Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Идентификация и иммунохимическое тестирование белковых маркеров рака яичников

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Идентификация и иммунохимическое тестирование белковых маркеров рака яичников"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ

РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ПРОКОПЕНКО Петр Георгиевич

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ИММУНОХИМИЧЕСКСЕ ТЕСТИРОВАНИЕ БЕЛКОВЫХ МАРКЕРОВ РАКА ЯИЧНИКОВ

(03.00.04 — биохимия)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1993

Работа выполнена в Российском государственном медицинском университете.

Научный консультант — академик РАЕН,

профессор Ю. С. Татаринов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Г. И. Авдеев доктор медицинских наук, профессор А. М. Герасимов доктор медицинских наук, профессор Л. Ф. Панченко

Ведущее учреждение — Онкологический научный центр РАМН.

Защита диссертации состоится на заседании Специализированного Ученого Совета № 3 Д 084.14.03 РГМУ (ул. Островитянова, 1).

*_» ._ 1994 г. в 14 часов.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ (ул. Островитянова, 1).

Автореферат разослан «-> ---- 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, доктор медицинских наук,

профессор П. К. Джанашия

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность иеследозания. Основной трудностью в успеепой гэралги рака яичников ягляется несовершенство методов сзсззрскенной / ранней / диагностики этого за-бйлоьйп:ы. ]'• результате около 80% больных раком якчки-К02 Шйхп 8 началу лзченкя распространенный процесс и ЯОЗУОМу рьцфкаяьисо хирургическое лечение выполняется ТОЛИ» у 80$ больно, что означает крайне неблагоприятный прогноз / ¡иС„Кразвская»1976 /. Тщательно заблокированная клйнккз раннего рака яичников обусловила поиск:? позпх кетодов лабораторной диагностики, аовюс опухолет« мзраеров» которые способствовали бы улуч-ивддо результатов ргпией диаглостикя этого, заболевания. Необходимо отезтпть, что диагностика добрекачес-ТРешшх сяуколей я:гшиков"'<-я^е л^т л акту&тьна, так "Гк. **,,,пер£!Г-зш? раки з зтом органе з подавляющем боль-гапотво Случсй23 развиваются з серозных а псеядоглуципоз-in.sc И'мгвис ел! на фоне процессов, им аналогичных" /Н.Ф. Глазу::оа,1251 /. Исходя из этого, на нал взгляд, точнее бшго бы гошрять о закпости ранней диагностика опухолей - яз»н£К£ш* ...

Однако■какого метода диагностики или опухолевого эркера, г:о?ор»б удовлетворяла бы большинство исследователей я ялиякцкстов, при раке яичников пока нз найдепо. ПоЗжСму потгск новых опухолевых маркеров и разработка , поз;.'" .методов диагностики рака яичкиксз остается весьш елстуадьной. задачей. •

Цель исследования. Целью настоящего исследования яз' лястся поиск, вденуифшмция и толунохшическоз тсстиро-гшпю белковых улркероз рака яичников. Основкыа задаст, исследования. . "!

-1ф Поиск п луцунохшдпаская идентификация опухслэвш: :.'лрт:вров з ткали адепокарцнно.*лы язчнипоэ п в атаяи ::ота-• ■ сгазсз аденскарцино:ш яичвнков. .

2. Изучзнсо свойств а разработка способов аолучеагя вдзвхбй^а^вагшых. авткгеяоа,

3. Разработка / радаоЕ^ТЕологгигс-г coro, х&ъ^офаркзэтЕОГо / шгодоз определения eoehz бак-ковах маркеров'в онворотш scpolai»

4. Оценка дшадюотцадкйп: воз*шностз2 для passsro скришшгс ояухолэй яичшйк» Езвосгного белкового агдекегра-¿оррктица. •

5. Изучение ц оцэегг. д^ашйотичеоЕсг nspcaeasEB .ео-г-%. г.арг.зроз ;уя ¿ШШ:сквя ощ^олевэ£ саттарь^ яичккков .

Научная новЕзна. Впорваа цуоведево caareaaiEsaci-res кзучйыи! антигенной структуры ке^астазов рака яечньлюв» представ ешяйх аул "чпстнх1"' оа^йдевшс клвгок, о целью пояска новых опухолевых шрке-ров» ¡Йаентифшхарогаао 20 узкоепе-дздчееких антигенов, нг^азвных "свариашю^га-статичсоаао: антигонага" / ОЫД Л Epejssaseaa клааес-факаяся овараально-штаохатгяескгзх сзияге&ог с содраэдегг шаи их es оргаЕоспецЕцотескяо, зв2^анга6аец2фа!»газ19в егзЗриоаальнне, оцухолеассоцшфоваан2£2.*>

Для 4-е еовых сшарладшо^э'гастагажсазгг еянагсзоз обработаны кслЕчаственные / радеогаазуесшзетес^, issg^s-ферментный / метода определения es в «гь^рокш ярош» е.. гакае разработаны способы' их получанЕЕ^, Езгориз гащщзещ авторскими свидетельствами / патвнтаыа / ш шобрггзаял, ■ БаорЕыа наглядно ародеьюЕстрнроБЬЗ фандаз эктопического синтеза спэшфгчэского трофобластшвсзаЕЕО йага-агга-копротеина /ТЕГ/ в тканл аденоаарцнноыз- яЕяаакгз'а «Заа-ружэны шрфологнчзснсе структуры е которые mzgt üzzb сг-ветственнкш за его свнтаз в опухохлЕ»

Практическая зяачитасгь работы., Разработала СШ2££2 получения 4-z новых белков к заяшцеш амгорсшшз саащэ-твльотваии на изобретеннЕ» Разработаш кслЕчеетвазше! катоды определення еоеух оварнально-матастатЕчвахш: белйшх В сыворотко КрОВЕ бОЛЬЕНХ. ПрЭДДОЕвНО ПрСВОДЕТЬ ЕОЛИЗС?— венное определение фэррнтина в сыворотке крова две равна-

з

'£■0 обнаружения опухолей .Т'Лаяпоз* Цроиадека злззпггеские испытания 2>.и^нодга1,зосг2Еуа'д dspansmiesía а трсфобласг:-'гесжс опухолей тляткт.1, 1:о?орнА патумн по aaisojT/ ьгатоду л лрставэдствонних условиях. Лрсдлодаю арйкзаоииз ;:слз-^стзаанех «гтодоа определена яоадвдйеа ш hos^i оварп-essanis з котазтатотескзх бзляоз з coistagmt у фэрратлЕ«1:е ' что кпгг создать рзатавуэ оснозу ддд проблем

prase;-«: з сзйц^жэгхой днагзосяза река ízswxob»

/гоабачгл. работа. Иатарга® дзссчртецда дозлагезаже* ва ыз^лаборгторгаз: "онф^ренхетс РГМУ j на, saeQ053E0!i с:г>

"Дгзгносзгггл .7. лг^'-гз'-^л tíasirsa пря ргксс: rs» с.-ййакг«г:згаяз епухелгй дглизкоэ" / ПоскзаД?53 /5 ~а ^r^spajjs» Ёок^зрггдЕг:: Тоорзтотескга п плязвъзс-» лгз «escasas» рг?зсап / ОрсЛбург.Ж»» 1989 /, ''Проблем? „и^г.П'ссгягга ог^узсоле'Л' геаехнх пплп»«» ергадгг/ / Сяе^з, кто <arst¿V9£ /» "Рребгекз дошгкостзяа раза* /Сшисрэ,йпоз2Я, ' ШЗ /« • . *

Дсссертедгя нзлоаена на £?,8 отрашщзз ::=1ешош-:снсго текста, содержит 27 рисунков д ?Л таблица» Работа ссетсггг :п 2 *гастэЗ. I часть вклкладт дкторзздь ныл сб-ор д глазу Ч,Материалу п пзтодн", II часть яредстаз-яяезт "Собственные исследования и ж состой? лз g-?n глаз, глади "Обсуждение получении:: результатов", выводов я литературного указателя» Библиография содерглт COD источшюа, включая 101 отечественной и 208 зарубежной латератур», До текэ дассзртада опубликовало 35 наутгнь'д работ / 13 9 цеп-тральннх яурзаяах /» нз нях 4 авторские свидетельства т изобретения»

Полоз-ешхя. вшиэтаеже т заииту.

. I. Иазупозазянческос изучение метастазов рака яэтянглз "злозека-является позшд и перспективным направлении для Еспска опухолевш: шркероз, поскольку первое системное "сследогаяло позволило хтдептлфканровать 12 новях сцухсле-ассощированных антигенов.

2.Для 4-х новых опухолеассоцшроБашшх белков разработаны количественные / радпотмупологический, гсиму-коферментный / методы определения их в сыворотке крови Сольных, которые защищены авторским свидетельствам /патентам;/ на изобретения.

3. В 'гканл аденокарцкномы яичников каблюдастся фено-

эктопического синтеза специфического трофобластичсс-

кого бета-гликонротеина / ТБГ /.

4. Применение количественных методов опрзделешы но- ■ вых ор.ариалъкоч.'.етастатическкх белков в комплексе с известны!,si опухолевыми иазкеракя,- особенно с ферратшом, создает реальную основу для ранения проблемы ранней и специфической диагностики рака иачквков.

МАТЕРИАЛ И МЕ10ДЫ ЯССЕЩОВАНИЙ

Работа основана на результатах шкунохимического тестирования 20354 образцов сыворотки крови / больных, беременных негадан, новорожденных, плодов, ззрослых здоровых ¿поде"/ и различных биологических жидкостей / ылг.ютпчес-кая,лимфатическая, асцитическая/, 1983 образцов тканевых экстрактов из различных органов и тканей человека к гатот-шх, из них 218 злокачественных опухолей яичников, 89 метастазов рака яичников в салышк, 127 доброкачественных ' опухолей яичников. .

При выполнении работы были иммунизированы 150 кроли- . ков, от которых получено 924 серии различных антисызоро-. > ток. Кроликов иммунизировали нативням биологическим т-. териалом / сыворотка крови, асцитическая, лимфатическая ■ к амлистпческая кидкости, содержимое опухолей/ и разлэт-ными фракциями из этих биологических жидкостей; нативнк-i.ct экстрактами из опухолевой, метастатической, нормальной и эмбриональных тканей и различными фракция;-.® 1:з натлвкых экстрактов ; полуочищенными и чистыми препарата!® последу-е;.по: белков. ;

В работе'применены современные истоды икуунохшип, биохимик, методы белковой химии, методы органического синтеза апфннкых и биоспецифических сорбентов. Количественные нм~ мунохимические методы / радиоиммунологический, иммужх'ер-

цеяхниЗ / отлеталась достаточной чувствительностью и

20СПрОИЭВОДЖ.'.ОСТЫО»

Матеыатлчеиогй анализ результатов проводили на ЭВ?Л Efl 105БМ по программе Ы.Ц^Г' 7Д г.з пакета программ ЕМДР 01 „

результаты исследований и их обсэдение

Пру поиске иовнх опухолевых t/лркеров накл была пм-нунпскроагиш яролшса гдшеопротеидной фракцией аденокар-irojrotsi яячзпжов« 3 полученных антисыворотках были сбнгру-.тезв в sxenvisJscmpossKM антитела к спецкфическоцу. трофо-йластпчогпаму бет?.-глжопротен1£у» Подобных свздсгпй г, л:~есатурс> но а воз>-:о~лость синтеза ТБГ г-лст^а:.;::

глсгг-карцсис.-л д'Г^'-.оз считалась спорной. 3 сгсзп с DTitrí пал dJDia pasr-ботпна ?з/:.тнсфер?.:зктпая тсст-:зистс:а -л." определения ТБГ, Е'глп дспыганы 3 варианта этой спстс-?~í. в порвем мрпгятв прл псзалко тисрду-о ч'^-sy ;.:х ;:с-га«ка-глобулкновзл5фра:ашг> аитпснзорстгл: :: ТЕГ, по втором вагт'етте - lo" фракшлз п з третье:! - члстпе ли—

-д ТБГ. Сбьсггивпкз результату пслучзпв: соль-о л ít-fííbс:-? raposina к-'-тгуно^ермзятйого акалпсз.

урссяя ТБГ в сыворотке крови ссльтас раком я*»пшо.* васлшали у 3-х г.з 2-1 большое. Уровень ТБГ в C:,V."¡pG740 крови ЗУ«Х бОЛЬНЫХ НВ Пр83!Л2аЛ 10 ккг/л. В эк-

ааепокарцлкс*?; .¡глч?'::ков уроззнь ТЬГ превкзал 3 гл:г./л в из 22 с.-у-хаез /' Í8£ /.

г'.отсдом в пара^-погх! срезах -i.--н:т пдсяохзрппнсг.г; выявлено зыра^закс^ св-

г-злллкуллрг—: структур, ксторке гглолшг-: гл:сгси.ч0"п'л.: плоски:* эпителием с уу.ереяшшм свечением цдтоплазш;, а часть внугрепкзЛ стешс; фолликула внотланг« яр::о цвзтл-ютлся пяллвдрзческнм зпгтслаэы. Б вале;,; о та ф^тл-чкудлтигл структура пкзет сходство с сп17хггп0трсфзблайт0гл,с:^тез'--рустнл з нор:.:з ТЕГ / Ю.С.Татарпнов л соавг. »1375 /.

Лнплвзцрул проведенные всслодования,падо иреадз дсого от1;ет::ть необходимость осторожной зшторпретаща» результатов, получрЕних г,слзвк:.зГ нетбдагя.тагль::! как

; л*

мектныП и радиоиммунологическиЯ, где первостепенное значение приобретает тщательность контроле?.. Как следует из нашего опыта отработки иммунофэрмеитцо;; спстеш на ТБГ, только применение чистых антител в апы';е позволило получить адекватные результата, почти полностью совпздаг-гпе с общепризнанными результатами радионм^'пологг.^еского определения ТГТ / А.В.Соколов,197? /.

Таким образом, нами впервые были получали антитела к ТЬТ при иммунизации кроликов экстрактом эденокараико:.-.:; яичника, чем наглядно продемонстрирован йсноха?-; эктопической продукции специфического трофоблаотглезкого бета-гликопротеина.

Кроме поиска новых опухолевых маркеров pasca кнчишеав, в последнее время исследователи стали исиытыкйь кзвейх-нис опухолевые маркера, гормоны, ферменты для SKariioC'fS-ки рак-i яичников, шшме словами, продоляаетск eetshcks-шга поиск методов ранней диагностики этого забатз^акля. Пчраллелыю поиску KoBtrx гаркеров ш также включилась в поиски. методов.ранней диагностики с ¡¡спользо£г.ч:шм ::с-вестннх белков. Одшш кз таких белков является ферщтаа. Недавние сообщение PcvszH L.}ll<\jtlc/ü.y J. /1590/ наподака-ет еще раз о неиспользованных возможностях этого белка в диагностике рака, который является, быть мояет, одним кз самих ранних его предвестников. Авторы в течение 2—1? лет при наблюдении за большая с хроническими заболеваниями печен;', определяли в сыворотке крови концентрацию ферргт: на и показали, что прогрессивное повышение концентрацш: ферритина в сыворотке крови больных с хронически.',»! заболе ваниямк печени связано с развитием гепатоцеллзачярного рал

Единого мкеция о механизме повышения уровня циркулирующего ферритина в крови больных при злокачественных. забоя ваниях пока нет, По-видалому, нет такке и прямой зависимости ме:-лду содержанием ферритина з ткани опухоли и уровне;,; его в сыворотке крови больных1. Например, при раке поч ^ ки нами выявлена выраженная гиперферриткнемия у Сольных

при значительном накоплении ферритина в опухолевой ткани, а с другой стороны, отсутствие какого-либо накопления фер

purspa з олухолегой ткаш rip:? parte яичнияоэ / 1977 /, •:o np3t.3*rci.3 ^гект^ся сгедспил о значительном повышении уровня сывороточного феррт:ша у больных ргхои яичников / Kiico А.,1879 /. Тем не менее, специи:.siioro псслсдова-г.лл otoro so фэса ;т достаточном клиническом ?итеркале проведено не бкло, а 1-.;.:оется лаис» упокянаю» о нескольким случаях ра-;а ялчшиоз / среди сяухсле.'; друге:?' ~.спа-лизаипл /, при котором уровень ферритина з крови позывая»

Прп йзучеизя содор-.'?лг,!я фарраткпа ит.г^'одкхфуЬ^отпг ' пим :.*отодом в сг.уолеЗ " »гесрсткз гро:-;'-: тгрл рано яггаиккез 6v.ro уотгл!' ?лсио, что концентрация феррктп-по, как з опухолиГ-Ь'л, так я в нормальних тканях генеких половых органов практически одинакова. В сыворотке проза гпаерферрцтансмэт гч;:;:о 5С0 удг/л знязлячя в 22% слу-чявт» пр.. и в 7% случаев у Сольных о доб-

рокачественные опухолям яичников.

Гиперф,'епрц'ги;:о;*ая( выявленная при раке яичников нкцунодяКуз::онкш методом, ci ¡солировала разработку кщуяо$ср.:сагаого м.:гсда определения феррптныа. Результат» •¿u.^u&lор;.-.2нткого определения ферритина показали / рис Л /, что содержание ферритлна в сыворотке крови контрольной группы ./ докорт'-генвиин / колебалось от 16 до 200 мкг/л, составляя я среднем 57,0 +5,4 мет/л. В дачсстзс нормального соцер=апкя феррнтнна для .т.ен-сита была принята верхняя граница норма - 200 ют/л.

Повышенным уровнем ферриткка в сыворотке.крови больных принято было считать 201 ют/л и выше/рис. I/, Гкпер-ферритннежя выявлена в 57% случаез при доброкачественных опухолях яичников, у всех 5-ти больных с пограничными опухолями яичнккол, л у 93,2^. больных раком яичников: в I-I1 стадии в 84,0>% и в Ш-1У стадии - в Ъ5% случаев. Необходимо отметить, что содержание ферритнна в сыворотке крови больных раком яичников I—II стадией заболевания составляет от 200 мхг/л и вкие, а это означает, что гели мы булсм считать повышешпел уровнем ферритнна в крови ' больных по с 201 ют/л. а с 200 ккг/л, то глпер5«рратг-

Л Ь'Оо /есс _ е в с $ £ /Л.

Зое о

№ о а е. г » • а» 8 в е-

Осе к в "'• ■ лс Л е о л

<3

«Р ¿' . «г

Чоо ЬСО 200 100 в> в Л ? «»6 в «с«? в.0© в в О вйе с^с • в в* «¿9 •У» в е в «в К Г* я.

® 9 № # • • « а» в » ■ « ®*еГ в* »'Л* о в »« * «

1/ Л а. 3 Ч 5 6 2? 5

Рис.1. Содержание ферритина / ькг/л / в сыворотке кров больных с опухолями яичников.

I - рак яичников 1-11 стадии ; 2 - рак Ш-1У стадии; 3 - пограничные опухоли ; 4 - серозные опухоли ; 5 - иу-цинозныз опухоли; о - прочие доброкачественные опухоли 7 - опухолевидные образования; 8 - здоровые хенданы до 45 лет; 9 - здоровые женщины старше 45 лет.

немил составит 100% при пограничных опухолях яичников, 1С0£ з 1-11 стадии рока яичников и Э5% - при Ш-17 . стадиях рака яичников. На основании этого можно заключить, что тест на ферритин наиболее информативен и чувствителен з ранних стадиях рака яичников.

Полученные данные при изучении (^ррнтика при опухолях ЯНЧКПК03 иммуноЗ ермонтннм методом Окла обработаны па ЗЕМ с помощью дискр::мпналтиого иналпза, из которо--го следует, что определенно ферритика является ценным диагностическим тестом для выявления больных с опухс-дяичников» Особо перспектизшти нам представляется тспользовзпг.е количественных методов динамического оп-уздолоння сывороточного ферр'иткна в группах' высокого ряска по опухолям яичников, у ленского населения при профилактических ООКОТ^Ш С целью ЯКТИ*ил"0 Г~ТВЛСН«т раг'Л л;г^п)шоэ в ранних стад;тх',

Следующим л основным этапом нашей работы был поиск Опухолевых маркеров рака яичников и их иммупохнтгческая идентификация. Эти исследования мы рассматриваем как продолжение иммунехкмкчгекпх псслеяозанкй рака ялчня-т. * КОЗ, которые были начата в лаборатории В.С.Татарикова В 1970 году. Тогда были идентифицированы четыре опухо-ЛСЕУХ маркера, котсры? известны в литературе как альфа-2-ГЛ0булин адекокарциномы яи'пшков, РЭА, КЦА и ЗПА / О.А.Борисенко, 1975 /. .

Понятие "опухолевый маркер" мокко определять как любой белок / гормон, фермент /, урозень которого в крови повивается /понижается/ при програссировании опу?^-холевого процесса и снижается /повышается/ при регрессии опухоли в процессе лечения. Поиск опухолевых марке-роз при раке яичников продолжается последние годы очень интенсивно и это, видимо, можно объяснить несколькими факторами.

Во-первых, отсутствуют методы раннеЯ п специфической диагностики рака яичников, а циника раннего рака яичников настолько тщательно замаскирована, что Щ? этих

большее к началу лечения ¡г-еит П1-1У стадию заболевания» а это означает, что 00-С0£ эти;-; багакнл погибнут в течение 5-ти лет / И.С.Краеьская,197С ; И.Д.Нечаева, 1987 /. Осмыслив эти данные, становится понятным интерес исследователей к отой проблемэ.

Во-вторых, интенсивные поиски опухолевых маркеров проводятся при раке различных органов, по рак яичников •/.одзо выделить особо. Уи приведем небольшое сравнениее пз которого более по( г.тнкм становятся интенсивность поисков при раке яичников в'последние годы. В 70-е годи ш проводили попек опухолевых каркероз прл раке почки и в результата Ю- летних исследований прнпла к воду, что из 4-х маркеров, обнаруженных наш при ракз пошел, единственным нэдеааым маркеров для рака почка являет .а ферр: ¿на, по ецз лучив в сочетании с ?родэфер-рино:: / 1973 /. Остальные 3 кархера оказалгеь ьзлозф-фективныки. Ка основании отих исследований гл цзкдосищ, что для поиска опухолевых эркеров почка остается "немой".Спустя 15 лет иезавшашв Есследованкяыг зарубежное авторов кодтверздеьи невз! денные, где автора' првшш к таког.-у ке заклзчвшю, что едаистеенниа парке»» ром для рака почки мойзт быть ферритии /{Г^еп А, ¿1 а1> 19Э1/. Других опухолевых маркеров для рака почтах за последние 20 лет не найдено.

При раке яичников картина противоположная. В 70-е годы при раке яичников описано около 10 опухолевых маркеров, в 80-е ещё столько лее..И большинство пх кажутся перспективными, Отсэда капраиизается вывод. что интенсивнее шцут таи, где чаще находят, И так ж.; объектом является рак яичников. '

В-третьих,, одной из первых задач, стоящих, перед -' иммунохимией, является попек 'опухолевых маркеров, которые позволят разработать раннзко диагностику рака. Но. конечной цель» юыунохшят рака являе-хся разработка специфической ЕкмунорерапяЕ река / Ю.Дэй, 1356 /. Дру-гимн словах;, если будет найден специфический дда рака

и

каркор, будет рзшена не только ранняя диагностика, без которой нозозмогна успешная терапия рака, но к специфическая кигукотерзх&я рака. Идеальным маркером, с по:-«дьв которого «02210 решить специфическую диагнос- ■ ■тлку я ямгдуяо -орашпз ра~ау монет быть белок /антиген/ содорхйЕкйся г значительных количествах в опухолевых плотгпх зсакого-то определенного органа с одновремен-шм ROiiBsníiíiíc:.'. ого уровня з крови к не определяемого в тканях органов взрослого здорового человека, то.есть, сод,оpsíínn? его в нормальных органах и сыворотке крови здорэпг: «теде Я должно Сыть нпчтокно мальчл по сравнению о опудашв» Исзлодозатели а области имхунохама рака но 3?8гдрт .чдпезди, что такой маркер существует, отсэда к гчгтскстаксстз» поисков.

Яоягя опухслзвпх кзрх-зров при ояк»» ик upo-

гэп'л.?" цч направленяя-ч. Креме традиционных

снулслзП яачпккэв, применяемых для сл:униза-н:гГ; *;ц -олучэннл гнтлсыворэтс:: л раз-

личин." биологический материал, получаем«! от больных pattoa ятшиков: сивсглтка крова, астатическая н лимЬа-тнчлеггг? экссудат. Постепенно мы пришли г.

о нссс'.:сл.г.,'0с:г.1 изучения антигенной структуры з плоке поиска спухолзвкх иг.рк^рэз з "чистых" опухолевых глегках первичного рака япчн.жов. Интерес к клеткам метастазов возппч кэ случайно. Во-первых, гстоголетнее изучение гзрвичтпо: опухалзй сначала почек, а затеа ягчяакоз утвердило нас з етелн, что первичный опухолевый узел* гдз яреазезлп сспсвнкз соб:.ткя по ахокачестветкау аерзроддо-:rr¿ ткан::, нзеит д сезе отпечатка всех этапов зтого пе-рзрохиенпя - от ::зр)ла,л.ннх аат»£генов, спепафаческах для данного органа, до пзкрзтпчгских анмгеаов аогибсах клетей/ ЮТ/. Крз:.:е отого, первичный опухолевый узел иоо-бычайно бога? эритросатарншга а лейкоаитаршнж ентагэ-

которые гэгут гаг.олго увести исследователя з сторону езога кзлуцеПся диагностической звгта'лстьз и сиеан-¿[•этясстм». Нар-онег., аервичйи5 уззл содерллт а есткшшо

спухслеше клетки» но удельная масса тс вес»© ссадина и непостоянна. Поэтому, помехи при ^¿унном огаме, создаваемо нормальными, эритроцитарнымл,лейкоцитарнши, некротическим: антигенами перекраво:от антигенную специфичность опухолевой клетки.

Во-вторьх, опухслезая клетка почти полностью уеряе? функция и специфичность той гугзткп органа, из.которого она произошла, но.зэдпхо, додкна приобрести другую спе-цирачнооть - специфичность клетка оаухо.та яичника, ко;с-рая буде-т отличать её о г опухолевой клетки, дродзогсд-шзй из другого органа, например почки, почьни я т.д. Эта опухолевая специфичность мохст выражаться в I иди 2-х сцзипфических антигенах дул этого ткпл опухоли, е 20-40 антигенов у них могут быть одннаковдаи /о с другиь-л опухолями. Примерок это:-^' иололенпю ;.:огут;-слуаить П/И^а-сзтопротбш, РЭЛ. Поскольку функционально с морфологически клетки, яичников веоька разнообразии /' 'иХ.Гд.эзунсз,1951/, то к специфичность клеток опухолей яичников МОЖЫТ быть кзебычкой.

В-третьих, в литературе веется бальЕое количесгео раЗот по изучения антигенной структура перйэтвых опухолей яичников и полное отсутствие ин^ориаинд об антигенной структуре метастазов рака яичников. Кзхагтазк выбраны ещё и потому, что метастатиче-скиз узлы рекг. яичников в сальник рассматривает как аутогенно кайся-лантированну» культуру клеток каршшоул, .а теней дифференцированной опухолевой клетки хранит всэ шфорнзшз} о своем перерождении от начала до полного завершения днфференцировки / М.Ф.Глазунов,1961/.

Изучение конечных этапов заболевания с цодьз. гезйа-боткн ранних методов его диагност;®:', звучит парадоксально, если пренебречь тот факт, что геном кдетхец - нздег-нкй хранитель ннЬорь^ации о всех этапах сё перерождения. На первый взгляд логичнее было бы изучать предраковые состояния для разработки ранних методов диагностик» то есть, доброкачественные и пограничные опухоли яичнихоа*

•к

По здесь ?лы столкнулись си с теми ле проблемами, что а ■ Пр>' изучении первичных узлов опухоли - низкий удельный ,з§5 раковых меток з общей ьг-ссз ткани доброкачественно 3 пограничной опухоли.

Для проведения настоящей работы иа\и била собрана 1ШД0Ш1У,П метастазов рака яичншгав в сальник, первичных опухолей очников, а такае сыворотка крови этих бол;лшх, Нативкыма экстрактами метастазов к различии:,-.л Фрги$ШУ?гя зз нкх я течение ряда лет были п1.*.нупизироваки 53 кролика, от которых полу чело 142 серии анти:.:етаотатл-"пск'лх сывороток. Антксшюротки подвергались жесткому кстрп'.онир ршроккм набором экстрактов из тканей внутренне органов здоровых взрослых ладей, сиворс-псой и плаз-МО". дд;;ороз, Иооле подобного .'.-логоотапного истощения в днт.ненроротках л:;бо обнаруживалась антитела ускаснепи-антигена:.:, либо с::::лр,,.м1га.:::; ш:ке:сюс антител, .-у; 1 д;:т!?л:1Ч0С1-:::анализ исто-денных ант;-: х-тастатических гл?г:ороток позволил едеитп'! нцнрэваи. и охарактеризовать "О упкоспсии'!кчеекпх антигенов, названных "оварпально-котлетатически?.--.: антигс-кз'/;:'' / Г,.'Л 1-20/. В таблицу сзариально-кетастатичоских антигенов / табл. 1,2/ не в уплачены известные белки - ферратия к лактоферрпн, которые так;?.е бгак идентпгнплрог-аны анти:.<етастатпческн.'ли си-вороткага.

Все С'АА идент/Лнцкрованы г.енду собой и с известшили раковоэмбриональнш.-и, нлацентарнк:.::;, реактианшли к другп-кп антигенами. Для всех 20 ОМА изучены основное сиз:в:о-хкмческие СЕоГ.ства, достаточнее для того, чтобы кал:-ды.1 антиген и.:ел индивидуальные черты, все 120 антигенов нг.ев? белковую природу и лизь 2 из них вчрахенпиз глико-протехди / С.'/.А 16 и 20 /. Проведенная пргвпл в косвенная идентификация С'.'А г..-,:,коллег,с определенно;: долей уверенности, предположит!., *г'о почти все они, 'за исключением ОМА I и С.7А С, яздяктся новы?.-;:, не сапсанны-н в литературе, белкаки.

Анализ распределения овар;:ально-?.'.етастатпческнх

з-/г

Таблица I.

Характеристика овариалько-метастатических антигенов.

0:.:А олектрофорети- Относи- Пределы Специфическая

Г.1.' ческая подвия- тельная осазде- окраска

ность в адаюе №ол.мас- ния суль----------------

са/Kfi/ фатом болки глшсо-аммония протеиды

/ %% /

I альфа-2-глобулин S00 25-45 + -

2 бета-1- но 50-70 + -

3 бета-1- Ii 60 40-60 + -

4 альфа-1- _1Г_ 115 50-75 + -

5 бета-1- t( 22 35-55 ч -

6 альфа-2- . 130 ' 30-50 + -

7 преальбу>.иш ' 24 60-80 + -

8 бета-г-глобулик 35 30-50 -г . -

9 альфа-1- 57 30-50 +

10 альфа-2- 55 30-50 + ■ -

II альфа-2- 14 30-50 -

12 альфа-1- Jl^ 36 30-50 + —

13 бета-2- 63 30-50 + -

14 бета-2- 55 30-50 —

15 бета-1- 32 50-70 + -

16 бета-2- 50 40-50 + +

17 преальбумин 21 50-75 + -

18 альфа-2-глобулин 32 55-75 + -

19 альфа-2- 12 40-65 + -

20 бета-2- 100 30-50 + +

Таблица 2>

Распределение ОМА в тканях и биологических жидкостях.

ОМА Ткань ерганоз Ткань Сыво- Биологинсо-

опухо- ротка кие кидкое» лен крови яички- боль-ков кых

взрослых плодов лея ЗОЯ ЛОЯ 3051

т поч:<а почка - + - - -

2 почка почка ч" + - - -

3 почка почка - - -

.1 селезенка селезенка д. + 4- г/.

г. цчлеззнка + о. + 4- а1, л'5

ь мозг мсзг.тошс.к. -г 1- - -

7 мозг мозг„почка - + '.'v -¿iv у .'к

6 - плацента -

9 - тонкий, к-к л. + * ^ т.

10 - толстый к-к - - -

11 - - + + + -г Ал

12 - - + + аъдф

То - -.елудок + + + аь,ас,л<

14 - _ + + Ж

15 гелудок ч- л. - - АК

16 - - ■¡г - +

Г? - - - + - - " А& еСЛ

16 - - + - - АЬ • СИ

19 - - + - _

20 - — - т - - а V/

Сокращения: дОЛ - дсэрокачественг.ые опухоли ялчынкоз;

ЗОЯ - злокачествэняке опухоли яичннкоз ; А2 - амннотическая жидкость ; ЛФ - ллмга ; АС - асцит; СН - сшюротка новорегдерлшх.

антигенов в тканях внутренних органов взрослых и п'лодбв / табл.2 / позволил выделить среди них: I - оргаиоейо-пифические белки /ОМА 1-7/ ; 2 - илацентаснеш1фпческио / с:;л 8/ ; 3 - эмбриональные / ОМА 3,10,13,15 / ; 4:- ' опухолеассоциировапнпз / ОМА 11-12, СЫА 14, 0!>'Л 16-20 / и в отдельную группу могут быть выделены известные бел";! - ферритин и лактсферрин.

Поскольку ни один из оварпаяьно-мотастзтическйх ая- -тигенов не обнаружен им:.г, ¡юдннфузпоннда методом в ТА^ИА нормального яичника, то все их мокно рассг.*лтривать, как антигены приобретешшо/иакоплепные/ опухолевой клеткб'Д пли как проекты дсропрессии генов в процессе канцербго-нсза. Безусловно, такое количество новых белков, обнаруженных при пер:ом системно,'.: иууукох'длаческом изучения гэтастатической ткани рейса яичников, кокет вызвать скептическое /давление, через что пробел и автор настоящей работы, ток как идентификация да;:/.е одного опухолсассоин-провапкого белка узкой специфичности при. раке некоторых органов, например почки, до спи пор остается непройдзн-нж этапом. Однако дпльксЕшпо исследования откх белков, анализ закладки янчнпкоз в эбрпогенезе и одной кз самых сложных класспфпкапиП гистологических типов опухолей яичников утвердило пас в реальности существования чрезвычайно сложной и разнообразной антигенной структуры метастазов рака яичников. Более того, модно, с большой долей уверенности предположить, что число метастатических антигенов овариального рака долгло быть значительно болклим,. чем нам удалось обнаружить при первом приближении.

Дальнейшие исследования овариальпо-метастатнческих ' антигс-нов были напраяены на оценку их диагностических перспектив при раке яичников. ¡Сале мы у;;;.е отмечали,' ■ ОМА-6 был ранее идентифицирован в тк&ки рака шнп'.иков и назван "канцеро-церебральным антигеном"-КЦА / С.А. Еорисенко и соавт.,1970 /. Способа*выделения и определения КЦА в сыворотке крови разработано не было, а км- -кгунодиффузионным методом обнаружить его в сыворотке крови больных не удалось. Каш был разработан способ

M S г/п

¿00

®

!

•O 4

!

I V Í

WCY

- ï,—

о ■•>

о

Si

LJJ JLL¿ j.L

S- r> > 6

а

• »

»

«

• . — —' —.

*

•

» VÎ, - э

е * с* -

в « о. • *.в «Í V « в 6 в 5}á •5 • • < > •я?! "" tu i о а ! : Í •

Pr.c.2. Результаты Т::%хлс:^-гл;олсп:чес::ого тестирования OMAo /КЦА/ *

L - pox кдепкикэб ; 2 •- доброкачественные опухоли ялчнпков ; 3 - опухолевидны? процессе япчнпков ; 4 - par. тела 5/лтка ; а - полкпоз элдсметопя ; 6 - miera гдтгл ; ? - paie ггейкз тлатпл ; 8 - сак маточных ттг/б ; 9 - доноры ivyr^nsíuj 10 - доносы гзезйкк /17—'0 лот/ fil - доносы зеицанн /41-74 года/ ; 12'- коворо.-дденпк-з.

гыделеа::п КЦА и сокмэстно с Л.В.Соколовы:.:, отработан радяои.йуыолог;гасскиЙ катод определения его в сыворотке кропя, '¡увствитедмюсть разработанной радиоиммунсло-гичсской тест-систо:дг для КЦА составляла 1,5 мкг/л. Диа-т/ностичсску/э чувствительность тест-системи на рак яичников мы определил как процент лиц с повышенным уровнем маркера в группе болышч раком, а диагностическую специфичность - как процент лиц с нормальным уровнем «маркера из группы больных лэбрскачественными опухолями ккчшшоз /Г.А.Ткачева, Г£03 /.

Анализ результатов т^иопумунологического определения КЦА показал /рис.2/, 'что чувствительность тост-системы на рак яичников /уровень КЦА 46-50 ;лкг/л/ составила 69^-, при г том диагностическая спецкфи»£Ность - 57,1^; чувствительность тест-сасгг1.';-! при уровне КЦА. быез 90 мкгу'л - /2,8Х, специфичность - 77,7^; при уровне ЩА ВЕпнс 120 мхт/л чувствительности составила 35,82, а сне-Ш'флчкость - 95,2;».

Биологическая роль КЦА пока неясна. Однако полученные данные о более высоком уразне его в крови мук™' ' пин по сравнению с женщинами / / позволяет пред-'

положить метаболическую связь КЦА с г<укскиш половыми гормонами. Известно, что яичники'вкрзйатквают андрогено-• подобные стероиды к местом их продукции считают кнтер- , стпцнальные метки яичника,' хилуенке кдохки и сеть яич-кика. Хилусные клетки, которые морфологически сходны с интерстициальнкми клетками семенников,'обиазу&иваат у-девочек с момента роадения, в течение перш?: дет жизни, '. значительное количество у беременных женщин к V взрос- . дых пожилых женвдн до глубокой старости / Д4и1ЁЕ£2зк-' блат, 1573 /. ; •

В свете этих данных представляется возмогший ефьай-. нить изменения сывороточного уровня КЦА в крови кеядд* в различные периоды жизни и при опухолях яичников.Домученные данные позволяют предположить, что высокий уро- : вень КЦА в крови больных с опухолями яичников может

Физико-химическая характеристика ОЬ'Л 8-12

СВОЙСТВО ХАРАКТЕРИСТИКА

с:о~8~" ~омл~9 о;шо" ~ о:.:лп ошг

Относительная электро-форетическая подвижность б агаре

Молекулярная масса,кД: методом гель-фильтрации

методом электрофореза в ПЛАТ " '

Изоэлектрическая точка

ТермостаЗилькость

Устойчивость к действии

ферментов:

протеази

куклеазы

Взаимодействие:

с эстргиыидсе-': ароаой с тес-юстероЕсе-'Таг.озо:-: с Кон-А сотого!:' с голубо!» сефарозсГ:

Реакция на ¿елок

0,25 55

0,83 57

0,76 55

0,63 14,5

0,60 36

15,5 .60 52 -

6,87 4,44 7.23 7,55 6,17

65°Сх15 1.' и к, 65°Сх15 мп.н. 55°Сх!5 ¡.ст. 65°Сх15 млн. 65°Сх15 млн.

кнактивпруют инактнвнруют икактивкруют ш; активируют ннактивируют

усто/чнв

кет связи кат связи к2т связи кет связ;:

устойчив

нет связи кет связи нет связи нет связи

устойчив

нет связи

нет связи нет связи

ломит ель»;. полонит.

устойчив

нет связи нет связи

положит.

устойчив

нет связи нет связи

положит.

свидетельствовать об андрогенпродуцирукщей функции эпителиальной опухоли яичников и дальнейшие псследоСЗ-и ил данного белка позволят ответить на вопрос о возь;о;£~ кости применения КЦА в качестве маркера опухолей янчн'П-5 кот с функционируете» строкой.

Для слздув:ц:гл 5-ти овариально-метастатических aiííií-генов / OLIA S-I2 / физико-химические свойства изучены более подробно / табл.3 /. Для 4-х из них разработаны способк получения, которые защищены авторскими свидс" тельстваки /патентами/ на изобретения.

Нами разработан им:лукоферментный метод определенпя OMAS в сыворотке крови, так как ш/;лунодиффузионнык ме-тодо:.; обнаружить его в сыворотке крови не удалось. Результаты иммукоферглентного тестирования 0?,1Аь в сыворотке кровл свидетельствуют о том / табл. 4 /, что уровень его повышен в 74,5fr при paite яичников и в 37,5)6 случаев при доброкачественных опухолях яичников. Чувствительность тест-систем на рак яичников составила 74, ö';j , а диагностическая специфичность - 62,5$.

Установлено, что сывороточный уровень Qí.iAS несколько висе у здоровых мужчин, чем у кенщин. Повышение сывороточного уровня этого белка обнаружено у всех обследо- . ванных новорожденных, независимо от пола. Хотя это повышение и незначительно / средние показатели в 2,5 раза -выше, чек у здоровых женщин/., но довольно стабильно - у ' всех 16 обследованных новорожденных / 100/- /. Ещё менее значительное повышение сывороточного уровня QMA8 отмечено у беременных кенщин и практически не зависело от срока беременности, но у 2д% беременных аенщиа уровень, его был выше нормы, В ачниотической жидкости концентрация 0МА8 была высокая я иногда достигала 1000 ьекг/л, что на 2 порядка выше, чем в сыворотке крови здоровых хен-

цин.

Результаты ишувоферментного определения 0МА8 косвенно подтверждает его плацентарное происхождение ■ / табл.2 / а это открывает дополнительную.перспективу :

ч

Таблица 4»

Результаты ¡^¡уноформентпого тестирования 0ЫА8.

Чис- Средняя кон- - Медиа- Чис- Псо-

Ос/воротка крови ло центрация, на» ло аент

проб мкг/л гзг/ л пс- ПСЗЯ-

зп- тиз-

т яв- пнх

ных

Здоровыо:

Паникин 40 10,0¿0,1 9,1 0 0

гфеЧЮЛ 40 14,3 ¿0,4 12,6 о 7,5

Новорожденные 16 25,0 ¿1,1 28,0 16 100,0

Беременные':

я-12 14 13 Р 9 + Г,6 14,0 6 39 (3

21-40 недель 19 15,3 +1,7 15,0 7 42,8

Больные:

рак ядч.ч:с.оз 51 21.1 ±2,7 16,8 38 74,5

доброк'ачест-

зенние опухо-

ли яичников 24 13,1 +1,0 14,6 9 37,5

рак тела тткл 20 14,6 ¿0,9 13,0 8 40,0

миома маткн 8 11,1 + 1,5 8,3 I 12,5

.Лмниотнческая жидкость, 18-24 недели

354,0 * 117,3 125 8 100,0

8

использования его не только в качестве уаркера рака яичников, но к дальнейшего изучения при патологии беременности.

СШ11 представлен ыуцкноподобным белком с молекулярной «аосой 57 кД и злектрофоретической подвижность» альфа-1-глобуликов / табл. 1,3 /. ¡^"-унодп^уз ионным методом он обнаружен в ткани 9 из 12 доброкачественных цуцинозных опухолей, в тканях серозных опухолей не выявлен. Чувствительность иштунодкфТузиошю" тест-спстолн па 021А9 составила 3 ют/л. Результаты и^/унодиЭДузион-наго тестирования 0.7.А9 показали / табл.5 /, что чуреть;'-

Таблица 5,

Результаты ижуиодуз-/.оиного тестирования 0.7.Л9 в сыворотке крови к биологических жидкостях.

Заболевание

Число проб

Число Процент

поз?!-. позитив-

тивных НИХ

Рш: яичников 36 81 53,3

ГраяулезоклтеочныЗ рак яичников е 1 пп п

Мулинозкая пас гадь- яичников 18 Ю 55,5

Серозная цнетоде-исаа яичников ¿9 и 0

I оО ю: е с т а е к; I но оплели яичников /текоца.Фкброьуц сражая тератому

Ьере^зиные ЕС.'сзшн

щеюп» Элороьио /донор::/

34- 11 5, У

13 р 0

г.

ТГ^ ц 4-ь-V 0 . 0

еооть. б 8 100,0

Лсш;*ачоская ейдкос?»

дальних такой яички» _ „

кой $ 75,0

телькост* -геста на рак яичников с npaiiíRcsse:* vsc?-скстеш на 0M.VJ невелика а составляет 53,2"/»» Иптг такой ;¿9 процент воло\'.итель.чнх / S5,5;'i / 5u.1r.-2H срздз больных с доброкачественными г,£айнсгн1г.'л опул.-.иг?:: :пгшпксв л ни в одном случае ;;;» 12 больных с дсСрока-чествешшул серознима спухоляг.-n яячпйкоэ.

На основан:::: получен.' ¿< результатов ¡мдуиодкйу-зионного анализа 0.'ЛА& ми полагаем, что разработка количественных методов определения ОМ'.Э г» енворэтко крови пополнит, арсенал лабораторных v-етодоз специфическим ?ларкером .муцнлозных оаухолбГ» яхкнакоа«

Сиаилть дна! аостпюсксо значение я аерспотсзгк ОШО л OüAII лля япчншеоз пека но ародстаалягт-ся Еозкод-чкг,, таге как а..д^нодкффуз;то1ЦШм гетодец 0.'Ш0 не глшгд-д» з сыворотке кглв» « vilMl

oínapy^Kn толг-о у болъглс раксм яшг^иоз а з 16,6,* больнее с дэброка"лсг'-^:ч!г:л cayxo.v.?c. яд жсссв, 33, - это .;-?удовлствср.гг(гльч?л ^-встиателкгос-гь для гларлога, хотя .засцифг-шоеть при "го:* составляет S3,4?ó. для 0МЛ10 в настоящее зре^л разраСаткЕззтся ко-личесгзеннкй /рад:;о;:л:унологкческий / его сарзде-ления з сыворотка крови, a такда предлагается разработка количественного метода определения Güín,

С!Ш2 нам представляется нзнфадзе п&репвакаяй»! болкс:.: для диагностики рака яичшжаэ^Геау.-шгата нодиффузаенкого тестирования Ш2 одаааадгЕ /тгЗд.,6/, что чаде всего он обнаруживается 2 аг-заротш героза больных раком яичников - в 75;» слукхзз* пси: дойреза-честзешшх .опухолях яичников' сн «бйздрвеа а 15,5.5 слу-чазв. Следовательно, чувствительность ка gas якчкикоз паи определении ША12 составляет Vo*» a сашафачкость -S4,4;í.. ,

Несбходг^о ©тктеггт&в что из 13 больных раком яичников I-II ОТЗДИК C'llIS KZZx-TS ж Э больных / 6S& /, из 43 IIí-IT стада:: у 33 больных /76,7//. Пра дкна-цэйдгденяи за больными раком яичников чорез

Тей лай 6'.

Результата 1шку1юди|фуз11онного тестирования С!Ш2 в

сыворотке крови л биологических гцокостях.

..............* " ""....... 1 "' 111 ...... • * •' ••

Число Число Пооцект Заболевание проб позе- пЬзытиб-

thbkhjc кнх

Ра:: яичников 55- ■ <? • 75,0

Добрсяачествпшшо 51

опухоли яичников 9 • I5r6

Ра;: тела 31 3 6,5

Рек шейки jístksi 6 0 0

Líroisa иаткп 40 0 0

Зкдометрзоз 7 G 0

Pí a ка-гочащ. труб I t a- ICQS¡

PÍU: curto: I e ■ Q

Я o 0

КоБогй^яшш* IG 0 0

Декор:! ICO 0 0

гадкоать 12 О

ККК? 12 О

«ЙЛЙТШ* «Ж* 2 л

Р

О

50,0

3-3 Месяцев после ко:.илексного лечения подожмгельаая реакция на 0".М2 зннзлена только при прогресскрогешт процесса у 3-х из 8-ми больных»

Остальное 8 оьариачьно-метастатических антигенов / СУА13-20 / в гэднвидугш.нсм плана не рассмотрены з работе потому г что кммунодп ЬПузионным методом о:-а не обнаружены в сыворотке к] или о5наруг.ош-2 з невысоком проценте случаев / О.МАХо, 14 {16 /, что не дает п'рсдста-данпя о перспективе :о: в диагностике рака япч-нахоа. Предполагаете,«', разработка количественных методов определена нсех этих белкой, что иозеолит оценить их диагностические возмолйост;« при раке йичтшкоз.

3 процессе работы по изучению м-:.т£г.?атн«5еских ан-тиге:юв встал вопрос о необходимости цдептифнкйпки их с антигенами, обналу^еннымл конскло»««пт-аыми ¿¡илтелсда в ппгя»д::ис «ид«. сто оказалось по несколь-

ким причингм. ГЪ-перзы::, при гиСрвдо'ягаЗ технике получения мс:юкдг>на.~:::~ антител отсутствует зтап получения преципитадгои^он тест-снотлму, как :: традиционной ■лм:.<уно химии, пезтотгу прямее сспоставлсип.? прецпгглтедя-ониых тзет-систем визуальным методом классической иммунохимии не представляется воэшхнзд. Во-гторах, при изменил антигенов, обнаруженных моноклональкыми антителами, отсутствует этап выделения антигена и изучения физико-хит.кческих сзсЯстз его, что не позволяет провес-та косвенную гдент-Лпкглпа антигенов по их свойства.«.!. Попытки идентификации антигенов, обнаруженных ьянокло-нальнымл антителе.«и, медду собой "слеп:.?.:;:" / радио;:м-гг/нсл:: .:ческ:гЛ, км^ноЬармеитгаьЧ/ методаг/л представляют громоздкие,дорогостоящие, а глагноз, неубедительна» исследования. Например, радио^'/муологнчсским методой прожадт параллельное определение нескольких аяткгапоа ■ с помогал монсклокалышх антител у 750 больных и по частоте. обнаруженная антигенов а различных группах больных судят об их различии / МаГ;апО е* а/,,1!з93 /.

■ Следовательно, при работе с мон'оклоналышмл аятито-

ища: отсутствие этапа выделения антигена,, изучения его свойств, получения 'полЕкдокаяькнх антител /ии: праапплтацпенной системы с использовании'. ЦАТ/ к цряио2 дгентйЪикащгп антигенов s роакпкн нрецилпта-спи, по зедагает исследователя от г.ороятнзота прово-Д2Т& дорогостоящий радоо-агу^олог^зскпЯ анализ одного Ii того це сстЕгено монокло^шлькшги антителами» сы-завдза раздечные названия»

На основании вышесказанного мы полагаем, что гиб-рпдомная техника получения ыоиоклональных антител долмна бить -¿олько первым этапом при изучении нового антигена - ovo этап обнаружения. ¡»депткфикадаа s:c про-:, водить f.3>rj!0 только поело второго зтапа - получения прзциппганкош.'ой тест-снстеиы / на основе полпклональ» них или .MOHorjjona.'ibHHX антител / и далее всё ¡сак з традиционной я&тнохимлй, где оба эти отапа обьздине-; hi: в одном ярзипгытацкошкя тест-система позволяет обнаружить, идентифицировать» изучить свойства, выделок. в «¿пс*о« вед« R пропасти .«эбые исследования с иесяаа-шидд белкой "визуальным" методом 1сласскчсско8 - с применением стандартной тест-с;<сте».и. Дсстс;шств« ¿ недостатка "визуальных" к "слепых" методов им у^ндеяв в процессе изучения метастатических балкох; 2 zpzszz к здздду, что юз^аишети гласскчес— кс!: ^ивлупохици;: eco далеко не исчерпаны, а педтгер;;-&LC-3 7¿ глузхть резуялзп/ данной рдботьч Stisis образом, i.a cc^ojíuiív;; проведсатюс ксадедогл» ri,} что :сзучепип з»тс.сгйтзтчесг.ой рода дачппко;.» гстодяо J^UOXE-

ms саддс^ач <.сз:;.'П£гзп.1 хапрзвленсск длг поиска к ксйл: бс-гвсогих глархеров и открывает :-:о~ WiwOiüccí»: ¿un ¡ákíí£* в спгшфкчое-

•* ста tstosoa дегаойтгда р-акз, SaeJ характеризовать

ss^iOHHUö 2 работ© белковые каркера по пг|>ор:1атиз-' 8СЭ52» чувствительности, сяеаиГлчлости я перспектиь-еззгл» со as бкло б;; представить г а-.едужзи вл-. и.

¡e. По ин^орг/лтпв.чости к чувствительности на рак япч-[икса феррптин должен стоять на первом месте, так лал [увствительность на рак .-шчников при определении £зр-)итина приближается к максимальной и тест на феррхтин юг бы быть своеобразным диагностическим "ситом", через :отсрсо "отсеивались"бы потенциальные больные с спуло-ог/л яичников. Саму» зысоку диагностическую спешфгч-гасть на рак яичников показа; 0MAI2, а самуа низкую -)МА9,П. 0Г.1А6,ö занимл-тг среднюю позиция мззду ферри« :ином и о:Ш2. CavüM перспективны?.! маркерси для спсцп-:ическоП, но но ранней, диагнсстилси рака якчникоз пишется CMAI2.

Но наибольший интерес в перспективе, на нал взгляд, 1рг.надле::л1т параллельному определена з крови целого сошлекеа метастатических аптпгеноп- предвар U7¡ы.а •• ccppiiTHHOEoe "сито", изпржер, с

знвороточны?? уровне?! феррит:ша сытъ 100 г.сгг/л.А}?;1Л2з гтих результатов / рис Л / показал, что уровень ферря-гина зулз ICO удг/л обнаружен у 36 из 45 больвлх сероз-п.-ми цистаденомами / 80,2 /, у 13 из 14 большие муцютоз-ис.гп цистадепсмамн / Sc% /, у 25 из 31 больной прсчшп доброкачественными опухолдед; яичников / 60,6;' /„ у всех вольных пограничными опухолями личнпков /100&/ я всех Зольных раком янчников I-II стадии заболевания /10 Следовательно, 0-Э больных из 10-ти доброкачественными эпухолямл яичников и все больные пограяичтлми опухолям т в I-II стадии рака яичников будут 'Ьтсеяны" yso пра определении сыьсро точного уровня ферритинл.

Частое повышение сывороточного уровня ферритина при доброкачественных опухолях яичников не только но является недостатком его, как опухолевого иаркера, а больЕКи еостоинствсц, так как. он раньше других маркеров-реал:- , рует на изменения, происходящие в яичнике. Важность диагностики доброкачественных опухолей яичников обусловлена тем, что".,.первичные раки в этой органе в подалдягь-ием большинстве случаев развиваются в серозных а псев-

доглуцннозннх кистах .-.игл па фона процессов, им гичных" / !.'.0.Глазунов,Î'JGI /. Отсюда следует, что доброкачественная опухоль яичников не остается так».-* еою всегда, но рано или поздно трансфор«:руется р злокачественную п поэтому доброкачественную опуходь явчнкков рассматривает как предрак, а диагностик и оперативное удаление это.", опухоли =■ цсщ профздактику рапа яичников. Поэтов иаиболъдув Д§ВЯ93?& ДЛЯ днаг.-иостнкк ршса яячнкков продстщшшт те щркрру, кото-г pue могут уловить изменения в гомеостаз§ уже на çja-r дая» доброкачественной опухолей таким ?('4ркероу h'ozç? бить с^орритпк.

Представление о том, что добрр^ачдстррнкнд рпухоли яичников являются ступенью, прэдРРй?йу>'«оИ раку яич?де= ков, шжно продемонстрировать и ца результатах нашей работы. Таблица 7 представляет р орзннСШШ'. частоту ■ выявления ферратина и кетасшйчеешгх Ш'ТЙГенор р сыг-воротке крови Сольных при др^рюкачертвзнинх дпухрлдх яичников и раке дотиков. JÎ3 этого ррзадснил олрдур?, что самый быстро рсагирумуад, а следоьауальпр, рйМЖ ранним белком является фсррпт}Ш, a сгу.сда рдддШШи / салага поздние / C.V..4Î2, Другой едэрадц "вдёрод" ферратаиа происходит на »тале, когда цз кррмэдыюЯ кдапш уно сформировалась адетка добрркачертреиней тухоли, а."выброс" О'.'/Лг v когдг клетка дрброка.чед-.-дадеяоЗ опухоли naîtontira достаточно кол;:честлен1пгх Ш'тж^ Д?и нерзходй в новое начзотрй-рзкррую УН» çnooобкуо сг;нгоЗ{-:1'оглть erps йпс^рддьшщо gnnjçxaTb его ç:rr:it:3 ДРУГОЕ ШТайЬЗ? QPPa-

1Ь осиешшй ртох :> полопаем, «JÏP раннеЯ аГЙ1Т0СТ?ку рана, наиболее пригодны <1<п-

«ю.я^щлде С-ерритин, которые ;/огут ШЧЪР&тло mWiîb в гомоостазе, нред-

këfffpytëpp ÎS4Ry» Это ездовано на том, что роковой

iîe-Tj в крови не «охот быть и про-

. Я9

Часю«'2. тяплжт %ч№.Ж'А л ^•з^стага'ггскгл ан?л-гстг; г-роз'т '"фи лсб^яа^эс-лсг^х

ОДУЯОЯЕХ п ЯТШКСЗ»

АНТИГОН Прсц-);?"

СПу/ОЛИ ЯЙ"Ч:ТКС>Ь яячягтоз

^ерштяя 57 „О 92 >0

СМ'5 37,5 89.0

0?№ 37 „ 5 С'МЗ

ОМАН 33 »3

Она<2 в ~о.О

дуктсз кем*;:, к> ее:»,

б'^-ков^ г..-:;оесл глегхГ, а чсзеосзгс^З-

;сге бая:-;;! угг5 страт-.^/? ¡гмлавхпа -

псственксЗ опухоли» Но посушу 'тсррптс? сбладга?

сокс?. 7у"схг;зх!?л^н0схьэ ii хпзкоз спсшфттосяв» ро£9

а СУАХ2 - тсогой еаейа&паоегь» а клзкоГ; чувстаатеаз-ростьй / .чя отзге деЗрокачествеиЕсЗ опухоли/8 го ддч регйшм г.роЗлеиц раккаМ г, саенгфгеескоа дгзткосглка рака лп^лжоз ксобходою сочетать пргаенаняе в кома-« ' .*г-:-/:со С-:-; различных т::лоз белков:

1 - фгзкаяогачесш} / неспса2$Еческав в рэактявтгй / белка, которые количественно отразив? раавза атагн эволюции доброкачественной опухает д^к^рсс* з кразь которых Ш220 набрать разик другах белма / фэррз-твы /;

2 - опухо леасеонипрозакя;:>г /услонкоспеця*~ческас/ белки, которке.вядико» количественно реагируют на более поздних этапах с-волхоия: доброкачествзиноа олухолп

• so

/ 0üA6fS /, ко раковой клетка caö нет ; 3 - спеш^лческаа баикп, которые могут ллляться цродук» том синтеза /прямого uva опосредованного / сф0]дьц>0~ веааейоя раковоЗ клетке « продуктом ранней стадии, аяо« Л2ЦК2 раковой клотке./ ОМА 12 /.

Згот кетодачосксй водход к даотноотш» wosa? позволить реально peasîb но тол-л:о ршшюа дащгагсстаау ргкц якагков, ко а ощоддокниг 1*исто;.оя№згиас тиаоз опухолей яшпшкоа» цуцк^оэнщс ь е ¿po-j шп: © ¿^кядпешируздей строка Е ДРУГИХ»

В U В О Д M

26 Нровадс-н скатауатйческг.й Р.с.'унохшагчсакг.Г: &нц-га шкачшиой структура «cyacmcc pasca тг.ккоз с изгьэ шша EÔSÎK оцугслск»: uipKipcВ, Вяерп."- идеи-

20 '/ЗКОСаС^ь-^еККХ ¿ШТКГОДОЗ» lI03Bií¿a£tU

шкгйиж" / VJ& z-2-3 /»

S» йрФДкаашш гизссгЗ-счшдог оварксльио-к:отастатстос-œ сезддоод с шдрс.йдошняеи ы »uu I-opmiosnemiia-.-coasse / í£I¿ S~7 il Д - итоитаспе1и»1шосшг/ 0!ЛА9 /; Ш - е^олшд^не / O^i. 8-10» 0&U3. OMIS /;ЗУ -

wyxesaaoscircGpiíBHía«« / ШЛП-Х2, 0УАМ. 0KAX6-2Û / s îi ? ^-уй'цу lsíj-y быть tSA&Mmi азьестнас белкк - <)юрри~

'.■2S g UiixGp'rîù ï£îiî;à 1£С-ИТК^иакрО?4Г:Ы

евзэргжгакЕ.

Se Дгл 4<c 33SÎK ©r^p-aníHío-'isíaaTaTüqv'dcax

nnS» еэдя^^саяшВ / ;:r в сагорот-

spsss Cosmic? с çaiyo shöscök» ПОЯСНЕЛ / (Х'ЛЗ-ÎQ, С2Ш£2 /, пог-5|й15 ССЕЕГЛЗУ ksïppçjkk*« Bs KsOvr^ç^ïï-i;.

* 4« ЦрзЬсггсо тестнровашо.

ffiiLS с sss^cc&apKarccw C-?áS в oíí3oj»T¿e

6G£Lï3jK йрз езудалл:: лачкаков» ^еггат&льнэеть

теста на p^a: яик:зсоя !5рп с^рададскг: С'.?Л~ срскптга 692» прн опрэделгяпд САЗ - 74,'.?: ranr^v vrr-r. гсп-. та на pai: яшчиахов сх: киазадк -

5. й.'.\!упод5.С^э}чхппа* гл^одсп. которого ссотавллла 2 ».сг/д, ттр-:- ^дс.-!.-» С1ЛА12 s CMII2 в ci«3orovitv apovi 6oxbV.cz с ятчиакоз. Чухстпательность тсста кг. рэ~. :rz-:. определена*: 0IIAII омль с3,37>5 лрд ояглдзден'д: Г/а112 -75.S, а сшмг.-^чнссть т-лтл на рад яичнтаоз cccTO2?.n G3,4;'b и ссоа-рстсел^гшо.

6. Установкой r<i;?cv-iT.' ?u;-опмЧ0С?;с5Гл с;-:'.т<г.!.г а^аческого трЫобч-статеегого . / ТБГ / з г; зясл&гзптнглсз шгпгагхя? л,

морТодогете?...... структур:! тагтя пстор.-:?

"сгут Саг* -л ег» cv-.-'O :?

та:: пзч кс" % пго т; стгссгл»'^" r.^ovn Оо^ь-

ЯЖ состоять? дг=/т, Т2,5;',

7. Гяхъжб t 7Т0 пггл-гго.т^о zazr-'ic-^-^ix n опродо.тснач з скоротал крогл; атуггл» тзстом для речного сСпарудонгл опугодпл яггстоз,

в, Прайвавид® колалествзнянх г-.-угодсз сарэдод^?-. ко'.тлекса гз «ог.нх оздраагльао-мзсгсп-атзпсск?; Kmst*-поз з сочетачлц о ацгестннаа опухолевкггз мзскврааа, особенно фбррятаца?, создаёт раслытуэ основу ддг: рглэ^ нал прсСлеач* рялн*" п сгсагфотсско.! дгшгносттзл реет

ПЗДГЁПЗСШ РЕСС55ЩАШШ

, I. Ранняя даагиоотжа сака яячяшш corasa. Сгггг» только акхавяоЗ. Длт: ожкзшого Ег-шэдзгпш рзаа /бгселхз на равней сгадаг / ш стшип доЗрскачестзсьгоЗ caysasn / ккзао £3Kctisrs;o32.vr.. кзйэтйстааапоэ опродзлг^а сгзрэ» точного урсгагг фзррзяза -у еттсп б гЗ-гМ-саамг» к»-рглта I раз я 3

2. Группа повкбзнного ргска по раку_якчносоь

/ уровень сывороточного феррвтнна вкео 100 ьхг/л / должна Сыть тестирована I раз в год па оваркалъио- ■ катсстатичоскне антигена / ОМА 6,8.9,12 / и ферритшг.

3. Прогрессивное ковыпекпе сывороточного уровня оирЕйяы.'о-иетасгатнчесхЕх антигенов и ферритшт дсллво являться показанием к углубленному их обследования.

; ' список

наусшх работ,ощ^гтесваштк по дгссвр-зедз

1. Прокопенко П.Г, И:.е.1уяохп?.ячссг.гя

дня феррптнна а ого юиунологкчесяах аналогов - asv-фа-2Н-глобулнна п бета-фетопротезна, E3S1, lC82fr4, с.70 - 73. / БЭЕ1 - Белл„гкопер.Спал,и ггед. /

2. Мягунов В.Н.,Позана И.М.,Прохопеняо П.Г.,

Татаринсв Li.С. Тротобдастячосияз бата-глзхояро-тени в гфапаратах плацентарного и^уноглобулпта. ЖЫЭИ, 1982, с.59-62. •

3. Борасенко С.А.,Прокопы^о П»Г..Макаров 0.B«

Изучение '¡ерр^тпна прх опухолях -еттсхих половш: органов. Еопр.оякол., 1383,5 6,0.45-17»

л Прсxs-cKVvf П.Г., ьсрхсешсо С.Л.,Сс:солсз А»3.» Радиои?е!у1:с\';сгг;--1ес:соэ нзучекнз кгдлорзперебразг-.нг'гэ антигена пр-; опухолях гзтггалй. Тсз.док-,. Гсгссгзз:т. сгата» " ЕеГфсс^слгфачэскв5 Р^вяя.ЦЗЗ,

с «49-50„

5. Еордсзпхо 0ел,дрокос2ияо П.Г., Ггявновз. IV. U, Татзриноз fi.C.»Макаров О.В. Цдвпти^капзя пегого лиигатического антигена в екзэротод кровн бодкпег: раком яичников» Тез.докл.конй. "Актуальные вопроси яымунологна »адларгодогиа я иолекуляряоЗ бполохш"', КраснодарД9£392-S3.

6. Пркзяога И.Ь*., Борнсеняо С,Л., Прс.чспеклэ И.Г., Наваров О.В.,Соколоз A.B. РадиоЕгаупологзчез-

коз опрадало'лке ялпцерсцорсбрального антигена в сагэ-ротка крови большее с- опуходягл: гонитолгП. ггл«-,

IS84, £4,с.27-29»

7. Прокопенко Я.Г., Борасзнхо С.А.Датарзвсз S.C. Ендедэано я фнзязя-хнипесяал хасзятергстЕка stencapo— церебрального антигена. Еоар.гэд.ю^сзл, XS34,2Ito.7I-

-74.

8„ Еорпй-жо С. А; .Прокопенко П.Г*,Соколов А.В., Грязнова , Татарина:: Ю,С. .Макаров О.Б. Оорзхсяахо уровня кеацероаероЗрсл1.1:ого гипстока а сиьоротке кроая больна: раксл1якчнккев с кспсльзо-

раглогд^-пологачсского ьйтода. Тез.докл. кокф. Ч&атактст и лечебная тактика при рапппх формах глогеязия^шлк оцугог.гЗ яичников",!.'эсква,1884,с.2Э-23.

0. Пржояз»» И.Ги,Вор2зонко С.Д,,С-оксл ^^ысфзрАзггпцй '.¡оррлткпй человека, Тез.докл.

кр.ч*>. Ч'з&зж&кис лрсблъма бг.схг.мп:^, Кеазрог.0,2985, о.20-23.

10. Борпсснг.у С.л.ирукопепко 11.Г, Использование некоторых п?.с.«укохккпческкх маркеров в диагностике слухол-зй ялчинков. 13 кн."Опухоли яичников", Москва,

И. Прсхспоыю П.Г., Борнсето С.Л.,Фомина К,В, гЬ'уяс.^^зятииГ! а:!сдиз трофобласгического бета-тко-Те г,, дог»'-.. XI сг'г-да врачей Кузбасса,, Немо™ : рою. 1е36в С. 243-245.

12. Врзкопснпо .Бормсепко С,Л,.Реазтоаа Т.И,, Т&*ерзщоэ трофобластичес-

«оге е-«»в-г;иж.оард7еа«, и пденокарцкномы «кчнпка» Хса к, с.ПО-ПВ.

ЙЗ. Прокопенко ПЛ\, £ор«сенко С.А. .Макаров О,В., Тетеригоа Ь.С. АФФинная хроматография антител & вддоодомэитвок шуте. Тез.дохл.мездунар.конф.

в бяодзгей е медицине"»Цосква,1586,

К. Грязнова М.М.,Борвсенко С.Л. .Макаров О.В., Прокопенко ¡1.Г. Сывороточный ферритин при опухолях ягчнпкоь. Акув. в гки.»1?Б6,£ 10,с.44-57.

15, Лрогюявшго Я»Г« ,£ор;<гешю С.Л.,Та?а?зйоз ÏMJ», Ккуупохимичеекая идентй'Тчкапа.ч п метастазах озарйляьнага рака, ПЭШ» Л 7,с.81-83,

16, Fcrexor," ,Прокопг-:гко II,Г. Доргселко С. А,» Татарией ii.G* П'"!у;:с:/ор7олог;:чссксс "пученпо

троДОл.хтическоге toгз~?лж,:проте;;на а опухолях «вг;-ников. ЕЭНЛ.лепоакровхчо . iSiliTiî Z5.II.83»

17. Еорпеенко С,А.,Макаров О.З.Детругнна З.А., Сокина I.i.3, ,Про:сопенко П.Г. Идентификация

исв'ох балков в лямге больних раком лзчкжов. Тез .дохл. Kc:;ji. "Проблемы изучения каслелотвониосгл на уровне бэлковых продутоз roiù;c-:i экспр?с-с:!йя^осква,1989,сЛОв

18. Прокопенко Н.Г,,Еор::сенко П.а;.Макаром О,у., Рв^етзга Т.п. У^грло'.^'ентпоо олр-заеданяе но-

еого белка В СКВОГОТКС КСОЭИ ССЛ-Ш« ГГ.)„- IV''С ЯИЧПЯХОЭ. Там sa,с,"1Э„

Т9» Лрохопокхо n.r.,îo;v!oon-:o О.З.,

Рсгетова T.Î!.,Cc:.tî':îa !!„3. Осс£?н:;ооти бельевого состава мзтпетазоз рака яичников человека.~а5с,50„

20. Гряпксва Я.М..Еорисенко С.А,,Какзрсз 0.3.» îoi.snia M.В,,Прокопенко Л.Г.,7атпр;пюэ 3.G.

Сггвороточшг" ферритгл к трс>гсбг.зст:"гас:а-'П йота-гглу.о-прстегл прл опухолях яэтнпкев. 2сгг>.оапол.,1350,5 5, c.S'1-БЗ.

21. 1Ггокс*;а:с:о Д.Г.,Татарином L-.G. .Еорисекко С.А., Ф'мппа П.В. трэЛобластического

бета-гл^копротекна в. сызорзтзе крова я ткани опухолей ' явчиккоз. БЭБМ,1890,.'5 б,с. 5?3-57'î.

22. Борисенко С.А. .{Макаров 0.3. .Петрукпга З.А», Прокопенко П.Г.Определение оварггалыгочютаста-

тического антнтена-О у больних с опухолями гентлалкЯ. Акушл; гин., 19906,0.42-4*1.

t

23. Прокопенко П.Г»,Вор!!сеияо öiA» .Какарм 0*B., TûTapzKOB.U.C. 0К1?Л0вс.риааыюю

кисдотораствэрнюго в опулшя яич-

ников. КБМ, 1901 f Гг35оЛВГ>483*

24. IípQKQnsffiíO H s Г» »EopüßeiiKO O.B», Fcsiôîasâ îiïl.e С-омпнп MSI],

опалнз cpapEiiïbHû-MjïacTâïS'.'iacKôrô шшагока-В. ЕЭЕЛ, IS3X6 Я 5s

25. ПрОКСПЛЧ.БорасьНко G»A«»Татарином Ю.С. ÍIí3jynoxor::45Ci:«C¡ ttlttiôVZ £:iïûré:!0û дик?;: в опухолевой тзгш s ¡¿даостак Щ'Л рака ямнкков. Теэ.г,5Г-й* Ï сгол;.:. ?ССС*з:5 Новосибирск, 1032,0,42,

«&» Коййроа Oí В. »Soiuceiuto C.A«»BpWonöKKo п.Г.

Ctíb0í..jT04i:üi'0 'К-ррлтиы«» в диагностике qiiyjí¿;¿¿:3 л'сз^до.л. i съезда гпйсколохчэз

L&ír&i* hû-a»ÏÔSâ»c.7I«

SV; ПроМ-ё^о В* Г»»Böp20t'»»Kö Ú.A.»McK*p¡>B 0.3,,

F'äQj СЛ';:.- ЙС-луЧеНПЛ ûHK^'OÏPJ-î.HOÏ'ô L'jôïûMîi.-.u ' »^0]'üKö6 <:• 3 Р.Д гНюОр^;;^

::■ 7ЖП7?,,

Ü.T^bvj v.^K-IO С./,s O.B.,

¡¿ííí lipúatíaibu-.ó и„Л> /¡.'лкарог.

titrà o v .^¡¿'--^еллкл^а. Лол-уч'.'н

îL-i'ôav ua fcyoôpsï-buo fe ïj-OiJôCiô»

ê'3i Scràûôteo Ce¿> »npy's'.Offôî'-"* П.Г-,!&керсв O.B., tiïapnsûB .«J.C. Спг-с^б кочученкя оккооваркаль-r.sro tiesyseno по.чо-ктсльноз рег-екиз

Йй ьнйач? ох S2»C"»î>2 во ватажа ва ¡кобрзтенпе

îî üÁ&sám ы с£»п,я> г.

&. Borlicnko s. A., Prcv:ppcr.JiO P.0,,i-fetarov. 0.V.. ?oalm K.V. Oncoovarlan alia-l»cie)vjHn ecr ps'cntial marker of ovarian cancer,1!) wotlnj of tfca IS02M,Sapporo. Japan, p. SO, 1932

32. Doriacnko S. A., '<rnkope;/ko ?.«.. Mafcarov O.V..Potrushina V.A., xsina H.V. "I-Jcntii.ication of c-ncGavarian alia-i-globulino In iocd 50i'K.';i cc patiants with iMiltai tutors.* XYin-th Moot-ig of the ISOEM, Moeco-', p- 0?, 1990

G3. Prol:openka P. G., BorliXTiko S, A., Makarov 0.7. "Itr-uno-sytneaasay of ovarian-a.otastatlc antigen- 0 In patients th ovarian tusors." -X'/ll-th Meeting r>? the ISGcm. ■-•Iturg. p. 54.1931.

3-i.Frokopciiko p.G..Dcrlsenko Hakarov 0.V..Reohetova T. I., tarinov Yu. S. "Identification of aclfl-solublc alfa--globulln in ovarian tumor tissue." XYlll-th Hooting f the ISOSM.Moscow,p.151.1990 ;

35;ProkGpcnko P.G., Bcriconko S.A., Reshetova T.I.. tarinov Yu.S. Identification of cncoovarlan alfa-'jlcbuiin in Usa.o and blood sc-rua of ovarian icer.XIX-th Mealing oi the ISOEM.Siena. Italia. 155,1931.

36. Prokopenko P., Boriscnko S..Makarov 0. .IvV.ov N.. ,3r$T)-?V Vu." Urpunochomicai identification of J3'(intir.e-rii of ovarlal cancc-r. XXI-at ■Upc of the IS08M. Jerutialea, Israel, p. CO. 1S93-