Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эколого-генетическая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в некоторых промышленных центрах Республики Молдова
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-генетическая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в некоторых промышленных центрах Республики Молдова"

На правах рукописи

Левннски Марина Васильевна

ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ В НЕКОТОРЫХ ПРОМЫШЛЕННЫХ ЦЕНТРАХ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА

03.00.16 - экология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж - 2008

□ □34566 17

003456617

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Калаев Владислав Николаевич

Официальные оппопенты: доктор биологических наук, профессор

Федорова Алевтина Ильинична

кандидат биологических наук Попова Ирина Евгеньевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Воронежский государственный педагогический университет»

Защита диссертации состоится« 3 » декабря ___2008

г. в_И_часов на заседании диссертационного совета Д 212.038.05 при Воронежском государственном университете по адресу: г. Воронеж, Университетский пл., 1, биолого-почвенный факультет, аудитория 59__

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке ГОУ ВПО «Воронежский государственный университет»

Автореферат разослан « ■*/ » ноября_ 200!? г.

Ученый секретарь диссертационного Совета

Г. И. Барабаш

Актуальность темы. С распадом СССР вопросы охраны здоровья населения и окружающей среды перешли в ведение властей вновь образованных независимых государств. Однако отсутствие значительных географических барьеров и интенсивные миграционные процессы привели к тому, что данные проблемы уже не являются только внутренними для каждой отдельно взятой страны. Развитие промышленного и сельскохозяйственного производства, увеличение количества автотранспортных средств негативно сказываются на состоянии среды обитания человека. Оценка загрязнения среды крайне необходима для принятия грамотных решений по вопросам охраны природы и здоровья населения (Захаров, Кларк, 1993). По мнению В.М. Захарова и А.Т. Чубинишвили (2001): «При всей важности оценки качества среды на всех уровнях, с применением различных подходов (включая физические, химические, социальные и другие аспекты), приоритетной представляется биологическая оценка», поскольку главным ключевым моментом для такой оценки является самочувствие, состояние различных видов живых существ и самого человека.

Республика Молдова - индустриально-аграрная страна с преобладанием сельскохозяйственного сектора и обрабатывающей промышленности. По последним данным, полученным Центром превентивной медицины г. Кишинев, уровень заболеваемости населения является высоким. Отмечается функциональная деградация репродуктивной сферы у женщин и мужчин. В последнее десятилетие для населения Республики Молдова характерно снижение средней продолжительности жизни до 65,8 - 67,8 лет (по данным за 2004 год), высокая смертность - 11 - 12 случаев на 1 ООО жителей, из них 42,2% - в трудоспособном возрасте, причем среди мужчин смертность в 2 раза выше, чем среди женщин (Си ргтге 1а вкиа^а ..., 2007). Возможной причиной этого является широкое использование на полях страны в «доперестроечный» период пестицидов. Немалое их количество в настоящее время скопилось на складах, многие из которых уже пришли в аварийное состояние. В результате этого происходит распыление пестицидов и загрязнение ими почвы, воздуха, водоемов.

В настоящее время в промышленном производстве Республики Молдова для изготовления синтетических моющих средств и каучука в связи с изменением технологического процесса стал широко применяться алкенилангидрид янтарной кислоты, токсические свойства и биоразлагаемость которого не изучены, хотя данное соединение может внести определенный вклад в формирование загрязнения водной и воздушной среды.

В такой ситуации получение интегральной оценки качества среды обитания, формирующегося при взаимодействии огромного числа разнообразных факторов, является наиболее важным. Особый интерес представляет исследование состояния генетической и иммунной системы организма человека как ведущих показателей гомеостаза развития в условиях загрязнения.

Целью диссертационной работы явилось комплексное изучение качества среды обитания и здоровья населения в некоторых городах Республики Молдова по данным микроядерного теста в буккальном эпителии людей и некоторым параметрам состояния иммунной системы у лиц разных возрастных групп, а также определение биоразлагаемости и токсических свойств алкени-лангидрида янтарной кислоты как нового поллютанта, применяемого в промышленном производстве в Республике Молдова.

Для достижения поставленной цели предполагалось решить следующие задачи:

1. Оценить генотоксичность окружающей среды в некоторых промышленных центрах Республики Молдова по частоте встречаемости буккальных эпителноцитов с микроядрами в группе детей дошкольного возраста.

2. Установить влияние внешних (загрязнение окружающей среды) и внутренних (пол ребенка) факторов на генетическую систему детского организма.

3. Выявить состояние иммунитета и тенденции в его изменении у лиц разных возрастных групп, проживающих в районах г. Кишинев с разным уровнем антропогенного загрязнения, по продукции сывороточных антител к инфекционным заболеваниям (корь, дифтерия, столбняк) после вакцинации.

4. Провести сравнительный анализ результатов исследований уровня сывороточных антител в крови к кори, дифтерии, столбняку и данных микроядерного теста в буккальном эпителии детей для выявления механизмов возникновения цитогенетической нестабильности у человека на антропогенно загрязненных территориях.

5. Определить биоразлагаемость и токсические свойств алкенилангидрида янтарной кислоты.

Научная новизна выполненной работы.

Впервые определен уровень генотоксичности окружающей среды в 6 городах Республики Молдова (Кишинев, Рыбница, Комрат, Хьшчешты, Оргееп, Кэушень) по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей.

Установлено влияние загрязнения окружающей среды на эффективность работы иммунной системы, определяемой по продукции антител к инфекционным заболеваниям (корь, дифтерия, столбняк) после вакцинации и устойчивость к ним. Выявлены возрастные группы людей в республике Молдова, иммунная система которых наиболее чувствительна к воздействию поллютаитов.

Показана связь стабильности генома человека с состоянием иммунитета (продукция антител к инфекционным заболеваниям).

Впервые установлены биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты (пороговая концентрация, недействующая концентрация, смертельная доза, острая токсичность, характер токсического дейст-

вия, местное действие на кожу и оценка ее функционального состояния, кумулятивные свойства вещества) в опытах на микроорганизмах и животных.

Научно-практнчсское значение результатов исследований.

Результаты оценки генотоксичности окружающей среды в 6 городах Республики Молдова на основании микроядерного теста в буккапьных эпителио-цитах детей и исследования влияния загрязнения на продукцию сывороточных антител к инфекционным заболеваниям предоставляют возможности проведения более эффективных санитарно-гигиенических мероприятий по оздоровлению населения и окружающей среды.

Показана возможность использования показателя концентрации антител к кори, дифтерии, столбняку в крови для оценки уровня загрязнения окружающей среды .

Установленная связь между частотой встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии, отражающей стабильность генома человека на загрязненных территориях, и состоянием иммунитета объясняет появление цито-генетическн аберрантных клеток нарушением их элиминации иммунной системой.

Определены биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты в опытах на животных и микроорганизмах, что открывает перспективу безопасного обращения с данным веществом в процессе производства.

Положения, выносимые на защиту.

1. Загрязнение окружающей среды в городах Республики Молдова нарушает стабильность генетического аппарата человека, индуцируя образование микроядер в клетках буккального эпителия детей. По степени генотоксичности окружающей среды для человека обследованные города можно ранжировать (в порядке убывания степени загрязнения) в следующий ряд: Кишинев - Рыбница - Комрат — Хынчешты - Оргеев - Кэушень. Уровень генотоксичности среды в городах Республики Молдова сопоставим или ниже такового в г.г. Воронеж, Нововоронеж и Санкт-Петербург.

2. Встречаемость буккальных эпителиоцитов с нарушениями генетического материала у детей на обследованных территориях зависит от пола ребенка: более чувствительны к техногенному загрязнению дети мужского пола.

3. Загрязнение окружающей среды оказывает влияние на состояние иммунной системы организма: при увеличении концентрации поллютантов в среде отмечается рост числа людей с высоким и низким титром антител к столбняку, кори и дифтерии; на экологически «чистых» территориях у большинства обследованных лиц выявлены средние значения титра антител в крови. Наиболее чувствительны к загрязнению люди в возрасте от 5 до 18 и старше 40 лет.

4. Появление клеток с микроядрами в буккальном эпителии опосредовано нарушением работы иммунной системы, которая в условиях загрязнения окру-

жающей среды находится в «напряженном» состоянии и не справляется с элиминацией цитогенетически аберрантных клеток.

5. Алкенилангидрид янтарной кислоты, используемый в качестве эмульгатора при эмульсионной полимеризации в виде водного расвора мыла при производстве синтетических моющих средств и каучука, обладает в опытах на микроорганизмах и животных токсическими свойствами, позволяющими отнести его к согласно ГОСТу 12.1007 - 76 к 3 классу опасности (умеренноопасные вещества), и является соединением, относительно устойчивым к биологической деструкции.

Личный вклад. Автором разработаны теоретические и методические положения, обоснованы цели и задачи исследования, проведён сбор и анализ экспериментального материала, обобщены результаты исследований. Статьи и научные доклады подготовлены самостоятельно и в соавторстве.

Апробация результатов исследования.

Результаты диссертационной работы были представлены на 1 межрегиональной яаучно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды современного города» (Воронеж, 2005), на 6 международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 2007), на отчетной научной сессии биолого-почвенного факультета Воронежского государственного университета (Воронеж, 2005, 2006, 2007 гг.). Материалы исследований обсуждались на заседаниях кафедры генетики, цитологии и биоинженерии и кафедры экологии и систематики беспозвоночных животных.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи, в том числе 1 - в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, из 5 глав, включающих обзор литературы, описание материалов и методов исследования, результаты работы, выводы, список литературы источник). Работа изложена на {¿¡^страницах машинописного текста, включает ХО таблиц, _3_рисунков.

Благодарности.

Диссертант выражает глубокую признательность научному руководителю 1 - го года обучения профессору кафедры экологии и систематики беспозвоночных животных Негробову О.П. и искреннюю благодарность научному руководителю 2 - го и 3 - го года обучения профессору кафедры генетики, селекции и теории эволюции Буториной А.К. за поддержку начинания исследований в области экологии.

ВВЕДЕНИЕ

Во введении обоснована актуальность выбранной темы в связи с накопленными к настоящему времени сведениями по оценке влияния антропогенного загрязнения на состояние здоровья населения, генетический аппарат и иммун-

ную систему человека и необходимость проведения подобных работ в Республике Молдова. Сформулированы цели и задачи исследования.

ГЛАВА 1. Обзор литературы

В главе представлен обзор работ отечественных и зарубежных авторов, посвященных рассмотрению общих вопросов влияния загрязнения окружающей среды на функционирование различных систем и органон человека, дано описание типов мониторинга и места биологического мониторинга в системе мер слежения за состоянием окружающей среды среди них. Проанализированы методы оценки влияния загрязнения на цитогенетический аппарат человека, животных и растений; особое внимание уделено микроядерному тесту, в том числе исследованиям, выполненным на буккальном эпителии человека. Представлена характеристика физико-химических свойств алкенилангидрида янтарной кислоты как нового соединения, используемого в промышленном производстве в качестве эмульгатора при эмульсионной полимеризации в виде водного раствора мыла, и попадающего в окружающую среду в качестве поллютанта при производстве каучука и синтетических моющих средств.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Эколого-географическая характеристика Республики Молдова как района проведения исследований

В главе приводится описание природно-ландшафтных, климатических характеристик и экологической ситуации в Республике Молдова и в обследованных городах.

Для оценки стабильности генетического аппарата в условиях воздействия поллютантов был проведен анализ частоты встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей, проживающих в 6 городах Республики Молдова: Кишинев (5 районов), Рыбница, Комрат, Оргеев, Хынчешты, Кэушень, различающихся по степени антропогенного загрязнения. Исследования состояния иммунной системы по таким параметрам, как продукция антител к инфекционным заболеваниям (дифтерии, столбняку, кори) после вакцинации и устойчивость к этим заболеваниям, проводили в 3 районах г. Кишинев (Чокана, Буюкань, Малая Малина).

Город Кишинев - столица Молдовы - расположен в центре Республики Молдова. Кишинев является развитым промышленным мегаполисом. Наиболее загрязненными районами в г. Кишинев являются Центр и Чокана. Здесь сосредоточено наибольшее количество промышленных предприятий (винные заводы, фармацевтическая и мебельная фабрики, фабрика строительных материалов, стекольный завод и другие). В выбросах промышленных предприятий зарегистрировано свыше 36 химических соединений, из которых 5 относятся к 1-ому и 2-ому классам опасности. Основные загрязнители: неорганическая пыль

(превышение ПДК в 5 раз), формальдегид (превышение ПДК в 6 раз), оксид (NO) и диоксид (NO2) азота (превышение ПДК в 8 раз) и озон (превышение ПДК в 2 раза). Районы Ботаника и Телецентр - среднезагрязненные, примерно с тем же составом загрязнителей, среди которых неорганическая пыль (превышение ПДК в 3 раза), формальдегид (превышение ПДК в 4 раза), оксип (NO) и диоксид (N02) азота (превышение ПДК в 6 раз) и озон (превышение ПДК в 1,5 раза) занимают ведущее положение. Районы Малая Малина и Буюкань выбраны в качестве контроля как относительно чистые территории, находящиеся вдали от крупных автодорог и промышленных предприятий, превышение ПДК в 1,5 раза отмечалась только для неорганической пыли (Republic of Moldova ..., 2004; Си privire la situatia ..., 2007).

Город Рыбница расположен на левом берегу Днестра. Наиболее загрязнённый после Кишинева город. В нем сосредоточено много индустриальных предприятий (металлургический завод, строительный завод и др.). В Рыбнице в 2002 г. произошло радиоактивное загрязнение цезием-137 металлических изделий и фильтров, используемых в технологическом процессе. На сегодняшний день металлические изделия с радиационным загрязнением хранятся на территории завода, в отдельных специализированных хранилищах, оборудованных по стандартам SPORO - 85.

Город Комрат, расположенный на реке Ялпуг, - столица Гагаузской автономии. В городе функционируют заводы: маслодельный, винодельческий, железобетонных изделий; работает производство безворсовых ковров с молдавским национальным орнаментом. В городе в 77,7 % проб зафиксировано превышение предельно-допустимых нормативов по загрязнению пылью, в 48,1% -по NO2, в 80,0 % - по озону. Вода и почва загрязнены пестицидами.

Город Хынчешты - административный центр Хынчештского района, являющегося территориальной единицей Республики Молдова. Для почв города характерно загрязнение гельминтами (22,54% проб), для воды - пестицидами. Отмечается загрязнение территории твердыми и жидкими зоотехническими отходами, а также химическими веществами, попадающими на почву и переходящими в пищевые цепи.

Город Оргеев находится в центре Молдовы в окружении лесов (молдавские Кодры). Относительно экологически «чистый» район. Централизованное снабжение водой осуществляется из реки Днестр. Вода не соответствует ГОСТам по санитарно-химическим и санитарно-микробиологическим показателям. Выявлены гельминты-колифаги. Лишь 22,4% проб отвечает санитарно-химическим требованиям. Почва на детских площадках в 4,4% случаев не соответствует предъявляемым требованиям.

Город Кэушень - центр Каушанского района. Кэушень считается экологически «чистым» городом. Подавляющее большинство проб соответствует

требованиям служб санитарно-эпидемиологического надзора за состоянием окружающей среды.

2.2. Методы исследований

Буккальный эпителий был собран у 147 детей. Выбор микроядерного теста обусловлен относительной простотой в выполнении, информативностью (Ильинских и др., 1992), а также тем, что буккальный эпителий является «зеркалом», отражающим процессы, протекающие в организме (Гемонов, 1969).

Микроядерный тест в буккальном эпителии проводили согласно рекомендациям, изложенным в работе Нерсесяна А.К. с соавт. (1993). Препараты окрашивали ацетоорсеином. На препаратах учитывали отношение количества микроядер к общему числу ядросодержащих клеток (%о).

Исследования состояния иммунной системы по таким параметрам, как продукция антител к инфекционным заболеваниям (дифтерии, столбняку, кори) после вакцинации и устойчивость к этим заболеваниям, осуществляли по стандартной методике. Всего было обследовано 310 человек в возрасте от 5 до 60 лет, и на базе поликлиник сделано 930 анализов крови. Были выделены группы лиц с высоким уровнем антител к кори (титр антител 1:80), к дифтерии (8,0 ME/мл), к столбняку (25,6 ME/мл), средним титром антител к кори (от 1:10 до 1:40), к дифтерии (от 0,5 ME/мл до 4,0 ME/мл), к столбняку (от 0,1 ME/мл до 6,4 ME/мл) и низким титром антител к дифтерии (от 0,03 ME/мл и ниже), к столбняку (от 0,005 ME/мл и ниже) и с отсутствием титра антител к кори.

Возможность биоразложения алкенилангидрида янтарной кислоты определяли как соотношение величины биохимического потребления кислорода (ВПК) 1С химическому потреблению кислорода (ХПК). Величину ХПК устанавливали бихроматным методом (ПНД Ф 14.1.2.100 - 97) (Количественный химический анализ ..., 1997а). Биохимическое потребление кислорода определяли методом разбавления в инкубационных флаконах (ПНД Ф 14.1:2:3:4.123 - 97) (Количественный химический анализ ..., 19976). Для заражения разбавляющей воды микрофлорой использовали активный ил из Левобережных очистных сооружений г. Воронеж. Для определения биоразлагаемости алкенилангидрида янтарной кислоты применяли водный раствор с концентрацией 1 г/л. Действие алкенилангидрида янтарной кислоты на микрофлору ила очистных сооружений устанавливали по изменению активности одного из основных окислительных ферментов - каталазы и по суммарной активности дегидрогеназ. Активность ка-талазы определяли стандартным пероксидным методом с дальнейшим титрованием оставшейся после действия каталазы перекиси водорода раствором пер-манганата калия (Землянухин, 1985), активность дегидрогеназ - тетразолиевым методом (Землянухин, 1985). Токсикологические исследования проводили в эксперименте на белых крысах. Они включали определение острой токсичности, характера токсического действия, местного действия на кожу, оценки функционального состояния кожи, кумулятивных свойств вещества. Среднюю

смертельную дозу определяли по методу Дейхмана (Токсикометрия химических веществ ..., 1986). Коэффициент кумуляции вычисляли по отношению суммарной среднесмертелыюй дозы к среднесмертельной дозе при однократном введении. Оценку кумулятивных свойств проводили в эксперименте на белых крысах по методу Лима в течение 24 дней (Токсикометрия химических веществ ..., 1986). Вещество вводили животным перорально, натощак, в дозах, увеличивающихся через каждые 4 дня в 1,5 раза. Начальная доза составила 1/10 от DL5o - 0,21 г/кг. Изучение характера токсического действия проводили в 20-дневном эксперимента на белых крысах при ежедневной дозе вещества 0,21 г/кг. Животные были разбиты на две равноценные по показателям группы по 10 особей в каждой. Затравку проводили пять раз в неделю при внутрижелудоч-ном введении. В ходе эксперимента проводилось наблюдение за общим состоянием и поведением животных: динамикой массы тела, составом крови (эритроциты, гемоглобин, лейкоциты), активностью ферментов (каталазы, пероксида-зы). Функцию печени оценивали по содержанию гиппуроновой кислоты в моче, почек - по содержанию белка и хлоридов в моче (Пушкина, 1963; Проблема нормы в токсикологии, 1991). Исследования раздражающего действия на неповрежденную кожу проводили в эксперименте на белых крысах при ежедневных 4-часовых аппликациях алкенилангидрида янтарной кислоты на выстриженный боковой участок кожи. Вещество наносили в нативном виде (предварительно подогретое до температуры тела крыс на водяной бане) (Оценка воздействия вредных ..., 1980).

Изучение действия вещества на гидробионты проводили на примере одноклеточных зеленых водорослей (хлореллы) (Руководство по определению ..., 2002).

Статистическую обработку данных проводили на ПЭВМ с помощью пакета статистических программ "Stadia". Процедура группировки данных и их обработка изложены в работе Кулаичева (2006). Сравнение средних значений осуществляли с использованием t-критерия Стьюдента. Сравнение выборок по частоте встречаемости микроядер в эпителиоцитах ротовой полости детей осуществляли по непараметрическому Х-критерию рангов Ван-дер-Вардена. Влияние района исследований на встречаемость клеток с микроядрами в буккальном эпителии и на титр антител определяли с использованием однофакторного параметрического и непараметрического дисперсионного анализа Крускалла-Уоллиса. Силу влияния фактора места сбора материала (в %) вычисляли по Снедекору. Так как частота встречаемости микроядер — признак, для которого характерно ненормальное распределение, то проводили сравнение выборок не по абсолютным значениям, а по медианам {Me), которые в данном случае являются более точным показателем выборки. Связь между загрязнением района и уровнем титра антител в крови людей выявляли с использованием таблиц сопряженности при помощи критерия хи-квадрат.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Оценка гснотокснчности окружающей среды в городах Республики Молдова по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей

В результате проведенных исследований была выявлена частота встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей, проживающих в обследованных городах Республики Молдова (табл. 1).

Наибольшая частота встречаемости клеток с микроядрами отмечалась в наиболее загрязненном из обследованных городов Республики Молдова - г. Кишинев - 2,42+0,12 %о. Дисперсионный анализ выявил влияние района проживания в г. Кишинев на встречаемость клеток с микроядами как у мальчиков (Р<0,001), так и у девочек (Р<0,01), а также при анализе данных без разделения по половому признаку (Р<0,001). Максимальное число клеток с микроядарами выявлено в наиболее загрязненном районе (Центр +Чокана) -3,11+0,24 %о; наименьшее - в чистом (Малая Малина) - 1,05+0,20 %»; промежуточное положение занимает среднезагрязненный район - Ботаника, уровень клеток с микроядрами у детей, проживающих в нем, составил 2,80+0,13 %о. Различия по частоте встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей между районами достоверны (Р<0,001), причем отмечаются они при сравнении районов по встречаемости эпителиоцитов с микроядрами как у мальчиков, так и у девочек. На основании проведенных исследований представляется возможным сделать вывод о высокой генетической нестабильности, отмечаемой в соматических клетках детей, проживающих в районе Чокана , и меньшей - в районе Малая Малина города Кишинев.

Вторым городом по частоте встречаемости клеток с микроядрами явился г. Рыбница - 1,77±0,27 %о. В остальных обследованных населенных пунктах уровень клеток с микроядрами у детей был ниже (табл. 1). При снижении уровня загрязнения отмечается уменьшение встречаемости аберрантных клеток в городах в следующем порядке: Кишинев, Рыбница, Комрат, Оргеев, Хынчеш-ты, Кэушень. Уровень загрязненности обследуемых территорий (по данным Центра превентивной медицины) изменяется в следующей последовательности в порядке уменьшения значений: Кишинев - Рыбница — Комрат - Хынчешты -Оргеев - Кэушень. Результаты дисперсионного анализа показали влияние места сбора материала на изучаемую цитогенетическую характеристику (сила влияния - 9,9 % (Р<0,05)). Однако дисперсионный анализ, проведенный без учета данных, полученных в г. Кишинев и г. Рыбница, не показал достоверного влияния места исследования. Это указывает на приблизительно одинаковую гено-

токсичность окружающей среды в г.г. Комрат, Хынчешты, Оргеев, Кэушень Республики Молдова.

Таблица 1

Встречаемость клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей, проживающих в городах Республики Молдова

Город %о клеток с микроядрами

мальчики девочки мальчики + девочки

Кишинев, Центр +Чокана 3,00+0,40 А/е=3,00 3,25±0,25 Ме=3,00 3,11 ±0,24 Мг=3,00

Ботаника +Телецентр 2,70+0,19 Ме=3,00 2,8+0,19 Ме-3,00 2,80+0,13 3,00

Малая Малина 0,60+0,16 М?=1,00 1,5+0,31 М>=1,00 1,05+0,20 Ме-1,00

Среднее значение по городу 2,3+0,19 Ме=2,00 2,55±0,15 Мг=3,00 2,42+0,12 М?=2,00

Рыбница 1,66±0,33 Ме= 1,50 2,00±0,57 Ме =2,00 1,77+0,27 Ме =2,00

Комрат 0,85±0,26 Ме =1,00 1,33+0,66 Ме =2,00 1,00±0,25 Ме =1,00

Хынчешты 0,66+0,33 Ме =1,00 1,00±0,31 Ме =1,00 0,87+0,22 Ме =1,00

Оргеев 1,00+0,40 Ме =1,00 1,00+0,31 Ме=1,00 1,00±0,23 Ме= 1,00

Кэушень 0,50±0,28 Ме =0,50 1,00+0,40 Ме =1,00 0,75+0,25 Ме =1,00

Результаты дисперсионного анализа подтверждаются данными попарного сравнения уровня клегок с микроядрами в обследованных населенных пунктах с применением непараметрических критериев. Выявлены достоверные различия медиан значений встречаемости клеток с микроядрами в выборках из обследованных городов с аналогичными значениями из г. Кишинев и г. Рыбница. Различий по частоте встречаемости клеток с микроядрами между остальными населенными пунктами не обнаружено. Высокие значения частот встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей в г. Кишинев и Рыбница и отсутствие различий по указанному цитогенетическому показателю между детьми из других городов можно объяснить значительным воздействием выбросов металлургических заводов, крупных промышленных предприятий и отмеченным ранее в г. Рыбница радиоактивным загрязнением. Отсутствие разли-

чий между остальными городами связано, как нам представляется, с приблизительно одинаковым уровнем загрязнения поллгогантами, приводящими к возникновению микроядер в букхальном эпителии. Возможно также, что этот метод оценки генотоксичности недостаточно чувствителен по сравнению с другими, применяемыми для выявления генетических последствий загрязнения (Буторина, Калаев, 2000), т.к. микроядра являются следствием ограниченного числа аберраций хромосом (Захаров и др., 2000).

Отмечается более низкая частота встречаемости клеток с микроядрами у мальчиков, проживающих в г.г. Кэушень (0,50±0,28 %о, Ме=0,5) и Хынчешты (0,66+0,33 %о, Ме=1,0) по сравнению с г.г. Рыбница (1,66±0,33 %о, Ме=1,5) и Кишинев (3,00±0,40 %о, Ме=3,00) (различия достоверны (Р<0,05)). Этот факт , вероятно, можно объяснить тем, что в условиях меньшей антропогенной нагрузки на окружающую среду у детей мужского пола заметно снижается количество аберрантных клеток. Таким образом, мальчики демонстрируют более существенную изменчивость исследуемого показателя по сравнению с девочками в зависимости от условий внешней среды. Большая чувствительность лиц мужского пола по сравнению с женским к стрессовым факторам среды была показана рядом авторов (Ильинских и др., 1992; Буторина и др., 2000 и др.). Различия между мальчиками и девочками объясняются особенностями метаболизма и различной активностью антиоксидантной системы мужского и женского организма (Маймулов и др., 1998). Половых различий во встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии в среднем по республике не выявлено. Средний уровень аберрантных клеток составил в городах республики Молдова 1,1+0,1 %о (Ме=1,0) (у мальчиков - 1,0+0,2 %о (Ме=1,0), у девочек - 1,2+0,2 %> (Ме=1,0), различия недостоверны).

Проведя сравнение частот встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эгштепии детей, проживающих в Республике Молдова и некоторых городах РФ, мы можем говорить о низких значениях указанных показателей по сравнению с таковыми в г. Воронеж (Карпова и др., 2006), где значения медиан находились в диапазоне от 0 до 0,9 %, г. Нововоронеж и пос. Землянск Воронежской области и в г. Старый Оскол Белгородской области, где большинство значений медиан находилось в интервале 0 до 0,11 % (Карпова и др., 2006; Калаев и др., 2006). Также среднее арифметические значения были выше во всех районах г. Воронежа (от 0,17±0,03 % до 1,28±0,23 %), в большинстве районов г. Нововоронеж, г. Старый Оскол и пос. Землянск (от 0,09+0,04% до 0,48±0,20%) по сравнению с городами Молдовы. Подобные расхождения можно объяснить большой разнородностью обследованных индивидуумов по показателю стабильности генома в Воронежской области по сравнению с Республикой Молдова. Возможно предположить, что в обследованных населенных пунктах Воронежской области есть дети с очень высокой частотой встречаемости

микроядер, а также дети, у которых клетки с подобными нарушениями встречаются крайне редко, поэтому отмечаются столь значительное расхождение медиан и средних значений в выборках обследованных на территории Воронежской области. Обследованные дети из Республики Молдова по покгвателю «число клеток с микроядрами» более однородны. Указанные различия между выборками можно объяснить сравнительно более высокой генотоксичностью окружающей среды в г. Воронеж по сравнению с городами Республики Молдова и/или же этническими различиями между популяциями русских и молдаван по показателю «стабильность генома». Наиболее низкие значения встречаемости клеток с микроядрами, по имеющимся у нас данным литературы, отмечаются у детей-дошкольников г. Санкт-Петербург (Маймулов и др., 1998). У мальчиков это значение было равно 0,4 %о, девочек - 0,36 %о.

Т.о. на основании проведенных исследований и сравнения полученных результатов с ранее опубликованными, мы можем говорить об умеренном присутствии генотоксикантов в городах Республики Молдова. Наибольшее их количество отмечается в окружающей среде столицы - г. Кишиневе, далее по убывающей следуют: промышленный центр - г. Рыбница, города Комрат, Хынчешты, Оргеев, Кэушень с приблизительно одинаковым уровнем загрязнения. Описанные исследования можно рассматривать как результаты цитогене-тического мониторинга загрязнения окружающей среды в крупных промышленных городах Республики Молдова. Сравнивая полученные результаты с ранее выполненными работами по изучению генотоксичности окружающей среды в г.г. Воронеж и Санкт-Петербург, возможно оценить экологическую обстановку п обследованных населенных пунктах как удовлетворительную.

3.2. Влияние антропогенного загрязнения на уровень сывороточных антител крови у людей разных возрастных групп, проживающих б различных районах города Кишинев

Дети дошкольного возраста - наиболее чувствительная к воздействию негативных факторов внешней среды группа населения, у которых иммунитет как защитная система организма сформирован еще недостаточно. Наличие у них в клетках генетических нарушений (свидетельством чего является присутствие микроядер) служит индикатором стресса и недостаточной способности иммунной системы элиминировать аберрантные клетки.

Поскольку эффективность работы иммунной системы является одним из важнейших параметров, определяющих состояние всего организма, мы проводили ее оценку у людей разных возрастных категорий (от 5 до 60 лет), проживающих в тех же районах, что и обследованные дети.

Дисперсионный анализ выявил влияние района исследований на титр сывороточных антител к кори и дифтерии (Р<0,05). Наибольшие изменения отмечаются у людей в возрасте от 5 до 18 и старше 40 лет.

Данные о числе людей с разными значениями титров антител к кори, столбняку и дифтерии представлены в таблице 2. Результаты статистического анализа свидетельствуют, что имеет место связь между уровнем загрязненности района и частотой встречаемости людей с высоким, средним и низким титром антител к дифтерии (Р<0,05) и кори (Р<0,01). Связь между уровнем загрязнения района и встречаемостью людей с разным титром антител к столбняку не выявлена. В сильно- и среднезагрязненном районах по сравнению с экологически «чистым» районом отмечается увеличение числа лиц с минимальным титром антител. В экологически «чистом» районе чаще встречаются люди со средними значениями титра антител. Эта тенденция прослеживается по всем трем инфекционным заболеваниям. В сильно- и среднезагрязненном районах по сравнению с «чистым» отмечается также рост числа людей с высоким титром антител к дифтерии и столбняку, в то время как число лиц с высоким титром антител к кори снижена. Таким образом, в условиях значительного антропогенного загрязнения выявлен рост числа людей с минимальным и, по отдельным инфекциям, с максимальным титром антител. На экологически «чистых» территориях больше людей со средними значениями титра антител в крови.

Полученные результаты можно объяснить тем, что в условиях антропогенного загрязнения иммунная система организма людей находится в «напряженном» состоянии. У некоторых лиц она подавлена (у них отмечается минимальный титр антител), у других иммунная система реагирует на возрастание антропогенного загрязнения выраженным иммунным ответом (высокий титр антител). Значительное напряжение иммунной системы может привести к «срыву» нормального иммунного статуса организма, возникновению аллергических реакций и повышенной восприимчивости к инфекционным заболеваниям.

3..3. Связь встречаемости клеток с микропдрами в буккальном эпителии с некоторыми показателями иммунитета

В районах г. Кишинев с наиболее высокими уровнями встречаемости буккальных эпителиоцитов с микроядрами отмечается максимальное число людей с высоким и низким титром антител к кори, дифтерии и столбняку, что свидетельствует о том, что генетически поврежденные эпителиоциты не элиминируются иммунной системой организма, которая в условиях загрязнения не справляется со своими функциями.

Таким образом, связь между результатами микроядерного теста и состоянием иммунной системы у людей, проживающих в сходных условиях, отмеченная ранее Ильинских с соавт. (1992), подтвердилась и нашими исследованиями.

Таблица 2

Встречаемость людей (в % (абс. число)) с разным уровнем шгра антител к дифтерии (МЕ/'мл), к столбняку (МЕ/мл) и к кори (титр антител) в районах г. Кишинев с разным уровнем антропогенного загрязнения

Дифтерия Столбняк Корь

Высокий титр Средний титр Низкий титр Высокий титр Средний титр Низкий титр Высокий титр Средний титр Отсутствие антител

Чокана 55% (55) 27% (27) 18% (18) 78% (78) 20% (20) 2% (2) 11% (11) 47% (47) 42% (42)

Ботаника 60% /с л \ (уч; 27,78% (¿Э) 12,22% О*) 77,78% /-ТЛЛ (./и; 20% (18) 2,22% (2) 6,667% (2) 38,89% (35) 54,44% (49)

Буюканы 46,6% (56) 42,5% (51) 10,83% (13) 70,83% (85) 27,5% (33) 1,667% (2) 20% (24) 48,33% (58) 31,67% (38)

Мы можем предложить использовать показатель «число людей с высоким и низким титром антител к кори, дифтерии и столбняку» для диагностики загрязнения территории и прогноза генотоксичности окружающей среды.

3.4. Токсикологические свойства алкеннлангидрнда янтарной кислоты

Данные ХПК, БПК и биоразлагаемости представлены в таблице 3.

Таблица 3

Биоразлагаемость микрофлорой алкенилангидрида янтарной кислоты

хпк, мг 02/мг бпк5, мг 02/мг бпк|5, мг 02/мг бпк20, мг Ог/мг бпк2(/хпк, %

2,13 0,6 1,05 1,425 67

Соотношение величин биохимического и химического потребления кислорода, равное 67%, характеризует апкенилангидрид янтарной кислоты как соединение, относительно устойчивое к биологической деструкции.

Действие алкенилангидрида янтарной кислоты на микрофлору ила очистных сооружений, установленное по изменению активности одного из основных окислительны?: ферментов - каталазы и по суммарной активности дегидроге-наз, показало, что пороговая концентрация алкенилангидрида янтарной кислоты находится на уровне - 0,05 г/л, недействующая - на уроЕше 10 мг/л.

Изучение действия вещества, на гидробионтов проводилось на примере одноклеточны:; зеленых водорослей (хлореллы), которое показало, что в остром эксперименте недействующей являлась концентрация 7,5 мг/л.

Установлено, что средняя смертельная доза (ВЬМ1) для белых крыс, определенная по методу Дейхмана, находитлась на уровне 2100 мг/кг при внутри-желудочном введении вещества. Картина отравления характеризовалась кратковременным возбуждением, учащением дыхания, желудочно-кишечными расстройствами шаткой походкой, боковым положением, смерть наступала через 24 часа. При вскрытии обнаружено кровенаполнение легких, тонкого кишечника, печени, почек, закупорки желудочно-кишечного тракта не выявлено, (вещество эвакуировалось в кишечник), наблюдалось истончение стенок желудка. При изучении характера токсического действия в ходе проведения эксперимента у опытных животных наблюдалось раздражение желудочного кишечного тракта, подавленное состояние организма. Результаты исследований по показателям токсического действия вещества позволили обнаружить снижение количества лейкоцитов и активности пероксидазы в крови, хлоридов в моче, повышение концентрации гиппуровой кислоты в опытной группе животных по сравнению с контролем. После нанесения вещества на коже животных образовывалась пленка, которая полностью не смывалась. На коже оставался желто-коричневый след, который затем покрывался твердой коркой. В результате проведенных исследований установлено, что однократное воздействие на кожу

вызывало красно-розовую эритему по всему участку кожи. Опыт был завершен через 4 суток, т.к. симптомы раздражения увеличивались, интенсивность эритемы достигла 4 баллов (резко выраженная гиперемия). Наблюдались отторжение эпидермиса, некротические изменения кожи. Заживление ран происходило в течение двух недель. Коэффициент кумуляции, вычисленный по отношению суммарной среднесмертельной дозы (1Ж5дп) к среднесмертельной дозе при однократном введении (О1_,50) КС1Ш=9. Полученная величина коэффициента кумуляции показывает, что кумулятивное действие вещества выражено слабо. Согласно ГОСТ 12.1.007 - 76, вещество относится к 3 классу опасности (умеренно опасные вещества).

Вышеперечисленные свойства алкенидангидрида янтарной кислоты свидетельствуют об его токсических свойствах и требуют нормирования при его широкомасштабном применении.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены различия в частоте встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей, проживающих в 6 крупных городах Республики Молдова, обусловленные разными уровнями антропогенного загрязнения. Наибольшая генотоксичность окружающей среды по результатам микроядерного теста отмечается в г. Кишинев, далее следует промышленный центр - г. Рыбница, города Комрат, Хынчешты, Оргеев, Кэушень характеризуются приблизительно одинаковым уровнем загрязнения. Результаты микроядерного теста в буккальном эпителии детей в 6 городах Республики Молдова позволяют оценить экологическую обстановку в обследованных населенных пунктах как удовлетворительную.

2. Пределы изменчивости частоты встречаемости буккальных эпителио-цитов с микроядрами составили для мальчиков от 0,50±0,28 %> (г. Кэушень) до 3,00±0,4 %о (г. Кишинев), для девочек от 1,00±0,4 %о (г.г. Хынчешты, Оргеев, Кэушень) до 3,25±0,25 %о (г. Кишинев). Отмечаемые различия частот встречаемости клеток с микроядрами обусловлены различной чувствительностью мужского и женского организма к воздействию присутствующих в среде поллютан-тов.

3. Установлено влияние антропогенного загрязнения на уровень сывоточ-ных антител к кори, дифтерии, столбняку в крови людей разных возрастных групп в 3 районах г. Кишинев. В сильно- и среднеза1рязненном районах по сравнению с «чистым» отмечается рост числа лиц с высоким титром антител к дифтерии и столбняку и снижение их числа при анализе иммунитета к кори. На экологически «чистых» территориях у большинства обследованных выявлены средние значения титра антител к возбудителям инфекционных заболеваний в крови. Наибольший размах колебаний уровней антител отмечается в группах лиц в возрасте от 5 до 18 лет и старше 40 лет.

4. Показана возможность использования показателя концентрации антител к кори, дифтерии, столбняку в крови для оценки уровня загрязнения окружающей среды .

5. Ослабленная воздействием поллютантов иммунная система не распознает и не элиминирует генетически поврежденные эпителиоциты, что способствует накоплению аберрантных клеток и нарушению стабильности генетической системы организма.

6. Установлена биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангид-рида янтарной кислоты, нового загрязнителя окружающей среды, используемого в производстве синтетических моющих средств и каучука.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Онищенко В.В. Некоторые токсикологические свойства алкенилангид-рида янтарной кислоты / В.В. Онищенко, М.В. Левински, ВЛО. Скрябина, Т.В. Черенкова // Проблемы охраны окружающей среды современного города: матер. 1 межрегионал. науч.-практич. конференции (30 мая 2005 г.). - Воронеж: Кривичи, 2005. -С. 13- 76.

2. Калаев В.Н. Микроядерный тест в буккальном эпителии детей, проживающих в различных районах г. Кишинева / В.Н. Калаев, А.К. Буторина, М.В. Левински // Медицинская экология: сб. статей 6 международ, науч.-практич. конференции (июнь 2007 г.). - Пенза: Приволжский дом знаний, 2007. - С. 39 -44.

3. Калаев В.Н. Оценка генотоксичности окружающей среды в городах республики Молдова по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей / В.Н. Калаев, А.К. Буторина, М.В. Левински, А.П. Преображенский // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2008. - Т. 7, № 1.-С. 196-200.

4. Левински М.В. Анализ встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии и уровень сывороточных антител среди детского и взрослого населения, проживающего в различных районах города Кишинева / М.В. Левински, В.Н. Калаев, А.К. Буторина // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2008. - № 2. - С. 11 - 16.

Статья № 4 напечатана в журнале, рекомендованном ВАК РФ для опубликования материалов кандидатских диссертаций по биологическим наукам.

Подписано в печать 27.10.08. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,1.

Тираж 80 экз. Заказ 2014.

Отпечатано с готового оригинала-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета.

394000, г. Воронеж, ул. Пушкинская, 3.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Левински, Марина Васильевна

Введение

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие мониторинга. Типы мониторинга

1.2. Понятие о цитогенетическом мониторинге

1.3. Микроядерный тест

1.4. Причины возникновения микроядер

1.5. Сфера применения микроядерного теста

1.5.1. Объекты микроядерного теста

1.5.2. Использование микроядерного теста для оценки состояния окружающей среды и мутагенности химических веществ и физических факторов

1.5.3. Применение микроядерного теста для оценки генетического гомеостаза организма и состояния иммунной системы

1.6. Ограничения при использовании микроядерного теста

1.7. Буккальный эпителий - «зеркало» состояния организма 30 1.7.1. Строение буккального эпителия в норме и при патологиях

1.8. Микроядерный тест в буккальном эпителии

1.9. Физико-химические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты, используемого в промышленном производстве

ГЛАВА II. Материалы и методы исследований

2.1. Эколого-географическая характеристика Республики Молдова как района проведения исследований

2.1.1. Географическое положение Республики Молдова

2.1.2. Климатические условия Республики Молдова

2.1.3. Население Республики Молдова

2.1.4. Внутренние воды Республики Молдова

2.1.5. Почвенный покров Республики Молдова

2.1.6. Растительный покров Республики Молдова

2.1.7. Животный мир Республики Молдова

2.1.8. Природные районы Республики Молдова

2.1.9. Охрана природы в Республике Молдова

2.1.10. Загрязнение окружающей среды в Республике Молдова

2.1.10.1. Загрязнение почвы в Республике Молдова

2.1.10.2. Загрязнение водных источников в Республике Молдова

2.1.10.3. Загрязнение продуктов питания в Республике Молдова

2.1.10.4. Показатели здоровья населения в Республике Молдова

2.2. Характеристика районов проведения исследований в Республике Молдова 58 2.2.1 Краткое описание физико-географических условий г. Кишинев

2.3. Методы исследований

2.3.1. Микроядерный тест в буккальном эпителии детей

2.4. Определение уровня сывороточных антител крови к кори дифтерии столбняку среди детского и взрослого населения, проживающего в различных районах города Кишинев

2.5. Определение биоразлагаемости и токсических свойств алкенилангидрида янтарной кислоты

2.6. Статистическая обработка результатов исследований

ГЛАВА III. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Оценка генотоксичности окружающей среды в некоторых промышленных центрах Республики Молдова

3.2. Микроядерный тест в буккальном эпителии детей, проживающих в различных районах города Кишинев

3.3. Оценка генотоксичности окружающей среды в городах Республики

Молдова по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей

3.4. Влияние антропогенного загрязнения на уровень сывороточных антител крови у людей разных возрастных групп, проживающих в различных районах города Кишинев

3.5. Связь встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии с некоторыми показателями иммунитета

3.6. Биоразлагаемость и токсикологические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-генетическая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в некоторых промышленных центрах Республики Молдова"

Актуальность темы. С распадом СССР вопросы охраны здоровья населения и окружающей среды перешли в ведение властей вновь образованных независимых государств. Однако отсутствие значительных географических барьеров и интенсивные миграционные процессы привели к тому, что данные проблемы уже не являются только внутренними для каждой отдельно взятой страны. Развитие промышленного и сельскохозяйственного производства, увеличение количества автотранспортных средств негативно сказываются на состоянии среды обитания человека. Оценка загрязнения среды крайне необходима для принятия грамотных решений по вопросам охраны природы и здоровья населения (Захаров, Кларк, 1993). По мнению В.М. Захарова и А.Т. Чубинишвили (2001): «При всей важности оценки качества среды на всех уровнях, с применением различных подходов (включая физические, химические, социальные и другие' аспекты), приоритетной представляется биологическая оценка», поскольку главным ключевым моментом для такой оценки является самочувствие, состояние различных видов живых существ и самого человека.

Республика Молдова — индустриально-аграрная страна с преобладанием сельскохозяйственного сектора и обрабатывающей промышленности. По последним данным, полученным Центром превентивной медицины г. Кишинев, уровень заболеваемости населения является высоким. Отмечается функциональная деградация репродуктивной сферы у женщин и мужчин. В последнее десятилетие для населения Республики Молдова характерно снижение средней продолжительности жизни до 65,8 - 67,8 лет (по данным за 2004 год), высокая смертность -11 — 12 случаев на 1000 жителей, из них 42,2% - в трудоспособном возрасте, причем среди мужчин смертность в 2 раза выше, чем среди женщин (Си privire la situatia ., 2007). Возможной причиной этого является широкое использование на полях страны1 в «доперестроечный» период пестицидов.

Немалое их количество в настоящее время скопилось на складах, многие из которых уже пришли в аварийное состояние. В результате этого происходит распыление пестицидов и загрязнение ими почвы, воздуха, водоемов.

В настоящее время в промышленном производстве Республики Молдова для изготовления синтетических моющих средств и каучука в связи с изменением технологического процесса стал широко применяться алкенилангидрид янтарной кислоты, токсические свойства и биоразлагаемость которого не изучены, хотя данное соединение может внести определенный вклад в формирование загрязнения водной и воздушной среды.

В такой ситуации получение интегральной оценки качества среды обитания, формирующегося при взаимодействии огромного числа разнообразных факторов, является наиболее важным. Особый интерес представляет исследование состояния генетической и иммунной системы организма человека как ведущих показателей гомеостаза развития в условиях загрязнения.

Целью диссертационной работы явилось комплексное изучение качества среды обитания и здоровья населения в некоторых городах Республики Молдова по данным микроядерного теста в буккальном эпителии людей и некоторым параметрам состояния иммунной системы у лиц разных возрастных групп, а также определение биоразлагаемости и токсических свойств алкенилангидрида янтарной кислоты как нового поллютанта, применяемого в промышленном производстве в Республике Молдова.

Для достижения поставленной цели предполагалось решить следующие задачи:

1. Оценить генотоксичность окружающей среды в некоторых промышленных центрах Республики Молдова по частоте встречаемости буккальных эпителиоцитов с микроядрами в группе детей дошкольного возраста.

2. Установить влияние внешних (загрязнение окружающей среды) и внутренних (пол ребенка) факторов на генетическую систему детского организма.

3. Выявить состояние иммунитета и тенденции в его изменении у лиц разных возрастных групп, проживающих в районах г. Кишинев с разным уровнем антропогенного загрязнения, по продукции сывороточных антител к инфекционным заболеваниям (корь, дифтерия, столбняк) после вакцинации.

4. Провести сравнительный анализ результатов исследований уровня сывороточных антител в крови к кори, дифтерии, столбняку и данных микроядерного теста в буккальном эпителии детей для выявления механизмов возникновения цитогенетической нестабильности у человека на антропогенно загрязненных территориях.

5. Определить биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты.

Научная новизна выполненной работы.

Впервые определен уровень генотоксичности окружающей среды в 6 городах Республики Молдова (Кишинев, Рыбница, Комрат, Хынчешты, Оргеев, Кэушень) по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей.

Установлено влияние загрязнения окружающей среды на эффективность работы иммунной системы, определяемой по продукции антител к инфекционным заболеваниям (корь, дифтерия, столбняк) после вакцинации и устойчивость к ним. Выявлены возрастные группы людей в Республике Молдова, иммунная система которых наиболее чувствительна к воздействию поллютантов.

Показана связь стабильности генома человека с состоянием иммунитета (продукция антител к инфекционным заболеваниям).

Впервые установлены биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты (пороговая концентрация, недействующая концентрация, смертельная доза, острая токсичность, характер токсического действия, местное действие на кожу и оценка ее функционального состояния, кумулятивные свойства вещества) в опытах на микроорганизмах и животных.

Научно-практическое значение результатов исследований.

Результаты оценки генотоксичности окружающей среды в 6 городах Республики Молдова на основании микроядерного теста в буккальных эпителиоцитах детей и исследования влияния загрязнения на продукцию сывороточных антител к инфекционным заболеваниям предоставляют возможности проведения более эффективных санитарно-гигиенических мероприятий по оздоровлению населения и окружающей среды.

Показана возможность использования показателя концентрации антител к кори, дифтерии, столбняку в крови для оценки уровня загрязнения окружающей среды .

Установленная связь между частотой встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии, отражающей стабильность генома человека на загрязненных территориях, и состоянием иммунитета объясняет появление цитогенетически аберрантных клеток нарушением их элиминации иммунной системой.

Определены биоразлагаемость и токсические свойства алкенилангидрида янтарной кислоты в опытах на животных и микроорганизмах, что открывает перспективу безопасного обращения с данным веществом в процессе производства.

Положения, выносимые на защиту.

1. Загрязнение окружающей среды в городах Республики Молдова нарушает стабильность генетического аппарата человека, индуцируя образование микроядер в клетках буккального эпителия детей. По степени генотоксичности окружающей среды для человека обследованные города можно ранжировать (в порядке убывания степени загрязнения) в следующий ряд: Кишинев - Рыбница - Комрат - Хынчешты - Оргеев - Кэушень. Уровень генотоксичности среды в городах Республики Молдова сопоставим или ниже такового в г.г. Воронеж, Нововоронеж и Санкт-Петербург. г

2. Встречаемость буккальных эпителиоцитов с нарушениями генетического материала у детей на обследованных территориях зависит от пола ребенка: более чувствительны к техногенному загрязнению дети мужского пола.

3. Загрязнение окружающей среды оказывает влияние на состояние иммунной системы организма: при увеличении концентрации поллютантов в среде отмечается рост числа людей с высоким и низким титром антител к столбняку, кори и дифтерии; на экологически «чистых» территориях у большинства обследованных лиц выявлены средние значения титра антител в крови. Наиболее чувствительны к загрязнению люди в возрасте от 5 до 18 и старше 40 лет.

4. Появление клеток с микроядрами в буккальном эпителии опосредовано нарушением работы иммунной системы, которая в условиях загрязнения окружающей среды находится в «напряженном» состоянии и не справляется с элиминацией цитогенетически аберрантных клеток.

5. Алкенилангидрид янтарной кислоты, используемый в качестве эмульгатора при эмульсионной полимеризации в виде водного раствора мыла при производстве синтетических моющих средств и каучука, обладает в опытах на микроорганизмах и животных токсическими свойствами, позволяющими отнести его к согласно ГОСТу 12.1007 — 76 к 3 классу опасности (умеренноопасные вещества), и является соединением, относительно устойчивым к биологической деструкции.

Личный вклад.

Автором разработаны теоретические и методические положения, обоснованы цели и задачи исследования, проведён сбор и анализ экспериментального материала, обобщены результаты исследований. Статьи и научные доклады подготовлены самостоятельно и в соавторстве.

Апробация результатов исследования. Результаты диссертационной работы были представлены на 1 межрегиональной научно-практической конференции «Проблемы охраны окружающей среды современного города» (Воронеж, 2005), на 6 международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 2007), на отчетной научной сессии биолого-почвенного факультета Воронежского государственного университета (Воронеж, 2005, 2006, 2007 гг.). Материалы исследований обсуждались на заседаниях кафедры генетики, цитологии и биоинженерии и кафедры экологии и систематики беспозвоночных животных.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 статьи, в том числе 1 - в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Благодарности.

Диссертант выражает глубокую признательность научному руководителю 1-го года обучения профессору кафедры экологии и систематики беспозвоночных животных Негробову О.П. и искреннюю благодарность научному руководителю 2-го и 3-го года обучения профессору кафедры генетики, селекции и теории эволюции Буториной А.К. за поддержку начинания исследований в области экологии.

ВВЕДЕНИЕ

Сохранение благоприятной среды обитания является важнейшим условием обеспечения экологической безопасности и достижения устойчивого социально-экономического развития общества. Как подчеркивается в глобальной стратегии ВОЗ по здоровью и окружающей среде (1993), успешная реализация этой задачи возможна лишь на основе создания региональных систем мониторинга среды обитания и здоровья населения. Для стран СНГ с их нестабильной экономикой, ухудшающейся медико-демографической обстановкой и углубляющейся деградацией окружающей среды в большинстве индустриально развитых регионов, а особенно в крупных промышленных городах, эта проблема особенно важна и актуальна (Эколого-гигиенические основы ., 2002).

Разработанные в 70-е - начале 80-х гг. XX столетия И.П. Герасимовым, Ю.А. Израэлем (1984), и развитые в работах Б.В. Виноградова, Н.Ф. Реймерса, R.E. Munn концептуальные подходы к осуществлению мониторинга среды обитания человека, в 90-е гг. были логично дополнены медико-экологической компонентой. Осознанию этого в значительной мере способствовали как фундаментальные достижения в области гигиены и экологии человека, так и результаты региональных научно прикладных исследований в экологии и медицине (Авалиани, 1997; Беляев, 1996; Буштуева, 1979; Геохимия окружающей среды, 1990; Куролап, 2000; 2006; Общесоюзные санитарно-гигиенические и ., 1988; Чубирко, 1997; Экология человека, 2001). В настоящее время уже очевидно, что эффективная экологическая политика базируется на приоритете здоровья населения, как в фокусе отражающего весь спектр различных воздействий среды обитания на человека.

До настоящего времени не выработано целостного подхода и единой унифицированной методологии осуществления регионального мониторинга здоровья населения, включая взаимосвязанные, организационно-технические и информационно-аналитические аспекты. Недостаточно разработанными остаются подходы к оценке и моделированию уровней риска для здоровья населения, связанного с загрязнением окружающей среды, что определяет актуальность разработки этой проблемы в целом, с ориентацией на практические службы Госсанэпиднадзора (Эколого-гигиенические основы ., 2002).

В настоящее время общепризнано, что здоровье населения следует рассматривать как важнейший критерий качества жизни, который как в фокусе отражает весь спектр различных воздействий среды обитания на человека. В этой связи, высокой информативностью в региональных медико-экологических исследованиях обладают показатели предпатологических сдвигов в состоянии общественного здоровья. Наиболее часто встречаются упоминания о таких видах предпатологических реакций как нарушения иммунного статуса (Эколого-гигиенические основы ., 2002; Ревич, 2004; Чубирко, 2004; Куролап, 2006).

В связи с вышесказанным представляется актуальным проведение исследований по комплексной эколого-генетической оценке состояния окружающей среды в промышленных городах Республики Молдова, включающей определение стабильности генома и некоторых показателей иммунитета у населения как показателей генетического гомеостаза и его здоровья. Выполнение этой работы важно не только для данной страны, но и для Российской Федерации, т.к. отмечаются значительные миграционные потоки между этими странами.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Левински, Марина Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Выявлены различия в частоте встречаемости клеток с микроядрами в буккальном эпителии детей, проживающих в 6 крупных городах Республики Молдова, обусловленные разными уровнями антропогенного загрязнения. Наибольшая генотоксичность окружающей среды по результатам микроядерного теста отмечается в г. Кишинев, далее следует промышленный центр - г. Рыбница, города Комрат, Хынчешты, Оргеев, Кэушень характеризуются приблизительно одинаковым уровнем загрязнения. Результаты микроядерного теста в буккальном эпителии детей в 6 городах Республики Молдова позволяют оценить экологическую обстановку в обследованных населенных пунктах как удовлетворительную.

2. Пределы изменчивости частоты встречаемости буккальных эпителиоцитов с микроядрами составили для мальчиков от 0,50±0,28 %о (г. Кэушень) до 3,00±0,4 %о (г. Кишинев), для девочек от 1,00±0,4 %о (г.г. Хынчешты, Оргеев, Кэушень) до 3,25±0,25 %о (г. Кишинев). Отмечаемые различия частот встречаемости клеток с микроядрами обусловлены различной чувствительностью мужского и женского организма к воздействию присутствующих в среде поллютантов.

3. Установлено влияние антропогенного загрязнения на уровень сывоточных антител к кори, дифтерии, столбняку в крови людей разных возрастных групп в 3 районах г. Кишинев. В сильно- и среднезагрязненном районах по сравнению с «чистым» отмечается рост числа лиц с высоким титром антител к дифтерии и столбняку и снижение их числа при анализе иммунитета к кори. На экологически «чистых» территориях у большинства обследованных выявлены средние значения титра антител к возбудителям инфекционных заболеваний в крови. Наибольший размах колебаний уровней антител отмечается в группах лиц в возрасте от 5 до 18 лет и старше 40 лет.

4. Показана возможность использования показателя концентрации антител к кори, дифтерии, столбняку в крови для оценки уровня загрязнения окружающей среды .

5. Ослабленная воздействием поллютантов иммунная система не распознает и не элиминирует генетически поврежденные эпителиоциты, что способствует накоплению аберрантных клеток и нарушению стабильности генетической системы организма.

6. Установлена биоразлагаемость и токсические свойства алкени л ангидрида янтарной кислоты, нового загрязнителя окружающей среды, используемого в производстве синтетических моющих средств и каучука.

107

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Левински, Марина Васильевна, Воронеж

1. Авалиани С.Л. Окружающая среда. Оценка риска для здоровья / С.Л. Авалиани, М.М. Андрианова, Печенникова, О.В. Пономарева. М.: Консультационный центр по оценке риска, 1997. — С. 5 — 158.

2. Алов И.А. Патология митоза / И.А. Алов // Вестник АМН СССР. -1965. -№11. С. 58 - 66.

3. Арутюнян Р. М. Анализ микроядер в слизистой ротовой полости для оценки цитогенетического эффекта загрязнителей среды / P.M. Арутюнян, Э.Р. Туманян, Г.С. Ширинян // Цитология и генетика. 1990. — Т. 24, №2. - С. 57 - 60.

4. Архипчук В.В. Влияние малых доз радиации на ядрышковую активность эмбрионов карповых рыб / В.В. Архипчук // Радиобиология. -1990. Т. 30, вып. 4.- С. 496-501.

5. Архипчук В.В. Использование ядрышковых характеристик в биотестировании / / В.В. Архипчук // Цитология и генетика. 1995. - Т. 29, № з. - С. 6 - 9.

6. Архипчук В.В. Наследуемость количественных характеристик ядрышек у карповых рыб / В.В. Архипчук, Т.А. Макарова // Гидробиологический журнал. — 1992а. Т. 28, № 6. — С. 81 - 85.

7. Архипчук В.В. Ритмичность ядрышковой активности в клетках карповых рыб/ В.В. Архипчук, Т.А. Макарова // Гидробиологический журнал. 1993. - Т. 29, № 3. - С. 110 - 112.

8. Архипчук В.В. Цитогенетический метод определения влияния пороговых величин антропогенных факторов на геном растений и животных / В.В. Архипчук, В.Д. Романенко, М.В. Архипчук и др. // Докл . АН (Россия). 19926. - Т. 326, № 5. - С. 908 - 910.

9. Беляев Е.Н. Роль санэпидслужбы в обеспечении с санитарно-эпидемиологического благополучия населения Российской Федерации / Е.Н.

10. Беляев. М.: Издат.-информ. центр Госкомитета санэпиднадзора РФ, 1996. -416 с.

11. Беляева Н.Н. Связь изменений слизистых оболочек носа и рта с иммунным статусом при воздействии факторов окружающей среды / Н.Н. Беляева, А.А. Шамарин, И.В. Петрова и др. // Гигиена и санитария. 2001. -№5.-С. 62-64.

12. Бернет Ф. Клеточная иммунология / Ф. Бернет. М.: Мир, 1971. —542 с.

13. Боровский Е. В. Атлас заболеваний слизистой оболочки рта / Е.

14. B. Боровский, Н. Ф. Данилевский. -М.: Медицина, 1991а. -317 с.

15. Боровский Е. В. Биология полости рта/ Е. В. Боровский, В. К. Леонтьев. -М.: Медицина, 19916.-304 с.

16. Бочков Н. П. Генетический мониторинг популяций человека при реальных химических и радиационных, нагрузках / Н. П. Бочков,- Л. Д. Катосова // Вестник РАМН. 1992. - №4. - С. 10 - 14.

17. Бочков Н.П. Классификация и методы учета хромосомных аберраций в соматических клетках / Н.П. Бочков, Ю.С. Демин, Н.В. Лучник // Генетика. 1972. - Т. 8, № 5. - С. 133 -142.

18. Бурдин К.С. Основы биологического мониторинга / К.С. Бур дин. М.: Изд - во Моск. ун - та, 1985. - 158 с.

19. Буторина А. К. Цитогенетические нарушения в соматических клетках человека и березы повислой в районах г. Воронежа с различной интенсивностью антропогенного загрязнения / А. К. Буторина, В. Н. Калаев,

20. C. С. Карпова // Экология. 2002. - №6. - С. 438 - 441.

21. Буторина А.К. Анализ чувствительности различных критериев цитогенетического мониторинга / А.К. Буторина, В.Н. Калаев // Экология. — 2000. -№3.- С. 206-210.

22. Буштуева К.А. Методы и критерии оценки состояния здоровья населения в связи с загрязнением окружающей среды / К.А. Буштуева. — М.: Медицина, 1979. 159 с.

23. Гемонов В.В. Морфология и гистохимия слизистой оболочки полости рта в норме и при некоторых патологических состояниях в эксперименте: Автореф. дис. . докт. мед. наук / В.В. Гемопов. М.: ММСИ, 1969.-39 с.

24. Геохимия окружающей среды / Ю.Е. Сает, Б.А. Ревич, Е.П. Янин и др. М.: Недра, 1990. - 335 с.

25. Гончарова Р. И. Кластогенность этилметансульфоната и диметилтерефталата в микроядерном тесте и пути ее модификации / Р. И. Гончарова, О. В. Даливеля, Т. Д. Кужир и др. // Цитология и генетика. 2002. - №1. - С. 15-24.

26. Гриф В.Г. Ритмы митотической активности и клеточные циклы в меристемах растений / В.Г. Гриф, Э.М. Мачс // Цитология. 1994. - Т. 36, № 11.-С. 1069- 1084.

27. Гуськов Е.П. Свободно-радикальные процессы и уровень аберраций хромосом в листьях древесных растений как тест-системы на генотоксичность городской среды / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат, Т.В. Вардуни // Экология. 2000. - № 4. - С. 270-275.

28. Димитриев Д. А. Современные методы изучения влияния окружающей среды на иммунную систему / Д. А. Димитриев, Е. Г. Румянцева // Гигиена и санитария. 2002. - №3. - С. 68-71.

29. Дмитриева С. А. Кариология флоры как основы цитогенетического мониторинга. На примере Березинского заповедника / С.А. Дмитриева, В.И. Парфенов. Минск: Навука i тэхшка, 1991. - 260 с.

30. Дубинин Н. П. Некоторые проблемы современной генетики / Н. П. Дубинин. М.: Наука, 1994. - 223 с.

31. Дубинин Н.П. Действие малых доз и загрязнение биосферы мутагенными факторами / Н.П. Дубинин // Успехи современной биологии. -1990. Т. 109, вып. 3. - С. 323-338.

32. Дубинин Н.П. Экологическая и космическая генетика. Селекция / Н.П. Дубинин. -М.: Наука, 2001. С. 204.

33. Дышева Н.М. Использование учета микроядер в клетках человека для выявления цитогенетических повреждений факторами окружающей среды / Н. М. Дышева // Вестник РАМН. 1992. - №4. - С. 55 - 59.

34. Ерзинкян К. JI. Антропогенные факторы окружающей среды и проблемы здоровья / К. JI. Ерзинкян // Вестник РАМН. 1989. - №8. - С. 59 — 67.

35. Захаров В.М. Биотест: интегральная оценка здоровья экосистем и отдельных видов / В.М. Захаров, Д.М. Кларк. М.: Моск. Отд. Международн. Фонда «Биотест», 1993 — 68 с.

36. Захаров B.M., Чубинишвили А.Т. Мониторинг здоровья среды на охраняемых природных территориях / В.М. Захаров, А.Т. Чубинишвили. М Центр экологической политики России, 20016. — 68с.

37. Захаров В.М., Чубинишвили А.Т., Дмитриев С.Г. и др. Здоровье среды: практика оценки / В.М. Захаров, А.Т. Чубинишвили, С.Г. Дмитриев и др. — М.: Центр экологической политики России, 2000. 320 с.

38. Землянухин А.А. Малый практикум по биохимии / А.А. Землянухин. — Воронеж: Изд во Воронежского гос. ун — та, 1985. — 128 с.

39. Израэль Ю.А. Экология и контроль состояния природной среды / Ю.А. Израэль. Л.: Гидрометеоиздат, 1984. - 380 с.

40. Израэль Ю.А. Глобальная система наблюдений. Прогноз и оценка изменений состояния окружающей природной среды. Основы мониторинга / Ю.А. Израэль // Метеорология и гидрология. 1974. - № 5. - С. 3-8.

41. Израэль Ю.А. Концепции мониторинга состояния биосферы / Ю.А. Израэль // Мониторинг состояния окружающей природной среды. Труды I советско-английского симпозиума. 1977. - С. 10-25.

42. Ильинских И.Н. Инфекционная кариопатология / И.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, Е.Н. Ильинских и др. — Томск: Изд во Томского ун-та, 2005. - 168 с.

43. Ильинских И.Н. Кариопатологические изменения в иммунокомпетентных клетках человека и животных под влиянием факторов инфекционной природы: Автореф. дис. . докт. биол. наук / И.Н. Ильинских. -Томск, 2002.-39 с.

44. Ильинских Н. Н. Использование микроядерного теста в скрининге и мониторинге мутагенов / Н.Н. Ильинских, И.Н. Ильинских, В.Н. Некрасов // Цитология и генетика. — 1988. — Т. 22, №1. — С. 67 72.

45. Ильинских Н. Н. Микроядерный анализ и цитогенетическая нестабильность / Н.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, Н.Н. Ванчугова и др. -Томск: Изд-во Томского университета, 1992. — 272 с.

46. Ильинских Н. Н. Цитогенетический гомеостаз и иммунитет / Н. Н. Ильинских, И. Н. Ильинских, Е. Ф. Бочаров. Новосибирск: Наука, 1986. - 254 с.

47. Ильинских Н.Н. Инфекционный мутагенез / Н.Н. Ильинских, Е.Ф. Бочаров, И.Н. Ильинских. Новосибирск: Наука, 1984. - 167 с.

48. Ильинских Н.Н. Хромосомные нарушения в лейкоцитах крови здоровых детей и детей, больных синдромом Дауна, в норме и после вакцинации против кори / Н.Н. Ильинских // Цитология. — 1981. № 1. — С. 67-73.

49. Инге-Вечтомов С.Г. Экологическая генетика. Что это такое? / С.Г. Инге-Вечтомов // Соросовский образовательный журнал. 1998. № 2. С. 59-65.

50. Индикация загрязнения окружающей среды с использованием кариологических методов / Н.А. Калашник и др. // Цитология. 1999. — Т. 41,№ 12.-С. 1065.

51. Каверина Н.В. Геоэкологическая оценка воздействия железнодорожного транспорта на экосистемы прилегающих территорий: Автореф. дис. . канд. геогр. наук / Н.В. Каверина. Воронеж, 2004. - 23 с.

52. Калаев В.Н. Цитогенетический мониторинг: методы оценки загрязнения 'окружающей среды и состояния генетического аппарата организма. Учеб. пособие / В.Н. Калаев, С.С. Карпова. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 2004. — 79 с.

53. Китаева JI.B. Генотоксический эффект формальдегида в соматических клетках человека in vivo / JI.B. Китаева, Е.А. Михеева, Л.Ф. Шеломова // Генетика. 1996. - Т. 32, №9. - С. 1287 - 1290.

54. Количественный химический анализ вод. Методика выполнения измерений химической потребности кислорода в пробах природных и очищенных сточных вод титрометрическим методом (ПНД Ф 14.1.2.100 97). - М.: ГУАК Госкомэкологии России, 19976. - 23 с.

55. Колюбаева С. Н. К механизму образования микроядер в ФГА-стимулированных лимфоцитах периферической крови человека / С.Н. Колюбаева, JL В. Щедрина, Р. П. Степанов // Цитология. 1986. - Т. 28, № 2. -С. 227-231.

56. Крысанов Е.Ю. Генетический подход / Е.Ю. Крысанов, С. Т. Дмитриев // БИОТЕСТ: интегральная оценка здоровья экосистем и отдельных видов. Москва, 1993. - С.50 - 55.

57. Кулаичев А.П. Методы и средства комплексного анализа данных / А.П. Кулаичев. М.: Форум: ИНФА -М, 2006. - 512с.

58. Куролап С.А. Оценка риска для здоровья населения при техногенном загрязнении городской среды / С.А. Куролап, Н.П. Мамчик, О.В. Клепиков. Воронеж: Воронежский государственный университет, 2006.-220 с.

59. Куролап С.А. Медицинская география: современные аспекты / С.А. Куролап // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6, № 6. -С. 52-58.

60. Луговской A.M. Мониторинг среды методом биоиндикации / A.M. Луговской, Л.А. Межова // Состояние особо охраняемых природных территорий Европейской части России: Сб. науч. тр. — Воронеж: Изд-во Воронеж, гос. ун-та, 2005. С. 105-108.

61. Мамчик Н.П. Экология и мониторинг города Воронежа / Н.П. Мамчик, С.А. Куролап, О.В. Клепиков и др. — Воронеж: Изд во Воронежского государственного университета, 1997. - 180 с.

62. Мирзоян А.В. Создание и апробация генетико-биохимической тест-системы для мониторинга мутагенности окружающей среды с использованием листьев древесных растений : Автореф. дис . канд. биол. наук / А.В. Мирзоян. Ростов-на-Дону, 2001. - 22 с.

63. Негробов О.П. Экологические основы оптимизации и управления городской средой. Экология города. Учеб. пособие / О.П. Негробов, Д.М. Жуков, Н.В. Фирсова. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 2000. - 272 с.

64. Нерсесян А. К. Анализ микроядер в слизистой ротовой полости онкологических больных для оценки кластогенного эффекта химиопрепаратов / А. К. Нерсесян, В. Н. Зильфян, В. А. Кумкумаджян и др. // Цитология и генетика. — 1993. — Т. 27, № 1. С. 77-81.

65. Нерсесян А. К. Изучение микроядер в ретикулоцитах больных злокачественными новообразованиями при химиотерапии / А. К. Нерсесян, P.M. Арутюнян // Биол. журн. Армении. 1989. - Т. 42, № 6. - С. 581 - 583.

66. Нерсесян А. К. Микроядерный тест в эксофолиативных клетках человека как метод изучения действия мутагенов/канцерогенов / А. К. Нерсесян // Цитология и генетика. 1996. - Т. 30, № 5. - С. 91 - 96.

67. Общесоюзные санитарно-гигиенические и санитарно-противоэпидемиологические правила и нормы. Санитарные правила и нормы охраны поверхностных вод от загрязнения. СанПиН № 4630-88. М.: Б.и., 1988.-69 с.

68. Осипов А. Н. Оценка молекулярных и цитогенетических эффектов хронического воздействия низкоинтенсивного у-излучения у мышей / А. Н. Осипов, A. J1. Елаков, П. В. Пучков и др. // Генетика. 2002. -Т. 38, № 10.-С. 1345 - 1350.

69. Оценка биоразнообразия, мониторинг и экосети. Кишинев: BIOTICA, 2002.- 168 с.

70. Оценка воздействия вредных химических соединений на кожпые покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи. Методические указания. -М., 1980. 80 с.

71. Перминова И. Н. Биомониторинг в лимфоцитах рабочих, контактирующих с соединениями никеля, и подход к снижению генетических эффектов / И. Н. Перминова, Т. А. Синельщикова, Н. И. Алехина и др. // Цитология и генетика. 2001. - Т. 35, № 3. - С. 59 - 65.

72. Проблема нормы в токсикологии / Под ред. И.М. Трахтенберга. -М.: Медицина, 1991. 65 с.

73. Протасов В.Ф. Экология, здоровье и охрана окружающей среды в России / В.Ф. Протасов. М.: Финансы и статистика, 2000. - 672 с.

74. Проценко Л.Д. Химия и фармакология синтетических и противоопухолевых препаратов / Л. Д. Проценко, 3. П. Булкина. Киев: Наук. Думка, 1985. - 268 с.

75. Пушкина Н.Н. Биохимические методы исследования / Н.Н. Пушкина. -М.: Наука, 1963. 195 с.

76. Ревич Б.А. Экологическая эпидемиология / Б.А. Ревич, СЛ. Авалиани, Г.И. Тихонова. М.: Академия, 2004. 384 с.

77. Романенко В.Д. Использование морфологических характеристик ядрышек для оценки метаболических процессов в организме рыб / В.Д. Романенко, В.В. Архипчук, В.Д. Соломатина и др. // Докл. РАН. 1992. -Т.326, №3. - С.562 - 565.

78. Руководство по определению биотестов токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов. — М.: Природа, 2002. 56 с.

79. Серебряный А. М. Клеточный состав популяции лимфоцитов и радиационный адаптивный ответ / А. М. Серебряный, А. В. Алещенко, В. Я. Готлиб и др. // Цитология. 2003. - Т. 45, № 1. - С. 81 - 85.

80. Соболь М.А. Роль ядрышка в реакциях растительных клеток на действие физических факторов окружающей среды / М.А. Соболь // Цитология и генетика. -2001.- Т.29, №3.- С. 6-12.

81. Соболь М.В. Частота микроядер в клетках буккального эпителия у школьников Украины разного возраста и пола / М.В. Соболь, В.Ф. Безруков // Цитология и генетика. 2007. Т. 41, № 4. С. 56 - 58.

82. Тарасов В. А. Низкая эффективность краткосрочных тестов при оценке потенциальной мутагенной активности химических соединений для млекопитающих / В. А. Тарасов, Р. М. Велибеков, И. К. Любимова // Генетика. 2001. - Т. 37, № 7. - С. 1008 - 1017.

83. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду // Под ред. А.А. Каспарова, И.В. Саноцкого. М.: Центр международных проектов ГКНТ, 1986. - 117 с.

84. Федоров В.Д. Биологический мониторинг: обоснование и опыт организации / В.Д. Федоров // Гидробиол. журнал. 1975. - Т. 11, № 5. - С. 753-770.

85. Федорова А.И. Биоиндикация мутагенного эффекта радона с использованием ядрышкового теста в клетках корней традесканции/ А.И. Федорова, В.Н. Калаев, А.Ю. Плахотина // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. - № 2. - С. 151 - 156.

86. Федорова А.И. Мутагенная активность тяжелых металлов в почвах придорожной полосы / А.И. Федорова, В.Н. Калаев, Ю.Г. Просвирина и др. // Почвоведение. 2007. - № 8. - С. 998 - 1005.

87. Фраш В. Н. Микроядерный тест как краткосрочный метод выявления потенциальной онкогенности различных групп химических веществ / В. Н. Фраш, Н. Н. Ванчугова // Экспериментальная онкология. — 1987.-Т. 9, №2. -С. 8-14.

88. Хволес А.Г. Механизм стимуляции мутагенами / А.Г. Хволес, Т.А. Черняев // Докл. АН СССР. 1988. - Т. 301, № 4. - С. 985 - 988.

89. Чернова О.А. Хромосомные аберрации, индуцированные микоплазменными инфекциями в лимфоцитах периферической крови человека // О.А. Чернова, Е.Н. Волкова, В.М. Чернов // Генетика. 1996. - Т. 32,№ 6.-С. 810-813.

90. Чубирко М.И. Химическое воздействие воздушной среды и здоровье населения / М.И. Чубирко, Н.М. Пичужкина. Воронеж: Истоки, 2004. - 224 с.

91. Шилов Б.В. Компьютерный морфометрический анализ структуры ядер лимфоцитов периферической крови человека в норме и при Эпштейн-Барр вирусной инфекции в условиях in vivo и in vitro: Автореф. дис . канд. мед. наук / Б.В. Шилов. Томск, 2001. - 22 с.

92. Экологический мониторинг. Методы биомониторинга / Под ред. Д.Б. Гелашвили. Нижний Новгород: Изд-во ННГУ, 1995. -4.2. - 272 с.

93. Эколого-гигиенические основы мониторингаи охраны городской среды / Н.П. Мамчик, С.А. Куролап, О.В. Клепиков и др. Воронеж: Воронежский государственный университет, 2002. - 332 с.

94. Юркин А. Ю. Методические особенности анализа микроядер в клетках человека и животных при экологической оценке состояния окружающей среды: Автореф. дис . канд. мед. наук / А. Ю. Юркин. -Томск, 2002. — 22 с.

95. Bonassi S. Human population studies with cytogenetic biomarkers: Review of the literature and future prospectives / S. Bonassi, D. Ugolini, M. Kirsch-Volders et al.// Environ, and Mol. Mutagen. 2005. - V. 45 -P. 258 - 270.

96. Bonatti S. Induction of micronuclei in Chinese hamster ovary cells treated with Pt coordination compounds/ S. Bonatti, P. H. Lohman, F. Berends// Mutat. Res. 1983.-Vol. 116, №2.-P. 149- 153.

97. Capcelea A. Bazele ecologice ale ecologiei in Republica Moldova / A. Capcelea . Chi§inau, §tiinta, 2000. - 220 p.

98. Capcelea A. Republica Moldova pe calea dezvoltarii durabile . realizari §i probleme / A. Capcelea . Chi§inau: §tiinta,1995. - 96 p.

99. Cu privire la situatia sanitaro-epidemiologica in municipiul Chisinau in anii 2004-2006. — Chisinau: Centrul municipal de medicina preventive, 2007.-355p.

100. Fenech M. The affect of donor age on spontaneous and induced micronuclei / M. Fenech, A. Morley // Mutat. Res. 1985. - № 148. - P. 99 - 105.

101. Ferech M. The Human Micronucleus Project — an international collaborative study on the use of micronucleus technique for measuring DNA damage in humans / M. Ferech, N. Holland, W.P. Chang, E. Zeiger, S. Bonassi // Mutat. Res. 1999. V. 428. P. 271 282.

102. Garaba V. Poluanti organici persistenti? Mediul si sanatatea / V. Garaba. Chisinau: Colectia " NATURA". - 80 p.

103. Gebhart E. Chromosome aberatious in lymphocytes of patients under chemotherapy / E. Gebhart // Mutation in man / Ed. G. Obe. Berlin; Heidelberg: Springer Verlag, 1984.-P. 198-222.

104. Gebhart E. Clastogenic action of chemotherapy in humans / E. Gebhart//In vivo.- 1987.-Vol. 1,№ l.-P. 15-21.

105. Goldberg M. T. A micronucleus test for colon mutagens / M. T. Goldberg, W. R. Bruce // Environ. Mutagen. 1981. - Vol. 3, № 3. - P. 304 - 307.

106. Hose J. E. Cytogenetic and cytologic anomalies induced in purple sea urchin embryos by parental exposure to benzopyrene / J. E. Hose, H. W. Puffer // Mar. Biol. Lett. 1983. - Vol. 4, № 2. - P. 87 - 95.

107. Jolly J. Blutcrankheiten und blutdiagnostic / J. Jolly // Arch, d'anat. -1907.-V. 9,№> l.-p. 133-141.

108. Lahdetie J. Micronuclei induced during meiosis by ethilmethansulfonate, cyclophosphamide and dymethylbenzanthracene in male rats / J. Lahdetie // Mutat. Res. 1983. - Vol. 120, № 4. - P. 257-261.

109. MacGregor J.T. Guidelines for the conduct of micronucleus assays in mammalian bone marrow erythrocytes / J.T. MacGregor, J.A. Heddle, F. Hite et al. // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Tes. 1987. - V. 189, № 2 . - P . 103 - 112.

110. Nersesyan A.K. The micronucleus assay in exfoliated human cells: a mini review of papers from the CIS / A.K. Nersesyan, A.I. Ilin // Цитология и генетика. 2007. Т. 41, № 2. - С. 56-66.

111. Republic of Moldova: State of the Environment Report 2004. -Chisinau: Institutul National de Ecologie, 2006. -129 p.

112. Ropot V. Aspecte privind folosirea §i protectia apelor in Republica Moldova / V. Ropot // Management ecologic §i dezvoltarea durabila. Chi§inau, 1996. - P. 86-88.

113. Ropot V. Resursele de ара ale Republicii Moldova: problemele de utilizare protectie / V. Ropot, M. Sandu // Ecologia §i protectia mediului inconjurator in Republica Moldova. Chi§inau, $tiinta, 1992. - P. 48-50.

114. Sarto F. The micronucleus assay in exfoliated cells of the human buccal mucosa / F. Sarto, S. Finotti, L. Giakomelii et al. // Mutagenesis. 1987. -Vol. 2, № l.-P. 11-17.

115. Schmid W. The micronucleus test / W. Schmid // Mutat. Res. 1975. -V. 31, № l.-P .9-16.

116. Sclegel R. The persistance of micronuclei in peripheral blood erythrocytes: detection of chronic chromosome breakage in mice / R. Sclegel, J. Mac Gregor//Mutat. Res. 1982.-Vol. 104, № 6.-P. 367-371.

117. Sex difference in the micronucleus test. The collaborative study group for the micronucleus test // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Tes. 1986. - V. 172, № 2 .-P. 151-163.

118. Shelby M. D. Selecting chemicals and assays for assessing mammalian germ cell mutagenccity / M. D. Shelby // Mutat. Res. 1996. - Vol. 352.-P. 159-167.

119. Shindo H. The micronucleus test with mouse spleen cells / J. Shindo, F. Hirano, H. Maeda et al. // Mutat. Res. 1983. - Vol. 121, № 1. - P. 53 - 56.

120. Stich H. Micronuclei in exfoliated human cells as a tool for studies in cancer risk and cancer intervention / H. Stich, M. P. Rosin // Cancer Lett. 1984. -V. 22, №2.-P. 241.

121. Stich H. The use of micronuclei in tracing the genotoxin damage in the oral mucosa of tobacco users / H. Stich // Mech. Tobacco Carcinogen. Proc. Conf., Sept., 1984. Cold Spring Harbor. - 1986. - P. 99 - 111.

122. Trombitsky I. Trasaturile caracteristice mediului ambiant moldav / I.Trombitsky, A. Andreev // Starea Mediului Ambiant in Republica Moldova. -Chisinau: Editura AGEPI, 1999. P. 7-11.