Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Хронобиологический анализ гематологических показателей у мышей в норме и при действии некоторых антибактериальных препаратов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Хронобиологический анализ гематологических показателей у мышей в норме и при действии некоторых антибактериальных препаратов"

с:-' ч§>

^ГУЖНОВА СВЕТЛАНА АЛЕКСЕЕВНА N

на правах рукописи

ХРОНОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У МЫШЕЙ В НОРМЕ И ПРИ ДЕЙСТВИИ НЕКОТОРЫХ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Специальность 03.00.13. - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Астрахань - 1997

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте по и: нию лепры Минздрава РФ.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор А.А. Ющенко доктор биологических наук, профессор Д.Л. Тёплый.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.Н. Бекчанов кандидат медицинских наук B.C. Балыбин

Ведущая организация — Саратовская государственная академия меда ской ветеринарии и биотехнологии. и ;

Защита состоится " _ 1997 г. в часов на засех

диссертационного совета К 113.71.01 по защите кандидатских диссертащ соискание учёной степени кандидата биологических наук в Астраханском дарственном педагогическом университете (414000, Астрахань, пл. Шаумш С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета. Автореферат разослан

о? _ 1997 г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

В.Ф. Савин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В настоящее время накоплен обширный фактический материал, доказывающий, что биоритмы являются универсальным явлением, присущим биосистемам, которое позволяет организмам адаптироваться к условиям меняющейся среды. Временная организация физиологических функций определяет их эффективность, состояние здоровья человека, его работоспособность, устойчивость к воздействию неблагоприятных факторов (Моисеева Н.И., Сысуев В.М., 1981; Романов Ю.А., 1981; Алякринский Б.С., Степанова С.И., 1985; Степанова С.И., 1986; Оранский И.Е., 1988; Дедов И.И., Дедов В.И., 1992).

Биоритмологические подходы находят всё более широкое применение в практической медицине (Таболин В.А., 1972-1995, Романов Ю.А., 1978 -1994; Голиков А.П., Голиков П.П., 1985; Деряпа Н.Р. ссоавт., 1985; Кудрин А.Н., 1987, 1995 и др.). Правильный выбор времени введения лекарств позволил добиться максимального терапевтического эффекта при лечении многих заболеваний (Гехт Б.М. с соавт., 1985; Заславская P.M., 1982 1995; Кудрин А.Н., 1987, 1995; Комаров Ф.И., 1995; Halberg Н. с соавт., 1978; Reinberg А. с соавт.,1987; TargniniB. с соавт.,1978; Deslander C.J., 1983; Levy R. с соавт.,1983 и др.).

Вместе с тем, хронофармакологические исследования при таких хронических инфекциях, как микобактериозы (лепра, туберкулёз) практически те проводились, хотя современное состояние их лечения остаётся весьма несвершенным.

Наряду с поисками новых более эффективных противолепрозных трепаратов предпринимаются попытки решения этой задачи путём оптимизации способов использования имеющихся. Перспективным направлени-:м в этой работе представляется пересмотр схем назначения применяемых :редств с учётом хронобиологического принципа.

В настоящее время к основным противолепрозным средствам отно-;ятся препараты сульфонового ряда, производные 4,4- диаминодифенил-

сульфона (ДДС) и рифампицина (РФП). Значение хронофармахологическо-го изучения этих препаратов выходит за рамки лепрологии, так как обладая выраженной антибактериальной активностью в отношении внутриклеточных паразитов, а также иммуногролным и противовоспалительным действием, они успешно применяются при лечении многих других заболеваний.

Недостаточность и разноречивость хронобиологических данных о гематологических показателях в норме, значимость спектра применения ДДС и РФП на современном этапе, а также отсутствие систематизированных сведений о хронозависимости влияния этих препаратов, явились предпосылкой для проведения данного исследования.

Цель исследования заключалась в изучении околосуточной ритмики уровня гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и содержания лимфоцитов в периферической крови у мышей в норме и хронозависимости влияния на эти показатели антибактериальных препаратов ДДС, РФП и их комбинированного применения.

Задачи исследования:

1. Изучить околосуточный ритмосгаз уровня гемоглобина (Гб), количества эритроцитов (Эр), лейкоцитов (Лк) и содержания лимфоцитов (Лф) в крови у интактных мышей;

2. Исследовать влияние утреннего (9 час.) и вечернего (17 час.) введения ДДС, РФП и их комбинированного применения на параметры околосуточных ритмов Гб, Эр, Лк и Лф;

3. Выявить зависимость воздействия ДДС, РФП и их сочетанного применения при различных режимах введения (утреннем и вечернем) в различные сезоны года.

Основные положения, выносимые на защиту: !!!

1. Для интактных мышей характерно наличие околосуточной ритмики таких гематологических показателей как уровень Гб, количество Эр, Лк, содержание Лф.

2. Ритмометрические параметры данных компонентов крови имеют сезонные особенности.

3. ДДС, РФП и их комбинированное применение оказывают влияние на состояние ритмосгаза уровня Гб, количества Эр, Лк и содержания Лф у интактных мышей.

4. Степень влияния указанных препаратов сопряжена с сезоном года и временем их введения.

Новизна исследования.

Впервые изучены групповые околосуточные ритмы уровня гемоглобина и количества форменных элементов у интактных мышей линии СВА в разные сезоны года.

Впервые проведено исследование степени воздействия ДЦС, РФП и их сочетанного введения в разное время суток и различные сезоны года на параметры временной организации гематологических показателей в эксперименте с целью дальнейшего совершенствования химиотерапии этими препаратами. -'Г!-'!

Впервые получены данные, свидетельствующие, что основные проти-: волепрозные препараты ДДС, РФП и их совместное применение оказывают ' влияние на параметры околосуточных ритмов уровня гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и лимфоцитов в крови у интактных мышей. Показано, что степень влияния этих препаратов зависит от времени их введения. Выявлены сезонные особенности воздействия препаратов на хроь ноструктуру изучаемых показателей.

Научно - практическая значимость работы заключается в том, что полученные в ходе её выполнения результаты расширяют представления о закономерностях влияния лекарственных препаратов на интактный орга- 1 низм. Они также могут быть использованы в планировании эксперимен-

тальных исследований с целью получения более оптимальных и корректных результатов, а также должны учитываться в клинической практике при выработке рекомендаций по совершенствованию схем лечения.

Апробация работы, публикации.

Основные положения диссертации доложены на 14-м Международном Конгрессе по лепре (Орландо, США, 1993), 1-м Международном симпозиуме "Лабораторные животные в медико-биологических и биотехнологических исследованиях (Москва, 1992), симпозиуме "Иммунодиагностика и патогенез болезней, вызываемых микобактерияии" (Астрахань,1994), 15-й конференции молодых учёных, посвященной 30-летию ЦНИИ эпидемиологии (Астрахань, 1992), Юбилейной научной конференции, посвященной 100-летию основания Астраханского лепрозория (Астрахань, 1996), 7-м Российском съезде дерматологов и венерологов (Казань, 1996), Республиканской научно-практической конференции "Экология человека и краевая патология Приаралья" (Нукус, 1993), итоговой научной конференции АГ-ПУ (Астрахань, 1997).

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Объём и структура работы.

Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, собственные результаты, обсуждение полученных результатов, список литературы. Материалы диссертации изложены на 167 страницах машинописного текста, включая 29 таблиц и 28 рисунков. Список литературы состоит из 179 работ, из них 119 отечественных и 60 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Исследование выполнено на 2030 мышах линии СВА обоего пола. В каждый сезон проведено 6 серий: 3 утренних и 3 вечерних. В утренних сериях эксперимента препараты и их комбинацию вводили через зонд в желудок в 9 час., в вечерних - в 17 час. ДДС применяли в доз? 25 мг/кг, РФП - 50 мг/кг. После введения необходимых ингредиентов через каждые 4 часа в течение суток (* 13,17,21,1,5,9,13 час. в утренних и в 21, 1, 5,9, 13,17, 21 в

вечерних опытах) мышей забивали быстрой декапитацией по 5-8 особей на временную точку параллельно в опытной и контрольной группах с целью забора крови.

Мыши, использованные в каждой серии, были синхронизированы по возрасту, весу, полу, условиям содержания (естественная смена дня и ночи, стандартный уход и корм).

Гематологические показатели определяли унифицированными методами: уровень Гб гемоглобинцианидным методом, количество Эр и Лк подсчётом в камере Горяева, процентное содержание Лф в кровяных мазках, окрашенных по Романовскому Гимзе (Меньшиков В.В., 1987).

Для определения параметров околосуточных ритмов изучаемых показателей использовали графически - параметрический метод хронобиологи-ческого анализа (Романов Ю.А., 1994). Определяли следующие параметры:

1) мезор (среднесуточная величина показателя) - частное от деления суммы его значений в каждой временной точке эксперимента на число определений в течение суток (абсолютные единицы);

2) акрофаза - время суток, на которое приходится максимум изучаемого показателя (часы);

3) надир - время суток, на которое приходится минимум изучаемого показателя (часы);

4) абсолютная амплитуда (АА) - разница между максимальным и минимальным значениями параметра в рассматриваемом ритме (абсолютные единицы);

5) относительная амплитуда (ОА) - отношение величины максимального параметра к минимальному;

6) активная фаза (АФ) - период ритма, когда величина его показате-тей превышает мезор (в часах суток);

7) длительность активной фазы (часы);

8) фазовый сдвиг между ритмами - разница между временем, на которое приходятся акрофазы рассматриваемых ритмов (часы).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли по ^ программе "Статграф". Достоверность различий между средними определяли по критерию Стьюдента. Разницу между величинами параметров ритма считали достоверным при р<0,05 и менее. , Для определения степени сезонной вариабельности абсолютной и относительной амплитуды колебаний интактных мышей вычисляли коэффициент сезонности (Трахтенберг И.М.,1991): & = (\\V-Wy) I Wy ♦100%, где & - коэффициент сезонности = 1,2,3,4); - сезонная норма показателя; \Уу - среднегодовая норма.

Полученные данные в зависимости от величины коэффициента клас-.,, сифицировали следующим образом: Б! < (10%) - незначительные; (10%) < п... < (30%) - выраженные и > (30%) - сильновыраженные сезонные колебания.

В работе использовали спектрофотометр СФ-26, микроскоп , "Виолам", электронно-вычислительную технику, отечественные наборы для определения гемоглобина и окраски кровяных мазков.

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. ; 1. Характеристика групповых околосуточных ритмов уровня гемо-

глобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и содержания лимфоцитов у интактных мышей линии СБА в разные сезоны года.

У интактных мышей во все сезоны года наблюдаются разнонаправленные ритмичные колебания уровня Гб, количества Эр, Лк, Лф. Сезонные особенности ритмометрических параметров этих компонентов крови отражены в таб.1.

ТАБЛИЦА № 1

СЕЗОННАЯ ДИНАМИКА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ИНТАКТНЫХ МЫШЕЙ

Сезоны года Мезор АА S% Степень выражен ности АО S% Степень выражен ности

Гемоглобин (г/л)

Эсень 135.512.4 30.5 10.2 Выражен 1.27 2 Незнач.

Зима 137.2±2.9 28.6 15.8 Выражен 1.26 3 Незнач.

Весна 134.Ш.4 44.5 31.0 Сильно выражен 1.38 6.1 Незнач.

Пето 127.4±4.5 32.3 4.9 Незнач. 1.3 0 -

Эритроциты (х10и/л

Эсень 7.70+0.23 0.23 9.52 Незнач. 1.2 3.8 Незнач.

)ииа 8.5±0.17 - 0.17 19.04 Выражен 1.23 «.0 Незнач.

Весна 8.1±0.28 0.28 33.3 Сильно выражен 1.3 4.27 Незнач.

Пето 6.7±0.19 0.12 9.52 Незнач. 1.26 <1 Незнач.

Лейкоциты (х10*/л)

Эсень 10.4±0.3 3.29 14.88 Выражен 1.4 5.7 Незнач.

)има 12.410.3 3.59 7.13 Незнач. 1.37 7.7 Незнач.

Весна Il.8±0.4 4.43 14.62 Выражен 1.5 1.0 Незнач.

Пето 8.9Ю.35 4.15 7.37 Незнач. 1.67 12.42 Выражен

Лимфоциты Г/о)

Эсень 52.712.4 22.38 7.7 Незнач. 1.57 4.8 Незнач.

Зима 51.5+2.8 29.83 23.0 Выражен 1.88 13.9 Выражен

Весна 52.9±2.6 28.0 15.0 Незнач. 1.81 9.7 Незнач.

fiero 63.311.2 16.48 30.0 Сильно выражен 1.35 18.0 Выражен

По поводу сезонной динамики среднесуточного уровня Гб и Эр в литературе существуют разноречивые сведения. Одни авторы утверждают, что их количество нарастает к летнему времени (Имепьбаева Э А. с соавт., 1985; Урляпова Н.Г с соавт.,1990). По мнению других, число Эр в крови максимально зимой и связано в это время года с энергетическим обеспечением функционирования кислородно-транспортной системы (Деряпа Н.Р.,

1985).. Подобное расхождение в результатах, по-видимому, обусловлено различными методологическими подходами к проведению эксперимента. Сильно выраженную изменчивость по сезонам имела АА колебаний этих компонентов. Её максимум приходился на весеннее время года, что могло свидетельствовать о напряжении в системе и объясняться особенностями состояния эндокринного статуса в это время. Это совпадает с мнением ряда исследователей, считающих, что в такой "переходный" период как весна, для крови естественен внутрисистемный десинхроноз (Баркова Э.Н. с со-авт., 1988).

Акрофазы описываемых составляющих крови по сезонам располагались синхронно. Зимой и осенью 70% экстремумов Гб и Эр приходились на тёмное, весной и летом - на светлое время суток.

Для Лк характерно повышение мезора в зимний и весенний сезоны й снижение летом, что согласуется с данными Л.И. Шатилович (1994). Содержание Лф, напротив, летом максимально, а в другие сезоны их уровень стабилен. Повышение АА количества Лк выявлено в весенне-летний, а снижение в осенне-зимний сезоны. Степень выраженности сезонной изменчивости мезора и АА Лк относительно годовой нормы в эксперименте совпадала с весенним и осенним сезонами - переходными периодами года.

Расположение акрофаз Лк коррелировало с таковыми у Гб и Эр, и приходилось на темное, а весной и летом - на светлое время суток.

В отличие от Лк, для Лф было характерно значительное снижение АА и ОА колебаний в летний сезон. При этом акрофазы были сдвинуты на светлый, а в остальное время года - на тёмный фотопериод. Учитывая, что максимальный уровень мезора Лф выявлен летом, а АА и ОА в это время были максимальными при смещении акрофаз, мы пришли к выводу о наличии внутреннего десинхроноза в системе, свидетельствующего о напряжении иммунологического статуса в этот сезон.

Таким образом, для мышей, использованных в эксперименте, характерно наличие циркадианной ритмики уровня Гб, Эр, Лк и Лф. Ритмостаз

этих показателей имел особенности, связанные с биологическими характеристиками особей, условиями проведения эксперимента и сезонам года.

2. Характеристика околосуточных ритмов уровня гемоглобина у мышей, получавших препараты.

Существенные изменения ритмосгаза уровня Гб были выявлены у мышей, получавших ДДС в 9 часов в зимнее время года (рис.1 А). На протяжении двадцати часов наблюдения у животных отсутствовали ритмичные колебания. Среднесуточный уровень Гб был достоверно снижен (р<0,01), а к концу суток в крови отмечали тенденцию к его дальнейшему уменьшению. Все перечисленные факты явно свидетельствовали о рассогласовании ритма.

«Лсы Чкы

Рис.1

Хронограммы уровня гемоглобина у мышей в норме и при введении ДДС: А — в 9 час. зимой; Б — в 17 час. летом.

При введении ДДС в 17 часов во все сезоны года под действием препарата наблюдались либо изменения ритмометрических параметров, либо профиля ритма. Зима и весна характеризовались, прежде всего, снижением мезора Гб (р<0,05), что не исключает возможности изменения интенсивности зависимых от данного параметра крови окислительно - воссгановтель-ных процессов в организме. В летнее время года фазносгь колебаний Гб нарушалась, однако величина ритмометрических параметров не изменялась, а за восемь часов до окончания эксперимента отмечалась явная тенденция к восстановлению ритма, о чём свидетельствовало сближение уровня Гб в 17

и 21 часов в обеих группах соответственно (рис.1 Б). В остальных случаях отличия в ритмометрических параметрах у подопытных и контрольных мышей были несущественными.

При введении РФП в 9 часов, прежде других, обращал на себя внимание весенний сезон. В это время года (утренняя серия) ритмостаз Гб подвергался значительной перестройке, что выражалось в кардинальном изменении профиля ритма н его параметров: ни один из зафиксированных максимумов статистически достоверно не отличался от мезора, а снижение АА у подопытных животных наблюдалось не только относительно контроля, но и "внутри" ритма (рис.2А). Таким образом, несмотря на то, что мезор в опытной группе был статистически достоверно выше, характер описываемых изменений свидетельствовал о перенапряжении в системе и не исключал возможности "затухания" флюктуации.

При введении РФП в 17 часов (рис.2Б) происходило смещение акро-фазы ритма со светлого времени суток на тёмное и повышение АА в первые 12 часов эксперимента. Через 16 часов после введения препарата различия между параметрами ритма в обеих группах нивелировались, что позволило сделать заключение об адаптивном характере отмеченных нами изменений.

13 Л 21 1 9 » 13 21 1 а » 13 1Т 21

Чкы Часы

Рис.2.

Хронограммы уровня гемоглобина у мышей в норме и при введении РФП весной: А — в 9 час.; Б — в 17 час.

Летом (при обоих режимах введения) воздействие препарата проявлялось в смещении акрофаз на противоположный фотопериод и значительном повышении'(на 100%) ЛЛ. 1С концу эксперимента достоверные различия в уровне Гб в контрольных точках отсутствовали. Зимой и осенью существенных изменений не наблюдалось. Таким образом, степень влияния РФП была более выражена в весенне-летний сезон.

Сочетанное применение препаратов в зимнее время года (рис.3А, Б), летом в вечернем режиме, а также весной в утреннем вызывало смещение фазы ритмов, приводящее их к инверсированному состоянию. Зимой в утренней серии и весной в вечерней выявлено статистически достоверное снижение мезора.

Ч«сы Часы

Рис.3.

Хронограммы уровня гемоглобина у мышей в норме и при комбинированном введении ДДС и РФП зимой: А — в 9 час.; Б — в 17 час.

Оценивая влияние комбинированного введения препаратов, мы отметили одну неизменно повторяющуюся закономерность. Она заключалась в том, что, невзирая на различную степень выраженности ритмометрическнх изменений, во все сезоны года при обоих режимах введения как минимум за 4-6 часов до окончания наблюдения отличия в параметрах ритма сглаживались и, как следствие, прослеживалась чёткая тенденция к восстановлению характерных для системы колебаний.

Обобщая выше изложенное, мы пришли к выводу, что комбинированное применение препаратов, в целом, оказывает менее выраженное

влияния на структуру пространственно- временной организации уровня Гб, способного привести к срыву адаптации и, в этом смысле, оно более предпочтительно, чем введение ДДС и РФП по отдельности.

3.Характеристика околосуточных ритмов количества эритроцитов у мышей при действии препаратов.

Рассматривая аспекты влияния препаратов на ритмостаз количества Эр, следует отметить, что, как и в случае с Гб, их воздействие было неоднозначно и коррелировало со временем введения и сезоном года. Особое внимание, на наш взгляд, заслуживает весенний сезон (утренняя серия), так как в это время года через четыре часа после введения препарата за резким увеличением количества Эр следовало такой же интенсивности снижение, приводившее в дальнейшем к полному отсутствию колебаний до конца эксперимента (рис.4А). Осенью при воздействии препарата наблюдали смену фазы ритма на прямо противоположную, зимой через двенадцать часов после начала эксперимента во всех временных контрольных точках выявлены статистически достоверные отличия. К окончанию эксперимента восстановления ритма не наблюдалось.

Рис.4.

Хронограммы количества эритроцитов у мышей в норме и при введении ДДС в 9 час.: А — весной; Б — летом.

При вечернем введении ДДС во все сезоны года и летом в утрени серии (рис.4Б) изменений в хронограммах Эр подопытных особей не вьи лено.

Следует также отметить, что введение ДДС во все сезоны года, кроме етнсго, способствовало нарушению синхронизации между колебаниями Гб Эр, которые в контрольных группах были согласованы между собой.

Существенное влияние РФП отмечено в зимний сезон. При его при-[енении в 9 часов происходила смена фазносги колебаний количества Эр, в ечерней серии фиксировали резкое снижение АА (рис.5А), приводившее к □стоянию полного десинхроноза.

В весеннее время года изменения в структуре ритма Эр (вечерняя семя) выражались п интенсивном уменьшении АА (50%), свидетельствующем снижении адаптационных возможностей организма. Тенденции к восста-овлению ритма за время эксперимента не наблюдалось (рис.5Б).

Рис.5.

Хронограммы количества эритроцитов у мышей в норме и при введении РФП в 17 час.: А —зимой; Б — весной.

Введение РФП в летний сезон не вызывало изменений ритмостаза Эр. )сеныо и весной они были незначительны.

Воздействие комбинированного применения препаратов при их вве-ении в 9 часов на ритмостаз Эр было более существенно в осенний )ис.6А) и зимний сезоны, в вечерней серии - в осенний сезон (рис.бБ). Оно ыражалось в смене фазносги колебаний и, как следствие, изменении прошли ритма. Мезор и АА числа Эр оставались постоянными. Зимой выяв-ено статистически достоверное снижение мезора, но за четыре часа до за-

вершения наблюдений уровень Эр достигал контрольного. В другие сезонь года изменений не выявлено.

Чкы Чесы

Рис.6.

Хронограммы количества эритроцитов у мышей в лорме и при комбинированном введении ДДС и РФП: А — в 9 час. осенью; Б — в 17 час. весной.

Таким образом, в целом, в зимний и весенний сезоны воздействш ДДС, РФП и их сочетанного применения на пространственно-временнук организацию уровня Гб и количества Эр выражено сильнее, чем в другш сезоны года.

3. Характеристика околосуточных ритмов количества лейкоцитов з мышей при действии препаратов.

Анализируя влияние ДДС. введенного в 9 часов, на ритмостаз коли чества Лк, мы пришли к выводу, что оно наиболее выражено в весенне« время года, т.к. в этом случае наблюдается существенное снижение АА (нг 50%) (рис.7А). Однако к концу эксперимента содержание Лк в опытно! группе было выше, чем в контроле, а кривая колебаний по форме повторя ла контрольную. Вечерний режим введения в это же время года также вы зывал снижение АА, но за 4 часа до завершения эксперимента количестве Лк в обеих группах было идентичным.

Зимой (вечерняя серия) препарат вызывал частичную инверсию. Вое становление ритмостаза Лк не наблюдалось. АЛ и ОЛ были иесколькс снижены (рис.7Б). У животных утренней серии наблюдались те же тендсн ции, но они были менее выражены.

Чкм Чю1

Рис.7.

Хронограммы количества лейкоцитов у мышей в норме и при введении

ДДС:

А — в 9 час. весной; Б — в 17 час. зимой.

В другие сезоны года изменения ритмометрических параметров числа Лк при действии ДДС были незначительны.

Результаты графически-параметрического анализа хронограмм, полученных в серии экспериментов с использованием РФП, показали, что ритмосгаз количества Лк особенно чувствителен к вечернему введению последнего (исключением явилась весна).

Осенью его применение вызвало частичную инверсию ритма и небольшое снижение мезора, АА оставалась на уровне контрольной, восстановления профиля ритма не наблюдалось (рис.8А). Зимой при частичной инверсии ритма отмечена стабильность мезора и АА. Характер колебаний к завершению эксперимента восстанавливался. В летнее время года (рис.8 Б) при незначительном смещении акрофазы выявлено статистическое снижение мезора и на 30% АА.

1С&1

Рнс.8.

Хронограммы количества лейкоцитов у мышей в норме и при введении РФП в 17 час.: А — осенью; Б — летом.

Введение РФП в 9 часов не вызывало деструктивных перестроек в рнтмостазе Лкг Возникавшие изменения в профиле ритмов носили временный характер и за 8 -12 часов наблюдения, как правило, нивелировались.

Анализ хронограмм, полученных у мышей, после комбинированного введения препаратов показал, что ритмосгаз Лк в осенний и летний сезоны отличался высокой резистентностью к их введению.

Рис.9.

Хронограммы количества лейкоцитов у мышей в норме и при комбинированном введении ДДС и РФП зимой: А — в 9 час.; Б — в 17 час.

В зимнее время года в обеих сериях применение препаратов приводило к инверсии ритма, а в утренней серии ещё и к значительному снижению

АА (рис.9А, Б). В весеннее время года при смещении акрофазы "внутри" фотопериода, на протяжении двадцати часов наблюдения отмечено значительное снижение АА, профиль ритма отличался от контрольного. Здесь следует заметить, что АА за сутки в целом была на уровне контрольной, а к концу эксперимента количество Лк у животных в обеих группах было идентичным.

5. Характеристика околосуточных ритмов содержания лимфоцитов у мышей при действии препаратов.

Анализ хронограмм содержания Лф у мышей, получавших ДДС, показал, что осенью нарушения привычного ритмостаза Лф не происходило. Для остальных сезонов в утренних сериях при незначительном смещении акрофаз (зимой и летом) и повышении АА (летом и весной) за 8-12 часов до завершения наблюдений была характерна идентичность профилей ритмов в опыте и контроле.

Вечернее введение препарата в те же сезоны вызывало более существенные изменения, следствием которых было отсутствие тенденции к восстановлению привычного ритмостаза за время наблюдения. Здесь же в качестве негативного фактора следует отметить снижение АА и ОА колебаний, которое выявлено в весенний и летний периоды (рис. 10А, Б). Кроме того, в вечерней серии во все сезоны года под действием препарата наблюдали тенденцию к снижению мезора.

Менее всего на состояние ритмостаза Лф влияло применение РФП утром в зимнее время года. Вечерний режим введения в этот сезон на фоне небольшого сдвига времени акрофазы вызывал статистически достоверное увеличение содержания Лф, которое к концу эксперимента практически не отличалось от контрольного.

Чкы Часы

Рис.10.

Хронограммы содержания лимфоцитов у мышей в норме и при введении ДДС в 17 час.: А — весной; Б — летом.

Осенью в обеих сериях под воздействием препарата отмечали существенное увеличение АА при незначительном смещении фазы ритма. За 4-8 часов до окончания эксперимента показания в обеих группах не отличались от таковых в контроле (р>0,5). В весенний сезон адаптация к введению РФП была затруднена, о чем свидетельствовали существенные изменения в профиле ритма, которые выражались в значительном смещении фазы при сохранении интенсивности колебаний. Характер ритмики в наблюдаемый период не восстанавливался (рис. 11 А, Б).

Рис.11.

Хронограммы содержания лимфоцитов у мышей в норме и при введении РФП весной: А — в 9 час.; Б — в 17 час.

Значительные изменения были также выявлены в летнее время года при утреннем режиме введения. Они заключались в смене фазы ритма на прямо противоположную, существенном снижении АА, т.е. имело место выраженное состояние десинхроноза. Вечернее применение РФП сопровождалось временным рассогласованием ритма, однако к концу эксперимента исследуемые показатели в обеих группах становились идентичными, что даёт основание предполагать адаптивную направленность- зафиксированных изменений. * • „ ■■.

Результаты, полученные при сочетанном применении препаратов при эбоих режимах введения, показали, что временная организация флюктуа-дий Лф более устойчива к последнему в осенний и зимний сезоны. Основанием для подобного вывода послужило то, что, как правило, к концу экс-неримента содержание Лф в опытной и контрольных группах было идентичным, мезор статистически достоверных изменений не претерпевал, а сривые колебаний оставались высокоамплитудными.

Весной (рис.12 А.Б) и летом влияние Д+Р в обеих сериях было более тачимым и выражалось в статистически достоверном снижении мезора, а > весенний сезон ещё и в уменьшении АА. Профили ритмов соответственно ггличались от контрольных. Восстановления привычного ритмостаза за :утки эксперимента не наблюдалось (кроме лета в вечерней серии).

Чкы Чкы

Рис.12.

Хронограммы содержания лимфоцитов у мышей в норме и при комбинированном введении ДДС и РФП весной: А — в 9 час.; Б — в 17 час.

Таким образом, в ходе проведённых нами исследований, выявлена различная чувствительность ритмостаза изученных нами параметров красной и белой крови к ДДС. РФП и их комбинированному применению. Показано,, что изменения профиля ритма и его параметров коррелируют со временам введения и сезоном года. Характер выявленных изменений может носить как адаптивную направленность, так и свидетельствовать о режиме перенапряжения, способного привести к срыву адаптации.

ВЫВОДЫ

1. У интактных мышей выявлены групповые околосуточные ритмы уровня гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и лимфоцитов, абсолютная и относительная амплитуды и положение акрофазы которых характеризуются сезонными особенностями.

2. Влияние ДДС и РФП на изученные гематологические показатели зависело от времени введения (утро-вечер), сезона года и характера введения (раздельное или одновременное).

3. ДДС при вечернем введении наиболее выраженное влияние оказывает на ритмосгаз уровня гемоглобина и лейкоцитов (зима, весна), лимфоцитов (весна, лето), а при утреннем - эритроцитов (зима, весна).

4. РФП при обоих режимах введения существенно влияет на параметры ритмов гемоглобина и лимфоцитов весной, эритроцитов зимой, при вечернем введении - эритроцитов весной, лейкоцитов осенью и летом.

5. Комбинированное введение ДДС и РФП практически не нарушает характера суточных колебаний уровня гемоглобина и числа лейкоцитов, но оказывает выраженное воздействие при утреннем применении на ритмы числа эритроцитов осенью и зимой, лимфоцитов весной и летом, при вечернем - эритроцитов весной, гемоглобина зимой.

6. Результаты проведённого исследования подтверждают целесообразность одновременного применения ДДС и РФП в клинической практике и могут быть использованы при дальнейшем совершенствовании схем антибактериальной терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лужнова С.А. Хронобиологические аспекты действия диаминоди-^енилсульфона на некоторые показатели крови у мышей, заражённых Mleprae II Актуальные вопросы эпидемиологии и инфекционных болезней: Z6. тр. мол. учёных. - М., 1992. - С. 67-68.

2. Иртуганова O.A., Васильев А.Э., Урляпова Н.Г., Анохина В.В., Ка-1янина О.В., Лужнова С.А., Аюпова А.К. Разработка

товых средств и методов лечения больных лепрой // Экология человека и сраевая патология Приаралья: Тез. докл. Респ. науч.практ. конф. - Нукус, I993.-C.9-11.

3. Urlyapova N., Juscenko A., Luzhnova S. The effect of antileprosy drags in biological rhythms // 14th International Leprosy Congress: Abstracts. -Mando, 1993,- CH74 (Int. J. Lepr. - 1993. - V.61, No4(Suppl.). - P. 17A).

4. Лужнова C.A., Урляпова Н.Г., Ющенко A.A. Влияние диаминоди-[>енилсульфона и рифампицина на ритмостаз ряда гематологических пока-ятелей у мышей // Тез. докл. 2-го Рос. нац. конгресса "Человек и лекарсг-ю". - М., 1995.-С.254-254.

5. Лужнова С.А., Ющенко A.A., Урляпова Н.Г. Влияние диаминоди-|>енил сульфона на биоритмы уровня лимфоцитов у интактных мышей II Тробл. туберкулёза. - 1995. - N 2& - С.51-53.

6. Ющенко A.A., Урляпова Н.Г., Анохина В.В., Лужнова С.А. Хро-юбиологические аспекты патогенеза и лечения лепры // Тез. докл. 7 Рос. гьезда дерматологов и дерматовенерологов. - Казань, 1996. - 4.2 - С.59-60.

7. Ющенко A.A., Лужнова С.А., Урляпова Н.Г. Влияние диаминоди-книлсульфона на параметры околосуточных ритмов гематологических юказателей у мышей // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1997. - N 4. - С.455-459.

8. Лужнова С.А., Ющенко A.A., Урляпова Н.Г. Влияние рифампици-га на циркадианные ритмы гематологических показателей у мышей // "ездоки. итоговой научной конференции АГПУ.- Астрахань.-1997.- С.15-5.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Данные настоящего исследования могут быть рекомендованы к использованию:

.. 1) в научных учреждениях, осуществляющих изучение хронобиологи-ческой организации компонентов крови в норме и при воздействии антибактериальных препаратов;

2) в учебных курсах университетов на кафедрах физиологии человека и животных, медицинских вузах на кафедрах биологии, нормальной и патологической физиологии.