Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Электрофоретипы ротавирусов, изолированных от больных детей

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Электрофоретипы ротавирусов, изолированных от больных детей"

_ 7 Ш01\ »393

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней

На правах рукописи

РАХИМА АЛХШШЗЫ

ЭЖПРОФОШШШ РОТАВИРУСОВ, И30ЛИР0ЕШ1ЫХ ОТ БОЛЬНЬОС ДЕТЗй

03.00.06 - вирусология

^^ и ^ '^Ч?

* "Ч <, . ^

I Ч >> <у*

\ ч ¿Ь/.*'

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ушной степени кандидата медицинских наук

Алыаты, 1993

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан.

НАУЧШЙ РУКСВДЩШЬ; доктор медицинских наук

У-АЛШНОМ

ОЖЦШШЕ ШПШЕШН: доктор медицинских наук, профессор

СЛ.ИШН0В доктор биологических наук.профессор МД.САЯГОВ

ЙЗДУЩВК УЧНЗВДШИЕ: Кафедра микробиологии с иммунологией

и вирусологией КГШ

Защита состоится * Л? * Л1993 г. в г{-У часов на заседании специализированного совета Д.079.05.01 ври НИИ вшздеуиологин, микробиологии и инфекционных болез-неЯ ИЗ Республики Казахстан (480002, г.Алыаты, ул. М.Ыака-таева, 34).

С дассертацвей можно ознахоютыш в библиотеке

яйбюк.

Автореферат разослан ш 04 1993 г.

Ученый секретарь ('|р'чр*м|"|"ц'""и"'п совета кацдадят шдацшац наук

ВЛ^рш

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В этиологии острых кишечных инфекций (СКИ) значительный вес имеют ротавкрусы. Ротавируснка гастроэнтериты составляют около 5055 ОНИ и встречаются повсеместно ( М. Steiaho{t , 1580, С.ГЛроздов и др., 1382, V. Ша&с\е.~ иез et э1. > 1984, А.Г.Букринская и др., 1Ш6, СДЛрканов и др., 1986, У.А.Абенова и др.» 1988).

Ротавирусная инфетгщя с учетом широкого географического распространения, высокого уровня заболеваемости и смертности детей раннего возраста вклпчена в программу ВОЗ в числе приоритетные проблем. Перспектива решения данной проблемы диктует необходимость совершенствования: методов выявления вирусспещ-фических структур в клиническом материале. Применение обычных вирусологических методов затруднено некоторыми особенностями возбудителя - практически невсзыакностьо культивирования рота* вирусов и их высокой природной изменчивостьо. 3 настоящее время все существующие коммерческие тест-системы, основанные на иммунологических реакциях* способны обнаружить липь ротавиру-сы группы А из 5 известных.

В связи с ветеиэлокеннш, нале внимание привлекли методы» не требущие предварительного кульпшгравашгя вирускне изоля-тов и представлящие возможность проследить за циркулвс^й штаммов ротавирусов э природе.

Одним иэ таких перспективные методов инд икации ротавиру-сов является электрофорез нггрганней РЕС в полиакршвгггЕдоа голе.

В виду уникальности структуры тенена ротавируса СП фрзг*-ментов, распределенные в 4 группы!„ дяннк!? метод цзлессо<Гргзна использовать как в качестве абйоййко" спечк^кянога даагкоспг-

чзского теста, так и для идентификации вновь выделенньх штампов. Электрофоретип, являясь постоянные признаком штамма, позволяет характеризовать этиологический агент и пути его распространения, такие вшвлять параротавирусы, не имеющие антиген -ного родства со штатами, на основе которых сконструированы известные диагностические препараты.

Помимо этого, элекгрофорэтипирование вирионной РНЧ позволяет определить новые варианты ротавирусов, приобретшие в результате генетических перестроек наиболее вирулентные свойства.

Метод электрофореза геномной РНК для изучения ыолекуляр -ной эпидемиологии ротавирусной инфекции и совершенствований идентификации ротавирусов нашел широкое применение в отдельных регионах европейской части бившего СССР (А.Г.Букринская и др., 1936, К.А.Новикова и А..С.Анцупова, 1967, В.Й.Хауетов и др., 1989).

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось совершенствование методов лабораторной диагностики рота-вкрусноЯ инфекции путем определения злекярофоретипов вирионной РНК.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определение электрофоретипов геномной РНК ротавирусов, вгделекнкх ст больных детей.

2. Провести анализ электрофоретипов вновь выделенных итам-\'ов ротавирусов, циркулирующих на территории Казахстана и уста-ноеи^ь дошщкрущяе шгаумы.

3. Определить диагностическую рначилость нового метода и кспсльзовг.ть его в качество критерия достоверности различных

тестов диагностики ротавирусной инфекции.

4. Изучить возможные ассоциации между злектрсфорзтипсы ви-рионной РШ и особенностями клинического течения ротавируснкх гастроэнтеритов.

Научная новизна.

1. В Республике Казахстан впервые определены электрофора-типы вирионной РНК ротавирусов» выделенных от больные детей. Совершенствований нового способа - обработка геля нитрате?» серебра (рац.предложение I? 419) позволяет выявить субвирусвде структуры в клиническом материале в очень ыалых концентрациях - в нанограммах.

2. Впервые была установлена неоднородность пепуяязш выделенных от больнга детей ттау?/ов ротавирусов: идентифицироэа-но 19 вариантов электрофоретяпов. В регионах республики доки-нирует короткий форетил ротавирусов.

3„ Показана абсолютная специфичность и высокая чувствительность нового метода определения электроферетипоз геномной РШ ротавирусов.

.4. Установлена корреляция между тяхестьо ротавирусно?. инфекции и электрофоретипом возбудителя. Ротавкрусы с коротка форетипоы вызывает более тяжелую клиническую картину заболевания у детей.

Научно-практическая пеннссть. Результаты проведенных; исследований могут быть использованы как в научно-исследовательской, так и в диагностической практике, С этсЯ целъв проведен-;: семинарн для вирусологов (г.Алыа-Ата, 1969, 1590), издана методические рекомендации "Ускореш-зге метода лабораторий д;:аг-ностики и клинические особенности течения рсгззирусасго роэнтеркта" (г.Алиа-Атз, 1359), кфзрмзгзтакньД листс-* "Зксп -

ресо-ыетоды выявления ротавирусного антигена" (г.Алма-Ата, ■ 2969) и информационное письмо "Анализ электрофоретипов геномной РНК ротавирусов человека" (г. Алма-Ата, 1991), разработаны 2 рационализаторских предложения за № 419 "Усовершенствование метода выявления геномной РЖ ротавируса в полиакриламидном геле" и за № 423 "Способ применения коммерческого препарата антивирусных иммуноглобулинов для экспресс-диагностики рота -вирусной инфекции с использованием стафилококка Кован-1" »принятые БРИЗ НИИЭМИБ.

Основные положения, вкносимыа на защиту.

1. Использование усовершенствованного метода электрофореза вирионной РНК ротавирусов позволяет обнаружить субвирусные структуры в пробах в очень малых концентрациях - нанограымах.

2. Установленная высокая вариабельность геномной РНК ротавирусов позволяет определить домкнирущке форетшы и краевые особенности ротавирусныг гастроэнтеритов. На территории Казахстана преобладает короткий фораткп, в то время как в Тадаикис-тане и Монголии, в основном, выявлен длинный форетип ротавирусов. л

3. Метод определения злектрофоретипов макет быть исполь -зован для оценки достоверности чувствительности и специфичности других лабораторных тестов диагностики ротавирусной инфек -ции.

4. Характер подвижности фрагментов геномной РНК изолятов позволяет определить клиническую картину течения ротавирусной инфекции: короткие форетипы вирионной РНК вызывав* более тяжелую форму ротавирусньос гастроэнтеритов у детей.

Личный вклад. Все основные разделы представленной работы заполнены автором самостоятельно, слектронномикроскотачгские

исследования и анализ истории болезни совместно с сотрудниками лаборатории кишечных вирусов НИИ ВЫЙБ и клиницистами 1-й инфекционной детской больницы г.Алматы (с.н.с. Р.Ф.Галимов и д.м.н., проф. А.БЛанатбаева).

. Апробация работы. Основные положения диссертации долсие-' ны на ХУЛ съезде Всесоюзного общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (г.Алма-Ата, 1989 г.), республиканских семинарах для вирусологов (г.Алма-Ата, 1939, 1990 гг.), У объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов и инфекционистов Казахстана (г.Алыа-Ата, 1991 г.), объединенном заседании секции общества вирусологов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов (г.Алма-Ата, 1992 г.).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано II научных работ, в том числе методические рекомендации - I, информационных листка - 2 и 2 рацпредложения.

Объем и структура работы. Диссертация излажена ка Ц5" страницах машинописного текста.и состоит из введения, обзора данных литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, основных выводов и указателя литературы, включающего 187 источников. Материалы диссертации иллюстрированы 10 таблица -ыи, 13 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

В работе использованы ротавирусн, выделенные из суспензий фекалий больных СКЙ детей с помощью дифференциального ультрацентрифугирования, также референтный штамм ротавируса обезьян 6А-Н , полученный из музэя культур НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН.

Вирусы йуЛь*ивйровали ка перевиваемых культурах клеток

почек обезьян (4647, !,1А-104, Ж-2, уего ). Счистку, концентрирование вируса и депротеинизацию вирусных: частиц проводили по общепринятой методике (С.Г.Дроздов• и др., 1982, А.Г. Букринская и др., 1939).

электрофорез депротеинизированкой ДЕунитчатой РНК осуществляли на полосках 7,55& полиакриламидного геля с помощью буферной системы Ъаегаи11 (1970).

Для анализа фрагментов вирионной РНЧ в геле мы использовали нитрат серебра.

Кммуноферментный анализ ОКА.) с использованием тест-сис-теы, разработанных сотрудниками Института вирусологии им.Д.И. Ивановского РАИН и Института экспериментальной ветеринарии ЗА.СХКИЛ, проводили по схеме, предложенной А.Г.Букринской и др. (1987, 1968).

Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) ставили с помочью эритроцитарнсго ротавирусного иммуноглобулинового диаг-ностикуыа, разработанного и полученного в лаборатории килеч -ньх вирусов НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней ¡.13 РК (НЛ.Таыекдарова и др., 1937).

Обнаружение ротавирусных частиц с помощью электронной микроскопии (£Ю выполнили по методике, описанной В.И.Хаусто-вкм и др. (1934).

Статистическая обработка результатов проведена по общеизвестной методике (Б.С,Бессмертный, М.Н.Ткачева, 1961). Достоверность результатов определялась путем вычисления средней оакбки и коэффициента достоверности Стьюдента.

Сбдщй объем исследований. Обследовано 3695 больных и 60 здоровых детей.

Всего выполнено 7553 анализов, из них в электрофорезе ви-рисккой РНК - 1041, КА-3280, РПГА-3120, ЗМ-72, РСК-45.

Результаты исследований

Изучение геномной РНК ротавирусов, выделенных от'больных детей: характеристика электрофоре-типов, определение доминирупдего форетипа

Для индикации и идентификации ротавирусов мы использовали метод электрофореза вирионной РНК в полиакрилаыидном геле. 3 и-ачестве «гасителя геля нами использован нитрат серебра,позволяющий определить ротазирус в исследуемом материале в очень незначительных «онпентрашях (нанограммах). Исследовано 950 проб больных ОНИ детей Казахстана. 3 437 образцах выявлена ви-русспепифическая РНК, что составило 46,0+1,655. При электрофо-ретическом анализе вновь выделенных штаммов ротавирусов нами показано, что они содержат II фрагментов двунитчатой РНК, которые в зависимости от молекулярной массы разделены на четыре группы, что соответствует их принадлежности к роду ногг.у1тз (рис. I). Как видно из рисунка, I группа состоит из 4-х фрагментов (1,2,3,4), П, 1У группы из 2-х фрагментов (5,6 и 10, II соответственно), а Ш группа включает 3 фрагмента (7,3,9). Такое распределение фрагментов РНК позволяет определить раз -личия в их расположении относительно друг друга в каждой группе. Следует отметить, что по относительной миграции 10-го и П-го фрагментов электрофоретигщ ротавирусов бывавт длиннь-е к короткие (А.Г.Букрпнская и др., 1936, т. хит^игаада еЪ а1Д962).

На территории Республики Казахстан за период с 1963 по 1992 гг. наблюдалась существенная геномная вариабельность лэо— лятов ротавирусов. При проведении сравнительного анализа выделенных электрофоретипов вирионной РНК, согласно прелложенив' м. Ьоигепсо (1931), значительная гетерогенность устаксэ-лена у ротавирусов с коротким электрофоре тип см - 10 вариантов. Среди них наиболее часто встречался один зариакт, который ха-

А Б . В Г Д

Рис. 1..ЭЖКТР0§0РЕГРАЫМА ФРАГМЕНТОВ РНК ' РОТАЕЯРУСОВ

дорожки А,Б,Г,Д - РНК рогавируса, выделенная от больных детей,

дорожка В - РНК ротавируса обезьян 5А_11

арабской цифрой указаны фрагменты дн РНК, римской цифрой - группы фрагментов.

растеризуется равнозначной подвижностью 2-го и 3-го, также 7-го и 0-го фрагментов. Внутри длинного злектрофоретипа идентифицировано б вариантов. Выявлены промежуточные варианты фо-ретипов ротавирусов, т.е. по подвижности фрагментов 1У группы занимали промежуточное положение между коротким и длинным боретипами. Кроме того, нами обнаружен новый аномальный злек-тройоретип, который мьт назвали широким, учитывая широкий разбег групп фрагментов РЬ'К относительно друг друга. Причем, в последних трех группах отмечена коыиграция фрагментов.

На основании полученных данных составлена оригинальная классификация электрофоретипов ротавирусов, представленная в таблице I, где 232 штамма (53,1+2,4%) с коротким, 152 (34,3+ 2,3$) - с длинним электрофоретипом. Между тем, в 24 случаях (5,5+1,1%) выявлена смесь короткого и длинного форетипов. В 2 случаях обнаружен промежуточный форетип, что составило 0,5+ 0,3%, а в I случае (0,2+0,2%)-широкий форетип. В 26 случаях (6,0+1,1%) характер-электрофоретипа ротавирусов не определен из-за нечеткости электрофореграмм.

В динамике за весь рассматриваемый период наблюдалась преимущественная циркуляция ротавирусов с коротким типом миграции фрагментов вирионной РНК. Так, если в 1988 году ротави-русы с коротким форетипом были выявлены в 48,5% случаев, то с длинным форетипом - в 27,0% случаев, в 1989 году в 53,4% и в 37,9% случаев соответственно. В 1990 году также доминировал короткий форетип: из 144 образцов вирусспещфической РНК 82 (56,9%) относились к короткому форётипу, остальные 52 пробы (36,1%) были с длинным электрофоретипом. Наконец, в 1991 году соотношение короткого и длинного форетипов ротавирусов было соответственно 48 ¿4% и 31;3%.

Таблица I

Характеристика электрофоретипов РНК ротавирусоь, изолированных на территории Казахстана

" ...... «ор^тш; вирусспещ^ческой'РНК*"........

: ~ Т----~ Т ------ Т------?------

/в вбе.мвипуснойРш. короткий , длинный , ^„пг,™ ,промежуток- , широкий , неопределен-

ЧИС.И /в аас.чие.и фореткп 1 форе тип 1 ! ный форатип 1 форетип 1 ннй форетип

. 1 —___1 ____1-----1 фаредиаов ______1_____'____;__

960 437 232 168 24 2 I 26 м

■ , го

100 46,0+1,6 63,1+2,4 34,8+2,3 6,6+1,1 0,5+0,3 0,2+0,2 6,0+1,0

Необходимо отметить, что первый вариант короткого форе-типа выделялся регулярно, по-видимому, он обладал большим эпидемическим потенциалом.

Для сравнения нами определены электрофоретипы ротавиру-сов, изолированных от больных детей в г.Душанбе и Монголии.

При исследовании методом электрофоретипирования 70 фекальных проб, больных ОКИ детей, представленных из г „Душанбе доктором Ф.Г.Асадовой, в 30,0±5,5^ случаев обнаружена ротави-русная РНК, преимущественно с длинным форетипом.

Анализ 21 пробы, привезенной из Монголии доктором Сурен-ханд, показал та*к,е доминирование в этой стране длинного фо-ретипа выделенных штаммов ротавирусов, над коротким.

Суммируя вшеизлсженное, следует отметить, что в г Душанбе (Таджикистан) и Монголии, как во многих странах мира, в соответствии с данными литературы, преобладает циркуляция ротавирусов с длинным электрофоретипом. В то же время, на территории Республики-Казахстан, по результатам наших исследований, доминируют ротавирусы с коротким форетипом.

Диагностическая значимость метода электрофорезе вирионной РНК и сравнительная оценка эффектов -ности использования различных методов лабораторной диагностики ротавирусной инфекции

Для совершенствования диагностики ротавирусной инфекшда использован метод электрофореза вирионной РНК в силу абсолютной специфичности, обусловленной уникальной структурой генома. В результате проведенных исследований ротавирусная инфекция диагностирована и документально подтверждена в 46,0+1,6% случаев из всех обследованных больных ОКИ детей.

Ротавируснье гастроэнтериты вызывались, в основном, одним из штаммов ротавирусов. Вместе с тем, нами зафиксированы слу-

чан сметанного инфицирования (5,5+1,1%), о чем свидетельствовало обнаружение двух профилей миграции фрагментов РНК рота -вирусов в одной пробе. Наличие смазанной ротавирусной икфек -ции имеет важное значение: известно, что человек может быть заражен двумя различными штаммами ротавирусов в том случае,если они относятся к различным серотипам. Следовательно, при смешанной инфекции присутствуют не только 2 различных эле*т -рофоретипа, но и 2 различных серотша ротавирусов.

Помимо этой, есть и другая перспектива использования метода электрофореза геномной РНК. С его помощь я нами был расшифрован случай внутрибольничного инфицирования. При исследовании копрофильтратов больнкх в динамике за время пребывания ¡ас в стационаре, у одного больного через несколько дней выявлена суперинфекция вследствие внутрибольничного распространения ротавирусного заболевания. Этиологическое единство эпидемического процесса в данном очаге установлено путем сравнительного анализа полученных электрофоре грамм.

Диагаосткческая ценность метода электрофореза вирусспе -сф:ческоЕ PIK в полиакридамвдном геле возрастала в случае обнаружения атипичные ротавирусов, не относящихся к группе А.

Б кслрофильтратах детей контрольной группы ротавирусная РНК выявлена не бала.

Tsirioi образом, показана диагностическая ценность метода ьге^трсфср-етипирсЕяния, заклхгаапцаяся в его высокой результа-ткЕнастя при раепкфровте СКИ.

Еа ежедусчем этапе работы была дана оценка эффективности jsesrosscoBajose метода электрофореза геномной РНК в сравнительно» астэте с да5с$атсразга методами: KiA, Eü и РИГА, исполь-гтекззз fß* вгвгв&етт ротавгрусно® инфекции.

С помощью i32A нами анализировано 32Б0 проб фекалий больных детей остргаи гастроэнтеритами неясной этиологии. Ротави-русная природа заболевания подтверждена у 1536 детей, т.е. 48,4+0,9/2 случаев. При параллельном исследовании 620 проб методами электрофореза вирусспецифической РНК и ilSA., в электрофорезе вирионной РНК в полиакриламидном геле положительными оказались 3Ö4 пробы (46,3+1,7%), а в Ш. - 436 проб (53,2+ 1,7%). При сопоставлении полученных результатов отмечался высокий уровень их совпадения (95,5%). Однако, были отметены и разноречивые данные, обусловленные с одной стороны, ложнопо -ложительными и ложноотрипательными результатами в И5А, с другой стороны наличием антигена при отсутствии вирусспецифической РНК в силу неполной сборки вируса или, напротив, разрушением вирусного белка при сохранении геномной РНК.

Дальнейшие эксперименты касались сравнительного анализа диагностической эффективности методов электрофореза вирионной РНК в полиакриламидном геле и ЭМ. Для этого нами SM изучено 72 пробы фекалий больных ОКИ детей. Ротавирионы были обнаружены в <6 препаратах (36,1+5,7%). При анализе этих же проб ме -тодом электрофореза_ геномной РНК положительные результаты отмечены в 45,8+5,9^ случаев. Совпадение результатов зарегист -рировано в 91*7% случаев. Тем не менее, между полученными данными не всегда наблюдался параллелизм. В некоторых, особенно длительно храниЕ-аихся материалах, выявлялась вирусспеци -фичэская РНК при отсутствии вирусных частиц. Очевидно, при хранении и размораживании вирусные частицы распадаптся, тогда как двунитчатая фрагментированная геномная РНК является стабильной структурой и не подвергается разрузяниа, э связи с метод электрофоретилирогания применяется для ретроспективно? диагностики.

Кроме того, в процессе нашей работы был апробирован ро-тавирусный иммуноглобулинов^ эритроцитарнкй диагностику!.« . Нами составлена научно-техническая документация на данный да-агностикуы. С его помощью в РПГА мы исследовали 3120 проб фекалий, больных ОКИ. При этом в 1307 образцах выявлен рота -вирус, что составило 41,9+0,9%. Параллельному исследованию методами электрофореза вирионной РНК и РПГА подвергнуто 950 суспензий фекалий. При этом вирусспецифическая РНК обнаружена в 437 пробах (46,0+1,6%), а ротазярусный антиген в 387 пробах (40,7+1,6%). Разница частота индикации ротавируса в ^опрофи -льтратах указанными методами статистически была достоверной (р< 0,05).

Далее нами проведена сравнительная оценка результативности использования методов, для чего 72 пробы одновременно были анализированы в РПГА, И4А, ЭМ и электрофорезе вирусспеци -фической РНК в полиакриламидном геле.

Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2

Сравнительная характеристика чувствительности и специфичности используемых методов

Исследовано положительных проб (.%) на ротавирусную

м инфекцию, выявленных методами проб фекалий,-----.-------------------

больных ОКИ ' К1ГА I Ш , ЭИ ^ГЩ^н-

________1_________1______

72 30(41,7+5,8) 35(48,6+5,9) 26(36,1+5,7) 33(45,8+5,9)

Как видоо из таблиш, наиыеныаий процент индикагии рота-вирусов падает на с! - 36,1+5,7% и на РПГА - 41,7+5,6%, а наибольший процэнг - на И5А (48,6+5,9%), что не противоречит

литературнкм сообщениям о его высокой чувствительности (А.Г. Еукринск-ая и др., 1988, сьеггяг,1?68), а также на электрофорез геномной РКК (45,8+5,9^), обусловленный, по-видимому, в результате метода серебрения.

Таким образом, полученные данные указывают на высокув чувствительность методов И5А и электрофореза вирионной РНК, по сравнении с Ш и РИГА.

Вместе с теп, необходимо отметить, особув ценность методов 31.1 и злектрофорэтипирования, заключавшуюся в очень высокой специфичности, демонстрируемой фотографическим подтверждением наблюдаемого феномена и невозможности контаминации другими вирусами.

Для подтверждения диагностической значимости вшеназван-нкх методов лабораторной диагностики ротавирусной инфекции нами проведены исследования парных сывороток крови 45 больных ОКИ с помощью РСК. Прирост вирусспецифических антител в 4 и более раз обнаружен в 9 пробах (20,0+6,0%) от детей.

Положительные результаты клинической оценки метода электрофореза вирусспецифической РНК в полиакриламидном геле побудили нас использовать его в качестве контрольной тест-сис -темы для верификации некоторых особенностей эпидемического процесса при ротавирусной инфекции за период исследования с 1968 по 1992гг. С этой цёЛыо данным методом проведен анализ распространенности ротавирусных гастроэнтеритов среди больных детей разных возрастных групп. Заболеваемость ротавирусной инфекцией наиболее часто отмечена в возрасте от I до 2-х лет (59,7+2,6% - 49,8+3,3%). У детей более старшего возраста удельный вес выявления вирионной РНК, как этиологического фак -тора развития данной инфекции оказался значительно ниже (36,3+ 4,0$ - 23,5+4,2%). При определении соотношения выявления коре-

ткого и длинного электрофоретипов ротавирусов, во всех возрастных группах наблюдалось преобладание короткого форетипа, причем с наибольшей частотой у детей до I года (61,7%).

Б результате последующих исследований нами установлено различие в сезонном распределении электрофоретипов ротавиру -сов. В частности, при изучении копрофильтратов, взятых от больные детей в зимне-весенние месяцы, обнаружение геномной РНК составило соответственно 49,7+2,9% и 57,8+2,8%; в осенне-лет-кие периоды года показатели вьделения вирионной РНК были достоверно ниже.

Таким образом, полученные нами данные путем выявления постоянного признака штаммов ротавирусов - форетипов подтверждает ранее отмеченную зимне-весеннюю сезонность ротавирусных гастроэнтеритов и высокий удельный вес этой инфекции среди детей до 2-х лет.

Особенности клинического течения ротавирусного гастроэнтерита в зависимости от форетипа возбудителя

В ходе изучения этого вопроса нами проана^йюировано 64 истории болезни детей, больных ротавирусн-^ инфекцией. Больных распределили в 2 групш; по 32 реб/ад^и в I группу входили дети, в колрофильтратах которк^ обнаружены ротавирусы с коротким форетипои, а во 2 группе были дети, в фекальных: пробах когорте вкявлены рот&г^яруси с длинным форетипом.

Но дрняка» истории болезни в клинике ротавирусного гастроэнтерита ведущей аркада симптомов: диарея, рвота, гипертермия. Яретого> в качестве основных клинических проявлена® озз^чеш! шяеиетв обцего состояния организма и на-хгвде ^егвя$ваа!9Ш» интоксикация различав степени.

При тщательной анализе истории болезни детей между клинической картиной болезни и электрофсретаческой подвиннсстьо ротавирусов , вызвавших заболевание наблюдалась некоторая взаимосвязь, о чем свидетельствует содержание таблицы 3. Кая видно из таблицы, у детей из I группы, по сравнении с детьми из 2 группы, наблвдалось острсо начало заболевания, бсшсе случаев с инициальной рвотой (68,8%), чаще встречались признаки дегидратации (34,4%), а также у большгнства детей из этой группы течение ротавирусной инфекции носило тяхельй (56,3%) и сре-диетяжелый (34,4%) характерна основании полученной картины, № прзпли к вкзоду, что между клиническим течением заболевания и определенный электрофоретипом ротавируса существует коррелящм, причем, тнфекгуш вызванная ротавирусом с коротким форетипом, протекает более тетело.

Резтаируя вшеизложенное, следует отметить, что вперзыэ в Казахстане апробирован в клинической к эпидемиологической практике метод определения электрофоретипов вириокно*! РЕ-С з полиакркламидком геле. Установлена значительная гетерогенность форетипов ротавирусов, выделенных от больньх детеЯ. Идентифицировано Ю вариантов короткого и 6 вариантов длинного форе -типов. Кроме того, выявлены 2 варианта промежуточного фсрепг-па и I аномальней форетш ротавирусов. На территория респу<5 -лики отмечено доминирование короткого форетипа рогав:ттг,'-оз.

Метод электрофореза геномной Р£К нами бил истатан в »а-честве диагаостического теста. Изучена его эф^ектквкссть а сравнительном аспекте с другими четодетп лабораторной я;«гно-стики ротавирусной инфекции. Пр» это;* установлена вкзагаа специфичность, обусловленная уникальной струятурсй геке-тческсга

Таблица 3

Зависимость клинических проявлений ротавкрусной инфекции от выявленного электрофоретипа возбудителя

» | Клинические симптомы ; 'Ж"

! Длинный фоое-, тип (п 3/С)

I. ДИАРЕЯ

число случаев 29 (90,6%) дефекация за 24 ч.

- 5 7

- 6-15 19

- 16 и более 3 количество дней с диареей 7,5 + 3,4

2. РВОТА

число случаев 22 (68,8%)

число дней 4,0 + 1,5

3. ПШЕРТШШ число случаев

- 37,5°С . 4 (12,5%)

- 37 ,б°С~38,5°С 23 (71,9%)

- 38,5°С и вьше 3.(9,4%) средняя продолжительность

в днях 4,9 + 2,4

4. ДЕЩЦРАТАЩЯ потеря массы тела

- 5% 7 (21,9%)

- 5-1056 4 (12,5%)

ь. интоксикация 22 (68,8%)

6. ТЕ*ЕНИЕ ЗДБСШДНИЯ '

легкое 3 (9,4%)

среднетяжедое II (34,4%)

тяЕелое 18 (56,3%)

27 (84,4%)

16 II О

7,0 + 2,2

16 (50,0%) 2,0 + 1,3

12 (37,5%)

13 (40,6%) I (3,1%)

3,3 + 1,2

4 (12,5%) I (3,1%)

16 (50,0%)

6 (18,6%) 18 (56,3%) 8 (25,0%)

аппарата ротавирусов и высокая чувствительность в результате применения нитрата серебра для окраски геля.

И наконец, отмечено еще одно достоинство метода электрофореза вирионной РНК, заключающееся в возможности определить взаимосвязь между электрофоретипоы вновь выделенных штаммов ротавирусов и особенностью клинического течения ротавирусной инфекции. С помощью данного метода было установлено, что рота вирусы с коротким форетипом вызывают более тяжелую клиническую картину болезни.

выводи

1. В Республике Казахстан впервые определены электрофо -ретипы вирионной РЖ ротавирусов, выделенных от больных детей.

2. Усовершенствован метод электрофореза геномной РНК ротавирусов с помощью обработки геля нитратом серебра, позволяющим определить субвирусные структуры в очень незначительных концентрациях - наногранмах.

3. Установлена злектрофоретическая неоднородность енсеь ввделенных штаммов ротавирусов. Заявлено 19 вариантов профи -лей геномной РНК: 10 с коротким, б с длинным фореткпами, 2 варианта промежуточного форетипа и I аномальный форетип. Во всех регионах республики доминирует короткий форетип ротавк -руса, существенно влиящлР на характер течения болезнн.

4. Сравнительный анализ лабораторных методов диагностик;: ротавирусной-инфекций показал высокою специфичность и чувствительность метода электрофореза вирионной РНК, который мак'*? быть лспользован в качестве критерия чугстз'/.тсльнпстл л специфичности применяемых лабораторных тестев индикации гота?, и рус -ной инфекции.

5. Показана возможность использования метода определения электрофоретипа вирионной РШ для выявления внутрибольничного распространения ротавирусных гастроэнтеритов и сметанной инфекции, вызванной различными штаммами ротавирусов.

6. Установлена корреляция между электрофоретипом вновь выделенных щтамыов и особенность» течения ротавирусной инфекции. Ротавирусы с коротким форетипом вирионной FKK вызывают более тяжелую клиническую картину заболевания.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, СШШКОШНЫХ ПО UMS ДИССЕРТАЦИИ

1. Абенова УЛ., Кусмухамбетова P.A., Чубова Н.В., Асадова Ф.Г., Галимов Р.Ф., Соколова H.H. //Ускоренные метода диагностики ротавирусной инфекции. - Здравоохранение Казахстана, ISQ9, р В, с.58-59.

2. Цубова Н,В., Кусмухамбетова P.A., Абенова УЛ. //Экспресс-методы выявления ротавирусного антигена. - Информационный листок, КазНЙШИ, 1989.

3. Абенова У.А.,-Канатбаева А.Б., Соколова H.H., Чубова Н.В., Кусмухамбетова P.A., Асадова Ф.Г., Галимов Р.Ф. //Ускоренные методы лабораторной диашостикк и клинические особен -ности течения ротавирусного гастроэнтерита. - Методические рекомендации, Алма-Ата, 1939, е.23.

4. Денисов Г.Й., Абенова У.А., Хайруаева А.Е., Еркинбеко-ва В.К., Соколова H.H., Омирбаева М.С., Чубова Н.В., Кусмухамбетова P.A., Шкгеллезы и другие острые кишечные инфекции. -Информационно-методический бюллетень, Алма-Ата, 1939.

5. Кусмухамбетова P.A., Абенова У .А. //Ротавирусы: структура, геном и белки,- Рукопись (12 с.) депонирована в БИНШИ, И., 1990, Вб, (223), с.146-147.

6. Абенова У-А., Дюскалиева Г.У., Ч/бова Н.З., Куи/ухамбё-това P.A., Махыутова P.E. //Заболеваемость ротавирусной инфек -цией у детей в IS87-I990 гг. в г.Алма-Ата. - В те.: Материалы У объединенного съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана. Тез. докладов, Алыа--Ата, 1991, т.5, c.III-112.

7. Абенова У .А., Кусыухаыбетова P.A., Махмутова P.E. //Характеристика электрофоретипов ротавирусов, выделенных от. боль -ных детей. - Там же, с.112-114.

8. Кусмухамбетова P.A., ^бова Н.В., Махыутова P.E., Абе -нова У.А. //Электрофоретипы штаммов ротавирусов, выделенных от больных детей в Казахстане. - Депонированный сборник "Эпидемиология, диагностика и профилактика кишечных инфекций", 1991, с. 48-51. •

9. Чубова Н.В., Кусмухамбетова P.A. //Применение реакции коагглптинацин с использование» стафилококка шт. Кован I для диагностики ротавирусного гастроэнтерита. - Там ае, с.87-89.

10. Кусмухамбетова P.A., Абенова У.А. //Анализ электрофоре-типов геномной РНК ротавирусов человека. - Информационное письмо, Алма-Ата, 1991, e.IL.

11. Абенова УД., Кусмухамбетова P.A. //Характеристика электрофоретипов ротавирусов, выделенных от больных детей в Казахстане. - Вопросы вирусологи!, 1992, Р2, с. 120-122. : " .

Рационализаторские предложения

1. Кусмухамбетова P.A., Абенова УД. //Усовврпенствование метода внявдетшя геномной ГШ ротавируса в полиакриламцдноы геле. - Удостоверение У 419. ~

2. Чубова Н.В., Кусмухамбетова P.A., АбеноваУД., Шамардин БД. //Способ применения коммерческого препарата антирота-вирусиых иммуноглобулинов для экспресс-диашостики ротавирусной лнфегции с использованием стафилококка Кован I.- УдОстов .№ 423.

¿а*-