Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин

Ковязин, Владимир Анатольевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин"

На правах рукописи

КОВЯЗИН Владимир Анатольевич

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ, ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ И НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ЭНДОМЕТРИИ ЖЕНЩИН

03 00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Аы орефера!

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва, 2005

Работа выполнена на кафедре патологической анатомии медицинского факультета Российского университета дружбы народов.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

БАБИЧЕНКО Игорь Иванович

Официальные оппоненты: академик РАЕН,

доктор медицинских наук, профессор АВТАНДИЛОВ Георгий Герасимович

член-корреспондент РАЕН, доктор медицинских наук, профессор ДУБОВАЯ Татьяна Клеопиковна

Ведущая организация:

ГУ НИИ морфологии человека РАМН

Защита диссертации состоится « /3 » буГиды 2005 г. в ¡\__часов

на заседании диссертационного совета Д 212.263.08 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6.

Автореферат разослан « № » С&нТиёРЛ 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

О.Б.Саврова

М06- У. O-s-zcb г<Г

ТШдз ¿mm

i YsJ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В основе циклических пересгроек эндометрия лежат «тонкие» молекулярные механизмы, обеспечивающие морфо-функциональные изменения эндометрия в различные фазы нормального менструального цикла (Fierro Е. et al., 2001).

Известно, что апоптоз является важным процессом в эндометрии, поскольку он поддерживает клеточный гомеостаз в течение менструального цикла nyicM элиминации стареющих клеюк из функционального слоя эндометрия матки (Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю., 2001). При этом нарушения процессов апоитоза и связанные с ним патологические изменения клеток лежат в основе гиперпластических и неопластических заболеваний эндометрия (Сохова З.М. и ДР-, 2002).

До настоящего времени механизмы апоптоза в эндометрии человека еще полностью не изучены, остается предметом споров роль белков BCL-2, ВАХ и Р53 - в нормальном неизмененном эндометрии и при развитии патологических состояний (McLaren J. et al., 1997; Watanabe H. et al., 1997). Дальнейшие исследования в этом направлении помогут выявить молекулярно-биологические механизмы, лежащие в основе неопластической трансформации железистых клеток эндометрия.

Апоптоз в эндометрии находится под воздействием половых стероидов (Moulton B.C. et al., 1997). Однако окончательно взаимосвязь между факторами апоптоза и стероидными гормонами яичников не выяснена (Saegusa М. et al., 1996; Bozdogan О. et al., 2002). Как известно слизистая оболочка матки является гормонозависимым органом: функциональная активность эндометрия находится под контролем циклической секреции гормонов яичников (Kounelis S. et al., 2000), а неадекватная гормональная стимуляция может привести к функциональным изменениям в клетках. Поскольку действие стероидных гормонов на клетку осуществляется посредством их взаимодействия со специфическими внутриклеточными рецепторами, преде тавляется актуальным изучение распределения рецепторов к эстрогенам, прогестерону и факюров апоптоза в нормальной и патологически измененной слизистой оболочке полости матки.

Актуальность исследований молекулярных механизмов апоптоза определяется и тем фактом, чго в структуре злокачественных новообразований рак эндометрия занимает 3 место, а темпы роста показателей заболеваемости раком эндометрия значительно выше таковых при других злокачественных опухолях репродуктивной системы у женщин (Берштейн Л.М., 2004).

Анализ литературных данных показал, что имеющиеся в настоящее время морфологические критерии для дифференциальной диагностики доброкачественных, предраковых и раковых заболеваний эндометрия ненадежны (Ченик О.Ф., 2004), поскольку не позволяют объективно оценить состояние исследуемого эндометрия и поставить правильный диагноз (Dietel М., 2001). Зю обстоятельство диктует необходимое ib поиска .новых критериев. (Эллиниди B.TI, Пожарисский К.М., 1999). В связи с этим яплягтяоззВДйШАМ 1ШйЧбо'гка новых

БИБЛИОТЕКА I

. snmsp.

*"m i^—mamma* w

объективных методов в морфологии (Автандилов Г.Г., 2005).

В последние юды в развитии патологических состояний организма человека особое значение придается молекулярпо-г енет ическим факторам (Берппейн Л.М., 2004). Для решения подобных задач перспективным направлением является исследование экспрессии нового фактора, контролирующею развитие апопюза НЬПК (Костанян И.А. и др., 1995; Бабиченко И.И, 2001).

Таким образом, настоящее комплексное иммуногистохимическое исследование эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в слизистой оболочке полости матки, а также экспрессии факторов, связанных с процессами аиоптоза, имеет особую актуальность, поскольку дает возможность расширить представления о механизмах функционирования нормального эндометрия и направлено на решение проблемы ранней диагностики предраковых и раковых заболеваний эндометрия.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось выявление ранних изменений, происходящих на молекулярном уровне в ходе нормального менструального цикла, при гиперпластических и неопластических изменениях эндометрия.

Задачи исследования:

1) изучение динамики экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону в ходе фазовых изменений менструального цикла в железах неизмененного эндометрия человека;

2) исследование особенностей экспрессии антиапоптозного фактора ВСЬ-2 и проапоптозных факторов НЬПР, ВАХ и Р53 в эпителиальных клетках в различные фазы нормального менструального цикла;

3) изучение особенностей экспрессии рецепторов к эстрогенам, прогестерону в гиперпластическом и неонластическом эндометрии;

4) изучение особенностей экспрессии белков, регулирующих процессы апоптоза ВСЬ-2, ВАХ, Р53 и фактора ШЛЭР при гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциноме эндометрия;

5) изучение корреляции между факторами апоптоза и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону в неизмененном, гипериластическом и неопластическом эндометрии.

Научная новизна исследований. В работе впервые проведено комплексное иммуногистохимическое исследование экспрессии рецепторов к стероидным юрмонам и белков, характеризующих процессы апоптоза в клетках. ВСЬ-2, ВАХ, Р53 и Ш.иР в неизмененном, гипериластическом и неопластическом эндометрии женщин. Подобный комплексный подход к изучению эпителиальных клеток эндометрия позволяет оценить границы изменений экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону и белков, регулирующих апоптоз в ходе нормального менструального цикла, и выявить характеристику начальных анапластических изменений эндометрия.

Установлены взаимосвязи между стадиями менструального цикла и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогес1ерону в ядрах эпителия желез эндометрия. Исследованы рецепторы к стероидным гормонам при гиперпластических и неопластических процессах.

В работе впервые показаны особенности экспрессии нового фактора апоптоза НЬБР в различные фазы нормального менструального цикла, при гиперпластических и неопластических процессах. Выявлено свойство антител к фактору НТ.ПР окрашивать апоптозные тельца и ядра клеток, в которых только начинались процессы апоптоза, что позволяет оценить уровень апоптотических процессов в неизмененном и патологическом эндометрии.

Прослежена взаимосвязь между экспрессией факторов апоптоза и рецепторов к стероидным гормонам.

Научно-практическая значимость. В работе показаны молекуляртто-клеточные механизмы, характеризующие циклические изменения в нормальном эндометрии и при его неопластической трансформации.

Выявлены особенности распределения рецепторов к стероидным гормонам яичников в железистом компоненте эндометрия в различные фазы нормального менструального цикла, а также при гиперпластических и неопластическх процессах

Показана важная роль апоптоза в поддержании тканевого гомеостаза в эндометрии, и его непосредственная связь с рецепторами к стероидным гормонам

Определены иммуногистохимические характеристики гиперплазии и высокодифференцированной аденокарцияомы эндометрия. Выявлены молекулярные критерии начальных стадий анапластических процессов.

Полученные в работе данные позволяют расширить представления о клеточной биологии эндометрия в норме и при патологических состояниях и могут быть использованы для улучшения дифференциальной диагностики гиперпластических и ранних стадий неопластических процессов эндометрия.

Положения диссертации, выносимые на защиту:

1 Биологическое действие стероидных гормонов на эпителиальный компонент эндометрия определяется уровнем рецепторов к эстрогенам и прогестерону в клетках желез: высокая чувствительность эпителия желез к эстрогенам в течение фазы пролиферации стимулирует развитие секреторного аппарата клетки для его дальнейшей функции в фазе секреции, в свою очередь увеличение чувствительности железистого эпителия к прогестерону в секреторную фазу цикла тормозш пролиферацию тканей, вызванную эстрадиолом, и способствуют развитию секреторной активности эндометрия.

2. Система регуляции синтеза стероидных рецепторов находится под влиянием уровня эстрогенов и прогестерона в крови Эстрогены стимулируют синтез собственных рецепторов и рецепторов к прогестерону. Прогестерон угнетает синтез как собственных рецепторов, так и рецепторов к эстрогенам.

3 Половые стероиды, воздействуя на экспрессию про- и антиапошозных белков, контролируют процессы апоптоза в эндометрии человека. Падение уровней эстрогенов и прогестерона к концу менструального цикла приводит к снижению пролиферативных процессов и активации в железистых клетках апоптоза.

4. На пути неопластической трансформации клетки эндометрия утрачивают способность к восприятию стероидных гормонов, в них снижается уровень экспрессии белка BCL-2, препятствующего развитию апоптоза, и увеличивается содержание проапоптозного фактора В АХ и HLDF. Увеличение уровня апоптотических процессов при неопластической трансформации эндометрия является следствием повышения уровня пролиферативных процессов и направлено на удаление злокачественных клеток.

Апробация результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии и патологической анатомии медицинского факультета Российского университета дружбы народов 2005 г Результаты работы, отражающие основные положения диссертации, представлялись на научных конференциях: V Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке», 21-23 октября 2004 г.; Пироговской студенческой научной конференции, 17 марта 2005 г.; X Всероссийской научно-практической конференции "Молодые ученые в медицине", 26-27 апреля 2005 г.; I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов "Актуальные вопросы патологической анатомии", 31 мая - 2 июня 2005 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, 1 из них в центральной печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5-ти глав, выводов, практических рекомендаций и библиографии. Работа изложена на 147 страницах, содержит 6 рисунков, 39 микрофотографий и 6 таблиц Список литературы состоит из 257 источников, из них 217 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Характеристика материала. Исследования проводились на клинических базах кафедры патологической анатомии медицинского факулыета Российского университета дружбы народов - в Госпитале для ветеранов войн №2 г. Москвы и Городской клинической больницы №4 г Москвы. За период с октября 2000 г по ноябрь 2004 г. были отобраны архивные препараты соскобов эндометрия 180 пациенток, не получавших гормонального лечения. Из них 101 случай составлял неизмененный эндометрий, 32 случая - типичная гиперплазия эндометрия (ТГЭ), 13 случаев - атипичная гиперплазия эндометрия (АГЭ) и 34 -высокодифференцированная аденокарцинома эндометрия (ВАК). Средний возраст пациенток с нормальным эндометрием составил 38,27±7,21 лет, с

типичной гиперплазией эндометрия - 53,34±1,03 Лег, с атипичной гиперплазией эндометрия - 47,54+0,55 лет и с ВАК - 57,85±0,88 лет.

Количество исследуемых биопсий в различные фазы нормального менструального цикла было следующим: в 44 случаях эндометрий ма1ки находился в фазе пролиферации (14 - в ранней пролиферации (P1I), 11 - средней (СП), 19 - поздней (111 ])), в 47 случаях в фазе секреции (12 - в ранней секреции (PC); 14 - средней (СС); 21 - поздней (ПС)) и 5 случаях в фазе десквамации (ДВ).

Методика иммуногистохимических исследований. Соскобы из полости матки с нормальным эндометрием в разные фазы менструального цикла у 101 женщины и гистологические срезы 79 больных с гиперплазией эндометрия и высоко дифференцированной аденокарциномой эндомефиоидиого типа исследовали иммуногистохимическим методом (Гуревич JI.E., Исаков В.А., 1999).

Для исследования в качестве первичных иммунных сывороток использовали: 1) мышиные моноклональные антитела к эстрогеновым (клон 1D5; «Dako», USA) и прогестероновым рецепторам (клон 1А6; «Dako», USA); 3) мышиные моноклональные антитела к BCL-2 (клон 124; «Dako», USA); 4) кроличьи поликлональные антитела к ВАХ («Dako», USA); 5) мышиные моноклональные антитела к Р53 (клон DO-7; «Dako», USA); 6) кроличьи поликлональные антитела к HLDF (Институт биоорганической химии имени М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова). На каждом стекле один срез (контрольный) обрабатывали соответствующей неиммунной сывороткой («Dako», USA). Для визуализации результатов иммуногистохимической реакции использовали универсальный пероксидазный набор LSAB t kit («Dako», USA).

Системы оценки различных иммуногистохимических маркеров. Анализ окрашенных пероксидазным методом ядер осуществляли при увеличении объектива х40. Уровень содержания рецепторов к эстрогенам и прогестерону и белка Р53 оценивали методом определения гистохимическою счета (H-score) (McClelland R.A. et al., 1991). Система гистохимического счета включает в себя определение интенсивности окраски, оцениваемую от 0 до 3 баллов и долю (%) окрашенных клеток. Формула подсчета следующая- H-scorc = la+2b+3c, где а доля (%) клеток со слабо выраженным ядерным окрашиванием, b - доля (%) клеток с умеренно выраженным ядерным окрашиванием, с - доля (%) клеток с сильно выраженным ядерным окрашиванием

Экспрессия антиапоптозного белка BCL-2 и проапоптозного белка ВАХ наблюдалась в цитоплазме клеток, отличалась по интенсивности окрашивания и оценивалась в баллах: 0 - отсутствие реакции, 1 - слабая реакция, 2 умеренная реакция, 3 - сильная реакция. Экспрессию фактора HLDF оценивали по особенности его локализации в железистых клетках эндометрия: на поверхносш эпителиальных клеток в виде коричневой полоски или диффузное окрашивание цитоплазмы.

Апоптотический индекс (АИ) был рассчитан по следующей формуле: АИ = (Na/No)*100%, где Na - количество апоптозных телец, No - общее количество ядер клеток (No=100).

Статистический метод. Полученные данные были подвергнуты компьютерной обработке с использованием системы статистического анализа (^аЙБЙса уб.О».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспрессия рецепторов к стероидным гормонам при циклических перестройках эндометрия

Дифференцированный анализ экспрессии рецепторов к стероидным гормонам в эпителии желез в каждую из семи стадий нормального менсгруального цикла женщин подтвердил циклический характер экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону в ядрах эпителиальных клеток (Рис. 1). Ранняя фаза пролиферации характеризовалась умеренной экспрессией рецепторов к эстрогенам. Значение Н-ясоге для эстрогеновых рецепторов в эту стадию составило 210,4213,35. Максимальные концентрации эстрогеновых рецепторов (283,07±8,66) наблюдались в позднюю стадию фазы пролиферации. Фаза секреции характеризовалась снижением экспрессии рецепторов к эстрогенам При этом в раннюю секреторную фазу значение Н-Бсоге составляло 190,03+2,11, в среднюю секреторную - 54,36±1,13. В позднюю стадию фазы секреции и фазу десквамации экспрессия рецепторов к эстрогенам практически прекращалась, 23,44±1,37 и 33,24±2,05 соответственно.

В фазу пролиферации наблюдалось постепенное повышение экспрессии рецепторов к прогестерону. В раннюю пролиферативную фазу показатепь Н-ясоге составил 138,34+2,52, в среднюю пролиферативную - 213,57±4,41, в позднюю пролиферативную - 271,82+6,63. В раннюю секреторную фазу экспрессия рецепторов к прогестерону достигала максимальных значений (283,73±2,47), и, 1аким образом, «отставала» от экспрессии рецепторов к эстрогенам на стадию цикла В конце стадии ранней секреции чувствительность эпителия эндометрия к прогестерону начинала снижаться, величина Н-всоге составляла 41,15±0,69 и 11,05+1,76, соответственно, однако уровень экспрессии рецепторов к прогестерону преобладал над экспрессией эстрогеновых рецепторов в течение всей секреторной фазы цикла.

Таким образом, биологическое действие с!ероидных гормонов на эпителиальный компонент эндометрия определяется уровнем рецепторов к эстрогенам и прогестерону в клетках желез- высокая чувствительность эпителия желез к эстрогенам в течение фазы пролиферации стимулирует развитие секреторного аппарата клетки для его дальнейшей функции в фазе секреции, в свою очередь увеличение чувствительности железистого эпителия к прогестерону в секреторную фазу цикла тормозит пролиферацию тканей, вызванную эстрадиолом, и способствуют развитию секреторной активности эндометрия.

Рис. 1. Показатель экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону в железах неизмененного эндометрия в зависимости от фазы менструального цикла.

Экспрессия анти- и проапоптозных факторов в различные фазы цикла в неизмененном эндометрии

В настоящей работе были изучены особенности экспрессии антиапоптозного белка ВСЬ-2 и проапоптозных белков ВАХ, Р53 и фактора НЬБР в ходе циклических перестроек в неизмененном эндометрии. Суммарные результаты иммупогистохимического исследования представлены в таблице 1.

Из литературных данных известно, что белок ВСЬ-2 - один из главных эндогенных ингибиторов апоптоза (антиапоптозный белок). В нашем исследовании в эпителии желез эндометрия ранней стадии пролиферации при исследовании экспрессии ВСЬ-2 мы наблюдали коричневое окрашивание цитоплазмы. Подобная реакция была выявлена также в эпителиальных клежах средней и поздней стадий пролиферации Напротив, в эпителиальных клетках эндометрия фаз секреции и десквамации экспрессия ВСЬ-2 слабо выражена. Средняя интенсивность иммуногистохимического окрашивания антиапоптозного белка ВСЬ-2 в фазу пролиферации составила 2,66±0,21 и была статистически значимо больше, чем в секрецию (р=0,008) и десквамацию (р<0,0001).

Белок ВАХ гомологичен ВСЬ-2, но имеет проапоптозный эффект (КогБтеуег 8Л, 1999). В результате проведенных иммуногистохимических исследований локализации белка ВАХ нам удалось выявить его экспрессию во все фазы менструального цикла, за исключением ранней и средней стадий пролиферации, в течение которых мы наблюдали окрашенные в синий цвет ядра и отсутствие продуктов диаминобензидиновой реакции в цитоплазме. В позднюю

стадию фазы пролиферации и фазы секреции и десквамации наблюдалась положительная иммуногистохимическая реакция с антителами к белку В АХ. Средняя интенсивность иммуногистохимического окрашивания белков В АХ в фазу пролиферации составила 0,95±0,11 и была достоверно ниже по сравнению с фазами секреции (р<0,0001) и десквамации (р«,0001) Полученные нами результаты подтверждают исследования Х.-1. Тао и соавт (1997): концентрация белка ВАХ увеличивается к концу секреторной фазы, когда усиливаются апоптотическис процессы.

Анализ локализации белков ВСЬ-2 и ВАХ показал, что в одних и тех же железистых клетках эндометрия наблюдается одновременная экспрессия этих факторов, но с разной интенсивностью иммуногистохимического окрашивания. Вероятно, этот факт объясняется тем, что ВАХ взаимодействует с ВСЬ-2 и образует гетеродимеры, обладающие антиапоптозным эффектом. В работе 8. КгаЗехуякл и соавт. (1994) подобный механизм проапоптозного действия ВАХ рассматривается как физиологический и описан в нормальных тканях.

Другим известным проапоптозным фактором является «дикий» тип гена-онкосупрессора р53, нам так же, как М. КоэМуата и соавт. (1993), не удалось выявить экспрессию этого белка ни в одну из фаз нормального менструального цикла.

В настоящей работе нами впервые была исследована экспрессия фактора 11Ы31; в течение нормального менструального цикла в неизмененном эндометрии. По сведениям И.А. Костанян и соавт (1994), фактор ПЬПР, как и ею ДНК-гидролизующий фрагмент, способны вызывать запрограммированную гибель клеток, а результаты иммуногистохимических исследований предстательной железы человека позволяют сделать заключение, что НЬОР может быть использован в качестве маркера апоптоза (Бабиченко И.И и др., 2002)

Проведенное иммуногистохимическое исследование показало, что в пролиферативную фазу, а также в раннюю и среднюю стадии секреторной фазы выявляется коричневая полоска на поверхности эпителиальных клеток желез. В позднюю стадию секреторной фазы и менструальную фазу НЬОР фактор экспрессировался диффузно в цитоплазме железистых клеток эндометрия. Различная локализация продуктов диаминобензидиновой реакции в железах эндометрия объясняется особыми свойствами фактора НЬОР, который обладает как дифференцирующей активностью, так и проявляет свойства неспецифической нуклеазы, гидролизующей молекулы нуклеиновых кислот по свободнорадикальному механизму.

Экспрессия фактора НЬОР на поверхности эпителиальных клеток в пролиферативной фазе сочеталась с высокой концентрацией антиапоптозного белка ВСЬ-2 и отрицательной иммуногистохимической реакцией к проапоптозному белку ВАХ. В конце менструального цикла, когда фактор НЬОР экспрессировался в цитоплазме, наблюдалась сильная иммуногистохимическая реакция к проапоптозному белку ВАХ, а экспрессия антиапоптозного ВСЬ-2 была снижена. Таким образом, на основании того, как меняется экспрессия факторов

апоптоза по ходу нормального менструального цикла, можно сделать заключение, что фактор НЦОР обладает сходным проапоптозным действием с белком ВАХ и противоположным с ВСЬ-2, вызывая запрограммированную клеточную смерть в конце менструального цикла.

Таблица 1.

Экспрессия факторов апоптоза Н1Л)Р, ВАХ, ВСЬ-2 в эпителиальных клетках эндометрия в течение нормального менсл руального цикла.

Факторы РП СП ГШ РС сс ПС ДВ

шл>р поверх. поверх. поверх. поверх. цитоп. цитоп. цитоп.

ВСЬ-2 2,46±0,21 2,74*0,16 2,78±0,41 2,0)±0,71 1,22*0,10 0,93*0,22 0,57*0,01

ВАХ - - 0,95±0,11 1.78±0 51 2,03*0,38 2,84*0.67 2,96+0.02

Р53 - - - - - - -

ШЛЭР: поверх. - тонкая полоска на поверхности эпителиальных клеток эндометрия, цитоп. - коричневое окрашивание цитоплазмы эпителиальных клеток эндометрия.

Количественная оценка апоптоза по ходу фаз нормального менструального цикла

Иммуногистохимическое исследование фактора НЬОР показало, что анштела к данному фактору специфически окрашивают апоптотичсские тельца, а также ядра некоторых железистых клеток в коричневый цвет. Этот факт, по всей видимости, объясняется тем, что экспрессия НЬОР фактора происходит при запуске апоптоза в клетках, до развития первых морфологических признаков, при этом фактор достаточно стоек и сохраняется в цитоплазме после завершения нуклеосомальной фрагментации ДНК клеток. Данное свойство антител к фактору НЬБР позволяет оценить апоптоз с принципиально новых позиций, т е анализировать его признаки, как до развития фрагментации ядер, так и после завершения лизиса ядер. Это имеет особое значение еще и потому, что данные относительно его развития в клетках, особенно при патологиях, недостаточно точны (Кока\уа К. ег а1., 1996), основные сложности связаны с особенностями методических приемов при изучении программированной клеточной гибели (Бабиченко И.И. и др., 2002; Манских В.Н., 2004).

На основании окрашивания апоптозных телец была произведена оценка уровня процессов запрограммированной клеточной гибели, происходящих в эндометрии в течение фаз менструального цикла. При этом в нашем исследовании при подсчете апоптотического индекса учитывались не только апоптотические тельца, но и ядра тех клеток, где только начинались процессы детерминированной гибели клетки.

По нашим данным апоптотический индекс начинает увеличиваться в среднюю секреторную фазу и достигает наибольших значений в фазу десквамации. Среднее значение апоптогического индекса в фазу пролиферации составляло 3,72±0,97, что было достоверно меньше (р=0,001) среднего значения в фазу секреции и десквамации (11,79±4,97). Изменение аиоптотического индекса по ходу фаз менструального цикла представлено на рис. 2.

Стадия цикла

Рис. 2. Апоптотический индекс в различные стадии менструального цикла.

Таким образом, антитела к фактору ШЛЭК позволяют выявить апоптоз на ранних стадиях, еще до развития первых морфологических признаков, а также наглядно оценить уровень апоптотических процессов, происходящих в эндометрии. Суммарные данные подсчета апоптотического индекса, а также экспрессии белков апоптоза ВСЬ-2, ВАХ подтверждают литературные данные и свидетельствуют об интенсивных процессах апоптоза в конце менструального цикла.

Корреляционный анализ факторов апоптоза и рецепторов к стероидным гормонам в неизмененном эндометрии

Результаты наших исследований показывают связь между экспрессией апоптозных белков и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Уровень антиапоптозного белка ВСЬ-2 положительно коррелирован как с экспрессией рецепторов к эстрогенам (г=+0,91, р<0,001), так и к прогестерону (г=+0,83, р=0,012). Скорее всего, синтез этого белка в клетках контролируется уровнем стероидных гормонов в крови. Недостаток препятствующего апоптозу белка ВСЬ-2 в поздние стадии менструального цикла способствует запрограммированной клеточной смерти клеток эндометрия с момента падения 10

уровня трофических гормонов, что подтверждают результаты наших собственных исследований и литературные данные (Kokawa К. et al., 1996; Silikone Т. et al., 1997) Между белком В АХ и рецепторами, как к эстрогенам, так и к npoi естерону мы наблюдали отрицателыгую корреляцию, г=-0,86, р-0,005 и г—0,71, р~0,011 соответственно

Экспрессия рецепторов к стероидным гормонам при гиперплазии и в аденокарциноме высокой степени дифференцировки

Проведенные нами иммуногистохимические исследования выявили два типа экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Результаты проведенного сравнительного исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам в нормальном пролифериругощем эпдомегрии, при гиперпластических и неонластических процессах представлены на рис. 3.

Первый тип характеризовался равномерным и высоким уровнем экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону в эпителии всех желез. Ядра клеток интенсивно окрашивались продуктами ДАБ реакции в коричневый цвет. Подобная каргина была свойственна для ТГЭ и напоминала экспрессию стероидных рецепторов в неизмененном пролиферативном эндометрии (НПЭ). Величина H-score для эстрогеновых и npoi естероновых рецепторов в НПЭ была 255,08±6,21 и 207,08+5,01 соответственно, при ТГЭ - 276,66+2,93 и 259,41+3,48 соответственно. Статистического различия H-score (р~0,356), как для эстрогеновых, так и для прогестероновых рецепторов между НПЭ и ТГЭ выявлено не было.

Второй тип экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону был выявлен на гистологических препаратах с АГЭ и ВАК и характеризовался мозаичной картиной экспрессии ядерных рецепторов. В отдельных железистых клетках наблюдалась интенсивная ДАБ реакция в ядрах в виде коричневых зерен различного размера. В другой части клеток, с периферическим распределением хроматина и крупными ядрышками, подобная реакция была выражена слабо, либо совсем не проявлялась. Средняя интенсивность иммуногистохимической реакции при данных видах патологии сильно варьирована. Значение H-score для эстрогеновых и прогестероновых рецепторов при АГЭ составило 108,31+8,33 и 138,69±11,16 соответственно, при ВАК - 65,29+6,09 и 84,85+6,26 соответственно. Статистического различия H-score, как для эстрогеновых рецепторов (р=0,756), так и для прогестероновых рецепторов (р=0,802) между АГЭ и ВАК выявлено не было.

Среднее значение H-score для эстрогеновых (265,87+8,04) и прогестероновых (233,25±9,5) рецепторов в доброкачественном эндометрии (ТГЭ) было достоверно выше (р=0,002 и р=0,001), чем в анапластическом (АГЭ и ВАК).

О -,-,-1-

НПЭ (п=36) ТГЭ (п=32) АГЭ (п=13) ВАК(П=34)

■ Эстро! сновые рецеторы —^ - Прогестероновыс рецешоры

Рис. 3. Экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в неизмененном эндометрии в фазу пролиферации, при гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциноме.

Сопоставление полученных в настоящем исследовании результатов при изучении неизмененного и неопластического эндометрия показало, что при неизмененном пролиферативном эндометрии и при типичной гиперплазии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, при нсопластической трансформации наблюдается увеличение числа атипичных железистых клегок с низким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону.

Таким образом, на пути неопластической трансформации клетки эндометрия утрачиваю! способность к восприятию стероидных гормонов. В анапластических тканях эндометрия наблюдается увеличение числа эндометриальных желез, содержащих атипические железистые клетки, в которых отсутствуют рецепторы к эстрогенам и прогестерону. Иммуногистохимическое исследование рецепторов к стероидным гормонам может служить дополнительным критерием для дифференциальной диагностики неопластического и неизмененного пролиферирующег о эпителия эндометрия. Оценка чувствительности железистого компонента эндометрия к стероидным гормонам при неопластических процессах может иметь существенное значение при назначении стероидной терапии.

Экспрессия анги- и проапопюзных факторов при ¡иперплазии эндометрия и высокодифференцированной аденокарциноме

Исследуя апоптоз при гиперпластических и неопластических процессах эндометрия, мы определяли экспрессию факторов, препятствующих (ВСЬ-2) и 12

способствующих его развитию (ВАХ, Р53 и НЫЭГ) Суммарные данные экспрессии белков ВСГ-2, ВАХ, Р53 и НТЛЭР представлены в таблице 2.

Проведенная в нашей работе иммуногистохимическая реакция с антителами к белку ВСТ.-2 отмечалась во всех случаях с ТГЭ, в 85% АГЭ и 56% ВАК Средняя интенсивность иммуногистохимического окрашивания белков ВСГ-2 была наиболее высокой при ТГЭ (2,84±0,23) и не имела достоверных различий (р=0,633) с 1ТПЭ. В большинстве АГЭ и ВАК интенсивнос1Ь экспрессии ВСГ-2 была слабой или умеренно выраженной (1-2+, реже 3+), значимых различий (р=0,834) между этими группами заболеваний обнаружено не было. Среднее значение интенсивности окрашивания для АГЭ и ВАК (1,53±0,47) было достоверно ниже НПЭ (р=0,004).

Экспрессия белка ВАХ наблюдалась в 22% случаев ТГЭ, 92% АГЭ и 88% ВАК. Интенсивность экспрессии белка ВАХ была слабой или отсутствовала (0-1+) в ТГЭ (0,41 ±0,10) и возрастала в анапластическом эндометрии, при АГЭ составляла 2,45±0,27, в ВАК - 2,27±0,17 Достоверных различий экспрессии ВАХ между ТГЭ и НПЭ обнаружено не было (р=0,8). В АГЭ и ВАК наблюдалась выраженная экспрессия ВАХ белка (2-3+), достоверных статистичсских различий (р-0,505) между этими группами не обнаружено. Среднее значение интенсивности окрашивания ВАХ при данных видах патологии было значимо выше по сравнению с НПЭ (р=0,005) и ТГЭ (р<0,0001).

Количество ВСЬ-2 позитивных случаев в аденокарциномах эндометрия колеблется от 28% до 78% (Saegusa М еГ а1, 1996, УатаисЫ N. е1 а1., 1996) В настоящем исследовании оно составило 56%. В ряде работ было доказано, что утрата экспрессии гена Ьс1-2 является неблагоприятным прогностическим фактором при аденокарциномах эндометрия (8ае§ша М. е! а!., 1996) и, как правило, сопровождается снижением количества рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Напротив, распределение в клетках антиапоптозного белка ВСЬ-2 является признаком чувствительности адснокарцином эндометрия к прогестероновой терапии (Атегсиа С.А. е1 а1., 1999). Таким образом, снижение экспрессии препятствующего развитию апоптоза белка ВСЬ-2 в аденокарциномах эндометрия соответствует более агрессивному феношну опухоли.

В результате проведенного исследования мы не выявили мутантные белки Р53 иммуногистохимическим методом в НПЭ и ТГЭ. В свою очередь, в 3 случаях АГЭ (23%) и во всех случаях ВАК была обнаружена экспрессия продукюв мутантного гена р53. Значение Н-ясоге для АГЭ составляло 6,82±1,01, ВАК -52,78±2,36. При этом экспрессия Р53 при высокодифференцированной аденокарциноме наблюдалась в 10-50% ядер клеток, при атипической гиперплазии количество окрашенных ядер в коричневый цвет не превышало 10%.

Поскольку экспрессия фактора Р53 при атипической гиперплазии эндометрия наблюдается крайне редко со слабой интенсивностью окрашивания, можно сделать предположение, что мутация гена Р53 является достаточно поздним этапом в злокачественной трансформации эндометрия. Учитывая

достоверные различия (р=0,0002) между атипической гиперплазией и высокодифференцированной аденокарциномой эндометрия по экспрессии белка Р53, данный признак может быть использован как дополнительный дифференциально-диагностический критерий.

В настоящей работе нами впервые была исследована экспрессия фактора ННОИ в эндометрии человека ири гиперпластических и неопластических процессах. Проведенное иммуногистохимическос исследование с антителами к фактору НЬОР в НПЭ и при ТГЭ выявило его экспрессию только на поверхности эпителиальных клеток в виде коричневой полоски. В свою очередь, при ЛГЭ и в ВАК фактор Н1Л)Р диффузно распределялся в цитоплазме железистых клеток. Полученные результаты свидетельствуют о том, что антитела к фактору Ш ЛЗР позволяют провести дифференциальную диагностику между доброкачественными и злокачественными процессами в эндометрии человека, и могут быть использованы в качестве нового иммуногистохимического маркера для выявления ранних стадий анапластических процессов.

Таблица 2.

Экспрессия факторов апоптоза ВАХ, ВСЬ-2, Р53 и НЫ№ в неизмененном пролиферативном эндометрии, при гиперпластических процессах и в высокодифференцированной адснокарциноме.

Показатели НПЭ (п=36) ТГЭ (п=32) АГЭ (п=13) ВАК (п=34)

% М±ш % М±т % М+гп % М+гп

ВСХ-2 100 2,62±0,11 100 2,84+0,23 85 1,61+0,32 56 1,44+0,19

ВАХ 30 0,56+0,08 22 0,41+0,10 92 2,45+0,27 88 2,27+0,17

Р53 0 0 0 0 23 6,82+1,01 100 52,78+2,36

Н1Л)К полоска на поверхности полоска на поверхности цитоплазма цитоплазма

Количественная оценка апоптоза в гиперпластическом и неопластическом эндометрии

На основании окрашивания апоптозных телец в коричневый цвет был произведен подсчет апоптотического индекса в неизмененном пролиферативном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии (рис. 4).

Наименьшее значение апоптотического индекса наблюдалось в НПЭ и ТГЭ, 4,62±0,32 и 3,41±0,11, соответственно. Максимальных значений АИ достигал при АГЭ (24,73±3,46) и был достоверно выше (р=0,0004) по сравнению с ВАК (22,44+2,73), ТГЭ (р<0,0001) и НПЭ (р<*0,0001). Таким образом, данные иммуногистохимического исследования с использованием антител к фактору НЫЗР свидетельствуют об относительном увеличении процессов апоптоза при неопластической трансформации клеток.

Рис. 4. Апоптотический индекс в неизмененном нролиферахивном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии.

Корреляционный анализ факторов апоптоза и рецепторов к стероидным гормонам при гиперплазии эндометрия и аденокарциноме высокой степени дифференцировки

В нашем исследовании выявлена положительная корреляция между иммунореактивностью препятствующего развитию апоптоза белка ВСЬ-2 и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону в ТГЭ, слабая отрицательная - в АГЭ и отсутствовала - в ВАК. Между проапоптозным белком ВАХ и рецепторами к стероидным юрмонам в ТГЭ была обнаружена отрицательная корреляция, в АГЭ и ВАК она отсутствовала Результаты корреляционного анализа представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Корреляция меиеду факторами апоптоза ВСЪ-2, ВАХ и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону в гиперпластическом и неопластическом эндометрии (р<0,05).

ВСЬ2 ВАХ

Типичная (железисто-кистозная) гиперплазия ЭР г=+0,94,р<0,001 г—0,71,р-=0,051

ПР г= 1-0,87, р-0,001 г=-0,81, р<0,001

Атипичная железистая гиперплазия ЭР г-+0,63, р<0,001 г=-0,25, р<0,001

ПР г=+0,59, р<0,001 г=-0,19, р<0,001

Высокодифференцированная аденокарцинома ЭР г—(-0,24, р<0,001 г=-0,17, р=0,071

ПР г^+0,34, р=0,005 г=-0,10, р=0,014

ЭР - эстрогеновые рецепторы, ПР - прогестероновые рецепторы

Таким образом, факторы апоптоза в неизмененном эндометрии и при типичной гиперплазии эндометрия находятся под влиянием стероидных гормонов, неопластическая трансформация эндометрия приводит к нарушению контроля над ростом эпителиальных клеток. При этом развивающиеся в условиях неадекватной гормональной стимуляции процессы могут стать источником индукции новообразования.

выводы

1. Комплексное иммуногистохимическое исследование экспрессии про-(Н1ЛЭР, ВАХ, Р53) и антиапоптозных факторов, а также рецепторов к эстрогенам и прогестерону в железистых клетках эндометрия позволяет провести морфо-футткциональную оценку состояния эндометрия.

2. В эпителиальных клетках эндометрия в ходе нормального менструального цикла у женщин происходят фазовые изменения экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону, при этом динамика экспрессии рецепторов к эстрогенам опережает экспрессию рецепторов к прогестерону на одну стадию менструального цикла.

3. Антиапоптозный белок ВСЬ-2 и проапоптозный белок ВАХ определяются во все стадии нормального менструального цикла с разной интенсивностью иммуногистохимического окрашивания, экспрессия проапоптозного белка Р53 дня неизмененного эндометрия не характерна.

4 Фактор Н1 .ПР обладает проапоптозным действием и характеризует запрограммированную клеточную гибель в конце менструального цикла НЬОР выявляется во все фазы менструального цикла, при этом в пролиферативную фазу, а также в раннюю стадию секреторной фазы НТ.ПР был выявлен в виде коричневой полоски на поверхности железистых клеток эндометрия. В среднюю и поздшою стадию секреторной фазы и менструальную фазу НТ.ВР фактор распределяется в цитоплазме железистых клеток эндометрия.

5. В неизмененном эндометрии, находящимся в пролиферативной фазе цикла, и при его типичной гиперплазии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, по мере неопластической трансформации эпителия эндометрия количество рецепторов в клетках снижается.

6. Антитела к фактору НЬОР и Р53 являются маркерами начальных стадий анапластических изменений в эндометрии.

7 Использование фактора НЬОР в роли специфического маркера апоптоза свидетельствует об относительном увеличении процессов апоптоза в конце менструального цикла и при неопластической трансформации клеток.

8. Баланс про- и антиапоптозных факторов находится под влиянием стероидных гормонов, изменение этого баланса может привести к

нарушению клеточного гомеостаза железистых клеток и вызвать патологические состояния в эндометрии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Антитела к фактору HLDF позволяют провести дифференциальную диагностику между доброкачественными и злокачественными процессами в эндометрии человека, и могут быть использованы в качестве новою иммуногистохимического маркера для выявления ранних стадий анапластических процессов Фактор HLDF выявляется на поверхности эпителиальных клеток при типичной гиперплазии, Ю1да как при неопласгических процессах анти!ела к данному фактору диффузно окрашивают цитоплазму.

Иммуногисюхимическое исследование рецешоров к стероидным гормонам также может служить дополнительным критерием для дифференциальной диагностики между неопластическим и неизмененным эндометрием, находящимся в пролиферативной фазе цикла. В неизмененном пролиферативном и гиперпластическом эндометрии без атипии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, при неопластической трансформации наблюдается увеличение числа атипичных железистых клеток с низким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону.

Фактор Р53 может быть использован в качестве надежного онкомаркера. выявление его в железистом компоненте эндометрия свидетельствует о злокачественном фенотипе клеток, и являться дополнительным дифференциально-диагностическим признаком в диагностике атипической гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциномы эндометрия

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТА1ЩИ

1. Ковязип В.А., Костанян И.А., Драницына С.М., Бабиченко И И. Иммуногистохимическое исследование экспрессии факторов апоптоза в железистых клетках нормального пролиферативного, гиперпластического и неопластического эндомефия // Вестник РУДН. Серия Медицина. - 2005. №1(29). - С.65-70.

2. Ковязин В.А., Костанян И.А, Драницына С.М., Бабиченко ИИ Экспрессия IILDF и BCL-2 факторов в железистых клетках эндометрия человека в течение нормального менструального цикла и при анапластических процессах // Тез. V Международной научно-пракшчсской конференции «Здоровье и Образование в XXI веке», г. Москва, 21-23 октября 2004 г. - М.: Изд-во РУДН. - 2004. -С.454-455.

3. Ковязин В.А., Костанян И.А., Драницына С.М., Бабиченко И.И. IILDF - новый маркер анапластических процессов в эндометрии человека // Вестник РГМУ. Периодический медицинский журнал. - 2005. - №3(42) - С. 173-174

4. Ковязин В.А. Иммуногистохимическое исследование рецепторов стероидных гормонов в железистых клетках нормального пролиферативного, гитгерпластического и неопластического эндометрия // Тез. X Всероссийская научно-практическая конференция "Молодые ученые в медицине", 26-27 апреля 2005 г. - Казань: ООО Издательский дом "Меддок". - 2005. - С 222-223

5. Ковязин В А., Костанян И.А., Драницына С.М., Бабиченко И И. Фактор HLDF и белок Р53 в нормальном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии // Тез. I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов "Актуальные вопросы патологической анатомии" - Орел: Орел ГАУ. - 2005 -С.222-224.

6. Бабиченко И.И., Ковязин В.А. Иммуногистохимическая характеристика гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии // Диагностика, лечение и реабилитация больных в геронтологической клинике. Сборник научных трудов. Выпуск 3 - М.: Госпиталь для ветеранов войн №2, 2005.-С.7-11.

Ковязин Владимир Анатольевич (Россия) «Иммуногистохимическое исследование пролиферативных,

гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин».

В работе проведено комплексное иммуногистохимическое исследование экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону, а также и белков характеризующих процессы апоптоза в клетках: BCL-2, ВАХ, Р53 и HLDF в неизмененном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии женщин. Установлено, что подобный комплексный подход к изучению эпителиальных клеток эндометрия позволяет оцепить границы изменений экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону, а также белков регулирующих апоптоз в ходе нормального менструального цикла, и выявить начальные признаки анапластических изменений эндометрия.

Vladimir A. Kovyazin (Russia) «Immunohistochemical study of normal proliferative, hyperplastic and neoplastic processes in human endometrium»

Complex immunohistochemical examination was carried out to investigative the expression of oestrogen and progesterone receptors, as well as the expression of proteins which characterize the apoptosis process in cells: BCL-2, BAX, and P53 in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium. The similar complex approach of studing endometrial epithelial cells allows to value the edge of oestrogen and progesterone expression variations, as well as various expression of proteins that regulate apoptosis during normal menstrual cycle, and to indicate characteristics the beginning of the neoplastic changes in glandular epithelial cells.

Подписано в печать 20 Об 2005 г Формат 60x90, 1/16 Объем 1,25 п л Тираж 100 экз Заказ № 625

Огпечагано в ООО "Фирма Блок" 107140, I Москва, ул. Краснопрудная, вл 13. т 264-30-73 \у\у\у.Ыок01ссп1ге.пагос1 ги Иношвлснис брошюр, авторефератов, печать и переиле! диссерхаций.

Щ 1 б 4 10

PH Б Русский фонд

2006^4 14393

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Ковязин, Владимир Анатольевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НОРМАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИЯ.

1.1. Структурные изменения эндометрия под действием стероидных гормонов.

1.2. Механизм действия стероидных гормонов.

1.3. Рецепторы к эстрогенам и прогестерону в эндометрии женщин в течение нормального менструального цикла.

1.4. Апоптоз и его значение.

1.5. Молекулярные основы апоптоза.

1.6. Экспрессия факторов апоптоза в клетках эндометрия в ходе нормального менструального цикла.

ГЛАВА II. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ И НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ЭНДОМЕТРИЯ.

2.1. Гистологические характеристики гиперплазии эндометрия и высокодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

2.2. Экспрессия рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах и высокодифференцированной аденокарциноме эндометрия.

2.3. Экспрессия факторов апоптоза при гиперпластических процессах и в высокодифференцированной аденокарциноме эндометрия.

ГЛАВА III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика материала.

3.2. Методы исследования.

ГЛАВА IV. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1. Гистологические и иммуногистохимические характеристики циклических изменений в неизмененном эндометрии.

4.1.1. Морфологические особенности циклических изменений железистого компонента эндометрия.

4.1.2. Экспрессия рецепторов к стероидным гормонам при циклических перестройках эндометрия.

4.1.3. Экспрессия анти- и проапоптозных факторов в различные фазы цикла неизмененного эндометрия.

4.1.4. Количественная оценка апоптоза по ходу фаз нормального менструального цикла.

4.1.5. Корреляционный анализ факторов апоптоза и рецепторов к стероидным гормонам в неизмененном эндометрии.

4.2. Морфологические и иммуногистохимические особенности гиперпластических и неопластических процессов эндометрия.

4.2.1. Гистологические характеристики гиперплазии эндометрия и высокодифференцированной аденокарциномы эндометриоидного типа строения.

4.2.2. Клинико-морф о логические характеристики гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

4.2.3. Экспрессия рецепторов к стероидным гормонам при гиперплазии и аденокарциноме высокой степени дифференцировки.

4.2.4. Экспрессия анти- и проапоптозных факторов при гиперплазии эндометрия и высокодифференцированной аденокарциноме.

4.2.5. Количественная оценка апоптоза в гиперпластическом и неопластическом эндометрии.

4.2.6. Корреляционный анализ факторов апоптоза и рецепторов к стероидным гормонам при гиперплазии эндометрия и аденокарциноме высокой степени дифференцировки.

ГЛАВА V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин"

Актуальность проблемы

В основе циклических перестроек эндометрия лежат «тонкие» молекулярные механизмы, обеспечивающие морфо-функциональные изменения эндометрия в различные фазы нормального менструального цикла (Pierro Е. etal., 2001).

Известно, что важным внутриклеточным процессом в эндометрии является апоптоз, который поддерживает клеточный гомеостаз в течение менструального цикла путем элиминации стареющих клеток из функционального слоя эндометрия матки (Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю., 2001). При этом нарушения процессов апоптоза и связанные с ним патологические изменения клеток лежат в основе гиперпластических и неопластических заболеваний эндометрия (Сохова З.М. и др., 2002).

Анализ литературы показал, что до настоящего времени механизмы апоптоза в эндометрии человека еще полностью не изучены, остается предметом споров роль белков, участвующих в процессах апоптоза - BCL-2, В АХ и Р53 - в неизмененном эндометрии и при развитии патологических состояний (McLaren J. et al., 1997; Otsuki Y. et al., 1994; Tao X.-J. et al., 1997; Watanabe H. et al., 1997).

Имеющиеся данные относительно значения вышеназванных белков в биологии аденокарцином противоречивы (Nakamura Т. et al., 1997; Crescenzi Е. et al., 2000; Morsi H.M. et al., 2000a,b; Sakuragi N. et al., 1998; Trogovac T.C. et al., 1995; Peiro O.G. et al., 2001; Takai N. et al., 2002), дальнейшие исследования в этом направлении помогут пролить свет на молекулярно-биологические механизмы, лежащие в основе неопластической трансформации железистых клеток эндометрия.

Существуют сведения, что апоптоз в эндометрии находится под воздействием половых стероидов (Moulton B.C. et al., 1997). Однако окончательно взаимосвязь между факторами апоптоза и стероидными гормонами яичников не выяснена (Saegusa M. et al., 1996; Bozdogan О. et al., 2002).

Как известно слизистая оболочка матки является гормонозависимым органом: функциональная активность эндометрия находится под контролем циклической секреции гормонов яичников (Kounelis S. et al., 2000), неадекватная гормональная стимуляция может привести к функциональным изменениям в клетках. Поскольку действие стероидных гормонов на клетку осуществляется посредством их взаимодействия со специфическим внутриклеточным рецептором (Сергеев П.В. и др., 1999), представляется актуальным изучить распределение рецепторов к эстрогенам и прогестерону в нормальной и патологически измененной слизистой оболочке полости матки и проследить связь этих рецепторов с факторами апоптоза в ходе фазовых изменений эндометрия, а также при его патологических состояниях.

Актуальность исследований молекулярных механизмов апоптоза определяется и тем фактом, что в структуре злокачественных новообразований рак эндометрия занимает 3 место, а темпы роста показателей заболеваемости раком эндометрия значительно выше таковых при других злокачественных опухолях репродуктивной системы у женщин (Берштейн Л.М., 2004; Чиссов В.И., Старинский В.В., 2002).

Анализ литературных данных показал, что имеющиеся в настоящее время морфологические критерии для дифференциальной диагностики доброкачественных, предраковых и раковых заболеваний эндометрия ненадежны (Чепик О.Ф., 2004; Bergeron С. et al., 1999; Kendall B.S. et al., 1998; Marsden D.E., Hacker N.F., 2001; Scov В.G. et al., 1997), поскольку не позволяют объективно оценить состояние исследуемого эндометрия и поставить правильный диагноз (Dietel M., 2001). Это обстоятельство диктует необходимость поиска новых критериев. (Эллиниди В.Н., Пожарисский К.М., 1999). В связи с этим является актуальным разработка новых объективных методов в морфологии (Автандилов Г. Г., 2005).

В последние годы в развитии патологических состояний организма человека особое значение придается молекулярно-генетическим факторам (Берштейн Л.М., 2004). Для решения подобных задач перспективным направлением является исследование экспрессии факторов, контролирующих развитие апоптоза (Бабиченко И.И., 2001). Особенно интересным представляется изучение нового фактора развития апоптоза - НЬОР (Костанян И.А. и др., 1995), который открывает новые возможности в изучении молекулярных механизмов апоптоза в эндометрии человека.

Настоящее комплексное иммуногистохимическое исследование эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в слизистой оболочке полости матки, а также экспрессии факторов, связанных с процессами апоптоза, имеет особую актуальность, поскольку дает возможность расширить представления о механизмах функционирования нормального эндометрия и направлено на решение проблемы ранней диагностики предраковых и раковых заболеваний эндометрия.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось выявление ранних изменений, происходящих на молекулярном уровне в ходе нормального менструального цикла, при гиперпластических и неопластических изменениях эндометрия.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

2) исследование особенностей экспрессии антиапоптозного фактора ВСЬ-2 и проапоптозных факторов ВАХ, Р53 и фактора НЬОБ в эпителиальных клетках в различные фазы нормального менструального цикла;

3) изучение особенностей экспрессии рецепторов к эстрогенам, прогестерону в гиперпластическом и неопластическом эндометрии;

4) изучение особенностей экспрессии белков, регулирующих процессы апоптоза ВСЬ-2, ВАХ, Р53 и фактора НЬБР при гиперпластических процессах и высокодифференцированной аденокарциноме эндометрия;

5) изучение корреляции между факторами апоптоза ВСЬ-2, ВАХ и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону в неизмененном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии.

Основные результаты и новизна исследования

В работе впервые проведено комплексное иммуногистохимическое исследование экспрессии рецепторов к стероидным гормонам и белков, характеризующих процессы апоптоза в клетках: ВСЬ-2, ВАХ, Р53 и НЬБР в неизмененном, гиперпластическом и неопластическом эндометрии женщин. Подобный комплексный подход к изучению эпителиальных клеток эндометрия позволяет оценить границы изменений экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону и белков, регулирующих апоптоз в ходе нормального менструального цикла, и выявить характеристику начальных анапластических изменений эндометрия.

Установлены взаимосвязи между стадиями менструального цикла и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону в ядрах эпителия желез эндометрия. Максимальная экспрессия рецепторов к эстрогенам в железистых клетках эндометрия отмечена в среднюю и позднюю стадии пролиферации, к прогестерону - в позднюю пролиферацию и раннюю секрецию.

Определен уровень рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических и неопластических процессах. При типичной гиперплазии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, при атипичной гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциноме наблюдается увеличение числа атипичных железистых клеток с низким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону.

Показаны особенности экспрессии апоптозных факторов ВСЬ-2, ВАХ, Р53 и нового фактора апоптоза НЬБР в различные фазы нормального менструального цикла, при гиперпластических и неопластических процессах.

В пролиферативной фазе менструального цикла экспрессия фактора НЬОР была выявлена на поверхности эпителиальных клеток, сочетаясь с высокой концентрацией антиапоптозного белка ВСЬ-2 и отрицательной иммуногистохимической реакцией к проапоптозному белку ВАХ. Напротив, в конце менструального цикла, когда фактор НЬБР диффузно выявлялся в цитоплазме, наблюдалась сильная иммуногистохимическая реакция к белку ВАХ, а экспрессия ВСЬ-2 была снижена.

Экспрессия антиапоптозного белка ВСЬ-2 была высокой при типичной гиперплазии эндометрия, а в случаях атипической гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциномы снижена. Напротив, экспрессия стимулирующего процессы апоптоза белка ВАХ значительно возрастала в анапластическом эндометрии.

Проапоптозный белок Р53 не выявлен в неизмененном эндометрии и при типичной гиперплазии эндометрия. В свою очередь, в некоторых случаях атипической гиперплазии и во всех случаях высокодифференцированной аденокарциномы была обнаружена экспрессия продуктов мутантного гена р53.

Фактор НЫЛ7 выявлялся на поверхности эпителиальных клеток при типичной гиперплазии, тогда как при неопластических процессах антитела к данному фактору диффузно окрашивали цитоплазму. Антитела к фактору НЬЭР окрашивали в коричневый цвет апоптозные тельца и ядра клеток, в которых только начинались процессы апоптоза, что позволило определить апоптотический индекс в неизмененном и патологическом эндометрии. Апоптотические процессы увеличиваются к концу нормального менструального цикла, а также в анапластически измененном эндометрии.

Выявлена непосредственная связь между факторами апоптоза и рецепторами к стероидным гормонам в неизмененном эндометрии и при типичной гиперплазии эндометрия. Между иммунореактивностью антиапоптозного белка ВСЬ-2 и экспрессией рецепторов к эстрогенам и прогестерону обнаружена положительная корреляция, между проапоптозным белком ВАХ и экспрессией рецепторов к стероидным гормонам выявлена отрицательная корреляция. В анапластических тканях эндометрия данные факторы не коррелировали.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе показаны молекулярно-клеточные механизмы, характеризующие циклические изменения в неизмененном эндометрии и при его неопластической трансформации.

Показана важная роль апоптоза в поддержании тканевого гомеостаза в эндометрии и его непосредственная связь с рецепторами к стероидным гормонам.

Определены иммуногистохимические характеристики гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциномы эндометрия по содержанию рецепторов к эстрогенам и прогестерону и факторам апоптоза. Выявлены молекулярные критерии начальных стадий анапластических процессов.

Полученные в работе данные позволяют расширить представления о клеточной биологии эндометрия в норме и при патологических состояниях и могут быть использованы для улучшения дифференциальной диагностики гиперпластических и неопластических процессов эндометрия.

Практическая ценность работы

Описанный в настоящей работе комплексный иммуногистохимический подход к оценке неизмененного эндометрия и эндометрия при гиперпластических и неопластических процессах представляет практическую ценность для верификации диагноза и прогноза предраковых и раковых заболеваний эндометрия, а также для целесообразности назначения гормональной терапии при данных видах патологии.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Биологическое действие стероидных гормонов на эпителиальный компонент эндометрия определяется уровнем рецепторов к эстрогенам и прогестерону в клетках желез: высокая чувствительность эпителия желез к эстрогенам в течение фазы пролиферации стимулирует развитие секреторного аппарата клетки для его дальнейшей функции в фазе секреции, в свою очередь увеличение чувствительности железистого эпителия к прогестерону в секреторную фазу цикла тормозит пролиферацию тканей, вызванную эстрадиолом, и способствуют развитию секреторной активности эндометрия.

2. Система регуляции синтеза стероидных рецепторов находится под влиянием уровня эстрогенов и прогестерона в крови. Эстрогены стимулируют синтез собственных рецепторов и рецепторов к прогестерону. Прогестерон угнетает синтез как собственных рецепторов, так и рецепторов к эстрогенам.

3. Половые стероиды, воздействуя на экспрессию про- и антиапоптозных белков, контролируют процессы апоптоза в эндометрии человека. Падение уровней эстрогенов и прогестерона к концу менструального цикла приводит к снижению пролиферативных процессов и активации в железистых клетках апоптоза.

4. На пути неопластической трансформации клетки эндометрия утрачивают способность к восприятию стероидных гормонов, в них снижается уровень экспрессии белка ВСЬ-2, препятствующего развитию апоптоза и увеличивается содержание проапоптозного фактора ВАХ и Н1ЛЖ Увеличение уровня апоптотических процессов при неопластической трансформации эндометрия является следствием повышения уровня пролиферативных процессов и направлено на удаление злокачественных клеток.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Ковязин, Владимир Анатольевич

выводы

1. Комплексное иммуногистохимическое исследование экспрессии про-(НЫЛ7, ВАХ, Р53) и антиапоптозных факторов, а также рецепторов к эстрогенам и прогестерону в железистых клетках эндометрия позволяет провести морфо-функциональную оценку состояния эндометрия.

3. Антиапоптозный белок ВСЬ-2 и проапоптозный белок ВАХ определяются во все стадии нормального менструального цикла с разной интенсивностью иммуногистохимического окрашивания, экспрессия проапоптозного белка Р53 для неизмененного эндометрия не характерна.

4. Фактор ШЛЭР обладает проапоптозным действием и характеризует запрограммированную клеточную гибель в конце менструального цикла. НЫЗР выявляется во все фазы менструального цикла, при этом в пролиферативную фазу, а также в раннюю стадию секреторной фазы НЬБР был выявлен в виде коричневой полоски на поверхности железистых клеток эндометрия. В среднюю и позднюю стадию секреторной фазы и менструальную фазу НЫЛ7 фактор распределяется в цитоплазме железистых клеток эндометрия.

5. В неизмененном эндометрии, находящемся в пролиферативной фазе цикла, и при его типичной гиперплазии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, по мере неопластической трансформации эпителия эндометрия количество рецепторов в клетках снижается.

6. Антитела к фактору НЬБР и Р53 являются маркерами начальных стадий анапластических изменений в эндометрии.

7. Использование фактора НЫЭР в роли специфического маркера апоптоза свидетельствует об относительном увеличении процессов апоптоза в конце менструального цикла и при неопластической трансформации клеток.

8. Баланс про- и антиапоптозных факторов находится под влиянием стероидных гормонов, изменение этого баланса может привести к нарушению клеточного гомеостаза железистых клеток и вызвать патологические состояния в эндометрии.

Практические рекомендации

Выявленные в настоящем исследовании особенности клеточной биологии эндометрия в норме и при патологических состояниях могут оказать помощь в постановке правильного диагноза.

Антитела к фактору Н1Л)Р позволяют провести дифференциальную диагностику между доброкачественными и злокачественными процессами в эндометрии человека, и могут быть использованы в качестве нового иммуногистохимического маркера для выявления ранних стадий анапластических процессов. Фактор Н1Х)Р выявляется на поверхности эпителиальных клеток при типичной гиперплазии, тогда как при неопластических процессах антитела к данному фактору диффузно окрашивают цитоплазму.

Иммуногистохимическое исследование рецепторов к стероидным гормонам также может служить дополнительным критерием для дифференциальной диагностики между неопластическим и неизмененным эндометрием, находящимся в пролиферативной фазе цикла. В неизмененном пролиферативном и гиперпластическом эндометрии без атипии более 90% клеток желез содержат рецепторы к стероидным гормонам, при неопластической трансформации наблюдается увеличение числа атипичных железистых клеток с низким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону.

Фактор Р53 может быть использован в качестве надежного онкомаркера: выявление его в железистом компоненте эндометрия свидетельствует о злокачественном фенотипе клеток, и являться дополнительным дифференциально-диагностическим признаком в диагностике атипической гиперплазии и высокодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Ковязин, Владимир Анатольевич, Москва

1. Автандилов Г.Г., Лысенко О.Н. Плоидометрия в диагностике гиперпластических процессов эндометрия // Российские медицинские вести. 2004. - Т.9, № 1. - С.22-27.

2. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. — М.: Медицина, 2002. -238с.

3. Берпггейн Л.М. Эпидемиология, патогенез и пути профилактики рака эндометрия: стабильность или эволюция? // Практическая онкология. -2004. Т.5, №1. — С.1-8.

4. Бохман Я.В., Прянишников В.А., Чепик. О.Ф. Комплексное лечение при гиперпластических процессах и раке эндометрия. М.: Медицина, 1979. - 272с.

5. Вихляева Е.М., Самедова Н.Ч. и др. Гиперпластические процессы репродуктивной системы женщин. М., 1983 — С.67-75.

6. Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии. М.: ООО «Медицинское инфармационное агенство», 2000. - 768с.

7. Давыдов С.Н. Негормональное лечение расстройств менструальной функции и климактерия. Л.: Медицина, 1974. — 174с.

8. Захарцева Л.М., Воробьева Л.И., Манжура Е.П. Морфологические и иммуиогистохимические критерии прогноза при раке эндометрия. // Онкология. 2001. - Т.З, №4. - С.252-256.

9. Кондриков Н.И. Структурно-фунциональные изменения эндометрия под воздействием стероидных гормонов. // Практическая гинекология. —1999. Т.1, №1. - С.20-25.

10. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия.2000. Т.65, №1. - С.5-33.

11. Костанян И.А., Астапова М.В., Старовойтова Е.В., Драницына С.М. Выделение и изучение механизма действия пептидно-белковых факторов дифференцировки, вырабатываемых активированными клетками HL-60. // Цитология. 1994. - Т.З6, №6. - С.525.

12. Кухта В.К., Морозкина Н.В., Богатырева Е.В., Сокольчик Е.Г. Молекулярные механизмы апоптоза. // Белорусский медицинский журнал. 2004. - №1. - С.35-38.

13. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Сравнительная морфология апоптоза и некроза клеток опухолей. // Тезисы I Белорусского съезда патологоанатомов и судебных медиков. Минск. 1991. - №2. - С. 299300.

14. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина, 2001. - 192с.

15. Лысенко О.Н., Ашхаб М.Х., Стрижова Н.В., Бабиченко И.И. Иммуиогистохимические исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах в эндометрии // Архив патологии. 2004. - Т.66, №2. - С.7-10.

16. Манских В.Н. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза. // Бюллетень сибирской медицины. 2004. — Т.1. — С.63-70.

17. Новикова B.C. Программированная клеточная гибель. / Под ред. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. 77с.

18. Новожилова А.П., Плужников H.H., Новиков B.C. Программированная клеточная гибель. / Под ред. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - С.9-29.

19. Райхлин Н.Т., Райхлин А.Н. Апоптоз основные механизмы развития и роль в онкологической практике. / Под ред. C.B. Петрова, Н.Т. Райхлина. // Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - Казань, 2000. - С.250-265.

20. Побединский Н.М., Балтуцкая О.И., Омельяненко А.И. Стероидные рецепторы нормального эндометрия. // Акушерство и гинекология. -№3.-2000. -С.5-8.

21. Пожарисский K.M., Леенман Е.Е. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний. // Архив патологии. 2000. - №1. - С.3-10.

22. Савицкий Г.А. Локальная гиперэстрадиолемия в патогенезе гиперпластических процессов эндометрия. //Вопросы онкологии. 1991. - №2. - С. 164-169.

23. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных // Соровский образовательный журнал 2001. -Т.7, №10. - С.18-25.

24. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. Волгоград: «Семь ветров», 1999. -538с.

25. Серебров А.И. Рак матки. Л.: Медицина, 1968. - 326с.

26. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2001. - С.54-81.

27. Сохова З.М., Артемьев В.Е., Старцева Н.М. Проблема апоптоза и процессов его регуляции в формировании акушерской патологии // Вестник РУДН. 2002. - №1. - С.242-249.

28. Топчиева О.И., Прянишников В.А., Жемкова З.П. Биопсии эндометрия. -М.: Медицина, 1978. 232с.

29. Фанченко Н.Д. Адамян Л.В. и др. Гиперпластические процессы репродуктивной системы женщин. М., 1997. - №7. — С.26-27.

30. Фильченков A.A., Стойка P.C. Апоптоз и рак. Киев: Морион, 1999. -184с.

31. Хмельницкий O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки. СПб.: СОТИС, 2000. - 336 с.

32. Чепик О.Ф. Морфогенез гиперпластических процессов эндометрия. // Практическая онкология 2004. - Т.5, №1. - С.9-15.

33. Чиссов В.И., Старинский В.В. Злокачественные новообразования в России в 2000 году (заболеваемость и смертность). М.: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2002. - 264 с.

34. Эллиниди В.Н., Пожарисский К.М. Ядрышковые организаторы и митотический режим в гиперпластических изменениях и раке эндометрия. // Вопросы онкологии. 1999. - Т.45, №6 — С. 636-639.

35. Ярилин А.А. Апоптоз Природа феномена и его роль в целостном организме // Патол. физиол. и экспер. терапия. — 1998. — Т.2, №1. С.38-48.

36. Ambros R.A., Sheehan С.Е., Kallakury B.V., Ross J.S., Malfetano J., Paunovich E., Figge J. MDM2 and p53 protein expression in the histologic subtypes of endometrial carcinoma. // Mod. Pathol. 1996. - V.9. - P.l 1651169.

37. Amezcua C.A., Zheng W., Muderspach L., Felix J.C. Down regulation of bcl-2 is a potential mark of the efficacy of progestin therapy in treatment of endometrial hyperplasia. // Gynecol. Oncol. 1999. - V.73, №1. - P. 126-136.

38. Ashkenazi A. Targeting death and decoy receptors of the tumour-necrosis factor superfamily // Nat. Rev. Cancer 2002. - V.2. - P.420-30.

39. Athanassiadou P., Petrakakon E., Liossi A. et al. Prognostic significance of P53 bcl-2 and EGFR in carcinoma of endometrium. // Acta. Cytol. 1999. -V.43, №6. - P.1030-1044.

40. Baak J.P.A., Mutter G.L. EIN and WH094. // J. Clin. Pathol. 2005. - V.58, №1. -P.l-6.

41. Balint E.E., Vousden K.H. Activation and activities of the p53 tumour suppressor protein. //Br. J. Cancer. -2001. -V.85. -P.1813-1823.

42. Basu A., Haldar S. The relationship between Bcl-2, Bax and P53: consequences for cell cycle progression and cell death. // Mol. Hum. Reprod. 1998. —V.4. - P. 1099-1109.

43. Baudendistel L.J., Ruh M.F., Nadel E.M., Ruh T.S. Cytoplasmic estrogen receptor replenishment: oestrogems versus anti-oestrogens. // Acta Endocrinol. 1978. - V.89, №3. -P.599-611.

44. Bayard F., Damilano S., Robel P., Banlin E.E. Cytoplasmic and nuclear estradiol and progesterone receptors in human endometrium. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1978. - V.46, №4. -P.635-648.

45. Beato M. Transcriptional control by nuclear receptors. // FASEB J. 1991. — V.4, №:5. — P.2044-2051.

46. Bergeron C., Ferenezy A., Toft D., Shyamala G. Immunocytochemical study of progesterone receptors in hyperplastic and neoplastic endometrial tissues. // Cancer Res. 1988. - V.48. - P.6132-6136.

47. Bergqvist A., Ferno M. Oestrogen and progesterone receptors in endometriotic tissue and endometrium: comparison of different cycle phases and ages. // Human Reproduction. 1993. - V.8. - P.2211-2217.

48. Bhagavan B.S., Parmley T.H., Rosenshein N.B., Jefferys J.L., Grisso J.-A., Stolley P.D. Comparison of estrogen-induced hyperplasia to endometrial carcinoma. // Obstet. Gynecol. 1984. - V.64. - P.12-15.

49. Boise L.N., Gonzalez-Garcia M., Postema C.E., Ding L., Lindsten T., Turka L.A., Mao X., Nunez G. and Tompson C.B. Bcl-x, a bcl-2 related gene that functions as dominant regulator of apoptotic cell death. // Cell 1993. - V.74. -P.597-608.

50. Bokhman J.V. Two pathogenic types of endometrial carcinoma. // Gynecol. Oncol. 1983. - V. 15. - P. 10-17.

51. Bouchard Ph., Marraoui J., Masai M.R. et al. Immunohistochemical localization of oestradiol and progesterone receptors in human endometrium: a tool to assess endometrial maturation. // Baillieres Clin. Obstet. Gynecol. -1991. V.5, №1. — P. 107-115.

52. Bozdogan O., Atasoy P., Erekul S., Bozdogan N., Bayram M. Apoptosis-related proteins and steroid hormone receptors in normal, hyperplastic, and neoplastic endometrium. // Int. J. Gynecol. Pathol. — 2002. — V.21, №4. — P.375-382.

53. Bratton S.B., Cohen G.M. Apoptotic death sensor: an organelle's alter ego? // Trends. Pharmacol. Sci. 2001. - V.22. - P. 306-315.

54. Brustmann H., Naude S. Expression of nm23 in normal, hyperplastic and neoplastic endometrial tissues. // Pathol. Res. Pract. 1999. - V.195. - P.829-834

55. Buckley C.H., Fox H. Biopsy pathology of the endometrium. // Raven Press, New York.-P. 149-165.

56. Buendia B., Santa-Maria A., Courvalin J.C. Caspase-dependent proteolysis of integral and peripheral proteins of nuclear membranes and nuclear pore complex proteins during apoptosis. // J. Cell Sci 1999. - V.112 - P.1743-1753.

57. Casper R.F. Regulation of estrogen/progesterone receptors in the endometrium. // Int. J. Fertil. Menopausal. Stud. 1996. - V.41, №1. - P. 1621.

58. Chan W.K., Mole M.M., Levison D.A., Ball R.Y., Lu Q.-L., Patel K., Hanby A.M. Nuclear and cytoplasmic bcl-2 expression in endometrial hyperplasia and adenocarcinoma. // J. Pathol. 1995. - V.177. - P.241-246.

59. Chittenden T., Harrington E.A., O'Connor R., Flemington C., Lutz R.J., Evan G.I. and Guild B.C. Induction of apoptosis by the Bcl-2 homologue Bak. // Nature 1995. - V.374. - P.731-733.

60. Creasman W.T. Prognostic significance of hormone receptors in endometrial cancer. // Cancer. 1993. -V.71. - P. 1467-1470.

61. Crescenzi E., Criniti V., Pianese M., Tecce M.F., Palumbo G. Differential expression of antiapoptotic genes in human endometrial carcinoma: bcl-XL succeeds bcl-2 function in neoplastic cells. // Gynecol. Oncol. 2000. - V.77, №3.-P.419-428.

62. Critchley H.O., Tong S., Cameron S.T., Drudy T.A., Kelly R.W. and Baird D.T. Regulation of bcl-2 gene family members in human endometrium by antiprogestin administration in vivo // J. Reprod. Fertil. 1999. - V.115. -P.389-395

63. Dahmoun M, Boman K, Cajander S, Westin P, and Backstrom T. Apoptosis, proliferation and sex steroid receptors in superficial parts of human endometrium at the end of the secretory phase. // Clin. Endocrinol. Metab. — 1999. V.84. - P.1737-1743.

64. Dallenbach-Hellweg G., Poulsen H. // Atlas of endometrial histopathology. -1996.

65. Deligdisch L., Cohen C.J. Histologic correlation and virulence implications of endometrial carcinoma associated with adenomatous hyperplasia. // Cancer. — 1985. V.56. -P.1452-1455.

66. Diebold J., Barretton G., Felchner M., Meier W., Dopfer K., Schmidt M. and Lohrs U. Bcl-2 expression, p53 accumulation and apoptosis in ovarian carcinoma cell lines. // Am. J. Clin. Pathol. 1996. - V.105. - P.341-349.

67. Dietel M. The histological diagnosis of endometrial hyperplasia. Is there a need to simplify? // Virch. Archiv. 2001. - V.439, №5. - P.604-608.

68. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrares, and function during apoptosis. // Annu. Rev. Biochem. 1999. - V.68. - P.383-424.

69. Elhafey A.S., Papadimitriou J.C., El-hakim M.S. et al. Computerized image analysis of p53 and proliferating cell nuclear antigen expression in begin, hyperplastic and malignant endometrium. // Arch. Pathol. Lab. Med. 2001. - V.125. — P.872-879.

70. Erdem O., Erdem M., Dursun A. et al. Angiogenesis, p53, and bcl-2 expression as prognostic indicators in endometrial cancer: comparison with traditional clinicopathologic variables. // Int. J. Gynecol. Pathol. — 2003. -V.22. P.254-260.

71. Feinmesser M., Halpern M., Fenig E. et al. Expression of the apoptosis-related oncogenes Bcl-2, Bax and P53 in merkel cell carcinoma: can they predict treatment response and clinical outcome? // Hum. Pathol. 1999. — V.30. - P.1367-1372.

72. Ferenczy A., Gelfand M. The biologic significance of cytologic atypia in progestogen-treated endometrial hyperplasia. // Am. J. Obstet. Gynecol. -1989. V.160. — P.126-131.

73. Fox H. The endometrial hyperplasias. // Obstet. Gynecol. Annu. 1984. -V.13.- P. 197-209.

74. Fox H., Backley C.H. The endometrial hyperplasias and their relationship to endometrial neoplasia. // Histopathology. 1982. - V.6. - P.493-510.

75. Fox H., Backley C.H. Pathology for gynaecologists. 2nd edn. Edward Arnold, //London.-1991.-P.l 18-160.

76. Garcia-Velasco J., Arid A. Apoptosis and the pathgenesis of endometriosis. // Semin. Reprod. Med. -2003. V.21. - P. 165-172.

77. Geisler J.P., Geisler H.E., Wiemann M.C. et al. Lack of bcI-2 persistence: an independent prognostic indicator of poor prognosis in endometrial carcinoma. //Gynecol. Oncol. 1998. - V.71, №2. -P.305-307.

78. Genz T., Eiletz J., Kreuzer G. et al. Endocrine regulation of the endometrium throughout the menstrual cycle. // Geburtshilfe Frauenheikd. 1980. - V.40. -P.990-999.

79. Giatromanolaki A., Sivridis E., Konkonrakis M.I., Harris A.L., Gatter K.C. Bcl-2 and p53 expression in stage I endometrial carcinoma. // Anticancer Res. 1998. -V.18. - P.3689-3693

80. Glasser S.R., Aplin J.D., Guidice L.C., Tabibzadeh S. The Endomitrium. // London&New York; Taylor&Francis. 2002. - 674 p.

81. Gomez-Benitez J., Diaz-Chico B.N. Time course of anterior pituitary estrogen receptor after low 17 beta-estradiol doses in ovariectomized rats. // J. Steroid Biochem. 1985. - V.23, №1. - P.77-80.

82. Gompel A., Sabourin J.C., Martin A., Yaneva H., Audouin J., Decroix Y. and Poitout P. Bcl-2 expression in normal endometrium during the menstrual cycle. // Am. J. Pathol. 1994. - V.144. - P. 1195-1202.

83. Gorczyca W., Gong J., Darzynkiewicz Z. Detection of DNA strand breaks in individual apoptotic cells by the in sith terminal deoxynuclejtidyl transferase and nick traslation assys. // Cancer Res. 1993. - V.53. - P. 1945-1951.

84. Gottlieb R.A. Mitochondria: execution central // FEBS Letters. 2000. -V.482 - P.6-12.

85. Grio R., Curti A., Gobbi F., Piacentino R. Estrogen and progestin treatment in postmenopause. Effects on the endometrium. // Minerva Ginecol. 1998. -V.50., №12. - P.553-556.

86. Hadcock J.R., Malbon C.C. Regulation of receptor expression by agonists: transcriptional and post-transcriptional control. // Trends Neurosci. — 1991. — V.14. -P.242-247.

87. Harada T., Kaponis A., Iwabe T., Taniguchi F., Makrydimas G., Sofikitis N., Paschopoulos M., Paraskevaidis E. and Terakawa N. Apoptosis in human endometrium and endometriosis // Human Reproduction Update 2004. — V.10, №1 — P.29-38.

88. Haunstetter A., Izumo S. Apoptosis: Basic Mechanisms and Implications for Cardiovascular Disease. // Circ. Res. 1998. - V.82. - P.l 111-1129.

89. Henderson B.E., Feigelson H.S. Hormonal carcinogenesis. // Carcinogenesis. -2000. V.21. -P.427-433.

90. Hendrickson M.R., Ross J.C., Kempson R.L. Toward the development of morphologic criteria for well-differentiated adenocarcinoma of the endometrium. // Am. J. Surg. Pathol. 1983. - V.7. -P.819-838.

91. Henzl M.R., Segre E.H. Physiology of human menstrual cycle and early pregnancy. A review of recent investigations. // Contraception. 1970. — V.l. -P.315-338.

92. Hernandez E. Pathological findings and prognosis from uterine malignancies. // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 1993. - V.5. - P.480-485.

93. Ho S.P., Tan K.T., Pang M.W., Ho T.H. Endometrial hyperplasia and the risk of endometrial carcinoma. // Singapore Med. 1997. - V.38. - P.l 1-15.

94. Hopwood D., Levison D.A. Atrophy and apoptosis in the cyclical human endometrium. // J. Pathol. 1976. - V.l 19, №3. - P.159-166.

95. Horn L.C., Bilek K., Schnurrbusch U. Endometrial hyperplasias: histology, classification, prognostic significance and therapy. // Zentralbl. Gynecol. -1997. V.119. — P.251-259.

96. Hudock J.A., Hanau C.A., Christen R., Bibbo M. Expression of estrogen and progesterone receptors in cytologic specimens using various fixatives. // Diagn. Cytopathol. 1996. - V.l5, №1. - P.78-83.

97. Hunter J.E., Tritz D.E., Howell M.G., DePriest P.D., Gallion H.H., Andrews S J. et al. The prognostic and therapeutic implications of cytologic atypia in patients with endometrial hyperplasia. // Gynecol. Oncol. 1994. - V.55. -P.64.71.

98. Hussain S.P., Hollstein M.N., Harris C.C. The p53 tumor supressor gene: at the crossroads of molecular carcinogenesis, molecular epidemioogy and cancer risk assessment. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2000. - V.919. - P.79-85.

99. Inoue M., Okayama A., Fujita M., Enomoto T., Sakata M., Tanizawa O., Neshima H. Clinicopathological characteristics of P53 overexpression in endometrial cancers. // Int. J. Cancer 1994. - V.58. - P. 14-19.

100. Isola J J. Immunohistochemical demonstration of adrogen receptor in breast cancer an its relationship to other prognostic factors // J. of Pathology. 1993.- V.170, №1. -P.31-35.

101. Jackel M.C., Dorudian M.A., Marx I., Brinck U., Schauer A., Steiner W. Spontaneous apoptosis in laryngeal squmous cell carcinoma is independent of Bcl-2 and Baxprotein expression. // Cancer. 1999. - V.85. - P.591-599.

102. Jacques S.M., Qureshi F., Munkarah A., Lawrence W.D. Interinstitutional surgical pathology review in gynecologic oncology: endometrial cancer in hysterectomy specimens. // Int. J. Gynecol. Pathol. 1998. - V.17. - P.42-45.

103. Janicek M.F., Rosenshein N.B. Invasive endometrial cancer in uteri resected for atypical endometrial hyperplasia. // Gynecol. Oncol. — 1994. V.52. — P.373-378.

104. Janne O., Isomaa V., Isotalo H., Kokko E., Vierikko P. Uterine estrogen and progestin receptors and their regulation. // Ups. J. Med. Sci. Suppl. -1978. -V.22 P.62-70

105. Jensen E.V. Steroid hormones, receptors, and antagonists. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1996.-V.784.-P.1-17.

106. Jensen E.V., Jacobson H.I. Basic guides to the mechanism of estrogen action. // Recent. Prog. Horm. Res. 1962. - V.18. - P.387.

107. Jones R.K., Searle R.F., Stewart J.A., Turner S., Bulmer J.N. Apoptosis, bcl-2 expression, and proliferative activity in human endometrial stroma and endometrial granulated lymphocytes. // Biol. Reprod. 1998. - V.58. - P.995-1002.

108. Kaku N., Kamura T., Hirakawa T., Sakai K., Amada S., Kobayashi H., Nakano H. Endometrial carcinoma associated with hyperplasia — immunohistochemical study of angiogenesis and p53 expression. // Gynecol. Oncol. 1999. - V.72. - P.51-55.

109. Kassis J.A., Gorski J. On the mechanism of estrogen receptor replenishment: recycling, resynthesis and/or processing. // Mol. Cell. Biochem. 1983. -V.52, №1. - P.27-36.

110. Kerr J.F.R., Wyllie F.N., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide ranging implications in tissue kinetics. // Brit. J. Cancer. 1972. - V.26, №2. - P.239-257.

111. Khong T., Abdul Rahman H. Bcl-2 expression delays postpartum involution of pregnancy-induced vascular changes in the human placental bed. // int. J. Gynecol. Pathol. 1997. -V. 16, №2. - P. 138-142.

112. Kiechle M., Hinrichs M., Jacobsen A., Luttges J., Pfisterer J., Kommoss F., Arnold N. Genetic imbalances in precursor lesions of endometrial cancer detected by comparative genomic hybridization. // Am. J. Pathology 2000. — V.156. -P.1827-1833.

113. King W.J., Desombre E.R., Jensen E.V., Green G.L. Comparison of immunocytochemical and steroid binding assaya for estrogen receptor in human tumors. // Cancer. 1985. - V.45. - P.293.

114. King S.A., Adas A. A., LiVolsi V.A. Expression and mutation analysis of the p53 gene in uterine papillary serous carcinoma. // Cancer. 1995. -V.75. -P.2700-2705.

115. Kinzler K.W., Vogelstein B. Live (and death) in malignant tumor. // Nature. -1996. V.379. -P.19-20.

116. Kistner R. Estrogens and endometrial carcinoma // Obstet. Gynecol. — 1976. — V.48. -P.479-482.

117. Koh E.A., Illingworth P.J., Duncan W.C., Critchley H.O. Immunolocalisation of bcl-2 protein in human endometrium in the menstrual cycle and simulated early pregnancy. // Hum. Reproduction 1995. - V. 10, №6 - P. 1557-1562.

118. Kokawa K., Shikone T., Nakano R. Apoptosis in human uterine endometrium during the menstrual cycle. // Journal of Clin. Endocrinol, and Metab. 1996.- V.81, №11. P.4144-4147.

119. Kokawa K., Shikone T., Otani T., Nishiyama R., Ishii Y., Yagi S. and Yamoto M. Apoptosis and the expression of Bax and Bcl-2 in hyperplasia and adenocarcinoma of the uterine endometrium. // Hum. Reproduction 2001a. -V.16, №10. -P.2211-2218.

120. Konno R., Yamakawa H., Utsunomiya H., Ito K., Sato S. and Yajima A. Expression of survivin and Bcl-2 in the normal human endometrium. // Mol. Hum. Reprod. 2000. - V.6. - P.529-534.

121. Kontula K. Progesterone-binding proteins from endometrium and miometrium of sheep uterus: a comparative study. // Acta Endocrinol (Copenh). 1975. - V.78. -P.596-603.

122. Korsmeyer S.J. Bcl-2 gene family and the regulation of programmed cell death. // Cancer Res. 1999. -V.59 - P. 1693-1700.

123. Koshiyama M., Konishi I., Wang D. et al. Immunohistochemical analysis of P53 protein overexpression in endometrial carcinomas: inverse correlation with sex steroid receptor status. // Virchows Arch. 1993. — V.423, №2. -P.265-271.

124. Kounelis S., Kapranos N., Kouri E., Coppola D., Papadaki H. and Jones M.W Immunohistochemical profile of endometrial adenocarcinoma: a study of 61 cases and review of literature. // Mod. Pathol. 2000. - V.13. - P.379-388.

125. Kovalev S., Marchenko N., Chalas E. et al. Loss of the p53 function in uterine papillary serous carcinoma. // Human Pathol. 1998. - V.29. - P.613-618.

126. Krajewski S., Krajewska M., Shabaik A. et al. Immunohistochemical determination of in vivo distribution of Bax. A dominant inhibitor of bcl-2. // Am. J. Pathol. 1994. - V.145. -P.1323-1326.

127. Kreitmann B., Bayard F. Oestrogen and progesterone receptor concentrations in human endometrium during gestation. // Acta Endocrinol. (Copenh). -1979. V.92, №3. - P.547-552.

128. Kroemer G., Dallaporta B., Resche-Rigon M. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis. // Annu. Rev. Physiol. 1998. -V.60.-P.619-642.

129. Kuerbitz S.J., Plunkett B.S., Walsh W.V., Kastan M.B., Wild-type p53 ia a cell cycle checkpoint determinant folowing irradiation. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - V.89. - P.7491-7495.

130. Kumar S., Zhu L.-J., Polihronis M. et al. Progesterone induces calcitonin gene expression in human endometrium within the putative window of implantation. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1998. - V.83. - P.4443-4450.

131. Kurman R.J., Kaminski P., Norris H. The behavior of endometrial hyperplasia: A long term study of «untreated» hyperplasia in 170 patients. // Cancer. 1985.-V.56.-P.403.

132. Kurman R.J., Norris H.J. Evalution of criteria for distinguishing atypical endometrial hyperplasia from well-differentiated carcinoma. // Cancer. — 1982. V.49. - P.2547-2559.

133. Lawen A. Apoptosis an introduction // BioEssays. - 2003. - V.25. - P. 888896.

134. Lax S.F., Pizer E.S., Ronnett B.M., Kurman R.J. Clear cell carcinoma of the endometrium is characterized by a distinctive profile of p53, Ki-67, estrogen, and progesterone preceptor expression. // Hum. Pathol. 1998. - V.29. -P.551-558.

135. Lenton E.A., Cripps K., Sulaiman R., Sobowale O., Ryle M., Cooke I.D. Plasma prolactin concentrations during conception and first ten weeks of human pregnancy. // Acta Endocr. 1982. - V.65. - P.295-300.

136. Levine A.J., Momand J., Finlay C.A. The p53 tumor supressor gene. // Nature. 1991. - V.351.-P.453-456.

137. Li S.F., Shiozama T., Nakayama K., Nikaido T., Fujii S. Stepwise abnormality of sex steroid hormone receptors, tumor suppressor gene products (P53 and Rb), and cyclin E in uterine endometrioid carcinoma. // Cancer. 1996. - V.77. - P.321-329.

138. Longacre T.A., Kempson R.L., Hendrickson M.R. Endometrial hyperplasia, metaplasia and carcinoma. / In: Fox H., Wells M. (eds.) Obstetrical and Gynaecological Pathology, 4lh edn. Churchill Livingstone, Edinburgh, 1995. - P.421-510.

139. Lu Q., Abel P., Foster C., Lalani E.N. Bcl-2: role in epithelial differentiation and oncogenesis. // Hum. Pathol. 1996. - V.27. - P. 102-110.

140. Marone M., Fernandina G., Macchia G. et al. Bcl-2, Bax, Bcl-xl and Bcl-xs expression in neoplastic and normal endometrium. // Oncology. 2000. -V.58, №1. — P.161-168.

141. Marsden D.E., Hacker N.F. Optimal management of endometrial hyperplasia. // Best Practice & Research Clin. Obst. & Gyn. 2001. - V.15, №3. - P.393-405.

142. Mayo J.L. Healthy menstrual cycle. // Clinical Nutrition Insights. 1997. -V5.-P.l-8.

143. McClelland R.A., Wilson D., Leake R., Finlay P., Nicholson R.I. A multicentre study into the reliability of steroid receptor immunocytochemical assay quantification. British Quality Control Group. // Eur. J. Cancer. 1991. -V.27, №6. -P.711-715.

144. Metzger D.A. Cyclic changes in endometriosis implants. / In: The current status of endometriosis research and management. Ed. I. Brosens, J. Donnez. - Carndorth.Pathenon Publishing Group Ltd, 1993. - P.89-108.

145. Milgrom E., Baulieu E.E. Progesterone in uterus and plasma. IV. Progesterone receptor(s) in guinea pig uterus cytosol. // Steroids. 1970. -V.16. -P.741-754.

146. Miyashita Т., Reed J.C. Tumor suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. // Cell. 1995. - V.80. - P.293-299.

147. Moulton B.C., Motz j., Serdonillo C., Akcali K.C., Khan S.A. Progesterone withdrawal and ru-486 treatment stimulate apoptosis in specific uterine decidual cells. // Cell Death Dsiff. 1997. - V.4. - P.76-81.

148. Mozetti S., Ferrandina G., Marone M. et al. Expression of bcl-2, bax, bcl-xL and bcl-xs in endometrial and cervical tissues. // Can. Detect. Prevent. — 2000. V.24. -P.536-541.

149. Murakami T. Endometrial steroid receptor during normal menstrual cycle and physiopathology of nidaton. // Acta. Obstet. Gynecol. Jap. 1984. - V.36, №1. — P.85-93.

150. Mutter G.L., Wada H., Faquin W.C., Enomoto T. K-ras mutations appear in the premalignant phase of both microsatellite stable and unstable endometrial carcinogenesis. // Mol. Pathol. 1999. - V.52. - P.257-262.

151. Naismith J.H., Sprang S.R. Modularity in the TNF-receptor family. // Trends. Biochem. Sci. 1998. - V.23. -P.74-79.

152. Nakamura T., Nomura S., Sakai T., Niriya S. Expression of Bcl-2 oncoprotein in gastrointestinal and uterine carcinomas and their premalignant lesions. // Hum. Pathol. 1997. - V.28. - P.309-315.

153. Niikura H., Sasano H., Kaga K., Sato S., Yajima A. Expression of epidermal growth factor family proteins and epidermal growth factor receptor in human endometrium. // Hum. Pathol. 1996. - V.27. - P.282-289.

154. Norris H.J., Becjer R.L., Mikel U. A comparative morphometric and cytophotometric study of endometrial hyperplasia, atypical hyperplasia and carcinoma. // Human. Path. 1989. - V.20. - P.219-223.

155. Noyes R.W., Haman J.O. Accuracy of endometrial dating. Correlation of endometrial dating with basal body temperature and menses. // Fertil. Steril. -1953. V.4. - P.504-517.

156. Nurse P. Checkpoints pathways come of age. // Cell. 1997. - V.91. - P.865-867.

157. Oehler M.K., Rees M.C., Bicknell R. Steroids and the endometrium. // Curr. Med. Chem. 2000. - V.7, №5. - P.543-560.

158. Oltvai Z.N., Milliman C.L. and Korsmeyer S.J. Bcl-2 heterodimerizes in vitro with a conserved homolog, Bax, the accerelated programmed cell death. // Cell. 1993. - V.74. - P.609-619.

159. Otsuki Y., Misaki D., Sugimoto O, Ito Y., Tskjimoto Y., Akao Y. Cycle bcl-2 gene expression in human uterine endometrium during menstrual cycle. // Lancet. 1994. - V.344, № 8914. -P.28-29.

160. Otsuki Y. Apoptosis in human endometrium: apoptotic detection methods and signaling. // Med. Electron. Microsc. 2001. - V.34. - P. 166-173.

161. Owen-Schaub L.B., Zhang W., Cusack J.C., Angelo L.S., Santee S.M., Fujiwara T., Roth J.A., et al. Wild-type human p53 and a temperature-sensitive mutant induce Fas/APO-1 expression. // Mol. Cell. Biol. 1995. -V.15. -P.3032-3040.

162. Palazzo J.P., Mercer W.E., Kovatich A.J., McHugh M. Immunohistochemical localization of p21 in normal, hyperplastic and neoplastic uterine tissue. // Hum. Pathol. 1997. - V.27. - P.60-66.

163. Pecci A., Scholz A., Pelster D., Beato M. Progestins prevent apoptosis in a rat endometrial cell line and increase the ratio of bcl-XL to bcl-XS. // J. Biol. Chem. 1997. - V.272. - P. 11791-11798.

164. Pierro E., Minici F., Alesiani O. et al. Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium. // Biol. Reprod. — 2001. -V.64. -P.831-838.

165. Piquette G.N., Tilly J.L., Prichard L.E., Simon C., Polan M.L. Detection of apoptosis in human and rat ovarian follicles // J. Soc. Gynecol. Invest. 1994. - V.l. -P.297.

166. Pisani A.L., Barbuto D.A., Chen D., Ramos L., Lagasse L.D., Karlan B.Y. HER-2/neu, P53 and DNA analyses as prognosticators for survival in endometrial carcinoma. // Obstet. Gynecol. 1995. - V.85. - P.729-734.

167. Pluquet O., Hainaut P. Genotoxic and non-genotoxic pathways of p53 induction. //Cacer. Lett. 2001. - V.174. -P.l-15.

168. Pollard J.W., Pacey J., Cheng S.V., et al. Estrogens and cell death in murine uterine luminal epithelium. // Cell Tissue Res. 1987. - V.249, №3. - P.533-540.

169. Ponder B. Gene losses in human tumors. // Nature. 1988. - V.335. - P.400-402.

170. Press M.F., Nousek-Goebl n., King W.J. et al. Immunohistochemical assessment of estrogen receptor distribution in the human endometrium throughout the menstrual cycle. // Lab. Invest. 1984. - V.51. - P.495.

171. Quirk S.M., Currie W.B. Uterine steroid receptor changes associated with progesterone withdrawal during pregnancy and pseudopregnancy in rabbits. // Endocrinology. 1984. - V.l 14. - P. 182-191.

172. Raff M., Bares B.A., Burne J.F. et al. Programmed cell death and the control of cell survival: lessons from the nervous system. // Science. — 1993. V.262. -P.695-697.

173. Rao L., Perez D., White E. Lamin proteolysis facilitates nuclear events during apoptosis. //J. Cell. Biol. 1996. -V.135. - P. 1441-1455.

174. Reed J.C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death. // Cell. Biol. -1994.-V.124.-P.1-6.

175. Reed J.C. Regulation of apoptosis by bcl-2 family proteins and its role in cancer and chemoresistance. // Curr. Opin. Oncol. — 1995. V.7, №6. — P.541-546.

176. Reed J.C. Double identity for proteins of the Bcl-2 family. // Nature. 1997. - V.387. — P.773-776.

177. Robbins S.L., Cotran R.S., Kumar V., Collins T. Robbins' Pathologic Basis of Disease. 6th ed. Philadelphia, 1999. -P.132.

178. Robles A.I, Harris C.C. p53-mediated apoptosis and genomic instability diseases. // Acta. Oncol. 2001. - V.40 - P.696-701.

179. Rotello R., Lieberman R.C., Lepoff R.B. and Gerschenson L.E. Characterization of uterine epithelium apoptotic cell death kinetics and regulation by progesterone and RU 486. // Am. J. Pathol. 1992. - V.140. -P.449-456.

180. Runowicz C.D., Nüchtern L.M., Braunstein J.P., Jones J.G. Heterogeneity in hormone receptor status in primary and metastatic endometrial cancer. // Gynecol. Oncol. 1990. - V.38, №3. -P.437-441.

181. Saegusa M., Kamata Y., Isano M., Okayasu I. Bcl-2 expression is correlated with a low apoptotic index and associated with progesterone receptor immonoreactivity in endometrial endometrial carcinoma. // J. Pathol. 1996. - V. 180. — P.275-282.

182. Saegusa M., Okayasau I. Down-regulation of Bcl-2 expression is closely related to squamous differentiation and progesterone therapy in endometrial carcinoma. // J. Pathol. 1997b. - V.182. -P.429-436.

183. Saegusa M., Okayasu I. Progesterone therapy for endometrial carcinoma reduces cell proliferation but does not alter apoptosis. // Cancer. — 1998. — V.83. -P.111-121.

184. Sakuragi N., Ohkouchi T., Hareyama H., Ikega K., Watari H., Fujimoto T., Kuwabara M., Yamamoto R., Sagawa T., Fujino T., Fujimoto S. Bcl-2 expression adn prognosis of patiens with endometrial carcinoma. // Int. J. Cancer. 1998.- V.79.-P.153-158.

185. Sakuragi N., Salah-eldin A.E., Watari H., Itoh T., Inoue S., Moriuchi T., Fujimoto S. Bax, Bcl-2 and p53 expression in endometrial cancer. // Gynecol. Oncol. 2002. - V.86. - P.288-296.

186. Sale R., Sylander K., Hall P.A. Why is P53 protein stabilized in neoplasia? Some answers but many more questions. // J. Pathol. 1998. - V.184. -P.348-350.

187. Savill J. Phagocytic docking without shoking. // Nature. 1998. - V.392. -P.442-443.

188. Skov B.G., Broholm H., Engel U., Franzmann M.B., Nielsen A.L., Lauritzen A.F., Skov T. Comparison of the reproducibility of the WHO classifications of 1975 and 1994 of endometrial hyperplasia. // Int. J. Gynecol. Pathol. -1997. V.16, №1. — P.33-37.

189. Scully R.E., Bonfiglio T.A., Kurman R.J., Silverberg S.G., Wilkinson E.J. Uterine corpus in Histologic typing of tumors of the female genital tract (WHO-Fascicle). //Heidelberg, Springer-Verlag, 1994. -P.26-28.

190. Sherman A.I., Brown S. The precursors of endometrial carcinoma. // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1979.-V.135.-P.947-956.

191. Shikone T., Kokawa K., Yamoto M., Nakano R. Apoptosis of the human ovary and uterine endometrium during the menstrual cycle. // Hormone Res. -1997. V.48, №1. -P.27-34.

192. Shroyer K.R., Stephensen J.K., Silverberg S.G., Marcham N., Shroyer A.L., Wilson M.L. Telomerase expression in normal endometrium, endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinomas. // Int. J. Gynecol. Pathol. -1999. V.16. -P.219-224/

193. Silverberg S.G., Mutter G.L., Kubik-Huch P.A., Tavassoli F.A. Endometrial Tumours and related Lesions // WHO Classifications of Tumours, Pathology and Genetics / Tumours of the Breast and Female Genital Organs. IARC Press, 1994. -P.221-232.

194. Silverberg S.G. Problems in the differential diagnosis of endometrial hyperplasia and carcinoma. // Mod. Pathol. 2000. - V.13. - P.309-327.

195. Silverberg S.G., deGiorgi L.S. Histopathologic analysis of preoperative radiation therapy in endometrial carcinoma. // Am. J. Obstet. Gynecol. -1974. V. 119. — P.698-704.

196. Silverberg S.G., Kurman R.J. Tumors of the uterine corpus and gestational trophoblastic disease. Atlas of Tumor Pathology, AFIP Fascicle. 3rd series. -Springer Verlag, 1992. V.3. - P.47-89.

197. Sivridis E., Fox H., Buckley C.H. Endometrial carcinoma: two or three entities? // Int. J. Gynecol. Cancer. V.8. - P. 183-188.

198. Sivridis E., Giatromanolaki A., Konkonrakis M., Anastasiadis P. Endometrial Carcinoma: association of steroid hormone receptor expression with low angiogenesis and bcl-2 expression. // Virchows Arch. 2001. - V.438, №4. -P.470-477.

199. Sivridis E., Giatromanolaki A., Koukourakis M., Agnatis N. Lectin-binding patter in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium: the prognostic value of concanavalin. // Virch. Arch. 2000. - V.436. - P.52-58.

200. Sivridis E. Histological evaluation of the endometrium: from hyperplasia to cancer. // Eur. J. Gynaecol. Oncol. 1996. - V.5." - P.440-442.

201. Sommers S.C. The significance of endometrial hyperplasias / In: New concepts in gynecological oncology. Philadelfia, 1966. -P.356-365.

202. Sung C.J., Zneng Y., Quddus M.R., Kang X., Zhang Z.-F., Lauchlan S.C. and Zheng W. p53 as a significant prognostic marker in endometrial carcinoma. // Int. Gynecol. Cancer 2000. - V.10. - P. 119-127.

203. Tabibzadeh S. Signals and molecular pathways involved in apoptosis with special emphasis on human endometrium. // Hum. Reprod. 1995. - V.l. — P.303-323.

204. Takai N., Miyazaki T., Nishida M., Nasu K., Miyakawsa I. Survivin expression correlates with clinical stage, histological grade, innvasive behavior and survival rate in endometrial carcinoma. // Cancer Lett. 2002. -V.l84, №1. - P. 105-116.

205. Tamaya T., Murakami T., Okada H. Concentrations of steroid receptors in normal human endometrium in relation to the day of the menstrual cycle. // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 1986. - V.65. - P. 195-198.

206. Taskin M., Lallas T.A., Barber H.R., Sherchuk M.M. bcl-2 and p53 in endometrial adenocarcinoma. // Mod. Pathol. 1997. - V.10, №7. - P.728-734.

207. Tavassoli F., Kraus F.T. Endometrial lesions in uteri resected for atypical endometrial hyperplasia. // Am. J. Clin. Pathol. 1978. - V.70. - P.770-779.

208. Taymor M.L. The use of luteinizing-releasing hormone in genecology. // Fertil. Steril. 1974.- V.25.-P.992-1005.

209. Teleman S., Mihailovici M.S., Hilgarth M., Freudenberg N., Bettendorf H. p53 and steroid receptors support double endometrial cancinogenesis. // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. 1999. - V.103. -P.131-135.

210. Teleman S., Mihailovici M.S. Value of steroid receptors assessment in atypical endometrial hyperplasia // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. — 2003. V.107, №4. -P.813-816.

211. Terakawa N., Kigawa J., Taketani Y., Yoshikawa H., Yajima A., Noda K., Okada H., Kato J. et al. The behavior of endometrial hyperplasia: a prospective study. Endometrial Hyperplasia Study Group. // J. Obstet. Gynaecol. 1997. - V.23. -P.223-230.

212. Trogovac T.C., McGauphy V.R., Neemann T.H. Bcl-2 expression in endometrial hyperplasia and carcinoma. // Am. J. Clin. Pathol. — 1995. — V.104. -P.342.

213. Trope C.G., Marth C., Scheistroen M., Abeler V.M. Review Endometrial hyperplasia diagnosis and treatment. // Tidsskr Nor Laegeforen. - 1999. -V.l 19. -P.2030-2034.

214. Utaaker E., Iversen O., Skaarland E. The distribution and prognostic implications of steroid receptors in endometrial carcinomas. // Gynecol. Oncol. 1987. - V.28. - P.89-100.

215. Vaskivuo T.E., Stenback F., Karhumaa P., Risteli J., Dunkel L. and Tapanainen J.S. Apoptosis and apoptosis-related proteins in human endometrium. // Mol. Cell. Endocrinol. 2000. - V.l65. - P.75-83.

216. Vaskivuo T.E., Stenback F. and Tapanainen J. Apoptosis and apoptosis related factors Bcl-2, Bax, TNF-alpha and NF-kB in human endometrial hyperplasia and carcinoma. // Cancer. 2002. - V.95, №7. - P.1463-1471.

217. Vecek N., Nola M., Marusic M. et al. Prognostic value of steroid hormone receptors concentration in patients with endometrial carcinoma. // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 1994. - V.73. - P.730-733.

218. Vedeckis W.V. Nuclear receptors, transcriptional regulation, and oncogenesis. //Proc. Soc. Experim. Biol. Med. 1992. - V.199. - P.l-12.

219. Vignon F., Rochefort H. Regulation of estrogen receptors in ovarian-dependent rat mammary tumors. I. Effects of castration and prolactin. // Endocrinology. 1976. - V.98. -P.722-730.

220. Vogelstein B., Kinzler K.W. p53 function and dysfunction. // Cell. 1992. -V.70. - P.523-526.

221. Wahl G.M, Carr A.M. The evolution of diverse biological responses to DNA damage: insights from yeast and p53. // Nat. Cell. Biol. 2001. - V.3. -P.277-286.

222. Walker P.R., Leblanc J., Smith B., Pandey S., Sikorska M. Detection of DNA fragmentation and endonucleases in apoptosis // Methods. 1999. — V.17. -P.329-338.

223. Warnke R., Levy R. Detection of T and B cell antigens with hybridoma monoclonal andibodies. A biotin-avidin-horseradish peroxidase method. // J. Histochem. Cytochem. 1980. - V.28. -P.771.

224. Wehling M. Looking beyond the dogma of genomic steroid action: insights and facts of the 1990s. // Mol. Med. 1995. - V.73. - P.439- 447.

225. Wentz W.B. Progestin therapy in endometrial hyperplasia. // Gynecol. Oncol. 1974. — V.2. — P.362-367.

226. Winkler B., Alvarez S., Richart R.M., Crum C.P. Pitfulls in the diagnosis of endometrial hyperplasia. // Obstet. Gynecol. 1984. - V.64. - P. 185-193.

227. Автор диссертации приносит слова искренней благодарности за помощь в осуществлении настоящей работы:

228. Научному руководителю заведующему кафедрой патологической анатомии медицинского факультета Российского университета дружбы народов профессору, доктору медицинских наук И.И. Бабиченко.

229. Доцентам кафедры патологической анатомии медицинского факультета Российского университета дружбы народов кандидату медицинских наук А.Л. Владимирцевой и кандидату медицинских наук Н.М. Харченко.

230. Врачам патологоанатомического отделения Госпиталя для ветеранов войн №2: В.Н. Кукушкину и заведующей отделением доктору медицинских наук Л.В. Гундоровой.

231. Заведующему патологоанатомическим отделением Городской клинической больницы №4 г. Москвы профессору, доктору медицинских наук К.А. Рогову.

232. Кафедре патологической физиологии медицинского факультета РУДН.

Информация о работе

Ковязин, Владимир Анатольевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Иммуногистохимическое исследование пролиферативных, гиперпластических и неопластических процессов в эндометрии женщин - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы