Иммунологические механизмы устойчивости мелких млекопитающих Карелии

Моисеева, Татьяна Алексеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунологические механизмы устойчивости мелких млекопитающих Карелии
ВАК РФ 03.00.08, Зоология

Автореферат диссертации по теме "Иммунологические механизмы устойчивости мелких млекопитающих Карелии"

На правах рукописи

РГб од

МОИСЕЕВА Татьяна Алексеевна

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ УСТОЙЧИВОСТИ МЕЛКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ КАРЕЛИИ

Специальность 030008 "Зоология"

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Петрозаводск 2000

Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии и кафедре биологической и биоорганической

химии и биотехнологии Петрозаводского государственного университета

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор,член-корреспондент РАН Э.В.Ивантер

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор_

И.А.Болотников

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор П.И.Данилов кандидат биологических наук Л.Б.Узенбаева

Ведущая организация:

Петрозаводский государственный педагогический университет

Защита состоится « ^ 0 » у^Ц О ^ 2000 г. в [Ч часов на заседании диссертационного совета Д.063.95.01 Петрозаводского государственного университета по адресу: 185640, г.Петрозаводск, пр.Ленина, 33.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Петрозаводского государственного университета.

Автореферат разослан « $ У ¿ООО г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук С.Д.Узенбаев

Ебзъ.ы-мо ; ЕбК'ЭЬгя^^о

Е 0:/ V, 0

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В связи с существенным ухудшением экологической ситуации разработка систем оценок состояния окружающей среды чрезвычайно актуальна. Исследования последних лет показали, что иммунная система, как важнейший компонент комплексного механизма гомео-стаза, наиболее чувствительный индикатор неблагоприятных экзогенных воздействий [Шубик В.М., 1976, Хаитов Р.М. и соавт., 1995]. В связи с ограниченными на сегодняшний день возможностями оценки состояния экосистем по количественным показателям представляется целесообразным рассмотрение иммунологической системы оценок популяций млекопитающих.

В специальной литературе почти отсутствуют сведения об иммунологических механизмах устойчивости мелких млекопитающих, не разработаны и методические подходы к изучению этих вопросов. Одна из причин -сложности изучения животных, ведущих скрытый образ жизни и трудно доступных для детальных исследований. Кроме того, домовая мышь - одно из самых распространённых подопытных животных при изучении самых разных процессов; однако иммунный статус мышей как таксономической группы исследован крайне мало.

Цель и Задачи исследования.

Цель работы состояла в изучении иммунологических механизмов приспособления на разнообразные формы внешних воздействий избранных видов мелких млекопитающих на примере представителей отрядов грызуны - Rodentia и насекомоядные - Insectívora.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1.Подбор, модификация и отработка методов для оценки ммунного статуса популяции мелких млекопитающих .

2.Иммунологический анализ поддержания популяци-онного гомеостаза в условиях действия относительно постоянных факторов среды обитания с учётом разно-качественности особей.

3.Моделирование влияния техногенного загрязнения среды на иммунный статус популяции в экспериментальных условиях.

4.Сравнительная оценка выявленного иммунологического состояния у разных видов мелких млекопитающих .

Научная новизна.

Впервые проведён коплексный иммунологический анализ популяций землероек и полёвок, обитающих на территории Карелии. Выявлена видовая специфичность изучаемых факторов естественной резистентности у этих животных, установлены конкретные параметры крови для обыкновенных бурозубок, рыжих и тёмных полёвок. С помощью используемого впервые в практике зоологических исследований комплекса иммунологических показателей (лейкоциты,лимфоциты, фагоцитоз, иммцноглобулины, Р-белки) обнаружена существенная иммунологическая неоднородность популяций бурозубок и полёвок. Показано, что для количественного определения сывороточных иммуноглобулина 6 у обыкновенной бурозубки, домовой мьши, рыжей и тёмной полёвок и иммуноглобулина М у обыкновенной бурозубки можно использовать моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам человека. Установлено, что для количественного определения уровней Р-белков сыворотки крови у рыжей и тёмной полёвок можно использовать анти-Р-сыворотки мыши. Впервые проведено комплексное изучение иммунологического состояния домовой мыши в лабораторных условиях (сезонные и суточные колебания показателей естественной резистентности, перестройки иммунологического баланса организма мышей под воздействием факторов различной природы).

Практическое значение.

Изучение адаптивных особенностей иммунитета мелких млекопитающих представляет самостоятельный практический интерес, особенно в связи с эпидемио-

логическим и лесохозяйственным значением этих животных, их многообразной и весьма существенной био-ценотической ролью, а также широким использованием грызунов для различных лабораторных экспериментов. Разработанный нами способ оценки иммуннологического состояния популяции может быть рекомендован в качестве основы для оценки уровня устойчивости популяций других млекопитающих.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на 7 Межгосударственной межвузовской научно - практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 1995) , 2 съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 работы, 1 находится в печати.

Структура и объём диссертации.

Диссертация изложена на страницах машино-

писного текста. Состоит из введения, трёх глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Иллюстрирована 18 рисунками и 27 таблицами. Список литературы включает 158 источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ГЛАВА 1.Обзор литературы

На основании литературных данных даётся краткая эколого - морфологическая характеристика объектов исследования: обыкновенной бурозубки - Sorex araneus L., рыжей полёвки -Clethrionomys glareolus Schrb., тёмной полёвки - Microbus agrestis L., домовой мыши - Mus musculus L. . Специальный раздел посвящен расмотрению влияния факторов различной природы на иммунный гомеостаз мелких млекопитающих.

Г JI А В А 2. Материал и методика

Материалом для выполнения настоящей работы послужили результаты полевых и лабораторных исследований, проведённых лично автором в 1992-1995 гг. Животные, использовавшиеся для лабораторных экспериментов, содержались в условиях вивария. Животные из природных популяций отлавливались в двух районах Карелии: на площадках Приладожского териологическо-

го стационара (окрестности деревни Карку, Питкярант-ский район Карелии) и на площадках Кончезерской биологической станции (окрестности села Кончезеро, Кондопожский район Карелии).

Отлов проводился в летнее время с помощью жи-воловок. Экспериментальные исследования проведены в лабораториях Петрозаводского университета, на Се-гежском ЦБК.

В начале 90-х годов Институтом иммунологии Минздрава России и Всесоюзной проблемной комиссией "Эпидемиология иммунодефицитов и оценка иммунного статуса" была разработана трёхэтапная система массовых иммунологических обследований людей, основанная на использовании клинико - иммунологиеских и лабораторно - иммунологических методов [Петров Р. В. и соавт.,1992]. Мы применили ряд тестов первого уровня, включенных в эту систему, для оценки иммунного статуса популяций мелких млекопитающих.

С целью отразить функционирование основных звеньев иммунной системы - клеточное, фагоцитарное и гуморальное, а также в связи с необходимостью использовать малые объёмы проб крови животных и учитывать специфику полевых исследований, были выбраны следующие тесты: определение общего числа лейкоцитов и лимфоцитов, определение фагоцитарной активности нейтрофилов, определение иммуноглобулинов классов A, G, М. Кроме того, в крови животных определяли количества Р-белков, которые, по данным литературы, играют важную роль в регуляции активности иммунной системы [Кульберг А.Я., 1996]. Морфологические признаки (пол, возраст, массу тела) определяли стандартными методами.

Всего исследовано 323 зверька, определено 2116 показателей.

Далее в данном разделе даются некоторые практические рекомедации по работе с кровью мелких млекопитающих .

Подсчёт лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов, определение фагоцитарной активности нейтрофилов, определение иммуноглобулинов осуществлялся по Петрову P.M. и соавт. (1992).

Для количественного определения иммуноглобулинов методом РИД (Радиальной иммунодиффузией в геле) в сыворотке крови мелких млекопитающих мы использовали моноспецифические антисыворотки к иммуноглобу-

линам человека, полученные из лаборатории иммунохимии Московского института микробиологии и эпидемиологии им. Н.Ф. Гамалеи. Предположение, что такие исследования возможны, основывались на работе Чер-нохвостовой Е. В. и соавт. (1978) . Мы определяли иммуноглобулины основных классов - A, G, M - у представителей следующих видов : Sorex araneus (обыкновенная бурозубка), Cletrionomis glareolus (рыжая полёвка), Mus musculus (домовая мышь), Microtus agrestis (тёмная полёвка). Удалось выявить IgG у всех перечисленных видов, IgM - у Sorex araneus. Ни у одной из исследуемых таксономических групп не удалсь идентифицировать IgA.

Определение уровней Р-белков осуществлялось по Бартовой и соавт. (1989). Для определения уровней Р-белков в сыворотке крови мелких млекопитающих мы использовали мышиную анти-Р-сыворотку, полученную из лаборатории иммунохимиии Московского института микробиологии и эпидемиологии имени Н.Ф.Гамалеи. С помощью этой анти-Р-сыворот-ки удалось определить количество Р-белков в сыворотке крови представителей следующих родов: Gletrionomis glareolus, Microtus agrestis, Mus musculus. Не получено результатов при определении Р-белков у Sorex araneus (обыкновенная бурозубка).

Определение концентрации растворённого белка и активности катепсина Д в гомогенатах печени, применявшееся в экспериментах с четырёххлористым углеродом, осуществлялось по методу Ансона (Алексеенко Л.П.,1968).

Собранный цифровой материал обработан стандартным вариационно- статистическим методом [Ивантер Э.В., Коросов А.В.,1992]. Часть материалов обработана на ЭВМ с применением пакета статистической обработки информации "Stat-grafics".

ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Иммунологический анализ популяций обыкновенных бурозубок.

В данном разделе анализируется иммунологическое состояние популяций обыкновенных бурозубок в зави-сисмости от географического и биотопического размещения их популяций , пола и,ориентировочно, возраста животных (табл.1, рис 1а,2а).

Таблица 1

Клеточные и гуморальные факторы естественной резистентности крови у мелких млекопитающих, обитающих на территории Карелии.__

Вид животных Лейкоциты, абс. Лимфоциты Акт - ть фагоц-за,% Иммуноглобулины, г/л Р-белки титр

абс. % О М

Обыкновенная бурозубка М 6,01 3,52 58,88 57,00 9,24 1,60 -

ш 0,45 0,30 2,08 5,59 0,12 0,13 -

пип 3,00 1,51 32,60 38,0 8,50 0,45 -

тах 10,20 7,20 85,00 74,0 9,84 2,25 -

СУ,% 26,02 21,00 38,02 21,97 4,04 25,60 -

Рыжая полевка М 11,41 8,38 72,40 63.13 8,63 - 1:18400

т 0,80 1,00 1,98 5,88 0,20 - 5,002

тт 7,60 4,00 52,00 42,0 7,36 - 1:4000

тах 19,00 14,00 88,80 75,0 10,29 - 1:64000

СУ,% 30,21 27,02 20,15 22,25 6,04 - 58,00

Темная полевка М 11,74 8,04 71,39 - 8,69 - 1:7429

т 1,15 0,25 3,30 - 0,35 - 62,25

тт 8,00 6,00 63,90 - 8,15 - 1:4000

тах 18,00 12,00 78,00 - 9,75 - 1:32000

СУ,% 35,41 26,35 35,50 - 9,42 - 60,40

14 1 12 ю Ю

В 8

т 6

м 4 2

лейкоциты

лимфоциты

10 + 8 6 4 2 0

лимфоциты

г/л

1д б

титр 25000 20000 15000 10000 5000 0

Р-белки

Рисунок 1. Влияние пола на иммунологическое состояние обыкновенных бурозубок (а) и рыжих полевок (б)

самцы '*"¥! самки различия достоверны

Лейкоциты

Лимфоциты

5 5

ш 4

Лимфоциты

г/л 10 +

Р-белки

Рисунок 2. Сравнительная характеристика иммунологического состояния крови обыкновенных бурозубок (а) и рыжых полевок (б) из разных эпитопов.

Питкярантский район Кондопожский район различия достоверны

На основе полученных данных сделаны следующие выводы. Зависимость от пола животных для всей выборки статистически достоверно не проявляется ни для одного из выбранных показателей. Однако отмечена существенная зависимость различий по полу изучаемых параметров крови от размещения популяции. Так, в крови животных, отловленных в Питкярантском районе, наблюдается достоверное отличие между самцами и самками в процентном содержании лимфоцитов, количестве иммуноглобулина М, а у бурозубок ольшаника - ещё и в количестве иммуноглобулина в.

У самцов и самок Кондопожского района статистически обосновано различие в абсолютном и процентном содержании лимфоцитов, у бурозубок придорожного кустарника - и в количестве иммуноглобулина М. В результате наблюдаются существенные визуальные различия по полу всех изученных показателей. Зафиксировано влияние биотопического размещения популяции обыкновенных бурозубок на содержание в их крови лимфоцитов, иммуноглобулина М, не наблюдается взаимосвязи между биотопическим размещением популяции и общим количеством лейкоцитов, содержанием иммуноглобулина С.

Установлено влияние географического размещения популяции обыкновенных бурозубок (Пит-кярантский -Кондопожский районы Карелии) на все изучаемые показатели, за исключением общего количества лейкоцитов. Отметим также существенную зависимость различий по полу изучаемых параметров крови от биотопического размещения популяции (особенно это касается содержания лимфоцитов) .

3.2. Иммунологический анализ популяций полёвок.

Рыжие полёвки.

В данном разделе анализируется иммунологическое состояние популяций рыжих полевок в зависисмости от географического и биотопического размещения их популяций и пола животных (табл.1, рис 16,26).

Полученные данные позволяют сделать следующее заключение. В целом по выборкам влияние пола животных на изучаемые иммунологические показатели крови рыжих полёвок статистически подтверждена лишь для процентного содержания лимфоцитов, возраста - для абсолютного содержания лимфоцитов (при сравнениии групп "прибылые раннего выводка" - "прибылые позд-

него выводка"). Не получено статистически значимых различий при рассмотрении влияния размещения популяции рыжих полёвок ни на один из выбранных параметров. Однако установленные достоверные отличия по полу содержания лейкоцитов и лимфоцитов крови рыжих полёвок Кондопожского района, а также внутри некоторых других выборок, позволяют сделать выводы:

1)о зависимости этих показателей от пола,

2)о влиянии размещения популяции на половые различия иммунного гомеостаза крови рыжих полёвок.

Не выявлено чёткого влияния ни одного из рассматриваемых нами факторов (пол, возраст животных, размещение популяции) на содержание иммуноглобулина й и Р-белков в сыворотке крови рыжих полёвок; при этом всё же наблюдается небольшая зависимость количества сывороточного иммуноглобулина 6 от возраста и пола животных. Отмечено некоторое влияние возраста животных на содержание в их крови лейкоцитов и, особенно, лимфоцитов.

Тёмные полёвки■

Установленные иммунологичекие показатели крови тёмных полёвок представлены в таблице 1. Далее в данном разделе анализируется иммунологическое состояние крови тёмных полёвок с целью выявления возможных факторов иммунологической неоднородности популяции этих животных. Полученные данные позволяют сделать ориентировочное заключение о существенном сходстве в содержаниии лейкоцитов, общем количестве лимфоцитов, содержании иммуноглобулина 6, уровне Р-белков в крови рыжих и тёмных полёвок. В крови тёмных полёвок наблюдается определённая зависимость содержания лейкоцитов, иммуноглобулина й, уровня Р-белков от географического размещения популяции животных, содержания лейкоцитов - от биотопического размещения популяции; не выявлено взаимосвязи между количеством иммуноглобулина С, уровнем Р-белков сыворотки крови и биотопическим размещением популяции тёмных полёвок. Возраст тёмных полёвок из всех изучаемых параметров крови в наибольшей степени оказывает влияние на содержание сывороточного иммуноглобулина в.

3.3. Динамика, иммунологического состояния крови у обыкновенных бурозубок и рыжих полёвок в течение дня

Обыкновенные бурозубки.

У обыкновенных бурозубок наблюдается слабая тенденция к уменьшению общего количества лейкоцитов крови в течение дня, однако достоверной является лишь разница между 9 - и 21 - часовыми значениями данного показателя. Абсолютное количество лимфоцитов крови в течение дня также уменьшается, при чём гораздо более чётко и достоверно, чем количество лейкоцитов; лишь в 21 час отмечено некоторое визуальное увеличение количества лимфоцитов (по сравнению с 18 часами). Процентное содержание лимфоцитов в течение дня сначала несколько увеличиваетя, затем происходит резкое уменьшение, и далее - остепенное уменьшение значений этого параметра; все падения процентного содержания лимфоцитов достоверны. В течение дня у обыкновенных бурозубок не зафиксировано изменения содержания сывороточных иммуноглобулинов С и М - небольшие визуальные колебания значений данных параметров статистически не обоснованы. Отметим также постепенное нарастание варьирования значений количества иммуноглобулина в в течение дня коэфициенты вариации увеличиваются от 2,08% (9 часов утра) до 8,91% (21 час). Коэффициенты вариации других показателей в течение дня также испытывают существенные колебания.

Рыжие полёвки.

У рыжих полёвок зафиксировано чёткое достоверное уменьшение общего количества лейкоцитов крови в первой половине дня (9 - 15 часов) . Увеличение содержания лейкоцитов в 21 час (по сравнению с 18 часами) совпадает с усилением колебаний значений этого показателя - коэффициент вариации в данном случае равен 28,02%, в то время как для остальных выборок (9,12, 15,18 часов) коэффициенты вариации колеблются от 11,05% до 18,30%. Абсолютное содержание лимфоцитов крови в течение дня также уменьшается, при чём наиболее чётко это наблюдается в районе 15 - 18 часов. Разброс показателей абсолютного количества лимфоцитов в группах "18 часов" и "21 час" существенно больше, чем в первых трёх группах. В отношении процентного содержания лимфоцитов картина

несколько иная. Достоверным является лишь уменьшение данного показателя вечером (18 и 21 час) по сравнению с первой половиной дня (9,12,15 часов), а также разница между 18 - и 21 - часовыми измерениями. В первой половине дня процентное содержание лимфоцитов практически не изменяется. Зафиксировано достоверное увеличение содержания сывороточного иммуноглобулина 6 в направлении от 9 к 12 часам утра, все остальные колебания значений этого показателя в течение дня не имеют статистического подтверждения. Средние значения уровней Р-белков (по выборкам: 9,12,15,18,21 час) почти не изменяются.

Таким образом, изменения исследуемых показателей естественной резистентности крови у обыкновенных бурозубок и обыкновенных полёвок в течение дня аналогичны.

3.4. Влияние ритмологимеских факторов на. иммунный статус мышей.

Сезонная динамика.

В эксперименте с домовой мышью измерение показателей крови проводили в ноябре (осень), феврале (зима), мае (весна).

Выявлена сезонная периодичность иммунологической реактивности крови у мышей; при этом разные звенья иммунитета в различной степени подвержены сезонным колебаниям. Установлено, что общее содержание лейкоцитов осенью достоверно больше, чем зимой и весной. Козакевич В.П. (1956), изучавший жёлтого и малого сусликов Волжско - Уральских Песков, установил, что повышение лейкоцитоза совпадает с неблагоприятными условиями существования грызунов в природе. Барагунова Е.А. (1994) у различных видов мелких млекопитающих (полевая и лесная мыши, малые бурозубки и бурозубки Радде) выявила разные циклы сезонных колебаний параметров белой крови.

Абсолютное содержание лимфоцитов крови у мышей осенью достоверно больше, чем весной (соответственно 6, 674:0, 18, 6, 101:0,24 тыс. в 1 мм ) ; количество сывороточного иммуноглобулина С осенью достоверно больше (7,48+;0,10 г/л), чем зимой (6,900,16 г/л); уровень Р-белков весной достоверно выше, чем зимой и осенью соответственно 1:5300-1400, 1:1910-771, 1:1800-409). Не выявлено влияния времени года на фагоцитарную активность нейтрофилов, а

также на процентное содержание лимфоцитов в крови мышей.

Суточные изменения.

В эксперименте с белыми мышами измерение показателей крови проводили утром (9-10 часов) и вечером (18 - 19 часов). Нами не зафиксированы статити-чески обоснованные суточные колебания ни одного из изучаемых параметров резистентности.

3.5. Влияние токсических, факторов на иммунный статус мышей.

Поллютанты Сегежского ЦБК.

На основе полученных данных установлено (рис.3), что при ингаляционном воздествии комплекса токсических веществ, содержащихся в атмосфере варочного цеха Сегежского ЦБК, в организме домовой мыши (Mus musculus) наблюдаются разнонаправленные изменения показателей крови.

В клеточном звене иммунитета наблюдается лейкоцитоз и резкое уменьшение процентного содержания лимфоцитов; абсолютное содержание лимфоцитов имеет тенденцию к уменьшению. Не зафиксировано изменения активности нейтрофильного фагоцитоза. В гуморальном звене отмечено резкое повышение уровня Р-белков; содержание иммуноглобулина G не изменяется. Полученные результаты, вкупе с морфологическими изменениями (убавка веса, частичное облезание шерсти) свидетельствуют о дисбалансе защитных сил организма мышей после их пребывания на Сегежском ЦБК. Проведённый корреляционный анализ выявил более высокие коррелятивные связи между рассматриваемыми показателями крови в опытной группе по сравнению с контрольной; вероятно, усиление коррелятивных связей можно рассматривть как адаптивную реакцию в ответ на неблагоприятное экзогенное воздействие.

Четырёххлористый углерод.

Двум группам белых мышей ежедневно подкожно вводили по 0,01 мл четырёххлористого углерода (СС1^) 15 и ЗО дней. Установлено (рис.3), что при метаток-сическом воздействии СС1ц в организме домовой мыши имеют место дозозависимые, взаимосвязанные изменения показателей крови. В клеточном звене иммунитета наблюдается лейкоцитоз на фоне лимфопении и угнете-ни нейтрофильного фагоцитоза, в гуморальном звене

иммунитета - увеличение содержания иммуноглобулина 6 и повышение уровня Р-белков.

титр

р-белки

г/л 8

-- - III 4 1 1

и II I

ш шииН^г.' 1;... Л

ни

1»ь

Рисунок 3. Влияние токсических факторов на иммунный

статус мышей

контроль

поллютангы Сегежского ЦБК фтор питьевой воды (15 мг/л) 15 дней воздействия СС14 30 дней воздействия СС14

Анализ коррелятивных взаимоотношений между рассматриваемыми показателями крови в целом не выявил каких - либо чётких изменений, связанных с воздействием CClij ; при этом следует отметить усиление коррелятивных связей по мере воздействия CCli| между активностью фагоцитоза, с одной стороны, и количеством лейкоцитов и лимфоцитов, уровнем Р-белков, с другой.

При действии CCI в печени домовой мыши наблюдается снижение активности катепсина D и уменьшение количества растворённого белка, что свидетельствует о глубоких нарушениях функционирования лизосомаль-ного клеточного аппарата при метатоксическом воздействии CCI .

Фтор питьевой воды.

Установлено, что под воздействием фтора, содержащегося в питьевой воде в концентрации 15 мг/л (рис.3), разные звенья иммунного статуса домовой мыши претерпевают неадекватные изменения (все изменения достоверны, р<0,05). В клеточном звене наблюдается лейкоцитоз при угнетении фагоцитоза и при снижении содержания лимфоцитов увеличивается содержание нейтрофилов. В гуморальном звене иммунитета отмечено усиление выработки иммуноглобулина G и Р-белков. Проведённый корреляционный анализ выявил усиление адаптивных возможностей гуморального и фагоцитарного звеньев иммунитета при парентеральном воздействии фтора на организм мышей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В результате проведённых исследований установлены параметры крови для обыкновенной бурозубки, рыжей и тёмной полёвок,обитающих на территории Карелии. Как видно из табл.1, наблюдается как сходство, так и различия в составе крови изученных видов животных. Так, в крови рыжих полёвок общее содержание лейкоцитов в два раза достоверно больше, чем в крови обыкновенных бурозубок. В крови рыжих полёвок как абсолютное, так и процентное содержание лимфоцитов достоверно больше, чем в крови обыкновенных бурозубок. Установленное в наших исследованиях высокое процентное содержание лимфоцитов крови у рыжих и тёмных полёвок и обыкновенных бурозубок ана-

логично результатам, полученное Барагуновой Е.А. (1994) при изучении параметров крови мелких млекопитающих Кавказа; в лейкограмме всех изученных этим автором видов также наблюдается лимфоцитарный профиль . А вот жёлтый суслик, по данным Козакевича В.П. (1956), имеет ясно выраженный нейтрофильный профиль крови; в крови же малого суслика, по данным этого же автора, отмечается почти равное соотношение нейтрофилов и лимфоцитов.

Не зафиксировано достоверного различия в содержании сывороточного иммуноглобулина в между рыжими полёвками и обыкновенными бурозубками; разброс показателей количества иммуноглобулина С у обеих групп животных самый маленький из всех выбранных показателей крови. Отметим также, что показатели содержания иммуноглобулина М в сыворотке крови обыкновенных бурозубок подвержены существенно большим колебаниям, чем показатели содержания иммуноглобулина С у этих животных (коэффициенты вариации соответственно 25,60% и 4,04%).

Отмечено существенное сходство в составе крови рыжих и тёмных полёвок (табл.1). Наблюдается широкое варьирование уровней Р-белков у этих видов животных (соответственно 1:4000 — 1:64000 И {'АООО-У-ЦОЩ-

Параметры крови у рассматриваемых нами животных претерпевают значительные изменения под влиянием различных факторов. Мы проанализировали иммунологическое состояние популяций бурозубок и полёвок в зависимости от географического и биотопического размещения популяций, пола и возраста животных.

Пол животных. По нашим данным, пол животных оказывает существенное влияние на иммунный статус как обыкновенных бурозубок, так и рыжих полёвок. Клеточные факторы естественной резистентности крови (содержание лейкоцитов и лимфоцитов)подвержены половым различиям в большей степени, чем гуморальные (количество иммуноглобулинов и уровень Р-белков). Влияние пола более отчётливо прослеживается на иммунный гомеостаз рыжих полёвок, чем обыкновенных бурозубок; при этом существенное влияние для обеих групп животных имеет размещение популяции (как географическое, так и биотопическое) , а для рыжих полёвок - и возраст животных.

Географическое размещение популяции. Исследование обыкновенных бурозубок, отловленных в Кондопож-

ском и ГТиткярантском районах Карелии, указывает на иммунологическую специфичность данных внутривидовых группировок, длительное время развивавшихся в условиях пространственной изоляции. Рыжие полёвки проявляют в этом отношении меньшую специфичность.

Биотопическое размещение популяции. Параметры крови обыкновенных бурозубок претерпевают изменения в зависимости от биотопического размещения популяции; в наибольшей степени это наблюдается для содержания сывороточного иммуноглобулина М, в наименьшей - для общего содержания лейкоцитов. Рыжие полёвки проявляют в этом отношении меньшую специфичность ; некоторое влияние биотопического размещения популяции рыжих полёвок наблюдается для содержания в их крови общего количества лейкоцитов. Вероятно, выявленная видовая специфика иммунного статуса землероек и полёвок в зависимости от биотопического размещения их популяций связана с тем, что обыкновенные бурозубки - более экологически лабильные животные, и данная зависимость, очевидно, является для них положительным фактором приспособления к изменяющимся условиям среды.

Для рыжих полёвок установлено также некоторое влияние возраста животных на изучаемые иммунологические показатели крови (в особенности данный факт относится к абсолютному содержанию лимфоцитов); интенсивность выявленных изменений взаимосвязана с полом животных.

Нами отмечена очевидная динамика клеточных факторов естественной резистентности крови (количества лейкоцитов и лимфоцитов) у обыкновенных бурозубок и рыжих полёвок с максимумом в утренние и минимумом в вечерние часы, более чётко выраженная У полёвок. Видовые различия в величине суточных изменений данных параметров связаны, вероятно, с различными типами суточной активности землероек и полёвок: первые активны в течение всех суток, вторые имеют полифазный тип активности с шах между 10 и 16 часами. Не выявлено суточных изменений гуморальных факторов резистентности (содержания иммуноглобулинов и уровня Р-белков), за исключением достоверного повышения содержания сывороточного иммуноглобулина О у рыжих полёвок в утренние часы. Данные наблюдения, вкупе с достоверностью отличий между показателями количества лейкоцитов и лимфоцитов у рыжих полёвок и обык-

новенных бурозубок, свидетельствуют, по-видимому, в пользу большей видоспецифичности клеточных факторов иммунитета по сравнению с гуморальными.

Очевидно, что особенности иммунологического состояния у обыкновенных бурозубок и рыжих полёвок являются их видовыми признаками, связанными с условиями, в которых шло формирование вида, биологическими механизмами приспособления организма к данным условиям. Эти особенности особенно чётко проявляются, несмотря на обитание бурозубок и полёвок в одной географической зоне (Карелия); это говорит о генетически закреплённом уровне защитных сил организма. Уровень неспецифической защиты у этих видов в различной степени зависит от пола животных, размещения популяций, а для рыжих полёвок - и от возраста, что свидетельствует об иммунологической неоднородности данных таксономических групп.

Вместе с тем уровень иммунитета особей какой-либо популяции в природных условиях подвержен такому количеству воздействий, что трудно определить значимость и последствия каждого из них [Шубик В.М.,197б]. Поэтому целесообразно рассмотрение влияния факторов различной природы на иммунный го-меостаз мелких млекопитающих в лабораторных условиях. В качестве объекта исследования в данном случае мы выбрали домовую мышь(Mus musculus) . В отличие от землероек и полёвок, у домовой мыши нами не зафиксированы статистически обоснованные суточные колебания ни одного из изучаемых параметров резистентности. Сезонные изменения естественной резистентности крови у домовой мыши, по нашим данным, напротив, имеют место; не выявлено лишь достоверного изменения фагоцитарной активности нейтрофилов.

Абсолютное содержание лимфоцитов в меньшей степени подвержено сезонным колебаниям, чем такие показатели, как общее содержание лейкоцитов, процентное содержание^шмфоцитов, количество иммуноглобулина G, уровень Р-белков. Как нам представляется, указанные сдвиги - проявление сезонной биоритмичности иммунологического равновесия как одной из сторон общего гомеостаза организма. Отмеченные колебания показателей крови можно рассматривать как эво-люционно - обусловленную, защитно - приспособительную (компенсаторную) перестройку всего организма мыши в течение года.

Анализируя особенности влияния различных экологических фактров на иммунный статус мелких млекопитающих, нельзя не вспомнить положение И.М.Сеченова о том, что кровь представляет собой преформирован-ную внешнюю среду. Мы рассмотрели поступление в организм домовой мыши выбранных нами различных токсических агентов разными путями: четырёххлористый углерод -подкожное введение, фтор - парентеральное поступление (с питьевой водой), поллютанты Сегеж-ского ЦБК - ингаляционное воздествие. Показано, что токсические факторы вызывают чёткие изменения почти всех показателей иммунитета. Исключение составляют фагоцитарная активность нейтрофилов и количество иммуноглобулина С, изменения которых практически не выявлены у мышей, подвергавшихся ингаляционному воздествию поллютантов Сегежского ЦБК. Отметим также, что в абсолютном содержании лимфоцитов выявлены достоверные изменения лишь при парентеральном воз-дествии фтора на организм мыши, а два других токсических фактора (четырёххлористый углерод и поллютанты Сегежского ЦБК) вызывают менее значительные изменения аболютного содержания лимфоцитов.Таким образом, если изменения общего содержания лейкоцитов, процентного содержания лимфоцитов, уровней Р-белков под воздействием рассмотренных токсических факторов являются примерно одинаковыми по степени отчётливости, то изменение абсолютного содержания лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов, количества иммуноглобулина С, зависят от способа токсического воздействия на организм домовой мыши.

ВЫВОДЫ

1. Факторы устойчивости организма мелких млекопитающих проявляют видовую специфичность, при этом таксономически близкие виды близки и иммунологиче-ски. Рыжие полёвки, по сравнению с обыкновенными бурозубками, характеризуются более высокими показателями клеточных факторов естественной резистентности крови, что, повидимому, 1) свидетельствует о большей видоспецифичности клеточного иммунитета по сравнению с гуморальным; 2) отражает более высокие защитные свойства крови полёвок. Отмечено существенное сходство в составе крови рыжих и тёмных полёвок; широкое варьирование уровней Р-белков у этих видов свидетельствует, вероятно, об адаптивном по-

лиморфизме данного показателя, придающем популяции необходимую устойчивость.

2. Используемый впервые в практике зоологических исследований комплекс иммунологических показателей (лейкоциты, лимфоциты, фагоцитоз, иммуноглобулины, Р-белки) позволил выявить существенную иммунологическую разнокачественность популяций бурозубок и полёвок. Установлена зависимость иммунного статуса землероек и полёвок от географического (Питкярантский -Кондопожский районы Карелии) и биотопического размещения их популяций, связанная, по-видимому, с особенностями экологии данных видов животных. Для обыкновенных бурозубок эта связь проявляется более чётко и является, очевидно, положительным фактором приспособления популяций к изменяющимся условиям среды.

3. Выявленный половой диморфизм в уровне неспецифической защиты у землероек и полёвок более характерен для клеточных факторов естественной резистентности и зависит у обеих групп животных от размещения их популяций, а у рыжих полёвок - и от возраста .

4. У землероек и полёвок наблюдается параллельная суточная динамика количества лейкоцитов и лимфоцитов крови с шах в утренние и min в вечерние часы, более чётко выраженная у полёвок, что связано, вероятно, с различными типами суточной активности этих животных.

Сезонная периодичность иммунологического состояния крови у домовой мыши в наибольшей степени характерна (из рассматриваемых нами параметров) для общего содержания лейкоцитов, уровня Р-белков, количества иммуноглобулина G. Не установлено суточных колебаний показателей естественной устойчивости у домовой мыши.

5. Поддержание популяционного гомеостаза мелких млекопитающих под воздействием факторов различной природы (токсических, ритмологических, алиментарных) сопровождается перестройками иммунологического баланса организма, а также изменением иммунорегуля-ции, различающихся по силе, подвижности и уравновешенности, - не всегда зависящими от степени влияния фактора и способа воздействия его на организм животных. Противофазность колебаний клеточных и гуморальных факторов устойчивости можно рассматривать в

качестве компенсаторной рекции, направленной на поддержание оптимального реактивного состояния организма за счёт наиболее эффективных в данных условиях механизмов защиты.

6. Для количественного определения сывороточного иммуноглобулина G у обыкновенной бурозубки, домовой мыши, рыжей и тёмной полёвок можно использовать моноспецифическую антисыворотку к иммуноглобулину G человека. Мы склонны объяснить данный факт сходностью структуры цепей иммуноглобулина G у разных видов животных. Антисыворотки к иммуноглобулину М человека реагируют с иммуноглобулином М обыкновенной бурозубки.

Для количественного определения уровней Р-белков в сыворотке крови рыжей и тёмной полёвок можно использовать анти-Р-сыворотки мыши, что говорит, очевидно, о большом сходстве клеточных рецепторов у мышей и полёвок.

7. Разработанный нами комплекс тестов для оценки иммунного состояния популяции Micro-mammalia может быть рекомендован к применению в популяционно-экологических исследованиях других мелких млекопитающих - как для оценки общего состояния животных, так и для определения уровня устойчивости естественных популяций.

Список работ, опубликованных по теме диссертации :

1. Бацер JI.M., Моисеева Т.А. Влияние поллютан-тов целлюлозно-бумажного комбината на иммунный статус организма // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Матер. 7 Межгос. Межвуз. научно-практич. конф.- С.-Петербург, 1995.- С.102.

2. Моисеева Т.А. К оценке экологической ситуации с помощью иммунологических тестов // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Матер. 7 Межгос. Межвуз. научно-практич. конф.-

С.-Петербург, 1995.- С.115.

3. Болотников И.А., Крупнова М.Ю., Немова H.H., Моисеева Т. А. Иммунологическая реактивность мышей при отравлении CCI // 2 съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока.- Новосибирск, 1995.- С.49 - 50.

4. Бацер JI.M., Моисеева Т. А. Моделирование влияния фтора питьевой воды на некоторые иммуноло-

гические показатели организма // Проблемы экологической токсикологии.- Петрозаводск, 1998.- С.79 -82.

5. Моисеева Т.А. Иммунологическое состояние популяции обыкновенных бурозубок (Богех агапеиз эр.) - в печати.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Моисеева, Татьяна Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ЭКОЛОГО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОБЪЕКТОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1.1.Обыкновенная бурозубка - Sorex araneus L

1.1.2.Рыжая полёвка - Clethrionomys glareolus Schrb

1.1.3.Тёмная полёвка - Microtus agrestis L

1.1. 4 .Домовая мышь - Mus musculus L

1.2. ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ИММУННЫЙ Г0МЕ0СТАЗ МЕЛКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

2.1. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИЗУЧЕНИЮ КРОВИ МЕЛКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

2.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИЙ ОБЫКНОВЕННЫХ БУРОЗУБОК

3.2. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИЙ ПОЛЕВОК

3.2.1. Рыжие полёвки

3.2.2. Тёмные полёвки

3.3. ДИНАМИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ КРОВИ У ОБЫКНОВЕННЫХ БУРОЗУБОК И РЫЖИХ ПОЛЕВОК

В ТЕЧЕНИЕ ДНЯ.

3.3.1. Обыкновенные бурозубки

3.3.2. Рыжие полёвки

3.4. ВЛИЯНИЕ РИТМОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ИММУННЫЙ СТАТУС ДОМОВОЙ МЫШИ

3.4.1. Сезонная динамика

3.4.2. Суточные изменения

3.5. ВЛИЯНИЕ ТОКСИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ИММУННЫЙ

СТАТУС ДОМОВОЙ МЫШИ.

3.5.1. Поллютанты Сегежского ЦБК

3.5.2. Четырёххлористый углерод

3.5.3. Фтор питьевой воды (15 мг/л)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунологические механизмы устойчивости мелких млекопитающих Карелии"

Мелкие млекопитающие - грызуны и насекомоядные - важнейшее звено трофоценотических цепей, во многом определяющее формирование и развитие природных экосистем, фактическую и потенциальную их продуктивность [Ивантер Э.В. и соавт., 1985]. Благодаря высокой численности, видовому разнообразию и экологической лабильности эти животные проявляют наиболее рельефные адаптивные реакции на разнообразные формы внешних воздействий и могут поэтому рассматриваться в качестве ценной биологической модели для построения общей теории адаптаций, разработки методов биоиндикации при оценке направлений и масштабов антропогенных воздействий на животных. Вместе с тем изучение адаптивных особенностей иммунитета мелких млекопитающих представляет самостоятельный практический интерес, особенно в связи с эпидемиологическим и лесохозяйственным значением этих животных, а также их многообразной и весьма существенной биоценотической ролью.

В связи с существенным ухудшением экологической ситуации во многих регионах мира, в том числе ряде рег-ионов России,разработка систем оценок состояния окружающей среды чрезвычайно актуальна. Для успешной разработки системы биомониторинга эффектов влияния на организм вредных факторов производственной и окружающей среды необходим экспериментальный поиск и обоснование информативных критериев, позволяющих оценивать как специфические, так и неспецифические сдвиги со стороны важнейших органов и систем организма. Исследования последних лет показали, что иммунная система, как важнейший компонент комплексного механизма гомеостаза, наиболее чувствительный индикатор неблагоприятных экзогенных воздействий [Шубик В.М.,1976;

Хаитов P.M. и соавт., 1995] . Любая форма иммуногенеза включает в себя элементы более общих адаптационных реакций, и наоборот, общие адаптационные реакции нередко (а может быть, и практически всегда) предполагают включение механизмов иммуногенеза [Вольский И.Н.,1991]. В связи с ограниченными на сегодняшний день возможностями о'ценки состояния экосистем по количественным показателям представляется целесообразным на современном этапе развития биомониторинга рассмотрение иммунологической системы оценок окружающей среды.

Подчеркнем, что иммунитет популяций мелких млекопитающих в естественных условиях обитания на территории Карелии до настоящего времени практически не изучался. Единичны работы по изучению иммунного статуса популяций и в других районах [Смирнова Н.И.,1975; Жуков В.В.,1970]. А между тем сведения, характеризующие качественные и количественные изменения иммунного гомеостаза, представляют особый интерес, так как результаты таких исследований позволяют лучше понять экологию вида и популяции, их адаптационные возможности, что выходит прямо на микроэволюционную теорию, мониторинг среды и климата, охрану генофонда и управление популяциями животных [Барагунова Е.А., 1994] .

Изучение процессов микроэволюции невозможно без глубокого и всестороннего исследования межвидовых различий и внутривидовой структуры. Большинство работ по этому вопросу основывается на анализе морфологического сходства изучаемых форм, что не всегда позволяет выявить специфические особенности организма. Не случаен поэтому интерес систематиков к физиологическим, биохимическим, кариологи-ческим, экологическим и другим исследованиям. При этом наиболее интересные данные получены при использовании иммунологических показателей, способных улавливать генетически закреплённые изменения в ходе эволюционного развития организмов. Значение иммунологического метода в познании процессов эволюции в настоящее время признаётся многими исследователями [Васильев Н.В.,1978; Болотников И.А., Румянцев С.Н.,1991].

Популяция живых организмов представляет собой непосредственный обьект воздействия различных природных и антропогенных факторов. Как форма существования вида популяция обеспечивается выживанием и воспроизведением населения вида в конкретных условиях. Эта функция осуществляется однонаправленной адаптацией всех особей в популяции, системой закономерных взаимодействий особей, определяющей адаптивное распространение их в пространстве, поддержание устойчивых функциональных контактов и успешной репродукции [Экология популяций, 1991]. Применительно к мелким млекопитающим как животным, компенсирующим низкую индивидуальную стойкость приобретением и реализацией групповой стойкости, популяционный подход к изучению иммунологических механизмов адаптаций является не просто полезным, но и единственно правильным, ибо только он наиболее точно и полно соответствует основному для мелких животных популя-ционному способу существования [Ивантер Э.В., 1985].

Уровень иммунитета особей какой - либо популяции определяется, во-первых, общими свойствами отдельной особи (то есть видовыми особенностями строения); во-вторых, особенностями состава данной популяции (главным образом ее генетического разнообразия); в-третьих, характером взаимодействий между особями данной популяции при данной конкретной ситуации (конкуренция, сотрудничество)'; в-четвертых, массой воздействий абиотических и биотических факторов данного биогеоценоза на изучаемую популяцию [Шубик В.М., 1976]. При этом на иммунитет особи направлено такое количество воздействий, что трудно определить значимость и последствия каждого из них. Поэтому анализ адаптивных особенностей иммунитета любых организмов невозможен без моделирования влияния различных экологических факторов в лабораторных условиях; целесообразно рассмотрение факторов различной природы, например, токсических, биологических, алиментарных. Параллельно отметим, что мыши, наряду с крысами, морскими свинками, кроликами, - самый распространенный обьект исследования при изучении самых разных процессов. Однако иммунный статус мышей как таксономической группы изучен крайне мало. Результаты, получаемые разными авторами, часто противоречивы по своим количественным характеристикам. Поэтому нам представляется актуальным комплексный подход к выявлению и систематизации особенностей иммунитета мышей, определяющих их приспособительные возможности.

Таким образом, в связи с вышеизложенным, целью настоящей работы явилось изучение иммунологических механизмов приспособления на разнообразные формы внешних воздействий избранных видов мелких млекопитающих на примере представителей отрядов грызуны - Rodentia и насекомоядные Insectívora.

В соответствии с поставленной целью, в наши задачи входило:

- подбор, модификация и отработка методов для оценки иммунного статуса популяции мелких млекопитающих;

- иммунологический анализ поддержания популяционного гомеостаза в условиях действия относительно постоянных факторов среды обитания с учётом разнокачественности особей;

- моделирование влияния техногенного загрязнения среды на иммунный статус популяции в экспериментальных условиях;

- сравнительная оценка выявленного иммунологического состояния у разных видов мелких млекопитающих.

Выражаю глубокую благодарность моему научному руководителю, заведующему кафедрой зоологии и экологии, декану биологического факультета Петрозаводского государственного университета, члену - корреспонденту РАН, профессору Эрнесту Викторовичу Ивантеру за всестороннюю помощь и поддержку при работе над диссертацией.

Искренне признательна научному консультанту данной темы, профессору Игорю Алексеевичу Болотникову за постоянное внимание и большую помощь, оказанные при выполнении работы.

За ряд ценных методических указаний благодарю Людмилу Михайловну Бацер.

Очень признательна директору Института биологии КНЦ РАН, д.б.н. Немовой Нине Николаевне и научному сотруднику Института биологии КНЦ РАН, к.б.н. Крупновой Марине Юрьевне за содействие в разработке некоторых экспериментов.

Благодарю доцента кафедры зоологии и экологии ПГУ Ко-росова Андрея Викторовича за консультации по статистическому анализу.

Выражаю благодарность заведующей вивария Петрозаводского государственного университета Чернецкой Светлане Ивановне, старшему лаборанту кафедры зоологии и экологии ПГУ Зайцевой Галине Владимировне, старшему лаборанту кафедры биологической и биоорганической химии и биотехнологии ПГУ Горожанкиной Наталье Николаевне за содействие в работе.

Заключение Диссертация по теме "Зоология", Моисеева, Татьяна Алексеевна

ВЫВОДЫ

1. Факторы естественной устойчивости организма мелких млекопитающих проявляют видовую специфичность, при этом таксономически близкие виды близки и иммунологически. Рыжие полёвки, по сравнению с обыкновенными бурозубками, характеризуются более высокими показателями клеточных факторов естественной резистентности крови, что, по-видимому, 1) свидетельствует о большей видоспецифичности клеточного иммунитета по сравнению с гуморальным; 2) отражает более высокие защитные свойства крови полёвок. Отмечено существенное сходство в составе крови рыжих и тёмных полёвок; широкое варьирование уровней Р-белков у этих видов свидетельствует, вероятно, об адаптивном полиморфизме данного показателя, придающем популяции необходимую устойчивость.

2. Используемый впервые в практике зоологических исследований комплекс иммунологических показателей (лейкоциты, лимфоциты, фагоцитоз, иммуноглобулины, Р-белки) позволил выявить существенную иммунологическую разнокачест-венность популяций бурозубок и полёвок. Установлена зависимость иммунного статуса землероек и полёвок от геграфи-ческого (Питкярантский - Кондопожский районы Карелии) и биотопического размещения их популяций, связанная, по-видимому, с особенностями экологии данных видов животных. Для обыкновенных бурозубок эта связь проявляется более чётко и является, очевидно, положительным фактором приспособления популяции к изменяющимся условиям среды.

Сезонная периодичность иммунологического состояния крови у домовой мыши в наибольшей степени характерна (из рассматриваемых нами параметров) для общего содержания лейкоцитов, уровня Р-белков, количества IgG. Не установлено суточных колебаний показателей естественной устойчивости у домовой мыши.

5. Поддержание популяционного гомеостаза мелких млекопитающих под воздействием факторов различной природы (токсических, ритмологических, алиментарных) сопровождается перестройка и иммунологического баланса организма, а также изменением иммунорегуляции, различающихся по силе, подвижности и уравновешенности,- не всегда зависящими от степени влияния фактора и способа воздействия его на организм животных. Противофазность колебаний клеточных и гуморальных факторов устойчивости можно рассматривать в качестве компенсаторной реакции, направленной на поддержание оптимального реактивного состояния организма за счёт наиболее эффективных в данных условиях механизмов защиты.

151 ноглобулину М человека реагируют с иммуноглобулином М обыкновенной бурозубки.

Для количественного определения уровней Р-белков .в сыворотке крови рыжей и тёмной полёвок можно использовать анти Р-сыворотки мыши, что говорит, очевидно, о большом сходстве клеточных рецепторов у мышей и полёвок.

7. Разработанный нами комплекс тестов для оценки иммунного состояния популяции Мл-СготаттаНа может быть рекомендован к применению в популяционно - экологических исследованиях других мелких млекопитающих - как для оценки общего состояния животных, так и для определения уровня устойчивости естественных популяций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рассмотренные в настоящей работе материалы, безусловно, не исчерпывают всего многообразия вопросов и проблем, связанных с изучением иммунологических механизмов адаптации мелких млекопитающих к условиям существования. Уровень структурированности, целостности и авторегуляции популяции как надорганизменной системы в условиях сложной и динамической среды определяет диапазон непрерывного функционирования лабильных адаптивных реакций. В этом смысле можно утверждать, что объективная оценка иммунного статуса возможна только при учёте балансированного действия многих показателей иммунной системы. При этом важнейшим условием обеспечения адаптивного гомеостаза популяции является гетерогенность составляющих её особей по основным генетически детерминированным свойствам [Камёнов Д.А., 1980] .

Предварительная серия исследований была посвящена выбору методов оценки иммунного статуса мелких млекопитающих, в связи с необходимостью использования малых объёмов проб крови и выполнения анализов в полевых условиях. В специальной литературе почти отсутствуют сведения об иммунологических механизмах устойчивости мелких млекопитающих, не разработаны и методические подходы к изучению этих вопросов. Одна из причин - сложности изучения животных, ведущих скрытый образ жизни и трудно доступных для детальных исследований. Не претендуя на создание методологии изучения иммунного статуса популяции мелких млекопитающих, мы тем не менее попытались использовать ряд иммунологических тестов первого уровня, предложенные Институтом иммунологии Минздрава России и Всесоюзной проблемной комиссией "Эпидемиология иммунодефицитов и оценка иммунного статуса" [Петров Р.В. и соавт.,1992], для количественной характеристики иммунологического состояния некоторых таксономических групп мелких млекопитающих.

Определение содержания лейкоцитов, лимфоцитов и ней-трофилов, определение фагоцитарной активности нейтрофилов в крови мелких млекопитающих проводилось общепринятыми методами [Петров P.M. и соавт.,1992]. Для количественного определения иммуноглобулинов использовали моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам человека. Удалось определить содержание иммуноглобулинов G, M у обыкновенной бурозубки (Sorex araneus); содержание иммуноглобулина G: у домовой мыши (Mus musculus), рыжей полёвки (Glethrionomys glareolus), тёмной полёвки (Microtias agrestis). Чернохвостова E.B. и соавт. (1978) также указывают на то, что с помощью антисыворотки к иммуноглобулинам человека у различных животных лучше всего идентифицируется именно иммуноглобулин G (эти авторы не изучали содержание иммуноглобулинов у рассмотренных нами таксономических групп животных). Мы склонны объяснить данный факт сходностью структуры цепей иммуноглобулина G у разных видов животных.

В связи с вышеизложенным интересной представляется работа Hasui M. с соавт. (1994). Мышам seid вводили В-лимфоциты новорождённых детей и Т-лимфоциты взрослых лиц. У мышей выявлен синтез человеческого IgG с максимумом через б недель после переноса. Удаление из смеси Т-лимфоцитов популяции СД4- Т-лимфоцитов приводило к отсутствию IgG в сыворотке мышей. Обогащение популяции СД4- Т-лимфоцитов усиливало выработку IgG. Наряду с IgG у мышей зафиксирована выработка иммуноглобулина M человека.

С помощью анти-Р-сыворотки мыши нам удалось определить уровень Р-белков у рыжих и тёмных полёвок (Clethtionomys glareolus и Micrjtus agrestis); не получены результаты по определению Р-белков у обыкновенных бурозубок (Sorex araneus) - см. раздел 3.1. Вероятно, использование анти-Р-сыворотки мыши для количественного определения уровня Р-белков у полёвок возможно вследствие того, что'мыши и полёвки относятся к одному семейству Мышиные (Murida), отряд Грызуны (Rodentia) - см. рис.1. Поскольку Р-белки представляют собой не что иное, как продукты распада клеточных рецепторов, очевидно, можно говорить о большом сходстве клеточных рецепторов у мышей и полёвок. Отсутствие результатов по определению Р-белков у относящихся к отряду Насекомоядные (Insectívora) землероек - бурозубок, по нашему мнению, может свидетельствовать о различии определённых участков клеточных рецепторов у мышей и бурозубок - ответственных, вероятно, за преципитирующие (агглютинирующие) свойства или функции.

В доступной литературе мы встретили лишь несколько работ, посвящённых сравнительной характеристике иммунитета различных таксономических групп млекопитающих [Жуков

B.В.,1970; Смирнова Н.И.,1975; Мельник Э.Л.,1976; Румянцев С.Н.,1983; Берестов В.А., Узенбаева Л.В.,1983; Kondo N. и соавт.,1992; Koteja Р., Weiner J.,1993; Yukawa и со-авт.,1991]. Так, по данным Петровой Г.Г. (1971), возрастная и сезонная динамика количества лейкоцитов у норок различных цветовых типов зависит от пола животных. Бара-гунова Е.А. (1994) в своей работе рассматривает различные эколого - физиологические особенности адаптивных изменений системы крови мелких млекопитающих Кавказа. Особо следует остановиться на книге Болотникова И.А., Румянцева

C.Н. "Биология иммунитета" (1991), где обсуждаются роль иммунитета в процессе эволюции видов, формировании экосистем, молекулярно - генетические основы феноменов иммунитета. На различных примерах авторы показывают, что свойства иммунности в той или иной степени присущи всем известным видам живой материи. Конкретные же механизмы иммунитета, их разнообразие и степень сложности определяются особенностями организации живых существ, то есть местом каждого биологического вида на эволюционной лестнице. В то же время у представителей разных царств живой природы механизмы иммунитета сходны по своему генезису и сущности; в их строении обнаруживаются общие черты. Нам представляется, что полученные нами результаты - как методического плана, так и сравнительно - эволюционные характеристики иммунного статуса - могут являться одними из доказательств данных тезисов.

В результате проведённых исследований установлены конкретные параметры крови для обыкновенных бурозубок, рыжей и тёмной полёвок, обитающих на территории Карелии. Как видно из табл.26, рис.18, наблюдается как сходство-, так различия в составе крови изученных видов животных. При этом таксономически близкие виды близки и иммунологиче-ски; а более далёкие виды (например, рыжая полёвка и обыкновенная бурозубка) в этом отношении более специфичны. Так, в крови рыжих полёвок общее содержание лейкоцитов в два раза достоверно (р<0,05) больше (11,41 тыс. в 1 мм3), чем в крови обыкновенных бурозубок (6,01 тыс. в 1 мм3). В крови рыжих полёвок как абсолютное (8,38 тыс. в 1 мм3), так и процентное (72,40%) содержание лимфоцитов достоверно больше, чем в крови обыкновенных бурозубок (соответственно 3,52 тыс. в 1 мм3 и 58,80%). Большее количество лейкоцитов и лимфоцитов у рыжих полёвок, по-видимому, отражает более высокие защитные свойства их крови по сравнению с землеройками.

Клеточные и гуморальные факторы естественной резистентности крови у мелких млекопитающих, обитающих на территории Карелии

Вид животных Лейкоциты, тыс.в 1 мм3 Лимфоциты Акт-ть фагоц-за,% Иммуноглобулины, г/л Р-белки, титр тыс.в 1 MMJ % G М

Обыкновенная бурозубка среднее 6.01 ± 0.45 3.52 ±0.30 58.88 ±2.08 57.0 ±5.59 9.24 ±0.12 1.60 ±0.13 min 3.00 1.50 32.60 38.0 8.50 0.45 max 10.20 7.20 85.0 74.0 9.84 2.25

CV, % 26.02 21.00 38.02 21.97 4.04 25.60

Рыжая полевка среднее 11.41 ±0.80 8.38 ± 1.00 72.40 ± 1.98 63.13 ±5.88 8.63 ± 0.2 - 1:18400±5002 min 7.60 4.00 52.0 42.0 7.36 - 1 : 4000 max 19.00 14.00 88.80 75.0 10.29 - 1 : 64000

CV, % 30.21 27.02 20.15 22.25 6.04 - 58.00

Темная полевка среднее 11.74 ± 1.15 8.04 ± 0.25 71.39 ±3.30 - 8.69 ±0.35 - 1:7429±6225 min 8.00 6.00 63.90 - 8.15 - 1 :4000 max 18.00 12.00 78.0 - 9.75 - 1 :32000

CV, % 35.41 26.35 35.50 - 9.42 - 60.40

Кроме того, данный факт, вероятно, свидетельствует о большей видоспецифичности клеточного иммунитета по сравнению с гуморальным. Данные выводы в какой-то мере подтверждает и несколько более высокая (р>0,05) активность фагоцитоза нейтрофилов у рыжих полёвок по сравнению с обыкновенными бурозубками (как экстремальные, так и средние значения) - соответственно 38-7 4% (в среднем 57,00%) и 42-75% (в среднем 63,13%).

Рисунок 18

Сравнительная характеристика иммунного статуса обыкновенных бурозубок и рыжих полевок |обыкновенные бурозубки Щ рыжие полевки J - указан диапазон варьирования от min до max различия достоверны

Установленное в наших исследованиях высокое процентное содержание лимфоцитов крови у рыжих и тёмных полёвок и обыкновенных бурозубок (соответственно 72,4 0%, 7 7,00%, 58,80%) аналогично результатам, полученным Барагу'новой Е.А.(1994) при изучении параметров крови мелких млекопитающих Кавказа (полевые и лесные мыши, малые бурозубки и бурозубки Радде).

В лейкограмме всех изученных этим автором видов также наблюдается лимфоцитарный профиль. А вот жёлтый суслик, по данным Козакевича В.П. (1956), во все периоды активной жизни и во время спячки имеет ясно выраженный нейтрофиль-ный профиль крови (в среднем 68-7 2% нейтрофилов); в крови же малого суслика, по данным этого же автора, отмечается почти равное соотношение нейтрофилов и лимфоцитов.

Не зафиксировано достоверного различия в содержании сывороточного иммуноглобулина С между рыжими полёвками (8,63 г/л) и обыкновенными бурозубками (9,24 г/л). При этом разброс показателей количества иммуноглобулина Сиу рыжих полёвок, и у обыкновенных бурозубок самый маленький из всех выбранных показателей крови; у рыжих полёвок диапазон варьирования данного признака больше, чем у бурозубок.

Отметим также, что показатели содержания иммуноглобулина М в сыворотке крови обыкновенных бурозубок подвержены существенно большим колебаниям, чем показатели содержания сывороточного иммуноглобулина 6 у этого вида животных (коэффициенты вариации соответственно 25,60% и 4,04%).

Наблюдается существенное сходство в составе крови рыжих и тёмных полёвок (табл.26). Широкое варьирование уровней Р-белков у этих видов (от 1:4000 до 1:64000) свидетельствует, вероятно, об адаптивном полиморфизме данного показателя, придающем популяции необходимую устойчивость .

Используемый впервые в практике зоологических исследований комплекс иммунологический показателей позволил выявить существенную иммунологическую разнокачественность изучаемых видов млекопитающих. Параметры крови у рассматриваемых нами животных претерпевают значительные изменения под влиянием различных факторов.

Мы проанализировали иммунологическое состояние популяций бурозубок и полёвок в зависимости от географического и биотопического размещения популяций, пола и возраста животных (табл.27).

Для оценки степени отчётливости изменения иммунологического показателя мы принимали во внимание: достоверность изменения (р<0,05); величину различия между показателями - в целом по выборке (для бурозубок и полёвок -величину и достоверность изменения при сравнении тех или иных рассматриваемых групп внутри данной выборки); разницу между коэффициентами вариации изучаемых показателей (см. Разделы 3.1., 3.2.) .

Пол животных.

По нашим данным, пол животных оказывает существенное влияние на иммунный статус как обыкновенных бурозубок, так и рыжих полёвок. Клеточные факторы естественной резистентности (содержание лейкоцитов и лимфоцитов) подвержены половым различиям в большей степени, чем гуморальные (количество иммуноглобулинов и уровень Р-белков), табл.27.

Существенное влияние для обеих групп животных имеет размещение популяции (как географическое, так биотопическое) , а для рыжих полёвок - и возраст.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Моисеева, Татьяна Алексеевна, Петрозаводск

1. Айрапетьянц А.Э. Насекомоядные и грызуны // В кн. Звери Ленинградской области.- Л., 1970".

2. Аксюк А. Р. Гигиенические основы фторирования питьевой воды в различных климато географических зонах: Автореф. д-ра мед. наук.- М., 1971.

3. Алексеенко Л.П. Определение активности протеиназ по расщеплению белковых субстраров // В кн. Современные методы в биохимии.- М., 1968.- Т.2.- С.112.

4. Атлас Карельской АССР.- М., 1989.

5. Ахметов И.З. Лабораторные и дикие грызуны (содержание, резведение и использование в опытах).-Ташкент, 1981.

6. Барагунова Е.А. Эколого физиологические особенности адаптивных изменений системы крови мелких млекопитающих Кавказа: Дис. канд. биол. наук.-Екатеринбург, 1994.

7. Барков Л.В., Тимощук Г.И. Адаптивные реакции системы крови при длительном влиянии на организм атмосферных загрязнений// Гигиена и санитария.- 1978.- № 9.-С.10-15.

8. Бартова Л.М. и др. Методические рекомендации по определению Р-белков в сыворотке (плазме) крови человека.- М., 1989.

9. Берестов В. А. Динамика некоторых клинико морфологических и биохимических показателей крови пушных зверей (норок,песцов, лисиц) в норме и патологии: Автореф. д-ра ветер.наук.- Казань, 1969.

10. Берестов В. А., Узенбаева JI.B. Фагоцитарная реакция крови у песцов и норок.- JI., 1983.

11. Близнецов И. Я. Некоторые эколого физиологические особенности зимоспящих животных: серого сурка и жёлтого суслика: Автореф. . . канд. биол. наук.-Фрунзе, 1966.

12. Бобров Н.И. и др. К вопросу о функциональном состоянии лейкоцитов крови у людей на Севере // Гигиена и санитария.- № 6.- С.99-100.

13. Болотников И. А. и др. Биохимические аспекты иммунологи ческих реакций.- Петрозаводск, 1989.

14. Болотников И. А. и др. Иммунология. Иммунитет. Иммунологические реакции.- Петрозаводск, 1987.

15. Болотников И.А., Румянцев С.Н. Биология иммунитета.-Петрозаводск, 1991.

16. Булатова H.H. Особенности крови высокогорных животных//Эколого-физиологические особенности крови мелких млекопитающих.- Тр. Ин-та морфологии животных им.А.Н.Северцова.-Вып.41. -М., 1962.- С. 11-46.

17. Буравлёва И.В. и др. Количественное содержание G, А и М - иммуноглобулинов при желтухах различной этиологии // Современные методы экспериментальной иммунологии и различные аспекты их применения: Сб. научных работ.- М., 1976.- Т.17.- С. 94.

18. Бухарин 0.В. и др. Факторы естественного иммунитета у населения Оренбургской области // В кн. Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях.-Челябинск, 1978.- Вып. 5.- С.39 40.

19. Васильев Н.В. Адаптация и иммунитет // Теоретическая иммунология практическому здравоохранению: Тез. докл. 4 научн.конф. по проблеме клин, иммунодиагностики.- Таллин, 1978.-С. 444.

20. Виноградов B.C., Громов И.М. Краткий определитель грызунов. JI.,- 1984,- 136 с.

21. Вишинеску Н.Г. Суточная и сезонная ритмика химическо терморегуляции некоторых видов грызунов Румынии: Автореф. канд. биол. наук.- М., 1966.

22. Вольский И.Н. Иммунная система как орган адаптогенеза // Методологические аспекты адаптогенеза: Сб. научн. трудов.- Новосибирск, 1991.-С.36 45.

23. Габович Р.Д., Овруцкий Г. Д. Фтор в стоматологии и гигиене.- Казань, 1969.

24. Габович Р.Д., Ципрян В. И. Изучение действия фтора питьевой воды в санитарно геронтологическом эксперименте // Гигиена и санитария.- 1970.- № 4.-С.34 - 40.

25. Голиков А. П., Голиков П.П. Сезонные биоритмы в физиологии и патологии.- М., 1973.

26. Гугаринова В.Н. Моделирование хронического персистирующего гепатита // Механизмы повреждения, резистентности, адаптации и компенсации: Тез. докл. 2 Всесоюзн. съезда патофизиологов.- Ташкент, 1978.-Т.2.- С.604 605.

27. Дарлингтон Ф. Зоогеография.- М., 1966.

28. Делчо А. К. Эколого физиологические механизмы поддержания популяционного гомеостаза некоторыхмелких грызунов в норме и под воздействием пестицидов: Автореф. д-ра биол. наук.- М., 1980.

29. Джагинян А. И. Колебания показателей иммунологического статуса здоровых людей в течение года // Труды Ин-та им. Пастера.- Т. 61. Закономерности эпидемического процесса.- JI.,- С. 7 9 -81.

30. Дроздов С.Н. Экологическая ситуация в Карелии // В кн. Экология наземных позвоночных.- Петрозаводск, 1991.- 14.

31. Дуданова О.П., Яхонтова О.И. Регуляторные Р-белки при хронических заболеваниях печени // Иммунология.-1993.- № 1. С.50 - 52.

32. Дударев А.Д. Фторирование воды в условиях Ленинграда и его гигиениеская оценка: Автореф. канд. мед. наук.- J1.,

33. Дьячкова С.Я., Кулагина H.H. Динамика Р-белков при иммунизации различными антигенами // Новые методы прогноза патологического процесса: Тез. докл. Всесоюзн. симп. (Курск,май 1991).- М., 1991.- С. 5 -6.

34. Емельяненко И.Н., Душкин В.А. Изучение наследственных факторов клеточного иммунитета у линейных мышей // Журн. микробиол. и эпидемиол.-1973.- № 4.- С.104 109.

35. Епишин A.B., Епишина H.A., Добродзий Г.Н. Показатели фагоцитарной активности лейкоцитов и содержания в них гликогена при заболеваниях печени // Врач, дело.-1978.- № 5.- 95.

36. Жуков B.B. Иммунологические взаимоотношения некоторых форм в подсемействе полёвок: Дис. канд. биол. наук.- Свердловск, 1970.

37. Западнюк И.П. и др. Лабораторные животные, их разведение,содержание и использование в эксперименте.- Киев, 1962.

38. Ивантер Т.В. Землеройки (Soricidae) Карелии: Автореф.канд. биол. наук.- Петрозаводск, 1972.

39. Ивантер Т.В. О биотопическом размещении землероек -бурозубок // В кн. Экология наземных позвоночных Северо Запада СССР.- Петрозаводск, 1981.- С. 78 -90.

40. Ивантер Э.В. Популяционная экология мелких млекопитающих таёжного Северо Запада СССР.- Л., 1975.

41. Ивантер Э.В. и др. Закономерности динамики популяции рыжей полёвки (по наблюдениям в Северо -Восточном Приладожье) // В кн. Экология наземных позвоночных.- Петрозаводск, 1991.- 116.

42. Ивантер Э.В. и др. Адаптивные особенности мелких млекопитающих.- Л., 1985.

43. Ивантер Э.В., Коросов A.B. Основы биометрии.-Петрозаводск, 1992.

44. Казакова B.B. Влияние стирола на неко.торые показатели естественного иммунитета у лабораторных животных // Гигиена труда.- 1971.- № 2.- С.58.

45. Каменов Д. А. Эколого-физиологические механизмы поддержания популяционного гомеостаза некоторых мелких грызунов в норме и под воздействием пестицидов: Автореф. д-ра биол. наук.- М.,1980.

46. Карагезян А. Р. Экологические особенности кустарниковой полёвки и лесной мыши, обитающих в условиях биогеохимической провинции, обогащённой полибденом: Автореф. канд. биол. наук.- Свердловск, 1987 .

47. Карашурова J1.JI. и др. Состояние Т- и В-систем иммунитета у больных циррозом печени в зависимости от выраженности портальной гипертонии // В кн. Вопросы теоретической и практической иммунологии.-Петрозаводск, 1985.- С.93 97.

48. Картель М.В. Сравнительное эколого физиологическое изучение популяций крысы серой степной и лесостепной зон Украины: Автореф. канд. биол. наук.- Киев, 1973.

49. Книжников В. А. Кальций и фтор (радиационно гигиенические аспекты.- М., 1975.

50. Козакевич В.П. Сезонные изменения некоторых экологофизиологических особенностей жёлтого (Citellus fulvus Licht.)и малого (Citellus pygmaeus Pall.) сусликов Волжско Уральских песков: Автореф. канд. биол. наук.- Саратов, 1956.

51. Ковальчук JI.A., Цверенко C.B. Энергетический обмен и система крови мелких млекопитающих, обитающих вразличных климато-географических условиях//

52. Экология.-1997 .-№1.- С.51-57.

53. Козлов В. А. Роль некоторых природных факторов внешней среды в изменениях реактивности организма. Автореф. д-ра мед. наук,- М., 1967.

54. Коли Г. Анализ популяций животных.- М., 1979.

55. Комаров Ю.М. Окружающая среда и здоровье населения.-М.,1980.- 47с.

56. Комаров Ф.И. и др. Связь годовых биоритмов числа лейкоцитов в периферической крови здоровых людей с гелиогеофизическими ритмами // Военно-мед. журнал.-1987.- № 3.- 32.

57. Косарева H.JI. Домовая мышь (Mus musculus L.) как индикатор мутагенного загрязнения среды: Автореф. канд. биол.наук.- Екатеринбург, 1995.

58. Коржуев П.А., Корецкая Т. И. Эколого физиологические особенности крови землероек и кротов // Труды Института морфологии животных.- Вып. 41. Эколого физиологические особенности крови млекопитающих.- М., 1962.- С.129 - 136.

59. Короленко Т.А. Взаимодействие лизосомных препаратов с лизосомами при повреждении печени // Структура и функции лизосом: Тез. докл. 2 Всесоюзн. конф.-Новосибирск, 1989.- С.90 91.

60. Краскина Н.А. Современные представления о клеточных основах иммунологической реактивности // Современные методы экспериментальной иммунологии и различные аспекты их применения: Сб. научн. работ.- Т.17.- М., 1976.- С.5 13.

61. Краснощёков H.H. и др. Зависимость уровней заболеваемости рабочих от влияния технологических процессов, формирующих условия труда на целлюлозных заводах // Гигиена и санитария.- 1980.- № 10.- С. 28 -30.

62. Крыжановский Г.Н. Стресс и иммунитет // Вестн. АН СССР.- п 8.- С.З -5.

63. Кузьмин П.Н. и др. Циркадные ритмы неспецифической резистентности организма // В кн. Циркадные ритмы человека и животных.- Фрунзе, 197 5.- С.29 31.

64. Кульберг А.Я. Иммуноглобулины как биологические регуляторы.- М., 1975.

65. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология.- М., 1985.

66. Кульберг А.Я. Регуляторные белки новая медико -биологическая проблема // Регуляторные Р-белки при инфекционных и других заболеваниях: Сб.научн. трудов.- М., 1990.- С.З - 9.

67. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа.- М., 1986.

68. Кульберг А.Я. Рецепторы клеточных мембран.- М., 1987 .

69. Кульберг А.Я. Р-белки основные итоги десятилетних исследований // Иммунология.- 1996.- №п 2.- С.71 -72.

70. Кульберг А.Я. и др. Каталитические свойства продуктов катаболитного распада клеточных рецепторов (Р-белков) // Иммунология.- 1988.- № 3.- С.37 40.

71. Кульберг А.Я. и др. Взаимодествие фибронектина с промежуточными продуктами катаболического распада клеточных рецепторов Р-белками // Иммунология.-1989.- № 3.- С.30 35.

72. Лабораторные методы исследования в клинике // Справочник / Под ред. проф. Меньшикова В.В.- М., 1987.

73. Лазуткин А.Н. Динамика численности и изменчивость эколого физиологических показателей у лесных полёвок (род Glethrionomys) в Северном Приохотье: Автореф. канд. биол. наук.- Владивосток, 1997.

74. Лебедев К. А. и др. Иммунный статус человека. Сообщение 1.Необходимость системного подхода // Физиология человека.- Т.15.- 1989.- № 1.- С.131 -143.

75. Летягин А.Ю., Шурлыгина A.B. Хрономорфологический подход в иммунологии // Методологические аспекты современной иммунологии. Сб. научн. трудов.-Новосибирск, 1991.- С. 66 73. Литмен Г., Гуд Р. Иммуноглобулины.- М., 1981.

76. Логинов A.C. Клинические особенности течения первичного биллиардного цирроза печени // Тез. докл. 4 Всерос. Съезда терапевтов.- М., 1976.- С.36 37.

77. Майр Э. Популяции, виды и эволюция.- М., 1974.

78. Майструк П.Н. Материалы к обследованию фторирования воды: Автореф. канд. мед. наук.- Винница, 1964.

79. Макаров Г.Ф. и др. Неспецифические факторы иммунитета у больных с аутоаллергическими процессамив печени // Проблемы аутоаллергии: Тез. докл. научн. конф.- Таллин, 1975.- 24 6.

80. Маколкин В. И. и др. Исследование состояния клеточного иммунитета у больных хроническими заболеваниями печени // Тер.архив.- 1981.- № 12.-С.100 103.

81. Малетина М.В. Фагоцитарная активность лейкоцитов у здоровых лиц // В кн. Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях.- Вып.4.-Омск, 1976.- С.183 184.

82. Маргулис Г. У. и др. Структутно функциональная связь естественных антииммуноглобулинагглютинаторов с системой Р-белков // Новые методы прогноза патологического процесса: Тез.докл. Всесоюзн. Симп. (Курск, май 991).- М., 1991.- С.28 - 30.

83. Мельник Э.Л. Изучение факторов естественной резитентности у американской норки и голубого песца: Дис. канд. биол. наук.- Петрозаводск, 1976.

84. Меркурьева Р. В. и др. Методические подходы к оптимизации реальной ингаляционной нагрузки на население с применением математического моделирования // Гигиена и санитария.- 1987.-№ 3.- С.15 18.

85. Миногина Н.А., Волкославская В.Н. Исследование иммуноглобулинов при хронических заболеваниях печени // Врач, дело.- № 12.- С. 82 85".

86. Михайленко А.А. и др. Сезонные колебания показателей иммунной системы у больных хроническими заболеваниями // Врач, дело.- 1986.- № 5.- С.29 31.

87. Млекопитающие // Жизнь животных.- Т. 7 / Под ред. акад. Соколова.- М., 1989.

88. Муинов П. Морфо физиологические особенности некоторых равнинных и горных грызунов: Автореф. канд. биол. наук.- Свердловск, 1981.

89. Навроцкий В. К. и др. Состояние общей иммунологической реактивности организма и заболеваемости рабочих литейных цехов // Вестн. АМН.-1963.- № 8.- С.32 35.

90. Немова H.H. Катепсины животных тканей // В кн. Экологическая биохимия животных.- Петрозаводск, 1978.- С.76 78.

91. Ногаллер A.M. Иммунная система организма и хронические заболевания пищеварительного тракта // Иммунологические нарушения при заболеваниях органов пищеварения: Сб. научн. трудов.- Т.74.- Рязань, 1981.- С.6 12.

92. Одум Е. Экология.- М., 1968.

93. Овруцкий Г.Д., Хамитов Х.С. Фтор и иммунобиологическая реактивность организма.- Казань, 1976.

94. Некоторые итоги диспансеризации рабочих Надвоицкого аллюминиевого завода: Отчёт кафедры биохимии ПГУ / Рук. И.А.Болотников.- Петрозаводск, 1992.

95. Некоторые итоги диспансеризации рабочих Сегежского ЦБК: Отчёт кафедры биохимии ПГУ / Рук. И.А.Болотников.- Петрозаводск, 1992.

96. Петров P.M. Иммунология.- М., 1987.

97. Петров Р.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях. Методические рекомендации для. // Иммунология.- 1992.- № б.- С.51 62.

98. Петрова Г. Г. Возрастная и сезонная динамика гематологических показателей (Mustela vison brisson) норки с различной окраской меха: Автореф. канд. биол. наук.- Петрозаводск,1971.

99. Петрова Т.Р., Пономарёва Е.П. Влияние пирогенала на цитохимию лейкоцитов крови при хронических заболеваниях печени // Тез. докл. 4 Всерос. съезда терапевтов.- М., 1976.- С.72 73.

100. Покровский A.A., Тутельян В.А. Лизосомы.- М.,197 6.

101. Поповцева О.Н. Сезонные колебения показателей естественного иммунитета у животных в условиях Европейского Севера // Биологические проблемы Севера. 7 симпозиум. Адаптация человека к условиям Севера: Тез. докл.- Петрозаводск, 197 6.- С.98 -100.

102. Потапов В.Н. Динамика состояния факторов естественного иммунитета здорового человека в разные временные периоды: Автореф. канд. мед. наук.-Владивосток, 1981.

103. Прокопенко Л.Г., Кедровская H.H. Гуморальные факторы стимуляции иммуногенеза при токсическом поражении печени // Журн. микробиол. и эпидемиол.- 1976,- № 6.-С.57 62.

104. Прокопенко Jl.Г., Конопля А.И. О влиянии тиамина на формирование иммунного ответа при токсическом поражении печени // Журн.микробиол. и эпидемиол.-1978.- № 2.- С.36 40.

105. Прокопенко Л.Г., Равич Щербо М.И. Обмен иммуноглобулинов.- М., 1974.

106. Пых Ю.А., Малкина Пых И.Г. Об оценке состояния окружающей среды. Подходы к проблеме // Экология.-1996.- № 5.- 330.

107. Регеранд Т.И. Липидный состав сыворотки, форменных элементов и липопротеидов крови человека и некоторых позвоночных: Автореф. канд. биол. наук.- С.Петербург, 1994 .

108. Рождественская A.C. Сравнительный анализ популяций полёвок в зонах с разной степенью загрязнения: Автореф. канд. биол. наук.- Минск, 1985.

109. Румянцев С.Н. Конституциональный иммунитет и его молекулярно генетические основы.- Л., 1983.

110. Слепухин А.Ю. Активность протеиназ печени и селезёнки кроликов в процессе иммуногенеза // Структура и функции лизосом: Тез. докл. 2 Всесоюзн. конф.- Новосибирск, 1989.- 165.

111. Смирнов B.C. Роль Р-белков в структурно функциональной организации иммунной системы // Новые методы прогноза патологического процесса: Тез. докл. Всесоюзн. симп. (Курск, май 1991).- М., 1991.- С.8 -9.

112. Смирнова Н.И. Иммунологические исследования взаимоотношений сусликов рода Citellus Oken в Поволжье: Дис. канд. биол. наук,- Саратов, 1975.

113. Солбриг О., Солбриг Д. Популяционная биология и эволюция.-, 1982.

114. Суслонова Г.А. Суточные колебания показателей белой крови у здоровых людей на Севере // Циркадные ритмы человека и животных: Реф. докл. Всесоюзн. симп. 23 -25 июня 1975г.- Фрунзе, 1975.- С.29 31.

115. Сухорада В.А., Бакиров Г.С. Суточные -ритмы показателей периферической крови здорового человека в условиях Западной Сибири // Циркадные ритмы человека и животных: Реф. докл. Всесоюзн. симп. 23 25 июня 1975г.- Фрунзе, 1975.- С.118 -120.

116. Теплова С.Н. Роль климатогеофизических факторов среды в синхронизации сезонных колебаний активности механизмов неспецифической защиты организма от инфекции // Журн. микробиол. И эпидемиол.- 1981.- № 1.- С.75 80.

117. Токтосунов А.Т. Морфофизиологическая дифференциация амфибий и млекопитающих в условиях Тянь-Шаня: Автореф. д-ра биол. наук.- Свердловск, 1973.

118. Траянова Т.Г. и др. Показатели клеточного иммунитета при хронических прогрессирующих поражениях печени // Тез. докл. 4 Всерос. съезда терапевтов.- М., 197 6.-С. 72 73.

119. Труфакин В.А. и др. Суточные колебания фагоцитарной активности макрофагов у мышей. Связь с уровнем эндогенного кортекостерона и иммунного ответа / / Иммунология.- 1991.- n 1.- 72.

120. Туманов И.Л. Анатомо физиологические и экологические основы применения ратиндана в борьбе свредными грызунами: Автореф. канд. биол. наук.- JI., 1968.

121. Туликова Н.В. и др. Определитель возраста лесных полёвок.- М., 1970.

122. Уатт К. Экология и управление популяционными ресурсами.-, 1971.

123. Уильямсон М. Кн&птлз биологических популяций.- М., 1975.

124. Флинт В.Е. Типы пространственной структуры популяций у мелких млекопитающих // В кн. Популяционная структура вида и млекопитающих.- М., 1970.

125. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток // Иммунология.-1995.- № 3.- С.б 10.

126. Шатёрников К. Б. 0 роли лизосом в механизмах иммуногенеза // Структура и функции лизосом: Тез. докл. 2 Всесоюзн. конф.- Новосибирск, 1989.

127. Шилова С.А. и др. Прикладной аспект изучения экологии популяций на модели мелких млекопитающих // Экология популяций: Сб. научн. статей.- М., 1991.-С. 35 54 .

128. Шкорбатов Г.В. К построению общей теории адаптаций // Журн. общ. биол.- 1982.- Т.43.- Вып.6.- С.775 -787 .

129. Шмальгаузен И. И. Факторы эволюции. Теория стабилизирующего отбора.- М., 1968.

130. Шмидт Г.Ф. Эколого физиологические особенности некоторых зимоспящих животных Киргизии: Автореф. канд. биол. наук.- Алма-Ата, 1970.

131. Шубик В.М. Проблемы экологической иммунологии.- Л., 1976.

132. Шурлыгина A.B., Труфакин В.А. Хронобиологические аспекты структурно функциональной организации иммунной системы // Успехи совр. биологии.- 1*987.-Т.104,- Вып.2(5)С.268

133. Эберт Л.Я. и др. Изменения в содержании некоторых гуморальных факторов естественного иммунитета в зависимости от времени года // Журн. микробиол. и эпидемиол.- 1971.- № 4.- С.102 104.

134. Эберт Л.Я. и др. Изучение суточного ритма некоторых факторов неспецифической резистентности организма // Журн. микробиол. и эпидемиол.- 1972.- № 2.- С.88 -89.

135. Экологическая ситуация в Карелии // Сб. науч. работ.- Петрозаводск, 1993.

136. Яковлева Н.И. и др. Определение содержания естественных антител и Р-белков при инфекционной патологии у беременных // Иммунология.- 1986,- № 5.-С. 39 40.

137. Berkwist S. et. el. Destruction of obnoxious gases from kraft mils // Sven, paper sticln ocl. Svenpapersfor Holengesticlshr.- 1972.- T.75.- Vol.4.- P.117 -123.

138. Bilder G.E. Activity of the reticuloendotelial system follawing endocrine manipulationin rats. RES. // J. Reticuloendothel. Soc.- 1976.- Yol.19.- -№.1.-P.ll 17.

139. Dahl M.Y. Chemotaxis in cutaneous disease // Intern. J.Dermatol.- 1978,- Vol.17.- №.2.- P.95 104.

140. Daniel M., Mriak M., Rosicky B. Location and composition of nests built by some central European insectivores and odents in forest biotopes // Acta Fag. rerum natur. Univ.comen.- Zool.- 1971.- P.16.

141. Errucson I. Report on the safeti of drincing water fluoridation // Caries Res.- 1974.- Yol.8.- -№.1.-P.16 17.

142. Felsenfeld 0., Gyr K. Polimorphonuclear neutrophilic leucocytes in protein deficiency // Amer. J. Glin. Nutr.- Vol.30.- n.9.- P.1393 1397.

143. Glenn W., Becker R. Individual versus group housing in mice: immunological response totime phased injections // Phisiol. Zool.- 1969.- Vol.42.- №.4.-P.411.

144. Koteja P., Weiner J. Mice, voles and adaptive strategies in muroid rodents // Oicos.- 1993.-Vol.66.- №.3.- P.505

145. Mayanski D.N., Schwartz Y.Sh. Mononuclear phagocite system responsiveness in CC induced liver cirrcosis // Int.Exp. Pathol.- 1993.- Vol.74.- № 3.- P.229 -236.

146. Miller D. Effect of age on fever response to recombinant fumor necrosis factor A in a murine model // J. Amer. Geriatrr. Soc.-1991.-39,№ 8.- C.A 58.

147. Neveu P.J. Sex-dependent association between immune function and paw preference// Brain Res.-1991.-559, № 2.- C.347-351.

148. Rabatic S., Kurepa L., Decarus D. Alteration of light/dark reqimen provokes changes of mouse macrophage function and lymphocyte subsets // Period, biol.- 1993.- № 4.- P.263 266.

149. Vidal G. Associacion de la respuesta en anticuerpos con ciertas conductas emocionales // Pap. 16 Congr. Nac. Soc. Esp. Immunol.- 1990.- Vol.9.- № 1.- P.30.

150. Warheit D.B., Hartsky M. A. Role of alveolar macrophage chemotaxis and phagocytosis in pulmonary clearance responses to inhaled particles: comparisons among rodent species // Micross. Res. and Techn.-1993.- Vol.26.- № 5.- P.412 422.

151. Yukawa M., Onodera T. Immune response of the Mongolian gerbil (Meriones unquiculatus) to sheep red

152. Иммунологические показатели крови обыкновенных бурозубок

153. Место г, Пол Воз- Масса Лейкоциты, Лимфоциты, Активность г/лобитания час раст г абс. абс. % фагоцитоза,% О М1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

154. ПИТКЯ. РАНТСКИИ РАЙОН

155. Ельник 12 ж п 7.4 4.50 2.30 66.0 9.84 0.6722 18 ж п 7.2 3.50 3.30 73.0 9.60 0.6723 9 м 3 7.5 10.20 7.20 70.5 9.84 0.4524 12 м 3 7.7 9.80 6.80 69.4 9.20 0.551. КОНДОПОЖСКИИРАЙОН

156. Иммунологические показатели крови полевок

157. Место Пол Воз- Масса, Лейкоциты, Лимфоциты, Активность Р-белки,обитания час раст г абс. абс. % фагоцитоза,% г/л титр1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121. РЫЖИЕ ПОЛЕВКИ 1. Питкярантский район

158. Ельник 9 м п I 25.0 12.00 9.10 76.5 9.05 1 :80002 12 м пП 23.0 18.00 12.00 66.7 9.25 1 : 40003 21 м пП 24.5 13.00 8.30 63.9 — 9.25 1 : 80004 21 ж пП 27.5 10.70 8.00 74.8 8.15 1 : 16000

159. Луг 12 м п I 35.0 10.00 6.00 76.0 8.25 1 :80001. Кондопожский район

160. Критерий Стьюдента по таблицам 1-13

161. Пары Лейко- Лимфоциты ч 18 Рвыборок циты абс. % о М белки1 2 3 4 5 6 7 8

162. Бурозубки рыжие полевки 6.18* 4.40* 2.84* 1.44 -

163. Рыжие темные полевки 1.14 0.87 1.05 0.29 - 0.041. Б урозубки

164. Самцы самки 1.30 0.95 1.23 0.35 ((15=46) 1.65 ((15=46)

165. Карку Кончезеро 1.20 1.61 3.15* 2.29* ((15=46) 3/01* ((15=46)

166. Самцы: Карку Кончезеро 3.15* 0.15 4.10* 0.85 (с15=23) 1.48 ((15=23) .

167. Самки: Карку Кончезеро 0.28 0.49 0.90 1.78 (с15=21) 1.13 ((15=21) ■1. Питкярантский район

168. Самцы самки (все) 0.61 1.30 2.49* 1.25 3.00*

169. Самцы самки (ольшаник) 0.27 0.49 2.33* 11.00* 10.00*1. Кондопожский район

170. Самцы самки 0.01 4.80* 3.29* 0.80 (ёГ=22) 0.58 ((15=22)

171. Лес кустарник 0.11 0.80 0.80 1.15 ((15=22) 7.95* ((15=22)

172. Самцы -самки кустарника 0.32 2.10 2.30 1.78 3.05*

173. Самцы -самки леса 0.25 1.40 1.15 0.14 ((№=8) 0.48 (¿15=8)

174. Самцы: лес кустарник 0.41 0.93 1.14 1.64 ((15=13) 0.18 ((15=13)

175. Самки: лес кустарник 0.25 1.90 1.51 1.73 ((15=7) 0.30 (¿5=7)1. Чшие полевки

176. Самцы самки 1.89 1.60 3.49* 1.33 - 0.80

177. Карку Кончезеро 1.87 2.05 1.07 1.74 - 1.80

178. Самцы: Карку Кончезеро 1.83 2.18 0.15 0.30 - .0.041. Продолжение табл.31 2 3 4 5 6 7 8

179. Самцы: пр пп 4.18* 0.95 1.48 4.13* - 0.501. Питкярантский район

180. Самцы самки 0.29 2.01 1.98 0.80 - 1.201. Кондопожский район

181. Самцы самки 4.16* 5.43* 2.87* 1.91 - 1.63

182. Смешанный -лиственный лес 1.63 0.38 2.10 0.60 .0.8114 пр пп 1.08 5.25* 1.10 1.25 - 1.488 пр: самцы самки 0.45 4.10* 1.18 1.95 - 0.54

183. Самцы: пр пп 0.54 0.41 0.82 0.13 - 0.07

184. Самцы самки смешанного леса 2.20* 6.90* 4.44* 1.52 - 0.59

185. Самцы самки лиственного леса 1.18 1.40 1.95 1.25 - 2.01

186. Примечания: сН7 число степеней свободы;- различия достоверны (р< 0.005) пр прибылые раннего выводка; пп - прибылые позднего выводка

187. Критерий Стьюдента по таблицам 14, 159 12 15 18 211. Б П Б П Б П Б П Б П1. 1.12 2.80* 1.48 3.15* 1.60 3.95* 6.28* 4.60*1. 2.12 4.19* 4.25* 2.14 2.14 2.10 4.60* 0.48

188. II 0.58 0.98 4.68* 0.35 3.18* 3.85* 2.44* 2.60*1. 0.36 4.52 0.80 0.15 0.15 0.85 1.44 1.65

189. V 1.82 2.40* - 0.14 - 1.25

190. VI 0.40 - 0.12 - 1.03 - 0.6011.12 2.80* 0.45 2.10 0.38 3.90* 1.70 1.721. 2.15 4.19* 2.03 3.01* 4.14* 0.25 3.50* 4.16*

191. III 0.58 0.98 2.40* 0.12 8.20* 2.64* 14.05* 8.14*1. 0.36 4.52* 1.15 1.85 1.78 2.10 1.33 1.94

192. V 1.82 0.14 - 0.03 - 1.88

193. VI 0.40 - 1.08 - 1.13 - 0.8711.48 3.15* 0.45 2.10 0.48 0.95 0.98 0.141. 4.25* 2.14 2.03 3.01 0.89 4.25* 1.71 6.17*

194. III 4.68* 0.35 2.40* 0.12 0.90 3.15* 1.80 4.10*1. 0.80 0.15 1.15 1.85 1.74 0.03 1.40 0.48

195. V 2.40* 0.14 - 0.57 - 0.51

196. VI 0.12 - 1.08 - 0.43 - 0.5211.60 3.95* 0.38 3.90* 0.48 0.95 0.95 0.801. 2.14 2.10 4.14* 0.25 0.89 4.25* 1.14 2.01

197. III 3.18* 3.85* 8.20* 2.64 0.90 3.15* 2.03 2.16*1. 0.15 0.85 1.78 2.10 1.74 0.03 2.10 0.67

198. V 0.14 0.03 - 0.57 - 0.58

199. VI 1.03 - 1.13 - 0.43 - 0.5516.28* 4.60* 1.70 1.72 0.98 0.14 0.95 0.80 1. 4.60* 3.48* 3.50* 4.16* 1.71 6.17* 1.14 2.01

200. III 2.44* 2.60* 14.05 8.14* 1.80 4.10* 2.03 2.16*1. 1.44 1.65 1.33 1.94 1.40 0.48 2.10 0.67

201. V 1.25 1.88 - 0.51 - 0.58 -

202. VI 0.60 - 0.87 - 0.52 - 0.55

203. Примечание : * различия достоверны (р<0,05); Б - бурозубки; П - полевки; I - лейкоциты; II - лимфоциты, абс.;1.I лимфоциты (%);1. в; V -М; VI - Р-белки

Информация о работе

Моисеева, Татьяна Алексеевна
кандидата биологических наук
Петрозаводск, 2000
ВАК 03.00.08

Диссертация

Иммунологические механизмы устойчивости мелких млекопитающих Карелии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы