Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эпизоотология и диагностика криптоспоридиоза телят

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Эпизоотология и диагностика криптоспоридиоза телят"

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМЕНИ Я. Р. КОВАЛЕНКО ВСЕРОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

На правах рукописи

ОФФИОНГ Джозеф Майкл

эпизоотология И ДИАГНОСТИКА

КРИПТОСПОРИДИОЗА ТЕЛЯТ

03.00.19— паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва —

1992

Работа выполнена на кафедрах тропической ветеринарии и паразитологии, биохимии и биотехнологии Украинского государственного аграрного университета и в лаборатории паразитологии Нигерийского Национального ветеринарного научно-исследовательского института (г. Вом).

Научный руководитель

— кандидат ветеринарных наук, доцент В. Ф. ГАЛАТ

Официальные оппоненты

— доктор ветеринарных наук, профессор В. Ф. НИКИТИН (ВИГИС)

— доктор ветеринарных наук, профессор Б. А. ТИМОФЕЕВ (ВГНКИ)

Ведущее учреждение

— Московская ветеринарная академия имени К. И. Скрябина

Защита диссертации состоится « 'Ш »¿/(¡(Сб 992 г. в

Л

часов

на заседании специализированного совета Д 020.28.02< при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я- Р. Коваленко по адресу: 109472, г. Москва, Кузьминки ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан « Ю »дрч!/*7! 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

В. В. АМЕЛИНА

•.л __

. I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I. Актуальность проблемы. Применение прогрессивной технологии разведеция скога привело к снижению заболеваемости такими болезнями,, как гельминтозные инвазии, однако большая концентрация поголовья на ограниченных площадях создало предпосылки для развития криптоспоридиоза. Ущерб ог заболевания складывается аз гибели телят, снижения эффективности использования корма, а такие дополнительных затрат на приобретение медикаментозных средств.

В Федерат явной Республике Нигерии кочевой способ выращивания скота создает серьезную потенциальную опастность для распространения криптоспоридиоза на значительной территории страна, пригодной для животноводческой деягельности..

..Криптоспоридии поражают животных разных., видоз, однако,особенно часто встречаются у телят раннего возраста с признаками Диарей, Заболевание, по мнению тогах исследователей, .miser широкое распространение, но часто проходит нераспознанный или под другими диагнозами, Кршгоспоридиоз является антроцозоонозом. Следовательно, необходимость учета наличия.этой инвазии в хозяйстве при проведении дифференциальной диагностика представляется весьма.актуальной, и необходимой.

. 1.2. Цель и'-задачи исследований. Учитывая выше изложенное, Иеред нами была.поставлена задача выяснить еледующие.вопроси:

Изучить особенности эпизоотологии криптоспоридиоза молодняка крупного рогатого скота в ряде штатов Федеративной Республики Нигерия и животноводческих хозяйствах Киевской области. Установить факторы, влияющие на экстенсивности и интенсивности

инвазии. . . .... ........

Определить роль грызунов и кошек в распространении инвазии среди крупного рогатого скота.

Разработать оптимальные метода диагностики кряптоспоридио-за для практического внедрения их в условиях промышленного животноводства.

1.3. Научная новизна. Впервые установлена зараженность молодняка крупного рогатого скота крипт осп оридшши в скотоводческих хозяйствах Киевской области. Разработан метод твердофазного ишуноферментного анализа /ИфА/ для диагностики болезни. Усовершенствованы методики очистки ооцист возбудителя и техника получения экстракта паразита. '

Определена динамика образования криптоспоридиозных антител при внедрений паразита в организм телят.

Выяснена зависимость меаду сроками и титрами образования антител у иммунизированных кроликов. • .

Подтверкдено смещенное течение криптоспоридиоза с другими болезнями, вызываемыми энтеропатогенныш организмами вирусного и бактериального происхождения.

Установлены случаи заболевания крйптоспоридиозом молодых телят порода белый фулани в штатах Плато, Баучи и Кадуна /Нигерии»

1.4. Практическая значимость'. Полученные даннне могут быть использованы в лабораторной практике для диагностики крип« тоспоридиозной инвазии".

Результата исследований имеют важное значение для более эффективной диагностики болезни даже при скрытом ее течении.

Материалы исследований представляют интерес для.студентов факультетов ветеринарной медицины при чтении лекций по 1фипто-споридагозу крупного рогатого скота.

1.5. Апробация работы. Материалы проведенных исследований

доложены и получили положительную оценку на:

- УП Мевдународном конгрессе паразитологов /Парик 1990/,

- Ш Всесоюзном съезде паразитоцэнологов /Киев, 1991/.

■ - Республиканской научно-технической конференции " Ветеринарная медицина /Харьков, 1990/.

- 71 Украинском биохимическом съезде, Киев /1992/.

1.6. Публикации. По результатам диссертации опубликовано 4 работы, в которых изложено основное содержание научных исследований.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений

и списка литературы. Она изложена на .122 страницах машинописного текста и содержит'13 таблиц и 18 рисунков. Список использованной литературы включает 233 наименований, в том числе 202 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и истоды. Работа выполнена на кафедрах тропической ветеринарии и паразитологии, биохимии и биотехнологии Украинского государственного аграрного университета, а такие в лаборатории паразитологии Национального ветеринарного научно-исследовательского' института Нигерии. ....

Изучение" эпизоотологии криптоспоридиоза молодняка крупного рогатого скота проводили в 28 скотоводческих хозяйствах Киевской области и в трех штатах Цигерии. Обследованию подвергали в первую очередь телят,в возрасте от 3 дней до одного месяца в тех хозяйствах, в которых наиболее часто регистрировали диарею.

1-1703«

Всего подвергнуто диагностическим обследованиям 2696 голов крупного рогатого скота, принадлежащих колхозам, совхозам, подсобным хозяйствам Бориспольского, Киево-святошинского, Бородянского, Барышевского, Васильковского, Броварского и Фастовсвэго районов.

В Васильковском районе обследовали на наличие ооцист крип-тоспоридий фекалии от' 21 кошки и 41 мши, в Киево-Святошинском - соответственно 20 и 49, а в Фасговском - 27 кошек 2 75 мышей. .

Влияние, способа содержания новорожденных телят на течение криптоспоридаоза определяли в учебно-опытных хозяйствах Украинского государственного аграрного университета "Великоснитынский" и в агрономической опытной станции" Шгница".

Для проведения лабораторных диагностических исследований образцы фекалий брали непосредственно из прямой кишки телят. Мазки готовили на обезжиренных предметных стеклах, просушивали при комнатной температуре,, фиксировали спирт-эфиром и окрашивали разными способами /Романовскому, Шиш-Нильсену в модификация, негативным способом, с нигрозинов. Для исследования жидких фекалий также использовали флотационный метод.

Интенсивность инвазии определяли путем подсчета количества ооцист кршхтоспоридий в 10 полях зрения микроскопа /400 х/.

С иедью изучения инвазионной способности криптоспоридий при длительном их хранении использовали ооцисты возбудителя, которые в течение двух лет хранились в лабораторных условиях, эксперимент проводили на 40 крысятах, которым вводили суспензии ооцист в дозах от Ю3 до 10® в 0,1 мл физиологического раствора. Животных содержали в четырех пластмассовых клетках с решетчатым полом. Фекалии крысят собирали,- ежедневно, смешивали их с 2 мл

2,5 % раствора б ¡аромата калия до получения гомогенной смеси. Затем мазки высушивали, фиксировали и окрашивали но методу Шиш-Нильсена в модификации.

Опыты по определению восприимчивости крупного рогатого 'скота к крипт осп оридпш проводили в учебно-опытном хозяйства "Великоснигыиский". Для этой цели 20 новорожденных телят изолировали от матерей сразу же после роадэния. Их помещали в специально приготовленное помещение. Предварительно гам была проведена дезинфекция. Животных разделили на четыре группы по пять голов в каждой. Телятам первой опытной группы вводили суспензию из гшогенага очищенных ооцист кряптоспоридий, полученных от больных телят с признака-ля диареи, в дозе 6,5 х 10^ паразитов в 10 мл физиологического раствора. Вторую опытную группу яивот-ных заразили суспензией /по 10 мл.на голову/, содержащей 6,3х х Ю4 ооцист возбудителя выделенных от экспериментально зараженных белых крыс. .

Телят третьей опытной группы содернали совместно с зараженными животными с целью изучения возможности естественного их инвазирования. Еивотные контрольной группы не имели контакта с остальными группами и па подвергались искусственному зараяеняв. В течение 24 дней фекалии животных исследовали на наличие криптоспоридий.

Кровь и сыворотку крови телят подвергали гематологетёсним'и серологическим исследованиям до начала эксперимента и спустя 14,21,28, 42 и 56 дней после него. При эгом определяли количественные и качественные показатели крови /обшиП белок, БАСК, альфа, бета- и гамма-глобулин . , и соотношения альбумина к иммуноглобулину/.

1л-1703к

5

С целью проведения более глубоких исследований на 12-14-й день опита два теленка, у которых отмечали тянелое течение инвазия, были убиты.

Изучение основных закономерностей иммунного ответа организм на С, paivrum проводили ва 12 кроликах породы белый великан. С целью определения динамики антителообразования кроликам вводили очищенных гайогенизированных, озвученных крипгоспоридяй и-не озвученных ооцист возбудителя. - '-

Очистку ооцист г.рид г о споридий проводили путем дифференциального центрифугирования и.в ступенчатом градиенте сахарозы. Содержание белка определяли по методу Loutty . Опытных кроликов иммунизировали трехкратно с интервалом в две недели. На 14,21,28,

и

42 и S5 дни после первичной и последующей иммунизации брали кровь для. определения содержания в ней сывороточных антител и циркулирующих иммунных комплексов. " . Г: ' v

ИденЕификацшо иммунных глобулинов „кроликов на введенные ая-. гигены определяли с помощью электрофореза с применением додешшь-сульфата натрия в полиакрилададном геле /МАТ/.

Антитела к криптоспоридиям выявили методом твердофазного ■ ишуноферментаого анализа /И$А/. при разведении сывороток крови , "кроликов и телят 1:40 в буферном растворе ELlSfv , содерааше-го 0,5 г бычьего сывороточного альбумина и 0,25.мл твиа-20. Антигеном слуашл очищенный белковый дериват.криитоспоридий, разведе ных 1:80 в карбонат-бикарЗонатнсм буфере, содержащий 4,2 мкг -белка, иммобилизированным в полистероловых планшетах при температуре 4°С на 18 часов. ' . .

В постановке реакции ША использовали пероксидазный коггью-гат протав lo^G крупного рогатого скота /производства

ВНШТИШ/, а также ортофешшендиамин / LKB Швейцария / в качестве субстрата реакции. Оптическую плотность /Ш/ измеряли на автоматическом микрокалоркметре "ШОУ" /Англия/ при длине волны 492 Ем.

■ ¡2.2. Результаты исследований

2.2.1. Изучение эпизоотологии крштосшридпоза крупного рогатого скота

В ходе проведанных наг.® исследований было установлено, что криптоспоридяоз имеет широкое распространение в скотоводческих хозяйства Киевской области /табл. I/. Однако степень инвазирован-ности нивотннх в обследуемых хозяйствах была неодинаковой. При микроскопии окрашенных мазков легко обнаруживали оогсисты Са^рЬэзрогИшут, paa.\íaíi\ . Они были красного или фиолетового цвета с прозрачными ободками» хороио заметные на золеном фоне ¡лазка. Ооцисты имели вид округлых иди овальных образований размером 4,8 х 5,3 мкм. Внутри ооцист нередко удавалось обнарукить удлиненные спорозояты, расположенные на периферии круга.

Наиболее часто ооцисты криптоспорядий находили в фекалиях телят в период с декабря по май,- с пиком инвазии в марте-апреле. Нетом и осенью наблюдали незначительный.спад инвазия.

При анализе эпизоотологической елтуации установлено, что в период с февраля по апрель, наиболее поракэнн инвазией были яивотные Бориспольского района.,Из 186 обследованных телят у 37 /52,2$/ были обнаружены ооцисты криптоспоридяй. В колхоза "Большевик" Барышевского района одноклеточные организмы выявлены у 95$ телят. В отдельных случаях интенсивность инвазии достигала 48 ооцист в поле зрения микроскопа. Возбудителей такле oá-

2-1703К

?

Таблица I

Зараженность животных криптоспоридаями в хозяйствах Киевской области

Название ; Число ¡Крупный рогатый скот : _Кошки ■_;_Мыши •_■

района :^°я^Д°^аН';количеотво:, заражено ^количество; - заражено ¡количество: заражено -

: обследован:„опи. . . .обследован: , . * .обследован:КОЛИЧ0СГ_. а

îKax • «n : ' 'ных :

БорисдольскиЙ 4 186 97 52,2 - - - - -

Броварской I 155 75 50 »3 - _ -

Бородянский I 52 26 50 - - - - -

Барышэвский 2 216 65 30,1 _ - - ' - -

00 ВасильковокиЯ 14 548 141 25,7 21 8 38,1 41 19 4б;з

Киево-СвятошинскиЙ 4 163 47 28,8 20 5 25 * 49 15 30.6

Фастовскяй 2 1Э76 429 33,6 = 27 12 44,4 75 48 64,0

Всего 28 2696 977 36,2 69 25 36,2 165 82 49,7

нарушил в смывах из поилок, ведер я сосок. Ооцисгн не выявлены в мазках и отпечатках из слизистой оболочки влагалища растелившихся и стельных коров, что исключает заражение геляг в период родов.

Наряжаются преимушесгвенно телята в возрасте 7-15 днеЗ» которых содержали совместно с матерями, в проходах помещений или в групповых боксах. Гораздо реже возбудителей обнаруживали у телят, размещенных в индивидуальных клетках.

В большинстве хозяйств на 2-3 дань заболевания у 5-15/5 телят возникала диарея, которая часто сопровождалась депрессией. Температура тела, как правило,была в пределах физиологической нормы, аппетит сохранен. У больных животных нередко отмечали пареза тазовых конечностей. Полиартриты характеризовались увеличением и отечность» нескольких суставов, скованной походкой и хроматой. В последующие две недели количество яивотаых с расстройствами органов пищеварения увеличивалось до 50 к более процентов. К 2530 дню' вдело больных телят снижалось. Несмотря на это, у выздоровевшего молодняка ооцисты криптоспоридяй продолжали выделяться.

При исследовании фекалий по методу з^о^ел единичные ооцисгн паразита обнаружены у четырех телят 3-6 месячного возраста, которые ранее переболели диареей.

Анализ результатов исследований в трех штатах Федеративной Республики Нигерия показал наличие крштоспоридноза телят. Болезнь регистрируется круглый год. Сезоны года существенно не влияют на' течение инвазии. Наблюдали лишь незначительное снижение экстенсивности болезни в сухой сезон года /24 Л%/ по сравнению с показателями дождливого сезона /28,2$/ /табл. 2/. Во всех штатах интенсивность инвазии скота была незначительной - в поле зрения микроскопа обнаруживали ляиь единичные ооцисты криптоспоридий.

2*-1703* О

В середине доедяивого сезона поранение телят ооцисташ увеличилось до 32.4$ в штате Баучи, 21,9$ - в Кадуне и 26,4 % - в Плато, Б штаге Плато процент экстенсивности инвазии почти не изменился. Повидалась лишь интенсивность - до 25 оодист возбудителей в поле зрения микроскопа. ' •

Большую опастность представляет тот факт, что эти штата находиться ъ центре территории, пригодной для животноводства Нигерии, и через нее проходят енегодно кочевники "Фудали"-со своими кивогнши в поисках новых пастбищ.

Таблица 2

Зараженность телят криптосаоридиями в некоторых штатах северной Нигерии '

Название штага

Сухой сезон /декабрь 1990 г./

: Дождливый свзон /июль'1991" г./

:количес: :гво об-:заражено :еледо- : :ванных

% - :количес: заране-:гво об-:заражения .:следо- : но ¡ванных-

заражения

:телят : : телят :

Кадуна 67 ■ 12 17,9 82 18 21,9

Плато 56 19 28,6 ' 12Э 34 26,4

Баучи 98 23 23,5 171 . 57 ' 32,4

Всего 221 54 387 109

- Б % 24,4 28,2

2.2.2. Изучение инвазионной способности крилтоспорвди! при длительном их хранении

При экспериментальном заражения красят ооцистами криптоспо-

. . У

ридии полученных от больных телят и впоследствии храниишхея в

лаборатория на протяжении 2-х лет/, к концу четвертого дня в фекалиях живогяих первой группы удалось установить единичные паразиты. Затем последовало резкое увеличение количества ооцнсг в исследуемом материале. Уже на седьмой день интенсивность инвазии достигала 60 простейших в поле зрения микроскопа. В течение ■ последутшх двух дней/отмечен относительный спад количества выделяемых возбудителей. Второй более низкий подъем интенсивности выделения ооцист продолжался два дня /соответственно на Ю и II сутки/. В последующие дни.в фекалиях отмечены лишь единичные возбудители. Начиная с 20 дня после заражения крысят ооцист кргптосяоридий не находили.

Сходную картину развития инвазий наблюдали и у животных второй группы. Первые ооцисты в фекалиях крысят появились на 6 . день с начала опыта. За этим последовал первыГз пик инвазии /до 50 возбудителей в поле зрения микроскопа/ на 8-9-й дни и второй пик - на 13 день.

Динамика выделения ооцист крысятами третьей группы существенно .не отличалась от предыдущих. Тот факт, что они заражались криптоспоридияыи, показывает на то, что дане при длительном хранении в высохших фекалиях ооцисты не теряют вирулентных свойств.

На протяжении всего опыта в фекалиях контрольных животных ооцисты возбудителя отсутствовали, не наблюдали сникения упитан- ■ носги. В то же время у опытных крысят к концу исследования отмечены истощение и отставание в росте.

2,2.3. Изучение патогенных свойств криятосиоридиЗ .при экспериментальном заражении новорожденных телят

Анализ результатов изучения патогенных свойств ооцист крип-

тоспоридий при экспериментальном заражении новорожденных телят показал, что вое они в одинаковой степени чувствительны к возбудителям, независимо от источника инвазии. Групповая динамика, выделения ооцист паразита приведена в табл. 3, из которой видно, что болезнь быстро распространяется от больных к здоровым телятам при совместном их содержании.

Гематологические исследования выворотки крови опытных телят в период клинического проявления болезни подтвердили достоверное изменение ее показателей по сравнении с исходными данными. У кивогных цервой и второй опытных групп среднее содержание общего белка уменьшалось соответственно на 3,2 /Рл0,01/ и 1,9$ /Р< 0,01/. В то хе время в третьей группе телят этот показатель Увеличился на 6,4$ /Р < 0,01/.

Изменение белковых фракций сыворотки крови у этих животных характеризовались уменьшением альбуминов и альфа-глобулинов на i,3,5 и 17V/Р-с0,01/ и увеличением бета-глобулинов на 7,8$. Альбумин-глобулиновое соотношение у телят первой и второй трупп уменьшилось на 17,2 и 13,4$, ■ .

На 21 день с момента заражения в сыворотке крови тавотных опытных групп по сравнению с контрольными содержалось достоверно меныде общего белка соответственно на 6,5, 4,5 и 3,8$; альбуминов - на 13,5; 8,2 и 8$; альфа-глобулинов - на 2,5, 3,2 и 2,8/5. Наоборот бета-, гамиа-глобуяиков было больше на 18,4,." 18 и 16,8$ и — 11,4, 7,7 и II,4/ü» Альйумин-глобулиновое соотношение у гшвотных опытных групп было нике, чем в контроле.

Спустя 28 и 42 дня после зараяения;отмечено незначительное увеличение белковых фракций сыворотки крови у всех животных.

Показатели БАСК в начале опыта находились в пределах физиологической нормы и в течение исследования существенных измене-нений не наблюдали.

Таблица 3

Групповая динамика выделения ооцист криптоспоридий при экспериментальном заражении телят

"Группа :Количест-;_ Дни _

¿ивотннх^во телот ^ I 12_:_3_:^_5_:_6_:_7_;_8_ 1 9 £ 13_:£4_ ¿15 ¿16 _:17_:_18 ¿19 ¿20

Опытная 5 - - - - 1.4 3.6 12 12.8 12,8 33,8 14 3.3 1,3 " I "0,8 0,5 - - -

/I/ + 0.3+0,743,7+3,4 + 4,4+ 7,3+5,6 +0,3 +0,02+0,3 +0,3

- _ „ _ _ _ -

Опытная 5 - _ _ - 0,6 1.4 9,2 11,2 35,4 46 10,8 15,2 4.6 2.0 1.2 0,6 0,6 0,2 0,2 -

:/а/ чо,4+о,з+о,5+ 1,4 +2,8+4,3+3,0 +з,4 +1,4+0,5 +0,2 +о,з+о,з +0,2+0,2

Опытная 5 - - - 2,0 8,0 17,2 17,8 26.8 11,8 3,8 1,4 0,8 0.4 0.4 -

/Ш/ +0,8+2,6+1,7 + 2,3+ 2,5+ 2,6+1,5+0.5+0.4 +0.2+0,2

сэ ■ -

Вонтрольная 5 - - - --- - _ _ _

Ду/

При патологоанатомическом вскрытии больных телят характерные изменения обнаруживали в сычуге в тонком кишечнике. Сычуг был заполнен сгустками и кадкой частью молока, слизистая оболочка его бледно-розового цвета, а в фундаяьной части вследствие геперемии-красноватая, • '

Вследствие очаговой гиперемии тощая кишка со стороны серозной оболочки выглядела пятнистой. Местам она спазмирована без кишечного содераимого. Слизистая оболочка ее покрыта слизью, гшгерешрована.

■ Серозная оболочка подвздошной кишки светло-сиреневого цвета, вздутая газами и слегка истончена. "Содержимое кишки водянистое, серовато-келтого цвета. Слизистая оболочка отечная, гиперемирова-на с полосчатыми кровоизлияниями.

Проведенными' гистологическими исследованиями установлено, что в тощей кишке криптоспоридяя локализуйся в вида очагов на верхушках'-и боковых поверхностях ворсинок и микроворсинон эпителиального слоя. Изредка их обнаруживали в глубине крипт. Количество ооцист паразита в этой кишке сравнительно невелико. Больше возбудителей выявлено в подвздошной кишке, особенно в ее средней и концевой части. В местах скопления простейших организмов щллиндрические эпителиальные клетки были превращены в кубический эпителий с более интенсивно окрашенной цитоплазмой. Мембрана онтероцигов со стороны микроворсинок выглядит утолщенной я неровной. Границы пораженных клеток вырахсены нечетко.

Пораженные ворсинки утолщены, инфильтрировали клетками. Выражен отек ретикулярной соединительной ткани ворсинок и собственного слоя слизистом оболочки.

Криптоспоридия выявлены и в криптах ободочной кишки. Пораженные крипты расширены, эпителиальные клетки - утолщены. В полости крипт много десквашрованных эпителиальных клеток и криптоспоридий. В местах повреждения и десквамацин эпителиальных клеток единичные щнштоспорядии обнаруживаются и в ретикулярной соединительной ткани. ■

2.2.4. Определение динамики иммуногенеза кроликов при введении антигена крттоспоридий

Р-езультаты исследования гипериммуншх сывороток крови кроликов показали, что высокий титр плели кролики трехкратно иммунизированные гомогенизированными оощсгаш кршгоспорядпЗ. 7т на 14 день после введения антигена в сыворотке крови этих животных обнаружены следы антител к крипгоспорядиям. К 42 дню титр антител достигал максимальной величина. Он сохранялся на этом уровне до конца опыта. У кроликов,'иммунизированных кор-лускулярными антигенами ириптоспорядай в дозе 1,1 х Ю', первую ответную реакцию при иммуноферментном анализе сыворотки крови отвечали, на.-21 день. Затем последовало постепенное нарастание титра антител. В токе время в сыворотке крови кроликов, получивших более низкие дозы ооцист криптоспорядий /3,2 х Ю4/. процесс антителообразования задергивался и лишь ка 28 день наблюдали полокителвную реакцию.

В конце периода иммунизации отмечено достоверное увеличение титра антител во всех.группах кивотных. Оптические плотности у кроликов, которым вводили гомогенизированных злтпгон составлял 1,509. У животных иммунизированных ооиж^аглп криптоепорлдп:! в высоких и низшие дозах эти показатели соответствуют 1,219 и

о^эаГ.

2.2.5, Динамика образования антител, против кршзтоепоридяЯ у телят

При исследований сыворотки крови опытных телят методом 7Ш в качестве полокятельных и отрицательных контролей были использованы сыворотки роликов.

У кивотных первой и второй группы, зараженных ооцистамя крштоспоридий от клинически больных телят, набллдали статистически достоверное увеличение уровня антител к кршгоспоридиягл через три недели после начала эксперимента /табл. 4/. Спустя шесть недель титр антител увеличился до 1,54 и почти не изменялся на прогяненяи двух недель. Достоверное повышение уровня антител у телят второй опытной груши наблюдали также через три недели после заражения. Однако у них уЕе на 14 день отмечали следы антител к криптоспорядаям, хотя эти показатели были сомнительными. Максимальное ;ке повышение титра антител /1,81/ зарегистрировали на шестой неделе. Затем последовало уменьшение титра .• антител до ОП-1,58 на 8 недели. У животных третьей группы, которые были заранены криптоспоридаям естественным путем, достоверное повышение уровня антител наблюдали на четвертой недели. Однако у них титр антител продолжал рости до конца опыта. Сравнительная оценка величины антител во всем группам показала, что титр антител у кивотных третьей группы были нике, чем у телят первой и второй групп. Несмотря на это у них отмечали тенденцию к продолжительному и стойкому иммунитету.

Таблица 4

Средние значения оптической плотности показателей Шк у телят при экспериментальном заражении их ооцистами криптоспоридий ■ -

Группа животных •.Способ :заражения До заражения • После заракения титр антител в

> * ♦ :через :2 неде :ли ••через -:3 неде-•. ли через 4 недели :через ■ •Л не; зеяь !через :8 на/: дель ■ • '-

Опытная Д/ от телят 0,24+0,2 .0,38 +0,3 .0,80:.. ¿0,4 1,54 +0,3 1,57 ¿0,3 Л,СО . ¿0,3 Р 0,01

Опытная. /Я/ от крысят О.Збчр.З 0,64. +0,4 0,99 . +0,3 1,69 ¿0,5 "1,81 ¿0,2 "1,23 ¿0,5 Р 0,01

Опытная /131/ Естественное. зара-кение 0,28+0,3 0,36 ¿р,з- • 0,69 ¿3,4 1*,27 ¿0,3 1,14 ¿0,3 1,03 ±0,2 Р 0,01

Контрольная /1У/ •Физиологический раствор 0,28+0,2 0,31 ¿0,2 0,26 ¿0,1 0,35 ¿0,2 0,39 ¿0,3 0,34 ¿02

Р - Достоверное значение титра антител по сравнению с контролем.

выводы.

1. Кряпгоспорвдиоз-прогозойная болезнь многих видов нивот-ных и человека, имеющая широкое распространение на земном шаре. Возбудителями болезни у млекопитающих' являются одноклеточные организмы СгурЬсзрог"\4ия1 раг^типа ал С-таилд& Особенно большой экономический ущерб причиняет криптоспоридаоз молодняка крупного рогатого скота.

2. С целью определения экстенсивности и интенсивности инвазии было подвергнуто диагностическим обследованиям на крипгоспо-ридиоз 2696 голов крупного рогатого скота разных возрастных групп, лринадлекащих 28 хозяйствам Киевской области. В отдельных районах экстенсивность инвазии достигала 52,2$ интенсивность -до 48 ооцист возбудителя.в поле зрента микроскопа /400 х /. Максимальное заражение криптоспоридаяш наблюдали среда молодняка крупного рогатого скота в возрасте от 7 до 15 дней. У животных, старше шестимесячного"возраста одноклеточные организмы не обнаружена.

3. В Федеративной Республика-Нигерии болезнь, зарегистрировали в северных провинциях страны /Плато, Баучи, Кадуна/, где. экстенсивность заракеии составляла 24,4% при единичной.интенсивности инвазии. В июле месяце /середина дождливого сезона / '28,2/5 обследованного молодняка крураого рогатого скота породы белый фулани оказались зараиенашли криптоспоридиямя. В поле зрения микроскопа отмечали до 25 ооцист.

4. На степень заранения животных криптоспоридаяш влияют условия их содержания, мо;. .дняк скота, содержащийся в индивиду-, алышх клетках, гленьшз болеют по сравнению с животными, размояен-ншя в групповых боксах.

5. Резервуаром инвазия могут слунигь грызуны /мыши/ и кошки. При обследовании 165 мышей щтатоспоридш обнаружил у 82 голов /49,7%/, коиек - 25 /33,2$/.

6. ОйцистЫ крштоспоридий' весьма устойчивы во внешней среде. По нашим данным они могут сохранять яизнеспособность до 2 лет и более.

7. Основным клиническим признаком крштоспоридиоза телят является диарея. Однако интенсивность инвазии не всегда соответствует тяжести клинического течения болезни. Нередко инвазия протекает бессимптомно.

8. Криптоспоридиоз более тяжело протекает при паратизирова-нии в организме больных животных патогенных . микроорганизмов /рогавирусы, коронавирусы и кишечная палочка/.

3. Основные патологоанатомические и гистологические изменения наблюдали в кишечнике больных животных, где локализуются простейшие. На слизистой .оболочке кишечника отмечены отеки, гиперемия и полосчатые кровоизлияния. Криптоспоридяи локализовались на верхушках, и боковых поверхностях.ворсинок, в микроворсинках эпителиального слоя тощей, подвздошной и в криптах слепой кишки. ...

10. Наиболее эффективным, методом диагностики болезни являются лабораторные исследования. Криптоспоридии обнарукивали в мазках, изготовленных из содержимого кишечника и окрашенных по Цшш -Нильсену. Неплохие результаты получены при окрашивании мазков по Романовскому.. Флотационный метод бкелЬКег позволил концентрировать ооцксты возбудителей.

11. С помощью разработанной нами диагностической кя.туно-ферментной тест-систем /ИФАДбыло обнаружено присутствие кргл-тоспоридиозных антител в сыворотке экспериментально зараженных телят»

12. Б саворотке крови подопытных телят максимальные титре антител отмечали против хфиптоспоридаиь полученных от крыс. Это свидетельствует об усилении патогенных свойств возбудителя при пасса;;ароваш1и через организм крыс.

13. Отм-зчена прямая коррелятивная зависимость меаду введенной дозой крзлтоспоридиозного антигена и титрами образованных антител в сыворотке ьрови трехкратно игялунизированных кроликов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДШЗЩЯ

Б случае возникновения массово!) дяареи у молодняка крупного рогатого скота в возрасте от 3 дней до 1,5 месяца необходимо проводить паразитологические обследования аявотных с целью исключения кряпгоспорядиоза.^

Проведенные исследования позволяют нагл рекомендовать метод иммунойерцемного анализа /ША/. для диагностики крипгоспоридп-оза теллт при наличия соответствующих наборов сывороток.

■ При подтверждения диагноза следует разработать и осуществлять кошлекс ветерянарно-санитарных мероприятий, направленных на уменьиеняе еозмоености зарагения телят криптоспоридияш.

Регулярно убирать навоз и очищать помещения, изолировать больных телят от здоровых киеотных. Принять меры к уничтожению грызунов, не допускать на фермы кошек, которые являются резервуарами инвазии. ' "