Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Индукторы интерферона растительного происхождения

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Индукторы интерферона растительного происхождения"

РГБ ОД

2 2 МАЙ 19г5

На правах рукопйсй

САЙИТКУЛОВ Аликул Мамаякибович

ИНДУКТОРЫ ИНТЕРФЕРОНА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

(03.00.06— вирусология)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва —1995

Работа выполнена в Научно-исследовательском инстигуте эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гмалеи РАМН, Научно-исследовательском институте вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН и Ташкентском государственном университете РУзб.

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, академик РАЕН, профессор Ф. И. ЕРШОВ.

Официальные оппоненты:

академик международной академии информатизации, док. биол. наук, профессор В. В. МАЛИНОВСКАЯ

док. мед. наук, профессор Я. Е. ХЕСИН док. мед. наук, профессор А. Н. СЛЕПУШКИН

Ведущее учреждение:

Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л. А. Тарасевпча.

Защита состоится « ¡Я-» \у^ЬО¡-¿^.^ 1995 г. в [О часов на заседании диссертационного совета (Д 001.20.02) при НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН (Москва, 123098, ул. Гамалеи, 16).

Автореферат разослан « 0 » ¿уМД/_ 1995 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

Н. П. КОСЯКОВА

И В К Л Е Н И К

IlHn,p'jJcpJiiu uitiuu)ij.L-H 1У. ПОЛН^уНКЦИОЦаЛЫШЫ ЦЙТОпИНаи и

выраоативамтся организмом в отьет на вирусную инвенции или чу-ЖарОД1ШИ bHUU'oti. В Настоящей lipoMii СЛигШЛОСЬ ДВс) ПОДАОДи и прикладному использиъпшш интерферона в цедицпнскол практике: применение готовил препаратов интерферона - экзогенная интарфе-ронизацив и индукций выраоотки сооотъенного интерферона - эндогенна« ин'А'ьишоьинмяшш« <*,!* = т: др.,1221/.

ьили усПпхм mt4iinsi.«();. ITÜTOri'-РОНаЗйЦЗй пЬЧ-ШХОчпИ *0[Л1!20 известны, то индукторы интерферона ещё па заннли достойного положения 'в арсенале противовирусных средств. Причиной этого является, в первую очередь, их высокая стоииость,а также токсич-' ность иногих индукторов интерферона, которая лишь в несколько раз превышает оптимальную интарфорониндуцирующуш дозу. Хиииоте-рапевтическим индукс таких препаратов / ХТИ - отношение токсической дозы к терапевтической/ настолько низок, что ограничивает их практическом применение /Садиков A.C. и др.,1981, AUxigan U.,1982/.

Посик иалотопиичних индукторов эндогенного интерферона, и путей стимуляции интерфероноооразовании яиилен новый этапои в оирьое о iJiipjumiiui заиолеьаиинии. Индукторы интерферона, число которых составляет теперь несколько сотен, предстэвлнют собой разнородную группу препаратов, огличаыцнхен по хшичоскои структуре /Тазула.юва L.B., 1986, &o%itt ¿tat. 1987/. Они ооьединнит-ьй спосиокоствtu вызывать оораэоьанио интерферона, а также противовирусным. у ¡'ОЫ0ЛУ ЛИJ)j КЛЦ1Ш, радиопро-ч-г шо.чяее и з^тиОол'гвриальным гДОчятани / Ht.-Aal.^ 1991, . ¿~i.UU ¿L • ücoüöh роль при атоц принадлежит растительный веществам и слизи с споаоОраэиеи их фармакологического действив, сравнительно иалии токсичностью и ишронии спактрои ТНрЧПВйТЯЧвСКОГО -^ЛоУвПм /ГриL-U1JMti С.1. и Г,- . , . lipurita-4-:':JlOi' '■'" uUI .»¡n,iir;s ДоННич Крипа;)«»'!« «*оеиПоч".>><д> >и!Ч* гЧ>,— TpOJiWIÜ ••риГ^Ы-иЦшао ФУНКЦИИ, !ШППавЛ«Ш!не HB OPXWRVmt ГС!!Ь- • остизи аь jt>r.*-.ii. »¡ictui* и целого оргиаиэии, „• >[,«•,,!• «с*ои

наиоольыш« im,i»v при Ли гУиЛлыт саИЭЬ u i'Pj i.i д>и и ф.у|1к1>.!Й J UHO"

гичисленных растительных веществ, и такйа еще далеко ншшнин

механизм индукции. В результате целенаправленного скрининга

мокно получить препараты с заданными свойствами. По сравнению с синоптическими индукторами интерферона существенным прайму иесхвои растительных препаратов яампегаи ъозможность получения их иэ доступного и дешевого сырья и поиощьи простой технологии /Садиков A.C. и др.,1978/,

Из большого числа разительных вицеств, обладающих способностью индуцировать, интерферон, значительный интерес представляют растительны« полифенолы - производные госсипола и его модельные соединении. Благодари сравнительно простому строению и возможности разнообразных химических модификации они являются удобной моделыи для определения связи химической структуры со способностью к индукции интерферона, противовирусной активностью и проявлением ими токсических свойств. В этом плане очень важным нвлнетсн определиние роли отдельных радикалов в проявлении их биологическое активности. Особое внимание при этом доля, но быть удалено не вольно возмояности создания высокоактивных индукторов интерферона, но и простоте и эффективности способа их введения в организм.

Настоящая раоота выполнена в соответствии с оощесошзными программами 0.043.01. раздел 03.09. "Создать новые лекарственные средства на основе госсипола".утвержденным постановлением ГКНТ СССР, Госплана СССР и АН СССР И92/245/164 от 08 декабря 'I9i.ii ßi гос.регистрации 81072818/,комплексной программой.074, раздел Н6 "Изучить молекулярные основы синтеза и механизма действия интерферона и его индукторов", и И? "Разраиогать методы получения противовирусных и интерцюрониндуцируыщих препаратов, провести первичный отбор этих препаратов", утвержденный ГКНТ, Госпланом СССР и АН СССР № 24/25/13 февраль 1985/, общесоюзной программой "Интерферон" АМН СССР, по плану НИР ТэшГУ, утвержденному Мин .ВУЗом РУзб, Нн гос. регистрации 01860059763/ по теме: "Разработать методы синтеза и изучить биологические свойства новых противовирусных и интерферояиндуцируищих веществ на основе природных соединении"*

Цель и задачи исследования.. Целый настоящего исследования нвшшн целенаправленный синтез, скрининг, отиор и оценка

-■з -

НОВЫХ ИНДултОрОЬ ИНТирфсрОНа и[)tíДИ СОВДИНВНИН растительного

происхождения и их молельных соединений.

Для достижении указании!; цели Оыли постаилини илвдуычиа

3d.4d4lK

- изучить иииоинниъ i ¡i i; iрокни», свойства и оиологическую активность растительных веществ i" их производных;.

- ВЫЯВИТЬ отдельнш; Группы И Связи в ЦОЛеКуЛе, ВЛШ1ЩИВ На ИХ оно логически« аффекты •

- иислвдовзгь .возможность изиенвния продукции интерферона uata-

ДОЦ ЫОЛИШИлнтН! tuiiiu.*,-?»* ctPjU'iip ¿aUftti'tliibHHX ичиунтопов «íí¡ XüoUjdúüriM :

- провести доклиническое изучение отоОранных препаратов;

- изучить спектр противовирусной, антибактериальной и противоопухолевой активности отоОранных препаратов;

- провести фармакопинвтическив исследования радиоактивно-иаче-ных производных госеиполь и «го иодвлышх соединении;

- разрьиоч-вть ип-гшальныв ихвыы применения новых индукторов интерфврона при различных зооолеванилх человека и яивотных с 'учетом феномена пимреактилиоити;

- создать лекарственные средства на ochote изученных индукти-риь ИНтв рфероиа ■

- )>H3¡>dOUTail> рВлииииДЬЦИИ ДЛИ ДаЛЬивИШвГО плинического изучения индукторов интерферона.

Научная новизна раооты. На основе водорастворимой ацетил-целлюлозы, карооксиметилцвллюлоэн, низкомоль кулнрного природного полифвнола - госсипола и иго аналогов мыделенннх ИЗ высших растении создан ряд оригинальных отечнптннчннч 1»н;ук?яров интерферона

Изучено влиянии хииическо»' структуры синтезированных соединений на их биологическую активность. Установлено влияние некоторых функциональных групп на инч'ерферониндуцируимцую активность, на основании чего сыли синтезировали новые высокоактивное индукторы интерферона с заранее заданныии с но. ствами.

Разраоотун ciiucud получении нового индуктора интерферона на основе производных цнллылозы и мизкоыолекулнрного полифено-ли госсипола, выделенного из семян хлопчатники.

Впервые изучена интврферониндуцируюодая активность отобранных индукторов интерферона в культур« клеток различного происхождения, в том числе в иммункомпетентных клетках. Исследован характер продукции интерферона в организме экспериментальных животных при. различных путях введения препаратов, а также распределения эндогенного интерферона по органам в зависимости от природы растительных индукторов и способа их введения.

Установлено возможность изменения интесфероидлдуцирующей активности растительных соединение и их производных путем модификации их химическое структуры.

Изучением (рармакокинетики меченых. аналогов отобранных индукторов интерферона установлено, что биодостушюить зависит от пути вьадония. Выявлено максимальное накопление соединений при перорзльиом способе применения в желудочно-юшочиом тракте и печени. Слабое накопление индукторов наблюдается в остальных органах, что коррелирует с намоолее выраже;шоГ1 интерферонинду-цирующея активностью изучешшх соединений в юшечнике и печени.

Показана возможность энтерального /перорального и ректального/ введения отобранных препаратов, ато особенно ценно в клинических условиях. Исследованы закономерности продукции интерферона в различных органах и тканях в ответ разные способы введения препаратов, в связи с чем определена стратегия их применения. Исследовзш закономерности продукции интерферона в ответ на многократное введение индукторов интерферона. Выявлена возможность формирования эндогенного интерферона путем комбини ровэнного использования оригинальных отечественных индукторов интерферона растительного происхождения.

Исследована профилактическая и терапевтическая эффективность новых препаратов, а такке их комбинация при экспериментальных вирусных инфекциях. Показано, что сочетанное использование препаратов повышает уровень защиты от вирусных заболеваний.

.Впервые показана иммуномодулирующая активность растительных индукторов интерферона. Показана высокая эффективность комбинации препаратов с вакциной при лечении экспериментальных инфекций.

Впервые выявлено онтихламидийное действие отечественных индукторов интерферона растительного происхождения.

Практическая ценность, внедрение полученных результатов.

Свыше 200 новых соединении выделены из-высших растений и

' ¡дтезироьинп ни основе низпомолекулирного природного полшреио-

.!■■> - госслпола, |.:.1,изиоды4Х ольдегядо^евовол, альдегкмоиазхола*, ::ттопкоко? цзллплозп.

Совместно с 'ГашГУ РУзб.,ШШП'Ц i: H3K.SK пм.Н.Ф.Гаиалеи РАМН, НййбоХ им.акад.А.0.Садыкоьа АН РУзб. внявченн виеокоактивпие пкцукг);» иктерА'-{,о';о i: (.израоо-.ииц рого'лиишцг.и uo их нркивие-/•Ctifip''.ii"-afL хлохшдкгиок иафемцнн, "Цогоц«л"-при гриппе и ОРЗ, "Рагосии" - при гепатите/. Матеопазш по локппныир.о.кпии uny.

""""" ""ZZ'Jl'ZZZ'.'.l..ill V.,__ii uduvjAuiiiiunii tiiim<HT»Hun-*o™-

ческэп документации представлены в РосскЬскпи Государственный научный центр экспертизы лекарств для получения разрешения нэ 'первичное клиническое испытание в качестве индуктора интерферона .

Совместно с ТашГУ РУзб., Ш'.ЬН ии.Н.О.Гаиалеи РАИН, НИИ БОК ны.акзд.А.С.Садыкова АН РУзб. из высших растении выделены и разработаны спосооы получения препаратов Гоээлидон,Таншш,

7 высокой шперд^родннд^ппрухдод п

дг. у дгдвиоотъм прк эксириаем'г.-.¿них вирусшх ий-

Б дпг" 'л "¡¡en вре),<д проводится г.ар.'лнсскгпк'от'гпч.;;;'.:!!j дооледотдпл длд прели пал):<ш;№ » '.>5уиво'Ш~ет.

j.i'сокечувсгвктеяьп'Л идкрегегод д^д изучении ии-угто; j.. г г; 1 :>!';' :п: зпгро, дозводлгд.с:;': п^дудшь перьиснуй

и:;;д.'рд:]п:;г о з;!!.;:но1,!Срнос:тях продукции интерферона, та ими ил ; ;V.ii(,ii4H''<oi!i :! шкл'киошр^г.ио.' шп пьасс чи ни ■■у.лаь')-! гчкер-Пером d.

Разработан метод повышения протиъовниусной актиштпти пя-

р ;рлл:д;;.:х нд/д дд :!н"ерч;:;рон ., оснаьиии'/!' на детодо:;. -а;:нг

Hi^Ofh'TOpOjj г.ри

Разработан способ выделения низкоыолекулярных индукторов интерферона из высших растении.

Получены 8 авторских ов!'Чртетьо?» на ^зсбретсинп, на 3 из

хнтярих получат, личохтелышч рсагняя ляг дадкчи внтто к I пат"пт,

T,1.C,f?I85r;766 от i.2.01.1987г.- "г,аТ,1. IT, G, G1,7,71 -ге кс и о кси -¿»з'-дагопропия - г,Зт-дииешл- В,81-диыв«ил- --"Ut'I-e-

ппл - 211,2Ш,311,3Ш-тетрэметил- 4П,4Ш-диэмино- 51:1,5Ш-дипиразелон/'-динафталин, обладающий противовирусной и интерфе-ропиндуцирукцеИ активностью" - совместно с Садыковын А.С.,Исмз-лловым А.И.,Биктииировы*! Л,,3ияевым X.Л.,Барам Н.И.,Ершовым Ф. И.,Тазулаковой Э.Б.,Поповой О.М.,Баринским И.Ф. /не публикуется, ДСП/.

2.Л.С.(ÜI4784I4 от 08.01.89с."Способ получения нового индуктора интерферона", совместно с Наджиму'тдиновым Ш.,Ершовым Ф.И.,Садыковын A.C.,Сарымсаковым Л.Л.Дбдулхаевой Н.М.,Баринскин И.Ф., Хазулаховой Э.Б.,Исмаиловыы А.И,,Зияевым Х.Л./ не публикуется, ДСП/.

3.Л.С.Ii! 1600048 от 15.06.90г.-"Способ индукции интерферона", совместно с Тэвулаховой Э.Б.,Амитиной H.H.,Козловским М.М., Ершовым Ф.И.,Виноград И.А.

4.А.С. 101758446 от 26.12.90г."Способ получения таннина листьев сумаха, обладающего интерферониндуцирующеи активностью", совместно с Исламбековым Ш.Ю.,Мавляновым С.М., Исмаиловым А.П., Кзримдааноьым А.К.,Кзмаевым Ф.Г.,Ер-иэвым Ф.П..Таэупаховон З.Б., Гинэтченло Е.В.,Сэидмухамедовыы Л.П.

5.A.C.Ii.' 1695639 от 01.08.91."Производные аминоацетилцеллюлозы

,ii госсилояэ, обладающие интерфсрониндуцирующими и противовирусными свойствами", совместно с Аслановым Х.А.,Рохмояоердиевым Г., Ершовым Ф.й.,Тазудаховой У.Б.,Ауелбоковым С.Л.,Ачиловои Г.И., /шановои С.Х.,Маулянолым С.А. /не публикуется,ДСП/.

6.А.С,положительное решение для выдачи патента №4907166 от04. 02il99Ir. - Иротивозирусное и интерферониндуцирущее средство", coBi"?crJHо с Ершовым Ф.й.,Сарымс8ковУм А.А.,Мезеяцевои М.В., Тезулаховои О.Б.,Наджимутдииавьпл й.

7.Д.С«положительное реиении дли выдачи патента /а 4888154 от II. 09.1991г.-"Kor.rniaicc производного госспполз и поливннилпирролп-дона в :нзчес'*ве соединения обладающего интерферониндуцпруюцей вктивнu'vVbu а октлхламидш'ным действием", совместно с Зияевим Х.Л. уБйг.тпмировыг' Л,, Дкурао'ековои С,'Б.,Барам I! .П./Лсмапловим А.И., Б/нигрод H.A., Тазулаховои b.E., Epboi.mm ФД1.,Каранутидзе

пуби.куетск, ДСП/. С!, и 1737902 от 01.02.1992г.-"Натриевая солъ поошетакрило-'и.лииУ1»чой ккслиян, обладающая интерцчгрои'.пи.уцируице;! активное-

тью", совместно с Иргашевои Н.Х..Назаровым М.Ш.,иусаевым У.Н., Аслановым Х.А. / не пуоликуетсн.ДСП/.

9. A.C. получен патент te 1795890 от 1992г."Противохлами-

дийное средство", совместно с Ершовый Ф.И., Виноград Й.А.Дазу-лаховоМ Э.Б..Аслановым Х.А..АуелОековым С.А.,йэуляноьыц С.Л., Рахыаноердиевыи Г.,Ташпулатовыи Ю.Т.

Полоаения, вносимые на защиту

При изучении влиянии химической отруктуры на биологические

9КТИКН0СТ!! СО^НКЧвНК?1 p^CT^T^^Hnrn прлмп*п*ДвНИЯ ^ ЛтОО-

раны оригинальный индукторы интерферона, обладающие высокой ин-терферониндуцирукщей эффективностью в культурах клеток различного проиохоядения и в организме экспериментальных животных. Выявлены отдельные группы и свяаи в молекуле химических соединений, влияющие на их биологические эффекты. Установлена возможность изменения интерферониндуцирующеи.активности растительных веществ методом модификации их структуры.

Изучен хсрактер продукции интерферона в организме экспериментальных животных ь ответ на парентеральное, пероральное и ректальное введение, отобранных препаратов. Определен характер распределения интерферона по органам в зависимости от природы индуктора и способа его введения.

Разработаны оптимальный схемы многократного введении одного и того же индуктора и комоинированног^дщщщия индукторов интерферона различной природой, приводпщиё^'уровня продукции интерферона и позволяющие преодолеть состояние рефрактерности,

развивающиеся в организме и препятствующее синтезу интерферона при повторном использовании одного и того не индуктора.

Исследованы профилактические и терапевтические эффекты отоо ранных препаратов при экспериментальных вирусных инфекциях.

Впервые выявлены антихламидийное и противоопухолевое действие растительных индукторов интерферона.

Установлена иммуномодулирующая активность растительных индукторов интерферона.

Разработаны схемы применения индукторов интерферона с ингибитором нротеолиза - контрикалом, и антибиотикаии, и иммуноыо-дуляторэыи, позволяющие усилить противовирусный и антибактври-

альный эффекты при вкспериментальных инфекциях.

Исследование токсических свойств препаратов выявило, что все они обладают либо очень слабой, либо неопределимой в пределах раотворимых доа токсичностью.

Фермакокинетическов' исследование растительных индукторов | интерферона выявило,что они не кумулируются и быстро выводятся ) из организма через желудочно-кишечный трект.Череэ неделью выво- ■ дится более 98^ индукторов растительного происхождения^ в черев месяц отмечается практическ! полное их исчезнование. Максимальное накопление препаратов происходи* в желудочно-кишечном тракте /ЖКТ/ и печет, в то же время отмечается слабое проникновение их в остальные органы, что коррелирует о наиболее выраженной интерфероногенной активностью препаратов в кишечнике и печени.

6 связи с исследованием биологической активности отобранных препаратов, их фармвкокинетики, возможностям сочетанногб применения о другими индукторами интерферона, иммуномодулятора-ии, антибиотиками и химиопреяаратами бит разработаны охеиы при-' менения и разработаны рекомендации для дальнейшего их клинического использования. Предложены лекарственные формы втих препора тов.

Апробация работы. Основные экспериментальные материалы и сложения диссертации доложены и обсуждены на Ш-всесоюгном координационном совещании "Интерфероногенная и противовирусная активность природных и синтетических индукторов интерферона / Ташкент,1980/,У-воесиюзном симпозиуме по фэнольным соединениям Дэплин,1987/,Х-регионального симпозиума соц.стран мирз по интерферону /Юрмала,1988/, Всесоюзном симпозиуме "Современные аспекты клинического применения интерферонов и других иммуномоду-ляторов /Киев,1990/, Международным симпозиуме "Интерферон"/Сэн-кт-Петербург,1990/.Всесоюзном совещании "Актуальные проблемы биотехно логииу Новое иоири к, 1990/,1У-вееии1изн ом совещании по химическом реактива!»"/Паку, 1991/ и Конгрессах международной ассоциации исследоватолоЯ интерферонов и цкгокинов /Торонто,Канада, 1992/ и Будапешт/1994/.

Публикация работ..Основные положения диссертации отражены в Ъ авторских свидетельствах на изобретения,^ патент и 8-» опубликованных научных работах.

Обьем и структура диссертации, диссертация изложена на страница* машинописного текста, включая 51 таблицу, Ь7 ,д^нков и состоит из введения, оозора литературы /3-глав/, соо-стьенныл иссачдовоиИй /8-г лав/, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемом литературы, содержащего источника, в том числе /74 работ отечественных и зарубежных авторов.

Работа выполнена в плане исследований КЙИЗМ им.Н.Ф.Гамалея РАМНДэшГУ РУзб. и НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН.

Отдельные разделы работы выполнены совместно с Чижоит»_н, П./НИИ гриппа МБ ^^.З^ряПСйии.П.Й.Новякчм,

Ррезснча С.В'./Ийй гнруоггопт «ид.д.И.Ивановского РАМН,Москва/, Тазулаховои Ь.Б..Мезенцевой М.В.,Париинов О.В./НИИШ им.Н.Ф.Гама леи РАМН,Москва/,Козловским М.М.,Виноград И.А./НИИЗМ МЗ Укр., Г.Львов/,Виноград Н.А./Мед.Институт МЗ Укр.,Львов/,Логиновой Н. С./ВНЦБАВ,Купавна,Московии.обл./,Ивановой А.М./НИИ вирусологии АН РУзб,Ташкент/»Исмзиловыц А.И.,Барвй Н.И./НШНОХ им.вкад.А.С. Садыкова АН РУзб,Ташкент/,Серымсаковым А.А./НИЙХТЦДашкент/, Аслановым Х.А.,Ауелбековым С.Д..,Мйуляновым С.А./ТашГУ РУзб/.

Всем соавторам исследовании вырвнзю искренюю благодарность. Особую благодарность ьыранаю за постоянную помощь и внимание вед.н.сотр.,д.б.н.Тазулаховои Ь.Б. Искрекее благодарен за поддержку д.х.н,,про^.АсЛс)иоьу Х.А. Глубоко признателен за постоянное внимание и поддержку своему научному консультанту чл.~ корр.РАМН, акад.РАЕН,проф.Ершову.Ф.И. Искренее благодарен коллективам отдела 11Интерферон"НИЙс)М им.Н.Ф.Гамалеи РАМН, лаборатории химии природных соединении ТашГУ РУзб. и лаборатории онтогенеза вирусов !ЩИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН,

о.-:о £ С Т В Е Н II и Ё 11 С С Л Е л О В А н и я

Материалы и методы. В работе использовали перевиваемые культуры клеток Ь-929 / трансформированные фиброблястн иыией/ и /человечесые В-лимфобластоидные клетки/, а твкке

перевиваемые культуры фибробдастов эмбриона человека 1А-19, пер-вично-трипсинизированные культуры фибрролзстов эмбрионов человека /ФЭ4/ и фиброблистов эмбрионов кур /<5оК/, которые получали из лаборатории культуры тканей НИИ вирусологии им. Д.И.Иванов-' ского РАИН. "'■.= '

Для выделения лимфоцитов применяли методику, разработанную Фрак Г. и Прёйснер 8./1979/, выделение макрофагов из пери-тонеальвого вксудата осуществляли, используя их способность к адгезии на пластике. Для удаления моноцитов из популяции лимфоцитов применяли:методику Raiinotfilck /1964/. Разделение популяции лимфоцитов на Т- и B-клетки проводили по методикеМсуе /1977/, для чего'йспользовали антитела к мышиному f - глоОу- ' липу клеток В,-любезно предоставленному доктором М.Новэкон /Институт вирусологии -САН, Братислава/.

Б качестве индукторов интерферона в работе использовали природные вещества и их производные, выделенные из высших рэоте-ний^"отличающиеся по ¡химическое структуре и молекулярном массе.

--'Для исследования биолог.ическоК активности препаратов использовали самцов ыышей линии .СБА /14-16 и 20-25гг./и и белых :бе'спэродяых швей массой'6-8,14-16 и 16-18г.

• В работе использовал:! вирусы эпцефэломиокардита шше1; /ЕНС, •Цатами-"Колумбия"гриппа штзммы А/А icki /68Нд N2 и R - 94; клещевого "Энцефалита, штамм "Софыш" /BKS/; бешенства, штамм "Нк"; гепатита мышей, ¡'штамм "Мищеринэ"; гепатита Л человека; везику-

• лярйого стоматита, штамм ,!Ийдизна"/ВБС/. Инфекционную активность вирусов определял:! по ДВД^д/цд в микрокулмурах L-929 или призарэнашш шмеИ, вычисляя L Д^ по методу Рида и Менчэ. В работе такяе'ислольэовали'-С..hzachomeiiis /штамм Lg/ венерическая '.¿имфогрУнулома,1 ^прошедший ВО пассаже!; на желточных меш-

'- ках раавйвашйхсп ¡куршшх'-эмбрионоз.

- Для оценкй противовирусной эффективности индукторов интер-'гг|ербй8';по Ьтновению к вируса гепатита Л нами была использована специфическая реакция определёнйя вирусного антигена /НАА^ / в клеточном лизате ыетодом-твердофазного иымунофернентсого анализа /ИФА/. Противовирусную ^активность препаратов при других экспериментальных инфекциях исследовали на беспородных мышах. Вычисляли' проц^ент- выживаемости животных и среднюю продоляитель-'•ность жизни по сравнению с контролем. В каждой группе было использовано не ыекее 30 яивотных. ! ; • Антихламидайнзя 'актйвность^препаратов оценивалась по подавале нив репликации* микроорганизма в легких и лимфатических у ;лзх .

* мышей цтиоекопическими методами /окраска по Мэкиовелло и :.teio- ; •дом прямо» имыунбфлуоресценцип с хламидиБной родоспецифической '

антисывороткой/ и определения инфекционности в пулах суспензии

этих органов, взятих от 5 животных на 4 и 9 сутки после инфицирования- мышек венерической лимфогрануломои. Титрование инфекционности осуществляли в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов. Индекс эффективности препарата определяли как разницу мтяпвлпто «ГТГКЙНХ ЭУбрясИОЗ 3 3 «КЗЗрОло» •

Иоояедогянке -г^ттятпгп -раст:::ольпих шцукгйрзв интерфероне на антителогенез при первичном иммунном ответе на тимус-завпси-мыи антиген-эритроциты барана /З.Б./ проводили на самцах мышей линии СБА, которая обладает высоким иммунным ответом на Э.Б. Животных иммунизировали внутрпбрюшинным введением Э.Б..в количестве 2.10®/ в овъеме 0,5 мл/. Суспензию клеток селезенок получали мягкой гомогенизацией в среде 199 и фильтрацией через нейлоновый фильтр на 4-е сутки после иммунизации животных. Количество прямых 'Зу -М- антнтелообразующих клеток /АОК/ определяли методом локального гемолиза в агаре /по Зегт и МогсИп. 1963/. Контрольным животным вводили физиологическим раствор в то же сроки в том же объеме, -что и исследуемое вещество. Количество подсчитанных АОК в контроле в расчете на 10®ядро-содер-жащих клеток исследуемого пула клеток селезенки принимается.за 100%.

Определение активности интерферона проводили иикрометодом, описанным СлтрЪеИ /1975/ Литр машинного и человеческо-

го интерферонов определили в гомологичных культурэх и стандарти зовали по рефоренс препаратом. Серологический анализ образцов проводили с помощью реакции нейтрализации/ используя стандарты .антисывороток к с< - и ^ - человеческим интерферонзм и к I-типу мышиного интерферона. Для доказательства белковой природы ингибиторов вирусном активности и продукции интерферона проводили обраоотку проо ферментами: РНК-азой} ДНК-азои и трипсином..

Выделение интерферона из органов осуществляли методом, описанным Амитинои Н.Н.,Тазулаховой О.Б., и др./1984/. Пересчет, титров интерферона в международные единицы производили по следу*

ющей формуле: гч

А =» ^р— • А а, где

А-титр интерферона в МЕ/мл; Ст - титр стандарта интерферона в МЕ/мл; Р-титр стандарта в данном опыте; Ал- титр исследуемого интерферона в данном опыте.

В работе использовали коммерческие преп|р8*Ы.1.Международные стандарты человеческого леПкоцитарного интерферона с активностью ¿¿ОООО МЕ/мл / <? -023-901-527/ и международный стандарт человеческого фибробластного -интерферона / й -023-902-527/ с активностью 10 ООО МЕ/кл, а также антисыворотки к Ы- -человеческому / 6 -028-501-568/ и ^ - человеческому / <? - 028-502568/ интерферону, с активностью, выраженной в нейтрализующих единицах 750 ООО МЕ/кл и 800 ООО МЕ/мл,соответственно. Для пересчета в международные единицы препаратов интерферона использовали международный стандарт мышиного интерферона / б -002-904-511; / с активностью 17 ООО МЕ/мл. Препараты были получены из Национального Института здоровья /США/.

ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННЫЙ ПОИСК НОВЫХ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА СРЕДИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ И ИХ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНАЛОГОВ. СВЯЗЬ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ.•

Растительные, вещества, обладающие физиологической актив-костью известны как эффективные лекарственные средства/Носиров С-.Х. и др.,1990/. Важным достоинством этих соединений является отсутствие у них антигенной "активности и способность их индуцировать интерферон в культура'х человеческих клеток. Однако, мнй-гпе из этих веществ имели существенные недостатки /относительно высокая токсичность, плохая растворимость в воде/, что лимитирует их клиническую перспективность. Для решения втои задачи были исследованы новые/более 200/ вещества выделенные из высших растений и различающиеся :<ак по химической структуре,так и по молекулярному весу. ,

Условно их можно разделить на две большие группы: а/ низкомолекулярные вещества, к числу которых относятся азометиновые производные госсипола, з которых последний связан с различными циклическими аминами и препараты, содержащие полифенолы, и о/, высокомолекулярные производные природных соединений, которые являются гетероцелныыи полимерами.

Скрининг биологическоГ активности препаратов проводили 1 п viho по определении их'способности индуцировать интерферон и про' тквовпрусиог активности в культуре клеток человеческих и тинных фибробластов и í.4 vivo по концентрации сывороточного интерфероне, через 24 чзса после внутриСрюпшшого введения вещества белый 6ecj породним мышам.

-----------------Среди нпзкомолсгсулярных веществ, содержащих cyuuy полифв-

нолов, для изучения биологической активности были отобраны оригинальные соединения, выделенные из высших растении: Таннин и препарат под шифром 68-83,

Целенаправленный поиск индукторов интерферона осуществлен на примере госсипола и его производных. Сэм по себе госсипол оопадан выраженное интерферониндуцирующей и противовирусной активность», является токсичным веществом. Однако, уникальная хи-

имияпиаи 0<?рунтурз, nOSÄtafa:SSK33aSiS«C*b, * suyso-

»«рнн).г переходом 'внсокоя рсо.чд::онлйс;:йсииийсть обусаовливае* широким спектр его биологическои активности.

Известно, что однии иа путей повышения инт«рферониндуциру ющеи и противовирусной активисоти низкомолекуляркых химических соединении является целенаправленная модификация их структур / Ауелбеков С.А.й др.,1989,Барам Н.И. и др.,1989/.

Молекула госсипола содержит два нафталиновых ядра, замещенные гидроквильиьши, альдегидными и алкильными группами. Для установления роли этих функциональных групп в отноаении интер-фероннндуцирующе* активности препарата были лоьтапно модифицированы молекулы госсипола и созданы многочисленные производные этого природного полифенола /рисЛ/.

Из данных литервтуры известно, что в результате блокирования гидроксильных групп госсипол теряет свои интерферониндуциру-j юте свойства. Среди аналогов грссипола особенно интересными оказались продукты конденсации альдегидных групп с различными алифатическими и ароматическими соединениями, содержащими аминогруппы /Садыков A.C., и др.1981/.

Среди новых азометиновых производных госсипола наиболее высокой интер^ерокиндуцирущей активностью обладает ПХЛ-6-Рагосин Активность образовавшего интерфероне в крови животных в ответ однократное внутрибрюшинное введение препарате достигает 640 ME/ил, что в IG раз выше по сравнению с госсиполоы. Втот препа рот был отобран для .,алыш1:шего исследования/рис Л/.

Надо отметить, что эффективность использования ааометино вых производных госсипола снижается в силу практической нерве

зоримости их в воде. Ото затрудняет проведение иммунологических и вирусологических исследований в системе in *Иго , кроме

того ограничивает спектр их применения.

Одпим из способов повышения водбрастворимости и снижения токсичности гидрофобных соединений является введение в молекулу полярных групп или присоединение к высокомолекулярной цепочке. Именно с такой позиции наиболее подходящим для наших исследований оказался поливинилпирролидон /ПВП/.Ири использовании в качестве полимере - носителя ПВП получение комплексов становится возможным за счет карбонильной группы ПВ'П и гидроксильиых групп производных госсиполз. С помощью НВП и Рагосина был создан высокомолекулярный комплекс - оригинальный индуктор интерферона Гоззлидон / Рэгосин+ПВП/. По интсрферониндуцируклдей и противовирусной активности Гозалидон не уступает' Рагосину, но в то ке вреыя отличается высокой растворимостью в водэ, что сделало возможным изучить его иммуномодулнрующее свойства. Растворимость Гозалидона в воде позволило использовать не только пероральнын способ введения препарата, присущий Рагосину, но и парентеральное пути введения, что в свою очередь, расширяло показания к его применению.

Сравнительное изучение взаимосвязи между химическим строени ем и биологической активностью в ряду госсипола и его' аналогов позволило выявить большое значение альдегидных и гидроксильиых групп для проявления препаратами биологической активности.

При определении роль бинафтильного цикла молекулы госсипола з отношении интерферониндуцируыщиК яктаркспти производных этого препарата нами использованы эльдегидофенолы и альдегидонэфтолы, содержащие гкдроксильные группы и являющиеся структурными аналогами госсипола. Эти препараты отличаются относительным расположением заместител ей в фенольноы кольце.

Известно, что свободные ниакомолекулярные альдегиды как правило проявляют биологическую активность при токсических или субтоксических дозах. Надо отметить, что токсическое действие ряда лекарственных веществ можно преодолеть путем введения их в молекулу производных природных полимерных соединений. При этом продлева. ется физиологическое действие !Ц)етрз4ов и улучшается их водорзст-воримость, сникается токсичность и побочные действия.

В качестве такого полимера ш использовали производное хлопковой целлюлозы -.водорастворимую ацетилцеллгалозу /ВРАЦ/ - легко доступный реагент. Сравнительное изучение иптерферониндуцирупщей эктивности проиаводнйх ВРАЦ,-содержащих эльдегидофенолы п ольде- ; гпдонофтолы показывает, что один и тот ае заместитель - '¡¿гнольньш

- 1 5 -

гидроксил усиливав! интерферониндуцирующую активность производного бенв альдегида, если он находится в орто- полокении к альдегидной группе и не аффективен, в пара- положении. В производных нафтальдегида свободная гидроксильная группа усиливает ( интерферониндуцирующую активность этих производных по сравнение) о бенэальдегидными и оксибенвальдегидными производными соедине-| ниями /рис.1/.

Надо отметить, что наиболее высокая интерферо::индуцирую-щая активность наблюдается в ответ на введение динвфталиновых производных ароматических оксиальдёгидов. При этом титры интерферона достигают 640 МЕ/нл.Среди эглх соединений отобран оригинальный индуктор интерферона -АС-1 -Гомицел, который является продуктом конденсации ВРАЦ и госсипола.

для выяснения какое влияние оказывает хлопковая целлюлоза на иитерферониндуцирующую активность производных, а какое гос-сипол был синтезирован ряд соединений, которые являются продуктом конденсации госсипола и натриевой соли кзрбоксиметилцеллю-лоэы //П-в - КМЦ/.' Соединения отличались разным процентным соедр-держанием госсипола - 0,5$; 1,0%; 3,055; 5,0$,' 10,1$ и 20%. Контролем служили исходные вещества // а-КНЦ у ВРАЦ и госсипол. Полученные результаты показывают, что сами по себе Nа-КМЦ и ВРАЦ не обладают способностью индуцировать^и|р|1й|£он^Т^тры ьуо в кровотоке животных в ответ на кк введенйЕ^остаются на уровне интактного контроля. Наиболее высокой интерферониндуци-

рующей активностью среди полученных производных обладает //в-КМЦ*3,0% госсипол, который назван ДАКОС-Кагоцел. При однократном снутрибрюшиннои введении Кагоцела титры интерферона циркулирующего в крови животных достигают 1280 МЕ/ыл /рис.1/ Уменьшение или увеличение проценте госсипола ведет к снижению интер-ферониндуцирующей активности производных.

Ранее установлено, Что среди производных бензальдегидов наиболее высокую иитерферониндуцирующую активность проявляет внвйаг 2-оксибензальдегида, которым содержит гидроксильну» труп-, пу в-ароматической ядре в орто- положении к альдегидной группе. , Анализ данных литературы показывает, что замещение альдегидной ; группы альдегидофенолов соединениями, содержащими активные N Н,, группы приводит к усилению биологической активности лекарствен- ;

" Таблица I.

Первичны-отоор новых индукторов интерферона среда растительаых веществ и их модифицированных аналогов

Кл^асс

1

препаратов и 4 Отобранные I

Биологические.

ЭФФЕКТЫ

ИХ

ЙФН-иядущ^Противова-'Ишцгвоиоду-'Ант.ГЕшыи- 'Противоопу-

1 !рующзя ак-;русная зк~1лирувдая ак-1ди:шся ак~!Холевая ак-

дрепарат

количество

!сть,^Е/цл.Гть,пзфекций1ть ность. ! :гость : 1% защиты ! .1

.Производные

ЛОЛГ.ХЕНОЮЗ

105

1 Рагосин

Нозалидон Наннин » 63-83

* 640-12280'Гепатит ш-4 + киек, 6

' 1280 ' Н.И. I *

; 240 » ,37^. ! Н.К.

) 320-640 ; ЕЛЬ > Н.И.

I ►

I ь

! а ,л.

4 3.11.

Производные • Кагоцел хлопковой 55 1 Гошщел

I 1280 1 Грипп,75% 1

целлюлозы

I

; 640-1280 }

Н.И.

+ +

1

Н.Г..

Производные оензальдегодов ___20____

1280

¡Гепатит мы-1 не«, 50/ь.

Саврац

Примечание: ~ актввноеть ьыньлеаа, Н.И. - не исследовваи

яость

I +

>. ■ +

1 Н.К.

! 'Н.И.

¡ т

1 Н.И. !

42 I

нн* препарат /Ершов Ф,И., и .соавт.,1985/.

Основываясь на атих предпосылках создан новый оригинальный индуктор интерферона САМ-3 - Саврэц. Он индуцировал высокий уровень.интерферона. В ответ на его введение fr кровотоке циркулировало 64Ó-I880 i!E/«| интерферон.

Та кии образом, в реэуЙ¥ате целенаправленного поиска нами были отобраны новые рригиналыше отечественные индукторы интер ферона, такие как ОаврвцДвгоцел,Рагосин,Г.озелидон,Твннин,Гоми-цел и препарат йод шифром 6В-8В/Тэбл.1/.

Сравнительное изучение интерферониндударующей активности отобранных соединений в культуре клеток L -929 й Ы-19 показывает, что все отобранные препараты растительного происхождения обладают способностью индуцировать высокие титры интерферона, в культуре фибробластного типа как мышиного, так и человеческого происхождение. При атом наблюдается четкая зависимость между дозой вносимого в культуру прнаратэ и активностью продуцируемого интерфероне. Оптимальном концентрацией в денных культурвх клеток для нивкомоиекулярных препаратов /Рагосин, Таннин, 6388/ оказалась доза, равная 125 мкг/мл, а для высокомолекулярных индукторов интерферона /Саврац,Кагрцел,Гоаалидон и Гоиицел -250 мкг/мл. Пр.! этом титры интерферона достигали 512 МЕ/мл*

При сочетанном применении препаратов с ДЭАЭ-декстравом титры интерферона увеличивались в 2-4 раза и достигали 2048-2560 НЕ/ мл; Следует отметить, >íto титры интерферона, синтезированного г человеческих клетках всегда выше, чем титры интерферона, про Аудированного в мышиных клетках в аналогичных условиях. Феномен отмечается для всех йспользованных индукторов* что хорошо согла суется с данными литературы /Новохэтский A.C. и соавт.,1981/, Чернэшинв,Н.П.,и с0эвт.Д901/, которые показали, что произвол ные растительных полифенолов /ГСН, CK—I/ обладают высокой интер ферониндуцирующей активностью в различных клетовных системах. Ото свидетельствует о <1увствитеяышоти рецепторных саптов мембран человечески* клеток к препаратам данного класса, что откры веет перспективы для их клинического применения.

Ввиду того, что исходный препарат госсипол обладал выражен ной токсичностью при концентрации 100 ;лг/кг веса определение токсической дозы вновь полученных соединении приобретало особое значение. •

Токсическую дозу в органоне экспериментальных животных

Рагосинв определить не удалось, что связано с плохой растворимостью препарата. При использовании максимальных доз 300-600 иг/кг веса/ данный препарат был нетоксичен. Водорастворимые ниэ-комолекулирные индукторы интерферона /Таннин,63-83/и высокомолекулярные препараты /Саврац,Кагоцел, Гозалидон и Гомицел/ при введении мышам в максимально растворимых доз /1500-2000 иг/кг

jiwwCi/ W»«ÚÚÜH4¡W4> ilWAUÜuJíl'iitÚlíií •

Бйрааенагш ингр$сроииндуцирув^ан активность отоораниыл препаратов в сочетании с низком токсичностью, свидетельствуют oó их перспективности и целесообразности дальнейших исследований.

Анализ полученных данных показывает, что для проявления ' активности производных госсипола и его модельных, соединений необходимы:

I.Наличие гидроксильмых групп в молекуле госсипола /степень замещения гидроксилышх групп пропорционально снижению активности производных госсипола/.

2.Замещение альдегидном группы госсипола соединениями содержащими активны - NHg, -СНг,- .

Ь. Введение в молекулу полярных группировок и низкотоксичних полимерных соединении.

4.Введение сьсоодных гидроксилышх групп в молекулу альдегидо-фенолов в орто- положение к альдегидной группе.

Исследования показали, что интерферониндуцирующая активность отобранных препаратов зависит от дозы и способа введения! Мишам вводили различные концентрации препаратов от 3,1 иг/кг веса до ¿000 мг/кг веса внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно, перорэльно и ректально. Уровень синтеаа интерферона определяли в сыворотке крови животных через определенные промежутки времени после введения веществ. Было установлено, что максимальные дозы гшзкомолакулярных полкфенолов растительного происхожде ния колеблется от 12,5 мг/кг до 50 мг/кг веса. При этом для-Ра-госина оптимальная доза составляет 12,5 мг/кг для 63-83 и Тон-нння оптимальные дозы несколько выше /25-50 мг/кг веса/. Все В препарата индуцируют высокие уровни сывороточного интерферона при всех способах введения /табл.2/. Однако,, оптимальными

Рагосина является подкожный, пероральныи и ректальный способы

аппликации. Для Таннина и 63-83 парентеральные способы введения предпочтительни энтеральных.

Установлено, что высокомолекулирных соединений оптимальные интерферониндуцирующие дозы выше, чем для низкомолекулярных растительных полифенолов и при парентеральных способах аппликации колеблется в пределах 50-100 иг/кг веса. Ьнтерэльные пути аппликации / пероральный, ректальный/ позволяет снизить в 10 раз оптимальную интерферониндуцирующую дозу этих препаратов /табл.2/. Исключение составляет Го;л>лцел, когорт- при всех способа аппликации в дозе 10 мг/кг веса индуцирует одинаково высокие уровни интерферона и повыиение дозы до 100 мг/кг веса стимулирует интерфероногенез всего в 2 раза.

Как показали наши исследования для Савраца и Кагоцела нет принципиального значения каким способом вводить этот препарат, в то время как Гозалидон лучше всего вводить рзктально, при этом отмечаются-наибольшие количество интерферона. 5е.1 а£., /1984/ выявлена зависимость биологической активности высокомолекулярных соединений от их молекулярный массы. С увеличением молекулярное массы индукторов интерферона усиливается их интерферониндуцирующэя активность и способность стимулировэть противовирусную резистентность как ип виво, так и ин витро. Проведенные нами исследования не подтверждают такой зависимости для растительных препаратов. По нашим данным как пизкомолекулярные соединения Рагосин, 63-83, Таннин', так и более высокомолекулярные вещества /Саврац.Кагоцел/ обладают приблизи тельно равной способностью индуцировать сывороточшгБ интерферон, ■титры которого колеблется в пределах от 640 до 2560 МЕ/мл. Поводимому закономерность,, отмечаемая характерна, для двуспиралышх индукторов интерферона и в большой степени определяется длиной и конфигурацией соединения. В то время как , для ароматических соединений иитерферошшдуци'рующоя активность ; в болыпсИ степени зазисит от конформациоших ивойств молекулы и активных радикалов, способных присоединяться к чувствительным сайтом наружных мембран клеток..Тем но менее следует отметить определенное сходство интерферониндуцкрующеи активности оромэ-имеских соединений растительного происхондения с дсРНК. Ток, в отличие от синтетических низкоиолскулнрти соединении, дсРНК

_ ___________________Г 21 г____________________________________

и растительные вещества и их кодифицированные аналоги индуцируют синтез в культурах фиброблостов. Кроме того поликатион ДБАЭ-декстран, изменяющие конфирмационные свойства дсРНК /Тазула-хова Ö.В,,1986/ по видимому таким же образом действует и на растительные препараты, так как в его присутствии усиливается ицтерферониадуцирующия способность обоих классов соединении.

Изучение динамики л»"1»«?» ечггроточлогз nsxötüe^a«, им^у-

U.lp^BiiHnGrO üdf.iHfHJib"""» nrST'ipiiT'jyU, Г2 су.цОГ, 1 imrtnui

отличии в профиле интерферонового ответа на низкомолекулярные и высокомолекулярные препараты. Низкомолекулярные соединения /63-83,Таняин/ стимулировали при внутрибрюшинном и подковном способах введения образование в основном позднего интерферона, пик продукции которого отмечался через 48 часов после индукции, достигал приблизительно 2000 ед/мл, начинал снижется к 96 часам. Рагисин индуцировал при тех не.схемах-2 пика сывороточного интерферона "раннего", при котором отмечается ранее включение систем интерфвроьа с пиком продукции уже через Ш часов после индукции к"позднего"-чбрез -18 часов. Подобная картп;а, ча при использовании других индукторов /инояиплзкс, и пола/И/.поли/Ц// отаеч^лосъ и другими исследователями . амитиноь Н.К.,/1981/, и 'Гззулахозой Ъ.Б./1386/ было показано, что наличие Ü-ликов продукции интерферона. Авторы предположили, что в образовании раннего интерферона я его синтезе участвуя! В-лимфоциты и грануло-цщ'ы, s ю время как при формировании позднего интерферона принимают участие Т-лимфопитн, Нчтшчив 2-х ттккоз слсроточного интерферона, инду¡(HpoBuH.ioro Ьчгосином, твк%в ¡/orte? бить результатом синтйзэ интерферона разными популпцвями клеток иммунной системы.

Анализ динамики накопления эндогенного интерферона в сыло.-ротке крови мышеи при перорплыгом и внутрибршшшом спосооех введения низкомолекулнрних соединений /Тоннин,63-83/ и высокомолекулярных показал, что она имела олннаковыи особенности. Максимальные уровни /10 1-2018 ME/мл/ регистрировались через 48 часов после их введения. К 96 часам титры интерферона существенно снижались, а череа 120 часов после введение препаратов не определялись, При знутрииишечном пути введения как низкоиолекуляр-ных, так и высокомолекулярных соединений пик образования интерферона в крови животных сдвигался но двое суток по сравнении с внутриорюшинныи введением этих веществ и отмечался через SS

- 22Т а б лица 2

Показатели циркулирующего /сывороточного/ интерферона при различных способах введения новых индукторов интерферона растительного нроисхдадения в организм экспериментальных чг.вотннх.

1способ вве-

Препараты

иаш"..т.у!)о»1Доза, 1Ппк продук. векь продувIlt/кгIцнп Ш1,ч. щш,Ш|,!,;1'//1 веса J ;.тл. I 1

»Внутрибрюш. 512-1024 I 20 18 -12 и 48 1 4

Шнутриншеч 1024-2043 ! ГО I 48 и 96-120! 6

Рэвосин Шодкоздо Л 02 4 1 12,51 48 I 4

Шероральио 640 I 12,51 48 1 8-4

1Ректэльно ЮГ.4-2048 1 12,51 4 I 3

1Внутрпбрш. 5IS-I024 i 50 1 48 1 o-4

Таншш !Вкутршяшсч 1024 ! 50 1 D6 J 5

Шерорзльно 512 I 25 1 48 i 8

Шнутрибркы. 2560 1100 1 48 1 ■1

1Внутрииыаеч 640 1100 1 120 I 8

Саврац Шероральио 1280 1 10 1 40 I 3

ШодкОано 1280 J 10' 1 24 I 6

1Реглольно 1280 I 10 1 2-4 I a

1Внутрибрки. 11:80 1 100 I 48 i 8

1Внутришшеч 1260 1 ICO I 96-120 1 6

Кэгоцел Шерорзльно 640 i 10 1 48 1 .4

1 Подкожно . 640-12 SO 1 10 ! 24-72 1 5

1Ректально 1280 1 10 1 12-48 1 6

1Внутрибрго. 640-1280 J 10 1 48 1 6

1Внутришшеч 1380 i 100 i 96 1 6-7

Го в а ли до п Шодкожюе 2560 110-1001 26-120 1 7

1Ректально ¿560 i JO f. 24 I 4

(Внутрибрюа. 640-1280 ' 1 50 i b-I2 ' 1 u

Шодкояно 2560 I 10 I 48 1 5

Гомицсл Шсророльно 2048 1 10 I -18 1

1Ректэльно ■ 1260 • i ID 1 2-4 1 8

Примечание: на каждую группу Орали по 5 ;/г j30iiu;x.

Срок цирку-7ПЩШ1 1М,-

сутки

Время индукции,

24 48 72 95 ^20 144 чаоы' Рис. 2 . Динамика накопления интерферона в сыворотке крови пышен при пероральном/1/,внутрибрвшинном/2/,подкохном/3/, внутримышечном/4/ и ректальном /5/ введении Кагоцела.

довольно высокие титры отмечаются через 144 часа после .введения препарато^рис.й/.

Отличие в динамике отмечалось при подкожном введении высокомолекулярных препаратов Кагоцел, Гоззлидон, Гомицел и Саврац. Высокие титры интерферона /640-1.Д80 МЕ/мл/ начинают циркулировать уме через 4-1Й часов после индукции втими препаратами. Характерна стаоильно высокая циркуляция интерферона в течение 3-Ь суток

При ректальном способе введения Саврац отмечается продукция также р.iiuie.ro иитеР-ЗвР^фь/ЩЦЗ чи"ов/« Однако, « от-от Когоцелэ, Гоаице'л-т^»'" П1)И~)екталы!ом введении хоторси о довольно длительно циркулируют в кровотоке, при этом способе введении Сазраца интерферон исчезает из кровотока животных довольно бистро. .Ум через 3 суток в сыворотке крови можно обнаружить только следи интерферона.

'"окии обрезом, ш^кая токсичность, зоаможносгз» разшчиих использований препаратов и возможность снижения крггнпсти гоиченелии для формирования и циркуляции терапезтйчеоких доз ип терферона в течение длительного времени /до 7 суток/ свидетельствует о клинической перспективности отобранных как низко-, тай и высокомолекулярных индукторов интерферона созданных на основе растительных веществ.

ФАРМЛКОКИНЕТИКА РАСТИТЕЛЬНЫХ ИНДУКТОРОВ И СИНТЕЗ ИНТЕРФЕРОНА В ОРГАНАХ - МИШЕНЯХ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЯХ ИХ ВВЕДЕНИЯ.

Содержание интерферона б сыворотке крови может не отражать обцон картины продукции'и расперсделения его в организме животных, так как в органах шкет накапливаться о'ольие интерферона, чем в сыворотке. Локально концентрирующийся в органах и .тканях интерферон играет существенную роль в физиологически процессах и в патогенезе вирусных инфекций. Продукция локального интерферона зависит от фзрыэко<шиетнки использованных индукторов интерферона /Таэучэхога Э.Б.,1986/. Кроме того изучение фэрмако-кппетикп важно для определения скорости выведения препаратов щ организма, их кумулятивных свогств.

"^ормакокинетикв индукторов интерферона Рагосина.Свврац и Кагоцела изучено нами при различных путях введения'в ранее установленных оптимальных дозах, для чего синтезированы 3||- и С-униформы препаратов. Поскольку для Рагосина оптимальным способом введения является пероральнып при исследовании рьспрсдсле-нип ^С-Рэгосипо л органах и тканях мыше!: использовали именно

этот путь аппликации. Установлено, что наибольшая концентрация радиоактивности при этом выявляется в печени, что видимо, объясняется способом введения препарата. Далее по степени пакопле 1.ия радиоактивности следует кишечник и кровь. Низки;- уровень радиоактивности регистрировался в селезенке, тимусе и лимфатических узлах. В козг иивотных радиоактивным препарат проникал в минимальных количествах.

Результаты экспериментов по распределении метки наводили на мысль, что уровень синтеза интерферона исследуемыми органами в ответ на продукцию Рагосииом также может быть неодинаков. Действительно, при пероралыюм способе введении препарат стимулирует выраженную продукцию интерферона г. кишечнике, печени, что соглолуотоя с высоким содержанием соченного 1,о углероду , преппрата л этих органах. Уже через 4 часа в кишечника выпвля стсп больыо 20 ООО МЕ/ил. Динамика и уровень накопления интерферона в ткаг.пх печени сходна с динамиков накопления интерферона в сыворотке крови, что свидетельствует о том, что г кровь кн-Т'рре^он при это;: итообе введшим Рах*ос1ып попадая по видимому из шкдоаго и печени. В д:>ух> х орглшх уровень интерферона

гораздо нике, ч-io согласуется о данными фармококннетики. Неоди-HSK03UI: уровень пьvep.^ероло ь селезенке, -хинуее, лиа^оуагах. и пззгс гвилстельствует, что интерферон синтезируется л локальных органах ъ ответ на индукцию Рогэсияои, з не накапливается, сороируяоь клетками, оаэнесенпыг с кровотоком.

В целой, ;!;i0;i:iyuiec5»e»!iic!* обоазовзнчг интерферона в ответ ни вввденча Ьч.госдиа в и печев* моае* оказаться важ-

ный для рекомендации к применению этого гшепапата ппи питяпп*«-

n vn tJI f\r tr t» Л n

¿¡квкрецая '^С-Рагоопна с ыелчьз через аелудочно-кишечнык

тракт /¿114/ подтверждайся высоким содержанием радиоактивности г желчном пузырье. С фекалиями выводится почти ься введенная доза радиоактивности / >38%/ как пра одно-, так и при многократном введении меченного Рагоспна. сто свидетельствует, что Рагосин на куиулируется организмом.

Полученные результаты свидетельствует о метаболический у<>-

-'"i.i Z-.-::-:". гу ,:и r'arjCII-i.j. 1|Г-0Л.-!Д£иТСН j: f Л '! " Г," Д • ¡{.<-Jfrtil'AH (ji'.a

Ь1 - -

П; '! Г.'..,'.; !■■ i?; -."¡,Й;;СМС ;! pH,'!:pä ' СЛГ ÜU ,1! ji'!Ji;:Ü! b d йрГа-

I':,:;. ¡';'.i.'. C-Ki.vcicra orrf-üH^Lr; i -o.-.i щмдк-д.

'.'. J !'X ': i; Г 5 • .¡тДУин:: pL Д1: . ' Д S.iU; : , ..е.Ь.З Л0.;ДЗ

f ь Iii; .r-i'.f, СГеДуы: , ilKlli, •! , лД1.

er,п'чп,',..!.' узги. !i:i р-ии^к-

?:<? 1 •> ;••> <!'•»• muuk, ьымд, uufird,

плазмы и кроги. Использование двух, вариантов введения прппаппч>« .-ы" р . . . ". > ч ' • .. :;■ т. iг.'■■.¡. '.к.

- .. ..:..; ■ ..... ■.-..^xiiv. Лр:: .»;„

танозлаио, что при введении равных доз "'^С-Кагоцала площадь под кривог. кинетики в плазме кпози при виутрркядудочном зведетги з 5 раз UäiUttia, чем ной внутоиогш'иинком, Рору»''нт<; ттт:..'

4 ... .......Д.... UU1 #tOti »

r.iiT'i о.ог.т»пе 10 ООО 1,'ü/r '."кии:; органа интерферон». В дияьаавпьи титри и«тер$«роно з шмзчяяхе, гл'ле как и пч аледзтч' Рагоси-nn бчс?>'& п:!'лгг<"Л';ч, Но/об-чи-.. рпзулпмтн 6iu:n :!0J.y«ieiiU дру?«».* •> 'j'i'fcv ч i -i.<-.r, '.<.!,'< / Л'.::г,':!'1;> ¡Li:, дч

- Кб -

1985/. По видимому раняя продукция интерферона в кишечнике свой» ствекло клеткан- продуцентам етого органа и осуществляется в ответ на индукцию любым препаратом, способным индуцировать интерферон при пероралыюм введении вне зависимости от его природы.

В сыворотке крови через 4 часа после перорального введе-вия Кагоцела, интерферон только начинает определятся.. Максимальные титры интерферона тестируются- в крови животных через 24-48 I часов. Они составляют приблизительно 20$ от количестве интерферона, определяемого в тканях кишечника. Динамика накопления интерферона в печеночной, легочной ткогч, а также-в тимусе повторяет динамику накопления интерферона в сыворотке крови, но уровень определяемый в этих органах на порядок ниже уровня активности сывороточного интерферона, что хорошо согласуется с концентрацией меченного индуктора.

Исследование динамики и путеГ "введения ^С-Кагоцела из

киьотиого организме показало, что за 7 суток после введения ^С-Кэгоцела из организма выводитог. 96,33/и введенный дозы. Из

выделенной радиоактивности 90,70$ се составляет выделение с фекалиями н 3, ЗОд. - с ыочо».

Исследование динамики распределения 3Н-Саврац, существенно

отличающегося по химическое структуре от других изученных нами производных гоосипола показало, что послс перорального его введения относительно больше количество радиоактивной-метки обнаруживается в ЕКТ, в крови, печени и в костной мозге; в остальных органах радиоактивность распределяется следующим образом: поч-м: > легкие -- сердце > мышцы > сьлсоенкэ > мозг. В печени 'п селезенке максимальвне количество раглоактизноотп регистрируется через 4 часа после введения, в почках и сердце через 30 шш., в ЛСТ черсЕ 80 млн. после введения препарата.

Также как ¡; в отлет на другие иерорал.ыше индукторы интерферона, Саврац в дозе 10 иг/кг вызывает образование раннего пнтердерона в ккисчнике: 10 уце .¡¿д/г екзнк интерферона через й часа после введоыш препарата /рии.З/. Как угс отмечалось зние: Сгврац образует пик продукции шьерусронз в крови /1280

ип/ через 43 часов. Поздныь интерферон, циркулирующий ъ кровотоке хорзитгризустся предоллитольнси цш«.уля»ляел с постепенна!: о гостем уровня 1-. ЬЬ-120 чссаи /\нх. 3/. Следует отметить,

120 144

Время индукции, ч.

У:;",,?. ,?;,г'трСц11л?':!':о .ч: :."р"рер_но ль органам при чег>лп •: с п - ч*" '1 ° -я; ••пи Сзт'ьли. а- и Ы) ¡1:1 тс;, ,м:.?ор,"'П'" г> .т. , .у; С"-1" , 5- о Г.*ггя/.ф

достотс ..!•> м>»: "1..'1»> у ролей •> •••чн'ч.лишя ,:ктср5>.рояс л о

органах ' ■■тахт ло перорял )'О'; .'¡.сдгнпс Сспраца. и титри '■■¡"■р'л.с .'т:.:;л:-:.i-i-.fi „ I 'г,го:: ч1к; гь ц-„ч.'3': 'л /За' М;1: , я с. Л1?-1|'.;.и" :>■ ч;.г /о;,'и ^Е/и;/, о' 7.> уб часов /160-640 МЕ/мл/, ь 1 ылщгл чесое /1040 ¡й;/мл/-

"л-■"•<"• '.1 .и;;:-. < . 1 г- ■■ '!:. . .. ил ;к7:ь.,-;'. ;; . г

п «очи «мдетелъсгвуст о то», что препарат или продукты его иотайаякзма оасто ьна-одятсд на оргаписпа. За 4 сусо» поело донпп иочешшго Соврец из иргашимз, ¿ы^одктся 97,7£, Из них

ОПЫШВДИЫН ГЛ"И 11гпг;т!лп1!л;1гсг гг{ .у,«™..^ »«..

Оснивши огрылчевпек пршепо'«пг, илдукуороз квтб^усрсз"? по мнимом многих псолодокIVу лен плллесхя разлитие еочтизвкп х'т;— порескт:;в.гости в отлит ¿а лги.^нг"? ль&ого индуктора. Полгогсл введен: с .•шадогичлем") (.рек^и-хО л оазо гкииреоктивпо-ч:- осчд.о-ВОЗДЯЙЧ-ОН отсутствием ао*!Соа'иа«стпи;пг -.151 /рр^ероне. Иглесх^г.

ЧТО рОЗЗ/.Ви^ГС;1 ¿1 ОГГв? Н3 ПУЩ'ОЗ ВВСДСНИС •'■'¡-

дуктора /Тазулахови З.Б.,1Э86/н повторное введение препарата играет роль зонда, выявляющего гипореактивную фазу. Степень вы-рананности гипореактигностн зависит от дозы индуктора, а дли тельностъ феномена определяется типом /видом ипвотных/ и природой индуктора /Ершов Ф.11. и свавт.,1983/.Индукторы интерферона растительного происхождения, отобранные нами, отличается от других индукторов интерферона тем, то в ответ ни их введение интерферон циркулирует в кровотоке относительно дольго. Однако и л случае их прииенения может возникнут енгувцпи когда повторное применение крайне необходимо. Поэтому мы попытались разработать схемы их введению с учетом фазы гипоренктивности.

Паки установлено, что при однократной введении отооранных растительных препаратов вне зависимости от их природы и молекулярной массы максимальные титры интерферона в сыворотке крови животных наолюдаетсп. на Й-и день индукции. Двукратное введение препаратов выявляет развитие гилореэкмшшсти на 3-Й день поела пзрвоИ аппликации. Феномен отмечается в течение последующих 4-х дней, в течение которых повторно вводить аналогичным индуктор нецелесоооразно. При разработке оптимальных схем применения препаратов мы предположили, что преодолеем рзфрактерности организма кояет быть достигнуто сиеной ¡¡иду мороз. При этой лерво-ссепанное значение имеет подбор пар индукторов интерферона чередующихся введении, и этом случае, как показали эксперимента

па обязательно учитывать фаэу гипореактивности для аппликации препаратов. Ваутрибрюсинноо введение в качестве 1-го индуктора Кагоцела, и в качестве 2-го индуктора Рагосина приводит к зыра-езийоп продукции интерферона в ответ на введение зторого ипдук-«сра, дахз з, том случае, когда Рагосип вводили животный, находящийся в фазе гипореьктизиостя по отношении к Кагоцслу. Максимальный е^фект обнаружили при комбинированной введении препаратов относящихся к разный классам соединений. Такая.комбинации бала достигнута при внугрибрюпмнноИ инъекции сначала Рвгосана в через 3 дня двуспирального высокомолекулярного синтетического пэлииуклаотид« - поглгуацилэ. 1'итрм интерферона, полученного г, ч»гул*?йгв хюро',: яиду;сщ!П достигали 8000 МЕ/гл, чк» превиавв'? 51>Л30} «'ви У Я рза, урО-.-еи« про.пукиии !':(ТЗрфуроаи доя одкократ-

- 2.9 -

ром введении Лэгос;!и;'. и £ ¿V, рвяо - максямаяъпу? тптри и(п«р!'С рока в еыворот;;о крови мышей в ответ на одяокрптнуп ипъекют полнгуацила /25С МБ/.чл/. (.нелогичные результата получешч при вкутрибрюкшнои вввде;гаи л гзчествв 1-го индуктора Саврзц, п последующим чср?з ? дни *гед?ннем Гошадл, Перорэльлог. ре «тягано? и подкопное гг^дспсг* 1 лч;:целн глпореоктевпнн по отиомияь» к Соврацу животным приводит к вирзжеппои продукции интерферона. ЧТО монет ; ки„„„л КЛгУкнч - "р""^'":::! ~

к -птср^Оуи/т л иггет пс ззедяние пзргого

и второго индукторов.

Поскольку гппорзактавность в ответ по введение индукторов, использованных в данных экспериментах, развивается на 2-3 дель ц исчезает к 6 дню, то для получения высоких уровней интерферона целесообразно использовать предварительно подобранные парн индукторов чередуя их введение через каждые 3 дпя. Итак, впервые нами показана возможность использования индукторов »¡.тчсй природа, отлвчзюпихся <м лг.пг.чрской структуре для г.ресдс.тп'т-'' состоя:»:« рефрактерное:» срггнрэме к гирз^отке внае(/.',!л;!ояг.

НОС ЧЯрглОЕЭШГ ВС", швзл пи .риторов ССЗ ласт ПОСТОЯННО ГЫПО^О/. уровень ик-ерфгрон»' я кровотоке г. течение, по кряпкай нер« ]!?

Другой вариант многократного вводе кип, розработенпи^! кя'<>., касается иснолмогжпк одного и тога не яндуктерэ с учетом пто* реактчгпости. Показано, что один и тот индуктор можно гго-дить ¿> резо подряд о интервалом 24 часа. При этом рефрактерность не только II й по ксмиорот. копоз ; ос .•■едут::1?'!

донке индукторч, ос ля «тги ос^ствить ?. течет:* .45 ¡"-^

червоь шгьокшш, вызывает стимуляцию продукции интерферона, что вызывается по видимому прайминг - эффектом интерферона, который вырабатывается в ответ на первое введение индукторе /Солотп^* Я.Д..'< лр.,7Г01/.

:.1а'л.:у втории гглтош введением ппл^кторя пепбг.одд.'-О сдс-зазь.шперфвд в 3-4 дня. приходятся ял рсфроктераус !гсо

г.е аддуктор с-эво р-лгео чвод/ть 2 раз? с кптеуволом ?Л ч;>-га я т.1. То коп »¿одсйи« препаратов онла раарсботэпя нами

для Кагоцело и может битг. попользовано з течение 3-х недель. При этом также поддоржизаотся терапевтические уродпк пптзрфчрогга з течение всего времени эксперимента.

Такай образом, разработанные нами схемы позволяют получить

уровень интерферона, циркулирующего в кровотоке, равный тоиу, который отмечается в кровотоке больных при курсовой применении втого бейка.

ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ОРГАНИЗМА.

Одьии из показателен, отражающих состояние иммунитета, то есть, иммунологцческую реактивность организма является функциональная активность иыыуноцитов. Продукция интерферонов иммупоци-тами является в свою очередь отражением их функциональной активности. Для выяснения степени участил различных клеток иммунной системы в продукции интерферона проведено сравнительное изучение способности синтезировать .интерферон в ответ на индукцию ин вит-ро.

Изучение способности иммунокомпетентных клеток продуцировать интерферон в ответ на индукции препаратами Саврац,Гозалидон, Кагоцел и Гоыицел ¿а ¡гИго показало, что в синтезе его принимают участие вез исследова.чные лопульции клеток /лейкоциты крова . человека, лимфоциты селезенки, тимуса и клетки костного иозга мышей/. Максимальные уровни активности интерферона отмечаются при андукцци пптактних гиыфоцитов периферической крови /2000 МЕ/ ил/. Пик продукции интерферона приходится ет 2-3 сутки посте индукции, что, по -видимому, следует отнести за счет активности Т-клеток. В-лимфоциты и гранулоциты, выделенные не пула клеток пе-. ркферической крови синтезируют иаксииуи интерферона /1280 МЕ/мл/ в первые РА чеса после индукции.' В-организма индукция интерферо-| но носит несколько иной характер и зависит от множества факторов^ которые отсутствуют при иидукциа . Поэтому уровень и

динамика синтеза интерферона клетками, выделенными из индуциро: ванного организме может но совпадать с таковыми, выделенными ив иитвктниА животных в индуцированными ¿П \ГЦго . При этом наб-,ведается некоторая избирательность аимфомдных органов - мишеней. Наибольшим уровень интерферона отмечается в сыворотке крови и й кгвтках, гиделвнных из селезенки /^560 МЕ/мл/, наименьший -продуцируется клетками тимуса, что связано, вероятно, не с попу-хлцгиняыи сосгпво:; клеток, входящих в йти органы н ткани, в с

уровне« дифференцировки клеток /в тимусе большое количество Т-

виифоцитов представлено незрелыми клетками/. Сравнительным анализ продукции иптерферопв исследованными растительными индукторами показал, что наибольший интерферониндуцируыщеи активностью обладали Кагопел,Гозалидон /640-2560 МЕ/мл/. Гомнцел стимулпро вол невысокие уровни интерферона при всех способах введения. Наибольшие титры интерферона в ответ ив индукцию Кагоцелом и

¡'ПЧЯТШ ЯПТТП11 ПТЧН11П ТТТГП Ъ 11 1Г лт ».йот »ПРИЯПГП 1ГПЧЛП Т* ГН 1ГЯ1Я111П1 т

Следует отмстить, что Кагоцел индуцирует достаточно высокие уровни интерферона во всех исследованных типах клеток в ответ на все способы введения вещества. Поэтому он может быль введён о одинаковым успехом всеми способами, но наиболее оптимальный путь введения препарата внутримышечный и подкожный. Клетки селезенки и. костного мозга - основные продуценты интерферона в ответ на этот индуктор синтезируют при этих способах наибольшее количество интерферона. Гозалидоп предпочтительно вводить вяу-трт'Ор!'Ип:ч 1К1 и пврорально. При подкожном и внутримышечном вледп-пии птпго препарата енленоциты и клетки костного мозга синтезируют ».ичпьшча количества интерферона.'

Чг.«о-ипн отвечают слабо»: продукцией интерферона в ответ по Кпготгл и Гозолкдон. Наоборот, в ответ на Саврац средние уровня интерферона продуцируются как в клетках костного мозга и спле-н;зц:'т;]х., ток н в тимоцнтах. Урогень днфферепц::ровки клеток, по видимому че играет в случае Спврэца существенного значения, в то время кок при индукции Кагоцелом и Гозалидоном синтез интерферон? г" --«т пслчствлптся только зрелими Т-клетнвми. Ииэкяе я ер«- л'.*» урчвт» :,.йгер,иероно «ччгсезпруюг идоуноцсты ь ответ н? Гомнцел. Синтез интерферона синтезируют иммуноциты в ответ на Гомицел. Синтез интерферона при введении препаратов Саврац и Гомнцел различными способами осуществляется всеми исследованными почулшишмг. клеток.

В чтлгчии от интерферона, которш», кок правило, вводится в орган • ' в больших дозах, к.ммвлпмюи гуморальный иммунитет, и иду к1 Н'Ы впзивоит стснулпш'л) Физиологических доз иктерферсия, которые кок оыло показано ранее, стимулируют гуморальный иммунитет, усмливап антитслообраэование. Из'эстно также, что многие индукторы интерферона стимулируют клеточный иммунитет, повышая Д/к- активность и усиливая роль эффкторных элементов, отвеча-

ющих 8а цитотокеические реакции. Это и делает перспективный при-иенение индукторов при регуляции как клеточного, так и гуморального иммунитета /Ершов Ф.И. и др.,1989/.

Исследование влияния растительных индукторов интерферона /Кагоцвл,Рагосин/ на антителогенез при первичной иммунной ответе па тимус-зависимый антиген оарана /Э.Б./выявило стимуляцию внтителообразоввния.

Рагосин вводили перорально в дозах 200,400 и 600 мг/кг в различные сроки по отношению к аятигену. Результаты наследований показали, что введение Рагосина в дозах 8Ш0 и 600 мг/кг одновременно с иммунизацией приводило к симуляции иммунного от-виа на Ь.Б. При атом число АОК увеличивалось на 42-59% по сравнению с контролем. В доэе 400 мг/кг количество АОК не претерпевало существенных изменении.

Введение препарата Рагосина в вышеуказанных дозах.за 48 часов до иммунизации, также оказывало стимулирующее влияние на количество АОК. Такин образом Рагосин оказывал-стимулирующий, аффект на гуморальный иммунитет при одновременном и профилактически введении.

В отличие от Рагосина, Кагоцел обладает подобный эффектом при введении по лечебное схеие. Индукция препарата мышам линии СВА через 24 часа после иммунизации Б.Б. оказывает имиуномодули-рующее влияние на Од- М - антителогенез, направленность которого вависит от дозы введенного препарата. Стимулирующии аффект Кагоцела по отношению к контролю был наиболее выражен при дозе | препарата 5 мг/кг. При введении высоких доз препарата /50 мг/кг, число АОК изменяется «значительно и сохраняется па уровне 60-контроля. В результате этих исследований было показано, что перпараты Кагоцел н Рагосин обладают иммуностимулирующим действием первичного иммунологического ответа.

В следующей серии экспериментов проводили сравнительное научение влияния Кагоцела и известных лекарственных препаратов Ларифан и Ремантадин на иммунный ответ мышей, заракешшх гриппом1 /штвми В -94/. Исследовала уровень специфических АОК, несущих антитела к гриппу. Поскольку индуктор интерфероне Ларифан явля-отоя профилактический средством, его вводили 8а 24 часа до ' варакения мышей вирусом гриппа /табл.2/. Ларифан применяли в

"сочетании с ремантадином, которыР вводили по лечебной схеме. В отличие от этой схемы, Кэгоцел вводили как профилактически /за 24 часа/, так и по лечсбноГ схеме /через 24 часа после заражения^ Полученные результаты показали, что только■ Кэгоцел, введенный по лечебной схема достоверно увеличивает число специфических АОК, что открывает перспективу его клинического применения при гриппе в качестве терапевтического средства /табл.2/. Твблицэ 2 Сравнительное изучений »»..о....- аы оолвпкйн?««? »л'Н з сег.ааанкз с ияплп?»!"«™ иттлу:гг:ра:,!1! интерферона при грип-________позно^ инфекции.______ _

Индукторы I Число-АОК I Индекс стиму- I Р

интерферона 1 на 10 кл. I ляции /И.С./ 1

Ремантадин 11078+ 57 I 1,2 I 0,05 I

/перорально/ ~ |

Лэркфэн I 1108,7+I 1,4 0,05 ( /внутрибртинно/1

~ ~Кзгоцёл/-34/1~99Э+ 230 ~Г ~ 1,2 Г " ~ 0,05

/перорально/

1 134е,7-1-10б",1| 1,7 ( 0,05

/перорэлпо/

Контроль/^/ I 784,0+57 I - Г ~

«злее изучали иммуиемодуяирумцво двИдтиИо растительных индукторов интерферона на вакцинальный внтирабичеспиА иммунитет. Полученные результаты показывают, что при введении препаратов Рагосин и Кагоцел з отдельности /через "4 часа после заражения штеР. вирусом уличного Збвенства наблидается 17- и. 24>. зоапты .тавотим к/с^ометстБенно/, которые являются-не достоверными/Р? 0,5/, При комбинированном введении Кагоцела с вакциной процент зэщиты повивается до 41,5% /Р <0,01/, а в группах леченных препаратом Рагосин в комбинации с рзбичсскоГ вакциной 34,5/« что выявила достогерность на уровне 1-'<0,05. Это свидетельствует, что комбг.:.-.рсваниоп введение растительных индукторов интерферона с ВЗКЦИИ01-. приводит л нмыуноадъшэнтноыу эффекта, что выражается в ус1!Лпш;и шхунного ответа. '

ШЧЯГ;ВОВI!РУСНЛЯ АКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНЫХ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА ПРИ БКСПЕРИМЕН'ШЬНЬПС ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ В КУЛЬТУРЕ КЖЮК И В ОРГАНИЗМЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ХКВОТНЫХ.

изучение противовирусной активности растительны;: индукторов интерферона 1п (/¡Ьонроводкл!!'.в культуре клеток Ь-929 против вирусе /ИХ/ енцсфэлоинкзрдкталядпе^/ итак:; "Колумбия"/

в присутствии и без ДЭАЗ-декстрана. Было установлено, что Рагозин при контакте с клетками беа'ДЭАЬ-декстранв, не проявлял противовирусном активности при всех использованных дозах. Б присутствии ДЗАЗ-декстраг.а в соотнешении 1:1 к до'зе препарата отмечалась выраженная противовирусная активность препарата при использовании его в концентрации 31 мкг/нл н выше. Напротив, Кагоцел, Саврац и Таннин проявляю выраженную противовирусную активность при всех использованных дозах как в присутствии ДЭАЭ-дексграна, так ц без него. Вырааенный противовирусный аффект Рагосана при era применении с ДЬАВ-декстраном объясняется, вероятно тем, что подилатиов изменяет конуюрмацшо плохораствори-мого препарата, благодаря чему он приобретает способность соединяться с рецепторами клетки, ответственными за противовирусную резистентность. Выло исследовано также влияние растительных ин-дуктороф интерферона на продукцию вируса гепатита А в культуре клеток f&fiK-4. Характерный особенность») размнокения вируса гепатита А /ЬГА/ в культурах FRkK-4 является отсутствие литичес-кого процесса и длительной инкубациошшй период /28 дней/.

Полученные результаты показывают, что препараты Гоыицел а Саврац в концентрации 25 мкг/мл с ДБАЭ-декстраном в соотношении 1:2 /соответственно/, приблизительно одинаково подавляют размножение вируса в инфицированных культурах /на 27,5 и 26,1%, соответственно/. В меньшее степени подавлял продукцию вируса препарат Кагоцел /22,W а только на 7,5 - Рагосин,

Защитное действие растительных препаратов в организме экспериментальных животных изучали на модели экспериментальных ин-фекци. , воспроизводимых посредством заражения белых мышей вирусом гриппа /штамм k/klckl /68/H3//¿ u R -94/, вирусом EMC, вирусом клещевого энцефалита /штамм "Софьип/, вирусом оеиенства /та /штамм "Ня" м вирусом вепатита мышеВ/игамм "Ыищерина"/«

Научение противовирусной активности Кагоцела при ШС у белых мыше>. свидетельствует,что наилучеше результаты получаются прв ькстренной профилактике при введении препарата saif 68,0J&/ и через i часа пойле заражений вирусом /62,7?у. £ то яв время елодует отметить, что не только профилактическое /за 24 часа/ введение Кагоцелв защицает Ь6/Ь кивоишх, ао и лечебное его применении /через 21 часа после заражения оказалось эффективным / 49*/.

Рагосин также обеспечивал достаточно высокий уровень зэщи-при

ты ниВотных от ЕНС как профилактическая - за 4 и 24 часа до заражения /67 и 50%, соответственно/, так и при лечебном - через 4 я 24 часа после заражении /33 и 37соответственно/ схемах введения вещества. Однако, уровень защиты во всех случаях был несколько ниже, чем это отмечалось при применении Кагоцелв» TSMHVH f™1? ппп*и»тшп»пипи яктпкнпстыо н отно—

зепяк V't'C. Оя внзйгэл звтату ^«отчм* я слу-

чае профилактического введения за 4 и 24 часе до заражения. Уровень защиты составлял 30 и 37$, соответственно. При введения его с терапевтическое целью / через 4 и 24 часа после заражения/ наблюдали недостоверную защиту/ табл.3/.

Сравнительное изучение Кагоцела и Рагосина при гриппозной инфекции /k/A.ic.hi /68/HgVg/, выявило выр&женныи профилактически!: эффект обоих индукторов. Так* введенные 88 24 часа до заражения Кагоцел и Рагосин обеспечивали защиту 50 и 40% мышеЕ, чю соихвгзотвовало максимальным штрам интерферона, индуцированного ими у животных к моменту заражения. Достоверная защита мышеи отмечалась при внутрибркшняом введении Кагоцела за 4 ча-оо до заражения или через 24 часа после заражения вирусом гриппа /45^Ь/.

Достаточная высокая защита мышеи /40 и 35%/ отмечается при виутрибргаинным введении Рагосина за 24 и 4 часов до заражения гриппом. Снижение защиты животных /20%/ наблюдается при введе-нак через 4 пасе после заражении вирусов гриппе и при введении препарата через 24 часа после заражения защитны* эффект досто+е-точно высок и составляет 40%.

Таким образом^ при внутрибрюшинном введения обоих препаратов отмечается как профилактический, так и лечебный эффект в отношении вируса гриппе.

Иы предположили, что еще более выраженное действие будут оказывать препараты при интраназальном и пероральнои способах их применения. Ъто было подтверждено в экспериментах, посвященных определению терапевтического эффекте Квгоцела от дозы и опое соба его вводения. при гриппозной инфекции /штамм R -94/. Установлено, что при интраназальном способе введении Кагоцела наибол лее высокий защитный эффект наблюдается через 4 часа после аара-жения в дозе 10 мг/кг веса /65% защиты/. С увеличением до^ы

Таблица S.

Противовирусная активнооть препаратов Кагоцела,Рагосина и ТаннинаI при 8{№периментальной инфекции, обусловленной анцефалоииокарднтои иыпей /EUC, штамм "Колумбия"/.

Индукторы" Условия экс -1 Защита, 1 с.п.ж. Р

интерферона ■■ь перимента 1 в 1 1

-24 1. ... 56,0 .1 9,9 1 <0,001

' 0 1 -.. 1 - 4 I 66,0 1 8,6 1 -СО,001

К А Г 0.ЦК 11. г ,- t 4 1 ,ба,7 i 8,0 t <o,oui

-гг. -jj.fi 1 •• + ¿Я. I. ,48,0 1 8,7 1 .¿0,001

. 1. .. ...-.34" 1 ч 60,0 1 8,8 1 <0,001

1 1 i?7,0 1 7,8 1 <0,001

Р А Г.О С И. Н ■», '4 • Г 33,0 1 9,1 1 <0,01

. '.-" -у":; - , г > 84 ,'„'.' I' 37,0 1 8,3 1 <0,01

,. ~ ■ Г.;;' , , .. г; J; -г т . = ,-i ..£0,0 1 8,1 I <0,01 .

" S iiO;-....-'.:'- :'Г 1 - - » ..4 -.-: 1 37,0 1 in, а I <0,01 .

I 'А 11 Н И Н . 1 V- 4 -.. . 1 17,0 1 9,9 1 >0,05

' п:;:.-.-;,--.-: KV: 1 ♦ 24 1 - 20,0 1 9,9 1 >0,05

Контроль. \ •„,; .- i . - I 7,8 I

Прииечание; На .каждую »очку заражения брали по 80 иышеЙ.

препаротадо 50 иг/кг веса эффективность индуктора снижается до

40$. Еще оолее зффективнии, 'чей интраназальное оказалось перо-ральное .применении, Кагоцела череа 4 часа после заражения в дозе 10 иг/кг веса. Защита достигала 75$. Доствочно высокий защитный аффект наблюдался через 4 и 24 часа после заражения иышей в до- > «в 50 иг/кг веса /45 и 50$, соответственно/. I

. л .Анали8ируя, полученные данные, можно отметить, что при грип-| . познош инфекции.высо кип защитный аффект наблюдается при всех «хамах введения'Кагоцела и Рагооина. Следует подчеркнуть, что . наиболее высокикващитный аффект достигается при пероральном способе введения Кагоцела по лечебной схеме,,на основании чего препарат "можно досс'ыатривать как перспективное средство при гриппозной 'инфекции ц OPS.

В меньшей степени растительные препараты аффективны при клещевом энцефалите /доза вируса - IS ^ЛДзд/. Клинически достоверный защитник эффект наблюдается при внутрибрюшинном введении Рагосина по профилактической - /за 24 й 4 часа до заражения/ а лечебной - через 24 часа после заражения животных-схемам . Защита животных достигала соответственно - 21{26,7; я 23, Кагоцел проявлял проявлял достовернув защиту zzzz np¡¿

к-иялви'».» jjptííeüáio по лечебное сХгцц - червя ¿4 часа после зв-рчжения. Сззрац вы&нсал достоверную защиту при введепии его только за 24 часа до заражения и через 4 часа после заражения 21% и 23,¿^соответственно/. Наименьшим защитным эффектом в отношении этой инфекции обладал Таннин. Он выявил-достоверную аациту лишь при введении за 24 часе до заражения /22$, Р <0,05? Низким защитный аффект растительных препаратов при клещевой энцефалите может быть частично объяснен их фармакокинетикой. Вое они слабо проникают через гематоэнцефэлический барьер и об-наурживаются в мозге в низких концентрациях и стимулируют образование низких уровнен интерферона в мозге.

Ранее было отмечено, что при пероральном пути введения Сэв-рэцэ, Кагоцело ц Рагосина усиленная продукция интерферона происходит в кишечнике, животных. Кроме того, растительные препараты выявили противовирусную активность ин витро против гепатита А. Все это позволяет предположить клиническую перспективность дан- " ных препаратов при аитерояирусных инфекциях, что подтвердилось при исследовании противовирусной активности растительных индукторов но модели гепатита мышей /штамм "Мищерина"/. Препараты вводили перорэльно по профилактической схеме за .24 и 4 часа до и черев 24 часа после внутрибрюшинного заражения вирусои/б^' , ДДзд. Препараты обладали профилактическим И лечебным эффектом* При этом Кагоцол и Саврац обладали более■выраженным профилакти-, чссшш эффектом, в то время как Рагосин обладал наибольшим лечебным эффектом. При пероральном введении шышэм через 24 часа после заражения вирусом гепатита Рагоепн защищал 65^ животных.

Полученные результаты предпологвют возможность клинического применения Рагосина при гепатите и эншеровирусных инфекциях. Наши результаты были подтверждены данными других-авторов /Ряб-ченко Ь.П. и соавт.,1986/. Ими было исследовано действие Paro-

оиаа в условиях патологии на модели острого и хронического гепа тате, вызванного введением CCI^. Эти авторы показали что Раго-син при введении в дозах вызывающих индукции высоких титров ин терферона /12 мг/кг веса/ одновременно с не потенцировало развитие острого и хронического гепатита.

Ыы предположили, что при гепатите защитным аффект в большое степени определяется уровнем накопления интерферона в кишечнике. В то не время, как нами было установлено, что интерферон быстро появляясь в кишечнике в ответ на. индукции, также быстро исчезает, Бтр можеа быть результатом его инактивации ферментами протеолиза, в иаобилии присутствующими в кишечнике. Введение индукторов интерферона с ингибитором протеолиза контрикалом могло бы, по нашим предположением, защитить вновь образующийся интерферон от инактивации, в результате чего противовирусная резистентность также могла увеличиться.

Подобная возможность увеличения противовирусного аффекта растительных соединений при комбинации их с контрикалом, впервые была продемонстрировав^ нами на примере Кагоцела и Рагооина. Одномоментное введениеживотным Кагоцела в сочетании с 30 ООО ед/кг контрикам за ¿4 часа до заражения увеличивает уровень эощиты хивотных /60^. в опыте по сравнении с 40JS в контроле индуктора, введшюро i|0 тйЬ же схеме/. Низкомолекулярнт индуктор интерферона Рагосин индицирует еще более высоки.*! аащитны! аффект при введении его г комбинации с контрикалои, Противовирусный аффект при введении препарата по лечебно«! охеие /через чао а поела »аражанш /достигает 75$ при 65J6 защиты обусловленной в контроле индуктором.

Таким образом, можно отметите, что растительные препараты обладали выраженном противовирусным аффектом при всех иеследо -ванных иодеДях вкспррвментвльвых инфекци*. Наименее выражении» бффехт отмечался'при клетевом.анцефолите. Наибольшая противови-руснвя активность Кагоцела наблидалао при его применении при гриппозной инфекции, Рагооина при гепатита мышеГч Оба препарата обладали лечебниц аффектом при данных инфекциях, всвяаи с чей Кагоцеа можно рекомендовать для лечения гриппа и ОРЗ, а Рагосин для лечения витеровирусных заболевание и гепатита.

ШИХЛАМИДШ НАЯ АКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНЫХ

ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА.

л.игл.г?"?" нвлайхс" р»спи«4. гргг?!»"м»ш заболеваниями вызывай развитие восходящих и д«соаиз^^янпых тельных процессов. Они играют значительную роль в патолог:; ременностн и родов, влияют на жизнеспособность плода, вызывают л поражения.органов дыхания, сустав и т.д.

Известно, что эффективность клинического лечения и его результаты зависят от уровня иммунных реакций организме хозяина при хлонидноза, что открывает перспективу применения имиуномо-лулнрумик средств при лечении этих инфекции /Клежков Ф.А, и соовт.,Ш$8/.

Ранее нами било установлено, что растительные препараты эйлпдачт достаточно высокой тг.ерферониндуцируюдеи и иммуномо-дулнру.о'цес активностью. Основываясь но этих фактах' нами изучено влияние растительных шиу кторов интерферона Гозалкдои, Саврац и И.чгоцол я» репродукцию С. I гяскотаП & в организме ныиеи лл-шш ''ИЛ.

Дтг;;лпз нодучечных результатов показывает, что индуцирований' У-г-'^п^аном /в дозе 10 иг/кг веса/ яз протяжении первых С дне. < кал»« постоянно высоте? уровень интерферона в организме мыше!< обусловливает резко»! угнетение реплик-чщш хлоккдяЙ как но первом, так и не последующих циклах рпвмнонения возбудителя, о чем свидетельствовали цитоскопия и результаты титро-ваннп ■'я^гкц'.юниости микроорганизма. Из данных литературы из-зестяо, что 0. ЬгискогчШ( ¡'окопливается в 'наибольших количествах в легких и лимфоузлзх ;:швотннх, что обусловлено размножай-.'ем возбудителя в этих органах /Терсаах И.И.,1979,1984; Шаткий Л.А.,1983/. Поэтому, исследование влияния препаратов на размножение С. 1га.скота.11ь ¡.¡и проводили по накоплении ъозбу-дителя в этях оргэнах по сравнению с контролем, который выражали в Индексах эффективности /И.У./ /см,материалы и методы/. Ин-деке эффективности Гозвлидона в легких в течение всего срока наблюдения был высоким, составляя на 4 и 9 сутки 4,1 и 3,2; в лимфоузлах несколько нр.яе - Ь,2 и 2,3, соответственно.

Определение антигенных типов нндуцировзшшх Гозэлидоном интерфсромов у мыиеП на бо:-е хлапидийноз кнфекцни показало, что

ояи существенно отличаются от контроля. Так, в сыворотке определял«« только Ы- - интерферон, тогда как в контрольной группе в ' в равных количествах тестировался^ - и jf - интерфероны. В

лимфоузлах d - интерферон составлял 87,5$, j" - l'¿t5%, а в лег-¡ них U - интерферон составлял 93,75$,- f1 - интерферон - 6,25$.

Результаты определения антигенных типов интерферона позволяют заключить, что основную роль в подавлении репликации возбудителя играет сС - интерферон. Пролонгированный характер действия однократного введения Гоаалидона обусловлен, очевидно, наличием иммунного ртвета.

Саврац окааывал выраженное подавление размножения хламидиИ на более повДных сроках инфекции. При этом наиболее значительная ингибиция микроорганизма также отмечена в легких, где индекс эффективности составил 4,1. Аналиа полученных данных показывает, что на ранне.м этапе инфекции отмечается невысокая ингабиция I-цикла рэвмнокения возбудителя, которая сопровождается отсутствие) ем или низкими уровнями накопления d. - интерферона в паренхиматозных органвх, где реплицируются хлаыидии. На поздных этапах инфекции отмечается продукция высоких уровней иммунного интерферона как в легких, так и в лимфатических узлах животных, леченных Саврацем, что приводит к существенному подавлению разиножг-вия хламидиВ. В атом случае возможно как непосредственное влия-вие ^ - интерферона на микроорганизм, тек иммуномодулирующиИ аффект а - интерферона и самого препарата Саврац.

Однократное введение Кагоцела оказывает влияние на накопление хлаьидий в организме мышей на ранных этапах инфекции. В иа»-ках опечатках келточных мешков куриных вибрионов легких и лнифо-увлов, выделенных U8 мышей через 4 дня после заражения их хлами«! днями, цитоскопически не регистрировалось размнонение макроорган» HUBU8. При атом индекс эффективности был равен: в лимоуалах -1,0; в в легких - 2,0.

Применение Кагоцела по лечебной схеме /через 24 часа после заражении/ выявило высокую эффективность препарата. На погд-ных сроках хламиди^ноЯ инфекции Кагоцел оказался в 2,0-2,2 pase аффективнее чем тетрациклин гидрохлорид, который в настоящее время считаете» базовым препаратом при лечении хиамидиозов у люде!-. АвтихлаиидиЯное действие Кагоцела обусловлено, вероятно, величением уровня индукции интерферона и иммуномодулирующими /

свогствами этого индуктора.

Было продемонстрировано, комбинированное применение растительных индукторов е антибиотиками увеличивает антимикробную активность индукторов. При сочетанном применении Гозалидояо а тетрациклина гидрохлоридэ на фоне высокого уровня интерферона, !

UJÍ nv*íTmn»auiir»Pí5 Рпвя ffMjmoyif ■ Kt'OBIÍ Tf

в- т»«гея?»» всего сроке нвблвдеяяя, • гтжггетто еузс^сгпсе угзггг-' ние размнойвня хламидий как ранных, так и на поздних этапвх инфекции. Выраженная ингибиция хламидий в тканях легких в течение всего срока наблюдения обусловлена несколькими факторами: 1 а/ высоким уровнем продукции интерфероне в сыврротке и легких, > б/изменением его антигенного типа, индуцируемым введением препа-рота, и в/ сильной васкуляризациеь.тканей легких, что объясни- ¡ ет более выраженную ннгибицию возбудителя в легких, чем в лим ¡ фэтических узлах. Установлена прямая корреляция мезду уровнем накопления Ju~ интерферона и ингибированвем размножения хла-мидиП.

Исследование мазков опечвтков паренхиматозных органов пря комбинированном применении Савраца и тетрациклина гидрохлорида выявило огобую эффективность на раннем этапе инфекции, что заключилась в уменьшении количества инфекционного материала, более выраженного в легких по сравнению с контрольной/только индуктор/ группо» животных.

Значительное повыиепие уровня интерферона з первые трое оуток при комбинированном применении Кагоцелз с тетрациклином гидрохлоридом обеспечивало ещее существенное подавление репликации хлаиидцй. Высокие уровни интерферона в органах удерживались и на поздних сроках инфекции. Это, вероятно окавывало решающее действии нв усиление антихламадиНи'ого эффекта препарате при комбинированном применении с тетрациклином. При этом отмечено синергидное действие препаратов в исследуемых паренхиматозных органах. Так, ИЭ в лифатических узлах достиг 3,2; а в легких- 5,0 т.е. оказался в 3,¿ и ¿,5 pasa, соответственно выше,чем при лечении только индуктором.'.

Анализ полученных результатов показывает, что отобранные растительные индукторы интерферона обладают достаточно высокой антихлаиидиИной активностью в организме экспериментальных ки-вотных. Сравнительное рассмотрение знтихламадийно£ активности

этих соединении позволило расположить их по величине активности в ряд: Саврац > Гозалидон > Кагоцел.

Такии образом, нами экспериментально установлено, что исследованные препараты обладают достаточно высоко!; противохлами-дшкой активностью. Сочетанное применение растительных индукторов свнтибиотиками вызывает адитивны;!, а для Кагоцела -синергид-ныг аффект. Ьто открывает широкие перспективы применения растительных индукторов интерферона при патогенетической терапии хламидниных янфекщп:.

АНТИШОРОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНЫХ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА В.СИСТЕМЕ ЙН ВИТРО И ИН ВИВО.

Достаточно детально изучено торможение пролиферации злокачественных клеток in ¿Иго/¿t JlnJezbon. '1.,1Э80/ «л« задержку роста опухолес / вгеььг "У. cl. at .,1978/,КаракуЛов Р.К. а соавт. 1984/ по действием интерферона н его индукторов.

Нами изучено антипролафератгвиое действие растительных индукторов интерферона Кагоцел, Гозалидон и интерферонов d - я

j4- но рост опухолевых клегок ' Яaji . Полученные результаты свидетельствуют, что исследованные индукторы интерферона, также как интерферона обладают вырааенно!; антнпролкфсратнвной активностью. При этом наблюдается дозовая зависимость. Большие дозы препаратов существенно подавляют пролиферацию опухолевых клеток. Малые дозы проявляют.нгзкуй актавность/тобл.4/.

Результаты исследований антнконцерогенной активности растительных, препаратов Кагоцел, Саврац, Рагосин л Гозалидон in ifit/o при раке легких, вызванным уретаноц показывают, что при введений отобранных препаратов среднее чнвло аденом в легких на одно животное уменьшалось ив 44-58Все испытанные препараты оквзались эффективны. Наиболее эффективными оказались Гозалидон и Саврац. Надо отметить, что у контрольных животных, получивших уретан, частота возникновения аденом составила 100$ в то время, как у иышей, получивших перорзльно Саврац, она рав-и лась 66,0^, т.е. у 14д кввотных аденомы в легких вообще не появились.

Таким образом, под воздействием изученных растительных индукторов интерферона зафиксирован факт уменьшении частоты ада-«омотозных раьрвстанаИ впителгя легких, что монет свидетель«-

вовзть об знтпкоицерогенпон действ:;? указанных препаратов.

ТебЛЕЦэ 4.

Сравнительное изучение антипролйферэтивного дегстаия препаратов :;н1ерферона :« растительных индукторов по включении Зн-тяыидянз в ЛКК-клеток.

моан . I- день 1 дал 1 7-днеЯ

Препарата мкг/ил Синтез 1 Сзнтез 1 Синтез

I ДНК,* 1 ДНК,56 1 ДНК,г,

ЮСО 1 12,4 I 2Ь,7 1 39,8

Гозолидон 400 I 28,5 1 23,1 1 9,7

100 1 43,0 1 27,6 I 20,9

1000 1 Ь7,0 1 9,9 1 2'*,0

Кагоцел 400 Ь?,0 1 16,2 1 12,0

100 1 69,0 ! 49,4 1 '¿5,0

1000 1 гб,з ! 31,2 ! 38 5

С и вряц ■100 ! Ь4,7 . 1 35,5 1 313,3

100 1 19,4 1 48,3 I 49,3

'Л- интерферон ¿00 1 8,1 1 7,3 ! э3,0

¿¡0, ( £3,1 1 ¿5,4 » 74,0

с 1 4Ь,1 1 зо,а 1 86,0

150 33,0 1 В:0 ! 01,0

¿- гнтер-^ран 40 I 1 16,0 1 68,0

10 1 96,0 1 54,0 I 77,6 .

Контроль г - 1 100,0 • I 100,0 1 100.0

клеткч

Приисчсиие: Значения в процечгех. Ьычко.'шлз среднее арифметические ко трек повторов.

Заключение--

Исследованные растительные зн!укторы интерферона обновятся к числу новых оригинальных налотоксячных средств, обладающих высокой чнтерферониндуцнрующе; активностью.

&шнческ8Л структуре препаратов влияет не проявление ими оио лога ческах свойств / интерфероногенноить, антивирусную актиц-иоить, иммуноиодуларущае а^екты/. Целбнаирвядеянке структур-выв модификации производных госсипола вызывают жвмевеккя в спо~, cotíñvíCia аналоги* сишулароьать образоьаниб интерферона различными пипуляцшши пммуноцатиь, иледстьяеи чего ялляетсп еги накопление ь разных локальных органах.

Характерной шс способностью является! продукция интерфероиа разшшн популяциями клеток иммунной системы, что обусловливает длительную циркуляцию /до 7 с^ток/ пнгерферона в кровотоке.Большим преимуществом препаратов является способность их индуцировать лысокяе уровни интерферона при разных способах введения, включая пероральлык и ректальный ? что особенно ценно в клинических условиях,

Установлена корреляция ыеаду уровней накопления иятерфвро-иа в то» ала вяов ткани и антимикробный действие;/ разных про-Iвводных, в свяви о чей разработаны рекомендация для дальнейшего клинического использования отобранных препаратов.

ВЫВОДЫ

1. С помощью разработанного вами простого элективного и экономичного михрометодв проведен целенаправленны!? скрининг новых

жндукторов интерферона среди свыле 200 производных полифенолов, вльдегидофенолов, альдегидопафтолов, природных полимеров, а также визкомолекулярных соединении, выделенных на высших растения. Отобран ряд оригинальных клинически перспективных препаратов / Саврац, »Сагоцвя,Гозалидо![, Рагосзн, Таинин а 63-83/, обладающих высоким хамиотервлевтическим индексом.

2,Методом химической модификации установлено усиливавшее влияние активных радикалов - CHg-, NHg и -ОН групп на биологическу» j активность растительных соединения, на основании чего синтезированы новые индукторы интерферона с заранее веданными сьоРствами.! 8,Исилодоваяа зависиыосхь иптерферопиндуцнрущеи и протамовярус-«о* активности нпдукторов интердерона растительного проясхожде- ¡ ■вя от их химической суруигури я показано, что по степени витиь-иоста ом мэг}Т быть расположены в следом« ряд: производные поаяшеиомл > про*»ьодяыв иафтальдегидо» > производные бензэль-

дегидов» Величине активности зависит от природ« заместителей по альдегидным группам.

4. Разраоотан способ синтеза водорастворимых ферм на полимерной основе низкомолекулярных нерастворимых индукторов интерферона растительного происхождения. Покэзвнв яовуоятпгп изменеяи?? способности производных пп«р<г£:ыл .¿оетеяейий и иняуяпрова» синтезе "р-;;ьаи" шт"Я03днй"й»т?ср3.срон пп виво методом модификации структуры нпзкоыолекулярных растительных соединении на полимерной основе,

5. Установлено, что отобранные растительные веществе обладают высоко? шиерферониндуцирующеи активностью в культуре клеток различного происхождения, в том числе и в клетках иммунокомпе-тентных оргвнов. Исследован характер продукции интерферона в организме експериментв яьннх: животных при различных путях введения препаратов, а также распределения андогенного интерферона

по органом в зависимости от природы индуктора и способа его введения в эффективной дозе.

6. Выявлено возможность получения высокоактивного андогенного интерферона ин виво в комбинации: индуктор-индуктор и индуктор-биопрепергтн /контриквл/ в зависимости от пути введения препаратов. Разработаны схемы многократного использования растительных индукторов с учетом фазы гипорсактивпости, позволявшие получить длительную циркуляцию интерферона /до 21 дней/ в терапевтических титрах, а также оптиизяыше варианты комбинированного применения индукторов интерферона.

7.Впервые показана иммуномодулирующвя активность растительных индукторов интерферона при сочетанием их применения с противовирусными вакцинами. Показана высокая эффективность комбинации препаратов с вакциной при лечении экспериментальных инфекциС. в.Сиитеаировоны и 3Н-радиоэктивные меченые аналоги рвети' тельных индукторов интерферона'. Изучена фэрмакокинетика отобранных индукторов интерферона. Показано, что Оиодоступность аэви-сит от чути введения. Установлена прямая .корреляция распределения препаратов и локализации интерферона по орг9«ни.

9.Установлен широкий спектр противовирусной активности растительных индуктрров интерферона. Показано, что вти препараты проявляют нриоолее внраянный терапевтически!! 8ффект при вкспери-ментальнон гриппе, гепатита мииаг, гепатита Л человека,бепнет-

ье, клещевой энцефалите, С помощью математического моделирования реэраоотвн спосоо усиления защитного аффекта при их комоини роь8нном применении. При етом защитный вффек* растительных индукторов интерферона достигает до 75-80$. f Ю.Впервыа обнорухенв высокая антихлвмидигаая активность растительных индукторов интерферона. Показано, что отобранные препараты стимулируя синтез позднего интерферона у мышеи обеспечивает существеннре подавление репликации микроорганизма и проявляют пролонгированный антихламидииныв вффект, При сочетании препаратов и тетрациклином усиливается их защитное действии на поздних сроквх развития инфекции.

II. Разработаны рекомендации для дальнейшего клинического ис пользования новых отечественных высокоактивных оригинальных индукторов интерферона: ,,Свврац"-рекомендувтся при хламидийных инфекциях, "Кагоцел"- при 0?S и гринпе, "Рагосив" - при гепатита А, Предло евны лекарственные формы втих првпаратов.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации.

I .Твзулахова Б.Б.,СаЙиткулов A.M.-Преодоление гипореактивносга инду-:ции интерферона - В сб.:"Индукторы интерферона",М., 1982,с. 25-30,

2.Носик Н.Н.Дазулахова 8.Б.,Сайиткулов A.M. -Закономерности про дукции интерферона при использовании индукторов рваной природы и рваных схем их применения.- В сб.:"Индукторы интерферона",Ы., 1982,с.19-25.

8.Носик Н.Н.,Тазулзхова Б,Б.,СаРиткулов A.M.,Ершов Ф.И. - Особен ности продукции интерфероне при разных схемах применении индукто ров - Вопр.вирусол.,1982,б,с.92-95.

ф.Тааулехоэа 0.Б.,Сайиткулов A.M.,Ершов Ф.И.-- Возможности преодоления гипореактивности к индукции интерферона - Вопр.вирусол., 1983,0.354-336.

6.Ершов Ф.И.,Сайиткулов A.M. "Микрометод для изучения индукторо* интерферона ин витро"» Вопр, вирусол.,1984,6,с.756-757. -б.СаРиткулов A.U.,Твзулахова Э.Б.,Сврыисаков A.A.,Ершов Ф.И.-Биологическая характеристика новых индукторов интерферона, cos-данных не основе госсипола - Вопр.вирусов.,1084,6,с,749-752.

7,СеРнткулов А,у. "Интерферониндуцирумзие и противовирусные cboi

стяп нового природного индуктора шнерферона - Таш-8 - В сб.: "Мол.биол.вирусов гриппе и гепатита",М.,1Г-часть", 1985,с. 5—II.

8.Со( и'-кулов Л J.I.,Чиг.ов 11.11. Лурносов Е.В.,Ершов Ф.к. "Чатема-•плтскоз планариаояво эксперимента для оцепки сочетанного деРст-> 1Т.'< »"Mi:-. пв.;укаороп интерферона - Вопр.вирусол., 1985,5,с.617-01:\

9.V"* ФЛ'Ь.Сайгттгулпг А.'.'.,Тэ?улахово Э.Б.,Са*нков А.С, -"Но-

'••>' '"п t'HHip-icpoTS жтквипг при цррорэльном взе.»ешщ -Вон р. Вир,у со л,, 1У66,8, с «ЬЬ5-Я88,

Iö.Cal'r.TicviiOB A.u.-Гупомп« «=.- Г^и^Ытн

- «««у»»«™ „„mor,^^-«"- Т-Тн^сиье.спан.

по Фсиольннм соединениям,Таллин, 1987,с,84-95. П.Саднкои A.C. ,Исмаилов Л.И., Биктимиров Я.,3ияев Х.Л.,Баром Н. К.,Ириов 1>.И.,Са1!итк^лов А.М.Дазулаховэ 9.Б.,Попове О.М., БерннстшР И.Ф. - Н,2л,1,11,б,61,7,71-гвнса-онся-5,51-диизопро-пил-3,:Я д1!метил-8,81-дт.12т1Ш-/1111111-дифенил-г11,2111,311, 3-111-тетреме7ИЛ-411,4111-диамино-511,5А11-дипиразолок/-динэФт8~ <v-v> ;р>ук»* ьротпотьтгусио*' я йя?ер1 еропяпдупиру skt:d-

.•:>■_-.'■■ - flT.r?:; ст ПДС.1В.)2г,

Я.1); 1 Л:. Д''.::!17'гу.тлв А.М.,1еоутоховб !>.•>. -нпт<,,/.е.«01(0.,ен-

('TL кнзкомолпкулпрннг еоедиге.ьп р.'И'тител'до;-,- puncto :: -фи - Вой:. мгрусой., li-ьй,f,с .7i>. ,

~ ."i..n онулпл.-сф h. г.. ,С:ьд.ТК> ¡он Л.!!., Jap,>110:4':' , 0. , Rpa.,,: > . lu -oj:>:i'V .in >/м">гп., .мтере.'.уил при ¡.•':oi:!.p„!,-t;H-

но." >■ "' •' >' - '.?) ;р ,ж:.1,усол., <;,о 17!)-. iv.

A.wi.,Ач1пюпа i',u;.,ftcjmno3 ->.A. -СпецнТжчес ка я xs— рактег'.'.стика птттвт вп.п»»» «. »„Ч1.д

'.' ................сосдИнеи1111'*,18икей7,х9ИУ,с.7Ь-79.

Iä. Леля поя X.A.,CtiiBTKy.iOj Л.;.'. .ÜoynnbOJ С.А.-Клшшчеокк перс-

П1,кт:ч<«'м»' нтпуктор иртсрферсч.ч природного кдопеховдвая -кизма

ттпг'Тю . .и ^ ... , , (1 ,, ^ ..

iü„ii.t.'>«D» i .т.,njtwj«Koa i/.л..t-niimкулот. д.и, .jjmi™»«« vr'^n-Г8стстг?н,!ше зггество - агатные кпдукуорм интерферона z

ре клеток - В со.:"Интерч>еуон-&9",М..с.57-42. 1В.Асланов Х.А.,Ауелбеков С.А.,Сайиткулов А.1!.-Низкомолекулярные индукторы интерфероне- В кн.:"ПроОлеш и перспективы развития химии природных и физиологически активны* веществ" Д'аикент, "ФАН", 1988, с. II9-I54.

19.РнхианоердиеьГ,,йух8недаанов U.,Асланов л.А.,СаГ.иткулов А.ы. - Биологические свойстве CAi.i-3 - В с0.:"Ироопеиы использования целлюлозы и .ее производных в мсдьцииског и микробиологическом промышленности".Ташкент,1989,с.103.

20.Ершов Ф.П..Виноград !1.А.,и1:итку«ов А.М.Дазулахова о.Б. -Влияние индукторов интерферона на течение хчзмидш ион шьчекщш in i/iVo- lac те,с.100.

21.Ндд:ашутдинов Iii.,Ершов "¿.И.,Сэлш:он Л.С.,Сор1шегл:ов A.A., СаКи?кулов А.и,,Абдулхвева а.а.,£ар<:искт' 1..^.,Тоаулахов8 Ь.Б., Исламов А.Н. ,8ияев Х,Л. -Способ получения индукторов ин -ерфсро на - Авт.св11д.,«1478414 от G8.01.1989г.

22. 2ршов Ф.И. Д'азулахова Ь.Б.,Виногсад H.A..СаГпткулов A.M., Ьэткин А.А._Панкратовэ В.H.-Изучение интерфсрснкндуцирующеР способности С. tza.ikoma,iii соровара L £ на мышах линии СВА- В си.: "Актуальные гипросы диагностики и лечения хламициГных инфекции", M.,1990.с.126-128.

23.Ершов Ф.И.Дааулахоаа Ь.Б..Виноград И.А..Сагиткулов А.И. -Торможение роста Chlamidia tiac.bomv.iii андогенным интегпероном в внсперинентах in vivo .-/Депонировано л союзме шнфорп МЗ CCCP.I9LC.

24.СаГитпу/10в А.и.Дазулалово Ь.Б.,Асланов X.А.-Целенаправлен Btb поисл новмх индупхоров интерферона среди растительных веществ » их модифицированных аналогов. Связь структуры и пункции.-

В сб. : "Современные аспекты применения шпукторов интерферона и других иимуномодуляторов",.. 1990,с.105-106,

25.Ыаулянов С.А..Ауелбпков С.А.^аРиткулов А.М.,Рахманбердиев Г. Асланов Х.А.- Использование ароматических оксиамииов для синте за прот:;взвирусных препаратов - Тезисы докл. Ш-регион.сэвещ. респуб.сред.Азии и Казахст. по хим реактивом,Ташкент.,1990,

4 С.829.

26.Тазулахова Ь.Б,,Св1!иткулов A.M..Акитина.H.H.,Козловский М.М.,' Виноград И.А.- Способ индукции интерферона - 'Авт.свид.№1600048 ОТ Г>.OS. 1990.

#.Мирзз*л РЛ'.,Сяп»!г>гулоз A.:.i.,Ay?лоеготз С.А. - Влияние !Шл,ук-•1-0ров >;н ••.:,)¿врона растительного происхоидения на оиосинтез клеточных "помол?кул - В со.: 1У-Бсгсоюэ.совещ.по хим, реактннам", Баку,!!^ I,c.7I.

28.Аслз~ор Х.Д.,Розс19ноер ¡то» Г.Дрпов ¿.и.',Ауелбзкив С.А., 1 тзу тк: о*"* 1 •. ь., С з •' т к v лс у А. \.,лтлл->вя Г. LАмниона С. X. ,','яуля-нов С.А. - Производные акиноэцетилцеллгалозы и госсипола, облада-

'ПШНЛ ТТН ТО n.r'ifi a t*TJ г win» тплтм »л» *я ппяшниялч л*»« .».♦•»•• « — л — —

лтм» т i inusu'mu лт п i mu- I üo !

зд.Ервоз v.u.,Сам1тг.)'лов А..-Д.,Виноград Н.А.Дазулахова Ь.Б,, Ауелбекои С.А..Асланов л.А.,..!оулпнов С.Л.,Р8Х>ланбгр-;!ев Г.Д'аапу-' латол lu.'i. - [1ротнгохли;.::ип?''ное средство - Авт.свпдЛ приоритет. 4869604,положительное решение ;ля вьч.патент, от 30.01.1991г. ЗО.йияев л.Л.,Биктшииров ¿.,Д:кураоекова С.В.,Барам U.K.,1Лсмаилов А.й.,Сэ"ч"кулов А.:,'!.,Виноград Н.А.Дазулахова Ь.Б.,Ерпов Ф.И., Кэропутп [зе Т.Н. - Комплекс производного госсиполэ и полпфинил-пнррол: xio р '"очзстгс <*?.\ипе'Г!п обло ;лоаего литер iepoHiw :удт~ ручгк-й ' -т ."'Г ттьп п •".".: и :чг' ,г'стгсе'' - Абт. сви поиор:;т ~ ЛЧ>81Л лог> дмк«? решение для вид. патент.,от II. 09Л;'Л.

.^I.Cii •<—v< А. 1., 1ir>:::,\" *.....Amt нов Х.А. Дазулэхоза Ь.В.,.4оуля-

поз Гл.л.гэнпвп ••' .X. - Зависимость итерировандупя-

irT'-r,;.-irT'.; природных чч .уторов интерферона от ил хпмдчсс-коГ от;);/;;-;;-!-!,! - АитаЭиот. 'Знот^хнпл., Ii'Öl, т.й6,!27,с .ЬУ-42. üä.fcpnoB v.п.,Сумин й.И.,СаГ:ггкулов А.И.,Бврач Н.й.Д'озуявхова

Ft К По ' ГГ1Т.1 и А 1.1 — ПУТГ-С •• иСТ'"

я opnmx 't—^oMfx ггп:: различных путях его введения в экеггерпцен-16 - АнтиОиот. и оиотехнол., 1992,т.37,1,с.¿9-82.

33.Са^иткулов A.M.,Ершов Ф.И.,Асланов Х.А.Дазулаховэ З.Б.,Маулп-нов С.Л. - ПнтерФороншщцнрулчоя активности .производного оксибоп' з:;м!.::;т?э - Аятявиет. и 1::от-?анол.,П?93,т.57,2,с.37-40.

34.Со,'::7кулэв А..!., Виноград Н.А.Дазулахова Ь.Б.-Антнхлом:* аип-нвп активность растительных индукторов интерферопя - В с<5. ^Интерферон -92" ,;•,.,с . I7I-I77.

35.Сз1';:ткулов А.Li.,Виноград Н.Л.,Эиивв Х.Л.,£ш:тимиров Л., Д'урз-бекова С.Б.,Бэрэм Н.И.,Исмаилов А.И. - Индуктор интерферона па основе госсиполэ - В сб.:"Интерферон-92",М.,с.149-153,

36. Иргашева Н.Х., Назаров М.Ш., Сайиткулов A.M., Мусаев У.Н., Асланов Х.А. — Натриевая ооль шлиметакрилошщшоншй кислоты, обладающая интерферониндуцирующей активностью - Авт. свид. N=1737902 от 01.02.1992г.

37. Исл&мбеков Ш.Ю;, Мавлянов С.М., Сайиткулов A.M., Исмаилов А.И., Каримджанов А.К., Камаев Ф.Г., Ершов Ф.И., Тазулахова Э.Б., Гнатченко Е.В. -Способ получения танннна листьев суммаха, обладающего интерферониндуцирующей активностью. - Авт. свид. N=1733436 от 15.01Л992Г.

38. Ершоз Ф.И., Сайиткулов A.M., Сарымсаков А.А., Мезенцева М.В., Тазулахова Э.Б.,' Наджимутдинов Ш. - Производное целлюлозы и госсшюла, обладающие интерферониндуцирующей и противовирусным действием.-Авт.свид. ^приоритет 4907166, положительное решение для выдачи патент от 21.08.1992г.

39. Тухсанов Р-X., Ыаулянов С.А., Ауелбекоь С.А., Сайиткулов A.M., Димант И.Н./ Платонова Л.Б. - Противоопухолевое соединение природного происхождения - В сО: "Труда I -съезда онкологов Республики Узбекистан с .международным участием", 28-30 ноябрь 1994г, с.14.

40. Сайиткулов A.M., Ершов Ф.И., - Новое поколение индукторов интерферона -В сб.: "Биология ва экологияшшг хозирги замон ыуаммолари", 11-кисм, 16-18 февраль 1995й.

41. Erchov F.I., Sayltkulov A.IS. - FarmacoclnetlcB of new interferon Inducer - Cagocel -J. oi interferon Research.1992, V.12.P.S 140.

42. Erchov P.I., Tasulakhova' E.B., Sayifikulov A.M. - Antiviral Effect and clinical volue of new IFH Inducers - J. of Interferon Beserch, 1994, V. 14,1, P. S H4.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Сайиткулов, Аликул Мамаякибович

1.2.Виологические свойства мнторфероюв

1.3.Синтез и действие интерферона

ГЛАВА г.ВЗАИМОСВЯЗЬ СТРУКТУРЫ И АКТИВНОСТИ ИНДУКТОРОВ

ИНТЕРФЕРОНА

2.1.Высокомолекулярные индукторы интерферона

8.2. Ни з ко мо ле ку ля р ные индукторы интерфероны

2.3.Возможным механизм интерферонообразования вновь синтезированными соединениями.

ГЛАВА 3. РАСТИТЕЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА ИНДУКТОРЫ ИНТЕРФЕРОНА И

ПРОТИВОВИРУСНЫЕ ПРЕПАРАШ

ЗЛ.Госоипол и его производные индукторы интерферона

3.2.Гоесипол и его производные протививищ-снне препараты

3.3.Лекарственные средства ев основе производных хлопковой целлюлозы

3.4.Клинические применение индукторов интерферона. 81 ЧАСТЬ II.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТ0.ДН ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2•ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННЫЙ ПОИСК НОВЫХ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА СРЕДИ РАСТИТЕЛЬНЫ! ВЕЩЕСТВ И ИХ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНАЛОГОВ. СВЯЗЬ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ . ИВ 2.I.Физико-химические характеристики новых индукторов интерферона созданных на основе растительных веществ .хзз а,2»Индукторы интерферона растительного происхождения

2.2Д.1нтерферониндуцирующая активность новых расрастительных соединений в системе in. u~Ltzo

2.2.2.Интерферониндуцирующая активность растительных соединений в организме экспериментальных животных .IS

2;З.Характеретика интерферонов, индуцированных индукторами растительтго происхождения è

Введение Диссертация по биологии, на тему "Индукторы интерферона растительного происхождения"

Актуальность проблемы. Интерферонн /ИФН/ являются одним из наиболее универсальных препаратов, вырабатываемых организмом в ответ на вирусную инфекцию или чужеродный антиген* К действию ИФН в той или иной степени чувствительны все вирусные т фекции. В настоящее вр емя сложилось два подхода к прикладному использованию интерферонов в медицинской практике: применение готовых препаратов интерферона - экзогенная интерферонизация и индукция выработки собственного ИФН или эндогенная тгатерфе-ронизация /50,108,218,300/.

Если успехи экзогенной интерферонизации достаточно хорошо известны /284,885,869/, то индукторы интерферона еще не заняли прочного положения в арсенале противовирусных средств. Причино: этого является в первую очеребь относительно высокой токсичность многих индукторов интерферона. Токсическая доза таких препаратов лишь в несколько роз превышает оптимальную интерфе-рониидуцтрующую дозу. Химиотерапевтическиа индекс ~ ХШ/отношение токсической дозы к терапевтической/низок, что ограничивает их практическое применение /127,140,800/.

Поиск малотоксичных индукторов эндогенного ИФН, а также путей стимуляции ИФН-обрэзования явмпся новом вехой в борьбе с вирусными заболеваниями. Индукторы ИФН, число которых составляет теперь несколько сотен, представляют собо! разнородную группу препаратов, отличающихся по химической структуре. Они объединяются способностью вызывать образование интерферона /87,89/, а также противовирусными /101/ и иммуномодулирующим; и другими /£58/ эффектами. Особая роль в этом плане принадлежит растите-га ним веществам в силу своеобразования их фармакологического действия, сравнительно малой токсичности и широкого спектра тера™ певтического действия. Данные препарата обеспечивают широкие контрольно-регулнторные функции, направленные на сохранение го меоетаза на уровне клетки и целого организма /54,102/. О *ео-ретичеокой" фочки зрении наибольшей интерес представляет связь структуры и функции у многочисленных растительных веществ, а также еще далеко неясный механизм индукции. В результате целенаправленного скрининга можно получить препараты, пригодные для широкого клинического применения. По сравнение с синтетическими индукторами интерферона существенным преимуществом растительных препаратов является возможность получить их из доступного и дешевого сырья по простой технологии /60,127/.

Из большого числа растительных веществ значительный интерес представляют растительные полифенолы ~ производил госсипо-ла и его модельных соеднннений, Важным достоинством этих еас^ невив является их способность индуцировать ШШ в культурах человеческих клеток. Благодаря сравнительно простому отроению и возможности разнообразных химических модификаций они являются удобно! моделью для определения связи химической структуры с биологической функцией /способностью к индукции ИФН и противовирусной активностью/. В этом плане очень важным является определение роли отдельных радикалов в усилении биологически активности индукторов ШШ. Особое внимание при этом должно быт уделено возможности создания высокоактивных индукторов ИФН» ко торые активны при простом и наиболее оптимальном энтераявном • пути их введения.

Настоящая работа выполнена в соответствии с общесоюзными программами 0.048.01. раздел 08.09 "Создать новые лекарственна средстве на основе госсипола» утвержденный постановлением ГШ

СССР, Госплана СССР и АН СССР й 482/345/164 от 08 декабря 1981 /1й гос. регистрации 81072818/, комплексно*? программой 074, раз дел Н6 "Изучить молекулярные основы синтезе и механизма действия интерферона и его индукторов" и Н7 "Разработать методы получений противовирусных и йнтерфврониндуцирующЕХ препаратов, провести первичной отбор этих препаратов", утвержденной ГЕНТ, Госпланом СССР и АН СССР Ш Ш/Ш/13 февраль 1985/, общесоюзной программок "Шшрферой" АМН СССР, по плану НИР ХааГУ РУзб», утвержденному Шт. ВУЗом РУзб. /Ш гос. регистрации 0X860059762 по теме: "Разработать методы синтеза и изучить биологические свойстве новых противовирусных и интерферониндуцирующих веществ на основе природных соедике п

Основной целью настоящей работы является синтез, целенаправленный скрининг, отбор и оценка новых индукторов интерферона среди соединений растительного происхождения и их модельяш соединений.

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи: ~ изучить особенности строения, свойства и биологическую активность растительных веществ и их производных;

- провести доклиническое изучение отобранных препаратов;

- изучить спектр противовирусной, антибактериальной и противоопухолевой активности отобранных препаратов;

- выявить отдельные группы и связи в молекуле, влияющие на их биологические эффекты;

- исследовать механизма действия индукторов интерферона расти-тельнзжо происхождения;

- провести фармакокйнтеические исследования радиоактивно-меченых производных госоипола и его модельных соединений; создать новые яекартсвенные средства не основе изученных индукторов интерферона.

Научная новизна. На основе водорастворимой эцетилцеллюлозы, кзрбокоиметилцеллюлозы, низкомолекулярного природного полифенола - госсипола и его аналогов выделенных из высших рестеши создан ряд оригинальных отечественных индукторов интрферона.

Изучено влияние химической структуры синтезированных соединений Н8 биологическую активность, установлено усиливающее влияние некоторых функциональных групп нэ интерферошшдугщру-» ющую активность, на основании чего были синтезированы новые высоко активные индукторы интерферона с заранее заданными свойствами.

Разработан способ получения нового индуктора интерферона на основе производных хлопковой целлюлозы и низкомоле^улярного полифенола госсипола, выделенного из семян хлопчатника.

Впервые изучена интерферониндувдфующвк активность отобранных индукторов ъ культуре клеток разлитого происхождения, в том числе в тшунокомпетентных клетках* Исследован характер продукции интерферона в организме Екслериментадьных животных при различных путях введения препаратов, а такае распределение •эндогенного МФНа по органам ъ зависимости от природы индукторов и способа введения.

Установлена возможность изменения интерферониндуцирующей активности растительных соединений и их производных путем модификации их химической структуры.

Впервые установлена продукция, .интерферона ин виво в ответ на пероральное введение отобранных препаратов. Исследованы закономерности продукции интерферона в ответ на многократное введение индуктора интерферона. Выявлена возможность получения высокоактивного интерферона путем комбинированного использова

- JO ния оригинальных отечественных индукторов интерферона раститель ного происхождения,

Изучением фармэкокЕнетики меченых аналогов отобранных индукторов интерферона установлено» что биодоступность зависит'. от пути введения и резко снижается при перорзльном приеме »

Выявлено максимальное накопление соединении при атом способе применения в жедудочно-кишешом тракте и печени. Слабое накопление индукторов наблюдается в остальных органах, что коррс лирует с наиболее выраженной ин$ерфероногенной активностью изученных соединений s, кишечнике и; печени.

Исследована профилактическая и терапевтическая эффективность новых препаратов, s узкие их комбинаций при экспериментальных вирусных инфекциях. Показано, что сочетанкое использование препаратов повышает уровень защиты от вирршых заболеваний.

Впервые выявлено антихдамидийное действие отечественных индукторов интерфероне растительного происхождения.

Впервые показана иммуномодулирующзя активность растительных индукторов интерферона. Показана высокая эффективность комбинации препаратов с вакциной;, при лечении экспериментальных инфекций.

Практическая ценность работы« внедрение полненных результатов.

На основе низкомолекуяярняво природного полифенола - гос-сипола, производных хлопковой целлюлозы, вньдегидфенолов, эль-дегидонэытолов синтезированы и выделены из высших растений свыше 200 соединений.

Совместно о ТашГУ., НИИ химии и технологиям хлопковой целлюлозы /ИЙЫ1ТЦ/ и НШ8М им.Н.Ф.Гамалеи РАМН, НММ бнооргэни-ческо! химки им.акад.А.С.Садыкова АН РУзб. разработаны высоко активные индукторы интерферона - "Саврац"-рекомендуемый при жламйднМной инфекции, "Еагоцел" - при OPS и гриппе, "Рагосин" • при гепатите А. Материалы по доклиническому изучению вышеука;-' зэнных препаратов и необходимая нормативно-техническая докумен тация представлены в Российски! Государственный научный центр экспертизы лекарств для получения разрешения не первичное кзш;-ничеокИ испытание в качестве индуктора интерферона.

Совместно с ТашГУ РУзб., НЙИ8М им.Н.Ф.Гамалеи РАМН я Шй биооргакическрй химии иы.акзд.А.С.Садыкова АН РУзо. из высших растений выделены и разработаны препараты Гозэлидон» Г^шцел, Таннин и 68-88, обладающие высокой интерферошгадуцируящей и противовирусной активностью при экспериментальных вирусных инфекциях* В настоящее время проводятся §8рмакотоксикологические исследования для предстаяения в Российский Государственный нэ-б учный центр экспертизы лекарств.

Предложен внеокочувствителвный микрометод для изучения индукторов интерферона нн витро, позволяют получить первичную информацию о закономерностях продукций интрферона, а также щтотоксичности ж противовирусной активности индукторов интерферона »

Разработан метод появления противовиру&ой активности перо рзяьных индукторов интерферона.

Разработан способ повышения интерферониндуцирующей зутив-ности индукторов интерферона методом модификации их структур»

Разработан способ выделения нивкомолекулярных индукторов интерферона ив высших растений.

Получены 8 авторское свидетельства, на Ш ив которых получены положительные решения для выдачи патента и I патент. 1.А.С. № 1882766 от аа.04.87 ~ Х,*1^^1,?,?1- гексаок-си-5,5*-дии8опропил - 8,8*-диметил - 8,8*~диметин^1^1^~дипиразалон/—динафтаяин* обладающий' противовирусной и интер-феронкндуцирующе! активность" совместно с Садыковым A.C., Исмаиловым А.й.,Бйктимировш 1.,3ияевым Барак Й.Й., Ершовым Ф,И,,Тазу10Х0В0» 8.В.,Поповой О.М.,Баринеким И.Ф. / не публикуется, ДСП/. « а.А.С. Ш 1478414 от 08.О1.89."Способ получения нового индуктора интерферона/совместно с Надкимутдиновыы Ш,,Ершовым §.И., Садыковым A.C., Сарымсаковым A.A., Абдулхаевой М.М., Бариного» И.Ф.Дазулаховой 9.Б.,Исмаиловым А.И., Зияевым Х.Л. /не публикуется, ДСП/.

3.А.С.1® 1600048 от 15.06.90.-"Способ индукции интерферона11, совместно с Тазулаховой 8.Б.,Аштшно1г H.H.,Козловским МЛ., Ершовьш Ф.И.,Виноград И.А.

4.A.C. ig'1733436 от 26.12.80. -"Способ получения таинияа лист! ев сумаха, обладающего интерферонкндупирующей активность©" совместно с йслаыбевквым Ш.Ю.,Мзвлановнн С.М., Исмаиловым Ä.И, Каримджановым Д.К.,Панаевым Ф.Г.»Ершовым Ф.И.,Тазула:ковой 8.Б, Гкнзтченко Е.В.,Саидмухаме довш Л. П.

5. A.C. Е; 285688 от 0I.08.Sff. -"Производные аыкноацетилцеллю-лозы и госсипола, обладающее интерферониндуцирующими и противовирусными свойствами" совместно с Аслановым Х.А.,Р8Хман0ердиевым Г.,Ершовьш Ф.й. Д'эзулаховоШ 8.В.,Ауеябековым O.A.,

АшловоЙ Г.Ш.,Амановой СД.,Мауляновым С .А. / не публикуется, да./.

S.A.C.положительное решение для выдачи патента j® 4907168 от Q4.QÜ.SI, - "Противовирусное и Енгрфероикндуцирущее средство" совместно с Ершовым Ф.И.,Сарьшсэковый.АДмМезенцево1 М.В., Тезулаховой 0.Б.» Наджимутдиновым Ш.

7.1.С. Положительное решение для выдачи патента в 4888154 от 06.12,90.»"Комплекс производного госсипола и поливинилпиррилидона в качестве соединения, обладающего интерферовиндуцирущем активностью и внтйжламидианым действием0, совместно с Зиневым Х.1.,Биктш.1ировыы Л.ДжурэбековоЕ С.1,#£эрэм Н.И,Домаиловым А.ИfВиноград й.А.Дазулаховой Э.Б,,Ершовым Ф.И.«Карадутадзе Т.М./ не публикуете^ ДСП/.

8.А.СЛ I78790S от 0I.0S.I99E. Натриевая соль подкметзнрилоид™ лимонно! кислоты, обладающая интвЦррниндухщзущей акетвностью совместно с Иргашевой НД.^Назаровым M.iii. ,мусаевьщ У.В., Аслановым I.A./не публикуе тся,ДСП/♦

9.А.С. получен патент й 1795890 от 199£г »иEpoi'йBQxлa;л•I•-;и., ос сходство1'. си ^ ieü 'ü Ершовым Ф.И,.,Виноград Н»А.Дззу-ла o^ir O.Ü. Делан ) т .А. Дуеябековкм С.А,,Мауляновнм С.А., Ладмс. оорд 1евым Г, Дашпулатовьш 10.Т.

Положения, 1* vC мг- на защиту

При изучении влияние химической срукадр на биологической активности отобраны оригинальные индукторы интерферона среди соединений растительного происхождений, обладающие высокой ин~ тейерониндуцирующей активности в культурах клеток различного происхождения и в организме экспериментальных животных. Выявлено- отдельные группы и связи б молекулехжмических соединении, влияющие на их биологические эффекты.

Установлена возможность изменения штрферовиндуциругзщеа активности растительных вещес та методом модификации их структуры.

Наибольший эффект ин вшро наблюдается при сочетании индукторов интерферона с подикатионом Д8А8~декс®раяом.

Изучен характер продукции интерферона в организме экспера-ментальных тавотных в ответ на перорзльное, парентеральное и ректальное введение отобранных препаратов» Определен характер распределения интерферона по органам в зависимости от природы индукторэ и способа его введения.

Разаботаны оп яьные схеыы многократного введения одного и того se индуктора и комбинированного применения индукторов интерферона различной природа, увеличивающие ЗИ®вень продукции интерферона.

Исследованы профилзктичесги "рроггсвт легкий эффекты отобранных препаратов при экспс < «ль i~.r ± v )уоных . • п*тх Разработана схема комбинированного прянеаения индукторов интерферона различно! природы, a mim о ингибитором лротгояи-за, позволяющая усилить противовирусные эффект при зкед р. ?аявной: инфекции.

Впервые выявлено знтяхи l -н1лое и противоопухолевое действие растительных индукторов интерфероне.

Установлена ишупошдудирущзя активность реса'кгельзых индукторов интерферона»

Исследование т> с v:c свойств, препаратов выявило, чг:о все они обладают зшоо очень слабой, либо неопределимой в пределах растворимых доз токсичностью.

Фарыакоккыетичеекйе исследование растительных индукторов 1о — интерферона выявило, что они не кумулирузгся и быстро выводится из организма через желудочно-"-шшечиыГ: трак?. Через неделью выводится более 98$ индукторов растительного происхождения, а через месяц отмечается практически полное их исчезновение. Мексика льное накопление препаратов происходит в ззелудочно-кишечном тракте /жкт/ к печени, в то время отмечается слабое проник новение их в остальные органы, что коррелирует с наиболее выре-аеиноЗ интрфероногенно! активностью препаратов в кишечнике и печени.

В связи о исследованием биологической активности отобранных препаратов, их фармакокинетики, возможностям сочетанного применения с другими индукторами интерфероне »йммуномодзштора-ми,эн1бкотиками и химиопрепаратами быйиразработаны схяшпрные-нения и разработаны рекомендации для дальнейшего их клинического использования» Предложены лекарственна формы этих препаратов.

ЧАСТ I. ОБЗОР тштт

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Сайиткулов, Аликул Мамаякибович

ВЫВОДЫ

I С помощью разработанного нами простого эффективного ж экономичного микрометода проведем целенаправленный скрининг новых индукторов интерферона среди свыше 200 производных полифеноло! альдепдофеюлов, природных полимеров, а вякже низ ко молекулярных соединений, выделенных из высших растений. Отобран ряд орв гиалышх клинически перспективных препаратов /Савра$,Гозал®~ дон,Кагоцел,Рагосин,Танки н 63-83/ с высоким химжотерапевти-ческим индексом.

Методом химической модификации установлено усиливающее влияние активных радикалов -СН^™, - Нг>- и - ОН групп на биологическую активность растительных соединений, на основании чего синтезированы новые высокоактивные идукторы интерферона с заранее заданными свойствами.

3.Иеследовама зависимость интерферожимдуцирующей и противовиру ной активности индукторов интерферона растительного происхожде нин от их химической структуры и показано, что по степени активности они могут быть расположены в следующий ряд: производные полифемолов производные нафтальдегидов производные бежзальдегидов. Наиболее активными являются производные 0-окси бежзальдегидов, Величина активности зависит от природы замести телей по альдегидным группам,

4.Разработан способ синтеза водорастворимых форм на полимерной основе низкомолекулярных жерстворимых индукторов интерферона растительного происхождения, Показана возможность изменения способность производных синтезировать "ранний" или "поздний" интерферон ин виво методом модификации химической структуры жизкомолекулярных растительных соединений на полимерно! основе

5. Установлено, что отобранные растительные вещества обладают высокой интер-ферониндуцирующей активностью в культуре клеток различного происхождения, в том числе и в клетках иммуюкомпетентных органов. Исследован характер продукции интерферона в организме экспериментальных животных при различных путях введе ния препаратов, а также распределения эндогенного интерферона по органам в зависимости от природы индуктора и способа его вв дения в эффективно! дозе.

6.Выявлена возможность получения высокоактивного эндогенного интерферона им виво в комбинации: индуктор-индуктор и индуктор биопрепараты /контрикал/ в зависимости от пути введения препаратов. Разработаны схемы многократного использования раститель ных индукторов е учетом фазы гипореактивноети, позволяющие получать длительную циркуляцию интерферона /до 21 дней/ в терапевтических титрах, а также оптимальные варианты комбинированного применения индукторов интерферона.

7. Впервые показана иммуномодулирующая активность растительных индукторов интерферона при сочетанном их применения с противо-" вирусными вакцинами. Показана высокая эффективность комбинации препаратов с вакциной при лечении экспериментальных инфекций. 8.0интезированы ^С - и 3Н-радиоактивные меченые аналоги растительных индукторов интерферона. Изучение фармакокипетика отобранных индукторов интерферона. Показано, что биодоступность за-висит^/ от пути введения. Установлена прямая корреляция распределения препаратов и локализации интерферона по органам.

9. Установлен широкий спектр противовирусно® активности растительных индукторов интерферона. Показано, что эти препараты проявляют наиболее выраженный терапевтический эффект при экспе

- 309 риментальном гриппе, гепатите мышей, гепатите А человека, бе-шенствве, клещевом энцефалите. С помощью математического моделирования разработан способ усиления защитного эффекта при их комбинированном применении. При этом защитный эффект раститель ных индукторов интерферона достигает до 75-80%.

10. Впервые обнаружена высокая антихламидийная активность растительных индукторов интерферона. Показано, что отобранные пре параты стимулируя синтез позднего интерферона у мышей обеспечн взют существенное подавление репликации микроорганизма и nposi ляют пролонгированной антихламидийный эффект. При сочетании препаратов с тетрациклином усиливается их защитное действие на поздных сроках развития инфекции^

11. Разработаны рекомендации для дальнейшего клинического использования новых отечественных высокоактивных оригинальных индукторов интерферона: "Саврац"-рекомендуется при хламидийню инфекциях, "Кагоцел"- при ОРЗ и гриппе, "Рагосин" - при гепатите А.Предложены лекарственные формы этих препаратов.

Заключение.

Таким образом, в эксперименте на мышах линии СБА выявлена высокая интерферониндуцирующзя способность С. tz¿гc«iws>?clílь штамм !*<>/. Продукция индуцированного хламиднями интерферона в крови и паренхиматозных органах животных носила циклической волнообразный характер и коррелировала с циклом развития хлами-дий, а уровень интерферона находился в прямой зависимости от инфицирующей дозы возбудителя.

Введение 10% суспензии желточных мешков, содержащей С. ±га сЬомаЛг* ^ позволило воспроизвести экспериментальную нелетальную хлэмидийную /генерализованную/ инфекцию и при этом не оказн вало токсического действия на животных, в связи с чем в последу ющих экспериментах использовалась эта концентрация возбудителя. В то же время достаточно высокие "фоновые" показатели интарферс на, индуцируемые 10% суспензией неинфицированных желточных мешков свидетельствовали о необходимости более тщательной очистки суспензии от их примесей.

Наибольшее накопление хламидии отмечалось в легких и лимфе ршешшх узлах животных. Этот факт, а также участие этих органов в интер-ферошвом ответе организма предопределило выбор их для оценки влияния экзогенной и эндогенной интерферонизации на репликацию возбудителя в дальнейших исследованиях. Титрование 2 сывороточного интерферона позволяло судить об интерфероновом оз вете всего организма,

Цитоскопические исследования ыазкой-опечатков паренхиматог ных органов, выявляя возбудитель, не позволяли провести точную количественную оценку его накопления. 0|уствие специфической летальности при заражении мышей С .^гл^^« не давало возможности выявить наличие ззщитного эффекта препаратов, которые предстояло исследовать. Этот вопрос был решен введением дополь-иительной системы - развивающихся куриных эмбрионов, на которы: проводили титрование инфекционности при заражении последних в желточный мешок суспензией легких и лимфатических узлов хивот-ных.

Представляло важным изучить препараты как на первый цикл развития возбудителя после введения его в организм животных /ранный этап /, так и в период становления инфекционного процесса /поздный этап/. В связи с этим количественная оценка наш копления микроорганизма ин обо проводились на 4 и 9 сутки поел* инфицирования мышей хламидиями.

Анализ полученных результатов позврляет заключить, что природный индуктор интерферона Говалидон обладает выраженным антихламидийным действием при внутрибрюшинном пути введения по лечебной схеме мышам линии СБА, инфицированным С. Однократное введение индуктора интерферона в эффективной дозе стимулирует в организме инфицированных животных продукцию в высоких титрах эндогенного интерферона в течение длительного времени, что обусловливает пролонгированное действие препарата.

Индуктор интерферона растительного происхождения Саврац при внутрибрюшиниом однократном введении в дозе 10 мг/'кг веса инфицированным хламидиями мышам, также стимулирует продукцию интерферона . в высоких титрах как в кровотоке, так и в органах. При отсутствии или низких уровнях накопления и - интерферона в паренхиматозных органах, где реплицируется хламидии, на раннем этапе инфекции не отмечается выраженной ингибиции I цикла размножения возбудителя. Дитоскопически показано угнетение размножения хланидий на этом этапе накопления возбудителя. Выраженная ингибиция хламидии установлена на поздных сроках инфекций мышей и была обусловлена знтихлзыидийным действием высоких тигров индуцированного эндогенного интерферона.

Изучение влияния однократного введения Кзгоцела на накопл ния хламидий в организме мышей на ранных этапах инфекции показывает, что в мазках опечатках желточных мешков куриных эмбрио нов цитоскопически не регистрировалось накопления микрооргзни ма. Выраженный ингибиции возбудителя на I цикле размножения не отмечалось. Накопление преимущественно $ - интерферон и / -интерферон не обеспечивало должного антихламидийного эффекта на ранних этапах репликации шкроорганизма иммунный интерферон подавлял накопление возбудителя в легких и лимфоузлах в более отдаленные сроки. Исследование с помощью цитоскопии и титрование инфекционноети возбудителя на 9 сутки выявило выраженное антихламидийное действие препарата. Более выраженная ингибиция хламидии в легких обусловлена, очевидно, как динамикой продукции эндогенного интерферона в этом органе, так и лучщий его васкуляризацией.

В целом природные индукторы интерферона Кагоцел,Гозалидон Саврзц индуцируют высокие титры интерферона на фоне хламидийно инфекции ин виво. динамика продукции интерферона отличается от таковой в органах, что возможно связано с различным действием препаратов на клетки-продуценты интерферона иммуномодулирующим аффектом.

При сочетанном применении при экспериментальной хламидий-ной инфекции Гоззлидона и тетрациклин гидрохлорида на фоне высокого уровня индуцированного Гозалидоном в крови и паренхиматозных органах в течение всего срока наблюдения интерферона выявлено существенное угнетение размножения хламидий как на рапных, так и на поздних этапах инфекции. Индекс эффективности в лимфоузлах ж легких на поздних сроках инфекции составлял 8,3 и 3,4 соответственно, тее. был выше, чем в группе животных, лече] ных только Гозалидоном, что свидетельствует о пролонгированном действии индуктора и аддитивною действии препаратов.

Изучение комбинированного применения Оаврац и тетрациклин; на интерферонообразование и репликацию хламидий в организме инфицированных мышей, показало, что динамика интерферона в крови и паренхиматозных органах имела сходный характер с такова-й при лечении животных только индуктором и характеризовалась высоким уровнем его продукции.

Антихламидийная активность препаратов на раннем ероке инфекции оценивалась цитоскопии, которые показали снижение количества хламидий по сравнению с контролем. На поздных сроках инфекции установлен аддитивный характер действия препаратов.

Комбинированное применение Кагоцела и тетрациклина, хотя и несколько снизило общий уровень продукции интерферона в кров: однако, повысило содержание его в лимфоузлах и легких, а главное, снизило токсичность препарата.

Высокие уровни интерферона в организме животных в течение всего периода наблюдения обеспечили выраженную ингибицию возбудителя, при этом на поздных сроках инфекции отмечен синер-гидный характер действия препарата.

ГЛАВА 8. АНШУШРОГЕНШ АКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНЫ! ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА В СИСТЕМЕ ИН ВИТРО И ИН ВИВО.

В последние годы заметны! прогресс в онкологии связан с достижениями химиотерапии, хотя хирургический и лучевой методы остаются основными средствами лечения больных с опухолями большинства внутренних органов. Интенсивно развивается противоопу-холевахолевя химиотерапия в результате организации массового скрининга потенциально активных противоопухолевых агентов.

Среди низкомолекулярных препаратов наиболее изучено противоопухолевое действие природных фенолов. Они подавляют роет раг личных опухолевых клеток/74/. Различные авторы по разному подходят к механизму действия полифенолов на опухолевую клетку. Эмануель Н.М. /164/ обращается к фенольным соединения, исходя из их способности ингибировать своднорадикальные реакции. При этом подавляются окислительно-восстановительные процессы, играющие очень большую роль в обмене опухолевых клеток. Другие авторы предполагают, что дифеиолы, в частности госвипол и его прс изводные /125,127/ с ОН-группами в ортоположении, легко дают хиноны под влиянием тирозинозы, которые содержаться, в частности, в очень больших количествах в клетках меланом. Известно, что хиноны отличаются большой токсичностью, чем другие подобные фенолы. Таким образом, нетоксичный или малотоксичный шлифе нол, попав в клетку меланомы, будет превращен в ядовитое вещее! во, которое, как авторы предаюлогают, погубит ее.

Действительно, в молекуле гоесипола лежат два иафталино вых ядра с 6 оксигруппами, две из этих пар /'6 положениях 6-7 и 6а7»/' находятся в ортоположении друг к другу.

Кроме того, многими авторами было показано, что низкомолекулярный природный полифенол - гоевипол и его производные обладают широким спектром биологической активности: высокой интер ферониндуцирующей способностью в различных культурах /125/ и в организме экспериментальных животных /50/, противовирусной ак: тивностью против как РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов/28,29, 122/.

Эти исследования явились предпосылкой для дальнейших поис ков противоопухолевых соединений, в частности, среди более активных и менее токсичных производных госсипола.

8.1. Изучение влияние препаратов растительного происхождения на биосинтез клеточных макромолекул.

Практически все эффективные противоопухолевые препараты обладают более или менее выраженной разносторонней биологической активностью. Одним из основных путей реализации биологической, в том числе и противоопухолевой активности этих соединен!» является их действие на биосинтез, структуру и функции нуклеине вых кислот. В выраженной степени такими свойствами должны обладать, в частности химические препараты.

В связи с этим представлял интерес далнейший поиск препаратов, активно подавляющих пролиферацию опухолевых клеток, и не влияющих на нормальной метоболшзм клеток. Как показано в настоящей работе, среди исследованных препаратов наиболее высокую интерферониндуцирующую активность проявляют азометиновые производные госсипола, полученные конденсацией по альдегидной группе госсипола. Необходимо . было изучить не только токсичность, но и метаболизм клеток в ответ на введение отобран ных веществ.

Ранее было установлено, что для Саврац и Гомицел эффективной концентрацией индукции интерферона для двух линий культур клеток /1-19 и L-929/ фибробластного типа является 250 мкг/мл.

Для выяснения состояние биосинтеза клеточных макромолекул под воздействием препаратов Саврац и Гомицел изучали метаболизм клеток L-929 и ФЭК, используя метод включения предшественнике! биосинтеза белка и нуклеионовых кислот.

В первой серии опытов после образования монослоя клеток в культуралвнуй жидкость одновременно вносили различные конце! трации Саврац и Г&ыицел, а также радиоактивные предшественники биосинтеза белка и нуклеиновых кислот. Смесь инкубировали в течение 24 часа при 37°С. Далее клетки обрабатывали вышеизложенным методом.

Во второй серии опытов после образования монослоя клеток флаконы делили на 3 группы. Пррвую группу клеток инкубировали с препаратами в течение 24 часа, затем сливали культуральную жидкость и добавляли радиоактивный предшественник биосинтеза белкз или нуклеиновых кислот, инкубировали 10 час при 37°с. Затем монослой помещали в долодильник при 0°С и обрабатывали по описанной выше мегодмке. Вторую группу клеток контактировали с различными дозами препаратов в течение 4 часа, далее вносили радиоактивные предшественники и инкубировали в течение 4 часов В следующую группу клеток добавляли радиоактивный предшественник биосинтез белка или нуклеиновых кислот и инкубировали в течение 4 часов при 37°С. Далее контактировали с препаратами в течение 24 часа, затем клетки обрабатывали по описанной выше методике. В четвертую группу флаконов вносили радиоактивные предшественники и через 24 ч. добавляли различные дозы препаратов и инкубировали в течение 24 ч. Затем монослой клеток обрабатывали по описанной выше методике. Параллельно исследовали метоблоизм контрольных культур, не обработанных индукторами интерферона. В экспериментах использовали следующие коцентрации препаратов: 62,125 и 250 мкг/мл.

При обработке клегок препаратом Саврац в течение 24 часа в дозе 250 мкг/мл биосинтез белка незначительно подавляется /на 5-Ю%/ рис.34/. Биосинтез не снижается при одновременном внесении препарата Саврац в концентрации 250 мкг/мл и Н3-ури-дин /рис.35/. Незначительная ингибиция биосинтеза ДНК наблюдается при обработке вонослоя препаратом Сэврац в концентрации 250 мкг/мл как при контакте монослоя с препаратом на 24 ч.,так и на 4 часа /рис.33/. В концентрациях 62 и 126 мкг/мл препарат не влияет на биосинтез белка и нуклеиновых кислот.

Аналогичная зависимость выявляется при биосинтезе белка , препаратом Гомицел /рис.36/. Биосинтез белка подавляется на 10% после внесения препарата на монослой культур клеток в дозе 250 мкг/мл. Биосинтез РНК также незначительно снижается при контакте клеток с препаратом в течение 24 часа посла одновременного внесения препарата в дозе 250 мкг/мл с радиоактивным предшественниками /рис.35 и 37/. Надо отметить, что минимальное ингибирующее действие препаратов Гомицел и Саврац на биосинтез ДНК наблюдается при всех использованных концентрациях /рис.32 и 33/.

Анализ указанных экспериментальных подходов воздействия

100

70 о— —- — —о-» I

X---. д.

-х —à в -X б

Рис #8,2.

50 э---о а ч I zè в

70

Рис. 33. 50 ть Влияете индукторов интерферона на биосинтез ДНЕ /рис.82-Гоми~ щей, 83-Саврац/ в культуре клеток эмбрионов кур в зависимости от доз« препаратов, а/нпреярваригельная обработка культур клето: препаратами за 24 часа до внесения предшественников, б/»обрадо< ка культур клеток препаратми за 4 часа до внесения меченных со^ динаний» в/-внесение в культуральную жидкость радиоактивных предшественников за 4 ч. до обработки препаратом*

130

100

70 sp a

A / ч* та

К ъ ъ б

Рис Ж

50

125

130

70

250 -о 0

100-Г" I мкг/мл»

Рис «86.50

125

130

100

70

Рис »35

100

70

Йч \ ^ в Л

К 4 ч а

-о

Д038,МКГ/ МЛ,

50

250 х /

Л ■ \ . \ к 4

Доза, шш/т

JL»,

Рис.37. 50

Влияние индукторов интерферона на биосинтез белка/рис.34-Сав-рац,85-Гомицел/, РНК/рис,85~Саврац, 37-Гошце л/ в культуре клеток эмбрионов кур в зависимости от дозы препаратов. а/~пред варительная обработка культур клеток препаратами за. 24 часа до внесения предшественников, б/~обработка культур клеток препаратами за 4 час© до внесения меченных соединений, »/-внесение в культуральную жидкость радиоактивных предшественников за 4 час; до обработки препаратом. на клеточный метаболизм препаратов Саврац и ГОмицел показывает, что выявлены аналогичную закономерность. При обработке исследуемыми препаратами незначительно снижается в основном синтез клеточный ДНК. Незначительное подавление наблюдается при всех описанных случаях в дозе препаратов, равной 250 мкг/мл. Следуе; отметить, что отмечавны! уровень влияния препаратов на биосинтез клеточных макромолекул является ощибкой эксперимента.

Таким образом, Саврац и Гвмицел оказались оригинальными препаратами, обладающими высокой интерферониндуцирующей активностью в кулвтурах клеток и не влияющими на биосинтез клеточных макромолекул в зависимости от дозы и времени контакта их с клетками фибробластвв ".V кур.

8.2. Антипролиферативная активность растительных индукторов интерферона в опухолевых кулвтурах клеток.

Одним из многочисленных эффектов системы интерферона является ее противоопухолевые действие. Достаточно детально изучено торможение пролиферации злокачественных клеток ин витро /Ш,88,в00»205/ -иди вадерщ роста опухолей ин виво /73,74,82, 164,239^331/.^

Анализ данных литературы позволяет предположить, что противоопухолевый эффект ин виво являеься результатом целого комплекса событий и что участвуют в нем различные механизмы иммунологического ответа. В то же время интерферон и его индукторы могут непосредственно ингибироватв деление опухолевых клеток как ин витро/200,205,838/, так и ин виво/32,238,325,343,373а/.

- 256

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Сайиткулов, Аликул Мамаякибович, Москва

1. Аксенов О, А. , Бреслер С. Е. , Закабудин А. 1. и др. - Лабораторное и клиническое исследования биологической активности комплекса поли (Г), поли (Ц). - Вопр. вирусол. , 1978. N 4, с. 466-470.

2. Амитина ЕЕ- Закономерности интерферонообрааовании индукторов разной природы. Автореф. на канд. дисс. (Вирусология - 03. 00. 06) - 1985.

3. Амитина Е Н, Завизион Б. А., Тазулахова Э. Б. Выделение интерферона из органов. - В сб.: Методические рекомендации по применению современных методов исследования в вирусологии. М. 3 1984, с. 44-46.

4. Амитина ЕЕ , Тазулахова Э. Б., Ершов Ф. Е Инозинле-кезависимая продукция интерферона in vivo и in vitro. Вопр. вирусол. , 1984, N 3, о. 310-312.

5. Анджапаридзе О. Г., Бектемиров Т. А., Бургаеова М. Е -Влияние комплекса поли (И). поли (Ц) с поли L-лизином на тече-нииие осповакцинальной индукции у обезьян. Вопр. вирусол. 19774 N 3, с. 339-343.

6. Андрукович Е Ф., Голикова Т. И. , Костина С. Г. В кн.: "Новые идеи в планировании эксперимента". Под ред. Налимова В. В. Е , Наука, 1969, с. 140-153.

7. Арипов У. А., Сахибов А. Д. , Касымов Б. 3. и др. Изучение кумулятивных свойств и распределения нового иммунодеп-рессивного соединения - Зим. фарм. журн. 1983, N 8, с. 908-911.

8. Анджапаридзе О. Г., Бектемиров Т. А., Бургаеова М. Е и др. Продукция интерферона при различных способах введения модифицированного поли (И). поли (Ц). - Вопр. вирусол. 1981, N 4, с. 407-410.

9. Аспетов Р. Ф. , Новохатский А. С,} Носик Д. а и др. Человеческий иммунный интерферон: продукция и действие. - Еопр. вирусов 1984, N2, с. 240-245»

10. Асланов X. А., Ауелбеков С. А. , Оайиткулов А. М. -Низкомолекулярные индукторы интерферона. В кн: Проблемы и перспективы развития химии природных и физиологически активных веществ. 1988. Ташкент, "Фан", с. 119-154.

11. Барам Е И., йсмаилов А. И., Биктимиров Л и др. Производные госсипола и физиологическая активность. - Б кн,: Проблемы и перспективы развития химии природных и физиологически активных веществ. Ташкент. "Фан". 1988. с. 78-100.

12. Барам Е И., Пайзиева Р. 3. , йсмаилов А. Л и др. Б сб.: "Природные полифенолы и их производные - противовирусные препараты и индукторы интерферона". Ташкент. "Фан".

13. Баррель сон л д. //Будущее науки Ж ,1985, Вып. 18, с. 55-57.

14. Бакунц К А., Геворкян М. Г., Тазулахова 3. Б. и др. -Влияние высокомолекулярных индукторов интерферона (де РНК) на адсорбцию вируса. Еопр. мед. химии. - 1990, Т 36. М 2, с. 35-37.

15. Бектемиров Т. А., Бургаеова М. Е , Анджапаридзе О. Г. -Индукция интерферона у обезьян комплексом поли (И), поли (Ц) с поли Ь-лизином. Вопр. вирусол. , 1976, N 5, с. 536-539.

16. Богомолова Е С., Суекова В. С., Чернова В. А. и др. -Содержание в крови, распределение по органам и выделение из организма проспидина в зависмости от способа его применения. -Фармакология и токсикология. 1976, N 6, с. 742-746.

17. Бутов Ю. С., Хриеток В. К , Сомов Б. А. и др. Лечение госсиполом некоторых дерматоэов вирусной этиологии. - В сб.:

18. Ма®орнсыиа Вооооюоп. тъояф* по ноолодопапню логет.роо?зэопг1ык- 3 арастений и перспективы их использования в производстве лекарственных препаратов". М., 1972, с. 217-218.

19. Васильев IL С. , Суздалева В. В. Проблемы гематологии и переливания крови. 1986, Часть II, Вып. 7. Т. 3.

20. Вайнштейн В. А. Исследование механизма полимерной соллюбилизации полиеновых макролидных антибиотиков методом гель-хроматографии. - Хим. фарм. гкурнал. 1989, N 7, с. 859-883.

21. Вермель Е. Е , Кругляк С. А. Противоопухолевая активность госсипола в опытах на перевиваемых опухолях. Вопросы онкологии, 1983, т. IX, N 12, с. 39-43.

22. Вильнер JL К , Коган 3. К , Наумович Е Г. и др. Зависимость противовирусной активности комплекса поли (Г), поли (Ц) от размера непрырывных участков поли (Ц). - Вопр. вирусол.1988, N 3, с. 331-335.

23. Вильнер JL М. , Лашкевич В. А. Влияние виразола на противовирусную активность поли (Г), поли (Ц) и других полинукле-отидных интерфероногенов. - Антибиотики, 1984, Т. 26, N 6, с. 450-453.

24. Вильнер JL М. , Тимковский А. Л , Тихомирова- Сидрова ЕС.- Биологическая активность и структурные особенности по-линуклеотидных интерфероногенов. Вирусология, Е , 1977, Т. 8. -Молекулярная биология вирусов, с. 114-158.

25. Вильнер JL Е Влияние размера непрырывного участка поли (Г) в комплексе поли (Г,А), поли (Ц) на их интерфероноген-ную активность и способность стимулировать формирование иммунитета. - Вопр. вирусол. , 198,, Т. 31, N 6, с. 697-700.

26. Виноград Е А. Эффективность интерферона и его индукторов при экспериментальной хламидийной инфекции. - Авто-реф. канд. диее. , ( Вирусология - 03.00.09) - М. , 1990 г.55 4 ~

27. Вирник А. Д. , Смешко В, А., Хомяков К. Т. Модификация свойств лекарственных веществ путем присоединения их к полимерам. - Полимеры в медицине, часть I, 1978, Т. 6, N 4, с. 191-209.

28. Вирник А. Д. , Смешко В. А., Хошков К.13. Модификация свойств лекарственных веществ путем присоединения их к полимерам. - Полимеры в медицине, часть II, 1977, Т. 7, п 1, о. 27-55.

29. Вичканова С. А. , Горюнова Л В, Изучение вирулицидной активности госсипола ин виво. -"Антибиотики". 1968, N 7, с. 828-830.

30. Вичканова С. А., Ойфа А. И., Горюнова Л В. -К вопросу о противовирусных свойствах госсипола при экспериментальной гриппозной пневмонии. -"Антибиотики", 197*0. N 9, о. 1071.

31. Воронина Ф. В., Шапошникова Г. К , Кузнецов В. Е Ан-типролиферативная активность различных препаратов челевеческих кнтерферонов. - Вопр. вирусол. 6 1987, Т. 32, N 3, о. 329-334.

32. Вотяков В. И. Актуальные задачи в научной разработке соединений с антивирусными свойствами. - В сб.: "Молекулярная биология вирусов, химиотерапея и химиопрофилактика вирусных инфекций". Минск. 1974, с. 10-24.

33. Грабовека В. О. Влияние индуктора интерферона на экспериментальную опухоль мышей. В сб.: Современные проблемы медицинской вирусологии, Рига, 1987, с. 82.

34. Гребенча С. В. Изучение лечебного действия сочетан-ного применения де РНК и вакцины у мышей, зараженных уличным вирусом бешенства. - В кн.: Индукторы интерферона, М. , 1982, о. 140-146.

35. Гребенча С. В. , Киселева А. О. , Барине кий И. Ф, Изучение защитного действия сиденоцитов мышей линии СБА, иммунизированг 5 =ных интактированной неконцентрированной антирабической вакциной. Вопр. вирусол. 1986, б, с. 691-694.

36. Гребенча С. В., Носик Е Е , Ершов Ф. И., Баринский И. Ф. -Профилактическая и лечебная активность индуктора интерферона у мышей, зарашнных в мозг уличным вирусом бешенства. Вопр. вирусол. } 19835 Т. 28, N1, о. 71-74.

37. Григорян С. С. Индукторы интерферона: действие на ин-терфероновый статус в норме и паталогии. Докт. дисс. в виде доклада, (Вирусология - 03. 00.06) - М. , 1992.

38. Григорян 0.0., Ершов Ф. И., Подгородниченко В. К и др. Индукция интерферона при пероральном введении высокомолекулярных полинуклеотидов. - Вопр. вирусол. 1986, N 3, с. 338-342.

39. Григорян С. С., Симонов А. Е , Иванова А. М. , Ершов Ф. И. , Противовирусная активность амиксина, заключенного в липоеомы, - Вопр. вирусол., - 1988, 3, с. 302-305.

40. Григорян С. С., Ершов Ф. И., Поверенный А. М. и др. -Особенности продукции интерферона при энтеральном введении индукторов. Вопр. вирусол. , 1988, И1,с. 67-70.

41. Григорян С. 0., Поверенный А. М. , Ершов Ф. И. Вазоли-даторы как индукторы интерферона. - Вопр. вирусол. 1987, N 2, о. 204-208.

42. Григорян С. С. , Ершов Ф. И. , Поверенный А. М. и др. -йнтерферониндуцирующая активность заключенных в липоеомы двуспиральных полинуклеотидов и пути ее повышения. Вопр. вирусол. , 1987, N 3, о. 352-357.

43. Григорян С. С. , Иванова А. Ж , Ершов Ф. Л Противовирусная активность амиксина и его влияние на интерфероновыйстатуо при гепатите мышей. Вопр. внруоол. , 1890, N 2, о. 138-140.

44. Душанбиева С., Баринский Й.Ф., Асланов Х.А. Противовирусная активность ГСМ при герпетической инфекции. - В кн.: "Ери-родные полифенолы и их производные - противовирусные препараты и индукторы интерферона". Ташкент, "ФАН". 1981, 0. 102-108.

45. Душанбиева 0., Вагабов P.M., Баринский Й.Ф. и др. Противовирусное действие ГСН на модели вирусов группы бешенства. В кн.: "Природные полифенолы и их производные - противовирусные препараты и индукторы интерферона". Ташкент, "ФАН". 1981, С. II5-II9.

46. Дятлова Н.Г. Высокомолекулярные аналоги комплекса полирибогуанилата с полирибоцитидилатом. Автореф. дисс канд.хим. наук. Л., 1989.

47. Ершов Ф.И. Индукторы интерферона: Итоги и перспективы. -В кн.: "Перспективы научной разработки противовирусных веществ"., Минск, 1978, с. 25-28.

48. Ершов Ф.И. -Механизм действия интерферона. "Успехи современной биологии"., 1974, 77, N 3, с. 369-381.

49. Ершов Ф.И. Молекулярная биология интерферона: "Молекулярная генетика, микробиология и вирусология", 1983, N 6, с. 10-15.

50. Ершов Ф.И., Ауелбеков С.А., Асланов Х.А. Связь структуры и функции у низкомолекулярных индукторов интерферона.- В кн.: "Молекулярная биология вирусов"., Наука, - 1985, с. 209-220.

51. Ершов Ф.И., Григорян С.С., Еремерман И.Б. и др. Антибиотики, 1981, Т. 26, N 8, с. 617-620.

52. Ершов Ф.М., Баринский И.Ф., Подчерняева Р.Я. и др. Иммуностимулирующий эффект индукторов интерферона. - Вопр. вирусол., - 1983, N 4, с. 74-78.

53. Ершов Ф.И., Жданов В.М. Интерферон и гомеостаз.- Вести. АМН СССР, 1985, N 7, с. 35-40.

54. Ершов Ф.И., Беломогова Т.О., Готовцццева Е.П. и др. -Интерфероновый статус у людей в норме и при аллергических заболеваниях.- "Интерферон 85м. Тбилиси, 1985, с. 84-85.

55. Ершов Ф.И., Жданов В.М. Клинически перспективные индукторы интерферона. - В сб.: "Индукторы интерферона"., М., 1982, с. 7-18.

56. Ершов Ф.й., Масагутова Г.В., Фомина А.Н. Интерферонин-дуцирующая активность ГСН и ГБК при пероральном введении.- В сб. "Природные полифенолы и их производные противовирусные препараты и индукторы интерферона"., Ташкент, "ФАН"., 1981, с. 99-101.

57. Ершов Ф.И., Мощик К.В., Григорян С.С. Оптимизация схем использования индукторов интерферона.- "Антибиотики". 1982, N 4, с. 280-284.

58. Ершов Ф.й., Соколова Т.М., Кислинг У. Функциональная идентификация продуктов трансляции информационных РНК интерферона и антивирусного бежа. - "Иммунология", 1981, N 3, с. 71-75.

59. Ершов Ф.И., Новохатский A.C. В кн.:"Интерферон и его индукторы", "Медицина", М., 1981.

60. Ершов Ф.И., Новохатский A.Ö. Индукторы интерферона: Итоги и перспективы. - В кн.:"Индукторы интерферона". Рига, 1981,с. 7-18.

61. Ершов Ф.й., Тазулахова Э.Б. Иммуномодулирущие свойства индукторов интерферона,- Антибиотики и химиотерапии, 1989, N 4, с.270.276.

62. Ершов Ф.И., Тазулахова З.Б., Ермольева З.В. Продукция интерферона некоторыми арбовирусами группы А. - Антибиотики, 1966, N I, с. 32-35.

63. Ершова Ю.А., Минакова О.М., Чернова В.А. Об антимитоти-ческой активности проспидина. - Фармакология и токсикология. 1973, N 5, с. 79-81.

64. Жданов В.М., Гайдамович О.Я. Общая и частная вирусология, М., Медицина, 1982.

65. Жданов В.М., Галячов P.A. Состояние и перспективы развития химиотерапии вирусных инфекций. - В кн.: "Молекулярная биология вирусов, химиотерапея и химиопрофилактика вирусных инфекций", Минск, 1974, с. 3-9.

66. Жданов В.М., Ершов Ф.И. Роль интерферона в гомеостазе. - Вопр. вирусол., 1983, N 6, с. 757-761.

67. Зайцева О.В., Тазулахова Э.Б., Ершов Ф.И. Выделение и характеристика информационной РНЕ репрессора интерферона.- Антибиотики, 1980, N 3, с. 218.

68. Зейтленок М.А. Физиология системы интерферона. - В кн.:"Образование и действие интерферона", Рига, 1972, с. 7-78.

69. Земсеков В.М. Синтетические пожнуклеотиды как неспецифические стимуляторы иммунологической системы организма. - "Успехи современной биологии", 1973, Т. 76, вып. 1(4). с. 3-20.

70. Зубова О.В., Кирш Ю.Э., Лебедова Т.О. и др. ДАН СССР, 1969, Т. 186, N 2, С. 477-480.

71. Каракулов Р.К., Поверенный A.M., Ершов Ф.И. и др. Эффект комбинированного воздействия индуктора интерферона, облучения и 5-фгорурацила на саркому 37-мышей. - Вопросы онкологии, 1984, XXX, n 2, с. 69-76.

72. Кабиев O.K., Балмуханов С.Б. Природные полифенолы -перспективный класс противоопухолевых и радиопотенцирующих соединений. М., Медицина, 1975, с. 24-34.

73. Каспаров A.A., Чегланов Ю.А. Кератопластика в лечении герпетического кератита, Реконструктивная офтальмохирургия, М., 1979, с. 24-27.

74. Каргин В.А., Плата H.A. Полимеры в медицине. - Вестник АН СССР, 1969, N 6, с. 74-78.

75. Краснов М.М., Каспаров A.A., Войцеховская A.A. и др. -Иммуностимулирующая терапея офтальмогерпеса.- В сб.:"Индукторы интерферона", М., 1982, с. I55-I6I.

76. Кирш Ю.З., Соколова Л.В. Поливинилпирролидон и лекарственные позиции на его основе, способы их получения, Хим. фарм. журн., 1983, N б, с. 711-720.

77. Козинер В.В. Патология, физиология и эксперим. терапея, 1958, 2, N 3, с. 45.

78. Кочеткова В. А., Воронцова I.E. Экспериментально-клиническое изучение пролонгации действия ауронтила с помощью по-ливиншширролшдона. - В сб.: Материалы конференции по вопросам лекарственной терапии в онкологической клинике. - Л., 1964, с. 8687.

79. Лаврухина Л.А., Посевая Т.А., Баринский И.Ф., Ершов Ф.И. Противоопухолевый эффект отечественного препарата рекомбинантно-го L - интерферона (реаферона) в эксперименте. - Вопр. вирусол., 1989, N 3, с.312-315.

80. Лаврухина Л.А., Ермов Ф.И. Антипролиферативный эффект индукторов интерферона. - Вопр. вирусол., 1985, N 4, с. 446-449.

81. Лашш Г.Ф. Сравнение выборочных долей. - В кн.:"Биометрия", М., "Высш. школа", 1980, с. 104-107.

82. Лозицкий В.П., Буйко В.П., Пузис Л.Е. К дискуссии о новой стратегии лечения вирусных заболеваний. - Вопр. вирусол., 1988, N 3, с.375-377.

83. Мавлянов Г.Т., Ауелбеков С.А., Асланов Х.А. Выделение и изучение свойств интерфероноподобного ингибитора вирусов из нормальной сыворотки крови человека. - Хим. природ, соед., 1986, N 2, с.210-215.

84. Майчук Ю.Ф., Грипась К.А., Мальханов В.Е. В сб. :"Букле-озидц, производные бициклогептена и адамантана, другие антивирусные вещества", Минск, 1981, с. 191-194.

85. Масагутова Г.В., Фомина А.Н., Мирютова Т.Л. Интерферониндуцирующей активности низкомолекулярных индукторов в культуре лейкоцитов человека. - В сб.:"Индукторы интерферона", М., 1982, с. 82—86.

86. Малиновская В.В., Литовченко В.Г. Влияние различных препаратов интерферона на синтез ДНК. -Вопр. вирусол., - 1985, Ы 4, 417-419.

87. Майборода А.Д. Вирусный гепатит мышей. - Вопр.вирусол., 1988, N 6, с. 645-651.

88. Мартынова В.Р. -Чувствительность возбудителя паратрохомы к действию физико-химических факторов и химиотерапевтических препаратов. -Дисс. канд. биол.наук, 096, НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН, М., 1969, с. 173.

89. Мезенцева М.В. Биологическая активность новых отечественных индукторов интерферона при экспериментальной гриппозной инфекции. - Автореф. канд.дисс. "Вирусология" -03.00.08. - М., 1993.

90. Менткович Л.М., Хасман Э.Л., Жданова Л.В. Усиление фаго цитирующей активности мононукле арных клеток крови человека гомологичными интерферонами. Вопр.вирусол., 1984, Т.29. N 2, с.188-190.

91. Мирзаабдуллаев А.В., Асланова Д.Х., Ершов Ф.И. Синтез и противовирусная активность некоторых производных госсипола. -В кн.:"природные полифешлы и их производные - противовирусные препараты и индукторы интерферона", Ташкент, "ФАН", 1381, с. 129-134.

92. Мощик К.В., Гребенюк В.Н., Ершов Ф.И. Лечение гениталь-ного герпеса левамизолом в комбинации с мегосином. - Вопр „виру-сол., 1982, N5, с.94-97.

93. Мощик К.В., Гребенюк В.Н. Терапевтическая эффективность левамизола при генитальном герпесе. - В сб.:"Индукторы интерферона", М., 1982, с. 166-172.

94. Мусаев У.Н., Хван P.M., Ауелбеков С.А. и др. Сополимер малеинового ангидрида с N-метакрилоиланабазином, обладающий противовирусной и интерферониндуцирующей активностью. - Авт. свид. N 866989 (ДСП -не подлежит публикации в открытой печати).

95. Наджимутдинов Ш., Сарымсаков A.A., Усманов Х.А. В кн.:-"Некоторые аспекты синтеза полимеров медицинского назначения", Ташкент, "ФАН", 1978, с.261.

96. Носик H.H., Лаврухина Л.А., Ершов Ф.И. Защитное действие двунитовых комплексов - индукторов интерферона при энцефало-миокардита мышей.- Бюлл. эксперим.биол. и мед. 1984, Т.97, N 4, с.441-448.

97. Носик Д.Н., Корнеева М.Н., Корсун Н.С. и др. Поиск препаратов, подавляющих репродукцию вируса СШЩ.- Вопр. виру сол., 1988, N I, с.34-37.

98. Носик H.H., Ершов Ф.И.- Клиническое использование интерферона и его индукторов. -Антибиотики, 1980, Т.25, N 9, с.695-700.

99. Носик H.H., Ершов Ф.И., Козловский М.М. и др. Мнтерфе-рониндуцирующая и противовирусная активность сополимеров малеино-вого ангидрида. - Вопр.вирусол.s 1986, Т. 36, N 5, с. 605-609.

100. Новохатский A.C., Ершов Ф.И. Феномен рефрактерности в противовирусном действии синтетических полинуклеотидов. - Антибштики, 1973, Т. 8, N 3, с.713-718.

101. Оболенская В.В., Щегилева В.П., Аким Г.А. и др. В кн.:"Практические работы по химии и целлюлозы", М., 1965, с. 411.

102. НО. Обросов-Серова Н.П., Фомина А.Н., Слепушкин А.Н. и др.-Изучение интерферониндуцирующего и защитного действия полигуацила при экспериментальной гриппозной инфекции.- Вопр.вирусол., 1981, I 4, с. 423-428.

103. I. Озорина Р.Д., Ульянов A.M., Сорвачев К.Ф. Метод приготовления гомогенных образцов тканей и крови для жидкостного счета. "Биологические науки", 1981, N 4, с.100-102.

104. Подчерняева Р.Я., Щипанова М.В., Носик H.H. и др. Комбинированные использование индукторов интерферона с рекомбинантны-ми вирусами гриппа для защиты от заболевания.- Вопр.вирусол., 1984, Т.29, N 2, с. 173-175.

105. Педанова В.М., Сморочков А.П., Фуреч Н.М. и др. Аэрозоли придигиозана в лечении не специфических заболеваний органов дыхания у детей.- Антибиотики, 1979, 1 8, с.632-634.

106. Покидишева Л.Н., Гульевич Н.Е., Лаврухина I.A. -Антиклеточные действия интерферонов различного происхождения. -Вопр. виру сол., 1982, N2, с.32-34.

107. Роздайбедин С.Н. Клиника ж диагностика хламидийных уретритов у мужчин. -Врачебное дело, 1987, N I, с.93-96.

108. Розеренов Г.И. Автоматизация анализа математических моделей эпедимических процессов. - В сб.:"Математические методы в зпедимиологии и микробиологии", Труды Пастера, Л., 1979, Т.51, с.33-46.

109. Разводовский Е.Ф. -Фармакологически активные полимерные вещества. В кн.:Химия и технология высокомолекулярных соединений. (Итоги науки и техники). М,, 1976, Т.10, с.61-95.

110. Развадовский Е.Ф. Синтетические полимеры в фармакологии. - В кн.-"Успехи химии и физики полимеров", М., Химия, 1973,с. 302-328.

111. Романова М.Н., Белоусова A.M., Романова H.H. Действие алкилирующих агентов на АТФ-азную активность митохондрий печени. -Биохимия, 1972, N , с.846-850.

112. Рябченко В.П., Шагеева М.У., Носиров С.Х., Зияев Х.Л. -Исследование гепатотропного действия соединения ЖЯ-6 индуктора интерферона фенольного типа. В сб.:1-конф. биохимиков Узбекистана, Ташкент, ноябрь, 1986.

113. Самгин М.А., Баринский И.Ф., Душанбиева С. и др. Экспериментальное и клиническое изучение нового индуктора интерферона - препарата Мегосин. - В сб.:"Индукторы интерферона", 1982, М., с.162-166.

114. Сидорова Н.С., Бреслер С.Е., Вильнер Л.М. и др. -Перспективы биоорганической химии в создании новых лекарственных препаратов. -В сб.: Тезисы докл. Всесоюзн. симпозиума. Рига, 1982, с.148.

115. Садыков A.C., Вичканова С.А., Исмаилов А.И. и др. Изучение противовирусных свойств госсипола в эксперименте и в клинике. - Экспресс-информация. Новые лекарственные препараты. 1983, N 10, с.18-22.

116. Садыков A.G., Асланов Х.А., Ауелбеков С.А. -Низкомолекулярные индукторы интерферона. Ташкент, "ФАН", 1981, с.3-29.

117. Садыков A.C., Ершов Ф.И., Новохатский A.C. и др. В кн.: Индукторы интерферона. Ташкент, "ФАН", 1978, с. 305.

118. Сумин В.И. Изучение фармакокинетики физиологически активных производных госсипола. - Автореф.канд.дисс. 02.00.10. -Ташкент, 1990.

119. Сунамато Дзюндзо, Ивомато ИИеси. Активация клеток. - В кн.:"Биополимеры", М., Мир, 1988, с.446-456.

120. Сайиткулов A.M., Халмуратов Х.А., Ауелбеков O.A. и др. -Интерферониндущруадая активность производных флуоренона, Узб. би~ ол.зкурн., 1988, N 6, с.5-9.

121. Сидорова Н.С., Коган Э.М., Платонова Г.А. и др. -Синтез модифицированных полирибонуклеотидов. В кн.:"Метода получения и анализа биохимических реактивов", Юрмала, 1987, с.240.

122. Смороданцев A.A. Исследования по сравнению индукторов интерферона у людей и животных. -Acta Mol. et med.germ., 1979, Y.33, N 5-6, P. 867-871.

123. Смороданцев A.A., Аксенов O.A., Константинова И.К. и др. Сравнительное исследование токсичности пож (Г).поли (Ц) и поли (И).поли (Ц) на различных объектах. Вопр.вирусол., 1978, N 2, с.201-206.

124. Соловьев В.Д., Хесин Я.Е., Гулевич Н.Е. и др. Изучение связи индуцированного интерферона антивирусного состояния с хромосомным набором культур клеток человека. - Доклады АН CCGP, 1978, Т.243, N 4, с.1069-1071.

125. Сохин O.A., Гордленко С. Л. Современные проблемы в медицинской вирусологии. В сб.: Тезисы докл.конф.мол.ученых Инст.-микробиол. АН Латв. ССР, Рига, 1987, с.77.

126. Тазулахова Э.Б., Нестерчук С.Л., Мезенцова М.В. и др. -Интерфероновые реакции различных популяций лимфоцитов инбредных линий мышей с разной степенью чувствительности забадного энцефаломиелита лощадей. Вопр.вирусол., 1989, N I, с.72-96.

127. Тазулахова Э.Б., Чижов H.H., Борисова Н.Г и др. Участие иммуноцитов в продукций интерферона в ответ на продукции ароматическими углеводородами, Антибиотики, 1991, Т.36, N 10, с. 2831.

128. Тазулахова Э.Б. Закономерности индукции и продукции а ß 7 -интерферонов. Автореф.докт. дисс. -03.00.06. 1986.

129. Тазулахова Э.Б., Амитина H.H., Ершов Ф.И. -Инозиплекс стимулирует продукцию интерферона у мышей. В сб.: Антивирусные вещества, Минск, 1983, с.107.

130. Тимковский А,Л. Структурная организация полинуклеотид-ных индукторов интерферона. - В cd.:"Индукторы интерферона", Рига, 1981, с.52-65.

131. Тимковский А.Л. Исследование условий образования и структуры комплекса полирибогуаниловой и полирибоцитидиловойкислот с целью получения высокоактивного противовирусного препарата. Автореф.дисс. канд. биол.наук. Л., 1975.

132. Ушаков О.Н. Полимерные направления в химиотерапии. -Вестник АН ССОР, 1964, N 8, с.47-52.

133. Ушаков С.Н. Полимерные лекарственные соединения. - М.: Медпром. GCCP. 1963, N 8, с.5-13.

134. Фарбер H.A., Кетиладзе Е.С., Ершов Ф.И. и др. Эндогенный интерферон при вирусном гепатите В. - Вопр.вирусол., 1984, N I, с. I09-III.

135. Фрик Г., Прейснер 3. Выделение гранулоцитов человека. - В кн.:"Иммунологические методы", М., Мир, 1979, с.328-345.

136. Хаджибаева Г.С., Латыпова Р.В. Интерфероногенная активность батридена в культуре ткани. - Вопросы инфекционной и неинфекционной патологии. Ташкент, 1976, с.249-251.

137. Хван P.M., Бабаев Т.М., Мусаев У.Н. Синтез N-замещеяных метакриламндов алкалоидов. - Узб.хим.журн. 1982, N 4, с.30-33.

138. Хван P.M., Холикова Ф.Р. Влияние условий синтеза сополимеров на их фармакологическую активность. - Химико-фармацевтический журнал. -1979, N 12, с.16-20.

139. Хван P.M., Мусаев У.Н., Бабаев Т.М. и др. Синтез однородных сополимеров на основе N-метакрилоиланабазина с Н-метакрилоижшперидином. -В сб. :Физико-химические основы синтеза и переработки полимеров". Горький, 1979, N 4, с.13-17.

140. Хван P.M., Мусаев У.Н., Насыров С.Х. Синтез фармакологически активных однородных сополимеров на основе акриловых производных алкалоидов. - В сб.:"Синтетические полимеры медицинского назначения", Дзержинск, 1979, с.60-61.

141. Хомяков К.П., Вирник А.Д., Роговин З.А. Пролонгирование действий лекарственных препаратов путем использования их в смеси с полимерами или присоединением к полимерам. - Успехи химии, 1964, Т.33, N 9, C.I054-I068.

142. Чижое Н.П. Механизмы формирования резистентсности вирусов к хнмиопрепаратам. - Вопр.вирусол., 1985, N 3, с.266-279.

143. Чижов Н.П., Чурносов Е.В. Математическое моделирование влияния индукторов интерферона на развитие вирусной инфекции. -Вопр.вирусол., 1988, N I, с.94-98.

144. Чижов Н.П., Борисов М.А.- Структура и биологическая активность низкомолекулярных индукторов интерферона. Антибиотики и мед.биотехнол., 1987, 32, N 9, с.706-715.

145. Четверикова Л.К., Поляк Р.Я. Молекулярные и клеточные основы эффектов интерферона. - Молекулярная генетика, микробиол. и вирусол., 1987, N 6, с.9-17.

146. Шабад Л.М. В кн.: "Предрек в экспериментально морфологическом аспекте"., М., Медицина, 1967, с.382.

147. Шамансурова I.A. рестшраторный хламидиоз у детей. -Автореф.дисс.канд. M., 1988.

148. Шаткин a.a. Проблемы трахомы и паратрохомы (Географические распространение, биология возбудителя и их классификация). Автореф. дисс.док.мед.наук., 1966.

149. Шубладзе А.К., Гайдамович С.Я. В кн.-.Краткий курс практической вирусологии., 1954, с.55-56.

150. Щербакова Э.Г., Литвинов А.Н., Жиганов В.Е. и др. Изучение противовирусного действия нового низкомолекулярного индуктора интерферона. - Антибиотики, 1976, Т.21, N 9, с.838-842.

151. Эмануэль Н.М. Ингибиторы свободно-радикальных реакций и перспективы их применения в экспериментальной онкологии. В кн. Пути изыскания и синтеза противоопухолевых препаратов.

152. Шнурникова И.О., Вирник А.Д., Николаева Н.С. и др. Получение модифицированных целлюлозных волокнистых материалов обладающих антивирусной активностью. - РЖХ, 1983, М., 17, 5. Т.П.М.

153. Ямамито Киеаки, Танимато Матенко. Легко растворимые твердые препараты дипиридамола (Заявка N 62-255425, Япония, МКИ, A6IK, 31/505)- PIX, 1988, 240386П.

154. Baglioni С., Nilson Т.М. -The action of interferon of the molecular level. -Am.Sci., 1981, v.69, P.392-399.

155. Baglioni 0. Interferon-induced eimsymatic activities and their role in the antiviral state. Cell., 1979, v.17, P.225-264.

156. Ball L.S., White S.N. Effect of interferon Protreatment on coupled transcription and translation in eelefrue extracts of primary chich embryo cells-virology, 1978, N 84, P. 496-508.

157. Betts R.K., Douglas E.G., Gorge S.D., et all. Isopri-nosine in experimental Influenze A.infection in volunteers. Abst. 8 th Ann Meet Amer.Soc.Microbiology., Las-Vegas., Nevada, 1978.

158. Bischoff James R., Samuel Charles E. Mechanism of Interferon action: Activition of the human P 1/ elF-2 protein kinase by individual reovlras s-class mRNAs: S1 mRNA is a potent activator relative to S4 mRNA. - Virology. - 1989, 172, N 1, P.106-115.

159. Billan A. The clinical application of fibroblast lilterferon-an overwiew. - "led. Oncol, and Tumor. Pharmacother"., 1984, 1, N 2, P. 87-96.

160. Black D.R., Eckstein P., De-Clercq E., Merigan T. //Studies on the toxicity and antiviral activity of various Polynucleotides // Antimicrob. Agents Chemother., 1973, v.3, P.198-206.

161. Blalock J.B., Stanton J.D. Common pathways of interferon and hormonal action. - Nature, 1980, v.283, P.406-408.

162. Blackman M.J., Morris A.G. Gamme interferon production and cytotoxicity of spleen cells from mill infected with Semliki forest virus J.Gen.Virol., 1984 , 65, N5, P.955-961 .

163. Blalock J.E., Georgiades J.A., Langferd M., et all. -Purified human immune interferon has more patent anticellular activity than fibroblast or leukocyte interferon. J.Cell. Immunol., 1980, v.49, P.390-394.

164. Braun M., Levy H. Interferons as modifieres of immune responses. - Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1972, v.141, P.769-776.

165. Bocci ?. Distribation of interferon in budy fluids and tissues. -Tex.Rep.Biol., Med., 1977, v.35, P.436-442.

166. Bocci 7. Production and role of interferon in phisio-logical conditione. - Biol., Rev., 1981, 56, P.49-85.

167. Bocci., Muscelotta M., Paulasu L., Grasso G. The phi-siological interferon response. II Interferon is Present in lymph but not in plasma of healthy rabbits./J.Gen.Virol., 1984, v.65, P.101 -108.

168. Bonina L., Orzalesi., Merendino R. et al. Structure -actuvuty relationship of new antiviral compounds. - Antimicrob.

169. Agents Chemother., 1982. v.22, P.1067-1069.

170. Borden E.G., Hogan T.P., Yolliel J.G. Comparative antiprolefirative activity in vitro of natural interferon a and p for diploid and transformed human cells. - Cancer. Res. 1982 , 42, p. 4948.

171. Borden E.G., Murphy P. The interferon refractory state in vivo and in vitro stadies of its mechanism. - J.Immunol., 1971, v.106, P. 134-143.

172. Borden E., Witt P., Kvam D. et al. An effective orol inducer of interferon in humans. - J. interferon Res., 1991, 11, Suppl. N 1, P.92.

173. Borecky L.V. -The Perspectives of interferon and inducers therapy. Contr.Oncol.Karger-Basel. 1984, v.20, P.318-332.

174. Borecky L.V. 20 Ialire nach Entdeckung des Interferons: Forschitte und probleme //Acta Biol.Med.Germ. -1979, v.38. P.709-731.

175. Borecky L.V, Buchwald J., Aglerova E., Stodola I. et al. Results of five-year study of the curative effect of double-stranded ribonucleic acid in viral dermatoses and eye diseases. -Advanc.Exp.Med.Biol., 1978, v.110, P.175-191.

176. Borecky L.V. The perspectives of interferon and inducer therapy.//Contr.Oncol.Karger-Basel. 1984, v.20, P.318-332.

177. Borecky L., Lackovic V., Rovencky J. et al. Studies on the Interferon system in SLE/. 10 th Congress of the Hungarian Society of Microbiology, Sseded, Hungary, 1987, P.2.

178. Breing M.C., Armstrong J.A., Ho I. Rapid onset of hy-pozponsiveness to interferon induction in reexposure to poliribo-nucleotide. - J.Gen.Virol., 1975, 26, P.149-158.

179. Buckler С.Е., Du Buy Н.О., Johnson M.L., Baron S. Kinetics of serum interferon pesponce in mice after single and multiple interferon of Poly I. Poly 0. Proc.Sor.Exp.Biol.Med., 1971, 136, P.394-398.

180. Byrne Gerald I., Grubbs Barry., Dictey Terry J. et al., pii^rferon in recvery from pneumonia due to Chlamidia trachomatis in the mouse. - J.Infec. Diseases., 198T, 156, Ж 6, 993-996.

181. Campbell. Grunberder T., Kochman M.A., et al., A mic-roplague reduction array for human and mouse interferon./ -Can. J. Microbiol., 1875, y.21, P.1247-1253.

182. Gatalano L.W., Jr., Baron S. Protecion against herpes virus and encephalomyocarditis virus encephalotis with double-st-rended RNA inducer of interferon. - Proc.Soc.Exp.Biol.Med. -1970, Y.133, ?.684-687.

183. Chang T.W. Prophilactic effect of isoprinosine in upper respiratory viral illuess. -Philipp.J.Microb.Inf.Dis., 1975, v.4, P.38.

184. Chany 0. Membrano-bound interferon spesific cell receptor system: role in the establlishment and amplification of the antiviral state. - Biomedicine, 1976, v.25, P.148-157.

185. Corey L., Chang W.T., Reeves W.E., et all., Effect of isoprinisine on the cellular immune response in initial genital herpes virus infection. - Clin.Res., 1979, v.27, P.41.

186. Bahl H., Degre M. Human interferon and cell growth inhibition. - Acta path, microbiol.Scand.Sect. B., 1976, v.84, P.285-292.

187. Danielesku. Georgeta, Maniu H., Oprescu Elena, Jucu V., Georgescu T., Cajal N. Effect antiproliferative et antiviral de 1-interferon human du type alpha sur des cellules tumorales. -Rev.roum med. virol., 1987 , 38, N 2, 83-93.

188. Darby G. The Uninvited Guests. Nature, 1980, y.285, N 5759, P.13-15.

189. Dean R.T., Virelisier J.L. Interferon as a macrophage activating factor. J. Enhancement of cytotoxicity by fresh and matured human monocytes in the absence of other soluble signals. -Clin. Exp. Immun. 1983, y.51, P.501.

190. De Olercq E. Interferon inducers., Antibiotics Chemother. 1980, V.27, P.251-287.

191. De Olercq E. Synthetic intetferon inducers. - Topics in Current Chemistry. - 1974, y.52, P.173-208.

192. De Olercq E., Torrence P.P. Structure-activity relationships for interferon induction and inhibition of protein synthesis by polynucleotides. Tex.Kepts.Biol, and Med., 1981-1982, 41, P.76-83.

193. De Olercq E., Merigan T.C. Bis-D. Ae-Pluorenone: Mechanism of Antiviral Protection and Stimulation of Interferon Production in the Mouse. - J.Infect.Dis., 1971, v.123, P.190.

194. De Olercq E., Wells R.D., Grant R.C., Merigan T.C. -Therminal activation of the antiviral activity of synthetic double-stranded polyribonucleotides. J.Mol.Biol. 1971, v.56, P.83

195. Degre I., Rollag H. Influence of Interferon on phagocytic activity in vitro and in vivo. - J.Clin.Hematol.Oncol., 1979, v.9, P.281.

196. De Mayer E., De Mayer-Ouignard . Interferon structural and regulatory genes in mouse. // Interferons as cell growth inhibitors and antitumor factors. 1986, P.435-446.

197. De Mayer E., De Mayer-Ouignard J. Host genotype influences immunomodulation by interferon . - Nature, 1980, v.284, P.173-175.

198. De Mayer-Cuignard J.„ Cachard A., De Mayer E. Delayed-type hypersensitivity to sheep red blood cells: inhibition of sen-sitisation by interferon. - Science, 1975, v.190, P.574-576.

199. Dianzani P., Dolei A. Prod, and EXploed Exist and New Anim. Cell. Sustract. - Basel, 1984, P.3-12.

200. Dianzani P., Santiano M. Production, purification and characterization of gamma (immune) interferon-Drugs Exp.Clin.Res., v.8, P.651-659.

201. Dianzani P., Zucca M., Scuphan A., Geordiades J.A. Immune and virus-induced interferons may activate cells by different derepressional mechanisms. - Nature, 1980, v.238, P.400-402.

202. Dinolfo Elaine, Chadha Kailach C. Antiviral and anti-prolefirative activités of the molecular components of leucocyto-derived human interferon. - Microbiol, and Immunol., 1983, v.27, N 7, P.589-599.

203. Dianzani P., Santiano M., Ramoenglu U., et al. Membrane events leading to interferon-gamona induction by antigens (41995). //Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1985, v.178, N 1, P.139-142.

204. D;Jeu J.Y. Regulation oî cell function by interferon. //Interferon Research, Clinical Aplict. Regulatory Consd Ed.Zoon, Elsvier Sci.Publ. 1984, P.1, 125-131.

205. Dunnick J.K., Galasso G.I. Updata on clinical trials with exogenous interferon. J.Inf.Bis., 1980, v.142, P.293-300.

206. Stringfellow. D.A. Interferon and interferon inducers. - Modern Pharmacol, 1980, v.17, N 4, P.329.

207. Emodi G., Just M., Hernandez R., Hirt H.R. Circulating interferon in man after administration of exogenous human leucocyte interferon. - J.Nat.Cancer Inst. 1975, v.54, P.1045-1049.

208. Epstein L.S. Interferon as a model lymphokine. - Fed.-Proc., 1981, v.40, P.56-61.

209. Ershov F.I. Combined applicance of interferons and their inducers with various antiviral agents. - J.Interferon Res., 1989, 9, Suppl, P.268.

210. Evinger M., Rubinstein M., Pestka S. Antiproliferative and antiviral activités of human leukocute interferons. - Arch.-Biochem. and Biophys., v.210, N 1, P. 319-329.

211. Falcoff R. Some properties of virus and immune-induced human lymphocyte interferons. J.Gen.Virol., 1972, v.16, P.251-253.

212. Fenje P., Postic B. Prophylactis of experimental rabies with the polyriboinosinic -polyribocytidylic acid complex. J. Infect.Dis. 1971, v.123, p.426-428.

213. Fenje P., Postic B. Protection of rabbits against experimental rabbles by poly I. poly 0. //Nature, 1970, v.226, p.171-172.

214. Field A.K., Tytell A.A., Lampson G.P., Hilleman M.R. -Cellular control of interferon production and release after treatment with poly 1:0 inducer. Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 1972, v. 140, P.710-714.

215. Field A.K., Young C.W., Krukoff I.H., Tytell A.A. Induction of interferon in human subjects by poly Y:G. - Proc.Soc. Exp.

216. Fleischman W.R. Potentiation of the direct anticellu-lar activity of mouse interferons: mutual synergist and interferon concentration dependence. - Cancer Res. 1982, v.42, P.869-875.

217. Fleischman W.R., Georgiades J.A., Osbone L.G., Johnson H.M. Infec.Immun., 1979, v.26, P.248-253.

218. Fleischman W.R., Kleyn K.M., Baron S. Potentiation of antitumor effect of virus-induced interferon by mouse immune interferon preparations. J.Nat.Cancer.Inst., 1980, v.65, P.963-966.

219. Forestier F., Geniteau M.,Quero A. et.al. etude durole des macrophages daus la production d* interferon ches la souris. Ann.Immunol., 1979, v. с 130, p.581-586.

220. Friedman R.M. Interferons. New-York: Academic Press.1982.

221. Freedman A., Bogger Garon S., Brecher M. et al Prevention of Vori-cells-soster (vs) with poly (I) . poly (0) given during the incubation Period. Interferon Res., 1981, v.1, N 3, P.547-561.

222. Friedman R.m., Balkwill F.R., Griffin D.B. Interferons and ras-oncogene-induced tumour -studies in nude mice. - Sci.Rept. Counc.Dir.Res. 1 st Oct. 1985 - 30 th Sept. 1985.

223. Friedman R.M. Antitumor effect of interferons. -J.Exp.Pathol., 1987, v.3, N 2, P.203-227.

224. Galasso G.I., Dunnick J.K. Interferon and antiviral drug for use In man. - Tex.Repts, Biol.Mod., 1977, v.35, P.478-485.

225. Gardner H.L. Herpes genitalis: Our most important general disease. - Amer. J. Obstat.Gynecol., 1979, v.135, N 5, P.553-554.

226. Gerone P.Z., Hill D.A., Appel L.H., Baron S. Inhibition of respiratory virus infections of mice with aerosols of synthetic double-strended ribonucleic acid. // Infect. Immunity. -1971, v.3, P.323-327.

227. Gislar R.H., Llndale P., Gresser I. Effects of interferon on antibody synthesis in vitro. - J.Immun., 1974, v.113, P.438-444.

228. Golub O.J.- A single-dilution method for the estemation of LD titres of the psittacosis LGV group of viruses in chickembrios. J.Immun., 1984, v.59, N 1, P.71-82.

229. Goldstein L.P., Langford M.P., Stanton G.J. et al. In: The Biology of the interferon system, Amsterdam, North Holland Biomedical Press, 1981, P.313.

230. Gray P.W., Leung D.W., Pennica P. et al. Expression of human immune interferon c DNA. E.Ooli and monkey cells. - Nature, 1982, ¥.295, P.503-508.

231. Grebencha S.Y., Vanag K.A., Barinsky I.E. Separation of two street robies virus strain population into two biological variants. - Acta virol., 1981, v.25, P.168.

232. Guggenheim I.A., Baron S. Clinical studies of an interferon inducer, polyrlboinoslnic - polyribocytidilic acid poly (I) poly (0) , in children. - J.Infect.Dis., 1977, v.136, P.50-58.

233. Grollman H., Lee C., Ramos S., et al. Relationships of the structure and function of the interferon Receptor to Hormone Receptors and Estabilishment of the Antiviral state. - J.Cancer Res., 1978, V.38, P.4172.

234. Haddad P.S., Risk w.S. Isoprlnosine treatment in 18 patients with subacute sclerosing panencephalitis: a controlled study. - Ann.Neurol., 1980, v.7, P.188.

235. Hanna L. Merigan T.C., Jawetz E. Effect of interferon on TRIO agents and induction of interferon by TRIG agents. - Amer. J. Ophtalmol., 1967, v.63, P.1115-1119.

236. Havell Edward A. Augmented induction of Interferons during Listeria monocytogenes infection. - J.Infec.Diseases., 1986, 153, N 5, P.960-969.

237. Hayashi Yasuyuki Koike Katsura. Interferon inhibits hepatits B virus repliation in a stable expression system of transfected viral DNA. J.Virol., 1989, у.63, N 7, G.2936-2940.

238. Haberling R.L., Kalter S.S. Persistence and spread of influenza virus (A2-Hong Kong) in normal and poly I:C. treated baboons (Papio-cynocephalus) - Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1970, v.135, P.717-723.

239. Heidemann E., Reichmann U., Wilms K, et al. Klin Wochens., 1982, v.60, P.625-629.

240. Hill D.A., Baron S., Levy H.B., Bellanti J. et al. -Clinical studies on the induction of interferon by polyinosinic-polycytidylic acid. Perspect.Virol., 1971, v.7., P.197-222.

241. Hilleman M.R., Lampson G.P., Tytell A.A., Pield A.K. et al.- Double-stranded RNAs in relation to interferon induction and adjuvant activity. In: Biological effects of polynucleotide (R.F.Bears, W.Braun, Eds) - New-York, Springer-Verlag, 1971, P. 2744.

242. Hils Jutta, May Annilies, Sperber M. et al. Hemmung ausgewählter Influenza virus stamme der Typen A and В durch Phe-nolkazperpollmerisate. - Biomed. biochem. acta, 1986, v.45, N 9, P.1173-1179.

243. Hirsch M.S., Ellis D.A., Proffot M.R. et al. Effects of interferon on leukamia virus activation in graft versus host disease. - Nature New blol., 1973, v.244, P.102.

244. Hirsch M.S., Ellis D.A., Black P. et al. Immunosupres-sive effect of an interferon preparations In vivo. - Transplanti-on., 1974, v.17, P.234-236.

245. Hoffman Siegfried., WIss Beltr M. Interferon induction. - Luther-Univ., hillevittenberg, P. - 1988, N 32, P. 48-76.

246. Horrington D.G., Lupton H.W., Orabbs C.L., et al. Ad

247. Juvant effects of tilorone hydrochloride (analog 11.567) with inactivated venesuelen eguine ensephalomielits virus vaccine. -Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1981, v.166, N2, P.257-262.

248. Interferon against genital herpes. Biotechnol. Investment Opportuniesties. 1987, N 5, P.3.

249. Jenkin H.M., Lu Y.K. Induction of interferon by the Beur stain of trachoma in Hela-229 cells. - Amer. J.Gphtalmol., 1987, v.63, P.1110-1115.

250. Jondal m., Merill I., Ullberg M. Monocyte induced human naturrral killer (№) cell suppression followed by increased cytotoxic activity during short term in vitro culture in autologous serum. Can.J.Immunol., 1981, v.14, p.555-563.

251. Johnson H.M. Effect of interferon on antibody formation. //Tox.Ropt.Biol.Med., 1981-82, v.41, p.411-419.

252. Johnson H., Smith B., Baron S. Inhibition of the primary in vitro antibody responce by interferon preparation. - J.Immunol., 1979, V.114, P.403-409.

253. Johnson H., Stollar B.D., Torrance B.D., et al. Structural features of double-stranded polyribonucleotides reguered for immunological specifity and interferon induction. Proc. Nati. Acad. Sci., 1975, v.72, p.4564-4568.

254. Kauffman H.E. Ocular antiviral therapy in perspective. - J.Infect.Bis., 1976, v.133, Suppl. A 96-A 100.

255. Kollen J.A., Mirakian A. Antitumor activity of tilorone hydrochloride on a transplantable rat adenocarcinoma. - J. Res.Oommun.Chem. Pathol.Pharmacol., 1981, v.32, P.185-188.

256. Knop I., Strenmer R., Neumann 0. et al. Interferon inhibits the supressor T.cell response of delauvedtype hypersensetivity. Nature, 1982, Y.296, P.737-759.

257. Kelsey D.K., Overall Jr. J.O., Glasgow J.A, Production of alpha and gamma interferons by spleen cells from cytomegalovirus -infected miel. - Infect.Immun., 1982, 37, P.427-431.

258. Kircîmer H., Poter H.H., Hirst H.N., et al. Studies of the producer cell of interferon in human lymphocyte culteres. -J.Immunobiology, 1979, v.156, P.65-75.

259. Kirchner H., Zamatsky R., Hirst H.N. In vitro production of immune Interferon by spleen cells of mice immunized with herpes simplex virus. - Cell Immun., 1978, 40, P.204-210.

260. Knapp W., Baumgartner G. Monocyte-mediated suppression of human B lymphocyte differentiation in vitro. J.Immunol., 1978, V.121, p.1177-1183.

261. Kohane M., Vilcek J., Regulation of human interferon production stimulated with poly I:poly 0: Ourrelation between shu-toff and hyporesponsvess to reinduction. - Virology, 1977, P. 4754.

262. Krown S., Priden G., Khansur T., et al. Phase I.trial with the interferon inducer poly 1:0 (poly-L-lysine (poly I.C.L) . - J.Interfon Res., 1983, v.3, N 1, P.281-290.

263. Kulikowski T., Zawadzki Z., Shugar D., et al. Synthesis and antiviral activities of arabinofuranosil -5-ethyl- pidini-dln nucleosides. Selective antiherpes activity of I-(-D-ara- bino-syl)-5-ethyluracyl. - J.Med.Ghem. - 1979, v.22, P.647-653.

264. La Bonnardier G., Laude H. Higl interferon titer in newborn pig intestine during experimentally induced viral enterltes. - Inf.Immun., 1981, v.32, ?.28-31.

265. Lackovs V., Bore sky L., Kresakava J. Effect of implusin treutment of interferon production and antiviral resistance of mice. J.Arch.Immunol.Ther.Exp., 1977, v.25, N 5, P.655-661.

266. Lampson G.P., Names M.M., Field A.K., et.al. The effect of altering the size of poly C on the toxicity and antigene-city of polyI:0.//Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1972, v.141, P.1068-1072.

267. Large-scale production and phlsico-chemlcal characterization of human immune interferon. J.Infect, a Iimnun. 1979, v.26, P.36-41.

268. Leandersson T., Lundgern E. Antiproliferative effect on interferon on a Burkitts lymphoma cell line. J.Ixp.Cell.Res., 1980, V.130, N 2, p.421-426.

269. Lebon P., Boutin B., Dulac 0., et.al. Interferon 7-in acute and subacute encephalitis. - Brit. med.J., 1988, v.296, N 6614, P.9-16.

270. Lett I.R., Mantovani A., Herbarman R.B. Anient at ion of human monocyte-mediated cytolosis by interferon. - Cell.Inmi-nol., 1980, v.54, P.425-434.

271. Levy H.B., Baer G,» BaronS. Induccction of interferon in non-human primates by a nuclease resistant polyriboinosinic-polyribocytidiliccc acid complex. - J.Roy.Coll.Surg. 1974, v.2, P.1643-1646.

272. Levy H.B., London M., Fuccillo D.A., et.al. Prophylactic control of simian hemorragic. fever in monkeys by interferon inducer. - J.Infect.Dis., 1976, v.133, Suppl. A256-A259.

273. Levy H.B., Quinn T. Interferon Induction by polymere. - Bioactive Polym.Syst., New-York, Lond., 1985, P.387-415.

274. Liimavuorl K., Hovi T. Herpes simplex virus as an inducer oi Interferon in human monocytecultures. Antiviral Res., 1987, T.8, N 4, P.201-208.

275. Longley S., Dunning R.L., Waldman R.H. Effect of iso-prinosine against challenge with A (H N ) /Hong Kong influenza virus in volunterrs. - Antimicrob.Agents Chemother., 1973, v.3, P.506.

276. Mage M.R., Mc Hugh L.L., Rosthstein T.L. Mouse lymphocytes with and without immunoglobuline preparative scale separation in polystryrane tissue culture dishes coated with specifically purified enty-immmoglobin. - J.Immunol. Methods, 1977, 15, P. 4756.

277. Mayer G.D., Krueger R.P. Tilorone hydrochloride: a now antiviral agent and interferon inducer. - Proc. Congress Infect.DIs. - 1981, P.245-255.

278. Mayer G.D., Krueger R.P. -In: "Interferon and Interferon Inducers". New-York. 1980, P.187-222.

279. Mayer G.D. Structural and biological relationships of low molecular weidht interferon inducers.- Pharm. Ther. 1980, v.8, P.173-193.

280. Maszella G., Pinto A., Salzetta A. , et.al. Lympho-blastoid interferon in chranic non A:non B hepatits: effecacy and factors predictive of response to trietment: - J.Interferon Res., 1991, N 1, p.78.

281. Meindl P., Bodo G., Tuppy H. Synthetische nieder-moleculare inductoron von Interferon. 1. Mitterilunge: Derivate des Diaminofluoren-9-jns, Diaminobenzophenons und Diaminobiphe-nyls. - J.Drug. Res, 1976, v.26, P.313-316.

282. Merigan X. Interferon - the first quarter century. -JAMA, 1982, v.248, P.2513-2516.

283. Merigan M.C., Hanna I. Characteristics of interferon induction In vivo and In vitro by a TRIG agent //Proc.Soc.Exp. Biol.Med., 1986, v.122, P.421-424.

284. Merill J.E. Natural killer (NK) and antibiody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) activités can be diffiren-tiated by their different sensitivites to interferon and prosto-glandin E . - J.Clin. Immunol., 1983, v.3, P.42.

285. Michelson A.M., Logout P., Noahon-Merlin E. Properties immunochemiques du poly.G. poly C. et du poly G. - C.R. Acad. Sei. Paris. Ser. D. - 1971, v.272, P.669-672.

286. Minagawa H., Takenaka A., Mohris. Mohriii R. Protective effect of recombinant murine Interferon beta against mouse hepatits virus Infection. - Antiviral Res., 1987, 8, N 2, 85-95.

287. Mrukami H., Masui H., Gordon H.A., et.al. Growth of hybridoma cells In serum - frie medium: Ethanolamine an essentialcomponent. Proc.Nati.Acad.Sci. - 1982, y.79, P.1158-1162.

288. Monto Ho. Interferon for the treatment of infections. - Ann. Rev.Med.Selec.Top.Clin.Sci. 1987, v.38, P.51-59.

289. Moore M. Molecular Biologi of Clinical Application. Cambridge, 1983, P.181-209.

290. Nakamura 0., Shitara N., Matsutant M. et.al. Phase III -trialsof poly (ICIC) in malignant brain tumor patients. - J. Interferon Res., - 1981, v.2, N 1, P. 1-5.

291. Nanger B., Kalden J.R., Zawutsky R. et.al Interferon production in the human mixed lymphocyte culture. - J. Transplantation. 1981, V.32, N 2, P.149-152.

292. Neu H.C. Clinical use of the quinolones. - Lancet, 1987, v.2, N 8577, P.1319-1322.

293. Niblack J.P., McCreary M.B, Relationship of biological actiYites of poly I.poly C to homopolymer molecular weights. - Nature New Biol., 1971, v.233, P.52-53.

294. Nickol P.R., Weed S.D., Underwood G.E. Stimulation of murine interferon by a substituter Pyrimidine. - Antimicrob.Agents Chemother. 1976, y.9, P.433-439.

295. Nordlung J.J., Wolff S.M., Levy H.B. Inhibition of biologic activity of poly I:polyC by human plasma. - Proc.Soc.Exp. Biol.Med., 1970, v.133, P.439-444.

296. Olstad R., Degree M., Sel^elid R. Production of immuneinterferon (type II) in cocyltures of mouse peritencal macrophag-ges and syngeneic tumor cells. Scand J.Immunol. 1981, v.13, N 6, P.605-608.

297. Onishi Elko, Bannai HIsaichi, Yamazaki Shudo.- Effect of glucose on antiviral activity of interferon. J.Interferon Res., 1986, 6, N 4, P.381-388.

298. Pachuta D.M., Togo Y., Hornick R.B, et.al. Evaluation of isoprinosine In experimental human rhinovirus infection. - An-timicrob.Agents Chemother., 1874, v.5, P.403.

299. Pitha P.M., Pernia B., Maldarelli P. et.al. The errors in essemly of MuLV in interferon treuted cells. - J.Supramol. Struct., 1979, v.12, N 1, P.101-112.

300. Panusarn G., Stanley E.D., Dirda V.A. et.al. Prevention of illness from rhinovirus infection by a topical interferon inducer. - New.Engl. J.Med., 1974, v.291, P.57-61.

301. Park J.H., Baron S. Herpetic keratokonjuctivities: therapy with synthetic double-stranded RNA. - Science. - 1968, v.162, P.811-813.

302. Patterson W.R., Rowls W.E., Smith K.O., et.al. Detection of HSY-2 antibody in sera from women with cervical carcinoma and controles by RNA. - In: Abstr. 79.th Annu.Meet. Amer.Soc. Microbiol., Los.Angeles. Calif., 1979, P.74.

303. Perrillo R., Regensteln P., Peters M., et.al. Prednisone withadrawal followed by recombinant alpha interferon in the treatment of chronic hepatits B. - Hepatology. - 1986, v.6, N 5, P.677.

304. Pollard R.B. Interferon and Interferon inducers: Development of clinical usefulness and Therapeutic Promise - Drugs,1982, y.23, P.37-55.

305. Pollard R.B.- Usages of interferon and Interferon inducers in man. Med.Biol., 7.58, N 2, P.57-62.

306. Powladge Tabisha M. Interferon on trial. - Bio/Technology, 1984, V.2, N 3, P.214-215.

307. Pugliese A., Tovo P.A. Ar e thermostability and acid-lability characteristics of immune interferon in mice. - J.Immunol. lottera, 1980, N 2, P.133-134.

308. Rabinowitch Y. Separation of lymphocytes, polymorphonuclear leukocytes and monocytes on glass columns, including tissue culture olservations. - BL00D< ! C$< m< P.811.

309. Reiss C.Sn., Lin L.L.M., Nowlhowlttz S.L. Interferon production by cultured murine splenocyte in response to influenze virus-infected cells. - J. Interf.Res., 1984, N 4, P.81-89.

310. Rabbinstein M., Levy W.P., Moschere J.A. ,et.al. Human leykocyte Interferon: isolation and characterisation of several molecular forme. - Arch. Biochem. Biophys., 1981, v.210, P.307.

311. Rudolf Z. Treatment of malignant melanoma with human leukocyte interferon-preliminary results of randomized frial. -Yogosl.Collog.Interferon, Ljubliana, 1986, P.119-123.

312. Sharpe T.I., Birch P.I., Planterose D.N. Resistance to virus infection during hyporeactive state of interferon induction. J.Gen.Virol., 1971, v.12, pp.331-333.

313. Sammons M.L., Pannier M.L., Levy H.B.,et.al. Serum interferon response in rhesus monkay to mogified polyriboinosinic - polyribocytidilic acid complex. - In. Abstrs.Annu.Meet.Amer. Soc. Microbiol., Antlantic OOGIty, New-York, 19T6, P.239-240.

314. Sen Ganes G. Mechanism of interferon action: progress toward its understanding. - Progr. Nucl.Acid.Res. and Mol.Biol., 1984, V.27, P.105-156.

315. Seott G.M. The antiviral effects of interferon. - In: "Interferon:Mol.Biol.Clin.Appl. 35 th Symp.Soc. Gen.Microbiol., Leeds Sert., 1983, P.277-311.

316. Schiff G.M., Linneman O.G., Rotte J,T., et.al. Effect of tilorone HG1 against rubella virus challenge in humans. -Glin.Res., 1973, v.3, P.742-743.

317. Scwarz L., Pleischmann W.R. Interferon potentian occurs at a pretranscriptive stage. - Infect.Immun., 1983, v.39, P. 159-163.

318. Shiokawa K., Vaoi H. Effect of sonication on phlsico-chemical and biological properties of synthetic double-stranded polyribonucleotides as Interferon inducer. - Arch.ges.virus-forsch. 1972, v.38, P.109-124.

319. Sidorova N.S., Kogan E.M., Naumovlch N.G. Complexes of polyribogyanylate with modified polyriiibocytidilate. - Nucleic Acids Research, Sym. Series. - 1987, 18, P.113-116.

320. Sidorova N.S., Kogan E.M., Platonova G.A., Naumovich N.G. -Enzymatic synthesis and study of heteropolyribonucleotides. Second Interf.Meeting: Molecular and celluuular reeegggulation of enzyme activity, GBR. 1986, P.177-180.

321. Singer S.H., Pord M., Naguchi P., et.al. Suecccesfulindnctttion of locally produced (lung) Interferon during the hypo-responsive state. Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1978, 143, N 1, P.915-918.

322. Sonnenfeld G., Mandel A.D., Merigan T.ö. The immuno-supressive effffect of type II mouse interferon preparations on antibody production. - Cell.Immunol., 1977, v.34, P.193.

323. Spiegel Robert J. Alpha interferons: A clinical overview . - Urology, 1989, 34, N 4, P.87-96.

324. Stanly E.D., Jackson G.G., Dirda V.A., Rubines M. Effect of a topical interferon Inducer on rhinovirus infection in volunteers. - J.Infect.Bis., 1976, v.133, Suppl. A 121- A 127,

325. Steeg P.S., Noore r.n., Johnson H.M., Oppenheim J.J. -Regulation of murine macrophage 1 a antigen expression by lympho-kine with immune interferon activity. J.Exp.Med., 1983, v.156, P.1780.

326. Stebbing w. Studies on the mode action of singlo-stranded polynucleotides which Are aaantlviral against encephalo-myocarditis virus infection of mice. - Arch.Virol., 1981, 68, N 34, P.291-295.

327. Stephen E.I., Salmons M.L., Pannier W.L., Baron S, et.al.- Effect of a nuclease-resistant derivative of polyrlboinosinic-polyribocytidylic acid complex on yellow fever in rhesus monkeys (Macaca mulatta). J.Infect.Bis., 1977, v.136, P. 122-126.

328. Stefanos S., Wierserbin L., Huyden K., et.al. Cromato-graphic behavior purification and propertoes of mouse BGG -induced gamma interferon. - J.Interfer.Res., 1982, v.2, P.423-426.

329. Stewart W., Blalock J., Burko D., et.al. ~ Gommitee oninterferon mononuclatea. Nature, 1980, v.286, P.110.

330. Stewart W., Lin L.S.- Antiviral activities of interferons. Pharm.Ther., 19T9, v.6, N3, P.443-512.

331. Smejkal P., Zelena D., Krepelka J., Yancurova T. -Derivatives benzo (0), fluoren, 6, antiviiiral and interferon inducing activities of 3-benso (0 fluorenooone derivatives in mice. Acta virol., 1985 , 29, 1, P.11-19.

332. Stewart I.E., Besmyter J. Molecular heterogeneity of human leycocity interferon: two population differing in molecular weights, reguirements for renaturation and cross-species antiviral activity. Virology, 19T5, v.67, P.68-73.

333. Stewart W.E., Lin L.S. Antiviral activities of interferons. - J. Pharm.Ther., 1979, v.6, N3, P.443-512.

334. Steissled G., Raessens A., Oedidart H. New Antiviral compounds. - Adv.virus.Res., 1985, v.30, P.83-138.

335. Stringfellow D.A. Prostoglandin restoration of the interferon response of hyporeactive animals. - Science, 1978, v.201, P.376-378.

336. Stringfellow D.A.- Induction of interferon with looow molecular weight compounds: fluorenone esters (tilorone) and pirimidinones. "Meth.Enzymol.". v.78, New-York, 1981.

337. Stringfellow D.A. Production of the interferon protein: hyporesponslveness. Tex.Rp.Biol.Med., 1977, v.35, p.126-131.

338. Stringfellow D.A., Glasgow E.A. Tilorone hydrochloride: an oral interferon-inducing agent.//Antimicrob.Agents. Chemother., 1976, v.2, P.73-78.

339. Stringfellow D.A., Vanderberg N.C., Weed S.D. -Interferon induction by 5-galo-6-phenyl-pirimidines.

340. J.Interferon Res., 1980, y.1, n 1, P.1-14.

341. Streissle G., Raessens A., Oedigert H. New antiviral compounds. //Adv.virus.Res. - 1985, v.30, P.83-138.

342. Structure-activity relationship of gamma interferon Ubstr. 3. Annu. Meet. Int., Soc.Interferon Res.Nice., 3-8, Nov., 1991, 11, Suppl., N 1, P.133.

343. Symoens I., Rosenthal M. Levamisole in the hodulation of the immune response: the carrent experimental and clinical state. J.Reticulaendothal.,Soc., 21, 1977, P.175-221.

344. Sypula A., Lleliuska-Jenezylik. Production of interferon in human diploid cell cultures.II.Effect of various factors on interferon production in human diploid cell cultures. J.Archivum Immunologic, et theraplal exreimentalis, 1979, v.27, P.561-569.

345. Takeyama H., Kawashima K., Yamada K., I to Y. Properties of interferon induced by purified Protein derivative of tuberaulln in mice sensitized with BGG or cell-wall skeleton of BCG./-Gann.Jap.J. Cancer Res., 1979, v.70, P.421-428.

346. Tarr G.G., Armstrong I.A., Ho M. Production of interferon and serum hyporeactivity factor in mice infected with murine cytomegalovirus. - Infect.Immunol., 1978, 19, p.903-907.

347. Tan Y.H., Schnoider N.L., Tischield J. ,et.al. Human chromosome 21 olosage: effect on the expression of the Interferon-induced antiviral state. - Science, 1974, v.186, P.61-63.

348. Taylor-Papadimitriou Joyce. The effect of interferon on the growth and function of normal and malignant cells. "Interferons: Mol.Biol.Clin.Appl. 35 th. Symp.Soc.- Gen.Microbiol., Leeds, Sept., Cambridge e.s., 1983, PP.109-147.

349. Taylor-Papadimitrlou Joyce. The interferons. -Mol.Variants Proteins. Biosynth. and Clin.Relevance. London, 1984, 109-122.

350. Torrence Paul F. Molecular Jonndutions of interferon action. - Mol.Aspects. Med., 1982, v.5, N 3, 129-171.

351. Torrence P. F., Be Clercq E. Interferon inducers: general surven and classification. //Meth.Enzym. 1981, v.78, P.291-298.

352. Trepman J. Distinct antigenic character of two components of poly (I) . poly (0) - induced mouse L-cell interferon. - FEBS Lett., 1980, 109, p.137-140.

353. Trapman J., Bosveld J., Stoof T. Characterization of poly (I).poly (G) induced mouse L-cell interferon. J.Clln.Hematol.-Oncol., 1979, v.9, P.274.

354. Tsai S.G., Appel m.I. Hyporesponslveness to dog interferon induction In vitro. J. Gen. Virol., 1983, v.64, p.2007-2012.

355. Tyring J., K1 impel G.R. Fleischmann W.R., Baron S. -Direct cytolosis by partyally-purlfied prepations of immune interferon. Int.J.Cancer, 1982, v.30, P.59-64.

356. Van Eyqen M., Zuamonaky P.Y., Heck E., et.al. -Levamisole in prevention of recurrent upan-respiratory-tract infections in children. Lancet., 1976, v.1, P.383-385.

357. Vilcek I. Cellular mechanism of intrferon production. - J.Gn.Physiol., 1970, 56, p.761-791.

358. Vilcek J., Havell E.A., Kohase M. Superinductlon of interferon with metabolic inhibitors: Pussible mechanisms and practical applications. - J.Infect.Dis., 1976, 133, P. A22- A28.

359. Vilcek J., Havell B., Yamasaki S. Antigenic, Phisico-chemlcal and biologic characterizition of human interferons. -km, N.Y. Acad.Sei., 1977, v.284, PP.705-710.

360. Vilcek J., Ng M.H., Priedman-Kein A.E., Krawciw T.1.duction of interferon synthesis by synthetic double-stranded polynucleotides. J.Virol., 1968, v.2, P.648-650.

361. Vinograd N.A., Erchov P.I. Investigation of interferon status in patients with chlamidiosis. Abstrl. Ann. Meet. Int. Soc.-Interferon Res., Nice., 3-8, J.Interferon Res., 1991, 11, Suppl. N 1, C.249.

362. Virelizier J.L. Murine genotype influences the In vitro production of 7 (gamma) interferon. Eur. J .Immunol., 1982, v.12, P.988.

363. Virelizier J.L., Chan E.L., Allison A.O. Immunosuppressive effects of lymphocyte (type II) and leucocyte (type I) interferon on primary antibody responses in vivo and in vitro. Olin.-Exp.Immunol., 1977, v.30, P.299.

364. Vogel I.N., Fiubloom D.S., English K.E.et.al. -Interferon-induced enhancement of macrophage Pc.receptor expression:p-interferon treatment of G3H/HI macrophages results in increased number and dencity of Pc.receptors. J.Immunol., 1983, v.130, P.1280.

365. Voth R., Rossol S., Hess G., Meyer Zum Buschenfelde K.H. HBs - antigen induced interferon 7 in human macrophages. -J.Med.Virol., 1987, 21, N 4, A 125- A 126.

366. Waldman R.H., Ganguli R. Terapeutic efficacy of inosiplex (inoprinosine) in rhinovirus infection. Ann.N 4, Acad.Sci., 1977, v.284, P.153.

367. Waldman R.H., Ganguli R.Effect of GP-20,961 an interferon inducer on upper respiratory tract infections due to rhinovirus type 21 In volunteers. J.Infect.Dis., 1978, v. 138, P.531-535.

368. Webb D.R., Nowowiejsky I. Oontroll of supresser cell activation via endogenous prostoglandin synthesis: the role of T-cells and macrophages. - Ce 11. Immunol., 1981, v.63, P.321-328.

369. Weber J.M., Stewart R.B. Cyclic MP potentiation of interferon antiviral activity and effect of interferon on cellular cyclic IMP levels. - J.Gen.Virol., 1975, v.28, PP.363-372.

370. Weigent D.A., Langford M.P., Pleischman W.R., Stanton G.I. Enhancement of natural killing activity by different types of interferon. - In: Human lymphokines, New-York: Academic Press, 1982, P.539-550.

371. Wletzerbin J., Stefanoe S., lucero M. ,et.al. Phlsico-chemical characterization and partial Purification of mouse immune interferon. - J.Gen.Virol., 1979, v.44, P.773-781.

372. Williams B.R., Golgher P.R., Kerr I.M. Activation of a nuclease by p A 2 p 5 A 2 5 A. in intact cells. - FEBS Lotters, 1979, v.105, PP.47-52.

373. Wleklik Marek, Zahorska Renata, luczak Mlrostaw. -Interferon-inducing activity of flavonoids. Acta microbiol.Pol., 1987, 36, N 1-2, P.151-154.

374. Witkowski w., Noffmann S., Vecken-Stedt A., Skolziger R., Luck G., Zimmer Ch. Struetur-Wlrkings-Bezichungen activira-ler Busenpour - analoger zweiasischer fluorenone. - Acta Biol., Med.Germ., 1979, v.38, P.733-737.

375. Yaraamoto Y., Kawade Y. Antigenecity of mouse Interferons: distlnat antigenicity of the two L cell interferon species. - Virology, 1980, Y.103, P.80-88.

376. Yershow P.I., Tasulachova E.B., Novochatsky A.S. The effect of combination of diffent inducers on the refractory state In interferon production. J.Acta Virol., 1976, y.20, P.15-22.

377. Yip Y.K., Barrowclagh B.S., Urber C. ,et.al. Molecular Weight of human Gaaamma Interferon Is similar to Thaaat of Other human interferons. - J.Science, 1982, v.215, P.411.

378. Youngner I.S., SalYin S.B. Production and properties of mlgratian inhibitory factor and Interferon In the circulation of the mice with delayed bypersensivity. J.Immunol., 1973, y.111 , P.1914-1922.

379. Young G.W. Interferon Induction in cancer with some observations of the clinical effects of poly 1:0. Meg.Clin.North.-Amer., 1971, v.55, P.721-723.

380. Zucca M., Scupham A., Diansoni F. Differences in cellular activation by virus-induced and immune interferons. Abstr. 79 th Annu.Meet.Amer.Soc.Microbiol., Los Angeles, Calif., 1979, Washington (D.C.), 1979, P.277.