для генетики развития. Изучение этого вопроса является второй задачей настоящей работы.

Применение ряда фдуорохромов и других химических веществ, специфически связывающихся с ДНК, позволило получить большое количество важных фактов, значительно расширивших современные представления о структурной организации ядра и метафазных хромосом различных клеток животных. Этот подход почти не применялся для анализа хромосом в самом начальном эмбриогенезе млекопитающих. Поэтому в данной работе сделана попытка выявить особенности окрашивания флуорохромами ^характерные для хромосом в начальном эмбриогенезе.

Таким образом, настоящая работа входит в цикл цитогенетических исследований Отдела эмбриологии ИЭМ АМН СССР и относится к самому начальному эмбриогенезу млекопитающих, т.е. к тем яе самым стадиям, которым были посвящены две предыдущие кандидатские диссертации, выполненные в отделе (Паткин ЕЛ., 1980; Хожай Л.И., 1981), однако, настоящая работа касается другого круга вопросов, В ней поставлены следующие конкретные задачи:

1. Измерить длины отцовских и материнских гомологичных хромосом в 1-ом и 2-ом делениях дробления зародышей мышей.

2. Изучить характер поперечной исчерченности хромосом в первых делениях дробления, применив метод дифференциальной окраски.

3. Оцределить взаиморасположение хромосом в метафазных пластинках 1-ого и второго делений дробления.

4. Изучить окрашивание фдуорохромами, специфически связывающимися с ДНК и белками хромосом в 1-ой и 2-ой метафазах деления дробления.

5. Изучить влияние веществ, связывающихся с ДНК (БУдР и Хехст 33258) на отцовский и материнский наборы хромосом.

6. Оцределить время появления ЯОР, локализованных на хромосомах отцовского и материнского происхождения.

7. Сравнить количество ЯОР в 1-ом и 2-ом делениях дробления с количеством ЯОР на хромосомах эмбрионов последующих стадий развития.

Основной итог проведенных исследований сводится к следующему:

На стадиях первого и второго делений дробления зародышей мышей рисунок дифференциальной окраски хромосом не отличается от рисунка дифференциальной окраски хромосом взрослых животных.

В первом делении дробления у мышей длина хромосом отцовского происхождения в среднем в 1,2 раза больше длины гомологичных хромосом материнского происхождения. Во втором делении дробления не обнаружено существенных различий в длинах гомологичных хромосом.

Активация генов р-РНК в эмбрионах мыши происходит на стадии двух бластомеров. Активируется одновременно несколько кластеров генов р-РНК, локализующихся на различных хромосомах. Активация генов р-РНК, цроисходящих от отца и от матери, осуществляется одновременно.

На основании полученных результатов на защиту выносятся следующие положения.

1. При дифференциальном окрашивании по методу трипсин-Гимза рисунок окрашивания хромосом первого и второго делений дробления совпадает со стандартным рисунком дифференциальной окраски хромосом взрослых животных.

2. В первом делении дробления зародышей мышей существует различие в длинах между гомологичными хромосомами отцовского и материнского происхождения. Хромосомы отцовского происхождения длиннее в среднем в 1,2 раза.

3. Во втором делении дробления в длинах гомологичных хромосом не обнаруживается существенных различий.

4. Начиная с метафазы второго деления дробления и на протяжении всех последующих стадий доимшгантационного развития, в мета-фазах при селективном окрашивании серебром выявляются ядрышкооб-разующие районы на нескольких хромосомах.

Заключение Диссертация по теме "Эмбриология, гистология и цитология", Сорокин, Александр Викторович

ВЫВОДЫ

1. В первом делении дробления зародышей мышей хромосомы отцовского происхождения в среднем в 1,2 раза длиннее гомологичных хромосом материнского происхождения.

2. Во втором делении дробления зародышей мышей не обнаружено значительных различий в длинах гомологичных хромосом.

3. Рисунок дифференциальной окраски метафазных хромосом первого и второго делений дробления зародышей мышей не отличается от рисунка дифференциальной окраски метафазных хромосом взрослых животных.

4. В метафазных пластинках первого деления дробления хромосомы отцовского и материнского происхождения, как правило, не перемешиваются и сохраняют относительно обособленное расположение.

5. В эмбриогенезе мышей ЯОР метафазных хромосом впервые окрашиваются серебром во втором делении дробления, что может свидетельствовать о функционировании кластеров генов р-РНК в интерфазных ядрах двубластомерных зародышей.

6. При окрашивании серебром метафазных хромосом второго деления дробления выявляются ЯОР одновременно на нескольких хромосомах. Исходя из этого можно предположить, что в интерфазных ядрах двубластомерных зародышей происходит активация сразу нескольких кластеров генов р-РНК, локализующихся на различных хромосомах.

7. Независимо от отцовского или материнского происхождения ме-тацентрической хромосомы, несущей ЯОР, его окрашивание серебром наблюдается во втором делении дробления. Это позволяет предполагать, что активация кластеров генов р-РНК отцовского и материнского происхождения цроисходит одновременно в интерфазных ядрах двубластомерных зародышей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сорокин, Александр Викторович, Ленинград

1. Астауров Б.Л. Цитогенетика развития тутового шелкопряда и ееэкспериментальный контроль,- М., Наука, 1968.

2. Астауров БЛ. Наследственность и развитие.-М.,Наука, 1974.

3. Астауров Б.Л. Проблемы общей биологии и генетики.-М., Наука, 1979.

4. Баранов B.C. Хромосомный контроль раннего развития млекопитающих.- Онтогенез, 1983, т.14, с.573-589.

5. Барский В.Е., Иванов В.Б., Скляр Ю.Е. Дихлортриазиниламинофлуоресцин новый флуорохром для гисто- и цитохимического выявления белков.- Известия АН СССР, 1968, № 5, с.744-747.

6. Берг Р.Л. Гетероцикличность хромосом и их комплексов как механизм, обеспечивающий последовательность вступления в действие отдельных элементов кода наследственной информации.-В кн.: Проблемы медицинской генетики. Л., Медицина, 1965, с.97-105.

7. Бочков Н.П. Генетика человека. М., Медицина, 1978.

8. Газарян К.Г., Тарантул В.З. Геном эукариот. Молекулярная организация и экспрессия. М., Изд.МГУ, 1983.

9. Гинзбург А.С. Закономерности оплодотворения у животных.1. М., Изд. Знание, 1977.

10. Дубинин Н.П., Сидоров Б.Н. Эффект положения гена. Биолог.журн., 1934, т.'4, с.555-588.

11. Дыбан А.П. Дифференциальная активность хромосом в раннем эмбриогенезе млекопитающих. В кн.: Итоги науки и техники. Общая генетика. Изд.ВИНИТИ, 1979, М., т.6, с.41-76.

12. Дыбан А.П., Баранов B.C. Цитогенетика развития млекопитающих.- М., Наука, 1978.

13. Закс Л. Статистическое оценивание. М., Статистика, 1976.

14. Захаров А.Ф. Линейная дифференцированность хромосом млекопитающих и человека. Вестник АМН СССР, 1973а, т.12, с.44-49.

15. Захаров А.Ф. Новые методы изучения хромосом человека. В кн.:

16. Итоги науки и техники. Генетика человека. М., Изд.ВИНИТИ, 19736, т.1, с.48-89.

17. Захаров А.Ф., Барановская Л.И., Деминцева B.C., Ибрагимов АЛ.

18. Дифференциация хромосом человека по длине и проблема их идентификации. Сообщ.1. Общая картина дифференциации, выявляемая с помощью 5-бровдезоксиуридина. Цитология, 1973, т.15, с.508-518.

19. Захаров А.Ф. Дифференциальная окрашиваемость хромосом: феномен и механизмы. Успехи совр.биол., 1975, т.80, с.335-350.

20. Захаров А.Ф. Хромосомы человека (проблемы линейной организации). М., Изд.Медицина, 1977.

21. Зеленин А.В. Лгоминисцентная цитохимия нуклеиновых кислот.1. М., Наука, 1967.

22. Караванов А.А. Транскрипционно активные участки хроматина.

23. Онтогенез, 1983, т.14, с.339-359.

24. Кафиани К.А., Костомарова А.А. Информационные макромолекулыв раннем развитии животных. М., Наука, 1978.

25. Кикнадзе И.И. Функциональная организация хромосом. Л.,1. Наука, 1972.

26. Корочкин Л.И. Взаимодействие генов в развитии. М., Наука,1977.

27. Меллер Г.Г., Прокофьева-Бельговская А.А. Структура хромонеминертной области Х-хромосомы D.meianogaster. Докл. АН СССР, 1935, т.I, с.658-660.

28. Михайлов М.В., Заседателев А.С., Крылов А.С., Гурский Г.В.

29. Механизм "узнавания" АТ-пар ДНК молекулами красителя

30. Хехст 33258. Молекулярная биология, 1981, т.15, с.690-705.

31. Мосолов А.Н. Генетический аппарат эукариотов как единая динамическая структура. Успехи современной генетики, 1980, т.9, с.183-202.

32. Нейфах А.А., Тимофеева М.Я. Молекулярная биология процессовразвития. М., Наука, 1977.

33. Нейфах А.А., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. М., Наука, 1978.

34. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М., Наука, 1983.

35. Паншин И.Б. Цитогенетическая природа эффекта положения геновwhite and oubitus intaruptus. Еиол.журн., 1938, Т.7, с.837-868.

36. Паткин Е.Л. Исследование структурного гетерохроматина на начальных стадиях развития зародышей мышей. Онтогенез, 1980, т.II, с.49-55.

37. Паткин Е.Л. Лкминисцентная микроскопия гетерохроматина враннем эмбриогенезе млекопитающих. Автореф.канд.дис., Л., 1980.

38. Паткин Е.Л., Смарагдов М.Г., Смирнов А.Ф. Окрашивание интерфазных и метафазных хромосом с помощью цроционового желтого 4RS. Цитология, 1977, т.19, с.935-938.

39. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетероцикличность системы клеточного ядра. Ж.общ.биол., 1947, т.8, с.247-280.

40. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетероцикличность системы клеточного ядра на ранних стадиях развития лосося, форели, сига. Цитология, 1964, т.6, с.555-559.

41. Прокофьева-Бельговская А.А. Репродукция хромосом. Успехисовременной генетики, 1971, т.З, с.80-99.

42. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетерохроматические районы хромосом: строение и функции. Ж.общ.биол., 1977, т.38, с.735-737.

43. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетероцикличность системы клеточного ядра. В кн.: Генетика и благосостояние человечества. М., Наука, 1981, с.319-338.

44. Рокицкий П.Ф. Введение в статистическую генетику. Минск,

45. Изд. Высшейшая школа, 1974.

46. Свидченко А.И. Соматические ассоциации хромосом. Цитологияи генетика, 1975, т.9, с.464-470.

47. Смирнов А.Ф., Смарагдов М.Г. ДНК хромосом и проблемы организации генома эукариотов. Успехи современной генетики, 1978, т.7, с.131-149.

48. Соколов Н.Н. Взаимодействие ядра и цитоплазмы при отдаленнойгибридизации животных. М., Изд. АН СССР, 1959.

49. Тимофеев-Ресовский Н.В., Гинтер Е.К., Иванов В.И. О некоторых проблемах и задачах феногенетики. В кн.: Проблемы экспериментальной биологии развития. М., Наука, 1977, с.186-195.

50. Хвостова В.В. Обнаружение транслокаций с проксимальной частью

51. Х-хромосомы методом эффекта положения. Еиол.журн., 1936, т.5, с.7-11.

52. Хожай Л.И. Изучение кариологии начального эмбриогенеза приоплодотворении и партеногенетическом развитии. -I., автореф.канд.дис., 1981.

53. Ченцов Ю.С., Поляков В.Ю. Ультраструктура клеточного ядра.1. М., Наука, 1974.

54. Abramczuk J., SawickyW. Variation in dry mass and volume ofnonfertilized oocytes and blastomeres of 1-, 2- and 4celled mouse embryos. J.Exp.Zool., 1974, v.188, p.25-34.

55. Abramczuk J., SawickyW. Pronuclear sinthesis of ША in fertilised on parthenogenetically activated mouse eggs. -Exp.Cell Res.,1975, v.92, p.361-372.

56. Adler D.A., West J.D., Chapman V.M. Expression of oi-galactosidase in preimplantation mouse embryos. Nature, 1977, v.267, p.838-839.

57. Anglier II., Hernandez-Verdun D., Boutelle M. Visualisationof Ag-NOR proteins on nucleolar transcriptional units in molecular spreads.- Chromosoma, 1982, v.86, p.661-672.

58. Arrighi F.E., Hsu T.C. Localisation of heterochromatin inhuman chromosomes.- Cytogenetics, 1971, v.10, p.81-86.

59. Ashley Т., Pocock II. A proposed model of chromocomal organisation in nuclear at fertilisation.- Genetica, 1981, v.55, p.161-169.

60. Austin C.R. The formation, growth and conjugation of the pronuclei in the rat egg. J.Roy.Microscop.Soc., 1951, v.71, p.295-306.

61. Austin C.R., Braden A.W.H. Observations on nuclear size andform in living rat and mouse eggs. Exp.Cell Res., 1955, v.8, p.163-172.

62. Austin C.R., Walton A. Fertilization. In: Marshall's physiology of reproduction, 1960, v.1, part 2, p.310-396.

63. Avivi L., Feldman M. Arrangement of chromosomes of plants.

64. Hum.Genet., 1980, v.55, p.281-295.

65. Bak A.L., J^rgensen A.L., Leuthen J. Chromosome banding andcompaction.- Hum.genet., 1981, v.57, p.199-202.

66. Balhorn R. A model for the structure of chromatin in mammalian sperm. J.Cell.Biol., 1982, v.93, p.298-305.

67. Balman A. Wick translation of mammalian DHA. Biochim.

68. Biophys. Acta, 1979, v.563, p.155-166.

69. Bar M.L., Bertram E.C. A morphological distinction betweenneurones of the male and female and behavior of the nucleolar satellite during accelerated nucleoprotein synte-sis. Nature, 1949, v.163, p.676-677.

70. Berlowitz L. Chromosomal inactivation and reactivation in

71. Mealy bugs. Genetics, 1974, v.78, v.311-322.

72. Bestor Т., Schatten G. Anti-tubulin immunofluorescence microscopy of microtobules during the pronuclear movements of sea urchin. Dev.Biol.,1981, v.88, p.80-91.

73. Beutler E., Yeh M., Vairbanks V.P. The normal human femaleas a mosaic of X chromosome activity. Proc.lIatl.Acad. Sci. USA, 1962, v.48, p.9.

74. Biggers J.D., Whitten W.K., Whittingam D.G. The culture ofmouse embryos in vitro. In: Methods in mammalian embryology. Ed. Daniel J.C., Freeman, San-Francisco, p.86-116, 1971.

75. Blandau R.J. Biology of eggs and implantation. In: Sex andinternal secretions, v.2, Williams and Wilkins Co, Baltimore, <J961, v.8, p.797-882.

76. Bloom S.E., Goodpasture C. N-impruved technique for selectivsilver staining of nucleole organiser regions in human chromosomes. Hum.Genet., 1976, v.34, p.199-206.

77. Brown S.W. Heterochromatin. Science, 1966, v.151, p.417425.

78. Buckland R.A., Evans H.J., Sumner A.T. Identifying mousechromosomes with the ASG technique. Exp.Cell Res.,1971, v.69, p.231-236.

79. Buys C.H.C.M., Osigna J. Abudance of protein-bound sulfhydryl and disulfide groups at chromosomal nucleolus organising regions. Chromosoma, 1980, v.77, p. 1-11.

80. Calargo P.G., McLaren A. Ultrastructural observations ofpre implantation stages in the sheep. J.Embryol.exp. Morph., 1976, v.36, p.609-622.

81. Capoa A.D., Ferraro M., Lava P., Pellicia P., Finazzi-Agro A.

82. Silver staining of the nucleolus organiser regions (1T0R)requires clusters of sulfhydryl groups. J.Histochem. Cytochem., 1982, v.30, p.908-911.

83. Caspersson Т., Parber S., Poley G.E., Kadynowaki J., Modest

84. E.J., Simmonsson E., Wagh U., iiech L. Chemical differentiation along metaphase chromosomes. Exp.Cell Res.,1968, v.49, p.218-222.73» Chakaborty J. Nuclear changes in developing mouse embryos.-Ohio J.Sci., 1980, 80, Program abstr., p.64.

85. Chang C., Yanagimachi R. Fertilisation of ferret ova by deposition of epidimal sperm into the ovarian capsule with special refrence to the fertilisable life of ova and the capacitation of sperm. J.Exp.Sool., 1963, v.154, p.175-187.

86. Chiarelli В., Br^gger A. Superchromosomal organization andits cytogenetic consequences in the eukaryota. Genetica,1978, v.49, p.109-126.

87. Clegg K.B., Piko L. Size and specific activity of the UTPpool and overall rates of RNA synthesis in early mouse embryos. Develop.Biol., 1977, v.58, p.76-95.

88. Comings D.E. Arrangement of chromatin in the nucleus.

89. Hum.Genet., 1980, v.53, p.131-143»

90. Commitee on standartized genetic nomenclature for mice.

91. Standart karyotype of the mouse Mus musceles. J.Heredity, 1972, v.63, p.69-72.

92. Cotton R.W., Manes C., Hamkalo B.A. Electron microscopicanalysis of RITA transcription in preimplantation rabbitembryos. Chromosoma, 1980, v.79, p.169-178.

93. Dev.V.G., Tantravahi R., Miller D.A., Miller O.J. nucleolusorganisers in Mus musculus subspecies and the RAG mousecell line. Genetics, 1977, v.86, p.389-398.

94. Donahue R.P. Maturation of the mouse oocyte in vitro.

95. A sequence and timing of nuclear progression. -J.Exp.Zool., 1968, v.169, p.237-250.

96. Donahue R.P. Cytogenetic analysis of the first cleavagedivision in mouse embryos.- Proc.Nat.Acad.Sci. USA,1972a, v.69, р.74-77.

97. Edwards R.G., Sirlin J.L. Labelled pronuclei in mouse eggsfertilized by labbeled sperm.- Nature, 1956, v.177, p.429»93* Engel V/., Zenres M.T., Schmid M. Activation of mouse riboso-mal RITA genes at the 2-cell stage. Hum.Genet., 1977, v.38, p.57-63.

98. Epel D. Fertilization. Endeavour, 1980, v.4, p.26-31.95» Epstein C.J. Gene expression and macromolecular syntesis during preimplantation embryonic development. Biol.Reprod., 1975, v.12, p.82-105.

99. Gates A.H. Maximizing yield and developmental uniforrniti ofegge.- In; Methods in mammalian embryology. Ed. Daniel J. Freeman Co., San Francisco, 1971, p.64-75.

100. Gazit В., Cedar H., Lerer J., Voss R. Active genes are sensitive to deoxyribonuclease I during metaphase. -Science, 1982, v.217, p.648-650.

101. Gerassimova-llavashina H. A contribution to the cytology offertilization in flowering plants. Nucleus (Calcutta), 1960, v.3, p.111-120.

102. Golbus M.S., Calarco P.G., Epstein C.J. The effects of inhibitors of RTTA synthesis (oC-amanitin and actinomicin D)on preimplantation mouse embryogenesis. -J.Exp.Zool., 1973, v.186, p.207-216.

103. Epstein C.J., Smith S., Travis В., Tucker G. Both X-chromosomes function before visible X-chromosome inactiva-tion in female mouse ambryos. Nature, 1978, v.274,p.500-502.

104. Evans H.J., Buckland R.A., Pardue M.L. Location of genescoding for 18S and 28S ribosomal R1IA in the human genome.- Chromosoma, 1974, v.48, p.405-426.

105. Gondos В., Bhiraleus P., Conner L.A. Pronuclear membranealterations during initiation of cleavage in the rabbit.- J.Cell Sci., 1972, v.10, p.61-78.

106. Goodpasture C., Bloom S.E. Visualization of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver stainig. Chromosoma, 1975, v.53, P.37-50.

107. Groundaine M., Weintraub H. Propagation of globin DNAase1.hypersensitive sites in absense of factors required for induction: a possible mechanism for determination.

108. Cell, 1982, v.30, p.131-139.

109. Gwatkin R.B.L. Fertilization mechanisms in man and mammals.

110. Plenum Press, IT.Y.-London, 1977.

111. Hartung M., Mizze C., Stuhl A. Nucleolus organisers in humanoocytes of meiotic prophase I, studied by the silver -1I0R method and electron microscopy.- Hum.Genet.,1979, v.52, p.295-308.

112. Heitz E. Das He t.ero chroma tin der Mouse.- Jb .Wissensch.

113. Botan., 1928, v.69, p.762-818.

114. Heitz E. Hetегоchromatin, Chromozentren, Chromomeren.

115. Ber.dtsch.Botan.Geselsch., 1929, v.47, p.274-284.

116. Henderson A.S., Warburton D., Atwood K.C. Localization ofribosomal D1TA in the human chromosome complement.

117. Proc.Hat.Acad.Sci.USA, 1972, v.69, p.3394-3398.

118. Henderson M., Harris P. Cortical microtubules and pronuclearmigration in fertilized and artifically activated seaurchin eggs.- Eur.J.Cell Biol., 1980, v.22, p.301.

119. Hillman IT., Hillman R., Wileman G. Ultrastructural studies12 12of cleavage stage t /t mouse embryos.- Am.J.Anatomy, 1970, v.128, p.311-340.

120. Hilwig J., Gropp A. Staining of constitutive heterochromatinin mammalian chromosome with a new fluorochrome.

121. Exp.Cell Res., 1972, v.75, p.122-126.

122. Hofgartner F.J., Schmid M., Krone \7., Zenres M.T., Engel W.

123. Pattern of activity of nucleolus organisers during spermatogenesis in mammals as analysed by silver-staining.-Chromosoma, 1979a, v.71, p.197-216.

124. Hofgartner F.J., Krone W., Jain K. Correlated inhibition ofr-RlTA synthesis and silver-staining by actinomicin D.-Hum.Genet., 1979b, v.47, p.329-333.

125. Hollander D.H., Litton L.E., Liang Y.W. Ethidium bromidecounterstain for differentiation of quinacrine stainedinterphase bodies and brilliant metaphase bands.-Exp.Cell Res., 1976, v.99, p.174-175.

126. Howell W.M. Visualization of ribosomal gene activity: silverstains proteins associated with r-RlTA transcribed from oocyte chromosomes.- Chromosoma, 1977, v.62, p.361-367.

127. Howell W.M. Selective staining of nucleolus organiser regions (IT0Rfs).- In: The cell nucleus. Ac.Press, N.Y., 1982, v.11, p.89-142.

128. Howell W.M., Denton Т.Е., Diamond J.R. Differential stainingof the sattelite regions of human acrocentric chromosomes. Experientia, 1975, v.31, p.260-262.

129. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protractive colloidal develo- per: a 1-step method. Experientia, 1980, v.36, p.1014.

130. Hsu T.S. Differential rate in RNA-synthesis between euchromatin and heterochromatin.- Exp.Cell Res., 1962, v.27, p.332-334.

131. Hsu T.S., Arrighi P. Distribution of constitutive heterochromatin in mammalian chromosomes.- Chromosoma, 1971,v.34, p.243-253.

132. Hubbel H.R., Rothblum L.J., Hsu Т.О. Identification of asilver binding protein associated with cytological staining of actively transcribing nucleolar regions. -Cell Biol.Internal Reports, 1979, v.3, p.615-622.

133. Hughes M.E., Burki K., Falkan S. Visualisation of transcription in early mouse embryos.- Chromosoma, 1979, v.73, p.179-190.

134. Kaufman M.H. Ethanol-induced chromosomal abnormalities anconception.- Nature, 1983, v.302, p.258-260.

135. Keneklis T.P., Odarchenko N. Autoradiographic visualisationof paternal chromosomes in mouse eggs.- Nature, 1974, v.247, p.215-216.

136. Kerem B.-S., Goitein R., Richer C., Marcus M., Cedar H.1. situ nick-translation distinguishes between active and inactive X chromosomes.- Nature, 1983, v.304, p.88-90

137. Kiertzenbaum A.L., Tres L.L. Structure and transcriptionalfeature of the mouse spermatid genome.- J.Cell Biol.,1975, v.65, p.258-270.

138. Kopecny V., Pavlok A. Autoradiographic study of mouse spermatosoan arginine-rich nuclear protein in fertilization.-J.Exp.Zool., 1975, v.191, p.85-96.

139. Kopecny V., Pavlok A., Koefoed-Johsen H.H., Fulka J.3

140. Unimpaired fertilization with thimidine-H -labelled spermatozoa in the mouse.- Polia biol., 1975, v.3, p.176-183.

141. Kornberg A. DNA replication.- Preeman, San Francisco, 1980.

142. Krietsch V.K.G., Fundele R., Kuntz G.W.K., FehlauM., Burki K., Illmensee K. The expression of X-linked phosphoglycerate kinase in the early mouse embryo. -Differentiation, 1982, v.23, p.41-144.

143. Krishna M., Generoso M. Timing of sperm penetration, pronuclear formation, pronuclear DNA synthesis and first cleavage in naturally ovulated mouse eggs. -J.Exp.Zool., 1977, v.202, p.245-252.

144. Kuhn A. Lectures on developmental physiology.

145. Springer-Verlag, Berlin-N.Y., 1971, p.455.

146. Latt S.A., Munroe S.H., Disteche C., Roges W.E., Cassell D.M.

147. Uses of fluorescent dyes to study chromosome structure and replication. In: Chromosome today, v.6, Elsilver/ITorth-Holland Biomedical Press, The Netherlands, 1977, p.27-36.

148. Levey L.L., Stull G.B., Brinster R.L. Poly(A) and synthesisof polyadenylated RITA in the preimplantation mouse embryo.- Dev.Biol., 1978, v.64, p.140-148.

149. Lewis E.B. The phenomenen of position effect.

150. Advanc.Genet., 1950, v.3, p.73-115.153» Lev/is S.E. Developmental analysis of lethal effects of homo25Hzygosity for the С deletion in the mouse. -Dev.Biol., 1978, v.65, p.553-557.

151. Lima DeParia A. Differential uptake of tritiated thymidineinto hetero- and euchromatin in Melanopus and Secale.-J.bioph.biochem.Cytol., 1959, v.6, p.457-466.

152. Lischwe M.A., Smetana K., Olson M.O.J., Bush H. Proteins

153. C23 and B23 are the major nuclolar silver staining proteins.- Life Sci., 1979, v.25, p.701-708.

154. Longo F.J., Anderson E. Cytological events leading to theformation of the two-cell stage in the rabbit.Assotiation of the maternally and paternally derived genomes.-J.Ultrastr.Res., 1969, v.29, p.86-118.

155. Longo F.J., Kunkle M. Transformations of sperm nuclei uponinsemination. Curr.Top.Develop.Biol., 1978, v.12, p.149-184.

156. Luthardt F.Y/. Cytogenetic analysis of oocytes and earlypreimplantation embryos from XO Mice.

157. Dev.Biol., 1976, v.54, p.73-81.

158. Luthardt F.W., Donahue R.P. Pronuclear DNA synthesis in mouseeggs. Exp.Cell Res., 1973, v.82, p.143-151.

159. Lyon M.F. Gene action in the X-chromosome of the mouse (Musmuscuius).- Nature, 1961, v.190, p.372-373.

160. Lyon M.F. X-chromosome inactivation and developmental patterns in mammals. Biol.rev., 1972, v.47, p.1-35.

161. Marcus M., Goitein R., Gropp A. Condensation of all humanchromosomes in phase G2 and early mitosis can be drastically inhibited by 33258-Hiechst-treatment.-Hum.Genet., 1979a, v.51, p.99-105.

162. Marcus M., Nielsen K., Goitein R., Gropp A. Pattern of condensation of mouse and Chinese hamster chromosomes in G2 and 33258-Hoechst-Treated cells.- Exp.Cell Res., 1979b, v.122, p.191-201.

163. Marston J.H., Chang M.C. The morphology and timing of fertilization and early cleavage in the Mongolian gerbil and deer mouse.- J.Embryol.exp.Morph., 1966, v.15, p.169

164. Martin R.H., Balkan W., Burns K. Cytogenetic analysis of

165. Q-banded pronuclear chromosomes in fertilized Syrian hamsters eggs.- Cytogenet. Cell Genet., 1983, v.35, p.41-45.

166. Martin-DeLeon P.A., Boice M.L. Sperm aging in the male andcytogenetic anomalies. An animal model.- Hum.Genet., 1982, v.62, p.70-77.

167. Martin-DeLeon P.A., Boice M.L. Spontaneous heteroploidy inone-cell mouse embryos.- Cytogenet. Cell Genet., 1983, v.35, p.57-63.

168. McGaughey R.W., Chang M.C. Chromosomes at prometaphase andmetaphase of first cleavage in mouse and hamster eggs. -J.Exp.Zool., 1971, v.177, p.31-40.

169. McLaren A. Genetics of early mouse embryo.

170. Ann.Rev.Genet., 1976, v.10, p.361-388.

171. Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi R., Miller O.J. Supressionof human nucleolus organizer activity in mouse-human somatic hybrid cells. Exp. Cell Res., 1976a, v.101, p.235-243 177^ Miller O.J., Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi R., Croce C.M.

172. Expression of human and supression of mouse nucleolus activity in mouse human somatic cell hybrids. -Proc.lTatl.Acad.Sci.USA, 1976b, v.73, p.4531-4535.

173. Miller D.A. Choi Y.-C., Miller O.J. Chromosome localisationof highly repetetive human DIJA's and amplified ribosomal D1JA with restriction enzymes.- Science, 1983, v.219, p.395-397.

174. Miller O.L. The nucleolus, chromosomes and visualization ofgenetic activity.- J.Cell Biol., 1981, v.91, p.15s-27s.

175. Mintz B. Synthetic proccesses and early development in themammalian egg. J.Exp.Zool., 1964, v.157,p.85-100.

176. Mintz B. Nucleic acids and protein synthesis in developingmouse embryos.- Ciba Pound.Sympos.: Preimplantation stages of pregnansy. London-Churchill, 1965, p.145-161.

177. Mintz B. Gene control of mammalian differentiation.

178. Ann.Rev.Genet., 1974, v.8, p.411-470.

179. Monesi V. Ribonucleicacid synthesis during mitosis andmeiosis in the mouse testis.- J.Cell Biol., 1964, v.22,p.521-532.

180. Moore C.P.M. The ША activity of preimplantation mouse embryo- J.Embryol.exp.Morph., 1975, v.34, p.291-298.

181. Monk M. A stem-line model for cellular and chromosomal differentiation in early mouse development.

182. Differentiation, 1981, v.19, p.71-76.

183. Moutschen J. Fine structure analysis of chromosomes as revealed by fluorescence analysis.

184. Prog.Biophys.Mol.Biol., 1976, v.31, p.39-66.

185. Muller H.J., Paintner T.S. The differentiation of the sexchromosomes of Drosophila into genetically active and inert regions.- Z.indukt.Abstemm.Vererb., 1932, v.62,p.316-365.

186. Natarajan А.Т., Natarajan S. The heterochromatin of Rhoeodiscolor. Hereditas, 1972, v.72, p.323-330.

187. Neslitt M.N., Donahue R.P. Chromosome banding in preimlantation mouse embryos.- Science, 1972, v.177, p.805-806.

188. Odor D.L., Blandau R.J. Observations on fertilization andthe first segmentation division in rat ova.

189. Am.J.Anat., 1951, v.89, p.29-62.

190. Ohno S., Kaplan W.D., Kinosita R. Formation of the sex chromatin by a single X-chromosome in liver cells of Rattus norvegicus.- Exp. Cell Res., 1959, v.18, p.415-418.

191. Genetical res., 1981, v.37, p.183-197.

192. Pardue I.I.L., Gall J.G. Chromosome localization of mouse satellite DNA. Science, 1970, v.168, p.1356-1358.

193. Pathak S., Hsu Т.О., Utakoji P. Relationship between patternsof chromosome banding and D1TA synthesis sequences.

194. Cytogenet. Cell Genet., 1973, v.12, p.157-164.

195. Petzoldt U., Burki K., Illmensee G.R., Illmensee K. Proteinsynthesis in mouse embryos with experimentally produced acynchrony between chromosome replication and cell division. Roux's archives of developmental biology, 1983, v.192, p.138-144.

196. Petzoldt U., Illmensee G.R., Burki K., Hoppe P.O., Illmen- see K. Protein synthesis in microsurgically produced androgenetic and gynogenetic mouse embryos. -Mol.Gen.Genet., 1981, v.184, p.11-16.

197. Piko L. Gamete structure and sperm entry in mammals.1.: Fertilization, 1969, v.11, Ac.Press, N 4, p.325-403.

198. Piko L., Ciegg K.B. Quantative changes in total RITA, poly(A),and ribosomes in early mouse embryos.- Dev.Biol., 1982, v.89, p.362-378.

199. Pimpinelli S., Prantera G., Rocchi A., Gatti M. Effects of

200. Hoechst 33258 on human leukocytes in vitro. -Cytogenet. Cell Genet., 1976, v.17, p.114-121.

201. Raman R., Sperling K. Patterns of silver staining on ITORs ofprematurely condensed muntjac chromosomes following RITA inhibition.- Exp. Cell Res., 1981, v.135, p.373-378.

202. Rastan S. Timing of X-chromosome inactivation in postimplantation mouse embryos.- J.Embryol.exp.Morph., 1982, v.71,p.11-24.

203. Rocchi A., Prantera G., Pimpinelli S., DiGastro M. Effect of

204. Hoechst 33258 on Chinese hamster chromosomes. -Chromosoma, 1976, v.56, p.41-46.

205. Rodman Т.О., Bielder J.L. Specifity of compaction in meioticchromosomes of the female Chinese hamster. -Chromosoma, 1973, v.42, p.229-246.

206. Rodman Т.О., Bachvarova R. RITA synthesis in preovulatorymouse oocytes.- J. Cell Biol., 1976, v.70, p.251-257.

207. Rodman Т.О., Barth A.M. Chromosomes of mouse oocytes in maturation. Differential trypsin sensitivity and aminoacid incorporation.- Dev.Biol., 1979, v.68, p.82-95.

208. Rodman Т.О., Litwin S.D., Romani M., Vidali G. Life historyof mouse sperm protein: intratesticular stages. -- J. Cell.Biol., 1979, v.80, p.605-620.

209. Rodman Т.О., Pruslin P.H., Hoffman H.P., Alffrey V.G. Turnover of basic proteins in fertilized eggs: a cytoimmuno-chemical study of events in vivo.- J.Cell Biol., 1981, v.90, p.351-361.

210. Sawicky J.A., Magnuson Т., Epstein C.J. Evidence for expression of the paternal genome in the two-cell mouse embryo. -Nature, 1981, v.294, p.450-451.

211. Schultz J. Variegation in Drosophila and the inert chromosome regions.- Proc.Natl.Acad.Sci., 1936, v.22, p.27-33»

212. Schultz J. The function of heterochromatin.

213. J.Genet.Suppl., 1941, p.257-262.

214. Schwarzacher H.G., Mulcelsaar A.V., Schnede V/. The nature ofthe Ag-staining of nucleolus organiser regions. Electronand leight microscopic studies on human cells in interphase, mitosis and meiosis.

215. Cytogenet. Cell Genet., 1978, v.20, p.24-39.

216. Schwarzacher H.G., Watchler P. Nucleolus organisers regionsand nucleoli.- Hum.Genet., 1983, v.63, p.89-99. 215» Sherman M.I. Developmental biochemistry of preimplantation mammalian embryos. Ann.Rev.Biochem., 1979, v.48, p.443-470.

217. Sieger M., Pera P., Schwarzacher H.G. Genetic inactivity ofhetегоchromatin and heteropycnosis in Microtus argentis.- Chromosoma, 1970, 29, 349-364.

218. Siracusa G.M., Coletta M., Monesi V. Duplication of DNAduring the first cell cycle in the mouse embryo. -J.Reprod.Fertil., 1975, v.42, p.395-398.

219. Sirlin J.L., Edwards R.G. Timing of DNA synthesis in ovarianoocyte nuclei and pronuclei of the mouse.-Exp. Cell Res., 1959, v.18, p.190-194.

220. Sugawara s. Процесс оплодотворения яйца млекопитающих.

221. Кагаку то сэйбуцу, 1980, т.18, с.2-14.

222. Szabo S.P., O'Day D.H. The fusion of sexual nuclei.

223. Biol.rev., 1983, v.58, p.323-342.

224. Takagi N. Differentiation of X-chromosomes in the femalemouse.- Genetics, 1973, v.74, p.269-270.

225. Tanaka N., KatohM., Jwahara . Formation of chromosome-typeaberrations at the first cleavage after I/IMS treatment in late spermatids of mice. Cytogenet. Cell Genet., 1981, v.31, p.145-152.

226. Tarkowski A.K. An air-drying method for chromosome preparations from mouse eggs.- Cytogenetics, 1966, v.5, p.394-400.

227. Trendelenburg M.F. Progress in visualization of eukaryoticgene transcription.- Hum.Genet., 1983, v.63,p.197-215.

228. X-chromosome in the rat yolk sac.- ITature, 1976, v.262,p.580-581.

229. West J.D., Freis W.I., Chapman V.M., Papaioannou Y.E. Preferential expression, of the maternally derived X-chromosome in the mouse yolk sac. Cell, 1977, v.12, p.873-882.

230. Williams M.A., Klinschmidt J.A., Krohne G., Pranke N.W.

231. Argyrophilic nuclear and nucleolar proteins of Xenopus laevis oocytes identified by gel electrophoresis. -Exp. Cell Res., 1982, v.137, p.341-351.

232. Wollenberg C., Kiefaber M.P., Zang K.D. Quantitative studies the arragement of human.„metaphase chromosomes. VIII. Localisation of homologous chromosomes.

233. Hum.Genet., 1982, v.60, p.239-248.

234. Yanagimachi R. Mechanisms of fertilization in mammals.1.: Fertilization and embryo development in vitro.

235. Plenum Press, 1981, p.81-182, N.Y.

236. Young R.J., Sweeney K. Adenosine incorporation by unfertilized mouse ova: adenylation of RITA and ADP-ribosomal of protein. Biochemistry, 1978, v.17, p.1901-1907.

237. Young R.J., Sweeney K., Bedford J.M. Uridine and guanosineincorporation by the mouse one-cell embryo.

238. J.Embryol.exp.Morph., 1978, v.44, p.133-148.

239. Zakharow A.F., Baranovskaya L.I., Ibraimov A.I., Benjush V.A.

240. Demintseva V.S., Oblapenko N.G. Differential spiralisation along mammalian mitotic chromosomes. II. 5-Bromodeo-xyuridine and 5-bromodeoxycytidine-revealed differentiation inhuman chromosomes.- Chromosoma, 1974, v.44, p.343-359.

241. Zakharow A.F., Davudov A.Z., Benjush V.A., Egolina IT.A.

242. Genetic determination of NOR activity in human lymphocytes from twins.- Hum.Genet., 1982, v.60, p.24-29.

243. Zamboni L.D., Mishell D.R., Bell J.H., Baca M. Fine structure of the human ovum in the pronuclear stage.

244. J.Cell Biol., 1966, v.30, p.579-600. 248. Zamboni L., Chakaborty J., Smith D.M. First cleavage division of the mouse zygote. An ultrastruetural study. -Biol.Reprod., 1972, v.7, p.170-193.

245. В заключение считаю своим приятным долгом выразить глубокую благодарность моему научному руководителю профессору Андрею Павловичу Дыбану за предложенную тему исследования, постоянную заботу и руководство.

246. Выражаю свою искреннюю признательность Евгению Львовичу Пат-кину за постоянную помощь в выполнении и написании работы.

247. Приношу сердечную благодарность всему коллективу Отдела эмбриологии ИЭМ АМН СССР за внимание и дружескую помощь в работе.