Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментально-гистологическое обоснование заместительной пластики аллоплантом при обширных птеригиумах

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментально-гистологическое обоснование заместительной пластики аллоплантом при обширных птеригиумах"

У

На правах рукописи

»111111111111111

003058 1.

ЛОМУХИНА Елена Алексеевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ПЛАСТИКИ АЛЛОПЛАНТОМ ПРИ ОБШИРНЫХ ПТЕРИГИУМАХ

03 00 25 Гистология, цитология, клеточная биология 14 00 08 Глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 2007

Работа выполнена в Оренбургском филиале Федерального государственного учреждения «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» имени академика С Н Федорова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители: Заслуженный врач РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Канюков Владимир Николаевич

Заслуженный работник высшей школы РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Стадников Александр Абрамович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Корнеев Геннадий Иосифович

доктор медицинских наук,

профессор Малов Владимир Михайлович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится мая 2007 года в _ часов на заседании

диссертационного совета К 208 066 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу Россия, 460000, г Оренбург, ул Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан «'/У» апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Семченко Ю П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Птеригиум (крыловидная плева) - распространенное заболевание конъюнктивы глазного яблока, обусловливающее понижение остроты зрения вследствие астигматизма в 60-70% случаев или помутнения центра роговицы (при птеригиумах 4 степени) Главным аспектом проблемы лечения заболевания является частое его рецидивирование Процент рецидивов по данным разных авторов колеблется в пределах 3-56% (К С. Каранов, 1979, ГА Макеева, 1983)

Несмотря на многолетний, интенсивный поиск причин и изучение факторов, приводящих к прогрессирующему течению данного заболевания, проблема птеригиума остается актуальной в современной офтальмологии Этиопатогенез птеригиума не ясен, особенно в аспектах дисплазии, органотипических нарушений структуры соединительной ткани и микроциркуляторных расстройств (3 П Волоховская с соавт, 1981, 1993)

Единственным методом лечения птеригиума на сегодняшний день является оперативное вмешательство Существует большое количество методов оперативного лечения, но ни один из них не гарантирует безрецидивного послеоперационного периода Многообразие операций говорит о недостаточной их эффективности и стремлении найти более оригинальные способы лечебной коррекции, чтобы исключить рецидивы и удовлетворить косметическим требованиям

Современная хирургия птеригиума базируется на тщательном удалении измененной конъюнктивальной и субконъюнктивальной ткани с последующим закрытием дефекта В качестве трансплантатов, пересаживаемых на склеру, используются различные объекты: роговица, конъюнктива, слизистая губы, амнион, твердая мозговая оболочка, хрящ трахеи и бронхов плодов и мертворожденных (В Д Кукса, 1966, ТЛ Овсепян, 1971; ГА Макеева, 1983, НР Мазаева, 1989, В Н. Канюков с соавт, 1994) Однако каждая из этих методик наряду с преимуществами имеет ряд недостатков Главными недостатками аутотрансплантации являются весьма ограниченная возможность забора тканей и дополнительная травма, наносимая больному при этой манипуляции Основным препятствием для широкого использования аллотрансплантатов является реакция тканевой несовместимости При пересадке нативного трансплантата, как правило, развивается иммунное воспаление, приводящее к быстрому лизису пересаженной ткани и последующему рубцеванию

Все это побудило нас искать новые материалы для заместительной пластики конъюнктивы при обширных птеригиумах.

В Оренбургском филиале ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им акад С.Н Федорова Росздрава» под руководством д м н профессора В Н. Канюкова разработаны и защищены патентами ряд альтернативных методов замещения дефектов различных тканей глаза. В качестве аллотрансплантатов в клинической практике с успехом используются аорта, перикард, капсула почки (В Н Канюков с соавт., 1995, 1996, 2001, 2005, 2006)

Во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии профессором ЭР Мулдашевым разработан и внедрен в практическое здравоохранение аллоплант для пластики конъюнктивы Он изготавливается из висцеральных фасций с низким содержанием гиалуроновой кислоты и повышенным содержанием гепарансульфата Представляет собой тонкую пленку, полупрозрачную, умеренно эластичную и прочную на разрыв Основные свойства аллопланта для пластики конъюнктивы - это низкие антигенные свойства, предупреждение образования соединительной ткани в области трансплантации, обеспечение направленного роста тканей реципиента

Несмотря на широкое применение аллопланта при различных видах патологии конъюнктивы, возможность его применения для пластики послеоперационных дефектов при обширных птеригиумах не исследовалась

Цель исследования морфофункциональное обоснование возможности использования аллопланта для пластики конъюнктивы с целью замещения интраперационных дефектов при иссечении обширных птеригиумов.

Задачи исследования.

1. Изучить структурно-функциональную характеристику интраоперационного материала птеригиумов

2. Исследовать особенности морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы в зоне их контакта при экспериментальном моделировании дефекта

3. Изучить особенности репаративных процессов тканей глаза при замещении дефектов конъюнктивы аллоплантом в эксперименте

4 Обосновать целесообразность применения аллопланта для пластики интраоперационных дефектов конъюнктивы при иссечении птеригиумов в условиях офтальмохирургической клиники

Научная новизна

Новизна данного исследования состоит в получении новых данных (световой и электронной микроскопии, иммуноцитохимии) по особенностям репаративной регенерации тканей глаза при использовании аллопланта для пластики дефектов конъюнктивы

Практическая значимость

Полученные новые данные по морфофункциональной реорганизации тканей глаза (конъюнктива, роговица) делают возможным использование аллопланта с целью управления репаративными гистогенезами в хирургии птеригиума

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Развитие и формирование клинического фенотипа птеригиума происходит на основе выраженных нарушений тканевого гомеостаза, приводящих к декомпозиции волокнистых комплексов соединительной ткани конъюнктивы, мезенхимальным дистрофиям (мукоидное набухание и фибриноидные изменения)

2 Метод повреждения (дефектов) конъюнктивы и роговицы у экспериментальных животных позволяет оценить диапазон регенераторных потенций клеток и тканей, характер их воспалительных разрастаний, что может быть применено для оценки специфических гистологических изменений, наблюдаемых при развитии птеригиумов

3 Использование аллопланта оптимизирует репаративный гистогенез в зоне контакта конъюнктивы и роговицы, обеспечивает стационарное поддержание их нормальной гистоструктуры и компенсирует физиологическое снашивание и апоптоз клеточных элементов после нанесения дефекта Это приводит к полному восстановлению поврежденного участка

4 В своей совокупности полученные результаты обосновывают целесообразность использования аллопланта для хирургической коррекции птеригиумов и профилактики их послеоперационных осложнений

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО «ОрГМА», кафедре медико-биологической техники ГОУ ВПО «ОГУ» и практику

НИР в проблемной лаборатории «Нейроэндокринная регуляция взаимодействий про- и эукариот» Оренбургского филиала ЮУНЦ РАМН Полученные данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы, а также в условиях замещения слизистой оболочки аллоплантом, служат теоретическим обоснованием при разработке методов хирургической коррекции глазной патологии с использованием биоматериала в условиях офтальмохирургических клиник города

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на зональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы офтальмологии», г. Орск, 2005, VI Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы военной медицины», г Оренбург, 2005, IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии, г. Екатеринбург, 2006 (диплом за лучший стендовый доклад), на VII Конгрессе международной ассоциации морфологов, г Орел, 2006; заседании Оренбургского регионального отделения Общества офтальмологов России, 2006, областном конкурсе инновационных проектов, г Оренбург, 2006; конкурсе, проводимом Российским фондом фундаментальных исследований, г Москва, 2006, областном конкурсе молодых ученых, г Оренбург, 2006, VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций, г Москва, 2007 (серебряная медаль)

По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Работа иллюстрирована 2 таблицами, 35 рисунками Список литературы содержит 230 источников, в том числе 170 иностранных Диссертация изложена на русском языке

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Экспериментальная часть работы состояла из 2-х блоков исследований

В первом блоке проводилось изучение структурно-функциональной характеристики интраоперационного материала птеригиумов 20 пациентов (24 птеригиума) на световом и элеюгронномикроскопическом уровнях.

Во втором (экспериментальном) блоке проводилось изучение особенностей морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы при экспериментальном моделировании дефекта (8 глаз) и замещении его аллоплантом для пластики конъюнктивы (14 глаз) половозрелых кроликов-самцов породы БсИтвсЫНа.

С 2004 по 2006 год прооперировано 20 пациентов (24 глаза) по поводу первичного и рецидивирующего птеригиума в возрасте от 35 до 73-х лет Средний возраст составил 58,5 лет Женщины составляли 60% исследуемых (12 человек), мужчины - 40% (8 человек)

Распределение по диагнозам было следующим первичный птеригиум - 18 глаз (75%), рецидивирующий птеригиум - 6 глаз (25%)

Больные с первичным птеригиумом по стадиям распределялись следующим образом II стадия - 10 случаев (55,5%), III стадия - 8 случаев (44,5%) (по классификации О А Дудинова и Л М Ципенюк)

Распределение больных с рецидивирующим птеригиумом по стадиям было следующим II стадия - 1 случай (16,7%), III стадия — 4 случая (66,7%), IV стадия - 1 случай (16,7%)

У 16 пациентов иссекали головку и тело птеригиума и помещали в 10% раствор нейтрального формалина Затем проводили обезвоживание в батарее спиртов нарастающей концентрации и заливали в парафин-целлоидин Из каждого объекта после обезвоживания и заливки в целлоидин готовили гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином Майера и эозином, а также по Ван-Гизон

Гистологический материал птеригиумов от 4 пациентов подвергали ультраструктурному анализу (по методике, описанной ниже) Экспериментальная часть работы была выполнена на II половозрелых кроликам-самцам породы ЗсЫпэсЫПа массой 3-3,5 кг. Эксперименты проводили с соблюдением приказа Министерства здравоохранения СССР за №755 от 12 08 87 об обеспечении принципов гуманного обращения с животными и Федеральным законом РФ «О

защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997. Выполнены 2 серии опытов

В 1-й (контрольный) под местной анестезией инокаина трепаном диаметром 5 мм маркировался участок дефекта роговицы и бульбарной конъюнктивы с носовой стороны у 4-х кроликов (8 глаз) Роговицу иссекали до поверхностных слоев стромы. Также в зоне отметки тщательно удаляли конъюнктиву и субконъюнктиву до склеральной части глазного яблока Швы на образованный дефект не накладывались. В послеоперационном периоде ежедневно 3 раза в день в конъюнктивальную полость инсталлировали 0,25% раствор левомицетина. Экспериментальных животных декапитировали под эфирным рауш наркозом на 7, 14, 21, 30 сутки от начала опыта Объектом морфологических исследований служили комплексы роговица + конъюнктива + эписклера

Во 2-й серии экспериментов под местной анестезией инокаина трепаном диаметром 5 мм маркировался участок дефекта роговицы и бульбарной конъюнктивы с носовой стороны Роговицу иссекали до поверхностных слоев стромы Также в зоне отметки тщательно удаляли конъюнктиву и субконъюнктиву до склеральной части глазного яблока Дефект конъюнктивы закрывали аллоплантом для пластики конъюнктивы (тотальной № 000126 и частичной № 000118) Аллоплант выкраивали по форме дефекта конъюнктивы и фиксировали к слизистой оболочке и эписклере в состоянии натяжения узловыми швами Neylon 8-0 В послеоперационном периоде ежедневно 3 раза в день в конъюнктивальную полость инсталлировали 0,25% раствор левомицетина Экспериментальных животных декапитировали под эфирным рауш наркозом на 7, 14, 21, 30, 60, 90, 180 сутки от начала опыта Объектом морфологических исследований служили комплексы роговица + конъюнктива + аллоплант + эписклера

Для светооптического исследования эксцизивные фрагменты пограничных участков роговицы и конъюнктивы фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина После стандартной гистологической проводки материал заливали в парафин-целлоидин Приготовление серийных срезов толщиной 5-6 мкм осуществляли на ротационном микротоме. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином с последующим анализом и микрофотографированием при помощи цифровой фотокамеры Olympus-С160.

Для электронно-микроскопического исследования материал фиксировали в охлажденном (t°+4°C) 2,5 растворе глютарового альдегида на S-коллединовом буфере (рН=7,3). Постфиксацию проводили в 8

четырехокиси осмия по Millonig (1961). В дальнейшем кусочки обезвоживали при комнатной температуре в серии спиртов возрастающей крепости (50°-100°) и абсолютном этаноле, после чего заключили в смолу ЭТЮН-812 Полимеризацию объектов проводили при t°+60°C (в течение 3-х суток) С каждого блока на ультратоме УМТП-4 получали полутонкие срезы (1 мкм), которые окрашивали метиле новым синим и основным фуксином по прописи Sato et Shamoto (1973). Полутонкие срезы использовали при подготовке блоков к прицельной заточке, необходимой для изготовления ультратонких срезов (40-60 нм) на ультратоме LKB-5 (Sweden-Bromma).

Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию в насыщенном растворе уранилацетата при t°+37°C в течение 30 минут и цитрате свинца по Reynolds (1963). Изучение ультратонких срезов и их фотографирование производили на электронном микроскопе ЭМВ 100АК при увеличении от*8 000 до х40 000

Для иммуноцитохимии использовали первичные антитела с целью обнаружения у клеток экспрессии белка р53, участвующего в инициации апоптоза и выявлении интернуклеосомальной фрагментации ДНК в соответствии с рекомендациями Новиковой с соавт (1981)

Полученный материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, дегидратировали в этаноле и заливали в парафин Гистологические срезы (5-6 мкм) инкубировали с моноклональными антителами к фактору р53 (фирма «Dako», Дания) в рабочем разведении 1 50 Для визуализации иммунного окрашивания применяли стрептавидин-биотиновый пероксидазный метод с последующим докрашиванием ядер клеток гематоксилином Майера Для определения внутриядерной фрагментации ДНК использовали набор реактивов «Apoptag Plus Peroxidase in Situ Apoptosis Detection Кп»(фирма «Intergin», Канада) с докрашиванием ядер клеток 0,5% раствором метиленового зеленого на 0,1 М ацетатном буфере Во всех случаях подсчитывали процент окрашенных клеток в случайно выбранных полях зрения

Полученные результаты исследования статистически анализировали по t-критериям Стьюдента, используя коммерческую программу Microsoft Excel 5.0а.

Результаты исследований и их обсуждение

Гистологические исследования интраоперационного материала показали, что основную часть крыловидной плевы (птеригиумов) как роговичной, так и конъюнктивальной зон составляет рыхлая волокнистая соединительная ткань с большим количеством кровеносных сосудов

микроциркуляторного русла (артериолы, венулы, капилляры) При этом были обнаружены выраженные явления мукоидного и фибриноидного набухания межклеточных структур с локальной дезорганизацией волокнистых элементов.

Особого внимания заслуживали изменения коллагеновых и эластических волокон. Последние имели признаки выраженных повреждений, что проявилось в их фрагментации и появлении участков сильного истончения, чередующихся с локальными утолщениями. Обнаружены расширения значительных размеров между волокнами Эти расширения были заполнены форменными элементами крови, преимущественно эритроцитами, а также зернистыми преципитатами плазмы крови.

По ходу дезорганизованных волокон откладывался фибриноид, сдавливавший часть клеточных элементов Последние были представлены фибробластами и фиброцитами с характерными гиперхромными ядрами с признаками кариопикноза и узким ободком цитоплазмы

Нередко фибробласты контактировали с плазматическими клетками, для которых также были характерны ядра с выраженной конденсацией и маргинацией хроматина В цитоплазме плазмоцитов среди канальцев шероховатого эндоплазматического ретикулума регистрировались крупные липосомы Вблизи клеточной поверхности фибробласта располагались разволокненные коллагеновые фибриллы, теряющие специфическую поперечную исчерченность и распадающиеся на отдельные фрагменты и микрофиламенты. Подобная разволокненность коллагеновых волокон, по мнению А И Струкова, В.В.Серова, ДС Саркисова (1982), представляет новое структурно-функциональное качество соединительной ткани, когда на месте типичных надмолекулярных и ультраструктурных агрегатов коллагеновых белков, возникают иные, менее сложно устроенные и менее упорядоченные, вплоть до высвобождения тропоколлагеновых протофибршш Можно предположить, что подобная линейная деполимеризация коллагеновых фибрилл свойственна для соединительной ткани птеригиумов

В многочисленных расширенных кровеносных сосудах наблюдались признаки расстройств гемоциркуляции Это проявилось в сладж-феномене (склеивание, слипание эритроцитов), что наблюдалось не только в капиллярах, но и артериолах и венулах.

Внутрисосудистая агрегация эритроцитов сопровождалась повышением проницаемости сосудистой стенки, экстравазацией плазмы и диапедезом форменных элементов крови Безусловно, наблюдаемые 10

процессы, приводящие к гипоксии, вызывали нарушения метаболических ритмов клеток соединительной ткани и самих сосудов Это, в свою очередь, приводило к замедлению процессов восстановления тканевых структур. С другой стороны, эти явления усугубляли дистрофические изменения волокон и аморфного матрикса соединительной ткани птеригиумов

Электронно-микроскопическое изучение гемокапилляров показало наличие ультраструктурных повреждений эндотелиошггов Так, в их фенестрированной цитоплазме были выявлены липосомы и миелиноподобные тельца Базальная мембрана имела локальные дефекты за счет разрыхления и лизиса аморфного компонента

Как правило, в перикапиллярном районе наблюдался отек и скопление хлопьевидного материала, а также фрагментов периваскулярных клеток В этих участках соседние с капиллярами клетки соединительной ткани имели крупные липосомы, что свидетельствовало о повреждениях мембранных компартментов (демаскировка липидов биологических мембран)

В некоторых поверхностных зонах экстирпированных птеригиумов нами были обнаружены эпителиальные разрастания При этом в конъюнктивальной части крыловидной плевы покровные пласты однослойного однорядного строения состояли преимущественно из высоких цилиндрических клеток с овальными гиперхромными ядрами и светлой цитоплазмой По своему фенотипу они напоминали слизьпродуцирующие эпителиоциты Среди данных клеток располагались единичные лимфоциты Напротив, в роговичной части птеригиумов регистрировались массивные эпителиальные структуры как покровного, так и погружного характера Среди эпителиоцитов также регистрировались лимфоциты Количество слоев в покровном эпителии доходило до 12 и более При этом покровные структуры носили характер многослойного цилиндрического эпителия без присутствия покровных плоских клеток

Пролиферативные разрастания покровного эпителия, включая формирование погружных тяжей эпителиоцитов, мы наблюдали только в тех случаях, когда в тех или иных участках птеригиумов имелась малодифферинцированная соединительная ткань, пронизанная большим количеством гемокапилляров без признаков их сладжирования и стаза форменных элементов крови (эритро- и лейкостаза)

Исходя из целевой установки настоящей работы, мы, прежде всего, направили свои исследования на моделирование раневых дефектов конъюнктивы, примыкающей к роговице у экспериментальных животных (кроликов) При этом мы априорно предполагали получить ту

гистологическую картину регенерата, которая бы в основных морфологических чертах соответствовала гистоструктуре птеригиумов Т е мы сориентировали свои исследования, используя метод «регенерации», предполагающий возможность моделирования воспалительных разрастаний эпителиальных и соединительнотканных структур органа (НГ. Хлопин, 1946), которые могут дать объективную информацию о морфологических изменениях, наблюдаемых в тканях в условиях патологии По своей сути использованный нами экспериментально-гистологический метод одновременно может быть расценен как метод экспериментальной патологии структур конъюнктивы, контактирующей с роговицей

Гистологический анализ материала, полученного в первой серии опытов (раневые дефекты соответствующей области глазного яблока), проводимой без введения аллопланта, показал следующее. Начальной реакцией клеток и тканей раневой зоны являлся спазм сосудов микроциркуляции, сменяющийся паралитическим их расширением, значительным повышением проницаемости стенок сосудов и быстро нарастающей экстравазацией плазмы и форменных элементов крови Воспалительная реакция, вовлекающая клетки крови, соединительной ткани конъюнктивы и роговицы, нарастала быстро

Так через 7 суток на «поле воспаления» формировался лейкоцитарный «вал» в виде демаркационной зоны, включающий детрит, зернистые лейкоциты, моноциты, лимфоциты и макрофаги Наибольшую квоту при этом составляли полиморфноядерные лейкоциты (нейтрофилы), а также эозинофильные граиулоциты В более поздние сроки наблюдений (14 суток) в описываемых участках раневого дефекта появлялись во все возрастающем количестве моноциты и их производные - макрофаги

Через 7-14 суток после начала воспалительной реакции развивалась малодифференцированная (грануляционная) соединительная ткань, богатая гемокапиллярами, постепенно замещающая раневой дефект

При этом значительно уменьшалось число лейкоцитов (гранулоцитов и лимфоцитов)

Новообразованная ткань отличалась интенсивным формированием кровеносных капилляров и высокой активностью клеток фибробластического ряда Функционально специализированные фибробласты имели крупное светлое ядро с деконденсированным хроматином и большим ядрышком нуклеалонемного характера В их цитоплазме локализовались расширенные канальцы шероховатого эндоплазматического ретикулума, что достоверно свидетельствовало об 12

активизации в клетке синтеза коллагеновых и неколлагеновых биополимеров, входящих в состав фибриллярных и матриксных компонентов соединительной ткани

По мере нарастания количества коллагеновых волокон, а также в ходе фенотипических изменений клеточных элементов, происходила дифференцировка грануляционной ткани в фиброзную (рубцовую) тканевую структуру

Хотя по мере созревания малодифференцированной соединительной ткани число макрофагов снижалось, они и в формирующейся рубцовой ткани сохраняли признаки своей метаболической активности

Можно, со всей очевидностью, предположить, что данные клетки участвовали в лизисе волокнистых структур соединительной ткани

Параллельно с гисто- и органотипическими превращениями грануляционной соединительной ткани происходила активизация и соответствующая реорганизация репаративного гистогенеза конъюнктивального и особенно роговичного переднего эпителия (многослойного плоского неороговевающего)

Нами были обнаружены массивные разрастания многослойного эпителия вглубь соединительной ткани

Подобные погружные тяжи подвергались на поздних стадиях эксперимента (30 суток) канализации, проявляя присущие данным эпителиям выраженные свойства элиминации, что обычно наблюдается и в клинических условиях прогрессирующих птеригиумов (Н М Чилова-Атанасова, 1972) Выраженность эпителиальных разрастаний обеспечивалась тремя основными процессами клеточной репродукцией, миграцией эпителиоцитов и их последующей цитодифференцировкой

В ряде случаев эпителиальные пролифераты, как правило, со стороны роговицы, наблюдались в зоне выраженного отека, без наличия под базалыгой мембраной малодифференцированной соединительной ткани. В этих случаях под эпителием присутствовала экссудативная жидкость и хлопьевидный материал фибриноида

Электронно-микроскопическое изучение данных пролифератов показало наличие в них значительного числа малодифференцированных клеток Для них были характерны крупные светлые ядра с деконденсированным хроматином, узкий ободок цитоплазмы, в которой отсутствовали мембранные органеллы, но имелись в большом числе свободные рибосомы (полисомы) Наряду с наличием адгезивных контактов, либо контактов по типу «замка» в эпителиальном пласте всегда определялись межклеточные щели значительных размеров

В большинстве случаев описанные эпителиальные пролифераты наблюдались со стороны роговицы При этом в ней невозможно было идентифицировать боуменову оболочку. Мы особенно отмечаем то обстоятельство, что клетки базального слоя переднего эпителия роговицы теряли межклеточные контакты

С другой стороны в этих же местах роговицы появлялись во все возрастающих количествах малодифференцированные и функционально специализированные фибробласты, продуцирующие межклеточное вещество в виде пучков коллагеновых волокон и аморфного матрикса При этом данные структуры, перемежающиеся с крупными венулами и гемокапиллярами, внедрялись (прорастали) в околоконъюнктивальную зону роговицы Это обстоятельство со всей очевидностью свидетельствует о том, что моделируемый нами дефект приводил к формированию соединительнотканного регенерата, который имел выраженные тенденции перемещения на «территорию» роговицы

Этому процессу, очевидно, способствовали структурные перестройки базальных слоев многослойного неороговевающего эпителия роговицы и дискомплексация боуменовой мембраны Именно в данных участках наблюдалась повышенная митотическая активность клеток фибробластического дифферона Одновременно происходили активные процессы коллагеногенеза, приводящие к образованию фибриллярных компонентов соединительной ткани, свойственных Рубцовым структурам

Таким образом, в своей совокупности, полученные нами факты, свидетельствовали о том, что экспериментально моделируемый дефект области контакта конъюнктивы и роговицы приводил к формированию специфического регенерата, который в своих основных морфологических чертах был сходен с теми гистологическими признаками, которые наблюдались нами в эксцизивном интраоперационном материале птеригиумов

Через 30 суток эксперимента в зонах дефекта рубцовые преобразования соединительной ткани прогрессировали Доминирующими клетками при этом в этих зонах являлись фибробласты и фиброциты (последние значительно превалировали над первыми, которые, как правило, имели признаки ультраструктурных повреждений) Важно отметить, что на данном этапе репаративного процесса выявлены клетки, относящиеся к иммунокомпетентной системе (в частности, гипертрофированные плазмоциты) Для них были характерными расширенные канальцы гранулярного

эндоплазматического ретикулума, формирующего везикулярные

ультраструктуры, заполненные хлопьевидным материалом средней электронной плотности

Эти факты свидетельствовали о присутствии возможного компонента иммунного воспаления, имеющего место в моделируемых нами условиях. Оставляя в стороне сложные вопросы этиологии и патогенеза этого процесса, мы все-таки высказываем суждение о том, что пролиферативная фаза воспаления в области конъюнктивы и роговицы глаза может иметь уклонения и смену тканевых реакций репарации. Последние процессы при неблагоприятных условиях могут привести к рецидивам некробиологических явлений в тканях по типу аллергических реакций или иных патологических изменениях соединительнотканного рубца Подобный сценарий морфофункциональных событий описан при гиперсензитивном пневмоните, бронхопульмональном аспергиллезе, фиброзном альвеолите (А И. Струков, 1979)

Проведенный нами гистологический анализ материала через 90 суток от начала эксперимента показал существенные нарушения межтканевых взаимоотношений эпителиального покрова и стромы конъюнктивы Одновременно была обнаружена выраженная деструкция боуменовой оболочки, расслоение фиброзных пластин собственного вещества роговицы фибриллярными структурами соединительнотканного рубца.

Использование аллопланта для пластики конъюнктивы (в экспериментально моделируемых условиях раневых дефектов) существенно изменило ход воспалительных реакций и достоверно оптимизировало репаративные гистогенезы поврежденных гистоструктур конъюнктивы и роговицы

Следует, прежде всего, отметить, что общий характер морфологических изменений в этих условиях эксперимента был таким же, что и в контрольной серии (без применения аллопланта) Как правило, посттравматическое воспаление выражалось образованием микроскопических либо обширных очагов на территории гистонов роговицы и конъюнктивы, проявляясь следующими фазами альтерация, экссудация, пролиферация гематогенных и гистогенных клеточных элементов

Альтерация как инициальная фаза воспаления проявлялась в различного рода явлениях дистрофий, некробиоза и некроза тканей конъюнктивы и роговицы Экссудация, быстро следующая за альтерацией, складывалась из следующих процессов вазодилятации сосудов микроциркуляции, усиления сосудистой проницаемости, эмиграции форменных элементов крови, фагоцитоза и формирования воспалительного клеточного инфильтрата В последующем наступали

пролиферативные процессы клеток и тканей в соответствии с их гисто- и органобластическими потенциями

Вместе с тем, использование аллопланта позитивно изменило ход репаративных процессов в моделируемой раневой области.

Прежде всего, это касалось характера и течения альтеративной и экссудативной фаз воспаления. Так, зона некротических изменений тканей конъюнктивы и роговицы (на 7-е сутки эксперимента) была в 1,51,7 раза меньшей, по сравнению с предыдущей серией экспериментов

Следует особо подчеркнуть, что использование аллопланта создавало (на 7-е, 14-е сутки эксперимента) необходимые условия для лучшей сохранности макрофагических клеток, часть из которых подвергалась митотическому делению По своему генезу данные клетки являются моноцитарными, либо гистоцитарными, возникающими в раневой области за счет экстравазации форменных элементов крови.

В 2,5-3 раза (на стадиях 7 и 14 суток) возрастала репродуктивная активность клеток фибробластического дифферона (фибробластов, миофибробластов) Одновременно усиливались их метаболические функции. Эти клетки имели крупные ядра, большие ядрышки, их цитоплазма была насыщена свободными рибосомами (полисомами) Все это свидетельствовало о том, что введение аллопланта в область раневого дефекта создавало необходимые оптимальные условия для формирования полноценного соединительнотканного регенерата, сохраняющего малодифференцированный статус, наблюдаемый нами вплоть до 30 суток наблюдений в эксперименте

В эти сроки, включая 90 суток эксперимента, на поверхности новообразованной малодифференцированной соединительной ткани располагались эпителиальные пласты клеток многослойного строения

Следует особо подчеркнуть то обстоятельство, что проникновения, «миграции» соединительнотканных структур, а также их склерозирование, в роговицу не наблюдались Боуменова мембрана была сохранена на всех этапах эксперимента. Клетки переднего (многослойного неороговевающего эпителия) роговицы сохраняли свои межклеточные контакты и не претерпевали деструктивных изменений

Эти факты позволили нам сделать заключение о том, что использование аллопланта для пластики конъюнктивы создавало условия для адекватной реализации биологических свойств не только клеток соединительной ткани, но и эпителиоцитов роговицы.

Последующие наблюдения за тканевой дифференцировкой регенерата показали, что ее гисто- и органотипический ход были адекватными относительно эпителиально-соединительнотканных взаимоотношений Использование аллопланта сдерживало фазу 16

склерозирования, пролонгируя условия для репаративного гистогенеза эпителиального покрова регенерата Относительно источника подобного регенерата сделать заключение затруднительно Но, учитывая, что по своей гистоструктуре возникающие покровы регенерата имели строение многослойного плоского эпителия, можно сделать предположение о существенном вкладе в этот процесс переднего эпителия роговицы

В ряде случаев (14, 30 суток опытов) многослойные эпителии в виде локальных покрытий, наслаивались на однослойный железистый эпителий конъюнктивы, образуя конгломераты клеток

Вместе с тем, мы еще раз подчеркиваем то, что использование аллопланта лимитировало (препятствовало) перемещению, «вторжению» соединительнотканных структур вглубь роговицы

В данных экспериментальных условиях мы провели идентификацию клеток регенерата с целью установления их причастности к апоптозу (программированной клеточной гибели)

Для этого были использованы соответствующие иммуноцитохимические реакции

• на определение экспрессии гена проапоптотического белка р53,

• на выявление клеток с фрагментированной ДНК

Результаты проведенных исследований приведены в таблицах

1 и 2.

Таблица 1

Уровень апоптоза по экспрессии гена белка р53 (%) на 7 сутки эксперимента

^^ исследуемые группы изучаемые^^^, клетки интактные животные контрольная серия опытов серии опытов с применением аллопланта

эпителиоциты эоговицы 0,9±0,01 1,8±0,04 2,2±0,04

фибробласты конъюнктивы 0,7±0,01 2,99±0,01 0,7±0,01

фибробласты эоговицы 2,2±0,71 9,9±0,48 4,7±0,07

лимфоциты (в тканях) - 12,4±2,06 3,6±0,28

зернистые лейкоциты (в тканях) - 21,7±1,72 8,7±2,51

Таблица 2

Показатели фрагментации ДНК (%) на 7 сутки эксперимента

исследуемые группы изучаемые^"\_ клетки интактные животные контрольная серия опытов серия опытов с применением аллопланта

эпителиоциты роговицы 1,7±0,01 4,9±0,03 3,7±1,21

фибробласты конъюнктивы 2,7±0,01 9,8±0,07 4,0±0,02

фибробласты роговицы 0,1±0,01 1,1 ±0,02 0,7±0,01

лимфоциты (в тканях) - 28,3±2,33 16,8±3,21

зернистые лейкоциты (в тканях) - 6,7±0,09 3,1±0,04

Таким образом, было установлено, что при экспериментальных исследованиях раневых дефектов контактной области (роговица -конъюнктива) уровни экспрессии проапоптатического белка р53 и фрагментации ядерной ДНК у эпителиоцитов роговицы, фибробластов конъюнктивы и роговицы, лимфоцитов и гранулоцитов крови были достоверно повышены по сравнению с интактными животными Особенно это четко проявлялось в тех клеточных элементах, которые располагались на границе роговицы и склеры. Весьма существенным явилась визуализация апоптотических клеток на «поле воспаления» и зоне регенерата.

Применение аллопланта в экспериментальных условиях позитивно повлияло на количество идентифицируемых клеток с признаками апоптоза (за исключением эпителиоцитов роговицы), где этот показатель был недостоверно более низким (по сравнению с контрольной серией опытов). Следует особо подчеркнуть, что при использовании аллопланта наиболее манифестными были характеристики лейкоцитов, количественный уровень которых с указанными маркерами был достоверно ниже, чем в контроле (вероятность ошибки в данном исследовании р<0,05). Эти факты отразили наше предположение о том, что применение аллопланта способствовало нормализации экспрессии проапоптотических генов у клеток крови и фибробластических

дифферонов, приближая их показатели к величинам, сравнимых со здоровыми животными

Тем не менее, полученные данные иммуноцитохимических исследований однозначно трактовать затруднительно, особенно при отсутствии тех методик, которые позволяют оценить регенераторный потенциал клеток Пока мы можем высказать следующие обобщения на основе собственных результатов, касающихся данного аспекта клеточного гомеостаза посттравматического регенерата-

• Достоверное увеличение (по критериям использованных методов иммунной цитохимии) апоптоза клеток в зоне раневого дефекта конъюнктивы и роговицы, включая клетки на «поле воспаления», может быть скорректировано (в сторону нормализации) при использовании аллопланта с целью лечебной коррекции репаративных гистогенезов

• Возрастание числа апоптотических эпителиоцитов, соединительнотканных элементов и особенно лейкоцитов при раневых дефектах конъюнктивы и роговицы может быть расценено как отягощающий фактор усугубления реабилитационного потенциала тканей глазного яблока

• Существенные различия в числе выявленных нами клеток с признаками апоптоза и фрагментацией ДНК в контрольной и опытной (аллоплант) сериях можно объяснить тем, что, во-первых, их идентификация несомненно определяет разные фазы программированной гибели, а, во-вторых, могут свидетельствовать об обратимости апоптоза

Однако для доказательства этих предположений необходимы дополнительные исследования, в т ч с использованием моноклональных антител, маркирующих экспрессию белков, лимитирующих апоптоз

ВЫВОДЫ

1 Анализ обратившихся с 2002 по 2006 гг. в Оренбургский филиал «ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза им акад С Н Федорова Росздрава» по поводу заболевания птеригиумом показал, что наиболее многочисленную группу составили пациенты в возрасте от 61 до 70 лет со II степенью заболевания, свидетельствующую о преимущественном поражении людей пожилого возраста с видимым косметическим дефектом Значимых различий по полу и по пораженному глазу выявлено не было.

2. Птеригиум в структурно-функциональном отношении характеризуется нарушенным гомеостазом тканей конъюнктивы и

роговицы, выражающийся в изменении эпителиально-стромальных взаимоотношений, дезорганизации волокнистых структур соединительной ткани, нарушениях в микроциркуляторном русле.

3. Созданная экспериментально-гистологическая модель раневых дефектов тканей глаза на животных отражает в общих морфологических чертах закономерности патологических изменений, наблюдаемых при птеригиумах и их осложнениях, что основывается на светооптических, ультраструктурных и молекулярно-генетических критериях оценки репаративных гистогенезов

4 Введение аллопланта для пластики конъюнктивы в зону дефекта корригировало и оптимизировало ход репаративных процессов, обеспечивая стабилизацию гистоструктур конъюнктивы и роговицы, и дальнейшую адекватную регенерацию тканей

5. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности применения аллопланта с целью корригирующего воздействия на тканевые структуры глаза (конъюнктива, роговица) для хирургической коррекции птеригиумов и адекватного замещения послеоперационных дефектов

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Эффективная разработка метода хирургического лечения птеригиума с использованием аллопланта для пластики интраоперационных дефектов конъюнктивы может быть достигнута на основе экспериментально-гистологической модели раневых дефектов (с введением биоматериала)

2 Ультраструктурные и молекулярно-генетические исследования репаративных гистогенезов конъюнктивальных и роговичных структур возможно использовать в качестве критериев оценки эффективности хирургического лечения птеригиумов и реабилитационного потенциала тканей.

3 Данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы при экспериментальном моделировании дефекта, необходимо использовать в лекционном процессе и практических занятиях по гистологии в ВУЗах

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Морфопатогенетическое обоснование возможности использования биоматериала Аллоплант для заместительной пластики дефектов конъюнктивы при обширных птеригиумах / соав В Н Канюков, А А. Стадников // Специальный выпуск Вестника Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, 2005 - С.65-68

2 Заместительная пластика Аллоплантом при обширных птеригиумах / соав В Н. Канюков, Е Ф Чеснокова // Вестник Смоленской медицинской академии - Смоленск, 2005 - №2 - С 73-75

3 Новые технологии в лечении дефектов роговой оболочки и конъюнктивы в условиях мирного и военного времени / соав В Н Канюков, Е.Ф Чеснокова // Матер науч - практ конф «Актуальные вопросы военной медицины» - Оренбург, 2005. — С 494-497

4 Информационные экспериментально-гистологические технологии в офтальмохирургии / соав В Н Канюков, А А Стадников // Матер науч - практ конф «Современные информационные технологии в науке, образовании и практике» - Оренбург, 2005. - С 334-336

5 Некоторые аспекты реорганизации тканей глаза в условиях экспериментального моделирования и замещения дефектов различными аллотрансплантатами / соав В Н Канюков, А А Стадников, А А Горбунов, О М Трубина // Морфология -2006 Т.129 - №4 - С 59

6 Хирургическая коррекция дефектов конъюнктивы различными видами аллотрансплантатов / соав В Н Канюков, А А Стадников, А А. Горбунов // Морфология - 2006 - Т 130 - №5 - С 49.

7 Морфологические и иммуноцитологические исследования реорганизации тканей конъюнктивы при замещении ее различными видами аллотрансплантатов в эксперименте / соав В Н Канюков, А.А Стадников и др II Вестник Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, 2006 -№11(61) -С.137-140

8 Особенности морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы при экспериментальном моделировании дефекта и замещении его различными видами аллотрансплантатов / соав В Н. Канюков, А А Стадников, А А Горбунов // Матер науч совещ «Актуальные проблемы учения о тканях» - СПб, 2006 -С 50-51

9 Морфологическая характеристика особенностей замещения биоматериалом серии «Аллоплант» при пластике дефектов конъюнктивы в эксперименте // Всерос науч. конф молод учен «Актуальные проблемы офтальмологии». - М , 2006. - С.580-582.

10 К вопросу о хирургическом лечении птеригиума / соав В.Н Канюков, А А. Стадников // Матер 41-й науч -практ. конф врачей «Модернизация здравоохранения и совершенствование охраны здоровья населения» - Ульяновск, 2006 -С.217-218

11. Эффективность использования «Аллопланта» для заместительной пластики конъюнктивы в хирургическом лечении птеригиумов / соав В Н. Канюков, А А. Стадников // Матер V облает науч -практ. конф «Интеграция традиционной, народной и академической медицины в системе здравоохранения» - Оренбург, 2006.-С.61-64.

Получено заключение формальной экспертизы по заявке на изобретение «Способ хирургического лечения птеригиума» (В Н Канюков, А А Стадников, Е А Ломухина)

Подписан в печать 13 04 2007 г Формат 60 х 84/16 Уел печ. л 1,5 Тираж 100 экз 460044, г Оренбург, ул Советская, 19 Оренбургский государственный педагогический университет

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ломухина, Елена Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Этиопатогенез и морфогистологический анализ птеригиумов.

1.2 Общая характеристика различных методов оперативного лечения птеригиума и новые тенденции.

Глава II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Общая характеристика объекта исследований.

2.2 Клиническая характеристика больных.

2.3 Методика гистологического исследования птеригиумов.

2.4 Методика экспериментально-гистологического исследования.

2.5 Светооптическое исследование.

2.6 Электронно-микроскопическое исследование.

2.7 Иммуноцитохимическое исследование.

Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Эпидемиологические исследования заболеваемости птеригиумом жителей Оренбургской области.

3.2 Морфофункциональная характеристика птеригиумов (интраоперационного материала).

3.3. Экспериментально-гистологические исследования.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментально-гистологическое обоснование заместительной пластики аллоплантом при обширных птеригиумах"

Актуальность темы

Птеригиум (крыловидная плева) - распространенное заболевание конъюнктивы глазного яблока, обусловливающее понижение остроты зрения вследствие астигматизма в 60-70% случаев или помутнения центра роговицы (при птеригиумах 4 степени). Главным аспектом проблемы лечения заболевания является частое его рецидивирование. Процент рецидивов по данным разных авторов колеблется в пределах 3-56% (К.С. Каранов, 1979; Г.А. Макеева, 1983).

Несмотря на многолетний, интенсивный поиск причин и изучение факторов, приводящих к прогрессирующему течению данного заболевания, проблема птеригиума остается актуальной в современной офтальмологии. Этиопатогенез птеригиума не ясен, особенно в аспектах дисплазии, органотипических нарушений структуры соединительной ткани и микроциркуляторных расстройств (З.П. Волоховская с соавт., 1981, 1993).

Единственным методом лечения птеригиума на сегодняшний день является оперативное вмешательство. Существует большое количество методов оперативного лечения, но ни один из них не гарантирует безрецидивного послеоперационного периода. Многообразие операций говорит о недостаточной их эффективности и стремлении найти более оригинальные способы лечебной коррекции, чтобы исключить рецидивы и удовлетворить косметическим требованиям.

Современная хирургия птеригиума базируется на тщательном удалении измененной конъюнктивальной и субконъюнктивальной тканей с последующим закрытием дефекта. В качестве трансплантатов, пересаживаемых на склеру, используются различные объекты: роговица, конъюнктива, слизистая губы, амнион, твердая мозговая оболочка, хрящ трахеи и бронхов плодов и мертворожденных (В.Д. Кукса, 1966; T.JI. Овсепян, 1971; Г.А.Макеева, 1983; Н.Р. Мазаева, 1989; В.Н. Канюков с соавт., 1994). Однако каждая из этих методик наряду с преимуществами имеет ряд недостатков. Главными недостатками аутотрансплантации являются весьма ограниченная возможность забора тканей и дополнительная травма, наносимая больному при этой манипуляции. Основным препятствием для широкого использования аллотрансплантатов является реакция тканевой несовместимости. При пересадке нативного трансплантата, как правило, развивается иммунное воспаление, приводящее к быстрому лизису пересаженной ткани и последующему рубцеванию.

Все это побудило нас искать новые материалы для заместительной пластики конъюнктивы при обширных птеригиумах.

В Оренбургском филиале ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова Росздрава» под руководством д.м.н. профессора В.Н.Канюкова разработаны и защищены патентами ряд альтернативных методов замещения дефектов различных тканей глаза. В качестве аллотрансплантатов в клинической практике с успехом используются аорта, перикард, капсула почки (В.Н.Канюков с соавт., 1995, 1996, 2001, 2005, 2006).

Во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии профессором Э.Р. Мулдашевым разработан и внедрен в практическое здравоохранение аллоплант для пластики конъюнктивы. Он изготавливается из висцеральных фасций с низким содержанием гиалуроновой кислоты и повышенным содержанием гепарансульфата. Представляет собой тонкую пленку, полупрозрачную, умеренно эластичную и прочную на разрыв. Основные свойства аллопланта для пластики конъюнктивы - это низкие антигенные свойства, предупреждение образования соединительной ткани в области трансплантации, обеспечение направленного роста тканей реципиента.

Несмотря на широкое применение аллопланта при различных видах патологии конъюнктивы, возможность его применения для пластики послеоперационных дефектов при обширных птеригиумах не исследовалась.

Цель исследования - морфофункциональное обоснование возможности использования аллопланта для пластики конъюнктивы с целью замещения интраоперационных дефектов при иссечении обширных птеригиумов.

Для реализации этой цели поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ заболеваемости птеригиумом жителей Оренбургской области, обратившихся с данной патологией в Оренбургский филиал ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росздрава» с 2002 по 2006 гг.

2. Изучить структурно-функциональную характеристику интраоперационного материала птеригиумов.

3. Исследовать особенности морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы в зоне их контакта при экспериментальном моделировании дефекта.

4. Изучить особенности репаративных процессов тканей глаза при замещении дефектов конъюнктивы аллоплантом в эксперименте.

5. Обосновать целесообразность применения аллопланта для пластики интраоперационных дефектов конъюнктивы при иссечении птеригиумов в условиях офтальмохирургической клиники.

Научная новизна исследования

Новизна исследования состоит в получении данных световой и электронной микроскопии эпителиально-стромальных взаимоотношений, особенностей организации волокнистых структур соединительной ткани и кровеносных сосудов птеригиума.

Изучены процессы репаративной регенерации тканей конъюнктивы и роговицы в зоне их контакта на светооптическом, ультраструктурном и молекулярно-генетическом уровнях в условиях экспериментального формирования дефекта и при введении аллопланта для пластики конъюнктивы в интраоперационную рану.

Впервые проведена идентификация клеток регенерата (в том числе в условиях введения аллопланта) с целью установления уровня апоптоза по экспрессии проапоптотического гена белка р53 и показателей фрагментации ДНК.

Практическая значимость работы

Полученные новые данные по морфофункциональной реорганизации тканей глаза (конъюнктива, роговица) делают возможным использование аллопланта с целью управления репаративными гистогенезами в хирургии птеригиума.

Внедрение результатов исследования

Полученные данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы, а также в условиях замещения слизистой оболочки аллоплантом, служат теоретическим обоснованием для использования биоматериала с целью хирургической коррекции глазной патологии в условиях офтальмохирургических клиник города.

Согласно этим новым данным ведется разработка метода хирургического лечения птеригиума.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Развитие и формирование клинического фенотипа птеригиума происходит на основе выраженных нарушений тканевого гомеостаза, приводящих к декомпозиции волокнистых комплексов соединительной ткани конъюнктивы, мезенхимальным дистрофиям (мукоидное набухание и фибриноидные изменения).

2. Метод повреждения (дефектов) конъюнктивы и роговицы у экспериментальных животных позволяет оценить диапазон регенераторных потенций клеток и тканей, характер их воспалительных разрастаний, что может быть применено для оценки специфических гистологических изменений, наблюдаемых при развитии птеригиумов.

3. Использование аллопланта оптимизирует репаративный гистогенез в зоне контакта конъюнктивы и роговицы, обеспечивает стационарное поддержание их нормальной гистоструктуры и компенсирует физиологическое снашивание и алоптоз клеточных элементов после нанесения дефекта. В своей совокупности это приводит к полному восстановлению поврежденного участка. 4. В своей совокупности полученные результаты обосновывают целесообразность использования аллопланта для хирургической коррекции птеригиумов и профилактики их послеоперационных осложнений.

Апробация работы и публикации результатов исследования

Материалы диссертации представлены и обсуждены на зональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы офтальмологии», г. Орск, 2005; VI Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы военной медицины», г. Оренбург, 2005; IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии, г. Екатеринбург, 2006 (диплом за лучший стендовый доклад); на VII Конгрессе международной ассоциации морфологов, г. Орел, 2006; заседании Оренбургского регионального отделения Общества офтальмологов России, 2006; областном конкурсе инновационных проектов, г. Оренбург, 2006; конкурсе, проводимом Российским фондом фундаментальных исследований, г. Москва, 2006; областном конкурсе молодых ученых, г. Оренбург, 2006; VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций, г. Москва, 2007 (серебряная медаль).

По материалам диссертации опубликовано И научных работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 2 таблицами, 35 рисунками. Список литературы содержит 230 источников, в том числе 170 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Ломухина, Елена Алексеевна

выводы

1. Анализ обратившихся с 2002 по 2006 гг. в Оренбургский филиал «ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза им. акад. С.Н.Федорова Росздрава» по поводу заболевания птеригиумом показал, что наиболее многочисленную группу составили пациенты в возрасте от 61 до 70 лет со II степенью заболевания, свидетельствующую о преимущественном поражении людей пожилого возраста с видимым косметическим дефектом. Значимых различий по полу и по пораженному глазу выявлено не было.

2. Птеригиум в структурно-функциональном отношении характеризуется нарушенным гомеостазом тканей конъюнктивы и роговицы, выражающийся в изменении эпителиально-стромальных взаимоотношений, дезорганизации волокнистых структур соединительной ткани, нарушениях в микроциркуляторном русле.

3. Созданная экспериментально-гистологическая модель раневых дефектов тканей глаза на животных, отражает в общих морфологических чертах закономерности патологических изменений, наблюдаемых при птеригиумах, что основывается на светооптических, ультраструктурных и молекулярно-генетических критериях оценки репаративных гистогенезов.

4. Введение аллопланта для пластики конъюнктивы в зону дефекта корригировало и оптимизировало ход репаративных процессов, обеспечивая стабилизацию гистоструктур конъюнктивы и роговицы, и дальнейшую адекватную регенерацию тканей.

5. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности применения аллопланта с целью корригирующего воздействия на тканевые структуры глаза (конъюнктива, роговица) для хирургической коррекции птеригиумов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Эффективная разработка метода хирургического лечения птеригиума с использованием аллопланта для пластики интраоперационных дефектов конъюнктивы может быть достигнута на основе экспериментально-гистологической модели раневых дефектов (с введением биоматериала).

2. Ультраструктурные и молекулярно-генетические исследования репаративных гистогенезов конъюнктивальных и роговичных структур возможно использовать в качестве критериев оценки эффективности хирургического лечения птеригиумов и реабилитационного потенциала тканей.

3. Данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы при экспериментальном моделировании дефекта, необходимо использовать в лекционном процессе и практических занятиях по гистологии в ВУЗах.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ломухина, Елена Алексеевна, Оренбург

1. Барцевич, Б.Н. К методике удаления крыловидной плевы / Б.Н.Барцевич

2. Сб. науч. трудов врачей окружного военного госпиталя СевероКавказского военного округа. Ростов-на-Дону, 1970. - С.210-215.

3. Беляев, B.C. Руководство по глазной хирургии / B.C. Беляева. М., 1988.1. С.114-120.

4. Войшвилло, Р.Ф. Корнеосклеральная и экстракорнеальная кератопластикапри лечении больных с рецидивирующим птеригиумом и бельмами в сочетании с неполным симблефароном одного века / Р.Ф. Войшвилло,

5. B.К. Суркова // Повреждение органа зрения продуктами нефти, химии и др. факторами. Уфа, 1975. - С. 123-127.

6. Волоховская, З.П. Морфо-функциональная характеристика микроциркуляторных нарушений в патогенезе птеригиума / З.П. Волоховская, М.Я. Сахатов // Офтальмологический журнал. 1993. - № .2 - С. 108-112.

7. Волоховская, З.П. О дистрофии соединительнотканной основы птеригиума

8. З.П. Волоховская, Е.А. Грацианская, К.С. Каранов // Вестник офтальмологии. 1981. - №4. - С.52-53.

9. Джалиашвили, О.А. Использование гомотканей при хирургическом лечениипсевдоптеригиума (экспериментальные исследования) /

10. О.А. Джалиашвили, Ф.М. Касуха // Тр. военно-мед. акад. им. С.М.Кирова. 1972. - Вып. 191. -С.77-81.

11. Золотарев, А.В. Хирургическое лечение рецидивирующего птеригиума спластикой силиковысушенной амниотической мембраной / А.В. Золотарев, Е.С. Милюдин // Вестник офтальмологии. 2007. - №1. 1. C.39-42.

12. Кадыров, Р.З. Барьерная послойная кератопластика аллотрансплантатомсерии «Аллоплант»: Автореф. дис. канд. мед. наук. Красноярск, 1998. -22с.

13. Канюков, В.Н. Аллотрансплантация аортой в пластической хирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2001. -128с.

14. Канюков, В.Н. Альтернативный материал для пластики конъюнктивы / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, А.А. Горбунов // Новые технологии микрохирургии глаза: Материалы IV научно-практической конференции. Оренбург, 1995. - С.87-88.

15. Канюков, В.Н. Аутопластические варианты микрохирургии птергиума / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, А.А. Горбунов // Вопросы оперативной микрохирургии и микрохирургической анатомии: Материалы Российской научной конференции. Оренбург, 1997. - С.48.

16. Канюков, В.Н. Биологическое и экспериментально-гистологическое обоснование новых технологий в офтальмохирургии / В.Н. Канюков,

17. A.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2005. - 160с.

18. Канюков, В.Н. Способ пластики конъюнктивы придаточного аппарата глаза и орбиты / В.Н. Канюков, А.А. Горбунов, О.М. Трубина // Пластическая хирургия: Материалы научно-практической конференции. -М., 1996. -С.75-76.

19. Канюков, В.Н. Способы оптимизации микрохирургии птеригиума /

20. B.Н. Канюков, А.А. Горбунов. Оренбург, 1997. - 18с.

21. Канюков, В.Н. Экспериментально-гистологические и клинические аспекты реконструктивной офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников. -Оренбург, 2006. 128с.

22. Каранов, К.С. Удаление птеригиума и его морфологическое обоснование / К.С. Каранов // Здравоохранение Туркменистана. 1979. - №3. - С.44-45.

23. Коваленко, П.П. Основы трансплантологии / П.П. Коваленко. Ростов-на-Дону, 1975.-180с.

24. Кольцова, В.М. Модифицированная операция для удаления птеригиума / В.М. Кольцова // Вопр. клин, офтальмологии и глазных травм. -Красноярск, 1974. С.73-76.

25. Кольцова, В.М. Распространение птеригиума в Красноярском крае и консервативное лечение его: Автореф. дис. канд. мед. наук. — Красноярск, 1966. 17с.

26. Король, Е.А. Влияние птеригиума на рефракцию глаза / Е.А. Король // Здравоохранение Белоруссии 1965, - №10. - С.49-50.

27. Красников, П.Г. Послойная периферическая пересадка роговой оболочки с каймой склеры при рецидивирующих птеригиумах / П.Г. Красников // Вестник офтальмологии. 1976. - №3. - С.22-24.

28. Кукса, В.Д. Периферическая послойная пересадка роговой оболочки: Автореф. дис. канд. мед. наук. Одесса, 1966. - 19с.

29. Курлов, И.Н. О свободной пересадке конъюнктивы при удалении птеригиума / И.Н. Курлов, П.Ф. Гончар // Сб. науч. тр. глазной больницы -Кишинев, 1959. С.139-144.

30. Левкоева, Э.Ф. Птеригиум, его патогенез и патологическая анатомия / Э.Ф. Левкоева // Офтальмологический журнал. 1962. - №1. - С.3-8.

31. Лисиченко, Б.И. Периферическая барьерная аутопластика при первичном и рецидивирующем птеригиуме / Б.И. Лисиченко // Офтальмологический журнал. 1974. - №7. - С.487-488.

32. Мажорцева, В.П. Послойная пересадка роговицы при рецидивирующем птеригиуме / В.П. Мажорцева // Офтальмологический журнал. 1962. -№1. -С.14-16.

33. Мазаева, Н.Р. Брефопластика при птеригиуме / Н.Р. Мазаева // Вестник офтальмологии. 1989. - №4. - С.30-32.

34. Макеева, Г.А. Применение амниона и твердой мозговой оболочки для барьерной пластики при хирургическом лечении птеригиума / Г.А. Макеева // Офтальмологический журнал. 1983. - №2. - С.104-106.

35. Мамедова, Т.М. Клинико-морфологические данные крыловидной плевы / Т.М. Мамедова // Учен, записки Азерб. ин-та усовершенствования врачей. Баку, 1967. - Вып.2. - Т.8. - С.177-180.

36. Морозова, О. Д. Гомотрансплантат трупной конъюнктивы при симблефаронах и рецидивирующих птеригиумах: Автореф. дис. канд. мед. наук -М., 1968.-21с.

37. Морозова, О.Д. Роговично-конъюнктивальная пластика в хирургическом лечении симблефарона и рецидивирующего птеригиума / О.Д. Морозова // Вестн. офтальмологии. 1971. - №2. - С.24-27.

38. Мулдашев, Э.Р. Теоретические и прикладные аспекты создания аллотрансплантатов серии «Alloplant»: Автореф. дис.доктор, мед. наук. — СПб., 1994.-40с.

39. Муслимов, С.А. Морфологические аспекты регенеративной хирургии / С.А. Муслимов. Уфа: Башкортостан, 2000. - 166с.

40. Нигматуллин, Р.Т. Морфологические аспекты пересадки соединительнотканных аллотрансплантатов: Автореф. дис. доктор, мед. наук. — Новосибирск, 1996. 40с.

41. Новикова, JI.B. Иммуноцитологические методы исследования / JI.B. Новикова, К.Н. Лебедева, Э.М. Яковлева. Саранск: Из-во Мордовского Ун-та, 1981. - 92с.

42. Оптимизация некоторых технологий в пластической офтальмологии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина, А.А. Горбунов // Актуальные проблемы офтальмологии: Сб. науч. тр. Уфа, 1996. — С.49-52.

43. Перспективные направления алло(гомо) пластики в офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина, А.А. Горбунов // Брошевские чтения: Тезисы Всероссийской научно-практической конференции. Самара, 1997. - С. 143-144.

44. Перспективный донорский материал для реконструкции в офтальмологии /

45. B.Н. Канюков, А.А. Стадников, В.И. Коптев и др. // Труды Оренбургского межобластного офтальмоонкологического центра. Оренбург, 1996.1. C.49-51.

46. Птеригиум вопросы унифицированного подхода / В.Н.Канюков, А.А. Горбунов, С.И. Семеняченко, В.Г. Хейфец // Новые технологии микрохирургии глаза: Материалы II научно-практической конференции. -Оренбург, 1994. - С.39-42.

47. Птеригиум как иммунопатологический очаг конъюнктивы / Э.Р. Мулдашев, В.У. Галимова, Р.Т. Нигматуллин и др. // Микроциркуляторное русло соединительнотканных образований. — Уфа.,1988. С.67-70.

48. Пучковская, Н.А. Пересадка роговой оболочки при осложненных бельмах / Н.А. Пучковская. Киев: Госмедиздат УССР, 1960. - 216с.

49. Радзиковский, Б.Л. К технике удаления птеригиума от роговицы / Б.Л. Радзиковский // Вестник офтальмологии. 1940. - Т.17. - Вып.1/2. -С.139-140.

50. Сомов, Е.Е. Пластические операции на глазном яблоке при различных формах крыловидной плевы / Е.Е. Сомов, Ф. Касуха // Вестник офтальмологии. 1972. - №3. - С.63-66.

51. Стадников, А.А. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействиях про- и эукариот. Структурно-функциональные аспекты / А.А. Стадников. Оренбург, 2001. - 244с.

52. Струков, А.И. Болезни соединительной ткани с иммунными нарушениями / А.И. Струков // Архив патологии. 1972. - Т.32. - Вып.7. - С.35-40.

53. Струков, А.И. Общая патология человека / А.И. Струков, В.В.Серов, Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1982. - 653с.

54. Титаренко, З.Д. Птеригиум / З.Д. Титаренко, П.Ф. Гончар, И.В. Титаренко. Кишинев: Штиница, 1992. - 87с.

55. Хасанова, Н.Х. Послойная периферическая обезвоженной роговицы при рецидивирующих и обширных первичных птеригиумах / Н.Х. Хасанова, З.М. Осипова, З.Г. Камалов // Офтальмологический журнал. 1973. - №3. -С.235.

56. Хирургическое лечение птеригиума по методу аутопластики свободным конъюнктивальным лоскутом / В.П. Фокин, JI.H. Борискина, И.А. Бугаенко и др. // Вестник ОГУ. 2004. - №38. - С.131-132.

57. Хлопин, Н.Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии / Н.Г. Хлопин. Л.: АНСССР, 1946. - 490с.

58. Чилова-Атанасова, Н.М. К вопросу образования эпителиальных инвагинаций и каналов при птеригиуме / Н.М. Чилова-Атанасова // Офтальмология (София). 1972. - №2. - С.62.

59. Шевалев, Е.В. Применение частичной послойной пересадки роговой оболочки при рецидивирующих птеригиумах в условиях районнойбольницы / Е.В. Шевалев // Актуальные вопросы офтальмологии. Киев, 1970. -С.194-195.

60. Шишкин, М.М. Лимбальная аутотрансплантация и лимбальная аллотрансплантация в хирургическом лечении птеригиума / М.М. Шишкин, Т.А. Цыганова // Вестник ОГУ. 2006. - №11(61). - С.309-312.

61. Шишкин, М.М. Лимбальная трансплантация как профилактика рецидивов птеригиума / М.М. Шишкин, Т.А. Цыганова // Вестник ОГУ. 2004. — №38. - С. 132.

62. Ярилин, А.А. Апоптоз и его роль в целостном организме / А.А. Ярилин // Глаукома. 2003. - №2. - С.46-54.

63. A comparative study of recurrent pterygium surgery: limbal conjunctival autograft transplantation versus mitomycin С with conjunctival flap / F.M. Mutlu, G. Sobaci, T. Tatar et al. // Ophthalmology. 1999. - Vol.106. -P.817-821.

64. A heparin-binding growth factor secreted by macrophage-like cells that is related to EGF / S. Higashiyama, J.A. Abraham, J. Miller et al. // Science. -1991. Vol.251. - P.936-939.

65. A randomized trial comparing mitomycin С and conjunctival autograft after excision of primary pterygium / P.P. Chen, R.G. Ariyasu, V. Kaza et al. // Am. J.Ophthalmol. 1995. - Vol.120. -P.151-160.

66. Abnormal expression of the p53 tumor suppressor gene in the conjunctiva of patients with pterygium / D.T. Tan, A.S. Lim, H.S. Goh et al. // Am. J.Ophthalmol. 1997. - Vol.123. - №3. - P.404-405.

67. Activation of HER-4 by heparin-binding EGF-like growth factor stimulates chemotaxis but not proliferation / K. Elenius, S. Paul, G. Allison et al. //EMBOJ. 1997. - Vol.16. -P.1268-1278.

68. Adamis, A.P. The management of pterygium / A.P. Adamis, T. Starck, K.R. Kenyon // Ophthalmol. Clin. North. Am. 1990. - Vol.3. - P.611-623.

69. Adhesion of regenerating corneal epithelium. The role of basement membrane / A.A. Knodadoust, A.M. Silverstein, K.R. Kenyon et al. // Am. J. Ophthalmol.- 1968. Vol.65. - P.339-348.

70. A1-Rajhi, A.A. Recurrence of climatic droplet keratopathy / A.A. Al-Rajhi, J.A. Cameron // Acta Ophthalmol. Scand. 1996. - Vol.74. - P.642-644.

71. Alsagoff, Z. Necrotising scleritis after bare sclera excision of pterygium / Z. Alsagoff, D.T. Tan, S.F. Chee // Br.J.Ophthalmol. 2000. - Vol.84. - №9.- P.1050 1052.

72. Amniotic membrane graft for primary pterygium comparison with conjunctival autograft and topical mitomycin С treatment / D.H.K. Ma, L.C. See, S.B. Liau et al. // Br.J.Ophthalmol. 2000. - Vol.84. - №9. - P.973 - 978.

73. Amniotic membrane transplantation after extensive removal of primary and recurrent pterygia / A. Solomon, R.T.F. Pires, C.G. Scheffer et al. // Ophthalmology. 2001. - Vol.108. - №3. - P.449-460.

74. Amniotic membrane transplantation with conjunctival autograft for recurrent pterygium / J. Shimazaki, K. Kosaka, S. Shimmura et al. // Ophthalmology. -2003. Vol.110. - №1. - P.l 19-124.

75. Analysis of the mechanism of unresponsiveness produced by haptens pained on skin exposed to low dose ultraviolet radiation / C.A. Elmets, P.R. Bergstresser, R. Tigelaar et al. // J. Exp. Med. 1983. - Vol.158. - P.781 - 794.

76. Anduze, A.L. Merest sclera technique for primary pterygium surgery / A.L. Anduze // Ophthalmic. Surgery. 1989. - Vol.20. - P.892-893.

77. Anduze, A.L. Pterygium surgery with mitomycin-C: ten-year results / A.L. Anduze // Ophthalmic. Surg. Lasers. 2001. - Vol.32. - P.341-345.

78. Apoptosis and apoptosis related gene expression in normal conjunctiva and pterygium / Donald Т.Н. Tan, Wen Ying Tang, Yan Ping Liu et al. // Br.J.Ophthalmol. 2000. - Vol.84. - №2. - P.212-216.

79. Apple, D.J. Conjunctiva and eyelids / D.J.Apple, M.F. Rabb // Ocular pathology: clinical applications and self-assessment., 5th ed. St Louis: Mosby. -1998. -P.563-604.

80. Basic research conducted on alloplant biomaterials / E.R. Muldashev, S.A. Muslimov, R.T. Nigmatullin // Eur.J.Ophthalmol. 1999. - Vol.9. - P.8-13.

81. Bergmanson, J.P.G. Corneal damage in photokeratitis why is it so painful? / J.P.G. Bergmanson // Optom.Vis.Sci. 1990. - Vol.67. P.407-413.

82. Biochemical transformation of bulbar conjunctiva into corneal epithelium; an electrophoretic analysis / T.M. Harris, E.R. Berry, A.S. Pakurar et al. // Exp. Eye Res. 1985. - Vol.41. -P.597.

83. Block in anaphase chromosome separation caused by a telomerase template mutation / K.E. Kirk, B.P. Harmon, I.K. Reichardt et al. // Science. 1997. -Vol.276.-P.1478-1481.

84. Blum, H.F. Hyperplasia induced by ultraviolet light: possible relationship to cancer induction / H.F. Blum // Oxford, England: Pergamon Press. 1969. -P.83-89.

85. Boudreau, N. Suppression of apoptosis by basement membrane requires three-dimensional tissue organization and withdrawal from the cell cycle / N. Boudreau, Z. Werb, M.J. Bissell // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. -Vol.93.-P.3500-3513.

86. Buck, R.C. Ultrastructure of conjunctival epithelium replacing corneal epithelium / R.C. Buck // Curr. Eye Res. 1986. - Vol.5. - P. 149.

87. Chang-Ping Lin Clinical experiences of infectious scleral ulceration: a complication of pterygium operation / Chang-Ping Lin, Min-Hsiu Shih, Ming-Chi Tsai // Br.J.Ophthalmol. 1997. - Vol.81. - P.980-983.

88. Chen, JJ.Y. Abnormal corneal epithelial wound healing in partial-thickness removal of limbal basal epithelium / J.J.Y. Chen, S.C.G. Tseng // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1991. - Vol.32. -P.2219.

89. Chen, J.J.Y. Corneal epithelial wound healing in partial limbal deficiency / JJ.Y. Chen, S.C.G. Tseng // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1990. - Vol.31. -P.1301.

90. Chen, J.K. Fibroblasts isolated from human pterygia exhibit transformed cell characteristics / J.K. Chen, R.J. Tsai, S.S. Lin // In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 1994. - Vol.30A. - P.243-248.

91. Comparison of conjunctival autografts, amniotic membrane grafts and primary closure for pterygium excision / P. Prabhasawat, K. Barton, G. Burkett et al. // Ophthalmology. 1997. - Vol.104. - №6. - P.974-985.

92. Conjunctival autografting in the surgical management of pterygium / P. Riordan-Eva, I. Kielhorn, L.A. Ficker et al. // Eye. 1993. - Vol.7. - P.634-638.

93. Conjunctival transdifferentiation is due to incomplete removal of limbal basal epithelium / F.E. Kruse, J.J.Y. Chen, R.J.F. Tsai et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 1990.-Vol.31.-P.1903.

94. Corneal changes associated with chronic UV irradiation // H.R.Taylor, S.K. West, F.S.Rosenthal et al. // Arch. Ophthalmol. 1989. - Vol.107. -P.1481-1484.

95. Coroneo, M.T. Peripheral light focusing by anterior eye and the ophthalmohelioses / M.T. Coroneo, N.W. Miiller-Stolzenburg, A. Ho // Ophthalmic.Surg. 1991. - Vol.22. - P.705-711.

96. Coroneo, M.T. Pterygium as an early indicator of ultrviolet insolation: a hypothesis / M.T. Coroneo // Br.J.Ophthalmol. 1993. - Vol.77. - P.734-739.

97. Cullen, A.P. Anterior eye focusing of ultraviolet and visible radiation albedo / A.P. Cullen, O.M. Oriowo, A.C. Viosin // Clin.Exp.Optom. 1997. - Vol.80. -P.80-86.

98. Culture and characterization of epithelial cells from human pterygia / Nick Di Girolamo, Nicodemus Tedla, Rakesh K. Kumar et al. // Br.J.Ophthalmol. 1999. - Vol.83. - №9. - P. 1077-1082.

99. De Rotth, A. Plastic repair of conjunctival defects with fetal membrane / A. De Rotth // Arch. Ophthalmol. 1940. - Vol.23. - P.235-240.

100. Decreased pigment epithelium-derived factor and increased vascular endothelial growth factor levels in pterygia / J. Jin, M. Guan, J. Sima et al. // Cornea. -2003. Vol.22. -№5. - P.473-477.

101. DeLong, M.J. Apoptosis: a modulator of cellular homeostasis and disease states / M.J. DeLong // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1998. - Vol.842. - P.42-90.

102. Detection of human papillomavirus DNA in pterygia from different geographical regions / F. Piras, P.S. Moore, J. Ugalde et al. // Br.J.Ophthalmol. 2003. - Vol.87. - №7. - P.864-866.

103. Detorakis, E.T. Detection of herpes simplex virus and human papilloma virus in ophthalmic pterygium / E.T. Detorakis, G. Sourvinos, D.A. Spandidos // Cornea. 2001. - Vol.20. - P.164-167.

104. Detorakis, E.T. Molecular genetic alterations and viral presence in ophthalmic pterygium / E.T. Detorakis, E.E. Drakonaki, D.A. Spandidos // Int.J.Mol.Med. -2000.-Vol.6.-P.35-41.

105. Dowlut, M.S. Les pterygions recidivants: frequence et correction par autogreffe conjonctivale / M.S. Dowlut, M.Y. Laflamme // Can. J. Ophthalmol. 1981. — V0I.I6.-P.119-120.

106. Durand, L. Resultates du traitment des pterygions graves et recidivants par greffe corneo-conjonctivalle / L. Durand, L. Magnard // Ann. Oculist. — 1971. — Vol.204.-P. 1047-1076.

107. Dushku, N. P53 expression in altered limbal basal cells of Pingueculae, pterygia, and limbal tumors / N. Dushku, T.W. Reid // Curr.Eye Res. 1997. -Vol.16.-№12.-P.l 179-1192.

108. Dushku, N. Immunohistochemical evidence that human pterygia originate from an invasion of vimentin-expressing altered limbal epithelial basal cells / N. Dushku, T.W. Reid // Curr.Eye.Res. 1994. - Vol.13. - P.473-481.

109. Dushku, N. Immunohistochemical evidence that pterygia arise from altered limbal epithelial basal stem cells / N. Dushku, N. Tyler T.W. Reid // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1993. - Vol.34. - P.1013.

110. Ebadi, A.G. Operation du pterygium par la methode de la greffe libre de conjonctive / A.G. Ebadi // Am.Oculist. 1957. - Vol.190. - P.778-780.

111. Effect of pterygium morphology on pterygium recurrence in a controlled trial comparing conjunctival autografting with bare sclera excision / D.T. Tan, S.P. Chee, K.B. Dear et al. // Arch. Ophthalmol. 1997. - Vol.115. - №10. -P.1235-1240.

112. Efficacy and safety of recurrent pterygium surgery using human processed pericardium / L.S. Alvarenga, L.B. de Sousa, D. de Freitas et al. // Cornea. -2002. Vol.21. - №6. - P.542-545.

113. Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells / G. Cotsarelis, S.Z. Cheng, G. Dong et al. // Cell. 1989. - Vol.57. - P.201-209.

114. Expression of HLA antigens, B-2 microglobulin and enzymes by human amniotic membrane / M. Adinofli, C.A. Akle, I. McColl et al. // Nature. — 1982. Vol.695. - P.325-327.

115. Extension of life-span by introduction of telomerase into normal human cells / A.G. Bodnar, M. Ouellette, M. Frolkis et al. // Science. 1998. - Vol.279. -P.349-352.

116. Farrell, P.L.R. Bacterial corneoscleritis complicating pterygium excision / P.R.L. Farrell, R.E. Smith // Am.J.Ophthalmol. 1989. - Vol.107. - P.515-517.

117. Foster, C.S. The sclera: infectious scleritis / C.J. Foster, Maza Maite Sainz de la. // New York: Springer-Verlag, 1994. P.242 - 277.

118. Friedenwald, J.S. Effects of mustards and nitrogen mustard on mitotic and wound healing activities of the corneal epithelium / J.S. Friedenwald, W. Buschke, R.O. Scholtz // Hopkins Hosp. Bull. 1948. - Vol.82. - P. 148.

119. Friedenwald, J.S. Growth pressure and metaplasia of conjunctival and corneal epithelium / J.S. Friedenwald // Doc. Ophthalmol. 1951. - Vol.5/6. - P. 184.

120. Frucht-Pery, J. Single dosage of mitomycin С for prevention of recurrent pterygium: preliminary report / J. Frucht-Pery, M. Ilsar, I. Hemo // Cornea. -1994.-Vol.13.-P.411-413.

121. Fungal corneoscleritis complicating beta irradiation- induced scleral necrosis following pterygium excision / A.P. Moriarty, G.J. Crawfold, I.L. McAllister, I.J. Constable // Eye. 1993. - Vol.7. - P.525-528.

122. Galanopoulous, A. Necrotising anterior scleritis after pterygium surgery / A. Galanopoulous, G. Snibson, J. O'Day // Aust. NZ. J. Ophthalmol. 1994. -Vol.22. -P.3.

123. Glaubiger, D. Antitumor antibiotics. In: Chabner В A, ed. / Pharmacologic principles of cancer treatment // Philadelphia: WB Saunders, 1982. P.407-410.

124. Greider, C.W. A telomeric sequence in the RNA of Tetrahymena telomerase required for telomere repeat synthesis / C.W. Greider, E.H. Blackburn // Nature. 1989. -Vol.337. -P.331-337.

125. Guo, M. Basement membrane and human epidermal differentiation in vitro / M. Guo, F. Grinnell // J. Invest. Dermatol. 1989. - Vol.93. - P.372-378.

126. Hansen, A. Astigmatism and surface phenomena in pterygium / A.Hansen, M. Norn // Acta Ophthalmol. 1970. - Vol.5. - P.174-181.

127. Hara, T. Pterygium surgery using the principle of contact inhibition and limbal transplanted pedicle conjunctival strip / Т. Нага, E. Shoji, Y. Obara // Ophthalmic. Surg. 1994. - Vol.25. - P.95-98.

128. Hirst, L.W. Pterygium recurrence time / L.W. Hirst, A. Sebban, D. Chant // Ophthalmology. 1994. - Vol.101. - P.755-758.

129. Huang, A.J.W. Corneal epithelial wound healing in the absence of limbal epithelium / A.J.W. Huang, S.C.G. Tseng // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1991.- Vol.32. -P.96.

130. Human papillomavirus DNA in a recurrent squamous carcinoma of the eyelid / J.M. McDonnell, P.J. McDonnell, W.C. Stout et al. // Arch. Ophthalmol. -1989. Vol. 107. - P. 1631 -1634.

131. Human papillomavirus in pterygium / M.J.Gallagher, A. Giannoudis, C.S. Herrington et al. // Br.J.Ophthalmol. 2001. - Vol.85. - P.782-784.

132. Human papillomavirus in pterygium / S. Varinli, I. Varinli, M. Koksal Erkisi et al. // Cent.Afr.J.Med. 1994. - Vol.40. - P.24-26.

133. Hypoxic stimulation of vascular endothelial growth factor expression in vitro and in vivo / A. Minchenko, T. Bauer, S. Salceda // Lab.Invest. 1994. Vol.71. -P.374-379.

134. Immunogenicity of human amniotic membrane epithelial cells after transplantation into volunteers / C.A. Akle, M. Adinofli, K.I. Welsh et al. // Lancet. 1981. - Vol.2. - P. 1003-1005.

135. Immunopathology of scleritis / L.P. Fong, Sainz de LMM, B.A. Rice et al // Ophthalmology. 1991. - Vol.98. - P.472-479.

136. Intrascleral dissemination of infectious scleritis following pterygium excision / Ching-Hsi Hsiao, James J.Y. Chen, Samuel C.M. Huang, Huey-Kang Ma et al // Br.J.Ophthalmol. 1998. - Vol.82. - №1. - P.29-34.

137. Jimenez, В. Mechanistic insights on the inhibition of the tumor angiogenesis / B. Jimenez, O.V. Volpert // J. Mol. Med. 2001. - Vol.78. - P.663-672.

138. Kampitak, K. The effect of pterygium on corneal astigmatism / K. Kampitak // J.Med.Assoc.Thailand. 2003. - Vol.86. - N.l. - P. 16-23.

139. Kaya, M. Vertical conjunctival bridge flaps in pterygium surgery / M. Kaya, M. Tunc // Ophthalmic. Surg. Lasers. 2003. - Vol.34. - №4. - P.279-283.

140. Kenyon, K.R. Conjunctival autograft transplantation for advanced and recurrent pterygium / K.R. Kenyon, M.D. Wagoner, M.E. Hettinger // Ophthalmology. 1985. - Vol.92. - P.1461-1470.

141. Keratin-like proteins in corneal and conjunctival epithelium are different / S. Kinoshita, J. Friend, T.C. Kiorpes et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1983.-Vol.24.-P.577.

142. King, J.J.H. The pterygium. Brief review and evaluation of certain methods of treatment / J.J.H. King // Arch. Ophthalmol. 1950. - Vol.44. - P.854-869.

143. Kintworth, G.K. Chronic actinic keratopathy associated with conjunctival elastosis (pinguecula) and typified by characteristic extracellular concentration / G.K. Kintworth // Am. J. Pathol. 1972. - Vol.67. - P.372.

144. Kruse, F.E. Stem cells and corneal epithelial regeneration / F.E. Kruse //Eye. 1994. - Vol.8. - P. 170-183.

145. Lack of human Papillomavirus in pterygium of Chinese patients from Taiwan / K-H. Chen, W-M Hsu, C-C. Cheng et al // Br.J.Ophthalmol. 2003. - Vol.87. -№8. - P.1046-1048.

146. Ladoux, A. Hypoxia is a strong inducer of vascular endothelial growth factor mRNA expression in the heart / A. Ladoux, C. Frelin // Biochem. Biophys.Res.Commun. 1993. - Vol.195. -P.1005-1010.

147. Lathja, L.G. Stem cells concepts / L.G. Lathja // Differentiation. 1979. -Vol.14. -P.23.

148. Lauer, S.A. Human papillomavirus type 18 in conjunctival intraepithelial neoplasia / S.A. Lauer, J.S. Malter, J.R. Meier // Am.J.Ophthalmol. 1990. -Vol.110.-P.23-27.

149. Lebold, C.P. The life history of cells in renewing systems / C.P. Lebold // Am. J. Anat. 1981. - Vol.160. - P.l 14.

150. Levine, A.J. P53, the cellular gatekeeper for growth and division / A.J. Levine // Cell. 1997. - Vol.88. - P.323-331.

151. Lewallen, S. A randomized trial of conjunctival autografting for pterygium in the tropics / S. Lewallen // Ophthalmology. 1989. - Vol.96. - P.1612-1614.

152. Ley, R.D. Hair growth induction by ultraviolet radiation in the marsupial Monodelphis domestica /R.D. Ley, L.A. Applegate//Arch. Dermatol. 1987. -Vol.123.-P.1032-1035.

153. Limbal location of corneal epithelial stem cells / R.M. Lavker, G. Cotsarelis, G. Dong et al. // The cornea. Transactions of the world congress on the cornea. -1988.-Vol.23.

154. Limbal-conjunctival autograft transplantation in cases with recurrent pterygium / M. Guler, G. Sobaci, S. Ilker et al. // Acta. Ophthalmol. 1994. - Vol.72. -P.721-726.

155. Loss of the antiangiogenic pigment epithelium-derived factor in patients with angiogenic eye disease / J. Spanger, M. Osterhoff, M. Reimann et al. // Diabetes. 2001. - Vol.50. - P.2641-2645.

156. Low-dose intraoperative mitomycin-C versus conjunctival autograft in primary pterygium surgery: long term follow-up / A. Sharma, A. Gupta, J. Ram et al. // Ophthalmic. Surg. Lasers. 2000. - Vol.31. - №4. - P.301-307.

157. Malcolm, E. Histology of pterygium: an electron microscopic study / E.Malcolm, M.E.Cameron // Br.J.Ophthalmol. 1983. - Vol.67. -P.604 - 608.

158. Mann, I. A study of mustard gas lesions of the eyes of rabbits and man /1. Mann, B.D. Pullinger // Proc. R. Soc. Med. 1942. - Vol.35. - P.229.

159. Maumanee, A.E. Histopathology of the ocular lesions produced by sulfur and nitrogen mustard / A.E. Maumanee, R.O. Scholtz // Hopkins Hosp. Bull. -1948.-Vol.82.-P.121.

160. Mechanism of abnormal elastin gene expression in the pinguecular part of pterygia /1-Jong Wang, Fung-Roung Hu, Peh-Jer Chen et al. // Am.J.Pathology.- 2000. Vol.157. - №4. - P. 1269-1276.

161. Meller, D. Conjunctival epithelial cell differentiation on amniotic membrane / D. Meller, S.C.G. Tseng // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. - Vol.40. -P.878 - 886.

162. Microsatellite instability and loss of heterozygosity in human pterygia / D.A. Spandidos, G. Sourvinos, H. Kiaris et al. // Br.J.Ophthalmol. 1997. -Vol.81.-№6.-P.493-496.

163. Microsatellite instability in human atherosclerotic plaques / D.A. Spandidos, M. Ergazaki, D. Arvanitis et al // Biochem.Biophys. Res.Commun. 1996. -Vol.220. -P.137-140.

164. Miller, J.W. Vascular endothelial growth factor and ocular neovascularization / J.W. Miller // Am. J. Pathol. 1997. - Vol.151. - P. 13-23.

165. Miloning, G. The advantages of phosphate buffer for 0s04 solutions in fixation / G. Miloning // J.appl.Physics. 1961. - Vol.32. - №6. - P.1637-1638.

166. Moran, D.J. Pterygium and ultraviolet radiation: a positive correlation / D.J. Moran, F.C. Hollows // Br.J.Ophthalmol. 1984. - Vol.68. - P.343 - 346.

167. Mutations in the p53 tumor suppressor gene: clues to etiology and molecular pathogenesis / M.S. Greenblatt, W.P. Bennett, M. Hollstein et al. // Cancer.Res.- 1994 Vol.54. - P.4855-4878.

168. Oliver, D. The use of processed pericardial tissue in anterior ocular segment reconstruction / D. Oliver, Schein // Am.J.Ophthalmol. 1998. - Vol.125. -№4. - P.549-552.

169. Overexpression of p53 tumor suppressor gene in pterygia / O. Weinstein,

170. G. Rosenthal, H. Zirkin, et al. // Eye. 2000. - Vol. 16(5). - P.619-621. 172.Pinkerton, O.D. Immunologic basis for the pathogenesos of pterygium / O.D. Pinkerton, Y. Hokawa, L.A. Shigemura // Am.J.Ophthalmol. - 1984. -Vol.98.-P.225-226.

171. Pitts, D.G. The UV problem: have the rules changed? / D.G.Pitts, J.P.G. Bergmanson // J.Am.Optom.Assoc. 1989. - Vol.60. - P.420 - 424.

172. Postoperative instillation of low-dose mitomycin С in the treatment of primary pterygium / S. Hayasaka, S. Noda, Y. Yamamoto et al. // Am J.Ophthalmol. -1988. Vol.106. -P.715-718.

173. Potten, C.S. Epithelial proliferative subpopulations. Stem cells and tissue homeostasis / C.S. Potten // Cambridge University Press. 1978. - Vol.317.

174. Proliferative activity and p53 expression in primary and recurrent pterigia / I. Chowers, J. Pe'er, E. Zamir et al. // Ophthalmology. 2001. - Vol.108. -№5. - P.985-988.

175. Proliferative effects of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor on pterygium epithelial cells and fibroblasts / M.T. Nolan, N.Di Girolamo, M.T. Coroneo et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2004. -Vol.45. -№1. -P.110-113.

176. Prospective trial of intraoperative Mitomycin С in the treatment of primary pterygium / J. Cano-Parra, M. Diaz-Llopis, M.J. Maldonado et al // Br.J.Ophthalmol. 1995. - Vol.79. - P.439-441.

177. Pseudomonas corneoscleral ulcers / I.M. Raber, P.R. Laibson, G.H. Kurz et al. // Am.J.Ophthalmol. 1981. - Vol.92. - P.353-362.

178. Pseudomonas corneoscleritis / E. Alfonso, K.R. Kenyon, L.D. Ormerod et al. // Am.J.Ophthalmol. 1987. - Vol.103. - P.90-98.

179. Pterygial derived fibroblasts express functionally active histamine and epidermal growth factor receptors / R. Maini, D.J. Collison, J.M. Maidment et al. // Exp. Eye Res. 2002. - Vol.74. - №2. - P.237-244.

180. Pterygium excision with conjunctival autografting: an effective and safe technique / B.D. Allan, P. Short, G.J. Crawford, et al. // Br.J.Ophthalmol. -1993.-Vol.77.-P.698-701.

181. Quantitative analysis of regular and irregular astigmatism induced by pterygium / A. Tomidokoro, T. Oshika, S. Amano et al. // Cornea. 1999. -Vol.18.-P.412-415.

182. Rachmiel, R. Results of treatment with topical mitomycin С 0,02% following excision of primary pterygium / R. Rachmiel, H. Leiba, S. Levartovsky // Br J.Ophthalmol. 1995. - Vol.79. - P.233-236.

183. Raizada, I.N. Pinguecula and pterygium (a histopathological study) / I.N. Raizada, N.K. Bhatnagar // Indian.J.Ophthalmol. 1976. - Vol.24. -P.16- 18.

184. Reynolds, E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain in electron microscopy / E.S. Reynolds // J.Cell.Biol. 1963. - Vol.17. - №4. -P.203-213.

185. Reynolds, M.G. Alfonso E. Treatment of infectious scleritis and keratoscleritis / M.G.Reynolds, E.Alfonso // AmJ.Ophthalmol. 1991. - Vol.112. -P.543 - 547.

186. Risk analysis in the development of pterygia / F.D.Mackenzie, L.W. Hirst, D. Battistutta et al. // Ophthalmology. 1992. - Vol.99. - P. 1056-1061.

187. Safianik, B. Serious corneoscleral complications after pterygium excision with mitomycin С / B. Safianik, I. Ben-Zion, H.J. Garzozi // BrJ.Ophthalmol. -2002. Vol.86. -№3. - P.357-358.

188. Sato, T. A simple rapid polychrome stain for epoxy-embedded tissue / T. Sato, H. Shamoto // Stain.Technol. 1973. - Vol.48. - №8. - P.223.

189. Schermer, A. Differntiation-related expression of a major 64K corneal keratin in vivo and in culture suggests limbal location of corneal epithelial stem cells / A. Schermer, S. Galvin, T.T. Sun // J.Cell Biol. 1986. - Vol.103. - P.49-62.

190. Scleral flap necrosis and infectious endophthalmitis after cataract surgery with a scleral tunnel incision / L.O. David, E.P. James, G.M. John et al. // Ophthalmology. 1993. - Vol.100. - P.l59-163.

191. Seifert, P. Capillaries in the epithelium of pterygium / P. Seifert, W. Secundo // BrJ.Ophthalmol. 1998. - Vol.82. -№1. - P.77-81.

192. Serious complications of topical mitomycin-C after pterygium surgery / R.S. Rubinfeld, R.R. Pfister, R.M. Stein et al. // Ophthalmology. 1992. -Vol.99. -№11. - P. 1647-1654.

193. Severe corneoscleral infection / A.P. Moriarty, G.J. Crawfold, I.L. McAllister, I.J. Constable // Arch.Ophthalmol. 1993. - Vol.111. - P.947-951.

194. Shimazaki, J. Transplantation of amniotic membrane and limbal autograft for patients with recurrent pterygium associated with symblepharon / J. Shimazaki, N. Shinozaki, K. Tsubota // Br.J.Ophthalmol. 1998. - Vol.82. - №3. - P.235-240.

195. Sim, C.S. Mutant p53 protein is expressed in Bowens disease / C.S.Sim, S.D. Slater, P.H. McKee // Am. J. Dermatopathol. 1992. - Vol.14. -P.195-199.

196. Singh, G. Long-term follow-up study of mitomycin eye drops as adjunctive treatment for pterygia and its comparison with conjunctival autograft transplantation / G. Singh, M.R. Wilson, C.S. Foster // Cornea. 1990. - Vol.9. -P.331-334.

197. Singh, G. Mitomycin eye drops as treatment for pterygium / G.Singh, M.R. Wilson, C.S. Foster // Ophthalmology. 1988. - Vol.95. - P.813-821.

198. Sivakumar, M. Descemetocele following a simple avulsion procedure for pterigium / M. Sivakumar, D. Tan // Br.J.Ophthalmol. 1997. - Vol.81. - №3. - P.252.

199. Sliney, D.H. The focusing of ultraviolet radiation in the eye and ocular exposure / D.H. Sliney // Pterygium. The Hague: Kugler. 2000. - P.29-40.

200. Snibson, G.R. Pterygium surgery in Victoria: a survey of ophthalmologists / G.R. Snibson, C.D. Luu, H.R. Taylor // Aust. N. Z. J. Ophthalmol. 1998. -Vol.26.-№4.-P.271-276.

201. Sridhar, M.S. Surgically induced necrotizing scleritis after pterygium excision and conjunctival autograft / M.S. Sridhar, A.K. Bansal, G.N. Rao // Cornea. -2002. Vol.21. - №3. - P.305-307.

202. Starck, T. Conjunctival autograft for primary and recurrent pterygia: surgical technique and problem management / T. Starck, K.R. Kenyon, F. Serrano // Cornea. 1991. - Vol.10. -P.196-202.

203. Structure of heparin-binding EGF-like growth factor. Multiple forms, primary structure, and glycosylation of the mature protein / S. Higashiyama, K. Lau, G.E. Besner et al. // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267. - P.6205-6212.

204. Suppression of ICE and apoptosis in mammary epithelial cells by extracellular matrix / N. Boudreau, C.J. Sympson, Z. Werb et al. // Science. 1995. -Vol.267.-P.891-893.

205. Surgically induced necrotising sclerokeratitis (SINS)-precipitating factors and response to treatment / E. O'Donoughue, S. Lightman, S. Tuft et al. // Br .J.Ophthalmol. 1992. - Vol.76. - P.17-21.

206. Tananuvat, N. The results of amniotic membrane transplantation for primary pterygium compared with conjunctival autograft / N. Tananuvat, T. Martin // Cornea. 2004. - Vol.23. - №5. - P.458-463.

207. Telomerase activity: a biomarker of cell proliferation, not malignant transformation / C.D. Belair, T.R. Yeager, P.M. Lopez et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol.94. -P.13677-13682.

208. Terranova, V.P. Chemotaxis of human gingival epithelial cells to laminin. A mechanism for epithelial cell apical migration / V.P. Terranova, R.M. Lyall // J. Periodontol. 1986. - Vol.57. - P.311-317.

209. The human amniotic membrane is a site MHS class lb expression: evidence for the expression of HLA-E and HLA-G / J.M. Houlihan, P.A. Biro, H.M. Harper et al. // J. Immunol. 1995. - Vol.154. -P.5665-5674.

210. The long-term effects of visible light on the eye / H.R. Taylor, S.K. West, B. Munoz, et al. // Arch.Ophthalmol. 1992. - Vol.110. - P.99 - 104.

211. The role of ultraviolet irradiation and heparin-binding epidermal growth factor in the pathogenesis of pterygium / T.M. Nolan, N. Di Girolamo, N.H. Sachdev et al. // Am. J. Pathol. 2003. - Vol.162. - P.567-574.

212. Thoft R.A. Biochemical transformation of regerating ocular surface epithelium / R.A. Thoft, J. Friend // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1977. - Vol.16. - P. 14.

213. Tseng, S.C.G. Amniotic membrane transplantation for conjunctival surface reconstruction / S.C.G. Tseng, P. Prabhasawat, S.H. Lee // Am. J. Ophthalmol. 1997. - Vol.124. - P.765-774.

214. Tseng, S.C.G. Concept and application of limbal stem cells / S.C.G. Tseng // Eye. 1989. - Vol.3. - P.141.

215. Tseng, S.C.G. Staging of conjunctival squamous metaplasia by impression cytology / S.C.G. Tseng // Ophthalmology. 1985. - Vol.92. - P.728-733.

216. Tseng, S.C.G. Suppression of transforming growth factor isoforms, TGF-p receptor 2, and myofibroblasts by amniotic membrane matrix / S.C.G. Tseng, D.Q. Li, X. Ma // J. Cell Physiol. 1999. - Vol.179. - P.325-335.

217. Unbalanced expression of VEGF and PEDF in ischemia-induced retinal neovascularization / G.Q. Gao, Y. Li, D.C. Zhang et al. // FEBS Lett. 2001. -Vol.489. - P.270-276.

218. UVB-mediated induction of Inyerleukin-6 and -8 in pterygia and cultured human pterygium epithelial cells / N. Di Girolamo, R.K. Kumar, M.T. Coroneo et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. - Vol.43. -№11.- P.3430-3437.

219. Vaniscotte, M.H. 102 cases of pterygium: surgical treatment study results / M.H. Vaniscotte, E. Lancombe, Y. Pouliquen // J. Fr. Ophthalmol. 1986. -Vol.9. -P.227-230.

220. Weissgold, D.J. Rescue of exposed scleral buckles with cadaveric pericardial patch grafts / D.J. Weissgold, R.H. Millay, T.A. Bochow // Ophthalmol. 2001. -Vol.108.-P.753-758.

221. Wong, W. W. A hypothesis on the pathogenesis of pteiygiums / W. W. Wong // Ann.Ophthalmol. 1978. - Vol.10. -P.303-308.

222. Yanoff, M. Conjunctiva / M. Yanoff, B.S. Fine // Ocular pathology., 4th ed. Spain: Mosby-Wolfe. 1996. -P.205-229.

223. Zainah, Alsagoff Necrotising scleritis after bare sclera exision of pterygium / Zainah Alsagoff, Donald Т.Н. Tan, S-P Chee // BrJ.Ophthalmol. 2000. -Vol.84. - №9. - P. 1050-1052.

224. Zuclich, J.A. Ultraviolet induced photochemical damage in ocular tissue / J.A. Zuclich // Health Physics. 1989. - Vol.56. - P.671-682.

225. Zur Hausen, H. Papillomavirus infections-a major cause of human cancers / H. Zur Hausen // Biochim.Biophys.Acta. 1996. - Vol.1288. - P.55-78.