Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Индуцирование гаплоидии у сахарной свеклы

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Индуцирование гаплоидии у сахарной свеклы"

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИ ИНСТИТУТ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ И САХАРА ИН. А. Л. НАЗЛУНОВА

На правах рукописи

РГБ ОД

; О OKI W

ПОДВИГИНЙ Ольга Анатольевна

УДК 633:63:631.524.01

ИНДУЦИРОВАНИЕ ГАПЛОИДИН Н САХАРНОЙ СВЕКЛЫ

Специальность: 06.01.05 - Селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание дченой степени кандидата сельскохозяйственных наук

РАНОНЬ 1994

Работа выполнена во Всероссийском ордена Трудового Красного Знамени научно - исследовательском институте сахарной свеклы и сахара имени А. Л.Мазлумова в 1987 - 1993 гг.

Научный руководитель - доктор-биологических наук, профессор X И.Орел /ВИР/.

Официальные оппоненты - доктор сельскохозяйственных наук, профессор В. И. Буренин; кандидат сельскохозяйственных наук Т.Г.Ващенко.

—Ведущее учреждение-Воронежский государственный университет.

Защита диссертации состоится " " Ос^ли^А 199^ г. в 14""часов на заседании специализированного совета К 120.75,01 во Всероссийском научно - исследовательском институте сахарной свеклы и сахара им.А. Л."Мазлумова по адресу: 396030 Воронежская область, Рамонь, ВНИЮС.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " 22" и-л^-х о/м 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат сельскохозяйственных

наук В. А. Бычкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Основной задачей селекции сахарной свеклы является выведение сортов, совмещающих высокую урожайность с повышенной сахаристостью, устойчивых к болезням и вредителям, а также отвечающих требованиям новых индустриальных технологий возделывания, хранения и переработки. В связи с этим требуется значительное расширение работ по направленному созданию сортолинейных и межлинейных гибридов, используя при этом гомозиготные линии с заданными признаками.

Получение гомозиготных линий сахарной свеклы методом самоопыления является весьма трудоемким и длительным процессом. При самоопылении семена у свеклы практически нз завязываются, а если и завязываются, то в ограниченном количестве, всхожесть полученных семян из-за сильно выраженной инбредной депрессии часто бывает низкой.

Одним из эффективных способов получения константных линий у сахарной свеклы является метод гаплоидии. Он позволяет ускоренно-формировать гомозиготные линии с ценными генетическими и феноти-пическими признаками (Ницше В., Венцель Г., 1980; Павлова Н.К., 1957) о

Поэтому постановка вопроса по индуцированию гаплоидов у сахарной свеклы методом гиногенеза и получению гомозиготных линий на их основе является актуальной.

Исследования проводились в соответствии тематического плана ВНИИСС ПО проблеме 01.03.04.Н "Создать новый исходный материал« путем индуцирования гаплоидов".

Цель исследований - изучить условия и возможности массового индуцирования гаплоидов сахарной свеклы из неоплодотворенных семяпочек, методы их дкплоидизации и разработать технологическую схему

3

получения дигаплоидны« линий.

Задачи исследований.

1. Изучить влияние генотипа на процесс индуцирования гаплоидов.

2. Выявить отличительные, маркерные признаки растений-доноров и сроки введения неоплодотворенных семяпочек в культуру,

3. Изучить влияние регуляторов роста и условий культивирования на регенерационную способность неоплодотворенных семяпочек.

Исследовать морфологические и цигоэмбриологические особенности эмбриоидов и растений - регенерантов.

51 Изучить условия перевода гаплоидных растений на диплоидный уровень.

5. Выявить параметры технологического процесса получения ди-гаплоидных линий.

Научней новизна и практическая значимость работы. Установлены морфологические и цитоэмбриологические маркерные признаки растений-доноров, характеризующие отдельные этапы развития пыльцевых зерен и зародышевых мешков. Разработаны условия индуцирования гаплоидов сахарной свеклы методом гиногенеза.-Подобраны режимы перевода гаплоидных регенерантов на диплоидный уровень. Разработаны параметры технологического процесса получения дигаплоидных гомозиготных линий сахарной свеклы.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на зональной конференции молодых ученых и специалистов (Каменная степь, 1996); на районных научно-производственных конференциях молодых ученых и специалистов (Рамонь, 1987,1989); конференции молодых ученых ВНЙС (Киев, 1988); межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов (Воронеж, 1993); представлены стендовыми сообщениями на XI международном симпозиуме (Ленинград, 1990); П Российском симпозиуме (Пущино, 1993).

Публикации результатов. По материалам исследований, представ-Н

ленных в диссертации, опубликовано II работ»

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической части, грех глав с изложением экспе-ринентальных данных и их обсуждением, выводов, практических рекомендаций, списка литературы (Г38 наименований, из них 82 иностранных авторов). Общий объем диссертации составляет 1о2 страниц машинного текста, включая 17 таблиц, 40 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в 1987-1993 годах во ВНШСС им. А. X Мазлумова (Рамонь, Воронежской области). Материалом для исследований служили односемянные фергильные линии сахарной свеклы и их гибриды, линии с ЦМС рамонской селекции, фертильная линия и линия с ЦМС из США, сорта различного происхождения (Рамонская, Белоцерков-ская, Уладовская).

Для изучения процесса мейоза использовали методику приготовления временных давленных препаратов (Зайковская Н.Э. ,1968; Зайков-, екая Н» 0. , Ярмолвк Г.И. , 1958). Определение фертильности пыльцы проводили путем окрашивания препаратов IS раствором кармина по методике Юрцева Б.Н. и Пухальского В.А. (1958). Подсчет количества хромосом проводили по методике разных авторов (Дарлингтон CiД., JIa Кур ЛФ. ,1980; Методические указания ВИР,1986) на корешках и точках роста.

Изучение формирования зиготического зародыша проводили согласно методическим указаниям по цитоэмбриологическим исследованиям ВИР (1984),

Эмбриоидогенез и состояние зародышевого мешка при культивировании в условиях in vitro исследовали на постоянных препаратах, выполненных по общепринятой цитологической методике путем парафини-рования (Паушева 3.П., 1980).

При введении в культуру неоплодотворенных семяпочек была ис~ пользована методика стерилизации, техника приготовления питатель®, ных сред и культивирования по Бугенко Р. Г. (197 5).

Диплоидизашя гаплоидных растений проводилась методами накалывания раствора колхицина на точку роста, погружения корней гаплоидов в раствор колхицина на определенное время и добавлением колхицина в пита?ельную среду» Изоферментный анализ проводили согласно методике Йевитеса Е»В» (1986)»

Математическую обработку полученных данных проводили на ЭВМ по соответствуощим программам, разработанным во ВНИИСС»

Достоверность полученных данных оценивали а помощьи критерия Фишера (Доспехов Б»А., 1979). Критерий fö использовали для определения достоверной степени отличия фактического распределения частот от теоретического и для выявления достоверности связи между признаками (Горя B.C., 1978; Плохинский H.A., 1980).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Индукция гаплоидов и условия культивирования

На процесс индукции гаплоидии влияет целый косплекс лимитирующих факторов, связанных с генетическими и биологическими особенностями роста и развития растений, а также с воздействием условий внешней среды.

Проведенные исследования на сахарной свекле показали, что генотип исходного растительного материала определяет формирование гаплоидных регенерантов» Самую низкую регенерационнуо способность показали материалы с ЦМС - 1,6% к сорта-популяции - 2%. Фертиль -ные инбредные линии и гибридные комбинаций Pj с участием этих линий имели более вне окуп склонность к индукции гаплоидов и количество регенерангов у них достигало 3,1$ и 3,5Склонность к индукции гаплоидов у форм с ЦМС оказалась ниже в 2 раза по сравнению б

о фертильными растениями этого номера. Наибольший выход гаплоидов' наблюдали у селекционного материала, подверженного Длительному инцухгировании, когорый в среднем составил 5,5

Исследования позволили выявить, что линии длительного инцух-та по сравнении с контролен имели значительные цитологические изменения в период формирования генеративных органов. Замечено, что регенеращонная способность линейного материала зависела от наличия аномальных пыльцевых зерен. Так у линий РФ 358 и РФ 1338 количество регенервнтов.колебалось от 2, 8 до 3,при наличии аномальных пыльцевых зерен и микроспор в этих номерах 5,7 и 9,5%. У линии Ам. 308 эти цифры были соответственно 11,1$ и 16,

Высокой склонностыз к регенерации обладали генотипы из гибридных комбинаций с участием линий РФ 353 и 1338. Выход гибридов у них составил 7,6% (РФ 358 х РФ 1119) и 10, % (РФ 12301 х РФ 1338) (табл. I). Следовательно, наличие аномальных пыльцевых зерен можно использовать как цитологические "маркерные" признаки при, отборе генотипов-доноров для индуцирования гаплоияов.

Установлено, что формирование гаплоидных структур происходило из неоплодотворенных семяпочек (эмбриоидогенез или каллусогенез) и частота возникновения регенерантов определялась генотипом. Количество проростков полученных через эмбриоидогенез составило в зависимости от генотипических особенностей донорского материала от 0,6 до II, Е?, каллусов от 0,9 до 14,2^ 'Стабл. I). Регенераци-онная способность каллусных структур тактк^ определялась генотипом.и колебалась от 8,3 по 100&,

Определявшее значение для иедукцирования гаплоидов имел состав питательной среды, тип и уровень стимуляторов роста в ней. Наличие в питательной среде гиббереллина в концентрациях от 0,1 до 5 мг/л вызывало образование гаплоидных растений путем прямой

7

регенерации. Незначительные концентрации гиббереллина стимулировали выход гаплоидов до 5,2$, тогда как увеличение его в пита -•тельной среде снижало формирование гаплоидных проростков до Z,%. Добавление в пигагельнуи среду б->БАП в концентрациях О, I— 0,3 мг/л сохраняло индукции гаплоидов на высоком уровне 2,8-3,

Таблица I, Влияние генотипа на формирование регенеран-тов и каллусов из неоплодотворенных семяпочек сахарной свеклы в условиях in vitro U989-I992rr.) 3

Происхождение

Исходный материал

Введено семяпочек," шт.

Получено

регенерангов

"ШТ.

каллусов

иг.

%

Сорт-популяция

Линии •/сибсы/

МС-формы Гибриды Pj

Инцухт-линии

Р одн.9 7.97 17 2,1

БЦ одн.34 698 13 1,9

У-35 171 3 1,8

РФ 3 53 1 501 49 3,3

РФ 1338 17 30 49 2,8

РФ 634 170 I 0,5

РФ III9 7 5 2 2,7

РФ 718 405 9 2,2

РФ 14 360 II 3,1

РФ 15 435 26 5,9

PC 135 162 3 1,9

РФ 358 /С/ 225 4 1,8

С из США б 16 5 4 2,4

РФ 358 х РФ 1119 105 8 7,-5

PC 1118 х РФ II19 НО О О

РФ 12001х РФ 1338 10 5 II 10,5

РФ 540 . х РФ 584 130 7 5, it

РФ 634 126 5 4,0

РФ 1338 .115 2 1,7

РФ 531 10 5 6 5,7

Ам. 308 108 12 11,1

факт. %г 281,27

о

теор. Уг 60, 5 (.при 44 степенях свободы)

33 19 О

29 24 2

0 6

16 32

23 12

4

6

1

0 3

6

5 II

1

М

2,7 О

1,9 I.* 1.2

О

1/5 4,4 7,4

14,2

5.3

2.4

5.7 0,9

О

2,3

4.8 4,3

10, 5 0,9

При этом иногда наблюдали регенерацию через каллусогенез. Присутствие в питательной среде 2, 4-Д вызывало активное формирование каллусных структур до

Изучение различных сроков введения неоплодотворенных семяпочек в культуру in vitro показало, что наибольшее количество ре-генерантов формируется при эксплантации семяпочек с растений, вегетирующих в поле, и составляет в среднем 4, что в 2 раза больше, чем при зимне-весенней эксплантации из теплицы.

Сравнение условий культивирования неоплодотворенных семяпочек показало, что в темновых условиях происходит угнетение развивающихся семяпочек и количество регенерантов сокращается в 2 раза, ' что составляет 1,1$.

Результаты проведенных исследований показали, что семяпочки, изолированные с побегов верхнего и нижнего ярусов, обладают одинаковой регенерационной способностью - 2,5%. Выход же гаплоидных регенерантов из семяпочек, эксплантированных с центрального побега, в 1,8 раза выше, чем с других побегов.

Цитоэмбриологические особенности морфогенеза при прямой регенерации

В результате цитологических исследований установлено, что уже с первых дней культивирования клетки зародышевых мешков начинали делиться. В отличие от полового размножения, когда первым начинает делиться центральная клетка, образующая ядра эндосперма, при куль-,тивировании in vitro активное деление наблюдали сначала в клетках антипод и яйцевого аппарата. На третий день после введения в культуру начиналось формирование гиногенетического зародыша, который располагался или в микропилярной, или в халазальной частях зародышевого мешка. Центральное ядро к делению не приступало и сохранялось до 5 дня.

Гиногенегические зародыш,, как и зигогические, на 5 день имели форму шара на ножке и располагались, как правило, в микропилярной части зародышевого мешка. Дальнейшее культивирование семяпочек'на питательной среде вело к активному делению клеток зародыше, который к 20-24 дни занимал весь зародышевый мешок. К 28 дню культивирования сильно развитые гиногенегические зародыши разрывали внутренние интегументы и выходили зв пределы зародышевого мешка. Через 28-30 дней после введения неоплодотворенных семяпочек в культуру ia vitroMH визуально наблюдали появление ростовых почек на поверхности наружного интегумента семяпочек и через 2-3 дня появление тоненького корешка.

Проведенные исследования свидетельствуют, что в своем развитии, гиногенегические зародыши проходят стадии, аналогичные этапам формирования зародышей при половом размножении.

Нормальное семя и его части - эндосперм, перисперм, оболочка не формируются. Развившийся гиногенетический зародыш без периода покоя образует гаплоидный проросток, питающийся компонентами питательной среды.

Формирование гаплоидных и дигаплоидных линий

С одного растения в культуру можно ввести 200-2 50 неоплодотворенных семяпочек, но количество семяпочек, дающих гаплоидные ре-генеранть, незначительно и колебалось от I до 13.

Несмотря на го, что семяпочки берутся с одного растения, реге-неранты из них отличались между собой по своим генотипическим и фенотипическим признакам.

Гаплоиды, полученные от одной семяпочки, представляют один генотип и поэтому формирование гомозиготных линий проводили путем 10

культивирования регенерантов, развиващихся о отдельно взятой семяпочки.

Проведенные наблюдения показали, что в течение 3^4 недель часть, регенерантов погибала, а рост и развитие оставшихся гаплоидов зависели от реакции на проведение пересадки. Выживаемость их после I пассажа колебалась от 45, 5 до 100£ (габл.2).

Таблица 2. Выживаемость гаплоидных регенерантов ^пцвый^месяц^ культивирования

Исходный материал Получено регенерантов, шт. Выжило шт. регенерантов

РФ 358 42 30 71,4

Р одн. 9 17 10 58,8

БЦ-34 одн. 9 б 66,7

РФ 718 9 8 88,9

РФ 5 х РФ 635 5 5 100

РФ 1119 2 2 100

РФ 12301 х РФ 1338 II 5 45,5

Гибель регенерантов отмечалась и после 2-3 пассажа, но уже в меньших количествах. Процесс стабилизации гаплоидных форм происходил в течение 3-4 пассажей. За это время регенерангы всех генотипов имели высокую склонность формировать ростовые почки и разли -чались по внешнему виду: окраске, форме листа, длине черешка.

При переводе гаплоидов на диплоидный уровень было проведено изучение различных методов колхицинирования.

I. При введении 0,1-0,^ колхицина в безгормональную среду и выдержке растений на ней в течение 2 суток наблюдалось сильное'угнетение и гибель гаплоидных регенерантов. Уменьшение содержания колхицина в питательной среде до 0,01$ и 0,005 £ давало удвоение хромосом у 83,% растений.

2. При обработке гаплоидных растений путем погружения корней в раствор колхицина.было выявлено, что длительная .обработка угнетающе действовала -на состояние растений и приживаемость их в грунте падала от до 0. Цитологический анализ плоидносиГ показал,что наилучшие результаты удвоения (более 50$ растений), были получены при концентрации 0,2$. Концентрации колхицина 0,0^-0,практически не оказывали никакого действия не гаплоидный набор хромосом, а 0,3£ приводила к полиплоид.изации основной массы обрабатываемых растений (табл. 3).

Таблица 3. Влияние концентраций колхицина на плоидность обработанных регенеран-тов сахарной свеклы

Время экспозиции, час ■ Концентрация колхицина, % Количество растений с п 2 п плоидностью,: миксоплоиды •

12 контроль 100 - -

0,05 85 15 -

0.1 70 30 -

0,2 15 55 30

0,3 15 4а 43

гч 0,05 50 35 15

0,1 - - 100

0,2 35 15 50

0,3 - - -

36 0,05 50 25 25

0,1 80 20 -

0,2 60 20 20

0,3 - - 100

48 0,05 80 - 20

0,1 16, б 50 33,4

0,2 - 30 70

0,3 100 - -

60 0,05 80 - 20

ОД 50 - 50

0,2 - 50 50

0,3 - - 100

Увеличение концентрации колхицина и времени экспозиции повышав ло количество миксоплоидов до 70-100$ и снижало количество диплоидных растений.

В результате статистической обработки была выявлена достовер,-ная связь,между концентрацией раствора колхицина и процентным со- . отношением растений разного уровня плоидности (к"Ч), 355; ^ф=123,04; $^22, 46) а Связь между временем экспозиции и изменешем плоидности имела место, хотя и была слабее, чем с концентрацией (к=0,184; /фН6.31; У?12)..

3. Обработка гаплоидных растений методом накалывания на точку роста показала, что слабая концентрация колхицина 0,0!$ вызывала удвоение числа хромосом у 75% растений. Увеличение концентрации до 0,1% не повысило количество дигаплоидов, а выявило у растений появление клеток с несбалансированным числом хромосом. Последующее увеличение концентрации до 0,2-0,3$ дало 100$ диплоидизацию гаплоидов.

Из изученных методов перевода гаплоидов на диплоидный уровень наиболее перспективным оказался метод добавления колхицина в питательную среду, т.к. при использовании других методов увеличивался выход химер и снижалась выживаемость растений. Кроме того значительно увеличивался расход колхицина как при обработке корней, так и точек роста.

Технологическая схема получения дигаплоидных линий сахарной свеклы

Проведенные исследования позволили разработать условия индуцирования гаплоидов, подобрать ретам перевода гаплоидных регенеран-гов на диплоидный уровень и получить новые исходные формы сахар -ной свеклы с высокой изменчивостью селекционных признаков.

Результаты экспериментов увились основой технологической схемы получения гомозиготных дигаплоидных линий сахарной свеклы, включающей несколько этапов,

1. Подбор донорского исходного материала для введения в куль- ' туру и эксплантация неоплодотворенных семяпочек.

Для получения гаплоидов эксплантирупт неоплодотворенные семяпочки растений, предпочтительно в начале цветения с наличием 7-8 ядерных зародышевых мешков и аномальных пыльцевых зерен.

2. Индуцирование гаплоидных регенерантов.

Индуцирование гаплоидов проводят при культивировании на питательной среде Гамборга (В ^ при 15 часовом фотопериоде и 4г+2б-28°С в течение I-I,5 месяцев. .Отбирают нормально развитые регенеранты, имеющие корешок, гипокотиль и 1-3 листочка.

3. Стабилизация гаплоидов in vitro и микроразмножение. Процесс стабилизации включает проведение 3-4 пассаткей и отбор наиболее развитых растений в количестве не менее 25 шт. с высокой склонностью формировать ростовые почки.

Ь. Диплоидизация.

*

Диплоидизация достигается путем колхицинирования гаплоидных регенерантов и отбора дигаплоидов по количеству хромосом.

5. Массовое размножение дигаплоидов в условиях in vitro Дигаплоиды размножают путем микрочеренкования до получения необходимого количества растений. 14

6. Получение пробирочных растений с корнями.

Дигаплоидные микроклоны с корнями получают при культивировании на корневой питательной среде,

7. Пересадка в грунт.

После высадки в грунт растения поливают и накрывают полиэтиленовой пленкой на 5-7 дней для лучшей приживаемости.

Технологическая схема на малой площади и в течение 1-Х, 5 лег может обеспечить получение необходимого объема дигапловдных пробирочных растений, удовлетворяющих запросам селекционеров, для вклю^-чения созданного исходного материала в селекционный процесс»

ВЫВОДЫ

1. Формирование гаплоидных структур в культуре неоплодотворен-ных семяпочек сахарной свеклы в основном определяется генотипом растения-донора. Наиболее отзывчивы на индуцирование гаплоидии генотипы из материалов гибридного и линейного происхождения, с чадто-той образования гаплоидов 3, 5 и 5,5%, соответственно.

«

2. "Выявлено, что цитологические нарушения в период формирования генеративных органов, ведущие к появлению аномальных пыльцевых зерен и микроспор до 17-27,и выше, являются отличительными (маркерными) признаками растений-доноров с высокой регенерацион-ной способностью.

3. Установлено, что эффективное индуцирование гаплоидов происходит при использовании бутонов с побегов I порядка и экспланти-ровании семяпочек, содержащих дифференцированные 7-8 ядерные зародышевые мешки. Оптимальный период эксплантации - начало цветения'.

Морфогенез при ивдукции гаплоидов определяется содержанием ростовых веществ в питательной среде и условиями культивирования. В присутствии 2, 4Д и б-БАП и нахождении эксплангов в темноте активизировался процесс каллусогенеза. Наличие гиббереллина в питатель-

15

ной среде и культивирование неоплодогворенных семяпочек на свету увеличивало выход гаплоидных регенерангов.

5. Гиногенетический зародыш в своем развитии проходит стадии аналогичные зигогическому-зародышу и образует гаплоидный проросток. Основным отличием гиногенетического развития является отсутствие формирования семени и его частей.

6. Установлено, что оптимальным методом перевода гаплоидных растений на диплоидный уровень является добавление раствора кол-хишна 0,00 5 # концентрации в питательную среду и выдержка реге-нерантов на ней в течение 2 суток.

7. Разработаны параметры технологического процесса получения гомозиготных дигаплоидных линий сахарной свеклы, основанные на индуцировании гаплоидов из неоплодогворенных семяпочек в культуре

in vitro.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Разработанную технологическую схему получения гомозиготных линий рекомендуется использовать в селекционной практике для создания нового исходного материала с высокой генетической изменчивостью

2. Полученные'дигаплоидные линии (12 шт.) применять в селекционном процессе.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Т. ПЛужжалова, В.В.Знаменская, 0. АоПодвигина Особенности мейоза у инбредных линий сахарной свеклы //Гаметогенез, оплодотворение и эимбриогенез семенных растений, папоротников и мхов. -Кишинев. : Шгиинца, 1986. - С» 55

2. 0. А. Подвигина, Т. ПЛужжалова, В. П.Ошевнев Особенности микро-спорогенеза у сахарной свеклы //Онтогенетика высших растений, —Ки— шинев.: Шгиинца, 1989. - С. 208.

3. 0. А. Подвигин а Влияние инбрйдинга на формирование мужского гаметофита сахарной свеклы //Рукопись во ВНИИТЭИ Агропром 30.01. 89-Госагропром СССР. № 153/2. ВС-89 Деп.

0.А. Подвигина, Т. П.Жужжалова Особенности микросп орогенеза и фертильность пыльцы инбредных линий сахарной свеклы //Цитология и анатомия культурных растений: Сб.научных трудов по прикладной ботанике, генетике и селекции, - Jl.,1989. -Т. 124. -С. 83-85.

5. 0. А. Подвигина, Т. Оужжалова, В.П.Ошевнев, Н. П. Грибанова Особенности формирования мужского гаметофига у самофертильных линий - закрепителей ЦМС сахарной свеклы //Резервы увеличения производства сахарной свеклы и сахара /сборник научных трудов/.-Воронеж, 1990. - С. 42-47.

6. В.В.Знаменская, Т.П.Жужкалова, 0.А. Подвигина Индукция гино-генеза у сахарной свеклы //Новые методы биотехнологии растений. ПРоссийский симпозиум, май 1993, г. Пушно.- Пущино,1993. -С. Г4Г.

7. 0. А. Подвигина Культура неоплодотворенных семяпочек vitro, как способ получения гаплоидных растений //Обеспечение эффективного функционирования производственного потенциала АПК России в условиях рыночных отношений. - Воронеж, 1993. - С. 127-128.

8. 0. А.Подвигина, В.В.Знаменская, Т. ПДужжалова Морфогенетичес-кая оценка донорных растений при индуцировании гаплоидов у сахарной свеклы//Молекулярно-генетические маркеры и селекция растений.Материалы конференции,Киев,май 1994.-Киев.: Аграрна наука,1994.-С. 121.

9. Т.П.Федулова, 0. А.Подвигина Изоферменгные маркеры в идентификации гаплоидов сахарной свеклы //Молекулярно-генетические мар-

<

керы и селекция растений. Материалы конференции,Киев^ май 1994. -Киев.: Аграрна наука, 1994. -С.69.

"tO..O*A.Podvigina, T.P.Zhuzhzialova, LoI.Oryol Pecularities of male ganetophyte foraing of lines fixators of augar beet CMS (Beta vulgaris L.) //Embryology and seed reproduction.X1 Iat.sy®p». Leningrad, USSE, 2990.-1-., 1990.-P.127.

11.V. V. Znaaenalcaya, T. P.Zhuzhzhalova., O.A.Podvigina Haploid in-du&tion in the unfertilized ovules culture of Beta vulgaris L. //Embryology and seed reproduction: X1 Int. syap., Leningrad, USSR, 1990.-L.,1990.-P.197.